KR20200099137A

KR20200099137A - 세포 요법 및 감마 세크레타제 억제제의 조합

Info

Publication number: KR20200099137A
Application number: KR1020207016230A
Authority: KR
Inventors: 다미안 제이. 그린; 스탠리 알. 리델; 멜리사 웍스
Original assignee: 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드; 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터
Priority date: 2017-11-06
Filing date: 2018-11-06
Publication date: 2020-08-21
Also published as: AU2018359907A1; WO2019090364A1; BR112020008812A2; US12193994B2; CN111886012A; IL274361A; MA50564A; JP2023025191A; SG11202003427XA; JP7233425B2; US20200289565A1; EP3706754A1; MX2020004568A; US20250090542A1; CA3080395A1; JP2021502343A

Abstract

본 발명은, 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제를 포함하는 면역 요법제, 및 감마 세크레타제의 억제제의 투여를 포함하는 조합 요법들을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 세포를 조작, 준비, 및 생성하는 방법, 상기 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제를 함유하는 조성물, 및 그를 함유하고 예를 들어 상기 제공된 조합 요법에 따라 상기 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제를 사용, 생성 및 투여하기 위한 키트 및 장치를 제공한다.

Description

세포 요법 및 감마 세크레타제 억제제의 조합

관련 출원의 상호 참조

이 출원은 "세포 요법 및 감마 세크레타제 억제제의 조합"이라는 명칭으로 2017.11.06.자로 출원된 미국 가특허출원 제62/582,308호, "세포 요법 및 감마 세크레타제 억제제의 조합"이라는 명칭으로 2017.11.07.자로 출원된 미국 가특허출원 제62/582,937호, "세포 요법 및 감마 세크레타제 억제제의 조합"이라는 명칭으로 2017.05.01.자로 출원된 "세포 요법 및 감마 세크레타제 억제제의 조합"이라는 명칭으로 출원된 미국 가특허출원 제62/665,450호에 기초한 우선권 주장 출원으로 상기 출원들의 내용은 그 전체가 본원에 참조 병합되었다.

서열 목록의 참조에 의한 편입

본 출원은 전자 형식으로 서열 목록과 함께 제출된다. 서열 목록은 2018년 11월 6일에 작성된 735042014240SeqList.TXT라는 파일로 제공되며, 크기가 320,126 바이트이다. 서열 목록의 전자 형식의 정보는 그 전체가 참조로서 편입된다.

분 야

본 발명은 한 양상에서 입양 세포 요법(adoptive cell therapy)과 같은 면역 요법 예를 들어 T 세포 요법, 및 감마 세크레타제 억제제(gamma secretase inhibitor)와 관련된 방법, 조성물 및 용도에 관한 것이다. 제공된 방법, 조성물 및 용도는, T 세포 요법, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)-발현 T 세포, 예를 들어 항-BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)-발현 T 세포로 조작된 세포로 조작된 세포를 포함한 일반적으로 조작된 T 세포 요법과 병행하는 감마 세크레타제 억제제의 투여 또는 사용과 관련된 조합 요법을 위한 것들을 포함한다. 또한, 본 방법에 사용하기 위한 조성물, 대상체에 대한 투여 방법, 제조 물품 및 키트가 제공된다. 일부 양상에서, 방법 및 세포의 특징은 면역 치료제에 의해 리쿠르트된(recruited) 내인성 면역 세포를 위한 T 세포의 활성, 효능, 지속성, 체적증가 및/또는 증식을 증가 또는 개선시킨다.

면역 치료, 예를 들어 입양 요법을 위해, 조작된 T 세포의 투여에 대한 다양한 전략이 이용 가능하다. 예를 들어 T 세포 발현 유전적으로 조작된 항원 수용체, 예를 들어 CAR을 조작하고, 상기 세포를 함유하는 조성물을 대상체에게 투여하기 위한 전략들이 이용가능하다. 예를 들어 대상체에 투여할 때 세포의 지속성, 활성 및/또는 증식을 개선시키는 것과 같은, 세포의 효능을 개선시키는 개선된 전략이 필요하다. 상기 요구에 부합하는 방법, 조성물, 키트, 및 시스템이 제공된다.

본 발명은, 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제를 포함하는 면역 요법제, 및 감마 세크레타제의 억제제의 투여를 포함하는 조합 요법들을 제공한다. 일부 양상에서, 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 제공된 방법은 면역 요법제 또는 면역 치료제, 예를 들어 입양 세포 요법을 위한 세포, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 포함하는 조성물의 투여, 및 감마 세크레타제 억제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포는, B 세포 성숙 항원(BCMA), 예를 들어 표면 BCMA에 결합하는 항원-결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 치료를 위한 대상체를 선택하는 것을 포함하되, 상기 대상체는 세포(예를 들어 종양/암 세포) 상에 저발현의 표면 BCMA을 갖는 것이다. 일부 구현예에서, 세포 요법제는 재조합 수용체, 예를 들어 BCMA에 결합하지 않는 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 세포(예를 들어 종양/암 세포) 상에서 막내 절단(intramembrane cleavage)을 금지하되, 상기 세포 요법제는 상기 수용체를 특이적으로 표적화한다. 일부 구현예에서, 조합 요법은 일반적으로 감마 세크레타제 억제제의 투여, 및 세포 요법제, 예를 들어 입양 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 위한 세포를 포함하는 조성물의 투여를 포함하되, 상기 감마 세크레타제 억제제는 세포 요법제의 투여에 후속한다. 일부 구현예에서, 요법은 세포 요법제의 활성을 조정한다.

본 발명은, (a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 단계; 및 (b) 상기 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 치료방법을 제공하는 것으로, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도(measure)는, 가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 존재하에 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는다.

본 발명은 질환 또는 장애를 갖는 대상체에게 세포 요법제를 투여하는 것을 포함하는 치료방법을 제공하는 것으로, 상기 세포 요법제는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하되, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않되, 상기 세포 요법제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 감마 세크레타제의 억제제를 사전에 투여받았고/받았거나 그것으로 치료를 수행한다.

본 발명은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에게 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 것을 포한하는 치료방법을 제공하는 것으로, 상기 세포 요법제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 감마 세크레타제의 억제제를 사전에 투여받았고/받았거나 그것으로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양으로, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는다.

본 발명은, (a) 대상체에서 암의 세포가, (i) CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커(surface plasma cell marker)를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되고 (ii) 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준(threshold level) 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 포함하는 암세포를 갖는 대상체를 선택하는 단계; (b) 상기 단계 (a)에서 선택된 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 단계; 및 (c) 상기 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명은, (a) 암을 갖는 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 단계로서, 상기 대상체는 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 포함하는 혈장 세포를 갖는 것으로 선택되는 것인 단계; 및 (b) 상기 대상체에 암 치료용 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 단계를 포함하는 치료방법을 제공한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 표면 BCMA의 역치 발현 수준은 복수의 대조 대상체에서 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 평균 또는 중간 발현 또는 수준 보다 낮으며, 선택적으로 상기 대조 대상체는 건강하거나 또는 정상 대상체의 군이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 표면 BCMA를 발현하는 상기 대상체에서, 표면 BCMA의 저 발현 수준은, 혈장 세포, 또는 혈장 세포 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 상기 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만 또는 10% 미만 또는 약 그 미만일 때 존재하거나; 또는 표면 BCMA를 발현하는 상기 대상체에서, 표면 BCMA의 역치 수준은, 혈장 세포, 또는 혈장 세포 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 상기 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만 또는 10% 미만 또는 약 그 미만이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 표면 BCMA의 발현은 유세포 분석(flow cytometry) 및/또는 면역 분석에 의해서 결정된다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 항원-결합 도메인은 가용성 BCMA를 결합하지 않거나 또는 표면 BCMA에 결합하는 상기 항원-결합 도메인의 친화도 보다 낮은 친화도를 갖는 가용성 BCMA에 결합한다. 일부 구현예에서, 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 대한 항원-결합 도메인의 친화도는 상기 가용성 BCMA에 대한 친화도 보다 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 또는 10배 높다.

제공된 구현예 중의 임의의 일부에서, 항-BCMA CAR은 본원에서 기술된 항-BCMA CAR이다. 상기 방법 및 본원에서의 용도에 사용하기 위한 제공된 항-BCMA CAR 중에는, 상기 항체 또는 항원-결합 단편이 SEQ ID NO: 24로 제시되는 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 24와 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_H 영역을 함유하고; SEQ ID NO: 25로 제시되는 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 25와 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR의 항체 또는 항원-결합 단편은 각각 SEQ ID NOS: 173, 174 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR의 항체 또는 항원-결합 단편은 각각 SEQ ID NOS: 176, 177 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR의 항체 또는 항원-결합 단편은 각각 SEQ ID NOS: 178, 179 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR의 항체 또는 항원-결합 단편은 각각 SEQ ID NOS: 180, 181 및 182의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 186, 187 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 V_H 영역은 SEQ ID NO: 24로 제시된 서열 세트를 포함하고 상기 V_L 영역은 SEQ ID NO: 25로 제시된 서열 세트를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 단일-사슬 항체 단편, 예를 들어 scFv이다. 일부 구현예에서, 상기 scFv는 SEQ ID NO: 188로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 188과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항-BCMA CAR은 SEQ ID NO: 124로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 124와 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 항-BCMA CAR은 SEQ ID NO: 125로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 125와 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 BCMA의 막내 절단을 억제한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.35 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.35 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM, 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.35 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.25 nM 내지 0.35 nM, 0.35 nM 내지 10 nM, 0.35 nM 내지 5 nM, 0.35 nM 내지 1 nM, 0.35 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM or 5 nM 내지 10 nM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 막내 절단을 억제한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 약 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 막내 절단을 억제한다.

본 발명은, (a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하되, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는 것인 단계; 및 (b) 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 치료방법을 제공한다.

본 발명은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 것을 포함하는 치료방법을 제공하는 것으로, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하되, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는 것이며, 상기 세포 요법제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 감마 세크레타제의 억제제를 사전에 투여받았고/받았거나, 그것으로 치료를 수행한다.

본 발명은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 것을 포함하는 치료방법을 제공하는 것으로, 상기 억제제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 사전에 투여받았고/받았거나, 그것으로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하되, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는 것이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 표적 항원은 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산(anti-folate) 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME; Preferentially expressed antigen of melanoma), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원 중에서 선택된다.

본 발명은, (a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)에서의 투여 후 상기 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 치료방법을 제공한다.

본 발명은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 것을 포함하는 치료방법을 제공하는 것으로, 상기 억제제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 사전에 투여받았고/받았거나, 그것으로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것이다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은, B 세포 성숙 항원(B cell maturation antigen; BCMA), 탄산무수화 효소 9(carbonic anhydrase 9; CAIX), Her2/neu(receptor tyrosine kinase erbB), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린(mesothelin), CEA, 및 B형 간염 표면 항원(hepatitis B surface antigen), 항-엽산 수용체(antifolate receptor), CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(epithelial glycoprotein 2; EPG-2), 상피 당단백질 40(epithelial glycoprotein 40, EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(folate binding protein; FBP), FCRL5, FCRH5, 태아성 아세틸콜린 수용체(fetal acethycholine receptor), GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kinase insert domain receptor; kdr), 카파 경질 사슬 사슬(kappa light chain), 루이스(Lewis) Y, L1-세포 접착 분자(L1-cell adhesion molecule; L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 우선적으로 발현되는 흑색종 항원(PRAME), 서바이빈(survivin), TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 폴레이트 수용체-a(folate receptor-a), CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 듀얼 항원, 암-고환 항원(a cancer-testes antigen), 메소텔린(mesothelin), 뮤린(murine) CMV, 뮤신 1(mucin 1, MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원(oncofetal antigen), ROR1, TAG72, VEGF-R2, 태아성 암 항원(carcinoembryonic antigen; CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름스 종양 1(Wilms Tumor 1; WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체 특이 항원(a pathogen-specific antigen) 및 유니버셜 태그(universal tag)와 관련된 항원으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 Muc1이다. 본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 표적 항원은 BCMA이다. 일부 구현예에서, 상기 BCMA는 표면 BCMA이다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 BCMA, 노치(Notch) 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2(Ephrin B2), 베타글리칸(Betaglycan)(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1(Delta1), E-카드헤린(E-cadherin), N-카드헤린(N-cadherin), HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R 또는 아멜로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된 하나 이상의 표적의 절단을 억제 또는 감소키거나 또는 억제 또는 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 절단이 감소되거나 또는 억제되는 하나 이상의 표적은 Muc1이다. 일부 구현예에서, 절단이 감소되거나 또는 억제되는 상기 하나 이상의 표적은 BCMA이다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, BCMA, 노치(Notch) 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2, 베타글리칸(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1, E-카드헤린, N-카드헤린, HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R 또는 아멜로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된 하나 이상의 표적의 절단은 상기 감마 세크레타제 억제제에 의해서 억제 또는 감소되거나 또는 억제 또는 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 절단이 감소되거나 또는 억제되는 하나 이상의 표적은 Muc1이다. 일부 구현예에서, 절단이 감소되거나 또는 억제되는 상기 하나 이상의 표적은 BCMA이다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 0.01 nM 내지 1 μnM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 1 μnM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 1 μ1 nM, 0.1 nM 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 1 μ0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 1 μto 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 1 μnM, 5 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 1μM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 표적을 억제한다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 1 μM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM, 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 표적을 억제한다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제 또는 비-펩티드 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제이고 상기 펩티드 억제제는 펩티드 알데하이드 유도체, 디플루오로케톤 유도체, 하이드록시에틸렌 디펩티드 이소테레(isotere) 유도체, 알파-나선형 펩티드 유도체 및 디펩티드 유사체로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비-펩티드 억제제이고 상기 비-펩티드 억제제는 벤조디아제핀 유도체 또는 설폰아미드 유도체이다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 전이 상태 억제제 또는 비-전이 상태 억제제이다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비스테로이드계 항-염증성 약물이다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날(leucinal); 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003(Merck); semagacestat/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드], LY411575, L-685,458, BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)으로부터 선택된다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 하기 구조식의 화합물 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염이다:

본 발명은, (a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 단계; 및 (b) 상기 대상체에 하기 구조식의 화합물 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 치료방법을 제공한다:

본 발명은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하되, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고, 상기 세포 요법제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 하기 구조식의 화합물 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염을 사전에 투여받았고/받았거나, 하기 구조식의 화합물 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염으로 치료를 수행 중인 것을 포함한느 치료방법을 제공한다:

본 발명은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 하기 구조식의 화합물 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하되, 상기 투여 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 사전에 투여받았고/받았거나 또는 상기 세포 요법제로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 치료방법을 제공한다:

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMWMAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 Muc1이다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 BCMA이다. 일부 구현예에서, 상기 BCMA는 표면 BCMA이다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 가용성 BCMA를 결합하지 않거나 또는 표면 BCMA에 결합시키기 위한 상기 재조합 수용체의 친화도 보다 낮은 친화도를 갖는 가용성 BCMA에 결합한다. 일부 구현예에서, 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 대한 항원-결합 도메인의 친화도는 상기 가용성 BCMA에 대한 친화도 보다 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 또는 10배 높다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 대상체는 표면 BCMA를 발현하는 혈장 세포, 또는 암 세포 또는 골수종 세포 또는 혈장 세포 마커를 발현하는 세포를 포함한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 대상체는 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)를 포함하는 세포를 갖는 것으로 선택되고/되거나; 저발현의 표면 BCMA를 포함하는 혈장 세포를 갖는 것에 기초하여 억제제 및/또는 세포 요법제의 투여를 위한 대상체를 선택한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 표적은 표적 항원이고 상기 감마 세크레타제 억제제는 상기 표적 항원의 절단을 억제한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 억제제의 투여는, 상기 억제제의 투여 이전에 대상체 중의 세포로부터의 BCMA 절단 또는 쉐딩(shedding)의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포로부터의 BCMA 절단 또는 쉐딩을 감소시키고; 상기 억제제의 투여 이전에 대상체의 혈청 중의 BCMA의 수준 또는 양과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 대상체의 혈청 중에서 검출된 BCMA의 수준 또는 양을 감소시키고/시키거나; 상기 억제제의 투여 이전에 대상체 중의 세포 상의 표면 BCMA의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 발현을 증가시킨다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 억제제의 투여는, 상기 억제제의 투여 이전에 대상체 중의 세포로부터의 표적 또는 표적 항원의 절단 또는 쉐딩의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과까지, 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포로부터의, 표적 또는 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 절단 또는 쉐딩을 감소시키고; 상기 억제제의 투여 이전에 대상체의 혈청 중의 BCMA의 표적 또는 표적 항원의 수준 또는 양과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 상기 대상체의 혈청 중에서 검출된, 상기 표적 또는 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 수준 또는 양을 감소시키고/시키거나; 상기 억제제의 투여 이전에 대상체 중의 세포 상의 표면 표적 또는 표적 항원의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포 상의 표면 표적 또는 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 발현을 증가시킨다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 장애는 암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 B 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 다발성 골수종, 형질 세포종, 형질 세포 기원의 암 및/또는 B 세포 기원의 암이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 억제제는 경구, 피하 또는 정맥 내 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 경구 투여된다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 억제제는 적어도 투여되거나 또는 1일 6회, 1일 5회, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 1주 3회, 1주 1회 이상, 또는 1회만 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 1주 3회 투여된다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여는 적어도 또는 적어도 약, 또는 14일, 적어도 또는 적어도 약, 또는 21일 또는 적어도 또는 적어도 약, 또는 28일인 처리 사이클에서 수행된다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 억제제는 0.5mg 내지 500mg, 0.5mg 내지 250mg, 0.5mg 내지 100mg, 0.5mg 내지 50mg, 0.5mg 내지 25mg, 0.5mg 내지 10mg, 0.5mg 내지 5.0mg, 0.5mg 내지 2.5mg, 0.5mg 내지 1.0mg, 1.0mg 내지 500mg, 1.0mg 내지 250mg, 1.0mg 내지 100mg, 1.0mg 내지 50mg, 1.0mg 내지 25mg, 1.0mg 내지 10mg, 1.0mg 내지 5.0mg, 1.0mg 내지 2.5mg, 2.5mg 내지 500mg, 2.5mg 내지 250mg, 2.5mg 내지 100mg, 2.5mg 내지 50mg, 2.5mg 내지 25mg, 2.5mg 내지 10mg, 2.5mg 내지 5.0mg, 5.0mg 내지 500mg, 5.0mg 내지 250mg, 5.0mg 내지 100mg, 5.0mg 내지 50mg, 5.0mg 내지 25mg, 5.0mg 내지 10mg, 10mg 내지 500mg, 10 mg 내지 250mg, 10 mg 내지 100mg, 10 mg 내지 50mg, 10 mg 내지 25mg, 25mg 내지 500mg, 25mg 내지 250mg, 25mg 내지 100mg, 25mg 내지 50mg, 50mg 내지 500mg, 50mg 내지 250mg, 50mg 내지 100mg, 100mg 내지 500mg, 100mg 내지 250mg 또는 250mg 내지 500mg의 양으로 투여되거나 혹은 상기 억제제의 투여 각각은 독립적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 적어도 또는 적어도 약 0.5mg, 1.0mg, 2.5mg, 5.0mg, 10.0mg, 25mg, 50mg, 100mg, 250mg 또는 500mg인 양이거나 또는 약 상기 양으로 투여되거나, 또는 상기 억제제의 투여 각각은 독립적으로 투여된다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 유전자 이식(transgenic) T 세포수용체(TCR) 또는 기능성 비-T 세포수용체이다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 키메라 수용체이고, 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 항원 및, ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극 시그널링 영역(costimulatory signaling region)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB로부터 유도된 도메인이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 대상체는 인간이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 BCMA는 인간 BCMA이거나 또는 상기 표적 항원은 인간 항원이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제는 T 세포 요법제를 포함하고 유전자 조작된 세포의 상기 용량은 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+이다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차(primary) T 세포이다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제는 대상체에 자가조직의(autologous) 세포를 포함한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제는 대상체에 동종이계의(allogeneic) 세포를 포함한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 세포 요법은, 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하거나, 상기 세포 요법은 각각 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개 또는 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 또는 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개 또는 약 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC의 투여를 포함한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 세포 요법은, 5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 2.5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 0.5 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 0.5 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC의 투여를 포함한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여 개시는, 상기 세포 요법제의 투여 개시 이전에, 상기 투여와 동시에, 또는 상기 투여 후에 수행한다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 상기 세포 요법제의 투여 개시 이전에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여는, 상기 세포 요법제의 투여 개시전 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주 이내, 또는 약 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주 이내에 수행한다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 상기 세포 요법제의 투여 개시후에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여는, 상기 세포 요법제의 투여 개시후 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상, 또는 약 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상 이내에 수행한다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는, 상기 세포의 투여 개시후 7일, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상까지 투여된다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 억제제는 대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 상기 세포 요법제의 세포의 수가 세포의 투여 개시후의 선행 시점에서의 대상체 중에서와 비교하여 감소되고; 혈액 중에서 검출가능한 상기 세포 요법제의 세포의 수가, 세포의 투여 개시 후 상기 대상체의 혈액 중에서 검출가능한 세포의 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 약 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 그의 피크 또는 최대수 미만이고/이거나; 상기 세포 요법제의 세포의 피크 또는 최대 수준 후의 시점에서 상기 대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 세포로부터 유도된 세포의 수가 상기 대상체의 상기 혈액 중의 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만일 때에 투여된다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 상기 세포 요법제의 투여전에 림프구 고갈 화학요법제(lymphodepleting chemotherapy)를 투여하는 것을 포함하고/하거나 상기 대상체는 상기 세포의 투여전에 림프구 고갈 화학 요법제를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 림프구 고갈 화학요법은 대상체에 플루다라빈(fludarabine) 및/또는 사이클로포스파미드(cyclophosphamide)를 포함한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 스테로이드를 투여하는 것을 포함하고, 선택적으로 상기 스테로이드는 상기 억제제의 투여 개시전에, 그와 동시에 및/또는 그 후에 투여되고, 선택적으로 상기 스테로이드는 상기 억제제를 사용한 치료 사이클도중에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone)이거나 그를 포함한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 세포 요법은 감마 세크레타제 억제제의 부재하에서 상기 세포 요법제가 대상체에 투여되는 방법과 비교하여 증가되거나 대상체에서 연장된 팽창 및/또는 지속을 나타낸다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 방법은 그에 의해서 하나 이상의 증상 또는 질환 또는 장애의 결과를 예방, 경감 또는 개선시킨다.

본 발명은, (a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 B 세포 성숙 항원(BCMA)를 표적화하거나 또는 그에 대해 특이적인 치료제 또는 요법제를 투여하는 단계; 및 (b) 상기 대상체에 감마 세크레타제 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 치료방법을 제공한다.

본 발명에 제공된 방법 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 치료제 또는 요법제는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 선택적으로 이중 특이적 항체(bispecific antibody)이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료제 또는 요법제는 T 세포 항원, 선택적으로 CD2 또는 CD3을 추가로 표적화하거나 또는 그에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 상기 치료제 또는 요법제는 제 2 항원을 추가로 표적화하거나 또는 그에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체이고, 선택적으로 상기 제 2 항원은 CD19, CD20, CD22, CD33, CD38, CS1, ROR1, GPC3, CD123, IL-13R, CD138, c-Met, EGFRvIII, GD-2, NY-ESO-1, MAGE A3, 및 글리콜리피드(glycolipid) F77로부터 선택된다.

본 발명에 제공된 방법들 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날; 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003(Merck); semagacestat/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드], LY411575, L-685,458, BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)으로부터 선택된다.

본 발명은, (a) 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 세포; (b) 감마 세크레타제의 억제제로서, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 감마 세크레타제의 억제제를 포함하는 조합물을 제공한다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 BCMA의 세포내 절단을 억제한다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.35 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.35 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM, 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.35 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.25 nM 내지 0.35 nM, 0.35 nM 내지 10 nM, 0.35 nM 내지 5 nM, 0.35 nM 내지 1 nM, 0.35 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM or 5 nM 내지 10 nM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 막내 절단을 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 막내 절단을 억제한다.

본 발명은, (a) 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포로서, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는 것인 세포; 및 (b) 감마 세크레타제의 억제제를 포함하는 조합물을 제공한다.

본 발명은, (a) 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포로서, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는 것인 세포; 및 (b) 감마 세크레타제의 억제제로서, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 감마 세크레타제의 억제제를 포함하는 조합물을 제공한다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은, 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2, NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원 및 범용 태그(universal tag)와 관련된 항원으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 Muc1이다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, BCMA, 노치 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2, 베타글리칸(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1, E-카드헤린, N-카드헤린, HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R, 및 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 절단을 감소시키거나 억제하는 상기 하나 이상의 표적은 Muc1을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단을 감소시키거나 억제하는 상기 하나 이상의 표적은 BCMA를 포함한다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, BCMA, 노치 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2, 베타글리칸(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1, E-카드헤린, N-카드헤린, HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R, 및 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된 하나 이상의 표적의 절단은 감마 세크레타제 억제제에 의해서 억제되거나 또는 감소되거나 또는 억제될 수 있거나 또는 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 절단을 감소시키거나 억제하는 상기 하나 이상의 표적은 Muc1을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단을 감소시키거나 억제하는 상기 하나 이상의 표적은 BCMA를 포함한다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 0.01 nM 내지 1μM, 0.01 nM 내지 100 nM, 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 1μM, 0.05 nM 내지 100 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 1μM, 0.1 nM 내지 100 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 1μM, 0.25 nM 내지 100 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 1μM, 0.5 nM 내지 100 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 1μM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM, 5 nM 내지 1μM, 5 nM 내지 100 nM, 5 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 1μM, 10 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 1μM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 표적을 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 1μM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 표적을 억제한다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제 또는 비-펩티드 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제이고 상기 펩티드 억제제는 펩티드 알데하이드 유도체, 디플루오로케톤 유도체, 하이드록시에틸렌 디펩티드 이소테레 유도체, 알파-나선형 펩티드 유도체 및 디펩티드 유사체로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비-펩티드 억제제이고 상기 비-펩티드 억제제는 벤젠디아제핀 유도체 또는 설폰아미드 유도체이다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 전이 상태 억제제 또는 비-전이 상태 억제제이다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비스테로이드계 항-염증성 약물이다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날; 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003(Merck); semagacestat/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드], LY411575, L-685,458, BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)으로부터 선택된다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 하기 구조식의 화합물 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염이다:

본 발명은, (a) 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포; 및 (b) 하기 구조식의 화합물 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조합물을 제공한다:

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은, B 세포 성숙 항원(BCMA), 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2, NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원 및 범용 태그와 관련된 항원으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 Muc1이다.

본 발명에 제공된 조합물 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 BCMA이다. 일부 구현예에서, 상기 BCMA는 표적 BCMA이다. 일부 구현예에서, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 표면 BCMA에 결합하기 위한 상기 재조합 수용체의 친화도 보다 낮은 친화도를 갖는 가용성 BCMA에 결합하지 않거나 또는 결합한다.

본 발명에 제공된 임의의 조합물의 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 유전자 이식(transgenic) T 세포수용체(TCR) 또는 기능성 비-T 세포수용체이다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 키메라 수용체이고, 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 항원 및, ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극 시그널링 영역(costimulatory signaling region)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB로부터 유도된 도메인이다.

본 발명에 제공된 임의의 조합물의 일부 구현예에서, 상기 BCMA는 인간 BCMA이거나 또는 상기 표적 항원은 인간 항원이다.

본 발명에 제공된 임의의 조합물의 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포이다.

본 발명에 제공된 임의의 조합물의 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 세포는 대상체에 투여하기 위한 약학 조성물로서 제형화되며, 선택적으로 상기 세포는 질환 또는 질환 상태를 치료하기 위한 하나 이상의 단위 용량으로 투여하기 위해 제형화된다.

본 발명에 제공된 임의의 조합물의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 대상체에 투여하기 위한 약학 조성물로서 제형화되며, 선택적으로 상기 감마 세크레타제 억제제는 질환 또는 질환 상태를 치료하기 위한 하나 이상의 단위 용량으로 투여하기 위해 제형화된다.

본 발명은, 청구항 99 내지 139 중의 어느 항의 조합물 및 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 상기 조합물의 성분들을 투여하기 위한 지침(instructions)을 갖는 키트를 제공한다.

본 발명은, (a) 세포의 표면에서 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현을 탐지하기 위한 시약; (b) 감마 세크레타제 억제제로서, 선택적으로 상기 감마 세크레타제 억제제가 하나 이상의 단위 용량으로 제형화된 감마 세크레타제 억제제; 및 (c) 암을 갖는 대상체의 혈장 세포의 표면에서 BCMA를 탐지하기 위한 시약의 사용 결과에 기초하여 대상체에 억제제를 투여하기 위한 지침을 갖는 키트를 제공한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은 혈장 세포가 저발현의 표면 BCMA 및/또는 역치 수준 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 특정한다. 일부 구현예에서, 표면 BCMA의 발현의 역치 수준은 복수의 대조 대상체에서 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 평균 또는 중간 발현 또는 수준보다 낮으며, 선택적으로 상기 대조 대상체는 건강하거나 또는 정상인 대상체의 군이다. 일부 구현예에서, 표면 BCMA를 발현하는 상기 대상체에서, 표면 BCMA의 저 발현 수준은, 혈장 세포, 또는 혈장 세포 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 상기 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만 또는 10% 미만 또는 약 그 미만일 때 존재하거나; 또는 표면 BCMA를 발현하는 상기 대상체에서, 표면 BCMA의 역치 수준은, 혈장 세포, 또는 혈장 세포 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 상기 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만 또는 10% 미만 또는 약 그 미만이다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 키트는 추가로, 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 함유하며, 선택적으로 상기 유전자 조작된 세포는 질환 또는 질환 상태를 갖는 대상체에 하나 이상의 단위 용량의 투여용으로 제형화된다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 질환 또는 질환 상태를 갖는 표적 항원에 특이적으로 결합한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 대한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 개시전에, 투여 개시와 동시에 또는 투여 개시후에, 상기 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 상기 대상체에 투여하는 것을 특정하고, 선택적으로 상기 유전자 조작된 세포는 질환 또는 질환 상태를 갖는 대상체에 하나 이상의 단위 용량의 투여용으로 제형화된다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 대한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 개시전에, 상기 대상체에 상기 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 세포 요법제의 투여 개시 전 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주 이내에 또는 약 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주 이내에 상기 억제제를 투여하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 대한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 개시후에, 상기 대상체에 상기 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 것을 특정한다.

본 발명은, (a) 감마 세크레타제 억제제로서, 선택적으로 상기 감마 세크레타제 억제제가 하나 이상의 단위 용량으로 제형화된 감마 세크레타제 억제제; 및 (b) 대상체에 대한 세포 요법제의 투여 개시후에 상기 감마 세크레타제 억제제를 상기 대상체에 투여하기 위한 지침으로서, 상기 세포 요법제가 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 지침을 갖는 키트를 제공한다.

본 발명은, (a) 감마 세크레타제 억제제로서, 선택적으로 상기 감마 세크레타제 억제제가 하나 이상의 단위 용량으로 제형화된 감마 세크레타제 억제제; 및 및 (b) 대상체에 대한 세포 요법제의 투여 개시후에 상기 감마 세크레타제 억제제를 상기 대상체에 투여하기 위한 지침으로서, 상기 세포 요법제는, 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 지침을 갖는 제공한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여 개시는, 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 개시 후 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 14일, 21일, 28일 이상 이내에 또는 약 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 1주, 14일, 21일, 28일 이상 이내에 수행한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 억제제는, 대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 세포 요법제의 세포의 수가 세포의 투여 개시후의 선행 시점에서의 대상체 중에서와 비교하여 감소되고; 혈액 중에서 검출가능한 세포 요법제의 세포의 수가, 세포의 투여 개시 후 대상체의 혈액 중에서 검출가능한 세포의 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 약 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 그의 피크 또는 최대수 미만이고/이거나; 상기 세포 요법제의 세포의 피크 또는 최대 수준 후의 시점에서 상기 대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 세포로부터 유도된 세포의 수가 대상체의 혈액 중의 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만일 때에 투여된다는 것을 특정한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 억제제는, 상기 세포의 투여 개시후 7일, 14일, 21일, 28일 이상까지 투여하기 위한 것임을 특정한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은, B 세포 성숙 항원(BCMA), 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2, NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원 및 범용 태그와 관련된 항원으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 Muc1, 선택적으로 인간 Muc1이다. 임의의 구현예의 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 인간 항원이다.

일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 BCMA, 선택적으로 인간 BCMA이다. 일부 구현예에서, 상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 표면 BCMA에 결합하기 위한 상기 재조합 수용체의 친화도 보다 낮은 친화도를 갖는 가용성 BCMA에 결합하지 않거나 또는 결합한다.

본 발명에 제공된 임의의 키트의 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 유전자 이식(transgenic) T 세포수용체(TCR) 또는 기능성 비-T 세포수용체이다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 키메라 수용체이고, 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 항원 및, ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극 시그널링 영역(costimulatory signaling region)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB로부터 유도된 도메인이다.

본 발명에 제공된 임의의 키트의 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포이다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, BCMA, 노치 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2, 베타글리칸(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1, E-카드헤린, N-카드헤린, HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R, 및 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 절단을 감소시키거나 억제하는 상기 하나 이상의 표적은 Muc1을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단을 감소시키거나 억제하는 상기 하나 이상의 표적은 BCMA를 포함한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, BCMA, 노치 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2, 베타글리칸(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1, E-카드헤린, N-카드헤린, HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R, 및 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된 하나 이상의 표적의 절단은 감마 세크레타제 억제제에 의해서 억제되거나 또는 감소되거나 또는 억제될 수 있거나 또는 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 절단을 감소시키거나 억제하는 상기 하나 이상의 표적은 Muc1을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단을 감소시키거나 억제하는 상기 하나 이상의 표적은 BCMA를 포함한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 0.01 nM 내지 1μM, 0.01 nM 내지 100 nM, 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 1μM, 0.05 nM 내지 100 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 1μM, 0.1 nM 내지 100 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 1μM, 0.25 nM 내지 100 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 1μM, 0.5 nM 내지 100 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 1μM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM, 5 nM 내지 1μM, 5 nM 내지 100 nM, 5 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 1μM, 10 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 1μM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 표적을 억제한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 1μM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 표적을 억제한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제 또는 비-펩티드 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제이고 상기 펩티드 억제제는 펩티드 알데하이드 유도체, 디플루오로케톤 유도체, 하이드록시에틸렌 디펩티드 이소테레 유도체, 알파-나선형 펩티드 유도체 및 디펩티드 유사체로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비-펩티드 억제제이고 상기 비-펩티드 억제제는 벤젠디아제핀 유도체 또는 설폰아미드 유도체이다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 전이 상태 억제제 또는 비-전이 상태 억제제이다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비스테로이드계 항-염증성 약물이다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날; 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003(Merck); semagacestat/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드], LY411575, L-685,458, BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)으로부터 선택된다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 하기 구조식의 화합물 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염이다:

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 장애는 암이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 B 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 상기 암은 다발성 골수종, 형질 세포종, 형질 세포 기원의 암 및/또는 B 세포 기원의 암이다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 용량은, 각각의 경우, 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하거나, 상기 세포 요법은 각각 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개 또는 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 또는 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개 또는 약 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개를 포함하고, 선택적으로 상기 지침은 세포의 용량을 포함하는 하나 또는 복수의 단위 용량에 대응하는 세포의 용량 및/또는 볼륨을 포함하는 하나 또는 복수의 단위 용량의 투여를 특정한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 용량은, 5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 2.5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 0.5 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 0.5 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC를 포함하고, 선택적으로 상기 지침은 세포의 용량을 포함하는 하나 또는 복수의 단위 용량에 대응하는 세포의 용량 및/또는 볼륨을 포함하는 하나 또는 복수의 단위 용량의 투여를 특정한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은 상기 억제제를 경구, 피하 또는 정맥 내 투여하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은 상기 억제제를 경구 투여하는 것을 특정한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 억제제가 적어도 1일 6회, 1일 5회, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 1주 3회, 1주 1회 이상, 또는 1회만 투여되는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은 억제제가 1주 3회 투여되는 것을 특정한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 억제제의 투여가 적어도 또는 적어도 약, 또는 14일, 적어도 또는 적어도 약, 또는 21일 또는 적어도 또는 적어도 약, 또는 28일인 처리 사이클에서 수행되는 것을 특정한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 억제제가 0.5mg 내지 500mg, 0.5mg 내지 250mg, 0.5mg 내지 100mg, 0.5mg 내지 50mg, 0.5mg 내지 25mg, 0.5mg 내지 10mg, 0.5mg 내지 5.0mg, 0.5mg 내지 2.5mg, 0.5mg 내지 1.0mg, 1.0mg 내지 500mg, 1.0mg 내지 250mg, 1.0mg 내지 100mg, 1.0mg 내지 50mg, 1.0mg 내지 25mg, 1.0mg 내지 10mg, 1.0mg 내지 5.0mg, 1.0mg 내지 2.5mg, 2.5mg 내지 500mg, 2.5mg 내지 250mg, 2.5mg 내지 100mg, 2.5mg 내지 50mg, 2.5mg 내지 25mg, 2.5mg 내지 10mg, 2.5mg 내지 5.0mg, 5.0mg 내지 500mg, 5.0mg 내지 250mg, 5.0mg 내지 100mg, 5.0mg 내지 50mg, 5.0mg 내지 25mg, 5.0mg 내지 10mg, 10mg 내지 500mg, 10 mg 내지 250mg, 10 mg 내지 100mg, 10 mg 내지 50mg, 10 mg 내지 25mg, 25mg 내지 500mg, 25mg 내지 250mg, 25mg 내지 100mg, 25mg 내지 50mg, 50mg 내지 500mg, 50mg 내지 250mg, 50mg 내지 100mg, 100mg 내지 500mg, 100mg 내지 250mg 또는 250mg 내지 500mg의 양으로 투여되거나 혹은 상기 억제제의 투여 각각은 독립적으로 투여되는 것을 특정한다.

본 발명에 제공된 키트 중의 어느 하나의 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 억제제가 적어도 또는 적어도 약 0.5mg, 1.0mg, 2.5mg, 5.0mg, 10.0mg, 25mg, 50mg, 100mg, 250mg 또는 500mg인 양이거나 또는 약 0.5mg, 1.0mg, 2.5mg, 5.0mg, 10.0mg, 25mg, 50mg, 100mg, 250mg 또는 500mg인 양으로 투여되거나, 또는 상기 억제제의 투여 각각은 독립적으로 투여되는 것을 특정한다.

도 1은 24시간의 공-배양(co-culture) 후 상이한 농도의 대표적인 감마 세크레타제 억제제(LY3039478)로 공-배양된 OPM2, MM1 또는 RPMI-8826 상의 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현 수준을 나타낸다. X축 근처의 막대(bar)는 상기 억제제에 대해 평가된 C_max 및 C_min을 시사한다.
도 2a 및 도 2b는 약 150시간의 공-배양 후에 대표적인 감마 세크레타제 억제제(LY3039478)의 존재 또는 부재하에 항-BCMA CAR-발현 T 세포로 공-배양된 OPM2 세포(도 2a) 또는 RPMI-8226 세포(도 2b)의 용해 백분율(% 사멸률)을 나타낸다. 도 2c는 대표적인 감마 세크레타제 억제제(LY3039478)의 존재 또는 부재하에 항-BCMA CAR-발현 T 세포로 공-배양된 OPM2 세포의 용해 백분율(% 사멸률)을 나타낸다. X축 근처의 막대는 상기 억제제에 대해 평가된 C_max 및 C_min을 시사한다.
도 3a 내지 3d는 24시간의 공-배양(co-culture) 후 대표적인 감마 세크레타제 억제제(LY3039478)의 존재 또는 부재하에 OPM2(도 3a 및 3c) 또는 RPMI-8226 세포(도 3b 및 3d)로 공-배양된 항-BCMA CAR-발현 T 세포의 상청액에서 IFN-감마 및 IL-2의 생성을 나타낸다. 도 3e는 OPM2 세포 및 상이한 농도의 대표적인 감마 세크레타제 억제제(LY3039478)로 공-배양된 항-BCMA CAR-발현 T 세포의 상청액에서 IFN-감마의 생성을 나타낸다. X축 근처의 막대는 상기 억제제에 대해 평가된 C_max 및 C_min을 시사한다.
도 4a 및 4b는 대표적인 감마 세크레타제 억제제(LY3039478)(비히클 대조, 스퀘어(square))의 존재하에 또는 1μM(위쪽 삼각형) 또는 0.001μM(아래쪽 삼각형)의 농도를 갖는 상기 억제제의 존재하에 10 내지 17일에 걸쳐서 MM1S로 다중 라운드(multiple rounds)의 자극 후 건강한 공여자(도 4a) 및 다발성 골수종을 갖는 공여자(도 4b)로부터 기원하여 얻어진 항-BCMA CAR-발현 T 세포의 세포수를 나타낸다.
도 5a 및 5b는 대표적인 감마 세크레타제 억제제(LY3039478)(좌측 막대)의 존재하에 또는 0.001μM(중간 막대) 또는 0.001μM(우측 막대)의 농도를 갖는 상기 억제제의 존재하에 day 4a에서 MM1S 세포로 제 2 라운드의 자극 후에 건강한 공여자(도 5a) 및 다발성 골수종을 갖는 공여자(도 5b)로부터 기원하여 얻어진 항-BCMA CAR-발현 T 세포의 상청액에서 IFN-감마, IL-2 및 IFN-알파의 생성을 나타낸다.
도 6은 단일 용량의 LY3039478(3mg/kg)의 경구 투여 후 상이한 시점에서 감마 세크레타제 억제제 LY3039478의 혈장 수준을 나타낸다.
도 7은 인간 다발성 골수종(RPMI-8226)에 대한 마우스 이종 이식편 모델에서 단일 용량의 LY3039478(3mg/kg)의 경구 투여 후 시간에 따른 BCMA의 혈장 수준을 나타낸다.
도 8은 단일 용량의 LY3039478의 경구 투여 후 시간 경과에 따른 인간 다발성 골수종(RPMI-8226)에 대한 마우스 이종 이식편 모델로부터 유도된 피하 종양 세포에서 유세포 분석에 의해 평가된 표면 BCMA 발현을 나타낸다.
도 9a 내지 9b는 인간 다발성 골수종에 대한 마우스 이종 이식편 모델에서 상이한 치료의 영향을 평가한, 실시예 5에 기재된 연구 결과를 나타낸다. 도 9a는 연구도중 수일에 걸친 종양 부피(mm)를 도시한다. 그래프 아래의 점선 화살표는 실시예 5에 기재된 LY3039478이 투여된 기간을 나타낸다. 도 9b는 CAR T 주사 후 65일에 걸쳐서 처리된 동물들 사이의 생존율을 나타낸다.
도 10a 내지 10b는 실시예 5에 기술된 다양한 조건하에서 처리된 인간 다발성 골수종 이종 이식 마우스 모델의 동물의 CAR T 주사(CAR T 주사 후 일수) 후 시간(일)에 따른 CD4+ CAR T+ 및 CD8+ CAR T+ 말초 혈액 카운트를 나타낸다. 도 10a는 시간에 따른 혈액 당(μL) CD4+ CAR T+ 세포 카운트를 도시한다. 도 10b는 시간 경과에 따른 혈액의 μL 당 CD8+ CAR T+ 세포수를 나타내고, 화살표가 있는 GSI 막대는 투여되는 경우 LY3039478(GSI) 전달 시점을 나타낸다.
도 11은 실시예 5에 기재된 연구에서 저용량(le6) CAR T 주사 후 7일 및 15일에 취한 위성 종양 다이제스트(satellite tumor digest)로부터 1 x 10⁶개의 세포 당 CD4+(상부) 및 CD8+(하부) CAR + T 세포수를 나타낸다.
도 12a는 실시예 5에 기재된 상이한 치료 요법의 개시 후 7일 및 15일에 BCMA의 혈청 수준을 나타낸다.
도 12b는 실시예 5에 기술된 다양한 처리군으로부터의 마우스에서 항-BCMA CAR T 세포 주사 후 7일 및 15일에 취한 종양 다이제스트로부터 유세포 분석에 의해 평가된 표면 BCMA 발현을 나타낸다.
도 13a는 0.3:1의 이펙터 대 표적 비율에서, 또는 처리되지 않은 경우(RPMI, OPM2 또는 MM1.S 단독)에 만성 자극된 항-BCMA CAR+ T 세포 및 DMSO(DMSO 대조군) 또는 감마 세크레타제 억제제 화합물 LY3039478(1μM GSI)로 처리될 때 시간 경과에 따른 RPMI-8226, OPM2 및 MM1.S 세포 생존율을 나타낸다.
도 13b는 만성적으로 자극된 항-BCMA CAR+ T 세포 및 DMSO(DMSO 대조군) 또는 LY3039478(1μM GSI)로 처리되거나 미처리된 경우(RPMI, OPM2또는 MM1.S 단독)에 RPMI-8226, OPM2 및 MM1.S 세포의 사멸 백분율을 나타낸다.
도 13c는 0.3:1 또는 1:1의 이펙터 대 표적 비율에서 만성적으로 자극된 항-BCMA CAR+ T 세포 및 LY3039478(1μM GSI) 또는 DMSO(DMSO 대조군)를 갖는 RPMI-8226, OPM2 및 MM1.S 세포의 24시간 배양 후 상청액 IL-2 농도를 나타낸다.
도 14는 상이한 농도의 감마 세크레타제 억제제 LY3039478 또는 DMSO(veh.)에서 BCMA 함유 비드와 항-BCMA CAR+ T 세포의 24시간 배양 후 상청액에서의 IFNg, IL-2 및 TNFa 농도를 도시한다.
도 15a는 실시예 8에 기재된 바와 같이 입으로 3회 용량의 소분자 감마 세크레타제 억제제(GSI) LY3039478의 3회 용량의 투여 전(GSI 전) 및 (GSI 후) 다발성 골수종 환자 세포로부터 유래된 샘플에서 세포 표면의 BCMA 항체 결합능(BCMA ABC)을 나타낸다.
도 15b는 실시예 8에 기재된 바와 같이 입으로 3회 용량의 소분자 세크레타제 억제제(GSI) LY3039478을 경구로 투여하기 전에 (GSI 전) 및 (GSI 후) 측정가능한 표면 BCMA 발현을 갖는 것으로 결정된 환자 샘플에서 혈장 세포의 백분율을 도시한다.

본 발명은, 면역 요법제, 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제, 및 감마 세크레타제의 억제제의 투여를 포함하는 조합 요법들을 제공한다. 일부 양상에서, 상기 제공된 방법은 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 대한 면역 요법제 또는 면역 치료제, 예를 들어 입양 세포 요법을 위한 세포, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 포함하는 조성물의 투여, 및 감마 세크레타제 억제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서 감마 세크레타제 억제제는 상기 면역 요법제, 예를 들어 세포 요법제의 투여 개시전, 투여 개시와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 세포(예를 들어 종양/암 세포) 상에서 감마 세크레타제, 예를 들어 BCMA의 표적의 막내 절단을 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포는, B 세포 성숙 항원(BCMA), 예를 들어 표면 BCMA에 결합하는 항원-결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 치료를 위한 대상체를 선택하는 것을 포함하되, 상기 대상체는 세포, 예를 들어 종양/암세포, 예를 들어 CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되는 대상체 중의 암의 세포 상의 저발현의 표면 BCMA를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체, 예를 들어 BCMA와는 다른 항원에 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다.

세포 요법, 예를 들어 T 세포-기반 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법(대상 질환 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체를 발현하는 세포 뿐 아니라 다른 입양 면역 세포를 투여하는 것을 포함하는 요법들 입양 T 세포 요법들을 포함함)은 암 및 기타 질환 및 장애의 치료에 효과적일 수 있다. 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 재조합 수용체의 T 세포 표면 상에서의 조작된 발현은 T 세포 특이성의 재배향(redirection)을 가능케 한다. 임상 연구에서, CAR-T 세포, 예를 들어 항-CD19 CAR-T 세포는 백혈병 환자와 림프종 환자 모두에서 지속가능한, 완전 반응을 생성하였다[문헌 「Porter et al (2015) Sci Transl Med, 7:303ra139; Kochenderfer (2015) J Clin Oncol, 33: 540-9; Lee et al (2015) Lancet, 385:517-28; Maude et al (2014) N Engl J Med, 371:1507-17」 참조].

특정 상황상, 입양 세포 요법에 사용할 수 있는 접근법은 항상 완전히 만족스럽지는 않을 수 있다. 일부 상황에서, 최적 효능은 표적, 예를 들어 표적 항원을 인식하고 그를 표적하는, 대상체 내의 적절한 위치, 종양, 및 그 환경으로 이동하고, 그곳으로 위치하고 성공적으로 진입하는 상기 투여된 세포의 능력에 달려있을 수 있다. 일부 상황에서, 최적의 효능은, 활성화되는, 증폭하는, 예를 들어 세포독성 살상 및 사이토카인과 같은 다양한 인자들의 분비를 포함하는 다양한 효과기 기능을 작용, 지속, 예를 들어 장기간 지속, 분화, 전이 또는 특정 표현형적 상태로의 재프로그래밍에 관여 (예를 들어 장기 기억, 덜 분화된, 및 효과기 상태), 질환의 국소적 미세환경에서 면역 억제 상태를 회피하거나 저감, 청소(clearance) 다음에 효과적이고 강인한 재반응(recall response) 및 표적 리간드 또는 항체에 대한 재노출을 제공, 및 고갈, 아네르기, 말초 내성, 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 회피하거나 감소시키는 상기 투여된 세포의 능력에 달려있을 수 있다.

일부 구현예에서, 조작된 세포의 노출 및 지속은 환자에게 투여 한 후에 감소되거나 내려간다. 그러나, 일부 경우, 재조합 수용체를 발현하는 투여 되는 세포에 대하여 대상체의 노출 증가는 (예를 들어 세포수 증가 또는 지속 시간 증가) 입양 세포 요법에서의 효능 및 치료 결과를 향상시킬 수 있다는 관찰이 있다. 다수의 임상 실험에서 다양한 CD19-발현 암을 가진 대상체들에 대해 상이한 CD19-표적화 CAR-발현 T 세포를 투여한 다음에 수행된 1차 분석은 CAR-발현 세포에의 더 많고 및/또는 더 긴 노출 정도와 치료 결과 사이의 상관 관계를 밝혀주었다. 이러한 결과는, 중증의 또는 상당한 종양 부담을 가진 개체들에서의 환자 생존과 관해도 포함하였다.

일부 양상에서, 제공된 방법 및 용도는 치료된 대상체의 특정 그룹에서와 같이, 특정한 대체 방법에 비해 향상되거나 보다 내구성 있는 반응 또는 효능을 제공하거나 달성하게 해준다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법들은 예를 들어 T 세포 요법과 같은 입양 세포 요법을 위한 세포(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 포함하는 조성물과 같은 T 세포 요법제, 및 감마 세크레타제의 억제제를 투여함으로써 유리한 장점을 갖는다.

상기 제공된 방법은 감마 세크레타제 억제제의 존재하에서 BCMA-발현 세포에 노출된 후 감마 세크레타제 억제제가 BCMA에 특이적인 재조합 수용체-발현 세포의 하나 이상의 기능적 활성을 개선시킨다는 관찰에 기초한다. 이러한 기능적 활성은 예를 들어 항원-의존성 세포 용해 활성 및/또는 하나 이상의 사이토카인 생성 능력을 포함한다. 일부 양상에서, 개선된 활성은 세포(예를 들어 종양/암 세포, 예를 들어 다발성 골수종 세포)에서의 표면 BCMA의 발현 증가 또는 발현 증가로 인한 것일 수 있다. 일부 양상에서, 표적 세포에서 표적 항원, 예를 들어 BCMA의 발현을 증가시키거나 안정화시키는 것은 표적 항원, 예를 들어 BCMA의 발현에 대해 또는 낮을 수 있는 환자의 결과를 개선시켜서 세포 요법, 예를 들어 T 세포 요법에 의해 표적화하기에 충분한 항원이 이용 가능하다. 일부 구현예에서, 제공된 구현예는 표적 항원, 예를 들어 BCMA의 가변 표면 발현을 갖는 대상체 그룹 중의 치료 결과의 변동성을 감소시킨다. 제공된 방법의 일부 구현예에서, 대상체에서 암의 세포, 예를 들어 CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되는 세포가 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준에 대한 표면 BCMA의 수준을 갖는 경우 감마 세크레타제 억제제 및 면역 요법제, 예를 들어 세포 요법제(예를 들어 CAR-T 세포)의 제공된 조합 요법제의 투여를 위해 환자가 선택된다. 따라서 일부 양상에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 예를 들어 BCMA의 막내 절단을 감소시키거나 또는 억제시킴으로서, BCMA의 표면 발현을 안정화시키는 양으로 투여된다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 높은 수준의 혈청 또는 혈장 또는 종양 수준의 가용성 또는 쉐드(shed) BCMA를 갖지 않거나, 또는 그에 기초하여 선택되지 않은 대상체에서 이점을 제공한다. 일부 구현예에서, 환자는 높은 혈청 또는 혈장 또는 종양 수준의 가용성 또는 쉐드 BCMA를 갖도록 선택되지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 조합 요법은 세포 요법제, 예를 들어 표면 BCMA에 결합하는 항원-결합 도메인을 갖는 CAR-발현 T 세포의 투여를 포함하되, 상기 항원-결합 도메인은 표면 BCMA에 결합하는 상기 항원-결합 도메인의 친화도보다 낮은 친화도를 갖는 가용성 BCMA에 결합하는 것이다. 일부 양상에서, 상기 제공된 조합 요법은 세포 요법제, 예를 들어 재조합 수용체-발현 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여를 포함하되, 상기 재조합 수용체 또는 CAR에 의한 표면 BCMA의 결합 또는, 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 재조합 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는 가용성 또는 쉐드 형태의 BCMA의 존재하에서 감소 또는 차단되지 않거나 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는다.

일부 양상에서, 상기 결과는 세포 요법제의 세포, 예를 들어 T 세포의 활성, 일부 경우 고유 활성을 향상시키거나 또는 개선시키면서 달성된다. 일부 양상에서, 이것은 BCMA 이외의 다른 표적에 대한 활성, 예를 들어 노치의 절단을 위한 활성을 나타내는 감마 세크레타제 억제제의 존재하에서 달성될 수 있다. 이러한 억제제의 예는 LY3039478 또는 본 발명의 화합물 1, 또는 입체이성질체, 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이다. 일부 양상에서, 노치 시그널링(notch signaling)은 T 세포 분화 및/또는 증식을 조절할 수 있지만, 본 발명의 관찰은 노치 시그널링을 표적화하는 것으로 알려진 예시적인 억제제, 예를 들어 LY3039478의 존재하에서 T 세포의 향상된 활성을 입증한다. 예를 들어 본원에 도시된 바와 같이, BCMA-발현 세포에 의한 반복된 자극 후, 항-BCMA CAR-T 세포 활성을 평가하는 예시적인 일련의 자극 분석에서, 예시적인 감마 세크레타제 억제제의 존재하에 증가된 CAR+ T 세포 확장 및/또는 생존이 관찰되었다. 이러한 결과는 제공된 조합 요법이 T 세포의 확장, 증식 및 지속과 관련된 기능을 포함하여 T 세포 기능을 향상시킨다는 것을 나타낸다.

상기 제공된 결과는 입양 T 세포 요법의 투여를 포함하는 것과 같은 세포 요법을 포함하는 방법에서 감마 세크레타제 억제제의 조합 요법이 T 세포 요법의 개선된 기능을 달성함을 나타낸다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제와 세포 요법(예를 들어 조작된 T 세포의 투여)의 조합은 항원과의 접촉 후 T 세포 요법의 하나 이상의 기능 및/또는 효과, 예를 들어 지속성, 확장성, 세포 독성, 및/또는 치료 결과, 예를 들어 종양 또는 다른 질환 또는 표적 세포를 사멸시키거나 또는 감소시키는 능력을 개선시키거나 또는 향상시킨다. 일부 양상에서, 상기 제공된 방법은, 대안 치료와 비교하여, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-T 세포) 또는 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염의 투여를 비롯한 단일요법과 비교하여 1.5배, 2.0배, 3.0배, 4.0배, 5.0배, 10배 이상으로 전체 반응 및/또는 생존을 증가시킨다.

일부 양상에서, 제공된 방법은 T 세포의 지속성 결여 및/또는 고갈을 극복하는 것과 같이, T 세포 요법을 증강, 증가 또는 강화시킬 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포가 투여된 대상체는, 대상체의 생물학적 샘플 예를 들어 대상체의 혈액에서와 같이, 대상체에서 상기 요법의 T 세포의 존재, 부재 또는 수준에 대해 모니터링된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염은은, T 세포 요법제 (예를 들어 CAR-T 세포)가 투여된 바 있으나 그러한 세포들이 약하게 팽창하거나 및/또는 대상체의 샘플 예를 들어 혈액 샘플에서, 역치(threshold) 수준 이하인 대상체에게, 대상체에서의 CAR-T 세포의 강력한 또는 강건한 팽창이 일반적으로 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-T), 일부 경우, 이 동일한 T 세포 요법제(예를 들어 동일한 CAR-T 세포)가 투여된 복수의 대상체에서 일반적으로 관찰된 시점에, 상기 대상체에 투여된다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 샘플에서 조작된 세포, 예를 들어 CAR+ 세포의 수준은 샘플 ㎕ 당 세포 예를 들어 CAR+ 세포의 수로서 결정되고, 일부 구현예에서, 피크 수준은 선택적으로 세포 또는 세포 요법의 투여 후 지정된 기간에 걸쳐서 가장 높은 측정치이다. 일부 양상에서, 감마 세크레타제 억제제는, T 세포 요법제, 예를 들어 CAR T 세포의 투여 개시로부터 약 1-15일 후, T 세포 요법제, 예를 들어 CAR T 세포, 또는 그의 CD8+ 또는 CD3+ 서브세트 μL 당 세포 10개 미만, 예를 들어 세포 5개 미만 또는 세포 1개 미만이 혈액 내에서 검출가능한 경우에 투여된다. 일부 양상에서, 감마 세크레타제 억제제는, T 세포 요법제, 예를 들어 CAR T 세포의 투여 개시로부터 약 12-15일 후, T 세포 요법제, 예를 들어 CAR T 세포, 또는 그의 CD8+ 또는 CD3+ 서브세트 μL 당 세포 10개 미만, 예를 들어 세포 5개 미만 또는 세포 1개 미만이 혈액 내에서 검출가능한 경우에 투여된다.

특정 양상에서, 제공된 방법은 T 세포 요법에 대한 피크 반응(T 세포의 존재 및/또는 종양 부담의 감소)이 관찰되었으나, 그 반응, 예를 들어 T 세포 의 존재 및/또는 종양 부담 감소가, 저감되었거나 또는 더 이상 검출가능하지 않은 대상체에서 T 세포 요법을 증강, 증가 또는 강화시킬 수 있다. 일부 양상에서, 감마 세크레타제 억제제는 다음 시점, 즉: (i) 대상체의 혈액에서 T 세포 요법의 세포의 피크 또는 최대 수준이 검출가능한 후; (ii) 혈액 내 검출가능한 T 세포 요법의 세포수가, 혈액 내에서 검출가능하였던 후, 검출가능하지 않거나, 감소되거나, 선택적으로 T 세포 요법제 투여 후 선행 시점에 비해 감소된 후; (iii) 혈액 내 검출가능한 T 세포 요법의 세포수가 T 세포 요법제 투여 개시 후 대상체의 혈액에서 검출가능한 T 세포 요법의 세포의 피크 또는 최대 수에 비해 1.5배, 2.0배, 3.0배, 4.0배, 5.0배, 10배 또는 그 이상 감소된 후; (iv) T 세포 요법의 피크 또는 최대 수준이 대상체의 혈액에 서 검출가능한 후, 대상체의 혈액 중에서 검출가능한 T 세포 또는 그로부터 유래된 세포의 수가 대상체 혈액 내의 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC)의 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만인 때; (v) T 세포 요법제로 치료된 후 관해에 이어 대상체가 재발되거나 및/또는 질환 진행을 나타낸 후; 및/또는 (iv) 대상체가 T 세포 투여 전 또는 후 및 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염의 투여 개시 전의 시점에서의 종양 부담에 비해 증가된 종양 부담을 나타낸 후 1주 이내, 예를 들어 1, 2, 또는 3일 후에 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포를 받는 대상체에게 투여되지만, 상기 대상체는 T 세포 요법으로 치료 후, 예를 들어 반응이 예를 들어 T 세포의 존재 및/또는 종양 부담의 감소가 경감되었거나 더이상 탐지되지 않는 시점에서 재발하였다. 일부 양상에서, 재발은 BCMA 항원 손실로 인해 발생할 수 있으며, 일부 경우에는 BCMA 항원 하향 조절/항원 탈출로 인한 것일 수 있다. 일부 양상에서, 그것은 세포 표면으로부터의 BCMA 항원의 절단 또는 쉐딩(shedding)으로 인한 것일 수 있다. 일부 양상에서, 항원 손실은 표적 항원(예를 들어 BCMA)을 나타내는 세포의 감소를 초래하여, CAR T 세포의 활성 및/또는 기능을 감소 또는 저하시키고/시키거나 예를 들어 혈액 중의 CAR T 세포의 수를 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는 대상체가 재발하거나 재발될 것으로 의심되거나 재발될 것으로 예상되거나 세포 표면으로부터 표적 항원(예를 들어, BCMA)의 절단 또는 쉐딩을 감소시키기 위해 재발될 가능성이 있는 시점에 투여 될 수 있다. 상기 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제를 투여하는 것은 표적 항원(예를 들어 BCMA)의 절단 및/또는 쉐딩을 예방 또는 감소시킴으로써 재발 후 CAR T 세포를 재활성화시키거나 강화시킬 수 있다.

일부 구현예에서, 세포 요법제 및 감마 세크레타제 억제제와의 조합 요법을 포함한 제공된 방법은, 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 세포 요법제의 투여와 비교하여 투여되는 대상체에서 증가된 지속성 및/또는 더 나은 효능을 갖는 유전자 조작된 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 대상체 내에서의 지속성은, 대체 방법, 예를 들어 레퍼런스 세포 조성물의 투여, 예를 들어 T 세포 요법제를 투여하지만 면역조절 화합물의 투여는 없는 다른 대체 방법에서 달성될 지속성에 비해 더 크다. 일부 구현예에서, 지속성은 적어도 약 15배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배 이상 증가한다. 일부 구현예에서, 투여된 세포의 지속성의 정도(degree 또는 extent)는 대상체에게 투여 후 검출 또는 정량될 수 있다. 예를 들어 일부 양상에서, 정량적 PCR (qPCR)을 이용하여 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 장기 또는 조직 (예를 들어, 병소)에서 재조합 수용체 (예를 들어, CAR-발현 세포)를 발현하는 세포의 양을 추정한다. 일부 양상에서, 지속성은 DNA의 마이크로그램당 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 DNA 또는 플라스미드의 복제물 또는, 예를 들어 혈액 또는 혈청 샘플의 마이크로리터당 또는 말초 혈액 단분자 세포 (PBMC) 또는 백혈구의 총수당 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포 또는 샘플의 마이크로리터당 T 세포의 수로서 정량화된다. 일부 구현예에서, 일반적으로, 수용체에 특이적인 항체를 사용하여, 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유동세포 계측 분석을 또한 수행할 수 있다. 또한, 세포 기반 분석을 사용하여, 질병 또는 질환의 세포와 결합할 수 있고/있거나, 이에 대한 반응, 예를 들어 세포독성 반응을 중화시킬 수 있고/있거나, 유도할 수 있거나, 수용체에 의해 인식되는 항원을 발현할 수 있는 세포와 같은 기능성 세포의 수 또는 백분율을 검출할 수 있다. 이러한 구체예 중 임의의 것에 있어서, 재조합 수용체와 결합된 또 다른 마커 (예를 들어, CAR-발현 세포)의 발현의 정도 또는 수준을 사용하여, 대상체에서 내인성 세포와 투여된 세포를 구별할 수 있다.

본 발명에 제공된 방법의 양상에서, 세포 요법제를, 효능을 증진시키고/시키거나 CAR T 세포 활성을 촉진시키는 감마 세크레타제 억제제와 조합시키는 것은 감마 세크레타제 억제제 없이 고용량의 CAR T 세포로 보여지는 것과 동일한 치료효과를 달성하는 저용량의 CAR T 세포의 투여를 허용한다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제와 조합될 때 투여된 CAR T 세포의 용량은 감마 세크레타제 억제제 없이 투여된 CAR T 세포의 용량의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 또는 그 이상까지 감소될 수 있다.

일부 구현예에서, 이 방법은 B 세포 악성 종양 또는 혈액 학적 악성 종양을 포함하는 암과 같은 질환 또는 질환 상태를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 양상에서, 암은 다발성 골수종, 형질 세포종, 형질 세포 기원의 암 및/또는 B 세포 기원의 암이다. 일부 양상에서, 이러한 질환, 병태 또는 악성 종양은 입양 세포 요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위한 세포(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 포함하는 조성물과 같은 세포 요법 단독으로의 치료에 대한 반응, 예를 들어 완전 반응(CR)이, 다른 T 세포 요법에 의한 치료 또는 다른 질병 또는 악성 종양의 치료에 비해 비교적 낮은 것들(예를 들어 그렇게 치료된 대상체의 약 60% 미만, 약 50% 미만 또는 약 45% 미만에서 CR)을 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 질환 또는 질환 상태의 증상 또는 또는 결과 또는 부담을 다음의 (i)과 (ii)의 조합보다 큰 정도로 경감 또는 완화시킨다: (i) 감마 세크레타제 억제제의 단독 투여에 의해 발휘되는 감소 또는 완화 정도, 선택적으로 질환 또는 질환 상태를 갖는 대상체 집단의 평균적인 감소 또는 완화 정도, 및 (ii) T 세포 요법제의 단독 투여에 의해 발휘되는 감소 또는 완화 정도, 선택적으로 질환 또는 질환 상태를 갖는 대상체 집단의 평균적인 감소 또는 완화 정도. 일부 구현예에서, 이 방법은 예를 들어 질환 또는 질환 상태를 갖는 대상체 집단의 평균에 비해, 질병의 그러한 증상, 경과 또는 부담을, 약 1.5배, 2.0배, 3.0배, 4.0배, 5.0배, 6.0배, 7.0배, 8.0배, 9.0배, 10.0배, 20.0배, 30.0배, 40.0배, 50.0배 이상 더 많이 감소 또는 완화시킨다.

또한 본 발명에 따라 세포의 조작, 제조 및 생산을 위한 방법, 세포(예를 들어 CAR-발현 T 세포) 및/또는 감마 세크레타제 억제제를 함유하는 조성물, 및 예를 들어 제공된 조합 요법에 따라 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제를 함유하고 이를 이용, 생산 및 투여하기 위한 키트 및 장치가 제공된다.

본 출원에 언급된 특허 문서, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 간행물은 각각의 개별 간행물이 참조로 개별적으로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 참조로 그 내용 전체가 통합된다. 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개 출원 및 기타 간행물에 기재된 정의와 상반되거나 불일치하는 경우, 참조로 본원에 포함된 정의보다 본원에 제시된 정의가 우선한다.

본원에 사용된 섹션 제목은 단지 정리 목적을 위한 것이며 기술된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니된다.

I. 조합 요법

본 발명에 따라 1) 감마 세크레타제 억제제 및 2) 면역 억제 요법제, 예를 들어 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 세포(예를 들어 T 세포)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 장애 예를 들어 암 또는 증식성 질환을 치료하기 위한 조합 요법을 위한 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 세포 요법제는 질환 또는 장애 예를 들어 암 또는 증식성 질환과 관련된 항원을 특이적으로 인식하거나 및/또는 표적화하는 T 세포를 포함하는 입양 면역 세포 요법제이다. 또한 면역 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제를 포함하는 조성물 및/또는 감마 세크레타제 억제제를 포함하는 조성물을 함유하는 키트와 같은 제조 물품 및 조합물, 그리고 암을 비롯한 질환, 질환 상태 및 장애를 치료 또는 예방하기 위한 그러한 조성물 및 조합물의 용도도 제공된다.

일부 구현예에서, 이러한 방법은 면역 요법제, 예를 들어 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 투여 전, 투여와 동시, 투여 도중, 투여 경과 중(경과 중 일회 및/또는 주기적으로), 및/또는 투여 후(예를 들어 투여 개시 후), 감마 세크레타제 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 감마 세크레타제 억제제 및 세포 요법제의 순차(sequential) 또는 간헐적(intermittent) 투여를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 세포 요법은 입양 세포 요법이다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 종양 침윤 림프구(TIL) 요법, 트랜스제닉 TCR 요법 또는 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)-발현 세포 요법인 재조합-수용체 발현 세포 요법(선택적으로 T 세포 요법)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 요법은 B 세포 표적화 요법이다. 일부 구현예에서, 상기 요법은 B 세포 성숙 항원(BCMA)을 표적으로 한다. 일부 구현예에서, 상기 요법은 CD19를 표적으로 한다. 일부 구현예에서, 상기 요법은 뮤신 1(MUC1)을 표적으로 한다. 일부 구현예에서, 세포 및 세포를 투여하기 위한 투여계획은 다음에 이어지는 "세포의 투여"라는 소제목 A 이하의 설명에 포함된 것들을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 및 세포를 투여하기 위한 투여계획은 다음에 이어지는 "감마 세크레타제 억제제의 투여"라는 소제목 A 이하의 설명에 포함된 것들을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 면역 요법제, 예를 들어 조작된 세포, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제를 비롯한 세포 요법제, 및 감마 세크레타제 억제제를 투여하는 것을 포함하는 조합 요법을 치료하고자 하는 질환 또는 질환 상태(예를 들어 암)에 걸려 있거나 또는 질환 또는 질환 상태(예를 들어 암)에 걸릴 위험이 있는 대상체 또는 환자에게 투여한다. 일부 양상에서, 이 방법은, 면역요법 또는 면역요법제에 의해 인식된, 예를 들어 조작된 T 세포에 의해 인식된 항원을 발현하는 암에 있어서 종양 부담을 경감시키는 것과 같이, 질환 또는 질환 상태의 하나 이상의 증상을 치료, 예를 들어 완화시킨다.

일부 구현예에서, 치료되는 질환 또는 질환 상태는 항원의 발현이 질환, 질환 상태 또는 장애와 관련되거나 및/또는 병인과 연관이 있거나, 예를 들어 그러한 질환, 질환 상태, 또는 장애를 일으키거나, 악화시키거나 또는 달리 연관되는 것들이다. 예시적인 질환 및 질환 상태는 악성종양 또는 세포의 형질전환(예를 들어 암), 자가면역 또는 염증성 장애, 또는 예를 들어 세균, 바이러스 또는 다른 병원체에 의해 일어나는 감염성 장애와 관련된 질환 또는 장애 상태를 포함할 수 있다. 예시적인 항원으로는 치료될 수 있는 다양한 질환 및 장애 상태와 관련된 항원을 들 수 있고, 여기에는 본 발명에 설명된 임의의 항원들이 포함된다. 특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체 또는 트랜스제닉 TCR을 비롯하여, 조합 요법의 조작된 세포 상에서 발현되는 재조합 수용체는, 질환 또는 질환 상태와 관련된 항원에 특이적으로 결합한다.

일부 구현예에서, 질환 또는 질환 상태는 BCMA를 발현하는 암 또는 증식성 질환이다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 BCMA를 표적화하는 재조합 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-T 세포)를 사용한다. 특정 구현예에서, 질환 또는 질환 상태는 다발성 골수종이다. 일부 경우에, 다발성 골수종은 재발성 또는 불응성 골수종이다.

치료되는 질환 중에는 BCMA 관련된 임의의 질환 또는 장애 또는 BCMA가 특이적으로 발현되고/되거나 BCMA가 치료를 위해 표적화된 임의의 질환 또는 장애이 있다(이하, 상기 용어는 BCMA-관련된 질환 또는 장애으로서 교환가능하게 언급됨). BCMA 발현과 관련된 암은 혈액 악성 종양 예를 들어 호지킨 림프종 및 비-호지킨 골수종 둘 다 뿐만 아니라, 다발성 골수종, 발덴스트롬 매크로글로불린 혈증(Waldenstrom macroglobulinemia)을 포함한다. BCMA의 리뷰에 대해서는 문헌 「Coquery et al., Crit Rev Immunol., 2012, 32(4):287-305」을 참조한다. BCMA는 종양 세포 생존을 매개하는 것과 연루되어 있으므로 암 요법의 잠재적 표적이다. 마우스 항-인간 BCMA 항체 및 인간 항-인간 항체를 비롯한 항-BCMA 항체를 함유하는 키메라 항원 수용체, 및 이러한 키메라 수용체를 발현하는 세포는 이전에 기술되었다[문헌 「Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060」, 국제공개공보 제WO2016/090320호, 제WO2016/090327호, 제WO2010/104949 A2호 및 제WO2017/173256호 참조]. 항-BCMA 항체를 함유하는 예시적인 CARS가 본원에 기술되어 있다.

일부 구현예에서, 조작된 세포, 예를 들어 항-BCMA CAR의 투여 개시전에, 대상체는 하나 이상의 종래 요법(prior therapies)를 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 또는 그 이상의 종래 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상의 종래 요법을 받았다. 일부 양상에서, 대상체는 재발하였거나, 혹은 예를 들어 각각 개별적으로 하나 이상의 이전 요법들 중의 하나 이상에 치료 불응성이었다. 일부 양상에서, 대상체가 하나 이상의 요법의 후보가 아니거나 혹은 그에 대해 금기로 되지 않는 한, 종래 요법은 자가 줄기 세포 이식(ASCT); 면역 조절제, 예를 들어 IMiD; 프로테아좀 억제제; 및 항-CD38 항체를 사용한 치료를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제, 예를 들어 IMiD는 탈리도마이드(thalidomide), 레날리도마이드(lenalidomide) 또는 포말리도마이드(pomalidomide)로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 프로테아좀 억제제는 보르테조미브(bortezomib), 카르필조미브(carfilzomib) 또는 이삭조미브(ixazomib)로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 다라투무맙(daratumumab)이거나 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 진행성 질환이 요법에 대해 최선의 반응이 아닌 한, 각각의 요법에 대해 2회 이상의 연속 치료 주기를 겪어야 한다. 일부 양상에서, 본원에서 상기 방법으로 치료하기 위한 대상체는 ASCT 후 골수 코어 생검(bone marrow core biopsy)에서 10% 초과의 CD138+ 악성 형질 세포 면역 조직 화학(malignant plasma cells immunohistochemistry; IHC)으로 재발되거나 치료 불응성인 골수종을 가지며, 대상체가 ASCT를 겪지 않는 경우 대상체는 예를 들어 고령 합병증(age comorbidity), 환자 선택, 질환의 상태 및/또는 의사의 재량으로 이식 부적합으로 되며, 4주기 초과의 유도 요법 후에도 지속되고/되거나 프로테아좀 억제제 및 면역 조절 약물, 예를 들어 IMiD를 사용한 요법에 불응성이거나 내성이 없는 질환을 갖는다.

일부 구현예에서, 질환 또는 질환 상태는 종양, 예를 들어 고형 종양, 림프종, 백혈병, 혈액 종양, 전이성 종양, 또는 기타 암 또는 종양 유형이다.

일부 구현예에서, 질환 또는 장애와 관련된 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), ROR1, tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, erbB 다이머, EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 e 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경질 사슬, 루이스 Y(루이스 Y), L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 a2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, 포에탈 AchR(Foetal AchR), NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 및 범용 태그와 관련된 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 및 병원체-특이적 항원으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항원은 범용 태그(universal tag)이거나 또는 이것과 연관된 것이다. 일부 구현예에서 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원은 노치(Notch) 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, 세포 표면 관련 뮤신 1(MUC1), 에프린 B2(Ephrin B2), 베타글리칸(Betaglycan)(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CX3CR1, CXCL16, 델타1(Delta1), E-카드헤린(E-cadherin), N-카드헤린(N-cadherin), HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R, 및 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 B 세포-관련된 질환이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 모세포종, 림프종 육아종증, 이식 후 림프 증식성 질환, 면역 조절 질환, 중질 사슬 질환, 일차 또는 면역 세포-관련된 아밀로이드증, 또는 결정되지 않은 유의성의 단일 클론성 감마 병증 중의 하나 이상의 질환 또는 질환 상태이다.

일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 자가 면역 질환 또는 장애이다. 상기 자가 면역 질환 또는 장애는, 제한되지는 않지만, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 루푸스 신염, 염증성 장 질환, 류마티스 관절염(예를 들어 청소년 류마티스 관절염), ANCA 관련 혈관염, 특발성 혈소판 감소증 자반증(idiopathic thrombocytopenia purpura; ITP), 혈전성 혈소판 감소증 자반증(thrombotic thrombocytopenia purpura; TTP), 자가 면역 혈소판 감소증, 차 가스 병(Chagas' disease), 그레이브 병(Grave's disease), 베게너의 육아종증(Wegener's granulomatosis), 다발성 동맥염, 스요그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 천포창(pemphigus vulgaris), 경피증, 다발성 경화증, 건선, IgA 신증, IgM 다발성 신경 병증, 혈관염, 당뇨병, 레이노드 증후군( Reynaud's syndrome), 항-인지질 증후군(anti-phospholipid syndrome), 굿페이스쳐 질환(Goodpasture's disease), 가와사키 질환(Kawasaki disease), 자가 면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia), 중증 근무력증(myasthenia gravis) 또는 진행성 사구체 신염을 포함한다.

일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 B 세포 악성 종양이다(B cell malignancy). 일부 구현예에서, 암(예를 들어 BCMA-발현 암)은 림프종, 백혈병 또는 혈장 세포 악성 종양이다. 본원에서 숙고되는 림프종은, 제한되지는 않지만, 버킷 림프종(Burkitt lymphoma)(예를 들어 고질적인 버킷 림프종 또는 산발성 버킷 림프종), 비-호지킨 림프종(NHL), 호지킨 림프종, 발덴스트롬 매크로글로불린 혈증, 소포 림프종, 소분할 세포 림프종(small non-cleaved cell lymphoma), 점막-관련된 림프 조직 림프종(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma; MALT), 변연부 림프종, 비장 림프종, 결절 단핵구 B 세포 림프종(nodal monocytoid B cell lymphoma), 면역 모세포 림프종, 대세포 림프종, 확산 혼합 세포 림프종, 폐 B 세포 혈관 신경 림프종, 소 림프성 림프종, 1차 종격동 B 세포 림프종(primary mediastinal B cell), 림프형 질세포성 림프종(lymphoplasmacytic lymphoma; LPL) 또는 맨틀 세포 림프종(MCL)을 포함한다. 본원에서 고려되는 백혈병은, 제한되지는 않지만, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 혈장 세포 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병(ALL)을 포함한다. 또한, 제한되지는 않지만, 다발성 골수종(예를 들어 비-분비 다발성 골수종, 스몰더링 다발성 골수종 연기(smoldering multiple myeloma)) 또는 혈장종을 비롯한 혈장 세포 악성 종양이 본원에서 고려된다. 일부 구현예에서, 질환 또는 질환 상태는 다발성 골수종, 예를 들어 재발된 및/또는 불응성 다발성 골수종이다. 제한되지는 않지만, 치료될 수 있는 상기 질환, 장애 또는 상태 중에는 신경 아세포종, 신장 세포 암종, 결장암, 결장 직장암, 유방암, 상피 편평 세포 암, 흑색종, 골수종(예를 들어 다발성 골수종), 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암를 포함한다.

일구 구현예에서, 암 또는 증식성 질환은 B 세포 악성 종양 또는 혈액학적 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 암 또는 증식성 질환은 급성 림프구성 백혈병(ALL), 비-호지킨 림프종(NHL), 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)이다. 일구 구현예에서, 암은 CLL이다. 일구 구현예에서, 상기 방법은 골수종, 림프종 또는 백혈병을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 급성 림프구성 백혈병(ALL), 비-호지킨 림프종(NHL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 확산 대형 B-세포 림프종(DLBCL), 급성 골수성 백혈병(AML), 또는 골수종, 예를 들어 다발성 골수종(MM)을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 MM 또는 DBCBL을 치료하는데 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 고형 종양과 같은 비-혈액학적 암을 치료하는데 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 방광암, 폐암, 뇌암, 흑색종(예를 들어 소-세포 폐, 흑색종), 유방암, 자궁경부암, 난소암, 결장암, 췌장암, 자궁내막암, 식도암, 신장암, 간암, 전립선암, 피부암, 갑상선암 또는 자궁암을 치료하는데 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 암 또는 증식성 질환은 췌장암, 방광암, 대장암(colorectal cancer), 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포암, 폐암, 난소암, 자궁경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암 또는 연조직 육종이다.

일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 질환 또는 질환 상태는 감염성 질환 또는 장애 상태, 예를 들어 바이러스, 레트로바이러스, 박테리아, 및 원충 감염, 면역결핍, 사이토메갈로바이러스(CMV), 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus)(EBV), 아데노바이러스, BK 폴리오마바이러스(polyomavirus)이나, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애 상태는 자가면역 또는 염증성 질환 또는 장애 상태, 예를 들어 관절염, 예를 들어 류머티즘성 관절염(RA), I형 당뇨병, 전신 홍반성 낭창(SLE), 염증성 장 질환, 건선, 경피증, 자가 면역 갑상선 질환, 그레이브스병(Grave's disease), 크론병(Crohn's disease) 다발성 경화증, 천식, 및/또는 이식 관련 질환 또는 장애 상태이다.

질병의 예방 또는 치료를 위한, 감마 세크레타제 억제제 및/또는 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)과 같은 면역요법제의 적절한 용량은, 치료하고자 하는 질환의 종류, 세포 및/또는 세포 상에 발현되는 재조합 수용체, 질환의 위중도 및 경과, 투여 경로, 감마 세크레타제 억제제 및/또는 T 세포 요법제가 예방 목적으로 투여되는지 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 치료법, 투여 빈도, 대상체의 임상 이력 및 세포에 대한 반응 및 임상에 참가하는 의사의 재량에 따라 달라질 수 있다. 조성물과 세포는 일부 구현예에서 대상체에게 한번에 또는 수회로 나누어 적절히 투여된다. 제공된 조합요법의 예시적인 투여계획 및 스케쥴에 대해 설명한다.

일부 구현예에서, 면역 요법제, 예를 들어 세포 요법제(예를 들어 CAR-T 세포 요법제) 및 감마 세크레타제 억제제는 추가 조합 치료의 일부로서 투여될 수 있으며, 동시에 또는 임의 순서로 순차적으로, 또 다른 치료제를 개재시켜 투여될 수 있다. 일부 맥락에서, 면역 요법제, 예를 들어 세포 요법제, 예를 들어 조작된 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포들은, 상기 세포 요법제가 하나 이상의 부가적인 치료제의 효과를 증강시키도록, 또는 그 역으로, 충분히 근접한 시간 이내에 또 다른 치료제와 함께 공동-투여된다. 일부 구현예에서, 세포들은 하나 이상의 부가적인 치료제의 투여에 앞서 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 요법제, 예를 들어 조작된 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포들은 하나 이상의 부가적인 치료제를 투여한 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 조합 요법은 화학요법제의 투여와 같은, 림프구 고갈 요법을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 조합 요법은 항암제, 체크포인트 억제제 또는 기타 면역조절제와 같은 또 다른 치료제를 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 조합 요법은 스테로이드, 예를 들어 덱사메카손(dexamethasone)을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 이러한 용도에는 그러한 방법 및 치료에 있어서의 조합 요법의 사용, 및 그러한 조합 요법을 수행하기 위한 의약의 제조시 그러한 조성물의 용도가 포함된다. 일부 구현예에서, 방법 및 그에 따른 용도는 대상체에서 질환 또는 질환 상태 또는 장애, 예를 들어 암 또는 증식성 질환을 치료한다.

면역요법제(예를 들어 CAR-T 세포 요법제와 같은 T 세포 요법제) 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 전, 투여 도중 또는 투여 후, T 세포 요법제의 생물학적 활성, 예를 들어 조작된 세포 집단의 생물학적 활성을, 일부 구현예에서, 예를 들어 임의의 수의 공지 방법에 의해 측정한다. 평가하고자 하는 파라미터들에는 표적 세포를 파괴하는 조작된 세포의 능력, T 세포 활성의 지속성 및 기타 척도, 예를 들어 후술되는 섹션 III에 구체적으로 설명되어 있는 분석법과 같이, 기술분야에 알려진 적절한 방법을 이용하여 측정가능한 것들이 포함된다. 일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 T 세포 기반 치료법을 위해 투여되는 T 세포의 생물학적 활성은 예를 들어 항원에 의한 재자극시 세포독성 세포 살해, 하나 이상의 사이토카인의 발현 및/또는 분비, 증식 또는 팽창을 평가함으로써 구한다. 일부 양상에서 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하의 감소와 같은, 질환 부담 및/또는 임상 결과를 평가함으로써 측정된다. 일부 구현예에서, 조합 요법 중 어느 한쪽 또는 양자 모두의 물질의 투여 및/또는 상기 요법제의 임의의 반복 투여는, 조합 요법제의 어느 한쪽 또는 양자 모두의 물질의 투여 전, 투여 도중, 투여 경과 도중 또는 투여 후 의 평가 결과에 기초하여 결정될 수 있다.

일부 구현예에서, 세포 요법제와 조합된 감마 세크레타제 억제제의 조합 효과는 감마 세크레타제 억제제만을 사용하는 치료법 또는 세포 요법제를 이용하는 단독요법에 비해 상승적일 수 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 제공된 방법은 목적하는 치료 효과의 증가 또는 개선, 예를 들어 암과 관련된 하나 이상의 증상의 감소 또는 억제를 증가 또는 개선시키는 결과를 일으킨다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 조작된 T 세포, 예를 들어 CAR T-세포의 팽창 또는 증식을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 팽창 또는 증식의 증가는 대상체에게 투여시 생체내에서 관찰된다. 일부 구현예에서, 조작된 T 세포, 예를 들어 CAR-T 세포의 수의 증가는, 약 1.2배, 1.5배, 2.0배, 3.0배, 4.0배, 5.0배, 6.0배, 7.0배, 8.0배, 9.0배, 10.0배 또는 그 이상을 상회한다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 조작된 T 세포, 예를 들어 CAR T-세포의 활성 및/또는 기능을 연장하고/하거나 유지시킨다.

A. 면역 요법제의 투여

일부 구현예에서, 면역 세포상의 항원에 결합하거나 이를 표적화하고/하거나 질환 또는 장애에 관여되는 면역 요법제가 제공된 조합 요법 방법에 따라 투여된다. 특정 구현예에서, 면역 요법제는 세포 또는 조직 위에서 또는 세포 또는 조직에서 발현되는 항원에 결합하고/하거나 이를 인식한다. 특정 구현예에서, 항원은 세포 또는 조직 위에서 또는 세포 또는 조직에서 발현된다. 특정 구현예에서, 항원은 세포의 표면 위에서 발현된다. 특정 구현예에서, 세포는 B 세포, T 세포 및/또는 종양 또는 암 세포이다. 특정 구현예에서, 항원은 순환 세포 위에서 또는 순환 세포에서 발현된다. 일부 구현예에서, 항원은 순환 세포의 표면 위에서 발현된다.

특정 구현예에서, 면역 요법제는 질환과 관련된 하나 이상의 항원에 결합하고/하거나 이를 인식한다. 인간 대상체에서 면역 요법제로 치료될 수 있는 질환, 질환 상태 및 장애 중에는 고형 종양, 혈액 악성 종양 및 흑색종을 비롯한 종양, 국소 및 전이성 종양, 감염성 질환, 예를 들어 바이러스 또는 다른 병원체 감염증, 예를 들어 HIV, HCV, HBV, CMV, HPV 및 기생충 질환, 및 자가 면역 및 염증성 질환이 포함된다. 일부 구현예에서, 질환 또는 질환 상태는 종양, 암, 악성 종양, 신생물(neoplasm) 또는 다른 증식성 질환 또는 장애이다. 상기 질환은 제한되지는 않지만 백혈병, 림프종, 예를 들어 만성 림프구성 백혈병(CLL), ALL, 비호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 불응성 여포 성 림프종(refractory follicular lymphoma), 맨틀 세포 림프종, 무취 B 세포 림프종, B 세포 악성 종양, 결장, 폐, 간, 유방, 전립선, 난소, 피부, 흑색종, 뼈의 암들, 및 뇌암, 난소암, 상피암, 신장 세포 암종, 췌장 선암종, 호지킨 림프종, 자궁경부암종, 결장직장암, 교모세포종, 신경모세포종, 유잉 육종(Ewing sarcoma), 수모세포종(medulloblastoma), 골육종(osteosarcoma), 활액 육종(synovial sarcoma) 및/또는 중피종(mesothelioma)을 포함한다.

일부 구현예에서, 면역 요법제는 감마 세크레타제에 의한 절단의 표적인 하나 이상의 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 항원은 BCMA이거나 또는 뮤신 1(Muc1)이다.

1. 치료제, 예를 들어 항체

특정 구현예에서, 상기 면역 요법제는 치료제, 예를 들어 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 양상에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 이중 특이적 항체이다.

일부 양상에서, 상기 면역 요법제는 면역계 활성화제 또는 자극제이거나 이를 함유하는 치료제이다. 특정 구현예에서, 상기 면역계 자극제는 하나 이상의 면역 세포를 활성화시키는 작용제 또는 요법제이다. 일부 구현예에서, 상기 면역 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 상기 면역 세포 활성화제는 IL-2, 예를 들어 프로류킨(Proleukin); rhu-IFN-알파-2a 및/또는 rhu-IFN-알파-2b, 예를 들어 페가시(Pegasys), 로페론-A(Roferon-A), 인트론-A(Intron-A) 및 PEG 인트론; 항-CD3 모노클로널 항체, 예를 들어 무로모나브-CD3(Muromonab-CD3) 및/또는 오르토클론 OKT 3(Orthoclone OKT 3); TGN-1412; 및/또는 블리나투모맙(Blinatumomab), 예를 들어 항-CD3xCD3 BiTE이다.

일부 구현예에서, 면역 치료는 T 세포상에 발현된 표면 분자에 결합할 수 있는 결합 분자이거나 또는 이를 함유하는 T 세포 결합 요법일 수 있다. 일부 구현예에서, 표면 분자는 수용체 복합체의 성분과 같은 T 세포의 활성화 성분일 수 있다. 일부 구현예에서, T 표면 분자는 CD3 또는 CD2일 수 있다. 일부 구현예에서 T 세포-관련 치료는 항체 또는 항원-결합 단편이거나 이를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포-관련 치료는 종양 또는 암세포상의 표면 항원과 같은, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 나열된 항원, 예를 들어 CMA 또는 Muc1, 표적 세포상의 표면 항원에 결합하는 적어도 하나의 항원-결합 도메인 및 T 세포의 활성화 성분(예를 들어, T 세포 표면 분자, 예를 들어, CD3 또는 CD2)에 결합하는 적어도 하나의 항원-결합 도메인을 포함하는 이중 특이적 항체일 수 있다. 일부 구현예에서, 그러한 항체의 이의 표적 둘 모두에 대한 동시 또는 거의 동시적인 결합은 표적 세포와 T 세포 사이에 일시적인 상호 작용이 일어나 T 세포의 활성화, 예를 들어 세포 독성 활성, 및 표적 세포의 계속적인 용해를 초래할 수 있다.

이러한 예시적인 이중 특이적 항체 T 세포-결합자는 유연한 링커에 의해 융합된 직렬 scFv 분자[예를 들어 문헌 「Nagorsen and Bauerle, Exp Cell Res 317, 1255-1260 (2011)」참조]; 다른 것을, 예를 들어 유연한 링터, 통해 융합되고 안정한 결합을 할 수 있는 제 1 및 제 2 서브유닛으로 이루어지 FC 도메인을 추가로 포함하는 탠덤 scFv 분자(국제공개공보 제WO2013/026837호 참조); 디아바디 및 탠덤 디아 바디를 포함하는 이의 유도체[문헌 「Holliger et al., Prot Eng 9, 299-305 (1996)」참조]; C 말단 이황화물 브릿지를 갖는 디아 바디(diabody) 포맷을 포함 할 수있는 이중 친화성 리타 데이션(DART) 분자; 또는 전체 하이브리드 마우스/래트 IgG 분자를 포함하는 삼중체[문헌 「Seimetz et al., Cancer Treat Rev 36, 458-467 (2010)」참조]를 포함하는 이중 특이적 T 세포 조작(BiTE) 분자 일 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포 참여 요법은 블린사이토 또는 AMG 330일 수 있다. 이러한 T 세포-결합과 같은 어느 것도 제공된 방법, 조성물 또는 조합물들에 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 치료제는 BCMA 및 하나 이상의 추가 항원에 결합할 수 있는 BCMA-특이적 결합이다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 추가 항원은 CD19, CD20, CD22, CD33, CD38, CS1, ROR1, GPC3, CD123, IL-13R, CD138, c-Met, EGFRvIII, GD-2, NY-ESO-1, MAGE A3, 또는 글리코리피드 77(glycolipid F77)을 포함한다. 상기 이중 특이적 항체의 예는 국제공개공보 제WO2017/025038호에 기술되어 있다.

치료제, 예를 들어 면역 요법제는 볼루스 주입, 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안내 주사, 눈 주위 주사, 망막하 주사, 유리체내 주사, 경 중격 주사, 공막하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하 주사(subconjectval injection), 결막하 주사(subconjuntival injection), 안각건하 주사, 안구후 주사, 안구 주위 주사 또는 후 방 공막 부근 전달에 의한 임의의 적절한 수단에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료제, 예를 들어 면역 요법제는 비경구, 폐내 및 비내, 및 국소 치료가 필요한 경우, 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다.

특정 구현예에서, T 세포 관여 요법제 및/또는 면역계 자극제의 하나 이상의 용량이 투여된다. 특정 구현예에서, 0.001㎍ 내지 5,000㎍의 T 세포 관여 요법제 및/또는 면역계 자극제가 투여된다. 특정 구현예에서, 0.001㎍ 내지 1,000㎍, 0.001㎍ 내지 l㎍, 0.01㎍ 내지 l㎍, 0.1㎍ 내지 10㎍, 0.01㎍ 내지 l㎍, 0.1㎍ 내지 5㎍, 0.1㎍ 내지 50㎍, 1㎍ 내지 100㎍, 10㎍ 내지 100㎍, 50㎍ 내지 500㎍, 100㎍ 내지 1,000㎍, 1,000㎍ 내지 2,000㎍, 또는 2,000㎍ 내지 5,000㎍의 T 세포 관여 요법제가 투여된다. 일부 구현예에서, T 세포 관여 요법제의 용량은 0.01㎍/kg 내지 100mg/kg, 0.1㎍/kg 내지 10㎍/kg, 10㎍/kg 내지 50㎍/kg, 50㎍/kg 내지 100㎍/kg, 0.1mg/kg 내지 1mg/kg, 1mg/kg 내지 10mg/kg, 10mg/kg 내지 100mg/kg, 100mg/kg 내지 500mg/kg, 200mg/kg 내지 300mg/kg, 100mg/kg 내지 250mg/kg, 200mg/kg 내지 400mg/kg, 250mg/kg 내지 500mg/kg, 250mg/kg 내지 750mg/kg, 50mg/kg 내지 750mg/kg, 1mg/kg 내지 10mg/kg, 또는 100mg/kg 내지 1,000mg/kg(체중에 대한 림프구 고갈제의 양)이거나 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, T 세포 관여 요법제의 용량은 0.1㎍/kg, 0.5㎍/kg, 1㎍/kg, 5㎍/kg, 10㎍/kg, 20㎍/kg, 30㎍/kg, 40㎍/kg, 50㎍/kg, 60㎍/kg, 70㎍/kg, 80㎍/kg, 90㎍/kg, 0.1mg/kg, 0.5mg/kg, 1mg/kg, 2.5mg/kg, 5mg/kg, 10mg/kg, 15mg/kg, 20mg/kg, 25mg/kg, 30mg/kg, 35mg/kg, 40mg/kg, 45mg/kg, 50mg/kg, 55mg/kg, 60mg/kg, 65mg/kg, 70mg/kg, 75mg/kg, 80mg/kg, 85mg/kg, 90mg/kg, 95mg/kg, 100mg/kg, 200mg/kg, 300mg/kg, 400mg/kg, 500mg/kg, 600mg/kg, 700mg/kg, 800mg/kg, 900mg/kg, 또는 1,000mg/kg이거나 또는 약 0.1㎍/kg, 0.5㎍/kg, 1㎍/kg, 5㎍/kg, 10㎍/kg, 20㎍/kg, 30㎍/kg, 40㎍/kg, 50㎍/kg, 60㎍/kg, 70㎍/kg, 80㎍/kg, 90㎍/kg, 0.1mg/kg, 0.5mg/kg, 1mg/kg, 2.5mg/kg, 5mg/kg, 10mg/kg, 15mg/kg, 20mg/kg, 25mg/kg, 30mg/kg, 35mg/kg, 40mg/kg, 45mg/kg, 50mg/kg, 55mg/kg, 60mg/kg, 65mg/kg, 70mg/kg, 75mg/kg, 80mg/kg, 85mg/kg, 90mg/kg, 95mg/kg, 100mg/kg, 200mg/kg, 300mg/kg, 400mg/kg, 500mg/kg, 600mg/kg, 700mg/kg, 800mg/kg, 900mg/kg, 또는 1,000mg/kg이다. 특정 구현예에서, T 세포 관여 요법제는 경구, 정맥내, 복강내, 경피, 척수내, 근육내, 비강내, 경점막내, 피하 또는 직장으로 투여된다.

일부 구현예에서, 투여되는 CAR T 세포의 용량은 감마 세크레타제 억제제와의 조합으로 투여될 때 CAR T 세포의 용량의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 그 이상까지 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제와 조합될 때 투여된 CAR T 세포의 용량은 감마 세크레타제 억제제 없이 투여된 CAR T 세포의 용량의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 그 이상까지 감소될 수 있다.

2. 세포 요법

본 발명의 방법, 조성물, 조합물, 키트 및 용도의 일부 구현예에서, 조합 요법은 대상체에 면역 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 투여하는 것을 포함한다. 이러한 치료제의 투여는 전술한 감마 세크레타제 억제에의 투여 전, 투여 후, 투여와 동시에 개시될 수 있다. 본원에서 제공된 방법, 조성물, 조합, 키트 및 용도에 사용하기 위한 예시적인 세포 요법제 및 조작된 세포는 섹션 II에서 기술되어 있다.

일부 구현예에서, 세포-기반 요법제는 세포, 예를 들어 종양 또는 암과 같은 병소 표면에서 발현되는 분자를 표적으로 하는, 예를 들어 T 세포 또는 NK 세포와 같은 면역 세포이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포수용체(TCR) 또는 다른 항원-결합 수용체를 발현한다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 재조합 수용체, 예를 들어 트랜스제닉 TCR 또는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현한다. 일부 구현예에서, 상기 세포들은 대상체에 대해 자가이다. 일부 구현예에서, 세포들은 대상체에 대해 동종이계이다.

일부 양상에서, 세포 요법은 종양 침윤 림프구(TIL) 요법, 트랜스제닉 TCR 요법 또는 유전자 조작된 세포, 예를 들어 재조합-수용체 발현 세포 요법제를 포함하는 T 세포 요법이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 예를 들어 종양 또는 암의 세포에서 발현되거나 이와 연관된, 질환 또는 질환 상태와 연관된 것과 같은 리간드에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하도록 조작된 T 세포를 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 제공된 세포들은 리간드-결합 도메인 또는 그의 결합 단편, 및 T 세포수용체(TCRs) 및 그의 성분들, 및/또는 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 함유하는 것들을 비롯하여, 재조합 수용체와 같은 수용체를 발현하거나 및/또는 발현하도록 조작된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 리간드-결합 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인을 함유하는 CAR이다. 일부 구현예에서, 항원과 같은 리간드는, 세포 표면에서 발현되는 단백질이다. 일부 구현예에서, CAR은 TCR-유사 CAR이고 항원은 주요조직적합성 복합체(MHC) 분자 맥락에서 세포 표면 상에서 인식되는, TCR과 같은, 세포내 단백질의 펩티드 항원과 같은 가공된 펩티드 항원이다.

재조합 수용체를 함유하는 조작된 세포를 비롯한 조작된 세포들에 대해 본원에서 추가로 기술된다. CAR 및 재조합 TCR를 비롯한 에시적인 재조합 수용체, 이들 수용체를 조작하여 세포내로 도입하는 방법으로는 국제공개공보 제WO2000/14257호, 제WO2013/126726호, 제WO2012/129514호, 제WO2014/031687호, 제WO2013/166321호, 제WO2013/071154호, 제WO2013/123061호, 미국특허출원공개공보 제2002/131960호, 제2013/287748호, 제2013/0149337호, 미국특허 제6,451,995호, 제7,446,190호, 제8,252,592호, 제8,339,645호, 제8,398,282호, 제7,446,179호, 제6,410,319호, 제7,070,995호, 제7,265,209호, 제7,354,762호, 제7,446,191호, 제8,324,353호 및 제8,479,118호, 및 유럽특허출원 제2537416호, 및/또는 문헌 「Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu et al., Cancer, 2012 March 18(2): 160-75」에 개시된 것들을 들 수 있다. 일부 양상에서, 유전자 조작된 항원 수용체에는 미국특허 제7,446,190호에 설명된 CAR, 및 국제공개공보 제WO/2014055668 A1호에 설명된 것들이 포함된다.

일부 구현예에서, 조합 요법은 대상체에게 세포, 예를 들어 범용 태그 상에 존재하거나 및/또는 암과 관련된 항원을 표적으로 하거나 및/또는 이를 특이적으로 인식하는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, T 세포에 의해 인식되거나 표적화되는 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), ROR1, 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2, NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 선택적으로 전술한 임의의 것들의 인간 항원; 병원체-특이적 항원이다. 일부 구현예에서 T 세포에 의해서 인식되고/되거나 표적화된 항원은 노치 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, 세포 표면 관련 뮤신 1(MUC1), 에프린 B2, 베타글리칸(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CX3CR1, CXCL16, 델타1, E-카드헤린, N_카드헤린, HLA-A2, IFNaR2, IL1R114257, IL1R2, IL6R, 및 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된다.

일부 구현예에서, T 세포에 의해 인식되고/표적화된 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)이다. 예시적인 항원-결합 도메인 및, BCMA를 표적화하거나 또는 그에 특이적으로 결합하는, 상기 항원-결합 도메인을 함유하는 CAR은 공지되어 있으며, 예를 들어 국제공개공보 제WO2016/090320호, 제WO2016/090327호, 제WO2010/104949 A2호 및 제WO2017/173256호를 참조할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 항원 결합 도메인은 BCMA에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유도된 VH 및 VL을 함유하는 scFv이다. 일부 구현예에서, BCMA에 결합하는 상기 항체 또는 항체 단편은 국제공개공보 제WO2016/090327호 및 제WO2016/090320호에 제시된 항체 또는 항체 단편으로부터의 VH 및 VL이거나 또는 그를 함유한다.

입양 세포 요법을 위해 조작된 세포를 투여하는 방법은 공지이며 본 발명에서 제공된 방법 및 조성물과 연계하여 이용될 수 있다. 예를 들어 입양 T 세포 요법은, 예를 들어 그루엔베르그(Gruenberg) 등의 미국특허출원공개공보 제2003/0170238호; 로젠베르그(Rosenberg)의 미국특허 제4,690,915호; 문헌 「Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85). See, e.g., Themeli et al., (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al., (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4): e61338」에 기술되어 있다.

일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법은 자가조직 전달(autologous transfer)에 의하여 수행되는데, 자가조직 전달에서 세포는 상기 세포 요법을 받는 대상체로부터 또는 그러한 대상체로부터 유래한 샘플로부터 단리 및/또는 달리는 제조된다. 따라서, 일부 양상에서, 세포는 대상체, 예를 들어 치료를 필요로 하는 환자로부터 유래하고, 상기 세포는, 단리 및 가공 다음에 동일한 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법은 동종이계 전달(allogeneic transfer)에 의해 수행되는데, 동종이계 전달에서 세포는 상기 세포 요법을 받거나 궁극적으로 받는 대상체, 예를 들어 제1 대상체 이외의 대상체로부터 단리 및/또는 달리는 제조된다. 그러한 구현예에서, 세포는 그 후 동일한 종의 상이한 대상체, 예를 들어 제 2 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제 2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제 2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제 2 대상체는 제1 대상체와 동일한 HLA 클래스 또는 수퍼타입을 발현한다.

세포들은 적절한 임의 수단에 의해 투여될 수 있다. 세포들은 종양 부담 감소와 같은 치료 효과를 달성하기 위해 투여계획에 따라 투여된다. 용량 계산 및 투약은 부분적으로는 T 세포 요법제 투여 개시 전, 투여 개시 후 및/또는 투여와 동시에 투여될 수 있는, 면역조절 화합물의 투여 스케쥴에 따라 달라질 수 있다. T 세포 요법제의 다양한 투약 스케쥴은 다양한 시점, 볼루스(bolus) 투여 및 펄스 주입(pulse infusion)에 따라 일회 또는 복수회 투여하는 것을 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다.

a. 조성물 및 제형

일부 구현예에서, 세포 요법제, 예를 들어 재조합 항원 수용체, 예를 들어 CAR 또는 TCR에 의해 조작된 세포를 포함하는 T 세포 요법제의 세포의 용량은 의약 조성물 또는 제형과 같은 조성물 또는 제형으로서 제공된다. 이러한 조성물은 질환, 질환 상태 및 장애의 예방 또는 처리에서와 같이, 제공된 방법에 따라 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 조작된 T 세포(예를 들어 CAR T 세포)와 같은 세포 요법은 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 제형화된다. 일부 구현예에서, 담체의 선택은 부분적으로는, 특정 세포 또는 물질 및/또는 투여 방법에 의해 결정된다. 따라서, 다양한 적합한 제형이 존재한다. 예를 들어 의약 조성물은 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 보존제는, 예를 들어 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산나트륨 및 염화벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 양상에서, 2종 이상의 보존제의 혼합물이 사용된다. 보존제 또는 그의 혼합물은 통상적으로 총 조성물 중 약 0.0001 중량% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 담체는, 예를 들어 문헌 「Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A Ed (1980)」에 기재되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로, 사용되는 용량 및 농도에서 수용체에 유독하지 않은 것이며, 인산염, 시트르산염 및 다른 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제(예를 들어 염화옥타데실디메틸벤질 암모늄; 염화헥사메토늄, 염화벤잘코늄; 염화벤제토늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기)의 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 소수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함한 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온; 금속 복합체(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 양상에서, 조성물 중에 완충제가 포함된다. 적합한 완충제는, 예를 들어 시트르산, 시트르산나트륨, 인산, 인산칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 양상에서, 2종 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 그의 혼합물은 통상적으로 총 조성물 중 약 0.001 중량% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 의약 조성물의 제조 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법이, 예를 들어 문헌 「Remington: Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed(May 1, 2005)」에 더욱 상세히 기재되어 있다.

제형은 수용액을 포함할 수 있다. 제형 또는 조성물은 또한, 각각의 활성이 상호 악영향을 미치지 않는 세포 또는 제제에 의해 예방되거나 치료되는 특정 지표, 질환 또는 장애 상태에 유용한 1종 이상의 활성 성분을 함유할 수 있는데, 예를 들어 그 활성은 세포에 상보성이고 및/또는 각각의 활성은 서로 유해한 영향을 주지 않는 것인 하나 이상의 활성 성분이다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합물 중에 적절히 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 의약 조성물은 화학치료제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카르보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 겜시타빈, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등과 같은 다른 약학적 활성 제제를 추가로 포함한다.

의약 조성물은 일부 구현예에서, 질환 또는 장애 상태의 치료 또는 예방에 유효한 양, 예를 들어 치료적 유효량 또는 예방법적 유효량의 세포를 함유한다. 일부 구현예에서, 치료 대상체의 주기적 평가에 의해, 치료 또는 예방법적 효능을 모니터링한다. 수일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여에 대하여, 질환 상태에 따라, 치료는 원하는 질환 징후에 대한 억제가 나타날 때까지 반복된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 요망되는 용량은 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다회 볼루스 투여 또는 조성물의 연속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.

세포는 표준 투여 기법, 제형 및/또는 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 상기 조성물의 저장 및 투여를 위하여, 제형 및 시린지 및 바이알과 같은 장치가 제공된다. 세포에 관하여, 투여는 자가 또는 이종의 것일 수 있다. 예를 들어 면역반응 세포 또는 전구세포는 하나의 대상체로부터 얻어질 수 있으며, 동일한 대상체 또는 상용 가능한 상이한 대상체에 투여될 수 있다. 말초혈 유래 면역반응 세포 또는 그의 전구세포(예를 들어 생체내, 생체외 또는 시험관내 유래)는 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥내 주사 또는 비경구 투여를 포함하여, 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물(예를 들어 유전자 변형된 면역반응 세포를 함유하는 의약 조성물)의 투여 시, 이는 일반적으로 단위 용량의 주사 가능한 형태(용액, 현탁액, 유제)로 제형화될 것이다.

제형은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육내, 비강내, 협측, 설하 또는 좌제 투여용의 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 비경구로 투여된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비경구"는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의해, 말초 전신 전달을 사용하여, 대상체에 투여된다.

일부 구현예에서, 조성물은, 일부 양상에서 선택된 pH로 완충될 수 있는 멸균 액체 제조물, 예를 들어 등장성 수용액, 현탁액, 유제, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공된다. 액체 제조물은 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조가 용이하다. 추가로, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기에 다소 편리하다. 한편, 점성 조성물은 특정 조직과의 접촉 시간을 연장하기 위해 적절한 점성 범위 내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은, 예를 들어 물, 염수, 인산염 완충 염수, 폴리올(예를 들어 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.

용매, 예를 들어 적절한 담체, 희석제 또는 부형제, 예를 들어 멸균수, 생리 염수, 글루코스, 덱스트로스 등과의 혼합물에 세포를 혼입시킴으로써, 멸균 주사용 용액을 제조할 수 있다. 조성물은 또한 동결건조될 수 있다. 조성물은 투여 경로 및 요망되는 제조물에 따라, 보조 물질, 예를 들어 습윤제, 분산제 또는 유화제(예를 들어 메틸셀룰로스), pH 완충제, 겔화 또는 점도 강화 첨가제, 보존제, 착향료, 착색제 등을 함유할 수 있다. 일부 양상에서, 적절한 제조물을 제조하기 위해, 표준 텍스트를 참고할 수 있다.

항균 보존제, 산화방지제, 킬레이트제 및 완충액을 포함하여, 조성물의 안정성 및 멸균성을 향상시키는 다양한 첨가제를 첨가할 수 있다. 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등등에 의해, 미생물의 작용을 확실히 방지할 수 있다. 주사 가능한 약학적 형태의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 유도할 수 있다.

생체내 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 멸균된 것이다. 멸균은, 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.

질환의 예방 또는 치료를 위하여, 적절한 용량은 치료될 질환의 유형, 제제 또는 제제들의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 제제 또는 세포가 예방 또는 치료 목적을 위하여 투여되는가 여부, 이전의 치료, 대상체의 임상 내력 및 제제 또는 세포에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따른다. 일부 구현예에서, 조성물은 대상체에게 한 번에 또는 일련의 치료를 통해 적절하게 투여된다.

경우에 따라, 세포 요법은 세포를 포함하는 단일 의약 조성물로서 투여된다. 일부 구현예에서, 주어진 용량은 세포 또는 제제의 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 이것은 세포 또는 제제의 복수 볼루스 투여에 의해, 예를 들어 3일을 초과하는 기간에 걸쳐, 또는 세포 또는 제제의 연속 주입 투여에 의해 투여된다.

b. 투여 계획 및 투여

일부 구현예에서, 용량의 세포가 본 발명의 조합 요법에 따라 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 크기 또는 투여 시기는 대상체의 특정 질환 또는 질환 상태의 기능으로서 결정된다. 제공된 설명을 참조로 특정 질환에 대한 용량의 크기 또는 투여 시기를 당업자의 수준에서 실험적으로 결정할 수 있다.

특정 구현예에서, 세포, 또는 세포의 각 서브-유형 집단은 대상체에게 약 10만 내지 약 1000억 개의 세포수준으로 및/또는 대상체의 체중 킬로그램당 그러한 양의 세포로 투여될 수 있는데, 예를 들어 대상체의 체중 킬로그램당 10만 내지 약 500억개의 세포(예를 들어 약 500만개의 세포, 약 2500만개의 세포, 약 5억개의 세포, 약 10억개의 세포, 약 50억개의 세포, 약 200억개의 세포, 약 300억개의 세포, 약 400억개의 세포 또는 상기 수치들 중 임의의 2 가지에 의하여 구획되는 범위), 100만 내지 약 500억개의 세포(예를 들어 약 500만개의 세포, 약 2500만개의 세포, 약 5억개의 세포, 약 10억개의 세포, 약 50억개의 세포, 약 200억개의 세포, 약 300억개의 세포, 약 400억개의 세포 또는 상기 수치들 중 임의의 2 가지에 의하여 구획되는 범위), 예를 들어 약 1000만 내지 약 1000억개의 세포(예를 들어 약 2000만개의 세포, 약 3000만개의 세포, 약 4000만개의 세포, 약 6000만개의 세포, 약 7000만개의 세포, 약 8000만개의 세포, 약 9000만개의 세포, 약 100억개의 세포, 약 250억개의 세포, 약 500억개의 세포, 약 750억개의 세포, 약 900억개의 세포, 또는 상기 수치들 중 임의의 2 가지에 의하여 구획되는 범위), 및 일부 경우 약 1억개의 세포내지 약 500억개의 세포(예를 들어 약 1억 2천만개의 세포, 약 2억5천만개의 세포, 약 3억 5천만개의 세포, 약 4억 5천만개의 세포, 약 6억 5천만개의 세포, 약 8억개의 세포, 약 9억개의 세포, 약 30억개의 세포, 약 300억개의 세포, 약 450억개의 세포) 또는 이들 범위들 사이의 임의의 수치이다. 용량은 질환 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 대한 특별한 속성에 따라 다를 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 값은 재조합 수용체-발현 세포의 수를 말하며; 다른 구현예에서, 이들은 투여되는 T 세포 또는 PBMC 또는 총 세포의 수를 말한다.

일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, 세포는, 약 1 x 10⁶ 내지 약 1.2 x 10⁹개의 전체 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC), 예를 들어 1 x 10⁷개 또는 약 1 x 10⁷개, 5 x 10⁷개 또는 약 5 x 10⁷개, 1 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁸개, 2 x 10⁸개 또는 2 x 10⁸약 개, 2.5 x 10⁸개 또는 약 2.5 x 10⁸개, 3 x 10⁸개 또는 약 3 x 10⁸개, 3.5 x 10⁸개 또는 약 3.5 x 10⁸개, 4 x 10⁸개 또는 약 4 x 10⁸개, 4.5 x 10⁸개 또는 약 4.5 x 10⁸개, 5 x 10⁸개 또는 약 5 x 10⁸개의 상기 세포, 6 x 10⁸개 또는 약 6 x 10⁸개, 7 x 10⁸개 또는 약 7 x 10⁸개, 8 x 10⁸개 또는 약 8 x 10⁸개, 9 x 10⁸개 또는 약 9 x 10⁸개, 1 x 10⁹개 또는 약 1 x 10⁹개의 상기 세포, 또는 상기 값들 중의 임의의 2개 값들 사이의 범위의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, 용량은 약 5 x 10⁸개의 전체 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC) 보다 적게 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, 용량은 약 1.5 x 10⁸개의 전체 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC) 보다 적게 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, 용량은 약 1 x 10⁸개의 전체 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC) 보다 적게 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, 용량은 약 5 x 10⁷개의 전체 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC) 보다 적게 포함한다.

일부 구현예에서, 투여된 총 세포의 용량은 각각 약 1 x 10⁵ 내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 2.5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 2.5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 2.5 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁶ 내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁶ 내지 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁶　내지 2.5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁶ 내지 5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶　 내* 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 2.5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁷ 내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁷ 내지 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁷　내지 1 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁷　내지 5 x 10⁷개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁷　내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁷　내지 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁷　내지 2.5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁸ 　내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁸　내지 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 1 x 10⁸ 내지 2.5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포,　2.5 x 10⁸ 내지 8 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 2.5 x 10⁸　내지 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포, 또는 5 x 10⁸개의 총 CAR-발현 T 세포내지 8 x 10⁸ 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다.

일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 약 50 x 10⁶ 내지 800 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 50 x 10⁶ 내지 450 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 50 x 10⁶ 내지 300 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 50 x 10⁶ 내지 150 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 150 x 10⁶ 내지 800 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 150 x 10⁶ 내지 450 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 150 x 10⁶ 내지 300 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 300 x 10⁶ 내지 800 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 300 x 10⁶ 내지 450 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포, 또는 450 x 10⁶ 내지 800 x 10⁶개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 약 50 x 10⁶개의 CAR-발현 T 세포, 약 150 x 10⁶개의 CAR-발현 T 세포, 약 450 x 10⁶개의 CAR-발현 T 세포, 또는 약 800 x 10⁶개의 CAR-발현 T 세포이다.

임의의 구현예의 일부에서, 수는, 상기 세포의 일부 재조합 수용체-발현(예를 들어 CAR+) 세포에서, CD3+의 총수, CD8+의 총수 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 총수를 나타낸다.

일부 구현예에서, 세포 요법은 약 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC), 약 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC 또는 약 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷ 개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC의 세포수를 포함하는 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 적어도 또는 약 적어도 1 x 10⁵ 개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC, 예를 들어 적어도 또는 약 적어도 1 x 10⁶개, 적어도 또는 약 적어도 1 x 10⁷개, 적어도 또는 약 적어도 1 x 10⁸개의 그러한 세포의 세포수를 포함하는 용량의 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수는 CD3+ 또는 CD8+의 총 수에 관한 것이며, 일부 경우에는 재조합 수용체-발현(예를 들어 CAR+) 세포에 관한 것이기도 하다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 약 1 x 10⁵내지 1 x 10⁸개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, 약 5 x 10⁵내지 1 x 10⁷개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, 또는 약 1 x 10⁶내지 1 x 10⁷개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+재조합 수용체-발현 세포의 세포수를 포함하는 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 세포 약 1 x 10⁵내지 1 x 10⁸개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포, 약 5 x 10⁵내지 1 x 10⁷개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포, 또는 약 1 x 10⁶내지 1 x 10⁷개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포의 세포수를 포함하는 용량을 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.

일부 구현예에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, 예를 들어 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 용량에서, 상기 용량 중의 CD8+ T 세포는 약 1 x 10⁶ 내지 5 x 10⁸ 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ 세포를 포함하는데, 예를 들어 약 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁸ 개의 그러한 세포, 예를 들어 1 x 10⁷, 2.5 x 10⁷, 5 x 10⁷, 7.5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 또는 5 x 10⁸ 개의 총 그러한 세포, 또는 전술한 수치들 중 임의의 2 수치 사이의 개수이다. 일부 구현예에서, 환자는 다회 용량을 투여받고, 용량 각각 또는 총 용량은 전술한 수치들 중 어느 하나 이내일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 각각 포함하기로, 약 1 x 10⁷ 내지 0.75 x 10⁸ 개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, 1 x 10⁷ 내지 2.5 x 10⁷ 개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, 약 1 x 10⁷ 내지 0.75 x 10⁸ 개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 약 1 x 10⁷, 2.5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 7.5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 또는 5 x 10⁸ 개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 세포 요법은 0.1 x 10⁶세포/대상체의 체중 kg, 0.2 x 10⁶ 세포/kg, 0.3 x 10⁶ 세포/kg, 0.4 x 10⁶ 세포/kg, 0.5 x 10⁶ 세포/kg, 1 x 10⁶ 세포/kg, 2.0 x 10⁶ 세포/kg, 3 x 10⁶ 세포/kg 또는 5 x 10⁶ 세포/kg 이상 또는 약 그 이상, 또는 0.1 x 10⁶세포/대상체의 체중 kg, 0.2 x 10⁶ 세포/kg, 0.3 x 10⁶ 세포/kg, 0.4 x 10⁶ 세포/kg, 0.5 x 10⁶ 세포/kg, 1 x 10⁶ 세포/kg, 2.0 x 10⁶ 세포/kg, 3 x 10⁶ 세포/kg 또는 5 x 10⁶ 세포/kg이거나 약 그 정도인 세포수를 포함하는 용량의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 세포 요법은 각각 포함하기로, 약 0.1 x 10⁶ 세포/대상체의 체중 kg 내지 10 x 10⁷세포/kg, 약 0.5 x 10⁶ 세포/kg 내지 5 x 10⁶ 세포/kg, 약 0.5 x 10⁶ 세포/kg 내지 3 x 10⁶ 세포/kg, 약 0.5 x 10⁶ 세포/kg 내지 2 x 10⁶ 세포/kg, 약 0.5 x 10⁶ 세포/kg 내지 1 x 10⁶ cell/kg, 약 1.0 x 10⁶ 세포/대상체의 체중 kg 내지 5 x 10⁶ 세포/kg, 약 1.0 x 10⁶ 세포/kg 내지 3 x 10⁶ 세포/kg, 약 1.0 x 10⁶ 세포/kg 내지 2 x 10⁶ 세포/kg, 약 2.0 x 10⁶ 세포/대상체의 체중 kg 내지 5 x 10⁶ 세포/kg, 약 2.0 x 10⁶ 세포/kg 내지 3 x 10⁶ 세포/kg, 또는 약 3.0 x 10⁶세포/kg인 세포수를 포함하는 용량의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 약 2 x 10⁵세포/kg 내지 약 2 x 10⁶세포/kg, 예를 들어 약 4 x 10⁵ 세포/kg 내지 약 1 x 10⁶세포/kg 또는 약 6 x 10⁵세포/kg 내지 약 8 x 10⁵세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 대상체의 체중 킬로그램당 2 x 10⁵개 이하의 세포(예를 들어 항원-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포)를 포함하는데(세포/kg), 예를 들어 약 3 x 10⁵세포/kg 이하의, 약 4 x 10⁵세포/kg 이하의, 약 5 x 10⁵세포/kg 이하의, 약 6 x 10⁵세포/kg 이하의, 약 7 x 10⁵세포/kg 이하의, 약 8 x 10⁵세포/kg 이하의, 약 9 x 10⁵세포/kg 이하의, 약 1 x 10⁶세포/kg 이하의, 또는 약 2 x 10⁶세포/kg 이하이다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 2 x 10⁵개 이상 또는 약 2 x 10⁵개의 세포(예를 들어 항원-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포)를 포함하는데(세포/kg), 예를 들어 약 3 x 10⁵세포/kg 이상 또는 약 3 x 10⁵세포/kg, 약 4 x 10⁵세포/kg 이상 또는 약 4 x 10⁵세포/kg, 약 5 x 10⁵세포/kg 이상 또는 약 5 x 10⁵세포/kg, 약 6 x 10⁵세포/kg 이상 또는 약 6 x 10⁵세포/kg, 약 7 x 10⁵세포/kg 이상 또는 약 7 x 10⁵세포/kg, 약 8 x 10⁵세포/kg 이상 또는 약 8 x 10⁵세포/kg, 약 9 x 10⁵세포/kg 이상 또는 약 9 x 10⁵세포/kg, 약 1 x 10⁶세포/kg 이상 또는 약 1 x 10⁶세포/kg, 또는 약 2 x 10⁶세포/kg 이상 또는 약 2 x 10⁶ 세포/kg이다.

일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체-발현 T 세포의 용량은 대상체에 단일 용량으로 투여되거나 또는 2주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년 또는 그 이상 이내에 1회만 투여된다.

일부 양상에서, 상기 약학 조성물 및 제형은 그의 주어진 용량 또는 분획으로 투여하기 위한 세포의 수를 포함하는 단위 용량 형태 조성물로서 제공된다.

일부 구현예에서, 투여량의 세포는 각각 투여량 중 일부의 세포를 함유하는 복수 개의 조성물 또는 용액의 투여에 의하여 투여될 수 있는데, 예를 들어 제1 및 제 2 조성물 또는 용액, 필요에 따라 더 다수의 조성물 또는 용액의 투여에 의하는 것이다. 일부 양상에서, 각각 상이한 세포 집단 및/또는 서브-유형을 함유하는 복수 개의 조성물은, 필요에 따라 특정 기간 내에 개별적이거나 독립적으로 투여된다. 예를 들어, 세포의 집단 또는 서브-유형은, 각각 CD8⁺ 및 CD4⁺ T 세포 및/또는 각각 CD8⁺-농축된 및 CD4⁺-농축된 집단, 예를 들어 각각 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작 세포들을 각기 포함하는 CD4⁺ 및/또는 CD8⁺ T 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여량의 투여는 CD8⁺ T 세포의 투여량 또는 CD4⁺ T 세포의 투여량을 포함하는 제1 조성물의 투여, 및 CD4⁺ T 세포 및 CD8⁺ T 세포의 다른 투여량을 포함하는 제 2 조성물의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 조성물 또는 투여량의 투여, 예를 들어, 복수 개의 세포 조성물의 투여는 세포 조성물을 개별적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 양상에서, 개별적인 투여는 동시에 또는 어느 순서로든 순차적으로, 수행된다. 일부 구현예에서, 투여량은 제 1 조성물 및 제 2 조성물을 포함하고, 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 0 내지 12 시간 간격으로, 0 내지 6 시간 간격으로 또는 0 내지 2 시간 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물의 투여 개시 및 제 2 조성물의 투여 개시는 2 시간 이하의 간격으로, 1 시간 이하의 또는 30 분 이하의, 15분 이하의, 10 분 이하의 또는 5 분 이하의 간격으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제 2 조성물의 투여의 완료 및/또는 개시는 2 시간 이하, 1 시간 이하, 또는 30 분 이하, 15분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하의 간격으로 수행된다.

일부 조성물에서, 제1 조성물, 예를 들어 투여량 중 제 1 조성물은 CD4⁺ T 세포를 포함한다. 일부 조성물에서, 제 1 조성물, 예를 들어 투여량 중 제 1 조성물은 CD8⁺ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물은 제 2 조성물 이전에 투여된다.

일부 구현예에서, 세포의 투여량 또는 조성물은 정의된 비율 또는 표적 비율의 재조합 수용체를 발현하는 CD8⁺ 세포에 대한 재조합 수용체를 발현하는 CD4⁺ 세포, 및/또는 CD8⁺ 세포에 대한 CD4⁺ 세포를 포함하는데, 여기의 비율은 선택적으로 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1 사이로, 예를 들어 대략 1:1이다. 일부 양상에서, 표적 비율 또는 원하는 비율의 상이한 세포 집단 (예를 들어 CD4⁺: CD8⁺ 비율 또는 CAR⁺ CD4⁺: CAR⁺ CD8⁺ 비율, 예를 들어 1:1)을 갖는 조성물 또는 투여량의 투여는 상기 집단 중 하나를 함유하는 세포 조성물을 투여한 후 상기 집단 중 다른 것을 포함하는 개별적인 세포 조성물을 투여하는 것을 포함하는데, 여기서 투여는 상기 표적 비율 또는 원하는 비율로 또는 대략 그러한 비로 이루어진다. 일부 양태에서, 세포의 용량 또는 조성물을 정해진 비율로 투여하면 T 세포 요법의 팽창, 지속성 및/또는 항종양 활성을 개선시킨다.

입양 세포 요법과 관련하여, 주어진 세포의 "용량"의 투여는 단일 조성물 및/또는 단일 무중단 투여(uninterrupted administration)로서, 예를 들어 단일 주사 또는 연속적 주입으로서 주어진 양 또는 세포의 수의 투여를 포함하고, 또한 3일 이하의 특정 기간에 걸쳐 다중의 개별적인 조성물이나 주입으로 제공되는, 분할 용량으로서 주어진 양이나 세포의 수의 투여를 포함한다. 따라서, 일부 상황에서, 용량은 특정한 단일 시점에서 개시되거나 주어진 특정 수의 세포의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나 일부 상황에서는, 용량은 3일 이하의 기간에 걸쳐 다회의 주사 또는 주입으로 투여되는데, 예를 들어 3일 또는 2일 동안 1회 또는 하루에 걸친 다중 주입에 의한다.

따라서, 일부 양상에서, 용량의 세포는 단일 의약 조성물로서 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 세포는 용량의 세포를 집합적으로 함유하는 복수의 조성물로서 투여된다.

"분할 용량(split dose)"이라는 용어는 1일을 초과하여 투여되도록 분할된 용량을 가리킨다. 이러한 투약 유형은 본 발명의 방법에 의해 포괄되며 단일 용량인 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 분할 용량의 세포는 3일이 넘는 기간에 걸쳐, 용량의 세포를 집합적으로 포함하는 복수의 조성물로서 투여된다.

따라서, 세포의 용량은 분할 용량으로서 투여될 수 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, 용량은 2일 이상 또는 3일 이상에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 용량을 분할하는 예시적인 방법은 제 1 일에 용량의 25%를 투여하고 제 2 일에 용량의 나머지 75%를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 용량의 33%는 제 1 일에 투여되고 나머지 67%는 제 2 일에 투여될 수 있다. 일부 양상에서, 용량의 10%는 제 1 일에 투여되고, 용량의 30%는 제 2 일에 투여되고, 용량의 60%는 제 3 일에 투여된다. 일부 구현예에서, 분할 용량은 3일 이상에 걸쳐 이루어지지는 않는다.

일부 구현예에서, 대상체는 세포를 복수 용량, 예를 들어 2 이상의 용량 또는 복수의 연속적인 용량으로 투여받는다. 일부 구현예에서, 2 용량이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 연속 용량을 투여받으며, 에컨대 제 1 용량 투여로부터 대략 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일 후에 제 2 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 제 1 용량에 이어 복수의 연속 용량이 투여되며, 예를 들어 연속 용량 투여 후 부가적인 용량 또는 용량들이 투여된다.　일부 구현예에서, 부가적인 용량(들)은 종래 용량들 보다 많다.

일부 구현예에서, 대상체 세포의 다중 용량, 예를 들어, 2회 이상 용량 또는 다중 연속 용량을 받는다. 일부 구현예에서, 2회 용량이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 연속 용량을 받으며, 예를 들어, 제 2 용량은 제 1 용량 이후 대략 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일에 투여된다. 일부 구현예에서, 다중 연속 용량은, 추가의 용량 또는 용량들이 연속 용량 투여 이후 투여되도록, 제 1 용량 이후 투여된다. 일부 양상에서, 추가적인 용량으로 대상체에 투여되는 세포의 수는 제 1 용량 및/또는 연속 용량과 동일하거나 이와 유사하다. 일부 구현예에서, 추가적인 용량 또는 용량은 이전의 용량보다 더 크다.

일부 양상에서, 제1 및/또는 연속 용량의 크기는 하나 이상의 기준에 기초하여 결정되는데, 예를 들어 화학요법과 같은 선행 치료에 대한 환자의 반응, 대상체의 질병 부담, 예를 들어 종양 부하, 벌크, 크기 또는 정도, 세기, 또는 전이 유형, 단계 및/또는 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성, 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응를 발생할 가능성 또는 이환율에 기초한다.

일부 양상에서, 제 1 용량의 투여와 연속 용량의 투여 사이의 시간은 약 9 내지 약 35일, 약 14 내지 약 28일, 또는 15 내지 27일이다. 일부 구현예에서, 연속 용량의 투여는 제 1 용량의 투여 이후 약 14일 초과 및 약 28일 미만의 시점이다. 일부 양상에서, 제1 및 연속 용량 사이의 시간은 약 21일이다. 일부 구현예에서, 추가의 용량 또는 용량들, 예를 들어 연속 용량은 연속 용량 투여 이후 투여된다. 일부 양상에서, 추가적인 연속 용량 또는 용량은 이전 용량의 투여 이후 적어도 약 14일 및 약 28일 미만에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가적인 용량은 이전 용량 이후 약 14일 미만에, 예를 들어, 이전 용량의 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13일에 투여된다. 일부 구현예에서, 용량은 이전 용량 이후 약 14일 미만으로 투여되지 않고 및/또는 용량은 이전 용량 이후 약 28일 초과로 투여되지 않는다.

일부 구현예에서, 세포의 용량, 예를 들어, 재조합 수용체-발현 세포는 T세포의 제 1 용량 및 T세포의 연속 용량을 포함하는 2 가지 용량 (예를 들어, 이중 용량)을 포함하고, 이러한 제 1 용량 및 제 2 용량 중 하나 또는 둘 모두는 T세포의 분할 용량의 투여를 포함한다.

일부 구현예에서, 세포의 용량은 일반적으로 질환 부담을 감소시키는데 충분히 효과적일 정도로 크다.

일부 구현예에서, 세포는 원하는 용량으로 투여되는데, 이는 일부 양상에 있어서 원하는 용량 또는 세포수 또는 세포 유형(들) 및/또는 원하는 세포 유형의 비를 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 총 세포수(또는 체중 kg당 세포수) 및 개개의 서브-유형 집단의 원하는 비율, 예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비에 기초한다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 개개 집단에서 세포의, 또는 개개의 세포 유형의 원하는 총 세포수(또는 체중 kg당 세포수)에 기초한다. 일부 구현예에서, 상기 용량은 이러한 특징의 조합에 기초하는데, 예를 들어 원하는 총 세포수, 원하는 비율, 및 개개 집단에서 원하는 총 세포수와 같은 특징이다.

일부 구현예에서, 세포 집단 또는 서브-유형, 예를 들어 CD8+ 및 CD4+ T 세포는 원하는 총 세포의 용량, 예를 들어 원하는 T 세포의 용량의 용인되는 차이로, 또는 그 내에서 투여된다. 일부 양상에서, 원하는 용량은 원하는 세포의 수 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위당 원하는 세포의 수로서, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 양상에서, 원하는 용량은 최소한의 세포수 또는 체중 단위당 최소한의 세포수이거나, 또는 그보다 많다. 일부 양상에서, 원하는 용량으로 투여된 총 세포 중에서, 각 집단 또는 서브-유형은 원하는 결과 비(예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비)로, 또는 그 근처에 존재하는데, 예를 들어 그러한 비의 특정 용인 차이 내이거나 오류 내이다.

일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 각 세포 집단 또는 서브-유형의 원하는 용량, 예를 들어 CD4+ 세포의 원하는 용량 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 용량의 용인되는 차이로 또는 그 이내로 투여된다. 일부 양상에서, 원하는 용량은 상기 서브-유형 또는 집단의 원하는 세포수, 또는 상기 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위당 원하는 그러한 세포의 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 양상에서, 원하는 용량은 최소한의 세포수 또는 체중 단위당 최소한의 세포수이거나, 또는 그보다 많다.

따라서, 일부 구현예에서, 용량은 총 세포의 원하는 고정 용량 및 원하는 비에 기초하고, 및/또는 하나 이상의, 예를 들어 각각 개별적인 서브-유형 또는 서브-집단의 원하는 고정 용량에 기초한다. 따라서, 일부 구현예에서, 용량은 T 세포의 원하는 고정 또는 최소 용량 및 원하는 CD4+ 대 CD8+ 세포의 비에 기초하고 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 고정 또는 최소 용량에 기초한다.

일부 구현예에서, 세포는 다수의 세포 집단 또는 서브-유형, 예를 들어 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 서브 유형의 원하는 결과 비의 용인 범위에서 또는 그 이내에서 투여된다. 일부 양상에서, 원하는 비는 특정 비일 수 있고 또는 비의 범위일 수 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, 원하는 비(예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 세포의 비)는 약 1:5 내지 약 5:1(또는 약 1:5보다 크고, 약 5:1보다 작음), 또는 약 1:3 내지 약 3:1(또는 약 1:3보다 크고, 약 3:1보다 작음), 예를 들어 약 2:1 내지 약 1:5(또는 약 1:5보다 크고, 약 2:1보다 작음)이고, 예를 들어 약 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5이다. 일부 양상에서, 상기 용인되는 차이는 상기 원하는 비의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 및 이들 범위 사이의 임의의 수치를 포함하여 그 이내이다.

세포는 임의의 적합한 수단에 의해 투여 될 수 있다. 세포는 투여 요법으로 투여되어 종양 부담의 감소와 같은 치료 효과를 달성한다. 복용 및 투여는 면역 조절 화합물의 투여 스케줄에 부분적으로 의존 할 수 있으며, 이는 T 세포 요법의 투여 개시전, 개시후 및/또는 동시에 투여 될 수 있다. T 세포 요법제의 다양한 투여 스케줄은 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 일시 투여 및 펄스 주입을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 특정 구현예에서, 조작된 T 세포는 재조합 수용체를 발현한다. 특정 구현예에서, 조작된 T 세포는 CAR을 발현한다.

특정 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포의 수를 지칭한다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 수 및/또는 농도는 투여된 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵구(PBMC)의 수 또는 농도를 말한다.

일부 양상에서, 용량의 크기는 하나 이상의 기준에 기초하여 결정되는데, 예를 들어 화학요법과 같은 이전 치료에 대한 환자의 반응, 대상체의 질환 부담, 예를 들어 종양 부하, 벌크, 크기 또는 정도, 세기, 또는 전이 유형, 단계 및/또는 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성, 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응를 발병할 가능성 또는 이환율에 기초한다.

일부 구현예에서, 세포와 조합하여 감마 세크레타제 억제제를 투여함으로써 세포의 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있고, 예를 들어 실질적으로 또는 유의하게 증가시킬 수 있고, 이에 따라 대상체에 세포를 더 낮은 용량으로 투여할 수 있다. 경우에 따라, 제공된 방법은 감마 세크레타제 억제제 투여 없이 세포 요법제를 투여하는 방법에서의 용량보다 더 적은 용량, 감마 세크레타제 억제제를 투여하지 않고 세포 요법제를 투여하는 방법의 용량보다 적어도 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배 또는 10배 더 낮은 용량으로도, 동일하거나 더 좋은 치료 효과를 달성할 수 있다.

일부 구현예에서, 예를 들어 용량은 약 5.0 x 10⁶ 내지 2.25 x 10⁷, 5.0 x 10⁶ 내지 2.0 x 10⁷, 5.0 x 10⁶ 내지 1.5 x 10⁷, 5.0 x 10⁶ 내지 1.0 x 10⁷, 5.0 x 10⁶ 내지 7.5 x 10⁶, 7.5 x 10⁶ 내지 2.25 x 10⁷, 7.5 x 10⁶ 내지 2.0 x 10⁷, 7.5 x 10⁶ 내지 1.5 x 10⁷, 7.5 x 10⁶ 내지 1.0 x 10⁷, 1.0 x 10⁷ 내지 2.25 x 10⁷, 1.0 x 10⁷ 내지 2.0 x 10⁷, 1.0 x 10⁷ 내지 1.5 x 10⁷, 1.5 x 10⁷ 내지 2.25 x 10⁷, 1.5 x 10⁷ 내지 2.0 x 10⁷, 2.0 x 10⁷ 내지 2.25 x 10⁷ 범위이다. 일부 구현예에서, 세포의 용량은 적어도 또는 적어도 약 5 x 10⁶, 6 x 10⁶, 7 x 10⁶, 8 x 10⁶, 9 x 10⁶, 10 x 10⁶내지 약 15 x 10⁶재조합-수용체 발현 세포, 예를 들어 CD8+인 세포를 발현하는 재조합-수용체의 세포수를 함유한다. 일부 구현예에서, 이러한 용량, 이러한 세포의 표적 수는 투여된 조성물 중 재조합-수용체를 발현하는 총 세포에 관한 것이다.

일부 구현예에서, 예를 들어 더 낮은 용량은 대상체 체중 킬로그램 당 약 5 x 10⁶ 세포, 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포, T 세포, 및/또는 PBMC, 예를 들어 대상체 체중 킬로그램 당 그러한 세포를 약 4.5 x 10⁶, 4 x 10⁶, 3.5 x 10⁶, 3 x 10⁶, 2.5 x 10⁶, 2 x 10⁶, 1.5 x 10⁶, 1 x 10⁶, 5 x 10⁵, 2.5 x 10⁵, 또는 1 x 10⁵ 개 미만으로 함유한다. 일부 구현예에서, 더 낮은 용량은 대상체 체중 킬로그램 당 그러한 세포를 약 1 x 10⁵, 2 x 10⁵, 5 x 10⁵, 또는 1 x 10⁶ 개 미만으로 함유하거나, 또는 전술한 임의의 2 수치 사이의 범위의 값으로 함유한다. 일부 구현예에서, 그러한 값이라 함은 재조합 수용체-발현 세포의 수를 가리키며; 다른 구현예에서, 이들은 투여된 총 세포, T 세포 또는 PBMC의 수를 가리킨다.

일부 구현예에서, 대상체에게 하나 이상의 후속 용량의 세포를 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 후속 용량은 세포의 제 1 용량 투여 개시로부터 약 7일, 14일, 21일, 28일 또는 35일 이상 경과 후에 투여된다. 세포의 후속 용량은 제 1 용량보다 많거나, 동일하거나 더 적을 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포 요법제의 투여, 예를 들어 제1 및/또는 제 2 용량의 세포의 투여를 반복할 수 있다.

일부 구현예에서, T 세포 요법제, 예를 들어 세포의 용량, 또는 세포의 분할 용량의 제 1 용량의 투여는 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염의 투여 전, 투여와 동시 또는 투여 후(후속하여 또는 후속적으로) 개시된다.

일부 구현예에서, 세포의 용량, 또는 세포의 후속 용량은, 조합 요법에 따라 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 세포의 용량, 또는 세포의 후속 용량은, 조합 요법에 따라 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시와 같은 날에 투여된다. 일부 구현예에서, 세포의 용량, 또는 세포의 후속 용량은, 조합 요법에 따라 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시로부터 1일 이내, 2일 이내, 3일 이내, 4일 이내, 5일 이내, 6일 이내, 또는 7일 이내에 투여된다.

일부 구현예에서, 세포의 용량, 또는 세포의 후속 용량은, 조합 요법에 따라 감마 세크레타제 억제제의 투여 시작 또는 개시에 앞서 투여된다. 일부 구현예에서, 세포의 용량은 제공된 조합 요법에 따라 감마 세크레타제 억제제의 투여로부터 적어도 또는 적어도 약 1 시간, 적어도 또는 적어도 약 2시간, 적어도 또는 적어도 약 3시간, 적어도 또는 적어도 약 6시간, 적어도 또는 적어도 약 12시간, 적어도 또는 적어도 약 1일, 적어도 또는 적어도 약 2일, 적어도 또는 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 또는 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 또는 적어도 약 7일, 적어도 약 12일, 적어도 또는 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 또는 적어도 약 21일, 적어도 또는 적어도 약 28일, 적어도 약 30일, 적어도 또는 적어도 약 35일, 적어도 또는 적어도 약 42일, 적어도 약 60일 또는 적어도 약 90일 전에 투여된다.

일부 구현예에서, 제공된 조합 요법에 따른 감마 세크레타제 억제제는 면역요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 선행 투여가 면역요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여개시 직전 T 세포의 기능성에 비해 T 세포의 기능성 감소와 연관이 있거나 연관이 있을 가능성이 있는 때 또는 T 세포 요법의 개시 후 선행 시점에서 투여된다. 일부 구현예에서, 이 방법은 세포 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법의 세포의 용량의 투여 후, 그러나 감마 세크레타제 억제제의 투여 전, T 세포의 하나 이상의 기능, 예를 들어 혈액 내의 수준 또는 양에 의해 측정되는 바와 같은, 예를 들어 세포의 팽창 또는 지속성, 또는 예를 들어 섹션 III에 설명되는 바와 같이, 본 발명에 설명된 바람직한 결과 또는 다른 결과에 대해 대상체로 부터의 샘플을 평가하는 것을 포함한다. 조합 요법의 투약에 관하여 평가 또는 결정하는 다양한 파라미터들이 섹션 III에 설명되어 있다.

B. 감마 세크레타제 억제제의 투여

본 발명에 제공된 상기 방법, 조성물, 조합물, 키트 및 용도의 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 하나 이상의 조성물, 예를 들어 감마 세크레타제의 억제제, 및/또는 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제를 함유하는 약학 조성물로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 세포, 예를 들어 종양/암세포 상의 하나 이상의 수용체들의 막내 절단을 억제하거나 또는 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 암/종양 세포 상의 세포 표면 수용체의 막내 절단 억제의 IC₅₀은 약 100μM, 50μM, 25μM, 10μM, 1μM, 0.75μM, 0.5μM, 0.25μM, 0.1μM, 75nM, 50nM, 25nM, 또는 10nM 미만이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.35 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 1.0 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.35 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 1.0 nM, 1.0 nM 내지 10 nM, 1.0 nM nM 내지 5 nM, 1.0 nM nM 내지 1 nM, 1.0 nM nM 내지 0.5 nM, 1.0 nM nM 내지 0.35 nM, 1.0 nM nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.25 nM 내지 0.35 nM, 0.35 nM 내지 10 nM, 0.35 nM 내지 5 nM, 0.35 nM 내지 1 nM, 0.35 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM or 5 nM 내지 10 nM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 상기 암/종양 세포 상의 세포 표면 수용체의 막내 절단을 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 암/종양 세포 상의 세포 표면 수용체의 막내 절단 억제의 IC₅₀은 약 10nM-25nM, 25nM-50nM, 50nM-75nM, 75nM-0.1μM, 0.1μM-0.25μM, 0.25μM-0.5μM, 0.5μM-0.75μM, 0.75μM-1μM, 1μM-10μM, 10μM-25μM, 25μM-50μM, 50μM-75μM, 또는 75μM-100μM이다. 일부 구현예에서, 상기 수용체는 B 세포 성숙 항원(BCMA), 노치 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, 세포 표면 관련된 뮤신 1(Muc1), 에프린 B2, 베타글리칸(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1, E-카드헤린, N-카드헤린, HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R 또는 아멜로이드 전구체 단백질(APP)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 수용체는 세포 표면 관련된 뮤신 1(Muc1)이다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제의 억제제는 세포, 예를 들어 종양/암세포 상의 전술한 하나 이상의 수용체의 막내 절단을 억제하거나 감소시키고, 상기 감마 세크레타제 억제제의 투여는 세포상의 수용체 발현의 수준을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제의 억제제는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 막내 절단을 금지하고, 표면 BCMA의 절단 억제의 IC₅₀은 약 100μM, 50μM, 25μM, 10μM, 1μM, 0.75μM, 0.5μM, 0.25μM, 0.1μM, 75ξΝ, 50ξΝ, 25nM, 또는 10nM이다. 일부 구현예에서, 상기 암/종양 세포 상의 세포 표면 수용체의 막내 절단 억제의 IC₅₀은 약 10nM-25nM, 25nM-50nM, 50nM-75nM, 75nM-0.1μM, 0.1μM-0.25μM, 0.25μM-0.5μM, 0.5μM-0.75μM, 0.75μM-1μM, 1μM-10μM, 10μM-25μM, 25μM-50μM, 50μM-75μM, or 75μM-100μM이다. 일부 구현예에서, 표면 BCMA의 절단 억제의 IC₅₀은 0.5nM 미만이다. 일부 구현예에서, 표면 BCMA의 절단 억제의 IC₅₀은 약 0.01nM 내지 약 0.5nM, 또는 0.01nM 내지 약 0.5nM, 또는 약 0.01nM 내지 약 0.35nM이다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제의 억제제는 낮은 뇌 침투율을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제의 단지 0.1%, 0.25%, 0.5%, 0.75%, 1%, 2.5%, 5%, 7.5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%가 투여 후 뇌를 침투한다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제의 억제제는 일부 구현예에서, 감마 세크레타제의 기질의 일부분의 막내 절단을 선택적으로 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 막내 절단을 선택적으로 억제하거나 감소시킨다.

일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제 또는 비-펩티드 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 알데하이드 유도체, 디플루오로케톤 유도체, 하이드록시에틸렌 디펩티드 이소테레 유도체, 알파-나선형 펩티드 유도체 및 디펩티드 유사체 중의 펩티드 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 벤조디아제핀 유도체 및 설폰아미드 유도체로부터 선택된 비-펩티드 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 전이 상태 억제제, 예를 들어 LY-411575-I 또는 LY685,458이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비-전이 상태 억제제 예를 들어 DAPT, RO4929097이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 감마 세크레타제 조절제이다. 일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 조절제는 비스테로이드계 항-염증성 약물-유형 조절제이다.

일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날; 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752(제조원: Merck); MRK-003(제조원: Merck); semagacestat/LY450139(제조원: Eli Lilly); RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드](Alexis Biochemicals 사로부터 구입가능함), LY411575(제조원: Eli Lilly and Co.), L-685,458(제조원: Sigma-Aldrich), BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)(제조원: Bristol Myers Squibb)이다.

일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 하기 구조식의 화합물 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이다:

일부 구현예에서, 화합물 1은 도시된 단일 입체이성질체이다. 일부 경우에, 4개의 입체이성질체를 생성하는 2개의 키랄 중심이 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 화합물 1에 대한 언급은 또한 화합물 1을 비롯한 라세미 혼합물을 포함한다. 특정 입체이성질체는 거울상이성질체적으로 순수하거나 또는 풍부한 출발물질을 사용한 입체 특이적 합성법으로 제조될 수 있다. 출발물질, 중간체, 또는 화합물 1을 포함한 라세미 혼합물 중의 어느 것의 특이적 입체이성질체는, 키랄 고정상에서의 크로마토그래피, 효소 분해, 또는 상기 목적으로 형성된 부분 입체이성질체, 예를 들어 부분 입체이성질체 염의 크로마토그래피 또는 분별 결정을 비롯한 당해 분야에 익히 알려진 기법, 예를 들어 문헌 「Stereochemistry of Organic Compounds, E. I. Eliel and S. H. Wilen (Wiley 1994) and Enantiomers, Racemates, and Resolutions, J., Jacques, A. Collet, and S. H. Wilen (Wiley 1991)」에서 찾을 수 있는 기법에 의해서 분해될 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 하기 구조식의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이다:

일부 구현예에서, 상기 화합물은 화합물 1이다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 4,4,4-trifluoro-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-하이드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드로 명명될 수 있으며; 또한 N-[(1S)-2-[[(7S)-6,7-디하이드로-5-(2-하이드록시에틸)-6-옥소-5H-피리도[3,2-a][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소에틸]-4,4,4-트리플루오로부탄아미드로 명명될 수도 있고; 화합물 1을 명확하게 식별하기 위해서 다른 이름이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 LY3039478로 알려져 있다. 또한, 화합물 1의 합성 및 제조에 대해서는 국제공개공보 제WO2013/016081호를 참조한다.

1. 조성물 및 제형

본 발명에 제공된 조합 요법, 조성물, 조합물, 키트 및 용도의 일부 구현예에서, 조합 요법제는 하나 이상의 조성물, 예를 들어 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 의약 조성물로서 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 조성물, 예를 들어 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 의약 조성물은 희석제, 아쥬반트, 부형제, 또는 비히클 등, 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 세포가 함께 투여되는 담체를 포함할 수 있다. 적절한 약학적 담체의 예는 이. 더불유. 마틴(E. W. Martin)의 문헌 「Remington's Pharmaceutical Sciences」에 설명되어 있다. 이러한 조성물은 환자에게 적절한 투여 형태를 제공할 수 있도록, 적절한 양의 담체와 함께 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염의 치료적 유효량을 일반적으로 순수한 형태로 함유한다. 이러한 약학적 담체는 멸균 액체, 예를 들어 물 및 예를 들어 땅콩 기름, 대두유, 광물유, 참기름과 같은 페트롤륨, 동물, 식물 또는 합성 기원의 오일일 수 있다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액 역시 액상 담체, 특히 주사가능한 용액을 위한 담체로서 사용될 수 있다. 의약 조성물은 희석제(들), 아쥬반트(들), 항유착제(들), 결합제(들), 코팅제(들), 충전제(들), 향료(들), 색소(들), 윤활제(들), 활택제(들), 보존제(들), 세제(들), 흡수제(들), 유화제(들), 약학적 부형제(들), pH 완충제(들), 또는 감미료(들), 및 이들의 조합을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 의약 조성물은 액체, 고체, 동결건조 분말, 겔 형태 및/또는 이들의 조합일 수 있다. 일부 양상에서, 담체의 선택은 부분적으로는 특정한 억제제에 의해 및/또는 투여 방법에 의해 결정된다.

약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 사용되는 용량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 이의 비제한적인 예로는: 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예를 들어 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 예를 들어 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 폴리머; 글리신, 글루타민, 아스파라진, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트화제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 슈가; 나트륨과 같은 염-형성 카운터-이온; 금속 복합체(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 안정화제 및/또는 보존제를 들 수 있다. 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 조성물은 동결건조될 수도 있다.

일부 구현예에서, 의약 조성물은 근육내, 정맥내, 피내, 병소내, 복강내 주사, 피하, 종양내, 경막외, 코, 구강, 질, 직장, 국소, 국소, 귀, 흡입, 협측(예를 들어 설하), 및 경피 투여 또는 임의의 경로를 비롯한 당업자에게 알려진 임의의 경로에 의해 투여되도록 조성될 수 있다. 일부 구현예에서, 다른 투여 방식도 상정할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구내(periocular) 주사, 망막하 주사, 유리체내 주사, 경막내 주사, 사슬골하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하(subconjectval) 주사, 결막하(subconjuntival) 주사, 서브테논(sub-Tenon's) 주사, 레트로전술 주사, 골반 주사, 또는 후방 점액 전달에 의할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 비경구, 폐내 및 비강내, 및 국소 치료가 요망되는 경우 병변내 투여에 의한다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 용량은 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 이는 다수의 볼루스 투여, 예를 들어 3일 이하의 기간 동안, 또는 연속 주입 투여에 의해 투여된다.

일부 구현예에서, 투여는 치료 부위에 따라 국소, 국소 또는 전신 일 수 있다. 일부 구현예에서, 치료를 필요로 하는 영역으로의 국소 투여는, 예를 들어 수술이 진행되는 동안 국소 주입, 국소 적용, 예를 들어 수술후 상처 드레싱과 관련하여, 주사에 의해, 국소 주입에 의해. 카테터, 좌약 또는 임플란트에 의한 카테터에 의해 달성될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 또한 다른 생물학적 활성제와 함께 순차적으로, 간헐적으로 또는 동일한 조성물로서 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 또한 제어 방출 제형 및 장치 제어 방출을 포함하는 제어 방출 시스템, 예를 들어 펌프에 의한 제어 방출 시스템을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 경구이다.

일부 구현예에서, 약학적 및 치료적 활성 화합물 및 그의 유도체는 전형적으로 단위 투여 제형 또는 복수 투여 제형으로서 제형화 및 투여된다. 각각의 단위 용량은 목적하는 치료 효과를 나타내는데 충분한 미리 정해진 양의 치료적 활성 화합물을, 필요한 약학적 담체, 비히클 또는 희석제와 함께 함유한다. 일부 구현예에서, 단위 투여 제형의 예로는 적절한 양의 화합물 또는 약학적으로 허용가능한 그의 유도체를 함유하는 정제, 캡슐, 알약, 분말, 과립, 멸균 비경구 용액 또는 현탁액, 및 경구 용액 또는 현탁액 및 오일 워터 에멀젼을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 단위 투여 제형은 앰풀, 시린지 또는 개별 포장된 정제 또는 캡슐에 함유될 수 있다. 단위 투여 제형은 여러 분획으로 나누어 투여하거나 또는 여러개를 한꺼번에 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 복수 투여 제형은 분리된 단위 투여 제형으로 투여될 단일 용기에 포장된 복수의 동일한 단위 투여 제형이다. 복수 투여 제형의 예로는 바이알, 정제 또는 캡슐의 병 또는 파인트 또는 갤런 들이 병을 들 수 있다.

2. 감마 세크레타제 억제제의 투여 스케쥴

일부 구현예에서, 제공된 조합 요법은 치료적 유효량의 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염, 및 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염의 투여는, T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 투여 전, 투여에 후속하여, 투여 도중, 투여와 동시 또는 거의 동시에 순차적으로 및/또는 간헐적으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 이 방법은 T 세포 요법제의 투여에 앞서 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염의 투여를 개시하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 이 방법은 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 투여 후에 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염의 투여를 개시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 스케쥴은 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염을 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 투여와 동시에 개시하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염은 주기적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이러한 주기, 즉 사이클은 감마 세크레타제 억제제를 투여한 다음, 감마 세크레타제 억제제의 약학적으로 허용가능한 염이 투여되지 않는 휴지 기간이 이어지는 투여 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시로부터의 사이클의 총 일수는, 약 1일, 3일, 7일, 약 21일, 28일, 30일, 40일, 50일, 60일이거나 이를 초과한다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는, 적어도 1 사이클에서 수행되며 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 투여 개시는 같은 날, 선택적으로 동시에 수행된다. 일부 구현예에서, 적어도 1 사이클에서의 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는 세포 요법제의 투여 개시전에 일어난다. 일부 구현예에서, 적어도 1 사이클에서의 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는 세포 요법제의 투여 개시와 동시에 또는 같은 날에 수행된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 투여 개시로부터 약 0 내지 30일, 예를 들어 0 내지 15일, 0 내지 6일, 0 내지 96시간, 0 내지 24시간, 0 내지 12시간, 0 내지 6시간, 또는 0 내지 2시간, 2시간 내지 15일, 2시간 내지 6일, 2시간 내지 96시간, 2시간 내지 24시간, 2시간 내지 12시간, 2시간 내지 6시간, 6시간 내지 30일, 6시간 내지 15일, 6시간 내지 6일, 6시간 내지 96시간, 6시간 내지 24시간, 6시간 내지 12시간, 12시간 내지 30일, 12시간 내지 15일, 12시간 내지 6일, 12시간 내지 96시간, 12시간 내지 24시간, 24시간 내지 30일, 24시간 내지 15일, 24시간 내지 6일, 24시간 내지 96시간, 96시간 내지 30일, 96시간 내지 15일, 96시간 내지 6일, 6일 내지 30일, 6일 내지 15일, 또는 15일 내지 30일 전에 투여된다. 일부 양상에서, 감마 세크레타제 억제제는, T 세포 요법제의 투여 개시 전 약 96시간, 72시간, 48시간, 24시간, 12시간, 6시간, 2시간 또는 1시간 이내에 투여된다.

감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 수화물의 약학적으로 허용가능한 염이 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)에 앞서 주어지는 임의의 이러한 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는, 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제)의 투여가 개시될 때까지 및/또는 세포 요법제의 투여 개시 후 일정 시간 동안 규칙적인 간격으로 지속된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 후에 투여되거나 추가로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제)의 투여 개시 후 약 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 96시간, 4일, 5일, 6일 또는 7일, 14일, 15일, 21일, 24일, 28일, 30일, 36일, 42일, 60일, 72일 또는 90일 이내에 투여된다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 세포 요법제의 투여 개시 후 감마 세크레타제 억제제를, 예를 들어 규칙적인 간격으로 지속적인 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어 감마 세크레타제 억제제는 매일, 격일로, 3일마다, 일주일에 3번, 또는 일주일에 한번씩 일정한 기간 동안 일정한 간격으로 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 개시로부터 최대 약 1일, 최대 약 2일, 최대 약 3일, 최대 약 4일, 최대 약 5일, 최대 약 6일, 최대 약 7일, 최대 약 12일, 최대 약 14일, 최대 약 21일, 최대 약 24일, 최대 약 28일, 최대 약 30일, 최대 약 35일, 최대 약 42일, 최대 약 60일 또는 최대 약 90일, 최대 약 120일, 최대 약 180일, 최대 약 240일, 최대 약 360일, 또는 최대 약 720일 이상 경과 후에 전술한 바와 같이 규칙적인 간격으로 투여된다.

전술한 임의의 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 개시 전 및 투여 개시후에 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는, 하기 시점들 또는 그 후, 선택적으로 직후 또는 1 내지 3일 후에 수행된다: (i) 대상체의 혈액에서 T 세포 요법의 세포의 피크 또는 최대 수준이 검출 가능하게된 때; (ii) 혈액 내에서 검출 가능하게된 후, 혈액 내 검출 가능한 T 세포 요법의 세포의 수가 검출 불가능하거나 또는 감소, 선택적으로 T 세포 요법 투여 후 선행 시점과 비교시 감소된 때; (iii) 혈액에서 검출 가능한 T 세포 요법의 세포의 수가, T 세포 요법의 실시 개시 후 대상체의 혈액에서 검출 가능한 T 세포 요법의 세포의 피크 또는 최대 수의 1.2배, 1.5배, 2.0배, 3.0배, 4.0배, 5.0배, 10배 또는 그 이상만큼 감소된 때; (iv) 대상체의 혈액에서 T 세포 요법의 세포의 피크 또는 최대 수준이 검출 가능한 후, 대상체로부터의 혈액에서 검출 가능한 T 세포의 세포수 또는 유래된 세포의 수가 대상체의 혈액 내의 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC)의 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만인 때; (v) T 세포 요법에 의한 치료 후 관해(remission)에 이어, 대상체가 질환 진행을 나타내거나 및/또는 재발된 때; 및/또는 (iv) T 세포 투여 전 또는 후 및 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시 전의 시점에서의 종양 부담에 비해 대상체가 증가된 종양 부담을 나타낸 때.

일부 양상에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는 대상체가 재발한(relapse) 후 또는 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 후 재발될 것으로 의심되거나 재발된 시점에서이다. 일부 경우에, 세포 요법제는 항-BCMA CAR-T 세포 요법제이고 감마 세크레타제 억제제는 대상체가 항-BCMA CAR-T 세포 요법제의 투여 후 재발될 것으로 의심되거나 재발할 가능성이 잇는 시점에서 투여된다.

일부 구현예에서, 적어도 1 사이클에서의 감마 세크레타제 억제제는 세포 요법제의 투여 개시후에 수행된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는, 세포 요법제의 투여 개시로부터 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 또는 적어도 약 12일, 적어도 약 14일, 적어도 또는 적어도 약 15일, 적어도 약 21일, 적어도 또는 적어도 약 24일, 적어도 약 28일, 적어도 약 30일, 적어도 약 35일 또는 적어도 약 42일, 적어도 약 60일, 또는 적어도 약 90일 후에 수행된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는, 세포 요법제의 투여 개시로부터 적어도 2일 후, 적어도 1주 후, 적어도 2주 후, 적어도 3주 후, 또는 적어도 4주 후에 수행된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는, 세포 요법제의 투여 개시로부터 2 내지 28일 또는 7 내지 21일 후에 수행된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시는, 세포 요법제의 투여 개시로부터 약 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 24일, 또는 28일 이상 경과 후에 수행된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 세포 요법제의 투여 개시 후 1일 수회, 1일 2회, 매일, 격일로, 1주 3회, 1주 2회, 또는 1주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 매일 투여된다. 일부 구현예에서 감마 세크레타제 억제제는 1일 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 1일 3회 투여된다. 다른 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 격일로 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 복수의 연속일의 투여 기간 동안, 예를 들어 최대 약 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30일, 또는 30일을 초과하는 기간의 연속일 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 약 7 연속일을 초과하여, 약 14 연속일을 초과하여, 약 21 연속일을 초과하여, 약 21 연속일을 초과하여, 또는 약 28 연속일을 초과하는 기간 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 최대 21 연속일의 투여 기간 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 최대 21 연속일의 투여 기간 동안 투여되며 여기서 상기 사이클은 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시로부터 30일을 초과하여 포함한다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 약 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30일 이하, 또는 30 연속일 이하의 투여 기간 동안 투여된다. 특정 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 21일의 치료 사이클에 걸쳐 14일 동안 1일 1회 투여된다. 특정 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 28일의 치료 사이클에 걸쳐 21일 동안 1일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 14 연속일 이하의 투여 기간 동안 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 복수의 연속일 동안 감마 세크레타제 억제제를 투여한 다음 감마 세크레타제 억제제가 투여되지 않는 휴지 기간이 이어지는 사이클로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 약 1일 초과, 약 3 연속일 초과, 약 5 연속일 초과, 약 7 연속일 초과, 약 8 연속일 초과, 약 9 연속일 초과, 약 10 연속일 초과, 약 11 연속일 초과, 약 12 연속일 초과, 약 13 연속일 초과, 약 14 연속일 초과, 약 15 연속일 초과, 약 16 연속일 초과, 약 17 연속일 초과, 약 18 연속일 초과, 약 19 연속일 초과, 약 20 연속일 초과, 또는 약 21일 이상의 연속일을 초과하는 기간이다. 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 7 연속일 초과, 14 연속일 초과, 21일 초과, 또는 28일을 초과하는 기간이다. 일부 구현예에서, 상기 휴지 기간은 약 14 연속일을 초과한다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 사이클은 휴지 기간을 포함하지 않는다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 적어도 1회 반복되는 사이클로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 적어도 2 사이클, 적어도 3 사이클, 적어도 4 사이클, 적어도 5 사이클, 적어도 6 사이클, 적어도 7 사이클, 적어도 8 사이클, 적어도 9 사이클, 적어도 10 사이클, 적어도 11 사이클, 또는 적어도 12 사이클로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 사이클로 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 1일 6회, 1일 5회, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 매 3일마다, 주 3회, 주 2회, 주 1회 또는 세포 요법제 투여 개시전 또는 개시 후 오직 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 주 3회 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여는 적어도 또는 적어도 약 14일, 적어도 또는 적어도 약 21일 또는 적어도 또는 적어도 약 28일인 처리 사이클로 수행된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 세포 요법제의 투여 기간 전, 동안, 경과 동안, 및/또는 후에 규칙적인 간격으로 복수 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 세포 요법제의 투여에 앞서 규칙적인 간격으로 하나 이상의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 세포 요법제의 투여 후 규칙적인 간격으로 하나 이상의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 하나 이상의 용량의 투여는 세포 요법제의 용량의 투여와 동시에 일어날 수 있다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 용량, 빈도, 기간, 시기 및/또는 순서는, 예를 들어 본 명세서의 섹션 III에 설명된 것들과 같이, 치료 결과의 평가 및/또는 스크리닝 단계의 특정한 역치 또는 결과 기준에 기초하여 결정된다.

일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 치료적 유효량의 감마 세크레타제 억제제가 앞서 투여된 바 있는 대상체에게 세포 요법제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 대상체에게 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량을 투여하기 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제를 이용한 치료는 용량의 세포를 투여하는 것과 동시에 일어난다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 용량의 세포를 투여한 후에 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는 2 내지 28일, 예를 들어 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21일, 또는 21일 이상의 투여기간 동안 실시된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21일, 또는 21일 이상 동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21일, 또는 21일 이상 동안 1일 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21일, 또는 21일 이상 동안 1일 3회 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21일, 또는 21일 이상 동안 격일로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21일, 또는 21일 이상 동안 주 3회 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제)의 투여 개시 후 2, 4, 7, 9, 11, 14, 16, 및 18일에 투여된다.

본 발명에 제공된 방법들의 일부 구현예에서, 면역조절 화합물, 예를 들어 레날리도마이드, 및 세포 요법제는 동시에 또는 거의 동시에 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 최대 또는 최대 약 50mg/day, 100mg/day, 150mg/day, 175mg/day, 200mg/day, 250mg/day, 300mg/day, 350mg/day, 400mg/day, 450mg/day, 500mg/day, 600mg/day, 700mg/day, 800mg/day 이하의 총 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 0.5mg 내지 500mg, 0.5mg 내지 250mg, 0.5mg 내지 100mg, 0.5mg 내지 50mg, 0.5mg 내지 25mg, 0.5mg 내지 10mg, 0.5mg 내지 5.0mg, 0.5mg 내지 2.5mg, 0.5mg 내지 1.0mg, 1.0mg 내지 500mg, 1.0mg 내지 250mg, 1.0mg 내지 100mg, 1.0mg 내지 50mg, 1.0mg 내지 25mg, 1.0mg 내지 10mg, 1.0mg 내지 5.0mg, 1.0mg 내지 2.5mg, 2.5mg 내지 500mg, 2.5mg 내지 250mg, 2.5mg 내지 100mg, 2.5mg 내지 50mg, 2.5mg 내지 25mg, 2.5mg 내지 10mg, 2.5mg 내지 5.0mg, 5.0mg 내지 500mg, 5.0mg 내지 250mg, 5.0mg 내지 100mg, 5.0mg 내지 50mg, 5.0mg 내지 25mg, 5.0mg 내지 10mg, 10mg 내지 500mg, 10mg 내지 250mg, 10mg 내지 100mg, 10mg 내지 50mg, 10mg 내지 25mg, 25mg 내지 500mg, 25mg 내지 250mg, 25mg 내지 100mg, 25mg 내지 50mg, 50mg 내지 500mg, 50mg 내지 250mg, 50mg 내지 100mg, 100mg 내지 500mg, 100mg 내지 250mg 또는 250mg 내지 500mg의 양으로 투여되거나, 또는 상기 억제제의 각각의 투여는 독립적으로 행해진다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 적어도 또는 적어도 약 0.5mg, 1.0mg, 2.5mg, 5.0mg, 10.0mg, 25mg, 50mg, 100mg, 250mg 또는 500mg의 양으로 투여되거나, 또는 상기 억제제 각각의 투여는 독립적으로 행해진다. 일부 구현예에서, 상기 양은 감마 세크레타제 억제제의 1일 1회 투여량이다. 상기 투여량은 전술한 바와 같이 규칙적으로, 예를 들어 투여 기간 동안 격일로, 3일 간격으로, 주 3회, 또는 주 1회 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 투여 기간은 2 내지 28일, 예를 들어 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20일, 또는 21일 이상이다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 약 1mg 내지 약 20mg, 예를 들어 약 1mg 내지 약 10mg, 약 2.5mg 내지 약 7.5mg, 약 5mg 내지 약 15mg, 예를 들어 약 5mg, 10mg, 15mg 또는 20mg의 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 약 10㎍/kg 내지 약 5mg/kg, 예를 들어 약 50㎍/kg 내지 약 2mg/kg, 약 50㎍/kg 내지 약 1mg/kg, 약 50㎍/kg 내지 약 500㎍/kg, 약 50㎍/kg 내지 약 250㎍/kg, 약 100㎍/kg 내지 약 200㎍/kg, 약 50 내지 약 100㎍/kg, 약 100㎍/kg 내지 약 2mg/kg, 약 100㎍/kg 내지 약 1mg/kg, 약 100㎍/kg 내지 약 500㎍/kg, 약 100㎍/kg 내지 약 250㎍/kg, 약 100㎍/kg 내지 약 200㎍/kg, 약 100㎍/kg, 약 200㎍/kg 내지 약 2mg/kg, 약 200㎍/kg 내지 약 1mg/kg, 약 200㎍/kg 내지 약 500㎍/kg, 약 200㎍/kg 내지 약 250㎍/kg 또는 약 250㎍/kg 내지 약 2mg/kg, 약 250㎍/kg 내지 약 1mg/kg, 약 250㎍/kg 내지 약 500㎍/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 약 400㎍/kg 내지 약 600㎍/kg, 예를 들어 약 500㎍/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 양은 감마 세크레타제 억제제의 1일 1회 투여량이다. 상기 투여량은 전술한 바와 같이 규칙적으로, 예를 들어 투여 기간 동안 격일로, 3일 간격으로, 주 3회, 또는 주 1회 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 투여 기간은 2 내지 28일, 예를 들어 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20일, 또는 21일 이상이다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 적어도 또는 적어도 약 0.1mg/day, 0.5mg/day, 1.0mg/day, 2.5mg/day, 5mg/day, 10mg/day, 25mg/day, 50mg/day 또는 100mg/day의 1일 총 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 용량은 약 25mg/day이다. 특정 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 용량은 약 10mg/day이다. 상기 투여량은 전술한 바와 같이 규칙적으로, 예를 들어 투여 기간 동안 격일로, 3일 간격으로, 주 3회, 또는 주 1회 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 투여 기간은 2 내지 28일, 예를 들어 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20일, 또는 21일 이상이다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 약 1mg, 2.5mg, 5mg, 7.5mg, 10mg, 15mg을 초과하고 25mg 미만인 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는, 약 1mg/day, 2.5mg/day, 5mg/day, 7.5mg/day, 10mg/day, 15mg/day을 초과하고 25mg/day보다 적은 양으로 투여된다. 상기 투여량은 전술한 바와 같이 규칙적으로, 예를 들어 투여 기간 동안 격일로, 3일 간격으로, 주 3회, 또는 주 1회 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 투여 기간은 2 내지 28일, 예를 들어 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20일, 또는 21일 이상이다.

일부 구현예에서, 투여량, 예를 들어 1일 투여량은, 하나 이상의 분할된 용량, 예를 들어 2, 3, 또는 4개 용량으로 투여되거나 또는 단일 제형으로서 투여된다. 감마 세크레타제 억제제는 단독으로, 약학적으로 허용가능한 담체의 존재하에, 또는 다른 치료제의 존재하에 투여될 수 있다.

당업자는, 예를 들어 특정 제제 및 투여 경로에 따라 감마 세크레타제 억제제의 투여량을 더 많게 또는 더 적게 사용할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 일부 구현예에서,감마 세크레타제 억제제는 단독으로 투여되거나 또는 상기 화합물이 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제와 혼합되어 있는 의약 조성물 형태로서 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 치료하고자 하는 장기 또는 조직에 국소적으로 또는 전신적으로 투여될 수 있다. 예시적인 투여 경로의 예로는 국소, 주사(예를 들어 피하, 근육내, 피내, 복강내, 종양내 및 정맥내), 경구, 설하, 직장, 경피, 경비, 질 및 흡입 경로를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 투여 경로는 경구, 비경구, 직장, 코, 국소 또는 눈 경로이거나 흡입에 의한다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 경구 투여된다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 캡슐, 정제 및 분말과 같은 고체 투여 제형, 또는 엘릭시르, 시럽 및 현탁액과 같은 액체 투여 제형으로서 경구 투여된다.

일단 환자의 질환이 호전되면, 예방적인 또는 치료 유지에 적합한 용량으로 조정할 수 있다. 예를 들어 투여량 또는 투여 빈도 또는 양자 모두를, 증상의 함수로서, 목적하는 치료 또는 예방 효과가 유지되는 수준으로 감소시킬 수 있다. 만일 증상이 적절한 수준으로 완화되었으면, 치료를 중단할 수 있다. 그러나, 환자는, 증상이 재발할 경우 장기적으로 간헐적인 치료를 필요로 할 수 있다. 환자는 또한 장기적으로 만성 치료를 필요로 할 수도 있다.

3. 추가 요법

일부 양상에서, 제공된 방법은 세포 요법제(T 세포 요법제)의 투여 개시 전 또는 투여 개시와 동시에, 하나 이상의 림프구 고갈 치료를 수행 중인 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 치료는 사이클로포스파미드와 같은 포스파미드의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 치료는 플루다라빈의 투여를 포함할 수 있다.

일부 양상에서, 면역고갈(예를 들어 림프구 고갈) 요법을 받는 사전 컨디셔닝(preconditioning) 대상체는 입양 세포 요법(ACT)의 효과를 향상시킬 수 있다. 사이클로스포린과 플루다라빈과의 조합을 비롯한, 림프구 고갈 제제를 이용한 사전 컨디셔닝은, 전달된 세포의 반응 및/또는 지속성을 향상시키는 것을 포함하여, 세포 치료에서 전달된 종양 침윤 림프구(TIL) 세포의 효능을 향상 시키는데 효과적이었다[예를 들어 문헌 「Dudley et al., Science, 298, 850-54 (2002); Rosenberg et al., Clin Cancer Res, 17(13):4550-4557 (2011)」 참조]. 마찬가지로, CAR+ T 세포의 맥락에서, 일부 연구에서는 림프구 고갈 제제, 가장 일반적으로 사이클로포스파미드, 플루다라빈, 벤다무스틴 또는 이들의 조합을 통합시켰으며, 때때로 저선량 방사선 조사를 동반시켰다[문헌 「Han et al. Journal of Hematology & Oncology, 6:47 (2013); Kochenderfer et al., Blood, 119: 2709-2720 (2012); Kalos et al., Sci Transl Med, 3(95):95ra73 (2011); Clinical Trial Study Record Nos.: NCT02315612; NCT01822652」 참조].

이러한 사전 컨디셔닝은 치료의 효능을 약화시킬 수 있는 하나 이상의 다양한 결과의 위험을 감소시키는 것을 목표로 수행될 수 있다. 여기에는 T 세포, B 세포, NK 세포가 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15와 같은 사이토카인의 활성화 또는 항상성을 위해 TIL과 경쟁하는 "사이토카인 싱크(cytokine sink)"라고 알려진 현상; 조절 T 세포, NK 세포 또는 면역계의 다른 세포에 의한 TIL 억제; 종양 미세환경에서 음성 조절제의 영향이 포함된다[문헌 「Muranski et al., Nat Clin Pract Oncol. December; 3(12): 668-681 (2006)」 참조].

그러므로 일부 구현예에서, 제공된 방법은 대상체에게 림프구 고갈 치료를 실시하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 세포 용량 투여 전에 대상체에게 림프구 고갈 요법을 실시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 치료는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드와 같은 화학요법제를 함유한다. 일부 구현예에서, 세포의 투여 및/또는 림프구갈 치료는 외래 환자 전달을 통해 수행된다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 세포 용량 투여 전에 대상체에게 사이클로포스파미드, 플루다라빈 또는 그의 조합과 같은 림프구 고갈 제제 또는 화학요법제와 같은 사전 컨디셔닝 제제를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어 대상체는 첫번째 또는 후속 용량 투여로부터 적어도 2일 전에, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7일 전에 사전 컨디셔닝 제제를 투여받을 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 용량 투여 전 7일 이내, 예를 들어 6, 5, 4, 3 또는 2일 이내에 사전 컨디셔닝 제를 투여받는다.

일부 구현예에서, 대상체는 대상체의 신체 표면적의 약 20mg/kg 내지 100mg/kg, 예를 들어 약 40mg/kg 내지 80mg/kg의 용량의 사이클로포스파미드로 사전 컨디셔닝된다. 일부 양상에서, 대상체는 약 60mg/kg의 사이클로포스파미드로 사전 컨디셔닝된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 단일 용량으로 투여되거나 또는 다회 투여, 예를 들어 매일, 격일, 또는 매 3일마다 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 1일 또는 2일 동안 1일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 제제가 사이클로포스파미드를 포함하는 경우 대상체는 사이클로포스파미드를 포괄적으로 약 100mg/m² 내지 500mg/대상체의 표면적(m²), 예를 들어 약 200mg/m² 내지 400mg/m², 또는 250mg/m² 내지 350mg/m²의 용량으로 투여받는다. 일부 경우, 대상체는 약 300mg/m²의 사이클로포스파미드를 투여받는다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 단일 용량으로 투여되거나 혹은 복수의 용량, 예를 들어 매일, 격일로 또는 3일마다 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 매일, 예를 들어 1 내지 5일동안, 예를 들어 2 내지 4일동안 투여될 수 있다. 일부 경우, 대상체는 세포 요법의 개시전에 사이클로포스파미드를 3일동안 매일 약 300mg/대상체의 표면적(m²)으로 투여받는다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 제제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상체는 각각 포괄적으로 플루다라빈을 약 1mg/대상체의 표면적(m²) 내지 100mg/m², 예를 들어 약 10mg/m² 내지 75mg/m², 15mg/m² 내지 50mg/m², 20mg/m² 내지 30mg/m², 20mg/m² 내지 40mg/m², 24mg/m² 내지 35mg/m², 또는 24mg/m² 내지 26mg/m²의 용량으로 투여받는다. 일부 경우, 대상체는 플루다라빈을 약 30mg/m²의 용량으로 투여받는다. 일부 경우, 대상체는 플루다라빈을 약 25mg/m²의 용량으로 투여받는다. 일부 경우, 플루다라빈은 단일 용량으로 투여되거나 혹은 복수의 용량, 예를 들어 매일, 격일로 또는 3일마다 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 매일, 예를 들어 1일 내지 5일동안, 예를 들어 3일 내지 4일동안 투여될 수 있다. 일부 경우, 대상체는 세포 요법의 개시전에 사이플루다라빈을 3일동안 매일 약 30mg/대상체의 표면적(m²)으로 투여받는다.

일부 구현예에서, 림프구 고갈 제제는 사이클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합과 같은 제제의 조합을 포함한다. 따라서, 이러한 제제의 조합은 사이클로포스파미드를 전술한 것과 같은 임의의 용량 또는 투여 스케쥴로, 그리고 플루다라빈을 전술한 것과 같은 임의의 용량 또는 투여 스케쥴로 포함할 수 있다. 예를 들어 일부 양상에서, 대상체는 세포 투여 전에, 60mg/kg(~2 g/m²)의 사이클로포스파미드 및 3 내지 5 용량의 25mg/m² 플루다라빈을 투여받는다. 일부 양상에서, 대상체는 3일동안 약 30mg/대상체의 신체 표면적(m²)의 플루다라빈을 매일, 및 약 300mg/대상체의 신체 표면적(m²)의 사이클로포스파미드를 매일 투여받는다.

예시적인 한 가지 투여 요법으로서, 1차 용량 투여에 앞서, 대상체는 세포 투여 1일 전에 감마 세크레타제 억제제와 사이클로포스파미드 및 플루다라빈(CY/FLU)의 림프구 고갈 사전 컨디셔닝 화학요법을, CAR-발현 세포의 1차 투여로부터 적어도 2일 전에, 일반적으로 상기 세포 투여 전 7일 이내에 투여받는다. 또 다른 예시적인 투여 계획에서, 대상체는 감마 세크레타제 억제제를 세포 투여로부터 수일 후, 예를 들어 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일 또는 14일을 초과한 후에 투여받는다. 경우에 따라, 예를 들어 사이클로포스파미드는 감마 세크레타제 억제제의 투여로부터 24 내지 27일 후에 투여받는다. 사전 컨디셔닝 처리 후, 대상체에게 전술한 바와 같은 CAR-발현 T 세포의 용량을 투여한다.

일부 구현예에서, 세포 용량의 주입 전에 사전 컨디셔닝 제제의 투여는 치료 결과를 개선시킨다. 예를 들어 일부 양상에서, 사전 컨디셔닝은 그 용량으로 치료 효능을 향상시키거나, 대상체에서 재조합 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 지속성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 사전 컨디셔닝 처리는 세포 투여 후, 주어진 기간 후에 최소한도의 잔여 또는 분자 검출가능한 질환도 나타내지 않으면서 대상체가 살아있는 무병 생존을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 무병 생존 중앙값까지의 시간이 증가된다.

일단 세포가 대상체(예를 들어 사람)에 투여되면, 일부 양상에서 조작된 세포 집단의 생물학적 활성은 다수의 공지된 방법 중 임의의 방법에 의해 측정된다. 평가할 파라미터는 생체내에서 예를 들어 이미징 또는 생체외에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 계측법에 의한, 조작된 또는 천연의 T 세포 또는 다른 면역 세포의 항원에 대한 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌 「Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), and Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)」에 설명된 세포독성 분석과 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 또한 CD107a, IFNγ, IL-2 및 TNF와 같은 특정 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정될 수 있다. 일부 양상에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하의 감소와 같은 임상적 결과를 평가함으로써 측정된다. 일부 양상에서, 독성 결과, 세포의 지속성 및/또는 확장, 및/또는 숙주 면역 반응의 존재 또는 부재가 평가된다.

일부 구현예에서, 세포 용량의 주입 전에 사전 컨디셔닝 제제의 투여는 용량으로 대상체에서 치료 효과를 개선하거나 또는 재조합 수용체-발현 세포(CAR-발현 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 지속성을 증가시킴으로써 치료 결과를 향상시킨다. 그러므로, 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제와 세포 요법과의 조합 요법인 방법에서 주어지는 사전 컨디셔닝 제제의 용량은 감마 세크레타제 억제제가 사용되지 않는 방법에서 주어지는 용량보다 높다.

II. T 세포 치료 및 조작된 세포

일부 구현예에서, 제공된 병용 요법에 따라 사용하기 위한 세포 요법(예를 들어 T 세포 요법)은 질환 또는 질환 상태와 관련된 분자를 인식 및/또는 특이적으로 결합하도록 설계된 재조합 수용체를 발현하고 이러한 분자에 결합 시 상기 분자에 대한 면역 반응과 같은 반응을 일으키는 조작된 세포를 투여하는 단계를 포함한다. 수용체는 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR), 및 다른 트랜스제닉 T 세포수용체(TCR)을 포함하는 다른 트랜스제닉 항원 수용체를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 세포는 조작된 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T 세포수용체(TCR)와 같은 조작된 항원 수용체를 포함하거나 조작하도록 조작된다. 또한 그러한 세포의 개체군, T 세포 또는 CD8⁺ 또는 CD4⁺ 세포와 같은 특정 유형의 세포가 농축되거나 선택된 것과 같은 그러한 세포를 포함하는 조성물 및/또는 이러한 세포가 농축된 조성물이 제공된다. 조성물 중에는 적용 세포 치료와 같은 투여용 제약 조성물 및 제형이 있다. 또한, 예를 들어 환자에게 세포 및 조성물을 투여하기 위한 치료방법이 제공된다.

따라서, 일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정될 대, 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 결합시킴으로써 세포를 먼저 자극함으로써 유전자 전달을 수행하고, 이어서 활성화된 세포의 형질 도입 및 배양물의 임상적 적용을 위한 충분한 수의 확장을 포함한다.

A. 재조합 수용체

세포는 일반적으로 기능적 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR) 및 트랜스제닉 T 세포수용체(TCR)와 같은 다른 항원-결합 수용체를 포함하는 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 수용체 중에서 다른 키메라 수용체들이다.

제공된 방법 및 용도의 일부 구현예에서, 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체는, 바람직한 항원(예를 들어, 종양 항원)에 특이성을 제공하는 리간드-결합 도메인 (예를 들어 항체 또는 항체 단편)과 세포내 시그널링 도메인을 조합한 하나 이상의 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 시그널링 도메인은 1차 활성화 신호 또는 1차 신호를 제공하는, 자극 또는 활성화 세포내 도메인 부분, 예를 들어 T 세포 자극 또는 활성화 도메인이다. 일부 구현예에서, 세포내 시그널링 도메인은 이펙터 기능을 용이하게 하기 위해 동시 자극 시그널링 도메인을 포함하거나 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체는 면역 세포로 유전적으로 조작될 때 T 세포 활성을 조절할 수 있고, 일부 경우에, T 세포 분화 또는 항상성을 조절할 수 있어, 예를 들어 입양 세포 요법 방법에 사용하기 위해, 생체 내 수명, 생존 및/또는 지속성이 개선된 유전자 조작 세포를 생성할 수 있다.

1. 키메라 항원 수용체(CAR)

일부 구현예에서, 특정 항원(또는 마커 또는 리간드), 예를 들어 T 세포와 같은 조작된 세포는 특정 세포 유형의 표면에서 발현되는 항원에 대한 특이성을 갖는 CAR을 발현하는 것을 제공한다.

특정 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 수용체는 세포내 시그널링 영역을 함유하는데, 이는 세포질 시그널링 도메인(세포내 시그널링 도메인으로도 불림), 예를 들어 T 세포에서 1차 활성화 시그널을 유도할 수 있는 세포질(세포내) 영역, 예를 들어 T 세포수용체 (TCR) 요소의 세포질 시그널링 도메인(예를 들어 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포질 시그널링 도메인 또는 그의 기능적 변이체 또는 시그널링 부분)을 포함하고 및/또는 면역수용체 티로신계 활성화 모티프(ITAM)를 포함한다.

일부 구현예에서, 키메라 수용체는 리간드 (예를 들어 항원)에 특이적으로 결합하는 세포외 결합 도메인을 더 함유한다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체는 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인을 함유하는 CAR이다. 일부 구현예에서, 항원과 같은 리간드는 세포 표면에서 발현되는 단백질이다. 키메라 수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로 세포외 항원 결합 도메인, 예를 들어 항체 분자의 일부, 일반적으로 항체, 예를 들어 scFv 항체 단편의 가변 중질(V_H) 사슬 영역 및/또는 가변 경질(V_L) 사슬 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 TCR-유사 CAR이고 항원은 TCR처럼, 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자 맥락에서 세포 표면에서 인식되는, 세포내 단백질의 펩티드 항원과 같은 가공된 펩티드 항원이다.

CAR을 포함하는 예시적인 항원 수용체, 및 상기 수용체를 조작하여 세포내로 도입시키는 방법은 예를 들어 국제공개공보 제WO2000/14257호, 제WO2013/126726호, 제WO2012/129514호, 제WO2014/031687호, 제WO2013/166321호, 제WO2013/071154호, 제WO2013/123061호, 제WO2016/0046724호, 제WO2016/014789호, 제WO2016/090320호, 제WO2016/094304호, 제WO2017/025038호, 제WO2017/173256호, 미국특허출원공개공보 제2002/131960호, 제2013/287748호, 제2013/0149337호, 미국특허 제6,451,995호, 제7,446,190호, 제8,252,592호, 제8,339,645호, 제8,398,282호, 제7,446,179호, 제6,410,319호, 제7,070,995호, 제7,265,209호, 제7,354,762호, 제7,446,191호, 제8,324,353호, 제8,479,118호, 및 제9,765,342호, 및 유럽특허출원 제EP2537416호, 및/또는 문헌[Sadelain et al., Cancer Discov., 3(4): 388-398 (2013); Davila et al., PLoS ONE 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr Opin Immunol, 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012)]에 기재된 것들을 포함한다. 일부 양상에서, 항원 수용체는 미국특허 제7,446,190호에 기술된 CAR 및 국제공개공보 제WO2014/055668 A1호에 기재된 것들을 포함한다. CAR의 예는 상기 선행문헌 중의 어느 것, 예를 들어 국제공개공보 제WO2014/031687호, 미국특허 제8,339,645호, 제7,446,179호, 미국특허출원공개공보 제2013/0149337호, 미국특허 제7,446,190호, 미국특허 제8,389,282호, 문헌[Kochenderfer et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al., J Immunother 35(9): 689-701(2012); and Brentjens et al., Sci Transl Med 5(177)(2013)]에 개시된 CAR을 포함한다. 또한, 국제공개공보 제WO2014/031687호, 미국특허 제8,339,645호, 제7,446,179호, 미국특허출원공개공보 제2013/0149337호, 미국특허 제7,446,190호, 제8,389,282호, 국제공개공보 제WO2016/090320호, 제WO2016/090327호, 제WO2010/104949 A2호 및 제WO2017/173256호를 참조할 수 있다.

일부 구현예에서, CAR은 특정 항원(또는 마커 또는 리간드 또는 수용체)에 대한 특이성을 가지고 구성되는데, 예를 들어 입양 요법에 의하여 표적화되는 특정 세포 유형에서 발현되는 항원, 예를 들어 암 마커 및/또는 완충 반응(dampening response)을 유도하려는 목적의 항원, 예를 들어 정상 세포 또는 비-질환 세포 유형 상에서 발현되는 항원이다. 따라서, CAR은 전형적으로 그의 세포외 부분에 하나 이상의 항원 결합 분자, 예를 들어 하나 이상의 항원-결합 단편, 도메인 또는 일부분, 또는 하나 이상의 항체 가변 도메인 및/또는 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체 분자의 항원-결합 부분 또는 부분들을 포함하는데, 예를 들어 모노클로날 항체(mAb)의 가변 중질 사슬(VH) 및 가변 경질 사슬(VL)로부터 유래되는 단일-사슬 항원 단편(scFv)이다.

일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 항원 수용체와 같은 재조합 수용체의 일부로서 세포에서 발현된다. 항원 수용체 중에는 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)가 있다. 일반적으로, 펩티드-MHC 복합체에 대한 TCR-유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 CAR은 또한 TCR-유사 CAR로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR-유사 CAR의 MHC-펩티드 복합체에 특이적인 세포외 항원 결합 도메인은 하나 이상의 세포내 시그널링 요소와 연결되는데, 일부 양상에서 링커 및/또는 막통과(transmembrane) 도메인(들)을 통해서이다. 일부 구예현에서, 이러한 분자는 전형적으로 TCR과 같은 천연 항원 수용체를 통한 시그널, 및 임의로, 동시 자극 수용체와 조합되는 이러한 수용체를 통한 시그널을 모방하거나 이와 비슷할 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 수용체(예를 들어 CAR)은, 항원(또는 리간드 또는 수용체)에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 리간드-결합 도메인을 포함한다. 상기 키메라 수용체에 의해 표적화된 항원 중에는 질환, 질환 상태, 또는 입양 세포 요법을 통해서 표적화되는 세포 유형과 관련하여 발현된 것들이 있다. 상기 질환 또는 질환 상태 중에는, 암 및 종양을 포함하는, 예를 들어 면역계의 암, 림프종, 백혈병 및/또는 골수종, 예를 들어 B, T, 및 골수성 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종을 포함하는 증식성, 신생물성, 및 악성 질환 및 장애이다.

일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원은 정상 세포 또는 비표적화된 세포 또는 조직과 비교하여 질환 또는 증상의 세포, 예를 들어 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 항원은 정상 세포 상에 발현되고/되거나 조작된 세포 상에서 발현된다.

일부 구현예에서, CAR은 세포의 표면에 발현된 항원, 예를 들어 손상되지 않은 항원을 특이적으로 인식하는 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어 scFv)을 함유한다.

일부 구현예에서, 항원(또는 리간드 또는 수용체)은 종양 항원 또는 암 마커이다. 특정 구현예에서, 항원은 αvβ6 인테그린(avb6 인테그린), B 세포 성숙 항원(BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9(CA9, CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B(CTAG, NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원(CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1(CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4), 표피 성장 인자 단백질(EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이(EGFR vIII), 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), 에프린B2, 에프린 수용체 A2(EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5(FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체(태아 AchR), 엽산 결합 단백질(FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2(OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100(gp100), 글리피칸-3(GPC3), G 단백질 커플링된 수용체 5D(GPCR5D), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3(erb-B3), Her4(erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원(HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1(HLA-A1),　인간 백혈구 항원 A2(HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2(IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, L1 세포 부착 분자(L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A(LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린(MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스(CMV), 뮤신 1(MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D(NKG2D) 리간드, 멜란 A(MART-1), 신경 세포 부착 분자(NCAM), 종양 태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원,　전립선 줄기 세포 항원(PSCA), 전립선 특이 막 항원(PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1(ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질(5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72(TAG72), 티로시나제 관련 단백질 1(TRP1, TYRP1 또는 gp75로도 알려짐), 티로시나제 관련 단백질 2(TRP2, 도파크롬 토토머라제, 도파크롬 델타-이소머라제 또는 DCT로도 알려짐), 혈관 상피성장인자 수용체(VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2(VEGFR2), 윌름 종양 1(WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들이거나 이들을 포함한다. 일부 구현예에서 수용체에 의해 표적화된 항원들로는 공지의 몇몇 B 세포 마커와 같은, B 세포 악성종양과 관련된 항원을 들 수 있다. 일부 구현예에서, 항원은 BCMA, CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 이들을 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 항원(또는 리간드)은, 오르판 티로신 키나제 수용체 ROR1(orphan tyrosine kinase receptor ROR1), B 세포 성숙 항원(BCMA), 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산(anti-folate) 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME: preferentially expressed antigen of melanoma), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화된 분자(biotinylated molecule), 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해서 발현된 분자이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서 상기 수용체에 의해서 표적화된 항원은 B 세포 악성 종양과 관련된 항원, 예를 들어 공지의 임의의 수의 B 세포 마커를 포함한다. 일부 구현예에서 상기 수용체에 의해서 표적화된 항원은 D20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, 이그카파(Igkappa), 이글람브다(Iglambda), CD79a, CD79b 또는 CD30이다.

일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 희귀 티로신 키나아제 수용체 ROR1, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소테린, CEA 및 B형 간염 표면 항원, 항 엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2,3 또는 4, FBP, 태아 아세틸린 e 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, ILMAGE-A1, 메소텔린(mesothelin), MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-2 및 MAGE A3, CE7, 빌름스 종양 1(WT-1), 사이클린, 예를 들어 사이클린 A1(CCNA1), 및/또는 비오틴화 분자 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원균에 의해 발현되는 분자를 포함한다.

일부 구현예에서, CAR은 병원체 특이적 또는 병원체 발현된 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, CAR은 바이러스성 항원(예를 들어 HIV, HCV, HBV 등), 세균성 항원 및/또는 기생성 항원에 특이적이다.

일부 구현예에서, CAR은 MHC-펩티드 복합체로서 세포 표면 상에 제시되는, 예를 들어 종양-관련 항원과 같은 세포내 항원을 특이적으로 인식하는 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어 scFv)과 같은 TCR-유사 항체를 함유한다. 일부 구현예에서, MHC-펩티드 복합체를 인식하는 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 세포 상에서 재조합 수용체, 이를테면 항원 수용체의 일부로서 발현될 수 있다. 항원 수용체로는 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 들 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드-MHC 복합체에 대해 지향된 TCR-유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원-결합 단편을 함유하는 CAR은 TCR-유사 CAR라 칭할 수 있다.

"주조직 적합성 복합체(major histocompatibility complex)"(MHC)에 대한 언급은, 일부 경우에 폴리펩티드의 펩티드 항원, 예를 들어 세포의 기계적 장치에 의하여 가공되는 펩티드 항원과 복합체화할 수 있는 다형성 펩티드 결합 위치 또는 결합 홈을 함유하는 단백질, 일반적으로 당단백질을 말한다. 일부 경우, MHC 분자는 T 세포상의 항원 수용체, 예를 들어 TCR 또는 TCR-유사 항체에 의하여 인식 가능한 형태로 항원을 제시하기 위해, 예를 들어 펩티드와의 복합체로서, 즉 MHC-펩티드 복합체로서 세포 표면상에 표시되거나 발현될 수 있다. 일반적으로, MHC 클래스 I 분자는 일부 경우 3 개의 α 도메인을 갖는 막에 존재하는 알파 사슬 및 비-공유적으로 결합되는 β2 마이크로글로불린을 갖는 이종이량체이다. 일반적으로, MHC 클래스 II 분자는 통상 양자 모두 막에 존재하는 2 개의 막관통 당단백질인 α 및 β로 구성된다. MHC 분자는 항원 결합 위치 또는 펩티드를 결합하기 위한 위치 및 적절한 항원 수용체에 의한 인식에 필요한 서열을 함유하는 MHC의 유효 부분을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 분자는 세포질에서 기원하는 펩티드를, MHC-펩티드 복합체가 T 세포에 의하여 인식되는, 예를 들어 일반적으로 CD8+ T 세포에 의하여, 그러나 어떤 경우 CD4+ T 세포에 의해 인식되는 세포 표면으로 전달한다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 II 분자는 소포 시스템에서 기원하는 펩티드를, 이들이 통상 CD4+ T 세포에 의해 인식되는 세포 표면으로 전달한다. 일반적으로, MHC 분자는 마우스에서 H-2으로 그리고 인간에서는 인간 백혈구 항원(HLA)으로 총칭되는, 연결된 좌위 그룹에 의해 인코딩된다. 따라서, 통상 인간 MHC는 또한 인간 백혈구 항원(HLA)으로 지칭될 수 있다.

용어 "MHC-펩티드 복합체" 또는 "펩티드-MHC 복합체" 또는 이들의 변형은 예를 들어, 일반적으로 MHC 분자의 결합 홈 또는 틈에서 펩티드의 비-공유 상호 작용에 의한, 펩티드 항원과 MHC 분자의 복합체 또는 결합을 말한다. 일부 구현예에서, MHC-펩티드 복합체는 세포 표면상에 존재하거나 표시된다. 일부 구현예에서, MHC-펩티드 복합체는 항원 수용체, 예를 들어 TCR, TCR-유사 CAR 또는 이의 항원-결합 부분에 의해 특이적으로 인식될 수 있다.

일부 구현예에서, 폴리펩티드의 펩티드, 예를 들어 펩티드 항원 또는 에피토프는, 예를 들어 항원 수용체에 의한 인식을 위하여, MHC 분자와 결합할 수 있다. 일반적으로, 펩티드는 폴리펩티드 또는 단백질과 같은 보다 긴 생물학적 분자의 단편으로부터 유래되거나 이에 기초한다. 일부 구현예에서, 펩티드는 전형적으로 약 8 내지 약 24 개의 길이이다. 일부 구현예에서, 펩티드는 MHC 클래스 II 복합체에서의 인식을 위해 9 내지 22개의 아미노산 또는 약 그 정도의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 펩티드는 MHC 클래스 I 복합체에서의 인식을 위해 8 내지 13 개의 아미노산 또는 약 그 정도의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, MHC-펩티드 복합체와 같은 MHC 분자의 관점에서 펩티드의 인식에 따라, TCR 또는 TCR-유사 CAR과 같은 항원 수용체는 T 세포 반응, 예를 들어 T 세포 증식, 사이토카인 생산, 세포독성 T 세포 반응 또는 다른 반응을 유도하는 T 세포에 대한 활성화 시그널을 생성 또는 촉발한다.

일부 구현예에서, TCR-유사 항체 또는 항원-결합 부분은 공지되어 있거나 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들어, 미국출원공개공부 제2002/0150914호; 제2003/0223994호; 제2004/0191260호; 제2006/0034850호; 제2007/00992530호; 제2009/0226474호; 제2009/0304679호; 및 국제공개공보 제WO 03/068201호 참조).

일부 구현예에서, MHC-펩티드 복합체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 특정 MHC-펩티드 복합체를 함유하는 유효량의 면역원으로 숙주를 면역화함으로써 제조될 수 있다. 일부 경우, MHC-펩티드 복합체의 펩티드는 MHC에 결합할 수 있는 항원의 에피토프, 예를 들어, 종양 항원, 예를 들어 범용 종양 항원, 골수종 항원 또는 다른 항원의 에피토프이다. 일부 구현예에서, 면역 반응을 이끌어 내기 위해 그 후 유효량의 면역원을 숙주에게 투여하는데, 여기서 면역원은 MHC 분자의 결합 홈에서 펩티드의 3-차원적 제시에 대한 면역 반응을 이끌어 내기에 충분한 시간 동안 그들의 3-차원적 형태를 보유한다. 그후, 숙주로부터 수집된 혈청을 분석하여 MHC 분자의 결합 홈에서 상기 펩티드의 3-차원적 제시를 인식하는 원하는 항체가 생성되는지를 결정한다. 일부 구현예에서, 생성된 항체는 그 항체가 MHC 분자 단독, 관심 대상 펩티드 단독 및 무관한 펩티드와 MHC와의 복합체로부터 대상 MHC-펩티드 복합체를 구별할 수 있음을 확인하기 위해 평가될 수 있다. 그 후, 원하는 항체는분리될 수 있다.

일부 구현예에서, MHC-펩티드 복합체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 파지 항체 라이브러리와 같은 항체 라이브러리 디스플레이 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 돌연변이 Fab, scFv 또는 다른 항체 형태의 파지 디스플레이 라이브러리가 생성될 수 있으며, 여기서, 예를 들어 라이브러리 구성원은 CDR 또는 CDR들의 하나 이상의 잔기에서 돌연변이된다. 예를 들어, 미국출원공개공보 제2002/0150914호, 제2014/0294841호; 및 문헌 「Cohen CJ. et al. (2003) J Mol. Recogn. 16:324-332」을 참조한다.

본 발명에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 포함하고, 예를 들어 온전한 항체 및 기능적 (항원-결합) 항체 단편, 예를 들어 항원 결합 단편(Fab), F(ab')2 Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG (rIgG) 단편, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 가변 중질 사슬 사슬(V_H) 영역, 단일 사슬 항체 단편, 예를 들어 단일 사슬 가변 단편(scFv) 및 단일 도메인 항체(예를 들어 sdAb, sdFv, 나노바디) 단편이다. 상기 용어는 유전적으로 조작된 및/또는 달린 변형된 형태의 면역글로불린들, 예를 들어 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체, 및 헤테로 컨쥬게이트 항체, 다중 특이적, 예를 들어, 이중 특이적 항체, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv이다. 달리 언급하지 않는한, 용어 "항체"는 그의 기능적 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 온전한 또는 전장 항체를 포함하는데, 예를 들어 IgG 및 그 서브 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 부류 또는 하위-부류의 항체이다.

특정 구현예에서, 다중 특이적 결합 분자, 예를 들어 다중 특이적 키메라 수용체, 예를 들어 다중 특이적 CAR은 예를 들어 이중 특이적 항체, 다중 특이적 단일 사슬 항체, 예를 들어 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디, 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv를 포함한, 다중 특이적 항체의 임의의 것을 함유할 수 있다.

일부 구현예에서, 항원-결합 단백질, 항체 및 그의 항원 결합 단편은 전장 항체의 항원을 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 항체의 중질 사슬 및 경질 사슬은 전장일 수 있거나 항원-결합 부분(Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편(scFv))일 수 있다. 다른 구현예에 있어서, 항체 중질 사슬 불변 영역은 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE로부터 선택되고, 특히 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택되며, 더욱 특히 IgG1(예를 들어 인간 IgG1)이다. 또 다른 구현예에 있어서, 항체 경질 사슬 불변 영역은 예를 들어 카파 또는 람다로부터 선택되고, 특히 카파이다.

제공되는 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편" 또는 "항원 결합 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부분을 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 말한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂; 디아바디; 선형 항체; 가변 중질 사슬(V_H) 영역, 단일-쇄 항체 분자, 예를 들어 scFv 및 단일 도메인 V_H 단일 항체; 및 항체 단편으로부터 형성되는 다중 특이적 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR에서 항원 결합 도메인은 가변 중질 사슬(V_H) 및 가변 경질 사슬(V_L) 영역을 포함하는 항체 단편이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에 있어서, 항체는 가변 중질 사슬 영역 및/또는 가변 경질 사슬 영역, 예를 들어 scFv을 포함하는 단일-쇄 항체 단편이다.

용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체와 항원의 결합에 관여하는 항체 중질 사슬 또는 경질 사슬의 도메인을 말한다. 천연 항체의 중질 사슬(heavy chanin) 및 경질 사슬(light chain)의 가변 도메인(각각 V_H 및 V_L)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4 개의 보존된 구조 영역 (FR) 및 3 개의 CDR을 포함한다[예를 들어 문헌 「Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)」 참조]. 단일 V_H 또는 V_L 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는, 각각 상보적 V_H 또는 V_L 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 V_H 또는 V_L 도메인을 사용하여 단리될 수 있다[예를 들어 문헌 「Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)」 참조].

"초가변 영역(hypervariable region)" 또는 "HVR)과 동의어인 용어 "상보성 결정 영역(complementarity determining region)" 및 "CDR"은 당해 기술분야에서, 항원 특이성 및/또는 결합 친화성을 부여하는, 항체 가변 영역 내에서 아미노산의 비-연속적 서열을 지칭하는 것으로 알려져 있다. 일반적으로 각각의 중질 사슬 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 그리고 각각의 경질 사슬 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 존재한다. "프레임워크 영역(Framework region)" 및 "FR"은 당해 기술분야에서 중질 및 경질 사슬의 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 알려져 있다. 일반적으로 각각의 전장 중질 사슬 가변 영역(full-length heavy chain variable region )에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3, and FR-H4)이 그리고 전장 경질 사슬 가변 영역(full-length light chain variable region)에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3, and FR-L4)이 존재한다.

주어진 CDR 또는 FR의 정밀한 아미노산 서열 경계는, 문헌 「Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD ("Kabat" numbering scheme); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 ("Chothia" numbering scheme); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), "Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography," J. Mol. Biol. 262, 732-745." ("Contact" numbering scheme); Lefranc MP et al., "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains," Dev Comp Immunol, 2003 Jan; 27(1):55-77 ("IMGT" numbering scheme); Honegger A and Pluckthun A, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool," J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, ("Aho" numbering scheme); and Martin et al., "Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm," PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, ("AbM"numbering scheme)」 에 기술된 것들을 포함하여 다수의 익히 공지된 기법(scheme) 중의 임의의 것을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.

주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 기법에 따라 변할 수 있다. 예를 들어 상기 캐뱃 기법(Kabat scheme)은 구조적 정렬에 기반한 반면, 상기 초티아 기법(Chothia scheme)은 구조 정보에 기초한다. 상기 캐뱃 및 초티아 기법 둘 다에 대한 넘버링은, 삽입 문자, 예를 들어 "30a"에 의해 수용되는 삽입, 및 일부 항체에서 나타나는 결실을 갖는, 가장 통상적인 항체 영역 서열 길이에 기초한다. 상기 두가지 기법은 상이한 위치에 특정 삽입 및 결실("인델(indel")을 위치시켜서 차동 번호(differential numbering)를 매긴다. 상기 콘택트 기법(Contact scheme)은 복잡한 결정 구조의 분석을 기반으로 하고 여러 측면에서 코티아 넘버링 기법과 유사하다. 상기 에이비엠 기법(AbM scheme)은 옥스포드 에이비엠 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular's AbM antibody modeling software)에 의해서 사용된 것에 기초한 상기 캐뱃과 코티아의 정의 사이의 절충이다.

하기 표 1은 각각 캐뱃, 초티아, 에이비엠 및 콘택트 기법에 의해서 식별된 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적 위치 경계를 수록한다. CDR-H1에 있어서, 캐뱃 및 초티아 넘버링 기법 둘 다를 이용한 잔기 넘버링이 수록되어 있다. FR은 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치된 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치된 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치된 FR-L3 등으로 CDR 사이에 위치된다. 나타낸 캐뱃 넘버링 기법은 H35A 및 H35B에서 삽입을 하기 때문에, 나타된 캐뱃 넘버링 규칙을 이용하여 넘버링될 때 초티아 CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.

다양한 넘버링 기법에 따른 CDR의 경계
CDR	캐뱃	초티아	에이비엠	콘택트
CDR-L1	L24--L34	L24--L34	L24--L34	L30--L36
CDR-L2	L50--L56	L50--L56	L50--L56	L46--L55
CDR-L3	L89--L97	L89--L97	L89--L97	L89--L96
CDR-H1 (캐뱃 넘버링¹)	H31--H35B	H26--H32..34	H26--H35B	H30--H35B
CDR-H1 (초티아 넘버링²)	H31--H35	H26--H32	H26--H35	H30--H35
CDR-H2	H50--H65	H52--H56	H50--H58	H47--H58
CDR-H3	H95--H102	H95--H102	H95--H102	H93--H101

주 1: 문헌 「Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD」참조

주 2: 문헌 「Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948」참조

따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 그의 영역의 "CDR" 또는 "상보적 결정 영역" 또는 개별적으로 지정된 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3), 예를 들어 그의 가변 영역은 임의의 상기 언급된 기법, 또는 다른 공지된 기법에 의해 정의된 (또는 특정) 상보적 결정 영역을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어 특정 CDR(예를 들어 CDR-H3)이 주어진 V_H 또는 V_L 영역 아미노산 서열에서 상응하는 CDR의 아미노산 서열을 함유하는 것으로 언급되는 경우, 상기 CDR은 전술한 기법, 또는 다른 공지 기법 중의 임의의 것에 의해서 정의된 가변 영역 내의 상응하는 CDR(예를 들어 CDR-H3)의 서열을 갖는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, 특정 CDR 서열이 특정된다. 제공된 항체는 임의의 다른 상기 넘버링 기법 또는 당업자에게 공지된 다른 넘버링 기법 중의 임의의 기법에 따라 기재된 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해되어야 하지만, 제공된 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 기법을 이용하여 기술된다.

마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 그의 영역, 예를 들어 그의 가변 영역의 FR 또는 개별적으로 특정된 FR(들)(예를 들어 FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)는 공지 기법 중의 임의의 것으로 정의된 (또는 특정) 프레임워크 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에는 특정 CDR, FR, 또는 FR 또는 CDR의 식별 기법, 예를 들어 상기 캐뱃, 초티아, 에이비엠 또는 콘택트 방법, 또는 다른 공지 기법이 특정된다. 다른 경우에는 CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 주어진다.

단일-도메인 항체(sdAb)는 항체의 중질 사슬 가변 도메인의 전부 또는 일부분 또는 경질 사슬 가변 도메인의 전부 또는 일부분을 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에 있어서, 단일-도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, CAR은 항원에, 예를 들어 종양 세포 또는 암세포와 같은 표적화되는 질환의 세포의 암 마커 또는 표면 항원, 예를 들어 본원에서 기술되거나 당해 분야에 공지된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중질 사슬 도메인을 포함한다.

항체 단편은 다양한 기술에 의해 제조될 수 있으며, 예를 들어 온전한 항체의 단백질 분해성 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산이 포함되지만 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합적으로-생산된 단편인데, 예를 들어 자연적으로 존재하지 않는 배열을 포함하는 단편, 예를 들어 펩티드 링커와 같은 합성 링커에 의해 결합되는 2 개 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것들, 및/또는 자연적으로-존재하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성될 수 없는 것들이다. 일부 구현예에서, 상기 항체 단편은 scFv이다.

"인간화된" 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비-인간 CDR로부터 유래된 것이며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래된 항체이다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부분을 포함할 수 있다. 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 모태 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서 통상 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비-인간 항체의 변이체를 말한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선시키기 위하여 비-인간 항체(예를 들어, 그로부터 CDR 잔기가 유도된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.

따라서, 일부 구현예에서, TCR-유사 CAR을 비롯한 상기 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 단편은 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 단일-사슬 항체 단편, 예를 들어 단일-사슬 가변 단편(scFv) 또는 디아바디(diabody) 또는 단일 도메인 항체(sdAb)이다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 V_H 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 중질 사슬 가변 (V_H) 영역 및 경질 사슬 가변 (V_L) 영역을 포함하는 scFv이다.

일부 구현예에서, 항체는 중질 사슬 가변(VH) 영역 및 경질 사슬 가변(VL) 영역과 같은, 2개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 하나 이상의 링커를 포함하는, scFv와 같은 항원-결합 단편이다. 링커는 전형적으로 펩티드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 가용성 펩티드 링커이다. 링커 중에는 글리신과 세린 및/또는 일부 경우 트레오닌이 풍부한 것들이 있다. 일부 구현예에서, 링커는 가용성을 향상시킬 수 있는, 리신 및/또는 글루타메이트와 같은 하전된 잔기들을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 하나 이상의 프롤린을 더 포함한다. 일부 양상에서, 글리신 및 세린 (및/또는 트레오닌)이 풍부한 링커는 그러한 아미노산(들)을 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 포함한다. 일부 구현예에서, 이들은 적어도 약 50%, 55%, 60%, 70%, 또는 75%, 글리신, 세린, 및/또는 트레오닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 실질적으로 전적으로 글리신, 세린, 및/또는 트레오닌으로 이루어진다. 링커는 일반적으로 길이가 약 약 5 내지 약 50 아미노산, 전형적으로 약 10 내지 또는 약 30, 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30 아미노산이고, 일부 예에서 길이가 10 내지 25 아미노산이다. 예시적인 링커들은 서열 GGGGS(4GS; SEQ ID NO: 26) 또는 GGGS(3GS; SEQ ID NO: 27)의 반복체를 다양한 수로, 예를 들어 그러한 서열의 2, 3, 4, 내지 5개 반복체를 갖는 링커들을 포함한다. 예시적인 링커들은 SEQ ID NO: 28(GGGGSGGGGSGGGGS), SEQ ID NO: 29(GSTSGSGKPGSGEGSTKG), SEQ ID NO: 30(SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA), 또는 SEQ ID NO: 38(ASGGGGSGGRASGGGGS)에 제시된 서열을 갖거나 이들로 이루어진 것들을 포함한다.

일부 구현예에서, CAR은 BCMA, 예를 들어 인간 BCMA에 특이적인 항-BCMA CAR이다. 마우스 항-인간 BCMA 항체 및 인간 항-인간 BCMA 항체를 비롯한 항-BCMA 항체를 함유하는 키메라 항원 수용체, 및 이러한 키메라 수용체를 발현하는 세포에 대하여는 이미 설명된 바 있다. 예를 들어 문헌 「Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060」, 미국특허 제9,765,342호, 국제공개공보 제WO2016/090320호, 제WO2016/090327호, 제WO2010/104949 A2호, 제WO2016/0046724호, 제WO2016/014789호, 제WO2016/090320호, 제WO2016/094304호, 제WO2017/025038호, 및 제WO2017/173256호를 참조한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 국제공개공보 제WO2016/090320호 또는 제WO2016/090327호에 설명된 항체로부터 유래된 가변 중질 사슬(V_H) 및/또는 가변 경질 사슬(V_L) 영역을 함유하는, scFv와 같은, 항원-결합 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 가변 중질 사슬(VH) 및 가변 경질 사슬(VL) 영역을 함유하는 항체 단편이다. 일부 양상에서, VH 영역은 SEQ ID NOs: 18, 20, 22, 24, 32, 34, 36, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 145, 147, 149 및 151 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 또는 이를 포함하고; 및/또는 VL 영역은 SEQ ID NOs: 19, 21, 23, 25, 33, 35, 37, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 146, 148, 150 및 152 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 또는 이를 포함한다.

일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 18에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 19에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 20에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 21에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 22에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 23에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 24에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 25에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 32에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 33에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 34에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 35에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 36에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 37에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 41에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 42에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 43에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 44에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 45에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 46에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 47에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 48에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 49에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 50에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 51에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 52에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 53에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 54에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 55에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 56에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 57에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 58에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 59에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 60에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 61에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 62에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 63에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 64에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 65에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 66에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 67에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 68에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 69에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 70에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 71에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 72에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 73에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 74에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 75에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 76에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 145에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 146에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 147에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 148에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 149에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 150에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv와 같은 항원-결합 도메인은, SEQ ID NO: 151에 제시된 V_H 및 SEQ ID NO: 152에 제시된 V_L을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 또는 VL은 전술한 임의의 VH 또는 VL 서열에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내고, BCMA에 대한 결합을 유지하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, V_H 영역은 V_L 영역에 대해 아미노-말단이다. 일부 구현예에서, V_H 영역은 V_L 영역에 대해 카르복시-말단이다. 일부 구현예에서, 가변 중질 사슬 및 가변 경질 사슬는 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 SEQ ID NO: 28, 29, 30, 또는 38에 제시되어 있다.

제공된 항-BCMA CAR 중에는, 상기 항체 또는 항원-결합 단편이 SEQ ID NO: 24로 제시되는 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 24와 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_H 영역을 함유하고; SEQ ID NO: 25로 제시되는 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 25와 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR의 항체 또는 항원-결합 단편은 각각 SEQ ID NOS: 173, 174 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR의 항체 또는 항원-결합 단편은 각각 SEQ ID NOS: 176, 177 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR의 항체 또는 항원-결합 단편은 각각 SEQ ID NOS: 178, 179 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR의 항체 또는 항원-결합 단편은 각각 SEQ ID NOS: 180, 181 및 182의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 186, 187 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 V_L 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 V_H 영역은 SEQ ID NO: 24로 제시된 서열 세트를 포함하고 상기 V_L 영역은 SEQ ID NO: 25로 제시된 서열 세트를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 단일-사슬 항체 단편, 예를 들어 scFv이다. 일부 구현예에서, 상기 scFv는 SEQ ID NO: 188로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 188과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항-BCMA CAR은 SEQ ID NO: 124로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 124와 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 항-BCMA CAR은 SEQ ID NO: 125로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 125와 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.

일부 구현예에서, 상기 항원-결합 도메인은 sdAb를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원-결합 도메인은 SEQ ID NO: 77로 제시된 아미노산 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 항원-결합 도메인은 SEQ ID NO: 77로 제시된 적어도 또는 약 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR 중의 상기 항체 또는 항원-결합 도메인 중에는 BCMA 단백질, 예를 들어 인간 BCMA 단백질을 다수의 공지 방법 중의 임의의 것으로 측정된 특정 친화도 이상으로 결합할 수 있는 항체들이 있다. 일부 구현예에서, 상기 친화도는 평형 해리 상수(K_D)로 표시되고, 일부 구현예에서, 상기 친화도는 EC50으로 표시된다.

일부 구현예에서, 상기 제공된 CAR 중의 상기 항체 또는 항원-결합 도메인은 가용성 또는 쉐드 BCMA 단백질이 막-결합된 BCMA 단백질에 대한 항체의 결합의 10% 미만 또는 10% 또는 약 10%이다.

결합 친화도를 평가하고/하거나 결합 분자(예를 들어 항체 또는 그의 단편)가 특정 리간드(항원, 예를 들어 BCMA 단백질)에 특이적으로 결합하는지를 결정하기 위한 다양한 분석법이 공지되어 있다. 항원, 예를 들어 BCMA에 대한 결합 분자, 예를 들어 항체의 결합 친화도를 결정하는 것은 당업자의 수준 내에 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, BIAcore® 기구는 표면 혈장 공명 분석(SPR)을 이용하여 2개의 단백질(예를 들어 항체 또는 그의 단편, 및 항원, 예를 들어 BCMA 세포 표면 단백질, 가용성 BCMA 단백질) 사이의 복합체의 결합 동역학 및 상수를 결정하는데 사용될 수 있다[예를 들어 문헌 「Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949; Wilson, Science 295:2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res. 53:2560, 1993」; 및 미국특허 제5,283,173호, 제5,468,614호 또는 그 등가물 참조].

SPR은 분자가 표면에 결합하거나 또는 표면으로부터 분리됨에 따라 센서 표면에서 분자의 농도 변화를 측정한다. SPR 신호의 변화는 표면에 가까운 질량 농도의 변화에 정비례하고, 그에 의해서 두 분자 사이의 결합 동역학을 측정할 수 있다. 완충액이 칩 위로 통과함에 따라 시간에 대한 굴절률의 변화를 모니터링함으로써 복합체에 대한 해리 상수를 결정할 수 있다. 하나의 단백질과 다른 단백질의 결합을 측정하기 위한 다른 적합한 분석은, 예를 들어 면역 분석 예를 들어 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA) 및 방사선 면역 분석(RIA), 또는 형광, UV 흡수, 원형 이색성, 또는 핵자기 공명(NMR)을 통해서 단백질의 분광학적 또는 광학적 특성의 변화를 모니터링함으로써 결합의 결정을 포함한다. 다른 예시적인 분석은 웨스턴 블롯(Western blot), ELISA, 분석적 초원심분리, 분광학, 유세포 분석, 시퀀싱 및 발현된 폴리뉴클레오티드의 검출 또는 단백질의 결합을 위한 다른 방법을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

일부 구현예에서, 결합 분자, 예를 들어 항체 또는 그의 단편 또는 CAR의 항원-결합 도메인은, 105 M^-1과 동등하거나 그 보다 높은 친화도 또는 K_A(즉, 1/M의 단위를 갖는 특정 결합 상호작용의 평형 결합 상수; 이분자 상호작용(bimolecular interaction)을 가정하여 상기 회합 반응을 위한 오프-레이트(off-rate) [k_off 또는 k_d]에 대한 온-레이트(on-rate) [k_on 또는 k_a]의 비와 동등함)를 갖는 항원, 예를 들어 세포 표면 BCMA 단백질 또는 가용성 BCMA 단백질 또는 그 내부의 에피토프(epitope)에 결합하고, 예를 들어 그에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 그의 단편 또는 CAR의 항원-결합 도메인은 10^-5 M과 동등하거나 그 미만의 K_D(즉, 1/M의 단위를 갖는 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수; 이분자 상호작용을 가정하여 상기 해리 반응을 위한 온-레이트 [k_off 또는 k_a]에 대한 오프-레이트 [k_on 또는 k_d]의 비와 동등함)을 갖는 펩티드 에피토포에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 예를 들어 상기 평형 해리 상수 K_D는 10^-5 M 내지 10^-13 M, 예를 들어 10^-7 M 내지 10^-11 M, 10^-8 M 내지 10^-10 M, 또는 10^-9 M 내지 10^-10 M의 범위이다. 상기 온-레이트(회합률 상수; k_on 또는 k_a; 1/Ms의 단위) 및 오프-레이트(해리율 상수; k_off 또는 k_d; 1/s의 단위)는 당해 분야에서 공지된 분석법 중의 어느 것, 예를 들어 표면 혈장 공명(SPR)을 이용하여 측정될 수 있다.

일부 구현예에서, BCMA 단백질, 예를 들어 인간 BCMA 단백질에 대한 CAR의 항체(옐르 들어 항원-결합 단편) 또는 항원-결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 해리 상수는, 0.01 nM 내지 500 nM, 0.01 nM 내지 400 nM, 0.01 nM 내지 100 nM, 0.01 nM 내지 50 nM, 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, is 0.1 nM 내지 500 nM, 0.1 nM 내지 400 nM, 0.1 nM 내지 100 nM, 0.1 nM 내지 50 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.5 nM 내지 200 nM, 1 nM 내지 500 nM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 50 nM, 1 nM 내지 10 nM, 2 nM 내지 50 nM, 10 nM 내지 500 nM, 10 nM 내지 100 nM, 10 nM 내지 50 nM, 50 nM 내지 500 nM, 50 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 500 nM, 또는 약 0.01 nM 내지 약 500 nM, 약 0.01 nM 내지 약 400 nM, 약 0.01 nM 내지 약 100 nM, 약 0.01 nM 내지 약 50 nM, 약 0.01 nM 내지 약 10 nM, 약 0.01 nM 내지 약 1 nM, 약 0.01 nM 내지 약 0.1 nM, 0.1 nM 내지 약 500 nM, 약 0.1 nM 내지 약 400 nM, 약 0.1 nM 내지 약 100 nM, 약 0.1 nM 내지 약 50 nM, 약 0.1 nM 내지 약 10 nM, 약 0.1 nM 내지 약 1 nM, 약 0.5 nM 내지 약 200 nM, 약 1 nM 내지 약 500 nM, 약 1 nM 내지 약 100 nM, 약 1 nM 내지 약 50 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 약 2 nM 내지 약 50 nM, 약 10 nM 내지 약 500 nM, 약 10 nM 내지 약 100 nM, 약 10 nM 내지 약 50 nM, 약 50 nM 내지 약 500 nM, 약 50 nM 내지 약 100 nM 또는 100 nM 내지 약 500 nM이다. 특정 구현예에서, BCMA 단백질, 예를 들어 인간 BCMA 단백질에 대한 항체의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수 K_D는 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 또는 1 nM 또는 그 미만 또는 약 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 또는 1 nM 또는 그 미만이다. 일부 구현예에서, 상기 항체는, 나노분자 결합 친화도, 예를 들어 약 1 nM 미만, 예를 들어 약 0.9 nM, 약 0.8 nM, 약 0.7 nM, 약 0.6 nM, 약 0.5 nM, 약 0.4 nM, 약 0.3 nM, 약 0.2 nM 또는 약 0.1 nM 또는 그 미만이다.

일부 구현예에서, 상기 결합 친화도는 고친화도 또는 저친화도로 분류될 수 있다. 일부 경우에, 저친화도 내지 적당한 친화도를 나타내는 CAR의 결합 분자(예를 들어 항체 또는 그의 단편) 또는 항원-결합 도메인은 10⁷ M^-1까지, 10⁶ M^-1까지, 10⁵ M^-1까지의 K_A를 나타낸다. 일부 경우에, 특정 에피토프에 결합하는 고친화도를 나타내는 결합 분자(예를 들어 항체 또는 그의 단편)은 10⁷ M^-1 이상, 10⁸ M^-1 이상, 10⁹ M^-1 이상, 10¹⁰ M^-1 이상, 10¹¹ M^-1 이상, 10¹² M^-1 이상, 또는 10¹³ M^-1 이상의 K_A를 갖는 에피토프와 상호작용한다. 일부 구현예에서, BCMA 단백질에 대한 CAR의 결합 분자, 예를 들어 항-BCMA 항체 또는 그의 단편 또는 항원-결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평행 해리 상수 K_D는 0.01 nM 내지 1μM, 0.1 nM 내지 1μM, 1 nM 내지 1μM, 1 nM 내지 500 nM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 50 nM, 1 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 500 nM, 10 nM 내지 100 nM, 10 nM 내지 50 nM, 50 nM 내지 500 nM, 50 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 500 nM의 범위이거나, 또는 약 상기 범위의 상수값을 갖는다. 특정 구현예에서, BCMA 단백질에 대한 CAR의 결합 분자, 예를 들어 항-BCMA 항체 또는 그의 단편 또는 항원-결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평행 해리 상수 K_D는 1μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 또는 1 nM 또는 그 미만, 약 또는 그 미만이다. 특정 항체의 친화도는 공지의 항체, 예를 들어 참조 항체(예를 들어 항-BCMA 참조 항체)의 친화도와 비교될 수 있다.

일부 구현에서, 상이한 형태 또는 토폴로지 유형의 항원, 예를 들어 가용성 또는 쉐드 BCMA 단백질에 대한 CAR의 항-BCMA 항체 또는 항원-결합 도메인의 결합 친화도는 멤브레인-결합 BCMA에 대한 결합 친화도와 비교하여 특정 형태 또는 토폴리지 유형에 대한 우선적 결합 또는 상대적 친화도롤 결정하였다. 예를 들어 일부 양상에서, CAR의 항-BCMA 항체 또는 항원-결합 도메인은 가용성 또는 쉐드 BCMA와 비교하여 막-결합 BCMA에 우선적 결합을 나타내고/하거나, 가용성 또는 쉐드 BCMA와 비교하여 막-결합 BCMA에 대해 더 큰 결합 친화도를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 상이한 형태 또는 토폴로지 유형의 BCMA 단백질에 대한 평형 해리 상수 K_D는 우선적 결합 또는 상대적 결합 친화도를 결정하기 위해 비교 될 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 또는 쉐드 BCMA와 비교한 막-결합 BCMA에 대한 우선적 결합 또는 상대적 결합 친화도는 높을 수 있다. 예를 들어 일부 경우에 있어서, 가용성 또는 쉐드 BCMA에 대한 K_D 및 막-결합 BCMA에 대한 K_D의 비율은 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 또는 그 초과이고 상기 항체 또는 항원-결합 도메인은 막-결합 BCMA에 대해 우선적으로 결합하거나 또는 더 높은 결합 친화도를 갖는다. 일부 경우에 있어서, 막-결합 BCMA에 대한 K_A 및 가용성 또는 쉐드 BCMA에 대한 K_A의 비율은 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 또는 그 초과이고 상기 항체 또는 항원-결합 도메인은 막-결합 BCMA에 대해 우선적으로 결합하거나 또는 더 높은 결합 친화도를 갖는다. 일부 경우에 있어서, CAR의 상기 항체 또는 항원-결합 도메인은 유사한 정도로, 예를 들어 가용성 BCMA에 대한 K_D 및 막-결합 BCMA에 대한 K_D의 비율이 1 또는 약 1인 정도로, 가용성 또는 쉐드 BCMA 및 막-결합 BCMA를 결합한다. 일부 경우에 있어서, CAR의 상기 항체 또는 항원-결합 도메인은 유사한 정도로, 예를 들어 가용성 BCMA에 대한 K_A 및 막-결합 BCMA에 대한 K_A의 비율이 1 또는 약 1인 정도로, 가용성 또는 쉐드 BCMA 및 막-결합 BCMA를 결합한다. 막-결합 BCMA 또는 가용성 또는 쉐드 BCMA에 대한 우선적 결합도 또는 상대적 친화도는 공지의 항체, 예를 들어 참조 항체(예를 들어 참조 항--BCMA CAR)의 그것과 비교될 수 있다. 일부 구현예에서, 참조 항체(예를 들어 참조 항--BCMA CAR)는 막-결합 BCMA 및 가용성 또는 쉐드 BCMA 단백질에 결합한다.

일부 양상에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편 및 세포내 시그널링 영역을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 시그널링 영역은 세포내 시그널링 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 시그널링 도메인은 1차 시그널링 도메인인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 시그널링 도메인, T 세포수용체(TCR) 요소의 시그널링 도메인 및/또는 면역 수용체 타이로신-계 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 시그널링 도메인이거나 이를 포함한다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 항체 부분은 경첩 영역, 예를 들어 IgG4 경첩 영역, C_H1/C_L 및/또는 Fc 영역과 같은 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부일 수 있거나 또는 그것을 포함할 수 있는 스페이서(spacer)를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 스페이서 및/또는 경첩 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG이다. 일부 양상에서, 불변 영역의 부분은 항원 인식 성분, 예를 들어 scFv와 막통과 도메인 사이의 스페이서 영역으로 작용한다.

스페이서는 스페이서 부재와 비교하여 항원 결합 후 세포의 증가된 반응성을 제공하는 길이일 수 있다. 경첩 영역과 같은 예시적인 스페이서는 국제공개공보 제WO2014/031687호에 기재된 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 스페이서는 길이가 약 12개의 아미노산이거나 12개 이하의 아미노산이다. 예시적인 스페이서는 적어도 약 10 내지 229개의 아미노산, 약 10 내지 200개의 아미노산, 약 10 내지 175개의 아미노산, 약 10 내지 150개의 아미노산, 약 10 내지 125개의 아미노산, 약 10 내지 100개의 아미노산, 약 10 내지 75개의 아미노산, 약 10 내지 50개의 아미노산, 약 10 내지 40개의 아미노산, 약 10 내지 30개의 아미노산, 약 10 내지 20개의 아미노산 또는 약 10 내지 15개의 아미노산 및 열거된 범위 중의 끝점들 사이의 정수를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 영역은 약 12개 이하의 아미노산, 약 119개 이하의 아미노산, 또는 약 229개 또는 이하의 아미노산을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 특정 길이 이상, 예를 들어 100개 이상인 아미노산 길이, 예를 들어 적어도 110, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 또는 250개의 아미노산 길이를 갖는 스페이서이다. 예시적인 스페이서는 IgG4 경첩 단독, C_H2 및 C_H3 도메인에 연결된 IgG4 경첩, 또는 C_H3 도메인에 연결된 IgG4 경첩을 포함한다. 예시적인 스페이서는 IgG4 경첩 단독, C_H2 및 C_H3 도메인에 연결된 IgG4 경첩, 또는 C_H3 도메인에 연결된 IgG4 경첩을 포함한다. 예시적인 스페이서는 이에 한정되는 것은 아니지만, 문헌 [Hudecek et al., Clin. Cancer Res., 19:3153 (2013), Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol Res. 3(2): 125-135], 국제공개공보 제WO2014/031687호, 미국특허 제8,822,647호 또는 미국특허출원공보 제2014/0271635호에 개시되어 있는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 면역글로불린 경첩 영역, C_H2 및 C_H3 영역의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 경첩, C_H2 및 C_H3의 하나 이상은 전체적으로 또는 부분적으로 IgG4 또는 IgG2로부터 유도된다. 일부 양상에서, 상기 경첩, C_H2 및 C_H3은 IgG4로부터 유도된다. 일부 양상에서, 상기 경첩, C_H2 및 C_H3의 하나 이상은 키메라이고, IgG4 and IgG2로부터 유도된 서열을 함유한다. 일부 양상에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 경첩, IgG2/4 C_H2, 및 IgG4 C_H3 영역을 함유한다.

일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4 및/또는 IgG2로부터 전부 또는 일부가 유래될 수 있고 하나 이상의 도메인에서 하나 이상의 단일 아미노산 돌연변이와 같은, 돌연변이를 함유할 수 있다. 일부 실시예에서, 아미노산 변형은 IgG4의 힌지 영역 중 세린(S)을 프롤린(P)으로 치환하는 것이다. 일부 구현예에서, 아미노산 변형은 전장 IgG4 Fc 서열의 C_H2 영역 중 위치 177에서의 N177Q 돌연변이 또는 전장 IgG4 Fc 서열의 C_H2 영역 중 위치 176에서의 N176Q와 같이, 글리코실화 이질성(glycosylation heterogeneity)을 감소시키기 위해 아스파라긴(N)을 글루타민(Q)으로 치환하는 것이다.

일부 구현예에서, 스페이서는 서열 ESKYGPPCPPCP(SEQ ID NO: 1에 제시됨)을 갖고 SEQ ID NO: 2에 제시된 서열에 의해서 인코딩된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 3에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 4에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 인코딩된 스페이서는 SEQ ID NO: 31에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgD의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 5에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 89에 제시된 서열을 갖는다.

그 밖의 예시적인 스페이서 영역은 CD8a, CD28, CTLA4, PD-1, 또는 FcγRIIIa로부터 유래된 힌지 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 CD8a, CD28, CTLA4, PD-1, 또는 FcγRIIIa의 절단된(truncated) 세포외 도메인 또는 힌지 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 절단된 CD28 힌지 영역이다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 길이가 2 내지 10 아미노산인 링커, 예를 들어 알라닌 또는 알라닌과 아르기닌, 예를 들어 3중 알라닌(AAA) 또는 RAAA(SEQ ID NO: 　144)를 함유하는 것과 같은 링커가 CAR의 scFv와 스페이서 영역 사이에 존재하여 결합을 형성한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 78에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 80에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NOs: 81-83에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 84에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 86에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NO: 88에 제시된 서열을 갖는다.

일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NOS: 1, 3, 4, 5, 31, 78, 80, 81, 82, 83, 84, 86, 88, 또는 89 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다.

일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NOS: 157-165에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 SEQ ID NOS: 157-165 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다.

일반적으로 이 항원 인식 도메인은 하나 이상의 세포내 시그널링 요소와 연결되는데, CAR의 경우에, 예를 들어 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체를 통하여 자극 및/또는 활성화를 모방하고 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통하여 시그널을 전달하는 시그널링 요소이다. 따라서, 일부 구현예에서, 항원-결합 성분(예를 들어 항체)은 하나 이상의 막통과 및 세포내 시그널링 도메인에 연결된다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인과 세포내 시그널링 도메인을 연결하는 막통과 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 막통과 도메인은 예를 들어 세포외 도메인(예를 들어 scFv)과 세포외 시그널링 도메인 사이를 연결시키거나 융합시키는 것과 같이 세포외 도메인에 융합된다. 한 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR의 도메인들 중 하나와 자연적으로 결합된 막통과 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막통과 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호 작용을 최소화하기 위해, 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막통과 도메인에 이러한 도메인이 결합하는 것을 회피하도록 선택되거나, 아미노산 치환에 의하여 변형된다.

일부 구현예에서, 막통과 도메인은 천연원 또는 합성원으로부터 유도된다. 상기 유도원이 천연인 경우, 일부바 측면에 있어서 상기 도메인은 임의의 막-결합 또는 막통과 단백질로부터 유도된다. 막통과 영역은 T 세포수용체, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD8a, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, (4-1BB), CD154, CTLA-4, 또는 PD-1의 알파, 베타 또는 제타 사슬로부터 유래된 것들을 포함한다(즉, 적어도 그의 막통과 영역을 포함). 대안으로, 일부 구현예에서 막통과 도메인은 합성인 것이다. 일부 양상에서, 합성 막통과 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 양상에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체가 합성 막통과 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 결합은 링커, 스페이서 및/또는 막통과 도메인(들)에 의한다. 막통과 도메인의 예시적인 서열은 SEQ ID NOs: 8, 79, 85, 87, 142, 또는 143에 제시된 서열이거나 또는 이를 포함한다.

세포내 시그널링 도메인 중에는, 천연 항원 수용체를 통한 시그널, 동시 자극 수용체와 조합된 상기 수용체를 통한 시그널 및/또는 동시 자극 수용체만을 통한 시그널을 모방하거나 이와 비슷한 것들이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 길이가 2 내지 10개 사이의 아미노산인 링커, 예를 들어 글리신 및 세린을 함유하는 것, 예를 들어 글리신-세린 이중체를 함유하는 링커가 존재하며, 막통과 도메인과 CAR의 세포질 시그널링 도메인과의 연결을 형성한다.

수용체, 예를 들어, CAR는 일반적으로 적어도 하나의 세포내 시그널링 성분 또는 성분들을 포함한다. 일부 양상에서, CAR은 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 시그널링 서열은 면역수용체 타이로신계 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호전달 모티프를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, CAR의 세포질 신호 전달 분자(들)은 세포질 신호 전달 도메인, 그의 일부분, 또는 CD3 제타로부터 유래된 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 수용체는 T-세포 자극 및/또는 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬와 같은 TCR 복합체의 세포내 요소, 예를 들어 CD3 제타 사슬을 포함한다. 따라서, 일부 양상에서, 항원-결합 부분은 하나 이상의 세포 시그널링 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 시그널링 모듈은 CD3 막통과 도메인, CD3 세포내 시그널링 도메인 및/또는 다른 CD 막통과 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 Fc 수용체 γ, CD8, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부분을 더 포함한다. 예를 들어 일부 양상에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체는, CD3-제타(CD3-ζ) 또는 Fc 수용체 γ와, CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이의 키메라 분자를 포함한다.

일부 구현예에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체의 연결(ligation)에 따라, 수용체의 세포질 도메인 또는 세포내 시그널링 도메인은 면역 세포, 예를 들어 CAR를 발현하도록 조작된 T 세포의 정상적인 이펙터 기능 또는 반응 중 적어도 하나를 자극 및/또는 활성화시킨다. 예를 들어 일부 관점에서는, CAR은 T 세포의 기능, 예를 들어 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예를 들어 사이토카인 또는 다른 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 성분 또는 동시 자극 분자의 세포내 시그널링 도메인의 절단된 부분은 온전한 면역자극 사슬을 대신하여 사용되는데, 예를 들어 그것이 이펙터 기능 시그널을 전달하는 경우에 그러하다. 일부 구현예에서, 세포내 시그널링 도메인 또는 도메인들은 T 세포수용체(TCR)의 세포질 서열을 포함하고, 일부 양상에서는 천연의 상황에서 항원 수용체 결합 다음에 그러한 수용체와 협력하여 작용하고 시그널링을 개시하는 공-수용체의 서열을 포함하며, 및/또는 이러한 분자의 임의의 유도체 또는 변이체 및/또는 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열을 포함한다.

천연 TCR의 관점에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 시그널링뿐만 아니라 동시 자극 시그널을 요구한다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진시키기 위해, 2차 또는 공-자극 시그널을 발생시키는 위한 요소가 또한 CAR에 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 동시 자극 시그널을 생성하기 위한 요소를 포함하지 않는다. 일부 양상에서, 추가적인 CAR은 동일한 세포에서 발현되며, 2차 또는 동시 자극 시그널을 생성하기 위한 요소를 제공한다.

일부 양상에서, T 세포 자극 및/또는 활성화는 2 부류의 세포질 시그널링 서열에 의하여 매개되는 것으로 기술된다: TCR을 통해 항원-의존성 1차 자극 및/또는 활성화를 개시하는 것들(1차 세포질 시그널링 영역, 도메인 또는 서열), 및 항원-비의존성 방식으로 작용하여 2차 또또는 공-자극 시그널을 제공하는 것들(2차 세포질 시그널링 영역, 도메인 또는 서열). 일부 양상에서, CAR은 그러한 시그널링 요소들 중 하나 또는 양자 모두를 포함한다.

일부 구현예에서, CAR은 CD28, 4-1BB, OX40(CD134), CD27, DAP10, DAP12, ICOS 및/또는 다른 동시 자극 수용체와 같은, 동시 자극 수용체의 시그널링 영역 및/또는 막통과 부분을 포함한다. 일부 양상에서, 동일한 CAR은 일차 세포질 시그널링 영역 및 동시 자극 시그널링 성분 양자 모두를 포함한다. 일부 양상에서, 동일한 CAR은 일차 세포질 시그널링 영역 및 동시 자극 시그널링 요소들을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 예를 들어 막통과 도메인과 세포내 시그널링 도메인 사이에서 T 세포 동시 자극 분자 또는 그의 기능성 변이체로부터 유도된 세포내 도메인을 함유한다. 일부 양상에서, T 세포 동시 자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.

일부 구현예에서, 하나 이상의 상이한 재조합 수용체는 하나 이상의 상이한 세포내 시그널링 영역(들) 또는 도메인(들)을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 1차 세포질 시그널링 영역은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 동시 자극 요소는 또다른 수용체, 예를 들어 또다른 항원을 인식하는 또다른 CAR에 의해서 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은, 양자가 동일한 세포 상에서 발현되는, 활성화 또는 자극

CAR, 동시 자극 CAR을 포함한다(국제공개공보 제WO2014/055668호 참조).

일부 양상에서, 세포는 하나 이상의 자극 또는 활성화 CAR 및/또는 동시 자극 CAR을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 억제성 CAR을 더 포함하는데(iCARs)[문헌 「Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013)」 참조], 예를 들어 그에 의하여 질환-표적 CAR을 통하여 전달된 활성화 신호가 상기 억제성 CAR의 그의 리간드와의 결합에 의하여 감쇠되거나 억제되어, 예를 들어 오프-타겟 효과를 감소시키게 되는, 상기 질환 또는 질환 상태와 관련되고 및/또는 그에 특이적인 것 이외의 항원을 인식하는 CAR이다.

일부 구현예에서, 두 수용체는 각각 세포에 활성화 및 억제성 신호를 유도하고, 그로써 상기 수용체 중 하나에 의한 그의 항원에 대한 결합(ligation)은 상기 세포를 활성화시키거나 반응을 유도하지만, 상기 제2 억제성 수용체의 그의 항원에 대한 결합은 그 반응을 억제하거나 완충하는 신호를 유도한다. 예시로는 활성화 CAR 및 억제 CAR(iCAR)의 조합이 있다. 그러한 전략을 사용하여 예를 들어 그와 관련된 표적 외 효과를 감소시키며, 여기서 활성화 CAR은 질환 또는 질환 상태에서 발현되지만 정상 세포 상에서도 발현되는 항원에 결합하고, 억제성 수용체가 정상 세포에서 발현되지만 질병이나 질병 상태의 세포에서는 발현되지 않는 별개의 항원에 결합한다.

일부 양상에서, 키메라 수용체는 억제 CAR (예컨대 iCAR)이거나 또는 이를 포함하고 세포에서의 ITAM- 및/또는 동시 자극 촉진 반응과 같은 면역 반응을 약화시키거나 억제하는 세포내 성분을 포함한다. 이러한 세포내 시그널링 성분의 예로는 PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2 수용체, A2AR을 비롯한 EP2/4 아데노신 수용체를 포함하여, 면역 체크포인트 분자에서 발견되는 것들을 들 수 있다. 일부 양상에서, 조작된 세포는 이러한 억제 분자의 시그널링 도메인을 포함하거나 그로부터 유도된 억제 CAR을 포함하여, 예를 들어 활성화 및/또는 동시 자극 CAR에 의해 유도된 세포의 반응을 약화시키는 역할을 한다.

특정 구현예에서, 세포내 시그널링 도메인은 CD3(예를 들어 CD3-제타) 세포내 도메인에 연결된 CD28 막통과 및 시그널링 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, 세포내 시그널링 도메인은 CD3 제타 세포내 도메인에 연결된 키메라 CD28 및 CD137(4-1BB, TNFRSF9) 공-자극 도메인을 함유한다.

일부 구현예에서, CAR은 하나 이상의, 예를 들어 2개 이상의 동시 자극 도메인 및 1차 세포질 시그널링 영역을 세포질 부분에 포함한다. 예시적인 CARs은 CD3-제타, CD28, CD137(4-1BB), OX40(CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D 및/또는 ICOS의 세포내 시그널링 영역(들) 또는 도메인(들)과 같은 세포내 성분들을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 예를 들어 일부의 경우 막통과 도메인과 세포내 시그널링 영역 또는 도메인 사이에서 CD28, CD137(4-1BB), OX40(CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D 및/또는 ICOS로부터의 T 세포 동시 자극 분자의 세포내 시그널링 영역 또는 도메인을 함유한다. 일부 양상에서, T 세포 동시 자극 분자는 CD28, CD137(4-1BB), OX40(CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D 및/또는 ICOS 중의 하나 이상이다.

경우에 따라, CAR은 제1, 제 2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 양상에서, 제1 세대 CAR은 항원 결합시 CD3-사슬 유도 시그널을 단독으로 제공하는 것이고; 일부 양상에서, 제 2-세대 CAR은 그러한 시그널 및 동시 자극 시그널을 제공하는 것으로서, 예를 들어 CD28 또는 CD137과 같은 하나의 동시 자극 수용체로부터의 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 것이고; 일부 양상에서, 제3 세대 CAR은 상이한 동시 자극 수용체들의 복수의 동시 자극 도메인을 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 양상에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편 및 세포내 시그널링 도메인을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 단편은 scFv를 포함하고, 상기 세포내 도메인은 ITAM을 함유한다. 일부 양상에서, 상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 시그널링 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인과 세포내 시그널링 도메인을 연결하는 막통과 도메인을 포함한다. 일부 양상에서, 상기 막통과 도메인은 CD28의 막통과 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 동시 자극 분자의 세포내 도메인을 함유한다. 상기 세포외 도메인 및 막통과 도메인은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인 및 막통과 도메인은 본 발명에 기재되는 임의의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 수용체는 그 막통과 도메인이 유래되는 분자의 세포외 부분을 함유하는데, 예를 들어 CD28 세포외 부분이다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는, 예를 들어 막통과 도메인 및 세포내 시그널링 도메인 사이에, T 세포 동시 자극 분자로부터 유래되는 세포내 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 함유한다. 일부 양상에서, 상기 T 세포 동시 자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.

일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막통과 부분이거나 이를 함유하는 막통과 도메인, 및 CD28의 시그널링 부분 또는 이의 기능적 변이체 및 CD3 제타의 시그널링 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포내 시그널링 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막통과 부분이거나 이를 함유하는 막통과 도메인, 및 4-1BB의 시그널링 부분 또는 이의 기능적 변이체 및 CD3 제타의 시그널링 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포내 시그널링 도메인을 함유한다. 이러한 일부 구현예에서, 수용체는 인간 Ig 분자와 같은 Ig 분자의 일부분, 예를 들어 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지를 함유하는 스페이서를 더 포함하고, 예를 들어 힌지-온리(힌지-only) 스페이서이다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 막통과 도메인은 인간 CD28의 막통과 도메인(예를 들어 수탁번호 No. P01747.1) 또는 CD8a(수탁번호 No. P01732.1) 또는 이의 변이체이거나 이를 포함하는데, 예를 들어 SEQ ID NO: 8, 79, 142, 또는 143으로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 8, 79, 142, 또는 143과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 막통과 도메인이고; 일부 구현예에서는, 상기 재조합 수용체의 막통과-도메인 함유 부분은 SEQ ID NO: 9로 제시되는 아미노산 서열 또는 그와 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포내 시그널링 성분(들)은, 인간 CD28 단백질의 세포내 동시 자극 시그널링 도메인 또는 이들의 기능적 변이체 또는 일부분을 함유하는데, 예를 들어 천연 CD28의 186-187 위치에서 LL 내지 GG 치환을 갖는 도메인이다. 예를 들어 상기 세포내 시그널링 도메인은 SEQ ID NO: 10 또는 11로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 10 또는 11과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포내 도메인은 4-1BB(예를 들어 수탁번호 No. Q07011.1)의 세포내 동시 자극 시그널링 도메인 또는 영역 또는 이들의 기능적 변이체 또는 일부분을 포함하는데, 예를 들어 SEQ ID NO: 12로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 12와 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포내 시그널링 도메인은 인간 CD3 제타 자극 시그널링 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 포함하는데, 예를 들어 인간 CD3ζ의 이소형 3(수탁번호 No: P20963.2)의 112 AA 세포질 도메인 또는 미국특허 제7,446,190호 또는 미국특허 제8,911,993호에 기술된 바와 같은 CD3 제타 시그널링 도메인이다. 예를 들어 일부 구현예에서, 상기 세포내 시그널링 도메인 또는 영역은 SEQ ID NO: 13, 14 또는 15로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 13, 14 또는 15와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 양상에서, 스페이서는 오로지 IgG의 힌지 영역만을 함유하는데, 예를 들어 IgG4 또는 IgG1의 힌지 영역만, 예를 들어 SEQ ID NO: 1 또는 SEQ ID NO: 89로 제시되는 힌지 온리 스페이서이다. 다른 구현예에서, 상기 Ig 힌지이거나 이를 함유하는데, 예를 들어 필요에 따라 C_H2 및/또는 C_H3 도메인과 연결된 IgG4-유래 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 Ig 힌지인데, 예를 들어 SEQ ID NO: 4로 제시된 것과 같은 C_H2 및 C_H3 도메인과 연결된 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 Ig 힌지인데, 예를 들어 SEQ ID NO: 3으로 제시된 것과 같은 C_H3 도메인과만 연결된 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 가요성 링커로 알려진 것과 같은 기타 가요성 링커이거나 이를 포함한다. 스페이서는 SEQ ID NOs: 81-83 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 CD8a 힌지, SEQ ID NO: 88에 제시된 바와 같은 FcγRIIIa 힌지, SEQ ID NO: 84에 제시된 바와 같은 CTLA4 힌지, 또는 SEQ ID NO: 86에 제시된 바와 같은 PD-1 힌지이다.

예를 들어 일부 구현예에서, CAR은 scFvs를 포함한 항체 단편(antibody fragment)과 같은 항체, 스페이서, 예를 들어 면역글로불린 분자의 일부를 함유하는 경첩 영역, 예를 들어 경첩 영역 및/또는 무거운 사슬 분자의 하나 이상의 불변 영역, 예를 들어 Ig-경첩 함유 스페이서, CD28-유도된 막통과 도메인의 전부 또는 일부를 함유하는 막통과 도메인, CD28-유도된 세포내 시그널링 도메인, 및 CD3 제타 시그널링 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 CAR은 항체 또는 단편, 예를 들어 scFv, 스페이서 예를 들어 Ig-경첩 함유 스페이서의 어느 하나, CD28-유도된 막통과 도메인, 4-1BB-유도된 세포내 시그널링 도메인, 및 CD3 제타-유도된 시그널링 도메인을 함유한다.

일부 구현예에서, 항원 수용체는 마커를 추가로 포함하고/하거나 CAR 또는 다른 항원 수용체를 발현하는 세포는 세포 표면 수용체의 절단된 형태와 같은 수용체를 발현시키기 위한 세포의 형질 도입 또는 조작을 확인하는데 사용될 수 있는 세포 표면 마커와 같은 대리 마커를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 마커는 분자, 예를 들어 T 세포에서 자연상태에서 발견되지 않거나 또는 T 세포의 표면에서는 자연상태에서 발견되지 않는 세포 표면 단백질, 또는 그의 일부이다. 일부 구현예에서, 상기 분자는 비-자기 분자(non-self molecule), 예를 들어 비-자기 단백질, 즉 세포가 입양될 숙주의 면역 시스템에 의해서 "자기"로 인식되지 않는 것이다. 다른 구현예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않고/않거나 유전자 조작용, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 마커로서 사용되는 것 이외의 다른 효과를 생성하지 않는다. 다른 구현예에서, 마커는 세포의 반응을 향상시키고/시키거나 약화시키기 위한 동시 자극 또는 면역 체크 포인트 분자와 같이 생체 내에서 만날 세포에 대한 리간드와 같은 원하는 효과를 발휘하는 치료 분자 또는 분자 일 수 있다. 일부 양상에서, 마커는, 예를 들어 CD34, NGFR 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어 tEGFR)의 전부 또는 일부(예를 들어 절단된 형태)를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커를 인코딩하는 핵산은 절단 가능한 링커 서열, 예를 들어 T2A와 같은 링커 서열을 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어 마커 및 선택적인 링커 서열은 국제공개공보 제WO2014/031687호에 개시된 것일 수 있다. 예를 들어 마커는 선택적으로 T2A 절단 가능한 링커 서열과 같은 링커 서열에 연결된 절단된 EGFR(tEGFR)일 수 있다.

절단된 EGFR(예를 들어 tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 7 또는 166에 제시된 아미노산 서열, 또는 상기 SEQ ID NO: 7 또는 166에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 T2A 링커 서열은 SEQ ID NO: 6 또는 167에 제시된 아미노산 서열, 또는 상기 SEQ ID NO: 6 또는 167에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 그러한 CAR 구조물을 인코딩하는 핵산 분자는 T2A 리보솜 스킵 요소 및/또는 tEGFR 서열, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 서열의 하류를 인코딩하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열은 SEQ ID NO: 6 또는 167에 제시된 T2A 리보솜 스킵 요소, 또는 상기 SEQ ID NO: 6 또는 167에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 SEQ ID NO: 6 또는 167의 서열 상동성을 보이는 아미노산 서열을 인코딩한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체(예를 들어 CAR)를 발현하는 T 세포는 그러한 세포를 검출하는 마커로서 사용될 수 있는 비 면역원성 선택 에피토프(예를 들어 동일한 구조로부터 2 개의 단백질을 발현시키기 위해 T2A 리보솜 스위치에 의해 분리된 CAR 및 EGFRt를 인코딩하는 구조물의 도입에 의해)로서 절단된 EGFR을 발현하도록 생성될 수 있다[참조: 미국특허 제8,802,374호]. 일부 구현예에서, 서열은 SEQ ID NO: 7 또는 166에 제시된 tEGFR 서열, 또는 상기 SEQ ID NO: 7 또는 166에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 또는 그 이상의 SEQ ID NO: 7의 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 인코딩한다.

일부 구현예에서, 인코딩된 CAR은 CAR이 발현되는 세포 표면으로 CAR을 지향시키거나 전달하는 시그널 서열 또는 시그널 펩티드를 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 시그널 펩티드는 막통과 단백질로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 시그널 펩티드는 CD8a, CD33, 또는 IgG로부터 유래된다. 예시적인 시그널 펩티드는 SEQ ID NOs: 39, 40 및 153에 제시된 서열 또는 그의 변이체를 포함한다.

일부 구현예에서, CAR은 본원에서 설명된 sdAb 및 scFv, Ig-힌지 함유 스페이서 또는 본원에서 설명된 다른 스페이서와 같은 스페이서, CD28 막통과 도메인, CD28 세포내 시그널링 도메인, 및 CD3 제타 시그널링 도메인을 포함하여, 항-인간 BCMA 항체와 같은 항-BCMA 항체 또는 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 본원에서 설명된 sdAb 및 scFv, Ig-힌지 함유 스페이서 또는 본원에서 설명된 다른 스페이서와 같은 스페이서, CD28 막통과 도메인, 4-1BB 세포내 시그널링 도메인, 및 CD3 제타 시그널링 도메인을 포함하여, 항-인간 BCMA 항체와 같은 항-BCMA 항체 또는 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 CAR 작제물은 예를 들어 CAR의 하류에 T2A 리보좀 스킵 요소 및/또는 tEGFR 서열을 더 포함한다.

대상체에 투여된 세포에 의해 발현되는 CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로, 치료되는 질환 또는 질환 상태 또는 그의 세포에서 발현되고, 그와 관련되고, 및/또는 그에 특이적인 분자를 인식하거나 또는 그에 특이적으로 결합한다. 분자, 예를 들어 항원에 특이적으로 결합하면, 수용체는 일반적으로 ITAM-도입 신호와 같은 면역자극 신호를 세포 내로 전달하여, 그로 인하여 질환 또는 질환 상태를 표적하는 면역 반응을 촉진시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 세포는 질환 또는 질환 상태의, 또는 질환 또는 질환 상태와 관련된 세포 또는 조직에 의해 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현한다.

일부 구현예에서, CAR은 BCMA, 예를 들어 인간 BCMA에 특이적으로 결합하고, 기재된 바와 같은 항-인간 BCMA 항체 또는 단편을 포함한다. 항-BCMA CAR을 포함하는 비제한적 예시적 CAR 서열은 SEQ ID NOs: 90-141로 제시된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 SEQ ID NOS: 90-141의 임의의 것으로 제시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NOS: 90-141의 임의의 것과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 또는 약 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 CAR은 BCMA, 예를 들어 인간 BCMA을 특이적으로 결합한다.

2. 키메라 자가-항체 수용체(CAAR)

일부 구현예에서, 재조합 수용체는 키메라 자가항체 수용체 (CAAR)이다. 일부 구현예에서, CAAR은 자가항체를 결합하고, 예를 들어 특이적으로 결합하거나, 또는 인식한다. 일부 구현예에서, CAAR를 발현하는 세포, 예를 들어 CARR을 발현하도록 조작된 T 세포는 자가항체-발현 세포에 결합하고 이를 죽이는 데 사용될 수 있지만, 정상 항체 발현 세포에는 그러하지 아니하다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 자가면역 질환과 같은 자기-항원의 발현과 관련된 자가면역 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 궁극적으로 자가항체를 생산하고 그의 세포 표면 상에 자가항체를 표시하는 B 세포를 표적화 할 수 있고, 이들 B 세포를 치료적 중재를 위한 질환-특이적 표적으로 표시할 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 항원-특이적 키메라 자가항체 수용체를 사용하여 질환-유발 B 세포를 표적화함으로써 자가면역 질환에서 병원성 B 세포를 효율적으로 표적화하고 사멸시키는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 CAAR, 예를 들어 미국특허출원공보 제2017/0051035호에 개시된 임의의 수용체이다.

일부 구현예에서, CAAR은 자가항체 결합 도메인, 막통과 도메인, 및 하나 이상의 세포내 시그널링 영역, 또는 도메인(세포질 시그널링 도메인 또는 역역으로도 상호교환가능하게 불리워짐)을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 시그널링 영역은 세포내 시그널링 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 시그널링 영역은 1차 시그널링 영역, T 세포에서 1차 활성화 신호를 자극하고/하거나 유도할 수 있는 시그널링 도메인, T 세포수용체(TCR) 요소의 시그널링 도메인(예를 들어 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포내 시그널링 도메인 또는 영역 또는 그의 기능성 변이체 또는 시그널링 부분) 및/또는 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 시그널링 도메인이거나 이를 포함한다.

일부 구현예에서, 자가항체 결합 도메인은 자가항원 또는 그의 단편을 포함한다. 자가항원의 선택은 표적화 될 자가항체의 유형에 달려 있다. 예를 들어, 자가항원은, 그것이 특정 질환 상태, 예를 들어 자기면역 질환, 예를 들어 자가항체-매개 자가면역 질환과 관련된, B 세포와 같은 표적 세포상의 자가항체를 인식하기 때문에 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 자가면역 질환은 심상성 천포창(pemphigus vulgaris, PV)을 포함한다. 예시적인 자가항원은 데스모글레인 1(Dsg1) 및 Dsg3을 포함한다.

3. TCR

일부 구현예에서, 종양, 바이러스 또는 자기 면역 단백질의 항원과 같은 표적 폴리펩티드의 펩티드 에피토프 또는 T 세포 에피토프를 인식하는 T 세포수용체(TCR) 또는 그의 항원-결합 부분을 발현하는 조작된 세포, 예를 들어 T 세포가 제공된다.

일부 구현예에서, "T 세포수용체" 또는 "TCR"은 가변 α 및 β 사슬(각각 TCRα 및 TCRβ로도 알려짐) 또는 가변 γ 및 δ 사슬(또한 각각 TCRα 및 TCRβ로도 알려짐), 또는 이들의 항원-결합 부분을 포함하며, MHC 분자에 결합된 펩티드에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 αβ 형태이다. 전형적으로, αβ와 γδ 형태로 존재하는 TCR은 일반적으로 구조적으로 유사하지만, 이들을 발현하는 T 세포는 독특한 해부학적 위치 또는 기능을 가질 수 있다. TCR은 세포의 표면 또는 가용성 형태로 발견될 수 있다. 일반적으로, TCR은 T 세포(또는 T 림프구)의 표면에서 발견되며, 일반적으로 주요 조직 적합성 복합체(MHC) 분자에 결합된 항원을 인식하는 역할을 한다.

달리 언급하지 않는 한, 용어 "TCR"은 완전 TCR 뿐만 아니라 그의 항원-결합 부분 또는 항원-결합 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, TCR은 온전한 또는 전장 TCR이고, 예를 들어 αβ 형태 또는 γδ 형태의 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 전장 TCR 보다 짧지만 MHC 분자에서 결합된 특정 펩티드에 결합하는 항원-결합 부분이고, 예를 들어 MHC-펩티드 복합체에 결합한다. 일부 경우, TCR의 항원-결합 부분 또는 단편은 전장 또는 온전한 TCR의 구조적 도메인의 일부분만을 함유하지만, 여전히 상기 전장 TCR이 결합하는 MHC-펩티드 복합체와 같은 펩티드 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 경우, 항원-결합 부분은 특정 MHC-펩티드 복합체에 결합하기 위한 결합 위치를 형성하기에 충분한, TCR의 가변 도메인, 예를 들어 가변 α 사슬 및 가변 β 사슬을 함유한다. 일반적으로, TCR의 가변 쇄들은 펩티드, MHC 및/또는 MHC-펩티드 복합체의 인식에 관여하는 상보성 결정 영역을 함유한다.

일부 구현예에서, TCR의 가변 도메인은 초가변 루프 또는 상보성 결정 영역(CDR)을 함유하는데, 이것이 일반적으로 항원 인식 및 결합 능력 및 특이성에 주로 기여한다. 일부 구현예에서, TCR의 CDR 또는 그들의 조합은 주어진 TCR 분자의 항원-결합 위치의 전부 또는 실질적으로 전부를 형성한다. TCR 쇄의 가변 영역 내 다양한 CDR은 일반적으로 구조 영역(FR)에 의해 분리되는데, 이는 CDR과 비교하여 TCR 분자 중에서 일반적으로 가변성이 덜 나타난다[예를 들어 문헌 「Jores et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988; see also Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003」 참조]. 일부 구현예에서, CDR3이 항원 결합 또는 특이성을 책임지는 주 CDR이거나, 또는 항원 인식을 위해 및/또는 펩티드-MHC 복합체의 가공된 펩티드 부분과 상호 작용하기 위하여 주어진 TCR 가변 영역상의 3 개의 CDR 중에서 가장 중요하다. 일부 상황에서, 알파 사슬의 CDR1은 특정 항원 펩티드의 N-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 상황에서, 베타 쇄의 CDR1은 펩티드의 C-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 상황에서, CDR2는 MHC-펩티드 복합체의 MHC 부분과의 상호 작용 또는 그의 인식을 책임지는 주 CDR에 가장 크게 기여하거나 그러한 CDR이다. 일부 구현예에서, β-쇄의 가변 영역은 추가적인 초변이 영역을 함유할 수 있는데(CDR4 또는 HVR4), 이는 일반적으로 항원 인식이 아닌 초항원(superantigen) 결합과 관련된다[문헌 「Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426」 참조].

일부 구현예에서, TCR은 또한 불변 도메인, 막통과 도메인 및/또는 짧은 세포질 꼬리를 함유할 수 있다[문헌 「Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997」 참조]. 일부 양상에서, TCR의 각 쇄는 하나의 N-말단 면역글로불린 가변 도메인, 하나의 면역글로불린 불변 도메인, 막통과 영역 및 C-말단에서 짧은 세포질 꼬리를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 시그널링을 매개하는 것과 관련된 CD3 복합체의 불변 단백질들과 관련된다.

일부 구현예에서, TCR 사슬은 하나 이상의 불변 도메인을 함유한다. 예를 들어 주어진 TCR 사슬의 세포외 부분(예를 들어 α-사슬 또는 β-사슬)은 가변 도메인(예를 들어 Vα 또는 Vβ, 캐뱃(Kabat) 등의 캐뱃 넘버링에 기초한 전형적으로 아미노산 1 내지 116, "면역학적 단백질의 서열[문헌 「Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.」 참조] 및 세포 멤브레인에 인접한 불변 도메인(예를 들어 α-사슬 불변 도메인 또는 Cα, 전형적으로는 캐벳 넘버링 또는 β 사슬 불변 도메인 또는 Cβ, 전형적으로는 캐벳에 기초한 사슬의 117 내지 295 위치)과 같은 2개의 면역글로불린 유사 도메인을 함유할 수 있다. 예를 들어 어떤 경우에는, 2개의 사슬에 의해 형성된 TCR의 세포외 부분은 2개의 멤브레인-근위 불변 도메인, 및 가변 도메인 각각이 CDR을 함유하는 2개의 멤브레인-원위 가변 도메인을 함유한다. TCR의 불변 도메인은 시스테인 잔기가 이황화물 결합을 형성함으로써 TCR의 2개의 사슬을 연결하는 짧은 연결 서열을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 α 및 β 사슬 각각에 추가의 시스테인 잔기를 가질 수 있어서, TCR은 불변 도메인에서 2개의 이황화물 결합을 함유한다.

일부 구현예에서, TCR 사슬은 막통과 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, 막통과 도멘인은 양으로 하전된다. 일부 경우에 있어서, TCR 사슬은 세포질 꼬리(cytoplasmic tail)를 함유한다. 일부 경우에 있어서, 상기 구조는 TCR이 CD3 및 그의 서브유닛(subunit)과 같은 다른 분자와 회합할 수 있게 한다. 예를 들어 막통과 영역을 갖는 불변 도메인을 함유하는 TCR은 세포 멤브레인에서 단백질을 고정시키고 CD3 시그널링 장치 또는 복합체의 불변 서브유닛과 회합할 수 있다. CD3 시그널링 서브유닛(예를 들어 CD3γ, CD3δ, CD3ε 및 CD3ζ 사슬)의 세포내 꼬리는 TCR 복합체의 시그널링 용량에 관여하는 하나 이상의 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM을 함유한다.

일부 구현예에서, TCR은 2개의 사슬 α 및 β(또는 선택적으로 γ 및 δ)의 이종 이량체일 수 있거나 또는 단일 사슬 TCR 컨스트럭트일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 이황화물 결합 또는 이황화물 결합들에 의해 연결된 2개의 분리된 사슬(α 및 β 사슬 또는 γ 및 δ 사슬)을 함유하는 이종 이량체이다.

일부 구현예에서, TCR은 Vα, β 사슬의 서열과 같은 공지된 TCR 서열(들)로부터 생성될 수 있는데, 이들에 대하여 실질적으로 전장 코딩 서열이 용이하게 이용 가능하다. 세포 공급원으로부터 V 쇄 서열을 포함하는 전장 TCR 서열을 얻는 방법은 잘 알려져 있다. 일부 구현예에서, TCR을 인코딩하는 핵산은 다양한 원으로부터 얻어질 수 있는데, 예를 들어 주어진 세포 또는 세포들 내에서 또는 그로부터 분리된 TCR-인코딩 핵산의 중합 효소 연쇄 반응(PCR) 증폭에 의하여 또는 공개적으로 입수 가능한 TCR DAN 서열을 합성함에 의하여 얻어질 수 있다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체는 재조합 TCR 및/또는 자연발생적인 T 세포로부터 클로닝된 TCR을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 항원(예를 들어, 암 항원)에 대한 고-친화성 T 세포 클론은 동정되고, 환자로부터 분리되며, 세포내로 도입된다. 일부 구현예에서, 표적 항원에 대한 TCR 클론은 인간 면역계 유전자 (예를 들어, 인간 백혈구 항원 시스템, 또는 HLA)로 조작된 트랜스제닉 마우스에서 생성되었다. 예를 들어 종양 항원[예를 들어 문헌 「Parkhurst et al. (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180 and Cohen et al. (2005) J Immunol. 175:5799-5808」 참조] 참조. 일부 구현예에서, 파지 디스플레이가 표적 항원에 대한 TCR을 분리하는데 사용된다[예를 들어 문헌 「Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395 and Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354」 참조].

일부 구현예에서, TCR은 생물학적 원으로부터 얻어지는데, 예를 들어 세포로부터, 예를 들어 T 세포(예를 들어, 세포 독성 T 세포), T 세포 하이브리도마 또는 다른 공개적으로 입수 가능한 원으로부터 얻어진다. 일부 구현예에서, T 세포는 생체 내 분리된 세포로부터 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 흉선학적으로(thymically) 선택된 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 신에피토프-제한(neoepitope-restricted) TCR이다. 일부 구현예에서, T-세포는 배양된 T-세포 하이브리도마 또는 클론일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 또는 그의 항원-결합 부분은 TCR의 서열 지식으로부터 합성 생성될 수 있다.

일부 구현예에서, TCR은 표적 폴리펩티드 항원 또는 그의 표적 T 세포 에피토프에 대한 후보 TCR 라이브러리의 스크리닝하는 것으로부터 선택되거나 또는 동정된 TCR로부터 생성된다. TCR 라이브러리는 PBMC, 비장 또는 다른 림프 기관에 존재하는 세포를 포함하여 대상체로부터 분리된 T 세포로부터 Vα 및 Vβ 레파토리를 증폭함으로써 생성될 수 있다. 일부 경우에, T 세포는 종양-침윤 림프구(TIL)로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 라이브러리는 CD4+ 또는 CD8+ 세포로부터 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 건강한 대상체의 정상 T 세포원, 즉 정상 TCR 라이브러리로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 질환이 있는 대상체의 T 세포원, 즉 질환이 있는 TCR 라이브러리로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, 축퇴(degenerate) 프라이머는 인간으로부터 수득된 T 세포와 같은 샘플에서 예를 들어 RT-PCR에 의하여 Vα 및 Vβ의 유전자 레퍼토리를 증폭시키는데 사용된다. 일부 구현예에서, scTv 라이브러리는 증폭된 산물이 클로닝되거나 어셈블리 되어 링커에 의해 분리되는 나이브 Vα 및 Vβ 라이브러리로부터 어셈블리 될 수 있다. 대상체 및 세포의 공급원에 따라 라이브러리는 HLA 대립형질-특이적일 수 있다. 또는, 일부 구현예에서, TCR 라이브러리는 모체 또는 스캐폴드 TCR 분자의 돌연변이화 또는 다양화에 의해 생성될 수 있다. 일부 양상에서, TCR은 예를 들어 α 또는 β 쇄의 돌연변이화에 의하여 지시된 진화(directed evolution)의 대상이 된다. 일부 구현예에서, TCR의 CDR 내의 특정 잔기가 변경된다. 일부 구현예에서, 선택된 TCR은 친화적 성숙에 의해 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원 특이적 T 세포는, 예를 들어 펩티드에 대한 CTL 활성을 평가하기 위한 스크리닝에 의하여 선택될 수 있다. 일부 양상에서, TCR, 예를 들어 항원-특이적 T 세포 상에서 존재하는 TCR은, 예를 들어 결합 활성에 의하여, 예를 들어 상기 항원에 대한 특정 친화도 또는 결합력(avidity)에 의하여 선택될 수 있다.

일부 구현예에서, TCR 또는 그의 항원-결합 부분은 변형되거나 조작된 것이다. 일부 구현예에서, 지시된 진화 방법을 사용하여 특정 MHC-펩티드 복합체에 대한 보다 높은 친화성을 갖는 것과 같은 변경된 특성을 갖는 TCR을 생성시킨다. 일부 구현예에서, 지시된 진화(directed evolution)는, 제한되지는 않지만, 효모 디스플레이(yeast display)[문헌 「Holler et al., (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al., (2000) Proc Natl Acad Sci U S A, 97, 5387-92), phage display (Li et al., (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54」 참조], 또는 T 세포 디스플레이[문헌 「Chervin et al., (2008) J Immunol Methods, 339, 175-84」 참조]를 비롯한 디스플레이 방법에 의해서 달성된다. 일부 구현예에서, 디스플레이 접근법은 알려진 부모 또는 기준 TCR을 조작하거나 수정하는 것을 포함한다. 예를 들어 일부 경우에는, 야생형 TCR은 CDR의 하나 이상의 잔기가 돌연변이되는 돌연변이 유발 TCR을 생성하기 위한 주형으로 사용될 수 있으며, 원하는 표적 항원에 대한 보다 높은 친화성과 같은 원하는 변경된 특성을 갖는 돌연변이체가 선택된다.

일부 구현예에서, 관심있는 TCR을 생산 또는 생성하는데 사용하기 위한 표적 폴리펩티드의 펩티드는 공지되어 있거나 용이하게 동정될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 또는 항원-결합 부분을 생성시키는데 사용하기에 적합한 펩티드는 관심 대상 표적 폴리펩티드, 예를 들어 본원에서 기술된 표적 폴리펩티드에서 HLA-제한 모티프의 존재에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드는 이용가능한 컴퓨터 예측모델을 사용하여 동정된다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 결합 사이트를 예측하기 위해, 상기 모델은, 한정되지는 않으나, ProPred1[문헌 「Singh and Raghava (2001) Bioinformatics 17(12):1236-1237」 참조] 및 SYFPEITHI[문헌 「Schuler et al., (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-93 2007」 참조]를 포함한다. 일부 구현예에서, MHC-제한된 에피토프는 모든 백인의 약 39-46%에서 발현되는 HLA-A0201이며, 따라서 TCR 또는 다른 MHC-펩티드 결합 분자를 제조하는데 사용하기 위한 MHC 항원의 적합한 선택을 나타낸다.

컴퓨터 예측 모델을 이용한 HLA-A0201-결합 모티프 및 프로테아좀 및 면역-프로테아좀에 대한 절단 부위는 당업자에게 공지되어 있다. MHC 클래스 I 결합 부위를 예측하기 위해, 상기 모델은 ProPred1[문헌 「Singh and Raghava, ProPred: prediction of HLA-DR binding sites. BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001」에서 보다 상세하게 기술됨] 및 SYFPEITHI[문헌 「Schuler et al., SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. in Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-93 2007」 참조]를 포함한다.

일부 구현예에서, TCR 또는 이의 항원 결합 부분은 결합 특성과 같은 하나 이상의 특성이 변경된 재조합적으로 생산된 천연 단백질 또는 이의 돌연변이 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 인간, 마우스, 래트 또는 다른 포유류 동물과 같은 다양한 동물 중 하나로부터 유도될 수 있다. TCR은 세포에 결합되거나 가용성 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법의 목적을 위해, TCR은 세포 표면 상에 발현된 세포-결합 형태이다.

일부 구현예에서, TCR은 전장 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 항원-결합 부분이다. 일부 구현예에서, TCR은 이량체 TCR(dt TCR)이다. 일부 구현예에서, TCR은 단일 사슬 TCR(SC-TCR)이다. 일부 구현예에서, dTCR 또는 scTCR은 국제공개공보 제WO03/020763호, 제WO04/033685호, 제WO2011/044186호에 기재된 바와 같은 구조를 갖는다.

일부 구현예에서, TCR은 막통과 서열에 상응하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR은 세포질 서열에 상응하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, TCR은 CD3과 TCR 복합체를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, dTCR 또는 scTCR을 포함하는 임의의 TCR은 T 세포의 표면 상에 활성 TCR을 생성하는 시그널링 도메인에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 세포의 표면에서 발현된다.

일부 구현예에서, dTCR은, TCR α 사슬 가변 영역 서열에 상응하는 서열이 TCR α 사슬 불변 영역 세포외 서열에 상응하는 서열의 N 말단에 융합된 제 1 폴리펩티드, 및 TCR β 사슬 가변 영역 서열에 상응하는 서열이 TCR β 사슬 불변 영역 세포외 서열에 상응하는 서열의 N 말단에 융합된 제 2 폴리펩티드를 함유하고, 상기 제 1 및 제 2 폴리펩티드는 이황화물 결합에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 결합은 천연 이량체 αβ TCR에 존재하는 본래 사슬 간 디설파이드 결합에 상응할 수 있다. 일부 구현예에서, 사슬 간의 이황화물 결합은 천연 TCR에는 존재하지 않는다. 예를 들어 일부 구현예에서, 하나 이상의 시스테인은 dTCR 폴리펩티드 쌍의 불변 영역 세포외 서열에 혼입될 수 있다. 일부 경우에는, 천연 및 비천연 이황화 결합이 둘 다 바람직할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 멤브레인에 고정하기 위해 막통과 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, dTCR은 가변 α 도메인, 불변 α 도메인 및 불변 α 도메인의 C-말단에 부착된 제 1 이량체화 모티프를 함유하는 TCR α 사슬, 및 가변 β 도메인, 불변 β 도메인 및 불변 β 도메인의 C- 말단에 부착된 제 1 이량체화 모티프를 함유하는 TCR β 사슬을 함유하며, 상기 제 1 및 제 2 이량체화 모티프는 TCR α 사슬과 TCR β 사슬을 함께 연결하는 제 1 이량체화 모티프의 아미노산과 제 2 이량체화 모티프의 아미노산 사이의 공유 결합을 형성하도록 용이하게 상호 작용한다.

일부 구현예에서, TCR은 scTCR이다. 전형적으로, scTCR은 공지의 방법[문헌 「Soo Hoo, W. F. et al., PNAS (USA) 89, 4759 (1992); Wulfing, C. and Pluckthun, A. J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, I. et al., PNAS (USA) 90 3830 (1993); 국제공개공보 제WO96/13593호, 제WO96/18105호, 제WO99/60120호, 제WO99/18129호, 제WO03/020763호, 제WO2011/044186호; 및 Schlueter, C. J. et al., J. Mol. Biol. 256, 859 (1996)」 참조]을 이용하여 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, scTCR은 도입된 비-천연 이황화물 인터체인(non-native disulfide interchain) 결합을 포함하여 TCR 사슬의 결합을 촉진시킨다[예를 들어 국제공개공보 제WO 03/020763호 참조). 일부 구현예에서, scTCR은 그의 C-말단에 융합된 이종 류신 지퍼가 사슬 결합을 용이하게 하는 비-이황화물 연결 말단 절단된 TCR이다[예를 들어 국제공개공보 제WO99/60120호 참조]. 일부 구현예에서, scTCR은 펩티드 링커를 통해 TCRβ 가변 도메인에 공유 결합된 TCRα 가변 도메인을 함유한다[국제공개공보 제WO99/18129호 참조].

일부 구현예에서, scTCR은 TCR α 사슬 가변 영역에 상응하는 아미노산 서열로 구성된 제 1 분절, TCR β 사슬 불변 영역 세포외 서열에 상응하는 아미노산 서열의 N 말단에 융합된 TCR β 사슬 가변 영역 서열에 상응하는 아미노산로 구성된 제 2 분절, 및 상기 제 1 분절의 C 말단을 상기 제 2 분절의 N 말단에 연결시키는 링커 서열을 함유한다.

일부 구현예에서, scTCR은 α 사슬 세포외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 α 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제 1 분절, 및 서열 β 사슬 세포외 불변 및 막통과 서열의 N 말단에 융합된 β 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제 2 분절, 및, 선택적으로 상기 제 1 분절의 C 말단을 상기 제 2 분절의 N 말단에 연결시키는 링커 서열을 함유한다.

일부 구현예에서, scTCR은 β 사슬 세포외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 TCR β 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제 1분절, 및 α 사슬 세포외 불변 및 막통과 서열의 N 말단에 융합된 α 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제 2 분절, 및, 선택적으로, 상기 제 1 분절의 C 말단을 상기 제 2 분적ㄹ의 N 말단으로 연결시키는 링커 서열을 함유한다.

일부 구현예에서, 제 1 및 제 2 TCR 분절을 연결시키는 scTCR의 링커는 TCR 결합 특이성을 유지하면서 단일 폴리펩티드 가닥을 형성할 수 있는 임의의 링커 일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 예를 들어 P가 프롤린이고, AA가 아미노산이 글리신 및 세린인 아미노산 서열을 나타내는 화학식 -P-AA-P를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 제 1 및 제 2 분절은 그 가변 영역 서열이 그러한 결합을 위해 배향되도록 쌍을 이룬다. 따라서, 일부 경우에, 링커는 제 1 분절의 C 말단과 제 2 분절의 N 말단 사이의 거리를 확장하는데 충분한 길이를 가지거나, 그 반대의 경우도 있지만, scTCR의 표적 리간드로의 결합을 차단하거나 줄이기에는 너무 길지 않다. 일부 구현예에서, 링커는 10 내지 45개의 아미노산, 또는 약 10 내지 45개의 아미노산, 예를 들어 10 내지 30개의 아미노산 또는 26 내지 41개의 아미노산 잔기, 예를 들어 29, 30, 31 또는 32개의 아미노산을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 일반식 -PGGG-(SGGGG)5-P를 가지며, 여기서 P는 프롤린이고, G는 글리신이며, S는 세린이다(SEQ ID NO: 16). 일부 구현예에서, 링커는 서열 GSADDAKKDAAKKDGKS을 갖는다(SEQ ID NO: 17).

일부 구현예에서 scTCR은 α 사슬의 불변 도메인의 면역글로불린 영역의 잔기를 β 사슬의 불변 도메인의 면역글로불린 영역의 잔기에 연결시키는 공유 이황화물 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 천연 TCR에서 사슬간 이황화물 결합은 존재하지 않는다. 예를 들어 일부 구현예에서, 하나 이상의 시스테인은 scTCR 폴리펩티드의 제 1 및 제 2 분절의 불변 영역 세포외 서열에 혼입될 수 있다. 어떤 경우에는, 천연 및 비천연 이황화 결합이 둘 다 바람직할 수 있다.

도입된 쇄간 이황화물 결합을 포함하는 dTCR 또는 scTCR의 일부 구현예에서, 천연의 이황화물 결합은 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 천연 사슬간 이황화물 결합을 형성하는 하나 이상의 천연 시스테인은 세린 또는 알라닌과 같은 다른 잔기로 치환한다. 일부 구현예에서, 도입된 이황화물 결합은 제 1 및 제 2 분절 상의 비-시스테인 잔기를 시스테인으로 돌연변이시킴으로써 형성될 수 있다. 예시적인 TCR의 비천연 이황화물 결합은 국제공개공보 제WO2006/000830호에 기술되어 있다.

일부 구현예에서, TCR 또는 그의 항원 결합 단편은 표적 항원에 대한 평형 결합 상수와 약 10^-5 내지 10^-12M사이의 친화력 및 모든 개별 값 및 범위를 나타낸다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 MHC-펩티드 복합체 또는 리간드이다.

일부 구현예에서 α 및 β 사슬과 같은 TCR을 인코딩하는 핵산 또는 핵산은 PCR, 클로닝 또는 다른 적절한 수단에 의해 증폭되어 적합한 발현 벡터 또는 벡터로 클로닝될 수 있다. 발현 벡터는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터일 수 있고 임의의 적합한 숙주를 형질 전환 또는 형질 감염시키는데 사용될 수 있다. 적합한 벡터는, 플라스미드(plasmid) 및 바이러스와 같이, 증식 및 체적증대 또는 발현 또는 이들 모두를 위해 고안된 벡터를 포함한다.

일부 구현예에서, 벡터는 pUC 시리즈(Fermentas Life Sciences), pBluescript 시리즈(Stratagene, LaJolla, Calif), pET 시리즈(Novagen, Madison, Wis), pGEX 시리즈(Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden), 또는 pEX 시리즈(Clontech, Palo Alto, Calif)일 수 있다. 일부 경우에는, λG10, λGT11, λZapII(Stratagene), λEMBL4, 및 λNM1149와 같은 박테리오 파지 벡터도 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 식물 발현 벡터가 사용될 수 있고, pBI01, pBI1012, pBI1013, pBI121 및 pBIN19(Clontech)를 포함한다. 일부 구현예에서, 동물 발현 벡터는 pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo(Clontech)를 포함한다. 일부 구현예에서, 레트로 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터가 사용된다.

일부 구현예에서, 재조합 발현 벡터는 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 벡터가 DNA 기반인지 또는 RNA 기반인지 여부를 적절하게 고려해하여 벡터가 도입될 숙주의 유형(예를 들어 세균, 진균, 식물 또는 동물)에 특이적인 전사 및 번역 개시 및 종결 코돈과 같은 조절 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 TCR 또는 항원 결합 부분(또는 다른 MHC-펩티드 결합 분자)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 작동 가능하게 연결된 비 천연 프로모터를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 프로모터는 비 바이러스 프로모터 또는 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터, 및 마우스 줄기 세포 바이러스의 긴 말단 반복에서 발견되는 프로모터일 수 있다. 기타 공지된 프로모터 또한 고려된다.

일부 구현예에서, TCR을 코딩하는 벡터를 생성하기 위해, 관심있는 TCR을 발현하는 T 세포 클론으로부터 단리된 총 cDNA로부터 α 및 β 사슬을 PCR 증폭하고 발현 벡터에 클로닝하였다. 일부 구현예에서, α 및 β 사슬은 동일한 벡터 내로 클로닝된다. 일부 구현예에서, α 및 β 사슬은 상이한 벡터로 클로닝된다. 일부 구현예에서, 생성된 α 및 β 사슬은 레트로바이러스, 예를 들어 렌티바이러스 벡터에 혼입된다.

4. 다중 표적화

일부 구현예에서, 세포 및 방법은 세포 상에 2개 이상의 유전적으로 조작된 수용체의 발현과 같은 다중 표적화 전략을 포함하며, 각각 동일하거나 상이한 항원을 인식하고 전형적으로 각각 상이한 세포내 시그널링 성분을 포함한다. 그러한 다중 표적화 전략은 예를 들어 국제공개공보 제WO2014/055668 A1호(예를 들어 정상 세포와 같이 표적 상에 개별적으로 존재하지만 치료하고자 하는 질환 또는 증상의 세포에서만 함께 존재하는 두 개의 상이한 항원을 표적으로 하는 활성화 및 동시 자극 CAR의 조합을 기술함) 및 문헌 「Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013)」[활성화 CAR 및 억제 CAR을 발현하는 세포, 예를 들어 활성화 CAR이 정상 또는 비병출성 세포 모두에서 발현되는 하나의 항원 및 치료 대상의 질환 또는 증상의 세포에 결합하고, 억제성 CAR이 정상 세포 또는 치료를 원하지 않는 세포에서만 발현되는 다른 항원에 결합하는 것을 기술함]에 기술되어 있다.

예를 들어 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제 1 수용체, 예를 들어 제 1 항원에 의해 인식되는 항원에 대한 특이적 결합시 세포에 활성화 신호를 유도할 수 있는 제 1 유전적으로 조작된 항원 수용체(예를 들어 CAR 또는 TCR)을 발현하는 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제 2 수용체에 의해 인식되는 제 2 항원에 특이적으로 결합시 면역 세포에 동시 자극 신호를 유도할 수 있는 제 2 유전자 조작 항원 수용체(예를 들어 CAR 또는 TCR), 예를 들어 키메라 동시 자극 수용체를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제 1 항원 및 제 2항원은 동일하다. 일부 구현예에서, 제 1항원 및 제 2항원은 상이하다.

일부 구현예에서, 제 1 및/또는 제 2 유전적으로 조작된 항원 수용체(예를 들어 CAR 또는 TCR)은 세포에 활성화 신호를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 함유하는 세포내 시그널링 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 제 1 수용체에 의해 유도된 활성화는 시그널링 또는 ITAM 인 산화 및/또는 ITAM 매개 시그널링 캐스케이드의 개시와 같은 면역 반응의 개시를 초래하는 세포에서의 단백질 발현의 변화(예 : CD4 또는 CD8 등), NF-κB 및/또는 AP-1과 같은 하나 이상의 전사 인자의 활성화, 및/또는 NF-κB 및/또는 AP-1과 같은 유전자 발현의 유도 사이토카인, 증식 및/또는 생존과 같은 인자를 포함한다.

일부 구현예에서, 제 1 및/또는 제 2 수용체는 CD28, CD137(4-1BB), OX40 및/또는 ICOS와 같은 동시 자극 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, 제 1 및 제 2 수용체는 상이한 동시 자극 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 함유한다. 하나의 구현예에서, 제 1 수용체는 CD28 동시 자극 시그널링 영역을 포함하고, 제 2 수용체는 4-1BB 보조-자극 시그널링 영역을 함유하거나 그 역도 마찬가지이다.

일부 구현예에서, 제 1 및/또는 제 2 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 포함하는 세포내 시그널링 도메인 및 동시 자극 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 모두 함유한다.

일부 구현예에서, 제 1 수용체는 TAM 또는 ITAM-유사 모티프를 함유하는 세포내 시그널링 도메인을 함유하고, 제 2 수용체는 동시 자극 수용체의 세포내 시그널링 도메인을 함유한다. 동일한 세포에서 유도된 활성화 신호와 조합된 동시 자극 신호는 증가된 유전자 발현, 사이토카인 및 다른 인자의 분비 및 세포 사멸과 같은 T 세포 매개된 이펙터와 같은 견고하고 지속적인 면역 반응과 같은 면역 반응을 유발하는 신호이다.

일부 구현예에서, 제 1 수용체만의 결찰 또는 제 2 수용체만의 결찰은 어느 것도 강력한 면역 반응을 유도하지 않는다. 일부 양상에서, 단지 하나의 수용체가 결찰되다면, 세포는 항원에 대해 내성을 갖거나 비반응성이거나, 또는 억제되고/되거나 인자를 증식시키거나 분비하도록 유도되거나 작용기 기능을 수행하지 않는다. 그러나, 일부 이러한 구현예에서, 제 1 및 제 2 항원을 발현하는 세포의 만남과 같이 다수의 수용체가 결찰되었을 때, 예를 들어 하나 이상의 사이토카인의 분비, 증식, 지속성에 의해 지시되는 바와 같이, 및/또는 표적 세포의 세포 독성 사멸과 같은 면역 이펙터 기능을 수행하는 것과 같은, 완전한 면역 활성화 또는 자극과 같은 원하는 반응이 달성된다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포는 추가로 억제 CAR(inhibitory CAR; iCAR)[문헌 「Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013)」 참조], 예를 들어 질환 또는 증상과 관련된 것과는 상이하고/하거나 그에 특이적인 항원을 인식하는 CAR로서, 그에 의해서 질환-표적화 CAR을 통해서 분배된 활성화 신호는 억제 CAR을 그의 리간드에 결합시킴으로써 감소되거나 또는 억제되어, 예를 들어 오프-표적 효과(off-target effects)를 감소시킨다.

일부 구현예에서, 2개의 수용체는 세포에 대한 활성화 및 억제 신호를 각각 유도하여 수용체 중 하나에 의한 그의 항원에의 결합이 세포를 활성화시키거나 반응을 유도하지만 제 2 억제 수용체에 의한 결합 이 항원에 대한 신호는 그 반응을 억제하거나 약화시키는 신호를 유도한다. 예를 들어 활성화 CAR과 억제 CAR 또는 iCAR의 조합이다. 이러한 전략은 예를 들어 활성화 CAR이 질환 또는 증상에서 발현되는 항원에 결합 하나 정상 세포에서도 발현되며, 억제 수용체는 정상 세포에서 발현되는 별도의 항원에 결합하지만 질환이나 증상이 있는 세포가 아니다.

일부 양상에서, 키메라 수용체는 억제 CAR(예를 들어 iCAR)이거나 또는 그것을 포함하고, 면역 반응, 예를 들어 세포 중의 ITAM- 및/또는 동시 자극-촉진 반응을 약화시키거나 또는 억제하는 세포내 성분들을 포함한다. 상기 세포내 시그널링 성분들의 예는, PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2 수용체, A2AR를 비롯한 EP2/4 아데노신 수용체를 포함한, 면역 체크포인트 분자 상에서 발견된 것들이다. 일부 양상에서, 조작된 세포는 상기 억제 분자의 또는 그로부터 유도된 시그널링 도메인을 포함하는 억제 CAR을 포함하여, 그것이 예를 들어 활성화 및/또는 동시 자극 CAR에 의해서 유발된 세포의 반응을 약화시키게 한다.

일부 구현예에서, 다중 표적화 전략은 특정 질환 또는 증상과 관련된 항원이 비 병사성 세포(non-diseased cell)에서 발현되고/되거나 일시적(예를 들어 유전자 조작과 관련된 자극시)으로 또는 영구적으로 조작된 세포 자체에서 발현되는 경우에 사용된다. 이러한 경우, 2개의 분리된 개별적 항원 수용체의 연결을 요구함으로써, 특이성, 선택성 및/또는 효능이 개선될 수 있다.

일부 구현예에서, 복수의 항원, 예를 들어 제 1항원 또는 제 2항원은 암세포에서와 같이 표적화 되는 세포, 조직 또는 질환 또는 증상 상에 발현된다. 한 양상에서, 세포, 조직, 질환 또는 질환 상태는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다. 일부 구현예에서, 복수의 항원 중 하나 이상은 일반적으로 정상 또는 비병사성 세포 또는 조직 및/또는 조작된 세포 자체와 같은 세포 치료법으로 표적화하는 것이 바람직하지 않은 세포에서 또한 발현된다. 이러한 구현예에서, 세포의 반응을 달성하기 위해 다중 수용체의 연결을 요구함으로써, 특이성 및/또는 효능이 달성된다.

B. 유전자 조작을 위한 세포 및 세포의 준비

제공된 방법에 의해 투여되는 수용체를 발현하는 세포 중에는 조작된 세포가 있다. 유전자 조작은 일반적으로 레트로 바이러스 형질 도입, 형질주입 또는 형질 전환에 의해 재조합 또는 조작된 성분을 코딩하는 핵산을 세포를 포함하는 조성물로 도입하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 핵산은 이종성이며, 즉 예를 들어 조작되는 세포 및/또는 그러한 세포가 유래된 유기체에서 통상적으로 발견되지 않는 것 같은 다른 생물 또는 세포로부터 얻은 것과 같은 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에 통상적으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 여러 상이한 세포 유형으로부터의 다양한 도메인을 코딩하는 핵산의 키메라 조합물을 포함하여 자연계에서 발견되지 않는 핵산과 같이 자연 발생적 핵산은 아니다.

세포는 일반적으로 포유류 세포와 같은 진핵 세포이고, 전형적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프 기관으로부터 유래되며, 타고난 면역 또는 적응 면역의 세포, 예를 들어 림프구를 비롯한 골수 또는 림프 세포, 전형적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함한다. 다른 예시적인 세포는 유도된 만능 줄기 세포(pluripotent stem cell; iPSCs)를 포함하여 다능성 및 만능 줄기 세포와 같은 줄기 세포를 포함한다. 세포는 전형적으로 대상으로부터 직접 단리된 및/또는 대상으로부터 단리되고 동결된 것과 같은 일차세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 T 세포의 하나 이상의 서브 세트 또는 전체 T 세포 집단, CD4⁺ 세포, CD8⁺ 세포 및 이들의 모집단과 같은 다른 세포 유형, 예를 들어 기능, 활성화 상태, 성숙도, 항원 특이성, 항원 수용체의 유형, 특정 기관 또는 구획에서의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로파일 및/또는 분화 정도에 의존적일 수 있다. 치료될 대상과 관련하여, 세포는 동종 및/또는 자기 조직일 수 있다. 방법 중에는 상용 방법이 포함된다. 상용 기술과 같은 일부 양상에서, 세포는 만능성 및/또는 다능성, 예를 들어 유도된 만능 줄기 세포(iPSCs)와 같은 줄기 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 피험자로부터 세포를 단리하고, 이들을 제조, 가공, 배양하고/하거나 조작하고 동결 보존 전후에 동일 대상으로 도입하는 것을 포함한다.

T 세포 및/또 CD4⁺ 및/또는CD8⁺ T 세포의 서브 타입 및 하위 집단 중에서, 천연 T(T_N) 세포, 이펙터 T 세포(T_EFF), 메모리 T 세포 및 그의 서브-타입, 예를 들어 줄기 세포 메모리 T(T_SCM), 센트럴 메모리 T(T_CM), 이펙터 메모리 T(T_EM), 또는 말단분화 이펙터 메모리(terminally differentiated effector memory) T 세포, 종양-침윤 림프구(tumor-infiltrating lymphocytes; TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼(helper) T 세포, 세포독성 T 세포, 점막 관련 불변 T(mucosa-associated invariant T; TMAIT) 세포, 자연적으로 발생하는 및 적응 조절 T(adaptive regulatory Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예를 들어 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 폴리큘러 헬퍼(follicular helper) T 세포, 알파/베타 T 세포, 및 델타/감마 T 세포가 있다.

일부 구현예에서, 세포는 천연 킬러 세포(NK cell)이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵 세포 또는 과립구, 예를 들어 골수 세포, 대 식세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.

일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 핵산은 이종성이며, 즉 예를 들어 조작되는 세포 및/또는 그러한 세포가 유래된 유기체에서 통상적으로 발견되지 않는 세포는 다른 유기체 또는 세포로부터 얻어진 것과 같이 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에 통상적으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 여러 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 코딩하는 핵산의 키메라 조합물을 포함하여 자연계에서 발견되지 않는 핵산과 같이 자연 발생적 핵산은 아니다.

일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조단계를 포함한다. CAR과 같은 형질전화 수용체를 코딩하는 핵산 도입용 세포는 생물학적 샘플, 예를 들어 대상으로부터 수득되거나 이로부터 유도된 샘플과 같은 샘플로부터 분리 될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리된 대상은 질환 또는 증상를 가지거나 세포 치료가 필요하거나 세포 치료가 투여될 대상이다. 일부 구현예에서 환자는 세포가 분리, 가공 및/또는 조작되는 적용 세포 치료와 같은 특정 치료적 개입이 필요한 인간이다.

따라서, 한 구현예에서 세포는 일차 세포, 예를 들어 일차 인간 세포이다. 샘프에는 분리, 원심 분리, 유전자 조작(예를 들어 바이러스 벡터를 이용한 형질 도입), 세척 및/또는 배양과 같은 하나 이상의 처리 단계에서 생성되는 샘플뿐만 아니라 조직에서 추출한 조직, 유체 및 기타 샘플이 포함된다. 생물학적 샘플은 생물학적 소스 또는 처리된 샘플에서 직접 얻은 샘플 일 수 있다. 생물학적 시료로는 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀, 조직 및 기관 샘플(이로부터 추출한 가고 샘플 포함)과 같은 체액이 있으나 이에 국한되지 않는다.

한 양상에서, 세포가 유래되거나 분리되는 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이고, 또는 성분 채집술 또는 백혈구 추출물에서 유래된 것이다. 예시적인 샘플은 전혈, 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 전립선, 자궁 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 다른 기관에서 유래된 세포, 및/또는 이로부터 유래된 세포를 포함한다. 샘플은 세포 치료와 관련하여, 예를 들어 적용 세포 치료, 자기 및 동종 원천으로부터의 샘플을 포함한다.

일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주에서 유래한다. 일부 구현예에서 세포는 이종의 소스, 예를 들어 마우스, 래트, 비인간 영장류 및 돼지로부터 수득된다.

일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 및/또는 비친화성에 기초한 세포 분리 단계를 포함한다. 일 실시예에서, 세포를 세척, 원심 분리 및/또는 하나 이상의 시약의 존재하에, 예를 들어 원하지 않는 성분을 제거하고, 원하는 성분을 풍부하게하고, 특정 시약에 민감한 세포를 용해 시키거나 제거하기 위해 배양한다. 일 실시예에서, 세포는 밀도, 부착 성질, 크기, 민감성 및/또는 특정 성분에 대한 내성과 같은 하나 이상의 특성에 기초하여 분리된다.

일부 실시예에서, 환자의 순환 혈액으로부터의 세포는 예를 들어 성분 채집술 또는 백혈구 제거에 의해 얻어진다. 샘플에는 T 세포, 단핵 세포, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 비롯한 일부 림프구가 포함되어 있으며 일부 양상에서는 적혈구 및 혈소판 이외의 세포가 포함되어 있다.

일부 구현예에서, 환자로부터 수집된 혈액 세포를 세척하여 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 공정 단계를 위해 적절한 완충액 또는 배지에 세포를 위치시킨다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 환충 식염수(PBS)로 세척한다. 일부 구현예에서, 세척 용액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 다수 또는 모든 2가 양이온이 부족하다. 일부 양상에서 세척 단계는 반자동 “플로우 스루(flow-through)" 원심 분리기(예를 들어 the Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)를 제조사의 지침에 따라 수행한다. 일부 양상에서, 세척 단계는 제조사의 지시에 따라 접선 유동 여과(TFF)에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후 다양한 생체 적합성 완충액, 예를 들어 Ca⁺⁺/Mg⁺⁺ 부재 PBS에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분을 제거하고 세포를 배양 배지에 직접 재현탁한다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 적혈구를 용해시켜 퍼콜(Percoll) 또는 피콜(Ficoll) 구배를 통해 원심 분리하여 말초 혈액으로부터 백혈구를 제조하는 것과 같은 밀도-기반 세포 분리방법을 포함한다.

일부 구현예에서, 단리 방법은 표면 마커, 예를 들어 표면 단백질, 세포내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 마커에 기초한 임의의 공지된 분리 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리는 친화도 또는 면역 친화성-기재분리이다. 예를 들어 일부 양상에서 단리는 세포의 예를 들어 그러한 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 배양에 의해, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포 발현 또는 발현 수준에 기초한 세포 및 세포 집단의 분리를 포함하며, 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너에 결합한 세포를 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포로부터 분리하는 단계를 포함한다.

이러한 분리 단계는 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포가 보유되는 시약에 결합된 세포가 추가 사용을 위해 보유된 양성 선택 및/또는 음성 선택에 기초할 수 있다. 일 예에서, 두 분획은 추후 사용을 위해 보유된다. 일부 양상에서, 음성 선택은 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어, 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발견된 마커에 기초하여 분리가 가장 잘 수행된다.

분리는 특정 세포 집단 또는 특정 마커를 발현하는 세포의 100% 농축 또는 제거를 수반할 필요는 없다. 예를 들어 마커를 발현하는 세포와 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 또는 풍부화는 그러한 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 말하지만, 마커를 발현하지 않는 세포가 완전히 없게 할 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선별, 제거 또는 고갈은 그러한 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 의미하지만 그러한 모든 세포를 완전히 제거할 필요는 없다.

일부 실시예에서, 한 번의 단계로부터 양 또는 음으로 선택된 분획이 후속적인 양성 또는 음성의 선택과 같은 다른 분리 단계를 거치는 다중 단계의 분리 단계가 수행된다. 일부 실시예에서, 단일 분리 단계는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 함께 세포를 항온 처리함으로써, 복수의 마커를 동시에 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있으며, 각각은 음성 선택을 목표로 하는 마커에 특이적이다. 마찬가지로, 여러 세포 유형은 다양한 세포 유형에서 발현되는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 함께 세포를 배양함으로써 동시에 양성으로 선택될 수 있다.

예를 들어 일부 양상에서, 양성이거나 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어 CD28⁺, CD62L⁺, CCR7⁺, CD27⁺, CD127⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD45RA⁺, 및/또는 CD45RO⁺ T 세포의 높은 수준을 발현하는 세포와 같은 T 세포의 하위 집단은 양성 또는 음성 선별 기술에 의해 분리된다.

예를 들어 CD3⁺, CD28⁺ T 세포는 CD3/CD28 콘쥬게이트된 자성 비드(conjugated magnetic bead)(예를 들어 DYNABEADS®M-450 CD3/CD28 T 세포 확장기)를 사용하여 적극적으로 선택될 수 있다.

일부 구현예에서, 단리는 음성 선택에 의한 양성 선별 또는 특정 세포군의 고갈에 의해 특정 세포 집단에 대한 농축에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선별는 양성 또는 음성으로 선택된 세포 상에 상대적으로 높은 수준(마커 하이(high))으로 발현되거나 발현되는 하나 이상의 표면 마커(마커⁺)에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 다른 결합제와 세포를 인큐베이션시킴으로써 달성된다.

일부 구현예에서, T 세포는 B 세포, 단구 또는 CD14와 같은 다른 백혈구와 같은 비 T 세포에서 발현된 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 양상에서, CD4⁺ 또는 CD8⁺ 선별 단계는 CD4⁺ 헬퍼 및 CD8⁺ 세포 독성 T 세포를 분리하는데 사용된다. 이러한 CD4⁺ 및 CD8⁺ 모집단은 하나 이상의 순진, 메모리 및/또는 이펙터 T 세포 하위 집단에서 상대적으로 높은 정도로 발현되거나 표현된 마커에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 하위 집단으로 추가 분류될 수 있다.

일부 구현예에서, CD8⁺ 세포는 각각의 부분 집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해서, 네이비(naive), 센트럴 메모리, 이펙터 메모리(effector memory) 및/또는 센트럴 메모리 줄기 세포(central memory stem cell)를 추가로 풍부하게 하거나 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 센트럴 메모리 T(T_CM) 세포에 대한 농축은 팽창 및/또는 생체내 투여를 개선하는 것과 같은 효능을 증가시키기 위해 수행되며, 일부 양상에서는 특히 이러한 하위 집단에서 강건하다[문헌 「Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012); Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012)」 참조]. 일부 구현예에서, T_CM-풍부 CD8⁺ T 세포 및 CD4⁺ T 세포를 결합시키는 것은 효능을 추가로 강화시킨다.

일부 구현예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브 세트에 모두 존재한다. PBMC는 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하는 것과 같은, CD62L-CD8⁺ 및/또는 CD62L⁺CD8⁺ 분획을 풍부하게 하거나 고갈시킬 수 있다.

일부 구현예에서, 센트럴 메모리(central memory) T(T_CM) 세포에 대한 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, 및/또는 CD127의 양성 또는 고표면 발현에 기초하며; 일부 양상에서 그것은 CD45RA 및/또는 그랜자임 B(granzyme B)를 발현하거나 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 구현예에서 T_CM 세포에 대한 풍부한 CD8⁺ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선별 또는 농축에 의해 수행된다. 일부 양상에서, 센트럴 메모리 T(T_CM) 세포에 대한 농축은 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L에 기초한 양성 선별을 실시한 CD4 발현에 기초하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행한다. 일부 양상에서, 이러한 선택은 동시에 수행되고 다른 양상에서는 어느 순서로 순차적으로 수행된다. 일부 구현예에서, CD8⁺ 세포 집단 또는 부분 집단을 제조하는데 사용된 동일한 CD4 발현-기반 선택 단계는 또한 CD4⁺ 세포 집단 또는 하위 집단을 생성하는데 사용되어 CD4-기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획을 둘 다 유지시켜서 상기 방법의 후속 단계에서 사용한 후, 선택적으로 하나 이상의 추가의 양성 또는 음성 선택 단계를 수행한다.

특정 실시예에서, PBMC 또는 다른 백혈구 샘플의 시료는 CD4⁺ 세포의 선택에 종속되며, 여기서 양성 및 양성 분획 모두가 유지된다. 이어서, 음성 분획을 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기초한 음성 선별 및 양성 및 음성 선택이 어느 순서로 수행되는지에 대한 CD62L 또는 CCR7와 같은 센트럴 메모리 T 세포의 표지 특징에 기초한 양성 선택을 실시한다.

CD4⁺ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 가진 세포 집단을 확인함으로써 네이비하고 센트럴 메모리 및 효과 세포로 분류된다. CD4⁺ 림프구는 표준 방법으로 얻을 수 있다. 일부 구현예에서, 천연의 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA⁺, CD62L⁺, CD4⁺ T 세포이다. 일부 구현예에서, 센트럴 메모리 CD4⁺ 세포는 CD62L⁺ 및 CD45RO⁺이다. 일부 구현예에서, 이펙터 CD4⁺ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.

한 실시예에서, 음성 선택에 의한 CD4⁺ 세포를 풍부하게 하기 위해, 단클론 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 세포의 분리를 허용하기 위해 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 세포 및 세포 집단은 면역 자기(또는 친화력 자기) 분리 기술을 사용하여 분리 또는 단리된다[문헌 「Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro and In vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒ Humana Press Inc., Totowa, NJ」에서 검토됨].

일부 양상에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물은 상자성 비드(예를 들어 Dynalbeads 또는 MACS 비드)와 같은 자기적으로 반응하는 입자 또는 미세 입자와 같은 작고 자화 가능한 또는 자기적으로 반응하는 물질로 배양된다. 자기 반응 물질, 예를 들어 입자는 세포, 세포 또는 분리하고자하는 세포 집단 상에 존재하는 분자, 예를 들어 표면 마커에, 예를 들어 음성 또는 양성으로 선발하는 것이 바람직하다는 것을 의미, 특이적으로 결합하는 항체와 같은 결합 파트너에 직접 또는 간접적으로 부착된다.

일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특정 결합 부재에 결합된 자기 반응 물질을 포함한다. 자기 분리법에 많이 사용되는 자기 반응 재료가 있다. 적합한 자기 입자는 몰데이(Molday)의 미국특허 제4,452,773호 및 유럽특허 제452342 B호에 개시되어 있으며, 이는 본원에 참고로 인용된다. 오웬(Owen)의 미국특허 제4,795,698호 및 리버티(Liberti) 등의 미국특허 제5,200,084호에 기재된 것과 같은 콜로이드 상 입자는 다른 예이다.

일반적으로 배양은 샘플 내의 세포에 존재하는 경우, 자성 입자 또는 비드에 결합된 항체 또는 결합 파트너 또는 이 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 이차 항체 또는 다른 시약과 같은 분자가 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건 하에서 수행된다.

일부 양상에서, 샘플은 자기장에 놓이며, 자기적으로 반응하는 또는 자화 가능한 입자가 부착된 세포는 자석에 끌려가서 표지가 없는(unlabeled) 세포로부터 분리될 것이다. 긍정적인 선택의 경우, 자석에 끌리는 세포는 유지된다; 음성 선택의 경우 끌리지 않는 세포(표지가 없는 세포)은 유지된다. 일부 구현예에서, 양성 및 음성 선별의 조합은 양성 및 음성 분획이 보유되고 추가 처리되거나 추가 분리 단계에 종속되는 동일한 선별 단계에서 수행된다.

특정 구현예에서, 자기적 응답 입자는 1 차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘에 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 일부 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포-유형 특이적인 2차 항체 또는 다른 결합 파트너(예를 들어 스트렙타빈)-코팅 자성 입자가 첨가된다. 일부 구현예에서, 스트렙타비딘-코팅 자성 입자는 바이오티닐화된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.

일부 구현예에서, 자기적으로 반응하는 입자는 후속 배양, 배양 및/또는 조작되는 세포에 부착된 채로 남게 된다; 일부 구현예에서 입자는 환자에게 투여하기 위해 세포에 부착된 채로 남는다. 일부 구현예에서, 자화가능하거나 또는 자기적으로 반응하는 입자는 세포로부터 제거된다. 세포로부터 자화 가능한 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어 경쟁하는 비 표지된 항쳉 및 자화 가능한 입자 똔느 절단 가능한 리어에 접합된 항체를 포함된다. 일부 구현예에서, 자화 가능한 입자는 생분해성이다.

일부 구현예에서, 친화도-기재 선택은 자기-활성화 세포 분류(MACS)(Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통해 이루어진다. 자기화성화 세포 분류(MACS) 시스템은 자화된 입자가 부착되 세포를 고순도로 선택할 수 있다. 일부 구현예에서, MACS는 비 표적종 및 표적종을 외부 자기장의 적용 후에 순차적으로 용출시키는 모드로 작동한다. 즉 자화된 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 화학종이 용리되는 동안 제 위치에 유지된다. 이어서, 이 첫 번째 용출 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되어 용출되는 것을 방지한 종을 용리 및 회수할 수 있는 방법으로 자유롭게 한다. 일부 구현예에서, 비 표적 세포는 표적화되고 세포의 이종 집단으로부터 고갈된다.

일부 구현예에서, 추출 또는 분리는 세포 준비, 분리, 처리, 항온 배양, 배양 및/또는 방법의 제형 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 장치 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 양상에서, 시스템은 폐쇄, 무균 환경, 예를 들어 에러, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해 이들 단계 각각을 수행하는데 사용된다. 한 실시예에서, 시스템은 국제공개공보 제WO2009/072003호 또는 미국특허출원공보 제20110003380 A1호에 기재된 것과 같은 시스템이다.

일부 구현예에서, 시스템 또는 장치는 자동화된 또는 프로그래밍 가능한 방식으로, 하나 이상의, 예를 들어 모든 분리, 처리, 엔지니어링 및 제형 단계를 수행한다. 일부 양상에서, 시스템 또는 장치는 사용자가 프로세싱, 격리, 엔지니어링 및 제형 단계의 결과를 프로그램, 제어, 평가 및/또는 조정할 수 있게 하는 시스템 및/또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함한다.

일부 양상에서, 분리 및/또는 다른 단계는 ClinMACS 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여, 예를 들어 밀폐된 및 멸균 시스템에서 임상 규모의 세포의 자동화된 분리를 위해 수행된다. 구성 요소로는 통합 마이크로컴퓨터, 자기 분리 장치, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함될 수 있다. 일부 양상에서 통합 컴퓨터는 계측기의 모든 구성요소를 제어하고 표준화된 순서로 반복적인 절차를 수행하도록 시스템에서 지시한다. 일부 양상에서 자기 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 컬럼용 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 배관 세트 전체의 유속을 제어하며 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충액의 제어된 흐름과 세포의 지속적인 정지를 보장한다.

CliniMACS 시스템은 일부 양상에서 멸균 비 발열성 용액으로 공급되는 항체 결합 자성 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후, 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서 세포 준비 백을 튜빙 세트에 연결하고, 버퍼 세트 및 세포수집 백을 연결한다. 튜빙 세트는 프리-컬럼과 분리 컬럼을 포함하여 미리 조립된 무균 튜빙으로 구성되어 있으며 일회용으로만 사용된다. 분리 프로그램을 시작한 후, 상기 시스템은 세포 샘플을 자동으로 분리 컬럼에 적용한다. 표지된 세포는 컬럼 내에 보유되는 반면, 표지되지 않는 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 지답은 표지되지 않고 칼럼에 보유되지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 컬럼에 보유된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 자기장의 제거 후 컬럼으로부터 용리되어 세포수집 백 내에 수집된다.

특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 상기 CliniMACS Prodigy 시스템은 원심 분리에 의한 세포의 자동화된 세척 및 분별을 가능하게 하는 세포 처리 단일체를 갖추고 있다. 상기 CliniMACS Prodigy 시스템에는 소스 세포 생성물의 거시적 층(macroscopic layer)을 식별하여 최적의 세포 분획 종말점을 결정하는 온보드 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어가 포함될 수 있다. 예를 들어 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. 상기 CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 세포 분화 및 팽창, 항원 로딩 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 수행하는 일체형 세포 배양 챔버를 포함할 수 있다. 입력 포트는 멸균 제거 및 매체의 보충을 허용할 수 있으며, 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터할 수 있다[문헌 예를 들어 「Klebanoff et al., J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012)」, 및 「Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012)」 참조].

일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 유동 세포 계측법을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되며, 여기서 다수의 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 세포 집단은 예비 스케일(FACS)-분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 FACS-기반 검출 시스템과 조합된 마이크로 전자 기계 시스템(MEMS) 칩의 사용에 의해 수집 및 농축(또는 고갈)된다[예를 들어 국제공개공보 제WO2010/033140호, 문헌 「Cho et al., Lab Chip 10, 1567-1573 (2010)」; 및 「Godin et al., J Biophoton. 1(5):355-376 (2008)」 참조]. 두 경우 모두 세포를 여러 마커로 분류하여 잘 정의된 T 세포 하위 세트를 고순도로 분리 할 수 있다.

일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 카로 표지되어 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어 분리는 형광 표지된 항체와의 결합에 기초할 수 있다. 예를 들어 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 형광-활성 세포 분류(FACS)을 포함하는 분취용(FACS) 및/또는 미세 전자 기계 시스템(MEMS) 칩, 예를 들어 유동 세포 계측 탐지 시스템과 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 방법은 동시에 여러 마커를 기반으로 긍정적이고 부정적인 선택을 허용한다.

일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 항온 처리 및/또는 조작 전 또는 후에 세포를 동결, 예를 들어 냉동 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속 행동 단계는 과립구 및 어는 정도는 세포 집단 내의 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 세척 단계 후에 냉동 용액에 현탁된다. 임의의 다양한 공지된 동결 용액 및 파라미터가 사용될 수 있다. 일예로 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA) 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 함유하는 PBS를 사용하는 것을 포함한다. 그런 다음 DMSO와 HSA의 최종 농도가 각각 10%와 4%가 되도록 배지로 1 : 1로 희석한다. 이어서, 세포를 일반적으로 분당 1°의 속도로 -80℃로 동결시키고 액체 질소 저장 탱크의 증기 상에 저장한다.

일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작 전에 또는 유전자 조작과 관련하여 배양 및/또는 배양된다. 배양 단계는 배양(culture), 배양(cultivation), 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함 할 수 있다. 배양 및/또는 조작은 배양 용기 또는 세포 배양을 위한 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜빙 세트, 밸브, 바이알, 배양 접시, 백 또는 기타 용기와 같은 배양 용기에서 수행 될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재하에 배양된다. 그러한 조건은 집단 내에서 세포의 증식, 팽창, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고, 및/또는 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 준비하는 것을 포함한다.

조건은 하나 이상의 특정 매질, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 영양제, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예를 들어 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 용해성 수용체, 및 세포를 활성화 시키도록 고안된 임의의 다른 제제를 포함한다.

일부 구현예에서, 자극 조건 또는 작용제는 TCR 복합체의 세포내 시그널링 영역을 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 약제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 양상에서, 상기 약제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포내 시그널링 계통을 작동시키거나 개시시킨다. 이러한 제제는 항체, 예를 들어 TCR 구성요소 및/또는 동시 자극 수용체에 특이적인 것, 예를 들어 비드 및/또는 하나 이상의 사이토카인과 같은 고체 지지체에 결합된 항-CD3, 항-CD28를 포함할 수 있다. 선택적으로 상기 확장 방법은 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 배양 배지에 (예를 들어 적어도 약 0.5ng/ml 농도로) 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극제는 IL-2 및/또는IL-15, 예를 들어 적어도 약 10 유닛/mL의 IL-2 농도를 포함한다.

일부 양상에서, 배양은 리델(Riddell) 등의 미국특허 제6,040,177호, 문헌 「Klebanoff et al., J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012), and/or Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012)」에 기재된 기법에 따라 수행된다.

일부 구현예에서, 상기 T 세포는 비분할 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)와 같은 배양-개시 조성물(culture-initiating composition)에 피더 세포(feeder cell)를 (예를 들어 결과적인 세포 집단이 확대될 초기 집단에서 각 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40 이상의 PBMC 공급 세포를 포함하도록) 첨가하고; 상기 배양물을 (예를 들어 T 세포의 수를 확장시키기에 충분한 시간동안) 배양함으로써 확대시킨다. 일부 양상에서는, 비분할 피더 세포는 감마-조사 PBMC 피더 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC는 세포 분열을 방지하기 위해 약 3000 내지 3600 rad 범위의 감마선으로 조사된다. 일부 양상에서, 피더 세포는 T 세포 집단을 첨가하기 전에 배양 배지에 첨가된다.

일부 양상에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어 적어도 약 25℃, 일반적으로는 약 30℃, 일반적으로는 약 37℃의 온도를 포함한다. 선택적으로, 배양은 피더 세포로서 비분할 EBV-형질 전환 림프구 세포(LCL)를 첨가하는 것을 추가로 포함 할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 rad의 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 양상에서, LCL 피더 세포는 적당한 양으로, 예를 들어 약 10:1의 LCL 피더 세포 대 초기 T 림프구 비율의 양으로 제공된다.

일부 구현예에서, 항원-특이적 CD4⁺ 및/또는 CD8⁺ T 세포와 같은 항원 특이적 T 세포는 항원으로 순수 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극함으로써 수득된다. 예를 들어 항원 특이적 T 세포주 또는 클론은 감염된 피험자로부터 T 세포를 분리하고 시험관내에서 동일한 항원으로 세포를 자극함으로써 사이토메갈로바이러스 항원(cytomegalovirus antigen)에 생성될 수 있다.

C. 유전자 조작을 위한 핵산, 벡터 및 방법

일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 T 세포는 재조합 수용체를 발현하기 위해 유전자 조작된다. 일부 구현예에서, 이러한 조작은 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 분자를 도입함으로써 수행된다. 또한 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 분자 및 이러한 핵산 및/또는 핵산 분자를 함유하는 벡터 또는 작제물도 제공된다.

경우에 따라, 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 인코딩하는 핵산 서열은, 시그널 펩티드를 인코딩하는 시그널 서열을 함유한다. 일부 양상에서, 시그널 서열은 천연 폴리펩티드로부터 유래된 시그널 펩티드를 인코딩할 수 있다. 또 다른 측면에서, 시그널 서열은 이종의 또는 비-천연 시그널 펩티드를 인코딩할 수 있다. 일부 구현예에서, 시그널 펩티드는 막통과 단백질로부터 유래한다. 일부 예에서 시그널 펩티드는 CD8a, CD33, 또는 IgG로부터 유래된다. 시그널 펩티드의 예로는, 예를 들어 SEQ ID NO: 21에 제시된 CD33 시그널 펩티드, SEQ ID NO: 75에 제시된 CD8a 시그널 펩티드, 또는 SEQ ID NO: 76에 제시된 시그널 펩티드 또는 이들의 변형된 변이체를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 분자는 재조합 수용체의 발현을 제어하도록 작동적으로 연결된 적어도 하나의 프로모터를 함유한다. 일부 예에서, 핵산 분자는 재조합 수용체의 발현을 제어하도록 작동적으로 연결된 2개, 3개 또는 그 이상의 프로모터를 함유한다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 적절하다면 그리고 핵산 분자가 DNA- 또는 RNA-기반인지를 고려하여, 핵산 분자가 도입되는 숙주 유형(예를 들어 세균, 진균, 식물 또는 동물)에 특이적인, 전사 및 번역 개시 및 종결 코돈과 같은 조절 서열을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 예를 들어 프로모터, 인핸서, 인트론, 폴리아데닐화 시그널, Kozak 컨센서스 서열, 및 스플라이스 억셉터 또는 공여자와 같은 조절/제어 요소를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 하나 이상의 부가적인 폴리펩티드(들) 및/또는 재조합 수용체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 작동적으로 연결된 비천연 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 프로모터는 RNA pol I, pol II 또는 pol III 프로모터로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 프로모터는 RNA 폴리머라제 II(예를 들어 CMV, SV40 조기 영역 또는 아데노바이러스 주요 후기 프로모터)에 의해 인식된다. 또 다른 구현예에서, 프로모터는 RNA 폴리머라제 III(예를 들어 U6 또는 H1 프로모터)에 의해 인식된다. 일부 구현예에서, 프로모터는 비-바이러스 프로모터 또는 바이러스 프로모터, 예를 들어 시토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터, 및 쥐의 줄기 세포 바이러스의 장말단 반복체(long-terminal repeat)에서 발견되는 프로모터일 수 있다. 다른 공지의 프로모터들도 고려될 수 있다.

일부 구현예에서, 프로모터는 구성적(constitutive) 프로모터이거나 이를 포함한다. 예시적인 구성적 프로모터로는 예를 들어 시미안 바이러스 40 조기 프로모터(SV40), 시토메갈로바이러스 즉각적인-조기 프로모터(CMV), 인간 유비퀴틴 C 프로모터(UBC), 인간 연장 인자 1α 프로모터(EF1α), 마우스 포스포글리세레이트 키나아제 1 프로모터(PGK), 및 CMV 조기 인핸서와 커플링된 치킨 β-액틴 프로모터(CAGG)를 들 수 있다. 일부 구현예에서, 구성적 프로모터는 합성 또는 변형된 프로모터이다. 일부 구현예에서, 프로모터는 골수증식 육종 바이러스 인핸서에 의해 변형된 MoMuLV LTR의 U3 영역을 함유하는 합성 프로모터인 MND 프로모터이거나 또는 이를 포함한다[문헌 「Challita et al. (1995) J. Virol. 69(2):748-755」 참조]. 일부 구현예에서, 프로모터는 조직-특이적 프로모터이다. 또 다른 구현예에서, 프로모터는 바이러스 프로모터이다. 또 다른 구현예에서, 프로모터는 비-바이러스 프로모터이다.

또 다른 구현예에서, 프로모터는 조절된 프로모터(예를 들어 유도성 프로모터)이다. 일부 구현예에서, 프로모터는 유도성 프로모터이거나 또는 억압성(repressible) 프로모터이다. 일부 구현예에서, 프로모터는 Lac 오퍼레이터 서열, 테트라사이클린 오퍼레이터 서열, 갈락토스 오퍼레이터 서열 또는 독시사이클린 오퍼레이터 서열을 포함하거나, 또는 이의 유사체이거나 또는 Lac 리프레서 또는 테트라사이클린 리프레서, 또는 그의 유사체에 의해 결합도거나 인식될 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 조절 요소, 예를 들어 프로모터를 포함하지 않는다.

일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 또는 다른 항원 수용체를 인코딩하는 핵산 분자는, 마커를 인코딩하는 핵산 서열을 더 포함하거나 및/또는 CAR 또는 다른 항원 수용체를 발현하는 세포는 마커, 예를 들어 절단된 EGFR(tEGFR)와 같은, 세포 표면 수용체의 절단된 버젼 등의 수용체를 발현하도록 세포를 조작 또는 형질도입하는 것을 확인하는데 이용될 수 있는, 세포 표면 마커와 같은 예를 들어 대리 마커(surrogate marker)를 인코딩하는 핵산 서열을 더 포함한다.　 일부 구현예에서, 하나 이상의 마커(들)은 형질도입 마커, 대리 마커 및/또는 선택 마커이다.

일부 구현예에서, 마커는 형질도입 마커 또는 대리 마커이다.　형질도입 마커 또는 대리 마커는 핵산 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 분자가 도입된 세포를 검출하는데 이용될 수 있다.　 일부 구현예에서, 형질도입 마커는 세포 변형을 가리키거나 이를 확인할 수 있다. 일부 구현예에서, 대리 마커는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR과 함께 세포 표면에서 공동-별현되도 만들어진다.　 특정 구현예에서, 이러한 대리 마커는 활성을 거의 또는 전혀 갖지 않도록 변형된 표면 단백질이다.　 특정 구현예에서, 대리 마커는 재조합 수용체를 인코딩하는 동일한 핵산 분자 상에 인코딩된다.　 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 서열은 내부 리보솜 유입 부위(IRES)에 의해 선택적으로 분리된, 마커를 인코딩하는 핵산 서열 또는 자기-절단 펩티드 또는 리보솜 스키핑을 일으키는 펩티드, 이를테면 2A 서열, 예를 들어 T2A(예를 들어 SEQ ID NO: 6 또는 167), P2A(예를 들어 SEQ ID NO: 168 또는 169), E2A(예를 들어 SEQ ID NO: 170) 또는 F2A(예를 들어 SEQ ID NO: 172)에 작동적으로 연결된다. 외인성 마커 유전자는 경우에 따라 조작된 세포와 관련하여 이용되어 세포의 검출 또는 선택을 허용하고, 일부 경우에는 세포 자살을 촉진할 수도 있다.

예시적인 대리 마커는 세포 표면 폴리펩티드의 절단된 형태, 이를테면, 비-기능성이고 어떤 시그널 또는 세포 표면 폴리펩티드의 전장 형태에 의해 보통 형질도입되는 시그널을 형질도입하지 않거나 형질도입할 수 없는 절단된 형태 및/또는 내면화(internalizing)하지 않거나 할 수 없는 절단된 형태를 포함할 수 있다. 예시적인 절단된 세포 표면 폴리펩티드로는 성장인자 또는 기타 수용체의 절단된 형태, 이를테면 절단된 인간 표피 성장 인자 수용체 2(tHER2), 절단된 표피 성장 인자 수용체(tEGFR, SEQ ID NO: 7 또는 166에 제시된 예시적인 tEGFR 서열) 또는 전립선-특이적 막 항원(PSMA) 또는 그의 변형된 형태를 들 수 있다. tEGFR은 항체 세툭시맙(Erbitux 등록상표) 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체에 의해 인식되는 에피토프 또는, tEGFR 작제물 및 인코딩된 외인성 단백질에 의해 조작된 세포를 동정 또는 선택하거나 및/또는 인코딩된 외인성 단백질을 발현하는 세포를 제거 또는 분리하는데 이용가능한 결합 분자를 함유할 수 있다[미국특허 제8,802,374호 및 문헌 「Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434」 참조]. 일부 양상에서, 마커, 예를 들어 대리 마커는 CD34, NGFR, CD19 또는 절단된 CD19, 예를 들어 절단된 비-인간 CD19, 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어 tEGFR)의 전부 또는 일부(예를 들어 절단된 형태)를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 녹색 형광 단백질(GFP), 증강된 녹색 형광 단백질(EGFP), 예를 들어 수퍼-폴드GFP(sfGFP), 적색 형광 단백질(RFP)과 같은 형광 단백질, 예를 들어 tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2, 시안 형광 단백질(CFP), 청색 녹색 형광 단백질(BFP), 증강된 청색 형광 단백질(EBFP), 및 황색 형광 단백질(YFP)과 같은 형광 단백질 및 상기 형광 단백질의 종 변이체, 단량체 변이체, 및 코돈-최적화되거나 및/또는 증강된 변이체를 비롯한, 변이체들이거나 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 루시퍼라제, 대장균 유래의 lacZ 유전자, 알칼라인 포스파타제, 분비된 배아 알칼리성 포스파타제(SEAP), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(CAT)이거나 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자에는 루시퍼라제(luc), β-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(CAT), β-글루쿠로니다제(GUS) 또는 그의 변이체가 포함된다.

일부 구현예에서, 마커는 선택 마커이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 외인성 제제 또는 약물에 내성을 부여하는 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 항생제 내성 유전자로서 포유동물 세포에 대해 항생제 내성을 부여한다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 푸로마이신 내성 유전자, 하이그로 마이신 내성 유전자, 블라스티시딘(Blasticidin) 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 제네티신 내성 유전자 또는 제오신 내성 유전자 또는 이의 변형된 형태이거나 또는 이를 포함한다.

일부 양상에서, 마커, 예를 들어 대리 마커는, CD34의 전부 또는 일부(예를 들어 절단된 형태), NGFR, 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어 tEGFR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커를 인코딩하는 핵산은 예를 들어 T2A와 같은 절단가능한 링커 서열 등의 링커 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결된다. 예를 들어 마커, 및 선택적으로 링커 서열은 국제공개공보 제WO2014/031687호에 개시된 임의의 것일 수 있다. 예를 들어 마커는 선택적으로, T2A 절단가능한 링커 서열과 같은, 링커 서열에 연결된 절단된 EGFR(tEGFR)일 수 있다. 절단된 EGFR(예를 들어 tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 7 또는 166에 제시된 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 7 또는 166에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 T2A 링커 서열은 SEQ ID NO: 6 또는 167에 제시된 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 6 또는 167에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 마커는 분자, 예를 들어 T 세포 상에서 천연적으로 발견되지 않거나 혹은 T 세포의 표면에서 천연적으로 발견되지 않는 세포 표면 단백질, 또는 그의 부분이다. 일부 구현예에서, 상기 분자는 비-자기 분자, 예를 들어 비-자기 단백질, 즉 세포가 입양될 숙주의 면역 시스템에 의해서 "자기(self)"로서 인식되지 않는 것이다.

일부 구현예에서, 마커는 치료적 기능이 없고/없거나 유전자 조작을 위한, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 마커로서 사용되는 것과 다른 효과를 생성하지 않는다. 다른 구현예에서, 마커는 치료적 분자 혹은 일부 원하는 효과를 발휘하는 분자, 예를 들어 생체내에서 만나게 되는 세포에 대한 리간드, 예를 들어 이양시 세포의 반응을 증강시키고/시키거나 약화시키고 리간드와 조우하는 동시 자극 또는 면역 체크포인트 분자일 수 있다.

일부 구현예에서, 단일 프로모터는 단일 오픈 리딩 프레임(ORF)에서 자기-분해 펩티드를 인코딩하는 서열(예를 들어 2A 서열) 또는 프로테아제 인식 위치(예를 들어 퓨린)에 의하여 서로 분리되는 2 개 또는 3 개의 유전자를 함유하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 따라서 ORF는 하나의 폴리 펩티드를 인코딩하며, 이는 번역 도중 (2A의 경우) 또는 번역된 후에 개별 단백질들로 가공된다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩티드는 리보솜으로 하여금 2A 요소의 C-말단에서 펩티드 결합의 건너뛰기(리보솜 스킵핑)를 일으켜, 2A 서열의 말단과 다음 펩티드 하류 사이의 분리를 유도할 수 있다[예를 들어 문헌 「de Felipe Genetic Vaccines and Ther 2:13 (2004)」 및 「deFelipe et alTraffic 5:616-626 (2004)」 참조]. 다수의 2A 요소가 알려져 있다. 본 발명에 개시되는 방법 및 핵산에 사용될 수 있는 2A 서열의 예시는, 제한없이, 미국특허공개공보 제2007/0116690호에 기재된 것과 같은 구제역 바이러스(F2A), 마(馬) 비염 A 바이러스(equinerhinitis A virus)(E2A), 토시아 어시그나 바이러스(Thosea asigna virus)(T2A) 및 돼지 테스코바이러스-1(P2A)이다.

재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 분자를 세포에 도입하는 것은 몇 가지 공지 벡터를 이용하여 수행될 수 있다. 이러한 벡터에는 렌티바이러스 및 감마레트로바이러스 시스템을 비롯한 바이러스 및 비-바이러스 시스템, 트랜스포존-기반 시스템 이를테면 피기백(PiggyBac) 또는 슬리핑 뷰티(Sleeping Beauty)-기반 유전자 전달 시스템이 포함된다. 예시적인 방법으로는 바이러스, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 트랜스포존 및 전기천공(electroporation)을 경유하는 것을 포함하여, 수용체를 인코딩하는 핵산을 전달하기 위한 방법들을 들 수 있다.

일부 구현예에서, 유전자 전달은 우선 세포를 자극하는 것, 이를테면 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정되는 바와 같이, 이를테면 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 세포를 조합시킨 다음, 임상 적용에 충분한 수가될 때까지 배양체에서 활성화된 세포를 형질도입 및 팽창시킴으로써 달성된다.

일부 구현예에서, 유전자 전달 전 또는 전달 동안, 본 명세서에 설명된 임의의 것을 비롯하여, 감마 세크레타제 억제제의 존재하에 세포를 인큐베이션 또는 배양한다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 세포 제작 과정, 예를 들어 CAR-T 세포의 조작 과정 중에 첨가된다. 일부 양상에서, 감마 세크레타제 억제제의 존재는 생성된 세포 집단의 품질을 향상시킬 수 있다. 일부 양상에서, 감마 세크레타제 억제제는 세포의 증식 또는 팽창을 증가시키거나 또는 하나 이상의 시그널링 경로를 변경할 수 있음으로 해서 실질적으로 팽창 및/또는 이펙터 기능을 나타냄에도 불구하고, 덜-분화되거나 덜 활성화된 표면 표현형을 갖는 세포를 야기할 수 있다.

일부 상황에서, 자극 인자(예를 들어 림포카인 또는 사이토카인)의 과발현은 대상체에게 독성일 수 있다. 따라서, 일부 상황에서, 조작된 세포는, 예를 들어 양자 면역요법에서 투여시, 생체 내에서 세포를 음성 선택에 대하여 감수성이 되도록 하는 유전자 분절을 포함한다. 예를 들어 일부 양상에서, 세포는 그들이 투여되는 대상체의 생체 내 조건의 변화의 결과로서 제거될 수 있도록 조작된다. 음성 선택 가능한 표현형은 투여되는 제제, 예를 들면 화합물에 감수성을 부여하는 유전자의 삽입으로부터 결과하는 것일 수 있다. 음성 선택 가능한 유전자는 간시클로비어 감수성을 부여하는 헤르페스 심플렉스 바이러스 타입 I 티미딘 키나아제(HSV-1 TK) 유전자(Wigler et al., Cell II: 223, 1977); 세포성 히포크산틴 포스포리보실전달효소(HPRT) 유전자, 박테리아 시토신 디아미나아제(Mullen et al., Proc Natl Acad Sci USA, 89: 33 (1992))를 포함한다.

일부 구현예에서, 재조합 핵산은, 예를 들어 유인원 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스(AAV)로부터 유래한 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여, 세포내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 감마-레트로바이러스 벡터를 사용하여, T 세포내로 전달된다[예를 들어 문헌 「Koste et al(2014) Gene Therapy 2014 Apr 3 doi: 101038/gt201425」; 「Carlens et al(2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46」; 「Alonso-Camino et al(2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93」; 「Park et al., Trends Biotechnol 2011 November 29(11): 550-557」 참조].

일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터는 긴 말단 반복부 서열(LTR), 예를 들어 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MoMLV), 골수 증식성 육종 바이러스(MPSV), 뮤린 배아 줄기세포 바이러스(MESV), 뮤린 줄기세포 바이러스(MSCV), 비장 병소 형성 바이러스(SFFV), 또는 아데노-연관 바이러스(AAV)로부터 유래한 레트로바이러스 벡터를 가질 수 있다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래한 것을 포함한다. 레트로바이러스는 통상적으로 양쪽성이며, 이는 이들이 인간을 포함하는 여러 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미한다. 하나의 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 다수의 예시적 레트로바이러스 시스템이 기재된 바 있다[예를 들어 미국 특허 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; 문헌 「Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1 :5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; and Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3 : :102-109」 참조].

렌티바이러스 형질도입 방법은 공지되어 있다. 예시적 방법은, 예를 들어 문헌 「Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101 : :1637--1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; and Cavalieri et al. (2003) Blood.　 102(2): 497-505」에 기재되어 있다.

일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전기천공을 통해 T 세포내로 전달된다[예를 들어 문헌 「Chicaybam et al., (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 and Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437」 참조]. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 트랜스포지션(transposition)를 통해 T 세포내로 전달된다[예를 들어 문헌 「Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; and Huang et al., (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126」 참조]. 면역 세포에서 유전 물질을 도입하여, 발현시키는 다른 방법으로는 인산칼륨 형질감염[예를 들어 존 윌리 앤드 손(미국 뉴욕주 뉴욕 소재)의 「Current Protocols in Molecular Biology」에 기재된 바와 같음], 원형질체 융합, 양이온성 리포솜 매개 형질감염; 텅스텐 입자 촉진 미립자 충격[문헌 「Johnston, Nature, 346: 776-777(1990)」]; 및 스트론튬 인산염 DNA 공-침전[문헌 「Brash et al., Mol Cell Biol, 7: 2031-2034(1987)」 참조]을 포함한다.

재조합 산물을 인코딩하는 핵산의 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터에는, 예를 들어 국제공개공보 제WO2014/055668호 및 미국특허 제7,446,190호에 기재된 것들이 있다.

일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 T 세포는 증식 도중 또는 증식 후에 예를 들어 T 세포수용체(TCR) 또는 키메라 항원 수용체(CAR)로 형질감염될 수 있다. 원하는 수용체 유전자의 도입을 위한 이러한 형질감염은 예를 들어 임의의 적합한 레트로바이러스 벡터로 수행될 수 있다. 그 후, 유전적으로 변형된 세포 집단은 초기 자극(예를 들어 CD3/CD28 자극)으로부터 유리될 수 있고, 이어서, 예를 들어 새로 도입된 수용체를 통하여 제 2 유형의 자극으로 자극될 수 있다. 이 제 2 유형의 자극은 펩티드/MHC 분자 형태의 항원 자극, 유전적으로 도입된 수용체의 동족(가교성) 리간드(예를 들어 CAR의 천연 리간드) 또는 (예를 들어 수용체 내 불변 영역을 인식함으로써) 새로운 수용체의 구조 내에 직접 결합하는 기타 리간드(항체 등)를 포함할 수 있다. 예를 들어 문헌 「Cheadle et al., "Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy" Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66 or Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014).」를 참조한다.

일부 경우에, 세포, 예를 들어 T 세포가 활성화되는 것을 요하지 않는 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 일부 경우에서, 세포는 활성화 전에 선택 및/또는 형질도입될 수 있다. 따라서, 세포는, 세포의 배양 전에 또는 후에, 그리고 경우에 따라서는 상기 배양과 동시에 적어도 상기 배양의 일부분 도중에 조작될 수 있다.

일부 양상에서, 세포는 사이토카인 또는 다른 인자의 발현이 촉진되도록 추가로 조작된다. 특히, 추가적인 핵산, 예를 들어 도입을 위한 유전자는, 예를 들어 전달되는 세포의 생존 및/또는 기능을 촉진시킴으로써, 요법의 효능을 개선시키는 것; 예를 들어 생체내 생존 또는 국소화를 평가하기 위한 세포의 선택및/또는 평가를 위한 유전자 마커를 제공하는 유전자; 예를 들어 문헌 「Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol,., 11 :6 (1991); and Riddell et al., Human Gene Therapy 3 :319-338 (1992)」에 기재된 바와 같이, 생체내에서 음성 선택에 민감성인 세포를 제조함으로써, 안전성을 개선하기 위한 유전자이며; 또한 우성 양성 선택 가능 마커와 음성 선택 가능 마커의 융합으로부터 유래한 2 기능성 선택 가능 융합 유전자의 사용을 기술하고 있는 루프턴(Lupton) 등의 국제출출원 제PCT/US91/08442호 및 제PCT/US94/05601호의 공보를 참조한다. 예를 들어 리델(Riddell) 등의 미국특허 제6,040,177호의 컬럼 14 내지 17을 참조한다.

III. 예시적인 치료 결과 및 이를 평가하는 방법

본 발명에 제공된 방법, 조성물, 조합물, 키트 및 용도의 일부 구현예에서, 제공된 조합 요법은 본원에서 기술하는 바와 같이 요법 또는 치료와 관련된 하나 이상의 임의의 파라미터와 연관된 특성과 같은, 하나 이상의 치료 결과를 일으킨다. 부 구현예에서, 상기 방법은 T 세포, 예를 들어 T 세포 기반 치료를 위해 투여된 T 세포의 노출, 지속성 및 증식의 평가를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 제공되는 방법에서 세포, 예를 들어 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위하여 투여된 세포의 노출, 또는 증식 연장 및/또는 지속성, 및/또는 그 세포의 세포 표현형이나 기능적 활성의 변화는 상기 T 세포의 특징을 시험관 내 또는 생체 외로 평가함으로써 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 그러한 평가는 본 발명에서 제공되는 조합 요법제를 투여하기 전 또는 후에, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되는 T 세포의 기능을 결정 또는 확인하는데 이용될 수 있다.

일부 구체예에서, 조합 요법은 조합 요법으로 치료할 대상체를 동정하기 위한 스크리닝 단계 및/또는 조합 요법을 지속하는 단계, 및/또는 치료 결과를 평가하기 위한 단계 및/또는 치료 결과를 모니터링하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료에 적합한 대상체는 저 표면 발현의 BCMA를 갖는다. 일부 구현예에서, 저 표면 발현의 BCMA는 건강한 집단의 대상체에서 평균 표면 BCMA 발현에 대한 대상체의 BCMA 발현을 비교함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 상기 집단 평균 보다 낮은 BCMA 발현 수준이다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은, 건강한 집단의 대상체에서 평균 BCMA 발현 수준 보다 적어도 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250배 또는 그 미만이거나, 또는 상기 평균 BCMA 발현 수준의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 미만, 또는 약 그 미만인 BCMA 발현 수준이다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 상기 집단의 중앙값(median) 미만인 BCMA 발현 수준이다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 , 건강한 집단의 대상체에서 중앙값 BCMA 발현 수준 보다 적어도 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250배 또는 그 미만이거나, 또는 상기 중앙값 BCMA 발현 수준의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 미만, 또는 약 그 미만인 BCMA 발현 수준이다. 일부 구현예에서, 저 표면 발현의 BCMA는 환자 집단(예를 들어 다발성 골수종 환자 집단)에서 평균 표면 BCMA 발현에 대한 대상체의 BCMA 발현을 비교함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 상기 환자 집단 평균 보다 낮은 BCMA 발현 수준이다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 환자 집단(예를 들어 다발성 골수종 환자 집단)에서 평균 표면 BCMA 발현 수준 보다 적어도 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250배 또는 그 미만이거나, 또는 상기 평균 BCMA 발현 수준의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 미만, 또는 약 그 미만인 BCMA 발현 수준이다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 환자 집단(예를 들어 다발성 골수종 환자 집단)에서 중앙값 표면 BCMA 발현 수준에 대한 대상체의 BCMA 발현을 비교함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 상기 환자 집단 중앙값 보다 낮은 BCMA 발현 수준이다. 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 환자 집단(예를 들어 다발성 골수종 환자 집단)에서 중앙값 표면 BCMA 발현 수준 보다 적어도 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 100, 150, 200, 250배 또는 그 미만이거나, 또는 상기 중앙값 BCMA 발현 수준의 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%,, 또는 그 미만, 또는 약 그 미만인 BCMA 발현 수준이다. 일부 구현예에서, 대상체에서 저 BCMA 발현의 결정은 2번 이상의 상이한 시점(예를 들어 진단 전 및 진단 후, 진단시 및 진단 후 시점, 치료 전 및 치료 후) 대상체의 BCMA 발현을 비교함으로써 행해질 수 있다. 상기 방법에 따른 일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 조기 시점(earlier time point)과 비교하여 약 또는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그를 초과하게 BCMA 발현을 감소시키는 것으로 고려된다.

일부 구현예에서, 저 BCMA 발현은 역치 수준 미만의 BCMA 발현인 것으로 고려된다. 일부 구현예에서, 상기 역치 수준은 건강한 대상체 집단으로부터 확인된 평균 또는 중앙값 BCMA 발현 수준 미만인 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그보다 많거나, 약 상기 수치값이거나, 적어도 그 수치값이다. 일부 구현예에서, 상기 역치 수준은 환자 집단(예를 들어 다발성 골수종 환자)로부터 확인된 평균 또는 중앙값 BCMA 발현 수준 미만인 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그보다 많거나, 약 상기 수치값이거나, 적어도 그 수치값이다. 일부 구현예에서, 상기 역치 수준은 대상체로부터 확인된 평균 또는 중앙값 BCMA 발현 수준 미만인 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그보다 많거나, 약 상기 수치값이거나, 적어도 그 수치값이다.

일부 구현예에서, 치료 결과의 평가 단계는 치료를 평가하고/하거나 모니터링하는 단계 및/또는 요법 및/또는 반복 요법의 추가 또는 잔여 단계의 실시를 위한 대상체를 동정하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 본 발명에 제공된 조합 요법의 용량, 빈도, 기간, 시기 및/또는 순서를 결정하는데 이용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명에 설명된 임의의 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는, 제공된 조합 요법, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포), 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여의 하나 이상의 단계의 실시 전, 실시 도중, 그 경과 도중 또는 실시 후에 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 평가는 제공된 임의의 방법의 실시 전, 실시 도중, 그 경과 도중 또는 실시 후에 행해진다. 일부 구현예에서, 평가는 본 발명에 제공된 방법의 실시 전에 수행된다. 일부 구현예에서, 평가는 본 발명에 제공된 방법의 하나 이상의 단계를 실시한 후에 수행된다. 일부 구현예에서, 평가는 제공된 조합 요법의 하나 이상의 단계, 예를 들어 조합 요법을 투여받기에 적합하거나 및/또는 민감한 환자를 스크리닝 및 동정하기 위한 단계의 수행에 앞서 실시된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 치료 효능을 결정하거나 및/또는 치료를 지속할지 반복할지를 결정하거나 및/또는 조합 요법의 나머지 단계들을 실시할지를 결정하기 위한 것과 같이, 중간 또는 최종 치료 결과를 평가할 목적으로, 제공된 조합 요법의 하나 이상의 단계의 실시 전, 실시 도중, 그 경과 도중 또는 실시 후에 평가를 수행한다.

일부 구현예에서, 치료 결과는 개선된 면역 기능, 예를 들어 세포 기반 요법에서 투여된 T 세포의 면역 기능 및/또는 체내 내인성 T 세포의 면역 기능을 포함한다. 일부 구현예에서, 예시적인 치료 결과에는 증강된 T 세포 증식, 증강된 T 세포 기능성 활성, 면역 세포 표현형 마커 발현의 변화, 예를 들어 대상체에 투여된, 조작된 T 세포, 예를 들어 CAR-T 세포와 관련된 특징들이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 예시적인 치료 결과에는 감소된 질환 부담, 예를 들어 종양 부담, 개선된 임상 결과 및/또는 증강된 치료 효능이 포함된다.

일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 세포 기반 요법에서 투여된 T 세포의 생존 및/또는 기능을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 사이토카인 또는 성장 인자의 수준을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 질환 부담 및/또는 개선의 평가, 예를 들어 종양 부담 및/또는 임상 결과를 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가 중 어느 것이든 평가 방법 및/또는 본 발명에 설명된 분석법 및 또는 기술분야에 공지인 것을 포함할 수 있으며, 예를 들어 조합 요법의 하나 이상의 단계들의 실시 전, 실시 도중, 실시 경과 도중 또는 실시 후에, 1회 이상 수행될 수 있다. 본 발명에 제공된 일부 구현예에들에서 평가될 수 있는, 치료 결과와 관련된 예시적인 파라미터 세트들에는, 말초 혈액 면역 세포 집단 프로파일 및/또는 종양 부담이 포함된다.

일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 대상체에서 세포 요법의 효능에 영향을 미칠 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법에서 감마 세크레타제 억제제과 함께 용량의 세포를 투여한 후 대상체에서의 재조합 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포의 지속성, 팽창 및/또는 존재는 감마 세크레타제 억제제의 투여되지 않은 방법에서 달성된 것보다 크다. 본 발명에 제공된 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 일부 구현예에서, 파라미터의 평가는 대상체에서 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 팽창 및/또는 지속성을, 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 대상체에 면역요법을 실시하는 방법과 비교하여 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 대상체에게 T 세포 요법제가 투여되는 방법에 비해 대상체에서 증가되거나 연장된 팽창 및/또는 지속성을 나타내는 투여된 T 세포를 결과시킨다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량이 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 대상체에게 투여되는 방법에 비해, 대상체에 있어서 질환 부담, 예를 들어 종양 부담을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 대상체에게 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량이 투여되는 방법에 비해 대상체에 있어서 골수 모구(blast marrow)를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 대상체에게 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량이 투여되는 방법에 비해, 예를 들어 객관적 반응률(ORR), 무진행 생존(PFS) 및 전체 생존(OS)과 같은 임상 결과의 개선을 야기한다.

일부 구현예에서, 대상체는 조합 요법의 하나 이상의 단계들의 실시에 앞서 스크리닝될 수 있다. 예를 들어 대상체는 조합 요법 투여에 대한 적합성, 반응성 및/또는 감수성을 결정하기 위해 조합 요법 투여에 앞서, 질환 부담 예를 들어 종양 부담 및/또는 질환의 특징에 대해 스크리닝될 수 있다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 본 발명에 제공된 조합 요법의 용량 빈도, 기간, 시기 및/또는 순서를 결정하는데 이용될 수 있다.

일부 구현예에서, 조합 요법의 나머지 단계를 실시하고 및/또는 치료법의 효능을 모니터링하기 위한 대상체를 결정 및 동정하기 위해, 조합 요법의 하나 이상의 단계를 실시한 후에 대상체를 스크리닝할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여된 T 세포의 수, 수준 또는 양 및/또는 투여된 T 세포의 증식 및/또는 활성은 감마 세크레타제 억제제의 투여 전 및/또는 투여 후에 평가된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 대상체의 혈액 중 조작된 세포의 농도 또는 수가 (i) 마이크로리터 당 적어도 약 10개의 조작된 세포이거나, (ii) 말초혈액 단핵 세포(PBMC)의 총 수의 적어도 20%, 30%, 40% 또는 50%이거나, (iii) 적어도 또는 적어도 약 1 x 10⁵개의 조작된 세포를 나타내거나; 또는 (iv) 마이크로그램 DNA 당 재조합 수용체-인코딩 DNA가 적어도 5,000 카피이거나; 및/또는 (a)에서 투여 개시로부터 제90일에, CAR-발현 세포가 대상체의 혈액 또는 혈청에서 검출가능한 때 및/또는 (a)에서 투여 개시로부터 제90일에,대상체의 혈액이 마이크로리터 당 적어도 20% CAR-발현 세포, 적어도 10 CAR-발현 세포 또는 적어도 1 x 10⁴개의 CAR-발현 세포를 함유할 때까지 투여된다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제는 총 종양 부피의 적어도 50% 이상이 감소되는 바와 같은 치료에 대한 임상적 이점이 있으며, 6개월 또는 1년 또는 그 이상의 기간 동안 무진행 생존 또는 무질환 생존을 나타내거나, 검출가능한 종양이 사라지는 완전 반응(CR)을 나타낼 때까지 투여된다.

일부 구현예에서, 어떤 파라미터 또는 결과의 수준, 값 또는 측정치의, 상이한 평가 시점, 상이한 질환 상태, 레런스 포인트 및/또는 상이한 대상체에서의 동일 파라미터 또는 결과의 수준, 값 또는 측정치와 비교된, 변화 및/또는 변경, 예를 들어 증가, 상승, 감소 또는 저감을 구하거나 평가한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여 전 또는 투여 후, 상이한 조건 하에서 동일한 파라미터에 비해, 샘플 내 조작된 T 세포의 수와 같은 특정 파라미터의 증가 또는 감소와 같은 폴드 변화가 구해질 수 있다. 일부 구현예에서, 2 가지 이상의 파라미터들의 수준, 값 또는 측정치를 구하여 상대적인 수준을 비교한다. 일부 구현예에서, 파라미터의 결정된 수준, 값 또는 측정치는 대조군 샘플 또는 미처리 샘플로부터의 수준, 값 또는 측정치와 비교된다. 일부 구현예에서, 파라미터의 결정된 수준, 값 또는 측정치는 동일한 대상체의 샘플, 그러나 상이한 시점에서의 수준과 비교된다. 개별 파라미터의 정량화에서 얻어진 값들은 예를 들어 다변량 분석을 이용하여 파라미터의 수준, 값 또는 측정치에 대해 산술 또는 논리 연산을 형성함으로써 질환 평가 목적으로 조합될 수 있다. 일부 구현예에서, 2 가지 이상의 특정 파라미터의 비율이 계산될 수 있다.

A. T 세포 노출, 지속성 및 증식

일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가 및/또는 치료 결과 모니터링에 대해 평가될 수 있는 파라미터를 포함하는 요법 또는 치료 결과와 관련된 파라미터는 T 세포 예를 들어 T 세포 기반 요법으로 투여되는 T 세포의 노출, 지속성 및 증식을 평가하는 것이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 제공된 방법에서 예를 들어 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 세포와 같은 세포의 세포 표현형 또는 기능성 활성의 변화 및/또는 세포의 증가된 노출, 또는 연장된 팽창 및/또는 지속성은, 시험관내 또는 생체외에서 T 세포의 특징들을 평가함으로써 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 분석법은 본 발명에 제공된 조합 요법의 하나 이상의 단계들을 실시하기 전 또는 후에, 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되는 T 세포의 기능을 결정하거나 확인하기 위해 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 세포에 대한 대상체의 노출을, 예를 들어 경시적인 그의 팽창 및/또는 지속성을 촉진함으로써 촉진하도록 설계된다. 일부 구현예에서, T 세포 요법은 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 대상체에게 T 세포 요법이 실시되는 방법에 비해 대상체에서 증가되거나 연장된 팽창 및/또는 지속성을 나타낸다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 투여된 세포에 대한 대상체의 노출을 증가시키거나(예를 들어 경시적으로 세포수가 증가됨) 및/또는 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법의 효능 및 치료 결과를 개선시킨다. 일부 양상에서, 상기 방법은 재조합 수용체를 발현하는 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포에 대해 더 많이, 및/또는 더 길게 노출된다는 점에서, 다른 방법에 비해 치료 결과를 개선시킨다. 이러한 결과는 종양 부담이 심한 개체에서조차, 환자 생존 및 관해를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 T 세포 단독이 투여된 경우에 비해 대상체에서 예를 들어 T 세포 기반 요법으로 투여된 T 세포와 같은 세포에 대한 노출의 최대치, 총합 및/또는 기간을 증가시킬 수 있다. 일부 양상에서, 높은 질환 부담(및 그에 따라 더 많은 양의 항원) 및/또는 보다 공격적이거나 내성인 암의 맥락에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는, 세포의 팽창 및/또는 지속성을 막을 수 있는 면역억압, 아네르기 및/또는 소진을 결과시킬 수 있는 동일 맥락에서의 감마 세크레타제 억제제의 부재하에 T 세포만을 단독으로 투여한 경우에 비해, 치료 효능을 증강시킨다.

일부 구현예에서, T 세포의 투여 후 및, 감마 세크레타제 억제제의 투여 전, 도중 및/또는 그 후에, 대상체에서 재조합 수용체를 발현하는 세포(예를 들어 T 세포 기반 요법을 위하여 투여된 CAR-발현 세포)의 존재 및/또는 양이 탐지된다. 일부 양상에서, 정량적 PCR(qPCR)은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 장기 또는 조직 샘플(예를 들어 질환 위치, 예를 들어 종양 샘플)에서 재조합 수용체를 발현하는 세포(예를 들어 T 세포 기반 요법에서 투여되는 CAR-발현 세포)의 양을 평가하는데 사용된다. 일부 양상에서, 지속성은 DNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 DNA 또는 플라스미드의 카피 수, 또는 샘플, 예를 들어 혈액 또는 혈청의 마이크로리터당 또는 샘플의 마이크로리터당 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC) 또는 백혈구 또는 T 세포의 총 수당 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포의 수로서 정량화된다.

일부 구현예에서, 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여로부터 4, 14, 15, 27 또는 28일 후에 또는 적어도 그 때 대상체에서 탐지된다. 일부 양상에서, 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여로부터 2, 4, 또는 6 주 후에 또는 적어도 그 때, 또는 3, 6, 12, 18, 24, 30 또는 36개월 후에 또는 적어도 그 때, 또는 1, 2, 3, 4, 5년, 또는 그 이상 후에 또는 적어도 그 때 탐지된다.

일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 후, 상기 방법에 의한 대상체에서 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 세포)의 지속성은, 감마 세크레타제 억제제의 부재 하에, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포를 투여하는 것과 같이 면역요법 단독을 실시하는 것과 관련된 대체 방법에 의해 달성되는 것보다 더 크다.

증식 및/또는 지속성의 표지가 되는 노출, 예를 들어 세포수, 예를 들어 T 세포 요법을 위하여 투여된 T 세포의 수는 상기 대상체가 노출되는 세포의 최대 수, 검출 가능한 세포의 지속 시간 또는 특정 수 또는 백분율 이상의 세포, 시간에 따른 세포수에 대한 곡선하영역, 및/또는 그들의 조합 및 그들의 표지자의 관점에서 기술될 수 있다. 이러한 결과는 공지의 방법을 사용하여 평가될 수 있는데, 예를 들어 특정 샘플, 예를 들어 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서 핵산 또는 DNA의 총량과 비교하여 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 카피 수를 검출하는 qPCR 및/또는 상기 수용체들에 특이적인 항체를 사용하여 일반적으로 상기 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유세포 분석이다. 세포-기반 분석은 또한 기능성 세포의 수 또는 백분율을 검출하는데 사용될 수 있는데, 상기 기능성 세포는 예를 들어 질환 또는 장애 상태의 세포와 결합 및/또는 그를 중화 및/또는 그에 대한 반응, 예를 들어 세포독성 반응을 유도하거나 상기 수용체에 의하여 인식되는 항원을 발현할 수 있는 세포이다.

일부 양상에서, 대상체의 상기 세포에 대한 노출 증가는 세포의 증식 증가를 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체 발현 세포, 예를 들면, CAR-발현 세포는, T-세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 후에 대상체에서 팽창한다. 일부 양상에서, 이 방법은 감마 세크레타제 억제제의 투여 없이, T-세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포를 투여하는 것과 관련된, 다른 방법에 비해, 더 큰 정도로 세포 팽창을 일으킨다.

일부 양상에서, 일부 양상에서, 예를 들어 부위(예를 들어 대상체의 조직, 장기, 덩어리 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분)을 파괴하는 방법은, 예를 들어 유세포 분석에 의하여 측정되는 바, 투여된 세포의 높은 생체 내 증식이라는 결과를 낳는다. 일부 양상에서, 피크 세포의 분율이 높게 검출된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 또는 질환-위치 또는 그들의 백혈구 분획, 예를 들어 PBMC 분획 또는 T 세포 분획 중의 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 후 피크 또는 최대 수준에서, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%의 세포가 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현한다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 다른 체액 또는 기관 또는 조직에서 DNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR를 인코딩하는 핵산 카피 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10,000 또는 15,000 이상, 또는 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC)의 총 수, 단핵구 세포의 총 수, T 세포의 총 수 또는 총 마이크로리터 수당 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 또는 0.9 이상의 최대 농도라는 결과를 낳는다. 일부 구현예에서, 상기 수용체를 발현하는 세포는, 상기 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시 다음 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48, 또는 52 주 동안, 또는 그러한 투여 다음 1, 2, 3, 4, 5 년 동안 또는 그 이상, 대상체의 혈액 중 총 PBMC의 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60% 이상으로 검출되고, 및/또는 그러한 수준으로 검출된다.

일부 양상에서, 상기 방법은, 대상체의 예를 들어 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서, DNA 마이크로그램당 상기 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 핵산 카피 수에 있어서 2배 이상, 4배 이상, 10배 이상 또는 20배 이상 증가라는 결과를 낳는다.

일부 구현예에서, 상기 수용체를 발현하는 세포는 대상체의 예를 들어 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서, 예를 들어 특정 방법, 예를 들어 qPCR 또는 유세포 분석-기반 검출 방법에 의하여, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음, 또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 후, 적어도 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60 일 또는 그 이상의 일수 동안, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 다음 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 주 또는 그 이상의 주수 동안 검출된다.

일부 양상에서, 약 1 x 10², 약 1 x 10³, 약 1 x 10⁴, 약 1 x 10⁵, 또는 약 1 x 10⁶또는 약 5 x 10⁶ 또는 약 1 x 10⁷ 또는 약 5 x 10⁷ 또는 약 1 x 10⁸ 개 이상의 재조합 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포 및/또는 마이크로리터당 적어도 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 또는 500, 또는 1000개 수용체-발현 세포가 대상체에서, 또는 그의 유액, 혈장, 혈청, 조직 또는 구획에서, 예를 들어 그의 혈액, 예를 들어 말초 혈액, 또는 질환 위치, 예를 들어 종양 내에서 검출 가능하거나 존재한다. 일부 구현예에서, 이러한 세포수 또는 농도는, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음, 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 다음 적어도 약 20 일간, 적어도 약 40 일간, 또는 적어도 약 60 일간, 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월간, 또는 적어도 2 또는 3년간 대상체에서 검출 가능하다. 이러한 세포수는 유세포 분석-기반의 또는 정량적 PCR-기반의 방법에 의하여 검출되고 공지의 방법을 이용하여 총 세포수가 외삽될 수 있다. 예를 들어 문헌 「Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177), Park et al., Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828」을 참조한다.

일부 양상에서, 예를 들어 말초 혈액 또는 골수 또는 다른 구획에서 면역조직화학, PCR 및/또는 유세포 분석에 의하여 측정되는, 100개 세포당 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 카피 수, 예를 들어 벡터 카피 수는, 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 다음 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 5 주, 또는 적어도 약 6 주에, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 9, 10, 11, 또는 12개월에 또는 적어도 2 또는 3년에 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1 또는 적어도 10이다. 일부 구현예에서, 게놈 CNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 벡터의 카피 수는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포, 또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 다음 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 또는 적어도 약 4 주에 또는 그러한 투여 다음 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월 또는 적어도 2 또는 3년에, 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000 또는 적어도 10000 또는 적어도 15000 또는 적어도 20000이다.

일부 양상에서, 세포에 의하여 발현되는 수용체, 예를 들어 CAR는 대상체, 그의 혈장, 혈청, 조직 및/또는 질환 위치, 예를 들어 종양 위치에서의 정량적 PCR(qPCR) 또는 유세포 분석법에 의해, 상기 세포의 투여 다음, 예를 들어 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포, 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 개시 다음 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 3년보다 더 후의 시간에 검출 가능하다.

일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 다음 시간 경과에 따른 대상체의 유액, 혈장, 혈청, 혈액, 조직, 기관 및/또는 질환 위치, 예를 들어 종양 위치에서의 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포의 농도에 대한 곡선하면적(AUC)은, 감마 세크레타제 억제제의 투여 부재하에, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포를 대상체에게 투여하는 대체 투여 계획을 통해 달성되는 경우에 비해 더 크다.

일부 양상에서, 상기 방법은 예를 들어 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같이, 투여된 세포의 높은 생체내 증식을 야기한다. 일부 양상에서, 세포의 높은 피크 비율이 검색된다. 예를 들어 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여에 이어, 대상체의 혈액, 혈장, 혈청, 조직 또는 병소에서 또는 그의 백혈구 세포 분획, 예를 들어 PBMC 분획 또는 T 세포 분획에서, 피크 또는 최대 수준으로, 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%가 재조합 수용체 예를 들어 CAR을 발현한다.

일부 양상에서, 감마 세크레타제 억제제가 투여된 대상체에서 세포 용량의 증가 또는 연장된 팽창 및/또는 지속성은 대상체의 종양 관련 결과에서의 장점과 관련이 있다. 일부 구현예에서, 종양 관련 결과는 대상체에서 골수 모구의 감소 또는 종양 부담의 감소를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양 부담은 상기 방법 실시 후 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%, 또는 적어도 그 이상 감소한다. 일부 구현예에서, 질환 부담, 종양 크기, 종양 부피, 종양 질량, 및/또는 종양 부하 또는 벌크는 용량의 세포 투여 후, 감마 세크레타제 억제제가 투여되지 않는 방법으로 치료된 대상체에 비해 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 적어도 그 이상 감소된다.

B. T 세포 기능성 활성

일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과 평가 및/또는 치료 결과의 모니터링에 대해 평가될 수 있는 파라미터를 포함하는 요법 또는 치료 결과와 관련된 파라미터는 T 세포의 하나 이상의 활성, 표현형, 증식 또는 기능포함한다. 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하기 위한 당업계에 공지된 임의의 분석법이 사용될 수 있다. 세포 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 전 및/또는 후에, 일부 구현예에서 조작된 세포 집단의 생물학적 활성은 예를 들어 임의의 다수의 공지된 방법에 의해 측정된다. 평가하고자 하는 파라미터에는 예를 들어 영상화에 의한 생체내, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의한 생체외 분석에 의한, 항원에 대한 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포의 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 표적 세포를 파괴하는 조작된 세포의 능력은 예를 들어 문헌 「Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), and Herman et al., J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)」에 설명된 세포독성 분석과 같은, 기술분야에 공지인 임의의 적절한 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 CD107a, IFNγ, IL-2, GM-CSF 및 TNFα와 같은 하나 이상의 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석하거나 및/또는 세포용해 활성을 평가함으로써 측정된다.

일부 구현예에서, T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능에 대한 분석법의 예로는, ELISPOT, ELISA, 세포 증식, 세포독성 림프구(CTL) 분석, T 세포 에피토프, 항원 또는 리간드에 대한 결합, 또는 세포내 사이토카인 염색, 증식 분석, 림포카인 분비 분석, 직접 세포독성 분석 및 제한 희석 분석법을 들 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포의 증식 반응은, 예를 들어 ³H-티미딘, BrdU(5-브로모-2'-데옥시우리딘) 또는 2'-데옥시-5-에티닐우리딘(EdU)의, 이들의 DNA로의 통합에 의해 또는 카르복시플루오레신 디아세테이트 석신감마 세크레타제 인히비토릴 에스테르(carboxyfluorescein diacetate succingamma secretase inhibitoryl ester; CFSE), CellTrace Violet, 또는 멤브레인 염료 PKH26을 이용한 염료 희석 분석에 의해 측정될 수 있다.

일부 구현예에서, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하는 것은, T 세포로부터의 사이토카인 생성, 및/또는 대상체의 생물학적 샘플, 예를 들어 혈장, 혈청, 혈액, 및/또는 조직 샘플, 예를 들어 종양 샘플 중의 사이토카인 생성량 측정을 포함한다. 경우에 따라, 이렇게 측정된 사이토카인의 예로는 인터류킨-2(IL-2), 인터페론-감마(IFNγ), 인터류킨-4(IL-4), TNF-알파(TNFα), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-10(IL-10), 인터류킨-12(IL-12), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GMCSF), CD107a, 및/또는 TGF-베타(TGFβ)를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 사이토카인을 측정하는 분석법은 기술 분야에 잘 알려져 있으며, ELISA, 세포내 사이토카인 염색, 세포측정 비드 어레이, RT-PCR, ELISPOT, 유세포 분석 및 시험 샘플 존재하에 관련 사이토카인에 반응하는 세포를 반응성(예를 들어 증식)에 대해 시험하는 바이오-분석법을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.

일부 구현예에서, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하는 것은, 세포 표면형, 예를 들어 특정한 세포 표면 마커의 발현을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 T 세포는 T 세포 활성화 마커의 발현, T 세포 소진(exhaustion) 마커, 및/또는 T 세포 분화 마커에 대해 평가된다. 일부 구현예에서, 세포 표현형은 투여 전에 평가된다. 일부 구현예에서, 세포 표현형은 투여 후에 평가된다. 평가를 위한 T 세포 활성화 마커, T 세포 고갈 마커, 및/또는 T 세포 분화 마커는 T 세포의 특별한 서브세트, 예를 들어 CD25, CD38, 인간 백혈구 항원-DR(HLADR), CD69, CD44, CD137, KLRG1, CD62L^low, CCR7^low, CD71, CD2, CD54, CD58, CD244, CD160, 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1), 림프구 활성화 유전자 3 단백질(LAG-3), T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 단백질 3(TIM-3), 세포독성 T 림프구 항원-4(CTLA-4), 밴드 T 림프구 감쇠자(BTLA) 및/또는 T-세포 면역글로불린 및 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 도메인(TIGIT)[예를 들어 문헌 「Liu et al., Cell Death and Disease (2015) 6, e1792」] 등의 기술분야에 알려진 임의의 마커를 포함한다. 일부 구현예에서, 평가된 세포 표면 마커는 CD25, PD-1 및/또는 TIM-3이다. 일부 구현예에서, 평가된 세포 표면 마커는 CD25이다.

일부 양상에서, 발현 수준을 탐지하는 것은 시험관내 분석을 수행한느 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 시험관내 분석은 면역분석, 압타머-기반 분석, 조직 또는 세포 분석, 또는 mRNA 발현 수준 분석이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 인자, 이펙터, 효소 및/또는 표면 마커 각각 중 하나 이상에 대한 파라미터 또는 파라미터들은 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA), 면역블로팅, 면역침전, 방사능면역분석법(RIA), 면역염색, 유세포 분석법, 표면 플라즈몬 공명(SPR), 화학발광 분석법, 측면 유동면역분석, 억제 분석, 또는 열성 분석법을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 사이토카인 및/또는 표면 마커의 검출은 적어도 하나의 바이오 마커에 특이적으로 결합하는 결합 시약을 이용하여 탐지된다. 경우에 따라, 결합 시약은 그의 항체 또는 항원-결합 단편, 압타머 또는 핵산 프로브이다.

일부 구현예에서, 감마 세크레타제 억제제의 투여는 순환 CAR T 세포의 수준을 증가시킨다.

C. 질환 부담(DISEASE BURDEN)

일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가 및/또는 치료 결과의 모니터링을 위해 평가될 수 있는 파라미터를 포함하는, 요법 또는 치료 결과와 관련된 파라미터들에는, 종양 또는 질환 부담이 포함된다. 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법(예를 들어 CAR-발현 T 세포) 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여는, 대상체에서 질환 또는 질환 상태의 확산 또는 부담을 감소시키거나 예방할 수 있다. 예를 들어 질환 또는 질환 상태가 종양인 경우, 상기 방법은 일반적으로 골수 또는 분자상에서 검출가능한 암 중의 모구의 백분율, 종양 크기, 벌크, 전이를 감소시키거나 및/또는 종양 부담과 관련된 기타 증상 또는 생존 또는 예후를 개선시킨다.

일부 구현예에서, 제공된 방법은 감마 세크레타제 억제제의 투여 없이, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)가 주어지는 대체 방법에 비해, 치료된 대상체에 있어서 종양 부담을 감소시키는 결과를 초래한다. 조합 요법이 실시된 모든 대상체에서 종양 부담이 실질적으로 감소될 필요는 없으나, 그러한 조합 요법으로 치료된 대상체의 대다수에서, 예를 들어 임상 데이터에 기초하여, 조합 요법으로 치료된 대상체에 있어서 평균적으로, 예를 들어 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 감소된 종양 부담을 나타낸다.

질환 부담은 종양 또는 예를 들어 전이를 가리키는 다른 위치의 장기나 조직과 같이, 대상체의 장기, 조직 또는 체액 내의 또는 대상체 내 질환 세포의 총 수를 포함할 수 있다. 예를 들어 종양 세포는 특정할 혈액학적 악성종양 관점에서 혈액, 림프 또는 골수에서 검출되거나 및/또는 정량될 수 있다. 질환 부담은, 일부 구현예에서, 종양의 무게, 골수에 존재하는 모구 세포의 백분율 및/또는 개수, 전이 정도를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 대상체는 골수종, 림프종 또는 백혈병을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 만성 림프구 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL) 또는 골수종, 예를 들어 다발성 골수종(MM)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 MM 또는 DBCBL을 갖는다.

일부 구현예에서, 대상체는 고형 종양을 갖는다.

일부 구현예에서, 대상체는 MM을 갖는다. 일부 경우 MM은 대체된 및/또는 내화성 MM이다. MM의 경우, 질환 부담의 정도를 추정하는 예시적인 파라미터들에는 클론 혈장 세포(예를 들어 골수 생검에서 > 10% 또는 다른 조직으로부터의 생검에서 임의의 양으로; 혈장세포종); 혈청 또는 소변 중 모노클로날 단백질(파라단백질)의 존재, 혈장 세포 장애(예를 들어 고칼슘혈증(수정된 칼슘 > 275mmol/l))와 관련된 말단-장기 손상의 증거; 골수종에 기인하는 신장기능 부전; 빈혈(헤모글로빈 <10 g/dl) 및/또는 뼈 병변(압축 골절이 있는 용해성 병변 또는 골다공증))이 포함된다.

DLBCL의 경우, 질환 부담의 정도를 평가하기 위한 예시적인 파라미터들은 세포 형태학(예를 들어 중심모세포, 면역모세포 및 역형성 세포), 유전자 발현, miRNA 발현 및 단백질 발현(예를 들어 BCL2, BCL6, MUM1, LMO2, MYC, 및 p21의 발현)과 같은 파라미터를 포함한다.

백혈병의 경우, 질환 부담의 정도는 혈액 또는 골수내 잔여 백혈병의 평가에 의해 탐지될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 광학 현미경 법에 의해 검출된 바와 같이 골수에 5% 이상의 모구가 있는 경우 형태학적 질환을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5% 미만의 모구가 있는 경우 대상체는 완전 또는 임상적인 관해를 나타낸다.

일부 구현예에서, 백혈병의 경우, 대상체는 완전 관해(complete remission)를 나타낼 수 있지만, 형태학적으로 검출불가능한 (광학 현미경 기술에 의해) 잔여 백혈구 세포가 적은 비율로 존재한다. 대상체가 골수에서 5% 미만의 아세포를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 암을 나타내는 경우 대상체는 최소 잔류 질환(MRD)을 나타내는 것이라고 일컬어진다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 암은 소수의 세포를 민감하게 검출하게 하는 다양한 분자적 기법 중 임의의 것을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 양상에서, 그러한 기법은 독특한 Ig/T-세포수용체 유전자 재배열 또는 염색체 전위에 의해 생성된 융합된 전사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 유세포 분석법은 백혈병-특이적 면역 표현형에 기초하여 암 세포를 동정하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 암의 분자적 검출은 100,000개의 정상 세포 중에서 1 개만큼 적은 백혈병 세포를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 PCR이나 유세포 분석법에 의하여 100,000개 세포 중 적어도 1 개 또는 그 보다 많은 백혈병 세포가 검출된다면 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체의 질환 부담은 분자적으로 검출할 수 없거나 MRD-인데, 그렇게, 일부 경우, 어떠한 백혈병 세포도 PCR 또는 유세포 분석 기법을 이용하여 대상체에서 검출될 수 없다.

일부 구현예에서, 면역요법제 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-[0580] 발현 T 세포) 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 및/또는 방법은, 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 직전 시점에서의 질환 부담에 비해 질환 부담을 감소시킨다.

일부 양상에서, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여는, 질환 부담 증가를 방지할 수 있고, 이것은 질환 부담에 변화가 없다는 것에 의해 입증될 수 있다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 예를 들어 종양 세포의 수, 종양의 크기, 환자 생존 기간 또는 무사건 생존의 질환 또는 질환 상태의 부담을, 감마 세크레타제 억제제의 부재 하에, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 만을 단독으로 투여받은 대상체에서 관찰되는 것과 같은, 대체 요법을 이용하는 비교 방법으로 관찰되는 부담보다 더 많이, 및/또는 더 오랫동안 감소시킨다. 일부 구현예에서, 질환 부담은 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제, 및 감마 세크레타제 억제제을 투여하는 조합 요법의 경우가, 각 제제를 단독으로 투여하는 경우 예를 들어 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제가 투여되지 않은 대상체에게 감마 세크레타제 억제제를 투여하거나; 또는 감마 세크레타제 억제제가 투여되지 않은 대상체에게 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제를 투여하는 방법에 의해 발휘되는 질환 부담의 감소에 비해 그 정도가 더 크고 더 장기간 지속된다.

일부 구현예에서, 대상체에서의 질환 또는 장애 상태의 부담은 검출, 평가 또는 측정된다. 질환 부담은 일부 양상에서, 대상체에서 또는 대상체의 기관, 조직 또는 체액, 예를 들어 혈액 또는 혈청에서 질환 또는 질환-관련 세포의 총 수를 검출함으로써 검출될 수 있다. 일부 구현예에서, 질환 부담, 예를 들어 종양 부담은 고형 종양의 무게 및/또는 전이의 정도 또는 전이 개수를 측정함으로써 평가된다. 일부 양상에서, 대상체의 생존, 특정 기간 내의 생존율, 생존 범위, 무-사건 또는 무-증상 생존 또는 무-재발 생존의 존재 또는 기간이 평가된다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애 상태의 임의의 증상이 평가된다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애 상태 부담의 척도가 특정된다. 일부 구현예에서, 예시적인 측정 파라미터들에는 예를 들어 종양과 같은 질환 또는 질환 상태의 완화 또는 개선을 가리키는 특정한 임상 결과가 포함된다. 이러한 파라미터에는: 질환 제어 기간, 예를 들어 완전 반응(CR), 부분 반응(PR) 또는 안정한 질환(SD)(예를 들어 「Response Evaluation Criteria In Solid Tumors(RECIST)」 가이드라인 참조), 객관적 반응률(ORR), 무진행 생존(PFS) 및 전체 생존(OS)이 포함된다. 이들 파라미터에 대한 특정한 역치를 설정하여 본 발명에 제공된 조합 요법의 효능을 구할 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 방법으로 치료된 대상체는 보다 지속적인 반응을 달성한다. 경우에 따라, 반응 기간의 척도(measure of duration of response: DOR)에는 질환 진행에 대한 종양 반응의 문서화에 따른 기간이 포함된다. 일부 구현예에서, 반응을 평가하기 위한 파라미터는 지속성 반응, 예를 들어 요법의 개시로부터 일정 시간 후에 지속되는 반응을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 지속성 반응은 요법 개시 후 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월에서의 반응률에 의해 지시된다. 일부 구현예에서, 반응은 3개월 초과, 6개월 초과 또는 12개월 초과 동안 지속된다. 일부 특정 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여에 대한 반응으로 관해된 후 이전에 재발한 후 더 지속성있는 반응을 달성한다.

일부 양상에서, 질환 부담은 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법 전에, 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법 후 그러나 감마 세크레타제 억제제의 투여 전에, 감마 세크레타제 억제제의 투여 후 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법 전에, 및/또는 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법 후, 그러나 감마 세크레타제 억제제의 투여 전에, 감마 세크레타제 억제제의 투여 후 그러나 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법 전에, 및/또는 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법 및 감마 세크레타제 억제제의 양자 모두의 투여 후에 측정 또는 탐지된다. 조합 요법의 하나 이상의 단계의 다중 투여와 관련하여, 일부 구현예에서 질환 부담은 임의의 단계, 용량 및/또는 투여 사이클의 투여 전 또는 후에, 또는 임의의 단계, 용량 및/또는 투여 사이클의 투여 사이의 시점에 측정될 수 있다.

일부 구현예에서, 부담은 감마 세크레타제 억제제 및 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제의 투여 직전에 비해, 제공된 방법에 의해 적어도 또는 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100% 감소된다. 일부 구현예에서, 질환 부담, 종양 크기, 종양 부피, 종양 질량, 및/또는 종양 부하 또는 벌크는 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 및 감마 세크레타제 억제제의 투여 후, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 및/또는 감마 세크레타제 억제제의 투여 직전에 비해, 적어도 또는 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% 이상 감소된다.

일부 구현예에서, 이 방법에 의한 질환 부담의 감소는 예를 들어 조합 요법제의 투여 개시로부터 1개월, 2개월, 3개월, 또는 3개월 초과한 시점에서 평가되는 바와 같이, 형태학적 완전 관해의 유도를 포함한다.

일부 양상에서, 다중 파라미터 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은, 최소 잔여 질환에 대한 분석은 음성이거나, 또는 최소 잔여 질환 수준은 약 0.3% 미만, 약 0.2% 미만, 약 0.1% 미만 또는 약 0.05% 미만이다.

일부 구현예에서, 대상체의 무-사건 생존율 또는 총 생존율은, 다른 방법에 비하여, 상기 방법에 의하여 향상된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 조합 요법 투여 후 6개월에 상기 방법으로 치료된 대상체들에 대한 무-사건 생존율 또는 확률은 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 또는 약 95% 이상이다. 일부 양상에서, 총 생존율은 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 또는 약 95% 이상이다. 일부 구현예에서, 상기 방법으로 치료된 대상체는 무-사건 생존, 무-재발 생존, 또는 6개월 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년 이상까지 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 진행까지의 시간이 향상되는데, 예를 들어 진행까지의 시간은 약 6개월 이상 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10년 이상이다.

일부 구현예에서, 상기 방법에 의한 치료 다음에, 재발 가능성은, 다른 방법에 비하여, 감소된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 복합 요법 투여 후 6개월에 재발 가능성은 약 80% 미만, 약 70% 미만, 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만 또는 약 10% 미만이다.

IV. 제조 물품 및 키트(ARTICLES OF MANUFACTURE AND KITS)

감마 세크레타제 억제제 및 면역 요법을 위한 성분, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 T 세포 요법제, 조작된 세포 및/또는 그의 조성물을 포함하는 제조 물품이 또한 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서 용기는 그 자체로 또는 질환 상태를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 효과적인 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유한다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균된 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기는 주사용 바늘에 의해 천공될 수 있는 스토퍼를 갖는 것을 포함하는 정맥내 용액 백, 바이알, 또는 경구 투여되는 약제를 위한 병 또는 바이알을 포함한다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 질환 또는 질환 상태를 치료하는데 사용됨을 나타낼 수 있다.

제조 물품은 (a) 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되는 항체 또는 조작된 세포를 포함하는 조성물이 함유된 제1 용기; 및 (b) 제 2 제제, 예를 들어 감마 세크레타제 억제제가 포함된 조성물을 함유하는 제 2 용기를 포함할 수 있다. 제조 물품은 조성물이 특정 질환 상태를 치료하는데 사용될 수 있음을 가리키는 패키지 삽입물을 더 포함할 수 있다. 별법으로 또는 이에 더해, 제조 물품은 약학적으로 허용가능한 완충제를 포함하는 또 다른 또는 동일한 용기를 더 포함할 수 있다. 또한 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 재료도 포함할 수 있다.

V. 정의

달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용되는 분야의 모든 용어, 표기 및 다른 기술적 및 과학적 용어 또는 전문용어는 청구 대상이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에서, 일반적으로 이해되는 의미의 용어는 본 명세서에서 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 정의되며, 본 명세서에 이러한 정의가 포함된 경우에는 반드시, 당업계에서 일반적으로 이해되는 것 이상의 실질적인 차이를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.

본 발명에서 사용되는 바, "대상체"는 인간 또는 다른 동물과 같은 포유류이고, 통상 인간이다. 일부 구현예에서, 면역조절 폴리펩티드, 조작된 세포 또는 예를 들어 감마 세크레타제 억제제와 같은 화합물을 함유하는 조성물이 투여되는 대상체, 예를 들어 환자는 포유류, 통상 인간과 같은 영장류이다. 일부 구현예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상체는 남성 또는 여성이될 수 있으며 유아, 청소년, 청년, 성인 및 노인 대상체를 포함하는 임의의 적절한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류와 같은, 비-영장류 포유류이다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다.

본 발명에서 사용되는 바, "치료" (및 그 문법적 변형, 예를 들어 "치료하다" 또는 "치료하는")은 질환 또는 장애 상태 또는 장애 또는 그와 관련된 증상, 부작용 또는 결과, 또는 표현형의 완전한 또는 부분적 개선 또는 감소를 말한다. 치료의 바람직한 효과는 질환의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질환의 직접적인 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질환 진행률 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 이 용어는 질환의 완전한 치유 또는 임의의 증상에 대한 완전한 제거 또는 모든 증상 또는 결과에 대한 효과(들)을 의미하지는 않는다.

본 발명에서 사용되는 바, "질환의 발생 지체"는 질환(예를 들어 암)의 발생을 연기, 방해, 지연, 늦춤, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 이러한 지체는 질환 이력 및/또는 치료 대상인 개체에 따라 다양한 시간 길이일 수 있다. 충분한 또는 상당한 지체는, 개체가 질환을 발생시키지 않는다는 점에서, 사실상 예방을 포함할 수 있음이 당업자에게 자명하다. 예를 들어 전이 발생과 같은 말기 단계 암이 지체될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 바, "방지"는 질환에 걸리기 쉽지만 아직 그 질환으로 진단되지 않은 대상체에서 질환의 발생 또는 재발에 관한 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 세포 및 조성물은 질환의 발생을 지체시키거나 질환의 진행을 지연시키는데 사용된다.

본 발명에서 사용되는 바, 기능 또는 활성을 "억제"시킨다는 것은, 대상 조건 또는 파라미터를 제외하고 다른 것은 동일한 조건과 비교하였을 때, 또는 다른 조건과 비교하여 상기 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어 종양 성장을 억제하는 세포는, 상기 세포의 부재시 종양의 성장 속도와 비교하여 상기 종양의 성장 속도를 감소시킨다.

투여의 맥락에서 제제, 예를 들어 약학적 제형, 세포 또는 조성물의 "유효량"은 원하는 결과, 예를 들어 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위하여 필요한 투여량/양으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다. 제제, 예를 들어 약학적 제형 또는 조작된 세포의 "치료적으로 유효한 양"은 원하는 치료적 결과를 달성하기 위하여, 예를 들어 질환, 질환 상태 또는 장애의 치료, 및/또는 치료의 약물 동태학적 또는 약물 동력학적 효과를 달성하기 위하여 필요한 투여량으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다. 치료적으로 유효한 양은 대상체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 투여되는 면역조절 폴리펩티드 또는 조작된 세포와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공되는 방법은 면역조절 폴리펩티드, 조작된 세포, 또는 조성물을 유효량, 예를 들어 치료적으로 유효한 양으로 투여하는 것을 포함한다.

"예방적으로 유효한 양"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다. 반드시 그러한 것은 아니지만 통상, 예방적 투여량은 질환 발생 전 또는 초기 단계에서 대상체에게 사용되기 때문에, 상기 예방적으로 유효한 양은 치료적으로 유효한 양보다 적을 것이다.

"약학적 제형"이라는 용어는 그러한 형태로서 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는, 그 제형이 투여될 대상체에 허용될 수 없을만큼 독성인 어떠한 추가 성분을 함유하지 않는 제형을 말한다.

"약학적 허용가능한 담체"는 활성 성분 이외의, 약학적 제제의 성분을 말하며, 이는 대상체에게 비독성이다. 약학적 허용가능한 담체는 완충액, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.

본 발명에서 사용되는바, 뉴클레오티드 또는 아미노산 위치가, 기재된 서열, 예를 들어 서열 목록에 기재된 서열 내 뉴클레오티드 또는 아미노산 위치"에 대응한다"는 것은, 표준 정렬 알고리즘, 예를 들어 GAP 알고리즘을 사용하여 상기 기재된 서열과 상동성을 최대화하는 정렬시 확인된 뉴클레오티드 또는 아미노산 위치를 말한다. 당업자는 서열을 정렬시킴으로써, 예를 들어 보존된 아미노산 잔기 및 동일한 아미노산 잔기를 가이드로서 사용하여 대응하는 잔기를 확인할 수 있다. 일반적으로, 대응하는 위치를 확인하기 위해, 가장 높은 정도의 매치가 얻어지도록 아미노산 서열을 정렬한다[예를 들어 문헌 「Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New.Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073」 참조].

본 발명에 사용되는바, 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 전파시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 상기 용어는 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 혼입된 벡터뿐만 아니라 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 그들이 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본 발명에서는 "발현 벡터"라 지칭한다. 벡터 중에는 레트로바이러스, 예를 들어 감마레트로바이러스 및 렌티 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터가 있다.

용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양체"는 상호교환적으로 사용되며, 이러한 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하는데, 여기에는 최초의 형질전환된 세포 및 계대의 수에 관계없이 그로부터 유래된 자손이 포함된다. 자손은 핵산 함량이 부모 세포와 완전히 동일하지는 않을 수 있고, 돌연변이를 포함할 수 있다. 본래의 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본 발명에 포함된다.

본 발명에서 사용되는 바, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성"이라는 설명은 특정 마커, 통상 표면 마커의, 세포 상의 또는 세포내의 검출 가능한 존재를 말한다. 표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유세포 분석에 의하여 검출되는, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 존재를 말하는데, 여기서 상기 염색은, 다른 것은 동일한 조건 하에서 이소형-매치된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색을 실질적으로 초과하는 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 양성이라고 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 음성이라고 알려진 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출 가능하다.

본 발명에서 사용되는 바, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "음성"이라는 설명은 특정 마커, 통상 표면 마커의, 세포 상에 또는 세포내의 실질적인 검출 가능한 존재의 부재를 말한다. 표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유세포 분석에 의하여 검출되는, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 부재를 말하는데, 여기서 상기 염색은, 다른 것은 동일한 조건 하에서 이소형-매치된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색을 실질적으로 초과하는 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출되지 않고, 및/또는 상기 마커에 대하여 양성이라고 알려진 세포에 대한 것보다 실질적으로 낮은 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 음성이라고 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출된다.

본 발명에서 사용되는바, 아미노산 서열(레퍼런스 폴리펩티드 서열)에 대해 사용되는 경우, "백분율(%) 아미노산 서열 상동성" 및 "백분율 상동성"은, 서열들과, 최대치의 백분율 서열 상동성을 얻기 위하여 필요하다면 도입되는 갭을 정렬한 후, 상기 기준 폴리펩티드 서열 내 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열(예를 들어 대상 항체 또는 단편) 내 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되며, 상기 서열 상동성의 일부로서 어떠한 보존적 치환은 고려하지 않는다. 백분율 아미노산 서열 상동성을 결정하는 목적을 위한 서열정렬은 당해 분야의 기술의 범주 내에서 다양한 방식, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메갈리안(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공중이 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 이용하여 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 적절히 결정할 수 있다.

본 발명에서 사용되는바, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 분명히 다르게 지시하지 않는 한 복수의 대상을 포함한다. 예를 들어 "a" 또는 "an"은 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미한다. 본 발명에서 기술된 측면 및 변형은 측면들 및 변형들"로 이루어지는" 및/또는 "필수적으로 그로 이루어지는"을 포함하는 것으로 이해된다.

본 명세서에 걸쳐, 청구된 주제의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식에서의 설명은 편의상 및 간략화를 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안됨을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 설명은 가능한 모든 하위 범위 및 그 범위 내의 개별적인 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어 값의 범위가 제공되는 경우, 그 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 개재된 값 및 언급된 범위 내 임의의 언급된 또는 개재된 값이 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이들과 같은 보다 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로보다 더욱 작은 범위에 포함될 수 있으며, 기술된 범위 내에서 특별히 배제된 한계에 따라 청구된 대상 내에 포함된다. 명시된 범위가 하나의 한계 또는 두 한계를 포함하는 경우, 포함된 한계들 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위는 청구 대상에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.

본 발명에서 사용되는 "약"이라는 용어는 이 기술분야에서 당업자에게 쉽게 알려딘 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본 발명에서 어떠한 값 또는 파라미터와 관련한 "약"의 언급은 그 값 또는 매개 변수 자체에 대한 구현예를 포함(및 설명)한다. 예를 들어 "약 X"을 언급하는 설명은 "X"에 대한 설명을 포함한다.

본 발명에서 사용되는바, 조성물은 세포를 비롯한 2 이상의 산물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다.

VI. 예시적인 구현예

특히 다음의 구현예들이 제공된다:

1. 치료방법으로서, 상기 방법은,

(a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 단계; 및

(b) 상기 대상체에 LY3039478 또는 하기 구조식의 화합물 또는 입체이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전술한 것 중의 임의의 수화물을 투여하는 단계

를 포함하는 것인 치료방법:

2. 치료방법으로서, 상기 방법은 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 것을 포함하고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 면역 세포의 용량을 포함하되, 상기 세포 요법제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 LY3039478 또는 하기 구조식의 화합물 또는 입체이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전술한 것 중의 임의의 수화물을 투여받았고/받았거나, 그것들로 치료를 수행 중인 것인 치료방법:

3. 치료방법으로서, 상기 방법은 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 LY3039478 또는 하기 구조식의 화합물 또는 입체이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전술한 것 중의 임의의 수화물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여의 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 투여받았고/받았거나, 그것으로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 추가로 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 치료방법:

4. 구현예 1 내지 3 중의 어느 것에 있어서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것이 치료방법.

5. 구현예 4에 있어서, 상기 표적 항원은, B 세포 성숙 항원(BCMA), 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산(anti-folate) 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME; Preferentially expressed antigen of melanoma), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원 중에서 선택되는 것인 치료방법.

6. 구현예 4 또는 5에 있어서, 상기 표적 항원은 Muc1인 것인 치료방법.

7. 구현예 4 또는 5에 있어서, 상기 표적 항원은 BCMA인 것인 치료방법.

8. 구현예 7에 있어서, 상기 BCMA는 표면 BCMA인 것인 치료방법.

9. 구현예 8에 있어서, 표면 BCMA에 대한 상기 재조합 수용체의 결합, 또는 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 재조합 수용체-발현 세포의 기능 또는 활성을 나타내는 척도(measure)는, 가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 존재하에 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 치료방법.

10. 구현예 9에 있어서, 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 BCMA의 농도 또는 양은 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하거나, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균이거나, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 항-BCMA 재조합 수용체를 발현하는 세포, 선택적으로 참조 항-BCMA 재조합 수용체에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 가용성 또는 쉐드 BCMA의 농도 또는 양인 것인 치료방법.

11. 치료방법으로서, 상기 방법은,

(a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 상기 세포 요법제는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 것인 단계; 및

(b) 상기 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 단계

를 포함하되,

상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 상기 CAR-발현 세포의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는,

가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에,

선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서,

감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는

것인 치료방법.

12. 치료방법으로서, 상기 방법은,

질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 것을 포함하고, 상기 세포 요법제는 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하되,

상기 표면 BCMA에 대한 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 상기 CAR-발현 세포의 기능 또는 활성을 나타내는 척도(measure)는,

가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 존재하에,

감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것이며;

상기 세포 요법제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 감마 세크레타제의 억제제를 투여받았고/받았거나, 그것들로 치료를 수행하는

것인 치료방법:

12. 치료방법으로서, 상기 방법은,

질환 또는 장애를 갖는 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 것을 포함하되, 상기 억제제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 투여받았고/받았거나, 그것들로 치료를 수행하며, 상기 세포 요법제는 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하되,

가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 존재하에,

것인 치료방법.

14. 구현예 1 내지 13 중의 어느 것에 있어서, 상기 방법은, 상기 대상체에서 암의 세포가, (i) CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커를 발현하거나 또는 플라즈마 혈장 세포로부터 유도되고 (ii) 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 포함하는 것인 암을 갖는 대상체를 선택하는 것을 포함하는 것인 치료방법.

15. 구현예 14에 있어서, 상기 세포 요법제 및/또는 상기 감마 세크레타제 억제제가 상기 선택된 대상체에 투여되는 것인 치료방법.

16. 구현예 14에 있어서, 표면 BCMA의 발현의 역치 수준은 복수의 대조용 대상체에서 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 평균 또는 중앙값 발현 또는 수준 보다 낮으며, 선택적으로 상기 대조용 대상체는 건강하거나 또는 정상인 대상체의 군인 것인 치료방법.

17. 구현예 14 내지 16 중의 어느 것에 있어서, 표면 BCMA의 상기 저발현은, 표면 BCMA를 발현하는 대상체에서, 혈장 세포, 또는 혈장 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만, 10% 미만 또는 약 그 미만일 때 존재하거나, 또는

표면 BCMA의 상기 역치 수준은, 표면 BCMA를 발현하는 대상체에서, 혈장 세포, 또는 혈장 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만, 10% 미만 또는 약 그 미만인

것인 치료방법.

18. 구현예 14 내지 17 중의 어느 것에 있어서, 표면 BCMA의 발현은 유세포 분석(flow cytometry) 및/또는 면역 분석에 의해서 결정되는 것인 치료방법.

19. 구현예 14 내지 18 중의 어느 것에 있어서, 표면 BCMA에 대한 상기 재조합 수용체의 결합, 또는 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 상기 재조합 수용체-발현 세포의 기능 또는 활성을 나타내는 척도(measure)는, 가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 존재하에 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 치료방법.

20. 구현예 19에 있어서, 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양은, 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에 대응하는 것인 치료방법.

21. 구현예 1 내지 20 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 BCMA의 막내 절단을 억제하는 것인 치료방법.

22. 구현예 21에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.35 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.35 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM, 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.35 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.25 nM 내지 0.35 nM, 0.35 nM 내지 10 nM, 0.35 nM 내지 5 nM, 0.35 nM 내지 1 nM, 0.35 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM 또는 5 nM 내지 10 nM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 막내 절단을 억제하는 것인 치료방법.

23. 구현예 21 또는 22에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만, 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 막내 절단을 억제하는 것인 치료방법.

24. 치료방법으로서, 상기 방법은,

(a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는 것인 단계; 및

를 포함하는 것인 치료방법.

25. 치료방법으로서, 상기 방법은,

질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 것을 포함하고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하되, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는 것이며, 상기 세포 요법제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 감마 세크레타제의 억제제를 사전에 투여되고/되거나, 그것으로 수행하는

것인 치료방법.

26. 치료방법으로서, 상기 방법은,

질환 또는 장애를 갖는 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 것을 포함하고, 상기 억제제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 사전에 투여받았고/받았거나, 그것으로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하되, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는

것인 치료방법.

27. 구현예 24 내지 26 중의 어느 것에 있어서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합하지 않는 것인 치료방법.

28. 구현예 27에 있어서, 상기 표적 항원은, 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산(anti-folate) 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원 중에서 선택되는 것인 치료방법.

29. 세포 요법제의 활성을 조절하는 방법으로서, 상기 방법은,

(b) 상기 단계 (a)에서의 투여 후 상기 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 단계

를 포함하는 것인 방법.

30. 세포 요법제의 활성을 조절하는 방법으로서, 상기 방법은,

질환 또는 장애를 갖는 대상체에 감마 세크레타제의 억제제를 투여하는 것을 포함하고, 상기 억제제의 투여 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 사전에 투여받았고/받았거나, 그것으로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는

것인 방법.

31. 구현예 29 또는 30에 있어서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적을 결합하는 것인 방법.

32. 구현예 31에 있어서, 상기 표적 항원은, B 세포 성숙 항원(BCMA), 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산(anti-folate) 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원 중에서 선택되는 것인 방법.

33. 구현예 27, 28, 31 또는 32에 있어서, 상기 표적 항원은 Muc1인 방법.

34. 구현예 31 또는 32에 있어서, 상기 표적 항원은 BCMA인 방법.

35. 구현예 34에 있어서, 상기 BCMA는 표면 BCMA인 방법.

36. 구현예 14 내지 35 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 BCMA, 노치(Notch) 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2(Ephrin B2), 베타글리칸(Betaglycan)(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1(Delta1), E-카드헤린(E-cadherin), N-카드헤린(N-cadherin), HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R 또는 아멜로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된 하나 이상의 표적의 절단을 억제 또는 감소키거나 또는 억제 또는 감소시킬 수 있는 것인 방법.

37. 구현예 36에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제의 상기 하나 이상의 표적은 Muc1을 포함하는 것인 방법.

38. 구현예 36에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제의 상기 하나 이상의 표적은 BCMA를 포함하는 것인 방법.

39. 구현예 36 내지 38 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 0.01 nM 내지 1μM, 0.01 nM 내지 100 nM, 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 1μM, 0.05 nM 내지 100 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 1μM, 0.1 nM 내지 100 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 1μM, 0.25 nM 내지 100 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 1μM, 0.5 nM 내지 100 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 1μM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM, 5 nM 내지 1μM, 5 nM 내지 100 nM, 5 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 1μM, 10 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 1μM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 표적을 억제하는 것인 치료방법.

40. 구현예 36 내지 38 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 1μM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만, 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 표적을 억제하는 것인 치료방법.

41. 구현예 11 내지 40 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제 또는 비-펩티드 억제제인 것인 치료방법.

42. 구현예 41에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제이고 상기 펩티드 억제제는 펩티드 알데하이드 유도체, 디플루오로케톤 유도체, 하이드록시에틸렌 디펩티드 이소테레(isotere) 유도체, 알파-나선형 펩티드 유도체 및 디펩티드 유사체로부터 선택되는 것인 치료방법.

43. 구현예 41에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비-펩티드 억제제이고 상기 비-펩티드 억제제는 벤조디아제핀 유도체 또는 설폰아미드 유도체인 것인 치료방법.

44. 구현예 41 내지 43 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 전이 상태 억제제 또는 비-전이 상태 억제제인 것인 치료방법.

45. 구현예 41 내지 44 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비스테로이드계 항-염증성 약물인 치료방법.

46. 구현예 41 내지 45 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날(leucinal); 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003(Merck); semagacestat/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드], LY411575, L-685,458, BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)으로부터 선택되는 것인 치료방법.

47. 구현예 11 내지 46 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 LY3039478 또는 하기 구조식의 화합물 또는 입체이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전술한 것 중의 임의의 수화물인 것인 치료방법:

48. 구현예 1 내지 47 중의 어느 것에 있어서, 상기 대상체는 표면 BCMA를 발현하는, 혈장 세포, 또는 혈장 세포 마커를 발현하는 골수종 세포 또는 암세포를 포함하는 것인 치료방법.

49. 구현예 21 내지 48 중의 어느 것에 있어서,

상기 대상체에서 암의 세포는, (i) CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커(surface plasma cell marker)를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되고 (ii) 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준(threshold level) 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 포함하는 암세포를 갖고/갖거나;

상기 방법은 추가로, 상기 대상체에서 암의 세포가, (i) CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되고 (ii) 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 포함하는 암세포를 선택하는 것을 포함하는

것인 치료방법.

50. 구현예 4 내지 8, 27 내지 29 및 31 내지 49 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제의 표적은 상기 표적 항원이고 상기 감마 세크레타제 억제제는 상기 표적 항원의 절단을 억제하는 것인 치료방법.

51. 구현예 7 내지 23 및 34 내지 50 중의 어느 것에 있어서,

상기 억제제의 투여는,

상기 억제제의 투여 이전에 대상체 중의 세포로부터의 BCMA 절단 또는 쉐딩(shedding)의 수준과 비교하여 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포로부터의 BCMA 절단 또는 쉐딩을 감소시키고;

상기 억제제의 투여 이전에 대상체의 혈청 중의 BCMA의 수준 또는 양과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 대상체의 혈청 중에서 검출된 BCMA의 수준 또는 양을 감소시키고/시키거나;

상기 억제제의 투여 이전에 대상체 중의 세포 상의 표면 BCMA의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 발현을 증가시키는

것인 치료방법.

52. 구현예 1 내지 52 중의 어느 것에 있어서,

상기 억제제의 투여는, 상기 억제제의 투여 이전에 대상체 중의 세포로부터의 표적 또는 표적 항원의 절단 또는 쉐딩의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포로부터의 표적 또는 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 절단 또는 쉐딩을 감소시키고;

상기 억제제의 투여 이전에 대상체의 혈청 중의 표적 또는 표적 항원의 수준 또는 양과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 대상체의 혈청 중에서 검출된, 표적 또는 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 수준 또는 양을 감소시키고/시키거나;

상기 억제제의 투여 이전에 대상체 중의 세포 상의 표면 표적 또는 표적 항원의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포 상의 표면 표적 또는 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 발현을 증가시키는

것인 치료방법.

53. 구현예 1 내지 52 중의 어느 것에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암인 것인 치료방법.

54. 구현예 53에 있어서, 상기 암은 B 세포 악성 종양인 것인 치료방법.

55. 구현예 53 또는 54에 있어서, 상기 암은 다발성 골수종, 형질 세포종, 형질 세포 기원의 암 및/또는 B 세포 기원의 암인 것인 치료방법.

56. 구현예 1 내지 55 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제는 경구, 피하 또는 정맥내 투여되는 것인 치료방법.

57. 구현예 1 내지 56 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제는 경구 투여되는 것인 치료방법.

58. 구현예 1 내지 57 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제는 적어도 투여되거나 또는 1일 6회, 1일 5회, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 1주 3회, 1주 1회 이상, 또는 1회만 투여되는 것인 치료방법.

59. 구현예 1 내지 58 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제는 1주 3회 투여되는 것인 치료방법.

60. 구현예 58 또는 59에 있어서, 상기 억제제의 투여는 14일 이상 또는 약 그 이상, 21일 이상 또는 약 그 이상, 또는 28일 이상 또는 약 그 이상인 치료 사이클로 수행되는 것인 치료방법.

61. 구현예 1 내지 60 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제는 독립적으로, 0.5mg 내지 500mg, 0.5mg 내지 250mg, 0.5mg 내지 100mg, 0.5mg 내지 50mg, 0.5mg 내지 25mg, 0.5mg 내지 10mg, 0.5mg 내지 5.0mg, 0.5mg 내지 2.5mg, 0.5mg 내지 1.0mg, 1.0mg 내지 500mg, 1.0mg 내지 250mg, 1.0mg 내지 100mg, 1.0mg 내지 50mg, 1.0mg 내지 25mg, 1.0mg 내지 10mg, 1.0mg 내지 5.0mg, 1.0mg 내지 2.5mg, 2.5mg 내지 500mg, 2.5mg 내지 250mg, 2.5mg 내지 100mg, 2.5mg 내지 50mg, 2.5mg 내지 25mg, 2.5mg 내지 10mg, 2.5mg 내지 5.0mg, 5.0mg 내지 500mg, 5.0mg 내지 250mg, 5.0mg 내지 100mg, 5.0mg 내지 50mg, 5.0mg 내지 25mg, 5.0mg 내지 10mg, 10mg 내지 500mg, 10 mg 내지 250mg, 10 mg 내지 100mg, 10 mg 내지 50mg, 10 mg 내지 25mg, 25mg 내지 500mg, 25mg 내지 250mg, 25mg 내지 100mg, 25mg 내지 50mg, 50mg 내지 500mg, 50mg 내지 250mg, 50mg 내지 100mg, 100mg 내지 500mg, 100mg 내지 250mg 또는 250mg 내지 500mg 의 양으로 투여되거나, 또는 상기 억제제의 투여는 상기 양으로 각각 독립적으로 투여되는 것인 치료방법.

62. 구현예 1 내지 61 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제는 적어도 또는 적어도 약 0.5mg, 1.0mg, 2.5mg, 5.0mg, 10.0mg, 25mg, 50mg, 100mg, 250mg 또는 500mg인 양, 또는 약 상기 양으로 투여되거나, 상기 억제제의 투여는 각각 독립적으로 투여되는 것인 치료방법.

63. 구현예 14 내지 62 중의 어느 것에 있어서, 상기 재조합 수용체는 유전자 변형 T 세포 수용체(TCR) 또는 기능성 비-T 세포 수용체인 것인 치료방법.

64. 구현예 14 내지 63 중의 어느 것에 있어서, 상기 재조합 수용체는 키메라 수용체이고, 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)인 것인 치료방법.

65. 구현예 1 내지 13 및 64 중의 어느 것에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 것인 치료방법.

66. 구현예 65에 있어서, 상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하는 것인 치료방법.

67. 구현예 65 또는 66에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극 시그널링 영역을 포함하는 것인 치료방법.

68. 구현예 67에 있어서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 도메인을 포함하는 것인 치료방법.

69. 구현예 67 또는 68에 있어서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB으로부터 유도된 도메인인 것인 치료방법.

70. 구현예 1 내지 69 중의 어느 것에 있어서, 상기 대상체는 인간인 것인 치료방법.

71. 구현예 1 내지 70 중의 어느 것에 있어서, 상기 BCMA는 인간 BCMA이거나 또는 상기 표적 항원은 인간 항원인 것인 치료방법.

72. 구현예 1 내지 72 중의 어느 것에 있어서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함하는 것인 치료방법.

73. 구현예 72에 있어서, 상기 세포 요법제는 T 세포 요법제이고 상기 유전자 조작된 세포의 용량은 T 세포를 포함하는 것인 치료방법.

74. 구현예 72 또는 73에 있어서, 상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+인 것인 치료방법.

75. 구현예 72 내지 74 중의 어느 것에 있어서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포(primary T cell)인 것인 치료방법.

76. 구현예 1 내지 75 중의 어느 것에 있어서, 상기 세포 요법제는 상기 대상체의 자가조직의(autologous) 세포를 포함하는 것인 치료방법.

77. 구현예 1 내지 76 중의 어느 것에 있어서, 상기 세포 요법제는 상기 대상체에 대해 동종이계의(allogeneic) 세포를 포함하는 것인 치료방법.

78. 구현예 1 내지 77 중의 어느 것에 있어서, 상기 세포 요법은, 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하거나, 상기 세포 요법은 각각 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개 또는 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 또는 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개 또는 약 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하는 것인, 치료방법.

79. 구현예 1 내지 78 중의 어느 것에 있어서, 상기 세포 요법은, 5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 2.5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 1 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 0.5 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 1 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 0.5 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하는 것인, 치료방법.

80. 구현예 1, 4, 5 14 및 38 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제의 투여 개시는 상기 세포 요법제의 투여 개시전에, 그와 동시에 또는 그 후에 수행되는 것인 치료방법.

81. 구현예 80에 있어서, 상기 억제제의 투여 개시는 상기 세포 요법제의 투여 개시전에 수행되는 것인 치료방법.

82. 구현예 1, 2, 4, 5, 14, 15, 38, 39 및 81 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제의 투여 개시는 상기 세포 요법제의 투여 개시전에 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주 이내에, 또는 약 상기 기간 이내에 수행되는 것인 치료방법.

83. 구현예 80에 있어서, 상기 억제제는 상기 세포 요법제의 투여 개시후에 수행되는 것인 치료방법.

84. 구현예 1, 3, 4, 5, 14, 16, 19, 20, 38, 40 및 83 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제의 투여 개시는 상기 세포 요법제의 투여 개시후에 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상 이내에, 또는 약 상기 기간 이내에 수행되는 것인 치료방법.

85. 구현예 1, 3, 4, 5, 14, 16, 19, 20, 38, 40, 83 및 84 중의 어느 것에 있어서,

상기 억제제는,

대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 상기 세포 요법제의 세포의 수가 세포의 투여 개시후의 선행 시점에서의 대상체 중에서와 비교하여 감소되고;

혈액 중에서 검출가능한 상기 세포 요법제의 세포의 수가, 세포의 투여 개시 후 상기 대상체의 혈액 중에서 검출가능한 세포의 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 약 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 그의 피크 또는 최대수 미만이고/이거나;

상기 세포 요법제의 세포의 피크 또는 최대 수준 후의 시점에서 상기 대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 세포로부터 유도된 세포의 수가 상기 대상체의 상기 혈액 중의 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만일 때에

투여되는 것인 치료방법.

86. 구현예 1, 3, 4, 5, 14, 16, 19, 20, 38, 40 및 83 내지 85 중의 어느 것에 있어서, 상기 억제제는 상기 세포의 투여 개시후에 7일, 14일 21일, 28일 또는 그 이상의 기간까지 투여되는 것인 치료방법.

87. 구현예 1 내지 86 중의 어느 것에 있어서, 상기 방법은 추가로, 상기 세포 요법제의 투여전에 림프구 고갈 화학요법제(lymphodepleting chemotherapy)를 투여하는 것을 포함하고/하거나 상기 대상체는 상기 세포의 투여전에 림프구 고갈 화학 요법제를 받는 것인 치료방법.

88. 구현예 87에 있어서, 상기 림프구 고갈 화학요법제는 상기 대상체에 플루다라빈(fludarabine) 및/또는 사이클로포스파미드(cyclophosphamide)를 투여하는 것을 포함하는 것인 치료방법.

89. 구현예 1 내지 88 중의 어느 것에 있어서, 상기 방법은 추가로, 스테로이드를 투여하는 것을 포함하고, 선택적으로 상기 스테로이드는 상기 억제제의 투여 개시전에, 그와 동시에 및/또는 그 후에 투여되고, 선택적으로 상기 스테로이드는 상기 억제제를 사용한 치료 사이클도중에 투여되는 것인 치료방법.

90. 구현예 89에 있어서, 상기 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone)이거나 그를 포함하는 것인 치료방법.

91. 구현예 1 내지 90 중의 어느 것에 있어서, 상기 세포 요법은 상기 감마 세크레타제 억제제의 부재하에서 상기 세포 요법제가 상기 대상체에 투여되는 방법과 비교하여 증가되거나 대상체에서 연장된 팽창 및/또는 지속을 나타내는 것인 치료방법.

92. 구현예 1 내지 91 중의 어느 것에 있어서, 상기 방법은 그에 의해서 상기 질환 또는 장애의 결과를 예방, 경감 또는 개선시키는 것인 치료방법.

93. 치료방법으로서, 상기 방법은,

(a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에, B 세포 성숙 항원(BCMA)를 표적화하거나 또는 그에 대해 특이적인 치료제 또는 요법제를 투여하는 단계; 및

(b) 상기 대상체에 감마 세크레타제 억제제를 투여하는 단계

를 포함하는 치료방법.

94. 구현예 93에 있어서, 상기 치료제 또는 요법제는 그의 항체 또는 항원-결합 단편, 선택적으로는 이중 특이적 항체(bispecific antibody)이거나 또는 그를 포함하는 것인 치료방법.

95. 구현예 93 또는 94에 있어서, 상기 치료제 또는 요법제는, T 세포 항원, 선택적으로는 CD2 또는 CD3을 추가로 표적화하거나 또는 그에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체인 것인 치료방법.

96. 구현예 93 또는 94에 있어서, 상기 치료제 또는 요법제는 제 2 항원을 추가로 표적화하는 이중 특이적 항체이고, 선택적으로 상기 제 2 항원은 CD19, CD20, CD22, CD33, CD38, CS1, ROR1, GPC3, CD123, IL-13R, CD138, c-Met, EGFRvIII, GD-2, NY-ESO-1, MAGE A3, 및 글리콜리피드 F77로부터 선택되는 것인 치료방법.

97. 구현예 93 내지 96 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날(leucinal); 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003(Merck); semagacestat/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드], LY411575, L-685,458, BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)으로부터 선택되는 것인 치료방법.

98. 구현예 93 내지 97 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 LY3039478 또는 하기 구조식의 화합물 또는 입체이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전술한 것 중의 임의의 수화물인 것인 치료방법:

99. (a) 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 세포; 및 (b) 감마 세크레타제의 억제제를 포함하는 조합물로서,

가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 존재하에,

것인 조합물.

100. 구현예 99에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 BCMA의 막내 절단을 억제 또는 감소시키거나 또는 억제 또는 감소시킬 수 있는 것인 조합물.

101. 구현예 100에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.35 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.35 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM, 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.35 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.25 nM 내지 0.35 nM, 0.35 nM 내지 10 nM, 0.35 nM 내지 5 nM, 0.35 nM 내지 1 nM, 0.35 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM 또는 5 nM 내지 10 nM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 막내 절단을 억제하는 것인 조합물.

102. 구현예 100 또는 101에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만, 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 BCMA의 막내 절단을 억제하는 것인 조합물.

103. (a) 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포로서, 상기 재조합 수용체는 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하지 않는 것인 유전자 조작된 세포; 및 (b) 감마 세크레타제의 억제제를 포함하는 조합물.

104. 구현예 103에 있어서, 상기 재조합 수용체는 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것인 조합물.

105. 구현예 104에 있어서, 상기 표적 항원은, 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산(anti-folate) 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원 중에서 선택되는 것인 조합물.

106. 구현예 104 또는 105에 있어서, 상기 표적 항원은 Muc1인 조합물.

107. 구현예 99 내지 106 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 BCMA, 노치(Notch) 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2(Ephrin B2), 베타글리칸(Betaglycan)(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1(Delta1), E-카드헤린(E-cadherin), N-카드헤린(N-cadherin), HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R 또는 아멜로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된 하나 이상의 표적의 절단을 억제 또는 감소키거나 또는 억제 또는 감소시킬 수 있는 것인 조합물.

108. 구현예 107에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제의 하나 이상의 표적은 Muc1을 포함하는 것인 조합물.

109. 구현예 107에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제의 하나 이상의 표적은 BCMA를 포함하는 것인 조합물.

110. 구현예 103 내지 109 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 0.01 nM 내지 1μM, 0.01 nM 내지 100 nM, 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 1μM, 0.05 nM 내지 100 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 1μM, 0.1 nM 내지 100 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 1μM, 0.25 nM 내지 100 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 1μM, 0.5 nM 내지 100 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 1μM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM, 5 nM 내지 1μM, 5 nM 내지 100 nM, 5 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 1μM, 10 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 1μM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 표적을 억제하는 것인 조합물.

111. 구현예 103 내지 110 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 1μM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만, 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 표적을 억제하는 것인 조합물.

112. 구현예 99 내지 111 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제 또는 비-펩티드 억제제인 것인 조합물.

113. 구현예 112에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제이고 상기 펩티드 억제제는 펩티드 알데하이드 유도체, 디플루오로케톤 유도체, 하이드록시에틸렌 디펩티드 이소테레(isotere) 유도체, 알파-나선형 펩티드 유도체 및 디펩티드 유사체로부터 선택되는 것인 조합물.

114. 구현예 113에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비-펩티드 억제제이고 상기 비-펩티드 억제제는 벤조디아제핀 유도체 또는 설폰아미드 유도체인 것인 조합물.

115. 구현예 99 내지 114 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 전이 상태 억제제 또는 비-전이 상태 억제제인 것인 조합물.

116. 구현예 99 내지 115 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비스테로이드계 항-염증성 약물인 조합물.

117. 구현예 99 내지 116 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날(leucinal); 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003(Merck); semagacestat/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드], LY411575, L-685,458, BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)으로부터 선택되는 것인 조합물.

118. 구현예 99 내지 117 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 LY3039478 또는 하기 구조식의 화합물 또는 입체이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전술한 것 중의 임의의 수화물인 것인 조합물:

119. 조합물로서,

(a) 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포; 및

(b) LY3039478 또는 하기 구조식의 화합물 또는 입체이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전술한 것 중의 임의의 수화물

을 포함하는 조합물:

120. 구현예 119에 있어서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것인 조합물.

121. 구현예 120에 있어서, 상기 표적 항원은, 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산(anti-folate) 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원 중에서 선택되는 것인 조합물.

122. 구현예 120 또는 121에 있어서, 상기 표적 항원은 Muc1인 것인 조합물.

123. 구현예 120 또는 121에 있어서, 상기 표적 항원은 BCMA인 것인 조합물.

124. 구현예 120에 있어서, 상기 BCMA는 표면 BCMA인 것인 조합물.

125. 구현예 124에 있어서, 표면 BCMA에 대한 상기재조합 수용체, 선택적으로 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 상기 재조합 수용체-발현 세포, 선택적으로 CAR-발현 세포의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR 재조합 수용체, 선택적으로 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 감마 세크레타제의 억제제를 포함하는 것인 조합물.

126. 구현예 103 내지 125 중의 어느 것에 있어서, 상기 재조합 수용체는 유전자 변형 T 세포 수용체(TCR) 또는 기능성 비-T 세포 수용체인 것인 조합물.

128. 구현예 99 내지 102 및 127 중의 어느 것에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 것인 조합물.

129. 구현예 128에 있어서, 상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하는 것인 조합물.

130. 구현예 128 또는 129에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극 시그널링 영역을 포함하는 것인 조합물.

131. 구현예 130에 있어서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 도메인을 포함하는 것인 조합물.

132. 구현예 130 또는 131에 있어서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB으로부터 유도된 도메인인 것인 조합물.

133. 구현예 99 내지 132 중의 어느 것에 있어서, 상기 BCMA는 인간 BCMA이거나 또는 상기 표적 항원은 인간 항원인 것인 조합물.

134. 구현예 99 내지 134 중의 어느 것에 있어서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함하는 것인 조합물.

135. 구현예 134에 있어서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포를 포함하는 것인 조합물.

136. 구현예 134 또는 135에 있어서, 상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+인 것인 조합물.

137. 구현예 134 내지 136 중의 어느 것에 있어서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포(primary T cell)인 것인 조합물.

138. 구현예 99 내지 137 중의 어느 것에 있어서, 상기 유전자 조작된 세포는 대상체에 투여하기 위한 약학 조성물로서 제형화되며, 선택적으로 상기 세포는 질환 또는 질환 상태를 치료하기 위한 하나 이상의 단위 용량으로 투여하기 위해 제형화되는 것인 조합물.

139. 구현예 99 내지 138 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 대상체에 투여하기 위한 약학 조성물로서 제형화되며, 선택적으로 상기 감마 세크레타제 억제제는 질환 또는 질환 상태를 치료하기 위한 하나 이상의 단위 용량으로 투여하기 위해 제형화되는 것인 조합물.

140. 구현예 99 내지 139 중의 어느 것의 조합물 및 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 상기 유전자 조작된 세포 및/또는 상기 감마 세크레타제 억제제를 투여하기 위한 지침(instructions)을 포함하는 키트.

141. 구현예 140에 있어서, 세포의 상기 표면에서 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현을 탐지하기 위한 시약, 및 암을 갖는 상기 대상체의 암 세포의 표면에서 BCMA를 탐지하기 위한 시약의 사용 결과에 기초하여 대상체에 상기 억제제를 투여하기 위한 지침을 추가로 포함하되, 선택적으로 상기 암세포는 CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되는 것인 키트.

142. 구현예 141에 있어서, 상기 지침은, 상기 세포가 저발현의 표면 BCMA 및/또는 역치 수준 미만의 발현 수준의 표면 BCMA을 포함하는 경우 상기 대상체에 상기 억제제를 투여하는 것으로 특정하는 것인 키트.

143. 구현예 142에 있어서, 표면 BCMA의 발현의 역치 수준은 복수의 대조용 대상체에서 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 평균 또는 중앙값 발현 또는 수준 보다 낮으며, 선택적으로 상기 대조용 대상체는 건강하거나 또는 정상인 대상체의 군인 것인 키트.

144. 구현예 142 또는 143 중의 어느 것에 있어서, 표면 BCMA의 상기 저발현은, 표면 BCMA를 발현하는 대상체에서, 혈장 세포, 또는 혈장 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만, 10% 미만 또는 약 그 미만일 때 존재하거나, 또는

것인 키트.

145. 구현예 141 내지 144 중의 어느 것에 있어서, 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 추가로 포함하며, 선택적으로 상기 유전자 조작된 세포는 질환 또는 질환 상태를 갖는 대상체에 하나 이상의 단위 용량의 투여용으로 제형화되는 것인 키트.

146. 구현예 145에 있어서, 상기 재조합 수용체는 질환 또는 질환 상태를 갖는 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것인 키트.

147. 구현예 140 내지 146 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 대한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 개시전에, 투여 개시와 동시에 또는 투여 개시후에, 상기 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 상기 대상체에 투여하는 것을 특정하는 것인 키트.

148. 구현예 147에 있어서, 상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에, 상기 대상체에 대한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 개시전에 상기 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 것으로 특정하는 것인 키트.

149. 구현예 148에 있어서, 상기 지침은 상기 억제제의 투여 개시를 상기 세포 요법제의 투여 개시전에 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주 이내에, 또는 약 상기 기간 이내에 수행하는 것을 특정하는 것인 키트.

150. 구현예 147에 있어서, 상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에, 상기 대상체에 대한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 개시후에 상기 감마 세크레타제 억제제, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 것으로 특정하는 것인 키트.

151. 키트로서,

(a) 감마 세크레타제 억제제로서, 선택적으로 상기 감마 세크레타제 억제제가 하나 이상의 단위 용량으로 제형화된 감마 세크레타제 억제제; 및

(b) 대상체에 대한 세포 요법제의 투여 개시후에 상기 감마 세크레타제 억제제를 상기 대상체에 투여하기 위한 지침으로서, 상기 세포 요법제가 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하는 것인 지침

을 포함하는 키트.

152. 구현예 150 또는 151에 있어서, 상기 억제제의 투여 개시는 상기 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 개시후에 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상 이내에, 또는 약 상기 기간 이내에 수행되는 것인 키트.

153. 구현예 150 내지 152 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은, 상기 억제제는,

투여하기 위한 것으로 특정하는 것인 키트.

154. 구현예 150 내지 153 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은, 상기 억제제는 상기 세포의 투여 개시후에 7일, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상까지 투여하기 위한 것으로 특정하는 것인 키트.

154. 구현예 150 내지 154 중의 어느 것에 있어서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결함하는 것인 키트.

156. 구현예 146 또는 155에 있어서, 상기 표적 항원은, 탄산탈수효소 9(CAIX), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산(anti-folate) 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당단백질 2(EPG-2), 상피 당단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 다이머, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경질 사슬, 루이스 Y, L1-세포 부착 분자(L1-CAM), 흑색종-관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종의 우선 발현된 항원(PRAME), 서바이빈, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, Foetal AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, 쥐의 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암태아성 항원(CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 윌름 종양 1(WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체-특이적 항원; 및 범용 태그와 관련된 항원 중에서 선택되는 것인 키트.

157. 구현예 156에 있어서, 상기 표적 항원은 Muc1, 선택적으로 인간 Muc1인 것인 키트.

158. 구현예 156에 있어서, 상기 표적 항원은 BCMA, 선택적으로 인간 BCMA인 것인 키트.

159. 구현예 158에 있어서, 표면 BCMA에 대한 상기재조합 수용체, 선택적으로 상기 CAR의 결합, 또는 상기 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 상기 재조합 수용체-발현 세포, 선택적으로 CAR-발현 세포의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 존재하에, 선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 참조 항-BCMA CAR 재조합 수용체, 선택적으로 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양에서, 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 감마 세크레타제의 억제제를 포함하는 것인 키트.

160. 구현예 146 내지 159 중의 어느 것에 있어서, 상기 재조합 수용체는 유전자 변형 T 세포 수용체(TCR) 또는 기능성 비-T 세포 수용체인 것인 키트.

161. 구현예 146 내지 160 중의 어느 것에 있어서, 상기 재조합 수용체는 키메라 수용체이고, 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)인 것인 키트.

162. 구현예 161에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 것인 키트.

163. 구현예 162에 있어서, 상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하는 것인 키트.

164. 구현예 161 내지 163 중의 어느 것에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극 시그널링 영역을 포함하는 것인 키트.

165. 구현예 164에 있어서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 도메인을 포함하는 것인 키트.

166. 구현예 164 또는 165에 있어서, 상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB으로부터 유도된 도메인인 것인 키트.

167. 구현예 146 내지 166 중의 어느 것에 있어서, 상기 유전자 조작된 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함하는 것인 키트.

168. 구현예 167에 있어서, 상기 유전자 조작된 세포의 용량은 T 세포를 포함하는 것인 키트.

169. 구현예 167 또는 168에 있어서, 상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+인 것인 키트.

170. 구현예 167 내지 169 중의 어느 것에 있어서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포(primary T cell)인 것인 키트.

171. 구현예 141 내지 170 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 BCMA, 노치(Notch) 1, 노치 2, 노치 3, 노치 4, Muc1, 에프린 B2(Ephrin B2), 베타글리칸(Betaglycan)(TGFBR3), CD43, CD44, CSF1R, CXCR1, CXCL16, 델타1(Delta1), E-카드헤린(E-cadherin), N-카드헤린(N-cadherin), HLA-A2, IFNaR2, IL1R1, IL1R2, IL6R 또는 아멜로이드 전구체 단백질(APP)로부터 선택된 하나 이상의 표적의 절단을 억제는 것인 키트.

172. 구현예 171에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제의 상기 하나 이상의 표적은 Muc1을 포함하는 것인 키트.

173. 구현예 171에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제의 상기 하나 이상의 표적은 BCMA를 포함하는 것인 키트.

174. 구현예 141 내지 173 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 0.01 nM 내지 1μM, 0.01 nM 내지 100 nM, 0.01 nM 내지 10 nM, 0.01 nM 내지 5 nM, 0.01 nM 내지 1 nM, 0.01 nM 내지 0.5 nM, 0.01 nM 내지 0.25 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM, 0.01 nM 내지 0.05 nM, 0.05 nM 내지 1μM, 0.05 nM 내지 100 nM, 0.05 nM 내지 10 nM, 0.05 nM 내지 5 nM, 0.05 nM 내지 1 nM, 0.05 nM 내지 0.5 nM, 0.05 nM 내지 0.25 nM, 0.05 nM 내지 0.1 nM, 0.1 nM 내지 1μM, 0.1 nM 내지 100 nM, 0.1 nM 내지 10 nM, 0.1 nM 내지 5 nM, 0.1 nM 내지 1 nM, 0.1 nM 내지 0.5 nM, 0.1 nM 내지 0.25 nM, 0.25 nM 내지 1μM, 0.25 nM 내지 100 nM, 0.25 nM 내지 10 nM, 0.25 nM 내지 5 nM, 0.25 nM 내지 1 nM, 0.25 nM 내지 0.5 nM, 0.5 nM 내지 1μM, 0.5 nM 내지 100 nM, 0.5 nM 내지 10 nM, 0.5 nM 내지 5 nM, 0.5 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 1μM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 10 nM, 1 nM 내지 5 nM, 5 nM 내지 1μM, 5 nM 내지 100 nM, 5 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 1μM, 10 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 1μM의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 표적을 억제하는 것인 키트.

175. 구현예 141 내지 174 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, 1μM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.35 nM, 0.25 nM, 0.1 nM, 0.05 nM 또는 0.01 nM 미만, 또는 약 그 미만의 절반 최대 억제 농도(IC₅₀)로 표적을 억제하는 것인 키트.

176. 구현예 141 내지 175 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제 또는 비-펩티드 억제제인 것인 키트.

177. 구현예 176에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 펩티드 억제제이고 상기 펩티드 억제제는 펩티드 알데하이드 유도체, 디플루오로케톤 유도체, 하이드록시에틸렌 디펩티드 이소테레(isotere) 유도체, 알파-나선형 펩티드 유도체 및 디펩티드 유사체로부터 선택되는 것인 키트.

178. 구현예 177에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비-펩티드 억제제이고 상기 비-펩티드 억제제는 벤조디아제핀 유도체 또는 설폰아미드 유도체인 것인 키트.

179. 구현예 141 내지 178 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 전이 상태 억제제 또는 비-전이 상태 억제제인 것인 치료방법.

180. 구현예 141 내지 179 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 비스테로이드계 항-염증성 약물인 키트.

181. 구현예 141 내지 180 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는, LY3039478, 세크레타제 억제제 I(GSI I) Z-Leu-Leu-노르류신; γ-세크레타제 억제제 II(GSI II); γ-세크레타제 억제제 III(GSI III), N-벤질옥시카보닐-Leu-류시날, N-(2-나프톨릴)-Val-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IV); γ-세크레타제 억제제 III(GSI V), N-벤질옥시카보닐-Leu-페닐알라니알; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VI), l-(S)-엔도-N-(1,3,3)-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵트-2-일)-4-플루오로페닐 설폰아미드; γ-세크레타제 억제제 III(GSI VII), 멘틸옥시카보닐-LL-CHO; γ-세크레타제 억제제 III(GSI IX), (DAPT), N-[N-(3,5-디플루오로페닐아세틸-L-알라닐)]-S-페닐글리신 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 X(GSI X), {1S-벤질-4R-[1-(1S-카바모일-2-페닐에틸카바모일)-lS-3-메틸부틸카바모일]-2R-하이드록시-5-페닐펜틸}카밤산 t-부틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XI(GSI XI), 7-아미노-4-클로로-3-메톡시이소쿠마린; γ-세크레타제 억제제 XII(GSI XII), Z-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIII(GSI XIII), Z-Tyr-Ile-Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XIV(GSI XIV), Z-Cys(t-Bu)-Ile- Leu-CHO; γ-세크레타제 억제제 XVI(GSI XVI), N-[N-3,5-디플루오로페닐아세틸]-L-알라닐-S-페닐글리신 메틸 에스테르; γ-세크레타제 억제제 XVII(GSI XVII); γ-세크레타제 억제제 XIX(GSI XIX), 벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-부티르아미드; γ-세크레타제 억제제 XX(GSI XX), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)아세틸아미노]-N-(5-메틸-6-옥소-6,7-디하이드로-5H-디벤조일[b,d]아제핀-7-일)프로피온아미드; γ-세크레타제 억제제 XXI(GSI XXI), (S,S)-2-[2-(3,5-디플루오로페닐)-아세틸아미노]-N-(l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-벤조[e][l,4]디아제핀-3-일)-프로피온아미드; 감마 40 세크레타제 억제제 I, N-트랜스-3,5-디메톡시신나모일-Ile-레루시날(leucinal); 감마 40 세크레타제 억제제 II, N-t-부틸옥시카보닐-Gly-Val-발리날 이소발러릴-V V-Sta-A-Sta-OCH3; MK-0752; MRK-003(Merck); semagacestat/LY450139; RO4929097; PF-03084,014; BMS-708163; MPC-7869(γ 세크레타제 개질제), YO-01027(디벤즈아제핀), 컴파운드 E([(2S)-2-{[(3,5-디플루오로페닐)아세틸]아미노}-N-[(3S)-l-메틸-2-옥소-5-페닐-2,3-디하이드로-lH-l,4-벤조디아제핀-3-일]프로판아미드], LY411575, L-685,458, BMS-289948(4-클로로-N-(2,5-디플루오로페닐)-N-((lR)-{4-플루오로-2-[3-(lH-이미다졸-l-일)프로필]페닐}에틸)벤젠설폰아미드 하이드로클로라이드) 및 BMS-299897(4-[2-((lR)-l-{[(4-클로로페닐)설포닐]-2,5-디플루오로아닐리노}에틸)-5-플루오로페닐부타노산)으로부터 선택되는 것인 키트.

182. 구현예 141 내지 181 중의 어느 것에 있어서, 상기 감마 세크레타제 억제제는 LY3039478 또는 하기 구조식의 화합물 또는 입체이성질체 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 전술한 것 중의 임의의 수화물인 것인 키트:

183. 구현예 99 내지 182 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은 상기 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 특정하는 것인 키트.

184. 구현예 183에 있어서, 상기 질환 또는 장애는 암인 것인 키트.

185. 구현예 184에 있어서, 상기 암은 B 세포 악성 종양인 것인 키트.

186. 구현예 184에 있어서, 상기 암은 B 다발성 골수종인 것인 키트.

187. 구현예 183 내지 186 중의 어느 것에 있어서, 상기 용량은, 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 포함하거나, 상기 세포 요법은 각각 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개 또는 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 또는 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개 또는 약 1 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하되, 선택적으로 상기 지침은 하나 또는 복수의 단위 용량의 투여가 세포들의 용량을 포함하는 그러한 하나 또는 복수의 단위용량에 대응하는 세포의 용량 및/또는 부피를 포함하는 것으로 특정하는 것인, 키트.

188. 구현예 183 내지 186 중의 어느 것에 있어서, 상기 용량은, 5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 2.5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 1 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 0.5 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 1 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 0.5 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 포함하되, 선택적으로 상기 지침은 하나 또는 복수의 단위 용량의 투여가 세포들의 용량을 포함하는 그러한 하나 또는 복수의 단위용량에 대응하는 세포의 용량 및/또는 부피를 포함하는 것으로 특정하는 것인, 키트.

189. 구현예 99 내지 188 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은 상기 억제제를 경구, 피하 또는 정맥내 투여하는 것을 특정하는 것인 키트.

190. 구현예 189에 있어서, 상기 지침은 상기 억제제를 경구 투여하는 것을 특정하는 것인 키트.

191. 구현예 99 내지 190 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은 상기 억제제를 적어도 투여되거나 또는 적어도 1일 6회, 1일 5회, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 1주 3회, 1주 1회 이상, 또는 1회만 투여되는 것으로 특정하는 것인 키트.

192. 구현예 99 내지 190 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은 상기 억제제를 1주 3회 투여되는 것으로 특정하는 것인 키트.

193. 구현예 191 또는 192에 있어서, 상기 억제제의 투여는 14일 이상 또는 약 그 이상, 21일 이상 또는 약 그 이상, 또는 28일 이상 또는 약 그 이상인 치료 사이클로 수행되는 것으로 특정하는 것인 키트.

194. 구현예 99 내지 193 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은 상기 억제제의 투여를, 0.5mg 내지 500mg, 0.5mg 내지 250mg, 0.5mg 내지 100mg, 0.5mg 내지 50mg, 0.5mg 내지 25mg, 0.5mg 내지 10mg, 0.5mg 내지 5.0mg, 0.5mg 내지 2.5mg, 0.5mg 내지 1.0mg, 1.0mg 내지 500mg, 1.0mg 내지 250mg, 1.0mg 내지 100mg, 1.0mg 내지 50mg, 1.0mg 내지 25mg, 1.0mg 내지 10mg, 1.0mg 내지 5.0mg, 1.0mg 내지 2.5mg, 2.5mg 내지 500mg, 2.5mg 내지 250mg, 2.5mg 내지 100mg, 2.5mg 내지 50mg, 2.5mg 내지 25mg, 2.5mg 내지 10mg, 2.5mg 내지 5.0mg, 5.0mg 내지 500mg, 5.0mg 내지 250mg, 5.0mg 내지 100mg, 5.0mg 내지 50mg, 5.0mg 내지 25mg, 5.0mg 내지 10mg, 10mg 내지 500mg, 10 mg 내지 250mg, 10 mg 내지 100mg, 10 mg 내지 50mg, 10 mg 내지 25mg, 25mg 내지 500mg, 25mg 내지 250mg, 25mg 내지 100mg, 25mg 내지 50mg, 50mg 내지 500mg, 50mg 내지 250mg, 50mg 내지 100mg, 100mg 내지 500mg, 100mg 내지 250mg 또는 250mg 내지 500mg 의 양으로 수행하거나, 또는 상기 억제제의 투여를 상기 양으로 각각 독립적으로 수행하는 것으로 특정하는 것인 키트.

195. 구현예 99 내지 194 중의 어느 것에 있어서, 상기 지침은 상기 억제제의 투여를, 적어도 또는 적어도 약 0.5mg, 1.0mg, 2.5mg, 5.0mg, 10.0mg, 25mg, 50mg, 100mg, 250mg 또는 500mg인 양, 또는 약 상기 양으로 투여되거나, 상기 억제제의 투여는 각각 독립적으로 수행되는 것인 키트.

196. 구현예 99 내지 195 중의 어느 것의 조합물 또는 키트를 포함하는 제품.

VI. 실시예

하기 실시예는 단지 예시를 목적으로 포함되며 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다.

실시예 1: 감마 세크레타제 억제제의 존재하에 다발성 골수종(MM) 세포주 상의 BCMA의 표면 발현의 분석

다발성 골수종(MM) 세포주 상의 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 표면 수준에 대한 예시적인 감마 세크레타제 억제제(GSI), LY3039478의 효과를 분석하였다. 상기 억제제에 대한 평가된 C_max/C_min 내의 농도를 포함한, 상이한 농도의 LY3039478을 RPMI 8226 세포(BCMA^low 인간 다발성 골수종 세포주), MM1.S 세포(BCMA^med 인간 다발성 골수종 세포주) 및 OPM2 세포(BCMA^med 인간 다발성 골수종 세포주)와 함께 37℃에서 24시간동안 배양하였다. 각각의 세포주 상의 BCMA의 표면 발현을 항-BCMA 항체를 이용하여 유세포 분석(flow cytometry)에 의해서 분석하였다. 도 1에 도시된 바와 같이, LY3039478는 0.01nM 내지 0.35nM로, 상기 평가된 세포주의 표면으로부터 BCMA 절단의 강력한 억제를 성취하였다.

실시예 2: 감마 세크레타제 억제제의 존재하에 항-BCMA CAR-T 세포 기능의 분석

BCMA-발현 표적 세포에 대한 항-BCMA CAR-T 세포의 특정 기능적 활성은 예시적인 GSI LY3039478의 존재 또는 부재하에 분석되었다.

이 연구에서, 항-BCMA CAR-발현 T 세포를 생성하기 위해서, CD4 + 및 CD8 + T 세포를 2명의 건강한 공여 대상체 및 1개의 골수종 환자로부터의 백혈구 성분 채집술 샘플(leukapheresis sample)로부터의 면역 친화성-기반 농축에 의해 단리하였다. 단리된 T 세포를 활성화하고 항-BCMA CAR을 암호화하는 바이러스 벡터로 형질 도입하였다. 상기 CAR은 각각 SEQ ID NOS: 24 및 25에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 VL 도메인을 갖는 BCMA에 특이적인 scFv 항원-결합 도메인, 스페이서, SEQ ID NO: 31에 제시된 아미노산 서열을 갖는 스페이서, CD28 막통과 영역, 4-1BB 동시 자극 시그널링 영역 및 CD3-제타 유도된 세포내 시그널링 도메인을 함유하였다. 상기 CAR을 암호화하는 핵산 구조물은 자가-절단 T2A 서열에 의해서 상기 CAR 서열로부터 분리된, 형질 도입 마커로서 사용하기 위한 절단된 수용체 서열(truncated receptor sequence)을 포함하였다.

1. 세포 용해 활성

상기 본 실시예에서 기술한 바와 같이 생성된 항-BCMA CAR-T 세포를 0.3:1의 이펙터 대 표적 비율(E:T 비율)로 OPM2 또는 RPMI-8226 표적 세포 중의 어느 것으로 37℃에서 배양하였다. 0.1 nM, 1 nM, 10nM, 100nM, 1000nM, 10000nM 또는 100000 nM의 농도[평가된 인간 약동학 범위를 커버하는 상기 범위는 도 3a 내지 3d에서 박스로 표시됨]로 LY3039478의 존재하에 또는 LY3039478의 부재하에 배양물을 배양하였다. 대조군으로서, 표적 세포는 LY3039478로 배양되었지만 CAR-T 세포로 배양은 없었다. 세포 용해도 활성은 적색 형광 신호(IncuCyte(등록상표) Live Cell Analysis System, Essen Bioscience)에 의해 측정된 바와 같이 약 150 시간 후 생존가능한 표적 세포의 손실을 측정함으로써 분석되었다. 배양 기간 동안 관찰된 사멸 곡선 아래의 면적(~ 150 시간)을 측정하였다. 상기 억제제 없이 배양된 배열물로 사멸에 대한 AUC를 정규화함으로써 용해율(% 사멸률)을 결정하였다.

골수종 환자 유래 공여자로부터의 CAR-T 세포의 분석은 도 2a(OPM2) 및 도 2b(RPMI- 8226)에 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, LY3039478은, 시험된 억제제 농도에 걸친 효과의 크기는 세포주 의존성이지만, 두 세포주에서 시험된 모든 농도에서 항-BCMA CAR T 세포의 세포 용해 활성을 증가시켰다. 이 분석에서 CAR T 세포 기능에 대한 유해한 영향은 환자들에게서 관찰된 계산된 Cmax 보다 300배 높은 100μM LY3039478에서는 관찰되지 않았다. CAR-T 세포없이 LY3039478 단독의 존재하에 표적 생존에서는 차이가 관찰되지 않았다. 유사한 결과가 1:1의 E:T 비율에서 관찰되었다. 일부 공여자 대 공여자 가변성이 고관찰되었지만, LY3039478로 배양된 다른 공여자로부터 유래된 CAR-T 세포는 또한 CAR-T 기능에서 증가를 나타내었다. 이러한 결과는 감마 세크레타제 억제제의 존재하의 처치는 표면 BCMA 발현 및 항-BCMA CAR T 세포 용해 기능을 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다.

OPM2 표적 세포에 대한 항-BCMA CAR-T 세포의 세포 분해 기능에 관한 억제제에 대한 평가된 C_max/C_min 내의 농도를 비롯한 상이한 농도의 LY3039478의 효과를 추가로 평가하기 위해 유사한 연구가 수행되었다. 예시적인 공여자로부터의 도 2c에서의 결과는 LY3039478이 0.1 내지 0.25nM의 IC₅₀으로 BCMA-발현 표적 세포의 항-BCMA CAR-T 사멸을 증가시킬 수 있다는 것을 보여 주었다.

2. 사이토카인 생성

LY3039478의 존재 또는 부재하에 항-BCMA CAR-T 세포에 의한 사이토카인의 생성은 BCMA-발현 표적 세포와의 CAR-T 세포의 공배양물의 상청액에서 사이토카인 수준을 모니터링함으로써 분석되었다. 상기 본 실시예에서 기술한 바와 같이 생성된 CAR-T 세포를, 0.1 nM, 1 nM, 10nM, 100nM, 1000nM, 10000nM 또는 100000nM의 농도[평가된 인간 약동학 범위를 커버하는 상기 범위는 도 3a 내지 3d에서 박스로 표시됨]로 LY3039478의 존재하에 또는 LY3039478의 부재하에 OPM2 또는 RPMI-8226 표적 세포 중의 어느 것으로 배양하였다. 대조군으로서, 표적 세포는 LY3039478로 배양되었지만 CAR-T 세포로 배양은 없었다. 24시간 후에 배양물 상청액을 수거하고, 상기 배양물 상청액으로부터 IFNγ 및 IL-2을 측정하였다.

LY3039478의 존재는, LY3039478의 부재하에 배양된 공-배양물과 비교하여 BCMA-발현 표적 세포로 공-배양된 항-BCMA CAR T 세포의 상청액에서 IFN-감마(도 3a 및 도 3b) 및 IL-2(도 3c 및 도 3d)의 생성을 증가시켰다. 효과의 규모는 세포주들 사이에서, 일부 경우에는 상기 억제제의 농도에 따라 상이하였다. 세포 용해 기능에 관한 효과와 유사하게, 그 결과는 감마 세크레타제 억제제와의 조합이 항-BCMA CAR-T 세포에 대한 BCMA 항원 이용가능성을 증가시켜 사이토카인의 생성을 포함한 CAR-T 세포의 효과를 증가시킨다는 것을 나타냈다.

OPM2 표적 세포와 공-배양한 후 사이토카인을 생성하는 실시예 2에 기재된 바와 같이 생성된 항-BCMA CAR-T 세포의 능력에 관한 억제제에 대한 평가된 C_max/C_min 내의 농도를 포함한 상이한 농도의 LY3039478의 효과를 추가로 분석하기 위해 유사한 연구가 수행되었다. 하나의 예시적 공여자로부터의 도 3e에서의 결과는, LY3039478이 BCMA-발현 표적 세포로 배양된 항-BCMA CAR-T 세포에 의해 사이토카인 생성(0.1 내지 0.25nM의 IC50을 가짐)을 증가시킬 수 있다는 해석과 일치하였다

실시예 3 : 직렬 재자극 후 CAR-T 세포 팽장 및 사이토카인 생성에 관한 감마 세크레타제 억제제의 효과

반복된 라운드의 항원 자극 후 생체외에서 확장하는 CAR T 세포의 능력은 생체내 기능 및/또는 세포의 생체내에서 유지될 수 있는 능력과 상관될 수 있다(예를 들어 항원과의 접촉에 반응하여 투여 및 초기 활성화 후)[문헌 「Zhao et al. (2005) Cancer Cell, 28:415-28」참조]. 일련의 재자극후 CAR-T 세포 활성에 관한 예시적인 감마 세크레타제 억제제의 효과를 분석하기 위해서, 실시예 2에서 기술한 바와 같이 항-BCMA CAR+ T 세포를 생성하고, 조사된 BCMA-발현 표적 세포(MM1S 세포)를, 0.001μM(IC50 주위의 농도) 또는 1.0μM의 보다 높은 농도(대략 C_max의 3배)의 2가지 다른 농도에서, 또는 비히클만의 대조군으로 LY3039478의 존재하에 1:2의 이펙터-대-표적(E:T)의 비율로 부가하였다. 상기 분석은 건강한 공여자로부터 또는 다발성 골수종을 가진 공여자로부터 유래된 T 세포로부터 생성된 항-BCMA CAR + T 세포의 조성물에 대해 수행하였다. 3-4일마다, CAR-발현 T 세포를 수거하고, 계수하고, 동일한 농도의 LY3039478의 존재 또는 부재하에 동일한 E:T 비율로 새로 조사된 표적 세포를 함유하는 신선한 배지로 초기 시딩 밀도에서 재-플레이팅(re-plating)하였다. 10-14일의 배양 기간 동안 총 3-5 라운드의 자극이 수행되었다. T 세포 기능에 대한 억제제의 효과는 각 자극 라운드에서 수거된 상청액(도 5a 및 도 5b)에서 세포수(도 4a 및 도 4b) 또는 사이토카인 생성을 모니터링함으로써 평가되었다.

CAR-T 세포의 수는 건강한 공여자-유래 세포(도 4a) 또는 환자-유래 세포(도 4b)로부터 유래된 항-BCMA CAR+ T 세포에 대한 재-플레이팅 전에 각 라운드에서 결정되었다(도 4b). 두 공여자로부터 유래된 항-BCMA CAR+ T 세포의 경우, CAR-T 세포가 두가지 농도의 LY3039478의 존재하에 배양된 10-14일의 기간에 걸쳐서 항-BCMA CAR T 세포의 증가된 팽창이 관찰되었다(0.001μM 및 1.0μM). 상기 결과는 LY3039478이 T-세포 분화에 관여하는 노치 시그널링 경로의 공지된 억제제임에도 불구하고 CAR-T 세포 기능에 어떠한 유해한 영향도 나타내지 않았음을 의미한다. 상기 결과는 예시적인 감마 세크레타제 억제제 LY3039478이 동족 항원과의 반복된 조우(repeated encounter) 후에 지식된 CAR+ T 세포 팽창 및/또는 생존을 촉진할 수 있다는 결론과 일치하였다.

LY3039478의 존재 또는 부재하에 항원-발현 세포에 의한 재자극시 항-BCMA CAR-T 세포에 의한 사이토카인의 생성은 4일차에 제 1 라운드의 재-플레이팅 후에 분석되었다. 배양물 상청액은 재-플레이팅 후 24시간에 수거되었고, IFN-감마, IL-2 및 TNF-알파가 상기 배양물 상청액으로부터 측정되었다. 증가된 수준의 IFN-감마, IL-2 및 TNF-알파는 건강한 공여자 세포(도 5a) 또는 환자 공여자 세포(도 5b)로부터 유래된 항-BCMA CAR+ T 세포에서 두가지 농도의 LY3039478(0.001 μM 및 1.0 μM) 둘 다에서 관찰되었다.

실시예 4: 항-BCMA CAR 활성의 차단 활성에 관한 제제의 분석

각각 인간 항-BCMA scFv 항원-결합 도메인을 함유하는, 예시적인 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 생성되었다. 상기 CAR 중에는 각각 SEQ ID NOS: 22 및 23에 제시된 VH 및 VL 세트를 함유하는 항-BCMA scFv를 함유하는 것(이 실시예에서 항-BCMA.3 CAR로 언급됨), 각각 SEQ ID NOS: 24 및 25에 제시된 VH 및 VL 세트를 함유하는 항-BCMA scFv를 함유하는 것(이 실시예에서 항-BCMA.4 CAR로 언급됨), 및 각각 SEQ ID NOS: 18 및 19에 제시된 VH 및 VL 세트를 함유하는 항-BCMA scFv를 함유하는 것(이 실시예에서 항-BCMA.5 CAR로 언급됨)이 있었다. 또한, 암호화된 CAR은 SEQ ID NO: 31에 제시된 예시적인 스페이서, 인간 CD28 막통과 도메인, 인간 4-1BB-유래된 세포내 공-시그널링 서열, 및 CD3-제타 유래된 세포내 시그널링 도메인을 함유하도록 생성되었다.

이러한 CAR을 암호화하는 cDNA 클론을 다운스트림 리보솜 스킵 요소(예컨대, T2A)에 이어서 절단된 수용체-암호화 서열에 연결시키고, 렌티바이러스 발현 벡터(lentiviral expression vector)에 클로닝하였다.

항-BCMA CAR-발현 T 세포를 생성하기 위해서, 인간 공여자 대상체로부터의 백혈구 성분 채집술 샘플로부터 면역 친화성-기반 농축에 의해 T 세포를 단리하였다. 단리된 T 세포를 활성화시키고 항-BCMA CAR을 암호화하는 각각의 폴리뉴클레오티드를 함유하는 렌티바이러스 벡터로 형질 도입하고 확장시켰다: CD4+ 및 CD8+ T 세포를 염색하고(stain) 유세포 분석법으로 분석하여 항-BCMA CAR의 형질 도입 및 발현을 확인하였다. BCMA-발현 표적 세포 및 가용성 BCMA와의 배양 후 항-BCMA CAR-발현 세포의 다양한 기능을 분석하였다.

세포 용해 활성을 평가하기 위해서, 항-BCMA CAR-발현 T 세포를 0, 0.3, 3, 30 또는 300ng/mL에서 가용성 BCMA-Fc의 존재하에 5:1의 E:T 비율로 OPM2 표적 세포와 함께 배양하였다. 현미경에 의해 표적 세포를 추적할 수 있도록 표적 세포를 NucLight Red(NLR)로 라벨링하였다. 세포 용해도 활성은 적색 형광 신호(IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience 사용)에 의해 측정된 바와 같이 24 내지 72시간의 기간 동안 생존가능한 표적 세포의 손실을 측정함으로써 분석되었다. 용해율(% Lysis)을 모의 T 세포와 함께 배양된 표적 세포에서 발생하는 용해율로 정규화하였다. 항-BCMA.1-함유 CAR 또는 항-BCMA.3 CAR을 발현하는 T 세포의 세포 용해 활성은 3ng/mL 이상의 BCMA-Fc의 존재하에서 실질적으로 감소되었지만, 항-BCMA.4 CAR을 발현하는 T 세포의 세포 용해 활성은 300ng/mL 까지의 BCMA-Fc의 존재에 의해서 차단되었다.

사이토카인 생성을 평가하기 위해서, 항-BCMA CAR-발현 T 세포를 0, 111, 333 및 1000ng/mL에서 가용성 BCMA-Fc의 존재하에 5:1의 E:T 비율로 OPM2 표적 세포와 함께 배양하였다. CAR(모의)을 발현하지 않는 T 세포가 또한 평가되었다. 상청액 중의 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2의 사이토카인 축적을 분석하였다. 항-BCMA.1 CAR 또는 항-BCMA.3 CAR을 발현하는 T 세포를 함유하는 배양물에서의 사이토카인 축적은 111ng/mL 이상의 BCMA-Fc의 존재하에서 실질적으로 감소되었으나, 사이토카인 축적에서 보다 적은 감소가 시험된 모든 농도의 가용성 BCMA-Fc의 존재하에 항-BCMA.4 CAR을 발현하는 T 세포에서 관찰되었다.

또다른 실험에서, 가용성 BCMA의 존재 유무에 따른 항-BCMA.4 CAR-발현 T 세포의 활성을 분석하였다. 항-BCMA.4 CAR- 발현 T 세포를 RPMI-8226 종양 세포, 재조합 BCMA-Fc, 또는 NCI-H929 다발성 골수종 세포(BCMA-분비 세포주, 그 상청액은 가용성 BCMA를 함유함)와 함께 공-배양하였다. 종양 세포 용해 또는 사이토카인 생성은 NCI-H929 유래 가용성 BCMA(1000ng/mL 이하)의 농도에 영향을 받지 않았다. 세포 용해 및 사이토카인 생성은 둘 다 유사하게 높은 생리학적 수준의 재조합 BCMA에서 단지 최소로 감소되었다.

실시예 5: 동물 종양 모델에서 생체내 감마 세크레타제 억제제 화합물 LY3039478 및 항-BCMA CAR+ T 세포의 투여

인간 다발성 골수종 이종 이식편 모델에서 단일 용량의 LY3039478(3mg/kg)의 경구 투여 후 약동학 및 약역학 연구를 수행하였다. 구체적으로, NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgtmlWj1/SzJ(NSG) 마우스에 GFP 및 반딧불이 루시퍼라제(RPMI-8226 ffluc)를 발현하도록 변형된 1E+07 RPMI-8226 세포를 피하 주사(sc)하고 종양을 성장시켰다. RPMI-8226 주사(연구의 0일) 후 32일차에, 3mg/kg의 LY3039478의 단일 용량을 경구 투여하였다.

도 6은 약물의 혈장 수준에 대해 투여 후 0, 0.5, 2, 6, 18, 24, 36 및 48시간에 채취한 혈액 샘플의 분석을 도시한다. 도 7은 본 연구에서 단일 경구 용량의 LY3039478(3g/kg) 또는 비히클을 투여한 마우스에서 투여 후 0, 0.5, 2, 6, 18, 24, 36 및 48시간에 채취한 혈장 샘플에서 시간에 따른 혈장 BCMA 수준을 나타낸다. LY3039478 또는 비히클 대조군의 투여 후 2시간, 24시간 또는 48시간에 종양 세포를 BCMA의 표면 발현에 대해 평가하였다. 유세포 분석에 의해 평가된 바와 같이 표면 BCMA의 평균 형광 강도(MFI)가도 1에 도시되어 있다. 대안적인 다발성 골수종 종양 세포 모델에서 LY3039478의 2회 경구 투여로 투여된 0.1mg/kg 또는 1mg/kg의 투여 스케줄로 종양에서의 증가된 BCMA 발현이 확인되었다.

항-BCMA CAR T 세포 및 감마 세크레타제 억제제 화합물, LY3039478 각각의 투여 후 항종양 효과는 각각 개별적으로 및 조합하여 RPMI-8226 인간 다발성 골수종 이종 이식 마우스 모델에서 평가되었다. 실시예 2에 기재된 바와 같이 항-BCMA CAR-발현 T 세포가 생성되었다.

NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgtmlWj1/SzJ (NSG) 마우스에 GFP 및 반딧불이 루시퍼라제(RPMI-8226 ffluc)를 발현하도록 변형된 1E+07 RPMI-8226 세포를 피하 주사(sc)하고, 25일에 걸쳐서 종양 부피를 증가시켰으며, 25일째 되는 날이 본 연구에서는 0일로 명명되었다. 동물들을 8개 군으로 나누고 각각의 군든 하기 처치 중의 하나를 받았다: (1) 비히클 만, (2) LY3039478(3mg/kg)만, (3) 모의 T 세포(CAR을 발현하지 않음)(3.00E+06 T 세포/마우스) 및 비히클, (4) 모의 T 세포(3.00E+06 T 세포/마우스) 및 LY3039478(3mg/kg), (5) 항-BCMA CAR+ T 세포(1.00E+06 CAR+ 세포/마우스) 및 비히클, (6) 항-BCMA CAR+ T 세포(1.00E+06 CAR+ 세포/마우스) 및 LY3039478(3mg/kg), (7) 항-BCMA CAR+ T 세포(3.00E+06 CAR+ 세포/마우스) 및 비히클, 또는 (8) 항-BCMA CAR+ T 세포(3.00E+ 06 CAR+ 세포/마우스) 및 LY3039478(3mg/kg). 각 그룹에서 LY3039478 또는 비히클은 -1일 및 0일(0) 및 격일(e.o.d)에서 21일까지 입으로(p.o.) 전달되었다.

연구 기간 동안 매주 2회 종양 부피를 평가하였고; 상이한 그룹에 대한 결과가 도 9a에 도시되어 있다. 혈액 및 종양에서 CAR+ T 세포를 세포 표면 마커에 특이적인 항체 및 항-BCMA CAR에 특이적인 시약을 사용하여 유세포 분석에 의해서 7, 15, 21 및 28일에 평가하였다. 연구 전체에 걸쳐서 동물 생존을 모니터링하였다.

도 9a에 도시된 바와 같이, 종양은 음성 대조군 세포(Mock)의 입양 전달 후 또는 치료 받지 않은 마우스에서 연구 과정 동안 계속 성장하였다. 고용량의 항-BCMA CAR-발현 T 세포를 투여받은 마우스에서, CAR 성장 T 세포 전달 후 약 20일까지 종양 성장의 완전한 퇴행이 관찰되었고 연구의 나머지 기간 동안 지속되었으며; 저용량의 항-BCMA CAR-발현 T 세포 및 비히클을 받은 동물에서는 종양 성장의 일부 감소가 관찰되었다. 저용량의 항-BCMA CAR-발현 세포와 조합하여 LY3039478을 투여받은 동물에서, 저용량의 항-BCMA CAR-발현 세포 및 비히클로 처리된 마우스와 비교하여 종양 성장의 실질적인 감소가 관찰되었다. LY3039478 투여는 체중 및 상태 점수로 표시되는 바와 같이 연구 전체에 걸쳐서 잘 견딜 수 있었다.

연구 과정동안 동물의 생존 백분율이 도 9b에 도시되어 있다. 항-BCMA CAR- 발현 T 세포의 투여는 증가된 생존율을 결과하는 것으로 관찰되었다. 저용량의 CAR-T 세포 및 비히클로 처리된 군과 비교하여, 저용량의 항-BCMA CAR-발현 T 세포 및 GSI, LY3039478의 조합으로 처리된 마우스에서 추가의 생존 이점이 관찰되었다.

표 E1. 군별 생존
군	중간 생존 (일)	사멸 개체의 수	65일 생존율 %	65일 종양 부재 생존
비히클	22.5	10	0	NA
LY3039478	22.5	10	0	NA
Mock + 비히클	21	10	0	NA
Mock + LY3039478	22.5	7	30	2/3
항-BCMA CAR-발현 T 세포 1e6 + 비히클	60.5	5	50	5/5
항-BCMA CAR-발현 T 세포 1e6 + LY3039478	Undef	2	80	8/8
항-BCMA CAR-발현 T 세포 3e6 + 비히클	Undef	0	100	10/10
항-BCMA CAR-발현 T 세포 3e6 + LY3039478	Undef	0	100	10/10

연구 과정에 걸쳐서 혈액내 CAR+ T 세포의 존재를 모니터링하였다(CAR-T 세포 투여후 7, 14, 21 및 28일에 채혈한 혈액으로부터). 혈액 샘플로부터의 백혈구 세포를 다양한 시약으로 염색하여 T 세포를 포함하는 면역 세포 표면의 다양한 마커 및 CAR의 발현(상기 CAR에 특이적인 시약 및 상기 CAR 벡터에 의해 암호화된 형질 도입 마커에 특이적인 시약을 포함)을 검출하였다. 그 결과가 도 10a 및 10b에 도시되어 있다.

도시된 바와 같이, 그의 부재시와 비교하여 고용량 또는 저용량의 CAR-발현 T 세포의 투여 후 15일, 21일 및 28일에 말초 혈액에서 증가된 항-BCMA CAR-발현 CD4+ T 세포(도 10a) 및 항-BCMA CAR-발현 CD8+ T 세포(도 10b) 카운트가 관찰되었다. LY3039478의 존재하에, 고용량 항-BCMA CAR-발현 세포의 투여 후 약 15일에 피크 팽창이 있었고, 저용량 항-BCMA CAR-발현 T 세포의 투여후 약 21일에 피크 팽창이 있었다. LY3039478로 처리하거나 처리하지 않을 때 항-BCMA CAR을 발현하지 않은 CD4+ 또는 CD8+ T 세포에 대해서는 말초 혈액 카운트의 변화가 관찰되지 않았다.

또한, 다양한 처리 조건에 따라 종양에서 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포의 수를 결정하기 위해 종양 다이제스트를 분석하였다. 7 일 및 15 일에, 저용량의 항-BCMA CAR+ T 세포 및 LY3039478로 처리한 마우스로부터의 위성 종양 다이제스트는 저용량의 항-BCMA CAR+ T 세포 및 비히클로 처리한 마우스와 비교하여 많은 수의 CD4 + 및 CD8 + CAR + T 세포/1 x 10⁶개의 세포를 나타냈다(도 11). 평균 형광 강도(MFI)로 측정한 바와 같이, 유세포 분석법에 의한 표면 BCMA 발현을 위한 종양 다이제스트로부터의 세포의 분석은 LY3039478의 존재가 RPMI-8226 종양 세포에서 표면 BCMA MFI를 증가시킨다는 것을 보여주었다(도 12b). 혈청 BCMA는 또한 치료 조건에 따라 평가되었다. 도 12a는 각 치료 조건에 대해 7일 및 15일에 BCMA 혈청 수준을 나타낸다. 이러한 결과는 표면 BCMA의 절단을 감소시키거나 예방하는 LY3039478의 능력과 일치한다.

상기 결과는 저용량의 항 BCMA CAR T 세포와 조합된 LY3039478의 투여가 비히클 단독과 조합된 저용량의 항-BCMA CAR-발현 T 세포의 투여와 비교하여 증가된 항-종양 효과를 유도한다는 발견과 일치한다.

실시예 6: 감마 세크레타제 억제제 화합물, LY3039478의 존재하에 만성 자극 및 리-챌린지(Re-Challege) 후 항-BCMA CAR+ T 세포의 분석

장기간 CAR-특이적 자극 후 항-BCMA CAR+ T 세포의 세포 독성에 관한 감마 세크레타제 억제제 화합물 LY3039478의 효과를 평가하였다. 항-BCMA를 함유하는 실시예 2에 기재된 바와 같이 생성된 항-BCMA CAR+ T 세포 조성물을 CAR T 세포를 기능적으로 배출하도록 설계된 조건하에서 7일동안 50μg/mL의 BCMA-Fc 콘쥬게이트된 비드와 함께 배양하였다.

이어서, CAR-T 세포를 LY3039478의 존재 또는 부재하에 항원-발현 표적 세포로 리-챌린지시켰다. 구체적으로, 항-BCMA CAR-발현 T 세포를 0.3:1의 이펙터 대 표적 비율로 1μM의 LY3039478 또는 DMSO 비히클 대조군의 존재하에 다수의 골수종 세포주 RPMI-8226, OPM2 또는 MM1.S와 공동-배양하였다. 세포 용해 활성을 평가하기 위해서, 형광 현미경으로 추적할 수 있도록 표적 세포를 NucLight Red(NLR)로 라벨링하였다. 키네틱 형광 현미경법(INUCYTE® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience 사용)에 의해서 시간에 따른 형광 신호의 손실에 의해 결정되는, 시간에 따른 생존가능한 표적 세포의 손실을 측정함으로써 사멸 활성을 평가하였다. 표적 형광을 시간에 따라 모니터링하고 표적 세포수로 정규화하였다.

도 13a에 나타낸 결과는 LY3039478의 존재가 만성적으로 자극된 항-BCMA CAR+ T 세포의 세포 용해 활성을 개선시켰음을 입증하였다. 사멸 지수는 시간에 따른 표적 형광에 대한 곡선 아래 면적(AUC)의 역수로서 결정되었고, DMSO 비히클 대조군에 대해 정규화되었다. 도 13b에 도시된 바와 같이, 세포 사멸의 개선 정도는 표적 세포상의 BCMA 항원의 밀도와 관련이 있다(항원 밀도: RPMI-8226<OPM2<MM1.S).

상기 실험 또는 항-BCMA CAR+ T 세포 및 유사하지만 표적 세포를 1:1의 E:T 비율로 공동-배양한 실험에서 항-BCMA CAR-발현 T 세포 및 표적 세포의 배양 개시 24시간 후에 공동 배양물로부터 세포 배양물 상청액을 수거하였다. 수거된 상청액에서 TNF-알파, IFN-감마 및 IL-2의 생성은 Luminex Multiplex Assay를 사용하여 측정되었다. 두 E:T 비율 모두에서, GSI LY3039478의 존재는 만성적으로 자극된 항-BCMA CAR-발현 T 세포의 기능을 향상시켜서 사이토카인을 생성한다(도 13c). 사이토카인 생성에서의 개선 정도는 또한 표적 세포상의 BCMA 항원의 밀도와 상관관계가 있었다.

실시예 7: 감마 세크레타제 억제제의 존재 또는 부재에 항-BCMA CAR+ T 세포에 의한 사이토카인 생성의 분석

상이한 농도의 감마 세크레타제 억제제, LY3039478 또는 비히클(DMSO)의 존재하에 BCMA-함유 비드와 항-BCMA CAR+ T 세포의 배양 후 T 세포 기능을 나타내는 다양한 파라미터를 평가하였다. 24시간 후에 상청액을 수거하고 TNF-알파, IFN-감마 및 IL-2의 생성을 Luminex Multiplex Assay를 사용하여 측정하였다. 그 결과가 도 14에 도시되어 있다. 상기 결과는 이러한 GSI 화합물의 존재가 사이토카인 생성, CAR+ T 세포수 또는 생존력에 영향을 미치지 않는다는 결론과 일치하였다.

실시예 8: 감마 세크레타제 억제제로 치료받은 환자의 다수의 골수종 세포에서 BCMA 표면 발현의 분석

다발성 골수종을 갖는 3명의 인간 대상체에게 3개의 25mg 용량의 감마 세크레타제 억제제(GSI) LY3039478을 경구 투여하였다. 다발성 골수종 세포 표면의 절대 B 세포 성숙 항원(BCMA) 항체 결합능(ABC)을 GSI 투여 전 및 투여 직후에 각각의 환자로부터 얻은 골수 흡인물 표본(bone marrow aspirate specimens)에 대해 수행된 유세포 분석에 의해 정량화하였다. 세 번째 경구 GSI 용량, GSI 투여 후 BCMA ABC의 평균 66배 증가가 관찰되었다(도 15a). 측정가능한 표면 BCMA 발현을 갖는 것으로 결정된 환자 샘플에서 혈장 세포의 백분율은 3회 경구 투여후 GSI 전 35%(평균)에서 98.4%(평균)로 증가하는 것으로 관찰되었다(도 15b).

본 발명은 예를 들어 본 발명의 다양한 구현예를 예시할 목적으로 제공되는 특정 개시된 실시예로 그 범위가 제한되도록 의도되어서는 안된다. 기재된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본원의 설명 및 교시로부터 명백해질 것이다. 이러한 변형은 본 개시의 진정한 범위 및 사상을 벗어남이 없이 실시될 수 있으며 본 개시의 범위 내에 속하도록 의도된다.

서 열

서열 번호		서 열	설 명
1		ESKYGPPCPPCP	스페이서 (IgG4힌지) (aa) 호모 사피엔스
2		GAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCCCT	스페이서 (IgG4힌지) (nt) 호모 사피엔스
3		ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK	힌지-CH3 스페이서 호모 사피엔스
4		ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK	힌지-CH2-CH3 스페이서 호모 사피엔스
5		RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH	IgD-힌지-Fc 호모 사피엔스
6		LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR	T2A 인공
7		RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM	tEGFR인공
8		FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV	CD28 (수탁번호 P10747의 아미노산 153-179) 호모 사피엔스
9		IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV	CD28 (수탁번호 P10747의 114-179) 호모 사피엔스
10		RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS	CD28 (수탁번호 P10747의 180-220) 호모 사피엔스
11		RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS	CD28 (LL to GG) 호모 사피엔스
12		KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL	4-1BB (Q07011.1의 214-255) 호모 사피엔스
13		RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	CD3 제타 호모 사피엔스
14		RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	CD3 제타 호모 사피엔스
15		RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	CD3 제타 호모 사피엔스
16		PGGG-(SGGGG)5-P- wherein P is proline, G is glycine and S is serine	링커
17		GSADDAKKDAAKKDGKS	링커
18		QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
19		DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
20		QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSA	가변 중질 (VH) 항-BCMA
21		DVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
22		EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
23		SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLG	가변 경질 (VL) 항-BCMA
24		EVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
25		QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLG	가변 경질 (VL) 항-BCMA
26		GGGGS	링커
27		GGGS	링커
28		GGGGSGGGGSGGGGS	링커
29		GSTSGSGKPGSGEGSTKG	링커
30		SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA	링커
31		ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK	힌지-CH2-CH3 스페이서 호모 사피엔스
32		EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSKSIVSYMDYWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
33		LPVLTQPPSTSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQQLPGTAPKLVIYRNNQRPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLG	가변 경질 (VL) 항-BCMA
34		QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
35		QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLG	가변 경질 (VL) 항-BCMA
36		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
37		QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLG	가변 경질 (VL) 항-BCMA
38		ASGGGGSGGRASGGGGS	링커
39		MALPVTALLLPLALLLHAARP	CD8a 신호 펩티드
40		METDTLLLWVLLLWVPGSTG	신호 펩티드
41		EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
42		EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
43		QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
44		DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
45		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
46		EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
47		QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
48		EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
49		EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
50		EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
51		QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
52		DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
53		QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
54		DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
55		QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
56		EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
57		QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
58		LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLG	가변 경질 (VL) 항-BCMA
59		QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
60		DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
61		EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
62		DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
63		QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
64		DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
65		QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
66		DIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
67		EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
68		EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
69		QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
70		DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
71		QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
72		DIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
73		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
74		DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
75		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
76		DIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
77		QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTLDYYAIGWFRQAPGKEREGVICISRSDGSTYYADSVKGRFTISRDNAKKTVYLQMISLKPEDTAAYYCAAGADCSGYLRDYEFRGQGTQVTVSS	항-BCMA sdAb
78		IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP	CD28 스페이서
79		IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCN	CD8a TM
80		LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP	CD28 스페이서 (truncated)
81		PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD	CD8a hinge
82		TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD	CD8a hinge
83		FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD	CD8a hinge
84		DTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSD	CTLA4 hinge
85		FLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVS	CTLA4 TM
86		QIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLV	PD-1 hinge
87		VGVVGGLLGSLVLLVWVLAVI	PD-1 TM
88		GLAVSTISSFFPPGYQ	Fc(gamma)RIIIa hinge
89		EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK	IgG1 hinge
90		EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
91		EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
92		QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
93		DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
94		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
95		EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
96		QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
97		EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
98		EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
99		EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
100		QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
101		DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
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103		DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
104		QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
105		EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
106		QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
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108		SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
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110		QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
111		LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
112		SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
113		QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
114		QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
115		QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
116		DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
117		DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
118		DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAADTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSDFLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
119		DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
120		EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
121		EVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFKQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCAAWSAPTDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPRLLIYSASTLQSGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLQPEDFATYYCQQSYTSRQTFGPGTRLDIKESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
122		EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGANNIGSKSVHWYQQKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
123		SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
124		QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
125		QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
126		EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
127		QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
128		QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
129		EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
130		QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
131		QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
132		QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
133		QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
134		QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
135		DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
136		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
137		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
138		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
139		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
140		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
141		QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR	항-BCMA CAR
142		IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN	CD8a TM
143		IYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT	CD8a TM
144		RAAA	연결 펩티드
145		EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
146		QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVL	가변 경질 (VL) 항-BCMA
147		EVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFRQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCAAWSAPTDYWGQGTLVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
148		DIQMTQSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPRLLIYSASTLQSGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLQPEDFATYYCQQSYTSRQTFGPGTRLDIK	가변 경질 (VL) 항-BCMA
149		EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDIWGQGTMVTVSS	가변 중질 (VH) 항-BCMA
150		SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGANNIGSKSVHWYQQKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVL	가변 경질 (VL) 항-BCMA
151		EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSKSIVSYMDYWGQGTLVTVSS	가변 중질(VH) 항-BCMA
152		LPVLTQPPSTSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQQLPGTAPKLVIYRNNQRPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLG	가변 경질 (VL) 항-BCMA
153		MPLLLLLPLLWAGALA	CD33 신호 펩티드
154		MALPVTALLLPLALLLHA	CD8 알파 신호 펩티드
155		atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgatccca	GMCSFR 알파 사슬 신호 서열
156		MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP	GMCSFR 알파 사슬 신호 서열
157		Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro	예시적인 IgG 힌지
158		X1PPX2P X1 is glycine, cysteine or arginine X2 is cysteine or threonine	예시적인 IgG 힌지
159		Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro	예시적인 IgG 힌지
160		Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro	예시적인 IgG 힌지
161		ELKTPLGDTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP	예시적인 IgG 힌지
162		Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro	예시적인 IgG 힌지
163		Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro	예시적인 IgG 힌지
164		Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro	예시적인 IgG 힌지
165		Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro	예시적인 IgG 힌지
166		MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM	tEGFR 인공
167		EGRGSLLTCGDVEENPGP	T2A 인공
168		GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP	P2A
169		ATNFSLLKQAGDVEENPGP	P2A
170		QCTNYALLKLAGDVESNPGP	E2A
171		VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP	F2A
172		MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAGGGGSPKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK	BCMA-Fc 융합 폴리펩티드
173	DYYVY		CDR-H1
174	WINPNSGGTNYAQKFQG		CDR-H2
175	SQRDGYMDY		CDR-H3
176	GYTFIDY		CDR-H1
177	NPNSGG		CDR-H2
178	GYTFIDYYVY		CDR-H1
179	WINPNSGGTN		CDR-H2
180	GYTFIDYY		CDR-H1
181	INPNSGGT		CDR-H2
182	ARSQRDGYMDY		CDR-H3
183	TGTSSDVG		CDR-L1
184	EDSKRPS		CDR-L2
185	SSNTRSSTLV		CDR-L3
186	ISCTGTSSD		CDR-L1
187	EDS		CDR-L2
188	QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSS		항-BCMA scFv

SEQUENCE LISTING <110> Juno Therapeutics, Inc. Fred Hutchinson Cancer Research Center Green, Damian J. Riddell, Stanley R. Works, Melissa <120> COMBINATION OF A CELL THERAPY AND A GAMMA SECRETASE INHIBITOR <130> 73504-20142.40 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 62/582,308 <151> 2017-11-06 <150> US 62/582,937 <151> 2017-11-07 <150> US 62/665,450 <151> 2018-05-01 <160> 188 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) (aa) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) (nt) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 60 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 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Variable heavy (VH) Anti-BCMA <400> 43 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 44 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Variable light (VL) Anti-BCMA <400> 44 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 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Artificial Sequence <220> <223> Variable light (VL) Anti-BCMA <400> 54 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 55 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Variable heavy (VH) Anti-BCMA <400> 55 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly 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Gly Gly Ser 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val 115 120 125 Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu 130 135 140 Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val 145 150 155 160 Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp 165 170 175 Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly 180 185 190 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 195 200 205 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg 210 215 220 Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 225 230 235 240 Thr Val Ser Ser

Claims

치료방법으로서, 상기 방법은,
(a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 면역 세포의 용량을 포함하는 것인 단계; 및
(b) 상기 대상체에 하기 구조식의 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 전술한 것 중의 어느 것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 투여하는 단계
를 포함하는 것인 치료방법:
치료방법으로서, 상기 방법은 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 것을 포함하고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 면역 세포의 용량을 포함하되, 상기 세포 요법제의 투여의 개시시에, 상기 대상체는 하기 구조식의 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 전술한 것 중의 어느 것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 사전에 투여받았고/받았거나, 그것들로 치료를 수행 중인 것인 치료방법:
치료방법으로서, 상기 방법은,
질환 또는 장애를 갖는 대상체에 하기 구조식의 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 전술한 것 중의 어느 것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 투여하는 것을 포함하되,
상기 투여의 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 사전에 투여받았고/받았거나, 그것으로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 면역 세포의 용량을 포함하는 것인 치료방법:
제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
상기 화합물의 투여 개시는 상기 세포 요법제의 투여 개시전에, 그와 동시에 또는 그 후에 수행하는 것인 치료방법.
제 4 항에 있어서,
상기 화합물은 상기 세포 요법제의 투여 개시전에 투여되는 것인 치료방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 화합물의 투여 개시는 상기 세포 요법제의 투여 개시전에 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 또는 1주 이내에, 또는 약 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 이내에 수행하는 것인 치료방법.
제 6 항에 있어서,
상기 화합물은 상기 세포 요법제의 투여 개시후에 투여되는 것인 치료방법.
치료방법으로서, 상기 방법은,
(a) 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 세포 요법제를 투여하는 단계로서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 면역 세포의 용량을 포함하는 것인 단계; 및
(b) 상기 단계 (a)에서의 투여 후, 상기 대상체에 하기 구조식의 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 전술한 것 중의 어느 것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 투여하는 단계
를 포함하는 것인 치료방법:
치료방법으로서, 상기 방법은 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 화합물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 투여의 개시시에, 상기 대상체는 세포 요법제를 사전에 투여받았고/받았거나, 세포 요법제로 치료를 수행 중이고, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 면역 세포의 용량을 포함하고, 상기 화합물은 하기 구조식의 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 전술한 것 중의 어느 것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물인 것인 치료방법:
제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제 또는 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제 또는 상기 재조합 수용체는 표적 항원에 특이적으로 결합하고, 상기 화합물은 상기 표적 항원의 절단을 억제할 수 있고/있거나 상기 표적 항원은 감마 세크레타제에 의해서 절단되는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 11 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제 및/또는 상기 재조합 수용체는 BCMA에 특이적으로 결합하거나 그것을 표적화하는 것인 치료방법.
제 12 항에 있어서,
상기 세포 요법제 및/또는 상기 재조합 수용체는 혈장 세포의 표면 상에 및/또는 다발성 골수종 세포의 표면 상에 발현된 BCMA에 결합하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 11 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제 및/또는 상기 재조합 수용체는 Muc1에 특이적으로 결합하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 14 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체인 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 15 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 감마 세크레타제의 활성 또는 기능을 억제할 수 있거나 억제하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 16 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 BCMA의 막내 절단(intramembrane cleavage)을 억제하거나 또는 억제시킬 수 있는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 17 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체는, 표면 BCMA를 발현하는, 혈장 세포, 또는 혈장 세포 마커를 발현하는 골수종 세포 또는 암세포 또는 암세포를 포함하는 것인 치료방법.
제 17 항 또는 제 18 항에 있어서,
상기 대상체는, 상기 대상체에서 암의 세포가, (i) CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커(surface plasma cell marker)를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되고 (ii) 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준(threshold level) 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 포함하는 암을 갖고/갖거나;
상기 방법은 추가로, 상기 대상체에서 암의 세포가, (i) CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되고 (ii) 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 포함하는 암을 갖는 대상체를 선택하는 것을 포함하는
것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 19 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 경구, 피하 또는 정맥내 투여되는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 20 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 경구 투여되는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 21 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 적어도 투여되거나 또는 1일 6회, 1일 5회, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 1주 3회, 1주 1회 이상, 1주 2회 또는 1회만 투여되거나; 또는
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 상기 화합물 처치 기간(compound treatment period)동안 1일 6회, 1일 5회, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 1주 3회, 1주 2회, 1주 1회, 또는 1회만 투여되는
것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 22 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은, 선택적으로 상기 화합물 처치 기간 동안 격일로 투여되는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 22 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은, 선택적으로 상기 화합물 처치 기간 동안 1일 1회 이하로 투여되는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 22 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은, 선택적으로 상기 화합물 처치 기간 동안 1주 1회 내지 3회 투여되는 것인 치료방법.
제 22 항 내지 제 25 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 투여는 상기 화합물 처치 기간 동안인 것인 치료방법.
제 22 항 내지 제 26 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물 처치 기간은,
적어도 또는 적어도 약, 또는 14일이거나;
적어도 또는 적어도 약, 또는 21일이거나; 또는
적어도 또는 적어도 약, 또는 28일
인 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 27 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이 투여되거나, 또는 상기 화합물 처치 기간 동안 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 하나 이상 또는 각각의 투여는 독립적으로, 1.0mg 내지 100mg, 1.0mg 내지 50mg, 1.0mg 내지 25mg, 1.0mg 내지 10mg, 1.0mg 내지 5.0mg, 5.0mg 내지 100mg, 5.0mg 내지 50mg, 5.0mg 내지 25mg, 5.0mg 내지 10mg, 10 mg 내지 100mg, 10 mg 내지 50mg, 10 mg 내지 25mg, 25mg 내지 100mg, 25mg 내지 50mg의 양으로 투여를 포함하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 28 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이 투여되거나, 또는 상기 화합물 처치 기간 동안 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 하나 이상 또는 각각의 투여는 독립적으로, 적어도 또는 적어도 약 0.5mg, 1.0mg, 2.5mg, 5.0mg, 10.0mg, 25mg, 50mg, 100mg, 250mg 또는 500mg이거나, 또는 약 그 양으로 수행하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 29 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이 투여되거나, 또는 상기 화합물 처치 기간 동안 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 하나 이상 또는 각각의 투여는 독립적으로, 적어도 또는 적어도 약 5.0mg, 10.0mg, 15mg, 16mg, 17mg, 18mg, 19mg, 20mg, 21mg, 22mg, 23mg, 24mg, 25mg, 50mg, 또는 100mg이거나, 또는 약 그 양으로 수행하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 30 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이 투여되거나, 또는 상기 화합물 처치 기간 동안 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 하나 이상 또는 각각의 투여는 독립적으로, 적어도 또는 적어도 약 50mg이거나, 또는 약 그 양으로 수행하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 31 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이 투여되거나, 또는 상기 화합물 처치 기간 동안 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 하나 이상 또는 각각의 투여는 독립적으로, 50mg 또는 약 그 양으로 수행하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 30 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이 투여되거나, 또는 상기 화합물 처치 기간 동안 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 하나 이상 또는 각각의 투여는 독립적으로, 적어도 또는 적어도 약 25mg이거나, 또는 약 그 양으로 수행하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 30 항 및 제 33 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이 투여되거나, 또는 상기 화합물 처치 기간 동안 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 하나 이상 또는 각각의 투여는 독립적으로, 25mg 또는 약 그 양으로 수행하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 30 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물이 투여되거나, 또는 상기 화합물 처치 기간 동안 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 하나 이상 또는 각각의 투여는 독립적으로, 0.1mg/대상체의 체중 kg, 0.2mg/대상체의 체중 kg, 0.21mg/대상체의 체중 kg, 0.22mg/대상체의 체중 kg, 0.23mg/대상체의 체중 kg, 0.24mg/대상체의 체중 kg, 0.25mg/대상체의 체중 kg, 0.3mg/대상체의 체중 kg, 0.4mg/대상체의 체중 kg 또는 0.5mg/대상체의 체중 kg의 양, 또는 약 0.1mg/대상체의 체중 kg, 약 0.2mg/대상체의 체중 kg, 약 0.21mg/대상체의 체중 kg, 약 0.22mg/대상체의 체중 kg, 약 0.23mg/대상체의 체중 kg, 약 0.24mg/대상체의 체중 kg, 약 0.25mg/대상체의 체중 kg, 약 0.3mg/대상체의 체중 kg, 약 0.4mg/대상체의 체중 kg 또는 약 0.5mg/대상체의 체중 kg의 양으로 수행하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 35 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제 및/또는 재조합 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합하거나 그것을 표적화하고, 상기 화합물은 상기 표적 항원의 절단을 억제하고/하거나 상기 표적 항원의 쉐딩(shedding)을 억제하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 36 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여는,
상기 화합물의 투여 이전에 대상체 중의 세포로부터의 BCMA 절단 또는 쉐딩(shedding)의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 상기 대상체 중의 세포, 선택적으로 혈장 세포로부터의 BCMA 절단 또는 쉐딩을 감소시키고;
상기 화합물의 투여 이전에 대상체의 혈청 중의 BCMA의 수준 또는 양과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 대상체의 혈청 중에서 검출된 BCMA의 상기 수준 또는 양을 감소시키고/시키거나;
상기 화합물의 투여 이전에 대상체 중의 세포 상의 표면 BCMA의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 발현을 증가시키는
것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 36 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 상기 투여는,
상기 투여 후의 시점에서, 상기 대상체 중의 세포, 선택적으로 혈장 세포, 선택적으로 다발성 골수종 세포로부터의 BCMA 절단 또는 쉐딩에서 감소를 결과하고, 상기 감소는 상기 화합물의 투여 이전에 대상체 중의 세포로부터의 BCMA 절단 또는 쉐딩의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과, 또는 약 그 초과이되, 선택적으로 상기 시점은, 상기 투여의 개시 후 24시간, 48시간, 36시간, 또는 72시간, 또는 1주, 또는 약 그 시점이며;
상기 투여 후의 시점에서, 상기 화합물의 투여 이전에 상기 대상체의 혈청 중의 BCMA의 수준 또는 양과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과 또는 약 그 초과까지 상기 대상체의 혈청 중에서 검출 또는 측정된 BCMA의 상기 수준 또는 양을 감소시키되, 선택적으로 상기 시점은, 상기 투여의 개시 후 24시간, 48시간, 36시간, 또는 72시간, 또는 1주, 또는 약 그 시점이고/이거나;
상기 투여 후의 시점에서, 상기 화합물의 투여 이전에 대상체 중의 세포 상의 표면 BCMA의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포, 선택적으로 다발성 골수종 세포 상의 표면 BCMA의 발현을 증가시키되, 선택적으로 상기 시점은, 상기 투여의 개시 후 24시간, 48시간, 36시간, 또는 72시간, 또는 1주, 또는 약 그 시점인
것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 38 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물의 투여는,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 이전에 대상체 중의 세포로부터의 표적 또는 표적 항원의 절단 또는 쉐딩의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과까지, 또는 약 그 초과까지까지 세포, 선택적으로 혈장 세포로부터의 세포 요법제 및/또는 재조합 수용체에 의해서 특이적으로 결합된 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 절단 또는 쉐딩을 감소시키고;
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 이전에 대상체의 혈청 중의 표적 또는 표적 항원의 수준 또는 양과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과까지, 또는 약 그 초과까지 대상체의 혈청 중에서 검출된, 세포 요법제 및/또는 재조합 수용체에 의해서 특이적으로 결합된 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 수준 또는 양을 감소시키고/시키거나;
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 이전에 대상체 중의 세포 상의 표면 표적 또는 표적 항원의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과까지, 또는 약 그 초과까지 세포, 선택적으로 혈장 세포 상에서, 세포 요법제 및/또는 재조합 수용체에 의해서 특이적으로 결합된 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 발현을 증가시키는
것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 38 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물의 투여는,
상기 투여 후의 시점에서, 세포, 선택적으로 혈장 세포로부터의 세포 요법제 및/또는 재조합 수용체에 의해서 특이적으로 결합된 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 절단 또는 쉐딩에서 감소를 결과하고, 상기 감소는 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 이전에 대상체 중의 세포로부터의 상기 표적 또는 표적 항원의 절단 또는 쉐딩의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과까지, 또는 약 그 초과까지이며;
상기 투여 후의 시점에서, 상기 대상체의 혈청 중에서 검출된 상기 세포 요법제 및/또는 재조합 수용체에 의해서 특이적으로 결합된 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 수준 또는 양에서 감소를 결과하고/하거나, 상기 감소는 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 이전에 대상체의 혈청 중의 상기 표적 또는 표적 항원의 수준 또는 양과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과까지, 또는 약 그 초과까지 이며;
상기 투여 후의 시점에서, 세포, 선택적으로 혈장 세포 상에서, 상기 세포 요법제 및/또는 재조합 수용체에 의해서 특이적으로 결합된 표적 항원, 선택적으로 BCMA 또는 Muc1의 표면 발현의 증가를 결과하되, 상기 증가는 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 이전에 대상체 중의 세포 상의 표적 또는 표적 항원의 수준과 비교하여 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 이상 초과까지, 또는 약 그 초과까지인
것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 40 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 투여는 하기 구조식의 화합물의 투여를 포함하는 것인 치료방법:
제 1 항 내지 제 41 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 질환 또는 장애는 암인 것인 치료방법.
제 42 항에 있어서,
상기 암은 B 세포 악성 종양인 것인 치료방법.
제 42 항 또는 제 43 항에 있어서,
상기 암은 다발성 골수종, 형질 세포종, 형질 세포 기원의 암 및/또는 B 세포 기원의 암인 것인 치료방법.
제 42 항 또는 제 44 항에 있어서,
상기 암은 다발성 골수종인 것인 치료방법.
제 42 항 내지 제 45 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 암은 재발성 또는 불응성 암, 선택적으로 재발성 또는 치료 불응성 다발성 골수종인 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 46 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 방법은 추가로, 상기 세포 요법제의 상기 투여전에, 암을 갖거나, 또는 그의 세포가, (i) CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되고 선택적으로는, (ii) 저발현의 표면 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및/또는 역치 수준 미만의 발현 수준의 표면 BCMA를 포함하는 것인 상기 투여를 위한 대상체를 선택하는 것을 포함하는 것인 치료방법.
제 47 항에 있어서,
상기 세포 요법제 및/또는 상기 화합물을 투여받은 대상체는 상기 선택된 대상체인 것인 치료방법.
제 47 항 또는 제 48 항에 있어서,
표면 BCMA의 발현의 역치 수준은 복수의 대조용 대상체들에서 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 평균 또는 중앙값 발현 또는 수준 보다 낮으며, 선택적으로 상기 복수의 대조용 대상체들은 건강하거나 또는 정상인 대상체들의 군인 것인 치료방법.
제 47 항 내지 제 49 항 중의 어느 한 항에 있어서,
표면 BCMA의 상기 저발현은, 표면 BCMA를 발현하는 대상체에서, 혈장 세포, 또는 혈장 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만, 10% 미만 또는 약 그 미만일 때 존재하고,
표면 BCMA의 상기 역치 수준은, 표면 BCMA를 발현하는 대상체에서, 혈장 세포, 또는 혈장 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만, 10% 미만 또는 약 그 미만인
것인 치료방법.
제 47 항 내지 제 50 항 중의 어느 한 항에 있어서,
표면 BCMA의 발현은 유세포 분석(flow cytometry) 및/또는 면역 분석에 의해서 판단되는 것인 치료방법.
제 47 항 내지 제 51 항 중의 어느 한 항에 있어서,
(a) 상기 재조합 수용체, 선택적으로 키메라 항원 수용체의 상기 항원 결합 도메인의, 표적 세포의 상기 표면 상에 발현된 BCMA에 결합하는 능력, 또는 (b) 표면 BCMA를 발현하는 세포에 대한, 상기 재조합 수용체, 선택적으로 상기 키메라 항원 수용체의 기능 또는 활성을 나타내는 척도(measure)는 가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 농도 또는 양의 존재하에 감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 치료방법.
제 52 항에 있어서,
상기 농도 또는 양은, 동일하거나 또는 실질적으로 동일한 조건하에, 결합, 또는 참조 항-BCMA 재조합 수용체 또는 참조 항-BCMA 결합 도메인과 관련된 기능 또는 활성의 척도를 차단 또는 감소시킬 수 있거나 또는 실질적으로 차단 또는 감소시킬 수 있는 가용성 또는 쉐드 BCMA의 농도 또는 양이거나, 또는 생물학적 샘플 중에 존재하는 농도 또는 양인 것인 치료방법.
제 52 항에 있어서,
상기 가용성 또는 쉐드 형태의 상기 BCMA의 상기 농도 또는 양은 상기 대상체 또는 상기 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양이거나, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균인 것인 치료방법.
제 15 항 내지 제 54 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 54 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 재조합 수용체는,
각각 SEQ ID NOS: 173, 174 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 176, 177 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 178, 179 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 180, 181 및 182의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 186, 187 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역; 또는
SEQ ID NO: 24로 제시된 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 24와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_H 영역 및 SEQ ID NO: 25로 제시된 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 25와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_L 영역; 또는
SEQ ID NO: 188로 제시된 아미노산 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 188과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 scFv
를 포함하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체인 것인 치료방법.
제 56 항에 있어서,
상기 항원-결합 도메인 또는 상기 키메라 항원 수용체는 BCMA를 특이적으로 결합하는 것인 치료방법.
제 55 항 내지 제 57 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하는 것인 치료방법.
제 55 항 내지 제 58 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극(costimulatory) 시그널링 영역을 포함하는 것인 치료방법.
제 59 항에 있어서,
상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 도메인을 포함하는 것인 치료방법.
제 59 항 또는 제 60 항에 있어서,
상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB으로부터 유도된 도메인인 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 61 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체는 인간인 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 62 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 BCMA는 인간 BCMA이거나 또는 상기 표적 항원은 인간 항원인 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 63 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함하는 것인 치료방법.
제 64 항에 있어서,
상기 세포 요법제는 T 세포 요법제이고 상기 면역 세포의 용량은 T 세포를 포함하는 것인 치료방법.
제 64 항 또는 제 65 항에 있어서,
상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+인 것인 치료방법.
제 64 항 내지 제 66 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포(primary T cell)인 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 67 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제는 상기 대상체의 자가조직의(autologous) 세포를 포함하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 68 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제는 상기 대상체에 대해 동종이계의(allogeneic) 세포를 포함하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 69 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제의 투여는 각각, 1 x 10⁵개 내지 5 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵개 내지 5 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하고, 상기 세포 요법은 각각 1 x 10⁵개 내지 1 x 10⁸개 또는 약 1 x 10⁵개 내지 1 x 10⁸개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 5 x 10⁵개 내지 1 x 10⁷개 또는 약 5 x 10⁵개 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 또는 1 x 10⁶개 내지 1 x 10⁷개 또는 약 1 x 10⁶개 내지 1 x 10⁷개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하는 것인, 치료방법.
제 1 항 내지 제 70 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제의 투여는, 5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 2.5 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 PBMC; 1 x 10⁸개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 1 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 0.5 x 10⁷개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 1 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 0.5 x 10⁶개 이하의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하는 것인, 치료방법.
제 1 항 내지 제 69 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제의 투여는 각각, 2.5 x 10⁷개 내지 1.2 x 10⁹개 또는 약 2.5 x 10⁷개 내지 1.2 x 10⁹개의 CAR-발현 T 세포, 5.0 x 10⁷개 내지 4.5 x 10⁸개 또는 약 5.0 x 10⁷개 내지 4.5 x 10⁸개의 CAR-발현 T 세포, 또는 1.5 x 10⁸개 내지 3.0 x 10⁸개 또는 약 1.5 x 10⁸개 내지 3.0 x 10⁸개의 CAR-발현 T 세포를 포함하는 것인, 치료방법.
제 1 항 내지 제 69 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법제는 각각, 50 x 10⁶개 내지 450 x 10⁶개 또는 약 50 x 10⁶개 내지 450 x 10⁶개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 150 x 10⁶개 내지 450 x 10⁶개 또는 약 150 x 10⁶개 내지 450 x 10⁶개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 250 x 10⁶개 내지 450 x 10⁶개 또는 약 250 x 10⁶개 내지 450 x 10⁶개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); 또는 350 x 10⁶개 내지 450 x 10⁶개 또는 약 350 x 10⁶개 내지 450 x 10⁶개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 투여를 포함하는 것인, 치료방법.
제 1 항 내지 제 73 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 개시는 상기 세포 요법제의 투여 개시후에 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상 이내에, 또는 약 상기 기간 이내에 수행하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 74 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 억제제는,
대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 상기 세포 요법제의 세포의 수가 세포의 투여 개시후의 선행 시점에서의 대상체 중에서와 비교하여 감소되고;
혈액 중에서 검출가능한 상기 세포 요법제의 세포의 수가, 세포의 투여 개시 후 상기 대상체의 혈액 중에서 검출가능한 세포의 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 약 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 그의 피크 또는 최대수 미만이고/이거나;
상기 세포 요법제의 세포의 피크 또는 최대 수준 후의 시점에서 상기 대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 세포로부터 유도된 세포의 수가 상기 대상체의 상기 혈액 중의 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만일 때에
투여되는 것인 치료방법.
제 1 항 및 제 3 항 내지 제 75 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 상기 세포의 투여 개시후에 7일, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상까지의 상기 화합물 처치 기간 동안 투여되는 것인 치료방법.
제 27 항 또는 제 76 항에 있어서,
상기 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 상기 세포의 투여 개시후에 7일, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상까지의 상기 화합물 처치 기간 동안 3일 간격으로 투여되는 것인 치료방법.
제 27 항 또는 제 76 항에 있어서,
상기 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 상기 화합물 처치 기간 동안 1주 3회 투여되는 것인 치료방법.
제 1 항 및 제 3 항 내지 제 75 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 상기 세포의 투여 개시후에 2일, 4일, 7일, 9일, 11일, 14일, 16일, 및 18일에 투여되는 것인 치료방법.
제 1 항 및 제 3 항 내지 제 79 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 개시시 또는 투여개시 직전에 상기 질환 또는 질병상태가 재발된 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 80 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 방법은 추가로, 상기 세포 요법제의 투여전에 림프구 고갈 화학요법제(lymphodepleting chemotherapy)를 투여하는 것을 포함하고/하거나 상기 대상체는 상기 세포의 투여전에 림프구 고갈 화학 요법제를 받는 것인 치료방법.
제 81 항에 있어서,
상기 림프구 고갈 화학요법제는 상기 대상체에 플루다라빈(fludarabine) 및/또는 사이클로포스파미드(cyclophosphamide)를 투여하는 것을 포함하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 82 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 방법은 추가로, 스테로이드를 투여하는 것을 포함하고, 선택적으로 상기 스테로이드는 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여 개시전에, 그와 동시에 및/또는 그 후에 투여되고, 선택적으로 상기 스테로이드는 상기 화합물 처치 기간도중에 투여되는 것인 치료방법.
제 83에 있어서,
상기 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone)이거나 그를 포함하는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 84 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 요법은 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 부재하에서 상기 세포 요법제가 상기 대상체에 투여되는 방법과 비교하여 증가되거나 대상체에서 연장된 팽창 및/또는 지속을 나타내는 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 85 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 방법은 그에 의해서 상기 질환 또는 장애의 결과를 예방, 경감 또는 개선시키는 것인 치료방법.
조합물로서,
(a) 재조합 수용체를 발현하는 면역 세포; 및
(b) 하기 구조식의 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 전술한 것 중의 어느 것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물
을 포함하는 조합물:
제 87 항에 있어서,
상기 화합물은 BCMA의 막내 절단을 억제 또는 감소시키거나 또는 억제 또는 감소시킬 수 있는 것인 조합물.
제 87 항 또는 제 88 항에 있어서,
상기 재조합 수용체 및/또는 세포 요법제는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원을 표적화하거나 또는 그에 특이적으로 결합하는 것인 조합물.
제 87 항 내지 제 89 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 재조합 수용체 또는 세포 요법제는 BCMA를 표적화하거나 또는 그에 특이적으로 결합하는 것인 조합물.
제 90 항에 있어서,
상기 세포 요법제 또는 재조합 수용체는 혈장 세포, 선택적으로 다발성 골수종 세포의 표면 상에 발현된 BCMA에 특이적으로 결합하는 것인 조합물.
제 91 항에 있어서,
표면 BCMA에 대한 상기 재조합 항원 수용체의 결합, 또는 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 상기 재조합 수용체-발현 세포, 선택적으로 CAR-발현 세포의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 존재하에,
선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 항-BCMA 재조합 수용체를 발현하는 세포, 선택적으로 항-BCMA 재조합 수용체에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 가용성 또는 쉐드 BCMA의 농도 또는 양에서,
감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 조합물.
제 87 항 내지 제 92 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 재조합 수용체는 키메라 수용체이고, 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)인 것인 조합물.
제 93 항에 있어서,
상기 재조합 수용체는 키메라 수용체(CAR)이고 상기 키메라 항원 수용체는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 것인 조합물.
제 87 항 내지 제 94 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 재조합 수용체는,
각각 SEQ ID NOS: 173, 174 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 176, 177 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 178, 179 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 180, 181 및 182의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 186, 187 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역; 또는
SEQ ID NO: 24로 제시된 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 24와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_H 영역 및 SEQ ID NO: 25로 제시된 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 25와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_L 영역; 또는
SEQ ID NO: 188로 제시된 아미노산 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 188과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 scFv
를 포함하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체인 것인 조합물.
제 95 항에 있어서,
상기 항원-결합 도메인 또는 상기 키메라 항원 수용체는 BCMA를 특이적으로 결합하는 것인 조합물.
제 94 항 내지 제 96 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하는 것인 조합물.
제 94 항 내지 제 97 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극 시그널링 영역을 포함하는 것인 조합물.
제 98 항에 있어서,
상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 도메인을 포함하는 것인 조합물.
제 98 항 또는 제 99 항에 있어서,
상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB으로부터 유도된 도메인인 것인 조합물.
제 88 항 내지 제 100 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 BCMA는 인간 BCMA이거나 또는 상기 표적 항원은 인간 항원인 것인 조합물.
제 87 항 내지 제 101 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함하는 것인 조합물.
제 102 항에 있어서,
상기 면역 세포는 T 세포를 포함하는 것인 조합물.
제 102 항 또는 제 103 항에 있어서,
상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+인 것인 조합물.
제 102 항 내지 제 104 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포(primary T cell)인 것인 조합물.
제 87 항 내지 제 105 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포는 대상체에 투여하기 위한 약학 조성물로서 제형화되며, 선택적으로 상기 세포는 질환 또는 질환 상태를 치료하기 위한 하나 이상의 단위 용량으로 투여하기 위해 제형화되는 것인 조합물.
제 87 항 내지 제 106 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 대상체에 투여하기 위한 약학 조성물로서 제형화되며, 선택적으로 상기 화합물은 질환 또는 질환 상태를 치료하기 위한 하나 이상의 단위 용량으로 투여하기 위해 제형화되는 것인 조합물.
제 87 항 내지 제 107 항 중의 어느 한 항에 있어서,
하기 구조식의 화합물을 포함하는 것인 조합물:
제 87 항 내지 제 108 항 중의 어느 한 항의 조합물 및, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에, 면역 세포를 투여하고/하거나, 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 투여하기 위한 지침을 포함하는 키트.
제 109 항에 있어서,
상기 지침은, 상기 면역 세포의 투여 및/또는 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여가 제 1 항 내지 제 86 항 중의 어느 한 항에 따르는 것임을 특정하는 것인 키트.
제 109 항 또는 제 110 항에 있어서,
세포의 상기 표면에서 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현을 탐지하기 위한 시약, 및 암을 갖는 상기 대상체의 암 세포의 표면에서 BCMA를 탐지하기 위한 시약의 사용 결과에 기초하여 대상체에 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 투여하기 위한 지침을 추가로 포함하되, 선택적으로 상기 암세포는 CD138, 표면 CD38 또는 표면 혈장 세포 마커를 발현하거나 또는 혈장 세포로부터 유도되는 것인 키트.
제 111 항에 있어서,
상기 지침은, 상기 세포가 저발현의 표면 BCMA 및/또는 역치 수준 미만의 발현 수준의 표면 BCMA을 포함하는 경우 상기 대상체에 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 투여하는 것으로 특정하는 것인 키트.
제 112 항에 있어서,
표면 BCMA의 발현의 역치 수준은 복수의 대조용 대상체들에서 혈장 세포 상의 표면 BCMA의 평균 또는 중앙값 발현 또는 수준 보다 낮으며, 선택적으로 상기 복수의 대조용 대상체들은 건강하거나 또는 정상인 대상체들의 군인 것인 키트.
제 112 항 또는 제 113 항에 있어서,
표면 BCMA의 상기 저발현은, 표면 BCMA를 발현하는 대상체에서, 혈장 세포, 또는 혈장 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만, 10% 미만 또는 약 그 미만일 때 존재하거나, 또는
표면 BCMA의 상기 역치 수준은, 표면 BCMA를 발현하는 대상체에서, 혈장 세포, 또는 혈장 마커 또는 표현형을 갖는 세포 또는 암세포의 60% 미만 또는 약 그 미만, 50% 미만 또는 약 그 미만, 40% 미만 또는 약 그 미만, 30% 미만 또는 약 그 미만, 20% 미만 또는 약 그 미만, 10% 미만 또는 약 그 미만인
것인 키트.
제 109 항 내지 제 114 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 대한 면역 세포의 용량의 투여 개시전에, 투여 개시와 동시에 또는 투여 개시후에, 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 상기 대상체에 투여하는 것을 특정하는 것인 키트.
제 115 항에 있어서,
상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에, 상기 대상체에 대한 면역 세포의 용량의 투여 개시전에 상기 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 것으로 특정하는 것인 키트.
제 116 항에 있어서,
상기 지침은, 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 상기 세포 요법제의 투여 개시전에 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주 이내에, 또는 약 상기 기간 이내에 투여하는 것을 특정하는 것인 키트.
제 115 항에 있어서,
상기 지침은, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에, 상기 대상체에 대한 면역 세포의 용량의 투여 개시후에 상기 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 또는 그의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 것으로 특정하는 것인 키트.
키트로서,
(a) 하기 구조식의 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 전술한 것 중의 어느 것의 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물, 선택적으로 상기 화합물은 하나 이상의 단위 용량으로 제형화되는 것; 및

(b) 대상체에 세포 요법제의 투여 개시후에 대상체에 상기 화합물을 투여하기 위한 지침으로서, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 면역 세포의 용량을 포함하는 것인 지침
을 포함하는 키트.
제 119 항에 있어서,
상기 지침은, 상기 면역 세포의 투여 및/또는 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물의 투여가 제 1 항 내지 제 86 항 중의 어느 한 항에 따르는 것임을 특정하는 것인 키트.
제 109 항 내지 제 115 항 및 제 118 항 내지 제 120항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 지침은, 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물을 면역 세포의 용량의 투여 개시후에 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 14일, 21일, 28일 또는 그 이상 이내에, 또는 약 상기 기간 이내에 투여하는 것을 특정하는 것인 키트.
제 109 항 내지 제 115 항 및 제 118 항 내지 제 121 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 지침은, 상기 화합물의 투여 또는 상기 화합물의 투여 개시를,
대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 상기 세포 요법제의 세포의 수가 세포의 투여 개시후의 선행 시점에서의 대상체 중에서와 비교하여 감소되고, 선택적으로 상기 선행 시점은 상기 세포 요법제의 개시의 1주, 2주, 3주 또는 4주 이내이고;
혈액 중에서 검출가능한 상기 세포 요법제의 세포의 수가, 세포의 투여 개시 후 상기 대상체의 혈액 중에서 검출가능한 세포의 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 약 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 미만 또는 그의 피크 또는 최대수 미만이고/이거나;
상기 세포 요법제의 세포의 피크 또는 최대 수준 후의 시점에서 상기 대상체로부터의 혈액 중에서 검출가능한 세포로부터 유도된 세포의 수가 상기 대상체의 상기 혈액 중의 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만일 때에
수행하기 위한 것으로 특정하는 것인 키트.
제 109 항 내지 제 115 항 및 제 118 항 내지 제 122 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 지침은,
상기 화합물은, 상기 질환 또는 질환 상태가 상기 세포 요법제로 처치후에, 선택적으로는 객관적 반응후에 상기 대상체에서 재발하고/하거나 표적 항원의 감소 또는 손실이 상기 세포 요법제로 처치후에 상기 대상체에서 관측되는 시점에서 투여되는
것으로 특정하는 것인 키트.
제 119 항 내지 제 123 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 재조합 항원 수용체는 상기 질환 또는 장애와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 것인 키트.
제 124 항에 있어서,
상기 표적 항원은 Muc1, 선택적으로 인간 Muc1인 것인 키트.
제 124 항에 있어서,
상기 표적 항원은 BCMA, 선택적으로 인간 BCMA인 것인 키트.
제 126 항에 있어서,
표면 BCMA에 대한 상기 재조합 수용체의 결합, 또는 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후의 상기 재조합 수용체-발현 세포, 선택적으로 CAR-발현 세포의 기능 또는 활성을 나타내는 척도는, 가용성 또는 쉐드(shed) 형태의 상기 BCMA의 존재하에,
선택적으로 상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장 중에 존재하는 농도 또는 양에 대응하는 상기 가용성 또는 쉐드 형태의 BCMA의 농도 또는 양에서, 또는 상기 질환 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에서, 또는 상기 결합 또는 척도가 동일한 분석에서 항-BCMA 재조합 수용체를 발현하는 세포, 선택적으로 항-BCMA 재조합 수용체에 대해 감소 또는 차단되거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되는 가용성 또는 쉐드 BCMA의 농도 또는 양에서,
감소 또는 차단되지 않거나, 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않는 것인 키트.
제 109 항 내지 제 127 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 재조합 수용체는 키메라 수용체이고, 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)인 것인 키트.
제 128 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 시그널링 도메인을 포함하는 것인 키트.
제 109 항 내지 제 129 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 재조합 수용체는,
각각 SEQ ID NOS: 173, 174 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 176, 177 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 178, 179 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 183, 184 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역;
각각 SEQ ID NOS: 180, 181 및 182의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 포함하는 V_H 영역 및 각각 SEQ ID NOS: 186, 187 및 185의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 V_L 영역; 또는
SEQ ID NO: 24로 제시된 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 24와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_H 영역 및 SEQ ID NO: 25로 제시된 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 25와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 V_L 영역; 또는
SEQ ID NO: 188로 제시된 아미노산 서열 세트 또는 SEQ ID NO: 188과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 적어도 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 scFv
를 포함하는 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체인 것인 키트.
제 130 항에 있어서,
상기 항원-결합 도메인 또는 상기 키메라 항원 수용체는 BCMA를 특이적으로 결합하는 것인 키트.
제 129 항 내지 제 131 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 시그널링 도메인은 CD3-제타(CD3ξ) 사슬의 세포내 도메인을 포함하는 것인 키트.
제 129 항 내지 제 132 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 추가로 동시 자극 시그널링 영역을 포함하는 것인 키트.
제 133 항에 있어서,
상기 동시 자극 시그널링 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB로부터 유도된 시그널링 도메인을 포함하는 것인 키트.
제 133 항 또는 제 134 항에 있어서,
상기 동시 자극 시그널링 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB으로부터 유도된 도메인인 것인 키트.
제 109 항 내지 제 135 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포는 T 세포 또는 NK 세포를 포함하는 것인 키트.
제 136 항에 있어서,
상기 면역 세포는 T 세포를 포함하는 것인 키트.
제 136 항 또는 제 137 항에 있어서,
상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+인 것인 키트.
제 136 항 내지 제 138 항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포(primary T cell)인 것인 키트.
제 87 항 내지 제 139 항 중의 어느 한 항의 조합물 또는 키트를 포함하는 제조 제품.
제 1 항 내지 제 86 항 중의 어느 한 항의 치료방법 또는 제 87 항 내지 제 139 항 중의 어느 한 항의 조합물 또는 키트에 있어서,
상기 질환 또는 장애는 암, 선택적으로 다발성 골수종이고,
상기 세포 요법제 및 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물은 종양 부피, 종양 성장, 또는 종양 부담의 감소, 또는 생존 또는 진행-부재 생존(progression-free survival)의 증가를 결과하거나 또는 상기 대상체에서 객관적 반응 또는 완전한 반응을 결과하는 것인 치료방법 또는 조합물 또는 키트.
제 1 항 내지 제 86 항 중의 어느 한 항의 치료방법 또는 제 87 항 내지 제 139 항 중의 어느 한 항의 조합물 또는 키트에 있어서,
상기 질환 또는 장애는 암, 선택적으로 다발성 골수종이고,
상기 치료방법은, 대상체의 코흐트(cohort)에서, 종양 부피, 종양 성장, 또는 종양 부담의 감소, 또는 생존, 진행-부재 생존, 객관적 반응속도, 내구성 반응(durable response), 또는 완전한 반응의 증가를 결과하되, 상기 감소 또는 증가는, 상기 세포 요법제 또는, 상기 세포 요법제 및 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물 단독의 코호트에서 대상체로부터 결과하는 증가 또는 감소 보다 큰 것인
치료방법 또는 조합물 또는 키트.
제 1 항 내지 제 86 항 중의 어느 한 항의 치료방법 또는 제 87 항 내지 제 139 항 중의 어느 한 항의 조합물 또는 키트에 있어서,
상기 질환 또는 장애는 암, 선택적으로 다발성 골수종이고,
대상체의 코호트에서, 상기 치료방법은, 상기 세포 요법제 단독의 투여와 비교할 때 종양 부피, 종양 성장, 또는 종양 부담의 감소, 또는 상기 세포 요법제 단독의 투여와 비교할 때 생존, 진행-부재 생존, 또는 객관적 반응속도, 또는 완전한 반응, 또는 세포 요법제 활성 또는 기능을 나타내는 척도의 증가를 결과하는 것인
치료방법 또는 조합물 또는 키트.
제 143 항에 있어서,
상기 감소는, 치료가 없는 경우와 비교할 때 상기 화합물 단독의 코흐트에서 대상체에 투여한 후 종양 부피, 종양 성장, 또는 종양 부반에서의 감소보다 크거나, 또는 상기 증가는 치료가 없는 경우와 비교할 때 상기 화합물 단독의 코흐트에서 대상체에 투여한 후 생존 또는 진행-부재 생존 또는 객관적 반응 속도 또는 완전한 반응 속도보다 큰 것인 치료방법.
제 1 항 내지 제 86 항 중의 어느 한 항의 치료방법 또는 제 87 항 내지 제 139 항 중의 어느 한 항의 조합물 또는 키트에 있어서,
상기 질환 또는 질환 상태는 암, 선택적으로 다발성 골수종이고, 대상체의 코흐트에서, 상기 치료방법은 상기 세포 요법제 단독의 투여와 비교할 때 상기 암 또는 암세포 상의 BCMA의 표면 발현의 증가를 결과하는 것인 치료방법, 조합물 또는 키트.
제 1 항 내지 제 86 항 중의 어느 한 항의 치료방법 또는 제 87 항 내지 제 139 항 중의 어느 한 항의 조합물 또는 키트에 있어서,
상기 질환 또는 질환 상태는 암, 선택적으로 다발성 골수종이고, 대상체의 코흐트에서, 상기 치료방법은, 상기 코흐트의 대상체에 상기 세포 요법제 단독의 투여와 비교할 때 및/또는 상기 코흐트의 대상체에 상기 화합물 단독의 투여와 비교할 때 혈청 BCMA 수준의 감소를 결과하는 것인 치료방법, 조합물 또는 키트.
제 146 항에 있어서,
상기 세포 요법제 단독의 투여와 비교할 때 상기 감소는 치료가 없는 경우와 비교한 상기 화합물, 입체이성질체, 약학적으로 허용가능한 염 또는 수화물 단독의 투여후 상기 코흐트의 대상체에서 혈청 BCMA 수준의 감소보다 큰 것인 치료방법.