KR20200091925A - 칠엽수 추출물을 포함하는 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

Description

칠엽수 추출물을 포함하는 조성물

본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.

치아 임플란트 사용이 늘어나면서 임플란트와 관련된 다양한 질환들이 많이 나타나고 있다.

이 중 임플란트 주위염은 자연 치아가 아닌 임플란트 주변에 생기는 질환으로 임플란트 후 가장 주의가 요구되는 질환이다. 시술된 임플란트의 60% 이상에서 임플란트 주위염이 발생한다고 보고되고 있다. 특히 임플란트의 경우, 자연 치아와는 상이하게 신경이 분포하지 않아 초기에는 임플란트 주위염의 발병을 잘 인식하지 못하고 증상이 심각해진 후 비로서 발병을 인식하는 문제점이 있다. 그러나, 임플란트 주위염을 초기에 치료하지 않고 방치하는 경우, 심하면 잇몸뼈까지 녹아내리는 질환으로 꼼꼼한 치료가 필요하며, 임플란트 주위의 심각한 골손실은 임플란트 실패로 인한 재수술로 이어질 수 있다.

또한, 임플란트 주위염은 자연치아에서 발생되는 질환들과 비교하여 진행 속도가 빠르며, 질환의 정도가 더 심각한 경향이 있다.

그러나, 현재까지 임플란트 주위염을 예방 또는 치료하기 위해 사용되는 약들은 임플란트 주위염을 효과적 또는 근본적으로 치료하지 못하고 단순히 증상을 완화시키는 정도의 약들만이 사용되었다. 따라서 임플란트 주위염이 발병하면 약물을 사용하여 치료하기는 어려우며, 주로 외과적 시술 또는 수술 등의 방법이 이용되어 왔다.

따라서 임플란트 주위염을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있는 약물의 개발이 필요하다.

본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하고, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린 및 아프젤린을 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 칠엽수를 분쇄하는 제1 단계; 상기 분쇄된 칠엽수를 알코올 수용액으로 추출하는 제2 단계;를 포함하는 칠엽수 추출물의 제조 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하고, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린 및 아프젤린을 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명에 대하여 더욱 상세하게 설명한다.

본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 칠엽수 추출물를 유효성분으로 포함하고, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린(quercitrin) 및 아프젤린(afzelin)을 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 칠엽수 추출물은 임플란트 주위염을 예방 또는 치료할 수 있다. 종래의 약들은 단순히 임플란트 주위염에 동반되는 증상들만을 완화하는 정도에 불과하고 임플란트 주위염을 근본적으로 치료하지 못해 최종적으로는 외과적 수술에 이르거나 다시 임플란트를 하여야 하는 상황에 이르렀다. 그러나 본 발명의 칠엽수 추출물은 임플란트 주위염의 증상을 완화시킬 수 있을 뿐만 아니라 임플란트 주위염을 근본적으로 예방 또는 치료 할 수 있는 우수한 효과를 나타낸다. 예를 들면, 본 발명의 칠엽수 추출물은 VEGF의 활성을 효과적으로 억제하여 임플란트 주위염을 예방 또는 치료할 수 있다.

본 명세서에서 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 활성이 없는 담체와 함께 사용되어 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 명세서에서 상기 "예방"이란 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물의 투여로 질환의 발생을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 상기 "치료"란 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물의 투여로 질환이 호전되거나 이롭게 변경되는 것을 포함하며, 질병의 진행을 억제하거나 진행되는 속도를 지연시키는 것을 포함한다.

본 명세서의 "칠엽수(Horse chestnut)"는 칠엽수과(Hippocastanaceae)에 속하며, 컨커 트리(Conker Tree)라고도 불리고, 프랑스에서는 마로니에(marronier)라고도 불린다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 칠엽수 추출물은 잎 또는 종자(사라자)로부터 얻어질 수 있으며, 구체적으로는 잎으로부터 얻어질 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 칠엽수 추출물은 현재 시판되고 있는 칠엽수 잎이나 봄에서 가을에 걸쳐 수확한 잎을 그늘에 말려 사용할 수도 있다. 또는 상기 칠엽수 추출물은 칠엽수 건조 추출물일 수 있으며, 이는 칠엽수 종자로부터 제조되며 트리테르펜 글리코시드(triterpene glycosides), 즉 무수 아에신이 10 중량% 이상 함유되어 있는 것을 표준품으로 사용할 수도 있다. 보다 바람직하게는 칠엽수 잎의 추출물을 사용할 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수는 일본산 칠엽수(Aesculus turbinta BLUME), 중국산 칠엽수(Aesculus chinensis Bge 및 Aesculus wilculus Rehd) 및 유럽산 칠엽수(Aesculus hippocastanum L.) 등이 있으며, 구체적으로는 유럽산 칠엽수(Aesculus hippocastanum L.)일 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린(quercitrin) 및 아프젤린(afzelin)을 포함한다.

본 발명의 칠엽수 추출물에서 퀘르시트린(quercitrin)은 하기 화학식 1로 표시될 수 있다.

[화학식 1]

본 발명의 칠엽수 추출물에서 아프젤린(afzelin)은 하기 화학식 2로 표시될 수 있다.

[화학식 2]

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 2: 1 내지 30: 1의 중량비로 포함할 수 있다. 구체적으로 본 발명의 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 2: 1 내지 20: 1의 중량비로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 3: 1 내지 10: 1의 중량비로 포함할 수 있다. 보다 구체적으로는 본 발명의 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 3: 1 내지 6: 1의 중량비로 포함할 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 알코올 수용액 추출물이다.

상기 알코올은 탄소수 1 내지 4의 알코올일 수 있으며, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 칠엽수 추출물 (ALH-L1005)은 20 내지 30%(w/v) 에탄올 수용액 추출물, 구체적으로는 20 내지 25%(w/v) 에탄올 수용액 추출물, 보다 구체적으로는 25(w/v)% 에탄올 수용액 추출물일 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 칠엽수 추출물 전체 중량을 기준으로 상기 퀘르시트린을 0.5 중량% 내지 5 중량%로 포함할 수 있으며, 구체적으로는 1.5 중량% 내지 3.5 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 칠엽수 추출물 전체 중량을 기준으로 상기 아프젤린을 0.02 중량% 내지 2.5 중량%로 포함할 수 있으며, 구체적으로는 0.1 중량% 내지 1.5 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명의 칠엽수 추출물이 상기 퀘르시트린과 아프젤린을 상기 범위의 중량비로 포함하는 경우, 임플란트 주위염의 예방 또는 치료 효과가 우수할 수 있다.

다만, 상기 칠엽수 추출물의 퀘르시트린과 아프젤린의 함량은 지역, 연도, 수확 시기에 따라 효과가 유지되는 범위 내에서 변경될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린과 아프젤린의 함량은 추출물 내에 포함된 상기 퀘르시트린과 아프젤린의 함량을 정량화하여 측정될 수 있다.

본 발명의 칠엽수 추출물에 포함된 퀘르시트린과 아프젤린은 정량화되는 과정 중 다른 물질로 변환될 수 있으므로 상기 칠엽수 추출물 내에 포함된 상기 성분을 정확하게 정량하기 위해서는 정량화 과정이 엄격하게 조절되어야 할 필요가 있다.

본 발명의 다른 실시예에 있어서, 상기 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린과 아프젤린의 함량은 상기 화합물을 각각 하기 화학식 3으로 표시되는 퀘르세틴(quercetin)과 하기 화학식 4로 표시되는 캄페롤(kaempferol)로 변환시켜 측정할 수 있다.

[화학식 3]

[화학식 4]

구체적으로, 상기 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린과 아프젤린을 분리하지 않고 추출물 내의 상기 물질들을 각각 퀘르세틴과 캄페롤로 변환시켜 퀘르세틴과 캄페롤을 정량화함으로써, 상기 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린과 아프젤린의 함량을 측정할 수 있다. 예를 들면, 상기 칠엽수 추출물을 염산으로 처리하면 상기 추출물 내의 퀘르시트린과 아프젤린이 퀘르세틴과 캄페롤로 변환될 수 있다.

상기 화학식 3으로 표시되는 퀘르세틴(quercetin)과 상기 화학식 4로 표시되는 캄페롤(kaempferol)은 각각 퀘르시트린과 아프젤린보다 상대적으로 안정하며, 정량화 동안 잘 변환되지 않아 정량화가 상대적으로 용이하며, 정확한 정량화가 가능하다. 그 결과, 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린과 아프젤린의 함량을 직접 측정하는 경우와 비교하여 칠엽수 추출물 내의 상기 성분들의 함량을 일관성 있고 정확하게 측정할 수 있다.

또한, 상기 칠엽수 추출물 내에는 퀘르세틴과 캄페롤이 포함되어 있지 않기 때문에 퀘르시트린과 아프젤린를 각각 퀘르세틴과 캄페롤로 변환시킨 후 퀘르세틴과 캄페롤의 함량 측정을 통해 칠엽수 추출물 내에 포함된 퀘르시트린과 아프젤린의 함량을 정확하게 알 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 칠엽수 추출물의 지표물질은 퀘르시트린과 아프젤린일 수 있다. 다만, 상기 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린과 아프젤린은 상기 물질을 각각 퀘르세틴과 캄페롤로 변환한 후 정량화하여 측정될 수 있으며, 이 경우, 상기 칠엽수 추출물은 상기 퀘르세틴과 캄페롤의 함량에 의해 특정될 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에 따르면, 상기 칠엽수 추출물의 지표물질은 퀘르세틴과 캄페롤일 수 있다. 이 경우, 상기 칠엽수 추출물 내에 포함된 퀘르시트린과 아프젤린의 함량을 측정하는 것이 아니라, 상기 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린과 아프젤린을 퀘르세틴과 캄페롤로 변환한 후, 상기 퀘르세틴과 캄페롤을 정량화함으로써, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르세틴과 캄페롤의 함량에 의해 특정될 수 있다.

상기 화학식 1로 표시되는 퀘르시트린을 상기 화학식 3으로 표시되는 퀘르세틴으로 변환하는 공정은 이 분야에 공지된 다양한 방법을 통해 수행될 수 있으며, 구체적으로는 산 가수분해(Acid hydrolysis)법에 의해 수행될 수 있다. 예를 들면, 칠엽수 추출물을 유기 용매에 용해시킨 후 염산 등과 같은 강산으로 처리하면 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린이 퀘르세틴으로 변환될 수 있다.

상기 화학식 2로 표시되는 아프젤린을 상기 화학식 4로 표시되는 캄페롤로 변환하는 공정은 이 분야에 공지된 다양한 방법을 통해 수행될 수 있으며, 구체적으로는 산 가수분해(Acid hydrolysis)법에 의해 수행될 수 있다. 예를 들면, 칠엽수 추출물을 유기 용매에 용해시킨 후 염산 등과 같은 강산으로 처리하면 칠엽수 추출물 내의 아프젤린이 캄페롤로 변환될 수 있다.

본 발명의 실시예 들에 있어서, 상기 약학적 조성물은 상기 약학적 조성물 전체 중량을 기준으로 상기 칠엽수 추출물을 0.005 중량% 내지 70 중량%로 포함할 수 있으며, 구체적으로는 상기 칠엽수 추출물을 0.01 중량% 내지 50 중량%로 포함할 수 있으며, 보다 구체적으로는 상기 칠엽수 추출물을 0.01 중량% 내지 20 중량%로 포함할 수 있으며, 보다 더 구체적으로는 0.01 중량% 내지 10 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있다.

상기 첨가제는 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 결합제, 활택제, 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제, 희석제, 윤활제, 보존제 등일 수 있으며, 이에 한정되지 않는다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 첨가제는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 코포비돈, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 수크로오스, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 젤라틴, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아르산마그네슘, 스테아르산알루미늄, 스테아르산칼슘, 백당, 마그네슘, 덱스트로스, 소르비톨, 탈크, 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르, 리퀴드 파라핀, 링거액, 왁스, 파라핀, 트라가칸트, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연, 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 경구 또는 비경구용의 인체 또는 수의용으로 적합하게 제형화될 수 있다. 구체적으로는 적합한 제형은 문헌[예: Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA]에 개시되어 있는 것일 수 있다.

예를 들면, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 칠엽수 추출물을 캅셀의 부형제와 같은 첨가제 없이 충전하거나 미립화된 고체 담체 또는 액체 담체 또는 그 양자와 균일하게 충분히 접촉시킨 후, 필요한 경우 생성물을 바람직한 제제로 성형할 수 있다. 또는 상기 칠엽수 추출물은 연고 기제 등과 함께 연고 형태로 제형화되거나 폴리머 등과 함께 분무제 형태로 제형화될 수 있다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 구체적으로는 정제 또는 캡슐일 수 있다. 이러한 고형제제는 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 첨가제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴, 마그네슘, 스티레이트, 탈크 등을 섞어 조제할 수 있다.

경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 포함되며, 흔히 사용되는 단순희석제인 물 및 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 첨가제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 국소 적용을 위한 크림, 연고, 겔, 분무제 또는 패취 등이 포함 될 수 있다.

비수성용제 및 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

국소 적용을 위한 크림, 연고, 겔, 분무제 또는 패취 등의 기제로는 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 안정화제, 발포제, 계면활성제, 유화제 등이 사용될 수 있으며, 구체적으로는 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연, 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 약효를 증가시키지는 않으나 약학적 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 성분을 더 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 개체에 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미한다. 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있으며, 구체적으로는 경구 투여되거나 또는 국소투여될 수 있으며, 보다 구체적으로는 정제 또는 캡슐제 형태로 경구 투여되거나 또는 특정 조직에 용이하게 부착될 수 있도록 분무제 형태로 국소 투여될 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있다. 구체적으로는 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 정제, 캅셀제, 연질캅셀제, 수액제, 과립제, 환제 등으로 경구 투여될 수 있으며, 또는 주사용 형태(용액, 현탁액 또는 유탁액)로 비경구 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 정제 또는 캅셀의 형태로 경구 투여될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 임플란트 주위염을 예방 또는 치료를 위해 단독으로 투여될 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에 있어서, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 임플란트 주위염을 치료를 위해 공지의 약물과 병용하여 투여될 수 있다. 구체적으로 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 다른 약물과 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 순차적으로 투여되는 경우, 공지의 다른 약물 투여 전에 투여될 수 도 있고 또는 공지의 다른 약물의 투여 후에 투여될 수도 있다.

본 발명의 다른 실시예에 있어서, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 임플란트 주위염을 치료하기 위한 공지의 외과적 시술 또는 수술과 함께 병용하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 외과적 시술 또는 수술 전에 투여되거나 외과적 시술 또는 수술과 함께 투여될 수도 있으며, 또는 외과적 수술 또는 치료 후에 투여될 수도 있다.

본 발명의 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 개체에 투여하여 임플란트 주위염을 예방 또는 치료할 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어, "개체"는 임플란트 주위염을 가지고 있으며, 본 발명의 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물을 투여하여 임플란트 주위염이 예방 또는 치료될 수 있는 인간을 포함한 말, 양, 돼지, 염소, 개 등의 포유동물을 의미하며, 구체적으로는 인간을 의미한다.

본 발명의 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어, 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 체중, 성별, 연령, 건강상태, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물의 1일 투여량은 0.05㎎/㎏ 내지 200㎎/㎏ 일 수 있고, 구체적으로는 0.1 ㎎/㎏내지 100mg/kg일 수 있고, 상기 투여량은 환자의 나이, 체중 및 질환의 정도에 따라 적절하게 조절될 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물의 단위 제형당 함량은 1㎎ 내지 2g일 수 있으며, 구체적으로는 5㎎ 내지 1g일 수 있고, 보다 구체적으로는 10mg 내지 1g일 수 있으며, 보다 더 구체적으로 100mg 내지 800mg일 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 1일 1회 또는 1일 다회 투여될 수 있으며, 구체적으로는 1일 2회 내지 1일 3회 투여될 수 있으나, 이는 환자의 나이, 체중 및 질환의 정도에 따라 적절하게 조절될 수 있다.

본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하고, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린 및 아프젤린을 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 상기 "식품 조성물"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미한다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물을 포함하는 상기 식품 조성물에 포함된 상기 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 2: 1 내지 30: 1의 중량비로 포함할 수 있다. 구체적으로 본 발명의 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 2: 1 내지 20: 1의 중량비로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 3: 1 내지 10: 1의 중량비로 포함할 수 있다. 보다 구체적으로는 본 발명의 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 3: 1 내지 6: 1의 중량비로 포함할 수 있다.

상기 식품 조성물에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 전술한 약학적 조성물에서 언급된 사항이 서로 모순되지 않는 한 동일하게 적용될 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 식품 조성물을 그대로 섭취되거나 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 섭취될 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 섭취될 수 있다.

상기 식품 조성물의 종류는 특별히 제한되지 않는다. 상기 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물의 예로는 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함할 수 있다.

본 발명의 칠엽수 추출물을 포함하는 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명은 칠엽수를 분쇄하는 제1 단계 및 분쇄된 칠엽수를 알코올 수용액에 넣고 추출하는 제2 단계를 포함하는 칠엽수 추출물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 알코올은 탄소수 1 내지 4의 알코올일 수 있으며, 구체적으로는 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합물일 수 있으며, 보다 구체적으로는 에탄올일 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 제2단계의 추출은 약 40℃ 내지 약 90℃에서 수행될 수 있으며, 구체적으로는 약 45℃내지 약 85℃에서 수행될 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 제2 단계 중 추출은 공지의 추출법 예컨대, 초음파 추출법 또는 환류 추출법을 사용할 수 있으나, 이를 한정하지 않는다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 방법에서 칠엽수를 분쇄하기 전, 상기 칠엽수를 건조하는 단계를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 방법은 상기 제2 단계에서 수득된 추출액을 여과 및 농축하는 제 3단계를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 방법은 제3단계에서 수득된 농축액을 건조하여 분말로 제조하는 제4 단계를 더 포함할 수 있다.

발명의 실시예들에 있어서, 상기 제1 단계와 제2 단계 사이에 분쇄된 칠엽수를 초임계 처리하는 단계를 더 포함할 수 있다.

상기 초임계 처리는 이산화탄소를 유체로 사용할 수 있으며, 처리 온도, 압력, 및 처리 시간은 당업자가 적절하게 조절할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린과 아프젤린을 포함한다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 칠엽수 추출물 전체 중량을 기준으로 상기 퀘르시트린을 0.5 중량% 내지 5 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명의 실시예들에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 칠엽수 추출물 전체 중량을 기준으로 상기 아프젤린을 0.02 중량% 내지 2.5 중량%로 포함할 수 있으며, 구체적으로는 0.1 중량% 내지 1.5 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명은 상기 제조 방법으로 제조된 칠엽수 추출물을 유효 성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공할 수 있다. 상기 약학적 조성물은 앞서 설명한 약학적 조성물의 설명과 동일할 수 있다.

본 발명의 상기 제조 방법으로 제조된 칠엽수 추출물을 유효 성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공할 수 있다. 상기 식품 조성물은 앞서 설명한 식품 조성물의 설명과 동일할 수 있다.

본 발명은 칠엽수 추출물을 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하여 임플란트 주위염을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린과 아프젤린을 포함한다.

본 발명은 칠엽수 추출물의 임플란트 주위염의 예방 또는 치료하는 용도를 제공한다. 상기 용도에 있어서 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린과 아프젤린을 포함한다.

본 발명은 임플란트 주위염을 예방 또는 치료하는데 사용하기 위한 약제의 제조를 위한 칠엽수 추출물의 용도를 제공한다. 상기 용도에 있어서 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린과 아프젤린을 포함한다.

본 발명의 약학적 조성물에서 언급된 사항은 서로 모순되지 않는 한, 추출물의 제조방법, 식품 조성물, 치료방법, 용도에도 동일하게 적용될 수 있다.

본 발명의 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 임플란트 주위염의 예방 또는 치료 효과를 갖는다.

도 1은 칠엽수 추출물의 VEGF 억제 효과를 나타내는 도이다.
도 2은 NO 생성의 결과를 나타낸 도이다. 상기 도 2에서 세로축은 흡광도를 나타낸다.
도 3는 세포독성실험(Cytotoxicity Assay)의 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 ELISA로 측정한 인터루킨-6의 발현량을 나타낸 도이다.
도 5는 ELISA로 측정한 사이클로옥시게네이즈의 발현량을 나타낸 도이다.
도 6은 ELISA로 측정한 프로스타글란딘의 발현량을 나타낸 도이다.
도 7은 칠엽수 추출물의 HPLC 결과를 나타내는 도이다.
도 8은 퀘르시트린과 아프젤린 표준품의 HPLC 결과를 나타내는 도이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

제조예 1. 칠엽수 추출물의 제조

대한민국 대전광역시 도마동과 전민동에서 채집한 칠엽수 (Aesculus hippocastanum L.)의 잎을 상온, 그늘에서 건조시킨 후에 분쇄하였다. 분쇄된 잎 30g을 25(w/v)% 에탄올 600ml로 2시간 동안 80℃에서 추출하고, 추출액을 여과하였다. 여과액을 농축하여 칠엽수 잎의 추출물을 약 3.4g을 수득하였다. 이하에서는 실시예 1에서 제조된 칠엽수 추출물을 ALH-L1005로 명명하였다.

실시예 1. VEGF 억제 효과 확인

96well plate (Corning, USA)에 HUVEC(Human Umbilical Vein Endothelial Cells)를 3X10⁴ cells/well로 접종하였으며 이때 배지는 EBM-2 + 2% FBS배지를 사용하였다. 24시간 후에 serum free media에 VEGF 또는 VEGF + 칠엽수 추출물(ALH-L1005) (칠엽수 추출물의 농도: 6.25, 12.5, 25, 50, 100ug/ml)을 처리하여 48시간 배양 후 Well 당 XTT 시약을 50ul 처리하여 4시간 반응 시킨 후 ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) reader (Molecular Devices, USA)로 490nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기 측정된 결과는 하기 도 1에 나타내었다.

도 1에서 확인되는 바와 같이 본원발명에 따른 상기 칠엽수 추출물을 처리한 군은 HUVEC의 증식이 칠엽수 추출물을 처리하지 않은 군과 비교하여 현저히 억제된 것을 알 수 있었다. 이로부터 칠엽수 추출물이 VEGF를 억제함을 알 수 있다.

따라서 본 발명의 칠엽수 추출물은 VEGF를 효과적으로 억제하여 임플란트 주위염을 효과적으로 치료할 수 있음을 알 수 있다.

실시예 2. 염증 반응 억제 효과 확인

염증 반응에서의 대식세포(macrophage)는 TNF-α, 인터루킨-6 (IL-6), IL-1β와 같은 염증매개물질과 같은 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)을 생성하고, 유도형 NO 생성효소 (inducible nitric oxide synthase; iNOS)와 사이클로옥시게네이즈-2(cyclooxygenase-2; COX-2)를 합성하여 NO 및 프로스타글란딘 (prostaglandin E2; PGE2)를 생성한다. 상기와 같은 전염증성 사이토카인은 염증 반응을 유도하며, 숙주의 면역 반응이 적절하지 못하는 경우, 염증성 질환을 유발할 수 있다.

따라서, 염증반응으로부터 생성되는 NO, 전염증성 사이토카인의 생성 억제를 확인하여 항염증 효과를 확인할 수 있다.

실시예 2-1. NO 생성 억제

그리스(Griess) 반응을 이용하여 배양액 내의 NO(Nitric Oxide)의 농도를 측정 하였다. RAW 264.7 세포를 1X10⁶ cells/mL로 조절한 후 24 well plate에 접종하고 37℃ 5% CO₂ incubator에서 2시간 전 배양하였다. 그 후 실시예 1에서 수득된 칠엽수 추출물을 0, 25, 50, 75, 100 ug/mL 처리하고 1시간 후에 1 ug/mL의 LPS로 자극 하여 24시간 본 배양하였다. 이렇게 얻어진 상층액과 Griess 시약 (1% 술파닐아미드(sulfanilamide) + 0.1% 나프틸렌디아민 디하이드로클로라이드(naphthylendiamine dihydrochloride), 1:1)을 1:1로 실온에서 10분간 반응시켜 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용해 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기 측정된 결과는 하기 표 1 및 도 2에 나타내었다. 하기 표 1에서는 LPS만을 처리한 군의 흡광도를 기준(100%)으로 아무것도 처리하지 않은 군(Control) 및 LPS와 칠엽수 추출물을 모두 처리한 군이 나타내는 흡광도를 %를 표시하였다.

[표 1]

상기 표 1 및 도 2의 결과로 본 발명의 칠엽수 추출물은 25, 50, 75, 100 ug/mL의 농도에서 NO 생성을 억제하는 것을 확인할 수 있었다.

실시예 2-2. 세포독성시험(Cytotoxicity assay)

Murine macrophage cell line RAW264.7 세포를 96-well plate (Corning, USA)에 세포수가 1 X 10⁴ cells/well이 되게 분주하고 2시간 CO₂ incubator 에서 배양하였다(37℃ 5% CO₂). 배양 후 본 발명의 칠엽수 추출물을 0, 25, 50, 75, 100 ug/mL 농도별로 각각 처리하여 37℃에서 1시간 배양하였다. 배양 후 LPS (Lipopolysaccharides)를 1ug/mL 농도로 처리하여 37℃에서 24시간 배양하였다. Well 당 XTT 시약을 50 ul 처리하여 4시간 반응 시킨 후 ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) reader (Molecular Devices, USA)로 490nm에서 흡광도 변화를 측정하여 세포의 생존율을 백분율로 나타내었다.

상기 측정된 결과는 하기 표 2 및 도 3에 나타내었다.

[표 2]

상기 표 2 및 도 3의 결과로 본 발명의 칠엽수 추출물은 25, 50, 75, 100 ug/mL의 농도에서 세포 독성이 없는 것을 알 수 있었으며, 실시예 2-1의 NO 생성 억제효과는 세포 독성에 의한 것이 아님을 확인 할 수 있었다.

실시예 2-3. 인터루킨-6의 발현 억제

RAW 264.7 세포의 세포배양액 내의 인터루킨-6(IL-6)의 분비량은 ELISA kit (Mouse ELISA set, R&D Systems Inc.)를 이용하여 측정하였다. 세포배양액을 얻기 위해 RAW 264.7 세포를 5 X 10⁶ cells/mL로 조절하여 24 well plate에 접종하고 2시간의 전 배양 후 0, 25, 50, 75, 100 ug/mL 농도 별 본 발명의 칠엽수 추출물과 1 ug/mL의 LPS를 처리하였다. 그 후 24시간의 본 배양을 거쳐 원심분리를 통해 상층액을 얻었다. ELISA는 마이크로플래이트(microplate)에 포획 항체(capture antibody)로 anti-mouse IL-6를 분주하여 실온에서 하룻밤 동안 코팅(coating) 시켰다. 이후 워시 버퍼(Wash Buffer) (#WA126, R&D Systems Inc.)로 세척하고 Reagent Diluent (#DY995, R&D Systems Inc.)로 블로킹(blocking)하였고 워시 버퍼(Wash Buffer)로 세척한 뒤 각 microplate well에 세포 배양 상층액을 분주하고 실온에서 2시간 반응시켰다. 반응 후 워시 버퍼(Wash Buffer)로 세척하고 희석한 biotinylated anti-mouse IL-6 detection antibody와 스트렙타비딘-홀스래디쉬 퍼옥시다아제 컨쥬게이트(streptavidin-horseradish peroxidase conjugate)를 분주하여 실온에서 20분 반응시켰다. 그 후 다시 워시 버퍼(Wash Buffer)로 세척하고 기질 용액(Substrate Solution) (#DY999, R&D Systems Inc.)을 첨가하여 실온에서 20분 동안 암반응시켰다. 정지액 (Stop Solution) (#DY994, R&D Systems Inc.)으로 반응을 종료시킨 후 마이크로플래이트 리더(microplate reader)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기의 실험으로 측정된 하기 표 3 및 도 4에 나타내었다.

[표 3]

상기 표 3 및 도 4의 결과로 보아, 본 발명의 칠엽수 추출물은 25, 50, 75, 100 ug/mL의 농도에서 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)인 인터루킨-6의 발현량을 감소 시키는 것을 확인하였다.

상기의 모든 실험 결과를 종합적으로 고려하여 보았을 때, 본 발명의 칠엽수 추출물은 NO 생성을 억제하고, 세포 독성이 없으며, 전염증성 사이토카인인 인터루킨-6의 발현량을 감소시키는 것을 알 수 있었다. 상기의 결과로 지질다당류(Lipopolysaccharide; LPS)에 의하여 염증이 유도된 대식세포의 Raw264.7에 대한 NO생성과 세포내 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)인 Interleukin-6의 발현량을 감소시킴으로써 항염증 작용을 나타내는 것을 확인할 수 있다.

실시예 2-4. 사이클로옥시게네이즈(COX-2)의 발현 억제

MG63 세포의 세포배양액 내의 사이클로옥시게네이즈(COX-2)의 분비량은 ELISA kit (R&D Systems Inc.)를 이용하여 측정하였다. 세포배양액을 얻기 위해 MG63 세포를 1 X 10⁶ cells/mL로 조절하여 60mm culture plates에 접종하고 2시간의 전 배양 후 0, 25, 50, 75, 100 ug/mL 농도 별 본 발명의 칠엽수 추출물과 10 ug/mL의 LPS를 처리하였다. 그 후 48시간의 본 배양을 거쳐 배지는 버리고 세포는 PBS로 두 번 워시하고 lysis buffer를 이용하여 단백질을 분리하여 ELISA에 사용하였다. ELISA는 마이크로플래이트(microplate)에 포획 항체(capture antibody)로 anti-human/mouse COX-2를 분주하여 실온에서 하룻밤 동안 코팅(coating) 시켰다. 이후 워시 버퍼(Wash Buffer) 로 세척하고 Block buffer로 블로킹(blocking)하였고, 이를 다시 워시 버퍼(Wash Buffer)로 세척한 뒤 각 microplate well에 분리된 세포단백질을 분주하고 실온에서 2시간 반응시켰다. 반응 후 워시 버퍼(Wash Buffer)로 세척하고 희석한 biotinylated anti-human/mouse COX-2 detection antibody와 스트렙타비딘-홀스래디쉬 퍼옥시다아제 컨쥬게이트(streptavidin-horseradish peroxidase conjugate)를 분주하여 실온에서 20분 반응시켰다. 그 후 다시 워시 버퍼(Wash Buffer)로 세척하고 기질 용액(Substrate Solution)을 첨가하여 실온에서 20분 동안 암반응시켰다. 정지액 (Stop Solution)으로 반응을 종료시킨 후 마이크로플래이트 리더(microplate reader)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기 측정된 결과는 하기 표 4 및 도 5에 나타내었다.

[표 4]

상기 결과는 임플란트 주위염의 in vitro model인 MG63을 이용한 세포실험에서 본 발명의 칠엽수 추출물이 농도에 따라 사이클로옥시게네이즈(COX-2)의 발현량을 감소하는 것을 보여준다. 상기의 결과로 칠엽수 추출물이 지질다당(Lipopolysaccharide; LPS)에 의하여 염증이 유도된 MG63에 대한 사이클로옥시게네이즈(COX-2)의 발현량을 감소시킴으로써 항염증 작용을 나타내어 임플란트주위염에 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있다.

실시예 2-5. 프로스타글란딘(PGE2)의 발현 억제

MG63 세포의 세포배양액 내의 프로스타글란딘(PGE2)의 분비량은 ELISA kit (R&D Systems Inc.)를 이용하여 측정하였다. 세포배양액을 얻기 위해 MG63 세포를 1 X 10⁶ cells/mL로 조절하여 60mm culture plates에 접종하고 2시간의 전 배양 후 0, 25, 50, 75, 100 ug/mL 농도 별 본 발명의 칠엽수 추출물과 10 ug/mL의 LPS를 처리하였다. LISA는 마이크로플래이트(microplate)에 세포배양액과 primary antibody solution(anti-PGE2 mouse monoclonal antibody)를 넣고 상온에서 1시간 동안 반응시켰으며, 여기에 PGE2 conjugate를 첨가하고 추가로 2시간 동안 반응시켰다(competitive ELISA). 이후 워시 버퍼(Wash Buffer)로 총 4번을 세척하고 기질 용액(Substrate Solution)을 첨가하여 실온에서 30분 동안 암반응시켰다. 정지액 (Stop Solution)으로 반응을 종료시킨 후 마이크로플래이트 리더(microplate reader)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기 측정된 결과는 하기 표 5 및 도 6에 나타내었다.

[표 5]

상기 결과는 임플란트 주위염의 in vitro model인 MG63을 이용한 세포실험에서 본 발명의 칠엽수 추출물이 농도에 따라 염증매개물질인 프로스타글란딘(PGE2) 의 생성을 억제하는 것을 보여준다. 상기의 결과로 칠엽수 추출물이 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)인 프로스타글란딘(PGE2)의 생성을 억제함으로써 항염증 작용을 나타내어 임플란트주위염에 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있다.

실험예 1. 칠엽수 추출물 내의 퀘르시트린, 아프젤린 및 이의 함량(%)

칠엽수 추출물인 ALH-L1005가 퀘르시트린과 아프젤린을 포함하는지 여부를 다음과 같이 확인하였다.

ALH-L1005 100mg을 튜브에 넣고 100ml의 100% MeOH에 충분히 용해시킨 후 0.22 μm 필터로 여과한 후 HPLC를 수행하였으며, 그 결과는 도 7과 같다.

또한, 퀘르시트린 표준물질(Sigma-Aldrich) 및 아프젤린 표준물질(Sigma-Aldrich)에 대해서도 동일하게 HPLC를 수행하였으며, 그 결과는 도 8과 같다.

HPLC 수행 조건은 다음과 같다.

i) 컬럼: CAPCELL PAK C18 UG120 (SHISEIDO, 4.6x250mm, 5 μm)

ii) 검출기: UV 254 nm

iii) 유량: 1.0 ml/min

iv) 이동상

이동상 A: 0.1% (w/v) Formic acid\이동상 B: Acetonitrile

v) 주입량: 10μL

도 7 및 도 8로부터 제조예 1의 칠엽수 추출물이 퀘르시트린과 아프젤린을 포함하는 것이 확인되었다. 구체적으로 상기 도 2에서 퀘르시트린 표준품의 경우 RT(retention time) 값이 약 15분 정도되는 위치에서 피크를 나타내었고 아프젤린 표준품의 경우, RT(retention time) 값이 약 18분 되는 위치에서 피크를 나타내었다. 한편, 상기 도 1의 칠엽수 추출물의 경우, 역시 동일하게 RT(retention time) 값에서 피크를 나타내었으며, 이로부터 칠엽수 추출물인 ALH-L1005가 퀘르시트린과 아프젤린을 포함함이 명확하게 확인되었다.

또한, ALH-L1005에 대한 상기 HPLC로부터 측정한 퀘르시트린과 아프젤린의 중량비는 약 4:1~5:1 정도에 해당하였으며, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린을 칠엽수 전체 중량을 기준으로 약 1.88~2.20중량%로 포함하였으며, 아프젤린을 기준으로 칠엽수 전체 중량을 기준으로 약 0.41~0.5중량% 포함하였다.

Claims (9)

1. 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린 및 아프젤린을 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
3. 제2항에 있어서,
   상기 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 2: 1 내지 30: 1의 중량비로 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   상기 칠엽수 추출물은 알코올 수용액 추출물인 것인 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
   상기 조성물의 전체 중량을 기준으로, 상기 칠엽수 추출물의 함량은 0.005 중량% 내지 70 중량% 인 것인 임플란트 주위염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
6. 칠엽수를 분쇄하는 제1 단계; 및
   분쇄된 칠엽수를 알코올 수용액에 넣고 추출하는 제2 단계를 포함하며,
   아프젤린과 퀘르시트린을 포함하는 칠엽수 추출물의 제조 방법.
7. 칠엽수 추출물을 유효성분으로 포함하는 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물.
8. 제7항에 있어서,
   상기 칠엽수 추출물은 퀘르시트린 및 아프젤린을 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물.
9. 제8항에 있어서,
   상기 칠엽수 추출물은 상기 퀘르시트린과 상기 아프젤린을 2: 1 내지 30: 1의 중량비로 포함하는 것인 임플란트 주위염 예방 또는 개선용 식품 조성물.

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