KR20200074975A - 항-ApoC3 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

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폴 다실바-자르딘
하르트 한스 더
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스태튼 바이오테크놀로지 비.브이.
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Abstract

본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하고, ApoC3 기능을 길항작용하는 항체를 제공한다. 또한 이러한 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 이러한 항체를 암호화하는 핵산, 이러한 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포, 및 이러한 항체를 사용하여 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공된다.

Description

항-ApoC3 항체 및 이의 사용 방법
관련 출원
본 출원은 2017년 10월 31일자로 출원된 미국 가출원 번호 62/579,449의 이익을 주장하며, 이는 전체적으로 본 명세서에 참조로 포함된다.
기술분야
본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
증가된 혈액 트리글리세리드 수준(고중성지방혈증(hypertriglyceridemia))은 죽상경화증에 대한 원인 인자이고, 심혈관 사건의 위험, 예컨대, 심혈관 사망, 협심증, 심근경색증 및 뇌졸중을 증가시킨다.
ApoC3은 혈액에서 매우 높은 농도(10 μM 초과)로 순환하고, 트리글리세리드 풍부 지방단백질(TRL), TRL 잔존물 및 고밀도 지방단백질에 주로 결합하는 단백질이다. ApoC3은 혈액 트리글리세리드 수준의 중요한 조절인자인 것으로 보인다. 예를 들어, 인간에서 ApoC3 수준은 혈액 트리글리세리드 수준과 양의 상관관계가 있고, 증가된 ApoC3 수준은 고중성지방혈증과 연관된다고 밝혀져 있다. 또한, ApoC3은 지방단백질 리파제(TRL에서 트리글리세리드를 가수분해하는 효소)의 활성을 저해하고, 또한 TRL 잔존물의 간 흡수를 저해하는 것으로 밝혀져 있고, 이들 모두는 혈액 트리글리세리드 수준의 증가를 야기한다.
고중성지방혈증의 치료에 대해서 몇몇 요법, 예컨대, 피브레이트, 니아신 및 오메가-3 지방산이 승인되어 있다. 그러나, 이들 요법은 혈장 트리글리세리드를 낮추는 데 단지 약간 효과적이다. 따라서, 혈장 트리글리세리드를 낮추기 위한 개선된 요법이 당업계에 필요하다.
본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하고, ApoC3 기능을 저해하는 항체를 제공한다. 또한 이러한 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 이러한 항체를 암호화하는 핵산, 이러한 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포, 및 이러한 항체를 사용하여 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공된다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 간세포에 의한 TRL 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킬 수 있고, 대상체에게 투여되는 경우 ApoC3 및 ApoB의 혈청 수준의 신속한 감소 및 지속적인 감소를 초래할 수 있다. 따라서, 개시된 항-ApoC3 항체는 고중성지방혈증 및 연관된 질환(예를 들어, 심혈관 질환 및 췌장염)의 치료 및 예방에 유용하다.
따라서, 일 양태에서, 본 개시내용은 pH 7.4에서 제1 해리 상수(KD) 및 pH 5.5에서 제2 KD로 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 여기서 제2 KD와 제1 KD 간의 비는 적어도 약 5, 10, 20 또는 50이다. 특정 실시형태에서, 제1 KD는 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2 또는 0.1 nM 미만이다. 특정 실시형태에서, ApoC3을 발현하는 마우스에서 항체의 반감기는 적어도 약 3, 7, 14, 21 또는 28일이다.
특정 실시형태에서, 항체는 초저밀도 지방단백질(very low density lipoprotein: VLDL)의 간세포 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킨다. 특정 실시형태에서, 항체는 대상체에서 혈액으로부터 ApoC3의 청소율(rate of clearance)을 증가시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 대상체에서 혈액으로부터 ApoB의 청소율을 증가시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 대상체에서 혈액 중의 ApoC3의 수준을 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 대상체에서 혈액 중의 ApoC3의 수준을 적어도 2주 동안 적어도 40%만큼 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 대상체에서 혈액 중의 ApoB의 수준을 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 대상체에서 혈액 중의 ApoB의 수준을 적어도 2주 동안 적어도 20%만큼 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 대상체에서 식후 지방혈증을 저해할 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 지질-결합된 ApoC3에 결합할 수 있다.
특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열 내의 에피토프에 결합한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5, 6, 8 또는 10에서의 아미노산 중 적어도 하나를 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 5 및 6에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5, 6 및 8에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 10에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 6, 8 및 10에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 6 및 8에서의 아미노산을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체(예를 들어, 인간화된 항체)는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIHTX1X2GGTAYRDSVKG의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X1은 G, E 또는 D이고, X2는 G 또는 A이고(서열번호 87);
(c) CDRH3은 AGYSD의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고;
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSXGKTYFY의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 D 또는 G이고(서열번호 88);
(e) CDRL2는 QVSNRAS의 아미노산 서열(서열번호 7)을 포함하고;
(f) CDRL3은 AXGTYYPHT의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 Q 또는 H이고(서열번호 8), 선택적으로 여기서 항체의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 3, 9, 10; 3, 11, 10; 3, 9, 12; 또는 3, 11, 12가 아니다.
특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTGGGGTAYRDSVKG(서열번호 36), SIHTEAGGTAYRDSVKG(서열번호 37), SIHTDAGGTAYRDSVKG(서열번호 38), 또는 SIHTEGGGTAYRDSVKG(서열번호 39)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6) 또는 KTSQGLVHSGGKTYFY(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRL3은 AHGTYYPHT(서열번호 14) 또는 AQGTYYPHT(서열번호 13)의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 3, 36, 10, 6, 7 및 14; 3, 37, 10, 40, 7 및 14; 3, 38, 10, 40, 7 및 14; 3, 38, 10, 6, 7 및 14; 3, 39, 10, 6, 7 및 14; 또는 3, 37, 10, 40, 7 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 42-53으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 54-65로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호 42 및 54, 43 및 55, 44 및 56, 45 및 57, 46 및 58, 46 및 54, 47 및 58, 47 및 54, 48 및 58, 48 및 54, 49 및 59, 49 및 60, 50 및 59, 50 및 60, 51 및 61, 52 및 62, 53 및 62, 43 및 63, 44 및 64, 또는 45 및 65에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIX1TDGGGTAYRDSVKG의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X1은 S 또는 H이고(서열번호 4);
(c) CDRH3은 X2GYSD의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X2는 A 또는 H이고(서열번호 5);
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY의 아미노산 서열(서열번호 6)을 포함하고;
(e) CDRL2는 QVSNRAS의 아미노산 서열(서열번호 7)을 포함하고;
(f) CDRL3은 AX3GTYYPHT의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X3은 Q 또는 H(서열번호 8)이고, 여기서 X1, X2 및 X3 중 적어도 하나는 H이다.
특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 3, 11, 10, 6, 7 및 13; 3, 9, 12, 6, 7 및 13; 3, 9, 10, 6, 7 및 14; 3, 11, 10, 6, 7 및 14; 3, 9, 12, 6, 7 및 14; 3, 11, 12, 6, 7 및 13; 또는 3, 11, 12, 6, 7 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 16-18로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 각각은 각각 서열번호 16 및 19, 17 및 19, 18 및 19, 15 및 20, 16 및 20, 17 및 20, 또는 18 및 20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 단리된 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIHTX1X2GGTAYRDSVKG의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서, X1은 G, E 또는 D이고, X2는 G 또는 A이고(서열번호 87);
(c) CDRH3은 AGYSD의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고;
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSXGKTYFY의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 D 또는 G이고(서열번호 88);
(e) CDRL2는 QVSNRAS의 아미노산 서열(서열번호 7)을 포함하고;
(f) CDRL3은 AXGTYYPHT의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 Q 또는 H이다(서열번호 8).
특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTGGGGTAYRDSVKG(서열번호 36), SIHTEAGGTAYRDSVKG(서열번호 37), SIHTDAGGTAYRDSVKG(서열번호 38), 또는 SIHTEGGGTAYRDSVKG(서열번호 39)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6) 또는 KTSQGLVHSGGKTYFY(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRL3은 AHGTYYPHT(서열번호 14) 또는 AQGTYYPHT(서열번호 13)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 3, 36, 10, 6, 7 및 14; 3, 37, 10, 40, 7 및 14; 3, 38, 10, 40, 7 및 14; 3, 38, 10, 6, 7 및 14; 3, 39, 10, 6, 7 및 14; 또는 3, 37, 10, 40, 7 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 이 항체는 서열번호 42-53으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 이 항체는 서열번호 54-65로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 이 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호 42 및 54, 43 및 55, 44 및 56, 45 및 57, 46 및 58, 46 및 54, 47 및 58, 47 및 54, 48 및 58, 48 및 54, 49 및 59, 49 및 60, 50 및 59, 50 및 60, 51 및 61, 52 및 62, 53 및 62, 43 및 63, 44 및 64, 또는 45 및 65에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 이 단리된 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIX1TDGGGTAYRDSVKG의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X1은 S 또는 H이고(서열번호 4);
(c) CDRH3은 X2GYSD의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X2는 A 또는 H이고(서열번호 5);
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY의 아미노산 서열(서열번호 6)을 포함하고;
(e) CDRL2는 QVSNRAS의 아미노산 서열(서열번호 7)을 포함하고;
(f) CDRL3은 AX3GTYYPHT의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X3은 Q 또는 H(서열번호 8)이고, 여기서 X1, X2 및 X3 중 적어도 하나는 H이다.
특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 3, 11, 10, 6, 7 및 13; 3, 9, 12, 6, 7 및 13; 3, 9, 10, 6, 7 및 14; 3, 11, 10, 6, 7 및 14; 3, 9, 12, 6, 7 및 14; 3, 11, 12, 6, 7 및 13; 또는 3, 11, 12, 6, 7 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 이 항체는 서열번호 16-18로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 이 항체는 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 이 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 각각은 각각 서열번호16 및 19, 17 및 19, 18 및 19, 15 및 20, 16 및 20, 17 및 20, 또는 18 및 20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
상기 양태 중 어느 하나의 특정 실시형태에서, 항체는 인간 또는 인간화된 불변 영역을 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 야생형 인간 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 변이체이고, 여기서 변이체 인간 면역글로불린 중쇄 불변 영역은 pH 6에서 인간 FcRn에 대한 야생형 인간 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 친화도에 비해서 pH 6에서 인간 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 증가된 친화도를 갖는다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 인간 IgG의 중쇄 불변 영역이다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역이다.
특정 실시형태에서, 불변 영역은 각각 EU 위치 433, 434 및 436에서 아미노산 K, F 및 Y를 포함한다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 각각 EU 위치 252, 254 및 256에서 아미노산 Y, T 및 E를 포함한다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 각각 EU 위치 428 및 434에서 아미노산 L 및 S를 포함한다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 서열번호 22-24, 76-78 및 81-86으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 단리된 항체는 서열번호 66-73으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 특정 실시형태에서, 단리된 항체는 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 특정 실시형태에서, 단리된 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄 및 경쇄 각각은 각각 서열번호 66 및 74, 67 및 74, 68 및 74, 69 및 74, 70 및 74, 71 및 74, 72 및 74, 또는 73 및 74에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 바와 같은 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 ApoC3에 결합하는 항체의 생산 방법을 제공하며, 이 방법은 본 명세서에 개시된 바와 같은 숙주 세포를 항체의 발현을 허용하는 조건 하에서 배양하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 ApoC3의 활성을 저해하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 대상체의 혈액에서 트리글리세리드 수준을 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 식후 지방혈증을 저해하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 고중성지방혈증을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 킬로미크론혈증(chylomicronemia)을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 고중성지방혈증을 갖는 대상체에서 심혈관 질환의 위험을 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 심혈관 질환은 심근경색증이다. 특정 실시형태에서, 심혈관 질환은 협심증이다. 특정 실시형태에서, 심혈관 질환은 뇌졸중이다. 특정 실시형태에서, 심혈관 질환은 죽상경화증이다.
치료 방법과 관련된 상기 양태의 특정 실시형태에서, 항체는 대상체의 혈액에서 킬로미크론 또는 킬로미크론 잔존물의 수준을 감소시킨다. 특정 실시형태에서, 대상체는 추가 지질 저하제(lipid lowering agent)를 제공받고 있다. 특정 실시형태에서, 추가 지질 저하제는 HMG-CoA 리덕타제 저해제이다. 특정 실시형태에서, HMG-CoA 리덕타제 저해제는 아토바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴 또는 심바스타틴이다. 특정 실시형태에서, 추가 지질 저하제는 PCSK9 저해제이다. 특정 실시형태에서, PCSK9 저해제는 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙 또는 보코시주맙이다. 특정 실시형태에서, 추가 지질 저하제는 에제티미브이다. 특정 실시형태에서, 추가 지질 저하제는 에제티미브와 HMG-CoA 리덕타제 저해제의 조합물이다. 특정 실시형태에서, 추가 지질 저하제는 에제티미브, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 PCSK9 저해제의 조합물이다.
도 1a, 도 1b 및 도 1c는 5E5WT(도 1a), 5E5VH5_VL8(도 1b) 및 5E5VHWT_VL8("VL8"), 5E5VH12_VLWT("VH12"), 5E5VH5_VLWT("VH5") 및 5E5VH5_VL8("VH5_VL8")(도 1c) 항체가 HepG2 세포에 의해서 초저밀도 지방단백질(VLDL) 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시키는 것을 나타내는 일련의 그래프이다. HepG2 세포를 DiI VLDL과 인큐베이션시키고, ApoC3을 단독으로 또는 제시된 바와 같은 항-ApoC3 항체의 존재 하에서 정제시켰다. HepG2 세포에 의해 섭취된 DiI VLDL을 DiI 염료의 형광 분광법에 의해서 측정하였다. DiI VLDL 단독과 배양된 HepG2 세포("VLDL")는 양성 대조군으로서 작용하였고, 항-ApoC3 항체("ApoC3")의 부재 하에서 DiI VLDL 및 정제된 ApoC3과 함께 배양된 HepG2 세포는 음성 대조군으로서 작용하였다.
도 2a는 AAV8-인간 ApoC3 마우스 모델에서 2종의 항-ApoC3 항체, 5E5 및 5E5VH5_VL8, 및 항-계란 리소좀 인간 IgG1 항체(HyHEL5)의 주입 후 다양한 시간에서의 혈청 수준을 나타내는 그래프이다.
도 2b는 AAV8-인간 ApoC3 마우스 모델에서 순환하는 인간 ApoC3의 수준에 대한 5E5 및 5E5VH5_VL8의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2c는 AAV8-인간 ApoC3 마우스 모델에서 순환하는 ApoB의 수준에 대한 5E5 및 5E5VH5_VL8의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 인간 ApoC3이 바이오센서 칩 상에 고정되는 경우, 인간 ApoC3에 대한 20개의 인간화된 항-ApoC3 항체(mAb1 내지 mAb20)의 결합 동역학을 나타내는 일련의 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance: SPR) 센서그램이다. 점선이 있는 센서그램 및 실선이 있는 센서그램은 각각 검정 pH 7.4 및 5.5에 상응한다. 참고로, 25nM 농도에서 5E5VH5_VL8에 상응하는 센서그램이 모든 그래프에 포함된다(pH7.4에서 파선 및 pH5.5에서와 긴 파선).
도 4는 ApoC3 항체가 바이오센서 칩 상에 고정되는 경우, 20개의 인간화된 항-ApoC3 항체(mAb1 내지 mAb20) 인간 ApoC3의 결합 동역학을 나타내는 일련의 SPR 센서그램이다. 점선의 센서그램 및 실선의 센서그램은 각각 검정 pH 7.4 및 5.5에 상응한다. 참고로, 600nM의 표적 nhuApoC3 농도에서 5E5VH5_VL8에 상응하는 센서그램이 모든 그래프에 포함된다(pH7.4에서 파선 및 pH5.5에서와 긴 파선).
도 5a 내지 도 5c는, 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션된 상응하는 항체의 활성도에 대한, 제시된 온도에서 1시간 동안 항체의 인큐베이션 후 선택된 인간화된 항체 및 5E5VH5_VL8의 활성도 백분율을 나타내는 그래프이다. 활성도는 도 5a에서 회합 속도로 측정되었고, 도 5b 및 도 5c에서 RU 최대값(R0)으로서 측정되었다.
본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하고, ApoC3 기능을 저해하는 항체를 제공한다. 또한 이러한 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 이러한 항체를 암호화하는 핵산, 이러한 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포, 및 이러한 항체를 사용하여 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 간세포에 의한 TRL 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킬 수 있고, 대상체에게 투여되는 경우 ApoC3 및 ApoB의 혈청 수준의 신속한 감소 및 지속적인 감소를 초래할 수 있다. 따라서, 개시된 항-ApoC3 항체는 고중성지방혈증 및 연관된 질환(예를 들어, 심혈관 질환 및 췌장염)의 치료 및 예방에 유용하다.
1. 정의
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "ApoC3"은 아포지방단백질 C3 단백질을 지칭한다. 특정 실시형태에서, ApoC3은 인간 ApoC3이다. 예시적인 인간 ApoC3 아미노산 서열은 RefSeq 수탁 번호 NP_000031.1에 제시되어 있다. NP_000031.1의 성숙 아미노산 서열은 하기와 같다:
SEAEDASLLSFMQGYMKHATKTAKDALSSVQESQVAQQARGWVTDGFSSLKDYWSTVKDKFSEFWDLDPEVRPTSAVAA(서열번호 1).
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체" 및 "항체들"은 전장 항체, 전장 항체의 항원-결합 단편 및 항체 CDR, VH 영역 또는 VL 영역을 포함하는 분자를 포함한다. 항체의 예는 단클론성 항체, 재조합에 의해서 생산된 항체, 단일특이적 항체, 다중특이적 항체(이중특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 면역글로불린, 합성 항체, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍, 인트라바디, 이종접합체 항체, 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일 쇄 항체 또는 단일 쇄 Fvs(scFv), scFv-Fcs, 낙타 항체(예를 들어, 라마 항체) 낙타화 항체, 어피바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, 디설파이드-연결된 결합 Fvs(sdFv), 항-이디오타입(항-Id) 항체(예를 들어, 항-항 -Id 항체 포함) 및 상기 중 임의의 것의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 다클론성 항체 집단을 지칭한다. 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2), 또는 임의의 하위클래스(예를 들어, IgG2a 또는 IgG2b)를 가질 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 IgG 항체, 또는 이의 클래스(예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4) 또는 이의 하위클래스이다. 구체적인 실시형태에서, 항체는 인간화된 단클론성 항체이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된 항체"는 그의 자연 환경의 적어도 하나의 성분으로부터 식별 및 분리 및/또는 회수된 항체를 지칭한다. 용어 "단리된 항체"는 재조합 숙주 세포 내의 동일계의 항체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 폴리펩티드 및 경쇄 폴리펩티드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견된 비연속적인 항원 조합 부위를 의미한다. 이러한 특정 영역은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977)] 및 문헌[Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)], 문헌[Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)], 및 문헌[MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)]에 기재되어 있고, 이들 모두는 전문이 참고로 포함되며, 여기서 정의는 서로에 대해서 비교될 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 하위세트를 포함한다. 특정 실시형태에서, 용어 "CDR"은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) 및 Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)]에 정의된 바와 같은 CDR이다. CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 중쇄 CDR을 나타내고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 경쇄 CDR을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "프레임워크(FR) 아미노산 잔기"는 면역글로불린 쇄의 프레임워크 영역 내의 아미노산을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FR 영역"은 가변 영역의 부분이지만 CDR의 부분이 아닌 아미노산 잔기를 포함한다(예를 들어, CDR의 카밧 정의를 사용).
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "가변 영역" 및 "가변 도메인"은 상호 교환 가능하게 사용되며, 당업계에서 공통적이다. 가변 영역은 전형적으로 항체의 일부, 일반적으로, 경쇄 또는 중쇄의 일부, 전형적으로 성숙 중쇄 내의 약 아미노-말단 110 내지 120개 아미노산 또는 110 내지 125개 아미노산 및 성숙 경쇄 내의 약 90 내지 115개 아미노산을 지칭하고, 이것은 항체 사이에서 서열이 상당히 상이하고, 특정 항원에 대한 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 영역에 집중되는 반면 가변 도메인에서보다 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불린다. 임의의 특정 메커니즘 또는 이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 경쇄 및 중쇄의 CDR이 주로 항체와 항원의 상호 작용 및 특이성을 담당하는 것으로 여겨진다. 특정 실시형태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 실시형태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 가변 영역은 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 특정 실시형태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다.
용어 "VL"및 "VL 도메인"은 항체의 경쇄 가변 영역을 지칭하기 위해 상호 교환 가능하게 사용된다.
용어 "VH"및 "VH 도메인"은 항체의 중쇄 가변 영역을 지칭하기 위해 상호 교환 가능하게 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 상호 교환 가능하게 사용되며, 당업계에서 공통적이다. 불변 영역은 항체 부분, 예를 들어, 항체를 항원에 결합시키는데 직접 관여하지 않지만, 다양한 효과기 기능, 예컨대, Fc 수용체와의 상호작용을 나타낼 수 있는 경쇄 또는 중쇄의 카르복실 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해서 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 항체와 관련하여 사용되는 경우 용어 "중쇄"는 임의의 구별되는 유형, 예를 들어, 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)를 지칭할 수 있고, 이것은 IgG의 하위클래스, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 비롯하여, 각각 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 클래스를 생성시킨다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 항체와 관련하여 사용되는 경우 용어 "경쇄"는 임의의 구별되는 유형, 예를 들어, 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 카파(κ) 또는 람다(λ)를 지칭할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 널리 공지되어 있다. 구체적인 실시형태에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "EU 위치"는 문헌[Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969)] 및 문헌[Kabat et al., in "Sequences of Proteins of Immunological Interest", U.S. Dept. Health and Human Services, 5th edition, 1991]에 기재된 바와 같은 항체의 불변 영역에 대한 EU 넘버링 규칙에 따른 아미노산 위치를 지칭하고, 이들 각각은 전문이 참고로 본 명세서에 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "에 특이적으로 결합한다"는 약 1 x 10~6 M, 1 x 10-7 M, 1 x 10-8 M, 1 x 10-9 M, 1 x 10-10 M, 1 x 10-11 M, 1 x 10-12 M 미만 또는 그보다 더 작은 해리 상수(KD)로 항원에 결합하는 항체의 능력을 또는 비특이적 항원에 대한 치환도보다 적어도 2배 더 큰 친화도로 항원에 결합하는 항체의 능력을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "에피토프"는 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국지화된 영역을 지칭한다. 에피토프는, 예를 들어, 폴리펩티드(선형 또는 인접한 에피토프) 또는 에피토프의 인접한 아미노산, 예를 들어, 폴리펩티드 또는 폴리펩티드의 둘 이상의 비인접한 영역으로부터 형성될 수 있다(형태적, 비선형, 불연속 또는 비인접한 에피토프). 특정 실시형태에서, 항체가 결합하는 에피토프는 예를 들어, NMR 분광법, X-선 회절 결정학 연구, ELISA 검정, 질량 분석법과 결합된 수소/중수소 교환(예를 들어, 액체 크로마토그래피 전기 분무 질량 분석법), 펩티드 주사 검정 또는 돌연변이유발 맵핑(예를 들어, 부위-지향 돌연변이유발 맵핑)에 의해서 결정될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 본 명세서에 개시된 치료 또는 예방 조치를 지칭한다. "치료" 방법은 질환 또는 장애 또는 재발 질환 또는 장애를 예방하거나, 치유하거나, 지연시키거나, 이의 중증도를 감소시키거나, 이의 발달 위험을 감소시키거나, 이의 하나 이상의 증상을 개선시키기 위해서, 또는 이러한 치료의 부재 하에서 예상되는 것을 초과하게 대상체의 생존을 연장시키기 위해서 질환 또는 장애를 갖거나, 또는 이러한 질환 또는 장애에 취약한 대상체에게 항-ApoC3 항체를 투여하는 것을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 대상체에게 요법의 투여와 관련하여 용어 "유효량"은 목적하는 예방적 또는 치료적 효과를 달성하는 요법의 양을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "또는"은 및/또는을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약" 및 "대략"은 수치 값 또는 수치 범위를 수식하는 데 사용되는 경우, 그 값 또는 범위의 5% 내지 10% 초과 및 5% 내지 10% 미만의 편차가 언급된 값 또는 범위의 의도된 의미에 포함됨을 나타낸다.
2. 항-ApoC3 항체
본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하고, ApoC3 기능을 저해하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공한다.
특정 실시형태에서, 단리된 항체는 포유동물의 ApoC3 단백질에 결합한다. 특정 실시형태에서, 단리된 항체는 인간 ApoC3에 결합한다. 특정 실시형태에서, 단리된 항체는 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis)(시노몰거스 원숭이) ApoC3에 결합한다.
특정 실시형태에서, 단리된 항체는 산성 pH(예를 들어, pH 5.5 내지 pH 6) 하에서보다 생리 pH(예를 들어, pH 7.4)에서 더 높은 친화도로 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 결합한다. 이러한 pH-의존적 항체를 생성시키는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 일 예시적인 방법에서, 항-ApoC3 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 CDR 내의 하나 이상의 아미노 잔기는 문헌[Igawa et al., Nat Biotechnol. (2010) 28(11):1203-1207]; 문헌[Chaparro-Riggers et al., J Biol Chem. (2012) 287(14):11090-11097]; 미국 특허 번호 9,096,651 및 미국 특허 공개 번호 US20110111406A1에 기재된 바와 같이 히스티딘 잔기로 치환되며, 이들 각각은 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다. 그러나, 이러한 방법은 당업계에 널리 공지되어 있지만, 당업자는 임의의 주어진 항체의 경우, 항원에 대한 항체의 친화도를 방해하지 않으면서 항원에 대한 pH-의존적 결합을 달성하기 위해서 히스티딘으로 돌연변이될 수 있는 정확한 CDR 아미노산이 단지 경험적으로 결정될 수 있다는 것을 인지할 것이다(예를 들어, 전문이 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Edgcomb and Murphy, Proteins (2002) 49:1-6] 참고).
당업자는 항원에 대한 항체의 친화도가 해리 상수(KD)로 표현될 수 있다는 것을 인지할 것이고, 여기서 더 작은 KD는 더 높은 친화도를 나타낸다. 따라서, 특정 실시형태에서, 항-ApoC3 항체는 pH 7.4에서 제1 KD로 그리고 pH 5.5에서 제2 KD로 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 결합하고, 여기서 제2 KD와 제1 KD 간의 비는 적어도 1(예를 들어, 적어도 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100)이다.
특정 실시형태에서, 제1 KD는 100 nM 미만(예를 들어, 50, 20, 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2 또는 0.1 nM 미만)이다. 특정 실시형태에서, 제2 KD는 1 nM 초과(예를 들어, 2, 5, 10, 20 또는 50 nM 초과 또는 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5, 10, 20, 50 또는 100 μM 초과)이다. 특정 실시형태에서, 제1 KD는 100 nM 미만(예를 들어, 50, 20, 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2 또는 0.1 nM 미만)이고, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)을 발현하는 동물(예를 들어, 인간 또는 마우스)에서 항체의 반감기는 적어도 약 1일(예를 들어, 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일, 또는 약 1, 2, 3, 4, 6 또는 8주)이다. 특정 실시형태에서, ApoC3은 인간 ApoC3이고, ApoC3을 발현하는 동물은 인간이다. 특정 실시형태에서, ApoC3은 인간 ApoC3이고, ApoC3을 발현하는 동물은 인간 ApoC3을 발현하는 마우스이다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물의 간세포 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킨다(생체내에서 또는 시험관내에서). 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우, TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물의 간세포 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 약화시킨다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우, TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물의 간세포 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 적어도 약 1.1배, 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 또는 100배 약화시킨다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 식사 전, 식사 동안 또는 식사 후 대상체에게 투여되는 경우 대상체에서 식후 지방혈증을 저해할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체에서 식후 지방혈증을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 저해할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체에서 식후 지방혈증을 적어도 약 1.1배, 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 저해할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 식사 전, 식사 동안 또는 식사 후 대상체에게 투여되는 경우 대상체에서 식후 킬로미크론 또는 킬로미크론 잔존물의 수준을 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체에서 식후 킬로미크론 또는 킬로미크론 잔존물의 수준을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체에서 식후 킬로미크론 또는 킬로미크론 잔존물의 수준을 적어도 약 1.1배, 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 감소시킬 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 대상체에서 혈액으로부터 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 청소율을 증가시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항-ApoC3 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체에서 혈액으로부터의 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 청소율을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 증가시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체에서 혈액으로부터의 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 청소율을 적어도 약 1.1배, 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 증가시킬 수 있다. ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 청소를 평가하는 방법은 동위원소 트레이서(isotope tracer) 기술을 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, 여기서 동위원소는 방사성이거나 또는 안정적일 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 대상체의 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준을 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 항-ApoC3 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체의 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체에서 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준을 적어도 약 1.1배, 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 감소시킬 수 있다. 특정 실시형태에서, 대상체의 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준의 감소는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50일, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주 동안 유지된다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 지질-결합된 ApoC3(예를 들어, 트리글리세리드, TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물에 결합된 ApoC3)에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 지질 또는 지방단백질에 대한 ApoC3의 결합을 저해한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 ApoC3의 결합에 대해서 지질 또는 지방단백질과 결합하지 않는다. 특정 실시형태에서, 지질은 지방산 쇄를 포함한다. 특정 실시형태에서, 지질은 포스파티딜기를 포함한다. 특정 실시형태에서, 지질은 포스파티딜콜린(예를 들어, DMPC), 포스파티딜세린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨 또는 포스파티딜글리세롤을 포함한다. 특정 실시형태에서, 지질은 트리글리세리드이다. 특정 실시형태에서, 지방단백질은 TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체의 존재 하에서 지질 및 지방단백질(예를 들어, 트리글리세리드, TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물)에 결합하는 ApoC3의 능력은 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 항-ApoC3 항체의 부재 하에서 동일한 지방 및 지방단백질에 결합하는 ApoC3의 능력의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%이다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물의 간세포 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킨다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 바와 같은 항-ApoC3 항체의 존재 하에서 간세포(예를 들어, HepG2 세포)에 의한 TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물의 흡수는 항-ApoC3 항체의 부재 하에서 간세포(예를 들어, HepG2 세포)에 의한 TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물의 흡수보다 적어도 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5 또는 5배 더 높다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물의 간세포 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시키고, 지질-결합된 ApoC3(예를 들어, 트리글리세리드, TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물에 결합된 ApoC3)에 결합할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 아미노산 서열 FSEFWDLDPE(서열번호 2) 내의 ApoC3의 에피토프에 결합한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2 내의 적어도 하나의 아미노산을 포함하고, 선택적으로 서열번호 2에 인접한 서열번호 1로부터의 하나 이상의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5, 6, 8 또는 10에서의 아미노산 중 적어도 하나를 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5, 6, 8 또는 10에서의 아미노산 중 적어도 2개를 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5, 6, 8 또는 10에서의 아미노산 중 적어도 3개를 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5, 6, 8 또는 10에서의 아미노산 중 적어도 4개를 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 5 및 6에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5 및 6에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5 및 8에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 2, 5, 6 및 8에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 10에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 6 및 10에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 8 및 10에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 6 및 8에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 서열번호 2의 위치 6, 8 및 10에서의 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 지질-결합된 ApoC3(예를 들어, 트리글리세리드, TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물에 결합된 ApoC3)에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 TRL(예를 들어, VLDL)의 지방단백질 리파제-매개된 지방분해를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킬 수 없다. 특정 실시형태에서, 항체는 또한 TRL(예를 들어, VLDL) 또는 TRL 잔존물의 간세포 흡수를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킨다. 특정 실시형태에서, 항체는 또한 식사 전, 식사 동안 또는 식사 후 대상체에게 투여되는 경우 대상체에서 식후 지방혈증을 저해할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 또한 식사 전, 식사 동안 또는 식사 후 대상체에게 투여되는 경우 대상체에서 식후 킬로미크론 또는 킬로미크론 잔존물의 수준을 감소시킬 수 있다.
임의의 적합한 검정을 사용하여 본 명세서에 개시된 항체의 상기 기능 활성을 측정할 수 있다. 예시적인 검정은 본 명세서 실시예에 개시된 기능성 검정을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
예시적인 항-ApoC3 항체의 아미노산 서열은 본 명세서에서 표 1 내지 13에 제시되어 있다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
예시적인 인간화된 항-ApoC3 항체의 아미노산 서열은 본 명세서에서 표 8 내지 13에 제시되어 있다.
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하고, 이 항체는 본 명세서에서 표 3 또는 표 10에 제시된 VH 도메인의 CDR 중 1개, 2개 또는 3개 모두를 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 표 3 또는 표 10에 제시된 VH 도메인 중 하나의 CDRH1을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 표 3 또는 표 10에 제시된 VH 도메인 중 하나의 CDRH2를 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 표 3 또는 표 10에 제시된 VH 도메인 중 하나의 CDRH3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하고, 이 항체는 본 명세서에서 표 4 또는 표 11에 개시된 VL 도메인의 CDR 중 1개, 2개 또는 3개 모두를 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 표 4 또는 표 11에 제시된 VL 도메인 중 하나의 CDRL1을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 표 4 또는 표 11에 제시된 VL 도메인 중 하나의 CDRL2를 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 표 4 또는 표 11에 제시된 VL 도메인 중 하나의 CDRL3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 이 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 표 5 및 표 12에 제시된 항체의 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 항체의 CDR은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977)] 및 문헌[Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest (1991)]에 따라서 결정될 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체의 경쇄 CDR은 카밧에 따라 결정되고 항체의 중쇄 CDR은 맥칼럼(MacCallum)(상기)에 따라 결정된다.
특정 실시형태에서, 항체의 CDR은 면역글로불린 구조 루프의 위치를 지칭하는 코티아 넘버링 체계에 따라 결정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; 문헌[Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948]; 문헌[Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817]; 문헌[Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82]; 및 미국 특허 번호 7,709,226 참고). 전형적으로, 카밧 넘버링 관례를 사용하는 경우, 코티아 CDRH1 루프는 중쇄 아미노산 26 내지 32, 33 또는 34에 존재하고, 코티아 CDRH2 루프는 중쇄 아미노산 52 내지 56에 존재하고, 코티아 CDRH3 루프는 중쇄 아미노산 95 내지 102에 존재하는 반면, 코티아 CDRL1 루프는 경쇄 아미노산 24 내지 34에 존재하고, 코티아 CDRL2 루프는 경쇄 아미노산 50 내지 56에 존재하고, 코티아 CDRL3 루프는 경쇄 아미노산 89 내지 97에 존재한다. 카밧 넘버링 체계를 사용하여 넘버링되는 경우 코티아 CDRH1 루프의 단부는 루프의 길이에 따라서 H32와 H34 사이에서 달라진다(이는 카밧 넘버링 규칙이 H35A 및 H35B에 배치되기 때문이고; 35A도 35B도 존재하지 않는 경우, 루프는 32에서 끝나고; 35A만 존재하는 경우, 루프는 33에서 끝나고; 35A 및 35B가 모두 존재하는 경우, 루프는 34에서 끝난다).
특정 실시형태에서, 항체의 CDR은 문헌[Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136] 및 문헌[Lefranc M-P et al., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212]에 기재된 바와 같은 IMGT 넘버링 시스템에 따라서 결정될 수 있다. IMGT 넘버링 체계에 따르면, CDRH1은 위치 26 내지 35에 존재하고, CDRH2는 위치 51 내지 57에 존재하고, CDRH3은 위치 93 내지 102에 존재하고, CDRL1은 위치 27 내지 32에 존재하고, CDRL2는 위치 50 내지 52에 존재하고, CDRL3은 위치 89 내지 97에 존재한다.
특정 실시형태에서, 항체의 CDR은 AbM 초가변 영역을 지칭하고, 카밧 CDR과 코티아 구조 루프 사이의 절충을 나타내고, 옥스포드 분자의 AbM 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular Group, Inc.)에 의해서 사용되는 AbM 넘버링 체계에 따라서 결정될 수 있다.
특정 실시형태에서, 항체의 CDR은 문헌[MacCallum RM et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745]에 따라서 결정될 수 있다(예를 들어, Antibody Engineering, Kontermann and Dubel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)의 문헌[Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains"] 참고).
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 여기서 항체는 표 3에 제시된 VH 도메인의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 표 4에 제시된 VL 도메인의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 각각의 CDR은 독립적으로 본 명세서에 개시된 바와 같은 CDR의 카밧, 코티아, IMGT, 맥칼럼 또는 AbM 정의에 따라서 정의된다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 이 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서,
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIX1TX2X3GGTAYRDSVKG의 아미노산 서열(여기서, X1은 S 또는 H이고, X2는 G, E 또는 D이고, X3은 G 또는 A임)(서열번호 93)을 포함하고;
(c) CDRH3은 X4GYSD의 아미노산 서열(여기서, X4는 A 또는 H임)(서열번호 5)을 포함하고;
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSX5GKTYFY의 아미노산 서열(여기서, X5는 D 또는 G임)(서열번호 88)을 포함하고;
(e) CDRL2는 QVSNRAS(서열번호 7)의 아미노산 서열을 포함하고;
(f) CDRL3은 AX6GTYYPHT아미노산 서열(여기서, X6은 Q 또는 H임)(서열번호 8)을 포함하고,
여기서 X1, X4 및 X6 중 적어도 하나는 H이다.
특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTGGGGTAYRDSVKG(서열번호 36), SIHTEAGGTAYRDSVKG(서열번호 37), SIHTDAGGTAYRDSVKG(서열번호 38), SIHTEGGGTAYRDSVKG(서열번호 39), SISTDGGGTAYRDSVKG(서열번호 9), 또는 SIHTDGGGTAYRDSVKG(서열번호 11)의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, CDRH3은 AGYSD(서열번호 10) 또는 HGYSD(서열번호 12)의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6) 또는 KTSQGLVHSGGKTYFY(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, CDRL3은 AHGTYYPHT(서열번호 14) 또는 AQGTYYPHT(서열번호 13)의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 여기서 항체는 각각 서열번호 3, 36 및 10; 3, 37 및 10; 3, 38 및 10; 3, 39 및 10; 3, 9 및 10; 3, 11 및 10; 3, 9 및 12; 또는 3, 11 및 12에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 여기서 항체는 각각 서열번호 6, 7 및 14; 40, 7 및 14; 40, 7 및 13; 또는 6, 7 및 13에 제시된 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 19 또는 20에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 19 또는 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 15, 16, 17, 또는 18에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 19 또는 20에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공한다.특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 19 또는 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 이 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서,
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIHTX1X2GGTAYRDSVKG의 아미노산 서열(여기서, X1은 G, E 또는 D이고, X2는 G 또는 A임)(서열번호 87)을 포함하고;
(c) CDRH3은 AGYSD의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고;
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSXGKTYFY의 아미노산 서열(여기서, X는 D 또는 G임)(서열번호 88)을 포함하고;
(e) CDRL2는 QVSNRAS(서열번호 7)의 아미노산 서열을 포함하고;
(f) CDRL3은 AXGTYYPHT의 아미노산 서열(여기서, X는 Q 또는 H임)(서열번호 8)을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 이 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서,
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIHTGGGGTAYRDSVKG(서열번호 36), SIHTEAGGTAYRDSVKG(서열번호 37), SIHTDAGGTAYRDSVKG(서열번호 38), 또는 SIHTEGGGTAYRDSVKG(서열번호 39)의 아미노산 서열을 포함하고;
(c) CDRH3은 AGYSD의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고;
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6) 또는 KTSQGLVHSGGKTYFY(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함하고;
(e) CDRL2는 QVSNRAS(서열번호 7)의 아미노산 서열을 포함하고;
(f) CDRL3은 AHGTYYPHT(서열번호 14) 또는 AQGTYYPHT(서열번호 13)의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTGGGGTAYRDSVKG(서열번호 36), SIHTEAGGTAYRDSVKG(서열번호 37), SIHTDAGGTAYRDSVKG(서열번호 38), 또는 SIHTEGGGTAYRDSVKG(서열번호 39)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTGGGGTAYRDSVKG(서열번호 36), SIHTEAGGTAYRDSVKG(서열번호 37), 또는 SIHTDAGGTAYRDSVKG(서열번호 38)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTGGGGTAYRDSVKG의 아미노산 서열(서열번호 36)을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTEAGGTAYRDSVKG의 아미노산 서열(서열번호 37)을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTDAGGTAYRDSVKG의 아미노산 서열(서열번호 38)을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH2는 SIHTEGGGTAYRDSVKG의 아미노산 서열(서열번호 39)을 포함한다.
특정 실시형태에서, CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6) 또는 KTSQGLVHSGGKTYFY(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRL1은 KTSQGLVHSGGKTYFY(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, CDRL3은 AHGTYYPHT(서열번호 14) 또는 AQGTYYPHT(서열번호 13)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRL3은 AHGTYYPHT(서열번호 14)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRL3은 AQGTYYPHT(서열번호 13)의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 여기서 항체는 각각 서열번호 3, 36 및 10; 3, 37 및 10; 3, 38 및 10; 또는 3 39 및 10에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, VH 도메인은 각각 서열번호 3, 36 및 10에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, VH 도메인은 각각 서열번호 3, 37 및 10에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, VH 도메인은 각각 서열번호 3, 38 및 10에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 여기서 항체는 각각 서열번호 6, 7 및 14; 40, 7 및 14; 또는 40, 7 및 13에 제시된 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, VL 도메인은 각각 서열번호 6, 7 및 14에 제시된 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, VL 도메인은 각각 서열번호 40, 7 및 14에 제시된 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공하며, 여기서 항체는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 3, 36, 10, 6, 7 및 14; 3, 37, 10, 40, 7 및 14; 3, 38, 10, 40, 7 및 14; 3, 39, 10, 6, 7 및 14; 3, 37, 10, 40, 7 및 13; 또는 3, 38, 10, 40, 7 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 3, 36, 10, 6, 7 및 14에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 3, 37, 10, 40, 7 및 14에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 3, 38, 10, 40, 7 및 14에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 89 또는 90에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 89 또는 90에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 44에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 46에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 48에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 50에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 51에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 52에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 89에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하며, 선택적으로, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열번호 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하지 않는다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 90에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하며, 선택적으로, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열번호 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 91 또는 92에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 91 또는 92에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 57에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 59에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 61에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 62에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 63에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 64에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 65에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 91에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 92에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 89 또는 90에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 91 또는 92에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(예를 들어, 인간화된 항체)를 제공한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 89 또는 90에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 91 또는 92에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 42 및 54, 43 및 55, 44 및 56, 45 및 57, 46 및 58, 46 및 54, 47 및 58, 47 및 54, 48 및 58, 48 및 54, 49 및 59, 49 및 60, 50 및 59, 50 및 60, 51 및 61, 52 및 62, 53 및 62, 43 및 63, 44 및 64, 45 및 65, 89 및 91, 또는 90 및 92에 제시된 아미노산 서열을 갖는, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 42 및 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 43 및 55에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 44 및 56에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 45 및 57에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 46 및 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 46 및 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 47 및 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 47 및 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 48 및 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 48 및 54에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 49 및 59에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 49 및 60에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 50 및 59에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 50 및 60에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 51 및 61에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 52 및 62에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 53 및 62에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 43 및 63에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 44 및 64에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 45 및 65에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 89 및 91에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 선택적으로, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열번호 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하지 않는다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 90 및 92에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 선택적으로, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열번호 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 이 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서,
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIX1TDGGGTAYRDSVKG의 아미노산 서열(여기서, X1은 S 또는 H임)(서열번호 4)을 포함하고;
(c) CDRH3은 X2GYSD의 아미노산 서열(여기서, X2는 A 또는 H임)(서열번호 5)을 포함하고;
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하고;
(e) CDRL2는 QVSNRAS(서열번호 7)의 아미노산 서열을 포함하고/하거나;
(f) CDRL3은 AX3GTYYPHT의 아미노산 서열(여기서, X3은 Q 또는 H임)(서열번호 8)을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 이 항체는 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서,
(a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SIX1TDGGGTAYRDSVKG의 아미노산 서열(여기서, X1은 S 또는 H임)(서열번호 4)을 포함하고;
(c) CDRH3은 X2GYSD의 아미노산 서열(여기서, X2는 A 또는 H임)(서열번호 5)을 포함하고;
(d) CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하고;
(e) CDRL2는 QVSNRAS(서열번호 7)의 아미노산 서열을 포함하고;
(f) CDRL3은 AX3GTYYPHT의 아미노산 서열(여기서, X3은 Q 또는 H임)(서열번호 8)을 포함하고,
X1, X2 및 X3 중 적어도 하나는 H이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 항체는,
(a) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1;
(b) 서열번호 9 또는 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH2;
(c) 서열번호 10 또는 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH3;
(d) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1;
(e) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL2; 및/또는
(f) 서열번호 13 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 항체는,
(a) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1;
(b) 서열번호 9 또는 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH2;
(c) 서열번호 10 또는 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH3;
(d) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1;
(e) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL2; 및
(f) 서열번호 13 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함하고,
단리된 항체는 각각 서열번호 3, 9, 10, 6, 7 및 13에 제시된 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 서열을 포함하지 않는다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 여기서 항체는 각각 서열번호 3, 9 및 10; 3, 11 및 10; 3, 9 및 12; 또는 3, 11 및 12에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, VH 도메인은 각각 서열번호 3, 11 및 10에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, VH 도메인은 각각 서열번호 3, 9 및 12에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, VH 도메인은 각각 서열번호 3, 11 및 12에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 여기서 항체는 각각 서열번호 6, 7 및 13; 또는 6, 7 및 14에 제시된 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, VL 도메인은 각각 서열번호 6, 7 및 14에 제시된 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 여기서 항체는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 3, 11, 10, 6, 7 및 13; 3, 9, 12, 6, 7 및 13; 3, 9, 10, 6, 7 및 14; 3, 11, 10, 6, 7 및 14; 3, 9, 12, 6, 7 및 14; 3, 11, 12, 6, 7 및 13; 또는 3, 11, 12, 6, 7 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 3, 11, 10, 6, 7 및 14에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 3, 9, 12, 6, 7 및 14에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 17에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 19 또는 20에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 19 또는 20에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 실시형태에서, 항체는 서열번호 15, 16, 17 또는 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 19 또는 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 16 및 19, 17 및 19, 18 및 19, 15 및 20, 16 및 20, 17 및 20, 또는 18 및 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 16 및 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 17 및 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
임의의 Ig 불변 영역이 본 명세서에 개시된 단리된 항체에 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, Ig 불변 영역은 인간 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린(Ig) 분자의 불변 영역, 및/또는 면역글로불린 분자의 임의의 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 임의의 하위클래스(예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)의 불변 영역이다. 특정 실시형태에서, Ig 불변 영역은 인간 또는 인간화된 Ig 불변 영역이다.
특정 실시형태에서, 불변 영역은 야생형 인간 Ig(예를 들어, IgG) 중쇄 불변 영역의 변이체이고, 여기서 변이체 인간 Ig 중쇄 불변 영역은 동일한 조건 하에서 인간 FcRn에 대한 상응하는 야생형 인간 Ig 중쇄 불변 영역의 친화도에 비해서 산성 pH(예를 들어, pH 5.5 내지 pH 6)에서 인간 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해서 증가된 친화도(예를 들어, 적어도 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 또는 20배 증가)를 갖는다. 특정 실시형태에서, 변이체 인간 Ig 중쇄 불변 영역은 동일한 조건 하에서 인간 FcRn에 대한 야생형 인간 Ig 중쇄 불변 영역의 친화도에 비해서 생리 pH(예를 들어, pH 7.4)에서 인간 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해서 유사한 또는 감소된 친화도를 갖는다(예를 들어, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9 또는 2배 이하만큼 증가되거나, 이에 동일하거나 또는 감소된다). 특정 실시형태에서, 불변 영역은 야생형 Ig(예를 들어, IgG) 불변 도메인 또는 이의 FcRn-결합 단편(예를 들어, Fc 또는 힌지-Fc 도메인 단편)으로부터의 1개, 2개 또는 그 초과의 아미노산(예를 들어, 하나 이상의 치환, 삽입 또는 결실을 가짐)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 생체내에서 변이체 불변 영역을 갖는 항체의 반감기는 생체내에서 야생형 불변 도메인 또는 이의 FcRn-결합 단편을 갖는 상응하는 항체의 반감기에 비해서 증가된다. 예를 들어, 생체내에서 항체의 반감기를 증가시킬 돌연변이의 예에 대해서는 전문이 참고로 본 명세서에 포함된 국제 공개 번호 WO 02/060919; WO 98/23289; 및 WO 97/34631; 및 미국 특허 번호 5,869,046, 6,121,022, 6,277,375, 6,165,745, 8,088,376 및 8,163,881을 참고하기 바란다. 특정 실시형태에서, 하나 이상의 상이한 아미노산은 EU 넘버링 시스템에 따라서 넘버링된 제2 불변(CH2) 도메인(인간 IgG1의 잔기 231-340) 및/또는 제3 불변(CH3) 도메인(인간 IgG1의 잔기 341-447) 내에 존재한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체의 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG4)의 불변 영역은 각각 EU 넘버링 시스템에 따라서 넘버링된, 위치 252, 254 및 256에서 아미노산 티로신(Y), 트레오닌(T), 및 글루탐산(E)을 포함한다(전문이 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 번호 7,658,921 참고). "YTE IgG"라고 지칭되는 이러한 유형의 IgG는 동일한 항체의 야생형 버전과 비교할 때 4배 증가된 반감기를 나타내는 것으로 밝혀져 있다(전문이 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Dall'Acqua WF et al., (2006) J Biol Chem 281: 23514-24] 참고). 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체의 IgG(예를 들어, IgG1)의 불변 영역은 EU 넘버링 시스템에 따라서 넘버링된, 위치 434에서 아미노산 알라닌(A), 세린(S), 티로신(Y) 또는 페닐알라닌(F)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체의 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, 또는 IgG4)의 불변 영역은 각각 EU 넘버링 시스템에 따라서 넘버링된, 위치 433, 434 및 436에서 아미노산 라이신(K), 페닐알라닌(F), 및 티로신(Y)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체의 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, 또는 IgG4)의 불변 영역은 각각 EU 넘버링 시스템에 따라서 넘버링된, 위치 428 및 434에서 아미노산 류신(L) 및 세린(S)을 포함한다. 산성 조건 하에서 FcRn에 대해서 증가된 친화도를 가질 수 있는 추가 IgG 불변 영역은 전문이 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Ward et al., Mol. Immunol. (2015) 67(200):131-41]에 기재되어 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라서 넘버링된, 위치 251-257, 285-290, 308-314, 385-389 및 428-436에서 아미노산 잔기의 1개, 2개 또는 3개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 IgG 불변 도메인을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 서열번호 21, 22, 23, 24, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85 또는 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 단리된 항체는 서열번호 25 또는 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72 또는 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 각각 서열번호 66 및 74, 67 및 74, 68 및 74, 69 및 74, 70 및 74, 71 및 74, 72 및 74, 또는 73 및 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 또는 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 각각 서열번호 27 및 35, 28 및 35, 29 및 35, 30 및 35, 31 및 35, 32 및 35, 33 및 35, 또는 34 및 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다.
3. 사용 방법
ApoC3은 간세포에 의한 TRL(예를 들어, VLDL) 및 TRL 잔존물 흡수 및 청소를 저해하고, TRL(예를 들어, VLDL)의 지방단백질 리파제-매개된 지방분해를 저해함으로써, 대상체의 혈액에서 트리글리세리드 수준을 증가시키는 작용을 한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 간세포에 의한 TRL(예를 들어, VLDL) 및 TRL 잔존물 흡수 및 제거를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킬 수 있거나 또는 TRL(예를 들어, VLDL)의 지방단백질 리파제-매개된 지방분해를 저해하는 ApoC3의 능력을 약화시킬 수 있다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체의 혈액에서 ApoC3의 활성을 저해하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, ApoC3의 활성은 간세포에 의한 TRL(예를 들어, VLDL) 및 TRL 잔존물 흡수 및 청소의 저해이다. 특정 실시형태에서, ApoC3의 활성은 TRL의 지방단백질 리파제-매개된 지방분해의 저해이다. 특정 실시형태에서, ApoC3의 활성은 간세포에 의한 TRL(예를 들어, VLDL) 및 TRL 잔존물 흡수 및 청소의 저해 및 TRL의 지방단백질 리파제-매개된 지방분해의 저해이다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 대상체에서 혈액으로부터 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 청소율을 증가시키는 데 유용하다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 혈액으로부터 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 청소율을 증가시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 대상체의 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준을 감소시키는 데 유용하다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체의 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준을 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 방법은 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체의 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 감소시킨다. 특정 실시형태에서, 방법은 본 명세서에 개시된 방법 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 평가되는 경우 대상체에서 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준을 적어도 약 1.1배, 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 감소시킨다. 특정 실시형태에서, 대상체의 혈액에서 ApoC3 및/또는 ApoB(예를 들어, ApoB48 및/또는 ApoB100)의 수준의 감소는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50일, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주 동안 유지된다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 대상체의 혈액에서 트리글리세리드 수준을 감소시키는 데 유용하다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체의 혈액에서 트리글리세리드 수준을 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 고중성지방혈증의 치료에 유용하다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 고중성지방혈증을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 킬로미크론혈증을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 킬로미크론혈증 증후군을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 대상체에서 식후 지방혈증을 치료 및 예방하는 데 유용하다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 식후 지방혈증을 저해하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 항-ApoC3 항체는 식사 전, 식사 동안 또는 식사 후에 대상체에게 투여될 수 있다.
이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 본 출원인은 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체가 또한 식사 전, 식사 동안 또는 식사 후 대상체에게 투여되는 경우 대상체에서 식후 킬로미크론 또는 킬로미크론 잔존물의 수준을 감소시킬 수 있다고 여긴다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 식후 킬로미크론 또는 킬로미크론 잔존물의 수준을 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 항-ApoC3 항체는 식사 전, 식사 동안 또는 식사 후에 대상체에게 투여될 수 있다.
고중성지방혈증을 갖는 환자에서 혈액 중의 트리글리세리드 수준의 감소는 췌장염의 발달 위험을 감소시킬 수 있다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 고중성지방혈증을 갖는 대상체에서 췌장염의 위험을 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 대상체에서 심혈관 질환의 위험을 감소시키는 데 유용하다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 고중성지방혈증을 갖는 대상체에서 심혈관 질환의 위험을 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 고중성지방혈증 또는 과도한 식후 지방혈증과 연관되거나 이로 인해서 유발되는 임의의 심혈관 질환의 발달 위험은 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물의 투여에 의해서 감소될 수 있다. 위험이 감소될 수 있는 심혈관 질환은 비제한적으로 관상 동맥 질환, 죽상경화증, 협심증, 심근경색증 및 뇌졸중을 포함한다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물은 단독으로 또는 추가 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 추가 치료제는 또 다른 지질 저하제이다. 임의의 1종 이상의 지질 저하제가 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물과 조합하여 사용될 수 있다. 적합한 지질 저하제는 비제한적으로 HMG-CoA 리덕타제 저해제(예를 들어, 아토바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴 또는 심바스타틴), 피브레이트, 니아신, 담즙 격리제(예를 들어, 콜레스티라민, 콜레스티폴 및 콜레세벨람), 식이 콜레스테롤 흡수 저해제(예를 들어, 에제티미브), 마이크로솜 트리글리세리드 트랜스퍼 단백질(MTP) 저해제(예를 들어, 로미타피드), 피토스테롤, 췌장 리파제 저해제(예를 들어, 오를리스타트), 콜레스테릴 에스테르 트랜스퍼 단백질 저해제, 스쿠알렌 합성효소 저해제(예를 들어, TAK-475, 자라고즈산(zaragozic acid) 및 RPR 107393), ApoA-1 밀라노, 석시노부콜(AGI-1067), 지방단백질-B 저해제(예를 들어, 미포머센) 및 프로단백질 컨버타제 섭틸리신/케톡신 타입 9(PCSK9) 저해제(예를 들어, 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙 및 보코시주맙)를 포함한다. 특정 실시형태에서, 추가 지질 저하제는 에제티미브와 HMG-CoA 리덕타제 저해제의 조합물이다. 특정 실시형태에서, 지질 저하제는 에제티미브, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 PCSK9 저해제의 조합물이다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물은 다양한 경로에 의해서 대상체에게 전달될 수 있다. 이것은 비경구, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하 경로를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체 또는 약제학적 조성물은 피하 또는 정맥내로 전달된다.
병태의 치료 또는 예방에 효과적일 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물의 양은 질환의 본성에 좌우될 것이며, 표준 임상 기술에 의해서 경험적으로 결정될 수 있다. 조성물에 사용되는 정확한 용량은 또한 투여 경로 및 그로 인한 감염 또는 질환의 심각성에 따라 달라질 것이며, 의사 판단 및 각 대상체의 상황에 따라 결정되어야 한다. 예를 들어, 유효 용량은 또한 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태(나이, 체중 및 건강 포함), 환자가 인간 또는 동물인지의 여부, 투여되는 다른 의약 또는 치료가 예방적인지 치료적인지의 여부에 따라 달라질 수 있다. 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 약제학적 조성물은 임의의 빈도(예를 들어, 매주, 2주 마다, 3주 마다, 4주 마다, 매월, 2개월 마다)로 투여될 수 있다. 일반적으로, 환자는 인간이지만, 트랜스제닉 포유 동물을 포함하는 비인간 포유 동물도 치료될 수 있다. 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 치료 투여량 및 용량을 최적으로 적정한다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 또한 면역검정, 예컨대, 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), 면역침전 또는 웨스턴 블롯을 비롯한 당업자에게 공지된 전통적인 면역조직학적 방법을 사용하여 생물학적 샘플에서 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 단백질 수준을 검정하는 데 사용될 수 있다. 적합한 항체 검정 표지는 당업계에 공지되어 있고, 효소 표지, 예컨대, 글루코스 옥시다제; 방사성동위원소, 예컨대, 아이오딘(125I, 121I), 탄소(14C), 황(35S), 삼중수소(3H), 인듐(121In) 및 테크네튬(99Tc); 발광 표지, 예컨대, 루미놀; 및 형광 표지, 예컨대, 플루오레세인 및 로다민 및 비오틴을 포함한다. 이러한 표지는 본 명세서에 개시된 항체를 표지하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 인식하는 제2 항체가 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 단백질 수준을 검출하기 위해 항-ApoC3 항체와 함께 표지되어 사용될 수 있다.
ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 단백질의 발현 수준을 검정하는 것은 제1 생물학적 샘플에서 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 단백질의 수준을 직접적으로(예를 들어, 절대 단백질 수준을 결정 또는 추정함으로써) 또는 상대적으로(예를 들어, 제2 생물학적 샘플에서 질환 연관된 단백질 수준과 비교함으로써) 정성적으로 또는 정량적으로 측정 또는 추정하는 것을 포함하도록 의도된다. 제1 생물학적 샘플에서 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 폴리펩티드 발현 수준을 측정 또는 추정하고, 표준 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 단백질 수준과 비교할 수 있고, 표준은 장애를 갖지 않는 개체로부터 수득된 제2 생물학적 샘플로부터 취해지거나 또는 장애를 갖지 않는 개체의 집단으로부터의 수준을 평균냄으로써 결정된다. 본 기술에서 이해되는 바와 같이, 일단 "표준" ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 폴리펩티드 수준이 알려지면, 비교를 위한 표준으로서 반복적으로 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생물학적 샘플"은 대상체, 세포주, 조직 또는 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)을 잠재적으로 발현하는 세포의 다른 기원으로부터 수득된 임의의 생물학적 샘플을 지칭한다. 동물(예를 들어, 인간)로부터 조직 생검 및 체액을 얻는 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 생물학적 샘플은 말초 단핵 혈액 세포를 포함한다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 표준화되고, 본 설명에 기초하여 시험관내 및 생체내 적용을 포함하여 예후, 진단, 모니터링 및 스크리닝 응용에 사용될 수 있다. 면역계 상태 또는 면역 반응의 시험관내 평가 및 측정을 위한 예후, 진단, 모니터링 및 스크리닝 검정 및 키트를 사용하여 증가된 ApoC3 활성을 갖는다고 공지되거나 이를 갖는 것으로 의심되는 환자 샘플을 포함하는 환자 샘플을 평가하기 위해서 예측, 진단 및 모니터링할 수 있다. 일 실시형태에서, 항-ApoC3 항체는 생검 샘플의 면역조직화학에 사용될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 항-ApoC3 항체를 사용하여 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)의 수준을 검출할 수 있고, 이어서 이 수준은 특정 질환 증상에 관련될 수 있다. 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 검출 가능한 표지 또는 기능성 표지를 가질 수 있다. 형광 표지가 사용될 때, 현재 이용 가능한 현미경 및 형광 활성화 세포 분류기 분석(FACS) 또는 당업계에 공지된 두 방법의 조합이 특정 결합 구성원을 식별하고 정량하는 데 이용될 수 있다. 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 형광 표지를 가질 수 있다. 예시적인 형광 표지는 예를 들어, 반응성 및 접합된 프로브, 예를 들어, 아미노쿠마린, 플루오레세인 및 텍사스 레드, 알렉사 플루오르 염료, Cy 염료 및 DyLight 염료를 포함한다. 항-ApoC3 항체는 방사성 표지, 예컨대, 동위원소 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 67Cu, 90Y, 99Tc, 111In, 117Lu, 121I, 124I, 125I, 131I, 198Au, 211At, 213Bi, 225Ac 및 186Re를 가질 수 있다. 방사성 표지가 사용되는 경우, 당업계에 공지된 현재 이용 가능한 계수 절차를 사용하여 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 대한 항-ApoC3 항체의 특이적 결합을 식별하고 정량할 수 있다. 표지가 효소인 경우에, 당업계에 공지된 바와 같이 현재 이용되는 비색, 분광 광도, 형광 분석법, 전류 측정법 또는 기체 측정 기술 중 임의의 것에 의해 검출이 달성될 수 있다. 이는 항체와 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 간의 복합체의 형성을 허용하는 조건 하에서 샘플 또는 대조군 샘플을 항-ApoC3 항체와 접촉시킴으로써 달성될 수 있다. 항체와 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 간의 임의의 복합체를 검출하고, 샘플 및 대조군에서 비교한다. 본 명세서에 개시된 항체는 또한 면역친화도 정제를 통해서 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)을 정제하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)의 존재 정도의 정량 분석을 위해 시험 키트 형태로 제조될 수 있는 분석 시스템이 본 명세서에 또한 포함된다. 시스템 또는 시험 키트는 표지된 성분, 예를 들어, 표지된 ApoC3 및 1종 이상의 추가의 면역화학 시약을 포함할 수 있다.
4. 약제학적 조성물
생리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제 중에 원하는 순도를 갖는 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공된다(Remington 's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이고, 완충제, 예컨대, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 산화방지제, 예컨대, 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제(예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물, 예컨대, 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이팅제, 예컨대, EDTA; 당, 예컨대, 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대 이온, 예컨대, 나트륨; 금속 착물(예를 들어, Zn-단백질 착물); 또는 비이온성 계면활성제, 예컨대, TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
구체적인 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체 중에 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체, 및 선택적으로 1종 이상의 추가 예방제 또는 치료제를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체 중에 유효량의 본 명세서에 개시된 항체, 및 선택적으로 1종 이상의 추가 예방제 또는 치료제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 약제학적 조성물 중에 포함된 유일한 활성 성분이다. 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물은 ApoC3 활성을 저해하고, 병태, 예컨대, 암 또는 감염성 질환의 치료에 유용할 수 있다.
비경구 제제에 사용되는 약제학적으로 허용 가능한 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항미생물제, 등장제, 완충제, 산화방지제, 국소 마취제, 현탁화제 및 분산화제, 유화제, 격리제 또는 킬레이팅제 및 다른 약제학적으로 허용 가능한 물질을 포함한다. 수성 비히클의 예는 염화나트륨 주사, 링거 주사, 등장성 포도당 주사, 멸균수 주사, 포도당 및 락티드 링거 주사를 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 식물 기원의 고정유, 면실유, 옥수수유, 참기름 및 땅콩유를 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항미생물제를, 페놀 또는 크레졸, 수은, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스테르, 티메로살, 벤즈알코늄 클로라이드 및 벤즈에토늄 클로라이드를 포함하는 다용량 용기에 포장된 비경구 제제에 첨가할 수 있다. 등장제는 염화나트륨 및 덱스트로스를 포함한다. 완충제는 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 산화방지제는 중황산나트륨을 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 염산염을 포함한다. 현탁화제 및 분산화제는 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리소르베이트 80(TWEEN® 80)을 포함한다. 금속 이온용 격리제 또는 킬레이팅제는 EDTA를 포함한다. 약제학적 담체는 또한 수 혼화성 비히클을 위한 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 및 프로필렌 글리콜; 및 pH 조정을 위한 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
약제학적 조성물은 대상체에 대한 임의의 투여 경로를 위해서 제형화될 수 있다. 투여 경로의 구체적인 예는 비강내, 경구, 폐, 경피, 피내 및 비경구를 포함한다. 피하, 근육내 또는 정맥내 주사를 특징으로 하는 비경구 투여가 또한 본 명세서에서 고려된다. 주사제는 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전 액체 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태, 또는 에멀젼과 같은 통상적인 형태로 제조될 수 있다. 주사제, 용액 및 에멀젼은 또한 1종 이상의 부형제를 함유한다. 적합한 부형제는 예를 들어, 물, 염수, 덱스트로스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 또한, 원하는 경우, 투여되는 약제학적 조성물은 소량의 무독성 보조 물질, 예를 들어, 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 안정화제, 용해도 증강제 및 다른 이러한 작용제, 예를 들어 아세트산 나트륨, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올 아민올레에이트 및 시클로덱스트린을 함유할 수 있다.
항체의 비경구 투여를 위한 제제는 주사 준비가 된 멸균 용액, 피하 정제, 주사 준비가 된 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 조합될 준비가 된 멸균 건조 불용성 제품 및 멸균 에멀젼을 비롯한, 사용 직전에 용매와 조합될 준비가 된 멸균 건조 용해성 제품, 예컨대, 동결 건조된 분말을 포함한다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.
정맥내 투여되는 경우, 적합한 담체는 생리 식염수 또는 인산염 완충 식염수(PBS), 및 증점제 및 가용화제, 예컨대 글루코스, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리 프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물을 함유하는 용액을 포함한다.
항체를 포함하는 국소 혼합물은 국소 및 전신 투여에 대해 기재된 바와 같이 제조된다. 생성된 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있고, 크림, 겔, 연고, 에멀젼, 용액, 엘릭시르(elixir), 로션, 현탁액, 팅크(tincture), 페이스트, 폼(foam), 에어로졸, 관주제(irrigation), 스프레이, 좌제, 붕대, 피부 패치 또는 국소 투여에 적합한 임의의 다른 제형으로 제형화될 수 잇다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 예컨대, 흡입에 의한 국소 적용을 위한 에어로졸로서 제형화될 수 있다(예를 들어, 염증성 질환, 특히 천식의 치료에 유용한 스테로이드의 전달을 위한 에어로졸을 기재한 미국 특허 번호 4,044,126, 4,414,209 및 4,364,923 참고). 기도에 투여하기 위한 이들 제형은 네블라이저용 에어로졸 또는 용액의 형태이거나, 단독으로 또는 락토스와 같은 불활성 담체와 조합된 흡입용 초미세 분말 형태일 수 있다. 이러한 경우에, 제형의 입자는 일 실시형태에서, 50미크론 미만, 일 실시형태에서 10미크론 미만의 직경을 가질 것이다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체는 국지 또는 국소 적용, 예컨대, 피부 및 점막, 예컨대, 눈에서의 국소 적용을 위해서, 겔, 크림 및 로션의 형태로, 그리고 눈에 대한 적용을 위해서 또는 수조내(intracisternal) 또는 척수내(intraspinal) 적용을 위해서 제형화될 수 있다. 경피 전달 및 또한 눈 또는 점막 투여, 또는 흡입 요법을 위한 국소 투여가 고려된다. 항체의 비강 용액은 단독으로 또는 다른 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 투여될 수도 있다.
이온 삼투 및 전기 영동 장치를 포함하는 경피 패치는 당업자에게 널리 공지되어 있으며, 항체를 투여하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 매치는 미국 특허 번호 6,267,983, 6,261,595, 6,256,533, 6,167,301, 6,024,975, 6,010715, 5,985,317, 5,983,134, 5,948,433 및 5,860,957에 개시되어 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 것을 포함하는 약제학적 조성물은 동결건조된 분말이며, 이것은 용액, 에멀젼 및 다른 혼합물로서 투여하기 위해 재구성될 수 있다. 그것은 또한 재구성되거나 고체 또는 겔로 제형화될 수 있다. 동결 건조된 분말은 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 유도체를 적합한 용매에 용해시켜 제조된다. 일부 실시형태에서, 동결 건조된 분말은 멸균성이다. 용매는 분말로부터 제조된 분말 또는 재구성된 용액의 안정성 또는 다른 약리학적 성분을 개선시키는 부형제를 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 덱스트로스, 소르비톨, 프룩토스, 옥수수 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코스, 수크로스 또는 다른 적합한 작용제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 용매는 또한 완충제, 예컨대, 시트레이트, 인산나트륨 또는 인산칼륨 또는 일 실시형태에서 대략 중성 pH인 당업자에게 공지된 다른 이러한 완충제를 함유할 수 있다. 용액의 후속 멸균 용액, 그 다음 당업자에게 공지된 표준 조건 하에서의 동결 건조가 목적하는 제형을 제공한다. 일 실시형태에서, 생성된 용액은 동결 건조를 위한 바이알 내에 분배될 것이다. 각각의 바이알은 단일 용량 또는 다중 용량의 화합물을 함유 것이다. 동결 건조된 분말은 적절한 조건, 예를 들어 약 4℃ 내지 실온에서 저장될 수 있다. 주사용수를 사용한 동결 건조된 분말의 재구성은 비경구 투여에 사용하기 위한 제형을 제공한다. 재구성을 위해, 동결 건조된 분말을 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 첨가한다. 정확한 양은 선택한 화합물에 따라 다르다. 이러한 양은 경험적으로 결정될 수 있다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 및 본 명세서에 제공된 다른 조성물은 또한 특정 조직, 수용체 또는 치료될 대상체의 신체의 다른 면적에 표적화되도록 제형화될 수 있다. 이러한 많은 표적화 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 본 발명의 조성물에 사용하기 위한 모든 이러한 표적화 방법이 본 명세서에서 고려된다. 표적화 방법의 비제한적인 예에 대해서는, 미국 특허 번호 6,316,652, 6,274,552, 6,271,359, 6,253,872, 6,139,865, 6,131,570, 6,120,751, 6,071,495, 6,060,082, 6,048,736, 6,039,975, 6,004,534, 5,985,307, 5,972,366, 5,900,252, 5,840,674, 5,759,542 및 5,709,874를 참고하기 바란다.
생체 내 투여에 사용될 조성물은 멸균될 수 있다. 이는 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.
5. 항-ApoC3 항체를 생산하는 폴리뉴클레오티드, 벡터 및 방법
또 다른 양상에서, 본 명세서에는 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 경쇄 가변 영역 또는 중쇄 가변 영역)을 포함하는 폴리뉴클레오티드 및 벡터, 예를 들어, 숙주 세포(예를 들어, 이. 콜라이(E. coli) 및 포유 동물 세포)에서의 재조합 발현을 위한 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 제공된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "단리된" 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자는 핵산 분자의 자연 공급원(예를 들어, 마우스 또는 인간)에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 것이다. 추가로, "단리된" 핵산 분자, 예컨대, cDNA 분자는 재조합 기술에 의해 제조될 때 다른 세포 물질 또는 배양 배지가 실질적으로 없거나, 또는 화학적으로 합성될 때 화학 전구체 또는 다른 화학 물질이 실질적으로 없다. 예를 들어, "실질적으로 없는"이라는 표현은 약 15%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만(특히 약 10% 미만)의 다른 물질, 예를 들어, 세포 물질, 배양 배지, 다른 핵산 분자, 화학 전구체 또는 다른 화학물질을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자의 제제를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체를 암호화하는 핵산 분자(들)가 단리되거나 정제된다.
특정 양태에서, 본 명세서에는 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 폴리펩티드에 특이적으로 결합하고, 본 명세서에 개시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 항체, 뿐만 아니라 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 폴리펩티드에 대한 결합에 대해서 (예를 들어, 용량-의존적인 방식으로) 이러한 항체와 경쟁하거나 또는 이러한 항체의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
특정 양태에서, 본 명세서에는 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄 또는 중쇄를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 폴리뉴클레오티드는 본 명세서에 개시된 항체의 VH, VL 또는 CDR을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다(예를 들어, 본 명세서에서 표 1 내지 4 참고).
또한, 예를 들어, 코돈/RNA 최적화, 이종 신호 서열로의 대체, 및 mRNA 불안정성 요소의 제거에 의해 최적화된, 항-ApoC3 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 제공된다. mRNA에서 코돈 변화를 도입하고, 저해 영역을 제거함으로써 재조합 발현을 위해서 항-ApoC3 항체를 암호화하는 최적화된 핵산(예를 들어, 경쇄, 중쇄, VH 도메인, 또는 VL 도메인)을 생성시키는 방법은 따라서 미국 특허 번호 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; 및 6,794,498에 기재된 최적화 방법을 개작함으로써 수행될 수 있다. 예를 들어, RNA 내의 잠재적 스플라이스 부위 및 불안정성 요소(예를 들어, A/T 또는 A/U 풍부 요소)는 재조합 발현을 위한 RNA의 안정성을 증가시키기 위해서 핵산 서열에 의해서 암호화된 아미노산을 변경시키지 않으면서 돌연변이될 수 있다. 변경은 예를 들어, 동일한 아미노산에 대한 대안적인 코돈을 사용한 유전자 코드의 축퇴를 이용한다. 일부 실시형태에서, 보존적 돌연변이, 예를 들어, 유사한 화학적 구조 및 특성 또는 본래 아미노산으로서의 기능을 갖는 유사한 아미노산을 암호화하기 위해 하나 이상의 코돈을 변경하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 방법은 항-ApoC3의 발현을 최적화되지 않은 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 항-ApoC3의 발현에 비해서 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90 배 또는 100배 또는 그 초과만큼 증가시킬 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 암호화하는 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열(예를 들어, VL 도메인 또는 VH 도메인)은 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 암호화하는 비최적화된 폴리뉴클레오티드 서열(예를 들어, VL 도메인 또는 VH 도메인)의 안티센스(예를 들어, 상보성) 폴리뉴클레오티드에 혼성화될 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체 또는 단편을 암호화하는 최적화된 뉴클레오티드 서열은 고염격성 조건 하에서 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 암호화하는 비최적화된 폴리뉴클레오티드 서열의 안티센스 폴리뉴클레오티드에 혼성화된다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 암호화하는 최적화된 뉴클레오티드 서열은 고엄격성, 중간 또는 낮은 엄격성 조건 하에서 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 암호화하는 비최적화된 뉴클레오티드 서열의 안티센서 폴리뉴클레오티드에 혼성화된다. 혼성화 조건에 관한 정보는, 예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 출원 공보 번호 US 2005/0048549(예를 들어, 단락 72-73)에 기재되어 있다.
폴리뉴클레오티드를 얻을 수 있고, 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 본 명세서에 개시된 항체, 예를 들어, 표 1에 기재된 항체 및 이들 항체의 변형된 버전을 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 당업계에 널리 공지된 방법을 사용하여 결정될 수 있고, 즉, 특정 아미노산을 암호화하는 것으로 공지된 뉴클레오티드 코돈을 항체를 암호화하는 핵산을 생성시키는 그러한 방식으로 조립한다. 항체를 암호화하는 그러한 폴리뉴클레오티드는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오티드로부터 조립될 수 있고(예를 들어, 문헌[Kutmeier G et al., (1994), BioTechniques 17: 242-6]에 기재된 바와 같음), 이는 간략하게 항체를 암호화하는 서열의 일부를 함유하는 중첩 올리고뉴클레오티드의 합성, 이들 올리고뉴클레오티드의 어닐링 및 결찰, 및 이어서 PCR에 의해 결찰된 올리고뉴클레오티드의 증폭을 포함한다.
대안적으로, 본 명세서에 개시된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 적합한 공급원(예를 들어, 하이브리도마)으로부터의 핵산으로부터 당업계에 널리 공지된 방법(예를 들어, PCR 및 다른 분자 클로닝 방법)을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 공지된 서열의 3' 말단 및 5' 말단에 혼성화 가능한 합성 프라이머를 사용한 PCR 증폭을 관심 항체를 생산하는 하이브리도마 세포로부터 수득된 게놈 DNA를 사용하여 수행할 수 있다. 이러한 PCR 증폭 방법을 사용하여 항체의 경쇄 또는 중쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 핵산을 수득할 수 있다. 이러한 PCR 증폭 방법을 사용하여 항체의 가변 경쇄 영역 또는 가변 중쇄 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 핵산을 수득할 수 있다. 증폭된 핵산은 숙주 세포에서의 발현 및 추가의 클로닝, 예를 들어 키메라 및 인간화된 항체를 생성하기 위해 벡터로 클로닝될 수 있다.
특정 항체를 암호화하는 핵산을 함유하는 클론이 사용 가능하지 않지만, 항체 분자의 서열을 알고 있는 경우, 면역글로불린을 암호화하는 핵산은 서열의 3' 단부 및 5' 단부에 혼성화 가능한 합성 프라이머를 사용하여 PCR 증폭에 의해서 또는 특정 유전자 서열에 특이적인 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 클로닝하여 항체를 암호화하는 cDNA 라이브러리로부터 예를 들어, cDNA 클론을 식별함으로써 적합한 공급원(예를 들어, 항체를 발현하는 임의의 조직 또는 세포, 예컨대, 본 명세서에 개시된 항체를 발현하도록 선택된 하이브리도마 세포로부터 생성된 항체 cDNA 라이브러리 또는 cDNA 라이브러리, 또는 이로부터 단리된 핵산, 바람직하게는 poly A+ RNA)으로부터 수득되거나 화학적으로 합성될 수 있다. PCR에 의해 생성된 증폭된 핵산은 당업계에 널리 공지된 임의의 방법을 사용하여 복제 가능한 클로닝 벡터 내에 클로닝될 수 있다.
본 명세서에 개시된 항-ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여(예를 들어, 항-ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 쉽게 단리되고 서열분석될 수 있다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 공급원이 될 수 있다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터 내에 위치될 수 있고, 이어서 이것은 숙주 세포, 예컨대, 이. 콜라이 세포, 시미안 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포(예를 들어, CHO GS System™(Lonza)으로부터의 CHO 세포), 또는 면역글로불린 단백질을 달리 생성시키지 않는 골수종 세포 내에 형질주입되어, 재조합 숙주 세포에서 항-ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항체를 합성한다.
전체 항체를 생성하기 위해서, VH 또는 VL 뉴클레오티드 서열, 제한 부위 및 제한 부위를 보호하기 위한 측접 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 사용하여 scFv 클론에서 VH 또는 VL 서열을 증폭시킬 수 있다. 당업자에게 공지된 클로닝 기술을 사용하여, PCR 증폭된 VH 도메인을 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 감마 4 불변 영역을 발현하는 벡터 내에 클로닝할 수 있고, PCR 증폭된 VL 도메인을 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 또는 람다 불변 영역을 발현하는 벡터 내에 클로닝할 수 있다. 특정 실시형태에서, VH 또는 VL 도메인을 발현하기 위한 벡터는 EF-1α 프로모터, 분비 신호, 가변 영역에 대한 클로닝 부위, 불변 도메인, 및 네오마이신과 같은 선택 마커를 포함한다. VH 및 VL 도메인은 또한 필요한 불변 영역을 발현하는 하나의 벡터 내에 클로닝될 수 있다. 이어서, 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 전환 벡터는 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 전장 항체, 예를 들어, IgG를 발현시키는 안정적인 또는 일시적 세포주를 생성하기 위해 세포주 내로 공동 형질주입된다.
DNA는 또한 예를 들어, 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인을 암호 서열로 대체함으로써 또는 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 암호 서열 중 모두 또는 일부를 면역글로불린 암호 서열에 공유 결합시킴으로써 변형될 수 있다.
또한 고엄격성, 중간 또는 낮은 엄격성 혼성화 조건 하에서 본 명세서에 개시된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 본 명세서에 제공된 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 대해 고엄격성, 중간 또는 낮은 엄격성 혼성화 조건 하에서 혼성화한다.
혼성화 조건은 당업계에 기재되어 있고, 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 엄격성 조건 하의 혼성화는 약 45℃에서 6x 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC) 중에서 필터-결합된 DNA에 대한 혼성화, 그 다음 약 50 내지 65℃에서 0.2xSSC/0.1% SDS 중에서 1회 이상의 세척을 포함할 수 있고; 고도로 엄격성 조건 하의 혼성화는 약 45℃에서 6xSSC 중에서 필터-결합된 DNA에 대한 혼성화, 그 다음 약 68℃에서 0.1xSSC/0.2% SDS 중에서 1회 이상의 세척을 포함할 수 있다. 다른 엄격한 혼성화 조건 하의 혼성화는 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Ausubel FM et al., eds., (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York at pages 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3]에 기재되어 있다.
특정 양태에서, 본 명세서에는 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 및 관련된 폴리뉴클레오티드 및 발현 벡터에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 개시된 항체를 (예를 들어, 재조합적으로) 발현하는 세포(예를 들어, 숙주 세포)가 제공된다. 본 명세서에는 숙주 세포, 바람직하게는 포유동물 세포에서 재조합 발현을 위해 항-ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항체 또는 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 또한 본 명세서에는 본 명세서에 개시된 항-ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항체(예를 들어, 인간 또는 인간화된 항체)를 재조합 방식으로 발현시키기 위해 이러한 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 특정 양태에서, 본 명세서에는 숙주 세포로부터 이러한 항체를 발현시키는 단계를 포함하는, 본 명세서에 개시된 항체를 생산하는 방법이 제공된다.
ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 개시된 항체(예를 들어, 본 명세서에 개시된 전장 항체, 항체의 중쇄 또는 경쇄 또는 단일 쇄 항체)의 재조합 발현은 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터의 작제를 포함한다. 일단, 본 명세서에 개시된 항체 분자, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄(예를 들어, 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역)가 수득되면, 항체 분자의 생산을 위한 벡터는 당업계에 널리 공지된 기술을 이용하는 재조합 DNA 기법에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 뉴클레오티드 서열을 암호화하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄)을 함유하는 폴리뉴클레오티드를 발현시킴으로써 단백질을 제조하는 방법이 본 명세서에 개시된다. 당업자에게 널리 공지된 방법을 사용하여 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄) 암호화 서열 및 적절한 전사 및 번역 제어 신호를 함유하는 발현 벡터를 작제할 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어, 시험관내 재조합 DNA 기술, 합성 기술 및 생체내 유전자 재조합을 포함한다. 또한 프로모터에 작동 가능하게 연결된, 본 명세서에 개시된 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복제 가능한 벡터가 제공된다. 이러한 벡터는, 예를 들어, 항체 분자의 불변 영역을 암호화하는 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 86/05807 및 WO 89/01036; 및 미국 특허 제5,122,464 참조)을 포함할 수 있고, 항체의 가변 영역은 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄와 경쇄 둘 다의 발현을 위해 이러한 벡터에 클로닝될 수 있다.
발현 벡터는 통상적인 기술에 의해 세포(예를 들어, 숙주 세포)에 전달될 수 있고, 이어서, 얻어진 세포는 본 명세서에 개시된 항체를 생산하기 위해 통상적인 기술에 의해 배양될 수 있다. 따라서, 본 명세서에는 숙주 세포에서 이러한 서열의 발현을 위해 프로모터에 작동 가능하게 연결된 본 명세서에 개시된 항체, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 본 명세서에 개시된 단일 쇄 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 숙주 세포가 제공된다. 특정 실시형태에서, 이중 쇄 항체의 발현을 위해, 중쇄와 경쇄를 둘 다 암호화하는 벡터는 개별적으로 이하에 상술하는 바와 같이 전체 면역글로불린 분자의 발현을 위해 숙주 세포에서 공동 발현될 수 있다. 특정 실시형태에서, 숙주 세포는 본 명세서에 개시된 항체의 중쇄 및 경쇄 둘 다를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 함유한다. 구체적인 실시형태에서, 숙주 세포는 2개의 상이한 벡터, 즉, 본 명세서에 개시된 항체의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 단편을 포함하는 제1 벡터, 및 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 단편을 포함하는 제2 벡터를 함유한다. 다른 실시형태에서, 제1 숙주 세포는 본 명세서에 개시된 항체의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 단편을 포함하는 제1 벡터를 포함하고, 제2 숙주 세포는 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 제1 세포에 의해 발현된 중쇄/중쇄 가변 영역은 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 형성하기 위해 제2 세포의 경쇄/경쇄 가변 영역과 회합된다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에는 이러한 제1 숙주 세포 및 이러한 제2 숙주 세포를 포함하는 숙주 세포의 집단이 제공된다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에는 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체의 경쇄/경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터, 및 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체의 중쇄/중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터를 포함하는, 벡터의 집단이 제공된다.
다양한 숙주-발현 벡터 시스템은 본 명세서에 개시된 항체 분자를 발현시키기 위해 이용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 5,807,715 참조). 이러한 숙주-발현 시스템은 관심 대상의 암호 서열이 생산될 수 있고 후속으로 정제될 수 있는 비히클을 나타내지만, 또한 적절한 뉴클레오티드 암호 서열이 형질전환되거나 또는 형질주입될 때, 동일계에서 본 명세서에서 개시된 항체 분자를 발현시킬 수 있는 세포를 나타낸다. 이들은 미생물, 예컨대 항체 암호 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아(예를 들어, 이. 콜라이 및 비. 서브틸리스); 효모(예를 들어, 항체 암호 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 사카로마이세스 피키아(Saccharomyces Pichia)); 항체 암호 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 컬리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 또는 항체 암호 서열을 함유하는 재조합 플라스미드 발현 벡터(예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템(예를 들어, 녹조류, 예컨대 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii)); 또는 포유동물 세포(예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터)의 게놈으로부터 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터; 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터)를 함유하는 재조합 발현 작제물을 보유하는 포유동물 세포 시스템(예를 들어, COS(예를 들어, COS1 또는 COS), CHO, BHK, MDCK, HEK 293, NS0, PER.C6, VERO, CRL7O3O, HsS78Bst, HeLa 및 NIH 3T3, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20 및 BMT10 세포)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체를 발현시키기 위한 세포는 CHO 세포, 예를 들어, CHO GS 시스템™(Lonza)으로부터의 CHO 세포이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체를 발현시키기 위한 세포는 인간 세포, 예를 들어, 인간 세포주이다. 구체적인 실시형태에서, 포유동물 발현 벡터는 pOptiVEC™ 또는 pcDNA3.3이다. 특정 실시형태에서, 특히 전체 재조합 항체 분자의 발현을 위한 박테리아 세포, 예컨대, 에스케리키아 콜라이 또는 진핵 세포(예를 들어, 포유동물 세포)는 재조합 항체 분자의 발현을 위해 사용된다. 예를 들어, 인간 거대세포 바이러스로부터의 주요 중간 초기 유전자 프로모터 요소와 같은 벡터와 함께 포유동물 세포, 예컨대 CHO 세포는 항체에 대한 효과적인 발현 시스템이다(Foecking MK & Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-5; 및 Cockett MI et al., (1990) Biotechnology 8(7): 662-7). 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 NS0 세포에 의해 생산된다. 구체적인 실시형태에서, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열의 발현은 구성적 프로모터, 유도성 프로모터 또는 조직 특이적 프로모터에 의해 조절된다.
박테리아 시스템에서, 다수의 발현 벡터는 발현 중인 항체 분자에 대해 의도되는 용도에 따라서 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 다량의 이러한 항체를 생산하려는 경우, 항체 분자의 약제학적 조성물의 생성을 위해, 용이하게 정제되는 고수준의 융합 단백질 산물의 발현을 지시하는 벡터가 바람직할 수 있다. 이러한 벡터는 융합 단백질이 생산되도록 항체 암호 서열이 lac Z 암호 영역을 갖는 프레임 내 벡터에 개별적으로 결찰될 수 있는 이. 콜라이 발현 벡터 pUR278(문헌[Ruether U & Mueller-Hill B (1983) EMBO J 2: 1791-1794]); pIN 벡터(문헌[Inouye S & Inouye M (1985) Nuc Acids Res 13: 3101-3109]; 문헌[Van Heeke G & Schuster SM (1989) J Biol Chem 24: 5503- 5509]); 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, pGEX 벡터는 또한 글루타티온 5-트랜스퍼라제(GST)를 갖는 융합 단백질로서 외래 폴리펩티드를 발현시키기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 융합 단백질은 가용성이고, 매트릭스 글루타티온 아가로스 비드에 대한 흡수 및 결합, 그 다음 유리 글루타티온의 존재 하의 용리에 의해 용해된 세포로부터 용이하게 정제될 수 있다. 클로닝된 표적 유전자 산물이 GST 모이어티로부터 방출될 수 있도록 pGEX 벡터는 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하도록 설계된다.
곤충 시스템에서, 아우토그라파 칼리포니카(Autographa californica) 핵다면체 형성 바이러스(AcNPV)는, 예를 들어, 외래 유전자를 발현시키기 위한 벡터로서 사용될 수 있다. 상기 바이러스는 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포에서 성장한다. 항체 암호 서열은 바이러스의 비필수 영역(예를 들어, 폴리헤드린 유전자)에 개개로 클로닝될 수 있고, AcNPV 프로모터(예를 들어, 폴리헤드린 프로모터)의 제어 하에 위치된다.
포유동물 숙주 세포에서, 다수의 바이러스 기반 발현 시스템이 이용될 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우에, 관심 대상의 항체 암호 서열은 아데노바이러스 전사/번역 제어 복합체, 예를 들어, 후기 프로모터 및 삼중 리더 서열에 결찰될 수 있다. 이어서, 이러한 키메라 유전자는 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈(예를 들어, 영역 E1 또는 E3)에서 삽입은 생존 가능하고 감염된 숙주에서 항체 분자를 발현시킬 수 있는 재조합 바이러스를 초래할 것이다(예를 들어, 문헌[Logan J & Shenk T (1984) PNAS 81(12): 3655-9] 참조). 삽입된 항체 암호화 서열의 효율적인 번역에 특정 개시 신호가 필요할 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접한 서열을 포함한다. 추가로, 개시 코돈은 전체 삽입의 번역을 보장하기 위해 목적하는 암호화 서열의 판독 프레임에 맞게 작동하여야 한다. 이들 외인성 번역 제어 신호 및 개시 코돈은 자연 및 합성 둘 다의 다양한 유래를 가질 수 있다. 발현 효율은 적절한 전사 인핸서 요소, 전사 종결인자 등의 포함에 의해 향상될 수 있다(예를 들어, 문헌[Bitter G et al., (1987) Methods Enzymol. 153: 516-544] 참고).
추가로, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나 또는 목적하는 특정 방식으로 유전자 산물을 변형시키고 처리하는 숙주 세포 균주가 선택될 수 있다. 단백질 산물의 이러한 변형(예를 들어, 글리코실화) 및 가공(예를 들어, 절단)은 단백질의 기능에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 산물의 번역 후 가공 및 변형에 대한 특징적이고, 특이적인 기전을 가진다. 적절한 세포주 또는 숙주 시스템은 발현되는 외래 유전자의 정확한 변형 및 가공을 보장하도록 선택될 수 있다. 이를 위하여, 유전자 산물의 1차 전사체, 글리코실화 및 인산화의 적절한 가공을 위한 세포 머시너리를 갖는 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다. 이러한 포유동물 숙주 세포는 CHO, VERO, BHK, Hela, MDCK, HEK 293, NIH 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0(임의의 면역글로불린 쇄를 내인성으로 생산하지 않는 뮤린 골수종 세포주), CRL7O3O, COS(예를 들어, COS1 또는 COS), PER.C6, VERO, HsS78Bst, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20, BMT10 및 HsS78Bst 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항체는 포유동물 세포, 예컨대 CHO 세포에서 생산된다.
구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 감소된 푸코스 함량을 갖거나 또는 푸코스 함량을 갖지 않는다. 이러한 항체는 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 항체는 푸코실레이트의 능력이 결핍되거나 또는 결여된 세포에서 발현될 수 있다. 구체적인 예에서, α1,6-푸코실트랜스퍼라제의 대립유전자 둘 다의 넉아웃을 갖는 세포주가 감소된 푸코스 함량을 갖는 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있다. Potelligent® 시스템(Lonza)은 감소된 푸코스 함량을 갖는 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있는 이러한 시스템의 예이다.
재조합 단백질의 장기간, 고수율의 생산을 위해, 안정적인 발현 세포가 생성될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 안정적으로 발현시키는 세포주가 조작될 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 세포는 본 명세서에 개시된 항체를 형성하기 위해 회합되는 경쇄/경쇄 가변 영역 및 중쇄/중쇄 가변 영역을 안정적으로 발현시킨다.
특정 양상에서, 바이러스 복제기점을 함유하는 발현 벡터를 이용하기보다는, 숙주 세포는 적절한 발현 제어 요소(예를 들어, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사 종결인자, 폴리아데닐화 부위 등), 및 선택 가능한 마커에 의해 제어된 DNA로 형질전환될 수 있다. 외래 DNA/폴리뉴클레오티드의 도입 후에, 조작된 세포는 농축 배지에서 1 내지 2일 동안 성장하도록 허용될 수 있고, 이어서, 선택 배지로 전환된다. 재조합 플라스미드에서 선택 가능한 마커는 선택에 대한 내성을 부여하며, 세포가 플라스미드를 그들의 염색체에 안정하게 통합하도록 그리고 결국 세포주로 클로닝되고 확장될 수 있는 초점을 형성하기 위해 성장하도록 허용한다. 이 방법은 본 명세서에 개시된 항-ApoC3 항체를 발현시키는 세포주를 조작하기 위해 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 조작된 세포주는 항체 분자와 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 조성물의 선별 및 평가에 특히 유용할 수 있다.
각각 tk-, hgprt- 또는 aprt-세포에서, 단순포진바이러스 티미딘 키나제(문헌[Wigler M et al., (1977) Cell 11(1): 223-32]), 하이포잔틴구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(문헌[Szybalska EH & Szybalski W (1962) PNAS 48(12): 2026-2034]) 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(문헌[Lowy I et al., (1980) Cell 22(3): 817-23]) 유전자를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다수의 선택 시스템이 사용될 수 있다. 또한, 대사길항물질 내성은 하기 유전자에 대한 선택 기초로서 사용될 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 dhfr(문헌[Wigler M et al., (1980) PNAS 77(6): 3567-70]; 문헌[O'Hare K et al., (1981) PNAS 78: 1527-31]); 마이코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt(문헌[(Mulligan RC & Berg P (1981) PNAS 78(4): 2072-6)]; 아미노글리코시드 G-418에 대한 내성을 부여하는 neo(문헌[Wu GY & Wu CH (1991) Biotherapy 3: 87-95]; 문헌[Tolstoshev P (1993) Ann Rev Pharmacol Toxicol 32: 573-596]; 문헌[Mulligan RC (1993) Science 260: 926-932]; 및 문헌[Morgan RA & Anderson WF (1993) Ann Rev Biochem 62: 191-217]; 문헌[Nabel GJ & Felgner PL (1993) Trends Biotechnol 11(5): 211-5]); 및 하이그로마이신에 대한 내성을 부여하는 hygro(문헌[Santerre RF et al., (1984) Gene 30(1-3): 147-56]). 재조합 DNA 기술의 당업계에 통상적으로 공지된 방법은 목적하는 재조합 클론을 선택하기 위해 관례적으로 적용될 수 있고, 이러한 방법은, 예를 들어, 문헌[Ausubel FM et al., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)]; 문헌[Kriegler M, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)]; 및 Chapters 12 and 13의 문헌[Dracopoli NC et al., (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994)]; 문헌[Colbere-Garapin F et al., (1981) J Mol Biol 150: 1-14]에 기재되어 있으며, 이들은 본 명세서에 전문이 참고로 포함된다.
항체 분자의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가될 수 있다(검토를 위해, 문헌[Bebbington CR & Hentschel CCG, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)] 참조). 항체를 발현시키는 벡터 시스템에서 마커가 증폭 가능할 때, 숙주 세포의 배양물에 존재하는 저해제 수준의 증가는 마커 유전자의 카피 수를 증가시킬 것이다. 증폭된 영역이 항체 유전자와 회합되기 때문에, 항체의 생산은 또한 증가할 것이다(문헌[Crouse GF et al., (1983) Mol Cell Biol 3: 257-66]).
숙주 세포는 본 명세서에 기재된 2개 이상의 발현 벡터, 즉, 중쇄 유래 폴리펩티드를 암호화하는 제1 벡터 및 경쇄 유래 폴리펩티드를 암호화하는 제2 벡터로 공동 형질주입될 수 있다. 두 벡터는 중쇄와 경쇄 폴리펩티드의 동일한 발현을 가능하게 하는 동일한 선택 가능한 마커를 함유할 수 있다. 숙주 세포는 상이한 양의 2개 이상의 발현 벡터로 공동 형질주입될 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포는 제1 발현 벡터 및 제2 발현 벡터의 다음의 비 중 임의의 하나로 형질주입될 수 있다: 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:12, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45 또는 1:50.
대안적으로, 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 둘 다를 암호화하고 발현시킬 수 있는 단일 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 상황에서, 경쇄는 과량의 무독성 중쇄를 회피하기 위해 중쇄 앞에 놓여야 한다(문헌[Proudfoot NJ (1986) Nature 322: 562-565; and Kohler G (1980) PNAS 77: 2197-2199]). 중쇄 및 경쇄에 대한 암호 서열은 cDNA 또는 게놈 DNA를 포함할 수 있다. 발현 벡터는 단일시스트론성(monocistronic) 또는 다중시스트론성 (multicistronic)일 수 있다. 다중시스트론성 핵산 작제물은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상, 또는 2 내지 5, 5 내지 10, 또는 10 내지 20개의 유전자/뉴클레오티드 서열 범위로 암호화할 수 있다. 예를 들어, 이시스트론성(bicistronic) 핵산 작제물은 하기 순서로 프로모터, 제1 유전자(예를 들어, 본 명세서에 개시된 항체의 중쇄), 및 제2 유전자(예를 들어, 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄)를 포함할 수 있다. 이러한 발현 벡터에서, 유전자 둘 다의 전사는 프로모터에 의해 유도될 수 있는 반면, 제1 유전자로부터의 mRNA의 번역은 캡-의존적 스캐닝 기전에 의할 수 있고, 제2 유전자로부터의 mRNA의 번역은, 예를 들어, IRES에 의한 캡-독립적인 기전에 의할 수 있다.
일단 본 명세서에 개시된 항체 분자가 재조합 발현에 의해 생산되었다면, 이는 면역글로불린 분자의 정제를 위해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환, 친화도, 특히 단백질 A 다음에 특정 항원에 대한 친화도, 및 크기결정 칼럼 크로마토그래피에 의해), 원심분리, 분별 용해도에 의해 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제될 수 있다. 추가로, 본 명세서에 개시된 항체는 본 명세서에 개시된 이종 폴리펩티드 서열 또는 정제를 용이하게 하기 위한 당업계에 공지된 다른 것에 융합될 수 있다.
구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 단리되거나 또는 정제된다. 일반적으로, 단리된 항체는 단리된 항체와 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 존재하지 않는 것이다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체의 제제는 세포 물질 또는 화학 전구체가 실질적으로 존재하지 않는다. 표현 "세포 물질이 실질적으로 존재하지 않는"은 항체가 단리되거나 또는 재조합 방식으로 생산된 세포의 세포 성분으로부터 항체가 분리된 항체의 제제를 포함한다. 따라서, 세포 물질이 실질적으로 존재하지 않는 항체는 이종 단백질(또한 본 명세서에서 "오염 단백질"로서 지칭됨) 또는 항체의 변이체, 예를 들어, 항체 또는 항체의 다른 상이한 형태(예를 들어, 항체 단편)의 상이한 번역후 변형 형태의 약 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1%(건조 중량 기준) 미만을 갖는 항체의 제제를 포함한다. 항체가 재조합 방식으로 생산되는 경우, 이는 또한 일반적으로 배양물 배지가 실질적으로 존재하지 않으며, 즉, 배양물 배지는 단백질 제제 용적의 약 20%, 10%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만을 나타낸다. 항체가 화학적 합성에 의해 생산되는 경우, 이는 일반적으로 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 존재하지 않고, 즉, 이는 화학적 전구체 또는 단백질의 합성에 연관된 다른 화학물질로부터 분리된다. 따라서, 항체의 이러한 제제는 관심 대상 항체 이외의 화학적 전구체 또는 화합물을 약 30%, 20%, 10% 또는 5%(건조 중량으로) 미만으로 갖는다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 단리되거나 또는 정제된다.
ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 항체는 항체의 합성을 위한 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 화학적 합성에 의해 또는 재조합 발현 기술에 의해 생산될 수 있다. 본 명세서에 개시된 방법은, 달리 제시되지 않는 한, 분자 생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기 화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오티드 합성 및 변형, 핵산 혼성화 및 당업계의 기술 내의 관련 분야에서 통상적인 기술을 사용한다. 이들 기술은, 예를 들어, 본 명세서에 인용된 참고문헌에 개시되어 있으며, 문헌에서 완전하게 설명된다. 예를 들어, 문헌[Maniatis T et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]을 참고하기 바란다.
구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체는 생성을 수반하는 임의의 수단에 의해, 예를 들어, DNA 서열의 합성, 유전자 조작을 통해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 항체(예를 들어, 재조합 항체)이다. 특정 실시형태에서, 이러한 항체는 생체내 동물 또는 포유동물(예를 들어, 인간)의 항체 생체계열 레퍼토리 내에서 자연적으로 존재하지 않는 서열(예를 들어, DNA 서열 또는 아미노산 서열)을 포함한다.
일 양태에서, 본 명세서에는 본 명세서에 개시된 세포 또는 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 항체의 제조 방법이 제공된다. 특정 양태에서, 본 명세서에는 본 명세서에 개시된 세포 또는 숙주 세포(예를 들어, 본 명세서에 개시된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포 또는 숙주 세포)를 이용하여 항체를 발현시키는(예를 들어, 재조합적으로 발현시키는) 단계를 포함하는, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 항체의 제조 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 세포는 단리된 세포이다. 특정 실시형태에서, 외인성 폴리뉴클레오티드는 세포 내로 도입되었다. 특정 실시형태에서, 이 방법은 세포 또는 숙주 세포로부터 얻어진 항체를 정제시키는 단계를 추가로 포함한다.
다클론성 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., eds., John Wiley and Sons, New York] 참고).
단클론성 항체는 하이브리도마, 재조합 및 파지 디스플레이 기법, 또는 이들의 조합의 사용을 포함하는, 매우 다양한 당업계에 공지된 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 단클론성 항체는 당업계에 공지되고, 예를 들어, 문헌[Harlow E & Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling GJ et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)]에 교시된 것을 포함하는 하이브리도마 기법을 이용하여 생산될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "단클론성 항체"는 하이브리도마 기법을 통해 생산된 항체에 제한되지 않는다. 예를 들어, 단클론성 항체는 본 명세서에 개시된 항체, 예를 들어, 이러한 항체의 경쇄 또는 중쇄를 외인성으로 발현시키는 숙주 세포로부터 재조합적으로 생산될 수 있다.
구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 사용된 바와 같은 "단클론성 항체"는 단일 세포(예를 들어, 재조합 항체를 생산하는 하이브리도마 또는 숙주 세포)에 의해 생산된 항체이며, 여기서, 항체는, 예를 들어, ELISA 또는 당업계에 공지된 다른 항원-결합 또는 경쟁적 결합 분석에 의해 또는 본 명세서에 제공된 예에서 결정된 바와 같은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합한다. 특정 실시형태에서, 단클론성 항체는 키메라 항체 또는 인간화된 항체일 수 있다. 특정 실시형태에서, 단클론성 항체는 1가 항체 또는 다가(예를 들어, 2가) 항체이다. 특정 실시형태에서, 단클론성 항체는 단일특이성 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체)이다. 본 명세서에 기재된 단클론성 항체는, 예를 들어, 문헌[Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495]에 개시된 바와 같은 하이브리도마 방법에 의해 생성될 수 있거나, 또는, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 바와 같은 기술을 이용하여 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 이에 의해 발현된 클론 세포주의 그리고 단클론성 항체의 제조를 위한 다른 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다(예를 들어, 상기 문헌[Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al.)] 참조).
하이브리도마 기술을 이용하여 특정 항체에 대해 생산 및 선별하는 방법은 일상적이며, 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 하이브리도마 방법에서, 면역화를 위해 사용되는 단백질(예를 들어, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3))에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하거나 또는 생산할 수 있는 림프구를 유발하기 위해 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대, 양, 염소, 토끼, 래트, 햄스터 또는 마카크 원숭이가 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 이어서, 림프구는 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 골수종 세포와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다(문헌[Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]. 추가적으로, RIMMS(반복 면역화 다중 부위) 기술은 동물을 면역화하기 위해 사용될 수 있다(전문이 참고로 포함된 문헌[Kilpatrick KE et al., (1997) Hybridoma 16:381-9)].
일부 실시형태에서, 마우스(또는 다른 동물, 예컨대 래트, 원숭이, 당나귀, 돼지, 양, 햄스터 또는 개)는 항원(예를 들어, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3))으로 면역화될 수 있고, 일단 면역 반응이 검출되면, 예를 들어, 항원에 특이적인 항체는 마우스 혈청에서 검출되면, 마우스 비장을 채취하고, 비장세포를 단리한다. 이어서, 비장 세포를 임의의 적합한 골수종 세포, 예를 들어, American Type Culture Collection(ATCC®)(미국 버지니아주 매너서스에 소재)로부터 입수 가능한 세포주 SP20으로부터의 세포에 널리 공지된 기술에 의해 융합시켜 하이브리도마를 형성한다. 하이브리도마를 선택하고, 제한된 희석에 의해 클로닝시킨다. 특정 실시형태에서, 면역화된 마우스의 림프절을 채취되고, NS0 골수종 세포와 융합시킨다.
이렇게 제조된 하이브리도마 세포를 시딩하고, 비융합, 비경구 골수종 세포의 성장 또는 생존을 저해하는 1종 이상의 물질을 바람직하게 함유하는 적합한 배양 배지에서 성장시킨다. 예를 들어, 모 골수종 세포에 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 존재하지 않으면, 하이브리도마에 대한 배양 배지는 전형적으로 하이포잔틴, 아미노프테린 및 티미딘(HAT 배지)을 포함하며, 이들 물질은 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지한다.
구체적인 실시형태는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생산 세포에 의한 안정적인 고수준의 항체 생산을 뒷받침하고, HAT 배지와 같은 배지에 대해 민감성인, 골수종 세포를 사용한다. 이들 골수종 세포주 중에 뮤린 골수종계통, 예컨대 NS0 세포주 또는 Salk Institute Cell Distribution Center(미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재)로부터 입수 가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것 및 American Type Culture Collection(미국 매릴랜드주 락빌 소재)로부터 입수 가능한 SP-2 또는 X63-Ag8.653 세포가 있다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이형골수종 세포주는 또한 인간 단클론성 항체의 생산에 대해 기재되어 있다(문헌[Kozbor D (1984) J Immunol 133: 3001-5]; 문헌[Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)].
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지는 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 대해서 지향되는 단클론성 항체의 생산에 대해 분석된다. 하이브리도마 세포에 의해 생산된 단클론성 항체의 결합 특이성은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 분석, 예컨대 방사면역측정법(radioimmunoassay: RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA)에 의해 결정된다.
목적하는 특이성, 친화도 또는 활성도의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 식별된 후에, 클론은 희석 절차를 제한함으로써 서브클로닝되고 표준 방법에 의해 성장될 수 있다(상기 문헌[Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice]). 이 목적을 위한 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI 1640 배지를 포함한다. 추가로, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장될 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 단클론성 항체는, 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 수산화인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화도 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 절차에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
본 명세서에 개시된 항체는 특이적 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)을 인식하고, 당업자에게 공지된 임의의 기술에 의해 생성될 수 있는, 예를 들어, 항체 단편을 포함한다. 예를 들어, 효소, 예컨대, 파파인(Fab 단편 생성) 또는 펩신(F(ab')2 단편 생성)을 이용하는 면역글로불린 분자의 단백질 분해 절단에 의해 본 명세서에 개시된 Fab 및 F(ab')2 단편이 생산될 수 있다. Fab 단편은 항체 분자의 두 동일한 아암(arm) 중 하나에 대응하고, 중쇄의 VH 및 CH1 도메인과 쌍을 이룬 완전한 경쇄를 함유한다. F(ab')2 단편은 힌지 영역 내 디설파이드 결합에 의해 연결된 항체 분자의 두 항원-결합 아암을 함유한다.
추가로, 본 명세서에 개시된 항체는 또한 당업계에 공지된 다양한 파지 디스플레이 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 기능성 항체 도메인은 이를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 운반하는 파지 입자의 표면 상에 나타난다. 특히, VH 및 VL 도메인을 암호화하는 DNA 서열은 동물 cDNA 라이브러리(예를 들어, 영향을 받은 조직의 인간 또는 뮤린 cDNA 라이브러리)로부터 증폭된다. VH 및 VL 도메인을 암호화하는 DNA는 PCR에 의해 scFv 링커와 함께 재조합되고, 파지미드 벡터 내로 클로닝된다. 벡터는 이. 콜라이에서 전기천공되고, 이. 콜라이는 헬퍼 파지로 감염된다. 이들 방법에서 사용되는 파지는 전형적으로 fd 및 M13을 포함하는 사상 파지이고, VH 및 VL 도메인은 보통 파지 유전자 III 또는 유전자 VIII 중 하나에 재조합 방식으로 융합된다. 특정 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 발현시키는 파지는 항원으로, 예를 들어, 표지된 항원 또는 고체 표면 또는 비드에 결합 또는 포획된 항원을 이용하여 선택되거나 또는 식별될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예는 문헌[Brinkman U et al., (1995) J Immunol Methods 182: 41-50]; 문헌[Ames RS et al., (1995) J Immunol Methods 184: 177-186]; 문헌[Kettleborough CA et al., (1994) Eur J Immunol 24: 952-958]; 문헌[Persic L et al., (1997) Gene 187: 9-18]; 문헌[Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280]; PCT 출원 번호 PCT/GB91/001134; 국제 공개 번호 WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401, 및 WO 97/13844; 및 미국 특허 5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743 및 5,969,108에 개시된 것을 포함한다.
상기 참고문헌에 기재된 바와 같이, 파지 선택 후에, 파지로부터의 항체 암호 영역은 단리되고, 인간 항체 또는 임의의 다른 목적하는 항원 결합 단편을 포함하는 전체 항체를 생성하는 데 사용될 수 있으며, 예를 들어, 하기에 기재하는 바와 같이, 포유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모 및 박테리아를 포함하는 임의의 목적하는 숙주에서 발현된다. 항체 단편, 예컨대, Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 재조합 방식으로 생산하는 기술은 또한 당업계에 공지된 방법, 예컨대 PCT 공개 번호 WO 92/22324; 문헌[Mullinax RL et al., (1992) BioTechniques 12(6): 864-9]; 문헌[Sawai H et al., (1995) Am J Reprod Immunol 34: 26-34]; 및 문헌[Better M et al., (1988) Science 240: 1041-1043]에 개시된 것을 이용하여 사용될 수 있다.
특정 실시형태에서, 전체 항체를 생성하기 위해, VH 또는 VL 뉴클레오티드 서열, 제한 부위 및 제한 부위를 보호하기 위한 측접 서열을 포함하는 PCR 프라이머는 주형, 예를 들어, scFv 클론으로부터의 VH 또는 VL 서열을 증폭시키는 데 사용될 수 있다. 당업자에게 공지된 클로닝 기술을 이용하여, PCR 증폭된 VH 도메인은 VH 불변 영역을 발현시키는 벡터 내로 클로닝될 수 있고, PCR 증폭된 VL 도메인은 VL 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 또는 람다 불변 영역을 발현시키는 벡터 내로 클로닝될 수 있다. VH 및 VL 도메인은 또한 필요한 불변 영역을 발현하는 하나의 벡터 내에 클로닝될 수 있다. 이어서, 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 전환 벡터는 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 전장 항체, 예를 들어, IgG를 발현시키는 안정적인 또는 일시적 세포주를 생성하기 위해 세포주 내로 공동 형질주입된다.
키메라 항체는 항체의 상이한 부분이 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래된 분자이다. 예를 들어, 키메라 항체는 인간 항체의 불변 영역에 융합된 마우스 또는 래트 단클론성 항체의 가변 영역을 함유할 수 있다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Morrison SL (1985) Science 229: 1202-7]; 문헌[Oi VT & Morrison SL (1986) BioTechniques 4: 214-221]; 문헌[Gillies SD et al., (1989) J Immunol Methods 125: 191-202]; 및 미국 특허 번호 5,807,715, 4,816,567, 4,816,397 및 6,331,415를 참고하기 바란다.
인간화된 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 프레임워크 영역 및 비-인간 면역글로불린(예를 들어, 뮤린 면역글로불린)의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 CDR을 포함하는 미리 결정된 항원에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, 인간화된 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 항체는 또한 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3, 및 CH4 영역을 포함할 수 있다. 인간화된 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE, 및 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 비롯한 임의의 아이소타입을 포함하는, 면역글로불린의 임의의 부류로부터 선택될 수 있다. 인간화된 항체는 CDR-그래프팅(유럽 특허 번호 EP 239400; 국제 공개 번호 WO 91/09967; 및 미국 특허 번호 5,225,539, 5,530,101, 및 5,585,089), 베니어링(veneering) 또는 리서페이싱(resurfacing)(유럽 특허 번호 592106 및 519596; 문헌[Padlan EA (1991) Mol Immunol 28(4/5): 489-498; Studnicka GM et al., (1994) Prot Engineering 7(6): 805-814; 및 Roguska MA et al., (1994) PNAS 91: 969-973]), 쇄 셔플링(chain shuffling)(미국 특허 번호 5,565,332), 및, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,407,213, 미국 특허 번호 5,766,886, 국제 특허 출원 공개 WO 93/17105; 문헌[Tan P et al., (2002) J Immunol 169: 1119-25]; 문헌[Caldas C et al., (2000) Protein Eng. 13(5): 353-60]; 문헌[Morea V et al., (2000) Methods 20(3): 267-79]; 문헌[Baca M et al., (1997) J Biol Chem 272(16): 10678-84]; 문헌[Roguska MA et al., (1996) Protein Eng 9(10): 895 904]; 문헌[Couto JR et al., (1995) Cancer Res. 55 (23 Supp): 5973s- 5977s]; 문헌[Couto JR et al., (1995) Cancer Res 55(8): 1717-22]; 문헌[Sandhu JS (1994) Gene 150(2): 409-10] 및 문헌[Pedersen JT et al., (1994) J Mol Biol 235(3): 959-73]에 개시된 기술을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 당업계에 공지된 다양한 기술을 이용하여 생산될 수 있다. 또한 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 미국 출원 공개 US 2005/0042664 A1(2005년 2월 24일)을 참고하기 바란다.
다중특이적(예를 들어, 이중특이적 항체) 항체를 제조하는 방법이 기재되어 예를 들어, 미국 특허 번호 7,951,917; 7,183,076; 8,227,577; 5,837,242; 5,989,830; 5,869,620; 6,132,992 및 8,586,713을 참고하기 바란다.
단일 도메인 항체, 예를 들어, 경쇄가 결여된 항체는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 생산될 수 있다. 문헌[Riechmann L & Muyldermans S (1999) J Immunol 231: 25-38]; 문헌[Nuttall SD et al., (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263]; 문헌[Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74(4): 277-302]; 미국 특허 번호 6,005,079; 및 국제 공개 번호 WO 94/04678, WO 94/25591 및 WO 01/44301을 참고하기 바란다.
추가로, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 결국 당업자에게 널리 공지된 기술을 이용하여 항원을 "모방하는" 항-이디오타입(anti-idiotype) 항체를 생성하는 데 이용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Greenspan NS & Bona CA (1989) FASEB J 7(5): 437-444]; 및 문헌[Nissinoff A (1991) J Immunol 147(8): 2429-2438]을 참고).
특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 ApoC3 항체와 동일한 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)의 에피토프에 결합하는 본 명세서에 개시된 항체는 인간 항체이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항체 중 임의의 하나를 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 대한 결합으로부터 경쟁적으로 차단시키는(예를 들어, 용량 의존적 방식으 로) 본 명세서에 기재된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 기능성 내인성 면역글로불린을 발현시킬 수 없지만, 인간 면역글로불린 유전자를 발현시킬 수 있는 트랜스제닉 마우스가 사용될 수 있다. 특히, 인간 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자 복합체는 무작위로 또는 상동성 재조합에 의해 마우스 배아 줄기 세포 내로 도입될 수 있다. 대안적으로, 인간 가변 영역, 불변 영역, 및 다양성 영역은 인간 중쇄 및 경쇄 유전자에 추가로 마우스 배아 줄기 세포 내로 도입될 수 있다. 마우스 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자는 상동성 재조합에 의해 인간 면역글로불린 좌위의 도입과 별개로 또는 동시에 비기능성으로 제공될 수 있다. 특히, JH 영역의 동형접합적 결실은 내인성 항체 생산을 방지한다. 변형된 배아 줄기세포는 확장되고, 키메라 마우스를 생산하기 위해 배반포 내로 마이크로주사된다. 이어서, 키메라 마우스는 인간 항체를 발현시키는 동형접합 자손을 생산하도록 사육된다. 트랜스제닉 마우스는 선택된 항원, 예를 들어, 항원(예를 들어, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3))의 모두 또는 일부로 정상적 방식으로 면역화된다. 항원에 지향되는 단클론성 항체는 통상적인 하이브리도마 기술을 이용하여 면역화된, 트랜스제닉 마우스로부터 얻을 수 있다. 트랜스제닉 마우스에 의해 보유된 인간 면역글로불린 이식유전자는 B 세포 분화 동안 재배열하며, 후속적으로 부류 변환(class switching) 및 체세포 돌연변이를 겪는다. 따라서, 이러한 기술을 이용하여, 치료적으로 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 생성할 수 있다. 인간 항체를 생산하기 위한 기술의 검토를 위해, 문헌[Lonberg N & Huszar D (1995) Int Rev Immunol 13:65-93]을 참조하기 바란다. 인간 항체 및 인간 단클론성 항체를 생산하기 위한 이러한 기술 및 이러한 항체를 생산하기 위한 프로토콜의 상세한 논의를 위해, 예를 들어, 국제 공개 번호 WO 98/24893, WO 96/34096 및 WO 96/33735; 및 미국 특허 번호 5,413,923, 5,625,126, 5,633,425, 5,569,825, 5,661,016, 5,545,806, 5,814,318 및 5,939,598.를 참조한다. 인간 항체를 생산할 수 있는 마우스의 예는 XenomouseTM(Abgenix, Inc.; 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,184), HuAb-MouseTM Mederex, Inc./Gen Pharm; 미국 특허 번호 5,545,806 및 5,569, 825), Trans Chromo MouseTM(Kirin) 및 KM MouseTM(Medarex/Kirin)를 포함한다.
ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3)에 특이적으로 결합하는 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 이용하여 상기에 기재된 파지 디스플레이 방법을 포함하는 다양한 당업계에 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다. 또한 미국 특허 번호 4,444,887, 4,716,111, 및 5,885,793; 및 국제 공개 WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, and WO 91/10741를 참조한다.
일부 실시형태에서, 인간 항체는 마우스-인간 하이브리도마를 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 엡스타인-바 바이러스(EBV)로 형질전환된 인간 말초 혈액 림프구는 인간 단클론성 항체를 분비하는 마우스-인간 하이브리도마를 생산하기 위해 마우스 골수종 세포와 융합될 수 있고, 이들 마우스-인간 하이브리도마는 표적 항원(예를 들어, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3))에 특이적으로 결합하는 인간 단클론성 항체를 분비하는 것을 결정하도록 선별될 수 있다. 이러한 방법은 공지되어 있으며, 당업계에 기재되어 있고, 예를 들어, 문헌[Shinmoto H et al., (2004) Cytotechnology 46: 19-23]; 문헌[Naganawa Y et al., (2005) Human Antibodies 14: 27-31]을 참조한다.
6. 키트
또한 본 명세서에 개시된 하나 이상의 항체 또는 이의 약제학적 조성물 또는 접합체를 포함하는 키트가 제공된다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에서 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물의 성분 중 하나 이상, 예컨대, 본 명세서에 제공된 하나 이상의 항체로 채워진 하나 이상의 용기를 포함하는 약제학적 팩 또는 키트가 제공된다. 일부 실시형태에서, 상기 키트는 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물 및 임의의 예방적 또는 치료적 제제, 예컨대 본 명세서에 개시된 것을 함유한다. 선택적으로 약제 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 지시된 형태의 주의사항이 이러한 용기(들)에 부착될 수 있으며, 이러한 주의사항은 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 기관에 의한 승인을 반영한다.
또한 상기 방법에서 사용될 수 있는 키트가 제공된다. 일 실시형태에서, 키트는 하나 이상의 용기 내에 본 명세서에 개시된 항체, 바람직하게는 정제된 항체를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 키트는 대조군으로서 실질적으로 단리된 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항원을 함유한다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 키트는 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항원과 반응하지 않는 대조군 항체를 추가로 포함한다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 키트는 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항원에 대한 항체의 결합을 검출하기 위해 하나 이상의 요소를 함유한다(예를 들어, 항체는 검출 가능한 기질, 예컨대 형광 화합물, 효소 기질, 방사성 화합물 또는 발광 화합물에 접합될 수 있거나 또는 제1 항체를 인식하는 제2 항체는 검출 가능한 기질에 접합될 수 있다). 구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 키트는 재조합 방식으로 생산되거나 또는 화학적으로 합성된 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항원을 포함할 수 있다. 키트에 제공된 ApoC3(예를 들어, 인 간 ApoC3) 항원은 또한 고체 지지체에 부착될 수 있다. 더 구체적인 실시형태에서, 상기에 기재된 키트의 검출 수단은 ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항원이 부착되는 고체 지지체를 포함한다. 이러한 키트는 또한 비부착 리포터-표지 항-인간 항체 또는 항-마우스/래트 항체를 포함할 수 있다. 이 실시형태에서, ApoC3(예를 들어, 인간 ApoC3) 항원에 대한 항체의 결합은 상기 리포터-표지된 항체의 결합에 의해 검출될 수 있다.
실시예
이미 식별된 항체 클론인 5E5는 pH 7.4에서 고친화도로 그리고 pH 5.5에서 약간 감소된 친화도로 ApoC3에 결합한다(미국 가출원 특허 62/360,084 참조). 본 개시내용은 pH 7.4에서 ApoC3에 대해 고친화도 결합을 나타내지만, 5E5에 대해 pH 5.5에서 ApoC3에 대해 훨씬 감소된 친화도를 나타내는 클론 5E5의 신규한 유도체를 제공한다. 하기 실시예는 신규한 5E5 유도체의 특징규명을 기재한다. 5E5의 아미노산 서열은 미국 가출원 특허 62/360,084에 제시되어 있고, 신규한 5E5 유도체의 아미노산 서열은 본 명세서의 표 1 내지 7에 제시되어 있다.
본 섹션의 실시예는 본 출원의 이점 및 특징을 추가로 설명하기 위해 제공되지만, 본 출원의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 실시예는 단지 예시 목적을 위한 것이다.
실시예 1: 항-ApoC3 scFv-Fc 항체의 시험관내 특징규명.
본 실시예는 pH 7.4 및 pH 5.5 둘 다에서 항-ApoC3 scFv-Fc 항체의 항원-결합 동역학을 결정하기 위한 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance: SPR)-기반 실험을 기재한다.
5E5의 VH 및/또는 VL에서 하나 이상의 CDR 아미노산의 히스티딘으로의 치환에 의해 항체 클론 5E5의 신규한 유도체 패널을 생성하였다. 하기에 제시된 SPR-기반 방법을 이용하여 pH 7.4와 pH 5.5 둘 다에서 각각의 5E5 유도체의 항원-결합 동역학을 평가하였고, 추가적인 특징규명을 위해 pH 7.4에서 ApoC3에 대해 고친화도 결합을 나타내지만, 5E5에 대해 pH 5.5에서 ApoC3에 대해 훨씬 감소된 친화도를 나타내는 클론을 선택하였다. 예시적인 5E5 유도체 5E5VH5_VLWT, 5E5VH12_VLWT 및 5E5VHWT_VL8의 결합 동역학을 표 14에 제시한다.
50 ml 소규모 배양물에서 형질주입된 HEK293 세포로부터 시험 항체를 생성하였고, AKTA 순수 크로마토그래피 시스템을 이용하는 단백질 A 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 정제된 항체 단편의 품질 및 수율을 분광측정법에 의해 그리고 SDS-PAGE에 의해 결정하였다.
비오틴일화된 인간 ApoC3을 스트렙타비딘(streptavidin: SA) 코팅된 칩 상에서 포획하는 SPR-기반 방법을 사용하였고, 코팅된 칩에 대한 시험 항체의 결합 동역학을 pH 7.4와 pH 5.5 둘 다에서 측정하였다. 간략하면, 대략 500 RU의 표면 밀도에 도달하도록 20 μl의 비오틴일화된 인간 ApoC3을 10 μg/ml의 농도로 주사하였다. 60 μl의 각각의 시험 항체를 HBS-EP 완충제(GE, 카탈로그 번호 BR-1008-26; 0.010 M HEPES, 0.150 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05%(v/v) 계면활성제 P20, pH 7.4) 중에서 희석시켰고, 1 내지 100 nM의 농도로 주사하였다. 시험 항체를 30 μl/분의 유량으로 플로우 셀을 통과시킨 후, pH 7.4 또는 pH 5.5에서 5분 동안 오프 레이트 세척하였다. 결합 동역학을 유도하기 위해 랑그뮈어(Langmuir) 1:1 결합 모델을 적용하는 BIAevaluation 4.1 소프트웨어를 이용하여 얻어진 센서그램을 분석하였다. 데이터를 0으로 조절하고, 기준 세포 센서그램을 차감하였다.
Figure pct00020
모든 scFv-Fc 항체는 pH 5.5에서보다 pH 7.4에서 ApoC3에 대해 더 높은 친화도를 나타내었고, 항체 5E5VH12_VLWT는 가장 확연한 pH-의존적 결합을 나타내었다(표 14 참조). pH-의존적 결합의 규모는 산성 조건하에 해리 속도와 양의 상관관계가 있었다.
실시예 2: 항-ApoC3 인간 IgG 1 항체의 시험관내 특징규명.
실시예 1의 결과에 기초하여, 시험 scFv-Fc 항체를 인간 IgG1 항체로서 생성하였다. 인간 ApoC3 단백질을 CM5 칩 상에 고정시킨 SPR-기반 검정을 사용하였고, 코팅된 칩에 대한 시험 항체의 결합 동역학을 pH 7.4와 pH 5.5 둘 다에서 측정하였다. 간략하면, pH 4.5에서 10 mM 아세트산염 완충제 중의 네이티브 인간 ApoC3의 50 μg/ml 용액을 제조하고, 표면 밀도가 대략 500 RU에 도달될 때까지 주입하였다. 60 μl의 각각의 시험 항체를 HBS-EP 완충제(GE, 카탈로그 번호 BR-1008-26; 0.010 M HEPES, 0.150 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05%(v/v) 계면활성제 P20, pH 7.4) 중에서 희석시켰고, 표 9에 기재된 바와 같은 농도로 주사하였다. 시험 항체를 30 μl/분의 유량으로 플로우 셀을 통과시킨 후, pH 7.4 또는 pH 5.5에서 5분 동안 오프 레이트 세척하였다. 결합 동역학을 유도하기 위해 랑그뮈어(Langmuir) 1:1 결합 모델을 적용하는 BIAevaluation 4.1 소프트웨어를 이용하여 얻어진 센서그램을 분석하였다. 데이터를 0으로 조절하고, 기준 세포 센서그램을 차감하였다.
Figure pct00021
시험된 모든 항체는 pH 7.4에서 인간 ApoC3에 결합하였고, pH 5.5에서 ApoC3에 대해서 감소된 친화도를 가졌다(표 15 참고). 5E5VH5_VLWT, 5E5VH12_VLWT, 5E5VH5_VL8 및 5E5VH12_VL8은 특히 확연한 pH-의존성을 나타낸다.
실시예 3: 간세포에 의한 VLDL 흡수에 대한 항-ApoC3 항체의 효과.
본 실시예에서, 간세포에 의해 VLDL 흡수를 약화시키는 항-ApoC3 항체의 능력을 결정하였다.
간략하면, 24시간 동안 10% FCS가 보충된 완전 최소 필수 배지(Minimum Essential Medium: MEM)에서, 그리고 또 다른 24시간 동안 0.0125% 소 혈청 알부민(MEM-BSA 배지)이 보충된 완전 MEM 배지 내 폴리-d-라이신 코팅면 상에서 HepG2 세포(ATCC HB-8065)를 배양시켰다. 신선한 MEM-BSA 배지에서 15분 동안 IgG1 포맷으로 3μM 인간 ApoC3 단백질(Athens Research and Technology) 및 3 μM의 시험 항체와 함께 세포를 사전 인큐베이션시키고, 30 μg/mL의 ApoC3-고갈 DiI-표지된 VLDL(Kalen Biomedical, LLC # 770130-9)를 배지에 첨가하였다. 4주 인큐베이션 후, 세포를 20분 동안 1% 인트라리피드가 보충된 신선한 완전 MEM과 함께 추가로 인큐베이션시켰다. 15분 동안 실온에서 이소프로판올로 세포를 용해시키고, 용해물 중의 DiI 표지의 형광을 측정하고(ex=520 nm; em=580), 표준 곡선을 이용하여 DiI-표지된 VLDL의 양을 계산하고, 용해물 중의 총 단백질 양을 기초로 데이터를 정규화시킴으로써 세포에 의해서 취해진 DiI-표지된 VLDL의 양을 결정하였다. 그래프패드 프리즘 6(GraphPad Prism 6)을 사용하여 데이터를 그래프로 나타내고, 평균 +/- SEM으로서 보고한다. 그래프패드 프리즘 6을 사용하여 다중 비교를 사용하는 일측 ANOVA를 계산하였다.
도 1a, 1b 및 1c에 도시된 바와 같이, 5E5WT, 5E5VHWT_VL8, 5E5VH5_VLWT, 5E5VH12_VLWT 및 5E5VH5_VL8 항체는 HepG2 세포에 의한 VLDL 흡수를 증가시켰다. 특히, 5E5VHWT_VL8, 5E5VH5_VLWT, 5E5VH12_VLWT 및 5E5VH5_VL8 항체는 모두 ApoC3의 존재 하에서 VLDL 흡수를 완전히 회복하였다.
실시예 4: 항-ApoC3 항체의 약동학 및 약력학.
본 실시예는 인간 ApoC3의 트랜스제닉 발현에 기인하여 손상된 트리글리세라이드 청소율을 갖는 마우스 모델을 이용하는 5E5VH5_VL8 항체의 생체내 특징규명을 기재한다.
4.1 마우스 모델의 생성
표준 사료 식이로 유지한 60 내지 63일령의 야생형 C57BL/6 수컷 마우스를 복강내 투여에 의해 티록신 결합 글로불린(thyroxine binding globulin: TBG) 프로모터(RegenXBio)에 작동 가능하게 연결된 인간 ApoC3 유전자를 보유하는 AAV8 벡터의 3x1011개의 바이러스 입자로 감염시켰다. 투여 12일 후에, 혈액 샘플을 안구 후굴(retro-orbital sinus)로부터 수집하고, 혈액 샘플 중의 인간 ApoC3 수준을 1차 항-ApoC3 항체(Abcam 토끼 다클론성 항-인간 ApoC3 #ab21032) 및 2차 ApoC3 항체(Abcam 염소 다클론성 비오틴-접합체 ApoC3 # ab21024)를 사용하여 ELISA에 의해서 측정하였다. 감염 마우스에서, 인간 ApoC3의 평균 혈청 수준은 9.9 μM이었다. 4시간 금식 후 평균 순환 트리글리세라이드 수준은 이들 마우스에서 163 mg/dL인 반면, 대조군 마우스에서 평균 순환 트리글리세라이드 수준은 109 mg/dL였다(p=0.0065).
이어서, 모든 군이 12일에 유사한 평균 ApoC3 수준을 갖도록 마우스를 군화하였다. AAV 감염 14일 후에, 기준(T=0) ApoC3 수준을 확립하기 위해 안구 후 굴로부터 혈액 샘플을 수집하였다. 등쪽 피하 공간 내의 주사에 의해서 각각의 마우스에게 시험 항-ApoC3 인간 IgG1 항체 25 mg/kg을 투여하였다. 항-달걀 리소좀 인간 IgG1 항체(HyHEL5)를 아이소타입 대조군으로서 사용하였다. 시험 항체의 투여 후 0, 2, 4, 8 및 24시간에 그리고 그 후에 30일 동안 대략 2주마다 안구 후굴로부터 혈액 샘플을 수집하였다. 국립보건원의 실험동물의 관리와 사용에 관한 지침(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals of the National Institutes of Health)의 권고사항에 따라서 모든 동물 연구를 수행하였다. Vascumab, LLC의 실험동물운영위원회에 의해 모든 절차를 승인받았다.
4.2 항-ApoC3 항체의 약동학
인간 ApoC3을 발현시키는 마우스를 생성하였고, 섹션 4.1에 기재한 바와 같이 처리하였다. ELISA 검정으로 인간 IgG1 항체의 혈장 수준을 결정하였다. 구체적으로는, PBS 중에서 희석시킨 50 μL 1차 IgG 항체(Fitzgerald 41-XG57 염소 항-인간 IgG Fc 다클론성)와 함께 96-웰 플레이트(Griener # 655061)를 4℃에서 밤새 코팅시켰다. 플레이트를 200 μL TBS-T로 4회 세척하였고, 30℃에서 90분 동안 PBS 중에서 3% BSA(Roche BSA 분획 V 프로테아제 무함유 # 03 117 332 001) + 맑은 우유(Pierce Clear Milk Blocker # 37587)로 이루어진 200 μL의 차단 완충제로 차단하였다. 차단 완충제를 제거하고, 차단 완충제 중에서 희석시킨 시험 샘플 50 μL를 첨가하고, 300 rpm에서 회전시키면서 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 200 μL TBS-T로 4회 세척하고, 차단 완충제 중에 희석시킨 50 μL의 2차 항체(Abcam 염소 항-인간 IgG-Fc(비오틴) 다클론성 # ab97223)를 첨가하고, 300 rpm에서 회전시키면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 TBS-T로 1회 세척하고, PBS 중에서 100배로 희석시킨 50 μL의 SA-HRP(Abcam # 64269)를 첨가하고, 300 rpm에서 회전시키면서 실온에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 플레이트를 200 μL의 TBS-T로 4회 세척하고, 80 μL의 TMB로 현상시켰다. 50 μL의 0.5 N HCL에 의해 색원체 반응을 종결시켰다. 흡광도를 450 nm의 파장에서 판독하였다. 시험 웰에서 인간 IgG의 양을 정제된 시험 항체를 사용하여 구성된 표준 곡선의 4-파라미터 피트(Molecular Devices)로부터 계산하였다. 이 방법은 인간 ApoC3을 특이적으로 검출하며, 마우스 ApoC3와 교차반응하지 않는다.
도 2a에 나타낸 바와 같이, 5E5 항체는 인간 ApoC3을 발현시키는 마우스에서 신속하게 분해되었다. 이는 ApoC3-함유 지질 입자의 흡수를 통한 ApoC3의 신속한 전환에 의해 설명될 수 있다. 더 낮은 pH에서 ApoC3에 대해 감소된 친화도를 갖는 5E5VH5_VL8 항체는 산성 세포소기관에서 ApoC3으로부터 해리될 수 있고, 엔도솜 재순환을 통해 혈류로 복귀된다. 5E5VH5_VL8의 반감기는 약 1주인데, 이는 아이소타입 대조군 항체 HyHel5(마우스에서 특정 항원에 결합하지 않는 항체)의 반감기와 유사하다. 5E5VH5_VL8의 혈장 수준은 주사 후 약 1개월에 기준으로 복귀되었다. 5E5VH5_VL8의 연장된 반감기는 혈청 중에서 항체의 치료 수준을 유지하는 데 필요한 낮은 투여 빈도로 인해서, 이 항체를 임상 적용분야를 위한 우수한 후보로 만들었다.
4.3 항-ApoC3 항체의 약력학
인간 ApoC3을 발현시키는 마우스를 생성하였고, 섹션 4.1에 기재한 바와 같이 처리하였다. ELISA 검정으로 인간 ApoC3 및 ApoB의 혈장 수준을 결정하였다. 구체적으로, 96-웰 플레이트(Griener # 655061)를 PBS 중에서 희석시킨 50 μL의 1차 ApoC3 항체(에이비캠 토끼 다클론성 항-인간 ApoC3 #ab21032) 또는 50㎕의 1차 ApoB 항체(Meridian Life Sciences 염소 다클론성 항-인간 ApoB #K45253G)로 4℃에서 밤새 코팅시켰다. 플레이트를 200 μL의 TBS-T로 4회 세척하고, 30℃에서 90분 동안 200 μL의 차단 완충제(PBS 중의 Pierce Clear Milk Blocker # 37587)로 차단하였다. 차단 완충제를 제거하고, 차단 완충제 중에서 희석시킨 시험 샘플 50 μL를 첨가하고, 300 rpm에서 회전시키면서 실온에서 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 200 μL TBS-T로 4회 세척하고, 차단 완충제 중의 50 μL 2차 ApoC3 항체(Abcam 염소 다클론성 비오틴-접합체 ApoC3 # ab21024) 또는 2차 ApoB 항체((Meridian Life Sciences 염소 다클론성 비오틴-접합체 ApoB48/100 # 34003G)를 첨가하고, 300 rpm에서 회전시키면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 TBS-T로 1회 세척하고, PBS 중에 100배 희석시킨 50 μL의 SA-HRP(Abcam # 64269)을 첨가하고, 300 rpm에서 회전시키면서 실온에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 200 μL의 TBS-T로 4회 세척하고, 80 μL의 TMB(Thermo Ultra-TMB ELISA #34028), 그 다음 50 μL의 0.5 N HCL로 현상시켰다. 흡광도를 450 nm에서 판독하였다. 정제된 ApoC3(Athens Research and Technology)을 이용하여 구성한 표준 곡선의 4-파라미터 피트(Molecular Devices)로부터 시험 웰에서 ApoC3의 양을 계산하였다. 원심분리에 의해 단리한 마우스 VLDL을 이용하여 구성한 표준 곡선의 4-파라미터 피트(Molecular Devices)로부터 시험 웰에서 ApoB의 양을 계산하였다(ApoB 함량은 총 단백질 함량의 20%인 것으로 추정된다). 데이터를 계산하였고, HyHel5 대조군 항체로 처리된 마우스에서 대응하는 수준에 대한 백분율 값으로서 플로팅하였다.
도 2b 및 도 2c에 나타낸 바와 같이, 5E5 항체는 초기에 인간 ApoC3 및 ApoB의 혈장 수준을 감소시켰지만, 그 수준은 약 2일 후에 정상으로 복귀되었다. 대조적으로, 5E5VH5_VL8은 약 1개월 동안 인간 ApoC3 및 ApoB의 혈장 수준을 감소시켰다. 효능의 이러한 긴 지속기간은 5E5VH5_VL8의 긴 반감기와 일치되었는데, 이는 5E5VH5_VL8이 우수한 임상 후보라는 것을 확인하였다.
실시예 5: 항-ApoC3 항체의 인간화
5E5VH5_VL8의 인간화된 변이체를 WO2012123586A1에 기재된 "생식계열화"(germlining)" 방법에 따라서 생성시켰다. 간략하면, 5E5VH5_VL8의 VH 영역 및 VL 영역과 동일한 정규 접힘 구조 및 최대 아미노산 서열 동일성을 갖는 인간 생식계열 유전자 분절을 공지된 인간 생식계열 유전자 서열과 비교함으로써 식별하였다. 가장 가까운 인간 중쇄 및 경쇄 생식계열 서열은 각각 인간 IGHV3-23*01 및 인간 IGKV2-28*01이었다. 인간 IGHV3-23*01 및 IGKV2-28*01 생식계열 서열과 상이한 5E5VH5_VL8의 아미노산 잔기에서 인간화 돌연변이를 혼입한 5E5VH5_VL8 변이체의 파지 디스플레이 Fab 라이브러리를 작제하였으며, 각각의 표적화된 위치에서 라마 잔기 및 인간 잔기는 라이브러리에서 동일하게 표현된다. 서열 책임 모티프 DG, DS, NR 또는 M을 제거하기 위한 돌연변이를 또한 라이브러리에 혼입하였다. 수 라운드의 친화도-유도된 파지 디스플레이 선택 후에 최상의 표적 결합 특징(예를 들어, pH 7.4에서 ApoC3에 대해 고친화도 결합을 나타내지만, pH 5.5에서 ApoC3에 대해 훨씬 감소된 친화도)을 갖는 인간화된 5E5VH5_VL8 변이체를 식별하였다.
고친화도, pH-의존적 결합을 보유한 20개의 인간화된 항-ApoC3 항체를 상기에 기재된 초기 선택 및 선별로부터 식별하였다. 이들 항체의 VH 및 Vκ 암호 서열을 발현 벡터 내에 클로닝하고, 전장 IgG1 분자로서 ExpiCHO-S 세포에서 생성하였다. 이어서 AKTA Pure 시스템 상의 Hitrap MabSelect Sure 컬럼(GE, 카탈로그 번호 11-0034-94)을 사용하여 항체를 정제하였다. 항체를 pH 3.0에서 1.0 ml의 0.1 M 시트레이트 완충제를 사용하여 용리시키고, 중화를 위해서 0.1 ml Tris-HCl pH 9.0을 함유하는 튜브에 수집하였다. 항체 함유 분획을 풀링시키고, AKTA Pure 시스템 상의 HiTrap 탈염 컬럼을 사용하여 1x 포스페이트 완충 염수 용액(PBS; NaCl 137 mM, KCl 3 mM, Na2HPO4 8 mM, KH2PO4 15 mM, pH7.4) 중에서 탈염시켰다. 280 nm에서의 흡광도를 측정하고 다음과 같이 흡광 계수로 보정하여 단백질 농도를 결정하였다: (A280nm-A340nm)/ε(흡광 계수(g/L)). 정제된 샘플을 환원 및 비-환원 조건하에 SDS-PAGE로 검사하여 샘플의 정확한 크기 및 순도를 확인하였다.
인간화된 항-ApoC3 항체의 pH 의존적 회합 및 해리 파라미터를 평가하기 위해 2개의 상이한 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정을 수행하였다. 두 가지 검정의 방법 및 결과를 하기에 기재한다.
5.1 고정된 ApoC3에 결합하는 인간화된 항-ApoC3 항체의 SPR 분석
스트렙타비딘 코팅된 SPR 칩(GE Healthcare, 카탈로그 번호 BR100032) 상에서 pH 7.4에서, Biacore에 의해서 제공된 방법에 따라서 비오틴일화된 네이티브 인간 ApoC3을 포획하였고, 20 μl 10 μg/ml 비오틴일화된 네이티브 인간 ApoC3의 주입에 의해서 표면 밀도는 대략 500 RU에 도달하였다. HBS-EP 완충제(GE, cat # BR-1008-26; 0.010 M HEPES, 0.150M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05%(v/v) 계면활성제 P20, pH 7.4) 중에 희석시킨 1 내지 50 nM 범위의 시험 항체 60 μL를 주입하였고, 30 μl/분의 유량으로 플로우 셀을 통과시키고, 그 다음 pH7.4에서 5분 동안 오프-레이트 세척하였다. 해리 후, 10 μl의 10 mM NaOH/1 M NaCl 및 10 μl의 10 mM 글리신(pH1.5)을 주입함으로서 플로우 셀 표면을 재생시켰다. 동일한 일반 프로토콜을 사용하여 pH 5.5에서 검정을 반복하였으며, 여기서 이동 완충제 및 샘플 희석 완충제를 시트레이트 완충제가 보충된 HBS-EP 완충제로 10mM 최종 농도로 대체하고, pH를 5.5로 조정하였다.
결합 동역학을 유도하기 위해 랑그뮈어 1:1 결합 모델을 사용하는 BIAevaluation 4.1 소프트웨어를 이용하여 얻어진 센서그램을 분석하였다. 데이터를 0으로 조절하고, 기준 세포 센서그램을 차감하였다. 센서그램은 무분석물 블랭크에 대해서 이중 참조되었다. 오프-레이트 값이 장비의 kd 검출 한계인 1 x 10-6 1/s 미만인 경우 피팅된 파라미터는 적용되지 않는 것으로 간주하였다.
동역학 파라미터 계산치에 대한 개요를 생성된 인간화된 항체에 대해서 표 16에 제공한다. 도 3은 균일한 25 nM mAb 농도에서, 2개의 검정 pH 값에서 각각의 생성된 인간화된 mAb에 대한 중첩된 센서그램을 나타낸다.
Figure pct00022
Figure pct00023
도 3에 나타낸 바와 같이, mAb1 내지 mAb6은 pH 7.4 및 pH5.5 둘 다에서 매우 낮은 오프-레이트를 나타내었다. pH5.5에서 이들의 겉보기 친화도는 5E5VH5_VL8에 비해 개선되었으며, pH-의존적 표적 결합은 관찰되지 않았다. mAb7 항체는 pH 5.5에서 높은 오프-레이트로 명확한 pH 의존적 표적 결합을 나타낸다. 그러나, 두 pH 값에서 결합 단계의 Rmax 값은 5E5VH5_VL8의 값보다 높았다. mAb8 내지 mAb12 항체는 pH 7.4에서 매우 낮은 오프 레이트를 나타내었고, pH 7.4에서보다 pH5.5에서 더 높은 Rmax 수준을 나타내었다. pH5.5에서 이들의 겉보기 친화도는 5E5VH5_VL8에 비해 개선되었으며, pH-의존적 표적 결합은 관찰되지 않았다. HCDR 및 LCDR 서열을 가장 가까운 인간 생식계열 프레임워크 서열에 그래프팅함으로써 mAb13 내지 mAb14 항체를 생성하였고, 이러한 항체는 명확한 pH-의존적 표적 결합 특징을 나타내었다. 그러나, 인간 ApoC3에 대한 이의 친화도는 5E5VH5_VL8에 비해서 pH 7.4에서 감소되었다. mAb15, mAb17 및 mAb19 항체는 LCDR3(Q90H)에서 히스티딘 잔기를 함유하지 않았지만, 스크린에 목적하는 pH-의존적 표적 결합 특징을 나타내었다. mAb16, mAb18 및 mAb20 항체의 서열은 H90 5E5VH5_VL8에 상응하는 잔기가 히스티딘인 것을 제외하고 각각 mAb15, mAb17 및 mAb19와 동일하였다. 도 3에 도시된 바와 같이, mAb16, mAb18 및 mAb20은 pH 5.5에서 표적에 대한 감소된 친화도, pH 7.4에서 증가된 오프-레이트로 인해서, 명확한 pH-의존적 표적 결합을 나타냈다.
5.2 고정된 인간화된 항-ApoC3 항체에 결합하는 ApoC3의 SPR 분석
시험 항체를 SPR 칩 상에 포획하고, 인간 ApoC3 단백질을 주입하고, 항체에 대한 ApoC3의 결합을 측정하는 역 SPR 분석을 설계하였다. 구체적으로, 염소 항-인간 IgG Fcγ-특이적 항체(Jackson ImmunoResearch, Cat. nr. 109-005-098)를 CM5 칩 표면(GE Healthcare, cat. nr. BR100012) 상에 고정시켰다. Biacore/GE에 의해서 제공된 방법에 따라서 NHS/EDC 키트(Biacore AB, Cat.nr. BR-1000-50)를 사용하여 고정을 수행하였고: 칩의 활성화 후, 5.0의 pH를 갖는 10 mM 아세테이트 완충제 중의 항-인간 Fcγ 항체 30 μg/ml의 용액을 제조하였고, 표면 밀도가 대략 10000 RU에 도달될 때까지 주입하였다. 분석 주기는 다음 단계를 포함하였다:
(1) 항체 포획: HBS-EP 완충제(GE, cat. nr. BR-1008-26; 0.010 M HEPES, 0.150M NaCl, 3mM EDTA, 0.05 %(v/v) 계면활성제 P20, pH 7.4) 중에 희석시킨 pH7.4 또는 pH5.5에서의 50 nM 농도의 항체의 주입 및 최대 800 RU의 고친화도 항 huFcγ 항체에 의해서 포획되도록 함;
(2) 기준 안정화: 30 μl/ml 유량에서 100 μl HBS-EP 완충제의 주입;
(3) 표적 결합: 400 nM, 200 nM, 100 nM 및 50 nM 농도로 HBS-EP 완충제 중에 용해시킨 표적 ApoC3 단백질 60 μl의 주입;
(4) 오프-레이트 세척: 해리 단계의 평가를 위해서 5분 동안 30 μl/ml 유량으로 HBS-EP 완충제의 주입;
(5) pH1.5에서 20 μl의 10 mM 글리신을 주입함으로써 칩의 재생.
결합 동역학을 유도하기 위해 랑그뮈어 1:1 결합 모델을 사용하는 BIAevaluation 4.1 소프트웨어를 이용하여 얻어진 센서그램을 분석하였다. 데이터를 0으로 조절하고, 기준 세포 센서그램을 차감하고, 분석물 주입에 상응하는 센서그램을 이중 참조하기 위해 분석물 블랭크 검정을 사용하지 않았다. 해리 및 회합 단계 센서그램을 4개의 상이한 농도 곡선에 대해 별도로 피팅하였다. 도달한 최대 RU 값이 장비의 검출 한계(<5RU), Biacore 3000(Biacore AB) 미만인 경우 센서그램을 피팅에서 제외하였다.
동역학 파라미터 계산치에 대한 개요를 생성된 인간화된 항체에 대해서 표 17에 제공한다. 도 4는 생성된 변이체에 대한 결합 특징을 나타낸다. 표적 단백질의 상이한 제시로 인해서, 모든 항체의 오프-레이트가 이러한 설정에서 증가되었다.
Figure pct00024
Figure pct00025
도 4에 나타낸 바와 같이, mAb1 내지 mAb6은 pH7.4에서 ApoC3에 대한 개선된 겉보기 친화도를 나타내었고, pH-의존적 표적 결합이 관찰되었다. mAb7 항체는 두 pH 값 모두에서 높은 오프-레이트로 명백한 pH-의존적 표적 결합을 나타내었다. 회합 단계에서 pH 5.5에서의 Rmax 값은 5E5VH5_VL8에 비해 증가하였다. mAb8 내지 mAb12 항체는 5E5VH5_VL8보다 pH 7.4에서 더 낮은 오프 레이트를 나타내었고, pH 7.4에서보다 pH5.5에서 더 높은 Rmax 수준을 나타내었고, 5E5VH5_VL8의 것보다 pH5.5에서 더 높은 오프-레이트를 나타내었고, pH-의존적 표적 결합을 나타내었다. mAb13 및 mAb14 항체(HCDR 및 LCDR 서열을 가장 가까운 인간 생식계열 프레임워크 서열에 그래프팅함으로써 생성됨)는 두 pH 수준 모두에서 결합 손실을 나타내었고, 따라서, pH5.5에서의 친화도 값을 계산하지 않았다. mAb16, mAb18, 및 mAb20 항체는, pH 5.5에서 표적에 대한 감소된 친화도로 인해서, 명확한 pH-의존적 표적 결합을 나타내었지만, pH 7.4에서 오프-레이트는 또한 증가되었다.
요약하면, SPR 검정 결과에 따라서 인간화된 항체에 대해 하기 결합 프로파일 군이 식별되었다:
군 1: mAbs 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 및 12;
군 2: mAbs15, 17 및 19;
군 3: mAbs 16, 18 및 20;
군 4 mAb 7 함유; 및
군 5: mAbs 13 및 14.
각각의 군 내에서, 모든 변이체는 유사한 SPR 회합 및 해리 프로파일을 나타내었다. 따라서, 각각의 군으로부터의 대표적인 항체를 선택하여 가장 높은 인간 상동성 백분율의 기준에 기초하여 그들의 개발성 파라미터 중 하나로서 그들의 열내성을 평가하였다.
5.3 선택된 인간화된 항-ApoC3 항체의 열내성의 특징규명
인간화 항체의 열내성은 56 내지 68℃ 범위의 상이한 온도에서 1시간 동안 인큐베이션시킨 후에 평가하였다. 500 RU의 자연 huApoC3 단백질이 CM5 칩(GE Healthcare, cat. nr. BR100012) 상에 고정된 SPR 검정으로 항체의 활성을 결정하였다. Biacore에 의해서 제공된 방법에 따라서 NHS/EDC 키트(Biacore AB)를 사용하여 고정을 수행하였고: 칩의 활성화 후, 4.5의 pH에서 10 mM 아세테이트 완충제 중의 인간 ApoC3 60 μg/ml의 용액을 제조하였고, 표면 밀도가 대략 500 RU에 도달될 때까지 주입하였다.
HBS-EP 완충제(GE, cat # BR-1008-26; 0.010 M HEPES, 0.150M NaCl, 3 mM EDTA, 0.05%(v/v) 계면활성제 P20, pH 7.4) 중에 희석시킨 10 nM의 시험 항체 100 μL를 주입하였고, 30 μl/분의 유량으로 플로우 셀을 통과시키고, 그 다음 pH7.4에서 10분 동안 HBS-EP 완충제로 오프-레이트 세척하였다. 해리 후, 10 μl의 10 mM NaOH/1 M NaCl 및 10 μl의 10 mM 글리신(pH1.5)을 주입함으로써 플로우 셀 표면을 재생시켰다.
결합 단계에서 도달된 회합 속도 및 최대 RU 값을 판독 파라미터로서 측정하였다. 초기 결합 단계에서 최대 200초까지 회합 속도(기울기)를 평가하였고, 345s에서 해리 단계의 시작 부분에서 RU 최대 값(R0)을 판독하였다. 기능성 항체의 백분율을 100%로 설정된 참조군(4℃에서 배양된 샘플)을 기준으로 계산하였다. 활성 대 온도 곡선에서의 변곡점으로서 각각의 항체의 용융 온도를 결정하였다.
도 5a 및 5b에 도시된 바와 같이, 그리고 표 18에 열거된 바와 같이, 시험된 대부분의 인간화된 항체는 모 클론 5E5VH5_VL8과 비교하여 상당히 개선된 용융 온도를 나타냈다. 그러나, mAb14는 5E5VH5_VL8보다 현저히 낮은 용융 온도를 가졌다.
Figure pct00026
관찰된 열내성 변화가 변이체 13 및 14의 CDR 이식에 사용된 생식계열 프레임워크 서열과 관련이 있는지를 결정하기 위해 상기 검정에서 mAb13의 열내성을 평가하였다. 인간화된 항체 및 5E5VH5_VL8(대조군으로서 검정된)의 예상되는 용융 온도를 포괄하기 위해 확장된 온도 범위에서 검정을 수행하였다. 도 5c에 도시된 바와 같이, mAb13 및 mAb14는 유사한 열내성 곡선을 가지며, 5E5VH5_VL8보다 약 6℃ 낮은, 약 57℃의 용융 온도를 나타냈다.
* * *
본 발명은 본 명세서에 개시된 특정 실시형태에 의해 범위가 제한되지 않아야 한다. 사실상, 기재된 것들에 부가하여 본 발명의 다양한 변형이 전술한 설명 및 수반되는 도면으로부터 당업자에게 명백해질 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.
모든 참고문헌(예를 들어, 간행물 또는 특허 또는 특허 출원)은 여기에 인용된 각각의 참조 (예를 들어, 간행물 또는 특허 또는 특허 출원)가 명확하게 및 개별적으로 전체적으로 및 모든 목적을 위해 본원에 참고로 인용된 것과 같은 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 인용되었다.
다른 실시형태는 다음의 청구 범위 내에 있다.
SEQUENCE LISTING <110> STATEN BIOTECHNOLOGY B.V. <120> ANTI-APOC3 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 606962: SBW-007PC <140> PCT/IB2018/058564 <141> 2018-10-31 <150> 62/579,449 <151> 2017-10-31 <160> 93 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 79 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Glu Ala Glu Asp Ala Ser Leu Leu Ser Phe Met Gln Gly Tyr Met 1 5 10 15 Lys His Ala Thr Lys Thr Ala Lys Asp Ala Leu Ser Ser Val Gln Glu 20 25 30 Ser Gln Val Ala Gln Gln Ala Arg Gly Trp Val Thr Asp Gly Phe Ser 35 40 45 Ser Leu Lys Asp Tyr Trp Ser Thr Val Lys Asp Lys Phe Ser Glu Phe 50 55 60 Trp Asp Leu Asp Pro Glu Val Arg Pro Thr Ser Ala Val Ala Ala 65 70 75 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Phe Ser Glu Phe Trp Asp Leu Asp Pro Glu 1 5 10 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Thr Tyr Ser Met Arg 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source 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Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325 <210> 87 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> G, E or D <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> G or A <400> 87 Ser Ile His Thr Xaa Xaa Gly Gly Thr Ala Tyr Arg Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 88 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> D or G <400> 88 Lys Thr Ser Gln Gly Leu Val His Ser Xaa Gly Lys Thr Tyr Phe Tyr 1 5 10 15 <210> 89 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> V or L <220> <221> MOD_RES <222> 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or S <400> 92 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Xaa Val Xaa Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Ala Ser Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gln Gly Leu Val His Ser 20 25 30 Xaa Gly Lys Thr Tyr Phe Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Gln Leu Ile Tyr Gln Val Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Xaa Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Xaa Val Xaa Ala Glu Asp Xaa Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Xaa Gly 85 90 95 Thr Tyr Tyr Pro His Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 93 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> S or H <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> G, E or D <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> G or A <400> 93 Ser Ile Xaa Thr Xaa Xaa Gly Gly Thr Ala Tyr Arg Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly

Claims (45)

  1. ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 상보성 결정 영역(complementarity determining region) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하되, (a) CDRH1은 TYSMR의 아미노산 서열(서열번호 3)을 포함하고; (b) CDRH2는 SIHTX1X2GGTAYRDSVKG의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서, X1은 G, E 또는 D이고, X2는 G 또는 A이고(서열번호 87); (c) CDRH3은 AGYSD의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고; (d) CDRL1은 KTSQGLVHSXGKTYFY의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 D 또는 G이고(서열번호 88); (e) CDRL2는 QVSNRAS의 아미노산 서열(서열번호 7)을 포함하고; (f) CDRL3은 AXGTYYPHT의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 Q 또는 H(서열번호 8)이고,
    항체의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 3, 9, 10; 3, 11, 10; 3, 9, 12; 또는 3, 11, 12가 아닌, 단리된 항체.
  2. 제1항에 있어서, CDRH2는 SIHTGGGGTAYRDSVKG(서열번호 36), SIHTEAGGTAYRDSVKG(서열번호 37), SIHTDAGGTAYRDSVKG(서열번호 38), 또는 SIHTEGGGTAYRDSVKG(서열번호 39)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, CDRL1은 KTSQGLVHSDGKTYFY(서열번호 6) 또는 KTSQGLVHSGGKTYFY(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, CDRL3은 AHGTYYPHT(서열번호 14) 또는 AQGTYYPHT(서열번호 13)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 3, 36, 10, 6, 7 및 14; 3, 37, 10, 40, 7 및 14; 3, 38, 10, 40, 7 및 14; 3, 38, 10, 6, 7 및 14; 3, 39, 10, 6, 7 및 14; 또는 3, 37, 10, 40, 7 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  6. ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 서열번호 42-53으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  7. ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 서열번호 54-65로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  8. ApoC3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호 42 및 54, 43 및 55, 44 및 56, 45 및 57, 46 및 58, 46 및 54, 47 및 58, 47 및 54, 48 및 58, 48 및 54, 49 및 59, 49 및 60, 50 및 59, 50 및 60, 51 및 61, 52 및 62, 53 및 62, 43 및 63, 44 및 64, 또는 45 및 65에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 인간화된 항체인, 단리된 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 인간 불변 영역을 더 포함하는, 단리된 항체.
  11. 제10항에 있어서, 불변 영역은 야생형 인간 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 변이체이되, 변이체 인간 면역글로불린 중쇄 불변 영역은 pH 6에서 인간 FcRn에 대한 야생형 인간 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 친화도에 비해서 pH 6에서 인간 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 증가된 친화도를 갖는, 단리된 항체.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 불변 영역은 인간 IgG의 중쇄 불변 영역인, 단리된 항체.
  13. 제12항에 있어서, 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역인, 단리된 항체.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 불변 영역은 각각 EU 위치 433, 434 및 436에서 아미노산 K, F 및 Y를 포함하는, 단리된 항체.
  15. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 불변 영역은 각각 EU 위치 252, 254 및 256에서 아미노산 Y, T 및 E를 포함하는, 단리된 항체.
  16. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 불변 영역은 각각 EU 위치 428 및 434에서 아미노산 L 및 S를 포함하는, 단리된 항체.
  17. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 불변 영역은 서열번호 22-24, 76-78 및 81-86으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 66-73으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 단리된 항체.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 단리된 항체.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하되, 중쇄 및 경쇄 각각은 각각 서열번호 66 및 74, 67 및 74, 68 및 74, 69 및 74, 70 및 74, 71 및 74, 72 및 74, 또는 73 및 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, ApoC3은 인간 ApoC3인, 단리된 항체.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  23. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는, 폴리뉴클레오티드.
  24. 제23항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 발현 벡터.
  25. 제23항의 폴리뉴클레오티드 또는 제24항의 발현 벡터를 포함하는, 숙주 세포,
  26. ApoC3에 결합하는 항체의 생산 방법으로서, 제25항의 숙주 세포를 항체의 발현을 허용하는 조건 하에서 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
  27. 대상체에서 ApoC3의 활성을 저해하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  28. 대상체의 혈액에서 트리글리세리드 수준을 감소시키는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  29. 대상체에서 식후 지방혈증(post-prandial lipemia)을 저해하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  30. 대상체에서 고중성지방혈증(hypertriglyceridemia)을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  31. 대상체에서 킬로미크론혈증(chylomicronemia)을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  32. 고중성지방혈증을 갖는 대상체에서 심혈관 질환의 위험을 감소시키는 방법으로서, 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 심혈관 질환은 심근경색증인, 방법.
  34. 제32항에 있어서, 심혈관 질환은 협심증인, 방법.
  35. 제32항에 있어서, 심혈관 질환은 뇌졸중인, 방법.
  36. 제32항에 있어서, 심혈관 질환은 죽상경화증인, 방법.
  37. 제27항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 대상체의 혈액에서 킬로미크론 또는 킬로미크론 잔존물의 수준을 감소시키는, 방법.
  38. 제27항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 추가 지질 저하제(lipid lowering agent)를 제공받는, 방법.
  39. 제38항에 있어서, 추가 지질 저하제는 HMG-CoA 리덕타제 저해제인, 방법.
  40. 제39항에 있어서, HMG-CoA 리덕타제 저해제는 아토바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴 또는 심바스타틴인, 방법.
  41. 제38항에 있어서, 추가 지질 저하제는 PCSK9 저해제인, 방법.
  42. 제41항에 있어서, PCSK9 저해제는 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙 또는 보코시주맙인, 방법.
  43. 제38항에 있어서, 추가 지질 저하제는 에제티미브(ezetimibe)인, 방법.
  44. 제38항에 있어서, 추가 지질 저하제는 에제티미브와 HMG-CoA 리덕타제 저해제의 조합물인, 방법.
  45. 제38항에 있어서, 추가 지질 저하제는 에제티미브, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 PCSK9 저해제의 조합물인, 방법.
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3481864A1 (en) 2016-07-08 2019-05-15 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
CA3059133A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
CA3080103A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
EA202191890A1 (ru) 2019-01-18 2022-02-03 Астразенека Аб Ингибиторы pcsk9 и способы их применения
US11248001B2 (en) 2019-01-18 2022-02-15 Astrazeneca Ab PCSK9 inhibitors and methods of use thereof
CN121197633A (zh) 2019-12-13 2025-12-26 比特比德科有限责任公司 用于将治疗剂递送至胃肠道的可摄取装置
WO2023133360A2 (en) * 2022-01-10 2023-07-13 Phenomic Ai Anti-collagen triple helix repeat containing 1 (cthrc1) antibodies and methods of using the same
CN120399074B (zh) * 2023-06-02 2025-12-30 安徽金百奥生物科技有限公司 一种与人dr3胞外域高亲和力的纳米抗体
KR20250113586A (ko) * 2024-01-18 2025-07-28 (주)케어젠 근육 형성 촉진 활성, 항비만 및 항당뇨 활성을 갖는 신규 펩타이드 및 이의 용도

Family Cites Families (174)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4970144A (en) 1984-12-31 1990-11-13 International Genetic Engineering Peptide fragments of human apolipoprotein, type-specific antibodies and methods of use
DE3668186D1 (de) 1985-04-01 1990-02-15 Celltech Ltd Transformierte myeloma-zell-linie und dieselbe verwendendes verfahren zur expression eines gens, das ein eukaryontisches polypeptid kodiert.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5869620A (en) 1986-09-02 1999-02-09 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
EP0768377A1 (en) 1988-09-02 1997-04-16 Protein Engineering Corporation Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
AU7247191A (en) 1990-01-11 1991-08-05 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
ES2284161T3 (es) 1990-01-12 2007-11-01 Amgen Fremont Inc. Generacion de anticuerpos xenogenicos.
IT1246382B (it) 1990-04-17 1994-11-18 Eurand Int Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
AU8507191A (en) 1990-08-29 1992-03-30 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
AU662148B2 (en) 1991-04-10 1995-08-24 Scripps Research Institute, The Heterodimeric receptor libraries using phagemids
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
WO1992022324A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Xoma Corporation Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
PT1696031E (pt) 1991-12-02 2010-06-25 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
JP4157160B2 (ja) 1991-12-13 2008-09-24 ゾーマ テクノロジー リミテッド 改変抗体可変領域の調製のための方法
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US6010715A (en) 1992-04-01 2000-01-04 Bertek, Inc. Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent
US6024975A (en) 1992-04-08 2000-02-15 Americare International Diagnostics, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
CA2118508A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
PT1621554E (pt) 1992-08-21 2009-07-13 Univ Bruxelles Imunoglobtainas desprovidas de cadeias leves
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
JP3720353B2 (ja) 1992-12-04 2005-11-24 メディカル リサーチ カウンシル 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用
US6274552B1 (en) 1993-03-18 2001-08-14 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5985307A (en) 1993-04-14 1999-11-16 Emory University Device and method for non-occlusive localized drug delivery
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
US6838254B1 (en) 1993-04-29 2005-01-04 Conopco, Inc. Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae
US6004534A (en) 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
JPH09506262A (ja) 1993-12-08 1997-06-24 ジェンザイム・コーポレイション 特異的抗体の製造方法
PT744958E (pt) 1994-01-31 2003-11-28 Univ Boston Bancos de anticorpos policlonais
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
US6107045A (en) 1994-06-30 2000-08-22 Oklahoma Medical Research Foundation Antibodies to lipoproteins and apolipoproteins and methods of use thereof
US5759542A (en) 1994-08-05 1998-06-02 New England Deaconess Hospital Corporation Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases
US5660854A (en) 1994-11-28 1997-08-26 Haynes; Duncan H Drug releasing surgical implant or dressing material
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5983134A (en) 1995-04-23 1999-11-09 Electromagnetic Bracing Systems Inc. Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
WO1996034096A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6316652B1 (en) 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
US6167301A (en) 1995-08-29 2000-12-26 Flower; Ronald J. Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
WO1997014719A1 (en) 1995-10-16 1997-04-24 Unilever N.V. A bifunctional or bivalent antibody fragment analogue
US6039975A (en) 1995-10-17 2000-03-21 Hoffman-La Roche Inc. Colon targeted delivery system
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
ATE279947T1 (de) 1996-03-18 2004-11-15 Univ Texas Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten
TW345603B (en) 1996-05-29 1998-11-21 Gmundner Fertigteile Gmbh A noise control device for tracks
US6027947A (en) 1996-08-20 2000-02-22 Ramtron International Corporation Partially or completely encapsulated top electrode of a ferroelectric capacitor
US5985317A (en) 1996-09-06 1999-11-16 Theratech, Inc. Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents
HUP0000116A3 (en) 1996-10-01 2000-08-28 Stanford Res Inst Int Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
US6131570A (en) 1998-06-30 2000-10-17 Aradigm Corporation Temperature controlling device for aerosol drug delivery
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
ATE549918T1 (de) 1996-12-03 2012-04-15 Amgen Fremont Inc Menschliche antikörper, die ausdrücklich menschliches tnf alpha binden
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
TR199902553T2 (xx) 1997-04-14 2000-03-21 Micromet Gesellschaft F�R Biomedizinische Forschung Mbh �nsan v�cuduna kar�� antijen resept�rlerinin �retimi i�in yeni metod ve kullan�mlar�.
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US7951917B1 (en) 1997-05-02 2011-05-31 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5948433A (en) 1997-08-21 1999-09-07 Bertek, Inc. Transdermal patch
EP0968711B9 (en) 1997-10-28 2008-05-28 Bando Chemical Industries, Ltd. Dermatological patch sheet and process for producing base sheet therefor
US6048736A (en) 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
WO2001044301A1 (en) 1999-11-29 2001-06-21 Unilever Plc Immobilized single domain antigen-binding molecules
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
WO2001064008A2 (en) 2000-03-03 2001-09-07 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine for the treatment of artherosclerosis
GB0121171D0 (en) 2001-08-31 2001-10-24 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US7658921B2 (en) 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
JP4336498B2 (ja) 2000-12-12 2009-09-30 メディミューン，エルエルシー 延長した半減期を有する分子ならびにその組成物および用途
MXPA05000511A (es) 2001-07-12 2005-09-30 Jefferson Foote Anticuepros super humanizados.
FR2829581A1 (fr) 2001-09-07 2003-03-14 Genfit S A Methodes de criblage de molecules utiles pour la prevention ou le traitement du syndrome metabolique, des maladies cardiovasculaires et de l'atherosclerose
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
GB0305794D0 (en) 2003-03-13 2003-04-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB0305790D0 (en) 2003-03-13 2003-04-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel Composition
GB0305793D0 (en) 2003-03-13 2003-04-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US9062306B2 (en) 2003-04-29 2015-06-23 Biocrine Ab Methods for identifying compounds for treating type 1 diabetes
GB2404981A (en) 2003-08-15 2005-02-16 Univ Geneve Diagnostic method for stroke
JP2007528723A (ja) 2003-08-22 2007-10-18 メディミューン，インコーポレーテッド 抗体のヒト化
EP1673395A1 (en) 2003-10-15 2006-06-28 PDL BioPharma, Inc. Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig
EP2385069A3 (en) 2003-11-12 2012-05-30 Biogen Idec MA Inc. Neonatal Fc rReceptor (FcRn)- binding polypeptide variants, dimeric Fc binding proteins and methods related thereto
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
BRPI0517837A (pt) 2004-11-12 2008-10-21 Xencor Inc variantes fc com ligação alterada a fcrn
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8163881B2 (en) 2005-05-31 2012-04-24 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Immunoglobulin molecules with improved characteristics
CN104761637B (zh) 2006-03-31 2021-10-15 中外制药株式会社 调控抗体血液动力学的方法
DK2155789T3 (da) 2007-05-01 2013-10-21 Res Dev Foundation Immunoglobulin-Fc-biblioteker
CN101874042B9 (zh) 2007-09-26 2019-01-01 中外制药株式会社 利用cdr的氨基酸取代来改变抗体等电点的方法
AU2008345242B2 (en) 2007-10-31 2014-02-27 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
EP2275443B1 (en) 2008-04-11 2015-12-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly
US8444976B2 (en) 2008-07-02 2013-05-21 Argen-X B.V. Antigen binding polypeptides
GB2461546B (en) 2008-07-02 2010-07-07 Argen X Bv Antigen binding polypeptides
US20170247470A9 (en) 2008-09-17 2017-08-31 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
KR101834999B1 (ko) 2008-10-14 2018-03-06 제넨테크, 인크. 이뮤노글로불린 변이체 및 그의 용도
EP2233500A1 (en) 2009-03-20 2010-09-29 LFB Biotechnologies Optimized Fc variants
US20100323376A1 (en) 2009-06-17 2010-12-23 Maine Standards Company, Llc Method for Measuring Lipoprotein-Specific Apolipoproteins
LT2975051T (lt) 2009-06-26 2021-07-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Lengvai išskiriami bispecifiniai antikūnai su natyvios formos imunoglobulinu
CN102549016B (zh) 2009-06-30 2015-05-06 研究发展基金会 免疫球蛋白fc多肽
US20110008901A1 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Kiernan Urban A Apolipoprotein ciii in pre- and type 2 diabetes
GB2476681B (en) 2010-01-04 2012-04-04 Argen X Bv Humanized camelid VH, VK and VL immunoglobulin domains
BR112012022917A2 (pt) * 2010-03-11 2017-01-10 Pfizer anticorpos com ligação a antígeno dependente de ph
TWI667257B (zh) 2010-03-30 2019-08-01 中外製藥股份有限公司 促進抗原消失之具有經修飾的ＦｃＲｎ親和力之抗體
TWI654204B (zh) 2010-11-30 2019-03-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 具有鈣依存性的抗原結合能力之抗體
CA2827923C (en) 2011-02-25 2021-11-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc.gamma.riib-specific fc antibody
PL2686347T3 (pl) 2011-03-16 2018-10-31 Argenx Bvba Przeciwciała przeciwko CD70
US8557513B2 (en) 2011-06-27 2013-10-15 Biocrine Ab Methods for treating and/or limiting development of diabetes
BR112014007484A2 (pt) 2011-09-30 2017-04-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd molécula de ligação a antígeno de indução de resposta imune a antígeno alvo
WO2013064700A2 (en) 2011-11-03 2013-05-10 Argen-X B.V. Chimeric polypeptides and methods of use
EP2780463A4 (en) 2011-11-18 2015-07-01 Merck Sharp & Dohme FC-CONTAINING POLYPEPTIDES WITH INCREASED INFLAMMATORY FEATURES AND INCREASED FCRN BINDING
CA3233142A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Drug containing carrier into cell for forming immune complex
KR102041412B1 (ko) 2011-12-30 2019-11-11 한미사이언스 주식회사 면역글로불린 Ｆｃ 단편 유도체
WO2013125667A1 (ja) 2012-02-24 2013-08-29 中外製薬株式会社 FcγRIIBを介して抗原の消失を促進する抗原結合分子
HK1200271A1 (en) 2012-03-16 2015-08-07 瑞泽恩制药公司 Mice that produce antigen-binding proteins with ph-dependent binding characteristics
SG10202006507XA (en) 2012-05-30 2020-08-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Target-tissue-specific antigen-binding molecule
EP2977386A1 (en) 2012-08-31 2016-01-27 Argen-X Nv Method for producing antibody molecules having inter-species, intra-target cross-reactivity
WO2014033304A2 (en) 2012-08-31 2014-03-06 arGEN-X BV Highly diverse combinatorial antibody libraries
KR102169899B1 (ko) 2013-02-14 2020-10-26 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 지질단백질 리파제 결핍 (lpld) 모집단에서 아포지질단백질 c-iii (apociii) 발현의 조절
GB201302878D0 (en) 2013-02-19 2013-04-03 Argen X Bv Modified igG molecules
US9783600B2 (en) 2013-02-25 2017-10-10 Imbp Holding, Llc Apolipoprotein C3 (ApoCIII) antagonists and methods of their use to remove ApoCIII inhibition of lipoprotein lipase (LPL)
US20150259416A1 (en) 2014-03-12 2015-09-17 Biocrine Ab Methods for treating and/or limiting development of diabetes
US20140294812A1 (en) 2013-03-15 2014-10-02 Xencor, Inc. Fc variants that improve fcrn binding and/or increase antibody half-life
EP2992010B1 (en) 2013-04-29 2021-03-24 F.Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
GB2517953A (en) 2013-09-05 2015-03-11 Argen X Bv Antibodies to complex targets
CA2934644C (en) 2013-12-24 2023-11-21 Argen-X N.V. Fcrn antagonists and methods of use
GB201414823D0 (en) 2014-08-20 2014-10-01 Argen X Bv Multispecific antibodies
KR102720769B1 (ko) 2015-03-09 2024-10-22 아르제넥스 비브이 FcRn 길항제를 사용하여 Fc-함유된 제제의 혈청 수준을 감소시키는 방법
TW201713690A (zh) 2015-08-07 2017-04-16 再生元醫藥公司 抗ａｎｇｐｔｌ８抗體及其用途
WO2017055627A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Apoc3 mutations for the diagnosis and therapy of hereditary renal amyloidosis disease
EP3370713A4 (en) 2015-11-06 2019-10-23 Gemphire Therapeutics Inc. TREATMENT OF MIXED DYSLIPIDEMIA
EP3481864A1 (en) * 2016-07-08 2019-05-15 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
GB201617270D0 (en) 2016-10-11 2016-11-23 Argen-X N V And Fairjourney Biologics Triple vector for expressing antibody molecules in full therapeutic format
CA3059133A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
GB201707484D0 (en) 2017-05-10 2017-06-21 Argenx Bvba Method of preparing ph-dependent antibodies
CA3080103A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
AU2019352017A1 (en) 2018-10-03 2021-05-06 Staten Biotechnology B.V. Antibodies specific for human and cynomolgus ApoC3 and methods of use thereof

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