KR20200080183A - 치주질환 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 키트 - Google Patents

치주질환 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 키트 Download PDF

Info

Publication number
KR20200080183A
KR20200080183A KR1020190174381A KR20190174381A KR20200080183A KR 20200080183 A KR20200080183 A KR 20200080183A KR 1020190174381 A KR1020190174381 A KR 1020190174381A KR 20190174381 A KR20190174381 A KR 20190174381A KR 20200080183 A KR20200080183 A KR 20200080183A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
periodontal disease
mmp
prognosis
diagnosis
disease
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR1020190174381A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102802482B1 (ko
Inventor
김은경
김바울
김진섭
박재형
유승범
손미진
Original Assignee
주식회사 수젠텍
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 수젠텍 filed Critical 주식회사 수젠텍
Priority to PCT/KR2019/018497 priority Critical patent/WO2020138965A1/ko
Publication of KR20200080183A publication Critical patent/KR20200080183A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102802482B1 publication Critical patent/KR102802482B1/ko
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/56955—Bacteria involved in periodontal diseases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4737—C-reactive protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5412—IL-6
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/545—IL-1
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
    • G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
    • G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
    • G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
    • G01N2333/96486—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • G01N2333/96491—Metalloendopeptidases (3.4.24) with definite EC number
    • G01N2333/96494—Matrix metalloproteases, e. g. 3.4.24.7
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/18—Dental and oral disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

본 발명은 치주질환 진단 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 MMP-8을 비롯하여 염증성 질환 마커 또는 치주질환 균주 유래의 마커를 정상 대조군의 시료와 비교하여 증가된 농도로 검출되는 경우 치주질환으로 진단하는 것이다. MMP-8의 검출은 활성형 MMP-8과 비활성형 MMP-8을 구별하여 이루어지고 이를 통해 높은 정확도의 진단 방법, 진단 또는 예후용 조성물 및 키트를 제공할 수 있다.

Description

치주질환 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 키트{Method of diagnosing periodontal disease, composition and kit for the same}
본 발명은 치주질환 진단 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 생물학적 시료로부터 활성, 비활성형의 MMP-8(matrix metalloproteinase 8)을 구별하여 치주질환을 진단하는 방법에 관한 것이다.
치주질환은 잇몸에 발생하는 치은염과 치조골에 발생하는 치주염을 포함하며, 치아 자체가 손상되는 질환이 아닌 치아를 지지하는 주위 조직이 파괴되는 질환으로서 염증성 만성질환에 속한다. 이러한 치주질환은 환자가 느끼지 못하는 사이에 염증이 점차적으로 진행되어 치아 주변의 치조골이 파괴되어 치아를 뽑아야 하는 상태가 되어서야 발병을 인지하는 경우가 많다. 이를 막기 위해서는 치주질환을 조기에 진단할 수 있는 기술이 필요하다.
현재까지 전 세계적으로 치주질환과 관련된 다양한 연구가 진행 중이지만 치주질환이 어느 정도 진행이 된 후에 이를 치료하는 것에 연구가 집중되어 있을 뿐, 치주질환의 진단과 관련하여서는 육안으로 확인하거나 X-ray촬영을 통한 정성적 진단에 그치고 있는 것이 현실이다. 따라서, 치주질환을 조기에 진단하여 질병이 악화되기 전 효과적으로 제어하기 위한 진단 기술 개발이 시급하다.
한편, 치주질환을 진단하기 위한 전신성 바이오마커 및 국소(구강) 바이오마커에 대한 연구가 지속되어 오고 있지만, 최근까지도 전신성 바이오마커 또는 구강 바이오마커의 검출만으로는 높은 정확도나 민감도를 구현하고 있지 못하다.
이에 본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위하여, 치주질환이 발병하면 이에 반응하여 여러 염증성 물질들을 함유하게 되는 타액 또는 치은열구액(gingival crevicural fluid; GCF)의 프로테옴 분석을 통하여, 치주질환에 대한 바이오마커를 찾고, 추가적으로 고정확도의 치주질환 진단을 위한 바이오마커 사이의 상관관계를 분석하였다.
본 발명의 목적은 치주질환을 일으키는 세균의 감염여부를 높은 정확도로 진단할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 대상체로부터 검출한 MMP-8의 활성형 및 비활성형의 비율, MMP-8의 활성형 및 염증성 질환 마커의 비율로부터 보다 높은 정확도로 치주질환을 진단하는 방법을 제공하는 것이다.
대상체 유래의 생물학적 시료로부터 MMP-8(Matrix Metalloproteinase-8); 염증성 질환 마커, 및 치주질환 균주 유래의 마커;로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상을 검출하는 단계; 및 상기 생물학적 시료에서 검출된 상기 MMP-8, 염증성 질환 마커 또는 치주질환 균주 유래의 마커 수준이 정상 대조군 시료와 비교하여 증가한 경우, 상기 생물학적 시료가 유래한 대상체를 치주질환으로 판단하는 단계;를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 MMP-8을 검출하는 단계는 활성형 MMP-8과 비활성형 MMP-8을 구별하여 검출하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 대상체를 치주질환으로 판단하는 단계는 상기 생물학적 시료로부터 검출된 마커의 농도 또는 농도 비율이 하기 식 1 및 식 2를 만족하고, 하기 식 3 또는 식 4를 만족하는 경우 치주질환으로 판단하는 것을 포함하는 것일 수 있다.
[식 1]
Figure pat00001
[식 2]
Figure pat00002
[식 3]
Figure pat00003
[식 4]
Figure pat00004
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 생물학적 시료는 타액, 치은열구액(Gingival Crevicular Fluid; GCF) 및 혀 밑 고인액(Sublingual Fluid;SLF)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 생물학적 시료는 타액, 치은열구액(Gingival Crevicular Fluid; GCF) 및 혀 밑 고인액(Sublingual Fluid; SLF)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 염증성 질환 마커는 CRP(C-reactive Protein), sIgA(secretary Immunoglobulin A), 면역글로불린(Immunoglobulin), 인터루킨-1베타(IL-1beta), 인터루킨-6(IL-6), 종양괴사인자-알파(TNF-α;Tumor necrosis factor-alpha), 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase), 리소자임(Lysozyme), 락토페린(Lactoferrin) 으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 치주질환 균주 유래의 마커는 류코톡신(Leukotoxin), Karilysin, 세포융해소(Cytolysin), 진지페인(Gingipain)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 치주질환으로 판단하는 단계는 마이크로어레이, 항원-항체 반응 또는 질량분석 방식으로 수행되는 것을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 치주질환으로 판단하는 단계는 상기 대상체의 비마커 임상정보를 추가로 사용하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 비마커 임상정보는 상기 대상체의 치주낭의 깊이 측정, 출혈 여부 또는 X-ray 검사로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 활성형 MMP-8은 하기 표 1에 기재된 site 1, site 2, site 3 및 site 4로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 서열과 적어도 95% 이상의 상동성을 가지는 펩티드를 포함하는 것일 수 있다.
분류 명칭 위치(position) 서열(residue)
Acitve epitope Site 1 167-180 HGDNSPFDGPNGIL
Acitve epitope Site 2 182-192 HAFQPGQGIGG
Acitve epitope Site 3 218-229 EFGHSLGLAHSS
Acitve epitope Site 4 233-245 ALMYPNYAFRETS
본 발명의 일 예에 있어서, 비활성형 MMP-8은 하기 표 2에 기재된 어느 하나 이상의 서열과 적어도 95% 이상의 상동성을 가지는 펩티드를 포함하는 것일 수 있다.
분류 명칭 위치(position) 서열(residue)
Pro epitope Site 5 75-82 TGKPNEET
Pro epitope Site 6 44-55 PSNQYQSTRKNG
본 발명은 활성형 MMP-8(active Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체 및 비활성형 MMP-8(pro Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 활성형 MMP-8(active Matrix Metalloproteinase-8) 및 비활성형 MMP-8(pro Matrix Metalloproteinase-8)을 암호화하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 조성물을 제공한다.
본 발명은 상기 활성형 MMP-8(active Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체 및 비활성형 MMP-8(pro Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 조성물 및/또는 활성형 MMP-8(active Matrix Metalloproteinase-8) 및 비활성형 MMP-8(pro Matrix Metalloproteinase-8)을 암호화하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 조성물을 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 키트를 제공한다.
본 발명에 따른 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법은 MMP-8, 염증성 질환 마커 또는 치주질환 균주 유래의 마커 수준을 정상 대조군 시료와 비교하여 증가됨을 확인함으로써 손쉽게 치주질환 발병 여부를 판단할 수 있다.
또한, 본 발명은 MMP-8을 활성형과 비활성형으로 구분하여 검출함으로써 치주질환을 높은 정확도로 진단할 수 있고, 염증성 질환 마커의 정보를 추가로 활용함으로써 질병의 진행 정도를 파악할 수 있다. 이는 치주질환을 진단, 치료하고 나아가 모니터링에 활용할 수 있는 정보를 제공할 수 있다.
도 1은 비활성형 및 활성형 MMP-8 전체 아미노산 서열의 에피토프 위치를 예측한 결과이다.
도 2는 에피토프 위치로 가능성이 높은 서열부위 및 서열을 나타낸 것이다.
도 3은 비활성형 MMP-8 구조를 모델링한 이미지를 나타낸 것이다.
도 4는 비활성형 MMP-8을 이용하여 활성형 MMP-8를 형성한 후, 이를 확인한 겔 이미지를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 실험예 2에 따라 활성형 MMP-8, 비활성형 MMP-8 및 sIgA에 각각 특이적으로 결합하는 항체를 제작하여 각 항원과의 특이적 결합을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 실험예 2에 따라 활성형 MMP-8, 비활성형 MMP-8 및 sIgA의 농도별 형광 신호를 측정함으로써 정량 곡선을 산출한 결과 그래프를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 실험예 3에 따른 정상 대조군과 치주질환 환자군의 활성형 MMP-8, 비활성형 MMP-8, 전체 MMP-8 및 IL-1beta의 농도를 비교한 결과 그래프를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 실험예 3에 따라 정상 대조군과 치주질환 환자군의 활성형 MMP-8/전체 MMP-8의 비율, 활성형 MMP-8/sIgA의 비율 및 전체 MMP-8/sIgA의 비율에서 유의적 차이가 있음을 보여주는 그래프이다.
이하에서 본 발명에 대하여 구체적으로 설명한다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 따로 정의하지 않는 경우 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 내용으로 해석되어야 할 것이다. 본 명세서의 도면 및 실시예는 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 쉽게 이해하고 실시하기 위한 것으로 도면 및 실시예에서 발명의 요지를 흐릴 수 있는 내용은 생략될 수 있으며, 본 발명이 도면 및 실시예로 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법은, 대상체 유래의 생물학적 시료로부터 MMP-8(Matrix Metalloproteinase-8), 염증성 질환 마커 및 치주질환 균주 유래의 마커로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상을 검출하는 단계; 및 상기 생물학적 시료에서 상기 MMP-8, 염증성 질환 마커 또는 치주질환 균주 유래의 마커 수준이 정상 대조군 시료와 비교하여 증가한 경우, 상기 생물학적 시료가 유래한 대상체를 치주질환으로 판단하는 단계;를 포함한다.
본 발명에서 치주질환이란 잇몸 및 주변 결합조직 및 뼈의 염증반응 및/또는 퇴행을 의미하는 것으로 치은염(gingivitis), 치주염(periodontitis), 임플란트 주위염(peri-implantitis)을 포함하는 것이지만 이에 제한되는 것은 아니다. 여기서 임플란트 주위염이란 임플란트 시술 후 주위 뼈조직 소실과 연조직 감염을 포함한 임플란트 주위에 염증 반응이 생기는 것을 의미한다.
MMP-8은 치주조직 파괴에 관여하는 콜라겐 분해효소의 일종으로서 염증성 질환 마커 및/또는 치주질환 균주 유래의 마커와 함께 본 발명에 따른 치주질환 진단을 위한 바이오마커로 이용될 수 있다. 바람직하게는 MMP-8은 활성형인 aMMP-8(active MMP-8)일 수 있다.
구체적으로 염증성 질환 마커로는 염증 지표가 될 수 있는 CRP(C-reactive Protein), sIgA(secretary Immunoglobulin A), 면역글로불린(Immunoglobulin), 인터루킨-1베타(IL-1beta), 인터루킨-6(IL-6), 종양괴사인자-알파( Tumor necrosis factor-alpha: TNF-α), 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase), 리소자임(Lysozyme), 락토페린(Lactoferrin), 숙주 결합 조직의 파괴를 나타내는 마커인 MMP, AST(aspartate aminotransferase), TIMP(tissue　inhibitor　of　metalloprotease), 골조직 개조의 마커로 이용될 수 있는 ALP(Alkaline phosphatase), RANKL(receptor activator of NF-kB ligand), Osteocalcin, Osteonectin, Osteopontin가 제한없이 사용될 수 있다. 바람직하게는 CRP, sIgA, IL-1beta 또는 이들의 조합일 수 있다.
CRP(C-reactive protein)는 치주질환이 발생하는 경우 간에서 생성, 분비되어 급성 단계 혈액에서 나타나며, 치료가 진행되면 전신염증정도가 감소되어 농도가 줄어든다. SIgA는 타액, 눈물, 초유 및 위장 분비액 등 신체 분비물 중 가장 풍부하게 포함된 면역글로불린으로서 치은염과 치주염을 구분하여 그 농도가 증가한다.
또한, 구체적으로 치주질환 균주 유래의 바이오마커로는 치주질환 균주가 가지는 류코톡신(Leukotoxin), Karilysin, 세포융해소(Cytolysin)및 진지페인(Gingipain)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 MMP-8을 검출하는 단계는 활성형 MMP-8과 비활성형 MMP-8을 구별하여 검출하는 것을 특징으로 할 수 있다. 치주질환이 있는 경우 콜라겐 분해효소의 일종인 MMP가 세포외 기질의 분해 및 재건축 작용에 관여하게 되는데, 이 중 MMP-8의 활성형을 검출할 수 있다.
MMPs에 속하는 단백질은 80 내지 90개의 아미노산으로 구성된 프로펩티드 도메인의 존재 유무에 따라 활성형(active form)과 비활성형(pro form)으로 구분되는데 치주질환이 발병하면 MMP-8은 비활성형에서 활성형태로 전환되게 되어 비활성형과 활성형의 비율에 변화가 생기게 된다. 이러한 변화를 측정하여 치주질환 진단에 이용할 수 있다.
본 발명의 일 예에 있어서, 상기 생물학적 시료로부터 검출된 마커의 농도 또는 농도 비율이 하기 식 1 및 식 2를 만족하고, 하기 식 3 또는 식 4를 만족하는 경우, 상기 생물학적 시료가 유래한 대상체를 치주질환으로 판단할 수 있다.
[식 1]
Figure pat00005
[식 2]
Figure pat00006
[식 3]
Figure pat00007
[식 4]
Figure pat00008
구체적으로 예를 들면, 대상체의 생물학적 시료가 상기 식 1 및 식 2를 만족하는 경우 치주질환의 환자 후보로 볼 수 있고, 상기 식 1 또는 식 2를 만족하지 않는 경우 치주질환이 없거나 경미한 정상군으로 판단할 수 있다. 또한, 상기 치주질환의 환자 후보의 시료로부터 상기 식 3 또는 식 4를 만족하는 경우에는 치주질환을 가지는 환자로 판단함으로써, 다단계 알고리즘을 통한 진단으로 높은 정확도의 치주질환 판단이 가능하다.
상기 생물학적 시료는 타액, 치은열구액(Gingival Crevicular Fluid; GCF), 혀 밑 고인액(Sublingual Fluid; SLF) 및 생물학적 기원의 기타 시료를 말한다. 바람직하게는 상기 생물학적 시료는 동물, 보다 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간으로부터 수득될 수 있는 타액, 치은열구액 또는 혀 밑 고인액일 수 있다.
상기 시료는 검출에 사용되기 전에 전처리할 수 있다. 예를 들어, 세포 용해, 여과, 증류, 추출, 농축, 방해 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등을 포함할 수 있다. 또한 상기 전처리 외에, 상기 시료로부터 핵산 및 단백질을 분리하는 단계를 추가하여 검출에 사용하는 경우 보다 정확도 높은 결과를 얻을 수 있다.
생물학적 시료에서 단백질을 분리하는 과정은 공지의 공정을 이용하여 수행할 수 있으며 단백질 수준은 이 기술 분야에서 통상의 기술자가 실시하는 다양한 방법으로 측정될 수 있다.
상기 생물학적 시료로부터 검출된 마커를 통하여 치주질환으로 판단하는 단계는 마이크로어레이, 항원-항체 반응 또는 질량분석 방식으로 수행되는 것을 포함할 수 있다. 치주질환을 가지지 않은 정상 대상체의 항원-항체 반응 복합체 형성량과 치주질환 의심환자에서의 항원-항체 복합체의 형성량을 비교할 수 있고, 일정 농도 이상의 상기 단백질들의 검출 여부를 통하여 치주질환 진단에 필요한 정보를 제공할 수 있다.
본 발명에서 항원-항체 복합체란 치주질환 바이오마커 단백질과 이에 특이적인 항체의 결합물을 의미하고, 항원-항체 복합체의 형성량은 검출 라벨의 시그널의 크기를 통하여 정량적으로 측정이 가능하다.
본 발명의 마커 단백질은 공지된 단백질이므로 본 발명에 사용되는 항체는 상기 공지된 단백질을 항원으로 하여 면역학 분야에서 널리 알려져 있는 통상의 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 단일클론항체는 공지된 융합방법, 재조합 DNA 및 파지 항체 라이브러리 기술을 이용하여 제조할 수 있다.
면역학적 분석은 항원과 항체의 결합을 측정할 수 있는 방법이라면 제한되지 않고 포함될 수 있다. 이러한 방법들은 당 분야에서 공지되어 있으며, 예를 들어 면역세포화학 및 면역조직화학, 방사선 면역 분석법(radioimmunoassays), 면역크로마토그래피법(immunochromatograhy), 효소결합면역법(ELISA:Enzyme Linked Immunoabsorbent assay), 면역블롯(immunoblotting), 파아르 분석법(Farr assay), 면역침강, 면역형광법 등이 있다.
상기 치주질환으로 판단하는 단계는 상기 대상체의 비마커 임상정보를 추가로 사용할 수 있다. 비마커 임상정보로는 대상체의 치주낭의 깊이 측정, 출혈 여부 및 X-ray 검사로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따를 때, 활성형 MMP-8은 하기 표 1에 기재된 site 1, site 2, site 3 및 site 4로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 서열과 적어도 95% 이상의 상동성을 가지는 펩티드를 포함하는 것일 수 있다.
[표 1]
Figure pat00009
본 발명에 따를 때, 비활성형 MMP-8은 하기 표 2에 기재된 어느 하나 이상의 서열과 적어도 95% 이상의 상동성을 가지는 펩티드를 포함하는 것일 수 있다.
[표 2]
Figure pat00010
본 발명은 활성형 MMP-8(active Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체 및 비활성형 MMP-8(pro Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 조성물을 제공한다.
상기 항체는 다클론성 항체(polyclonal antibody) 또는 단일클론항체(monoclonal antibody)일 수 있으나, 바람직하게는 단일클론항체일 수 있다.
상기 단일클론항체는 일반적으로 AP(alkaline phosphatase) 또는 HRP(horseradish peroxidase)등의 효소가 결합된 2차 항체 및 이들의 기질을 사용하여 발색반응 시킴으로써 정량분석할 수 있고, 또는 직접 상기 마커 단백질에 대한 단일클론항체에 AP 또는 HRP효소 등이 결합된 것을 사용하여 정량분석할 수 있다. 또한 FITC(fluorescein isothiocyanat), PE(phycoerythrin) 등을 포함하는 다양한 형광 표지물질이 결합된 항체를 사용할 수 있다.
상기 마커 단백질과 항체의 반응은 면역크로마토그래피법(immunochromatography), 웨스턴 블랏(western blot), 면역침강법(Immunoprecipitation; IP), 효소결합면역흡착분석법(enzyme-linked immunoabsorbent assays; ELISA), 면역염색법(immunohistochemistry;IHC) 및 유세포분석법(flow cytometry analysis; FACS)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 단백질 확인 실험을 통해 확인할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명에 따른 치주질환 진단 또는 예후용 조성물은 활성형 MMP-8 및 비활성형 MMP-8을 암호화하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함할 수 있다.
본 발명은 상기 활성형 MMP-8(active Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체 및 비활성형 MMP-8(pro Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체 또는 상기 활성형 MMP-8 및 비활성형 MMP-8을 암호화하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 키트를 제공한다.
본 발명에 따른 키트는 마이크로어레이용, 유전자 증폭용, 딥스틱 래피드 키트, ELISA 분석용 또는 면역분석용으로 사용될 수 있다.
바람직하게 상기 키트는 마이크로어레이로 구성된 치주질환 진단용 키트일 수 있다. 상기 마이크로어레이는 특정 시약으로 처리된 슬라이드 글라스 표면 위에 항체를 부착하여 항원-항체 반응에 의해 상기 항체에 특이적으로 부착하는 단백질을 검출할 수 있도록 하는 것이다.
상기 항체를 포함하는 키트는 추가로 분석에 필요한 하나 이상의 부가 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 검출에 필요한 버퍼, 안정화제, 불활성 단백질, 시료 채취용 도구, 음성 및/또는 양성 대조군 등을 추가로 포함할 수 있다.또한, 상기 항체는 방사종(radionuclides), 형광원(fluorescors), 효소(enzyme) 등에 의해 표지화될 수 있다.
이하, 본 발명을 실험예 및 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실험예 및 실시예들은 본 발명을 더욱 쉽게 이해할 수 있도록 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실험예 및 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실험예 1>
1-1. 활성형 MMP-8과 비활성형 MMP-8의 펩티드 서열 분리
활성형 MMP-8의 구조는 현재 밝혀져 있고(PDB ID: 2OY4), 비활성형 MMP-8의 구조는 현재 밝혀져 있는 비활성형의 MMP-3(PDB ID: 1SLM) 및 MMP-1(PDB ID: 1SU3)의 구조, 활성형 MMP-8의 구조를 기반으로 모델러(Andrej Sali, USA, version 9.20)를 이용하여 모델링하였다(도 3).
비활성형 MMP-8의 프로펩티드를 분리시켜 활성형 MMP-8로 전환시켰다. 이때, 새롭게 노출되는 부분은 비활성형과 대비하여 활성형 MMP-8의 고유한 특성을 나타낼 가능성이 높다는 판단하에, 면역 반응에 영향을 줄 수 있는 특성으로서 표면노출도 및 극성을 계산하였다. 하기 표 3에 그 값을 나타내었다. 이는 단백질 구조의 환경 분석에 이용할 수 있는 ENVA(syntekabio, 한국)를 이용하여 계산하였다.
Figure pat00011
활성형과 비활성형 사이에서 표면노출도와 극성의 차가 크게 나타나는 위치를 선별하여 MMP-8의 활성부위를 포함하는 아미노산 위치임을 확인하였다.
이를 토대로 아미노산 서열 기반의 단백질 에피토프 위치들을 예측할 수 있는 프로그램 7종(Bepipred, Bepipred 2, Chou & Fasman, Emini, Karplus & Schulz, Kolaskar & Tongaonkar, Parker)을 이용하여 도 1에 예상되는 에피토프의 위치를 나타내었다. 이러한 7종의 프로그램들이 공통적으로 에피토프라 예측하는 위치를 포함하면서, 표 3에서의 활성형과 비활성형 MMP-8의 표면노출도 및 극성의 차이가 높은 서열들을 최종 선별하였다.
펩타이드를 합성 후 항체형성을 유도할 시, 단일클론항체를 선별하기 위해서는 펩타이드 내 시스테인 잔기에 BSA 또는 KLH의 접합이 필요하기 때문에, 도 1 위치들을 일부 포함하면서 시스테인 잔기가 추가된 펩타이드 서열을 합성하였다.
<실험예 2>
2-1. 항체 제작
활성형 MMP-8, 비활성형 MMP-8 및 sIgA에 특이적으로 결합하는 항체 제작을 위하여 이들과 면역보강제를 혼합하여 마우스에 주입하고, 면역이 완료된 마우스에서 비장을 적출하였다. 마우스의 암세포인 SP2/0 세포 및 비장세포를 PEG를 이용하여 융합하였다. 융합된 세포는 ELISA를 통하여 확인하였고, 융합된 세포를 선별하여 마우스 복강에 접종하였다. 접종 후 복강에 복수가 생성되면 이를 채취하여 protein G gel을 이용하여 항체를 정제하였다.
2-2. 제작된 항체의 검증
(1) 활성형 MMP-8 및 비활성형 MMP-8에 특이적으로 결합하는 항체 검증
NC 막(Nitrocellulose membrane)에 활성형 및 비활성형 MMP-8와 특이적으로 결합하는 항체를 분주(dotting)하였다. Anti MMP-8 항체(Sino biological)가 접합된 Europium bead 및 활성형 MMP-8 항원을 전개 버퍼(running buffer)에 혼합한 후, 항체가 분주된 NC 막을 전개 버퍼에 담갔다. 동일한 방법으로 Anti MMP-8 항체(Sino biological)가 접합된 Europium bead 및 비활성형 MMP-8 항원을 전개 버퍼에 혼합한 후, 항체가 분주된 NC 막을 전개 버퍼에 담갔다. 10분 경과 후 NC 막을 365 nm UV 램프로 비추어 항원-항체 결합을 확인하였다.
도 5(a)의 결과를 통하여 활성형 MMP-8 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 비활성형 MMP-8 항원과는 반응하지 않으면서, 활성형 MMP-8과는 반응성이 높은 것을 확인할 수 있었고, 도 5(b)를 통하여 비활성형 MMP-8에 특이적으로 결합하는 항체가 활성형 MMP-8 항원과는 반응하지 않으면서, 비활성형 MMP-8과는 반응성이 높은 것을 확인하였다.
(2) sIgA에 특이적으로 결합하는 항체 검증
NC 막에 sIgA와 특이적으로 결합하는 항체를 분주하였다. sIgA와 특이적으로 결합하는 항체가 접합된 Europium bead와 sIgA 항원(Fitzgerald)을 전개 버퍼에 혼합한 후, 항체가 분주된 NC 막을 전개 버퍼에 담갔다. 10분 경과 후 NC 막을 365 nm UV 램프로 비추어 항원-항체 결합을 확인하였다. 도 5(c)를 통해 sIgA와 항체가 특이적 결합을 형성한 것을 확인할 수 있다.
2-3. 정량 곡선 산출
(1) 활성형 MMP-8 항원과 비활성형 MMP-8 항원을 타액에 하기 표 4에 따른 농도별로 희석한 후 타액 보관용액과 1:1로 혼합하여 항원용액을 제조하였다. 타액 보관용액은 PBS에 1.0 mM PMSF 및 2.0 mM EDTA를 혼합하여 사용하였다. 상기 항원용액과 검체 희석액을 1:9 비율로 혼합 후 MMP-8 측정 키트의 검체 주입구에 분주하였다. 검체를 주입하고 10분 경과 후, TRF(Time Resolved Fluorescence) 측정 장비를 이용하여 비활성형 MMP-8과 활성형 MMP-8의 형광 신호를 측정하였다. 농도별로 측정된 신호를 이용하여 정량 곡선을 그렸다. 도 6의 (a) 및 (b)는 각각 비활성형(pMMP-8)과 활성형(aMMP-8)의 정량 곡선을 나타낸 것이다.
(2) sIgA 항원 용액과 검체 희석액을 1:99의 비율로 혼합한 것을 제외하면, 상기 (1)과 동일한 방법으로 sIgA의 형광 신호를 측정하고 농도별로 측정된 신호를 이용하여 정량 곡선을 그렸다. 도 6의 (c)는 sIgA의 정량 곡선을 나타낸 것이다.
Figure pat00012
<실험예 3> 임상검체 테스트
임상 검체 수집은 서울대학교 치과병원 치주과, 원스톱 협진센터를 내원한 20대 내지 80대 성인 남녀 중 치주질환이 없는 대상자 14명 및 치주질환자 38명의 타액을 채집하였다. 정상 대조군은 치주질환이 없거나 치은염이 아주 경미한 정도 및, 치주낭의 깊이가 3 mm 미만이며, 치주질환 환자군은 방사선 사진상으로 골소실 진행이 확인되고, 치주낭의 깊이가 5 mm이상으로 확인되는 경우를 기준으로 분류하였다.
3-1. 활성형 및 비활성형 MMP-8
타액 보관용액과 1:1로 혼합되어 있는 임상 검체를 검체 희석액과 1:9로 혼합한 후, MMP-8 측정 키트의 검체 주입구에 분주하였다. 상기 MMP-8 측정 키트는 MMP-8을 면역 크로마토그래피법으로 검출하기 위한 측면유동법(Lateral Flow Assay) 기반의 진단 키트를 사용하였다. 10분 경과 후, TRF(Time Resolved Fluorescence) 측정 장비를 이용하여 활성형 MMP-8과 비활성형 MMP-8의 형광신호를 측정하여, 측정된 신호를 정량 곡선에 대입하여 농도를 환산하였다.
3-2. sIgA
임상 검체를 검체 희석액과 1:99로 혼합한 것을 제외하면 상기 3-1.의 방법과 동일한 방법으로 sIgA의 형광신호를 측정하고, 측정된 신호를 정량 곡선에 대입하여 농도를 환산하였다.
3-3. IL-1beta
타액 보관용액과 1:1로 혼합되어 있는 임상검체를 검체 희석액과 1:1로 혼합하여 96well plate에 100 ㎕씩 분주하고, Biotin-conjugate 용액을 50 ㎕씩 분주하여 상온에서 2시간 항온유지하였다. 이후, 세척한 다음 streptavidin-HRP 용액 100 ㎕씩 분주하여 상온에서 1시간 항온유지하였다. 다시 세척 후, TMB 기질 시약 100 ㎕씩 분주하였고, 플레이트를 호일로 감싸 상온에서 10분간 항온유지하였다. 반응 종결액(stop solution)을 100 ㎕ 분주 후, 450 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
하기 표 5에 비활성형 MMP-8, 활성형 MMP-8, sIgA 및 IL-1beta의 농도를 나타내었다.
Figure pat00013
상기 표 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 비활성형 MMP-8, 활성형 MMP-8, sIgA 및 IL-1beta 모두 정상 대조군에 비하여 치주질환 환자군에서 농도가 높게 나타났다. 구체적으로 sIgA 및 IL-1beta는 정상 대조군에 비하여 치주질환 환자군에서 1.45배, 3배의 농도 증가를 나타내었고, 특히, 비활성형 MMP-8은 3.32배, 활성형 MMP-8은 4.12배, 전체 MMP-8에 있어서도 3.72배로 정상 대조군과 비교하여 높은 농도 차이를 보여주었다. 이러한 결과는 상기 마커들의 비약적인 농도 증가를 통하여 치주질환 여부의 진단이 가능하고, 여러 마커들의 농도 증가를 통하여 정확도 높은 진단이 가능함을 나타낸다.
또한, 도 8에 나타난 결과와 같이, 전체 MMP-8과 활성형 MMP-8의 비율 및 활성형 MMP-8과 염증성 질환 마커의 하나인 sIgA의 비율 역시, 이들의 유의적인 차이를 통하여 치주질환 판단에 중요한 인자가 될 수 있음을 확인할 수 있다.
이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실험예 및 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아니다. 따라서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.
<110> sugentech <120> Method of diagnosing periodontal disease, composition and kit for the same <130> P19110961435 <150> KR KR 18/0169547 <151> 2018-12-26 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 His Gly Asp Asn Ser Pro Phe Asp Gly Pro Asn Gly Ile Leu 1 5 10 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 His Ala Phe Gln Pro Gly Gln Gly Ile Gly Gly 1 5 10 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Glu Phe Gly His Ser Leu Gly Leu Ala His Ser Ser 1 5 10 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ala Leu Met Tyr Pro Asn Tyr Ala Phe Arg Glu Thr Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Thr Gly Lys Pro Asn Glu Glu Thr 1 5 <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Pro Ser Asn Gln Tyr Gln Ser Thr Arg Lys Asn Gly 1 5 10

Claims (14)

  1. 대상체 유래의 생물학적 시료로부터 MMP-8(Matrix Metalloproteinase-8), 염증성 질환 마커, 및 치주질환 균주 유래의 마커로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상을 검출하는 단계; 및
    상기 생물학적 시료에서 검출된 상기 MMP-8, 염증성 질환 마커 또는 치주질환 균주 유래의 마커 수준이 정상 대조군 시료와 비교하여 증가한 경우, 상기 생물학적 시료가 유래한 대상체를 치주질환으로 판단하는 단계;를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 MMP-8을 검출하는 단계는 활성형 MMP-8과 비활성형 MMP-8을 구별하여 검출하는 것을 특징으로 하는 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 대상체를 치주질환으로 판단하는 단계는 상기 생물학적 시료로부터 검출된 마커의 농도 또는 농도 비율이 하기 식 1 및 식 2를 만족하고, 하기 식 3 또는 식 4를 만족하는 경우 치주질환으로 판단하는 것을 포함하는, 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
    [식 1]
    Figure pat00014

    [식 2]
    Figure pat00015

    [식 3]
    Figure pat00016

    [식 4]
    Figure pat00017

  4. 제 1항에 있어서,
    상기 생물학적 시료는 타액, 치은열구액(Gingival Crevicular Fluid; GCF) 및 혀 밑 고인액(Sublingual Fluid; SLF)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 염증성 질환 마커는 CRP(C-reactive Protein), sIgA(secretary Immunoglobulin A), 면역글로불린(Immunoglobulin), 인터루킨-1베타(IL-1beta), 인터루킨-6(IL-6), 종양괴사인자-알파(TNF-α;Tumor necrosis factor-alpha), 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase), 리소자임(Lysozyme), 락토페린(Lactoferrin) 으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 치주질환 균주 유래의 마커는 류코톡신(Leukotoxin), Karilysin, 세포융해소(Cytolysin), 진지페인(Gingipain)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 치주질환으로 판단하는 단계는 마이크로어레이, 항원-항체 반응 또는 질량분석 방식으로 수행되는 것을 포함하는 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  8. 제 1항에 있어서,
    상기 치주질환으로 판단하는 단계는 상기 대상체의 비마커 임상정보를 추가로 사용하는 것인 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 비마커 임상정보는 상기 대상체의 치주낭의 깊이 측정, 출혈 여부 또는 X-ray 검사로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  10. 제 2항에 있어서,
    상기 활성형 MMP-8은 하기 표 6에 기재된 site 1, site 2, site 3 및 site 4로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 서열과 적어도 95% 이상의 상동성을 가지는 펩티드를 포함하는 것인, 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
    [표 6]
    Figure pat00018
  11. 제 2항에 있어서,
    상기 비활성형 MMP-8은 하기 표 7에 기재된 어느 하나 이상의 서열과 적어도 95% 이상의 상동성을 가지는 펩티드를 포함하는 것인, 치주질환 진단 또는 예후에 필요한 정보를 제공하는 방법.
    [표 7]
    Figure pat00019
  12. 활성형 MMP-8(active Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체 및 비활성형 MMP-8(pro Matrix Metalloproteinase-8)과 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 조성물.
  13. 활성형 MMP-8(active Matrix Metalloproteinase-8) 및 비활성형 MMP-8(pro Matrix Metalloproteinase-8)을 암호화하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 조성물.
  14. 제 12항 또는 제 13항의 조성물을 포함하는 치주질환 진단 또는 예후용 키트.
KR1020190174381A 2018-12-26 2019-12-24 치주질환 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 키트 Active KR102802482B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2019/018497 WO2020138965A1 (ko) 2018-12-26 2019-12-26 치주질환 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 키트

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180169547 2018-12-26
KR20180169547 2018-12-26

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200080183A true KR20200080183A (ko) 2020-07-06
KR102802482B1 KR102802482B1 (ko) 2025-05-07

Family

ID=71571236

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190174381A Active KR102802482B1 (ko) 2018-12-26 2019-12-24 치주질환 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 키트

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102802482B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102535571B1 (ko) * 2022-03-18 2023-05-26 임우진 치주질환 위험성 검사용 치약 포장 세트

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010047938A2 (en) * 2008-10-21 2010-04-29 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Mmp activation peptide detection in biological samples

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010047938A2 (en) * 2008-10-21 2010-04-29 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Mmp activation peptide detection in biological samples

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ahmed Al-Majid et al., International Journal of Dentistry, (2018.09.), Vol. 2018, pp 1-27. 1부.* *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102535571B1 (ko) * 2022-03-18 2023-05-26 임우진 치주질환 위험성 검사용 치약 포장 세트

Also Published As

Publication number Publication date
KR102802482B1 (ko) 2025-05-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6096813B2 (ja) 乳癌診断用マルチバイオマーカーセット、その検出方法、及びそれに対する抗体を含む乳癌診断キット
US20100227343A1 (en) Glycodelin monoclonal antibodies and methods for their use in the detection of ovarian cancer
JP6812521B2 (ja) クロモグラニンａを検出するための免疫アッセイ法および抗体
CN113287013A (zh) 溃疡性大肠炎以及原发性硬化性胆管炎的检查方法
CN103380379A (zh) 尿路感染的诊断方法
JP2024056971A (ja) ＡＰＰ６６９－ｘのＮ末端を特異的に認識する抗体、及び免疫測定法
CN109715659B (zh) 用于诊断骨关节炎的comp肽和抗体
JP7168688B2 (ja) 補体Ｃ４ｄアッセイ
CN107110848B (zh) 以脱氧羟腐胺缩赖氨酸合酶基因作为指标使用的动脉硬化及癌的检测方法
KR102802482B1 (ko) 치주질환 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 키트
JPWO2006098464A1 (ja) 前立腺がんの診断方法
JP5484549B2 (ja) 中皮腫診断キット
US8263356B2 (en) Antibodies and methods for predicting dental caries
KR102131860B1 (ko) 아르기닌이 메틸화된 ggt1에 특이적으로 결합하는 대장암 진단용 바이오마커 조성물
EP2568286B1 (en) Method for analysing mucin 1 having sia-alpha-2-8-sia-alpha-2-3-gal-beta glycans
JP2006308576A (ja) 膵液による膵管内乳頭粘液性腺癌および膵臓癌の検出法及び検出キット
WO2020138965A1 (ko) 치주질환 진단 방법, 이를 위한 조성물 및 키트
US12510542B1 (en) Capture antibody and detection antibody binding MMP9 protein
KR102128251B1 (ko) 아르기닌이 메틸화된 drd2에 특이적으로 결합하는 대장암 진단용 바이오마커 조성물
JP2004198313A (ja) 甲状腺腫瘍の診断用キット
CN111208304B (zh) 肿瘤来源IgG在甲状旁腺癌诊断和预后中的用途
CN114729947B (zh) 检测癌的骨转移的方法和检测试剂
JP7446882B2 (ja) 被験者のスクリ－ニング方法及び鑑別方法
JP7201966B2 (ja) 自己免疫性胃炎の検出方法
US20130095483A1 (en) Predictive biomarkers for breast cancer

Legal Events

Date Code Title Description
PA0109 Patent application

Patent event code: PA01091R01D

Comment text: Patent Application

Patent event date: 20191224

PG1501 Laying open of application
A201 Request for examination
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20221207

Comment text: Request for Examination of Application

Patent event code: PA02011R01I

Patent event date: 20191224

Comment text: Patent Application

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20240826

Patent event code: PE09021S01D

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20250402

PG1601 Publication of registration