KR20200074993A - 쇼그렌 증후군 치료에 사용하기 위한 항-cd40 항체 - Google Patents

쇼그렌 증후군 치료에 사용하기 위한 항-cd40 항체 Download PDF

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Abstract

본 개시는 항-CD40 항체를 활용하여 쇼그렌 증후군을 치료하기 위한 방법, 치료 요법, 용도, 키트 및 치료법에 관한 것이다.

Description

쇼그렌 증후군 치료에 사용하기 위한 항-CD40 항체
[이전 출원]
본 출원은 2017년 11월 3일 출원된 미국 가출원 제62/581212호 및 2018년 3월 19일 출원된 미국 가출원 제62/644939호에 대한 우선권을 주장하며, 그 내용은 전체적으로 포함된다.
[기술분야]
본 개시는 항-CD40 항체, 예컨대 CFZ533을 활용하여 쇼그렌 증후군, 예컨대 1차 쇼그렌 증후군 또는 2차 쇼그렌 증후군을 치료하기 위한 방법, 치료 요법, 용도, 키트 및 치료법에 관한 것이다.
1차 쇼그렌 증후군(pSS) 또는 이차 쇼그렌 증후군(sSS)과 같은 쇼그렌 증후군(SS)은 병인 불명의 일반적인 만성 자가면역 질환이다.
1차 및 2차 SS 환자에서의 이 질환의 특징은 타액선 및 누선의 단핵 세포 침윤물뿐만 아니라 항-Ro 및 항-La 자가항체의 존재를 포함한다(문헌[Bombardieri, et al. 2012]). 일부 예에서, 이러한 T 및 B 림프구의 축적은 GC와 형태학적 및 기능적 유사성을 갖는 이소성 림프양 구조(ectopic lymphoid structure, ELS)라 지칭되는 잘 조직된 구조를 형성한다(문헌[Voulgarelis et al. 2008]). 이전 연구는 SS 환자 및 이 질환의 전임상 모델로부터의 타액선에서의 ELS의 증거 및 진행 중인 친화도 성숙의 증거를 보고하여(문헌[Jacobi et al. 2002]; 문헌[Stott et al. 1998]; 문헌[Bombardieri et al. 2012]), 질환 병리학에서 이들 구조가 원인임을 시사하였다(문헌[Bombardieri et al. 2017]).
삶의 질(QoL) 척도에 미치는 이 질환의 영향은 상당하며, 비교 연구에 따르면 울혈성 심부전 또는 많은 암보다 pSS QoL이 정량적으로 더 나쁜 점수를 받은 것으로 나타났다(문헌[Segal et al 2009; Kuenstner et al 2002; Komaroff et al 1996]). 또한, SS에서의 증가된 B 세포 활성은 SS 환자의 5%에서 발생하는 림프종 발생으로 악성 형질전환 위험의 증가를 초래한다. SS 환자에 대한 치료는 점막 징후 및 증상에 대한 대증 치료로 제한되며, 현재까지 SS 환자에 대한 증거 기반의 전신 치료법은 없었다.
글루코코르티코이드 및 전형적인 질환 변형 항류마티스제(DMARD)는 대부분 효과가 없으며, 어떠한 약물 개입도 중증의 무기력 피로에 대해서는 효과가 없다. 효능에 대한 설득력 있는 증거의 결여에도 불구하고, 전신 홍반성 루푸스와 같은 유사한 자가면역 질환으로부터의 경험뿐만 아니라 일화적 증거에 기초하여, 항말라리아제(문헌[Tishler et al 2008]), 메토트렉세이트(문헌[Winzer and Aringer 2010]) 또는 아자티오프린(문헌[Kaufman et al 1999])이 특히 신장 또는 관절 병발과 같은 선외 증상의 치료에 때때로 사용된다.
B 세포 고갈제 리툭시맙을 이용한 소규모 임상시험들이 어느 정도의 치료 효능을 증명하였지만, 적절한, 대규모의 무작위 배정된 대조 임상시험은 선외 및 선상 질환 발현과 관련하여 명확한 효능을 나타낸 적은 없었다. 분비샘 파괴를 방지하고 선외 질환 발현을 다루는 질환 변형제는 만성 pSS와 같은 SS 치료에 있어 획기적인 진전을 가져올 것이다.
CFZ533은 인간 CD40에 대해 유도되는 인간 단클론 항체이다. 이는 IgG1 이소형 서브클래스에 속하며, FcγR 결합 및 ADCC 및 CDC와 같은 관련된 이펙터 기능을 파괴하는 Fc 침묵화 돌연변이(N297A)를 포함한다. CFZ533은 본 명세서에 참조로 포함된 미국 특허 제8828396호 및 미국 특허 제9221913호에 개시되어 있다.
침묵화된 ADCC 활성을 갖는 인간, 항-CD40 단클론 항체는 쇼그렌 증후군의 치료에 적합한 것으로 밝혀졌다. 특히, 항체 CFZ533은 개념 증명 연구에서 임상적으로 활성인 pSS에서 새로운 치료 양식을 제공할 가능성을 보여주었다.
본 발명의 제1 양태에 따르면, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항-CD40 항체가 제공된다. 일 구현예에서, 쇼그렌 증후군은 1차 쇼그렌 증후군이다.
항체는 다음으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다:
a. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
b. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
c. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
d. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
e. 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체.
항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 치료적 유효량의, 제1 양태에 따른 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체 및 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
일 구현예에서, 투여 경로는 제1 양태에 따른 항체의 피하 또는 정맥 내, 또는 피하 또는 정맥 내의 조합이다.
용량은 인간 대상체 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 30 mg의 활성 성분일 수 있다. 용량은 매주, 격주마다 또는 4주마다 제공될 수 있다.
일 구현예에서, 용량은 인간 대상체 킬로그램당 약 10 mg의 활성 성분이다.
일 구현예에서, 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분이다. 용량은 매주, 격주마다 또는 4주마다 제공될 수 있다.
일 구현예에서, 용량은 약 300 mg의 활성 성분이다.
바람직한 일 구현예에서, 용량은 150 mg의 활성 성분이다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 용량은 300 mg의 활성 성분이다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 용량은 600 mg의 활성 성분이다.
일 구현예에서, 항체는 로딩 투약 및 유지 투약을 통해 투여된다.
일 구현예에서, 로딩 투약은 제1 용량의 피하 주사를 통해 투여되고, 유지 투약은 제2 용량의 피하 주사를 통해 투여된다. 제1 용량은 제2 용량과 동일하거나 제2 용량보다 클 수 있다.
일 구현예에서, 제1 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 약 300 mg의 활성 성분이고, 제2 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 약 300 mg의 활성 성분이다.
일 구현예에서, 제1 용량은 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 활성 성분이고, 제2 용량은 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 활성 성분이다.
일 구현예에서, 로딩 투약은 적어도 2회의 피하 주사를 포함하고, 유지 투약은 매주(Q1W), 격주(Q2W) 또는 매월(Q4W) 피하 주사로 구성된다. 일 구현예에서, 로딩 투약은 2회의 피하 주사로 구성된다. 또 다른 구현예에서, 로딩 투약은 3회의 피하 주사로 구성된다.
일 구현예에서, 로딩 투약의 피하 주사들은 상이한 용량이다. 또 다른 구현예에서, 로딩 투약의 피하 주사들은 동일한 용량이다.
제2 양태에 따르면, 치료적 유효 용량의 항-CD40 항체를 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 상기 대상체의 쇼그렌 증후군의 치료 방법이 제공된다. 바람직한 구현예에서, 쇼그렌 증후군은 1차 쇼그렌 증후군이다.
일 구현예에서, 항체는 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다:
a. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
b. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
c. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
d. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
e. 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체.
일 구현예에서, 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 항체는 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 투여된다.
일 구현예에서, 항체는 피하로 또는 정맥 내로, 또는 피하 또는 정맥 내의 조합으로 투여된다.
일 구현예에서, 항체는 인간 대상체 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 30 mg의 활성 성분의 용량으로 투여된다.
일 구현예에서, 용량은 인간 대상체 킬로그램당 약 10 mg의 활성 성분이다.
일 구현예에서, 항체는 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 300 mg의 활성 성분의 용량으로 투여된다.
바람직한 일 구현예에서, 용량은 150 mg의 활성 성분이다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 용량은 300 mg의 활성 성분이다. 또 다른 바람직한 구현예에서, 용량은 600 mg의 활성 성분이다.
일 구현예에서, 항체는 로딩 투약 및 유지 투약으로 투여된다.
일 구현예에서, 로딩 투약은 제1 용량의 피하 주사를 통해 투여되고, 유지 투약은 제2 용량의 피하 주사를 통해 투여된다.
제1 용량은 제2 용량과 동일하거나 제2 용량보다 클 수 있다.
일 구현예에서, 제1 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 약 300 mg의 활성 성분이고, 제2 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 약 300 mg의 활성 성분이다.
일 구현예에서, 제1 용량은 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 활성 성분이고, 제2 용량은 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 활성 성분이다.
일 구현예에서, 로딩 투약은 적어도 2회의 피하 주사를 포함하고, 유지 투약은 매주(Q1W), 격주(Q2W) 또는 매월(Q4W) 피하 주사로 구성된다.
일 구현예에서, 로딩 투약은 2회의 피하 주사로 구성된다. 또 다른 구현예에서, 로딩 투약은 3회의 피하 주사로 구성된다.
일 구현예에서, 로딩 투약의 피하 주사들은 상이한 용량이다. 또 다른 구현예에서, 로딩 투약의 피하 주사들은 동일한 용량이다.
제3 양태에 따르면, 쇼그렌 증후군 치료용 의약의 제조를 위한, 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제 및 가용화제를 포함하는 액체 약학적 조성물, 및 쇼그렌 증후군을 앓는 환자에게 항-CD40 항체를 피하 투여하기 위한 수단의 용도가 제공되며, 이때, 항-CD40 항체는
a. 제1 로딩 투약으로;
b. 그 후, 제2 유지 투약으로 피하 투여되고, 상기 항-CD40 항체는 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다:
i. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
ii. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
iii. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
iv. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
v. 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
vi. 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체.
바람직한 구현예에서, 쇼그렌 증후군은 1차 쇼그렌 증후군이다.
도 1은 pSS 환자에서 CFZ533에 대한 개념 증명 연구(CCFZ533X2203)의 제1 및 제2 코호트의 연구 설계의 개략도이다.
도 2는 pSS 환자에서 CFZ533에 대한 개념 증명 연구(CCFZ533X2203)의 제3 코호트의 연구 설계의 개략도이다.
도 3은 개념 증명 연구 CCFZ533X2203이 시작되기 전의 예비 시뮬레이션된 약동학 프로파일을 보여주는 그래프이다.
도 4는 정맥 내 투여 후 약동학 프로파일(연구 CCFZ533X2203의 코호트 2; 중간 분석)을 보여주는 그래프이다.
도 5는 IV 투여 후 임상 점수(ESSDAI)(코호트 2; 연구 CCFZ533X2203)를 보여주는 그래프이다.
도 6은 IV 투여 후 바이오마커 수준(CXCL13)(코호트 2; 연구 CCFZ533X2203)을 보여주는 그래프이다.
도 7은 IV 투여 후 상이한 임상 종점에 대한 치료 결과(코호트 2; 연구 CCFZ533X2203)를 보여주는 개략도이다.
도 8은 약력학 프로파일(IV 투여 후 혈장의 총 가용성 CD40; 코호트 2; 연구 CCFZ533X2203)을 보여주는 그래프이다.
도 9는 피하 투여 후 임상 점수 (ESSDAI)(코호트 1; 연구 CCFZ533X2203)를 보여주는 그래프이다.
도 10은 피하 투여 후 약동학 프로파일(코호트 1; 연구 CCFZ533X2203)을 보여주는 그래프이다.
도 11은 SC 투여 후 약력학 프로파일(총 가용성 CD40)(코호트 1; 연구 CCFZ533X2203)을 보여주는 그래프이다.
도 12는 SC 투여 후 임상 점수(ESSPRI)(코호트 1; 연구 CCFZ533X2203)를 보여주는 그래프이다.
도 13은 IV 투여 후 임상 점수(ESSPRI)(코호트 2; 연구 CCFZ533X2203)를 보여주는 그래프이다.
도 14는 IV 투여 후 바이오마커 수준(CXCL13)(코호트 2; 연구 CCFZ533X2203)을 보여주는 그래프이다.
도 15는 IV 투여 후 임상 점수(ESSDAI)(코호트 2; 연구 CCFZ533X2203)를 보여주는 그래프이다.
도 16은 IV 투여 후 ICAM 및 B 세포 수준(코호트 2; 연구 CCFZ533X2203)을 보여주는 그래프이다.
도 17은 상이한 임상 종점에 대한 치료 결과(IV 및 SC 투여; 연구 CCFZ533X2203)를 보여주는 개략도이다.
도 18은 rCD154 유도성 경로 활성화의 시험관 내 CFZ533 억제를 보여주는 그래프이다.
도 19는 시험관 내 CFZ533 최소 자극 활성을 보여주는 그래프이다.
도 20은 CFZ533이 시험관 내에서 세포 고갈을 매개하지 않음을 보여주는 그래프이다.
도 21은 recCD154 또는 CFZ533에 의한 결합 시 CD40 수용체의 내재화를 보여주는 개별 RI-1 B 세포의 대표적인 영상이다.
도 22는 비 인간 영장류에서 CFZ533의 약동학 및 약력학(표적 결합; B 세포 고갈 없음) 특성을 보여주는 그래프이다.
도 23a는 비 인간 영장류에서의 PK/PD 및 백신 접종 연구의 실험 설계 개략도이다. 도 23b는 항-KLH IgG(면역 반응) 및 혈장 CFZ533 수준(약동학)을 보여주는 그래프이다. 도 23c는 배 중심의 조직학적 분석 결과를 보여준다.
도 24a, 24b 및 24c는 피하로 제공된 가능한 매주의 로딩 용량의 활성 성분 후, 격주의 유지 요법의 활성 성분(피하)을 그래프로 나타낸 것이다.
도 25a는 피하로 제공된 가능한 매주의 로딩 용량의 활성 성분 후, 활성 성분의 4주마다의 투여(피하)를 그래프로 나타낸 것이고, 도 25b는 피하로 제공된 가능한 매주의 로딩 용량의 활성 성분 후, 매주의 활성 성분의 투여(피하)를 그래프로 나타낸 것이다.
도 26은 MR1을 이용한 10주의 처리 후 타액선에서의 ELS의 CD40 서명 및 NOD 마우스의 타액선에서 3차 림프양 기관의 감소의 실험 결과를 보여준다.
도 27은 항-CD154를 이용한 10주의 처리 후 NOD 마우스의 타액선에서 AQP-5 양성 세포의 백분율 증가의 실험 결과를 보여준다.
CD40-CD154(CD154는 CD40L임) 경로는 쇼그렌 증후군(SS)의 발병에서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다.
따라서, 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 항체와 같은 CD40-CD154 신호전달을 차단할 수 있는 임의의 항-CD40 단클론 항체는 1차 쇼그렌 증후군(pSS)과 같은 SS의 치료에 적합할 수 있다.
이론에 구속되는 것을 바라지 않지만, 본 발명자들은 유지 요법 동안 적어도 약 40 μg/mL의 CFZ533 항체의 지속된 혈장 농도가 pSS 환자와 같은 SS 환자의 표적 조직에서 CD40-CD40L 경로를 차단하는 데 필수적임을 확인하였다. 또한, CFZ533은 (표적 교체(turnover) 및 발현과 관련이 있는) 표적 매개 배치의 대상이 되고, SS 환자는 신체에서 높은 CD40 발현을 나타내기 때문에, 치료 시작 시 더 많은 용량 또는 더 잦은 요법을 필요로 하는 CD40 수준이 증가된 병태의 이러한 환자에서 CD40 수용체를 완전히 포화시키기 위해서는 치료 시작 시 로딩 요법이 필수적이었다. 따라서, 영향 받은 조직에서 CD40 발현이 증진되는 상황(병태의 중증도)에서, 치료 시작 시(2 내지 3주) CD40 수용체의 신속한 포화를 제공하는 로딩 투약 요법 후, 전체 치료 기간에 걸쳐, 적어도 40 μg/mL 또는 적어도 100 μg/mL의 지속된 혈장 농도를 제공하는 유지 투약 요법은 치료 효과를 위한 것으로 여겨진다. 정상 상태에서의 관찰된 최대 혈장 농도는 약 300 내지 400 μg/mL(코호트 3; 연구 CCFZ533X2203)였고, 감염 위험 증가를 시사하는 주요 신호 없이, 일반적으로 안전하고 내약성이 우수하였다. 혈전색전 사례는 관찰되지 않았다.
적절한 투여량은 예를 들어, 특정 CD40 경로 길항제, 예를 들어 사용될 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 항-CD40L 항체(예를 들어, BIIB063) 또는 이의 항원 결합 단편, 치료 대상체, 투여 방식, 및 치료되는 병태의 속성 및 중증도, 및 환자가 거친 이전 치료의 속성에 따라 달라질 것이다. 궁극적으로, 담당 의료인이 각 개별 환자를 치료할 CD40 경로 길항제의 양을 결정할 것이다. 일부 구현예에서, 담당 의료인은 낮은 용량의 CD40 경로 길항제를 투여하고 환자의 반응을 관찰할 수 있다. 다른 구현예에서, 환자에게 투여되는 CD40 경로 길항제의 최초 용량(들)은 크며, 재발 조짐이 일어날 때까지 하향 적정된다. 최적 치료 효과가 환자를 위해 달성될 때까지 더 큰 용량의 CD40 경로 길항제가 투여될 수 있고, 투여량은 일반적으로 더 증가되지 않는다.
본 개시의 치료 방법 또는 용도의 일부를 실현하는 데 있어서, 치료적 유효량의 CD40 경로 길항제, 예를 들어, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 항-CD40L 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 환자, 예를 들어 포유류(예를 들어, 인간)에게 투여된다. 개시된 방법이 CD40 경로 길항제(예를 들어, mAb1/CFZ533, mAb2, ASKP1240)를 이용하여 SS 환자의 치료를 제공하는 것으로 이해되지만, 환자가 궁극적으로 CD40 경로 길항제로 치료되는 경우 이것이 이러한 CD40 경로 길항제 치료법이 반드시 단일요법인 것을 배제하지는 않는다. 실제로, 환자가 CD40 경로 길항제를 이용한 치료 대상으로 선택되는 경우, CD40 경로 길항제(예를 들어, mAb1/CFZ533, mAb2, ASKP1240)는 본 개시의 방법에 따라 단독으로 또는 다른 작용제 및 치료법과 조합하여 투여될 수 있다.
요법 변경은 pSS 환자와 같은 특정 SS 환자, 예를 들어 사용되는 CD40 경로 길항제, 예를 들어 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 항-CD40L 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 이용한 치료에 대해 부적절한 반응을 나타내는 환자를 위하여 적절할 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, 투여(예를 들어, mAb1/CFZ533 또는 mAb2)는 매월 투약, 예를 들어 격주 투약(2주마다) 또는 매주 투약보다 더 잦을 수 있다.
일부 환자는 로딩 요법(예를 들어, 수 주 동안의 매주 투여[예를 들어, 1 내지 4주, 예를 들어, 제0주, 제1주, 제2주, 및/또는 제3주에서의 투약, 예를 들어 2주, 제0주 및 제1주에서의 로딩 투약 요법]에 이은, CFZ533이 수 주 동안 매주, 격주, 또는 4주마다 투여될 수 있는, 예를 들어, 제3주 또는 제4주에서 시작되는, 유지 요법으로부터 이익을 얻을 수 있다.
예를 들어, mAb1/CFZ533 또는 mAb2의 적절한 요법은 수 주 동안 매주[예를 들어, 1 내지 4주, 예를 들어, 제0주, 제1주, 제2주, 및 제3주에서의 투약]에 이은, 매월의 유지 요법일 수 있다.
또 다른 예에서, mAb1/CFZ533 또는 mAb2의 적절한 요법은 수 주 동안 매주(예를 들어, 2 내지 8주, 예를 들어, 3주, 예를 들어, 제0주, 제1주, 제2주에서의 투약)에 이은, 격주마다의 유지 요법이다.
또한, (예를 들어, mAb1/CFZ533 또는 mAb2의) 투여는 매월 투약보다 덜 빈번하게, 예를 들어, 6주마다, 8주마다(2개월마다), 분기마다(3개월마다) 등으로 이루어질 수 있음이 이해될 것이다.
용량 증가는 질환의 중증도에 근거하여, 특정 SS 환자, 예를 들어 pSS 환자, 예를 들어 사용되는 CD40 경로 길항제, 예를 들어 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 항-CD40L 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 이용한 치료에 대해 부적절한 반응을 나타내는 환자를 위하여 적절할 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, 피하(s.c.) 투여량(로딩 또는 유지 용량)은 약 150 mg s.c. 초과 내지 약 900 mg s.c. 초과, 예를 들어, 약 75 mg, 약 100 mg, 약 125 mg, 약 175 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 600 mg 등일 수 있다; 이와 유사하게, 정맥 내(i.v.) 투여량은 약 10 mg/kg 초과, 예를 들어, 약 11 mg/kg, 12 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg 등일 수 있다. 또한, 용량 감소가 또한 특정 SS 환자, 예컨대, pSS 환자, 예를 들어, CD40 경로 길항제(예를 들어, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 항-CD40L 항체 또는 이의 항원 결합 단편)를 이용한 치료에 대해 유해 사례 또는 부정적인 반응을 나타내는 환자를 위하여 적절할 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, CD40 경로 길항제(예를 들어, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 항-CD40L 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 투여량은 약 150 mg s.c. 미만 내지 약 900 mg s.c. 미만, 예를 들어, 약 25 mg, 약 50 mg, 약 75 mg, 약 100 mg, 약 125 mg, 약 175 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 600 mg 등일 수 있다.
일부 구현예에서, CD40 길항제, 예를 들어, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 항-CD40L 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 s.c. 전달되는 600 mg의 초기 용량으로 환자에게 투여될 수 있고, 용량은 그 후 필요한 경우, 의사에 의해 결정되는 바와 같이, s.c. 전달되는 150 mg 또는 300 mg으로 조정될 수 있다.
일부 구현예에서, CD40 길항제, 예를 들어, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 본 명세서에서 CFZ533으로도 지칭되는 mAb1, mAb2, ASKP1240) 또는 항-CD40L 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 i.v. 전달되는 10 mg/kg의 초기 용량으로 환자에게 투여될 수 있고, 용량은 그 후 필요한 경우, 의사에 의해 결정되는 바와 같이, s.c. 전달되는 150 mg 또는 300 mg으로 조정될 수 있다.
특정 구현예에서, 3 mg/kg의 CFZ533이 제1일(D1), 제15일(D15), D29, D57, D85, D99, D113, 및 D141에 s.c. 투여된다.
또 다른 특정 구현예에서, 10 mg/kg의 CFZ533이 D1, D15, D29, D57, D85, D99, D113, 및 D141에 i.v. 투여된다.
또 다른 특정 구현예에서, 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 600 mg의 CFZ533의 네 개 단위 용량, 즉, D1, D8, D15 및 D22에 s.c. 투여되는 600 mg의 CFZ533을 포함하는 로딩 용량에 이은, 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 300 mg의 단위 용량, 즉, D29부터 D85까지 매주 1회 s.c. 투여되는 300 mg의 CFZ533을 포함하는 유지 용량.
추가의 특정 구현예에서, 제1일에 1회 i.v. 투여되는, 대상체 kg당 10 mg의 CFZ533의 하나의 용량을 포함하는 로딩 용량에 이은, 매주 1회(Q1W) s.c. 투여되는 300 mg의 단위 용량, 즉, D8부터 D85까지 매주 1회 s.c. 투여되는 300 mg의 CFZ533을 포함하는 유지 용량.
CFZ533은 분기마다, 매월, 매주 또는 격주마다, 예를 들어, 약 75 mg, 약 150 mg, 약 300 mg, 약 450 mg 또는 약 600 mg의 단위 용량으로, 피하 주사에 의해, 투여되는 약 75 mg 내지 약 600 mg 또는 약 150 mg 내지 약 300 mg의 투약으로 피하로, 투여될 수 있다.
CFZ533은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 로딩 용량으로, 피하 주사에 의해, 매주, 투여될 수 있으며, 로딩 용량은 1 내지 4주 동안 투여된다.
로딩 용량은 또한 약 10 mg/kg 내지 약 30 mg/kg의 i.v. 투여일 수 있다. 또한, 로딩 용량은 약 150 mg, 300 mg 및/또는 600 mg의 활성 성분의 용량으로 매주 또는 격주마다 피하로 투여될 수 있다.
CFZ533의 로딩 요법 또는 투약(예컨대, 150 / 300 / 600 mg, 매주 또는 격주마다)에는 바람직하게는 매주, 격주마다 또는 매월(4주마다) 투여되는 유지 요법 또는 투약이 이어진다. 유지 용량은 바람직하게는 매주 또는 격주마다 300 mg s.c. 또는 격주마다 600 mg 또는 4주마다 600 mg이다.
항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CFZ533, 이의 기능적 유도체 또는 이의 바이오시밀러일 수 있다.
본 명세서에서 정의되는 바와 같이, "단위 용량"은 약 75 mg 내지 900 mg, 예를 들어, 약 150 mg 내지 약 600 mg, 예를 들어, 약 150 mg 내지 약 600 mg, 예를 들어, 약 300 mg 내지 약 600 mg, 또는 예를 들어, 약 150 mg 내지 약 300 mg으로 포함될 수 있는 s.c. 용량을 지칭한다. 예를 들어, 단위 s.c. 용량은 약 75 mg, 약 150 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450mg, 약 500 mg, 약 550 mg, 약 600 mg이다.
정의
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, CD40은 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 5라고도 지칭되는 분화 클러스터 40(cluster of differentiation 40)을 지칭한다. 용어 CD40은 달리 기술되지 않는 한, 예를 들어, 서열번호 19에 정의된 바와 같은, 인간 CD40을 지칭한다.
수치 값 x에 관한 용어 "약"은, 예를 들어, +/-10%를 의미한다. 용어 "약"은 수치 범위 또는 숫자 목록 앞에 사용될 때, 시리즈의 각 숫자에 적용된다. 예를 들어, 어구 "약 1 내지 5"는 "약 1 내지 약 5"로 해석되어야 하고, 또는, 예를 들어, 어구 "약 1, 2, 3, 4"는 "약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 등"으로 해석되어야 한다.
단어 "실질적으로"는 "완전히"를 배제하지 않으며, 예를 들어 Y를 "실질적으로 함유하지 않는" 조성물은 Y를 완전히 함유하지 않을 수 있다. 필요한 경우, 단어 "실질적으로"는 본 개시의 정의로부터 생략될 수 있다.
"포함하는(comprising)"이라는 용어는 "포함하는(including)"뿐만 아니라 "구성되는(consisting)"도 포함하는데, 예를 들어 X를 "포함하는(comprising)" 조성물은 X만으로 구성될 수 있거나, 추가적인 어떤 것을 포함할 수 있는데, 예를 들어 X + Y일 수 있다.
AUC0-t는 시간 0부터 시간 't'(t는 투여 후의 정의된 시점)까지의 혈장 농도-시간 곡선 아래의 면적을 나타낸다[질량 x 시간 / 부피].
AUCtx-ty는 시간 'x'부터 시간 'y'('시간 x'와 '시간 y'는 투여 후의 정의된 시점)까지의 혈장 농도-시간 곡선 아래의 면적을 나타낸다.
Cmax는 약물 투여 후 관찰된 최대 혈장 농도이다[질량 / 부피].
Cmin은 약물 투여 후 관찰된 최소 혈장 농도이다.
Ctrough는 투약 간격의 시작 직전 또는 투약 간격의 끝에서의 관찰된 혈장 농도이다.
Tmax는 약물 투여 후 최대 농도에 도달하는 시간이다[시간].
ss(아래 첨자)는 파라미터가 정상 상태에서 정의됨을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체" 또는 "항-CD40 항체" 등은 (예를 들어, 결합, 입체 장애, 안정화/불안정화, 공간 분포에 의해) CD40과 상호 작용하는 전체 항체를 지칭한다. 자연 발생 "항체"는 이황화 결합에 의해 상호 연결된 적어도 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2, 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 불리는 더 보존된 영역 사이에 배치된 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성의 영역들로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 다음 순서로 아미노-말단으로부터 카복시-말단으로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호 작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적인 보체계의 첫 번째 구성요소(C1q)를 포함한, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 용어 "항체"는 예를 들어, 단클론 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 낙타과 항체, 또는 키메라 항체를 포함한다. 항체는 임의의 이소형(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 클래스(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2), 또는 서브클래스, 바람직하게는 IgG 및 가장 바람직하게는 IgG1의 항체일 수 있다. 예시적인 항체는 표 1에 기재된 바와 같은 CFZ533(본 명세서에서 mAb1로도 표시됨) 및 mAb2를 포함한다.
경쇄 및 중쇄는 구조적 및 기능적 상동성 영역으로 나뉜다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 이용된다. 이 점과 관련하여, 경쇄(VL) 및 중쇄(VH) 부분의 가변 도메인이 항원 인식 및 특이성을 결정한다는 점이 인정될 것이다. 역으로, 경쇄의 불변 도메인(CL) 및 중쇄의 불변 도메인(CH1, CH2 또는 CH3)은 분비, 태반 통과 이동성, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등과 같은 중요한 생물학적 성질을 부여한다. 관례상, 불변 영역 도메인의 넘버링은 불변 영역 도메인이 항체의 항원 결합 부위 또는 아미노-말단으로부터 멀어질수록 증가된다. N-말단은 가변 영역이고, C-말단에는 불변 영역이 있으며; CH3 및 CL 도메인은 실제로 각각 중쇄 및 경쇄의 카복시-말단을 포함한다. 특히, 용어 "항체"는 구체적으로 IgG-scFv 형태를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 항체의 "항원 결합 부분"(또는 간단히 "항원 부분")은 항원 또는 에피토프(예를 들어, CD40의 부분)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체, 예컨대, 단백질의 전장 또는 1개 이상의 단편을 지칭한다.
"상보성 결정 영역"("CDR")은 문헌[Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]("Kabat" 넘버링 체계), 문헌[Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948]("Chothia" 넘버링 체계) 및 ImMunoGenTics(IMGT) 넘버링(문헌[Lefranc, M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999)]; 문헌[Lefranc, M.-P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]("IMGT" 넘버링 체계)에 기재된 것들을 포함한, 다수의 주지된 체계 중 임의의 것을 이용하여 결정된 경계를 갖는 아미노산 서열이다. IMGT 하에, 항체의 CDR 영역은 IMGT/DomainGap Align 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "에피토프"는 면역글로불린에 고 친화도로 결합할 수 있는 임의의 결정기를 지칭한다. 에피토프는 항원을 특이적으로 표적화하는 항체에 의해 결합된 그 항원의 영역이며, 항원이 단백질인 경우 항체와 직접 접촉하는 특정 아미노산을 포함한다. 대부분의 경우, 에피토프는 단백질에 상재하지만, 경우에 따라 핵산과 같은 다른 종류의 분자에 상재할 수 있다. 에피토프 결정기는 분자의 화학적 활성 표면 그룹, 예컨대 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 술포닐 기를 포함할 수 있고, 특이적인 3차원의 구조적 특성 및/또는 특이적인 전하 특성을 가질 수 있다. 더욱이, Fv 단편의 두 도메인, VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 암호화되지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여 합성 링커에 의해 연결될 수 있으며, 이러한 링커는 이들을 VL 영역 및 VH 영역이 짝을 이루어 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 쇄(단쇄 Fv(scFv)로서 알려져 있음)로서 만들어질 수 있게 한다(예를 들어, 문헌[Bird et al., (1988) Science 242:423-426]; 및 문헌[Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883] 참조).
본 명세서에서 사용되는 어구 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 가진 다른 항체가 실질적으로 없는 항체(예컨대 CD40과 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 CD40 이외의 항원과 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음)를 지칭한다. 그러나 CD40과 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원, 예컨대 다른 종으로부터의 CD40 분자에 대해 교차반응성을 가질 수 있다. 또한, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "단클론 항체" 또는 "단클론 항체 조성물"은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 프레임워크 영역 및 CDR 영역이 인간 기원의 서열들로부터 유래되는 가변 영역을 갖는 항체를 포함하고자 한 것이다. "인간 항체"는 인간, 인간 조직 또는 인간 세포에 의해 생성될 필요는 없다. 본 개시의 인간 항체는 인간 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관 내 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이 유발에 의해, 항체 유전자의 재조합 중에 생체 내 접합부에서의 N-뉴클레오티드 첨가에 의해, 또는 생체 내 체세포 돌연변이에 의해 도입되는 돌연변이)를 포함할 수 있다.
천연 폴리펩티드 및 이의 기능적 유도체와 관련하여 "동일성"은 본 명세서에서 서열 동일성의 일부로서 보존적 치환을 고려하지 않으면서 최대 동일성 백분율을 달성하기 위하여, 필요에 따라, 서열을 정렬하고 갭을 도입한 후의 상응하는 천연 폴리펩티드의 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. N- 또는 C-말단의 연장 및 삽입은 동일성을 감소시키는 것으로 해석되어서는 안 된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 잘 알려져 있다. 동일성 백분율은 일반적인 정렬 알고리즘, 예를 들어, 문헌[Altshul et al. ((1990) J. Mol. Biol., 215: 403 410)]에 기술된 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool); 문헌[Needleman et al. ((1970) J. Mol. Biol., 48: 444 453)]의 알고리즘; 또는 문헌[Meyers et al. ((1988) Comput. Appl. Biosci., 4: 11 17])의 알고리즘에 의해 결정될 수 있다. 파라미터 세트는 갭 페널티 12, 갭 확장 페널티 4, 및 프레임이동 갭 페널티 5를 갖는 블로섬(Blosum) 62 점수 매트릭스일 수 있다. 2개의 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 사이의 동일성 백분율은 또한 PAM120 가중 잔기 표, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 사용하는, ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 문헌[E. Meyers and W. Miller ((1989) CABIOS, 4:11-17)]의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
"아미노산(들)"은 예를 들어, 모든 자연 발생적인 L-α-아미노산을 지칭하고, D-아미노산을 포함한다. 어구 "아미노산 서열 변이체"는 본 개시에 따른 서열과 비교하여 아미노산 서열에 일부 차이가 있는 분자를 지칭한다. 예를 들어, 명시된 서열의, 본 개시에 따른 항체의 아미노산 서열 변이체는 여전히 인간 CD40에 결합하는 능력을 갖는다. 아미노산 서열 변이체는 치환 변이체(본 개시에 따른 폴리펩티드에서 동일한 위치에 적어도 하나의 아미노산 잔기가 제거되고 그 위치에 상이한 아미노산이 삽입된 것), 삽입 변이체(본 개시에 따른 폴리펩티드의 특정 위치의 아미노산에 바로 인접하여 삽입된 하나 이상의 아미노산을 갖는 것) 및 결실 변이체(본 개시에 따른 폴리펩티드에서 하나 이상의 아미노산이 제거된 것)를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "Fc 영역"은 CH3, CH2, 및 항체의 불변 도메인의 힌지 영역의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 선택적으로, Fc 영역은 일부 항체 클래스에 존재하는 CH4 도메인을 포함할 수 있다. Fc 영역은 항체의 불변 도메인의 전체 힌지 영역을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명은 항체의 Fc 영역 및 CH1 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 항체의 Fc 영역 및 CH3 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 항체의 불변 도메인으로부터의 Fc 영역, CH1 영역, 및 C카파/람다 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 결합 분자는 불변 영역, 예를 들어 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 이러한 불변 영역은 야생형 불변 영역과 비교하여 변형된다. 즉, 본 명세서에 개시된 본 발명의 폴리펩티드는 3개의 중쇄 불변 도메인(CH1, CH2, 또는 CH3) 중 하나 이상 및/또는 경쇄 불변 영역 도메인(CL)에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 변형의 예는 하나 이상의 도메인에서의 1개 이상의 아미노산의 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다. 이러한 변화는 이펙터 기능, 반감기 등을 최적화하기 위해 포함될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "친화도"는 단일 항원 부위에서 항체와 항원 사이의 상호 작용의 강도를 지칭한다. 각각의 항원 부위 내에서, 항체 "팔(arm)"의 가변 영역은 여러 부위에서 항원과 약한 비 공유 결합력을 통해 상호 작용하며; 상호 작용이 많을수록 친화도는 더 강하다. 본 명세서에서 사용되는 IgG 항체 또는 이의 단편(예를 들어, Fab 단편)에 대한 용어 "고 친화도"는 표적 항원에 대해 10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 또는 10-10 M, 또는 10-11 M 이하, 또는 10-12 M 이하, 또는 10-13 M 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다. 그러나 고 친화도 결합은 다른 항체 이소형에 대해서 다양할 수 있다. 예를 들어, IgM 이소형에 대한 고 친화도 결합은 10-7 M 이하 또는 10-8 M 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "CD40 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는" 항체 또는 단백질은 100 nM 이하, 10 nM 이하, 1 nM 이하의 KD로 인간 CD40 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 단백질을 지칭하고자 한 것이다.
"CD40 이외의 항원과 교차 반응하는" 항체는 1 μM 이하, 100 nM 이하, 10 nM 이하, 1 nM 이하의 KD로 그 항원과 결합하는 항체를 지칭하고자 한 것이다. "특정 항원과 교차 반응하지 않는" 항체는 100 nM 이상의 KD, 또는 1 μM 이상의 KD, 또는 10 μM 이상의 KD로 그 항원에 결합하는 항체를 지칭하고자 한 것이다. 특정 구현예에서, 항원과 교차 반응하지 않는 이러한 항체는 표준 결합 분석에서 이들 단백질에 대해 본질적으로 검출 불가능한 결합을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "Kassoc" 또는 "Ka"는 특정 항체-항원 상호 작용의 결합 속도를 지칭하고자 한 것이고, 한편 본 명세서에서 사용되는 용어 "Kdis" 또는 "Kd"는 특정 항체-항원 상호 작용의 해리 속도를 지칭하고자 한 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "KD"는 해리 상수를 지칭하고자 한 것으로, 이는 Ka에 대한 Kd의 비율(즉, Kd/Ka)로부터 수득되고, 몰 농도(M)로서 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 당해 분야에 잘 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 항체의 KD를 결정하는 방법은 표면 플라즈몬 공명을 사용하거나 바이오센서 시스템, 예컨대 Biacore® 시스템을 사용하는 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "ADCC" 또는 "항체 의존적 세포독성" 활성은 세포 고갈 활성을 지칭한다. ADCC 활성은 당업자에게 잘 알려져 있는 ADCC 분석에 의해 측정될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "침묵" 항체는 ADCC 분석으로 측정 시 ADCC 활성이 없거나 적은 항체를 지칭한다.
일 구현예에서, 용어 "ADCC 활성이 없거나 적음"은 침묵 항체가 일반적인 ADCC 분석법으로 측정 시 50% 미만의 특이적인 세포 용해, 예를 들어, 10% 미만의 특이적인 세포 용해의 ADCC 활성을 나타냄을 의미한다. ADCC 활성 없음은 침묵 항체가 1% 미만의 ADCC 활성(특이적인 세포 용해)을 나타냄을 의미한다.
침묵화된 이펙터 기능은 항체의 Fc 영역의 돌연변이에 의해 얻을 수 있고, 당해 분야에 기재되어 있다: LALA 및 N297A(문헌[Strohl, W., 2009, Curr. Opin. Biotechnol. vol. 20(6):685-691]); 및 D265A(문헌[Baudino et al., 2008, J. lmmunol. 181:6664-69]; 문헌[Strohl, W., 위 참조]). 침묵 Fc IgG1 항체의 예는 IgG1 Fc 아미노산 서열에 L234A 및 L235A 돌연변이를 포함하는 소위 LALA 돌연변이체를 포함한다. 침묵 IgG1 항체의 또 다른 예는 D265A 돌연변이를 포함한다. 또 다른 침묵 IgG1 항체는 아글리코실화(aglycosylated)/비 글리코실화 항체를 야기하는 N297A 돌연변이를 포함한다.
용어 "치료" 또는 "치료하다"는 본 명세서에서 대상체에 대한 본 발명에 따른 항-CD40 항체 또는 단백질, 예를 들어, mAb1 또는 mAb2 항체의 적용 또는 투여, 또는 대상체로부터 단리된 조직 또는 세포주에 대한 본 발명의 상기 항-CD40 항체 또는 단백질을 포함하는 약학적 조성물의 적용 또는 투여(대상체는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환과 연관된 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환이 발생할 소인을 가짐)로서 정의되고, 목적은 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환의 임의의 연관된 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환이 발생할 소인을 경감, 완화, 또는 개선하는 것이다.
"치료"는 또한 대상체에 대한 본 발명의 항-CD40 항체 또는 단백질, 예를 들어, mAb1 또는 mAb2 항체를 포함하는 약학적 조성물의 적용 또는 투여, 또는 대상체로부터 단리된 조직 또는 세포주에 대한 본 발명의 상기 항-CD40 항체 또는 단백질을 포함하는 약학적 조성물의 적용 또는 투여(대상체는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환과 연관된 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환이 발생할 소인을 가짐)를 의도한 것으로, 목적은 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환의 임의의 연관된 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환이 발생할 소인을 경감, 완화, 또는 개선하는 것이다.
용어 "예방하다" 또는 "예방하는"은 예방적 또는 방지적 처치를 지칭한다; 이는 질환, 장애, 및/또는 이와 연관된 증상의 발병을 지연시키는 것 또는 예방하는 것과 관련된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 대상체는 이러한 대상체가 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에서 이익을 얻을 경우 이러한 치료를 "필요로 한다".
용어 "약학적으로 허용 가능한"은 활성 성분(들)의 생물학적 활성의 효과를 방해하지 않는 비 독성 물질을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 대상 화합물의 "투여" 또는 "투여하는"은 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 화합물 및 이의 전구약물을 제공하는 것을 의미한다. 1종 이상의 추가 치료제"와 조합한" 투여는 임의의 순서 및 임의의 투여 경로로의 동시적 및 연속적 투여를 포함한다. 하나의 투여는 치료 효과를 달성하기 위해 얼마나 많은 약물이 투여되어야 하는지에 따라 단일 주사, 또는 서로 공동으로 전달되는 다중 주사일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료적 유효량"은 환자(예컨대, 인간)에게 단일 또는 다중 용량 투여 시 장애 또는 재발성 장애를 치료하거나, 예방하거나, 그의 발병을 예방하거나, 치유하거나, 지연시키거나, 그의 중증도를 감소시키거나, 그의 적어도 하나의 증상을 완화하기에, 또는 그러한 치료의 부재 하에서 예상되는 것 이상으로 환자의 생존을 연장하기에 유효한 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어, mAb1의 양을 지칭한다. 단독으로 투여된 개별 활성 성분(예를 들어, 항-CD40 항체, 예를 들어, mAb1)에 적용되는 경우, 이 용어는 그 성분을 단독으로 지칭한다. 조합에 적용되는 경우, 이 용어는, 조합하여, 연속적으로, 또는 동시에 투여되든지 간에, 치료 효과를 가져오는 활성 성분들을 합한 양을 지칭한다.
어구 "치료 요법"은 병을 치료하는 데 사용되는 요법, 예를 들어, SS, 예컨대 pSS의 치료 중에 사용되는 투약 프로토콜을 의미한다. 치료 요법은 로딩 요법(또는 로딩 투약) 및 이어지는 유지 요법(또는 유지 투약)을 포함할 수 있다.
어구 "로딩 요법" 또는 "로딩 기간"은 질환의 초기 치료에 사용되는 치료 요법(또는 치료 요법의 일부)를 지칭한다. 일부 구현예에서, 개시된 방법, 용도, 키트, 절차 및 요법(예를 들어, SS의 치료 방법)은 로딩 요법(또는 로딩 투약)을 사용한다. 일부 사례에서, 로딩 기간은 최대 효능이 달성될 때까지의 기간이다. 로딩 요법의 일반적인 목표는 치료 요법의 초기 기간 동안 환자에게 높은 수준의 약물을 제공하는 것이다. 로딩 요법은 의사가 유지 요법 중에 사용하는 것보다 더 많은 용량의 약물을 투여하는 것, 의사가 유지 요법 중에 약물을 투여하는 것보다 더 자주 약물을 투여하는 것, 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 용량 증가는 로딩 요법 중에 또는 로딩 요법 후에 일어날 수 있다.
어구 "유지 요법" 또는 "유지 기간"은 로딩 요법 또는 기간 후에, 병의 치료 중에 환자의 유지를 위해, 예를 들어, 오랫동안(수 개월 또는 수 년 동안) 환자를 완화 상태로 유지하기 위해, 사용되는 치료 요법(또는 치료 요법의 일부)을 지칭한다. 일부 구현예에서, 개시된 방법, 용도 및 요법은 유지 요법을 사용한다. 유지 요법은 연속 치료법(예를 들어, 약물을 정기적인 간격으로, 예를 들어, 매주, 격주 또는 매월(4주마다), 매년 등 투여하는 것) 또는 단속 치료법(예를 들어, 중단된 치료, 간헐적 치료, 재발 시 치료, 또는 특정한 소정의 기준[예를 들어, 통증, 질환 발현 등] 달성 시의 치료)을 사용할 수 있다. 용량 증가는 유지 요법 중에 일어날 수 있다.
어구 "투여하기 위한 수단"은 사전 충전된 시린지, 바이알 및 시린지, 주사 펜, 자동주사장치, i.v. 드립 및 백, 펌프, 패치 펌프 등을 포함하나 이에 한정되지 않는, 약물을 환자에게 전신 투여하기 위해 이용 가능한 임의의 도구를 나타내는 데 사용된다. 이러한 품목을 이용하여, 환자가 약물을 자가 투여할 수 있거나(즉, 스스로 약물을 투여함), 또는 의사가 약물을 투여할 수 있다.
실시예 1. 항-CD40 항체
침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 mAb는 전체가 본 명세서에 참조로서 포함되는 미국 특허 제8828396호 및 미국 특허 제9221913호에 개시되었다. 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 항-CD40 mAb는 다른 항-CD40 항체와 비교하여 개선된 안전성 프로파일을 가질 것으로 예상되며, 특히 비 종양학적 적응증, 예컨대, 쇼그렌 증후군(SS) 및 특히 1차 쇼그렌 증후군(pSS)에 더욱 적합할 수 있다.
본 발명자들의 비 구속적인 가설에 따르면, mAb1 및 mAb2로 표시된, 미국 특허 제8828396호 및 미국 특허 제9221913호의 두 개의 mAb가 SS의 치료에 적합한 화합물인 것으로 여겨진다. CFZ533으로도 지칭되는 항체 mAb1이 특히 바람직하다.
mAb1은 시험관 내에서 CD154 유도성 활성화 및 생체 내에서 T 세포 의존성 항체 형성 및 배 중심 형성을 억제한다. pSS 환자에서, mAb1을 이용한 CD40 차단은 새로운 치료 양식을 제공하는 것으로 밝혀졌다(실시예 7).
당업자가 본 발명을 실시할 수 있도록 하기 위하여, mAb1 및 mAb2의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열을 아래 표 1에 제공하였다.
당해 분야에 공지된 또 다른 항-CD40 mAb는 예를 들어, 본 명세서에 참조로 포함된 미국 특허 제8568725B2호에 기술된 바와 같은, Astellas Pharma/Kyowa Hakko Kirin Co의 ASKP1240이다.
당해 분야에 공지된 또 다른 항-CD40 mAb는 예를 들어, 본 명세서에 참조로 포함된 미국 특허 제8591900호에 기술된 바와 같은, Boehringer Ingelheim의 BI655064이다.
당해 분야에 공지된 추가의 항-CD40 mAb는 예를 들어, 본 명세서에 참조로 포함된 미국 특허 제8669352호에 기술된 바와 같은, Fast Forward Pharmaceuticals의 FFP104이다.
또 다른 치료 양식은 항-CD40L-Tn3 융합 단백질인, AstraZeneca의 MEDI4920, 또는 Biogen의 항-CD40L 항체 BIIB063일 수 있다.
위에 언급된 항체와 동일한 작용 방식의 항체, 소위 바이오시밀러는 또한 당업자에 의해 인정되는 바와 같이, 본 개시에 포함된다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
일 구현예에서, 항-CD40 항체가 제공되며, 상기 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-CD40 항체가 제공되며, 상기 항체는 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함한다.
일 구현예에서, 항-CD40 항체가 제공되며, 상기 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함한다.
일 구현예에서, 항-CD40 항체가 제공되며, 상기 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함한다.
일 구현예에서, 항-CD40 항체가 제공되며, 상기 항체는 침묵 Fc IgG1 영역을 포함한다.
바람직한 구현예에서, mAb1로 표시된 항-CD40 항체가 제공된다. 구체적으로, mAb1은 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열을 포함하고; mAb2는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
1. 발현 시스템
경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 발현 벡터(들)는 표준 기술에 의해 숙주 세포 내로 전달감염된다. 다양한 형태의 용어 "전달감염"은 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내로 외인성 DNA의 도입을 위해 일반적으로 사용되는 광범위한 기술, 예컨대 전기천공, 칼슘-포스페이트 침전, DEAE-덱스트란 전달감염 등을 포괄하려는 것이다. 이론적으로 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 본 발명의 항체를 발현할 수 있다. 진핵 세포, 특히 포유류 세포가 원핵 세포에서보다 더 적절히 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비할 수 있기 때문에 이러한 진핵 세포, 예를 들어 포유류 숙주 세포, 효모 또는 사상 진균에서 항체의 발현이 논의된다.
특히 클로닝 또는 발현 벡터는 적합한 프로모터 서열에 작동적으로 연결된, 다음의 암호화 서열 (a) 내지 (b) 중 적어도 하나를 포함할 수 있다:
(a) 각각 mAb1의 전장 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 서열번호 15 및 서열번호 16; 또는
(b) 각각 mAb2의 전장 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 서열번호 17 및 서열번호 18.
본 발명의 재조합 항체를 발현하는 포유류 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO 세포)(예를 들어, 문헌[R.J. Kaufman and P.A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159:601-621]에 기술된 바와 같이, DH FR 선택 가능 마커와 함께 사용되는 문헌[Urlaub and Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기술된 dhfr- CHO 세포 포함), CHOK1 dhfr+ 세포주, NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 특히, NSO 골수종 세포와의 사용을 위해, 또 다른 발현 시스템은 PCT 출원공개 제WO 87/04462호, 제WO 89/01036호 및 유럽 특허 제0338841호에 제시된 GS 유전자 발현 시스템이다.
항체 유전자를 암호화하는 재조합 발현 벡터가 포유류 숙주 세포 내로 도입되는 경우, 항체는 숙주 세포에서 항체의 발현 또는 숙주 세포가 성장되는 배양 배지 내로의 항체의 분비를 허용하기에 충분한 기간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생성된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용해서 배양 배지로부터 회수될 수 있다(예를 들어, 문헌[Abhinav et al. 2007, Journal of Chromatography 848: 28-37] 참조).
숙주 세포는 mAb1 또는 mAb2의 발현 및 생성에 적합한 조건 하에서 배양될 수 있다.
2. 약학적 조성물
치료적 항체는 투여를 위해 준비된 수성 형태로 또는 투여 전에 적합한 희석제로 재구성하기 위한 동결건조물로서 전형적으로 제형화된다. 항-CD40 항체는 동결건조물로서, 또는 예를 들어, 사전 충전된 시린지 내의 수성 조성물로서 제형화될 수 있다. 이 제형은 완제 의약품(drug product, DP)으로도 지칭된다.
적합한 제형은 수성 약학적 조성물 또는 환자에게 전달하기 위하여 고농도의 항체 활성 성분 및 낮은 수준의 항체 응집물을 갖는 용액을 제공하도록 재구성될 수 있는 동결건조물을 제공할 수 있다. 고농도의 항체는 환자에게 전달되어야 하는 물질의 양을 감소시킬 수 있으므로 유용하다. 감소된 투약 부피는 환자에게 고정된 용량을 전달하는 데 소요되는 시간을 최소화한다. 고농도의 항-CD40 항체를 갖는 본 발명의 수성 조성물은 피하 투여에 특히 적합하다.
따라서, 본 발명은 mAb1 또는 mAb2와 같은 항-CD40 항체를 포함하는, 대상체에서의 투여, 예를 들어 피하 투여에 적합한 수성 약학적 조성물을 제공한다.
항-CD40 항체는 약학적으로 허용 가능한 담체와 조합될 때 약학적 조성물로서 사용될 수 있다. 이러한 조성물은 항-CD40 항체, 예컨대 mAb1 또는 mAb2 이외에, 담체, 다양한 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 가용화제, 및 당해 분야에 잘 알려진 기타 물질을 함유할 수 있다. 담체의 특성은 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 개시된 방법에서 사용하기 위한 약학적 조성물은 특정 표적 장애의 치료를 위한 추가적인 치료제를 또한 함유할 수 있다.
일 특정 구현예에서, 완제 의약품(DP)으로도 지칭되는 조성물은 pH가 6.0인 수성 제형으로부터 제조되며 다음을 포함하는 동결건조된 제형이다:
(i) 150 mg/mL의 mAb1 또는 mAb2,
(ii) 안정화제로서 270 mM의 수크로스,
(iii) 완충제로서 30 mM의 L-히스티딘, 및
(iv) 계면활성제로서 0.06%의 폴리소르베이트 20.
또 다른 특정 구현예에서, 완제 의약품(DP)으로도 지칭되는 약학적 조성물은 pH가 6.0이며 다음을 포함하는 수성 약학적 조성물이다:
(i) 150 mg/mL의 mAb1 또는 mAb2,
(ii) 안정화제로서 270 mM의 수크로스,
(iii) 완충제로서 30 mM의 L-히스티딘, 및
(iv) 계면활성제로서 0.06%의 폴리소르베이트 20.
3. 투여 경로
전형적으로, 항체 또는 단백질은 예를 들어 정맥 내, 복강 내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 이러한 투여를 수행하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 국소 또는 경구 투여될 수 있거나 점막을 가로질러 전달될 수 있는 조성물을 수득할 수도 있다. 당업자에 의해 인정되는 바와 같이, 특정한 선택된 투여 경로에 적합하도록, 임의의 적합한 투여 수단이 사용될 수 있다.
가능한 투여 경로의 예는 비경구(예를 들어, 정맥 내(I.V. 또는 IV), 근육 내(IM), 피내, 피하(S.C. 또는 SC) 또는 주입), 경구 및 폐(예를 들어, 흡입), 코, 경피(국소), 경점막 및 직장 투여를 포함한다. 비경구, 피내, 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액에는 다음의 성분이 포함될 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 식염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매; 항균제, 예컨대 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 긴장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화나트륨으로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 시린지 또는 다중 용량 바이알에 봉입될 수 있다.
항-CD40 치료법은 항-CD40 치료법을 필요로 하는 대상체에게 로딩 요법 또는 로딩 투약의 본 발명의 항체 또는 단백질을 투여함으로써 개시될 수 있다. "로딩 용량(들)"은 1회 또는 여러 차례 대상체에게 투여되는 본 발명의 항-CD40 항체 또는 단백질의 초기 투약을 의미하며, 투여되는 본 발명의 항체 또는 단백질의 용량은 더 높은 투약 범위(즉, 약 10 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 예컨대 약 30 mg/kg 정맥 내, 또는 최대 4주 동안 매주, 격주마다 약 600 mg, 또는 약 300 mg 또는 약 150 mg) 내에 속한다. "로딩 요법"은 단일 투여 또는 다중 투여, 예를 들어, 단일 또는 다중 정맥 내 주입(들)으로서, 또는 질환의 중증도에 따라 "로딩 투약" 요법에 조합된 다중 피하 투여로서 투여될 수 있다. "로딩 요법"의 투여 후, 대상체에게는 하나 이상의 추가의 치료적 유효 용량의 본 발명의 항-CD40 항체 또는 단백질이 투여된다. 후속적인 치료적 유효 용량은 예를 들어, 매주의 투약 일정에 따라, 또는 2주에 1회(격주), 3주에 1회, 또는 4주에 1회 투여될 수 있다. 이러한 구현예에서, 후속적인 치료적 유효 용량은 일반적으로 더 낮은 투약 범위(즉, 약 0.003 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 예컨대 약 10 mg/kg, 예를 들어 10 mg/kg IV 또는 매주, 격주마다 또는 4주마다 피하로 투여되는 약 150 mg, 약 300 mg 또는 약 600 mg) 내에 속한다.
대안적으로, 일부 구현예에서, "로딩 요법" 후, 후속적인 치료적 유효 용량의 본 발명의 항-CD40 항체 또는 단백질은 "유지 일정"에 따라 투여되며, 치료적 유효 용량의 본 발명의 항체 또는 단백질은 월 1회, 6주에 1회, 2개월에 1회, 10주에 1회, 3개월에 1회, 14주에 1회, 4개월에 1회, 18주에 1회, 5개월에 1회, 22주에 1회, 6개월에 1회, 7개월에 1회, 8개월에 1회, 9개월에 1회, 10개월에 1회, 11개월에 1회, 또는 12개월에 1회 투여된다. 이러한 구현예에서, 치료적 유효 용량의 본 발명의 항-CD40 항체 또는 단백질은, 특히 후속 용량이 더욱 빈번한 간격으로, 예를 들어, 매주, 2주에 1회 내지 4주에 1회 투여될 때 더 낮은 투약 범위(즉, 약 0.003 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 예컨대 약 10 mg/kg, 예를 들어, 10 mg/kg) 내에 속하거나, 특히 후속 용량이 덜 빈번한 간격으로 투여될 때, 예를 들어, 후속 용량이 1개월 내지 12개월 간격으로 투여될 때 더 높은 투약 범위(즉, 10 mg/kg 내지 50 mg/kg, 예컨대 30 mg/kg) 내에 속한다.
투약 시기는 일반적으로 "기준선"으로도 알려져 있는, 활성 화합물(예를 들어, mAb1)의 제1 용량일로부터 측정된다. 그러나 의료인마다 상이한 명명 규칙을 사용한다.
특히, 제0주는 일부 의료인에 의해 제1주로 지칭될 수 있는 한편, 제0일은 일부 의료인에 의해 제1일로 지칭될 수 있다. 따라서, 동일한 투약 일정을 지칭하면서, 예를 들어 의사마다 용량을 제3주/제21일, 제3주/제22일, 제4주/제21일, 제4주/제22일에 제공되는 것으로 지정하는 것이 가능하다. 일관성을 위하여, 투약 첫 주를 본 명세서에서는 제0주로 지칭하고, 투약 첫 날을 제1일로 지칭한다. 그러나 이 명명 규칙은 단순히 일관성을 위해 사용되며, 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다는 점은 당업자가 이해할 것이다. 즉, 의사가 특정 주를 "제1주" 또는 "제2주"라 지칭하는지와 관계없이 매주의 투약은 항-CD40 항체, 예를 들어, mAb1의 매주 용량을 제공하는 것이다. 본 명세서에서 언급된 투여 요법의 예는 도 1 및 도 2에서 발견된다. 용량은 정확한 시점에 제공될 필요가 없으며, 예를 들어, 대략 제29일에 예정된 용량은 그것이 적절한 주에 제공되는 한, 예를 들어, 제24일 내지 제34일에, 예를 들어, 제30일에 제공될 수 있음이 이해될 것이다.
본 명세서에서 사용되는 어구 "[표시된 용량]의 전달을 허용하기에 충분한 양의 항-CD40 항체를 갖는 용기"는 주어진 용기(예를 들어, 바이알, 펜, 시린지)가 원하는 용량을 제공하는 데 사용될 수 있는 부피의 (예를 들어, 약학적 조성물의 일부로서) 항-CD40 항체를 그 안에 두었음을 의미하는 데 사용된다. 예로서, 원하는 용량이 500 mg인 경우, 임상의는 250 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형을 함유하는 용기로부터 2 ml, 500 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형을 함유하는 용기로부터 1 ml, 1000 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형을 함유하는 용기로부터 0.5 ml 등을 사용할 수 있다. 각각의 이러한 경우에, 이러한 용기는 원하는 500 mg의 용량의 전달을 허용하기에 충분한 양의 항-CD40 항체를 갖는다.
본 명세서에서 사용되는 어구 "[표시된 용량]의 [투여 경로] 전달을 허용하는 투여량으로 제형화된"은 주어진 약학적 조성물이 표시된 투여 경로(예를 들어, s.c. 또는 i.v.)를 통해 원하는 용량의 항-CD40 항체, 예를 들어, mAb1을 제공하는 데 사용될 수 있음을 의미하는 데 사용된다. 예로서, 원하는 피하 용량이 500 mg인 경우, 임상의는 250 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형 2 ml, 500 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형 1 ml, 1000 mg/ml 농도의 항-CD40 항체 제형 0.5 ml 등을 사용할 수 있다. 각각의 이러한 경우에, 이들 항-CD40 항체 제형은 항-CD40 항체의 피하 전달을 허용하기에 충분히 높은 농도로 존재한다. 피하 전달은 전형적으로 약 2 ml 미만의 부피, 바람직하게는 약 1 ml 이하의 부피의 전달을 필요로 한다. 그러나 더 큰 부피는 예를 들어, 패치/펌프 메커니즘을 이용하여 시간이 지남에 따라 전달될 수 있다.
환자에서 쇼그렌 증후군 치료용 의약의 제조를 위한, 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1)의 용도가 본 명세서에 개시되며, 이러한 의약은 용기를 포함하도록 제형화되며, 각각의 용기는 단위 용량당 적어도 약 75 mg, 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, mAb1)의 전달을 허용하기에 충분한 양의 항-CD40 항체를 갖는다.
환자에서 쇼그렌 증후군 치료용 의약의 제조를 위한 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1)의 용도가 본 명세서에 개시되며, 의약은 단위 용량당 75 mg, 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, mAb1)의 전신 전달(예를 들어, i.v. 또는 s.c. 전달)을 허용하는 투여량으로 제형화된다.
4. 키트
본 개시는 또한 (경우에 따라) 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어, mAb1로 쇼그렌 증후군 환자를 치료하기 위한 키트를 포함한다. 이러한 키트는 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어, mAb1(예를 들어, 액체 또는 동결건조된 형태) 또는 (위에서 기술된) 항-CD40 항체를 포함하는 약학적 조성물을 포함한다. 추가로, 이러한 키트는 항-CD40 항체를 투여하기 위한 수단(예를 들어, 시린지 및 바이알, 사전 충전된 시린지, 사전 충전된 펜, 패치/펌프) 및 사용 지침을 포함할 수 있다. 지침은 특정 투약 요법의 일부로서 환자에게 항-CD40 항체(예를 들어, mAb1)를 제공하는 것을 개시할 수 있다. 이들 키트는 또한 예를 들어, 봉입된 항-CD40 항체, 예를 들어, mAb1과 조합하여 전달하기 위한, 건선 치료를 위한 (위에 기술된) 추가 치료제를 함유할 수 있다.
어구 "투여하기 위한 수단"은 사전 충전된 시린지, 바이알 및 시린지, 주사 펜, 자동주사장치, i.v. 드립 및 백, 펌프, 패치/펌프 등을 포함하나 이에 한정되지 않는, 약물을 환자에게 전신 투여하기 위해 이용 가능한 임의의 도구를 나타내는 데 사용된다. 이러한 품목을 이용하여, 환자가 약물을 자가 투여할 수 있거나(즉, 스스로 약물을 투여함), 또는 간병인 또는 의사가 약물을 투여할 수 있다.
쇼그렌 증후군을 앓는 환자의 치료를 위한 키트가 본 명세서에 개시되며, 키트는 a) 치료적 유효량의 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학적 조성물; b) 환자에게 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하기 위한 수단; 및 c) 2주에 1회씩, 3차례, 인간 대상체의 킬로그램당 약 3 내지 30 mg의 활성 성분의 용량에 이어, 인간 대상체 킬로그램당 약 3 내지 약 30 mg, 예컨대 10 mg의 활성 성분의 매월의 투약으로서, 또는 유지 요법 중에 매주, 격주 또는 매월 약 150 mg, 약 300 mg 또는 약 600 mg으로 이를 필요로 하는 환자에게 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 피하 투여하는 것을 제공하는 지침을 포함한다.
일 특정 구현예에서, 쇼그렌 증후군 치료용 의약의 제조를 위한, a) 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제 및 가용화제를 포함하는 액체 약학적 조성물, 및 b) 쇼그렌 증후군을 앓는 환자에게 항-CD40 항체를 피하 투여하기 위한 수단의 용도가 제공되며, 이때, 항-CD40 항체는
i) 2주에 1회씩, 3차례, 인간 대상체의 킬로그램당 약 3 내지 약 30 mg, 예컨대 10 mg의 활성 성분의 용량으로 환자에게 정맥 내 투여되고;
ii) 그 후, 인간 대상체의 킬로그램당 약 3 내지 약 30 mg, 예컨대 10 mg의 활성 성분의 매월의 용량으로서 환자에게 정맥 내 투여되며, 상기 항-CD40 항체는 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다:
a) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
b) 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
c) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
d) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
e) 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
f) 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체.
또 다른 특정 구현예에서, 쇼그렌 증후군 치료용 의약의 제조를 위한, a) 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제 및 가용화제를 포함하는 액체 약학적 조성물, 및 b) 쇼그렌 증후군을 앓는 환자에게 항-CD40 항체를 피하 투여하기 위한 수단의 용도가 제공되며, 이때, 항-CD40 항체는
i) (매주 또는 격주로) 약 150 mg의 활성 물질, 약 300 mg의 활성 물질 또는 약 600 mg의 활성 물질의 용량으로 환자에게 피하 투여되고;
ii) 그 후, 약 150 mg의 활성 물질, 약 300 mg의 활성 물질 또는 약 600 mg의 활성 물질의 매주, 격주 또는 매월(4주마다)의 용량으로 환자에게 피하 투여되며, 상기 항-CD40 항체는 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다:
a) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
b) 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
c) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
d) 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
e) 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
f) 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체.
실시예 2. 약리학
1. 1차 약리학
mAb1은 높은 친화도(0.3 nM의 Kd)로 인간 CD40에 결합한다. 그러나 이는 Fcγ 수용체(CD16 포함)에 결합하거나 항체 의존적 세포독성 또는 보체 의존적 세포독성을 매개하지 않는다. mAb1은 인간 백혈구의 재조합 CD154(rCD154) 유도성 활성화를 억제하지만, 단핵구 유래 수지상 세포(DC)에 의한 사이토카인 생성 또는 PBMC 증식을 유도하지 않는다. mAb1은 인간 및 비 인간 영장류 CD40과 매우 유사한 친화도로 결합한다.
생체 내에서, mAb1은 1차 및 2차 T 세포 의존적 항체 반응(TDAR)을 차단하고, 비 인간 영장류에서 신장 동종이식편의 생존을 연장시킬 수 있다(문헌[Cordoba et al 2015]). 또한, mAb1은 생체 내에서 확립된 배 중심(GC)을 교란시킬 수 있다.
CD40 수용체 점유 및 기능적 활성을 인간 전혈 배양물을 사용하여 시험관 내에서 동시에 평가하였다. CD20 양성 세포(B 세포)에서 CD69(활성화 마커)의 CD154 유도성 발현을 통해 기능적 활성을 정량하고, 형광 표지된 mAb1을 사용하여 CD40 점유를 모니터링하였다. rCD154 유도성 CD69 발현의 완전 억제를 위해 mAb1에 의한 거의 완전한 CD40 점유가 요구되었다.
2. 2차 약리학
혈소판 기능 및 혈액 지혈에 미치는 mAb1의 영향을 조사하였는데, mAb1이 혈소판 응집 반응을 유도하지 않고 오히려 높은 농도에서 혈소판 응집에 대해 약간의 억제 효과를 나타냄을 보여주었다.
실시예 3. 비 임상 독성학 및 안전성 약리학
mAb1을 이용한 독성학 연구는, 항-CD154 mAb를 이용한 임상시험에서 보고된 바와 같이 혈전색전 사례의 증거가 없었다는 점을 비롯하여, 임의의 유의한 기관 독성을 나타내지 않았다(문헌[Kawai et al 2000]). 13주의 GLP 레수스 원숭이 연구(10, 50 및 150 mg/kg의 매주의 투약)에서, mAb1의 약리학과 일치하는 관찰 소견인 진행 중 감염으로 인한 것이라 생각되는 림프양 세포충실성 증가가 22마리 중 5마리의 동물에서 눈에 띄었다. 50 mg/kg의 두 마리의 동물의 신장 및 폐에서 염증성 병변이 눈에 띄었고, 두 마리의 동물 중 한 마리에서 눈 및 기관의 병변이 또한 관찰되었다. 신장 및 폐에 미치는 mAb1의 직접적인 영향을 배제할 수는 없지만, 기회감염 병원체의 확인을 포함한 증거의 무게는 이러한 결과가 mAb1 매개성 면역억제에 대해 2차적일 가능성이 있으며, 감염성 기원임을 시사한다. 이러한 염증 소견을 고려하여, 13주의 독성 연구를 위한 무관찰 유해효과 수준(No Observed Adverse Effect Level, NOAEL)을 10 mg/kg으로 설정하였다. 시노몰구스 원숭이에서의 26주의 만성 독성 연구에서, 유해한 mAb1 관련 소견은 발견되지 않았다. 이러한 데이터에 기초하여, NOAEL을 150 mg/kg(26주)으로 설정하였다. 평균(모든 동물) Cmax, ss는 매주의 1, 50 및 150(NOAEL) mg/kg S.C.에서 각각 44, 3235 및 9690 μg/mL이었다. 26주의 시노몰구스 원숭이 연구로부터 유래된 NOAEL은 임상 투약 요법을 지지하는 데 가장 관련성이 높은 것으로 간주된다.
사후 조직학적 및 면역조직학적 평가는 비장 및 림프 조직의 피질 B 세포 영역에서 GC의 감소를 나타냈다. 회복 동물은 정상 T 세포 영역 및 증가된 B 세포 영역과 함께 증가된 림프절 세포충실성의 일부 사례를 보여주었고, 이는 약물 사용 중지 후 GC의 재구성과 일치한다. 회복 동물은 mAb1의 혈액 수준이 완전 수용체 점유에 필요한 수준 아래로 떨어진 직후에 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 대해 1차 TDAR을 나타낼 수 있었다.
T 세포 의존적 항체 반응(TDAR)인 KLH의 완전한 억제로 인해, mAb1에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성이 예상되지 않으므로 mAb1의 농도가 계속해서 약리적 수준으로 유지될 때 ADA 관련 부작용은 거의 없을 것으로 여겨진다.
조직 교차반응 연구 결과, CD40은 면역 세포뿐만 아니라 다양한 조직에도 존재함이 밝혀졌다. 이것은 CD40이 상처 치유 과정에 대한 반응, 바이러스 방어의 상향 조절 및 염증 관련 매개체와 같은 신호 전달에 관여하는 내피 및 상피 세포에서의 이의 발현에 주로 기인한다. mAb1과 같은 길항적 항-CD40 단클론 항체는 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)를 사용한 시험관 내 연구에 의해 확인된 염증 과정에 기여할 것으로 예상되지 않는다.
완전한 가이드라인을 준수하는 생식 독성 연구는 현재까지 수행된 적이 없다. 그러나 토끼를 관련 생식 독성학 종으로 확인하기 위하여 토끼에서의 용량-범위 발견, 배아-태아 발달(EFD) 연구가 수행된 바 있다. 배아-태아 발달에 미치는 영향은 관찰되지 않았으며, 어떠한 군에서도 처리 관련 태아 외부 기형은 없었다.
결론적으로, 비 임상 데이터는 1차 쇼그렌 증후군 환자에서의 최초의 다중 용량 연구를 뒷받침한다.
실시예 4. 비 임상 약동학 및 약력학
1. 약동학(PK)
IgG 면역글로불린에 전형적인, mAb1의 주요 제거 경로는 혈장과 평형을 이루는 부위에서 발생하는 단백질 분해 이화작용을 통한 것일 가능성이 높다. 또한, mAb1-CD40 복합체의 결합 및 내재화는 신속하고 포화 가능한 청소 경로를 초래하였다. 이것은 약 10 내지 20 μg/mL에서 변곡점을 나타내는 비 선형 mAb1 혈청 농도-시간 프로파일에 의해 설명되었다. 전체 청소에 대한 CD40 매개성 청소의 기여도는 CD40 발현 수준, 내재화 및 수용체 교체율과 함께 mAb1 농도에 의존한다. 10 내지 20 μg/mL를 초과하는 mAb1의 혈청 농도의 경우, 선형 동역학이 예상되며, 한편 비 선형 동역학은 낮은 농도에서 나타났다.
2. 약력학(PD)
시노몰구스 원숭이에서의 PK/PD 연구에서, PK 프로파일의 변곡점(약 10 μg/mL)은 독립적인 림프구 표적 포화 분석법에서 결정 시, CD40 포화도의 감소와 관련이 있었다. 따라서, 이 변곡점은 CD40의 포화 수준에 대한 마커 및 표적 결합에 대한 증거로 여겨진다.
CD40 점유와 약력학적 활성 사이의 연관성은 KLH로 면역화된 레수스 원숭이에서 추가로 증명되었다. 원숭이를 KLH로 3회 면역시켰다(첫 번째는 투약 약 3주 전, 두 번째는 mAb1 투여 2주 후, 세 번째는 mAb1의 완전 세척 후였다). 제2 KLH 백신 접종 시 40 μg/mL 초과의 혈장 농도의 mAb1에 의한 CD40 점유는 회상 항체 반응을 완전히 방지하였다. mAb1이 제거되자, 모든 동물은 제3 KLH에 대해 완전 기억 항체 반응을 나타냈다. 이러한 결과는 기존의 기억 B 세포의 기능이 영향을 받지 않았음을 시사한다. mAb1의 완전한 제거 후, 파상풍 변성독소(TTx)로의 면역화는 처리되지 않은 동물과 유사한 항-TTx-IgG/IgM 역가를 초래하였고, mAb1 제거 후 완전 TDAR이 회복되었음을 증명하였다.
3. 면역원성
면역억제 약물로부터 예상한 바와 같이, 레수스 원숭이(단일 용량)에서의 면역원성 데이터는 KLH-TDAR 경험으로부터의 결과와 일치하며, mAb1에 의한 완전 CD40 점유 하에서 mAb1에 대한 면역 반응이 나타나지 않을 수 있음을 확인시켜 주었다.
4. 치료 요법
mAb1의 약동학 및 약력학 프로파일, 그리고 mAb1의 전임상 및 임상시험 연구의 결과에 기초하여, 다음의 치료 요법이 사용될 수 있다.
일 구현예에서(도 24a의 1 참조), mAb1 치료 요법은 1주일 간격으로 투여된, 600 mg의 두 개의 용량의 mAb1로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 600 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 24a의 2 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 300 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 600 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 24a의 3 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 150 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 600 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 150 mg의 용량은 1 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 대안적으로는 ½배 희석된 2 mL의 완제 의약품(75 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
일 구현예에서(도 24b의 1 참조), mAb1 치료 요법은 1주일 간격으로 투여된, 600 mg의 두 개의 용량의 mAb1로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 300 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 24b의 2 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 300 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 300 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 24b의 3 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 150 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 300 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 150 mg의 용량은 1 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 대안적으로는 ½배 희석된 2 mL의 완제 의약품(75 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
일 구현예에서(도 24c의 1 참조), mAb1 치료 요법은 1주일 간격으로 투여된, 600 mg의 두 개의 용량의 mAb1로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 150 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 150 mg의 용량은 1 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 대안적으로는 ½배 희석된 2 mL의 완제 의약품(75 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 24c의 2 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 300 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 150 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 150 mg의 용량은 1 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 대안적으로는 ½배 희석된 2 mL의 완제 의약품(75 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 24c의 3 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 150 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 2주마다(Q2W) 투여되는, 150 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 150 mg의 용량은 1 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 대안적으로는 ½배 희석된 2 mL의 완제 의약품(75 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
추가 구현예에서(도 25a의 1 참조), mAb1 치료 요법은 1주일 간격으로 투여된, 600 mg의 두 개의 용량의 mAb1로 구성된 로딩 투약에 이은, 4주마다(Q4W) 투여되는, 600 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 25a의 2 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 300 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 4주마다(Q4W) 투여되는, 600 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 25a의 3 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 150 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 4주마다(Q4W) 투여되는, 600 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 150 mg의 용량은 1 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 대안적으로는 ½배 희석된 2 mL의 완제 의약품(75 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
추가 구현예에서(도 25b의 1 참조), mAb1 치료 요법은 1주일 간격으로 투여된, 600 mg의 두 개의 용량의 mAb1로 구성된 로딩 투약에 이은, 매주(Q1W) 투여되는, 300 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 25b의 2 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 300 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 매주(Q1W) 투여되는, 300 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
또 다른 구현예에서(도 25b의 3 참조), mAb1 치료 요법은 600 mg의 제1 용량의 mAb1 및 150 mg의 제2 용량의 mAb1(이때, 제2 용량은 제1 용량 1주일 후에 투여됨)로 구성된 로딩 투약에 이은, 매주(Q1W) 투여되는, 300 mg의 용량의 mAb1로 구성된 유지 투약으로 구성된다. 150 mg의 용량은 1 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 대안적으로는 ½배 희석된 2 mL의 완제 의약품(75 mg/mL)의 1회 주사를 통해, 바람직하게는 피하로 투여된다. 300 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 1회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다. 600 mg의 용량은 2 mL의 완제 의약품(150 mg/mL)의 2회 주사를 통해 바람직하게는 피하로 투여된다.
로딩 투약 파트 및 유지 투약 파트로 나누어진 치료 요법의 장점은 이것이 최적의 치료 효과를 가능하게 한다는 것이다.
본 명세서에 기술된 모든 치료 요법의 경우, 로딩 투약의 목적은 표적 포화(40 μg/mL에 가까운 혈장 농도)를 달성하여 치료 효과의 개시를 달성하는 것이고, 유지 투약의 목적은 효능을 유지하는 것이다.
실시예 5. 인간 안전성 및 내약성 데이터
mAb1의 안전성, 내약성, PK 및 PD 활성은 건강한 피험자 및 류마티스 관절염(RA) 환자에서 진행 중인 mAb1의 무작위, 이중 맹검, 위약 대조, 단일 상승 용량 연구에서 평가 중이다. 총 48명의 피험자가 등록되었다: 최대 3 mg/kg IV 또는 S.C.의 단일 용량의 mAb1을 받은 36명의 건강한 피험자 및 12명의 RA 환자(RA 환자 중 6명은 10 mg/kg IV의 단일 용량의 mAb1을 받음). 전체적으로, 건강한 지원자에서 최대 3mg/kg mAb1의 단일 용량 및 RA 환자에서 단일의 10 mg/kg의 mAb1은 안전하였고, 내약성이 우수하였으며, 의심되는 중증 유해 사례(SAE)는 발생하지 않았다. 30 mg/kg IV 용량의 조사는 RA 환자에서 진행 중이다. 이 연구는 여전히 진행 중이므로, 모든 임상 데이터는 사실상 예비적이며 RA 환자에서 최대 10 mg/kg의 용량으로 수행된 중간 분석을 기반으로 한다.
실시예 6. 인간 약동학 및 약력학(건강한 지원자 및 류마티스 관절염 환자)
건강한 피험자뿐만 아니라 류마티스 관절염 환자에서도, 단일 IV 또는 SC 투여 후, CFZ533 PK 프로파일은, 비 선형 PK 프로파일을 초래하고 CD40 수용체 점유율이 약 90% 미만으로 감소될 때 더 빠른 청소율을 초래하는 표적 매개 배치와 일치하였다.
중국인 피험자들의 PK 프로파일의 일부 개인간 변동성에도 불구하고, 중국인 피험자에서 CFZ533의 배치는 일반적으로 비 중국인 피험자와 유사하였고, 표적 결합도 3 mg/kg IV의 CFZ533 (약 4주) 후에 유사하였다. 이 용량 수준에서, 유사한 PK/PD 프로파일은 혈장에서의 유리 CFZ533 프로파일, 유리 CD40 및 총 CD40을 측정하는 말초 B 세포에서의 CD40 점유, 및 혈장에서의 총 sCD40 농도를 통해 증명되었다.
건강한 피험자에서 SC 투여 후, CFZ533은 인간에서 전형적인 IgG1 항체에 대해 예상되는 바와 같이 빠르게 흡수 및 분배되었다. 3 mg/kg SC에서, CFZ533은 일반적으로 용량 후 3일(2명의 피험자의 경우 7일)에 정점에 도달하였으며, 투약 1주일 후에 혈장 농도는 IV 후와 동일한 범위에 있었다. 3 mg/kg SC에서, 표적 결합의 지속기간은 또한 약 4주였다.
평균 용량 전과 비교하여 전혈 B 세포 상의 유리 CD40 및 혈장에서의 총 sCD40 프로파일에 의해 측정 시, 10 mg/kg IV의 류마티스 관절염 환자에서, 완전 CD 점유가 일반적으로 8주 동안 유지되었다. 30 mg/kg IV에서, PK 및 혈장에서의 총 sCD40 프로파일은 16주의 표적 결합의 지속기간과 일치한다.
건강한 피험자에서 CFZ533에 의한 CD40 결합은 일반적으로, B 세포 상의 유리 CD40에 의해 측정 시 B 세포에서의 CD40 점유를 추적하는 말초 B 세포 상의 총 CD40의 약 50%의 감소를 초래하였다. 이는 CFZ533에 결합할 때 막 결합 CD40의 내재화 및/또는 탈락(shedding) 때문일 가능성이 있다. 류마티스 관절염 환자에서 말초 B 세포 상의 총 CD40의 감소는 확인되지 않았다.
혈장 내 CFZ533과 전혈 B 세포 상의 CD40 점유(B 세포 상의 유리 CD40) 사이의 관계가 정의되었고, 0.3 내지 0.4 μg/mL의 CFZ533 농도는 전혈 B 세포 상의 완전(90% 이상으로 정의됨) CD40 점유와 관련이 있었다.
더욱 일반적으로, CFZ533에 대해 비 특이적 및 특이적 제거 경로가 확인되었다. FcRn 수용체에 의해 매개되는 비 특이적 및 고용량 경로는 일반적으로 내인성 IgG에 의해 공유된다. CFZ533의 특이적 표적 매개 배치는 부분적으로 내재화(이후의 리소좀 분해 수반)되고/되거나 막으로부터 탈락되는 CFZ533-CD40 복합체의 형성을 초래하였다. 표적 매개 과정은 CFZ533의 포화 가능한, 비 선형의 배치를 초래하였다. CFZ533-CD40 복합체의 형성은 용량/농도 의존적이고, 고농도의 CFZ533에서 포화가 발생하였다.
종합하면, CFZ533의 배치는 CFZ533의 전체 청소로 향하는 특이적(표적 매개) 및 비 특이적 제거 경로의 상대적 기여에 의존한다. CFZ533 농도가 표적의 농도보다 낮을 때 비 선형적 PK 거동이 관찰되었으며, CD40 수용체가 포화되는 더 높은 농도에서는, 비 특이적 경로가 우세하며, CFZ533의 제거가 선형적이었다.
막 결합 수용체를 표적으로 하고 표적 매개 배치를 나타내는 전형적인 IgG1 항체에 대해 예상한 바와 같이, CFZ533의 노출 정도(AUClast)는 용량 증가보다 더 증가하였다(초과 비례). 결과적으로, 이는 고용량에서의 CFZ533의 분배 부피의 감소 및 청소율과 관련이 있을 것으로 예상된다.
1 mg/kg IV의 CFZ533(1주 완전 CD40 점유)의 한 피험자는 CFZ533 혈장 농도가 정량 한계보다 낮고 조직에서 임의의 CD40 경로 관련 효과를 차단하기에 결정적으로 너무 낮아진 6주 후에 검출된 CFZ533에 대한 특이적 항체를 발달시켰다. 이 피험자에서 항-약물 항체(ADA)의 존재는 노출을 손상시키지 않았으며, 면역 관련 안전성 신호와 관련이 없었다. 이는 본 연구에서 2%의 ADA 발생률에 해당한다.
CFZ533의 3 mg/kg(IV 및 SC)의 단일 용량은 (약 3 내지 4주 동안) 완전(90% 이상) 수용체 점유에 상응하는 CFZ533 농도에서 제1 KLH 면역화에 대한 항-KLH 반응을 일시적으로 억제하였다. 항-KLH 1차 반응은 CFZ533 농도 및 수반되는 수용체 점유가 감소함에 따라 모든 피험자에서 검출되었다. 모든 피험자는 제2 KLH 면역화(수용체 점유의 손실이 예상된 후 투여됨)에 대한 회상 반응을 나타낼 수 있었다.
데이터는 CFZ533에 의한 CD40 결합이 인간 전혈에서 재조합 인간 CD154(rCD154) 매개성 B 세포 활성화를 방지하였음을 시사한다. B 세포에서의 rCD154 유도성 CD69 발현은 일반적으로 B 세포에서의 완전 CD40 점유에 상응하는 기간 동안 억제되었다. CD40 점유가 불완전하였을 때, rCD154의 기능적 활성이 회복되었다.
면역표현형 데이터에 미치는 CFZ533의 영향에 대한 증거는 없었다.
실시예 7. 1차 쇼그렌 증후군 환자에서 CFZ533의 안전성, 내약성, 약동학 및 예비 효능을 평가하기 위한 다기관, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 평행군 연구
쇼그렌 증후군의 치료에서 침묵화된 ADCC 활성을 갖는 인간, 항-CD40 단클론 항체를 사용하는 것의 적합성을 평가하기 위하여, 본 명세서에서 mAb1라고도 지칭되는 항체 CFZ533을 사용하여 임상시험 연구를 설계하고 수행하였다.
쇼그렌 증후군(SS)은 1차 SS일 수 있거나, 종종 전신 홍반성 루푸스(SLE) 또는 류마티스 관절염(RA)과 같은 기타 자가면역 질환과 관련이 있다. 이 경우, SS는 2차 SS라 한다. 2차 쇼그렌 증후군 환자는 1차 질환(예를 들어, RA 또는 SLE) 및 이에 수반되는 치료가 1차 SS 평가를 상당히 방해하므로 CFZ533 임상시험에서 제외되었다. 예를 들어, RA에서의 관절 병발/손상이 ESSDAI의 관절통 도메인을 해석 불가능하게 만들거나, 또는 항-TNF 치료가 CFZ533의 사용과 맞지 않는다. 그러나 2차 SS의 발병은 CD40-CD154 경로의 비정상적인 활성화에 의해 매개되는 자가항체 형성 및 배 중심 형성과 같은 pSS에서와 동일한 병리생물학적 사건에 의해 유발되므로, CFZ533를 이용한 치료는 2차 SS에서 유익할 것으로 예상되어, 전용 임상시험을 정당화한다.
1차 쇼그렌 증후군(pSS)은 외분비선 및 분비선 기능장애에서 이소성 배 중심의 형성을 특징으로 하는 전신성, 진행성 자가면역 질환이다. 환자의 일부는 또한 선외 발현을 발달시킨다. CFZ533은 pSS 발병에 연루된 배 중심 반응 및 기타 면역 매개 기능에 필수적인 공동 자극 경로 수용체인 CD40을 강력하게, 선택적으로 차단하는 신규한 단클론 항체이다. pSS 환자에서 CFZ533의 안전성, 내약성 및 효능을 평가하기 위하여 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 다기관, 부분 교차 IIa상 개념 증명(PoC) 연구를 수행하였다.
여러 증거는 CD40-CD154 경로에 의해 유도되거나 또는 이와 밀접하게 관련된 질환 병리가 pSS에서 필수적임을 시사한다. pSS의 전형적인 진단상의 특징은 (18 내지 59%의 환자에서 관찰된) 타액선에서의 배 중심 유사 구조물의 형성 및 자가항체와 같은 B 세포 과다반응성을 포함한다(문헌[
Figure pct00008
et al 2012]). pSS 병변에서는, 활성화된 T 세포가 우세하고, B 세포 과다활성, Ig 분비를 유발할 수 있으며, 선의 파괴를 촉진할 수 있다(문헌[Manganelli and Fietta 2003]). 또한, 이들 환자의 타액선에서 T 및 B 세포 침윤물은 CD40 및 CD154의 상향 조절을 나타낸다. CD40-CD154 매개성 조직 염증은 또한 pSS 발병에 기여할 수 있다.
나아가, CD40-CD154 매개성 조직 염증은 또한 pSS 발병에 기여할 수 있다. pSS 환자로부터 유래된 상피 세포주는 구성적으로 상향 조절된 표면 CD40을 갖는다(문헌[Dimitriou et al 2002]). 상승된 sCD154 농도와 함께 혈소판 및 백혈구로부터 유래된 증가된 수준의 미세입자가 pSS 혈청에서 보고된 바 았다(문헌[Sellam et al 2009]).
1. SS에서 개념 증명 연구 CCFZ533X2203의 설계
이는 다음의 코호트 1 및 2에서 다중 용량의 CFZ533의 안전성, 내약성, 약동학 및 예비적 임상 효능을 평가하기 위한, 이중 맹검에 이은, 공개라벨, 무작위 배정, 위약 대조, 평행군, 비 확증적 연구이다:
※ 코호트 1: 이중 맹검 및 위약 대조 방식에 이은 공개라벨 치료에서, pSS 환자에서 피하 투여된 3 mg/kg의 CFZ533;
※ 코호트 2: 이중 맹검 및 위약 대조 방식에 이은 공개라벨 치료에서, pSS 환자에서 정맥 내 주입에 의해 투여된 10 mg/kg의 CFZ533.
이들 코호트 다음에는 코호트 3의 공개라벨, 무작위 배정, 평행군, 비 확증적 파트가 있었다.
※ 코호트 3: 치료 아암 1에서, CFZ533은 4차례의 매주 600 mg s.c.(로딩 요법)에 이어, 9차례의 매주 300 mg s.c.(연구 제29일에 시작되는 유지 요법)로 제공되었다.
치료 아암 2에서, 로딩 요법은 (연구 제1일의) 10 mg/kg의 단일 I.v. 용량의 CFZ533였고, 이어서 12차례의 매주 300 mg s.c.(연구 제8일에 시작되는 유지 요법)가 있었다.
코호트 1 및 2에서, 경구 코르티코스테로이드의 기준선 섭취(예/아니오)에 의해 무작위 배정이 계층화될 것이다. 코호트 3에는 계층화가 없을 것이다.
이 연구는 코호트 1과 코호트 2의 경우 3개의 기간을 포함한다:
1. 위약 대조 기간(제1주, 제1일부터 제13주, 제85일의 용량 전 평가 완료까지)(이 기간 동안 pSS를 치료하는 데 필수적인 표준치료요법(예를 들어, 저용량 코르티코스테로이드) 외에 CFZ533 또는 위약의 4개 용량이 투여되었다);
2. 공개라벨 기간(제13주, 제85일의 투약으로부터 제25주, 제169일의 평가 완료까지)(이때, 모든 환자는 공개라벨 CFZ533 치료의 4개 용량을 받았다), 및
3. 추적조사 기간(제25주 내지 제32주)(이때, 환자는 연구 약물 없이 추적조사된다).
도 1은 코호트 1 및 2의 연구 설계를 개략적으로 나타낸 것이다.
코호트 3은 2개의 기간을 포함한다:
1. 공개라벨 치료 기간(제1주, 제1일의 투약으로부터 제13주, 제85일의 최종 용량 및 평가 완료까지),
2. 추적조사 기간(최종 용량 완료 후 제13주부터 제21주, 제141일까지)(이때, 환자는 연구 약물 없이 8주 동안 추적조사된다).
공개라벨 치료 기간에서, 치료 아암 1 투약은 4주 동안 매주 1회 CFZ533 600 mg s.c로 시작된다; 치료 아암 2에서, 투약은 제1일에 CFZ533 10 mg/kg i.v.로 시작된다.
그 후, 투약은 각각 4주 동안(치료 아암 1) 및 9주 동안(치료 아암 2) 매주 1회 CFZ533 300 mg s.c.로 계속된다.
도 2는 코호트 3의 연구 설계를 개략적으로 나타낸 것이다.
코호트 1
이 코호트는 대략 12명의 환자를 무작위 배정하였다. 각 환자에 대해, 제-28일부터 제-2일까지의 스크리닝 기간이 있었다. 스크리닝 시 자격 기준을 충족한 환자는 기준선 평가 대상으로 허가되었다. 제1일의 치료 전 제-1일에 평가를 완료할 수 있도록 제-6일부터 기준선 평가가 시작되었다.
투약 및 자격 기준 충족 전에 모든 기준선의 안전성 평가 결과가 이용 가능하였다. 적격 환자는 제1일(제1주)에 위약 대조 기간에 들어갔고, CFZ533 또는 위약을 이용한 치료를 받도록 2:1 비율로 무작위 배정되었다. 제1일에, 3 mg/kg의 용량의 CFZ533 또는 위약을 피하 주사(s.c.)로 투여한 후, 최대 6시간 동안 PK, 약력학(PD) 및 안전성 평가를 수행하였다. 안전성 문제가 없는 경우, 모든 평가를 완료한 후, 같은 날 현장에서 환자를 퇴원시켰다.
환자는 각각 제15일(제3주), 제29일(제5주) 및 제57일(제9주)에 (제1일에 받은 것과 동일한) 세 개의 s.c. 용량의 CFZ533 또는 위약을 받기 위하여 연구 기관으로 돌아왔다. 이러한 방문에서 안전성 및 효능 평가를 수행하고, PK 및 바이오마커 샘플을 수집하였다.
제85일(제13주)에, 위약 대조 기간의 종료에 대한 평가인 안전성 및 기타 평가 후, 모든 환자는 공개라벨 기간에 들어가 3 mg/kg의 공개라벨 s.c. 용량의 CFZ533을 받았다. 이어서, 각각 제99일(제15주), 제113일(제17주) 및 제141일(제21주)에 세 개의 공개라벨 s.c. 용량의 CFZ533(각각 3 mg/kg)을 받았다. 이러한 방문에서 안전성 및 효능 평가를 수행하고, PK 및 바이오마커 샘플을 수집하였다. 대조 기간의 맹검은 시험자와 환자에 대해 연구 종료 시까지 유지되었다.
제169일(제25주)에, 환자는 공개라벨 기간의 종료에 대한 평가를 받았고, 연구 약물이 투여되지 않은 채 추적조사 기간에 들어갔다. 이 기간 동안 환자는 안전성 모니터링을 위하여 연구 기관으로 돌아왔다.
연구 방문 종료는 제225일(제33주)에 이루어졌으며, 이는 연구 완료 평가에 이은 연구로부터의 해제를 포함하였다.
코호트 2
대략 12명의 피험자가 코호트 1에 등록되었을 때, 코호트 2는 약 30명의 환자를 무작위 배정하여 약 24명의 환자가 12주 치료를 완료하도록 등록을 시작하였다. 코호트 2에 대한 연구 설계는, 10 mg/kg의 CFZ533의 다중 정맥 투약 후, 주입 종료 후의 최대 2시간 동안의 PK, 약력학(PD) 및 안전성 평가를 포함한 투약 요법을 제외하고는 코호트 1과 동일하였다. 또한, 모든 투약 방문마다 체중을 측정하여 피험자의 실제 체중에 따라 약물 투여량을 계산하였다(코호트 1에서는, 피험자의 기준선 체중이 연구 전체에 걸쳐 사용되었다).
코호트 3
코호트 3은 약 24명의 환자를 무작위 배정하여 약 20명의 환자(치료 아암 1에서 10명, 치료 아암 2에서 10명)가 12주 치료를 완료하도록 한다.
치료가 연구 중에 일정한 수준으로 유지된다면 환자는 그들의 표준치료요법을 유지할 수 있다.
안전성 평가는 신체 검사, ECG, 활력 징후, 표준 임상 실험실 평가(혈액학, 혈액 화학, 소변 검사, 임신 검사, 혈액 응고), 유해 사례 및 중증 유해 사례 모니터링을 포함한다.
모든 s.c. 주사 및 i.v. 주입은 모니터링 시설에서 이루어진다. 환자는 코호트 1에서 s.c. 주사 후 적어도 6시간 동안, 코호트 2에서 i.v. 주입의 완료 후 2시간 동안 면밀히 모니터링된다. 코호트 3에서, 환자는 i.v. 주입 완료 후 적어도 1시간 및 s.c 주사 후 30분 동안, 또는 활력 징후, 및 주사 반응의 발달을 포함한 유해 사례의 징후 또는 증상에 대한 시험자의 재량에 따라 더 오랫동안 모니터링된다. 약동학, 약력학 및 안전성 평가는 코호트 1에서 s.c. 주사 후 최대 6시간 동안, 코호트 2에서 i.v. 주입의 완료 후 2시간 동안, 또는 코호트 3에서 i.v. 주입의 완료 후 1시간 및 s.c. 주사 후 30분 동안 이루어졌다. 안전성 평가에 대한 만족스러운 검토 후, 시험자의 재량에 따라 피험자들은 이러한 평가 후에 해제되었다.
PK 평가는 혈장 내 유리 CFZ533의 측정을 포함한다.
동시 PD 마커: 말초 혈액 B 세포에서의 CD40 포화(B 세포 상의 유리 CD40 및 총 CD40, 코호트 1 및 2만), 총 가용성 CD40 및 총 가용성 CD154(선택적, 코호트 1 및 2만)가 PK/PD 모델링을 허용하기 위해 환자의 혈장에서 측정된다. 또한, 자가항체 및 일부 탐색적 바이오마커가 조사된다. 항-CFZ533 항체의 준 정량적 분석을 통해 면역원성이 평가된다.
코호트 1 및 코호트 2에서, 선택적인 구순 생검이 기준선 및 위약 대조 기간의 끝(제13주, 제85일)에 수행된다.
코호트 1에서 12주 치료 기간을 완료한 약 12명의 환자를 포함하여 중간 분석(1차 IA)을 수행한다. 이들 환자에 대해, 주요 안전성 및 내약성 데이터 및 예비 효능이 평가된다.
일반적으로 현재의 임상 연구, 임상시험 의뢰자의 임상 개발 프로젝트에 관한 의사 결정을 뒷받침하기 위하여 또는 안전성 문제가 있을 경우, 추가의 안전성 및 효능 중간 분석이 수행된다.
2. 연구 설계의 근거
코호트 1 및 2
두 개의 상이한 용량(3 mg/kg s.c. 및 10 mg/kg i.v.)의 CFZ533을 두 개의 개별 코호트에서 평가하였다.
pSS 환자에서의 이러한 최초의, 탐색적 연구에서 안전성 및 임상 효능 데이터를 보고하는 데 있어서 잠재적 편향을 제거하기 위하여 무작위 배정, 위약 대조, 이중 맹검 접근법이 사용되었다.
위약에 대한 노출을 최소화하고 CFZ533에 대한 더 많은 데이터를 수집하기 위해 환자를 2:1 비율로 CFZ533 또는 위약에 무작위로 배정하였다. 경구 코르티코스테로이드의 기준선 섭취에서 활성 및 위약 아암 간의 불균형을 제한하기 위하여 계층화 무작위 배정을 수행하였다.
공개라벨 기간은 위약 대조 기간에 위약을 투여 받은 환자를 포함한 모든 환자에게 CFZ533을 투여한다. 이것은 이들 환자에게 잠재적인 치료 이익을 제공하고, pSS 환자에서 CFZ533에 대한 추가의 안전성 및 효능 데이터를 수집한다. 공개라벨 기간 후, 환자는 추적조사 기간에 들어갔는데, 이 기간을 위하여 안전성을 모니터링하고 반응 지속기간을 조사하기에 충분한 시간을 허용하기 위해 8주의 지속기간(CFZ533으로의 최종 투약 후 12주)이 선택되었다.
안전성 외에도, 유럽류마티스학회(European League Against Rheumatism, EULAR)의 쇼그렌 증후군 질병 활성 지수(Sjogren's Syndrome Disease Activity Index, ESSDAI)에 의해 추정된 효능이 연구의 주요 종점으로 선택되었다. ESSDAI 측정 기준은 당업자에게 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Seror et al. 2011a] 참조). ESSDAI는 리툭시맙에 대한 무작위 대조 시험의 후향적 분석에서 반응하는 것으로 나타났으며, 리툭시맙 치료의 효능을 평가하기 위한 민감한 도구로 제안되었다(문헌[Moerman et al 2014]). 저자들은 제12주와 제24주에 위약군에 비해 리툭시맙군에서 유의하게 더 낮은 ESSDAI를 보고하여, 이 소규모 연구에서 질병 활성을 감소시키는 데 있어서의 약간의 효과를 증명하였다.
유사하게, EULAR 쇼그렌 증후군 환자 보고 지수(EULAR Sjogren's Syndrome Patient Reported Index, ESSPRI)가 연구에 사용된다(예를 들어, 문헌[Seror et al. 2011b] 참조).
코호트 3
이 코호트의 주요 목적으로 인해, 위약 대조가 필요하지 않으며, 공개라벨 처리가 정당화된다. 코호트 3에서, 코호트 2(10 mg/kg i.v. 요법)에서 관찰된 최저 농도와 유사한 수준으로 혈장 내 CFZ533 농도에 대한 정상 상태 조건을 확립하기 위해 2개의 로딩 요법(치료 아암 1에서의 다중 s.c. 용량, 또는 치료 아암 2에서의 단일 i.v. 투여)에 이은 유지 요법(다중 s.c. 용량, 두 아암 모두)이 12주(제1일부터 제85일까지)로 설정되는지를 평가하기 위해 2개의 치료 아암이 구현된다.
추적조사 기간은 8주(제85일부터 제141일까지)로 설정되어,
(i) 표적이 완전히 포화된 조건(느린 제거) 및 불완전한 CD40 포화(빠른 제거) 하에서의 CFZ533의 제거를 추적하고,
(ii) 12주의 치료 후 CFZ533에 대한 표적 매개 제거 경로의 능력을 특성화한다.
3. 용량/요법의 근거, 치료 기간
인간 1차 쇼그렌 증후군에서는 항-CD40 차단제를 이용한 이전의 경험이 없다. 그러나 증거는 영향 받은 개인의 타액선에서의 림프양 응집체 및 배 중심 유사 구조물의 존재, 질환 특이적 자가항체 및 CD40 및 이의 리간드의 선상 발현을 포함한 이 질환의 병리생리학에서 CD40 의존성 면역 과정의 관여를 지적한다. 전임상 및 FIM(first-in-man) 연구 결과는 완전 CD40 수용체 점유가 실질 CD40 관련 기능의 차단뿐만 아니라 T 세포 의존적 B 세포 기능의 완전한 억제에 필요하고, 최대 치료 이익을 달성하는 데 필요하리라는 점을 시사한다. 예를 들어, 26주의 독성 연구 결과에 따르면, 매주 1 mg/kg의 CFZ533에서 말초 B 세포에서의 완전 CD40 점유가 측정되었지만, 일부 동물(3/6)에서 불완전한 약리학적 효과가 관찰되어, 배 중심의 부분적인 감소로서 나타났다.
이것은 CD40-CD154 상호 작용 및 조직에서의 후속 신호전달 사건의 완전한 억제에 (매주) 1 mg/kg을 초과하는 용량의 CFZ533이 필요할 것임을 나타냈다.
코호트 1(피하, 3 mg/kg)
건강한 지원자에서 시험한 CFZ533의 가장 높은 피하 용량은 현재 3 mg/kg이며, 건강한 지원자에게 단일 용량으로서 안전하고 내약성이 우수한 것으로 증명되었다. 1 및 3 mg/kg i.v.의 용량은 말초 혈액 B 세포에서 각각 1주 및 4주의 완전(90% 초과로 정의됨) CD40 점유와 관련이 있었다. 또한, 3 mg/kg의 CFZ533 i.v.를 받은 건강한 지원자로부터의 PBMC를 사용하여 생체 외 CD154 유도성 CD69 발현이 대략 4주 동안 억제되었다. CD40 점유율은 3 mg/kg의 단일 피하 용량의 CFZ533의 4주 후에 90%였다(평균 n = 6; 범위 73 내지 97%).
종합하여, 3 mg/kg s.c.가 현재 코호트 1을 위해 선택되었는데, 그 이유는 이 투약이 건강한 지원자에게 안전하고 내약성이 우수하였고, 원하는 약리학적 및 약력학적 효과를 초래할 수 있었기 때문이다.
시작 시 2주의 투약 간격은 피하 투여 후 조직에서 CD40-CD154 상호 작용의 완전한 억제뿐만 아니라 말초 B 세포에서의 완전 CD40 포화를 보장하기 위한 것이었다. 12주의 치료 기간 말까지, 1차 종점 및 기타 주요 효능 및 바이오마커 판독치의 임상적으로 의미 있는 변화가 발생할 것으로 예상되었다. 단일 주기의 리툭시맙을 이용한 공개된 결과에 기초하여, pSS 환자에서 유의한 임상 반응이 제5주에서 조기에 검출될 수 있고, 최대 효과가 제12주에 나타날 수 있다(문헌[Meijer et al 2010]). 추가의 12주의 공개라벨 연장기간 동안, CFZ533의 장기 효능 및 안전성에 관한 추가 데이터가 수집되었다.
코호트 2(정맥 내, 10 mg/kg)
더 많은 CD40 발현이 일어날 수 있는 조건에서, 표적 조직에서 완전하고 지속적인 CD40 경로 차단을 보장하기 위해, 치료 기간 전체에 걸쳐 보다 높은 혈장 노출을 제공하기 위한 10 mg/kg i.v. 요법이 도입되었다. 이 요법은 인간에서의 안전성 데이터, 전임상 독성학 연구로부터의 적절한 안전성 비율, 비 인간 영장류의 조직에서 관련 PD 효과 및 최근에 ASKP1240으로부터 공개된 데이터에 의해 뒷받침된다.
인간에서 확인된 안전성 및 내약성: 단일 상승 용량(0.03 내지 30 mg/kg)의 CFZ533 i.v. 및 3 mg/kg s.c.를 시험하는 제1상 연구(CCFZ533X2101)가 완료되었으며, 시험한 최고 용량(10 mg/kg i.v.)까지 주요 안전성 문제를 나타내지 않았다. 지금까지의 임상 경험을 기초로, 10 mg/kg i.v. 투약 요법은 pSS 환자에서 안전하고 내약성이 있을 것으로 예상된다.
전임상 독성학 연구로부터의 적절한 안전역: 현재까지의 GLP 독성학 연구는 (i) 레수스 원숭이에서 10, 50 및 150 mg/kg(s.c. 및 i.v.)으로 13주 동안 매주 s.c. 투약, 및 (ii) 시노몰구스 원숭이에서 1, 50 및 150 mg/kg으로 26주 동안 매주 s.c. 투약으로 CFZ533을 시험하였다. 이들 연구는 12주 또는 24주 동안 제안된 정맥 내 요법에서 CFZ533의 사용을 막을 주요한 발견을 밝혀내지 못했다. 시노몰구스 원숭이에서의 26주의 독성 연구에서, 정상 상태에서, 150 mg/kg(NOAEL)으로의 매주 투약 후 8300 μg/mL(Cav,ss)의 평균 농도가 얻어졌다. 1개월의 기간에 걸친 상응하는 전신 노출(AUC, 정상 상태 조건)은 232400 일*μg/mL일 것이며, 이는 첫 달에 걸쳐 예측된 전신 혈장 노출(AUC0-28일)보다 약 57배 더 크다(도 3). 26주의 독성학 연구에서, NOAEL에서, Cmax,ss는 9495 μg/mL이었으며, 이는 pSS 환자에서 제안된 정맥 내 요법에 대해 예상되는 Cmax(약 400 μg/mL)보다 24배 더 크다(도 3).
도 3은 10 mg/kg으로 정맥 내 제공된 CFZ533에 대한 예측된 평균 혈장 농도-시간 프로파일을 보여준다(코호트 2). 평균 PK 프로파일을 연구 제1일, 제15일, 제29일 및 제57일(위약 대조 기간) 및 연구 제85일, 제99일, 제113일 및 제141일(공개라벨 기간)에 제공된 10 mg/kg i.v의 CFZ533에 대해 시뮬레이션하였다. 건강한 피험자에서 FIH 연구 CCFZ533X2101로부터의 코호트 5(3 mg/kg i.v.) PK 데이터의 예비 모델 기반의 모집단 분석으로부터 얻은 파라미터를 사용하여 미카엘리스-멘텐(Michaelis-Menten) 모델을 적용하였다. 항-CD40 차단제를 이용한 이전의 경험은 인간 pSS에서 존재하지 않았으며, 건강한 피험자와 pSS 환자 사이의 CD40(발현, 교체)의 생물학에서의 잠재적인 차이는 전혀 알려지지 않았다. 제안된 i.v. 요법은 전체 치료 기간에 걸쳐 40 μg/mL 초과의 지속된 혈장 농도를 제공할 것으로 예상되어, pSS 환자의 표적 조직에서 증가된 CD40 발현을 예상하였다. 40 μg/mL에서의 가로 점선은 혈장 농도를 나타내며, 이를 넘어설 경우, 표적 조직에서 완전 CD40 점유 및 경로 차단이 예상된다(시노몰구스 원숭이 - 용량군 1 mg/kg에서 26주의 독성학 연구로부터의 PD 데이터에 기초함). 첫 달 동안 예상되는 전신 노출(더 높은 투여 빈도)은 4087 일*μg/mL(시노몰구스 - 매주 150 mg/kg의 NOAEL에서의 26주의 독성학 연구에서 정상 상태에서 한 달 동안 관찰된 전신 혈장 노출보다 57배 낮음), 예상된 Cmax는 약 400 μg/mL이다.
비 인간 영장류의 조직에서의 관련 PD 효과: 26주의 독성학 연구(1 mg/kg 용량군)에서 평균 정상 상태 혈장 농도가 38 μg/mL 이상인 동물은 림프절의 피질 B 세포 영역에서 배 중심이 완전히 억제되었다. 10 mg/kg i.v. 요법은 전체 치료 기간에 걸쳐(위약 대조 및 공개라벨, 도 3 참조) 40 μg/mL 초과의 지속된 혈장 농도를 제공할 것으로 예상되어, pSS 환자에서 더 높은 CD40 발현 및 표적 포화 상실로 인한 표적 조직에서의 불완전한 PD 효과를 예상하였다.
CD40을 차단하는 단클론 항체인 ASKP1240의 데이터: 고형 기관 이식에서 Astellas의 항-CD40 항체 ASKP1240의 개시된 PK/효능 데이터의 최근 분석(문헌[Harland et al 2015])은, 조직에서 효율적인 표적 매개 항체 청소가 표적 조직에서 표적 발현의 현저한 증가의 결과로서 CD40 차단 손실 및 아마도 효능 상실을 초래할 수 있음을 보여주었다. 제안된 정맥 내 요법은 더 많은 CD40 발현이 일어날 수 있는 조건에서, 전체 치료 기간에 걸쳐, CD40 제거 경로를 포화시키는 것을 목표로 한다. 사내 데이터는 1차 쇼그렌 증후군 환자에서 얻은 조직에서 CD40의 과발현을 시사하며(보관 중 데이터), 본래의 피하 요법은 이러한 조건에서 표적 조직에서 완전하고 지속적인 CD40 경로 차단을 제공하지 않을 수 있다.
코호트 3
코호트 1 및 2의 결과에 기초하여, pSS 환자에서의 효율적인 투약 요법은 조기의 완전 CD40 포화 및 최소 표적 매개 배치(TMDD)를 제공하는 로딩 요법(i.v. 또는 s.c.), 및 이어지는 s.c. 유지 요법을 필요로 하는 것으로 생각되었다.
코호트 3에서, 치료 아암 1 및 치료 아암 2에서의 용량/요법은 로딩 요법(i.v. 또는 s.c.)에 이은 s.c. 유지 요법이 코호트 2에서 시험한 i.v. 요법과 유사한 정상 상태 혈장 농도를 전달할 수 있는지 및 s.c. 경로를 통한 CFZ533의 표적 매개 배치를 극복할 수 있는 능력을 가졌는지를 평가하기 위해 설정된다.
치료 아암 1: CFZ533은 4차례의 매주의 600 mg s.c.(1 mL의 4회 주사)(로딩)에 이어, 9차례의 매주의 300 mg s.c.(1 mL의 2회 주사)(유지; 연구 제29일에 시작됨)로 제공된다. 로딩기 중에, CD40 풀의 포화 속도 및 s.c 용량의 생체이용률은 알 수 없다. 그럼에도 불구하고, 첫 달(제29일까지)에 걸친 2700 mg의 누적 용량은 TMDD를 극복하는 능력을 가진 것으로 예상된다(코호트 1 및 코호트 2에서 제29일에서의 누적 용량은 각각 630 및 2100 mg이었다). 건강한 지원자의 경우 표적 포화가 달성될 때, 피하 용량의 생체이용률이 75% 이상일 것으로 예상되기 때문에, 매주 600 mg의 로딩 요법에 이어 매주 300 mg의 유지 요법이 제85일까지 정상 상태 조건을 전달할 것으로 예상된다. 치료 아암 1에서, 코호트 1 및 코호트 2에서의 각각 1050 및 3500 mg과 비교하여, 제85일(최종 용량)까지의 누적 용량은 5100 mg일 것이다.
치료 아암 2: 로딩 요법은 (연구 제1일의) 10 mg/kg의 단일 I.v. 용량의 CFZ533로 구성되며, 이어서 12차례의 매주의 300 mg s.c.(연구 제8일에 시작되는 유지 요법)가 있다. 코호트 2 i.v.에서 이미 증명된 바와 같이, 코호트 3 치료 아암 2에서, 10 mg/kg의 단일 i.v. 용량(제1일)은 연구 제8일(유지 요법의 시작)까지 100 μg/mL 이상의 혈장 농도 및 완전 CD40 포화 조건을 제공할 것으로 예상된다. 치료 아암 2에서 매주의 s.c. 유지 요법이 유의미한 표적 매개 배치 및 최초 통과 효과(s.c. 경로)의 부재 하에 평가된다.
코호트 3에서, 완제 의약품의 각 바이알이 150 mg/mL의 CFZ533으로 제공되므로, 모든 피하 투여(매주 300 mg 또는 600 mg)는 투여를 용이하게 하고 편의성을 개선하기 위하여 일정한 용량(체중에 대해 조정되지 않음)으로 제공된다.
코호트 1(3 mg/kg s.c. 요법)에서, 중간 분석에서, 평균 체중은 70.7 kg(50.0 내지 91.1 kg 범위)이며, 212.2 mg의 일정한 용량(150 내지 273.3 mg 범위)에 상응한다. 코호트 2(10 mg/kg i.v. 요법)에서, 평균 체중은 72.6 kg(50.0 내지 107.2 kg 범위)이며, 726 mg의 일정한 용량(500 내지 1072 mg 범위)에 상응한다. 코호트 3에서, 각 경우에 300 mg 또는 600 mg의 피하 용량은 코호트 1 및 2에서 이미 적용된 용량 범위 내에 있으며, 안전성 및 내약성에 영향을 미치지 않을 것이다. 체중이 CFZ533의 배치에 영향을 미치는 방식은 완전히 특징지어진 것은 아니지만, 두 아암의 경우, 전체 치료 기간에 걸쳐, 평균 최대 혈장 농도(Cmax)가 약 300 μg/mL 미만일 것으로 예상되며(모든 피하 용량이 안전성을 위해 100% 생체이용 가능하고, pSS 환자의 경우 평균 체중을 70 kg으로 가정함), 코호트 2에서 관찰된 평균 Cmax(약 386 μg/mL, 코호트 2 위약 대조 기간 1의 제85일의 제5 용량)를 초과할 것으로 예상되지 않는다. 이것은 NOAEL(매주의 150 mg/kg s.c.)에서 시노몰구스 원숭이에서의 26주의 독성학 연구에서 Cmax 값(평균 9495 μg/mL)보다 32배 더 적을 것이다.
치료 및 추적조사 기간 동안 PK/PD 및 면역원성 종점이 평가되고 있다. 표 2는 연구에 대한 프로토콜 시놉시스를 제공한다.
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
4. 결과
코호트 1 및 2
44명의 환자가 등록하였다: 코호트 1에서 환자 8명이 3 mg/kg s.c.의 CFZ533을, 4명이 위약을 받았고, 코호트 2에서 21명이 10 mg/kg i.v.의 CFZ533을, 11명이 위약을 받았다. PK/PD는 FIH(first in human) 임상시험의 데이터를 기초로 한 CFZ533 10 mg/kg i.v. 코호트에서 예상된 바와 같았으나, CFZ533 노출은 3 mg/kg s.c. 코호트에서 예상했던 것보다 낮게 나타났는데, 이는 CD40 발현이 증진되었을 가능성이 높은 조건에서의 효율적인 표적 매개 배치(최초 통과 효과)로 인한 것일 수 있다. 전반적으로, CFZ533은 안전하고 내약성이 우수하였으며, 대부분의 AE는 경증 또는 중등도였다. 연구 의약품과 관련되지 않은 하나의 중증 AE(세균성 결막염)가 3 mg/kg s.c. 코호트에 있었다. 코호트 1에서, ESSDAI는 위약군 및 3 mg/kg s.c.군 모두에서 대략 12의 평균 기준선 점수로부터 대략 2점 개선되는 것으로 관찰되었고, 따라서 치료 차이의 증거는 없었다(ΔESSDAI = 0.68, 95% CI = -4.71 ~ 6.46). 그러나 코호트 2에서, 평균 기준선으로부터 대략 11의 ESSDAI의 개선은 위약군에서의 1.27과 비교하여 10 mg/kg i.v.군에서 6.35인 것으로 관찰되어, ΔESSDAI = 5.2(95% CI=1.02 ~ 10.58)의 군간 모델링된 차이가 CFZ533 i.v. 치료를 강력하게 선호하였다. ESSPRI, MFI, 의사의 전체 평가 및 환자의 전체 평가와 같은 기타 척도에서의 개선 및 배 중심 관련 혈청 바이오마커 CXCL13의 감소 또한 10 mg/kg i.v. CFZ533군에서 관찰되었다.
도 4는 CFZ533 - 10 mg/kg IV의 약동학을 보여주는 그래프이다. IV 요법은 표적 조직에서 완전 표적 포화 및 완전한 CD40 경로 차단을 제공하였다. 그래프에서 점선으로 표시된 40 μg/mL 초과의 혈장 농도로 예상된 조직에서의 CD40 경로 차단(GC 발달 및 T 의존적 항원 반응의 억제). 12/24주의 치료 후, 일부 pSS 환자에서 CD40 발현이 하향 조절되었다는 징후가 나타남.
도 5는 기준선 조정 ESSDAI 총 점수 - 10 mg/kg IV를 보여준다. 위쪽 선은 위약 iv이고, 아래쪽 선은 CFZ533 10 mg/kg iv이다. 보다시피, 위약 대비 CFZ533군에서 명백한 개선(평균 델타 = 5.6, 제12주)이 있었다.
도 6은 기준선 조정 CXCL13 - 10 mg/kg IV를 보여준다. 위쪽 선은 위약 iv이고, 아래쪽 선은 CFZ533 10 mg/kg iv이다.
도 7은 제13주(12주의 치료 -기간 1 이후)에서의 위약 대비 10 mg/kg CFZ533에 대한 다양한 종점에서의 치료군 차이를 보여준다.
ESSDAI와 의사의 전체 평가(VAS)에 명백한 개선이 있다고 결론내릴 수 있다. 또한, 대부분의 2차 종점의 경향은 CFZ533을 선호한다. ESSDAI 변화는 공개라벨 기간에 유지되었다. 10 mg/kg IV CFZ533으로 전환될 때 CXCL13 수준의 현저한 감소가 동일한 패턴을 따르면서 위약군에서 일부 개선이 있었다.
이 개념 증명 연구에서, 1차 쇼그렌 증후군에서 최초로 차단, 비 고갈 항-CD40 항체를 시험한 결과, CFZ533은 임상적으로 활성인 pSS에서 새로운 치료 양식을 제공할 수 있음을 시사한다.
또한, 도 8은 약력학/표적 결합(10 mg/kg IV)을 보여준다. 혈장 내 총 가용성 CD40 - 치료기간 및 추적조사 기간 동안 지속된 표적 결합. 12/24주의 치료 후, 일부 pSS 환자에서 CD40 발현이 하향 조절되었다는 징후가 나타나고 있다.
도 9는 ESSDAI 총 점수 - 코호트 1: 3 mg/kg SC의 프로파일 플롯을 보여준다.
도 10은 약동학: 유리 CFZ533 - 코호트 1: 3 mg/kg SC를 보여준다. 보다시피, 효율적인 전신 전(pre-systemic) 표적 매개 청소(최초 통과 효과; 상승된 CD40 발현으로 인한 것일 가능성)가 있으며, 조직에서의 CD40 경로 차단은 달성되지 않았다(CFZ533 <40 ug/mL).
도 11은 약력학/표적 결합: 혈장 내 총 가용성 CD40 - 코호트 1: 3 mg/kg SC를 보여준다. 보다시피, CD40 발현이 아마도 증진된 조건에서의 표적 매개 제거로 인하여 표적 결합은 지속되지 않았다.
도 12는 ESSPRI 총 점수 - 코호트 1: 3 mg/kg SC의 프로파일 플롯을 보여준다.
도 13은 ESSPRI 총 점수 - 코호트 2: 10 mg/kg IV의 프로파일 플롯을 보여준다.
도 14는 CXCL13(pg/mL) - 코호트 2: 10 mg/kg IV의 프로파일 플롯을 보여준다.
도 15는 10 mg/kg CFZ533 코호트에서의 ESSDAI 총 점수의 프로파일 플롯을 보여준다.
도 16은 ICAM+ B 세포(%) - 코호트 2: 10 mg/kg IV의 프로파일 플롯을 보여준다.
도 17은 제13주(12주의 치료 -기간 1 이후)에서의 위약 대비 CFZ533에 대한 다양한 종점에서의 치료군 차이를 보여준다.
CD40 신호전달은 자가면역 질환(AD)의 발병과 관련이 있으며, 전신 AD(pSS 포함) 환자는 일반적으로 증가된 CD40 발현 및 증가된 혈청/혈장 sCD40 수준을 나타낸다. 1차 쇼그렌 증후군 환자의 타액선 생검에서, CD40은 림프구, 도관 상피세포 및 내피세포에 의해 구성적으로 발현되었으며(문헌[Dimitriou et al, 2002]), 이는 연구 CCFZ533X2203에서 언급된 기준선에서의 증가된 혈장 수준과 일치한다.
CFZ533은 표적 매개 배치(TMD)의 대상이 되는데, 표적 매개 배치는 (용량에 비해) 상당한 비율의 CFZ533이 CD40에 고친화도로 결합되어 이러한 상호 작용이 CFZ533의 PK 프로파일에 반영되는 과정이다. 이러한 상황에서 pSS 환자를 치료하기에 적절한 약량학을 정의하는 데 고려해야 할 추가 인자에는 신체 내 CD40 발현 수준, CD40 합성 및 분해(표적의 생물학), 및 CFZ533-CD40 결합 동역학이 포함된다.
건강한 지원자, 류마티스 관절염, 1차 쇼그렌 증후군, 신장 이식, 그레이브병 및 중증 근무력증 환자에서 CFZ533에 대한 이전의 임상 경험은, 상승된 CD40 발현이 CFZ533의 높은 제거율(청소율), 표적 결합의 손실 및 CD40이 완전 포화되지 않은 경우, 표적 조직에서의 CD40 경로 차단의 손실과 관련이 있음을 보여주었다. 완전한 CD40 점유 하에서, CFZ533의 전체 청소에 대한 CD40의 기여도는 최소한이고, CFZ533의 배치는 주로 CFZ533이 FcRn 수용체(재활용/회수에 의해 IgG 항상성을 담당하는 고용량 수용체)에 결합한 결과이다.
데이터에서 볼 수 있는 바와 같이, 약동학/약력학 관점 및 용량 발견 전략으로부터, pSS 환자에서의 적절한 약량학은 로딩 요법 및 이어지는 유지 요법을 포함할 가능성이 있다.
CFZ533은 CD40 매개 제거의 대상이 되므로, IV 또는 SC 투여를 통한, 아마도 첫 달 동안의 로딩 요법은 납득이 된다. CD40이 치료 시작 시 완전히 포화되지 않은 경우, 상승된 CD40 발현의 조건에서, CFZ533의 높은 제거율(청소율)은 표적 조직에서의 표적 결합 손실 및 CD40 경로 차단의 손실과 관련이 있을 가능성이 있다. 로딩 기간 후, 그리고 pSS 환자에서 진행 중인 연구 CCFZ533X2203의 PK 데이터를 사용한 예비 모델링에 기초하여, 표적 조직에서 완전한 CD40 경로 차단을 보장하기 위해 SC 유지 요법이 선택될 것이다.
코호트 3
코호트 3에서 기준선으로부터 제12주까지 ESSDAI의 감소는 코호트 2에서와 같이 두 투약 아암에서 유사한 패턴을 보여, CFZ533의 2개의 IV/SC 또는 SC/SC 투약 요법의 효능을 지지하였다. 그러나 코호트 3은 공개라벨이었고 위약 대조군이 없었기 때문에 효능 데이터는 단지 탐색적인 것이며 주의해서 해석해야 한다.
실시예 8. CD40-CD154 경로 상호 작용의 차단은 쇼그렌 증후군의 NOD/ShiLtJ 마우스 모델에서 이소성 배 중심을 억제하고 병리를 억제한다
쇼그렌 증후군(SS)은 타액선염 및 외분비선 기능 장애를 특징으로 하는 만성 자가면역 질환이다. 이것은 RA 다음으로 가장 흔한 류마티스 전신 자가면역 질환 중 하나로, 성인 인구의 유병률이 0.3 내지 0.5%이다. 임상 증상으로는 피로, 건조각막결막염, 구강건조증, 건조한 코, 건조한 질, 건조한 기관, 건조한 피부, 관절통/관절염, 레이노병, 림프절병증, 간질 폐렴, 혈관염(일반적으로 피부), 신장염 및 림프종이 있다.
EULAR 쇼그렌 증후군 질병 활성 지수(ESSDAI)는 1차 SS 환자에서 질병 활성을 측정하도록 설계되었다. ESSDAI는 SS에 대한 HA 승인된 1차 결과 척도이며, 환자 보고 결과(ESSPRI)에 대한 보완책으로 설계되었다.
1차 및 2차 SS 환자에서의 이 질환의 특이적인 증상은 타액선 및 누선의 단핵 세포 침윤물뿐만 아니라 항-Ro 및 La 자가항체의 존재를 포함한다(문헌[Bombardieri et al. 2012]). 일부 예에서, 이러한 T 및 B 림프구의 축적은 GC와 형태학적 및 기능적 유사성을 갖는 이소성 림프양 구조(ectopic lymphoid structure, ELS)라 지칭되는 잘 조직된 구조를 형성한다(문헌[Voulgarelis et al. 2008]). 이전 연구는 SS 환자 및 이 질환의 전임상 모델로부터의 타액선에서의 ELS의 증거 및 진행 중인 친화도 성숙의 증거를 보고하여(문헌[Jacobi et al., 2002]; 문헌[Stott et al., 1998]; 문헌[Bombardieri et al., 2012]), 질환 병리학에서 이들 구조가 원인임을 시사하였다(문헌[Bombardieri et al., 2017]).
GC 생물학에서 CD40-CD154(CD40 리간드)와 같은 경로의 필수 역할을 뒷받침하는 명백한 데이터(문헌[Laman et al., 1996])에도 불구하고, ELS 형성 및 기능에서 다양한 면역 공동 자극 경로의 역할에 대한 발표된 데이터는 상대적으로 거의 없다. 이러한 상호 작용이 ELS 형성 및 기능에서 역할을 수행한다면, 영향 받는 조직에서 확립된 구조물을 제거하고 잠재적으로 기관 기능을 개선하기 위한 경로 차단이 예측될 것이다. 이 가설을 시험하기 위해, 2차 SS의 비 비만 당뇨병(NOD/ShiLtJ) 마우스 모델(문헌[Humphreys-Beher et al., 1996])에서 항-CD154 단클론 항체의 치료적 투여의 효과를 조사하고, 타액선 ELS, 항체 분비 세포 및 분비 세포 기능에 필수적인 단백질인 아쿠아포린-5(AQP-5)의 발현(문헌[Delporte et al., 2006])을 모니터링하였다.
1. 재료 및 방법
타액선에서의 CD40 경로 유전자 서명
치료되지 않은 NOD/ShiLtJ 마우스(Charles River, 독일)로부터의 타액선의 냉동절편을 마이크로어레이에 의한 유전자 발현 프로파일링에 사용하였다. ELS를 풍부하게 하기 위해 레이저 포획 미세절개가 적용되었다.
2차 SS의 NOD/ShiLtJ 마우스 모델
NOD/ShiLtJ 혈통은 SS 유사 질환 외에도 제1형 당뇨병 유사 질환을 발달시키므로 2차 SS의 모델로 간주될 수 있다(문헌[Humphreys-Beher et al., 1994]). 12주령의 암컷 NOD/ShiLtJ를 2개의 치료군에서 무작위 배정하였다(군당 n = 15, 2가지 실험): 10주동안 주당 2회, 복강 내(i.p.), 15 mg/kg의 MR1(아르메니아 햄스터 항마우스 CD154 IgG) 및 이소형 대조군(IC, 햄스터 항-마우스 IgG, BioXcell). 모든 절차는 동물 보호에 관한 스위스 법률에 따라 수행되었으며, 스위스 바젤에 있는 Cantonal Veterinary Office에 의해 승인되었다(동물 라이선스 제BS-2482호).
NOD/ShiLtJ 마우스의 비장 및 타액선의 조직병리학 및 면역조직화학
좌측 타액선의 3 μm 두께의 파라핀 절편을 헤마톡실린 및 에오신(HE)으로 염색하였다. CD3, CD45R, CD138, Iba-1, Ki-67 및 AQP-5에 대한 자동화된 면역조직화학 염색을 Ventana Discovery XT 면역염색기(Roche Diagnostics, 스위스)에서 수행하였다. NOD 마우스의 비장을 Ki-67로 염색하였다.
항체 분비 세포(ASC)에 대한 ELISPOT 분석
타액선 및 비장으로부터의 단일 세포 현탁액을 제조하고(온라인 보충 파일), 신선한 CD45+ 세포를 미리 코팅된 ELISPOT 플레이트에 첨가하고 암소에서 37℃에서 20시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트에 대한 ASC 결합은 TMB 기질 용액을 첨가하여 밝혀냈고, 스폿의 밀도는 EliSpot 판독기 "AID classic"으로 측정하였다.
항-Ro ELISA
제조사의 지침에 따라 ELISA 키트 카탈로그 번호 5710(Alpha Diagnostic International, Inc. 미국)을 이용하여 혈청에서 마우스 항-SSA/Ro60을 평가하였다.
2. 결과
타액선에서의 B 세포 CD40 유전자 서명의 상향 조절
마이크로어레이 분석을 사용하여, 1차, 인간 CD19pos B 세포의 rCD154 자극 후, B 세포에서 CD40의 하류에서 유전자를 확인하였고, 그 중 43개를 뮤린 유전자에 맵핑시킬 수 있었다. 그런 다음, 이들 유전자의 발현이 12주령 및 24주령 NOD 마우스의 타액선(SG) 조직에서 조절되는지를 조사하였다. Cd40, Cd80 및 Aicda를 포함한 14개의 유전자가 두 시점에서 전체 타액선(WS) 조직과 비교하여 미세절개된 ELS에서 유의하게 상향 조절되어, 만성 경로 활성화를 시사하였다(도 26a). 또한, Ingenuity 경로 분석 결과, CD40 및 CD154(CD40LG)가 제12주 및 제24주 모두에서 최상위 상류 조절인자 중에 있는 것으로 나타났고(도 26b), NOD/ShiLtJ 마우스 및 pSS 환자의 SG에서 상향 조절된 CD40 경로 유전자들 사이의 중첩을 증명할 수 있었다(문헌[Horvath et al., 2012]).
CD40-CD154 상호 작용은 ELS 형성에 필수적이다
NOD/ShiLtJ 마우스는 8 내지 12주령에서 SG에서 SG 기능의 감소에 앞서 100%의 발생률로 국소 세포 침윤물을 발달시킨다(문헌[Jonsson et al. 2012]). 위의 데이터는 NOD SG 조직에서 만성 CD40 경로 신호전달을 시사하였고, 이는 염증성 병소에서 단핵 세포에 의한 CD40 발현의 증거에 의해 뒷받침되었다(문헌[Roescher et al. 2012]). 따라서, 10주 동안 12주령에서 시작되는 2주마다의 15 mg/kg의 항-CD154 mAb MR1의 투약에 의해 치료적 CD40-CD154 차단의 효과를 시험하기로 하였다.
도 26b는 NOD/ShiLtJ 마우스에서 10주 동안 MR1의 만성 투약이 Ki67-양성 세포의 클러스터에 의해 정의된 바와 같은, 타액선에서의 ELS의 유의한 감소를 초래하였음을 보여준다. 또한, SG에 상재하는 B 및 T 세포, 그리고 대식세포의 백분율이 크게 감소하였다. 조직학적 영상은 MR1이 투약 시작 10주 후 ELS를 억제할 수 있음을 나타내었다(도 26c).
CD40-CD154 상호 작용의 차단은 ASC 형성 및 자가항체 생성을 억제한다
MR1 투여는 또한 비장, SG 및 골수에서 총 IgG(IgM은 아님) ASC의 감소(도 26b) 및 비장 GC의 완전한 억제를 초래하였다. 또한, 항-CD154 처리 마우스는 혈청 항-Ro IgG 수준의 유의한 감소를 나타냈으나, 타액선에서 Ro 특이적 ASC의 빈도는 유의미하게 영향을 받는 것으로는 나타나지 않았다(도 26c).
CD40-CD154 상호 작용의 차단은 AQP-5 양성 세포의 손실을 방지한다
마우스에서 자극성 타액 분비를 평가하는 것이 가능하지만, 이러한 분석을 위한 샘플링은 공복, 마취 및 필로카르핀 자극을 필요로 하며(문헌[Jonsson et al. 2006]); 이들은 동물 복지 및 판독치 해석에 영향을 미칠 수 있는 인자이다. 따라서, SS에서 분비 기능에 관여하는 것으로 제안된(문헌[Yoshimura et al., 2016]), 타액 및 눈물의 생성 조절에 관여하는 수분 통로 단백질인 AQP-5(문헌[Delporte et al., 2006])의 발현을 모니터링하기로 하였다. IHC 염색에 의해 평가된 AQP-5 양성 평가(도 27)는 대조군 동물과 비교하여 MR1 처리 동물에서 AQP-5 양성 세포의 백분율이 더 높음을 보여주어, CD40-CD154 차단이 타액선 분비 세포 기능의 손실을 예방하거나 지연시킬 수 있음을 시사한다.
3. 논의
타액선 ELS에서 친화도 성숙 및 자가반응성 B 세포의 존재의 증거는 SS 병리학에서 이들 구조물의 잠재적인 역할을 시사한다(문헌[Stott et al., 1998]). ELS와 GC 사이의 기능적 유사성을 고려하여, GC 생물학에 관여하는 면역학적 공동 자극 경로가 ELS에서 유사한 역할을 할 수 있다는 가설을 세웠다. CD40 또는 CD154의 결핍은 GC 형성을 방지하고, 리간드 또는 수용체의 약리학적 차단은 또한 확립된 GC를 교란시킨다(문헌[Ristov et al., 2018]; 문헌[Kim et al. 2014]). CD40 발현은 pSS 환자 및 NOD 마우스의 SG 선의 침윤 세포에서 관찰되었으므로, CD40-CD154 상호 작용 또한 ELS 생물학에 관련지어졌다(문헌[Roescher et al. 2012]; 문헌[Ohlsson et al. 2002]). NOD 마우스로부터의 ELS 및 pSS 환자의 SG 생검에서 CD40의 하류의 유전자들의 지속적인 상향 조절과 결합되어, 이들 데이터는 이 공동 자극 경로가 침윤성 타액선 백혈구에서 활성임을 시사하였다.
또한, CD40-CD154 상호 작용의 치료적 차단은 ELS의 제거, 침윤성 백혈구의 현저한 감소 및 혈청 항-Ro 자가항체 수준의 감소를 초래하였고, CD40-CD154 차단은 또한 분비 세포 기능에 필수적인 단백질인 AQP-5를 발현하는 세포의 손실을 방지하는 것으로 나타났으나(문헌[Delporte et al., 2006]), 타액 생성의 평가가 SG 기능의 더욱 직접적인 척도일 것이다. 이전의 데이터에 따르면, 어린 NOD 마우스(4 내지 5주령; 타액선염의 증거 1 내지 2개월 전)에서 단일 용량의 MR1의 예방적 투여는 타액선염의 발병을 예방하고 항-Ro 자가항체의 수준을 감소시킬 수 있었는데(문헌[Mahmoud et al., 2016]), 이는 CD40 결핍 NOD 마우스의 결과와 일치한다. 그러나 CD40-CD154 상호 작용의 치료적 차단이 SG 염증인 ELS를 없애고, 이 모델에서 자가항체 수준을 감소시킬 수 있음이 이전에는 밝혀지지 않았다.
이 데이터는 NOD 마우스의 SG에서 가용성 CD40-Ig 융합 단백질의 아데노 관련 바이러스 발현이 타액선염을 감소시키지 못한 초기 연구(문헌[Roescher et al., 2012])와 대조된다. 저자들이 SG에서 융합 단백질 발현의 증거를 보고하지 않았기 때문에, 약물의 농도가 완전한 CD40-CD154 경로 차단을 달성하기에 불충분했을 가능성이 있다. 대조적으로, 이 연구는 조직에서 완전한 경로 관련 PD 효과에 충분한 MR1 노출이 있었음을 시사하는 비장 GC의 교란을 명확하게 입증할 수 있었다. 종합적으로, 이 데이터는 항-CD40 항체 mAb1과 같은 생물제제에 의한 CD40-CD154 공동 자극 경로의 치료적 차단이 SS 환자에서 유리한 치료 효과를 제공할 수 있음을 시사한다(문헌[Ristov et al., 2018]).
실시예 9. 차단 및 비 고갈 항-CD40 단클론 항체 CFZ533의 시험관 내 및 생체 내 특성의 특징 분석
1. 방법
CD40에 대한 CFZ533의 친화도의 표면 플라즈몬 공명 분석
러닝 완충액으로서 HBS-EP+를 사용하여 25℃에서 재조합 CFZ533의 결합 분석을 수행하였다. 일반적인 결합 분석 주기는 다음 세 단계로 구성되었다: (i) 칩 표면 상에 고정된 단백질 A를 통한 항체의 포획, (ii) 포획된 항-CD40 항체에 대한 CD40 항원의 결합, 및 (iii) 단백질 A 표면의 재생. 항원-항체 결합 상호 작용의 반응 속도 상수를 결정하기 위하여, 결합 데이터를 처리하고, 블랭크 주사로부터의 반응으로 이중 참조하였다. 반응 속도 상수를 결정하기 위하여 Biacore T100 평가 소프트웨어의 1:1 상호 작용 모델을 사용하여 결합 곡선을 국소적으로 적합화하였다. 평형 해리 상수(KD)의 값은 속도 상수 kd/ka의 비율로서 계산하였다. 모든 결합 측정은 2개의 독립적인 실험에서 수행되었다.
FcγRIIIA에 대한 CFZ533의 친화도의 표면 플라즈몬 공명 분석
4-아미노산 정제 태그(4APP; Novartis) 및 Avi 비오틴화 태그(GLNDIFEAQKIEWHE; Avidity)가 부착된 인간 FcγRIIIA의 세포 외 도메인을 Geneart: 인간 FcγRIIIA (CD16a) 158V(Uniprot : P08637, 17-199), 인간 FcγRIIIA 158F(Uniprot: P08637, 17-199)에 의해 합성하고, HEK293 세포에서 발현시키고, 항-4APP 친화도 크로마토그래피로 정제하였다. 수용체는 BirA(Avidity)로 부위 특이적 비오틴화하고, 스트렙타비딘 센서 칩(General Electric)에 결합시켰고, 상이한 Ab의 평형 결합 수준을 기술된 바와 같이(문헌[Warncke et al. 2012]) 표면 플라즈몬 공명(T100, General Electric)에 의해 분석하였다. 평형 해리 상수(KD)는 1:1 모델에 의해 계산하였다.
인간 백혈구 배양
건강한 지원자(Blutspendezentrum, 스위스 바젤)로부터 전혈 버피 코트를 얻거나, 스위스 인간 연구법에 따른 사전 동의 및 책임 있는 윤리 위원회(Ethikkommission Nordwest- und Zentralschweiz; EKNZ)의 승인 하에 제공된 건강한 지원자로부터 전혈을 수집하였다. 인간 편도선 샘플은 Ergolz Klinik(스위스 리스탈)(연구 프로토콜 번호 1000244 v.03; Ethikkommission beider Basel; EKBB에 의해 승인됨) 및 Kantonspital(스위스 리스탈)(연구 프로토콜 번호 TRI0149 v.01; EKNZ에 의해 승인됨)로부터 얻었다. 생체 외 배양 실험의 경우, 자세한 방법은 보충 자료를 참조한다. 간략하게, 전혈, 단리된 PBMC, 시험관 내 유래 단핵구 DC 또는 인간 편도선 B 세포를 CFZ533 또는 관련 대조군 항체의 단일 농도 또는 용량 적정과 함께 인큐베이션하였다. 경로 차단 실험의 경우, 이들 배양물은 EC80 농도의 재조합 인간 CD154(5 μg/ml) 및 IL-4(75 ng/ml)도 포함하였다. 시험관 내 분석에 대한 판독은 티미딘 혼입(3H-TdR)에 의해 평가된 증식, B 세포의 활성화 분자 CD69의 발현에 대한 유세포 분석 기반 평가, 및 ELISA에 의해 평가된 사이토카인 분비를 포함하였다. NHP 전혈 및 PBMC에 대해 유사한 분석이 사용되었다. 일부 인간 전혈 실험에서, 형광 태그 부착된 CFZ533을 사용하여 CD40 수용체 점유도 조사하였다. 적절한 경우, GraphPad Prism® 소프트웨어에서 선형 회귀 기반 곡선 적합화를 사용하여 IC50 값을 추정하였다.
시험관 내 세포 고갈 분석
자세한 방법은 보충 자료를 참조한다. 간략하게, CD20pos B 세포의 매개성 고갈에 대한 CFZ533의 능력을 B 세포 고갈 항체 리툭시맙과 비교하여 3일 동안 인간 전혈에서 모니터링하였다. CDC의 경우, 토끼 보체의 존재 또는 부재 하에 CFZ533 또는 리툭시맙을 RAJI B 세포와 함께 인큐베이션하고, 발광에 의해 세포 용해를 평가하였다.
CFZ533의 내재화
형광 태그 부착된 CFZ533 및 rCD154의 내재화를 인간 B 세포주 RI-1을 사용하여 시험관 내에서 평가하였다(문헌[Th'ng et al, 1987]). CFZ533 내재화의 CD40 의존성을 CD40 녹아웃 RI-1 세포주를 사용하여 평가하였다. 제조사의 지시에 따라 Amnis® 영상 유세포 분석기(Merck KHaA, Darnstadt)를 사용하여 내재화를 평가하고, ImageStream®X 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다.
생체 내 연구
단일 용량 약동학/약력학(PK/PD) 연구는 7.5 내지 8.5세(6.5 ± 2.6 kg)로, 필리핀(Siconbrec, 필리핀 마카티 시티)으로부터 인공 사육된 생물제제 처리 미경험 시노몰구스 원숭이(마카크 원숭이, Macaca fascicularis)를 이용하였다. 동물 취급, 관리, 약물 치료 및 혈액 샘플링은 동물 보호에 대한 스위스 연방법(동물 라이선스 BS #1900, BS #1495)에 따라 수행된다. 회상 면역화 실험의 경우, 독일 뮌스터의 Covance Laboratories GmbH에서 수행된 독성학 연구(원고 준비 중)로부터의 동물을 이용하였다. 이 연구는 동물 복지법 및 허용된 동물 복지 표준에 관한 국가 법률 규정을 엄격히 준수하는 공인된 연구 프로토콜 및 현지 표준 운영 절차에 따라 수행되었다.
PK 연구에서, CFZ533은 16.2(5532), 18.5(5531) 및 20(5530) mg/kg의 계산된 단일 용량으로 3마리의 동물에게 투여되었다. CFZ533 혈청 농도, 말초 T 및 B 림프구 수, 및 CFZ533에 의한 말초 B 세포에서의 CD40 점유 분석을 위해 혈액을 샘플링하였다. 회상 TDAR 실험의 경우, 각각 연구 제8일(프라이밍) 및 제43일(회상; CFZ533 치료 중)에 알룸(Alum) 중 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)으로 동물을 면역화시켰다. 프라이밍 및 회상 면역화 1일 전 및 7, 14 및 21일 후에 혈청을 샘플링하였다. 표준물질로서 시노몰구스 원숭이 항-KLH IgM/IgG 기준 혈청을 사용하여 샌드위치 ELISA로 KLH 특이적 IgM/IgG 역가를 결정하였다. 위에 기술된 바와 같이 PK 평가를 수행하였다. PK 및 TDAR 실험에 대한 자세한 내용은 보충 자료를 참조한다.
배 중심의 조직학적 분석
포르말린 고정, 파라핀 왁스(FFPE) 포매된 비장 및 림프절(액와, 하악 및 장간막) 절편을 헤마톡실린 및 에오신, 그리고 다음의 마커를 이용한 간접적인 면역-과산화효소 방법(Dako의 HRP+DAB)으로 염색하였다: 항-CD20 항체(M0755, Dako), 항-CD8 항체(RM-9116-SO, Medac) 및 Ki67(M7240, Dako). 모든 슬라이드를 염색의 강도(음성부터 강력까지)에 따라 평가하고 등급을 매겼다. 또한, 조직 내에서 임의의 면역조직화학 염색 세포의 염색 패턴 및 분포 또한 기술하였다.
2. 결과
CFZ533은 인간 CD40에 결합하고 다수의 CD40 발현 세포 유형의 rCD154 유도성 활성화를 억제한다
표 3은 재조합 인간 CD40에 대한 CFZ533의 KD가 표면 플라즈몬 공명에 의해 0.3 nM로 결정되어, 이의 모 항체 HCD122(CFZ533의 야생형 IgG1 버전)와 매우 유사함을 나타낸다.
Figure pct00015
도 18a는 인간 전혈 배양물, PBMC 및 다수의 공여자(각각 5명, 32명 및 6명의 공여자)로부터 단리된 편도선 B 세포의 rCD154 및 IL-4 매개성 증식(3H-TdR)에 미치는 CFZ533의 효과를 보여준다. 데이터는 정규화된 cpm(rCD154 + IL-4 = 100; 점선)으로 표시된다. 도 18b는 밤새 배양 후 rCD154 자극 moDC에 의한 TNF- 알파 생산을 CFZ533이 억제하였음을 보여준다. 도 18c는 지연된 CFZ533의 첨가가 rCD154 + IL-4 매개성 인간 PBMC 증식을 억제하였음을 보여준다. rCD154 + IL-4로 자극하기 1시간 전, 자극과 동시에, 또는 2시간 및 6시간 후에 CFZ533을 인간 PBMC에 첨가하고, 이후 4일 배양 후 증식(3H-TdR)을 평가하였다(점선 및 파선은 rCD154 + IL-4 및 세포 + 배지 대조군을 나타낸다). 모든 데이터에 대해, rCD154 유도성 자극의 판독치의 평균 및 SD를 로그 변환된 CFZ533 농도의 함수로서 그래프로 나타내었다. 적절한 경우, 선형 회귀 기반 곡선 적합화를 사용하여 IC50 값을 결정하였다. 도 18d는 CFZ533에 의한 CD40 점유와 경로 차단 사이의 관계를 보여준다. CFZ533의 용량 적정의 존재 하에 10명의 공여자로부터의 인간 전혈을 rCD154와 함께 밤새 배양하였다. 경로 활성화 정도(B 세포에서의 CD69pos(%)) 및 CD40 점유 정도(알렉사플루오르(AlexaFlour) 488 표지된 CFZ533으로 염색)를 평가하였다. 열린 원과 채워진 원은 각각 CFZ533에 의해 점유된 CD40의 백분율 및 CD20pos B 세포에서의 CD69pos 발현 세포의 백분율을 로그 변환된 CFZ533 농도의 함수로서 나타낸 것이다(평균 및 SD 도시). 점선 및 파선은 모든 공여자에 걸쳐 정규화된 rCD154 유도성 CD69 발현 및 세포 + 배지 대조군 배양물을 나타낸다.
도 18a는 CFZ533이 각각 0.024 μg/ml(0.16 nM), 0.017 μg/ml(0.12 nM) 및 0.071 μg/ml(0.47 nM)의 효능(IC50 값)을 갖는 여러 공여자들로부터의 정제된 편도선 B 세포 및 인간 전혈 배양물, PBMC의 rCD154 유도성 증식을 완전히 억제하였음을 나타낸다. 또한, CFZ533이 0.04 μg/ml(0.27 nM)의 IC50으로 1차 단핵구 유래 수지상 세포(moDC)에 의한 rCD154 유도성 TNF 생산을 완전히 차단하였음을 증명할 수 있었다(도 18b).
이전에 발표된 바와 같이, CFZ533은 시노몰구스 원숭이로부터의 PBMC의 rCD154 유도성 증식을 억제하였다(문헌[Cordoba et al., 2015]). CFZ533은 인간, 레수스 및 시노몰구스 동물로부터의 PBMC의 rCD154 유도성 증식을 유사한 효능(각각 0.02, 0.03 및 0.01 μg/ml의 IC50)으로 억제하였고, 이들 종으로부터의 B 세포 상의 CD40과 대략 0.2 μg/ml의 EC50 값으로 결합할 수 있었다(표 4 참조).
Figure pct00016
위의 세포 데이터는 CFZ533이 rCD154 전에 또는 rCD154와 동시에 첨가된 실험으로부터 유래되었으며, 항체가 내인성 리간드의 결합을 방지할 수 있음을 나타내었다. 또한, rCD154를 함유하는 백혈구 배양 개시 후 6시간까지 CFZ533을 첨가하자 최소한의 효능 손실을 나타내며 세포 활성화가 완전히 억제되어, CFZ533이 CD40으로부터 내인성 리간드를 밀어낼 수 있음을 증명할 수 있었다(도 18c).
또한, CFZ533에 의한 CD40 점유 정도와 경로 억제 정도 사이의 관계를 평가하고자 했다. 그렇게 하기 위하여, 다수의 공여자로부터의 전혈에서 CFZ533에 의한 CD40 수용체 점유와 rCD154 유도성 CD69를 동시에 평가하였다. 도 18d는 CD40 경로 활성화의 완전한 차단에는 적어도 90%의 CFZ533에 의한 CD40 수용체 점유가 필요함을 나타낸다. 또한, CD40 경로 활성화의 판독치로서 CD23 및 CD54를 사용하여 수용체 점유와 경로 억제 사이의 유사한 관계가 관찰되었다(데이터 미도시).
CFZ533은 시험관 내에서 최소 자극 전위를 나타낸다
전혈의 B 세포에서 활성화 분자 CD69의 증식 및 상향 조절을 사용하여 인간 백혈구의 활성화를 자극하는 CFZ533의 능력을 평가하였다. 도 19a는 i. 여러 공여자(n = 13)로부터의 인간 전혈을 CFZ533의 용량 적정과 함께 인큐베이션하고, 3일의 배양 후에 증식(3H-TdR)을 평가하고, ii. 여러 공여자(n = 26)로부터의 인간 PBMC를 CFZ533의 용량 적정과 함께 인큐베이션하고, 3일의 배양 후에 증식(3H-TdR)을 평가한 것과 관련된 데이터를 보여준다. 두 그래프 모두, 데이터는 로그 변환된 CFZ533 농도의 함수로서 정규화된 cpm의 평균 및 SD로 제시된다(rCD154 + IL-4 = 100; 점선, 세포 + 배지 = 0; 파선). 도 19b는 CFZ533이 추가 자극의 존재 하에서 인간 PBMC 증식을 유도하지 않음을 보여준다. 인간 PBMC를 (i) IL-4 또는 (ii) 항-IgM F(ab')2의 존재 하에 CFZ533의 용량 적정으로 3일 동안 자극하였다. 3H-TdR(cpm)의 평균 및 SD를 로그 변환된 CFZ533 농도의 함수로 표시하였다. 도 19c에서, 무자극, CFZ533, 이소형 대조군 또는 rCD154와 함께 인간 전혈(41명의 공여자)을 밤새 배양하고, B 세포에서의 CD69 발현을 FACS에 의해 평가한 방법이 도시되어 있다. 각 점은 단일 공여자로부터의 데이터를 나타내며, 평균 CD69(%) 값을 빨간색 수평선으로 표시하였다.
도 19a는 rCD154와 대조적으로, CFZ533이 인간 전혈(1:10 희석물) 또는 PBMC에 의한 티미딘 혼입을 유도할 수 없었음을 보여준다. CFZ533이 증식을 유도할 수 없다는 점은 IL-4와 같은 추가의 공동 자극, 또는 항-IgM의 추가에 의해 영향 받지 않았다(도 19b). 또한, 다시 rCD154와 대조적으로, CFZ533이 여러 공여자로부터의 전혈의 B 세포에서 CD69의 상향 조절을 유도할 수 없었음을 증명할 수 있었다(도 19c). 마지막으로, CFZ533은 CD40 발현 단핵구 유래 DC 또는 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)에 의해 사이토카인 생성을 유도할 수 없었다(데이터 미도시).
CFZ533은 세포 고갈을 매개하지 않는다
CFZ533을 N297A 돌연변이를 함유하도록 조작하였고, 사전에 이것이 FcγR 결합을 무력화시켜 항체 의존적 세포독성(ADCC)을 매개할 수 없게 함을 증명하였다. CFZ533은 HCD122(야생형 IgG1)와 비교하여 FcγRIIIA에 결합할 수 없었으며(표 5), 이러한 결합 결여가 CFZ533이 세포 고갈을 매개하는 능력에 어떻게 영향을 미치는지 조사하고자 했다.
Figure pct00017
도 20의 A는 CFZ533의 용량 적정 또는 50 μg/ml의 리툭시맙의 존재 하에 72시간 동안 인큐베이션된 인간 전혈 배양물로부터의 데이터를 보여준다. 림프구 FSC/SSC 게이트 내에 해당되는 CD45pos 및 CD19pos 사례에 기초하여 B 세포 수를 결정하였다. 개별 항체 농도에 대한 결과는 처리되지 않은 샘플을 참조하여 잔존 B 세포 백분율로서 계산하고 로그 변형된 항체 농도의 함수로서 그래프화하였다(100%로 조정하고 점선으로 나타냄). 데이터는 8명의 독립적인 공여자의 평균과 SD를 나타낸다. 도 20의 B는 상이한 농도의 리툭시맙 또는 CFZ533 및 고정된 농도의 토끼 보체와 함께 배양된 Raji B 세포의 결과를 보여준다. Raji 세포의 농도 의존적 사멸을 2시간 후에 분석하였고, 여기서 루시퍼라제를 사용하여 각 웰에서 ATP 농도를 결정함으로써 세포의 생존력을 측정하였다. 결과를 로그 변형된 항체 농도의 함수로서 이소형 대조군 정규화된 상대 루시퍼라제 단위(RLU)로서 제시하였다.
도 20의 A는 고갈 항-CD20 항체 리툭시맙은 인간 전혈에서 B 세포의 대략 80%를 제거할 수 있었지만, CFZ533은 임의의 세포 고갈을 매개할 수 없었음을 나타낸다. 또한, CFZ533은 리툭시맙과 대조적으로 Raji B 세포의 보체 의존적 세포독성(CDC)을 매개할 수 없었다(도 20의 B).
CFZ533은 CD40 의존적 방식으로 B 세포에 의해 내재화된다
다음으로 CFZ533이 CD40 발현 인간 B 세포주 RI-1에 의해 내재화될 수 있는지를 조사하고자 했다. 도 21a는 rCD154가 비 허용 조건(4℃)과 비교하여 허용 조건(37℃) 하에서 내재화되었으며, 여기서 rCD154의 약한 염색이 원형질 막에서 관찰될 수 있었음을 나타낸다. 또한, CFZ533은 내재화되었지만, 37℃에서 잔존 막 염색이 있는 것으로 보였다. 도 21b는 rCD154의 내재화 정도가 CFZ533에 대해 관찰된 것보다 더 큰 것으로 나타났음을 보여주었다. CD40 녹아웃 RI-1 B 세포주를 사용하여, CFZ533(도 21c) 및 rCD154(데이터 미도시)의 결합 및 내재화가 CD40 의존적임을 증명할 수 있었다.
도 21a는 37℃ 또는 4℃에서 3시간 동안 알렉사플루오르 488로 표지된 rCD154 또는 CFZ533과 함께 배양된 개별 RI-1 B 세포의 대표적인 영상을 보여준다. 도 21b. 허용 조건 하에서의 CFZ533 및 rCD154의 상대적인 내재화 약화(비 허용 약화 값을 감산함). 각 점은 개별 실험의 데이터를 나타내며 모집단 평균은 빨간색 수평선로 표시하였다. 도 21c. 37℃에서 3시간 동안 알렉사488 표지된 CFZ533과 함께 배양된 개별 CD40 발현 또는 CD40 녹아웃 RI-1 세포의 대표적인 영상. 모든 실험에서, 세포막의 경계를 표시하기 위하여 알렉사플루오르 647 표지된 CD45로 세포를 공동 염색시켰다.
비 인간 영장류에서의 CFZ533의 약동학적 특성
도 22의 A. 정맥 내로 16.2(5532), 18.5(5531) 및 20(5530) mg/kg의 계산된 용량으로 단일 용량 투여 후 3마리의 시노몰구스 원숭이에서의 CFZ533의 혈청 농도. 도 22의 B. CD40 점유: (i) 이용 가능한 CD40(%) 및 (ii) 총 CD40(%). 도 22의 C. 말초 B/T 세포: 단일 용량 후 말초 혈액 B 세포의 백분율. 제0일은 CFZ533이 투여된 때이다.
위의 데이터는 CFZ533이 NHP CD40에 결합하였고, NHP B 세포의 rCD154 유도성 활성화를 유사한 효능으로 억제할 수 있었음을 나타냈다. 이는 시노몰구스 원숭이와 레수스 원숭이가 CFZ533 PK와 PD 사이의 상관 관계를 조사하는 생체 내 연구에 적합한 종임을 시사하였다. 도 22의 A의 데이터는 단일 정맥 내 용량의 CFZ533(16.2, 18.5 및 20 mg/kg의 계산된 용량) 후 3마리의 시노몰구스 원숭이의 PK 프로파일을 보여준다. 내재화 막 결합 항원을 표적으로 하는 단클론 항체의 경우에 전형적이듯(문헌[Mager et al. 2006] 및 문헌[Ng et al. 2006]), CFZ533 농도의 시간 경과는 명확한 표적 매개 배치를 나타내, 비 선형 PK 프로파일 및 농도 의존적 청소율 및 반감기를 초래하였다. PK 프로파일에서 관찰된 변곡점은 표적 결합의 마커로서, CFZ533의 전반적인 청소에 대한 CD40의 증가된 기여도 및 더 짧은 반감기와 관련이 있다. 또한, PK 프로파일의 변곡점은 CD40 포화도 감소가 관찰된 시간과 일치하였다(도 22의 B, i). 이것은 대략 10 내지 20 μg/ml에서 일어났는데, 이 때는 CFZ533이 더 빨리 제거될 때였다. 모든 동물에서, 세포에서 CD40 수용체 발현의 손실은 없었다(도 22의 B, ii). 또한, CFZ533은 연구 전반에 걸쳐 일부 관찰된 변동에도 불구하고, 말초 혈액 B 세포(도 22의 C) 또는 T 세포(데이터 미도시)를 고갈시키지 않았다.
CFZ533은 회상 T 세포 의존적 항체 생산을 억제한다
도 23a는 회상 TDAR에 미치는 CFZ533의 영향을 평가하기 위한 실험 설계의 개략도를 보여준다. x축 아래의 화살표는 1차 및 2차 KLH 면역화를 강조 표시한 것이다. 10 mg/kg의 단일 용량의 CFZ533의 타이밍은 위에 표시되어 있다. 별표는 항-KLH IgG 및/또는 CFZ533 수준을 측정한 시점을 나타낸다. 도 23b. 각각의 그래프는 개별 동물에 대한 항-KLH IgG(닫힌 기호) 및 혈장 CFZ533 수준(로그 스케일; 실선)을 보여준다. 대조군 동물(열린 기호)로부터의 평균 항-KLH IgG 수준을 비교의 목적으로 각 그래프에 겹쳐 표시하였다. 도 23c. CFZ533을 사용한 1 mg/kg/주의 피하 다중 용량 26주 연구의 레수스 원숭이의 mLN에서의 배 중심의 조직학적 분석(Ki67 염색). (i) 6마리의 동물로부터의 대표적인 mLN 절편을 (ii) 대조군 영상과 함께 표시하였다. (iii) 치료 기간의 끝에서의 개별 동물로부터의 투약 간격에 걸친 평균 정상 상태 CFZ533 혈청 농도.
CD40 차단의 예측된 정확한 PD 효과는 TDAR의 억제이다(문헌[Kawabe et al. 1994]). CFZ533은 NHP 및 인간에서 1차 TDAR을 억제하며, 회상 TDAR에 미치는 이 항체의 영향을 조사하고자 하였다. 실험 설계를 도 23a에 요약하였다. 간략하게, 4마리의 레수스 원숭이를 연구 제1일의 10 mg/kg의 단일 정맥 내 용량의 CFZ533 전에 연구 제-28일(프라이밍)에 알룸 중 KLH로 면역화한 다음, 연구 제15일에 제2 KLH 면역화를 수행하였다.
도 23b는 면역화된 대조군(CFZ533 없음)의 데이터와 비교하여, 4마리의 개별 동물에서 항-KLH IgG 회상 반응에 미치는 CFZ533의 영향을 예시한 것이다. CFZ533의 PK 프로파일에는 동물간 변동성이 있었고, CFZ533의 더 빠른 제거가 동물 #1과 #3에서 관찰되었다. 더 높은 혈장 농도는 동물 #2 및 #4에서 더 오랜 시간 동안 관찰되었다. 흥미롭게도, 이들 동물은 연구 제15일에 항-KLH IgG(및 IgM; 데이터 미도시) 회상 반응의 완전한 억제를 나타냈다(모든 동물이 KLH에 대해 1차 TDAR을 나타냈음에 유의한다). 대조적으로, 특히 혈청 CFZ533 수준이 제2 KLH 면역화 시점에 약 40 μg/ml 미만인 경우, 더 빠른 CFZ533 청소율을 나타내는 동물에서 (일부 지연은 있었으나) 항-KLH IgG 반응이 관찰되었다(동물 #1과 비교하여 동물 #3의 경우 더 지연됨). 이식 동물(문헌[Cordoba et al. 2015]) 및 비 이식 동물(도 22의 B)에서 CFZ533을 이용한 이전의 생체 내 실험에서 관찰된 바와 같이, 말초 B 세포 고갈은 관찰되지 않았다(데이터 미도시).
위의 결과는 NHP에서 회상 TDAR의 완전한 억제를 위해 대략 40 μg/ml보다 높은 CFZ533 혈청 농도가 요구됨을 나타내었다. CFZ533 노출과 CD40 경로 관련 조직 약력학적 효과 사이의 상관 관계를 추가로 조사하고자 하였다. 26주의 독성학 연구 종료 시, 1 mg/kg/주의 피하 CFZ533에서, 장간막 림프절(mLN)에서 GC의 조직학적 분석 및 분자 분석을 수행하였다. 도 23c의 (i)은 투약된 6마리의 동물 가운데, 3마리의 개체에서 GC의 완전한 억제를 관찰할 수 있었으나, GC는 여전히 나머지 동물의 mLN에서 관찰될 수 있었음을 나타낸다. 도 23c의 (iii)은 적어도 38 μg/mL의 혈청 농도(투약 간격에 걸친 평균 정상 상태 농도)가 림프절의 피질 B 세포 영역에서 GC 발달의 완전한 억제와 관련이 있지만, 20 μg/mL 미만의 혈청 농도에서는 전혈 CD20pos B 세포의 완전 CD40 점유(동물 26842 및 26772; 데이터 미도시)에도 불구하고, GC의 불완전한 억제(동물 26842) 또는 억제 없음(동물 26772 및 26837)이 관찰되었음을 나타낸다. 말초 B 세포 고갈의 증거는 없었다(데이터 미도시).
논의
CFZ533은 CD40-CD154 공동 자극 경로의 조절장애와 관련된 자가면역 질환 및 고형 기관 이식에 대한 잠재적인 치료법으로서 개발되고 있다. 본 명세서에서 CD40 경로 관련 시험관 내 및 생체 내 모델 시스템에서의 CFZ533의 기능적 특성의 특징 분석 및 CFZ533 노출과 PD 효과 사이의 관계 조사를 기술한다.
CFZ533은 CD40에 결합할 수 있었고 B 세포 및 DC를 포함한 상이한 인간 면역 세포 유형에서 rCD154 유도성 경로 활성화를 완전히 방지할 수 있었다. 또한, CFZ533이 전혈에서 경로 활성화를 완전히 차단하기 위해서는 90%를 초과하는 CD40 점유가 필요했던 것으로 나타난다. 종합적으로, 이들 데이터는 충분한 수용체 점유가 달성되었다고 가정할 때, CFZ533이 세포 유형과 관계 없이 CD40 경로 의존적 이펙터 기능을 차단할 가능성이 있음을 시사하였다. 또한, 본 데이터는 PBMC에서 CFZ533이 CD40으로부터 사전에 결합된 rCD154를 밀어낼 수 있었음을 나타내어, mAb와 생리적 리간드의 에피토프가 중첩될 수 있음을 시사하였고, 이는 구조 연구에서 조사 중인 개념이다.
생체 내에서, 농도 의존적 청소율 및 반감기가 단일 용량 PK 연구에서 CFZ533에 대해 관찰되었다. 이 PK 프로파일은 CD40 수용체 발현이 CFZ533의 제거에 영향을 미쳤음을 시사하였다. 낮은 CFZ533 농도(즉, 불완전한 표적 포화)에서, CFZ533의 전반적인 청소에 대한 CD40의 기여도가 증가하였고, 반감기는 IgG1 유형 항체에 대해 일반적으로 관찰되는 것보다 다소 짧았다. 완전한 표적 포화(및 완전한 기능적 경로 억제)에 상응하는 더 높은 농도에서는, CFZ533의 전반적인 청소에 대한 수용체의 기여가 제한되었고, 반감기는 증가되었다. CFZ533의 표적 매개 청소는, 복합체의 리소좀 분해가 뒤따를 가능성이 있는 시험관 내에서 관찰된 CFZ533의 CD40 매개성 내재화와 일치하였다.
PK/PD 연구로부터의 추가의 발견은 CFZ533이 생체 내에서 말초 B 세포를 고갈시킬 수 없음을 확인시켜 주었다(문헌[Cordoba et al. 2015]). 언급한 바와 같이, CFZ533이 CD40 발현 세포를 고갈시킬 수 없다는 점은, 힌지 영역에서 N-연관 글리코실화의 부재를 초래하는 항체에서의 N297A 돌연변이의 존재로 인해, FcγRIIIA와 결합하지 못하게 하고 ADCC 또는 CDC를 매개할 수 없게 한다. 특히, 염증 조건 하에서, 면역 및 비 면역 세포 유형에 대한 이 수용체의 광범위한 조직 분포를 고려할 때 특히 관심의 대상이 되는 CD40 발현 세포 유형의 고갈을 방지하기 위해 CFZ533의 Fc 침묵화를 수행하였다.
NHP 신장 이식에서의 효능(문헌[Cordoba et al. 2015]) 외에도, 본 논문의 결과는 CFZ533이 회상 TDAR을 완전히 억제함을 나타냈다. 이 결과는 T 세포 의존적 항원에 대한 기억 B 세포 반응이 CD40-CD154 상호 작용에 전적으로 의존함을 시사하였다. 회상 반응의 억제 정도는 CFZ533의 농도와 관련이 있는 것으로 보이며, 항원 특이적 항체 반응의 완전한 억제를 위해서는 (추가 면역 후 적어도 일주일 동안) 30 내지 40 μg/ml을 초과하는 혈청 수준이 요구되는 것으로 나타났다. 혈청 농도와 CD40 경로 관련 조직 PD 판독치 사이의 이러한 상관 관계는 장간막 림프절 GC에 미치는 CFZ533의 영향을 조사할 때에도 유지되었으며, 여기서 GC의 완전한 억제를 위해서는 평균, 정상 상태 혈청 CFZ533 농도의 최소 역치가 요구되었다. 이러한 데이터는 투약 전략을 알리기 위해 말초 약물 노출과 조직에서 표적 관련 PD 효과 사이의 상관 관계를 확립하는 것의 중요성을 지적한다. CD40-CD154 공동 자극 경로를 표적으로 하는 여러 가지 생물제제가 다양한 자가면역 질환을 위해 개발되고 있다. CFZ533과 같은 항-CD40 mAb 외에도, 항-CD154 mAb가 혈전색전 사례의 잠재적 위험에도 불구하고 병원에 남아 있다(문헌[Boumpas et al., 2003]). 최근의 결과는 Fc 침묵화 및 페길화된 F(ab')2 접근법이 CD154를 표적으로 하는 항체의 혈전색전 취약성을 제거할 수 있다고 제안하였지만, Fc 침묵 항-CD154 mAb는 덜 효과적일 수 있다는 보고가 있다. 현재까지는 전임상 모델 또는 병원에서 다수의 항-CD40 항체의 투여와 관련된 혈전색전 사례의 증거가 없다.
결론적으로, 본 데이터는 CFZ533이 최소한의 효능 특성을 갖는 경로 차단, 비 고갈 항-CD40 항체임을 나타낸다. 충분하고 약리학적으로 적절한 노출에서 CFZ533은 회상 TDAR을 완전히 억제할 수 있을 뿐만 아니라, CD40 발현 세포 유형을 고갈시키지 않으면서 배 중심을 억제할 수 있다. 신장 이식에서의 전임상 효능과 결합된 이러한 데이터는 선택 자가면역 질환 및 고형 기관 이식에서 CFZ533의 잠재적인 임상적 유용성에 대한 확실한 과학적 근거를 제공한다.
참고문헌
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SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> ANTI-CD40 ANTIBODIES FOR USE IN TREATMENT OF SJ?REN? SYNDROME <130> PAT057947 <150> US 62/581212 <151> 2017-11-03 <150> US 62/644939 <151> 2018-03-19 <160> 19 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Val Ile Ser Tyr Glu Glu Ser Asn Arg Tyr His Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 3 Asp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Gly Pro Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Gln Ala Arg Gln Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 7 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 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Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 10 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Thr Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Val Leu Ile Ser Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Arg 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 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Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 <210> 15 <211> 1350 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 caggtgcagc tggtggaatc tggcggcgga gtggtgcagc ctggccggtc cctgagactg 60 tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agctacggca tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggcaagg gactggaatg ggtggccgtg atctcctacg aggaatccaa cagataccac 180 gctgactccg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca actccaagat caccctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg gaccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggacgga 300 ggaatcgccg ctcctggacc tgattattgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcctcc 360 gctagcacca agggcccctc cgtgttccct ctggccccct ccagcaagtc cacctctggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaaa gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac ctccggcgtg cacacctttc cagccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccctcta gctctctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaaccc 660 aagtcctgcg acaagaccca cacctgtccc ccctgccctg cccctgaact gctgggcgga 720 ccttccgtgt tcctgttccc cccaaagccc aaggacaccc tgatgatctc ccggaccccc 780 gaagtgacct gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ccagagagga acagtacgcc 900 tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaaa 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgaaaa gaccatctcc 1020 aaggccaagg gccagccccg cgagccacag gtgtacacac tgccccccag ccgggaagag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtcaaag gcttctaccc ctccgatatc 1140 gccgtggagt gggagtccaa cggacagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggactccg acggctcatt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagtccc tgtccctgag ccccggcaag 1350 <210> 16 <211> 657 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 gacatcgtga tgacccagtc ccccctgtcc ctgaccgtga cacctggcga gcctgcctct 60 atctcctgca gatcctccca gtccctgctg tactccaacg gctacaacta cctggactgg 120 tatctgcaga agcccggcca gtccccacag gtgctgatct ccctgggctc caacagagcc 180 tctggcgtgc ccgaccggtt ctccggctct ggctctggca ccgacttcac actgaagatc 240 tcacgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactactgca tgcaggcccg gcagaccccc 300 ttcaccttcg gccctggcac caaggtggac atccggcgta cggtggccgc tcccagcgtg 360 ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420 ctgaacaact tctacccccg ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480 agcggcaaca gccaggagag cgtcaccgag caggacagca aggactccac ctacagcctg 540 agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc ataaggtgta cgcctgcgag 600 gtgacccacc agggcctgtc cagccccgtg accaagagct tcaacagggg cgagtgc 657 <210> 17 <211> 1350 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 caggtgcagc tggtggaatc tggcggcgga gtggtgcagc ctggccggtc cctgagactg 60 tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agctacggca tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggcaagg gactggaatg ggtggccgtg atctcctacg aggaatccaa cagataccac 180 gctgactccg tgaagggccg gttcacaatc tcccgggaca actccaagat caccctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg gaccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggacgga 300 ggaatcgccg ctcctggacc tgattattgg ggccagggca ccctggtgac agtgtcctcc 360 gctagcacca agggcccctc cgtgttccct ctggccccct ccagcaagtc cacctctggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaaa gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480 tggaactctg gcgccctgac ctccggcgtg cacacctttc cagccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccctcta gctctctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaaccc 660 aagtcctgcg acaagaccca cacctgtccc ccctgccctg cccctgaact gctgggcgga 720 ccttccgtgt tcctgttccc cccaaagccc aaggacaccc tgatgatctc ccggaccccc 780 gaagtgacct gcgtggtggt ggccgtgtcc cacgaggacc ctgaagtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ccagagagga acagtacaac 900 tccacctacc gggtggtgtc tgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaaa 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgaaaa gaccatctcc 1020 aaggccaagg gccagccccg cgagccacag gtgtacacac tgccccccag ccgggaagag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtcaaag gcttctaccc ctccgatatc 1140 gccgtggagt gggagtccaa cggacagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggactccg acggctcatt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagtccc tgtccctgag ccccggcaag 1350 <210> 18 <211> 657 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 18 gacatcgtga tgacccagtc ccccctgtcc ctgaccgtga cacctggcga gcctgcctct 60 atctcctgca gatcctccca gtccctgctg tactccaacg gctacaacta cctggactgg 120 tatctgcaga agcccggcca gtccccacag gtgctgatct ccctgggctc caacagagcc 180 tctggcgtgc ccgaccggtt ctccggctct ggctctggca ccgacttcac actgaagatc 240 tcacgggtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactactgca tgcaggcccg gcagaccccc 300 ttcaccttcg gccctggcac caaggtggac atccggcgta cggtggccgc tcccagcgtg 360 ttcatcttcc cccccagcga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420 ctgaacaact tctacccccg ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480 agcggcaaca gccaggagag cgtcaccgag caggacagca aggactccac ctacagcctg 540 agcagcaccc tgaccctgag caaggccgac tacgagaagc ataaggtgta cgcctgcgag 600 gtgacccacc agggcctgtc cagccccgtg accaagagct tcaacagggg cgagtgc 657 <210> 19 <211> 277 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 1 5 10 15 Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 20 25 30 Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 35 40 45 Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 50 55 60 Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 65 70 75 80 Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 85 90 95 Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 100 105 110 Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 115 120 125 Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 130 135 140 Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 145 150 155 160 Cys His Pro Trp Thr Ser Cys Glu Thr Lys Asp Leu Val Val Gln Gln 165 170 175 Ala Gly Thr Asn Lys Thr Asp Val Val Cys Gly Pro Gln Asp Arg Leu 180 185 190 Arg Ala Leu Val Val Ile Pro Ile Ile Phe Gly Ile Leu Phe Ala Ile 195 200 205 Leu Leu Val Leu Val Phe Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn 210 215 220 Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp 225 230 235 240 Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His 245 250 255 Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser 260 265 270 Val Gln Glu Arg Gln 275

Claims (34)

  1. 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항-CD40 항체.
  2. 제1항에 있어서, 쇼그렌 증후군은 1차 쇼그렌 증후군인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체는
    a. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
    b. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
    c. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
    d. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
    e. 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체
    로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  4. 제3항에 있어서, 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  5. 치료적 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체 및 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 경로는 피하 또는 정맥 내, 또는 피하 또는 정맥 내의 조합인 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 용량은 인간 대상체 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 30 mg의 활성 성분인 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  8. 제7항에 있어서, 용량은 인간 대상체 킬로그램당 약 10 mg의 활성 성분인 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체 화합물.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대, 약 300 mg의 활성 성분인 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  10. 제9항에 있어서, 용량은 150 mg의 활성 성분, 300 mg의 활성 성분 또는 600 mg의 활성 성분인 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 로딩 투약 및 유지 투약을 통해 투여되는 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  12. 제11항에 있어서, 로딩 투약은 제1 용량의 피하 주사를 통해 투여되고, 유지 투약은 제2 용량의 피하 주사를 통해 투여되는 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  13. 제12항에 있어서, 제1 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 약 300 mg의 활성 성분이고, 제2 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 약 300 mg의 활성 성분인 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 제1 용량은 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 활성 성분이고, 제2 용량은 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 활성 성분인 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 로딩 투약은 적어도 2회의 피하 주사를 포함하고, 유지 투약은 매주(Q1W), 격주(Q2W) 또는 매월(Q4W) 피하 주사로 구성되는 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  16. 제15항에 있어서, 로딩 투약의 적어도 2회의 피하 주사는 상이한 용량인 것인, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 항체.
  17. 인간 대상체의 쇼그렌 증후군의 치료 방법으로서, 치료적 유효 용량의 항-CD40 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 쇼그렌 증후군은 1차 쇼그렌 증후군인, 방법.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 항체는
    a. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
    b. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
    c. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
    d. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
    e. 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체
    로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 방법.
  20. 제19항에 있어서, 항체는 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인, 치료 방법.
  21. 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 투여되는 것인, 방법.
  22. 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 피하 또는 정맥 내, 또는 피하 또는 정맥 내의 조합으로 투여되는 것인, 방법.
  23. 제17항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 인간 대상체 킬로그램당 약 3 mg 내지 약 30 mg의 활성 성분의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 용량은 인간 대상체 킬로그램당 약 10 mg의 활성 성분인 것인, 방법.
  25. 제17항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대, 약 300 mg의 활성 성분의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 용량은 150 mg의 활성 성분, 300 mg의 활성 성분 또는 600 mg의 활성 성분인 것인, 방법.
  27. 제17항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 로딩 투약 및 유지 투약으로 투여되는 것인, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 로딩 투약은 제1 용량의 피하 주사를 통해 투여되고, 유지 투약은 제2 용량의 피하 주사를 통해 투여되는 것인, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 제1 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 약 300 mg의 활성 성분이고, 제2 용량은 약 150 mg 내지 약 600 mg의 활성 성분, 예컨대 약 300 mg의 활성 성분인 것인, 방법.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 제1 용량은 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 활성 성분이고, 제2 용량은 150 mg, 300 mg 또는 600 mg의 활성 성분인 것인, 방법.
  31. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 로딩 투약은 적어도 2회의 피하 주사를 포함하고, 유지 투약은 매주(Q1W), 격주(Q2W) 또는 매월(Q4W) 피하 주사로 구성되는 것인, 방법.
  32. 제31항에 있어서, 로딩 투약의 적어도 2회의 피하 주사는 상이한 용량인 것인, 방법.
  33. 쇼그렌 증후군 치료용 의약의 제조를 위한, 항-CD40 항체, 완충제, 안정화제 및 가용화제를 포함하는 액체 약학적 조성물, 및 쇼그렌 증후군을 앓는 환자에게 항-CD40 항체를 피하 투여하기 위한 수단의 용도로서, 항-CD40 항체는
    a. 제1 로딩 투약으로;
    b. 그 후, 제2 유지 투약으로 피하 투여되고, 상기 항-CD40 항체는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 용도:
    i. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
    ii. 서열번호 1, 서열번호 2, 및 서열번호 3으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 4, 서열번호 5, 및 서열번호 6으로 기재된 초가변 영역을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인을 포함하는 항-CD40 항체;
    iii. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 13의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
    iv. 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VH 도메인 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 VL 도메인, 및 서열번호 14의 Fc 영역을 포함하는 항-CD40 항체;
    v. 침묵 Fc IgG1 영역을 포함하는 항-CD40 항체; 및
    vi. 서열번호 9의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 10의 경쇄 아미노산 서열; 또는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항-CD40 항체.
  34. 제33항에 있어서, 쇼그렌 증후군은 1차 쇼그렌 증후군인, 용도.
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