KR20210132003A - 변형된 오르토폭스 바이러스 벡터 - Google Patents

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존 씨. 벨
마이클 에스. 허
매튜 와이. 탕
애드리안 펠린
캐롤라인 제이. 브라이트바흐
마이클 에프. 버지스
스티븐 에이치. 번스타인
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오타와 하스피털 리서치 인스티튜트
턴스톤 바이오로직스 코포레이션
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Abstract

본 명세서는 변형된 오르토폭스 바이러스 벡터, 뿐만 아니라 다양한 암 치료를 위해 상기 동일한 바이러스 벡터를 이용하는 방법에 관한 것이다. 본 명세서에서는 강화된 종양용해성 활성, 감염의 확산, 면역 회피, 종양 지속성, 외인성 DNA 서열 통합 능력, 대규모 제조를 위한 편의성, 그리고 안정성을 비롯한 다양한 유익한 치료요법적 활성을 나타내는 변형된 오르토폭스 바이러스 벡터를 제공한다.

Description

변형된 오르토폭스 바이러스 벡터
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 11월 4일자로 제출된 U.S. 가특허 출원 번호 62/930,524, 2019년 7월 10일자로 제출된 U.S. 가특허 출원 번호62/872,699, 그리고 2018년 12월 21일자로 제출된 U.S. 가특허 출원 번호 62/784,372를 우선권으로 주장하며, 이의 각 내용은 이의 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
서열 목록
본 출원은 14596-051-228_SL.txt의 제목으로 된, 2019년 12월 18일자로 생성되었으며, 1,252,729 바이트 크기의 ASCII 텍스트 파일로 된 서열 목록을 본 출원과 함께 제출하며, 이는 참고자료에 편입된다.
1. 분야
본 발명은 예를 들면, 세포 증식 장애, 이를 테면, 암 치료를 위한 면역요법 분야에 관계한다. 구체적으로, 본 발명은 유전적으로 변형된 오르토폭스바이러스, 뿐만 아니라 이를 만들고 이용하는 방법에 관한 것이다.
2. 배경
면역계는 자극을 받아 종양 세포들을 식별하고, 이들을 파괴시키기 위해 이들을 표적으로 할 수 있다. 종양용해성(oncolytic) 오르토폭스바이러스를 이용하는 면역요법은 암 연구에서 빠르게 진화하는 분야다. 효율성과 안전성을 극대화하기 위해, 종양용해성 바이러스에 대한 종양-선택성을 조작하고 및/또는 향상시키기 위한 새로운 접근 방식이 필요하다. 잠재적인 독성 치료요법적 제제 또는 유전자들이 바이러스에 추가될 때, 이러한 선택성이 특히 중요하다.
오르토폭스바이러스가 임상의 종양용해성 벡터로 사용되는 것은 암 치료에 유망한 패러다임이지만, 독성, 이를 테면, 환자에서 수두 병변, 그리고 면역억제성 부작용으로 인하여, 현재 대부분의 임상적 후보물질들은 대단하지 않은 임상적 성공을 보여주었다. 더 강력한 바이러스 복제, 암 세포 사멸, 및 감염 지점으로부터의 확산을 나타내는 오르토폭스바이러스를 조작하는 방법이 여전히 필요하다. 본 발명은 변형된 오르토폭스바이러스를 이용함으로써, 선택성 및 안정성의 한계에 대한 해결책을 제공함으로써, 이 문제를 해결한다.
3. 요약
본 명세서는 오르토폭스바이러스를 이용하여 암 치료를 기술한다. 특히, 본 명세서는 오르토폭스바이러스가 다음 유전자들중 하나 또는 그 이상, 또는 모두에서 결손을 갖도록 유전적으로 변형되도록 조작될 때, 강화된 종양용해성 활성, 감염의 확산, 및 안정성을 초래한다는 결과에 일부 근거한다: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자. 유전적으로 변형된 오르토폭스바이러스, 이를 테면, 이들 유전자들중 하나 또는 그 이상, 또는 모두에서 돌연변이를 나타내는 백시니아 바이러스 (예를 들면, Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 및 WAU86/88-1 바이러스)는 유익한 속성, 이를 테면, 개선된 종양용해 능력, 종양에서 복제, 감염성, 면역 회피, 종양 지속성, 외인성 DNA 서열 통합 능력, 및/또는 대규모 제조를 위한 편의성을 나타낼 수 있다. 본 명세서는 B8R 유전자에 결손이 함유되도록 추가적으로 유전적으로 변형된 오로토폭스 바이러스를 기술한다. 다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스는 다음 세 가지 형질전환유전자들(transgenes)중 적어도 하나를 발현시킨다: 막경유 도메인을 함유하는 인터루킨 12 (IL-12-TM), FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3-L) 그리고 항-세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4) 항체.
한 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3'역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) 세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 상기 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 그리고 (d) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이고; 및/또는 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되며 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재하고), 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌(locus)로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고(즉, 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 존재하고), 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류(upstream)에 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 50% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 60% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 70% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 80% 결손이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 75% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 80% 결손이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스의 게놈으로부터 유래된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이고; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류(downstream)에 있다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이고; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이고; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 B8R 유전자내 결손 좌에 삽입된다 (즉, B8R 유전자의 좌에 존재한다).
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 부분적 B13R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B13R과 B29R 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자중 임의의 하나, 둘 또는 셋은 남아있는 B13R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다), 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다), 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다) 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재하고), 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다), 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다) 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B13R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B13R과 B29R 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 남아있는 B13R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B13R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고 (즉, 부분적 B13R과 B29R 유전자 사이에 존재한다) 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 B13R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 C2L과 F3L 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 C2L 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 F3L 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다 (즉, B8R 유전자의 좌에 존재한다).
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다 (즉, 부분적 B14R과 B29R 유전자 사이에 존재한다). 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 남아있는 B14R 백시니아 유전자의 일부분과 남아있는 B29R 백시니아 유전자의 일부분 사이에 삽입된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이고; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이고; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터이다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3'ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b)세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며; (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고 (d) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터이다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류(downstream)에 있다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터이다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이 안에 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자이다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자이다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 핵산을 포함하는 바이러스가 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 핵산 또는 바이러스를 포함하는 패키징 세포주가 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 바이러스와 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 포유류 환자의 암을 치료하는 방법이 제공되는데, 전술한 방법은 본원에서 기술된 치료요법적으로 유효량의 바이러스를 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 또다른 측면에서, 포유류 환자의 암을 치료하는 방법이 제공되는데, 전술한 방법은 본원에서 기술된 약제학적 조성물의 치료요법적으로 유효량을 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
일부 구체예들에서, 상기 바이러스는 프라임:부스트(prime:boost) 치료에서 프라임으로 이용된다. 일부 구체예들에서, 상기 바이러스는 프라임:부스트 치료에서 부스트로 이용된다.
일부 구체예들에서, 상기 포유류 환자는 암을 가지고 있다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 상기 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 상기 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉(Ewing) 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷(Burkitt) 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬(islet) 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름(Wilms) 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소(small) 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시(Kaposi) 육종, 횡문근 육종, 세자리(
Figure pct00001
) 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌(
Figure pct00002
)거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 제공된 방법은 전술한 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
일부 구체예들에서, 제공된 방법은 전술한 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 인터루킨은 막-결합된다.
일부 구체예들에서, 상기 방법은 전술한 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 제공된 방법은 전술한 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다. 일부 구체예들에서, TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 cKit로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 핵산 또는 바이러스, 그리고 해당 핵산 또는 전술한 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다.
한 측면에서, 본원에서 기술된 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 전술한 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 제공된다. 일부 구체예들에서, 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
3.1. 정의
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약(about)"은 설명되는 값보다 10 % 이상 높거나 또는 낮은 값을 지칭한다. 예를 들면, 용어 "약 5 nM"는 4.5 nM ~ 5.5 nM 범위를 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체" (Ab)는 특정 항원에 특이적으로 결합하거나, 또는 이와 면역학적으로 반응하는 면역글로불린 분자를 말하며, 그리고 다중클론성, 단일클론성, 유전적으로 공작된 항체, 그리고 그렇지 않으면 항체의 변형된 형태, 키메라 항체, 인간화된 항체, 헤테로콘쥬게이트 항체 (예를 들면, 바이-, 트리-, 및 쿼드-특이적 항체, 디아바디, 트리아바디, 그리고 테트라바디를 비롯) 그리고 항체의 항원-결합 단편들, 예를 들면, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rIgG, 그리고 scFv 단편들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 더욱이, 달리 명시되지 않는 한, 용어 "단일클론성 항체" (mAb)에는 무손상(intact) 분자, 뿐만 아니라, 항체 단편들 (이를 테면, 예를 들면, 표적 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 단편들 (이를 테면, 예를 들면, Fab 및 F(ab')2 단편들) 모두가 내포된다. Fab 단편 및 F(ab')2 단편은 무손상 항체의 Fc 단편이 없고, 동물의 순환계로부터 더 빨리 제거되고, 온전한 항체보다 비-특이적 조직 결합이 적을 수 있다 (Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:31 6, 1 983 참고; 본원에 참고자료로 편입됨).
용어 "항원-결합 단편"은 본원에서 사용된 바와 같이, 표적 항원에 특이적으로 결합하는 능력이 유지된 항체의 하나 또는 그 이상의 단편들을 지칭한다. 상기 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 특정 단편들에 의해 실행될 수 있다. 상기 항체 단편들은 Fab, F(ab')2, scFv, SMIP, 디아바디, 트리아바디, 아피바디(affibody), 나노바디(nanobody), 압타머(aptamer), 또는 도메인 항체일 수 있다. 항체의 용어 "항원-결합 단편"에 포괄된 결합 단편들의 예로는 다음이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: (i) Fab 단편, 단가 단편은 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성됨; (ii) F(ab')2 단편, 이가(bivalent) 단편은 힌지 영역에서 이황화다리에 의해 연결된 두 개의 Fab 단편을 포함; (iii) Fd 단편, VH 및 CH1 도메인으로 구성됨; (iv) Fv 단편, 항체의 단일 아암의 VL 도메인과 VH 도메인으로 구성됨, (v) VH 도메인 및 VL 도메인이 내포된 dAb; (vi) dAb 단편 (Ward et al., Nature 341 :544-546, 1 989), 이는 VH 도메인으로 구성됨; (vii) VH 도메인 또는 VL 도메인으로 구성된 dAb; (viii) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR); 그리고 (ix) 합성 링커에 의해 임의선택적으로 연결될 수 있는 두 개 또는 그 이상의 단리된 CDRs의 조합. 더욱이, Fv 단편의 두 개 도메인, VL 도메인과 VH 도메인은 별개 유전자에 의해 인코드되며, 이들은 예를 들면, 재조합 방법을 이용하여 이들을 단일 단백질 쇄로 만들 수 있는 링커에 의해 연결될 수 있고, 이때 VL 영역 및 VH 영역은 짝을 이뤄 단가(monovalent) 분자들 (단일 쇄 Fv (scFv))을 만든다. (단일-쇄 Fv (scFv)로 공지됨; 예를 들면, Bird et al., Science 242:423-426, 1988, 그리고 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988). 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적 기술을 사용하여 수득되고, 상기 단편들은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다. 항원-결합 단편들은 재조합 DNA 기술, 무손상 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 절단, 또는 일부 구체예들에서 당업계에 공지된 화학적 펩티드 합성 절차에 의해 생성될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "이중특이적 항체"란 적어도 2가지 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 가지는 단일클론성, 대개 인간 또는 인간화된 항체를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포", "세포주", 및 "세포 배양물"은 호환될 수 있다. 이 모든 용어에는 모든 후속 세대인 자손도 포함된다. 고의적이거나 또는 우연한 돌연변이로 인해 모든 자손이 동일하지 않을 수 있음을 인지해야 한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "키메라" 항체란 하나의 공급원 유기체, 이를 테면, 렛(rat) 또는 마우스의 면역글로불린으로부터 유래된 가변 서열, 그리고 상이한 유기체 (예를 들면, 인간)의 면역글로불린으로부터 유래된 불변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 키메라 항체를 만드는 방법은 당분야에 공지되어 있다. 예를 들면, Morrison, 1985, Science 229(4719): 1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191 -202; U.S. 특허 번호 5,807,715; 4,816,567; 그리고 4,816,397 참고(본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "상보성 결정 영역" (CDR)이란 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 모두에서 발견되는 초가변 영역을 의미한다. 가변 도메인의 더욱 더 보존된 부분들은 프레임워크 영역 (FRs)이라고 불린다. 당업계에서 인지되는 바와 같이, 항체의 초가변 영역을 나타내는 아미노산 위치는 문맥 및 당업계에 공지된 다양한 정의에 따라 달라질 수 있다. 가변 도메인 내의 일부 위치는 하이브리드 초가변 위치로 볼 수 있는데, 이때 이러한 위치가 한 세트의 기준 하에서 초가변 영역 내에 있는 것으로 간주되지만, 다른 기준 세트 하에서 초가변 영역 외부에 있는 것으로 간주될 수 있다. 이들 위치중 하나 또는 그 이상은 연장된 초가변 영역에서 또한 볼 수 있다. 고유의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 각각은 β-시트 형태를 주로 채택한 4 개의 프레임워크 영역, 이에 연결된 3 개의 CDRs, 이때, 이들은 루프 연결되며, 그리고 일부 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성한다. 각 쇄에서 CDRs은 FR 영역에 근접하게 유지되어, FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 순서가 되며, 다른 항체 쇄의 CDRs과 함께 항체의 표적 결합 부위 형성에 기여한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health,, Bethesda, Md. 1987; 본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 달리 명시되지 않는 한, 면역글로불린 아미노산 잔기의 번호매김은 Kabat et al.,의 면역글로불린 아미노산 잔기 번호매김 체계에 따라 진행된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "보존적 돌연변이", "보존적 치환", 또는 "보존적 아미노산 치환"이란 하나 또는 그 이상 아미노산이 유사한 물리화학적 속성, 이를 테면, 극성, 정전기적 전하, 그리고 입체 볼륨을 나타내는 하나 또는 그 이상 상이한 아미노산으로 치환되는 것을 지칭한다. 이러한 속성은 아래 표 1에서 20 개의 자연-발생적 아미노산 각각에 대해 요약되어 있다. 이 표에서 보존적 아미노산 패밀리에는 (i) G, A, V, L 및 I; (ii) D 및 E; (iii) C, S 및 T; (iv) H, K 및 R; (v) N 및 Q; 그리고 (vi) F, Y 및 W가 내포된다. 보존적 돌연변이 또는 치환은 하나의 아미노산을 동일한 아미노산 패밀리의 구성원으로 치환을 말한다(예를 들면, Thr을 Ser으로 치환 또는 Arg를 Lys으로 치환).
표 1. 자연 발생적 아미노산들의 대표적인 물리화학적 속성
Figure pct00003
Figure pct00004
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "결손되다", "결손", 및 이와 유사한 것은 유전자 또는 이와 연합된 조절 요소 또는 이에 작동가능하도록 연계된 조절 요소 (예를 들면, 전사 인자-결합 부위, 이를 테면, 프로모터 또는 인헨서 요소)에 변형을 가하여, 해당 유전자를 제거하거나, 또는 그렇지 않으면, 해당 유전자를 기능을 하지 못하게 만드는 것을 지칭한다. 본원에 기재된 바와 같은 예시적인 결손은 표적 유전자의 시작 코돈에서 중지 코돈에 이르는 관심대상 유전자를 인코딩하는 핵산 전체의 제거가 내포된다. 본원에서 기술된 결손의 다른 예로는 표적 유전자를 인코딩하는 핵산의 일부분 (예를 들면, 하나 또는 그 이상 코돈, 또는 이의 일부분, 이를 테면, 단일 뉴클레오티드 결손)의 제거가 내포되고, 이로써 이러한 부분적으로-결손된 표적 유전자의 발현 시, 해당 산물 (예를 들면, RNA 전사체, 단백질 산물, 또는 조절 RNA)은 기능을 하지 못하거나, 또는 당해 표적 유전자의 야생형보다 기능이 떨어지게 된다. 본원에서 기술된 결손의 다른 예로는 관심대상의 유전자와 연합된 조절 요소(들) 모두 또는 일부의 제거, 이를 테면, 당해 표적 유전자의 발현을 조절하는 프로모터 및/또는 인헨서 핵산의 전부 또는 일부의 제거가 내포된다.
특이적 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 다음 유전자들중 하나 또는 그 이상에서 결손을 포함한다: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R (3' ITR에서), B22R (3' ITR에서), B23R (3' ITR에서), B24R (3' ITR에서), B25R (3' ITR에서), B26R (3' ITR에서), B27R (3' ITR에서), B28R (3' ITR에서), 그리고 B29R (3' ITR에서). 특이적 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 다음 유전자들에서 3' ITR에서 결손을 포함한다: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R. 특이적 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B20R, B21R (3' ITR에서), B22R (3' ITR에서), B23R (3' ITR에서), B24R (3' ITR에서), B25R (3' ITR에서), B26R (3' ITR에서), B27R (3' ITR에서), B28R (3' ITR에서), 그리고 B29R (3' ITR에서)중 하나 또는 그 이상에서 결손을 포함하고, 그리고 또한 B8R 유전자내 결손을 또한 포함한다.
일부 구체예들에서, 유전자 결손은 당해 유전자 전체 서열을 제거한다. 다른 구체예들에서, 유전자 결손은 부분 결손, 즉, 당해 유전자의 서열 일부를 제거한다. 한 구체예에서, 유전자 결손은 당해 유전자 서열의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%를 제거하는 부분 결손이다. 한 구체예에서, 유전자 결손은 당해 유전자의 단백질 코딩 서열의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%를 제거하는 부분 결손이다. 다른 구체예들에서, 유전자 결손은 해당 유전자 서열의 100%를 제거한다. 여전히 다른 구체예들에서, 유전자 결손는 해당 유전자의 단백질 코딩 서열의 100%를 제거한다. 한 구체예에서, 유전자 결손은 해당 유전자 서열의 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 200개, 적어도 300개, 적어도 400개, 적어도 500개, 적어도 600개, 적어도 700개, 적어도 800개, 적어도 900개, 또는 적어도 1000개 뉴클레오티드를 제거한다. 또다른 구체예에서, 유전자 결손은 해당 유전자 서열의 적어도 50개, 적어도 100개, 적어도 200개, 적어도 300개, 적어도 400개, 적어도 500개, 적어도 600개, 적어도 700개, 적어도 800개, 적어도 900개, 또는 적어도 1000개 뉴클레오티드를 제거하는 부분 결손이다. 특이적 구체예에서, 유전자의 부분 결손으로 부분 유전자가 된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "유도화된(derivatized) 항체"란 단리된 항체에 잔기를 절단하거나, 또는 이에 고유하지 않은 화학적 모이어티를 추가하기 위해 화학적 반응에 의해 변형된 항체를 지칭한다. 유도화된 항체는 당화, 아세틸화, 페길화, 포스포릴화, 아미드화, 공지의 화학적 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 연계 등에 의해 획득될 수 있다. 다양한 화학적 변형 중 임의의 것을 임의의 특정 화학적 절단, 아세틸화, 포일화, 튜니카마이신의 대사 합성 등을 포함하는 공지된 기술에 의해 수행할 수 있지만, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로, 유도체는 하나 또는 그 이상의 비-천연 아미노산을 함유할 수 있는데, 예를 들면, 앰버 억제 기술 사용을 사용한다 (예를 들면, US 특허 번호 6,964,859; 본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "디아바디(diabodies)"란 두 개 폴리펩티드 쇄를 포함하는 이가 항체를 지칭하는데, 이때 각 폴리펩티드 쇄에는 VH 도메인과 VL 도메인이 내포되며, 이들 도메인은 동일한 펩티드 쇄 상에 VH 도메인과 VL 도메인의 분자내 연합을 허용하기엔 너무 짧은 링커 (예를 들면, 5개 아미노산으로 구성된 링커)에 의해 연결된다. 이 구성은 각 도메인이 다른 폴리펩티드 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 이루어 동종이량체 구조를 형성하도록 한다. 따라서, 용어 "트리아바디(triabodies)"란 3개 펩티드 쇄를 포함하는 삼가 항체를 지칭하며, 각 쇄는 하나의 VH 도메인과 하나의 VL 도메인, 이들 도메인은 동일한 펩티드 쇄 상에 VH 도메인과 VL 도메인의 분자내 연합을 허용하기엔 극도로 짧은 링커 (예를 들면, 1-2개 아미노산으로 구성된 링커)에 의해 연결된다. 고유한 구조로 폴드되기 위해, 이러한 방식으로 구성된 펩티드는 일반적으로 적절한 폴딩을 허용하기 위해, 인접한 펩티드 사슬의 VH 도메인과 VL 도메인을 서로 공간적으로 인접하게 배치되어, 삼량체화된다 (Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 1993 참고; 본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, "듀얼 가변 도메인 면역글로불린" ("DVD-Ig")이란 사가(tetravalent), 듀얼-표적화 단일 제제를 만들기 위해, 링커를 통하여 2개의 단일클론성 항체의 표적-결합 가변 도메인을 복합시키는 항체를 지칭한다. (Gu et al., Meth. Enzymol., 502:25-41, 2012; 본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "내생적(endogenous)"이란 특정 유기체 (예를 들면, 인간)에서 자연적으로 발견되거나, 또는 유기체의 특정 위치 (예를 들면, 장기, 조직, 또는 세포, 이를 테면, 인간 세포)에서 자연적으로 발견되는 분자 (예를 들면, 폴리펩티드, 핵산, 또는 공-인자)를 설명한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "외생적(exogenous)"이란 특정 유기체 (예를 들면, 인간)에서 자연적으로 발견되거나, 또는 유기체의 특정 위치 (예를 들면, 장기, 조직, 또는 세포, 이를 테면, 인간 세포)에서 자연적으로 발견되는 분자 (예를 들면, 폴리펩티드, 핵산, 또는 공-인자)를 설명한다. 외생적 물질에는 외부 공급원에서 유기체로 제공되는 물질이나 또는 그로부터 추출된 배양물질이 내포된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FW 영역"에는 CDRs에 인접해 있는 아미노산 잔기들이 내포된다. FW 영역 잔기는 그 중에서도, 예를 들면, 인간 항체, 설치류-유래된 항체 (예를 들면, 뮤린 항체), 인간화된 항체, 영장류화된 항체, 키메라 항체, 항체 단편들 (예를 들면, Fab 단편들), 단일-쇄 항체 단편들 (예를 들면, scFv 단편들), 항체 도메인, 그리고 이중특이적 항체에 존재할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "이형(hetero)특이적 항체"란 적어도 2가지 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 가지는 단일클론성, 바람직하게는 인간 또는 인간화된 항체를 지칭한다. 전형적으로, 이형특이적 항체의 재조합적 생산은 면역글로불린 두 개 중쇄-경쇄 쌍의 공동-발현에 기반을 두고, 여기에서 두 중쇄는 상이한 특이성을 갖는다 (Milstein et al., Nature 305:537, 1 983). 유사한 과정들이 예를 들면, WO 93/08829, U.S. 특허 번호 6,210,668; 6,193,967; 6,132,992; 6,106,833; 6,060,285; 6,037,453; 6,010,902; 5,989,530; 5,959,084; 5,959,083; 5,932,448; 5,833,985; 5,821,333; 5,807,706; 5,643,759, 5,601 ,819; 5,582,996, 5,496,549, 4,676,980, WO 91 /00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991), Suresh et al., Methods in Enzymology 121 :210 (1986)에 기술된다(본원에 참고자료로 편입됨). 이형특이적 항체에는 Klein et al., mAbs 4(6):653-663, 2012(본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된 바와 같이, 다중-특이적 항체에서 정확한 쇄 연합을 강제하는 Fc 돌연변이가 내포될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"란 해당 단백질의 실질적인 모든 부분 (예를 들면, CDR, 프레임워크, CL, CH 도메인 (예를 들면, CH1, CH2, CH3), 힌지, (VL, VH))은 인간에서 오로지 미미한 서열 변화 또는 변이만을 갖고, 실질적인 비-면역원성인 항체를 지칭한다. 인간 항체는 인간 세포 (예를 들면, 재조합 발현에 의해)에서 생산되거나, 또는 기능적으로 재배열된 인간 면역글로불린 (예를 들면, 중쇄 및/또는 경쇄) 유전자를 발현시킬 수 있는 비-인간 동물 또는 원핵성 세포 또는 진핵성 세포에서 생산될 수 있다. 더욱이, 인간 항체가 단일-쇄 항체일 때, 원래 인간 항체에서 볼 수 없는 링커 펩테드가 이러한 항체에 내포될 수 있다. 예를 들면, Fv는 링커 펩티드, 이를 테면, 2 내지 약 8개의 글리신 또는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있고, 이러한 링커 펩티드는 중쇄의 가변 영역과 경쇄의 가변 영역을 연결한다. 이러한 링커 펩티드는 인간 기원의 것으로 간주된다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 이용한 디스플레이 방법을 비롯하여 당분야에 공지된 다양한 방법에 의해 만들어질 수 있다. U.S. 특허 번호 4,444,887 및 4,716,111; 그리고 PCT 공개 WO 1998/46645; WO 1998/50433; WO 1998/24893; WO 1998/16654; WO 1996/34096; WO 1996/33735; 그리고 WO 1991/10741 참고(본원에 참고자료로 편입됨). 인간 항체는 기능성 내생적 면역글로불린을 발현시킬 수는 없지만, 그러나 인간 면역글로불린 유전자를 발현시킬 수 있는 트랜스제닉(transgenic) 마우스를 이용하여 또한 만들 수 있다. 예를 들면, PCT 공개 WO 98/24893; WO 92/01047; WO 96/34096; WO 96/33735; U.S. 특허 번호 5,413,923; 5,625, 126; 5,633,425; 5,569,825; 5,661,016; 5,545,806; 5,814,318; 5,885,793; 5,916,771; 그리고 5,939,598 참고(본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간화된" 항체란 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는, 비-인간 (예를 들면, 뮤린) 항체 형태를 지칭하는데, 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편들 (이를 테면, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 표적-결합 하위도메인)이다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 최소한 하나의, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 수 있는데, 이때 CDR 영역의 모든 또는 실질적으로 모든 것은 비-인간 면역글로블린에 대응한다. 모든 FR 영역 또는 실질적으로 모두는 인간 면역글로불린 서열의 것일 수도 있다. 인간화된 항체는 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린 콘센수스 서열의 적어도 일부분을 또한 포함할 수 있다. 항체 인간화 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, Riechmann et al., Nature 332:323-7, 1988; U.S. 특허 번호: 5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 그리고 6,180,370(Queen et al); EP239400; PCT 공개 WO 91/09967; U.S. 특허 번호. 5,225,539; EP592106; 그리고 EP519596 참고(본원에 참고자료로 편입됨).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단일클론성 항체"란 임의의 진핵세포, 원핵세포, 또는 파아지 클론을 비롯한 클론 또는 단일 카피로부터 유도되는 항체를 지칭하며, 그리고 이를 생산하는 방법은 아니다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "다중-특이적 항체"란 하나 이상의 표적 항원에 대한 친화력을 나타내는 항체를 지칭한다. 다중-특이적 항체는 온전한 면역글로불린 분자와 유사한 구조를 가질 수 있고, Fc 영역, 예를 들면, IgG Fc 영역이 내포된다. 이러한 구조에는 IgG-Fv, IgG-(scFv)2, DVD-Ig, (scFv)2-(scFv)2-Fc 및 (scFv)2-Fc-(scFv)2이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. IgG-(scFv)2의 경우, scFv는 중쇄 또는 경쇄의 N-말단 또는 C-말단에 부착될 수 있다. 예시적인 다중-특이적 분자는 Kontermann, 2012, mAbs 4(2):182-197, Yazaki et al., 2013, Protein Engineering, Design & Selection 26(3):1 87-1 93, 그리고 Grote et al., 2012, in Proetzel & Ebersbach (eds.), Antibody Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology vol. 901, chapter 16:247-263에 의해 검토되었다(본원에 참고자료로 편입됨). Fc 영역이 결여되어 있고, 항체 또는 항체 단편들이 통합될 수 있는 예시적인 다중-특이적 분자에는 scFv 이량체 (디아바디), 삼량체(트라이바디) 그리고 사량체 (테트라바디), Fab 이량체 (접착성 폴리펩티드 또는 단백질 도메인에 의한 콘쥬게이트) 그리고 Fab 삼량체 (화학적으로 콘쥬게이트된)는 Hudson and Souriau, 2003, Nature Medicine 9:129-134(본원에 참고자료로 편입됨)에 의해 기술된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "서열 동일성 백분율(%)"이란 참조 서열 및 후보 서열 정렬시키고, 서열 최대 동일성 백분율을 얻기 위해 갭을 도입 한 후(필요한 경우) (예를 들면, 최적의 정렬을 위해 후보 서열과 참조 서열 중 하나 또는 둘 모두에 갭이 도입될 수 있으며, 비교 목적으로 비-상동성 서열은 무시될 수 있다), 참조 서열의 아미노산 (또는 핵산) 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 (또는 핵산) 잔기의 백분율을 지칭한다. 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 BLAST, ALIGN 또는 Megalign (ONASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 방법으로 성취될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 예를 들면, 후보 서열과 비교용으로 정렬된 참조 서열은 해당 후보 서열의 전체 길이에 걸쳐 또는 해당 후보 서열의 선택된 연접 아미노산 (또는 핵산) 잔기 부분에 걸쳐 50%~100% 서열 동일성을 나타낸다. 비교 목적으로 정렬된 후보 서열의 길이는 참조 서열 길이의 예를 들면, 적어도 30%, (예를 들면, 30%, 40, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%)일 수 있다. 후보 서열의 한 위치를 참조 서열의 대응 위치에 있는 동일한 아미노산 잔기가 차지하는 경우, 이들 분자는 해당 위치에서 동일하다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "영장류화된 항체"란 영장류-유래된 항체로부터 프레임워크 영역, 그리고 다른 영역, 이를 테면, 비-영장류 공급원 항체로부터 CDRs와 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 영장류화된 항체를 만드는 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, U.S. 특허 번호 5,658,570; 5,681,722; 그리고 5,693,780(본원에 참고자료로 편입됨) 참고.
본원에서 사용된 바와 같이, 폴리뉴클레오티드 단편 맥락에서 용어 "작동가능하도록 연계된(operatively linked)"이란 두 개 폴리뉴클레오티드 단편들이 연결되어, 이들 두 폴리뉴클레오티드 단편에 의해 인코드된 아미노산 서열이 프레임-안(in-frame)에 유지된다는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "조절 요소" 및 이와 유사한 것들은 항체 쇄 유전자의 전사 또는 해독을 제어하는 프로모터, 인헨서, 그리고 다른 발현 제어 요소들 (예를 들면, 폴리아데닐화 신호)을 지칭한다. 이러한 조절 서열은 예를 들면, Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185 (Academic Press, San Diego, CA, 1990)(본원에 참고자료로 편입됨)에서 기술된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 기술된 특정 질환 또는 병태 (이를 테면, 암 또는 감염성 질환)에 대한 치료를 제공받는 유기체를 지칭한다. 대상체 및 환자의 예시에는 포유류, 이를 테면, 질환 또는 병태, 예를 들면, 세포 증식 장애, 이를 테면, 암에 대한 치료를 제공받는 인간이 내포된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "scFv"란 단일-쇄 Fv 항체로써, 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인이 연결되어 하나의 쇄를 형성한다. scFv 단편들은 항체 경쇄 (VL)의 가변 영역 (예를 들면, CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3) 그리고 항체 중쇄 (VH) (예를 들면, CDR-H1, CDR-H2, 및/또는 CDR-H3)의 가변 영역이 링커에 의해 구별되는 하나의 폴리펩티드 쇄를 함유한다. scFv 단편의 VL 영역과 VH 영역을 연결시키는 링커는 단백질성 아미노산으로 구성된 펩티드 링커일 수 있다. 대체 링커들이 이용될 수 있는데, 가령 scFv 단편이 단백질용해성 분해에 대한 저항성을 증가시키기 위해 (예를 들면, D-아미노산을 함유하는 링커), scFv 단편의 용해도를 강화시키기 위해 (예를 들면, 친수성 링커 이를 테면, 폴리에틸렌 글리콜-함유하는 링커 또는 반복되는 글리신과 세린 잔기를 함유하는 폴리펩티드), 분자의 생물물리적 안정성을 개선시키기 위해 (예를 들면, 분자-내 또는 분자-간 이황화물 결합을 형성하도록 시스테인 잔기를 함유하는 링커), 또는 scFv 단편의 면역원성을 감쇠시키기 위해 (예를 들면, 당화 부위를 함유하는 링커), 이용될 수 있다 scFv 분자 당업계에 알려져 있고, 예를 들면, US 특허 5,892,019, Flo et al., (Gene 77:51, 1989); Bird et al., (Science 242:423, 1988); Pantoliano et al., (Biochemistry 30:10117, 1991); Milenic et al., (Cancer Research 51:6363, 1991); 그리고 Takkinen et al., (Protein Engineering 4:837, 1991)에 기술되어 있다. scFv 분자의 VL 도메인과 VH 도메인은 하나 또는 그 이상 항체 분자로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 scFv 분자의 가변 영역은 이들이 유래된 항체 분자의 아미노산 서열에서 가변적이 되도록 변형될 수 있음은 당업자들이 인지할 것이다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 아미노산 잔기 (예를 들면, CDR 및/또는 프레임워크 잔기에서)에서 보존적 치환 또는 변화를 유도하는 뉴클레오티드 치환 또는 아미노산 치환이 만들어질 수 있다. 대안으로 또는 부가적으로, 당분야의 인지 기술을 이용하여 CDR 아미노산 잔기에 돌연변이를 만들어 항원 결합을 최적화시킨다. scFv 단편들은 예를 들면, WO 2011/084714(본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "~에 특이적으로 결합한다"란 예를 들어 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 특이적으로 인지되는 단백질 및 기타 생물학적 분자의 이형성 집단에서 항원의 존재를 결정하는 결합 반응을 지칭한다. 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 100 nM 미만의 KD로 항원에 결합할 수 있다. 예를 들면, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 최대 100 nM (예를 들면, 1 pM ~ 100 nM)의 KD로 항원에 결합할 수 있다. 특정 항원 또는 이의 에피토프에 대한 특이적 결합을 나타내지 않는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 해당 특정 항원 또는 이의 에피토프에 대해 100 nM (예를 들면, 500 nm 이상, 1 μΜ, 100 μΜ, 500 μΜ, 또는 1 mM)이상의 KD를 나타낼 수 있다. 다양한 면역검정법 포멧을 이용하여 특정 단백질 또는 탄수화물과의 특이적 면역반응성을 갖는 항체를 선별할 수 있다. 예를 들면, 고형-상(phase) ELISA 면역검정법은 단백질 또는 탄수화물과의 특이적 면역반응성을 갖는 항체를 선별하는데 이용된다 (특이적 면역반응성을 결정하는데 이용되는 면역검정법 포멧 및 조건에 대해 설명하는 이를 테면, Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York (1988) and Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, New York (1999) 참고).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "형질감염"이란 외생성 DNA를 원핵성 또는 진핵성 숙주 세포로 도입시키기 위해 흔히 이용되는 다양한 기술, 예를 들면, 전기천공, 리포펙션, 칼슘-인산염 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 및 이와 유사한 것들중 임의의 것을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다" 또는 "치료"란 암과 같은 세포 증식 장애의 진행과 같은 원치 않는 생리 학적 변화 또는 장애를 예방하거나 또는 지연(경감)시키는 것이 목적의 치료요법적 처치를 지칭한다. 유익한 또는 바람직한 임상 결과는 탐지가능하거나, 또는 증상의 개선, 질병의 정도의 감소, 질병 상태의 안정화 (즉, 악화되지 않음), 질병의 진행 지연 또는 둔화, 질병 상태의 개선 또는 완화, 그리고 차도(부분적으로 또는 전체적으로)를 포함할 수 있지만, 이에 국한되지는 않는다. 치료를 필요로 하는 사람들은 이미 질병, 상태 또는 장애가 있거나, 해당 상태 또는 장애에 걸릴 경향이 있는 자, 또는 상태 또는 장애를 예방해야 하는 자들을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"란 핵산 벡터, 예를 들면, DNA 벡터, 이를 테면, 플라스미드, RNA 벡터, 바이러스 또는 다른 적합한 레플리콘 (예를 들면, 바이러스 벡터)를 지칭한다. 코딩 외생성 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 원핵성 세포 또는 진핵성 세포로 전달하기 위해 다양한 벡터들이 개발되었다. 이러한 발현 벡터들의 예들이 예를 들면, WO 1994/11026(본원에 참고자료로 편입됨)에 기술되어 있다. 본 발명의 발현 벡터는 단백질의 발현 및/또는 이들 폴리뉴클레오티드 서열을 숙주 세포, 이를 테면, 포유류 세포 (예를 들면, 인간 세포)의 게놈에 통합시키기 위해 이용되는 하나 또는 그 이상의 추가 서열 요소들을 함유할 수 있다. 본원에 기술된 항체 및 항체 단편들의 발현에 이용될 수 있는 예시적인 벡터에는 유전사의 전사를 지시하는 조절 서열, 이를 테면, 프로모터 및 인헨서 영역을 함유하는 플라스미드가 내포된다. 벡터는 표적 유전자의 해독율을 조절하는, 또는 유전자 전사로 인한 mRNA의 안정성 또는 이의 핵 이출(export)을 개선시키는 핵산을 함유할 수 있다 . 이들 서열 요소에는 해당 발현 벡터가 휴대하는 유전자의 효과적인 전사를 지시하기 위해 예를 들면, 5' 및 3' 미해독 영역, 내부 리보좀 진입 부위 (IRES), 그리고 폴리아데닐화 신호생성 부위가 내포될 수 있다. 본원에 기술된 벡터는 이러한 벡터를 함유하는 세포의 선별용 마커를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 또한 함유할 수 있다. 적합한 마커의 예로는 항생제, 이를 테면, 암피실린, 클로람페니콜, 카나마이신, 또는 나우르세오트리친(nourseothricin)에 대한 내성을 인코드하는 유전자들이 내포된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "VH"는 Fv, scFv, 또는 Fab의 중쇄를 비롯한 항체의 면역글로불린 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. "VL"에 대한 언급은 Fv, scFv, dsFv 또는 Fab의 경쇄를 비롯한 면역글로불린 경쇄의 가변 영역을 지칭한다. 항체들 (Abs) 그리고 면역글로불린 (Igs)은 동일한 구조적 특징을 갖는 당단백질이다. 특이적 표적에 대한 결합 특이성을 나타내며, 면역글로불린에는 항체 및 표적 특이성이 결여된 항체 및 기타 항체-유사 분자들이 모두 내포된다. 고유 항체들과 면역글로불린은 통상 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질로써, 2개의 동일한 경쇄 (L)와 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된다. 고유 항체의 각 중쇄는 아미노 말단에 가변 도메인 (VH)과 이어서 몇 개의 불변 도메인을 갖는다. 고유 항체의 각 경쇄는 아미노 말단에 가변 도메인 (VL)과 카르복시 말단에 불변 도메인을 갖는다.
3.2. 유전자 정의
본원에서 사용된 바와 같이, "B8R"는 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 감마 인터페론 (IFN-γ) 수용체에 상동성인 분비된 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B8R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21004로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 비-제한적 예들이 하기에서 재현된다: MRYIIILAVLFINSIHAKITSYKFESVNFDSKIEWTGDGLYNISLKNYGIKTWQTMYTNVPEGTYDISAFPKNDFVSFWVKFEQGDYKVEEYCTGLCVEVKIGPPTVTLTEYDDHINLYIEHPYATRGSKKIPIYKRGDMCDIYLLYTANFTFGDSEEPVTYDIDDYDCTSTGCSIDFATTEKVCVTAQGATEGFLEKITPWSSEVCLTPKKNVYTCAIRSKEDVPNFKDKMARVIKRKFNKQSQSYLTKFLGSTSNDVTTFLSMLNLTKYS (서열 식별 번호: 1).
용어 "B8R"에는 상기 열거된 단백질의 단편들 또는 변이체들, 또는 또다른 백시니아 바이러스 균주의 상동성 유전자들이 내포될 수도 있다. 변이체들에는 본원에서 기술된 서열에 대해 85% 또는 그 이상의 동일성을 갖는 서열들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "B14R" 이란 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B14R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20842로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MNHCLLAISAVYFKAKWLTPFEKEFTSDYPFYVSPTEMVDVSMMSMYGELFNHASVKESFGNFSIIELPYVGDTSMMVILPDKIDGLESIEQNLTDTNFKKWCNSLDAMFIDVHIPKFKVTGSYNLVDTLVKSGLTEVFGSTGDYSNMCNLDVSVDAMIHKTYIDVNEEYTEAAAATCALVSDCASTITNEFCVDHPFIYVIRHVDGKILFVGRYCSPTTNC (서열 식별 번호: 2).
본원에서 사용된 바와 같이, "B15R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B15R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21089로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MTANFSTHVFSPQHCGCDRLTSIDDVKQCLTEYIYWSSYAYRNRQCAGQLYSTLLSFRDDAELVFIDIRELVKNMPWDDVKDCTEIIRCYIPDEQKTIREISAIIGLCAYAATYWGGEDHPTSNSLNALFVMLEMLNYVDYNIIFRRMN (서열 식별 번호: 3).
본원에서 사용된 바와 같이, "B16R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, IL-1-베타 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B16R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21116으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다: MSILPVIFLP IFFYSSFVQT FNASECIDKG (서열 식별 번호: 4).
본원에서 사용된 바와 같이, "B17L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B17L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21075로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MSRKFMQVYEYDREQYLDEFIEDRYNDSFITSPEYYSAEKYMCRYTTLNHNCVNVRRCALDSKLLHDIITNCKIYNNIELVRATKFVYYLDLIKCNWVSKVGDSVLYPVIFITHTSTRNLDKVSVKTYKGVKVKKLNRCADHAIVINPFVKFKLTLPNKTSHAKVLVTFCKLRTDITPVEAPLPGNVLVYTFPDINKRIPGYIHVNIEGCIDGMIYINSSKFACVLKLHRSMYRIPPFPIDICSCCSQYTNDDIEIPIHDLIKDVAIFKNKETVYYLKLNNKTIARFTYFNNIDTAITQEHEYVKIALGIVCKLMINNMHSIVGVNHSNTFVNCLLEDNV (서열 식별 번호: 5).
본원에서 사용된 바와 같이, "B18R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B18R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21076으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MSRRLIYVLNINRKSTHKIQENEIYTYFSHCNIDHTSTELDFVVKNYDLNRRQHVTGYTALHCYLYNNYFTNDVLKILLNHDVNVTMKTSSGRMPVYILLTRCCNISHDVVIDMIDKDKNHLSHRDYSNLLLEYIKSRYMLLKEEDIDENIVSTLLDKGIDPNFKQDGYTALHYYYLCLAHVYKPGECRKPITIKKAKRIISLFIQHGANLNALDNCGNTPFHLYLSIEMCNNIHMTKMLLTFNPNFKICNNHGLTPILCYITSDYIQHDILVMLIHHYETNVGEMPIDERRMIVFEFIKTYSTRPADSITYLMNRFKNINIYTRYEGKTLLHVACEYNNTQVIDYLIRINGDINALTDNNKHATQLIIDNKENSPYTINCLLYILRYIVDKNVIRSLVDQLPSLPIFDIKSFEKFISYCILLDDTFYDRHVKNRDSKTYRYAFSKYMSFDKYDGIITKCHDETMLLKLSTVLDTTLYAVLRCHNSRKLRRYLTELKKYNNDKSFKIYSNIMNERYLNVYYKDMYVSKVYDKLFPVFTDKNCLLTLLPSEIIYEILYMLTINDLYNISYPPTKV (서열 식별 번호: 6).
본원에서 사용된 바와 같이, "B19R"는 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, IFN-알파-베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B19R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21077로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MTMKMMVHIYFVSLSLLLLLFHSYAIDIENEITEFFNKMRDTLPAKDSKWLNPACMFGGTMNDMATLGEPFSAKCPPIEDSLLSHRYKDYVVKWERLEKNRRRQVSNKRVKHGDLWIANYTSKFSNRRYLCTVTTKNGDCVQGIVRSHIKKPPSCIPKTYELGTHDKYGIDLYCGILYAKHYNNITWYKDNKEINIDDIKYSQTGKELIIHNPELEDSGRYDCYVHYDDVRIKNDIVVSRCKILTVIPSQDHRFKLILDPKINVTIGEPANITCTAVSTSLLIDDVLIEWENPSGWLIGFDFDVYSVLTSRGGITEATLYFENVTEEYIGNTYKCRGHNYYFEKTLTTTVVLE (서열 식별 번호: 7).
본원에서 사용된 바와 같이, "B20R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 B20R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21078로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다: MDEDTRLSRYLYLTDREHINVDSIKQLCKISDPNACYRCGCTALHEYFYNYRSVNGKYKYRYNGYYQYYSSSDYENYNEYYYDDYDRTGMNSESDSESDNISIKTEYENEYEFYDETQDQSTQHNDL (서열 식별 번호: 8).
본원에서 사용된 바와 같이, "C1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 C1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21036으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MVKNNKISNSCRMIMSTNPNNILMRHLKNLTDDEFKCIIHRSSDFLYLSDSDYTSITKET
LVSEIVEEYPDDCNKILAIIFLVLDKDIDVDIETKLKPKPAVRFAILDKMTEDIKLTDLV
RHYFRYIEQDIPLGPLFKKIDSYRTRAINKYSKELGLATEYFNKYGHLMFYTLPIPYNRF
FCRNSIGFLAVLSPTIGHVKAFYKFIEYVSIDDRRKFKKELMSK (서열 식별 번호: 9).
본원에서 사용된 바와 같이, "C2L" refers to an 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 세포외 매트릭스에 대한 칼슘-독립성 흡착에 영향을 주는 kelch-유사 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 C2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21037로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MESVIFSINGEIIQVNKEIITASPYNFFKRIQDHHLKDEAIILNGINYHAFESLLDYMRWKKINITINNVEMILVAAVIIDVPPVVDLCVKTMIHNINSTNCIRMFNFSKRYGIKKLYNASMSEIINNITAVTSDPEFGKLSKDELTTILSHEDVNVNHEDVTAMILLKWIHKNPNDVDIINILHPKFMTNTMRNAISLLGLTISKSTKPVTRNGIKHNIVVIKNSDYISTITHYSPRTEYWTIVGNTDRQFYNANVLHNCLYIIGGMINNRHVYSVSRVDLETKKWKTVTNMSSLKSEVSTCVNDGKLYVIGGLEFSISTGVAEYLKHGTSKWIRLPNLITPRYSGASVFVNDDIYVMGGVYTTYEKYVVLNDVECFTKNRWIKKSPMPRHHSIVYAVEYDGDIYVITGITHETRNYLYKYIVKEDKWIELYMYFNHVGKMFVCSCGDYILIIADAKYEYYPKSNTWNLFDMSTRNIEYYDMFTKDETPKCNVTHKSLPSFLSNCEKQFLQ (서열 식별 번호: 10).
본원에서 사용된 바와 같이, "F1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 카스파제-9 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 F1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P68450으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MLSMFMCNNIVDYVDDIDNGIVQDIEDEASNNVDHDYVYPLPENMVYRFDKSTNILDYLSTERDHVMMAVRYYMSKQRLDDLYRQLPTKTRSYIDIINIYCDKVSNDYNRDMNIMYDMASTKSFTVYDINNEVNTILMDNKGLGVRLATISFITELGRRCMNPVKTIKMFTLLSHTICDDCFVDYITDISPPDNTIPNTSTREYLKLIGITAIMFATYKTLKYMIG (서열 식별 번호: 11).
본원에서 사용된 바와 같이, "F2L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 데옥시우리딘 트리포스파타제 (dUTPase)를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 F2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P68634로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MFNMNINSPVRFVKETNRAKSPTRQSPGAAGYDLYSAYDYTIPPGERQLIKTDISMSMPKICYGRIAPRSGLSLKGIDIGGGVIDEDYRGNIGVILINNGKCTFNVNTGDRIAQLIYQRIYYPELEEVQSLDSTNRGDQGFGSTGLR (서열 식별 번호: 12).
본원에서 사용된 바와 같이, "F3L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 선천적 면역 반응 개질제이며, 독성(virulence) 인자인 kelch-유사 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 F3L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21013으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MPIFVNTVYCKNILALSMTKKFKTIIDAIGGNIIVNSTILKKLSPYFRTHLRQKYTKNKDPVTRVCLDLDIHSLTSIVIYSYTGKVYIDSHNVVNLLRASILTSVEFIIYTCINFILRDFRKEYCVECYMMGIEYGLSNLLCHTKNFIAKHFLELEDDIIDNFDYLSMKLILESDELNVPDEDYVVDFVIKWYIKRRNKLGNLLLLIKNVIRSNYLSPRGINNVKWILDCTKIFHCDKQPRKSYKYPFIEYPMNMDQIIDIFHMCTSTHVGEVVYLIGGWMNNEIHNNAIAVNYISNNWIPIPPMNSPRLYATGIPANNKLYVVGGLPNPTSVERWFHGDAAWVNMPSLLKPRCNPAVASINNVIYVMGGHSETDTTTEYLLPNHDQWQFGPSTYYPHYKSCALVFGRRLFLVGRNAEFYCESSNTWTLIDDPIYPRDNPELIIVDNKLLLIGGFYRGSYIDTIEVYNHHTYSWNIWDGK (서열 식별 번호: 13).
본원에서 사용된 바와 같이, "K1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, NF-κB 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20632로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MDLSRINTWKSKQLKSFLSSKDTFKADVHGHSALYYAIADNNVRLVCTLLNAGALKNLLENEFPLHQAATLEDTKIVKILLFSGMDDSQFDDKGNTALYYAVDSGNMQTVKLFVKKNWRLMFYGKTGWKTSFYHAVMLNDVSIVSYFLSEIPSTFDLAILLSCIHTTIKNGHVDMMILLLDYMTSTNTNNSLLFIPDIKLAIDNKDIEMLQALFKYDINIYSVNLENVLLDDAEITKMIIEKHVEYKSDSYTKDLDIVKNNKLDEIISKNKELRLMYVNCVKKN (서열 식별 번호: 14).
본원에서 사용된 바와 같이, "K2L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 세포 융합을 방해하는 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20532로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MIALLILSLTCSVSTYRLQGFTNAGIVAYKNIQDDNIVFSPFGYSFSMFMSLLPASGNTRIELLKTMDLRKRDLGPAFTELISGLAKLKTSKYTYTDLTYQSFVDNTVCIKPLYYQQYHRFGLYRLNFRRDAVNKINSIVERRSGMSNVVDSNMLDNNTLWAIINTIYFKGTWQYPFDITKTRNASFTNKYGTKTVPMMNVVTKLQGNTITIDDEEYDMVRLPYKDANISMYLAIGDNMTHFTDSITAAKLDYWSFQLGNKVYNLKLPKFSIENKRDIKSIAEMMAPSMFNPDNASFKHMTRDPLYIYKMFQNAKIDVDEQGTVAEASTIMVATARSSPEKLEFNTPFVFIIRHDITGFILFMGKVESP (서열 식별 번호: 15).
본원에서 사용된 바와 같이, "K3L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, PKR 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K3L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20639로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MLAFCYSLPNAGDVIKGRVYEKDYALYIYLFDYPHSEAILAESVKMHMDRYVEYRDKLVGKTVKVKVIRVDYTKGYIDVNYKRMCRHQ (서열 식별 번호: 16).
본원에서 사용된 바와 같이, "K4L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, DNA 변형 뉴클레아제 (예를 들면, DNA 니킹(nicking) 효소)를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K4L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20537로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MNPDNTIAVITETIPIGMQFDKVYLSTFNMWREILSNTTKTLDISSFYWSLSDEVGTNFGTIILNEIVQLPKRGVRVRVAVNKSNKPLKDVERLQMAGVEVRYIDITNILGGVLHTKFWISDNTHIYLGSANMDWRSLTQVKELGIAIFNNRNLAADLTQIFEVYWYLGVNNLPYNWKNFYPSYYNTDHPLSINVSGVPHSVFIASAPQQLCTMERTNDLTALLSCIRNASKFVYVSVMNFIPIIYSKAGKILFWPYIEDELRRSAIDRQVSVKLLISCWQRSSFIMRNFLRSIAMLKSKNIDIEVKLFIVPDADPPIPYSRVNHAKYMVTDKTAYIGTSNWTGNYFTDTCGASINITPDDGLGLRQQLEDIFMRDWNSKYSYELYDTSPTKRCKLLKNMKQCTNDIYCDEIQPEKEIPEYSLE (서열 식별 번호: 17).
본원에서 사용된 바와 같이, "K5L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 추정(putative) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K5L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21084로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MGATISILASYDNPNLFTAMILMSPLVNADAVSRLNLLAAKLMGTITPNAPVGKLCPESVSRDMDKVYKYQYDPLINHEKIKAGFASQVLKATNKVRKIISKINTPRLSYSREQTMRLVMFQVHIISCNMQIVIEK (서열 식별 번호: 18).
본원에서 사용된 바와 같이, "K6L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 추정(putative) 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K6L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P68465로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MSANCMFNLDNDYIYWKPITYPKALVFISHGAGKHSGRYDELAENISSLGILVFSHDHIGHGRSNGEKMMIDDFGTARGNY (서열 식별 번호: 19).
본원에서 사용된 바와 같이, "K7R"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, NF-κB 및 IRF3의 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 K7R 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P68467로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MATKLDYEDAVFYFVDDDKICSRDSIIDLIDEYITWRNHVIVFNKDITSCGRLYKELMKFDDVAIRYYGIDKINEIVEAMSEGDHYINFTKVHDQESLFATIGICAKITEHWGYKKISESRFQSLGNITDLMTDDNINILILFLEKKLN (서열 식별 번호: 20).
본원에서 사용된 바와 같이, "M1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, Ankyrin 반복 단백질.반복 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 M1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20640으로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MIFVIESKLLQIYRNRNRNINFYTTMDNIMSAEYYLSLYAKYNSKNLDVFRNMLQAIEPSGNNYHILHAYCGIKGLDERFVEELLHRGYSPNETDDDGNYPLHIASKINNNRIVAMLLTHGADPNACDKHNKTPLYYLSGTDDEVIERINLLVQYGAKINNSVDEEGCGPLLACTDPSERVFKKIMSIGFEARIVDKFGKNHIHRHLMSDNPKASTISWMMKLGISPSKPDHDGNTPLHIVCSKTVKNVDIIDLLLPSTDVNKQNKFGDSPLTLLIKTLSPAHLINKLLSTSNVITDQTVNICIFYDRDDVLEIINDKGKQYDSTDFKMAVEVGSIRCVKYLLDNDIICEDAMYYAVLSEYETMVDYLLFNHFSVDSVVNGHTCMSECVRLNNPVILSKLMLHNPTSETMYLTMKAIEKDKLDKSIIIPFIAYFVLMHPDFCKNRRYFTSYKRFVTDYVHEGVSYEVFDDYF (서열 식별 번호: 21).
본원에서 사용된 바와 같이, "M2L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, NF-κB 및 아팝토시스의 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 M2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 Q1PJ18로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MVYKLVLLFCIASLGYSVEYKNTICPPRQDYRYWYFAAELTIGVNYDINSTIIGECHMSESYIDRNANIVLTGYGLEINMTIMDTDQRFVAAAEGVGKDNKLSVLLFTTQRLDKVHHNISVTITCMEMNCGTTKYDSDLPESIHKSSSCDITINGSCVTCVNLETDPTKINPHYLHPKDKYLYHNSEYGMRGSYGVTFIDELNQCLLDIKELSYDICYRE (서열 식별 번호: 22).
본원에서 사용된 바와 같이, "N1L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, NF-κB 및 아팝토시스를 억제하는 BCL-2-유사 단백질을 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 N1L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P21054로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MRTLLIRYILWRNDNDQTYYNDDFKKLMLLDELVDDGDVCTLIKNMRMTLSDGPLLDRLNQPVNNIEDAKRMIAISAKVARDIGERSEIRWEESFTILFRMIETYFDDLMIDLYGEK (서열 식별 번호: 23).
본원에서 사용된 바와 같이, "N2L"은 오르토폭스바이러스 (예를 들면, 백시니아, 예를 들면, Copenhagen) 유전자, 이를 테면, IRF3의 억제제를 인코드하는 유전자를 지칭한다. 백시니아 바이러스의 Copenhagen 균주에서 예시적인 N2L 유전자(UniProtKB 데이터베이스 항목 P20641로 부여됨)에 의해 인코드된 단백질 서열의 예들이 하기에서 재현된다:
MTSSAMDNNEPKVLEMVYDATILPEGSSMDPNIMDCINRHINMCIQRTYSSSIIAILNRFLTMNKDELNNTQCHIIKEFMTYEQMAIDHYGEYVNAILYQIRKRPNQHHTIDLFKKIKRTPYDTFKVDPVEFVKKVIGFVSILNKYKPVYSYVLYENVLYDEFKCFINYVETKYF (서열 식별 번호: 26).
본원에서 기술된 유전자의 코딩 서열 (CDSs)의 예시적인 Copenhagen 균주 뉴클레오티드 서열은 하기 표 42에서 제시된다. 예시적인 야생형 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스 게놈의 뉴클레오티드 서열 또한 하기 표 42에서 제시된다. 또다른 예시적인 야생형 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스 게놈은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드의 다형성(polymorphisms)중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개, 또는 모두를 갖는, 서열 식별 번호: 590 (표 42에서 제시됨)이다. 특정 구체예들에서, 본원에서 기술된 유전자들의 CDS는 표 42에서 제시된 뉴클레오티드 서열과 동일하지만, 표 46에서 식별된 1, 2, 3개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드 다형성을 갖는다.
4. 도면의 간단한 설명
도 1에서는 오르토폭스바이러스 바이러스 균주들을 비롯한 59가지 수두바이러스 균주의 계통발생학적 분석을 보여준다.
도 2는 상이한 종양 유형의 5 가지 백시니아 바이러스의 계대 후 상이한 바이러스 균주의 풍성도(abundances)를 보여준다.
도 3은 다양한 상이한 환자 종양 코어에서 복제하는 백시니아 야생형 균주의 능력을 나타낸다.
도 4는 상이한 백시니아 야생형 균주들의 플라크(plaque) 크기 측정을 나타낸다.
도 5는 5p 결손 (CopMD5p) 그리고 3p 결손 (CopMD3p)의 게놈 구조를 보여준다. CopMD5p 및 CopMD3p를 교배하여 CopMD5p3p를 만들었다.
도 6은 다양한 투여량(doses)으로 Copenhagen 또는 CopMD5p3p의 감염 후, 암 세포 사멸을 보여주는 히트맵(heatmap)을 나타낸다.
도 7은 4가지 상이한 암 세포주에서 Copenhagen 및 CopMD5p3p 복제의 성장 곡선을 나타낸다.
도 8은 환자 생체외(ex vivo) 샘플에서 적정에 의해 나타낸, Copenhagen 및 CopMD5p3p의 복제 능력을 나타낸다.
도 9에서는 상기 변형된 CopMD5p3p 바이러스들은 부모계 바이러스와 상이한 플라크를 형성함을 보여준다. CopMD5p3p 플라크는 눈에 보이는 합포체 (세포 융합)와 함께, 중앙이 훨씬 더 투명하다.
도 10에서는 CopMD5p3p가 786-O 세포에서 합포체 (세포 융합)를 유도함을 보여준다.
도 11에서는 CopMD5p3p는 Copenhagen 야생형과 유사하게 종양 성장을 제어할 수 있지만, 체중 감소를 야기하지 않음을 보여준다.
도 12에서는 CopMD5p3p는 티미딘 키나제의 종양용해성 녹-아웃(knockout)을 숨기고 있는 다른 두 가지 백시니아 균주 (Copenhagen 및 Wyeth)와 비교하였을 때, 수두 병변 형성을 일으키지 않음을 보여준다.
도 13은 누드 CD-1 마우스에 전신 투여 후, 백시니아의 IVIS 생체-분포를 보여준다. 루시퍼라제 인코딩 CopMD5p3p (TK KO)은 종양 특이적이며, 표적-외 조직에서는 복제되지 않는다.
도 14는 전신 투여 후, 백시니아의 생체-분포를 보여준다. CopMD5p3p는 다른 종양용해성 백시니아와 유사하게 종양에서는 복제되지만, 표적-외 조직/장기에서는 복제가 덜 된다.
도 15에서는 인간 PBMCs에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. 인간 선천적 면역 세포를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 야생형 Copenhagen의 능력보다 더 강력하다.
도 16에서는 마우스 비장세포에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. 마우스 선천적 면역 세포를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 Copenhagen의 능력보다 더 강력하다.
도 15에서는 인간 PBMCs에서 백시니아의 면역원성을 보여준다. NF-kB 면역 전사 인자를 활성화시키는 CopMD5p3p의 능력은 Copenhagen 또는 VVdd보다는 더 강력하지만, 그러나 MG-1의 능력과는 유사하다.
도 18은 공격적 흑색종 모델 (C57BL6 마우스에서 B16-F10 동계성(syngeneic) 흑색종 모델)에서 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트(competent) 뮤린 모델에서 생존에 의해 측정된 생체내 효능.
도 19는 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 20은 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 21은 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체 및 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과를 나타낸다. 백시니아 및 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체와 항-CTLA-4 항체로 처치된 면역 컴피턴트 뮤린 모델에서 종양 성장 (상부 열) 그리고 생존 (하부 열)의해 측정된 생체내 효능. CopMD5p3p (좌측 컬럼)은 종양용해성 Copenhagen TK KO (우측 컬럼)과 비교된다.
도 22는 이를 테면, 5' ("5p") 주요 결손 유전자좌 (좌) 그리고 3' ("3p") 주요 결손 유전자좌 (우)를 품고 있는 변형된 Copenhagen 백시니아 바이러스 벡터)변형된 수두바이러스 벡터 (예를 들면, 변형된 백시니아 바이러스 벡터) 생산을 위한 계획을 나타낸다. 5p 표적화 구조체는 C2L에 대해 1 kb의 상동성 영역, 이어서 형질전환유전자를 발현시키는 eGFP, 그리고 F3L에 대해 1 kb의 상동성 영역으로 구성된다. 3p 표적화 구조체는 B14R에 대해 729bp의 상동성 영역, 이어서 형질전환유전자를 발현시키는 mCherry, 그리고 B29R에 대해 415bp의 상동성 영역으로 구성된다.
도 23에서는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 다양한 세포주들에서 증식되는 능력을 보여준다.
도 24에서는 크리스탈 바이올렛 (상부 패널) 그리고 알라마르 블루(Alamar Blue) 검증 (하부 패널)에 의해 평가하였을 때, 다양한 세포주들에서 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 세포독성 효과를 보여준다. 하단 패널에 나타낸 차트의 x 축을 따라 각 세포주에 대해 나열된 균주의 순서는 다음과 같다: 좌측에서 우측 방향으로, CopMD5p, CopMD5p3p, CopMD3p, 그리고 CopWT (야생형 Copenhagen 백시니아 균주).
도 25는 마우스에게 투여될 때, 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 분포를 나타낸다.
도 26은 자연 킬러 (NK) 세포를 활성화시키고, 항-종양 면역력을 촉진시키는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 27은 HT29 세포에 대항하는 NK 세포-매개된 과립소실을 강화시키고, NK 세포 활성의 측정 및 항-종양 면역력을 강화시키는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 28은 T-세포를 발화시켜 항-종양 면역 반응을 개시하도록 하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 29는 감염의 시작점으로부터 멀리있는 위치로 확산되는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 30은 바이러스 증식의 척도인 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 31은 U2OS 세포에서 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 32는 786-O 세포에서 플라크를 형성하는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온의 능력을 나타낸다.
도 33은 다양한 수두바이러스 게놈에서 CopMD5p3p에서 결손된 유전자의 백분율을 나타낸다.
도 34는 정상 세포주 대비 암 세포주에서 SKV-B8R+ 바이러스의 감염을 나타낸다.
도 35에서는 SKV-B8R+는 인터페론 신호생성을 손상시키지 않음을 보여준다.
도 36은 FLt3-LG 및 IL-12-TM 형질전환유전자에 대한 B8R 재조합 표적화 전략을 나타낸다.
도 37에서는 SKV (CopMD5p3p-B8R-)가 SKV-B8R+과 비교하여, 종양 대조군에서 유사한 효능을 가짐을 보여준다.
도 38은 기본 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스 게놈과 비교하여, SKV-123v2 종양용해성 플랫폼의 게놈 조직화(organization)를 나타내는 선형 데생 계략도를 보여준다. FRT는 Flippase 효소의 인지 부위다.
도 39는 2가지 면역치료요법적 형질전환유전자와 항체를 발현시키도록 공작된 SKV를 나타낸다.
도 40은 2가지 면역치료요법적 형질전환유전자와 항체를 발현시키도록 공작된 SKV를 나타낸다.
도 41은 형질전환유전자를 발현시키는 다양한 SKV 바이러스에 대해 정량화된 hIL-12 생산을 나타낸다.
도 42는 SKV-123, SKV-3 및 대조군 SKV-eGFP 바이러스 (감염-후 24 hrs MOI 0.1)로 감염된 생 Vero 세포 상에서 IL-12p35 (IL-12) 세포 표면 면역착색을 나타낸다.
도 43은 막 결합된 뮤린 IL-12 p35를 발현시키는 SKV는 뮤린 종양 제어에 더 큰 효능을 갖는다는 것을 보여준다.
도 44에서는 다양한 백시니아 균주에서 공작된 주요 이중 결손은 시험관내에서 암 세포 사멸을 강화시킨다는 것을 보여준다.
도 45는 다양한 백시니아 균주로 감염된 HeLa 세포의 표현형 특징을 보여준다.
도 46에서는 5p3p 백시니아 균주는 야생형 균주와 비교하여 체중 감소를 유도하지 않음을 보여준다. 마우스 체질량 측정을 보여준다. CD-1 누드 마우스는 꼬리정맥내 주사를 통하여 1 x 107 pfu (입자 형성 단위)로 처치받았고, 표시된 시점에서 측정되었다.
도 47에서는 5p3p 백시니아 균주는 야생형 균주와 비교하여 수두 병변을 유도하지 않음을 보여준다. 수두 병변의 존재 측정을 보여준다. CD-1 누드 마우스는 꼬리정맥내 주사를 통하여 1 x 107 pfu의 표시된 백시니아 바이러스 균주로 처치받았다. 주사-후 6일차 수두 병변에 대해 마우스를 검사하였다.
도 48A-48H는 0.05 ml의 SKV (백시니아 바이러스) (투여량: 1e7 pfu)로 처리받은 8 마리 이종이식편 마우스 모델의 시간 경과에 따른 종양 용적 및 생존 곡선을 나타낸다. 도 48A는 MiaPaca-2 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48B는 PC-3 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다 도 48C는 U87MG 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 49D는 UACC-62 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 도 48E는 UM-UC-3 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48F는 COLO-205 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48G는 NCI-H460 이종이식편 마우스 모델에서 얻은 결과를 보여준다. 도 48H는 HT29 이종이식편 모델에서 얻은 결과를 보여준다.
도 49는 인간 CTLA-4를 발현시키는 트랜스제닉 C57/BL6 마우스 모델의 시간 경과에 따른 평균 종양 용적 및 생존 곡선을 나타내고, MC-38 종양은 활성 형질전환유전자를 인코딩하는 SKV로 처치받았다. 그 다음 동물들을 5개 치료군으로 무작위화시키고, PBS, PBS + 이필리무맙(Ipilimumab), SKV, 항-PD-1 항체, SKV-12m3v2-eGFP 또는 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체로 처치하였다. SKV-12m3v2-eGFP는 인간 항-CTLA-4 항체, 인간 Flt3 리간드 및 마우스 IL-12 TM p35를 발현시키는 SKV이다.
도 50은 도 49에서 나타낸 실험의 개별 종양 용적을 보여준다.
도 51은 막-결합된 마우스 IL-12 p35 또는 막-결합된 마우스 IL-12 p70으로 처치된 MC-38 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적을 나타낸다.
도 52는 바이러스 (SKVB8R+TK- 인코딩 OVA 항원)를 이용한 이형성(heterologous) 프라임:부스트 종양용해성 백신 요법(regimen) 결과를 나타낸다.
도 53A-53F는 CT26 종양 세포들이 생착된 BALB/c 마우스에게 SKV-123v2를 IT 또는 IV로 투여하고 혈청 및 조직에서 FLT3-L 및 항-CTLA-4 항체의 생체분포를 보여준다.
도 54A-54D는 CT26 종양 세포들이 생착된 BALB/c 마우스에게 SKV-123v2를 IT 또는 IV로 투여하고 혈청 및 조직에서 IL-12-TM의 생체분포를 보여준다.
도 55는 SKV-123v2로 처치된 또는 처치되지 않은 NGS 마우스에서 종양 용적을 보여준다.
도 56은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (상부 패널) 그리고 정상 세포 (하부 패널)의 알라마르 블루 생존 동력학을 보여준다.
도 57은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)에서 바이러스 복제 성장 곡선을 보여준다.
도 58은 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)의 항-CTLA-4 항체 발현 수준을 보여준다.
도 59는 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포 (786-O, HeLa) 그리고 정상 세포 (PBMC, PrEC)에서 FLT3L 발현 수준을 보여준다.
도 60은 형질전환유전자를 백시니아 바이러스 게놈 안으로 삽입시키기 위한 표적화 구조체의 고안을 나타낸다. 구조체는 PCR 증폭 산물이거나 또는 박테리아 플라스미드의 일부분일 수 있다. 형질전환유전자 숫자 뿐만 아니라 이들의 방향 또한 가변성있다. 형질전환유전자와 형광 마커의 순서도 가변성있다.
5. 상세한 설명
본 발명은 유전적으로 변형된 오르토폭스바이러스, 이를 테면, 백시니아 바이러스 (예를 들면, Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1 바이러스), 뿐만 아니라 다양한 암의 치료용으로 상기 동일한 것들의 용도를 특징으로 한다. 본 발명은 오르토폭스바이러스, 이를 테면, Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1 바이러스들은 이들 바이러스가 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, K ORF A, K ORF B, B ORF E, B ORF F, 그리고 B ORF G 유전자와 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R ITRs의 복사본(copies)중 하나 또는 그 이상, 또는 이들 모두에서 결손이 함유되도록 공작될 때, 상당히 개선된 종양용해성 활성, 종양에서 복제, 감염성, 면역 회피, 종양 지속성, 외인성 DNA 서열 통합 능력, 그리고 대규모 제조를 위한 편의성을 나타낸다는 발견에 일부 기초한다. 본 발명의 다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스는 B8R 유전자의 결손을 함유한다. 마우스에서 비활성이지만, B8R 유전자는 인간 IFN-γ의 항바이러스 활성을 중화시킨다. 다양한 구체예들에서, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자의 좌 (현재 결손된)로 상동성 재조합 표적화 전략을 통하여 후속적으로 삽입된다. 다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스는 다음 세 가지 형질전환유전자들(transgenes)중 적어도 하나를 발현시킨다: IL-12-TM, FLT3-L 및 항-CLTA4 항체. 본원에서 사용된 바와 같이, FLT3L, Flt-3 리간드, FLT3LG, FLT3-LG, FLT3-L은 동의어로써, 모두 FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드를 지칭한다.
본원에 기재된 오르토폭스바이러스는 광범위의 암을 비롯한 다양한 다양한 세포 증식 장애를 치료하기 위해 환자에게, 이를 테면, 포유류 환자 (예를 들면, 인간 환자)에게 투여될 수 있다. 오르토폭스바이러스와 이에 대한 유전적 변형, 뿐만 아니라 유전적으로 변형된 오르토폭스바이러스를 생산하고, 증식시키는 방법, 그리고 이를 환자에게 투여하는 기술에 대해 이어지는 섹션에서 기술된다.
5.1. 수두바이러스
일반적으로, 수두바이러스 바이러스성 입자는 타원형 또는 벽돌 모양으로, 일부 길이는 200-400 nm로 측정된다. 외부 표면은 병렬로 이랑을 이루고 있으며, 때로는 나선형으로 배열된다. 이러한 입자들은 상당히 복합적이며, 100개 이상의 별개 단백질을 함유한다. 세포외 형태는 두 개 막 (EEV: 세포외 외피로 싸인 비리온)을 함유하는 반면, 세포내 입자들은 오로지 내측 막 (IMV: 세포내 성숙 비리온)만을 갖는다. 외측 표면은 단단히 압축된 핵 단백질로 구성된 코어를 둘러싸는 지질과 단백질로 구성된다. 항원적으로 수두바이러스는 또한 매우 복잡하여, 특이적 항체 및 교차-반응 항체를 모두 유도한다. 상기 입자에는 적어도 10 개의 효소가 존재하며, 주로 핵산 대사/게놈 복제와 관련된다.
야생형 수두바이러스의 게놈은 선형의, 이중-스트랜드의 DNA(130-300 Kbp)이다. 상기 게놈의 단부들은 몇 가지 텐덤(tandem) 반복 서열과 함께, 말단 헤어핀 루프를 갖는다. 몇 가지 수두바이러스 게놈이 서열화되었고, 대부분의 필수 유전자들은 해당 게놈의 중앙 부분에 위치하며, 한편 비-필수 유전자들은 단부들에 위치한다. 상기 수두바이러스 게놈에는 약 250개 유전자가 있다. 상기 바이러스는 게놈 복제에 필요한 모든 기능을 획득하기에 충분한 복잡성을 가지기 때문에, 복제는 세포질에서 일어난다. 세포에 의해 약간의 기여가 있지만, 이러한 기여의 속성은 명확하지 않다. 그러나, 비록 수두바이러스 유전자 발현 및 게놈 복제는 제핵된(enucleated) 세포에서 발생되지만, 성숙이 차단되며, 이는 세포에 의한 일부 역할을 나타낸다.
일단 세포의 세포질 안으로 진입되면, 코어에 연합된 바이러스 효소들에 의해 유전자 발현이 실행된다. 발현은 2 단계로 나뉘는데: 게놈의 약 50 %를 차지하고 게놈 복제 전에 발현되는 조기(early) 유전자와 게놈 복제 후에 발현되는 후기(late) 유전자. 발현의 시간적 제어는 후기 프로모터에 의해 제공되며, 이는 DNA 복제 활성에 의존적이다. 게놈 복제는 자가-촉발(self-priming)이 관여하는 것으로 보이며, 고-분자량 콘카타머(concatemers) 형성으로 이어지는데, 이것은 후속적으로 절단되고, 복구되어 바리어스 게놈을 만든다. 바이러스 어셈블리는 세포골격내에서 일어나며, 아마도 세포골격성 단백질 (예를 들면, 액틴-결합 단백질)과의 상호작용이 관여할 것이다. 바이러스 입자들로 성숙되는 합포체는 세포질 안에서 형성된다. 세포 간 확산은 감염 확산을 위한 대체 기전을 제공할 수 있다. 전반적으로, 이러한 크고 복잡한 바이러스의 복제는 다소 빠르며, 평균 12 시간이 소요된다. 적어도 9가지 상이한 수두바이러스가 인간에서 질환을 일으키지만, 바리올라르(variola) 바이러스와 백시니아가 가장 잘 알려져 있다. 바리올라르 균주는 바리올라르 메이져 (사망자수의 25-30%)와 바리올라르 마이너 (동일한 증상이지만, 사망률은 1% 미만)로 나뉜다. 두 바이러스에 대한 감염은 호흡 경로에 의해 자연적으로 발생하며, 전신적이며 다양한 증상을 나타내지만, 특히 바리올라르의 특징적인 농포와 피부 반흔이 가장 특징적이다.
5.2. 오르토폭스바이러스
5.2.1. 백시니아 바이러스
백시니아 바이러스는 수두바이러스 또는 폭스비리데(Poxviridae) 패밀리, 코르도폭시리네(Chordopoxyirinae) 하위패밀리, 그리고 오르토폭스바이러스 속(genus)의 구성원이다. 오르토폭스바이러스는 코르도폭시리네(Chordopoxyirinae) 하위패밀리의 다른 구성원보다는 상대적으로 더 동질성이며, 뚜렷하게 다른, 그러나 밀접하게 관련된 11가지 종들이 내포되며, 여기에는 백시니아 바이러스, 바리올라르 바이러스 (천연두(smallpox)의 원인균), 우두 바이러스, 버팔로수두 바이러스, 원숭이수두 바이러스, 마우스수두 바이러스와 말수두 바이러스 종 뿐만 아니라 기타 다른 종이 내포된다(Moss, 1996 참고).
백시니아 바이러스는 크고, 복잡한 외피로 싸인 바이러스로써 선형 이중-스트랜드의 DNA 게놈(약 190 kb, 대략적으로 250개 유전자 유전자를 인코딩)을 갖는다. 백시니아는 천연두를 근절하는 백신으로서의 역할로 잘-알려져 있다. 천연두 근절-후, 과학자들은 유전자를 생물학적 조직에 전달하기 위한 도구(유전자 치료요법 및 유전 공학)로 백시니아를 사용하는 방법을 연구해왔다. 백시니아 바이러스는 숙주 세포의 세포질에서만 복제되므로, DNA 바이러스 중에서 독특하다. 따라서, 바이러스 DNA 복제에 필요한 다양한 효소 및 단백질을 인코드하기 위해 큰 게놈이 필요하다. 복제 동안, 백시니아는 이들의 외측 막과는 상이한 몇 가지 감염성 형태를 만든다: 세포내 성숙 비리온 (IMV), 세포내 외피로 싸인 비리온 (IEV), 세포-연합된 외피로 싸인 비리온 (CEV), 그리고 세포외 외피로 싸인 비리온 (EEV). IMV는 가장 풍부한 전염성 형태이며, 숙주-간의 확산을 담당하는 것으로 생각된다. 다른 한편으로, CEV는 세포-간 확산에 중요한 역할을 하는 것으로 생각되며, EEV는 숙주 유기체 내에서 원거리 전파에 중요한 역할을 한다고 생각된다.
백시니아 바이러스는 우두의 원인이 되는 바이러스와 밀접하게 관련된다. 백시니아의 정확한 기원은 알려져 있지 않지만, 그러나 가장 일반적인 견해는 백시니아 바이러스, 우두 바이러스, 그리고 바리올라르 바이러스 (천연두의 원인 물질)는 모두 공통적인 조상 바이러스로부터 유래되었다는 것이다. 백시니아 바이러스가 말에서 원래 단리되었다는 추측 또한 있다. 백시니아 바이러스 감염은 건강한 개체에서는 경미하고, 일반적으로 무증상이지만, 그러나 경미한 발진 및 발열을 야기할 수 있고, 치사율은 극히 낮다. 백시니아 바이러스 감염에 대항하여 생성된 면역 반응은 치명적 천연두 감염으로부터 해당 사람을 보호한다. 이러한 이유로, 백시니아 바이러스를 천연두에 대항하는 생-바이러스 백신으로 이용하였다. 백시니아 바이러스 백신은 천연두 바이러스를 함유하지 있지 않기 때문에 안전하지만, 때로는 특정 합병증 및/또는 백신 부작용이 발생할 수 있는데, 특히 백신이 면역저하된 경우, 발생할 수 있다.
백시니아 바이러스의 예시적인 균주에는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1가 내포되지만, 이에 국한되지 않는다.
5.2.2. 티미딘 키나제 돌연변이체 및 헤마글루티닌 돌연변이체
현재 몇 가지 임상적 연구는 바이러스 티미딘 키나제 (TK) 유전자에 결손을 품고 있는 종양용해성 바이러스로써 백시니아 바이러스를 테스트한다. 이러한 결손은 해당 바이러스를 감쇠시켜, 해당 바이러스가 DNA 복제를 위한 세포성 티미딘 키나제 활성에 의존하게 되고, 따라서 바이러스 증식된다. 세포성 티미딘 키나제는 대부분의 정상 조직에서 낮은 수준으로 발현되며, 많은 암 세포에서는 상승된 수준으로 발현된다. 대사 표적화를 통해, TK-바이러스는 대사율이 높은 세포 (예를 들면, 건강한 세포 또는 종양 세포)에서 성장할 수 있으며, 티미딘 키나제 수치가 낮은 세포에서는 잘 성장하지 않을 것이다. 진행이 중단된(quiescent) 종양 세포들 (예를 들면, 암 줄기 세포)이 존재하기 때문에, TK-바이러스는 화학치료요법이 대체로 효과가 없는 것과 같이, 이들 암세포 집단을 죽이는 능력이 손상될 가능성이 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 바이러스 합성 기전 (TK를 비롯한)을 유지하며, 진행이 중단된 암 세포에서 증식될 수 있다. 이러한 구체예들에서, 본 명세서의 바이러스 변형으로 해당 바이러스가 TK 또는 다른 DNA 신진대사 효소들 (예를 들면, 리보뉴클레오티드 환원효소)의 결손 없이 매우 선택성이 되는 것을 허용할 수 있고, 그리고 대사율이 낮은 종양에서 더 효과적일 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 기능성 TK 유전자 (예를 들면, 야생형 TK 유전자)를 포함한다. 다른 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 TK 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)을 포함한다.
유사하게, 상기 백시니아 바이러스의 헤마글루티닌 (HA) 유전자의 비활성화는 해당 바이러스의 감쇠를 초래할 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 기능성 HA 유전자 (예를 들면, 야생형 HA 유전자)를 포함한다. 다른 구체예들에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 HA 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)을 포함한다.
특이적 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 기능성 TK 유전자 (예를 들면, 야생형 TK 유전자) 그리고 기능성 HA 유전자 (예를 들면, 야생형 HA 유전자)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 기능성 TK 유전자 (예를 들면, 야생형 TK 유전자) 그리고 HA 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 TK 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)과 기능성 HA 유전자 (예를 들면, 야생형 HA 유전자)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 변형된 바이러스 벡터는 TK 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)과 HA 유전자에 결손(들) 또는 기능-소실 돌연변이(들)를 포함한다.
5.2.3. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈
한 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3' 역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) 세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 상기 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터).
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
바람직한 구체예들에서, 본 명세서에서 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 유전자 (즉, 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 유전자)는 해당 뉴클레오티드 서열에 가장 근접한 두 개의 내생적 유전자다(해당 뉴클레오티드 서열의 상류 하나와 다른 하류). 상기 내생적 유전자는 부분 유전자 또는 전장 유전자일 수 있다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고 (c) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 그리고 (d) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터이며; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4(예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터).
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터).
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는 (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서의 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터).
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기(late) 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이필리무맙의 6개 상보성-결정 영역 (CDRs)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), IL-12 p40 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 막-결합되며, IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 또는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)0, 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L의 막경유 도메인과 세포질 도메인)을 포함한다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류(upstream)에 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 30% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 40% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 50% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 60% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 70% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 적어도 80% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 30% -90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%-85%, 50%-90%, 50%-85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85%, 또는 80%-85% 결손이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 75% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 80% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 서열의 약 82% 결손이다.
예를 들면, 일부 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 30% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 40% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 50% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 60% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 70% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 적어도 80% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 30% -90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%-85%, 50%-90%, 50%-85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85%, 또는 80%-85% 결손이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 약 75% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 약 80% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 591의 뉴클레오티드 서열의 약 82% 결손이다.
또다른 실시예에서, 일부 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 ACAACACCATGAGATATATTATA ATTCTCGCAGTTTTGTTCATTAATAGTATACACGCTAAAATAACTAGTTATAAGTTTGAATCCGTCAATTTTGATTCCAAAATTGAATGGACTGGGGATGGTCTATACAATATATCCCTTAAAAATTATGGCATCAAGACGTGGCAAACAATGTATACAAATGTACCAGAAGGAACATACGACATATCCGCATTTCCAAAGAATGATTTCGTATCTTTCTGGGTTAAATTTGAACAAGGCGATTATAAAGTGGAAGAGTATTGTACGGGACTATGCGTCGAAGTAAAAATTGGACCACCGACTGTAACATTGACTGAATACGACGACCATATCAATTTGTACATCGAGCATCCGTATGCTACTAGAGGTAGCAAAAAGATTCCTATTTACAAACGCGGTGACATGTGTGATATCTACTTGTTGTATACGGCTAACTTCACATTCGGAGATTCTGAAGAACCAGTAACATATGATATCGATGACTACGATTGCACGTCTACAGGTTGCAGCATAGACTTTGCCACAACAGAAAAAGTGTGCGTGACAGCACAGGGAGCCACAGAAGGGTTTCTCGAAAAAATTACTCCATGGAGTTCGGAAGTATGTCTGACACCTAAAAAGAATGTATATACATGTGCAATTAGATCCAAAGAAGATGTTCCCAATTTCAAGGACAAAATGGCCAGAGTTATCAAGAGAAAATTTAATAAACAGTCTCAATCTTATTTAACTAAATTTCTCGGTAGCACATCAAATGATGTTACCACTTTTCTTAGCATGCTTAACTTGACTAAATATTCATAA (서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 30% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 40% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 50% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 60% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 70% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 적어도 80% 결손이다. 다른 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 30% -90%, 30%-85%, 40%-90%, 40%-85%, 50%-90%, 50%-85%, 60%-90%, 60%-85%, 70%-90%, 70%-85%, 75%-90%, 75%-85%, 또는 80%-85% 결손이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 약 75% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 약 80% 결손이다. 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 서열 식별 번호: 550의 뉴클레오티드 서열의 약 82% 결손이다.
특정 구체예들에서, B8R 유전자내 결손으로 상기 백시니아 게놈의 B9R 유전자의 기능이 방해받지 않는다. 특정 구체예들에서, B8R 유전자내 결손으로 B9R 유전자의 발현이 방해받지 않는다. 특정 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B9R 유전자의 프로모터(들)을 제거하지 않는다. 특정 구체예들에서, B8R 유전자내 결손은 B9R 유전자의 전사 조절 서열을 제거하지 않는다. 특이적 구체예에서, 결손 후 남아있는 B8R 유전자의 유일한 서열은 적절한 B9R 기능 및/또는 발현에 필수적인 서열이다. 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 AAAATTTAATAAACA (서열 식별 번호: 551)을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 제거하지 않는다 또다른 특이적 구체예에서, B8R 유전자내 결손은 뉴클레오티드 서열 AAAATTTAATAAACA (서열 식별 번호: 551)을 제거하지 않는다. 특이적 구체예에서, 남아있는 B8R 유전자의 유일한 서열은 뉴클레오티드 서열 GATGTTCCCAATTTCAAGGACAAAATGGCCAGAGTTATCAAGAGAAAATTTAATAAACAGTCTCAATCTTATTTAACTAAATTTCTCGGTAGCACATCAAATGATGTTACCACTTTTCTTAGCATGCTTAACTTGACTAAATATTCATAA (서열 식별 번호: 552)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스의 게놈으로부터 유래된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열에서 유래된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나, 단 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나, 단 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1-3개, 1-5개, 2-4개, 2-5개, 1-9개, 2-8개, 4-8개, 6-8개, 1-9개, 2-9개, 4-9개, 6-9개, 7-9개, 1-10개, 2-10개, 5-10개, 또는 8-10개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 11-20개, 12-15개, 15-20개, 또는 18-20개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1-20개, 1-15개, 5-20개, 또는 10-20개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 모두 포함하는 것이 상이하다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 또는 32개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R에서 결손, 그리고 3' 역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들의 결손: B19R, 및 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다.
본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 아주 밀접한(synonymous) 변이체들인 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 또는 4개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 단백질 코딩 영역에 있지 않는 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 아미노산 서열의 변화를 초래하는 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개를 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 프레임시프트(frameshift)를 초래하는 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개 또는 2개를 포함하는 것이 상이하다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 또는 32개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R에서 결손, 그리고 3' 역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들: B19R, 및 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R의 결손, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다.
본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 유전자들중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개에서 발견된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 유전자들중 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 12개 또는 13개에서 발견된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 유전자들 모두에서 발견된 뉴클레오티드 다형성 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 표 46에서 식별된 유전자들중 1-5개, 5-10개, 1-13개, 5-13개, 또는 10-13개에서 발견된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 또는 32개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R에서 결손, 그리고 3' 역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들: B19R, 및 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R의 결손, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다.
본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 백시니아 유전자 C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L, 또는 A46R에 대해 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 구체예들 및 측면들의 일부에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 백시니아 유전자 C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L, 그리고 A46R에 대해 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나,단, 해당 뉴클레오티드 서열은 다음 백시니아 유전자들중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 또는 7개 유전자에 대해 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다: C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L, 그리고 A46R. 본원에서 제공된 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 GenBank 수탁 번호. M35027.1 (서열 식별 번호: 590)의 뉴클레오티드 서열과 동일하나 단, 해당 뉴클레오티드 서열은 다음의 백시니아 유전자들중 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 또는 13개 유전자에 대해 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성을 포함하는 것이 상이하다: C14L, C2L, C1L, N2L, F3L, F13L, F16L, G7L, L3L, J3R, D6R, A41L, 그리고 A46R. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 본원에서 확인된 백시니아 바이러스 유전자들 (예를 들면, C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 그리고 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R)의 결손중 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 또는 32개, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다. 이러한 구체예들의 일부에 있어서, 상기 재조합 바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R에서 결손, 그리고 3' 역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들: B19R, 및 B20R, B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R의 결손, 그리고 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)중 하나, 둘 또는 세 개의 삽입을 포함하도록 공작될 수 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열과 동일하나, 단 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개를 갖는 뉴클레오티드 서열이다.
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b) 다음중 하나, 둘 또는 셋: (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자(예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다).
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b) 다음중 둘 또는 셋: (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다).
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b): (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다).
상기 핵산이 상기 제 1 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 H5R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 2 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 후기 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하고, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B8R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B19R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 1 뉴클레오티드 서열은 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 2 뉴클레오티드 서열은 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 3 뉴클레오티드 서열은 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 624의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 624의 뉴클레오티드 서열과 동일하나, 단 표 46에서 식별된 뉴클레오티드 다형성중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 또는 20개를 갖는 뉴클레오티드 서열이다.
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b) 다음중 하나, 둘 또는 셋: (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다). 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 또는 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 그리고 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 제 2 형질전환유전자 및/또는 제 3 형질전환유전자는 본원에서 기술된 유전자좌 또는 유전자좌들에 삽입된다.
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b) 다음중 둘 또는 셋: (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다). 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 또는 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 두 개 또는 세 개 형질전환유전자는 본원에서 기술된 유전자좌 또는 유전자좌들에 삽입된다.
특정 구체예들에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열; 그리고 (b): (i) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); (ii) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215의 뉴클레오티드 서열을 포함하고); 그리고 (iii) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자 (예를 들면, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216의 뉴클레오티드 서열을 포함한다). 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 또는 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 프로모터, 이를 테면, 본원에서 기술된 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된, 그리고 이를 테면, 본원에서 기술된 프로모터, 상기 제 3 프로모터에 작동가능하도록 연계된 프로모터를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 제 2 형질전환유전자와 제 3 형질전환유전자는 본원에서 기술된 유전자좌 또는 유전자좌들에 삽입된다.
상기 핵산이 상기 제 1 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 H5R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 2 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 후기 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하고, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B8R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B19R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 핵산이 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하는 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 1 뉴클레오티드 서열은 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 2 뉴클레오티드 서열은 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 동일한 방향을 갖고, 해당 제 3 뉴클레오티드 서열은 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 더 포함한다. 상기 특이적 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자를 포함하고, 그리고 더욱이 B8R 유전자내 결손을 더 포함하며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류(downstream)에 있다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이며; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음 유전자들에서 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다: (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손; (b) 3' ITR의 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; (c) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, 상기 핵산은 B8R 유전자내 결손을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b)세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며; (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고 (d) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 일부 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 동일한 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자에 대해 역 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 5' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 다른 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자가 반대 방향을 갖는 경우, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈의 3' 단부에 더 근접해 있는 상기 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C2L 유전자 및 F3L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 C3L 유전자 및 F4L 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B14R 유전자 및 B29R 유전자이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면 내생적 백시니아 바이러스 유전자는 B13R 유전자 및 B29R 유전자이다. 여전히 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 인접한 내생적 백시니아 유전자는 B13R 유전자다. 특정 구체예들에서, 상기 핵산은 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터 (예를 들면, 조기 H5R 프로모터, 후기 H5R 프로모터, 또는 조기 H5R 프로모터 및 후기 H5R 프로모터)이다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다. 또다른 추가적인 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, F17R 프로모터는 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 여전히 또다른 구체예에서, D13L 프로모터는 서열 식별 번호: 562의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 핵산은 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 및/또는 B2R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, E3L 프로모터는 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, F11L 프로모터는 서열 식별 번호: 568의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B2R 프로모터는 서열 식별 번호: 569의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재하고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 존재한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4(가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되고, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4(가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특이적 구체예들에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4(가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L 과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4 (예를 들면, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에 있는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4(가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4(가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4(가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4(가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 다음을 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 본원에 제공된다: (a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며; (b) CTLA-4(가령, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입되고; (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며; 그리고 (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다: (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며; (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고 (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 특이적 구체예들에서, pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 1 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 1 형질전환유전자와 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 1 형질전환유전자와 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. 특정 구체예들에서 이때 B14R 유전자에서 부터 B29R까지의 유전자는 결손되며, 상기 제 2 형질전환유전자와 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입된다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이 안에 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입된다. B14R 유전자에서부터 B29R 유전자들이 결손되는 특정 구체예들에서, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들(이때 상기 핵산은 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자를 포함)에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 삽입된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 C2L 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 F3L 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 백시니아 유전자 C3L과 F4L 사이에 삽입되고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌로 삽입되며, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 부분 백시니아 B14R 유전자에 인접하게 삽입되고, 상기 부분 백시니아 B29R 유전자에 인접하게 삽입되고, 또는 B14R 유전자에서부터 B29R까지의 유전자들이 결손될 때, B13R 유전자에 인접하게 삽입된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자이다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자이다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들(이때 상기 핵산은 서열 식별 번호: 210의 뉴클레오티드 서열을 포함)에서, 상기 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자는 서열 식별 번호: 210의 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자로의 삽입은 해당 재조합 백시니아 바이러스 게놈 안에 존재하는 5p 결손의 경계 내 삽입이다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자로의 삽입은 해당 재조합 백시니아 바이러스 게놈 안에 존재하는 3p 결손의 경계 내 삽입이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 전장 항체 (예를 들면, 전장 인간 항체, 전장 인간화된 항체, 또는 전장 마우스 항체)다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 분할(cleavage) 펩티드, 예를 들면, 자가-분할 펩티드, 이를 테면, 2A 자가-분할 펩티드 (예를 들면, T2A 펩티드)에 의해 연계된 이필리무맙의 중쇄와 경쇄를 포함하는 폴리펩티드를 인코드한다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 분할 펩티드, 예를 들면, 자가-분할 펩티드, 이를 테면, 2A 자가-분할 펩티드 (예를 들면, T2A 펩티드)에 의해 연계된 이필리무맙의 중쇄 신호 펩티드와 중쇄, 그리고 경쇄 신호 펩티드와 경쇄를 포함하는 폴리펩티드를 인코드한다. 본원에 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 다른 구체예들에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 쇄 항체 (예를 들면, 단일 쇄 인간 항체, 단일 쇄 인간화된 항체, 또는 단일 쇄 마우스 항체, 이를 테면, 예를 들면, 9D9)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 또다른 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 일부 구체예들에서, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 IL-12 펩티드는 해당 사이토킨의 막-결합된 형태(version)이다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35) 그리고 막경유 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35) 그리고 막경유 도메인 (IL12-TMp35)으로 구성된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 막경유 도메인과 세포질 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 막경유 도메인과 세포질 도메인으로 구성된다. 상기 막경유 도메인은 임의의 막-결합된 단백질 (예를 들면, B7-1, 막-결합된 TNFα, 또는 막-결합된 FLT3L)로 부터 유래될 수 있다. 상기 세포질 도메인은 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L)을 함유하는 임의의 단백질로부터 유래될 수 있다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35) 그리고 B7 세포질 및 포유류 표면 디스플레이를 위해 공통적으로 이용되는 요소인 B7-1 항원의 막 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 (예를 들면, 인간 IL-12 p35) 그리고 B7 세포질 및 B7-1 항원의 막 도메인으로 구성된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함하는데, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 막경유 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)로 구성되며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 막경유 도메인 (IL12-TMp70, 또는 p40-p35-TM)으로 구성된다. 특이적 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함하며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함하며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 막경유 도메인과 세포질 도메인을 포함한다. 상기 막경유 도메인은 임의의 막-결합된 단백질 (예를 들면, B7-1, 막-결합된 TNFα, 또는 막-결합된 FLT3L)로 부터 유래될 수 있다. 상기 세포질 도메인은 세포질 도메인 (예를 들면, B7-1, TNFα, 또는 FLT3L)을 함유하는 임의의 단백질로부터 유래될 수 있다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)을 포함하며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 B7 세포질 및 B7-1 항원의 막 도메인을 포함한다. 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p70 (예를 들면, 인간 IL-12 p70)로 구성되며, 이것은 p40 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p40) 그리고 p35 하위단위 (예를 들면, 인간 IL-12 p35), 그리고 B7 세포질 및 B7-1 항원의 막 도메인을 포함한다. 특정 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 인간 IL-12 폴리펩티드 (예를 들면, 인간 IL12-TMp35 또는 인간 IL12-TMp70)이다. 특정 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드는 마우스 IL-12 폴리펩티드 (예를 들면, 마우스 IL12-TMp35 또는 마우스 IL12-TMp70)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 갖는 후기 프로모터다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 갖는 후기 프로모터 및 B8R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 특정 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 가용성 형태다. 예를 들면, 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 전체 FLT3L 막경유 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)이 결여된다. 다른 실시예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인 (예를 들면, GenBank 수탁 번호. U03858.1에서 제시된 인간 FLT3L의 막경유 도메인)의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 한 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인과 전체 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기중 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개가 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기 1개, 2개, 3개, 또는 4개가 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%와 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%과 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유 도메인과 세포외 도메인은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 전체 세포질 도메인, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 전체 FLT3L 막경유 도메인, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 또는 20개 아미노산이 결여된다. 또다른 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L에는 FLT3L 막경유 도메인의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 세포질 도메인의 N-말단 아미노산 잔기의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개, 그리고 FLT3L 세포외 도메인의 카르복시-말단의 1-5개, 1-10개, 5-10개, 10-20개, 15-20개, 1-20개, 5-20개, 또는 10-20개 아미노산이 결여된다. 특정 구체예들 및 측면에서, 상기 막경유, 세포질 및 세포외 도메인들은 GenBank 수탁 번호. U03858.1로 제시된 FLT3L 서열의 도메인이다.
특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 FLT3L은 X7 아이소폼(isoform)이며, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에는 Lyman et al., 1994, Blood 83:2795-2801에 기술된 바와 같이, 179개-뉴클레오티드 서열이 결여된다. 특이적 구체예들에서, FLT3L는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216에서 제시된 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다. 본원에서 기술된 다양한 구체예들 및 측면들의 특이적 구체예에서, 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다. 특정 구체예에서, B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명은 탐지가능한 마커, 예를 들면, 형광 마커 (예를 들면, 녹색 형광 단백질 (GFP) 이를 테면, 강화된 GFP (eGFP))를 인코딩하는 제 4 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 4 형질전환유전자를 더 포함하는, 본원에서 기술된 핵산을 또한 고려한다. 특정 구체예들에서, 상기 핵산은 상기 형광 마커를 인코드하는 제 4 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 형광 마커를 인코드하는 제 4 뉴클레오티드 서열은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열, 제 2 뉴클레오티드 서열, 그리고 제 3 뉴클레오티드 서열중 하나의 하류에 연계된다.
특이적 구체예에서, 상기 상기 형광 마커를 인코드하는 제 4 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 상기 형광 마커를 인코드하는 제 4 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 p7.5 프로모터다.
특이적 구체예들에서, 표 45에서 확인된 형질전환유전자(들), 표 45에서 확인된 유전자좌 (loci)로 삽입된 형질전환유전자(들), 그리고 표 45에서 확인된 프로모터(들)에 작동가능하도록 연계 형질전환유전자(들)을 갖는, 서열 식별 번호: 210 또는 서열 식별 번호: 624의 뉴클레오티드 서열을 갖는 벡터가 본원에서 제공된다. 특이적 구체예들에서, 표 45에서 기재된 바와 같은 벡터가 본원에서 제공된다.
상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자가 TK 유전자 유전자좌로 삽입될 수 있음이 또한 고려된다. 다른 형질전환유전자 (존재한다면)는 다른 유전자좌, 예를 들면, 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이, B8R 유전자내 결손 좌, 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이, 및/또는 HA 유전자 유전자좌로 삽입될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 TK 유전자 내 결손을 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자는 TK 유전자 내 결손 유전자좌로 삽입된다. 다른 구체예들에서, TK 유전자는 결손되지 않지만, 그러나, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자는 TK 유전자로 삽입되고, TK 유전자 기능을 방해한다.
다른 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 기능을 하는, 예를 들면, 야생형, TK 유전자를 포함하며, 상기 형질전환유전자(들)중 어느 것도 TK 유전자로 유전자좌로 삽입되지 않는다. 야생형 TK 유전자에는 백시니아 바이러스 게놈에서 자연적으로 발견되는 TK 유전자가 내포된다.
상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자가 HA 유전자 유전자좌로 삽입될 수 있음이 또한 고려된다. 다른 형질전환유전자 (존재한다면)는 다른 유전자좌, 예를 들면, 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이, B8R 유전자내 결손 좌, 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이, 및/또는 TK 유전자 유전자좌로 삽입될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 HA 유전자 내 결손을 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자는 HA 유전자 내 결손 유전자좌로 삽입된다. 다른 구체예들에서, HA 유전자는 결손되지 않지만, 그러나, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 상기 제 3 형질전환유전자, 및/또는 상기 제 4 형질전환유전자는 HA 유전자로 삽입되고, HA 유전자 기능을 방해한다.
다른 구체예들에서, 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 기능을 하는, 예를 들면, 야생형, HA 유전자를 포함하며, 상기 형질전환유전자(들)중 어느 것도 HA 유전자로 유전자좌로 삽입되지 않는다. 야생형 HA 유전자에는 백시니아 바이러스 게놈에서 자연적으로 발견되는 HA 유전자가 내포된다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 적어도 하나의 프로모터는 상기 제 1 뉴클레오티드 서열, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열 및/또는 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계되고, 이때 상기 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터, 후기 프로모터, 또는 조기/후기 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터 및 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 후기 프로모터는 TAAAT 뉴클레오티드 서열 (서열 식별 번호: 631)을 포함할 수 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터, 후기 프로모터, 또는 조기/후기 프로모터다. 특정 구체예들에서, 상기 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터 및 후기 프로모터다. 특이적 구체예들에서, 후기 프로모터는 TAAAT 뉴클레오티드 서열 (서열 식별 번호: 631)을 포함할 수 있다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터이다 (예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다). 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)이다. 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 (예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553)을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다) 그리고 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)이다. H5R 후기 프로모터가 TAAAT (서열 식별 번호: 631)의 뉴클레오티드 서열을 포함할 때, 한 구체예에서, 상기 핵산은 TAAAT와 ATG 해독 개시 코돈 사이에 개재(intervening) 서열 (예를 들면, 개재 서열의 길이는 약 10개, 20개, 30개, 또는 40개-뉴클레오티드 길이이다)을 포함하며; 또다른 구체예에서, TAAAT와 ATG 해독 개시 코돈 사이에 개재 서열이 없다 (예를 들면, TAAAT의 마지막 두 개 뉴클레오티드는 상기 ATG 해독 개시 코돈의 처음 두 개 뉴클레오티드다). 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 조기 프로모터 (예를 들면, AAAATTGAAATTTTA (서열 식별 번호: 555)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 후기 프로모터 (예를 들면, TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (서열 식별 번호: 556)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 조기/후기 프로모터 (예를 들면, AAAATTGAAATTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (서열 식별 번호: 557)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 LEO 조기 프로모터 (예를 들면, TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATA (서열 식별 번호: 556)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 LEO 후기 프로모터 (예를 들면, AAAATTGAAAAAATA (서열 식별 번호: 558)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 LEO 조기/후기 프로모터 (예를 들면, TTTTATTTTTTTTTTTTGGAATATAAATATCCGGTAAAATTGAAAAAATA (서열 식별 번호: 559)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다. 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 TTNTTTTTTNTTTTTTTNNNNTATAAAT (서열 식별 번호: 560, 이때 N은 임의의 뉴클레오티드이다)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 TTGTATTTTCTTTTGTTGGCATATAAAT (서열 식별 번호: 561)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 D13L 프로모터 (예를 들면, TTTATTGTAAGCTTTTTCCATTTTAAAT (서열 식별 번호: 562)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 후기 프로모터는 F17R 프로모터 (예를 들면, TCATTTTGTTTTTTTCTATGCTATAAAT (서열 식별 번호: 563)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 조기 프로모터, 후기 프로모터, 또는 조기/후기 프로모터다. 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 (예를 들면, TAAAAATTTAAAATATATTATCACTTCAGT (서열 식별 번호: 564)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터 (예를 들면, AAAAAACTGATATTATATAAATATTTTAGT (서열 식별 번호: 565)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 NNAAAANTGAAAANATANNNNNNNNNNNNN (서열 식별 번호: 566, 이때 N은 임의의 뉴클레오티드이다)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터 (예를 들면, AAAAAAATGATAAAGTAGGTTCAGTTTTAT (서열 식별 번호: 567)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F11L 프로모터 (예를 들면, TAAAAAGTGAAAAACAATATTATTTTTATC (서열 식별 번호: 568)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B2R 프로모터 (예를 들면, AAAATTAAAAAATAACTTAATTTATTATTG (서열 식별 번호: 569)의 뉴클레오티드 서열을 포함)이다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 100개 뉴클레오티드와 중첩되거나, 또는 이 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 80개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 70개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 60개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 50개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 40개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 30개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 20개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 10개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 약 5개 뉴클레오티드 안에 있다. 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈의 2개 뉴클레오티드 안에 있다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 프로모터 서열은 해당 프로모터가 작동가능하도록 연계된 형질전환유전자의 해독 개시 코돈과 중첩된다.
핵산이 형질전환유전자를 포함하는 본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 상기 핵산은 미해독 영역 (UTR), 예를 들면, H5R UTR 또는 이의 일부분, 예를 들면, 해당 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 H5R UTR의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함할 수 있다. 특이적 구체예에서, H5R UTR 또는 이의 일부분은 H5R 조기 프로모터(예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR 또는 이의 일부분은 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR 또는 이의 일부분은 H5R 조기 프로모터 (예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553)의 뉴클레오티드를 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다) 및 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR은 TTAAAGTTACAAACAACTAGGAAATTGGTTTATGATGTATAATTTTTTTAGTTTTTATAGATTCTTTATTCTATACTTAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAATTATTTCATTATCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGTA (서열 식별 번호: 626)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에 기술된 다양한 구체예들 및 측면의 특이적 구체예들에서(이때 상기 핵산은 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자를 포함하는), 상기 핵산은 미해독 영역 (UTR)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 UTR은 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 H5R UTR 또는 이의 일부분 (예를 들면, H5R UTR의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%)을 포함할 수 있다. 특이적 구체예에서, H5R UTR은 H5R 조기 프로모터(예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 그리고 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR은 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR은 H5R 조기 프로모터 (예를 들면, AAAAATGAAAATAAA (서열 식별 번호: 630) 또는 TAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTT (서열 식별 번호: 553)의 뉴클레오티드를 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다) 및 H5R 후기 프로모터 (예를 들면, TAAAT (서열 식별 번호: 631), TCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 632), 또는 AAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAAT (서열 식별 번호: 554)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 해당 서열의 상류 및/또는 하류에 임의선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드를 갖는다)를 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, H5R UTR은 TTAAAGTTACAAACAACTAGGAAATTGGTTTATGATGTATAATTTTTTTAGTTTTTATAGATTCTTTATTCTATACTTAAAAAATGAAAATAAATACAAAGGTTCTTGAGGGTTGTGTTAAATTGAAAGCGAGAAATAATCATAAATTATTTCATTATCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGTA (서열 식별 번호: 626)의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, 다음 유전자들중 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 20개, 30개, 40개, 50개, 60개, 70개, 80개, 90개, 또는 100개, 또는 이들 모두는 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈으로부터 결손되지 않는다: C3L, C4L, C5L, C6L, C7L, C8L, C9L, C10L, C11R, C12L, C13L, C14L, C15L (5' ITR에서), C16L (5' ITR에서), C17L (5' ITR에서), C18L (5' ITR에서), C19L (5' ITR에서), C20L (5' ITR에서), C21L (5' ITR에서), C22L (5' ITR에서), C23L (5' ITR에서), F4L, F5L, F6L, F7L, F8L, F9L, F10L, F11L, F12L, F13L, F14L, F15L, F16L, F17R, E1L, E2L, E3L, E4L, E5R, E6R, E7R, E8R, E9L, E10R, E11L, O1L, O2L, I1L, I2L, I3L, I4L, I5L, I6L, I7L, I8R, G1L, G2R, G3L, G4L, G5R, G6R, G7L, G8R, G9R, L1R, L2R, L3L, L4R, L5R, J1R, J2R, J3R, J4R, J5L, J6R, H1L, H2R, H3L, H4L, H5R, H6R, H7R, D1R, D2L, D3R, D4R, D5R, D6R, D7R, D8L, D9R, D10R, D11L, D12L, D13L, A1L, A2L, A3L, A4L, A5R, A6L, A7L, A8R, A9L, A10L, A11R, A12L, A13L, A14L, A15L, A16L, A17L, A18R, A19L, A20R, A21L, A22R, A23R, A24R, A25L, A26L, A27L, A28L, A29L, A30L, A31R, A32L, A33R, A34R, A35R, A36R, A37R, A38L, A39R, A40R, A41L, A42R, A43R, A44L, A45R, A46R, A47L, A48R, A49R, A50R, A51R, A52R, A53R, A54L, A55R, A56R, A57R, B1R, B2R, B3R, B4R, B5R, B6R, B7R, B8R, B9R, B10R, B11R, B12R, 및 B13R (예를 들면, 유전자 설명을 위해 Goebel et al., 1990, Virology 179(1):247-266 참고, 이는 이러한 설명에 대해 본원에 참고자료로 편입됨).
또다른 측면에서, 표 43에서 기술된 핵산 서열을 포함하는 핵산이 본원에서 제공된다.
또다른 측면에서, 섹션 6의 실시예에서 기술된 핵산이 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 16개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 17개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 18개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 19개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 20개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 21개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 22개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자 결손을 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자 각각의 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 숙주 상호작용에 연루된 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 세포외 매트릭스에 대한 칼슘-독립성 흡착에 영향을 준다. 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 NF-κB 억제제, 예를 들면, C2L, N1L, M2L, K1L, 그리고 K7R 유전자로 구성된 군에서 선택된 유전제에 의해 인코드된 NF-κB 억제제다. 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 아팝토시스 억제제, 예를 들면, 카스파제-9 억제제 (이를 테면, F1L 유전자에 의해 인코드된 것), BCL-2-유사 단백질 (이를 테면, N1L에 의해 인코드된 단백질)이다. 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 인터페론 조절 인자 3 (IRF3) 억제제 (이를 테면, N2L 또는 K7R에 의해 인코드된 것), 세린 프로테아제 억제제, 세포 융합을 억제시키는 단백질 (이를 테면, K2L에 의해 인코드된 단백질), RNA-활성화된 단백질 키나제 (PKR) 억제제 (이를 테면, K1L 또는 K3L에 의해 인코드된 것), 독성 인자 (이를 테면, F3L에 의해 인코드된 것), IL-1-베타 억제제 (이를 테면, B16R에 의해 인코드된 것), 또는 분비된 IFNα 격리자(sequestor) (이를 테면, B19R에 의해 인코드된 것)이다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 DNA 복제에 연루된 단백질을 인코딩하는 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 전술한 단백질은 DNA 변형 뉴클레아제 (예를 들면, K4L에 의해 인코드된 단백질) 또는 데옥시우리딘 트리포스파타제 (dUTPase) (예를 들면, F2L에 의해 인코드된 단백질)이다.
일부 구체예들에서, 적어도 하나의 결손된 유전자의 전체 뉴클레오티드 서열이 결손된다. 일부 구체예들에서, 적어도 하나의 결손된 유전자는 단지 부분적으로 결손되며, 그리고 해당 부분 결손으로 전술한 부분적으로 결손된 유전자가 숙주 세포 안으로 도입될 때 비기능성이 되도록 하는데 충분하다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 역전된 말단 반복 (ITRs)의 적어도 두 개 복사본을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈에는 ITRs의 임의의 복사본이 결여되어 있다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR로 구성된 군에서 선택된 ITR중 적어도 하나의 복사본에 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 다음 복사본중 적어도 모두에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B8R 유전자내 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 (i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손, 그리고 (ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 (i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손; 그리고 (ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자으로 구성된 군에서 선택된 적어도 하나의 형질전환유전자를 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자으로 구성된 군에서 선택된 적어도 두 개의 형질전환유전자를 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
예를 들면, 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예들에서, 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
예를 들면, 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 막-결합된다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p70이다. 일부 구체예들에서, 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p35이다.
예를 들면, 일부 구체예들에서, 제공된 핵산은 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 사이토킨은 인터페론 (IFN)이다. 일부 구체예들에서, 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다. 일부 구체예들에서, TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 c-kit로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 B8R 유전자내 결손을 포함하고, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다. 일부 구체예들에서, 적어도 2 개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다. 일부 구체예들에서, 적어도 3 개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다. 일부 구체예들에서, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손이 아닌 유전자 좌, 예를 들면, 오르토폭스바이러스 게놈의 5' 단부에서 결손 경계에 있는 유전자좌 또는 오르토폭스바이러스 게놈의 3' 단부에서 결손 경계에 있는 유전자좌에 삽입된다.
한 측면에서, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산이 제공되며, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 (i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손; (ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR; (iii) B8R 유전자내 결손으로 삽입된 IL-12-TM 형질전환유전자; (iv) B8R 유전자내 결손으로 삽입된 Flt3 리간드 형질전환유전자; 그리고 (v) 다음중 하나: (a) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 형질전환유전자, 또는 (b) (i) 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄를 인코드하는 형질전환유전자, 그리고 (ii) 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄를 인코드하는 형질전환유전자, 이때 상기 (v)의 형질전환유전자(들)은 상기 재조합 오르토폭스바이러스 게놈에 존재하는 5p 결손의 경계 안에 삽입되며, 이때 상기 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CTLA-4에 결합할 수 있다.
일부 구체예들에서, 상기 오르토폭스바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 서열로부터 유래되며, 이때 (a) 전술한 유래된 서열은 B8R 유전자 결손, 그리고 IL-12-TM 형질전환유전자, Flt3 리간드 형질전환유전자, 그리고 단일쇄 또는 이중-쇄 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 형질전환유전자(들)을 포함하며; (b) IL-12-TM 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하며; (c) Flt3 리간드 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고; 그리고 (d) 상기 항-CTLA-4 항체는 서열 식별 번호: 211의 아미노산 서열을 포함한다.
제공된 핵산의 일부 구체예들에서, 상기 핵산은 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자, 예를 들면, 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원을 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다. 일부 구체예들에서, HPV 단백질 또는 이의단편들은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들중 하나 또는 그 이상을 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 HPV 단백질 또는 단편들의 서열은국제 특허 공개 WO/2014/127478(이의 내용은 본원에 참고자료로 편입됨)에 기재된다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제(prostatic acid phosphatase), 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
본원에서 기술된 하나 이상의 형질전환유전자들이 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 (예를 들면, 재조합 백시니아 바이러스 게놈)으로 삽입될 때, 해당 형질전환유전자는 하나의 유전자좌 또는 다수의 유전자좌 (예를 들면, 두 개의 유전자좌 또는 세 개의 유전자좌)로 삽입될 수 있다. 상기에서 기술된 두 개 또는 그 이상의 형질전환유전자가 동일한 유전자좌로 삽입될 때, 해당 형질전환유전자는 상기 측면 내생적 오르토폭스바이러스 유전자 (예를 들면, 백시니아 바이러스 유전자)중 하나 또는 이 둘 모두에 대해 그리고 또한 서로에 대해 동일한 방향으로 삽입될 수 있거나, 또는 상이한 방향으로 삽입될 수 있다. 두 개 또는 그 이상의 형질전환유전자는 동일한 유전자좌로 삽입될 때, 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 (예를 들면, 재조합 백시니아 바이러스 게놈)의 동일한 좌로 삽입된 형질전환유전자들의 순서는 상이할 수 있다.
본원에서 기술된 다양한 구체예들과 측면들의 특정 구체예들에서, CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 해당 항-CTLA-4 항체 (예를 들면, 이필리무맙)의 중쇄와 경쇄를 인코드하며, 이들 두 쇄는 분할 펩티드, 예를 들면 자가-분할 펩티드, 예를 들면, 2A 자가-분할 펩티드에 의해 분리되어 있다. 특이적 구체예에서, 2A 자가-분할 펩티드는 T2A 펩티드이다. 특정 구체예에서, T2A 펩티드는 아미노산 서열 GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 식별 번호: 570)을 포함한다. 특정 구체예에서, T2A 펩티드는 아미노산 서열, PRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 식별 번호: 571)을 포함한다. 또다른 특정 구체예에서, T2A 펩티드는 아미노산 서열, EGRGSLLTCGDVEENPGP (서열 식별 번호: 572)을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 2A 자가-분할 펩티드는 P2A 펩티드이다. 특정 구체예에서, P2A 펩티드는 아미노산 서열, GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열 식별 번호: 573)을 포함한다. 또다른 특정 구체예에서, P2A 펩티드는 아미노산 서열, ATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열 식별 번호: 574)을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 2A 자가-분할 펩티드는 E2A 펩티드이다. 특정 구체예에서, E2A 펩티드는 아미노산 서열, GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP (서열 식별 번호: 575)을 포함한다. 또다른 특정 구체예에서, E2A 펩티드는 아미노산 서열, QCTNYALLKLAGDVESNPGP (서열 식별 번호: 576)을 포함한다. 또다른 특이적 구체예에서, 2A 자가-분할 펩티드는 F2A 펩티드이다. 특정 구체예에서, F2A 펩티드는 아미노산 서열, GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (서열 식별 번호: 577)을 포함한다. 또다른 특정 구체예에서, F2A 펩티드는 아미노산 서열, VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (서열 식별 번호: 578)을 포함한다. 2A 자가-분할 펩티드에 의한 항체의 중쇄와 경쇄의 연계로 상기 항체 형질전환유전자가 하나의 개방 판독 프레임에서 해독되며, 자가-분할이 동시 해독되어, 공동-발현된 중쇄와 경쇄이 동량이 되도록 한다. 특이적 구체예에서, 본원에서 기술된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된 항-CTLA-4 항체는 서열 식별 번호: 211의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 구체예들에서, 본원에서 제공된 핵산은 재조합 핵산이다.
5.2.4. 변형된 오르토폭스바이러스
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 바이러스가 본원에서 제공된다. 특이적 구체예에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 바이러스가 본원에서 제공되며, 이때 상기 핵산은 막-결합된 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자를 포함하는 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함한다.
또다른 측면에서, 섹션 6의 실시예에서 기술된 바이러스가 본원에서 제공된다.
또다른 측면에서, 본원에서 기술된 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스가 제공된다. 일부 구체예들에서, a) 상기 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고; b) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함하고; 또는 c) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전술한 바이러스는 백시니아 바이러스로부터 유래된다. 일부 구체예들에서, 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 군에서 선택된 균주로부터 유래된다. 일부 구체예들에서, 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주로부터 유래된다. 일부 구체예들에서, 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 티미딘 키나제 (TK) 유전자를 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 리보뉴클레오티드 환원효소 유전자를 더 포함한다.
제공된 바이러스의 일부 구체예들에서, 세포 (예를 들면, 포유류 세포)에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 해당 세포 (예를 들면, 포유류 세포) 집단은 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스와 접촉된 동일한 유형의 세포 (예를 들면, 포유류 세포) 집단과 비교하여, 합포체 형성이 증가되는 것으로 나타난다.
제공된 바이러스의 일부 구체예들에서, 세포 (예를 들면, 포유류 세포)에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 해당 세포 (예를 들면, 포유류 세포) 집단은 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스와 접촉된 동일한 유형의 세포 (예를 들면, 포유류 세포) 집단과 비교하여, 해당 바이러스의 확산이 증가되는 것으로 나타난다.
제공된 바이러스의 일부 구체예들에서, 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스의 것과 비교하여, 해당 세포 (예를 들면, 포유류 세포)에서 증가된 세포독성 효과를 발휘한다.
일부 구체예들에서, 전술한 포유류 세포는 인간 세포다.
일부 구체예들에서, 전술한 인간 세포는 암 세포다.
일부 구체예들에서, 전술한 포유류 세포는 U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562, 그리고 HCT-116으로 구성된 군에서 선택된 세포주의 세포다.
제공된 바이러스의 일부 구체예들에서, 상기 바이러스는 종양-연합된 항원, 예를 들면, 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다. 일부 구체예들에서, HPV 단백질 또는 이의단편들은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들중 하나 또는 그 이상을 포함한다. 일부 구체예들에서, 전술한 HPV 단백질 또는 단편들의 서열은국제 특허 공개 WO/2014/127478(이의 내용은 본원에 참고자료로 편입됨)에 기재된다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제(prostatic acid phosphatase), 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 단리된 바이러스다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 정제된 바이러스다.
다양한 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 재조합 바이러스다.
특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 환자 (예를 들면, 포유류 환자)에게 투여될 때, 수두 병변 형성을 야기하지 않는다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 시험관내에서 복제될 수 있고, 및/또는 환자 (예를 들면, 포유류 환자)에게 투여될 때, 복제될 수 있다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 시험관내에서 및/또는 환자 (예를 들면, 포유류 환자)에게 투여될 때, 본원에서 기술된 형질전환유전자(들)을 발현시킬 수 있다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 바이러스는 시험관내에서 및/또는 환자 (예를 들면, 포유류 환자)에게 투여될 때, 표적 종양 세포들을 사멸시킬 수 있다 (예를 들면, 암 세포독성을 나타냄). 수두 병변 형성, 복제, 형질전환유전자 발현, 또는 표적 종양 세포들 (예를 들면, 암 세포독성)의 사멸을 결정하기 위해 이용될 수 있는 예시적인 검증에 대해 섹션 6의 실시예들을 참고한다.
5.2.5. 바이러스 특징들을 측정하기 위한 검증법
특정 구체예들에서, 복제/확산 능력, 생존력, 형질전환유전자를 발현시키는 능력, 및/또는 표적 종양 세포들 (예를 들면, 암 세포독성)을 사멸시키는 본원에서 기술된 상기 바이러스의 능력은 당분야에 공지된 방법을 이용하여 테스트되었다. 복제/확산, 생존력, 형질전환유전자 발현, 또는 표적 종양 세포들을 사멸 (예를 들면, 암 세포독성)을 결정하는데 이용될 수 있는 예시적인 검증에 대해 섹션 6의 실시예들을 참고한다.
바이러스의 종양 확산 및 독성을 측정하는 당분야에 공지된 검증에는 플라크 크기, 합포체 형성을 측정, 및/또는 comet 검증 (EEVs)이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 바이러스의 면역자극 활성을 측정하는 당분야에 공지된 검증에는 NK 활성화 (CD69 발현%로 측정됨), NK 과립소실 (CD107a의 배수 증가로 측정됨), 및/또는 T-세포 프라이밍(priming) 검정이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 바이러스의 선택성을 측정하는 당분야에 공지된 검증에는 꼬리 수두 병변(tail pox lesions), 생체분포, 및/또는 체질량 측정이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
5.2.6. 세포, 세포주 및 패키징(Packaging) 세포주
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 세포가 본원에서 제공된다. 또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스를 포함하는 세포가 본원에서 제공된다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 세포는 포유류 세포 (예를 들면, 인간 세포)다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 세포는 숙주 세포 (예를 들면, 섹션 5.4에서 기술된 숙주 세포)다.
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 세포주이 본원에서 제공된다. 또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스를 포함하는 세포주이 본원에서 제공된다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 세포계통은 포유류 세포주(예를 들면, 인간 세포주)이다.
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산을 포함하는 패키징 세포주이 본원에서 제공된다. 또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스를 포함하는 패키징 세포주이 본원에서 제공된다. 상기 패키징 세포주는 오르토폭스바이러스 바이러스 (예를 들면, 백시니아 바이러스)를 패키징하기에 적합한 임의의 세포주일 수 있다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 패키징 세포주는 포유류 패키징 세포주 (예를 들면, 인간 패키징 세포주)이다.
본원에서 기술된 바이러스를 배양하는데 이용될 수 있는 예시적인 세포에는 예를 들면, HeLa 세포, U2OS 세포, 293T 세포, NIH3T3 세포, Jurkat 세포, 293 세포, COS 세포, CHO 세포, Saos 세포, PC12 세포, 그리고 닭 배아 섬유아세포 (CEF)들이 내포된다. 본원에서 기술된 바이러스를 패키지하는데 이용될 수 있는 예시적인 패키징 세포주에는 예를 들면, HeLa 세포주, U2-OS 세포주, HEK293T 세포주, 786-O 세포주, A549 세포주 또는 흡착성 인간 암 세포주들이 내포된다. 특정 구체예들에서, 상기 세포들은 백시니아 바이러스의 복제 및/또는 패키징에 필요한 하나 또는 그 이상 인자를 또한 발현하거나, 또는 이를 발현시키도록 공작된다.
특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 세포, 세포주, 또는 패키징 세포주는 섹션 6의 실시예에서 기술된 세포, 세포주 또는 패키징 세포주들이다.
5.2.7. 오르토폭스바이러스 유전자에 의해 인코드된 단백질의 예시
본원에서 기재된 오르토폭스바이러스 유전자에 의해 인코드된 예시적인 단백질은 하기 표 31-40에서 재현된다. 하기에서 사용된, 용어 "위치"란 본원에 기술된 예시적인 오르토폭스바이러스 벡터에서 결손된 핵산에 대한 유전자의 위치를 지칭한다. 다양한 유전자들의 경우, 아미노산 서열 정보 및 단백질 수납 ID 번호가 제공된다.
5.3. 유전적 변형 방법
표적 게놈에 핵산의 삽입 또는 이로부터 핵산을 결손시키는 방법에는 본원에서 기술된 방법 및 당분야에 공지된 방법들이 내포된다. 본 발명의 조성물의 발현에 영향을 주는 핵산 전달 방법에는 핵산 (예를 들면, DNA, 바이러스와 비-바이러스 벡터를 비롯하여)을 세포기관(organelle), 세포, 조직 또는 유기체내로 도입시킬 수 있는 사실상 모든 방법(본원에서 기술된 또는 당업자에게 공지된 것 같은)이 내포되는 것으로 간주된다. 이러한 방법들에는 DNA의 직접 전달, 이를 테면, 주사 (U.S. 특허 번호 5,994,624, 5,981,274, 5,945,100, 5,780,448, 5,736,524, 5,702,932, 5,656,610, 5,589,466 및 5,580,859, 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨), 마이크로주사 (Harland and Weintraub, 1985; U.S. 특허 번호 5,789,215, 본원에 참고자료로 편입됨)를 비롯한 주사에 의해; 전기천공에 의해 (U.S. 특허 번호 5,384,253, 본원에 참고자료로 편입됨); 인산 칼슘염 침전에 의해 (Graham and Van Der Eb, 1973; Chen and Okayama, 1987; Rippe et al., 1990); DEAE-덱스트란에 이어 폴리에틸렌 글리콜을 사용함으로써(Gopal, 1985); 직접적인 소닉 로딩(sonic loading)에 의해 (Fechheimer et al., 1987); 리포좀 매개된 형질감염에 의해(Nicolau and Sene, 1982; Fraley et al., 1979; Nicolau et al., 1987; Wong et al., 1980; Kaneda et al., 1989; Kato et al., 1991); 미세발사체 투하(microprojectile bombardment) (PCT 출원 번호 WO 94/09699 및 95/06128; U.S. 특허 번호 5,610,042; 5,322,783, 5,563,055, 5,550,318, 5,538,877 및 5,538,880, 그리고 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨); 실리콘 카바이드 섬유를 이용한 교반에 의해 (Kaeppler et al., 1990; U.S. 특허 번호 5,302,523 및 5,464,765, 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨); 아그로박테리움(Agrobacterium)-매개된 형질전환 (U.S. 특허 번호 5,591,616 및 5,563,055, 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨); 또는 원형질체(protoplasts)의 PEG-매개된 형질전환에 의해 (Omirulleh et al., 1993; U.S. 특허 번호 4,684,611 및 4,952,500, 이들 각각 본원에 참고자료로 편입됨); 탈수/억제-매개된 DNA 취입에 의해 (Potrykus et al., 1985) 전달이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 이를 테면, 이들 기술의 적용을 통하여 세포기관(들), 세포(들), 조직(들) 또는 유기체(들)은 안정적으로 또는 일과적으로 형질전환될 수 있다.
CopMD5p, CopMD3p, 그리고 CopMD5p3p 바이러스에서 결손된 유전자 클러스터 및 이의 기능에 대해 하기에서 기술된다. ITR 유전자들 (표 2에서 "-ITR" 및 "*"로 표시됨)은 해당 게놈의 우측 ITR인 하나의 복사본에서 결손된다. 그러나, 이들 유전자는 왼쪽 ITR에 두번째 복사본을 가지며, 이들은 이들 바이러스에서 무손상 상태로 유지된다. 전체 게놈 시퀸싱에 의해 결손들이 확인되었다. 결손된 유전자의 대부분은 바이러스 감염에 대한 숙주 반응을 차단시키는데 연루되거나, 또는 알려지지 않은 기능을 갖는다.
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다양한 구체예들에서, 상기 오르토폭스 바이러스는 B8R 유전자내 결손을 함유하도록 유전적으로 더 변형된다. 상기 백시니아 바이러스 B8R 유전자는 감마 인터페론 수용체 (IFN-γ)에 상동성인 분비 단백질을 인코드한다. 시험관내, B8R 단백질은 인간 및 렛(rat) 감마 인터페론을 비롯한 몇 가지 종의 감마 인터페론에 결합하고, 이의 항바이러스 활성을 중화한다; 그러나, 이것은 뮤린 IFN-γ에 유의적으로 결합하지 않는다. B8R 유전자 결손으로 인간의 IFN-γ 손상을 방지한다. 다양한 구체예들에서, 하나, 둘 또는 세 개 형질전환유전자들이 상기 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다. 일부 균주들에서, B8R 결손 부위에 존재하는 형질전환유전자(들)에 추가적으로, 해당 균주는 상기 오르토폭스 바이러스 상에서 상기 결손된 B8R 유전자의 유전자좌가 아닌 추가적인 유전자좌로 삽입된 적어도 하나의 형질전환유전자를 또한 갖는다. 다양한 구체예들에서, 적어도 하나의 형질전환유전자는 5p 결손의 경계로 삽입되며, 적어도 하나의 형질전환유전자는 3p 결손의 경계로 삽입되거나, 또는 이 둘 모두에 삽입된다. 다양한 구체예들에서, 적어도 3개, 4개, 5개 또는 그 이상의 형질전환유전자들이 상기 변형된 오르토폭스 바이러스 게놈으로 삽입된다.
다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터의 서열은 하기 표 43에서 서열 식별 번호: 210으로 나타낸 서열이다. 일부 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터의 서열은 서열 식별 번호: 210의 파생 서열이다. 예를 들면, 본원에서 명시된대로, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터는 본원에서 논의된 하나 또는 그 이상 형질전환유전자들을 발현시키도록 변형될 수 있다.
다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터의 서열은 하기 표 43에서 서열 식별 번호: 624로 나타낸 서열이다. 일부 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터의 서열은 서열 식별 번호: 624의 파생 서열이다. 예를 들면, 본원에서 명시된대로, 상기 변형된 오르토폭스바이러스 벡터는 B8R 서열의 결손을 함유할 수 있거나, 및/또는 본원에서 논의된 하나 또는 그 이상 형질전환유전자들을 발현시키도록 변형될 수 있다.
다양한 구체예들에서, 상기 변형된 오르토폭스바이러스는 다음 세 가지 형질전환유전자들(transgenes)중 적어도 하나를 발현시킨다: IL-12-TM, FLT3-L 및 항-CLTA4 항체. 이들 형질전환유전자의 서열의 비-제한적인 예시 및/또는 이들을 인코드하는 아미노산 서열의 비-제한적 예시들이 하기에서 제시된다:
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Figure pct00008
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재조합 백시니아 본원에서 기술된 바이러스를 만드는 예시적인 방법들은 섹션 6.32의 실시예 32 참고.
5.4. 바이러스 증식
본 발명은 야생형과 비교하였을 때 하나 또는 그 이상 유전자 결손을 갖도록 구축된 것들을 비롯한 재조합 오르토폭스바이러스를 특징으로 하며, 이러한 바이러스는 암이 아닌 세포에는 독성이 적거나 또는 비-독성이면서, 암 세포에 대항하여 사용되는 원하는 속성을 나타낸다. 이 섹션은 재조합 DNA 기술의 사용을 통해 돌연변이된 바이러스를 생성하는 방법과 같은, 본원에 기술된 재조합 오르토폭스바이러스를 생산하기 위한 다양한 프로토콜을 실시예를 통하여 요약한다.
예를 들면, 상기 오르토폭스바이러스 게놈에서 돌연변이를 만들기 위해, 고유한 폴리펩티드와 변형된 폴리펩티드는 벡터 안에 포함된 핵산 분자들에 의해 인코드될 수 있다. 벡터에는 예를 들면, 플라스미드, 코스미드, 바이러스 (박테리오파아지, 동물 바이러스, 그리고 식물 바이러스), 그리고 인공 염색체 (예를 들면, YACs)들이 내포될 수 있다. 당업자는 표준 재조합 기술을 통해 벡터를 구축할 수있는 장비를 갖추고 있을 것이며, Sambrook et al., (1989) 그리고 Ausubel et al., 1994에서 기술되고, 이둘 모두는 전문이 본원에 참고자료로 편입된다. 변형된 폴리펩티드를 인코딩하는 것에 추가적으로, 벡터는 비-변형된 폴리펩티드 서열, 이를 테면, 테그(tag) 또는 표적화 분자를 인코드할 수 있다.
숙주 세포에서 벡터를 증식시키기 위해, 벡터는 복제 부위의 하나 또는 그 이상의 원점 (흔히 "ori"로 지칭됨)을 함유할 수 있으며, 이 원점은 복제가 개시되는 특이적 핵산 서열이다. 대안으로, 상기 숙주 세포가 효모라면, 자체적으로 복제되는 서열 (ARS)이 이용될 수 있다.
이형성 핵산 서열을 표현하는 문맥에서, "숙주 세포"란 원핵성 세포 또는 진핵성 세포를 지칭하며, 그리고 이 세포에는 벡터를 복제할 수 있거나 및/또는 벡터에 의해 인코드된 이형성 유전자를 발현시킬 수 있는 형질변환가능한 임의 유기체가 내포된다. 숙주 세포는 벡터 또는 바이러스 (이들이 외생성 폴리펩티드를 발현시킬 때, 벡터로 적격하다)의 수령자로 이용될 수 있고, 이용되어 왔었다. 숙주 세포는 외생성 핵산, 이를 테면, 변형된 단백질-인코딩 서열이 숙주 세포로 전달되거나, 또는 도입되는 과정에 의해 "형질감염되거나(transfected)" 또는 "형질변환(transformed)"될 수 있다. 형질변환된 세포에는 일차(primary) 대상체 세포와 이의 후손이 내포된다. 숙주 세포는 원하는 결과가 벡터의 복제인지 또는 벡터-인코딩된 핵산 서열의 일부 또는 전부의 발현인지에 따라, 효모 세포, 곤충 세포, 그리고 포유류 세포들을 비롯한, 원핵생물 또는 진핵생물로부터 유래될 수 있다. 숙주 세포로 사용할 수 있는 수많은 세포주 및 배양물이 있으며, American Type Culture Collection(ATCC)를 통해 얻을 수 있고, 이곳은 살아있는 배양물과 유전적 물질에 대한 보관소 역할을 하는 조직이다(www.atcc.org). 적합한 숙주는 벡터 백본(backbone) 및 원하는 결과에 기초하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. 플라스미드 또는 코스미드(예를 들면)는 많은 벡터를 복제하기 위해 원핵생물 숙주 세포로 도입될 수 있다. 벡터 복제 및/또는 발현을 위해 숙주 세포로 이용되는 박테리아 세포에는 DH5α, JM109, 그리고 KCB, 뿐만 아니라 다수의 시판되는 이용가능한 박테리아 숙주, 이를 테면, SURE® Competent Cells 및 SOLOPACK™ Gold Cells (STRATAGENE®, La Jolla, Calif.)이 내포된다. 대안으로, 박테리아 세포 이를 테면, 대장균(E. coli) LE392는 파아지 바이러스를 위한 숙주 세포로 이용될 수 있다. 적합한 효모 세포에는 사카로미세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스 폼베(Saccharomyces pombe), 그리고 피치아 파스토리스(Pichia pastoris)가 내포된다. 벡터의 복제 및/또는 발현을 위한 진핵성 숙주 세포의 예시로는 HeLa, NIH3T3, Jurkat, 293, COS, CHO, Saos, 그리고 PC12가 내포된다. 다양한 세포 유형 및 유기체들로부터 많은 숙주 세포들이 이용가능하며, 이들은 당업자게에 공지일 것이다. 유사하게, 바이러스 벡터는 진핵성 숙주 세포 또는 원핵성 숙주 세포, 특히, 벡터의 복제 또는 발현을 허용하는 것들과 병용될 수 있다. 일부 벡터는 원핵성 세포와 진핵성 세포 모두에서 벡터의 복제 및/또는 발현을 허용하는 제어 서열을 이용하 수 있다. 당업자는 전술한 모든 숙주 세포를 배양하여 이들을 유지하고 벡터의 복제를 허용하는 조건을 추가로 이해할 것이다. 또한, 벡터 대규모 생산, 뿐만 아니라, 벡터에 의해 인코드된 핵산 산물 및 이들의 동족(cognate) 폴리펩티드, 단백질 또는 펩티드 생산을 허용하는 기술 및 조건이 이해되고, 알려져 있다.
섹션 5.2.6 및 5.4에서 기술된 세포, 세포주, 또는 패키징 세포주를 이용하여 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스를 증식시키는 방법이 또한 본원에서 제공된다. 한 측면에서, 바이러스를 증식시키는 방법이 본원에서 제공되는데, 이 방법은 본원에서 기술된 바이러스에 의해 감염된 세포, 세포주, 또는 패키징 세포주를 배양하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 바이러스는 증식 후, 단리되거나 또는 정제된다. 바이러스 증식을 위한 예시적인 방법 및 기술들에 대해 섹션 6의 실시예들 참고.
5.5. 치료 방법
5.5.1. 약제학적 조성물, 투여, 그리고 용량(Doses)
섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스 및 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 치료요법적으로 유효량의 상기 바이러스를 포함한다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 본원에서 기술된 치료 방법에 이용된다.
당분야에 공지된 방법을 이용하여 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 함유하는 치료요법적 조성물이 준비될 수 있다. 예를 들면, 이러한 조성물은 예를 들면, 생리학적으로 수용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제를 이용하고 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980); 본원에 참고자료로 편입됨), 그리고 바람직한 형태, 예를 들면, 동결건조된 제형 또는 수성 용액 형태로 준비될 수 있다.
본 발명의 방법들과 조성물을 이용하여 종양용해(oncolysis)를 유도하고, 세포를 사멸시키고, 성장을 저해하고, 전이를 저해하고, 종양 크기를 감소시키고, 그렇지 않으면 종양 세포들의 악성 표현형을 역전시키거나 또는 감소시키기 위해, 종양에 상기 변형된 오르토폭스바이러스를 접촉시킬 수 있는데, 예를 들면, 해당 오르토폭스바이러스를 암 환자에게 예를 들면, 본원에서 기술된 하나 또는 그 이상 투여 경로를 통하여 투여함으로써 접촉시킬 수 있다. 투여 경로는 암의 위치 및 성질에 따라 가변적일 수 있고, 그리고 예를 들면, 피내, 경피, 비경구, 정맥내, 근육내, 비강내, 피하, 국소 (예를 들어, 종양 근처, 특히 종양의 혈관계 또는 인접 혈관계), 경피적(percutaneous), 기관내, 복강내, 동맥내, 방광내, 종양내, 흡입, 관류(perfusion), 세척(lavage), 경구 투여 및 제형이 내포될 수 있다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물은 이용되는 투여 경로에 적합하도록 제형화된다.
용어 "혈관내(intravascular)"란 환자의 혈관 내로의 전달을 의미하는 것으로 이해되며, 이는 환자의 혈관으로, 혈관안에, 또는 혈관 또는 혈관들 내를 의미한다. 특정 구체예들에서, 상기 투여는 정맥 (정맥내)으로 간주되는 혈관에 투여되는 반면, 다른 투여에서는 동맥으로 간주되는 혈관에 투여된다. 정맥에는 내부 경정맥, 말초 정맥, 관상 정맥, 간 정맥, 문맥, 대복 재정맥, 폐정맥, 상대정맥(superior vena cava), 하대정맥(inferior vena cava), 위 정맥, 비장 정맥, 하장간막 정맥(inferior mesenteric vein), 상장간막정맥(superior mesenteric vein), 두부 정맥 및/또는 대퇴 정맥이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 동맥에는 관상 동맥, 폐동맥, 상완 동맥, 내 경동맥, 대동맥 궁(aortic arch), 대퇴 동맥, 말초 동맥 및/또는 섬모 동맥이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 전달은 세동맥 또는 모세관을 통해, 또는 세동맥 또는 모세관으로 전달될 수 있음도 고려된다.
종양내 주사, 또는 종양 혈관계로의 직접 주사는 이산된( discrete) 고형의 접근가능한 종양에 대해 특히 고려된다. 국소 투여, 지역적 투여 또는 전신 투여 또한 적합할 수 있다. 바이러스 입자는 유리하게는 예를 들어, 대략 1cm 간격으로 이격된 종양에 다수의 주사를 투여함으로써 접촉될 수 있다. 외과적 개입의 경우, 본 발명은 수술불가능한 종양을 절제할 수 있도록, 수술 전에 사용될 수 있다. 적절한 경우, 예를 들어, 종양 또는 종양 혈관계에 카테터를 이식함으로써 연속 투여가 또한 적용될 수 있다. 이러한 연속 관류(perfusion)는 예를 들어, 치료 시작 후 약 1-2 시간, 약 2-6 시간, 약 6-12 시간, 또는 약 12-24 시간 동안 발생할 수 있다. 일반적으로, 연속 관류를 통한 치료요법적 조성물의 용량(dose)은 관류가 발생하는 기간에 걸쳐 조정된 단일 주사 또는 다수 주사에 의해 제공된 용량에 등가일 수 있다. 특히 흑색종 및 육종의 치료에서 본 발명의 치료요법적 조성물을 투여하기 위해 사지 관류가 사용될 수 있음이 추가로 고려된다.
치료 요법은 가변적이며, 종양 유형, 종양 위치, 질환 진행, 그리고 해당 환자의 건강 및 연령에 따라 대개 달라질 수 있다. 특정 유형의 종양은 더 공격적인 치료가 필요한 반면, 동시에 특정 환자는 아주 힘든 프로토콜을 견딜 수 없다. 임상의는 치료요법적 제형의 알려진 효능 및 독성 (만일 존재한다면)을 기반으로 이러한 결정을 적합하게 내릴 수 있다. 특정 구체예들에서, 치료되는 종양은 적어도 초기에는 절제불가능 할 수 있다. 본 명세서의 치료제를 사용한 치료는 가장자리의 수축 또는 구체적으로 침습성인 특정 부분의 제거로 인해, 종양의 절제성을 증가시킬 수 있다. 치료 후, 절제가 가능할 수 있다. 절제 후 추가 치료는 종양 부위의 미세한 잔류 질병을 제거하는 데 도움이 될 것이다.
해당 치료에는 다양한 "단위 용량(unit doses)"이 내포될 수 있다. 단위 용량은 미리 결정된 양의 치료 조성물을 포함하는 것으로 정의된다. 투여되는 양, 특정 경로 및 제형은 임상 분야의 기술 범위 내에 있다. 단위 용량은 단일 주사로 투여할 필요는 없지만, 설정된 시간 동안 연속 주입을 포함할 수 있다. 본 발명의 단위 용량은 편의상 바이러스 구조체에 대한 플라크 형성 단위 (pfu)로 기술될 수 있다. 단위 용량의 범위는 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011, 1012 에서 1013 pfu 까지, 그리고 이보다 더 높은 범위일 수 있다. 추가적으로 또는 대안으로, 바이러스 종류 및 이들의 도달가능한 역가에 따라, 1 ~ 100, 10 ~ 50, 100~1000, 또는 최대 약 또는 적어도 약 1×104, 1×105, 1×106, 1×107, 1×108, 1×109, 1×1010, 1×1011, 1×1012, 1×1013, 1×1014, 또는 1×1015 또는 이보다 더 높은 (이 사이의 모든 값과 범위가 내포됨) 감염성 바이러스 입자(vp)들을 상기 종양 또는 종양 부위로 전달할 수 있다.
본원에 기술된 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 암 세포 또는 종양 세포들로 전달하는 또다른 방법은 종양내 주사를 통하여 전달할 수 있다. 그러나, 본원에 기술된 약제학적 조성물은 대안으로 비경 구, 정맥내, 피내, 근육내, 경피 또는 복강내 투여로 투여될 수 있다(U.S. 특허 번호 5,543,158; U.S. 특허 번호 5,641,515 및 U.S. 특허 번호 5,399,363 (각각은 이의 전문이 본원에 참고자료로 편입됨). 핵산 구조체의 주사는 발현 구조체가 주사에 필요한 특정 바늘 게이지를 통과할 수 있는 한, 주사기 또는 용액 주입에 사용되는 다른 방법에 의해 전달될 수 있다. 재조합 오르토폭스본원에서 기술된 바이러스의 투여에 이용할 수 있는 예시적인 바늘없는 주사시스템이 U.S. 특허 번호 5,846,233에서 구체화된다. 이 시스템은 용액을 보관하기 위한 앰플 챔버를 특정하는 노즐과 노즐로부터 용액을 전달 부위로 밀어내는 에너지 장치를 특징으로 한다. 또다른 예시적인 주사기 시스템은 어떤 깊이에서도 미리 정해진 양의 용액을 여러 번 주사할 수 있는 시스템이다(U.S. 특허 번호 5,846,225).
본원에서 기술된 바이러스 입자들 또는 핵산은 하나 또는 그 이상 부형제, 담체, 또는 희석제와 적합하게 혼합된 물에서 준비될 수 있다. 분산액은 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물 및 오일로 또한 제조될 수 있다. 일반적인 보관 및 사용 조건에서 이러한 제제에는 미생물 성장을 방지하기 위해 보존제를 함유할 수 있다. 주사용으로 사용에 적합한 약제학적 형태에는 멸균 수성 용액 또는 분산액과 멸균 주사용 용액 또는 분산의 임기 조제용 멸균 분말이 내포된다 (U.S. 특허 번호 5,466,468, 구체적으로 이의 전문이 본원에 참고자료로 편입됨). 모든 경우에, 상기 형태는 멸균될 수 있고, 용이한 주사가능성이 있을 정도로 유동적일 수 있다. 이는 제조 및 저장 조건 하에서 안정적일 수 있고, 박테리아 및 곰팡이와 같은 미생물의 오염 작용에 대항하여 보존되어야 한다. 상기 운반체는 예를 들면, 물, 에탄올, 폴리올 (가령, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이와 유사한 것들), 그리고 이들의 적합한 혼합물들 및/또는 식물성 오일이 포함된 용매 또는 분산액 매질이 될 수 있다. 예를 들면, 피복제, 이를 테면 레시틴의 이용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 이용에 의해 적절한 유동성이 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 예를 들면, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산, 티메로졸 및 이와 유사한 것들과 같은 다양한 항박테리아 및 항진균제를 포함시킴으로써 확보된다. 많은 경우에, 등장성 제제, 예를 들어, 당 또는 염화 나트륨을 포함하는 것이 합당할 것이다. 흡수를 지연시키는 물질, 이를 테면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 물질을 이 조성물에 사용함으로써 주사가능한 조성물의 연장된 흡수를 가져올 수 있다.
예를 들어, 수용액에서의 비경구 투여를 위해, 용액은 필요하다면 적절하게 완충될 수 있고, 액체 희석제는 충분한 식염수 또는 포도당을 이용하여 먼저 등장성이 되도록 한다. 이들 특정 수성 용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하, 종양내 및 복강내 투여에 적합하다. 이와 관련하여, 사용될 수 있는 멸균 수성 매질은 본 개시 내용에 비추어 당업자가 알고 있을 것이다. 예를 들면, 1 회 투여량(dosage)을 1ml의 등장성 NaCl 용액에 용해시키고, 1000ml의 피하주입 유체에 첨가하거나 또는 제안된 주입 부위에 주사할 수 있다. 투여량의 약간의 변화는 치료받는 대상의 상태에 따라 필연적으로 발생할 것이다. 투여 책임자는 임의의 경우에서 개별 대상체에 대한 적절한 용량을 결정할 것이다. 더욱이, 인체 투여를 위해, 조제물(preparations)은 FDA Office of Biologics 표준에서 요구하는 무균, 발열성, 일반 안전 및 순도 표준을 충족해야 한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "담체"에는 용매, 분산 매질, 비히클, 코팅, 희석제, 항박테리아제 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제, 완충제, 담체 용액, 현탁액, 콜로이드 및 이와 유사한 것 등이 내포된다. 약학적으로 활성인 물질용 이러한 매질 및 물질의 이용은 당업계에 공지되어 있다. 상기 활성 성분과 양립할 수 없는 임의의 통상적인 매질 또는 물질을 제외하고, 상기 치료요법적 조성물에 사용이 고려된다. 보충 활성 성분 또한 상기 조성물에 혼합될 수 있다. "약제학적으로 허용되는" 또는 "약리학적으로-허용되는"이라는 어구는 인간에게 투여될 때 알레르기 또는 유사한 비정상적인 반응을 일으키지 않는 분자 엔터티(entities) 및 조성물을 의미한다. 활성 성분으로 단백질을 함유하는 수성 조성물 조제물은 당업자에게 잘 알려져 있다. 전형적으로, 이러한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액 중에서 어느 한 가지로서 주사가능물질로서 준비된다; 주사에 앞서 액체에서 용해, 또는 액체에서 현탁에 적합한 고체 형태 또한 제조될 수 있다.
5.5.2. 치료 방법
세포 증식 장애, 이를 테면, 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)의 암을 치료하는 방법이 또한 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 세포 증식 장애, 이를 테면, 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 섹션 5.2.4에서 기술된 치료요법적으로 유효량의 바이러스를 투여하는 것을 포함한다.
또다른 측면에서, 세포 증식 장애, 이를 테면, 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 섹션 5.5.1.에서 기술된 치료요법적으로 유효량의 제약학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특이적 구체예에서, 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 암 일부 구체예들에서, 상기 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉(Ewing) 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷(Burkitt) 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬(islet) 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름(Wilms) 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소(small) 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시(Kaposi) 육종, 횡문근 육종, 세자리(
Figure pct00017
) 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌(
Figure pct00018
) 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
본원에서 기술된 치료 방법의 일부 구체예들에서, 상기 바이러스와 약제학적 조성물은 세포 증식 장애 (이를 테면, 암) 치료를 위한 또다른 제제와 조합하여 투여되지 않는다.
본원에서 기술된 치료 방법의 다른 구체예들에서, 상기 바이러스 또는 약제학적 조성물은 세포 증식 장애 (이를 테면, 암)를 치료하기 위한 하나 또는 그 이상의 추가 제제, 예를 들면, 섹션 5.5.3에서 기술된 하나 또는 그 이상의 추가 제제와 조합하여 투여된다.
상기 재조합 오르토폭스바이러스와 본원에 기술된 약제학적 조성물은 예를 들면, 종양용해에 의해 암 세포를 직접적으로 사멸시키기 위해 및/또는 표적 암 세포에 대항하여 적응성(adaptive) 면역 반응의 효과를 강화시키기 위해, 대상체, 예를 들면, 포유류 대상체, 이를 테면, 세포 증식 장애, 이를 테면, 암을 앓고 있는 인간에게 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 세포 증식 장애는 암, 이를 테면, 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암이다. 특정 경우들에서, 세포 증식 장애는 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉(Ewing) 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷(Burkitt) 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬(islet) 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름(Wilms) 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소(small) 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시(Kaposi) 육종, 횡문근 육종, 세자리(
Figure pct00019
) 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌(
Figure pct00020
) 거대 글로불린 혈증이다.
당해 분야의 숙련가를 갖는 의사는 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들면, 포유류 대상체 (예를 들면, 인간)에게 투여를 위한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 효과량을 용이하게 결정할 수 있다. 예를 들면, 의사는 원하는 치료 효과를 달성하고, 원하는 효과가 달성될 때까지 점차적으로 복용량을 증가시키기 위해 필요한 것보다 더 낮은 수준에서 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 처방 투여량을 시작할 수 있다. 대안으로, 의사는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 용량을 투여하고, 치료요법적 효과(예를 들면, 하나 또는 그 이상 종양의 용적 감소)를 얻을 때 까지 후속적으로 점진적으로 더 낮은 투여량을 투여함으로써 치료 요법을 시작할 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 적합한 일일 용량은 치료요법적 효과를 얻는데 효과적인 최저 용량인 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 양일 것이다. 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 치료요법적 조성물의 일일 용량은 단일 용량으로 투여되거나, 또는 임의선택적으로 단위 투여형태로, 일일, 주, 달 또는 일년에 걸쳐 적절한 간격을 두고 별도 투여되는 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 이상의 투여량으로 투여될 수 있다. 단독으로 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 투여하는 것이 가능할 수 있지만, 부형제, 담체, 그리고 임의선택적으로, 추가 치료요법적 제제와 병용하여 약제학적 제형으로 또한 투여될 수 있다.
당분야에 공지된 임의의 다양한 방법에 의해, 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터가 세포 증식 질환, 이를 테면, 암의 진행을 감쇠시키는 능력에 대해 모니터될 수 있다. 예를 들면, 의사는 하나 또는 그 이상의 종양의 용적을 분석함으로써, 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 치료하기 위해, 대상체, 예를 들면, 포유류 대상체 (예를 들면, 인간) 환자에서 반응을 모니터할 수 있다. 대안으로, 의사는 특정 대상체의 림프에서 T-reg 세포 집단을 분석함으로써 본 발명의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 치료하기 위해 대상체 (예를 들면, 인간)의 반응을 모니터할 수 있다. 예를 들면, 의사는 대상체, 예를 들면, 포유류 대상체 (예를 들면, 인간)로부터 샘플을 취하고, 그리고 확립된 절차, 이를 테면, 형광 활성화된 세포 소팅(sorting)을 이용하여 암 세포의 양 또는 밀도를 결정할 수 있다. 상기 재조합 오르토폭스바이러스가 투여되기 전, 해당 대상체에서 취한 샘플 안에 있는 암 세포의 양과 비교하여 해당 샘플에서 암 세포의 양이 감소되었다 (예를 들면, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 이상으로 감소)는 발견은 상기 오르토폭스바이러스 투여가 해당 암을 치료하는데 효과적임을 나타낼 수 있다.
5.5.3. 병용 치료요법
본원에 기술된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 하나 또는 그 이상 추가 제제, 이를 테면, 면역 체크포인트 억제제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 면역 체크포인트 억제제와 동시에, 면역 체크포인트 억제제와 혼합하여, 또는 면역 체크포인트 억제제와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 면역 체크포인트 억제제에는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 본 발명의 벡터는 인터루킨 (IL)과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 인터루킨과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 인터루킨에는 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 본 발명의 벡터는 인터페론과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 인터페론과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 인터페론에는 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 본 발명의 벡터는 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질에는 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 본 발명의 벡터는 사이토킨과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 사이토킨과 동시에, 이와 혼합하여, 또는 이와 별도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 예시적인 사이토킨에는 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, 항-TGF-베타, 항-VEGF-R2, 그리고 cGAS (구아닐 아데닐레이트 사이클라제)가 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
추가적으로 또는 대안으로, 면역 체크포인트 억제제는 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현을 위한 예시적인 면역 체크포인트 억제제에는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 인터루킨은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 인터루킨을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 면역 체크포인트 억제제에는 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 인터페론은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 인터페론을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 인터페론에는 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인터페론을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질에는 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드가 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 추가적으로 또는 대안으로, 사이토킨은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 사이토킨에는 GM-CSF, fms-관련된 티로신 키나제 3 (Flt3) 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 c-KIT가 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
추가적으로 또는 대안으로, 종양-연합된 항원은 상기 오르토폭스바이러스 자체에서 발현될 수 있다. 예를 들면, 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자가 내포될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법의 오르토폭스바이러스에 의한 발현용 예시적인 종양-연합된 항원에는 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, NTRK, MAGE-A3, NY-ESO-1, 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, HPV16의 E6 및 E7 단백질, HPV18의 E6 및 E7 단백질, 단미증(brachyury), 또는 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다. 본원에서 기술된 조성물 및 방법과 병용하여 사용하기 위한 종양-연합된 항원의 추가 예시들에는 표 3-30에 열거된 것들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 이필리무맙이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 트레멜리무맙(tremelimumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 니볼루맙(nivolumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 펨브로리주맙(pembrolizumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 쎄미플리맙(cemiplimab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 아테졸리주맙(atezolizumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 아벨루맙(avelumab)이다. 또다른 특이적 구체예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 두르발루맙(durvalumab)이다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예들에서, 상기 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예들에서, 상기 인터루킨은 막-결합된다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
본원에서 기술된 치료 방법의 특정 구체예들에서, 상기 방법은 해당 환자 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다. 특이적 구체예에서, TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예들에서, 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 cKit로 구성된 군에서 선택된다. 특이적 구체예에서, 상기 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
5.6. 키트
본 발명에 따라 이용될 수 있는 키트가 또한 본원에서 제공된다.
한 측면에서, 섹션 5.2.3에서 기술된 핵산, 그리고 숙주 세포에서 해당 핵산을 발현시키기 위해 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 본원에서 제공된다.
또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스, 그리고 숙주 세포에서 해당 바이러스를 발현시키기 위해 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 본원에서 제공된다.
또다른 측면에서, 섹션 5.2.4에서 기술된 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 상기 바이러스를 암 환자에게 (예를 들면, 포유류 환자, 이를 테면, 인간 환자)에게 투여하고, 이로 인하여 해당 암을 치료하기 위한 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트가 본원에서 제공된다. 특정 구체예들에서, 상기 포유류 환자는 인간 환자다. 치료되는 암은 섹션 5.5에서 기술된 암일 수 있다.
바람직한 구체예들에서, 상기 핵산 또는 바이러스는 해당 핵산 또는 바이러스를 보관하는데 적합한 하나 또는 그 이상의 용기에 보관된다. 특정 구체예들에서, 본원에서 제공된 키트는 의도된 용도에 적합한 제어(controls)를 더 포함한다.
5.7. 예시적인 구체예들
5.7.1. 세트 1
1. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각각은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
2. 구체예 1의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하고, 이들 각각은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
3. 구체예 2의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하고, 이들 각각은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
4. 구체예 3의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
5. 구체예 4의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
6. 구체예 5의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
7. 구체예 6의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
8. 구체예 7의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 9개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
9. 구체예 8의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 10개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
10. 구체예 9의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 11개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
11. 구체예 10의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 12개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
12. 구체예 11의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 13개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
13. 구체예 12의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 14개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
14. 구체예 13의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 15개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
15. 구체예 14의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 16개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
16. 구체예 15의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 17개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
17. 구체예 16의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 18개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
18. 구체예 17의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 19개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
19. 구체예 18의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 20개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
20. 구체예 19의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 21개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
21. 구체예 20의 핵산, 이때 전술한 결손은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R의 전술한 각 유전자를 포함한다.
22. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
23. 구체예 1-22중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
24. 구체예 23의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
25. 구체예 24의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
26. 구체예 25의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
27. 구체예 26의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
28. 구체예 27의 핵산, 이때 전술한 결손은 전술한 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각을 포함한다.
29. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
30. 구체예 1-29중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
31. 구체예 30의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
32. 구체예 31의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
33. 구체예 32의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
34. 구체예 33의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
35. 구체예 34의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
36. 구체예 35의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
37. 구체예 36의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
38. 구체예 37의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 9개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
39. 구체예 38의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 10개 유전자를 포함하며, 이들 각 유전자는 독립적으로 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된다.
40. 구체예 39의 핵산, 이때 전술한 결손은 전술한 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L 각각을 포함한다.
41. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈음 카스파제-9 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
42. 구체예 1-41중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 1 카스파제-9 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
43. 구체예 41 또는 42의 핵산, 이때 전술한 카스파제-9 억제제를 인코드하는 유전자는 F1L이다.
44. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 BCL-2 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
45. 구체예 1-44중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 BCL-2 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
46. 구체예 44 또는 45의 핵산, 이때 BCL-2 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 N1L이다.
47. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 dUTPase를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
48. 구체예 1-47중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 dUTPase를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
49. 구체예 46 또는 47의 핵산, 이때 dUTPase를 인코드하는 전술한 유전자는 F2L이다.
50. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
51. 구체예 1-50중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
52. 구체예 50 또는 51의 핵산, 이때 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 B19R이다.
53. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
54. 구체예 1-53중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
55. 구체예 53 또는 54의 핵산, 이때 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 B16R이다.
56. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 포스포리파제-D를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
57. 구체예 1-56중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 포스포리파제-D를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
58. 구체예 56 또는 57의 핵산, 이때 포스포리파제-D를 인코드하는 전술한 유전자는 K4L이다.
59. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 PKR 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
60. 구체예 1-59중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 PKR 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
61. 구체예 59 또는 60의 핵산, 이때 PKR 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K3L이다.
62. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
63. 구체예 1-62중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
64. 구체예 62 또는 63의 핵산, 이때 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K2L이다.
65. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
66. 구체예 1-65중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
67. 구체예 65 또는 66의 핵산, 이때 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 N2L이다.
68. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 kelch-유사 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
69. 구체예 1-68중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 kelch-유사 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
70. 구체예 69의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하며, 이들 각각은 kelch-유사 단백질을 인코드한다.
71. 구체예 68-70중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 kelch-유사 단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 F3L 및 C2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
72. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
73. 구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
74. 구체예 73의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각각은 모노글리세리드 리파제를 인코드한다.
75. 구체예 72-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 전술한 유전자는 K5L 및 K6L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
76. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 NF-κB 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
77. 구체예 1-76중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 NF-κB 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
78. 구체예 77의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각각은 NF-κB 억제제를 인코드한다.
79. 구체예 78의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각각은 NF-κB 억제제를 인코드한다.
80. 구체예 76-79중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 NF-κB 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K7R, K1L, 및 M2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
81. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
82. 구체예 1-81중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
83. 구체예 82의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하는데, 이들 각 유전자는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드한다.
84. 구체예 83의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하는데, 이들 각 유전자는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드한다.
85. 구체예 81-84중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 B18R, B20R, 및 M1L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
86. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다..
87. 구체예 1-86중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
88. 구체예 87의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 이들 각각은 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
89. 구체예 88의 핵산, 이때 전술한 결손은 전술한 B15R, B17R, 및 B14R 유전자 각각을 포함한다.
90. 구체예 1-89중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R구성된 ITR 유전자 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
91. 구체예 90의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
92. 구체예 91의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
93. 구체예 92의 핵산이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
94. 구체예 93의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
95. 구체예 94의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
96. 구체예 95의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
97. 구체예 96의 핵산, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
98. 구체예 97의 핵산, 이때 전술한 결손은 전술한 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R 유전자 각각을 포함한다.
99.
100.
102. 구체예 101의 핵산, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 균에서 선택된 균주다.
103. 구체예 101의 핵산, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주다.
104. 구체예 101의 핵산, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스다.
105. 구체예 1-104중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 각 결손은 대응하는 유전자를 인코딩하는 전체 폴리뉴클레오티드의 결손이다.
106. 구체예 1-104중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 각 결손은 대응하는 유전자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 일부분 결손이며, 그리고 이때 전술한 결손은 숙주 세포 안으로 도입될 때, 전술한 유전자가 비-기능성이 되도록 만드는데 충분하다.
107. 구체예 1-106중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
108. 구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원이다.
109. 구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
110. 구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
111. 구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
112. 구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
113. 구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
114. 구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
115. 구체예 107의 핵산, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
116. 구체예 107-115중 임의의 하나의 구체예의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-106중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b. (a)에서 형성된 핵산에 전술한 종양-연합된 항원을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c. (b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
117. 구체예 1-115중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
118. 구체예 117의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
119. 구체예 117의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
120. 구체예 117의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
121. 구체예 117의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
122. 구체예 117-121중 임의의 하나의 구체예의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-116중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b. (a)에서 형성된 핵산에 전술한 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c. (b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
123. 구체예 1-115 및 117-121중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
124. 구체예 123의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
125. 구체예 123의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
126. 구체예 125의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
127. 구체예 123-126중 하나의 구체예의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-115 및 117-121중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b. (a)에서 형성된 핵산에 인터루킨을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c. (b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
128. 구체예 1-115, 117-121, 그리고 123-126중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 인터페론 (IFN)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
129. 구체예 128의 핵산, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
130. 구체예 128 또는 129의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-115, 117-121, 그리고 123-126중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b. (a)에서 형성된 핵산에 인터페론을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c. (b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
131. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 및 129중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
132. 구체예 131의 핵산, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
133. 구체예 131 또는 132의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 및 129중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b. (a)에서 형성된 핵산에 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c. (b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
134. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 및 132중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
135. 구체예 134의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, 항-TGF-베타, 항-VEGF-R2, 그리고 cGAS (구아닐 아데닐레이트 사이클라제)로 구성된 군에서 선택된다.
136. 구체예 134의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드다.
137. 구체예 135 또는 136의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 및 132중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b. (a)에서 형성된 핵산에 사이토킨을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c. (b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
138. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 및 134-136중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 microRNA (miRNA)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
139. 구체예 138의 핵산, 이때 전술한 miRNA는 mir-6이다.
140. 구체예 138 또는 139의 핵산을 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
a. 트랜스포존 삽입 부위를 체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 및 134-136중 임의의 하나의 구체예의 핵산에 도입시키고;
b. (a)에서 형성된 핵산에 miRNA를 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 핵산으로 도입되며; 그리고
c. (b)에서 형성된 핵산을 회수한다.
141. 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 상기 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
142. 구체예 141의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
143. 구체예 142의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
144. 구체예 143의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
145. 구체예 144의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
146. 구체예 145의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
147. 구체예 146의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
148. 구체예 147의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 9개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
149. 구체예 148의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 10개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
150. 구체예 149의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 11개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
151. 구체예 150의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 12개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
152. 구체예 151의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 13개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
153. 구체예 152의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 14개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
154. 구체예 153의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 15개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
155. 구체예 154의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 16개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
156. 구체예 155의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 17개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
157. 구체예 156의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 18개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
158. 구체예 157의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 19개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
159. 구체예 158의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 20개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
160. 구체예 159의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 21개 유전자를 포함하고, 각 유전자는 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
161. 구체예 160의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 F1L, N1L, B14R, M2L, K1L, K7R, C2L, N2L, M1L, K2L, K3L, F3L, B16R, B19R, K4L, K5L, K6L, F2L, B15R, B17L, B18R, 및 B20R의 전술한 각 유전자를 포함한다.
162. B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함하는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터.
163. 구체예 141-162중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
164. 구체예 163의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
165. 구체예 164의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
166. 구체예 165의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
167. 구체예 166의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 독립적으로 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R로 구성된 군에서 선택된다.
168. 구체예 167의 벡터, 이때 전술한 결손은 B14R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 각각을 포함한다.
169. C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함하는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터.
170. 구체예 141-169중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
171. 구체예 170의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
172. 구체예 171의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
173. 구체예 172의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
174. 구체예 173의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
175. 구체예 174의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
176. 구체예 175의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
177. 구체예 176의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
178. 구체예 177의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 9개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
179. 구체예 178의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 10개 유전자를 포함하며, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
180. 구체예 179의 벡터, 이때 전술한 결손은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, K1L, K2L, K3L, K4L, K7R, 및 F2L 각각을 포함한다.
181. 카스파제-9 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함하는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터.
182. 구체예 141-181중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 카스파제-9 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
183. 구체예 181 또는 182의 벡터, 이때 전술한 카스파제-9 억제제를 인코드하는 유전자는 F1L이다.
184. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 BCL-2 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
185. 구체예 141-184중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 BCL-2 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
186. 구체예 184 또는 185의 벡터, 이때 BCL-2 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 N1L이다.
187. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 dUTPase를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
188. 구체예 141-187중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 dUTPase를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
189. 구체예 187 또는 188의 벡터, 이때 dUTPase를 인코드하는 전술한 유전자는 F2L이다.
190. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
191. 구체예 141-190중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
192. 구체예 190 또는 191의 벡터, 이때 IFN-알파/베타-수용체-유사 분비된 당단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 B19R이다.
193. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
194. 구체예 141-193중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
195. 구체예 193 또는 194의 벡터, 이때 IL-1-베타-억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 B16R이다.
196. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 포스포리파제-D를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
197. 구체예 141-196중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 포스포리파제-D를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
198. 구체예 196 또는 197의 벡터, 이때 포스포리파제-D를 인코드하는 전술한 유전자는 K4L이다.
199. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 PKR 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
200. 구체예 141-199중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 PKR 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
201. 구체예 199 또는 200의 벡터, 이때 PKR 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K3L이다.
202. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
203. 구체예 141-202중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
204. 구체예 202 또는 203의 벡터, 이때 세린 프로테아제 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K2L이다.
205. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
206. 구체예 141-205중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
207. 구체예 205 또는 206의 벡터, 이때 TLR 신호생성 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 N2L이다.
208. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 kelch-유사 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
209. 구체예 141-208중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 kelch-유사 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
210. 구체예 209의 벡터, 이때 전술한 벡터는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 kelch-유사 단백질을 인코드한다.
211. 구체예 208-210중 임의의 하나의 구체예의 벡터, 이때 kelch-유사 단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 F3L 및 C2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
212. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
213. 구체예 141-212중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
214. 구체예 213의 벡터, 이때 전술한 벡터는 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 모노글리세리드 리파제를 인코드한다.
215. 구체예 212-214중 임의의 하나의 구체예의 벡터, 이때 모노글리세리드 리파제를 인코드하는 전술한 유전자는 K5L 및 K6L으로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
216. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 NF-κB 억제제를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
217. 구체예 141-216중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 NF-κB를 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
218. 구체예 217의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 NF-κB 억제제를 인코드한다.
219. 구체예 218의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 NF-κB 억제제를 인코드한다.
220. 구체예 216-219중 임의의 하나의 구체예의 벡터, 이때 NF-κB 억제제를 인코드하는 전술한 유전자는 K7R, K1L, 및 M2L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
221. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
222. 구체예 141-221중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
223. 구체예 222의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드한다.
224. 구체예 223의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 Ankyrin 반복 단백질을 인코드한다.
225. 구체예 221-224중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 Ankyrin 반복 단백질을 인코드하는 전술한 유전자는 B18R, B20R, 및 M1L로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
226. 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
227. 구체예 1-226중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
228. 구체예 227의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자를 포함하고, 이들 각 유전자는 B15R, B17R, 및 B14R로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
229. 구체예 228의 벡터, 이때 전술한 결손은 전술한 B15R, B17R, 및 B14R 유전자 각각을 포함한다.
230. 구체예 141-229중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
231. 구체예 230의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
232. 구체예 231의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
233. 구체예 232의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
234. 구체예 233의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
235. 구체예 234의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
236. 구체예 235의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
237. 구체예 236의 벡터, 이때 전술한 결손은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하고, 이들 각 유전자는 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R로 구성된 ITR 유전자의 전술한 군에서 독립적으로 선택된다.
238. 구체예 237의 벡터, 이때 전술한 결손은 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R 각각을 포함한다.
239.
242. 구체예 241의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16m8, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 군에서 선택된 균주다.
243. 구체예 241의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주다.
244. 구체예 241의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스다.
245. 구체예 141-244중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 결손은 전체 대응하는 유전자를 인코딩하는 전체 폴리뉴클레오티드의 결손이다.
246. 구체예 141-244중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 각 결손은 대응하는 유전자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 일부분 결손이며, 그리고 이때 전술한 결손은 숙주 세포 안으로 도입될 때, 전술한 유전자가 비-기능성이 되도록 만드는데 충분하다.
247. 구체예 14141-246중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 벡터는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
248. 구체예 141-247중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
249. 구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원이다.
250. 구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD274, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
251. 구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
252. 구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
253. 구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
254. 구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
255. 구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
256. 구체예 248의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
257. 구체예 248-256중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 141-247중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e. (a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 종양-연합된 항원을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f. (b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
258. 구체예 141-256중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
259. 구체예 258의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
260. 구체예 258의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
261. 구체예 258의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
262. 구체예 258의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
263. 구체예 258-262중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 141-257중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e. (a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f. (b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
264. 구체예 141-256 및 258-262중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
265. 구체예 264의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23로 구성된 군에서 선택된다.
266. 구체예 264의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
267. 구체예 266의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
268. 구체예 264-267중 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 구체예 141-256 및 258-262중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e. (a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 인터루킨을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f. (b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
269. 구체예 141-256, 258-262, 및 264-267중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 인터페론 (IFN)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
270. 구체예 269의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
271. 구체예 269 또는 270의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 구체예 141-256, 258-262, 및 264-267중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e. (a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 인터페론을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f. (b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
272. 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 및 270중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
273. 구체예 272의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
274. 구체예 272 또는 273의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d. 트랜스포존 삽입 부위를 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 및 270중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e. (a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f. (b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
275. 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 및 273중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
276. 구체예 275의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, 항-TGF-베타, 항-VEGF-R2, 그리고 cGAS (구아닐 아데닐레이트 사이클라제)로 구성된 군에서 선택된다.
277. 구체예 275의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
278. 구체예 276 또는 277의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d. 트랜스포존 부위를 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 및 273중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e. (a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 사이토킨을 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f. (b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
279. 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 및 275-277중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 microRNA (miRNA)을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
280. 구체예 279의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 miRNA는 mir-6이다.
281. 구체예 279 또는 280의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 만드는 방법, 전술한 방법은 다음을 포함한다:
d. 트랜스포존 부위를 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 및 275-277중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 도입시키고;
e. (a)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터에 전술한 miRNA를 인코딩하는 유전자를 포함하는 운반가능한 요소를 접촉시키고, 이로 인하여 전술한 유전자가 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터로 도입되며; 그리고
f. (b)에서 형성된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 회수한다.
282. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 및 139중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 및 280중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 티미딘 키나제 (TK) 유전자를 포함한다.
283. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 리보뉴클레오티드 환원효소 유전자를 포함한다.
284. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 282, 및 283중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 282, 및 283중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 접촉시킬 때, 세포는 전술한 결손을 포함하지 않는 오르토폭스바이러스 벡터 형태와 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여 증가된 합포체 형성을 나타낸다.
285. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-284중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-284중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 접촉시킬 때, 세포는 전술한 결손을 포함하지 않는 오르토폭스바이러스 벡터 형태와 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 상기 오르토폭스바이러스 벡터의 확산 증가를 나타낸다.
286. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-285중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-285중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 벡터는 전술한 결손을 포함하지 않는 오르토폭스바이러스 벡터 형태와 비교하여, 포유류 세포 집단에 증가된 세포독성 효과를 발휘한다.
287. 구체예 284-286중 임의의 하나의 구체예의 핵산 또는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 포유류 세포는 인간 세포다.
288. 구체예 287의 핵산 또는 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 인간 세포는 암 세포다.
289. 구체예 284-286중 임의의 하나의 핵산 또는 상기 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 이때 전술한 포유류 세포는 U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562, 그리고 HCT-116으로 구성된 군에서 선택된 세포주로부터 유래된다.
290. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 핵산 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 포함하는 패키징 세포주.
291. 포유류 환자의 암을 치료하는 방법, 전술한 방법은 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 핵산의 치료요법적으로 유효량, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-289중 중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터의 치료요법적으로 유효량을 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
292. 구체예 291의 방법, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자다.
293. 구체예 291 또는 292의 방법, 이때 전술한 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
294. 구체예 291 또는 292의 방법, 이때 전술한 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시 육종, 횡문근 육종, 세자리 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
295. 구체예 291-294중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
296. 구체예 295의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
297. 구체예 295의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
298. 구체예 295의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
299. 구체예 295의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
300. 구체예 291-299중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
301. 구체예 300의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
302. 구체예 300의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
303. 구체예 301 또는 302의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
304. 구체예 291-303중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다.
305. 구체예 304의 방법, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
306. 구체예 291-305중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질을 투여하는 것을 더 포함한다.
307. 구체예 306의 방법, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
308. 구체예 291-307중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
309. 구체예 308의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, 항-TGF-베타, 항-VEGF-R2, 그리고 cGAS (구아닐 아데닐레이트 사이클라제)로 구성된 군에서 선택된다.
310. 구체예 308의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
311. 구체예 291-310중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 miRNA를 투여하는 것을 더 포함한다.
312. 구체예 311의 방법, 이때 전술한 miRNA는 mir-6이다.
313. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 그리고 전술한 핵산 또는 전술한 벡터를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
314. 구체예 1-115, 117-121, 123-126, 128, 129, 131, 132, 134-136, 138, 139, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 141-256, 258-262, 264-267, 269, 270, 272, 273, 275-277, 279, 280, 및 282-289중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 벡터, 그리고 치료요법적으로 유효량의 전술한 핵산 또는 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 암이 있는 포유류 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위하여 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
315. 구체예 314의 키트, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자이다.
316. 전술한 구체예들중 임의의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 B8R 유전자는 결손된다.
317. 구체예 316의 오르토폭스 바이러스, 이때 적어도 하나의 형질전환유전자는 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다.
318. 구체예 317의 오르토폭스 바이러스, 이때 적어도 두 개의형질전환유전자는 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다.
319. 구체예 318의 오르토폭스 바이러스, 이때 적어도 3개의 형질전환유전자는 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다.
320. 구체예 316-319중 임의의 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 적어도 하나의 추가적인 형질전환유전자는 B8R 유전자의 좌가 아닌 유전자좌로 삽입된다.
321. 구체예 320의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 유전자좌는 5p 결손의 경계에 있다.
322. 구체예 321의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 유전자좌는 3p 결손의 경계에 있다.
323. 구체예 316-322의 오르토폭스 바이러스, 이때 다음 형질전환유전자들중 적어도 하나가 삽입된다: IL-12TM, FLT3-L 또는 항-CLTA-4 항체.
324. 구체예 323의 오르토폭스 바이러스, 이때 IL-12-TM 유전자 및 FLT3-L 유전자는 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입된다.
325. 구체예 323-324의 적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 항-CLTA-4 항체는 5p 결손의 경계 내에 삽입된다.
326. 구체예 323-325의 적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 바이러스는 서열 식별 번호: 210의 서열을 포함한다.
326. 구체예 323-325의 적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 항-CLTA 항체는 서열 식별 번호: 211이다.
327. 구체예 323-326적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 IL-12-TM은 서열 식별 번호: 212이다.
328. 구체예 323-327의 적어도 하나의 구체예의 오르토폭스 바이러스, 이때 Flt3-L은 서열 식별 번호: 213이다.
329. 핵산 서열을 포함하는 오르토폭스 바이러스, 이때 상기 핵산 서열은 서열 식별 번호: 210의 파생 서열이고,
이때 전술한 파생서열은 서열 식별 번호: 210의 B8R 유전자 결손을 포함하고,
이때, IL-12-TM 및 FLT3-L 형질전환유전자는 전술한 결손된 B8R 유전자의 유전자좌로 삽입되며,
이때, 항-CLTA-4 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코드하는 유전자는 서열 식별 번호: 210에 존재하는 5p 결손 경계 내에 삽입되며;
이때 IL-12-TM은 서열 식별 번호: 212이며;
이때 FLT3-L은 서열 식별 번호: 213이며;
이때 상기 항-CLTA4 항체는 서열 식별 번호: 211에 의해 인코드된다.
5.7.2. 세트 2
1. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함한다.
2. 구체예 1의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
3. 구체예 2의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
4. 구체예 3의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
5. 구체예 4의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
6. 구체예 5의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
7. 구체예 6의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
8. 구체예 7의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
9. 구체예 8의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
10. 구체예 9의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
11. 구체예 10의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
12. 구체예 11의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
13. 구체예 12의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
14. 구체예 13의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
15. 구체예 14의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 16개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
16. 구체예 15의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 17개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
17. 구체예 16의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 18개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
18. 구체예 17의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 19개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
19. 구체예 18의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 20개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
20. 구체예 19의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 21개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
21. 구체예 20의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 22개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
22. 구체예 21의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
23. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
24. 구체예 23의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
25. 구체예 24의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
26. 구체예 25의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
27. 구체예 26의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
28. 구체예 27의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
29. 구체예 28의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
30. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
31. 구체예 30의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
32. 구체예 31의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
33. 구체예 32의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
34. 구체예 33의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
35. 구체예 34의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
36. 구체예 35의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
37. 구체예 36의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
38. 구체예 37의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
39. 구체예 38의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
40. 구체예 39의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
41. 구체예 40의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
42. 구체예 41의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
43. 구체예 42의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
44. 구체예 43의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
45. 구체예 44의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자 각각의 결손을 포함한다.
46. 구체예 1-45중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 숙주 상호작용에 연루된 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
47. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세포외 매트릭스에 대한 칼슘-독립성 흡착에 영향을 준다.
48. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 NF-κB 억제제다.
49. 구체예 48의 핵산, 이때 전술한 단백질은 C2L, N1L, M2L, K1L, 그리고 K7R 유전자로 구성된 군에서 선택된 유전자에 의해 인코드된다.
50. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 아팝토시스 억제제다.
51. 구체예 47의 핵산, 이때 전술한 아팝토시스 억제제는 카스파제-9 억제제다.
52. 구체예 51의 핵산, 이때 전술한 카스파제-9 억제제는 F1L 유전자에 의해 인코드된다.
53. 구체예 50의 핵산, 이때 전술한 아팝토시스 억제제는 BCL-2-유사 단백질이다.
54. 구체예 53의 핵산, 이때 전술한 BCL-2-유사 단백질은 N1L에 의해 인코드된다.
55. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 인터페론 조절 인자 3 (IRF3) 억제제다.
56. 구체예 55의 핵산, 이때 전술한 IRF3 억제제는 N2L 또는 K7R에 의해 인코드된다.
57. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세린 프로테아제 억제제다.
58. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세포 융합을 방해한다.
59. 구체예 58의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K2L에 의해 인코드된다.
60. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 RNA-활성화된 단백질 키나제 (PKR) 억제제다.
61. 구체예 60의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K1L 또는 K3L에 의해 인코드된다.
62. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 독성 인자다.
63. 구체예 63의 핵산, 이때 전술한 단백질은 F3L에 의해 인코드된다.
64. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 IL-1-베타 억제제다.
65. 구체예 64의 핵산, 이때 전술한 단백질은 B16R에 의해 인코드된다.
66. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 분비된 IFNα 격리자다.
67. 구체예 67의 핵산, 이때 전술한 단백질은 B19R에 의해 인코드된다.
68. 구체예 1-67중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 DNA 복제에 연루된 단백질을 인코딩하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
69. 구체예 68의 핵산, 이때 전술한 단백질은 DNA 변형 뉴클레아제다.
70. 구체예 69의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K4L에 의해 인코드된다.
71. 구체예 70의 핵산, 이때 전술한 단백질은 데옥시우리딘 트리포스파타제 (dUTPase)이다.
72. 구체예 71의 핵산, 이때 dUTPase는 F2L에 의해 인코드된다.
73. 구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 결손된 유전자의 전체 뉴클레오티드 서열은 결손된다.
74. 구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 결손된 유전자는 단지 부분적으로 결손되며, 그리고 해당 부분 결손으로 전술한 부분적으로 결손된 유전자가 숙주 세포 안으로 도입될 때 비기능성이 되도록 하는데 충분하다.
75. 구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 역전된 말단 반복 (ITRs)의 적어도 2개 복사본을 포함한다.
76. 구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 임의의 복사본이 결여되어 있다.
77. 구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR로 구성된 군에서 선택된 ITR중 적어도 하나의 복사본에 결손을 포함한다.
78. 구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 다음의 복사본중 적어도 모두에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
79. 구체예 1-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 B8R 유전자내 결손을 포함한다.
80. 구체예 1-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
81. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손; 그리고
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
82. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손; 그리고
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR,
이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
83. 구체예 1-82중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 하나의 형질전환유전자를 더 포함한다.
84. 구체예 83의 핵산, 이때 상기 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 두 개의 형질전환유전자를 포함한다.
85. 구체예 84의 핵산, 이때 상기 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
86. 구체예 83 또는 84의 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
87. 구체예 85 또는 86의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
88. 구체예 87의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
89. 구체예 88의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
90. 구체예 88의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
91. 구체예 83 또는 84의 핵산, 이때 전술한 핵산은 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
92. 구체예 85 또는 91의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
93. 구체예 92의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
94. 구체예 93의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
95. 구체예 94의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p70이다.
96. 구체예 83 또는 84의 핵산, 이때 전술한 핵산은 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
97. 구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 인터페론 (IFN)이다.
98. 구체예 97의 핵산, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
99. 구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
100. 구체예 99의 핵산, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
101. 구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 c-kit로 구성된 군에서 선택된다.
102. 구체예 101의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드다.
103. 구체예 83-102의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B8R 유전자내 결손을 포함하고, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
104. 구체예 103의 핵산, 이때 적어도 두 개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
105. 구체예 104의 핵산, 이때 적어도 3개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
106. 구체예 103-105중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손이 아닌 유전자좌에 삽입된다.
107. 구체예 106의 핵산, 이때 상기 유전자좌는 상기 오르토폭스바이러스 게놈의 5' 단부의 결손 경계에 있다.
108. 구체예 106의 핵산, 이때 상기 유전자좌는 상기 오르토폭스바이러스 게놈의 3' 단부의 결손 경계에 있다.
109. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손;
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR;
(iii) B8R 유전자내 결손에 삽입된 IL-12-TM 형질전환유전자;
(iv) B8R 유전자내 결손에 삽입된 Flt3 리간드 형질전환유전자; 그리고
(v) 다음중 하나:
(a) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 형질전환유전자
또는
(b) (i) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄를 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고
(ii) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄를 인코딩하는 형질전환유전자,
이때 (v)의 형질전환유전자(들)은 상기 재조합 오르토폭스바이러스 게놈에 존재하는 5p 결손의 경계 내로 삽입되며, 그리고
이때 상기 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CTLA-4에 결합할 수 있다.
110. 구체예 109의 핵산, 이때 상기 오르토폭스바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 서열로부터 유래되며, 이때
(a) 전술한 유래된 서열은 B8R 유전자 결손, 그리고 IL-12-TM 형질전환유전자, Flt3 리간드 형질전환유전자, 그리고 단일쇄 또는 이중-쇄 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 형질전환유전자(들)을 포함하고;
(b) IL-12-TM 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고;
(c) Flt3 리간드 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고; 그리고
(d) 상기 항-CTLA-4 항체는 서열 식별 번호: 211의 아미노산 서열을 포함한다.
111. 구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
112. 구체예 111의 바이러스, 이때
a) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고;
b) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함하고; 또는
c) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
113. 구체예 111 또는 112의 바이러스, 이때 전술한 바이러스는 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
114. 구체예 113의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 균에서 선택된 균주다.
115. 구체예 114의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주다.
116. 구체예 115의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
117. 구체예 111-116중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 티미딘 키나제 (TK) 유전자를 더 포함한다.
118. 구체예 111-117중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 리보뉴클레오티드 환원효소 유전자를 더 포함한다.
119. 구체예 111-118중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 이 포유류 세포 집단은 바이러스 형과 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 합포체 형성 증가되는 것으로 나타난다.
120. 구체예 111-119중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 이 포유류 세포 집단은 바이러스 형과 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 해당 바이러스의 확산이 증가되는 것으로 나타난다.
121. 구체예 111-120중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 바이러스는 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스의 것과 비교하여, 포유류 세포 집단에서 증가된 세포독성 효과를 발휘한다.
122. 구체예 119-121중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 포유류 세포는 인간 세포다.
123. 구체예 122의 바이러스, 이때 전술한 인간 세포는 암 세포다.
124. 구체예 119-121중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 포유류 세포는 U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562, 및 HCT-116으로 구성된 군에서 선택된 세포주다.
125. 구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-124중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 바이러스는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
126. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원이다.
127. 구체예 126의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
128. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
129. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
130. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
131. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 HPV 단백질 또는 이의단편들은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들중 하나 또는 그 이상을 포함한다.
132. 구체예 131의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 HPV 단백질 또는 단편들의 서열은 국제 특허 공개 WO/2014/127478(이의 내용은 본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된다.
133. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
134. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
135. 구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-124중 임의의 하나의 구체예의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
136. 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 전술한 방법은 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
137. 구체예 136의 방법, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자다.
138. 구체예 136 또는 137의 방법, 이때 상기 바이러스는 프라임:부스트(prime:boost) 치료에서 프라임으로 이용된다.
139. 구체예 136 또는 137의 방법, 이때 상기 바이러스는 프라임:부스트 치료에서 부스트로 이용된다.
140. 구체예 136-139중 임의의 하나의 구체예의 방법에서, 이때 전술한 포유류 환자는 암을 가지고 있다.
141. 구체예 140의 방법, 이때 전술한 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
142. 구체예 140의 방법, 이때 전술한 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시 육종, 횡문근 육종, 세자리 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
143. 구체예 136-142중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
144. 구체예 143의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
145. 구체예 144의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
146. 구체예 145의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
147. 구체예 145의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
148. 구체예 136-147중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
149. 구체예 148의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
150. 구체예 149의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
151. 구체예 149 또는 150의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
152. 구체예 136-151중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다.
153. 구체예 152의 방법, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
154. 구체예 136-153중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
155. 구체예 154의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
156. 구체예 155의 방법, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 및 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
157. 구체예 154의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 및 cKit로 구성된 군에서 선택된다.
158. 구체예 157의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
159. 구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 그리고 전술한 핵산 또는 전술한 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
160. 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 그리고 전술한 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
161. 구체예 160의 키트, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자이다.
162. 구체예 94의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p35이다.
5.7.3. 세트 3
1. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함한다.
2. 구체예 1의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
3. 구체예 2의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
4. 구체예 3의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
5. 구체예 4의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
6. 구체예 5의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
7. 구체예 6의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
8. 구체예 7의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
9. 구체예 8의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
10. 구체예 9의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
11. 구체예 10의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
12. 구체예 11의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
13. 구체예 12의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
14. 구체예 13의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
15. 구체예 14의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 16개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
16. 구체예 15의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 17개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
17. 구체예 16의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 18개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
18. 구체예 17의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 19개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
19. 구체예 18의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 20개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
20. 구체예 19의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 21개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
21. 구체예 20의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 22개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
22. 구체예 21의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
23. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
24. 구체예 23의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
25. 구체예 24의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
26. 구체예 25의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
27. 구체예 26의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
28. 구체예 27의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자의 결손을 포함하고, 각 유전자는 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
29. 구체예 28의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손을 포함한다.
30. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
31. 구체예 30의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
32. 구체예 31의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 3개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
33. 구체예 32의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 4개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
34. 구체예 33의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 5개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
35. 구체예 34의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 6개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
36. 구체예 35의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 7개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
37. 구체예 36의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 8개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
38. 구체예 37의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 9개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
39. 구체예 38의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 10개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
40. 구체예 39의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 11개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
41. 구체예 40의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 12개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
42. 구체예 41의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 13개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
43. 구체예 42의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 14개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
44. 구체예 43의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 적어도 15개 유전자 결손을 포함하고, 각 유전자는 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된다.
45. 구체예 44의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자 각각의 결손을 포함한다.
46. 구체예 1-45중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 숙주 상호작용에 연루된 단백질을 인코드하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
47. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세포외 매트릭스에 대한 칼슘-독립성 흡착에 영향을 준다.
48. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 NF-κB 억제제다.
49. 구체예 48의 핵산, 이때 전술한 단백질은 C2L, N1L, M2L, K1L, 그리고 K7R 유전자로 구성된 군에서 선택된 유전자에 의해 인코드된다.
50. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 아팝토시스 억제제다.
51. 구체예 47의 핵산, 이때 전술한 아팝토시스 억제제는 카스파제-9 억제제다.
52. 구체예 51의 핵산, 이때 전술한 카스파제-9 억제제는 F1L 유전자에 의해 인코드된다.
53. 구체예 50의 핵산, 이때 전술한 아팝토시스 억제제는 BCL-2-유사 단백질이다.
54. 구체예 53의 핵산, 이때 전술한 BCL-2-유사 단백질은 N1L에 의해 인코드된다.
55. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 인터페론 조절 인자 3 (IRF3) 억제제다.
56. 구체예 55의 핵산, 이때 전술한 IRF3 억제제는 N2L 또는 K7R에 의해 인코드된다.
57. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세린 프로테아제 억제제다.
58. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 세포 융합을 방해한다.
59. 구체예 58의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K2L에 의해 인코드된다.
60. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 RNA-활성화된 단백질 키나제 (PKR) 억제제다.
61. 구체예 60의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K1L 또는 K3L에 의해 인코드된다.
62. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 독성 인자다.
63. 구체예 63의 핵산, 이때 전술한 단백질은 F3L에 의해 인코드된다.
64. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 IL-1-베타 억제제다.
65. 구체예 64의 핵산, 이때 전술한 단백질은 B16R에 의해 인코드된다.
66. 구체예 46의 핵산, 이때 전술한 단백질은 분비된 IFNα 격리자다.
67. 구체예 67의 핵산, 이때 전술한 단백질은 B19R에 의해 인코드된다.
68. 구체예 1-67중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 DNA 복제에 연루된 단백질을 인코딩하는 적어도 1개 유전자의 결손을 포함한다.
69. 구체예 68의 핵산, 이때 전술한 단백질은 DNA 변형 뉴클레아제다.
70. 구체예 69의 핵산, 이때 전술한 단백질은 K4L에 의해 인코드된다.
71. 구체예 70의 핵산, 이때 전술한 단백질은 데옥시우리딘 트리포스파타제 (dUTPase)이다.
72. 구체예 71의 핵산, 이때 dUTPase는 F2L에 의해 인코드된다.
73. 구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 결손된 유전자의 전체 뉴클레오티드 서열은 결손된다.
74. 구체예 1-72중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 결손된 유전자는 단지 부분적으로 결손되며, 그리고 해당 부분 결손으로 전술한 부분적으로 결손된 유전자가 숙주 세포 안으로 도입될 때 비기능성이 되도록 하는데 충분하다.
75. 구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 역전된 말단 반복 (ITRs)의 적어도 2개 복사본을 포함한다.
76. 구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 임의의 복사본이 결여되어 있다.
77. 구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR로 구성된 군에서 선택된 ITR중 적어도 하나의 복사본에 결손을 포함한다.
78. 구체예 1-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 ITRs의 다음의 복사본중 적어도 모두에서 결손을 포함한다: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
79. 구체예 1-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈 B8R 유전자내 결손을 포함한다.
80. 구체예 1-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
81. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손; 그리고
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR.
82. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자 각각의 결손; 그리고
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR,
이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 무손상 B8R 유전자를 포함한다.
83. 구체예 1-82중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 하나의 형질전환유전자를 더 포함한다.
84. 구체예 83의 핵산, 이때 상기 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 두 개의 형질전환유전자를 포함한다.
85. 구체예 84의 핵산, 이때 상기 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자, 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
86. 구체예 83 또는 84의 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 전술한 핵산은 면역 체크포인트 억제제를 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
87. 구체예 85 또는 86의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
88. 구체예 87의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
89. 구체예 88의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
90. 구체예 88의 핵산, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
91. 구체예 83 또는 84의 핵산, 이때 전술한 핵산은 인터루킨 (IL)을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
92. 구체예 85 또는 91의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
93. 구체예 92의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
94. 구체예 93의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
95. 구체예 94의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p70이다.
96. 구체예 83 또는 84의 핵산, 이때 전술한 핵산은 사이토킨을 인코딩하는 형질전환유전자를 포함한다.
97. 구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 인터페론 (IFN)이다.
98. 구체예 97의 핵산, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
99. 구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
100. 구체예 99의 핵산, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
101. 구체예 96의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 c-kit로 구성된 군에서 선택된다.
102. 구체예 101의 핵산, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드다.
103. 구체예 83-102의 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B8R 유전자내 결손을 포함하고, 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
104. 구체예 103의 핵산, 이때 적어도 두 개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
105. 구체예 104의 핵산, 이때 적어도 3개의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손에 삽입된다.
106. 구체예 103-105중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 적어도 하나의 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손이 아닌 유전자좌에 삽입된다.
107. 구체예 106의 핵산, 이때 상기 유전자좌는 상기 오르토폭스바이러스 게놈의 5' 단부의 결손 경계에 있다.
108. 구체예 106의 핵산, 이때 상기 유전자좌는 상기 오르토폭스바이러스 게놈의 3' 단부의 결손 경계에 있다.
109. 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 다음을 포함한다:
(i) C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, B20R, 및 B8R 유전자 각각의 결손;
(ii) 다음 ITRs에서 각 복사본에서 결손: B21R-ITR, B22R-ITR, B23R-ITR, B24R-ITR, B25R-ITR, B26R-ITR, B27R-ITR, B28R-ITR, 및 B29R-ITR;
(iii) B8R 유전자내 결손에 삽입된 IL-12-TM 형질전환유전자;
(iv) B8R 유전자내 결손에 삽입된 Flt3 리간드 형질전환유전자; 그리고
(v) 다음중 하나:
(a) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 형질전환유전자
또는
(b) (i) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄를 인코딩하는 형질전환유전자, 그리고
(ii) 단일 쇄 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄를 인코딩하는 형질전환유전자,
이때 (v)의 형질전환유전자(들)은 상기 재조합 오르토폭스바이러스 게놈에 존재하는 5p 결손의 경계 내로 삽입되며, 그리고
이때 상기 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CTLA-4에 결합할 수 있다.
110. 구체예 109의 핵산, 이때 상기 오르토폭스바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 서열로부터 유래되며, 이때
(a) 전술한 유래된 서열은 B8R 유전자 결손, 그리고 IL-12-TM 형질전환유전자, Flt3 리간드 형질전환유전자, 그리고 단일쇄 또는 이중-쇄 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 형질전환유전자(들)을 포함하고;
(b) IL-12-TM 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고;
(c) Flt3 리간드 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 인코드하고; 그리고
(d) 상기 항-CTLA-4 항체는 서열 식별 번호: 211의 아미노산 서열을 포함한다.
111. 구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 재조합 오르토폭스바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
112. 구체예 111의 바이러스, 이때
a) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 2개 유전자 결손을 포함하고;
b) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함하고; 또는
c) 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 그리고 F3L 유전자로 구성된 군에서 선택된 적어도 1개 유전자 결손을 포함한다.
113. 구체예 111 또는 112의 바이러스, 이때 전술한 바이러스는 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
114. 구체예 113의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, EM63, ACAM2000, LC16m8, CV-1, 변형된 백시니아 Ankara (MVA), Dairen I, GLV-1h68, IHD-J, L-IVP, LC16mO, Tashkent, Tian Tan, 그리고 WAU86/88-1로 구성된 균에서 선택된 균주다.
115. 구체예 114의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen, Western Reserve, Tian Tan, Wyeth, 그리고 Lister로 구성된 군에서 선택된 균주다.
116. 구체예 115의 바이러스, 이때 전술한 백시니아 바이러스는 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스로부터 유래된다.
117. 구체예 111-116중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 티미딘 키나제 (TK) 유전자를 더 포함한다.
118. 구체예 111-117중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 재조합 오르토폭스바이러스 게놈은 리보뉴클레오티드 환원효소 유전자를 더 포함한다.
119. 구체예 111-118중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 이 포유류 세포 집단은 바이러스 형과 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 합포체 형성 증가되는 것으로 나타난다.
120. 구체예 111-119중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 포유류 세포 집단에 전술한 바이러스를 접촉시킬 때, 이 포유류 세포 집단은 바이러스 형과 접촉된 동일한 유형의 포유류 세포 집단과 비교하여, 해당 바이러스의 확산이 증가되는 것으로 나타난다.
121. 구체예 111-120중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 바이러스는 전술한 결손을 포함하지 않는 형태의 바이러스의 것과 비교하여, 포유류 세포 집단에서 증가된 세포독성 효과를 발휘한다.
122. 구체예 119-121중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 포유류 세포는 인간 세포다.
123. 구체예 122의 바이러스, 이때 전술한 인간 세포는 암 세포다.
124. 구체예 119-121중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 포유류 세포는 U2OS, 293, 293T, Vero, HeLa, A549, BHK, BSC40, CHO, OVCAR-8, 786-0, NCI-H23, U251, SF-295, T-47D, SKMEL2, BT-549, SK-MEL-28, MDA-MB-231, SK-OV-3, MCF7, M14, SF-268, CAKI-1, HPAV, OVCAR-4, HCT15, K-562, 및 HCT-116으로 구성된 군에서 선택된 세포주다.
125. 구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-124중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 이때 전술한 핵산 또는 전술한 바이러스는 종양-연합된 항원을 인코딩하는 형질전환유전자를 더 포함한다.
126. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 표 3-30중 임의의 하나에 열거된 종양-연합된 항원이다.
127. 구체예 126의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 CD19, CD33, EpCAM, CEA, PSMA, EGFRvIII, CD133, EGFR, CDH19, ENPP3, DLL3, MSLN, ROR1, HER2, HLAA2, EpHA2, EpHA3, MCSP, CSPG4, NG2, RON, FLT3, BCMA, CD20, FAPα, FRα, CA-9, PDGFRα, PDGFRβ, FSP1, S100A4, ADAM12m, RET, MET, FGFR, INSR, 및 NTRK로 구성된 군에서 선택된 종양-연합된 항원이다.
128. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 MAGE-A3, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
129. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 NY-ESO-1, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
130. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 하나 또는 그 이상의 인간 유두종바이러스 (HPV) 단백질, 또는 이의 단편들을 포함한다.
131. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 HPV 단백질 또는 이의단편들은 (i) HPV16의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들, 그리고 (ii) HPV18의 E6 및 E7 단백질, 또는 이의 단편들중 하나 또는 그 이상을 포함한다.
132. 구체예 131의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 HPV 단백질 또는 단편들의 서열은 국제 특허 공개 WO/2014/127478(이의 내용은 본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된다.
133. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 단미증(brachyury) 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
134. 구체예 125의 핵산 또는 바이러스, 이때 전술한 종양-연합된 항원은 전립선산 포스파타제, 또는 이의 하나 또는 그 이상 단편들을 포함한다.
135. 구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-124중 임의의 하나의 구체예의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
136. 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 전술한 방법은 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 전술한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
137. 구체예 136의 방법, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자다.
138. 구체예 136 또는 137의 방법, 이때 상기 바이러스는 프라임:부스트(prime:boost) 치료에서 프라임으로 이용된다.
139. 구체예 136 또는 137의 방법, 이때 상기 바이러스는 프라임:부스트 치료에서 부스트로 이용된다.
140. 구체예 136-139중 임의의 하나의 구체예의 방법에서, 이때 전술한 포유류 환자는 암을 가지고 있다.
141. 구체예 140의 방법, 이때 전술한 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
142. 구체예 140의 방법, 이때 전술한 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 부신피질 암종, AIDS-관련 림프종, 원발성 CNS 림프종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 기형/횡문근암, 기저 세포 암종, 담관암, 간외 암, 유잉 육종 가족, 골육종 및 악성 섬유성 조직구종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개 인두종, 외피종, 기관지 종양, 버킷 림프종, 카르시노이드 종양, 원발성 림프종, 척색종, 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 간외 담관암, 관 상피내 암종 (DCIS), 자궁내막암, 외피종, 식도암, 심부유로모세포종, 두개외 생식 세포종, 성선외 생식 세포 종양, 나팔관암, 뼈의 섬유성 조직구종, 위장 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양 (GIST), 고환 생식 세포 종양, 임신 영양모세포 질환, 신경교종, 소아 뇌간 신경 교종, 털이 많은 세포 백혈병, 간세포암, 랑게르한스 세포 조직구증, 호지킨 림프종, 하인두암, 섬 세포 종양, 췌장 신경내분비 종양, 윌름 종양 및 기타 소아 신장 종양, 랑게르한스 세포 조직구증, 소 세포 폐암, 피부 T 세포 림프종, 안구내 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 전이성 편평 경부암, 정중선 암종, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 골수이형성 증후군, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종(NHL), 비-소 세포 폐암 (NSCLC), 상피 난소암, 생식 세포 난소암, 악성 가능성이 낮은 난소암, 췌장 신경내분비 종양, 유두종증, 부신경절종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 흉막폐 모세포종, 원발성 복막암, 직장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 타액선암, 카포시 육종, 횡문근 육종, 세자리 증후군, 소장암, 연조직 육종, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신장 골반 및 요관의 이행 세포 암, 요도 암, 자궁 내막 자궁암, 자궁 육종, 질암, 외음부암, 그리고 발덴스트륌 거대 글로불린 혈증으로 구성된 군에서 선택된다.
143. 구체예 136-142중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
144. 구체예 143의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
145. 구체예 144의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
146. 구체예 145의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
147. 구체예 145의 방법, 이때 전술한 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
148. 구체예 136-147중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
149. 구체예 148의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
150. 구체예 149의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
151. 구체예 149 또는 150의 방법, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된다.
152. 구체예 136-151중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다.
153. 구체예 152의 방법, 이때 전술한 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
154. 구체예 136-153중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 전술한 방법은 전술한 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
155. 구체예 154의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
156. 구체예 155의 방법, 이때 전술한 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 및 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
157. 구체예 154의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 및 cKit로 구성된 군에서 선택된다.
158. 구체예 157의 방법, 이때 전술한 사이토킨은 Flt3 리간드이다.
159. 구체예 1-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 또는 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 그리고 전술한 핵산 또는 전술한 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
160. 구체예 111-134중 임의의 하나의 구체예의 바이러스, 그리고 전술한 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
161. 구체예 160의 키트, 이때 전술한 포유류 환자는 인간 환자이다.
162. 구체예 94의 핵산, 이때 전술한 인터루킨은 막-결합된 IL-12 p35이다.
5.7.4. 세트 4
1. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b)세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며;
(c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고
(d) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
2. 구체예 1의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
3. 구체예 1 또는 2의 핵산, 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
4. 구체예 3의 핵산, 이때 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
5. 구체예 3의 핵산, 이때 항-CTLA-4 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
6. 구체예 1-5중 임의의 하나의 구체예의 핵산, IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
7. 구체예 6의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
8. 구체예 7의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
9. 구체예 7의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
10. 구체예 1-9중 임의의 하나의 구체예의 핵산, FLT3L를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
11. 구체예 10의 핵산, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
12. 구체예 10의 핵산, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
13. 구체예 10의 핵산, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
14. 구체예 10의 핵산, 이때 상기 상기 FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
15. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
16. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
17. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
18. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
19. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
20. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
21. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
22. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
23. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
24. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
25. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
26. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
27. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
28. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
29. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
30. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
31. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
32. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
33. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
34. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
35. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
36. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
37. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
38. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
39. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
40. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
41. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
42. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
43. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
44. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
45. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
46. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
47. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
48. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
49. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
50. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
51. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
52. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
53. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
54. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
55. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
56. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
57. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
58. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
59. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
60. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
61. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
62. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
63. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
64. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
65. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
66. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
67. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
68. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
69. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
70. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
71. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
72. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
73. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
74. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
75. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
76. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
77. 구체예 1-14중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
78. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
79. 구체예 78의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
80. 구체예 78 또는 79의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
81. 구체예 78 또는 79의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
82. 구체예 80 또는 81의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다.
83. 구체예 80 또는 81의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있다.
84. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
85. 구체예 84의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
86. 구체예 85의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
87. 구체예 84-86중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
88. 구체예 87의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
89. 구체예 88의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
90. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
91. 구체예 90의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
92. 구체예 91의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
93. 구체예 90-92중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
94. 구체예 93의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
95. 구체예 94의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
96. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
97. 구체예 96의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
98. 구체예 97의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
99. 구체예 96-98중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
100. 구체예 99의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
101. 구체예 100의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
102. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
103. 구체예 102의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
104. 구체예 103의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
105. 구체예 102-104중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
106. 구체예 105의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
107. 구체예 106의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
108. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
109. 구체예 108의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
110. 구체예 109의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
111. 구체예 108-110중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
112. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
113. 구체예 112의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
114. 구체예 113의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
115. 구체예 112-114중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
116. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
117. 구체예 116의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
118. 구체예 117의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
119. 구체예 116-118중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
120. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
121. 구체예 120의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
122. 구체예 121의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
123. 구체예 120-122중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 pS의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
124. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
125. 구체예 124의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
126. 구체예 125의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
127. 구체예 124-126중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
128. 구체예 127의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
129. 구체예 128의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
130. 구체예 124-129중 임의의 하나의 구체예의 핵산, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
131. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
132. 구체예 131의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
133. 구체예 132의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
134. 구체예 131-133중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
135. 구체예 134의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
136. 구체예 135의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
137. 구체예 131-136중 임의의 하나의 구체예의 핵산, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
138. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 또는 B19R 프로모터다.
139. 구체예 138의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
140. 구체예 139의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
141. 구체예 138-140중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
142. 구체예 141의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
143. 구체예 142의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
144. 구체예 138-143중 임의의 하나의 구체예의 핵산, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
145. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
146. 구체예 145의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
147. 구체예 146의 핵산, 이때 B8R 프로모터는 서열 식별 번호: 564의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, B19R 프로모터는 서열 식별 번호: 565의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
148. 구체예 145-147중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
149. 구체예 148의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
150. 구체예 149의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
151. 구체예 145-150중 임의의 하나의 구체예의 핵산, F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
152. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
153. 구체예 152의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
154. 구체예 153의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
155. 구체예 154의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
156. 구체예 152-155중 임의의 하나의 구체예의 핵산, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
157. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
158. 구체예 157의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
159. 구체예 158의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
160. 구체예 159의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
161. 구체예 157-160중 임의의 하나의 구체예의 핵산, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
162. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
163. 구체예 162의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
164. 구체예 163의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
165. 구체예 164의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
166. 구체예 162-165중 임의의 하나의 구체예의 핵산, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
167. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
168. 구체예 167의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 또는 H5R 후기 프로모터다.
169. 구체예 168의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 조기 프로모터 및 H5R 후기 프로모터다.
170. 구체예 169의 핵산, 이때 H5R 조기 프로모터는 서열 식별 번호: 553의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, H5R 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 554의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
171. 구체예 167-170중 임의의 하나의 구체예의 핵산, E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
172. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
173. 구체예 172의 핵산, 이때 pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
174. 구체예 172 또는 173의 핵산, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
175. 구체예 172-174중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
176. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
177. 구체예 176의 핵산, 이때 pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
178. 구체예 176 또는 177의 핵산, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
179. 구체예 176-178중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
180. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
181. 구체예 180의 핵산, 이때 pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
182. 구체예 170 또는 181의 핵산, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
183. 구체예 180-182중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
184. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열, 이 서열은 부분적 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자를 포함하고, B8R 유전자내 결손을 포함하며;
(b) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 1 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 있고;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시되며, 그리고 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 형질전환유전자는 상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 있고; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시되며, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는상기 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열에서 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고;
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 pS 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 F17R 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 E3L 프로모터다.
185. 구체예 184의 핵산, 이때 pS 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 555, 서열 식별 번호: 556, 또는 서열 식별 번호: 557의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
186. 구체예 174 또는 185의 핵산, 이때 F17R 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 563의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
187. 구체예 184-186중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 E3L 프로모터의 뉴클레오티드 서열은 식별 번호: 567의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
188. 구체예 1-187중 임의의 하나의 구체예의 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
189. 구체예 1-187중 임의의 하나의 구체예의 핵산을 포함하는 패키징 세포주.
190. 구체예 188의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
191. 구체예 188의 바이러스와 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
192. 구체예 1-187중 임의의 하나의 구체예의 핵산과, 이 핵산을 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
193. 구체예 188의 바이러스와, 이 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
194. 구체예 188의 바이러스, 이 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
195. 구체예 194의 키트, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자이다.
196. 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 구체예 188의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
197. 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 구체예 191의 약제학적 조성물의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
198. 구체예 196 또는 197의 방법, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
199. 구체예 196-198중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
200. 구체예 199의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 더 포함한다.
5.7.5. 세트 5
1. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들에서 결손: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R;
(b) 3' 역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
(c) 세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
2. 구체예 1의 핵산, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
3. 구체예 2의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
4. 구체예 2의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
5. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
6. 구체예 5의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
7. 구체예 1-6중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
8. 구체예 1-7중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다.
9. 구체예 1-8중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함한다.
10. 구체예 1-8중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
11. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
(c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
12. 구체예 11의 핵산, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
13. 구체예 12의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
14. 구체예 13의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
15. 구체예 13의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
16. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(d) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
17. 구체예 16의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
18. 구체예 16의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
19. 구체예 11-18중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
20. 구체예 11-19중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다.
21. 구체예 11-20중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다.
22. 구체예 11-21중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
23. 구체예 11-22중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함한다.
24. 구체예 11-22중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
25. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
(c) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
26. 구체예 25의 핵산, 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
27. 구체예 26의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
28. 구체예 26의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
29. 구체예 26의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
30. 구체예 26의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
31. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 그리고
(d) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터이며;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
32. 구체예 31의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
33. 구체예 31의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
34. 구체예 31의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
35. 구체예 25-34중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
36. 구체예 25-35중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
37. 구체예 25-36중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함한다.
38. 구체예 25-36중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
39. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
40. 구체예 39의 핵산, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
41. 구체예 40의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
42. 구체예 40의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
43. 구체예 39-42중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
44. 구체예 43의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
45. 구체예 44의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
46. 구체예 44의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
47. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
48. 구체예 47을 포함하는 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
49. 구체예 47 또는 48을 포함하는 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
50. 구체예 47 또는 48의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
51. 구체예 39-50중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
52. 구체예 39-51중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는막-결합된다.
53. 구체예 39-52중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다.
54. 구체예 39-53중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다.
55. 구체예 39-54중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함한다.
56. 구체예 39-54중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
57. 구체예 39-56중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
58. 구체예 39-57중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함한다.
59. 구체예 39-57중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
60. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
61. 구체예 60의 핵산, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
62. 구체예 61의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
63. 구체예 61의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
64. 구체예 60-63중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
65. 구체예 64의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
66. 구체예 64의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
67. 구체예 64의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
68. 구체예 64의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
69. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는
(ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
70. 구체예 69의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
71. 구체예 69 또는 70의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
72. 구체예 69 또는 70의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
73. 구체예 69 또는 70의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
74. 구체예 60-73중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
75. 구체예 60-74중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다.
76. 구체예 60-75중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함한다.
77. 구체예 60-75중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
78. 구체예 60-77중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
79. 구체예 60-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함한다.
80. 구체예 60-78중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
81. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
82. 구체예 81의 핵산, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
83. 구체예 82의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
84. 구체예 83의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
85. 구체예 83의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
86. 구체예 81-85중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
87. 구체예 86의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
88. 구체예 86의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
89. 구체예 86의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
90. 구체예 86의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
91. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는
(ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
92. 구체예 91의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
93. 구체예 91의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
94. 구체예 91-93중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
95. 구체예 91-93중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
96. 구체예 91-93중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
97. 구체예 81-96중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 있다.
98. 구체예 81-97중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다.
99. 구체예 81-98중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다.
100. 구체예 81-99중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
101. 구체예 81-100중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함한다.
102. 구체예 81-100중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
103. 구체예 81-102중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
104. 구체예 81-103중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함한다.
105. 구체예 81-103중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
106. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
107. 구체예 106의 핵산, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
108. 구체예 107의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터다.
109. 구체예 107의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
110. 구체예 106-109중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
111. 구체예 110의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
112. 구체예 111의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
113. 구체예 111의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
114. 구체예 106-113중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함한다.
115. 구체예 114의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
116. 구체예 114의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
117. 구체예 114의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
118. 구체예 114의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
119. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
120. 구체예 119의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터다.
121. 구체예 119 또는 120의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한다.
122. 구체예 119 또는 120의 핵산, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열를 포함한다.
123. 구체예 119-122중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터다.
124. 구체예 119-122중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터다.
125. 구체예 119-122중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
126. 구체예 106-125중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
127. 구체예 106-126중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된다.
128. 구체예 106-127중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함한다.
129. 구체예 106-128중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드한다.
130. 구체예 106-129중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함한다.
131. 구체예 106-129중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된다.
132. 구체예 106-131중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
133. 구체예 106-132중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함한다.
134. 구체예 106-132중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된다.
135. 구체예 106-134중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
136. 구체예 106-135중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함한다.
137. 구체예 106-135중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된다.
138. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
139. 구체예 138의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다.
140. 구체예 1-10, 39-80, 그리고 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
141. 구체예 11-24, 39-59, 그리고 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
142. 구체예 25-38 및 60-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
143. 구체예 1-10, 39-80, 그리고 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
144. 구체예 11-24, 39-59, 그리고 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
145. 구체예 25-38 및 60-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
146. 구체예 1-10, 39-80, 그리고 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
147. 구체예 11-24, 39-59, 그리고 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
148. 구체예 25-38 및 60-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
149. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
150. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
151. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
152. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
153. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
154. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
155. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
156. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
157. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
158. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
159. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
160. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
161. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
162. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
163. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
164. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
165. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
166. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
167. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
168. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
169. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
170. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
171. 구체예 39-59 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
172. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
173. 구체예 60-80 및 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
174. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
175. 구체예 81-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
176. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
177. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
178. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
179. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
180. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
181. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
182. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
183. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
184. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
185. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
186. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
187. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
188. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
189. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
190. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
191. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
192. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
193. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
194. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
195. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
196. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
197. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
198. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
199. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
200. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
201. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
202. 구체예 106-137중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재한다.
203. 구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 50%의 결손이다.
204. 구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 60%의 결손이다.
205. 구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 70%의 결손이다.
206. 구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 80%의 결손이다.
207. 구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 약 75%의 결손이다.
208. 구체예 1-202중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 약 80%의 결손이다.
209. 구체예 1-208중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스의 게놈으로부터 유래된다.
210. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
211. 구체예 210의 핵산, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있다.
212. 구체예 210 또는 211의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
213. 구체예 210 또는 211의 핵산, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재한다.
214. 구체예 212 또는 213의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있다.
215. 구체예 212 또는 213의 핵산, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있다.
216. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
217. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
218. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
219. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
(a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
(b) 3' ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
(c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
(d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
(e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고
이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
(i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
(ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
(iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
220. 구체예 1-219중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
221. 구체예 1-105중 임의의 하나의 구체예의 핵산, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
222. 구체예 1-221중 임의의 하나의 구체예의 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
223. 구체예 1-221중 임의의 하나의 구체예의 핵산을 포함하는 패키징 세포주.
224. 구체예 222의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
225. 구체예 222의 바이러스와 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
226. 구체예 1-221중 임의의 하나의 구체예의 핵산과, 이 핵산을 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
227. 구체예 222의 바이러스와, 이 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
228. 구체예 222의 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 이 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
229. 구체예 228의 키트, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자이다.
230. 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 구체예 222의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
231. 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 구체예 225의 약제학적 조성물의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
232. 구체예 230 또는 231의 방법, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자다.
233. 구체예 230-232중 임의의 하나의 구체예의 방법, 이때 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택된다.
234. 구체예 230-233의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
235. 구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택된다.
236. 구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
237. 구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
238. 구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
239. 구체예 234의 방법, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
240. 구체예 219-228중 임의의 구체예의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
241. 구체예 240의 방법, 이때 상기 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택된다.
242. 구체예 240의 방법, 이때 상기 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택된다.
243. 구체예 240-242중 임의의 구체예의 방법, 이때 상기 인터루킨은 막-결합된다.
244. 구체예 230-243중 임의의 구체예의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함한다.
245. 구체예 244의 방법, 이때 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택된다.
246. 구체예 230-245중 임의의 구체예의 방법, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함한다.
247. 구체예 246의 방법, 이때 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질이다.
248. 구체예 247의 방법, 이때 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택된다.
249. 구체예 246의 방법, 이때 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 cKit로 구성된 군에서 선택된다.
250. 구체예 246의 방법, 이때 상기 사이토킨은 Flt3 리간드이다
5.8. 본 출원에서 참조된 표 3-45
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6. 실시예
다음의 실시예들은 본 명세서에서 청구된 조성물 및 방법이 어떻게 수행되고, 제조되고, 평가되는 지에 대한 설명을 당업자에게 제공하기 위해 제시되며, 순전히 본 발명의 예시로써 의도된 것이며, 발명자들이 자신의 발명으로 간주하는 범위를 제한하고자 함은 아니다.
6.1. 실시예 1 - OncoVac의 발견
59가지 수두바이러스 균주의 개방 판독 프레임 (ORFs)을 오르소로스(orthologs)로 클러스터화시키고, 아미노산 수준에서 정렬했다 (계통발생학적 분석을 위해 도 1 참고). Bayesian 분석을 수행하여 모든 균주의 관련성을 결정했다. 수두바이러스는 유전자 함량과 숙주 범위가 매우 다양하다. 서로 상이한 몇 가지 자연 발생적 백시니아 야생형 균주들이 있다.
도 33은 다양한 수두바이러스 게놈에서 CopMD5p3p에서 결손된 유전자의 백분율을 나타낸다(표 2). 그래프의 각 점은 하나의 수두바이러스 게놈 게놈을 나타낸다. 상동성 검색은 Copenhagen 게놈의 표 2 유전자의 아미노산 서열로 다른 분기군(clades)의 수두바이러스에 대한 의문을 제기하는데 이용된다. 다른 수두 바이러스에 존재하는 결손된 유전자의 양은 이들의 개산(divergence)이 증가함에 따라 감소된다.
백시니아 야생형형 균주들을 동일한 플라크 형성 단위 수로 혼합하고, NGS (투입 풀)로 시퀀싱했다. 생성된 혼합물을 상이한 암 세포주에서 3 회 계대시켰다. 최종 모집단은 Illumina NGS 시퀀싱으로 시퀀싱되었다. 리드(Reads: 짧은 DNA 단편)은 서열 동일성을 기반으로 다양한 균주에 할당되었으며, 최종 집단에서 각 균주의 백분율을 계산하는 데 사용되었다. 상이한 종양 유형에서 5 가지 백시니아 바이러스를 계대한 후, 상이한 바이러스 균주의 풍성도는 도 2에 나타낸다. Copenhagen 균주는 다른 균주보다 더 자라고, 따라서 빨리 복제한다.
상이한 백시니아 야생형 균주 또한 낮은 PFU (1 x 104)로 다양한 환자 종양 코어를 감염시키는데 이용되었다. 각 균주는 평균 4 개의 리플리케이트(replicates)로 감염되며, 각 리플리케이트에는 2 x 2 mm 종양 코어 3개가 함유되어 있다. 복제는 바이러스 역가를 통해 평가되었고, 도 3에 나타낸 바와 같이 플라크 형성 단위 (PFU)로 표현된다. Copenhagen 균주코펜하겐 균주는 다른 균주보다 더 높은 역가로 성장하고, 따라서 환자의 생체-외 샘플에서 더 빠르게 자기복제된다. 환자의 생체-외 코어는 환자의 3D 종양의 우수한 모방체다.
그 다음, 백시니아 야생형 균주는 3% CMC 오버레이(overlay)된 U2-OS 세포 상에서 플라크 검정을 받았다. 감염-후 2일 차, 각 균주에 대해 20-30개 플라크의 크기를 측정하였다. Copenhagen, Western Reserve, Wyeth, Lister, 그리고 Tian Tan에 대한 플라크 크기 측정은 도 4에 나타낸다. 플라크 형성은 상기 바이러스가 복제, 확산 및 사멸 능력에 의해 영향을 받는다. Copenhagen 균주에 대해 관찰된 더 큰 플라크 크기는 이 균주가 종양용해성 바이러스의 발달에 중요한 이러한 능력에서 우월함을 시사한다.
마지막으로, 도 1의 59가지 모든 수두바이러스 게놈을 사용하여 ORF를 찾고, 오르소로그(orthologous) 그룹으로 클러스터링했다. Groups 함유하는 Copenhagen 유전자를 포함하는 그룹은 Copenhagen 게놈에서 유전자의 위치 (x 축) 및 그룹의 크기 (y 축)를 기반으로 플롯되었다. 59 종 모두 동일한 유전자를 공유할 때, 보존은 100%로 간주된다. 주요 결손 CopMD5p 및 CopMD3p의 일부인 유전자는 이들의 결손이 적합도(fitness)에 영향을 미치지 않기 때문에, 바이러스 복제에 덜 중요한 것으로 밝혀졌다.
기존에 특성화되지 않은 A47L 유전자를 삭제시킴으로써, 새로운 표현형이 발견되었다. A47L을 삭제하면 Copenhagen 바이러스가 더 큰 플라크를 생성하게 된다.
Illumina NGS 딥 시퀀싱(deep sequencing)으로 플라크 정제 과정에서 주요 결손의 존재가 드러났다. CopMD5p 및 CopMD3p는 정제된 플라크이었으며, 주요 게놈 결손을 품고 있는 것으로 밝혀진 클론을 나타낸다. 이들 2 개의 클론은 재조합을 유도하기 위해, 높은 MOI (MOI 10)에서 HeLa 세포의 단층을 공동-감염시키는 데 사용되었다. 무작위로 플라크를 찍어내기(picking)하고, PCR에 의해 이들 두 게놈 결손을 모두 포함하는 이중 결손된 CopMD5p3p의 존재가 드러났다 (도 5 참조). 따라서, 야생형 Copenhagen 집단에서 자연적으로 발생하는 두 개의 결손이 발견되었다. 이들 2개 결손이 복합되어, 정제되면 본원에서 "CopMD5p3p"로 지칭되는 복제되는 바이러스가 제공되며, 이들은 C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자에서 결손, 뿐만 아니라 ITRs의 각 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R 복사본에서 결손을 나타낸다. 본원에서 사용된 바와 같이, "CopWT"는 야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스를 지칭하며, "CopMD5p"는 대표적인 5' 유전자 (C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 및 F3L)에 결손을 품고 있는 Copenhagen 백시니아 바이러스를 지칭하며, 그리고 "CopMD3p"는 대표적인 3' 유전자 (B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R)에 결손을 품고 있으며, 뿐만 아니라 ITRs의 각 B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R 복사본에서 결손을 가지는 Copenhagen 백시니아 바이러스를 지칭한다.
6.2. 실시예 2 - 암 세포 사멸
암 세포를 24-웰 플레이트에서 4개 리플리케이트로 MOI (1 ~ 0.01) 범위에서 CopMD5p3p로 감염시켰다. 바이러스로 감염-후 2일차 시점에서 플레이트를 크리스탈 바이올렛로 착색시켰다. 크리스탈 바이올렛 착색은 SDS에 용해시키고, 분광광도법에 의해 판독되었다. 데이터는 감염되지 않은 세포의 흡광도 백분율로 표시된다 (도 6 참고). 이 데이터는 대부분의 암 세포주가 CopMD5p3p 바이러스에 노출되었을 때 더 빨리 죽는다는 것을 보여준다.
야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온이 다양한 암 세포주들에서 항-종양 면역 반응을 유도하고, 증식하는 능력을 또한 도 23, 24 및 26-32에서 나타낸다.
6.3. 실시예 3 - 암 세포에서 성장
4 개의 암 세포주를 24-웰 플레이트에서 낮은 MOI (0.001)로 3 중으로 CopMD5p3p로 감염시켰고, 서로 다른 시점에서 바이러스를 수집하고, 적정하였다. 시간 0h은 투입을 나타낸다. HeLa, 786-O, HT-29, 그리고 MCF7의 성장 곡선은 도 7에 나타낸다. 이 데이터는 변형된 CopMD5p3p 바이러스는 시험관 내에서 이들의 성장하는 능력이 손상되지 않음을 보여준다. 이것은 상기 바이러스가 인터페론 반응이 존재할 때 조차도 복제 컴피턴트임을 의미한다. 포유류 세포주에서 복제하는 능력은 또다른 중요한 장점을 제공한다. 이러한 바이러스들이 향상된 속도와 효율성으로 제조될 수 있다.
6.4. 실시예 4 - 환자 종양 샘플에서 성장
환자 종양 샘플은 수술 직후 채취하여, 2mm x 2mm 코어로 절단했다. 3 개의 코어는 야생형 Copenhagen 또는 CopMD5p3p의 소량의 바이러스 (1 x 10 4 PFU)로 감염되었다. 72h 후, 바이러스 생산량은 플라크 분석에 의해 평가되었고, 최종 바이러스 역가는 PFU로 표현되었다(도 8 참고). 이 데이터는 변형된 CopMD5p3p 바이러스가 새로운 환자 종양 샘플에서 복제할 수 있음을 보여준다. 환자 종양 샘플에서 복제는 환자 3D 종양에서 복제에 대한 우수한 모델이다.
6.5. 실시예 5 - U2-OS 세포에서 합포체
U2-OS 세포의 단층은 Copenhagen 야생형 또는 CopMD5p3p 바이러스로 감염되었다. 2h 후, 배지는 플라크 분석에서 수행된 바와 같이, 오버레이 배지로 변경되었다. 감염-후 48h 시점에서, 플라크 표현형을 평가하기 위해 EVOS로 사진을 찍었다 (도 9 참고). 합포체라고도 알려진 세포 융합은 감염되지 않은 세포가 감염된 세포와 합쳐지기 때문에, 바이러스 확산을 지원하는 것으로 생각된다. 추가적으로, 융합된 세포는 면역원성으로 밝혀졌고, 암세포의 경우 항-종양 면역 반응 시작에 도움이 될 수 있다.
6.6. 실시예 6 - 786-O 세포에서 합포체
786-O 세포의 단층은 Copenhagen 야생형 또는 CopMD5p3p 바이러스로 감염되었다. 24h 후, EVOS로 10X 확대로 사진 촬영했다(도 10 참고). 이것은 합포체 발생에 대한 추가 증거다. 도 9에서 플라크 표현형을 나타낸다. 현재 실험에서는 세포의 단층이 오버레이없이 감염되었다. CopMD5p3p 바이러스에 감염된 대부분의 세포는 융합되었다.
6.7. 실시예 7 - 마우스 모델에서 종양 제어 및 체중 감소
누드(Nude) CD-1 마우스에게 HT-29 인간 결장 암 이종이식편을 씨딩하였다. 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 확립하면, 마우스를 정맥 내로 1 x 107 PFU의 백시니아 바이러스로 24h 간격으로 세 번 (점선) 처리했다. 마우스에서 종양 크기 및 체중 감소에 대해 거의 격일로 측정했다(도 11 참고). 이 실험은 CopMD5p3p가 면역력이 저하된 누드 마우스에서 체중 감소 또는 기타 질병 징후를 일으키지 않기 때문에 훨씬 더 안전한 바이러스임을 보여준다. 이 실험은 또한 CopMD5p3p가 부모계 Copenhagen 야생형 바이러스와 유사하게 종양 성장을 제어할 수 있음을 보여준다.
6.8. 실시예 8 - 수두 병변 형성
누드 CD-1 마우스를 1 x 107 PFU의 백시니아 바이러스로 정맥으로 1회 처리하였고, 각 그룹은 마우스가 6마리다. 치료-후 2주 시점에서, 마우스를 희생시키고, 꼬리 사진을 찍었다. 꼬리의 수두 병변은 모든 마우스 꼬리에서 수작업으로 계수되었다. 대표 사진은 도 12에 나타낸다. 이 실험은 CopMD5p3p가 면역력이 저하된 누드 마우스에서 수두 병변을 야기하지 않기 때문에 훨씬 더 안전한 바이러스임을 보여준다. 이는 이전의 종양용해성 백시니아 임상 데이터에서 치료시 수두 병변이 발생하는 환자를 보여주기 때문에 중요하다. 티미딘 키나제 (TK)의 녹아웃은 OV (종양용해성 바이러스)의 안전성을 높이는 인기 있는 방법으로, 현재 임상 III 상 종양용해성 백시니아와 FDA 승인된 종양용해성 T-Vec에 존재한다. 데이터는 TK의 결손이 이 분석에서 중요한 역할을 하지 않는다는 것을 보여주는데, 여기서 마우스는 TK가 결손된 바이러스에 감염되었을 때 수두 병변이 발생하지만, 그러나 무손상 TK를 보유한 CopMD5p3p에 의해서는 수두 병변이 발생되지 않는다는 것을 보여준다.
6.9. 실시예 9 - 전신 투여 후 백시니아의 IVIS 생체-분포
TK를 Fluc로 대체시킨 pSEM1 플라스미드에 의해 감염된 세포의 형질감염을 통하여 반딧불이 루시퍼라제(Fluc)를 발현시키도록, 백시니아 바이러스 야생형 Wyeth, 야생형 Copenhagen, 그리고 CopMD5p3p들이 공작되었다. 바이러스들은 플라크 정제되었고, 확장되었다. 모든 바이러스는 TK 녹-아웃이며, 이들의 TK 유전자좌에 기능성 Fluc가 인코드되어 있다.
그 다음, 누드 CD-1 마우스에게 HT-29 인간 결장 암 이종이식편을 씨딩하였다. 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 확립하면, 마우스를 정맥 내로 1e7 PFU의 백시니아 Fluc를 인코딩하는 바이러스로 처리했고, 그룹당 마우스는 4마리다. 치료-후 4 일 시점, 마우스에게 i.p.(복강 내) 루시페린을 주사하고, 바이러스의 존재 여부를 IVIS로 영상화하였다 (도 13 참고). 이 실험은 CopMD5p3p가 해당 종양에 더 특이적이기 때문에, 훨씬 더 안전한 바이러스임을 보여준다. 다른 바이러스는 꼬리, 근육, 발 및 비강-내에서 표적-외 복제를 보여준다. CopMD5p3p는 유일하게 상기 종양에 국소화된다. 기존 도 12 및 도 13에 나타낸 것과 같이, 다른 균주들과 비교하여, 꼬리에서 CopMD5p3p가 덜 검출된다. 도 14는 CopMD5p3p가 다른 종양용해성 백시 니아와 비교할 때 다른 장기 기관에서 더 낮은 역가를 갖는다는 것을 보여준다. CopMD5p3p는 종양의 다른 바이러스와 동일한 수준으로 복제되지만, 표적-외 조직에서는 덜 복제되므로, CopMD5p3p는 종양용해성 바이러스의 프로필에 더 적합하다.
야생형 Copenhagen 백시니아 바이러스와 몇 가지 변형된 Copenhagen 백시니아 비리온을 비롯한 다양한 백시니아 바이러스 벡터의 생체분포에 대한 추가 실시예는 도 25에 나타낸다.
6.10. 실시예 10 - 인간 PBMCs에서 백시니아의 면역원성
PBMCs는 건강한 인간 공여자(n = 2)의 혈액에서 단리되었다. PBMCs를 백시니아와 함께 24h 동안 배양하고, 유동세포분석(Flow Cytometry)을 사용하여 조기 활성화 마커를 확인했다(도 15 참고). 이 실험은 CopMD5p3p가 면역원성이 더 높고, 면역 세포에 의해 더 쉽게 검출된다는 것을 보여준다. 종양 조직에서 복제되는 OVs는 성공적인 항-종양 면역 반응을 위해 면역 세포를 활성화시켜야 하기 때문에, 이것이 바람직한 속성이라고 우리는 믿는다.
6.11. 실시예 11 - 마우스 비장세포에서 백시니아의 면역원성
면역 컴피턴트 Balb/C 마우에게 1e7 백시니아 PFU 백시니아 바이러스를 정맥으로 주사하였다. 1 ~ 2 일 후, 마우스를 희생시키고, 비장을 수거하고, 유동세포 분석을 사용하여 면역 활성화를 분석했다 (도 16 참고). 이 실험은 CopMD5p3p가 면역원성이 더 높고, 마우스 면역 세포에 의해 더 쉽게 검출된다는 것을 보여준다. 이 데이터는 대부분의 생체 내 실험이 마우스에서 수행되기 때문에 이전의 기존 도 15를 훌륭하게 보완한다.
6.12. 실시예 12 - 인간 세포에서 백시니아의 면역원성
인간 암 세포 786-O에 MOI 0.01에서 바이러스를 감염시켰다. 다음날, 세포를 수거하고, 세포 분획화(fractionation)을 통해 핵과 세포질을 분리하였다. 각 분획으로부터 단백질을 추출하고, NF-kB 하위단위 p65 및 p50에 대해 블롯팅했다 (도 17 참고). NF-kB 면역 전사 인자는 이의 하위단위 p65 및 p50이 핵으로 전좌되면 면역 반응을 시작했다. 일부 바이러스는 면역억제성이며, 이러한 전좌를 차단시켜, 면역 반응을 막는다. NF-kB 기능을 억제하는 것은 면역치료요법적 접근법과 함께 종양용해성 바이러스를 사용하려는 목표에 반-직관적(intuitive)이다. 따라서, CopMD5p3p는 MG-1과 유사하게 거동하기 때문에, 더 유리한 바이러스다.
6.13. 실시예 13 - 공격적 흑색종 모델에서 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과
면역 컴피턴트 C57BL/6 마우스에게 B16-F10 흑색종 종양을 피하로 씨딩하였다(5x105 세포). 치료는 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 형성하면 시작되었다. CopMD5p3p 바이러스로 처리된 마우스는 하루 간격으로 1e7 PFU 용량을 3회 종양 (종양-내)에 투여했다. 항 -CTLA-4로 처리된 마우스는 하루 간격으로 5 회의 100ug 용량의 항체를 i.p.로 제공받았다. 치료가 시작되면, 격일로 생존을 기록했다(도 18 참고). 이 실험에서 우리는 CopMD5p3p 바이러스의 종양용해 효과가 매우 공격적인 흑색종 뮤린 모델에서 잘-알려진 체크포인트 억제제 CTLA-4와 시너지 효과를 낼 수 있는지 테스트했다. 바이러스와 체크 포인트로 처리된 마우스의 중앙 생존율은 임의의 다른 그룹보다 높았다. 이것은 CopMD5p3p가 체크포인트 차단 면역요법과 시너지 효과를 내는 몇 가지 자극 속성을 가지고 있음을 시사한다.
6.14. 실시예 14 - 면역 체크포인트 억제제 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과
면역 컴피턴트 Balb/C 마우스에게 피하로 CT26-LacZ 종양을 씨딩했다(5 x 105 세포). 치료는 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 형성하면 시작되었다. 백시니아 바이러스로 처리된 마우스에게 상기 종양 안으로(종양-내) 1e7 PFU 투여량을 3회 투여했다 (24h 간격, 첫 3개 점선). 항-CTLA-4로 처리된 마우스는 100ug 용량의 항체를 i.p로 5 회 (24h 간격, 점선) 제공받았다. 치료가 시작되면 격일로 종양 크기 및 생존을 기록하였다 (도 19 참고). 데이터는 TK 녹-아웃 백시니아 바이러스가 CopMD5p3p처럼 항-CTLA-4와 잘 협업하지 않음을 보여준다. 이것은 CopMD5p3p가 면역원성이 더 높고, 항-종양 면역 반응을 더 많이 생성할 수 있음을 시사한다.
6.15. 실시예 15 - 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체와의 시너지 효과
면역 컴피턴트 Balb/C 마우스에게 피하로 CT26-LacZ 종양을 씨딩했다(5 x 105 세포). 치료는 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 형성하면 시작되었다. 백시니아 바이러스로 처리된 마우스에게 상기 종양 안으로(종양-내) 1e7 PFU 투여량을 3회 투여했다 (24h 간격, 첫 3개 점선). 항-PD1로 처리된 마우스는 백시니아 바이러스의 최종 용량을 제공받은 후 24h 시점에 100 ug 투여량의 항체를 i.p.로 5 회 (24h 간격, 점선) 제공받았다. 치료가 시작되면, 종양 크기와 생존을 격일로 기록했다(도 20 참고). 데이터는 TK 녹-아웃 백시니아 바이러스가 CopMD5p3p처럼 항-PD1과 잘 협업하지 않음을 보여준다. 이것은 CopMD5p3p가 면역원성이 더 높고, 항-종양 면역 반응을 더 많이 생성할 수 있음을 시사한다.
6.16. 실시예 16 - 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 항체 및 항-CTLA-4 항체와의 시너지 효과
면역 컴피턴트 Balb/C 마우스에게 피하로 CT26-LacZ 종양을 씨딩했다(5 x 105 세포). 치료는 피하 종양이 대략 5mm x 5mm 크기를 형성하면 시작되었다. 백시니아 바이러스로 처리된 마우스에게 상기 종양 안으로(종양-내) 1e7 PFU 투여량을 3회 투여했다 (24h 간격, 첫 3개 점선). 항-CTLA-4로 처리된 마우스는 100 ug 투여량의 항체로 i.p.로 5 회 (24h 간격, 첫 5개 점선) 제공받았다. 항-PD1로 처리된 마우스는 백시니아 바이러스의 최종 용량을 제공받은 후 24h 시점에 100 μg 투여량의 항체를 i.p.로 5 회 (24h 간격, 점선) 제공받았다. 치료가 시작되면, 종양 크기와 생존을 격일로 기록했다(도 21 참고). 이 실험에서 우리는 두 체크포인트를 동시에 차단할 경우, 더 낮은 용량 (100μg 대신 25μg)의 체크포인트 억제제 항체가 작용할 수 있는지 테스트했다. CopMD5p3p는 더 낮은 용량 (총 50 μg)의 체크포인트로 이 뮤린 모델에서 여전히 치료를 달성했다. 체크포인트 억제제는 용량 의존적 독성을 가지고 있기 때문에, 매우 적은 투여량의 체크포인트 차단제로도 여전히 관찰가능한 표현형을 얻을 수 있다는 것이 유리하다. 다른 실험에서와 같이, CopMD5p3p 바이러스는 확립된 종양을 치료할 수 있으며, 이 효과는 CopMD5p3p의 해당 결손이 없는 야생형 바이러스에서는 관찰되지 않는다.
6.17. 실시예 17 - 대상체 치료를 위한 투여
본원에서 기술된 방법을 이용하여, 당분야의 임상의는 대상체 (예를 들면, 환자)에게 암 또는 종양 세포들을 치료하기 위해 본원에 기술된 재조합 오르토폭스바이러스 벡터를 함유하는 약제학적 조성물을 투여할 수 있다. 상기 암은 예를 들면, 그 중에서도 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암일 수 있다.
예를 들면, 당업자는 환자가 암 또는 종양을 앓고 있음을 평가할 수 있고, 본원에서 개시된 재조합 오르토 폭스 바이러스 벡터를 함유하는 약제학적 조성물의 치료요법적 유효량 (예를 들어, 종양의 크기를 감소시키기에 충분한 양)을 환자에게 투여할 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 해당 대상체에게 명시된 시격으로(예를 들면, 매주, 매일, 또는 매 시간) 하나 또는 그 이상 투여량 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 또는 그 이상의)으로 투여될 수 있다. 치료 효과를 모니터링하고, 환자의 반응에 따라 투여량을 늘리거나 또는 줄이기 위해 투여 사이에 해당 환자를 평가할 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 해당 환자에게 경구, 비경구 (예를 들어, 국소), 정맥 내, 근육 내, 피하 또는 비강 내로 투여될 수 있다. 이 치료는 약제학적 조성물의 단일 투여와 관련될 수 있다. 이 치료는 약제학적 조성물의 지속적인 투여 (예를 들어, 수일, 수주, 수개월 또는 수년)와 관련될 수 있다. 이 치료는 또다른 치료요법적 제제 (예를 들면, 면역 체크포인트 억제제, 이를 테면, 그중에서도 항-PD-1 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, IL-12, 또는 Flt3 리간드)의 사용과 더 관련될 수 있다.
6.18. 실시예 18 - 몇 가지 백시니아 균주에서 CopMD5p 및 CopMD3p의 표적화된 결손
변형된 백시니아 바이러스 벡터를 만들기 위한 다음 프로토콜은 예를 들면, Rintoul et al. PLoS One. 6(9): e24643 (2011)(이의 명세서는 본원에 참고자료로 편입됨)에 기술된 기술을 이용한다.
간략하게 설명하자면, CopMD5p (5' 유전자: (C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, 및 F3L 유전자)에 결손을 품고 있는 Copenhagen 백시니아 바이러스) 그리고 CopMd3p (3' 유전자: B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R 유전자에 결손을 품고 있는 Copenhagen 백시니아 바이러스) 표적화 재조합 구조체들은 g-Block technology (IDT, Coralville Iowa)에 의해 합성되었다. U2OS 세포에 1.5 시간 동안 무혈청 DMEM에서 MOI 0.01로 야생형 백시니아 바이러스 (Wyeth, Western Reserve, Tian Tan, Lister)로 감염시켰다. 바이러스 상청액을 흡출하고, U2OS 세포를 OptiMEM (Gibco)에서 Lipofectamine 2000 (Invitrogen)에 의해 g-Blocks을 표적으로 하는 PCR 증폭된 CopMD5p 또는 CopMD3p로 형질 감염시켰다. 10 % FBS가 보충된 DMEM을 형질감염-후 30 분 시점에 세포에 첨가하고, 밤새도록 방치하였다. 다음날, 형질 감염 배지를 흡출하고, 신선한 DMEM 10 % FBS 배지를 세포에 첨가하였다. 감염 형질감염 후 48시간 시점에서, U2OS 세포를 수거하고, 단일 동결 해동 주기로 용해시켰다. 연속 희석된 용해물을 U2OS 세포의 합류 단층에 플레이 팅하고, eGFP 양성 (CopMD5p 표적화) 또는 mCherry 양성 (CopMD3p 표적화) 플라크를 분리하고, 5 회 플라크 정제를 통해 정제했다.
이중 주요 결손된 백시니아 바이러스는 U2OS 세포에서 CopMD5p 및 CopMD3p 결손된 백시니아 바이러스를 각 바이러스에 대해 MOI 5에서 공동-감염에 의해 생성되었다. 다음날 세포를 수확하고, 1 라운드의 동결 해동으로 용해시켰다. 용해물을 연속 희석하고, U2OS 세포의 합류 단층에 플레이 팅하고, 이중 양성 플라크 (eGFP + mCherry)를 선택했다. 플라크는 5 라운드의 플라크 정제에 의해 정제되었다.
본 명세서의 변형된 오르토폭스 바이러스 벡터 (예를 들면, 변형된 백시니아 바이러스 벡터, 이를 테면, 변형된 Copenhagen 백시니아 바이러스 벡터) 생성에 대한 예시적인 계획은 도 22에 나타낸다.
6.19. 실시예 19 - SKV (CopMD5p3p-B8R-)는 SKV-B8R+과 비교하였을 때 종양 제어에 있어서 유사한 효능을 갖는다
상기 백시니아 바이러스 (VV) B8R 유전자는 감마 인터페론 수용체 (IFN-γ)에 대해 상동성을 갖는 분비된 단백질을 인코드한다. 시험관내, B8R 단백질은 인간 및 렛(rat) 감마 인터페론을 비롯한 몇 가지 종의 감마 인터페론에 결합하고, 이의 항바이러스 활성을 중화한다; 그러나, 이것은 뮤린 IFN-γ에 유의적으로 결합하지 않는다. 여기에서 우리는 B8R 유전자가 결여된 재조합 VVs의 구성 및 특성을 기술한다. 표적화 구조체와 B8R 유전자좌 사이의 상동성 재조합은 B8R 유전자의 75 %를 2 개의 loxP 부위 측면에 있는 eGFP 이식 유전자로 대체했다 (SKV-GFP).
B8R- 바이러스는 B8R+ 바이러스와 유사한 효능을 나타내었다. 도 37. SKV 또는 SKV-GFP로 처리된 마우스의 생존이 평가되었다. 5 x 105 CT26-LacZ 세포를 0일차 피하로 씨딩했다. 14 일, 16 일 및 18 일차에 종양을 107 pfu의 용량으로 SKV 또는 SKV-GFP의 종양 내 주사로 처리했다. 주사된 바이러스가 B8R 유전자좌의 결손을 가졌을 때, 효능의 현저한 감소는 보이지 않았다.
6.20. 실시예 20 - 정상 세포주 대비 암 세포주에서 SKV-B8R+ 바이러스의 감염
일차 건강 세포 생존력은 암 세포의 것과 비교되었다. 합류 정상 세포 또는 암 세포를 MOI (pfu/세포) 범위에서 48 시간 동안 감염시킨 후 생존력을 정량화했다. 도 34에서 나타낸 것과 같이, SKV-B8R+ 바이러스는 선호적으로 암 세포를 감염시킨다.
6.21. 실시예 21-SKV-B8R+는 인터페론 신호생성을 손상시키지 않는다.
인터페론 신호생성은 다양한 정상 세포주와 하나의 암 세포주 (786-O)에서 인터페론 경로에서 상향조절된(발현 유도됨) 또는 하향조절된(발현 억제됨) 유전자 수를 결정함으로써, 평가되었다. 도 35. 1 백만개 세포의 합류 단층에 SKV-B8R+ (CopMD5p3p) 또는 TK 유전자가 기능을 하지 못하는 부모계 Copenhagen 바이러스로 18h 동안 MOI 3 (3e6 PFU)으로 감염시켰다. RNA는 RNA-seq를 이용하여 서열화시키고, 인터페론 유전자의 유전자 발현은 판독 맵핑 및 발현 정상화 후 결정되었다. SKV-B8R+ (CopMD5p3p) 바이러스는 대부분 인터페론 경로의 유전자를 유도하지만, 부모계 Copenhagen는 유전자를 억제시킨다. 이것으로 SKV-B8R+ (CopMD5p3p)는 정상 세포에서 바이러스 청소에 결정적인 유형 I 인터페론 신호생성을 유도할 수 있음이 암시된다.
6.22. 실시예 22 - Flt3L, IL-12 TM 및 항-hCTLA-4를 발현시키도록 공작된 B8R 네가티브 백시니아 바이러스
상기에서 기술된 바와 같이, 변형된 백시니아 바이러스 함유하는 CopMD5p3p 및 B8R 결손은 면역치료요법적 형질전환유전자, Flt3L 및 IL-12-TM, 뿐만 아니라 hCTLA-4에 대한 항체를 발현시키도록 추가 공작되었다(도 38에 나타남). Flt3L, IL-12 TM 및 eGFP 형질전환유전자들은 Copenhagen 백시니아 바이러스 게놈 상에서 B8R 유전자좌로 삽입되었다. 도 36 참고. 표적화 구조체와 B8R 유전자좌 사이의 상동성 재조합은 B8R 유전자의 75 %를 Flt3-LG, IL-12-TM 및 eGFP 형질전환유전자로 대체했다 (SKV-23). 이 전략으로 B8R를 대신하여 형질전환유전자들이 삽입된 B8R 녹-아웃 바이러스가 생성되었다. 상기 항-CTLA-4 IgG는 T2A 단백체 모티프에 의해 분리된 인간 항-CTLA-4 항체의 중쇄와 경쇄를 삽입시키기 위해 5p 결손의 경계를 표적으로 함으로써 SKV-23 백본으로 삽입되었다 (SKV-123v2; 도 38 참고).
막 결합된 IL-12 형질전환유전자를 발현시키는 이들 공작된 바이러스의 능력이 평가되었다. 세포는 SKV-1sc23, SKV-3 또는 SKV-GFP 공작된 백시니아 유전자로 감염되었다. 도 42에 나타낸 바와 같이, Vero 세포는 IL-12p35 특이적 항체로 착색되었다. Vero 세포는 세포 막 특이적 착색화된 패턴을 시각화시키기 위해 카운터착색으로 맥아 응집소 (WGA) 콘쥬게이트된 형광단으로 공동-라벨시켰다. 웨스턴 블랏 정량화를 통하여 형질전환유전자를 발현시키는 다양한 SKV 바이러스의 hIL-12 생성에 대해 추가 정량화되었다. 도 41 참고. 1 x106 HeLa 세포의 단층에 세 가지 형질전환유전자 (항-hCTLA-4, FTL3L, IL-12)의 상이한 조합을 발현시키는 다양한 백시니아 SKV를 MOI 0.1 (1x105 pfu)에서 감염시켰다. 감염-후 48h 후, 상청액과 용해물(lysate)을 수거하여, IL-12 p35 하위단위의 발현에 대해 프로브하였다. SKV-123 및 SKV-3은 모두 막경유 도메인을 갖는 IL-12 p35 하위단위를 발현시키도록 공작된 바이러스로써, 이들은 용해물 분획 상에 해당 단백질만을 발현시키고, 이는 IL-12는 상청액으로 분비되지 않음을 암시한다
항-hCTLA-4 및 hFLT3L의 ELISA 프로토콜을 이용하여 측정하였다. 1e6 HeLa 세포의 단층에 이들 세 가지 형질전환유전자를 모두 발현시키는 SKV-123를 MOI 0.1 (1 x 105 pfu)로 감염시켰다. 감염-후 48시간 시점에서, 상청액을 수거하였고, 인간 항-CTLA-4 항체 및 Flt3 리간드의 발현에 대해 ELISA를 통하여 검정하였다. 도 40에 나타낸 것과 같이, SKV-123 바이러스는 Flt3 리간드 가용성 단백질보다는 CTLA-4에 대항하는 항체를 더 많이 생산할 수 있었다.
이들 세 가지 형질전환유전자를 모두 발현시키는 SKV-123 바이러스는 시간 경과에 따른 형질전환유전자 발현 역동학에서 평가되었다 (도 39). 786-O 인간 선암종 세포주의 합류 단층에 SKV-123 바이러스를 MOI 3 (3 x106 pfu)으로 감염시켰다. RNA는 RNA-seq를 이용하여 서열화시키고, 삽입된 형질전환유전자들의 유전자 발현은 판독 맵핑 및 발현 정상화 후 결정되었다. 이 데이터에서 세포 감염이 발생한 후 3-4hr 시점에서 형질전환유전자 발현이 정점이라는 것이 시사된다.
별개 실험에서, SKV-123v2 바이러스로부터 3개 형질전환유전자 발현은 다른 3가지 암 세포주에서 추가 평가되었다. HeLa 인간 자궁경부암 세포 (American Type Culture Collection (ATCC) Cat. #: CCL-2), HT-29 인간 결장직장 암 세포 (ATCC Cat. #: HTB-38), 그리고 CT26.WT 뮤린 결장직장 암 세포 (ATCC Cat. #: CRL-2638). SKV-123 바이러스 감염(MOIs 0.1 또는 1.0)으로 상기 각 HeLa, HT-29, 그리고 CT26.WT 암 세포에서 CTLA-4 항체, FLT3L, 그리고 IL-12 형질전환유전자 산물이 생성되었다(도 56-59).
6.23. 실시예 23 막 결합된 뮤린 IL-12 p35를 발현시키는 SKV는 뮤린 종양 제어에 더 큰 효능을 갖는다.
SKV 또는 SKV-3 바이러스 (막 결합된 뮤린 p35 IL-12를 발현시키는)로 처리된 마우스의 생존이 평가되었다. 5e6 CT26-LacZ 세포들을 0일차 피하로 씨딩했다. 14 일, 16 일 및 18 일차에 종양을 107 pfu의 용량으로 SKV 또는 SKV-3SKV을 종양 내 주사로 처리했다. SKV 바이러스는 CT26 결장 종양을 품고 있는 마우스 생존을 연장시켰고, SKV-3의 IL-12 발현은 지속적인 치료로 이어지는 완화를 유도할 수 있다. 도 43 참고.
6.24. 실시예 24 - 다양한 백시니아 균주에서 공작된 주요 이중 결손은 시험관내에서 암 세포 사멸을 강화시킨다.
HeLa 세포에 다음 균주의 공작된 백시니아 바이러스를 MOI 0.1로 감염시켰다: (1) 부모계 야생형 바이러스 (wt); (2) 주요 결손된 5 프라임 (5p), (3) 주요 결손된 3 프라임(3p), 그리고 (4) 주요 이중 결손된 5 프라임과 3 프라임의 조합(5p3p). 세포 생존력은 감염-후 72 시간 시점에 알라마르 블루(alamar blue) 검정에 의해 정량화되었다. 5p 및 5p3p 주요 이중 결손된 백시니아 균주는 이들의 부모계 야생형 및 3p 주요 결손된 균주와 비교하였을 때, HeLa 세포에서 세포독성이 더 크다. 도 44-47 참고.
6.25. 실시예 25 - 8가지 상이한 이종이식편 마우스 모델에서 종양 용적 및 생존 이점에서 SKV의 효능
이들 효능 연구의 목적은 Mia PaCa-2 인간 췌장 종양 세포들, PC-3 인간 전립선 종양 세포들, U87MG 인간 신경아교종 세포, UACC-62 인간 흑색종 세포, UM-UC-3 인간 방광 종양 세포들, COLO-205 인간 결장 종양 세포들, NCI-H460 인간 폐 종양 세포들 또는 HT29 인간 결장 선암종 세포를 피하(SC)로 이식받은 무흉선 누드 마우스에 정맥(IV) 및/또는 종양내(IT)로 주사된 CopMD5p3p 결손과 B8R 결손을 모두 포함하는 변형된 백시니아 바이러스 (SKV)의 항-암 활성을 결정하는 것이었다.
세포를 배양하고, 필요한 수의 세포를 얻었을 때 총 45 마리의 암컷(6-8 주령) 무흉선 누드 마우스에 종양 세포를 접종하였다 (0 일차 시점). 각 마우스의 우측 옆구리에 SC로 0.2 mL의 1:1 Matrigel™ 안에 천만개 세포 (1 x 107 세포)를 주사하였다. 25 마리의 마우스가 약 100 ~ 200mg (표적 집단 평균 종양 무게는 대략적으로 200mg)의 종양을 가졌을 때, 백시니아 바이러스 치료가 시작되었다.
이 마우스들에게 0.05 ml SKV (용량 1e7 pfu)를 IT (10마리 마우스)로 및/또는 IV (10마리 마우스)로 투여하였다. 대조군 (5 마리 마우스)에게 0.05 ml PBS를 투여하였다. IT 주사의 경우, 멸균 주사기에 부착된 31G "½" 바늘을 이용하여 각 종양으로 주사하였다. 만일 종양이 크거나 또는 불규칙한 모양일 경우에는 매일 다른 부위에서 종양에 주사하였다. 사망률과 사망률에 대해 매일 두 번 마우스를 관찰하였다. 치료 첫날부터 일주일에 두 번 종양을 측정하였다. 종양 부피 (mm3)는 타원체 구 (l x w 2)/2 = mm3 식을 사용하여 계산되었으며, 여기서 l 및 w는 각 측정에서 수집 된 더 큰 치수와 더 작은 치수를 나타낸다.
종양 이식 후 60 일 또는 그 이전에, 체중이 과도하게 감소한 동물 (치료 첫날 체중의 >30% 감소) 또는 총 종양 부하가 4,000mg에 도달하였고, 궤양이 생겼거나, 또는 탈피된 동물들은 연구에서 제외시켰다.
이러한 효능 연구는 Mia PaCa-2, PC-3, U87MG, UACC-62 및 UM-UC-3 이종 이식 모델에서 1e7 pfu SKV의 용량이 IV 또는 IT로 투여되었을 때(도 48A-48E에 나타낸 것과 같이), 뿐만 아니라 COLO-205, H460 및 HT29 이종이식편 모델에서 1e7 pfu SKV의 용량이 IT 투여되었을 때(도 48F-48H에 도시된 바와 같이), 종양 부피의 측정 가능한 감소를 보여주었다. 이들 효능 연구는 도 48A-48H에 도시된 바와 같이, PBS 단독으로 처리된 대조군 마우스와 비교하여, SKV IV 및/또는 IT로 투여될 때, 8 가지의 이종이식편 모델 모두에서 생존율에서 유의적인 증가 (p <0.0001)를 또한 보여주었다.
6.26. 실시예 26 - 동계성 마우스 모델에서 종양 용적 및 생존 이점에서 다양한 SKV 벡터 효능
다수의 SKV 벡터를 만들었다 (상기 표 44 및 표 45 참고). 이 연구의 목적은 모든 인코드된 형질전환유전자들이 활성인 동계성 마우스 모델에서 SKV-12m3v2-eGFP, 이필리무맙 및 SKV의 효능을 비교하는 것이다. MC38 결장직장 암 세포 (5 x 105)를 Matrigel의 1:1 혼합물 100μl에 재현탁하고, 무혈청 DMEM 배지를 인간 CTLA-4를 발현시키는 트랜스제닉 C57BL/6 마우스의 오른쪽 옆구리에 SC로 주입했다. 그 다음,동물들을 5개 치료군으로 무작위화시키고, PBS, PBS + 이필리무맙, SKV, 항-PD-1 항체, SKV-12m3v2-eGFP 또는 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체로 처치하였다. SKV-12m3v2-eGFP는 인간 항-CTLA-4 항체, 인간 Flt3 리간드 및 마우스 IL-12 TM p35를 발현시키는 SKV이다. 마우스당 1 x 108 PFU를 전달하기 위해 50μl에 바이러스를 PBS로 희석시키고, 그 다음 총 부피를 종양 중앙으로 주입하여 단일 바늘 트랙을 생성시켰다. 항체 (100μl에 이필리무맙 20μg 및 100μl에 항-PD-1 항체 250μg)를 멸균 PBS에 적절한 용량으로 희석시키고, ip 주사에 의해 전달되었다. SC MC38 종양을 품고 있는 마우스를 a) 이필리무맙, 1 mg/kg, b) SKV, 1 x 108 PFU 또는 c) SKV-12m3v2-eGFP, 1 x 108 PFU를 3회 투여량으로 처리하였다. 종양을 측정하고, 부피를 기록하고, 치료 전, 그리고 연구 과정 (21 일 기간) 동안 기본 건강 상태를 평가했다. 연구 결과는 도 49 (평균 종양 부피 및 생존 곡선) 및 도 50 (개별 종양 부피)에 제시되어 있다. 이필리무맙 단독의 경우 종양 성장 지연 및 1 치료 (10 %); SKV 단독의 경우 효능 및 2 치료 (20 %)를 나타내었고; 3 개의 형질전환유전자를 발현하는 SKV는 종양 조절을 현저하게 개선하고, 생존을 증가시켰고, 3 치료 (30 %); PD-1 항체의 추가는 치료율을 두 배로 높였고 (30-60 %); 그리고 PD-1 항체 단독으로는 효과가 없었다 (데이터는 제시되지 않음).
연구에서 첫 번째 인도적 평가 변수 시점에 PBS-처리 그룹과 비교하여, 이필리무맙 (P< 0.05), SKV (P< 0.05), SKV-12m3v2-eGFP (P< 0.05), 그리고 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체 (P<0.05) 처리에 대해 종양 제어를 관찰하였다. 상이한 바이러스 간에, 또는 항-PD-1 항체의 추가로 인한 종양 제어 간에 통계적으로 유의적인 차이가 없었다. 모든 통계 테스트는 GraphPad Prism 8.2를 사용한 다중 t- 테스트를 사용하여 수행되었다.
PBS-처리 군과 비교하여(정중 생존 19일), SKV (P< 0.005, 정중 생존 20=5 일, 이필리무맙 (P< 0.001, 정중 생존 30 일), SKV-12m3v2-eGFP (P< 0.001, 정중 생존 33 일), 그리고 SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체 (P< 0.001)의 치료에서 생존 시간의 증가가 관찰되었다. 다음 처리 군에서 완전한 종양 퇴행이 관찰되었다: 이필리무맙 (n=1), SKV (n=2), SKV-12m3v2-eGFP (n=3) 그리고 SKV-12m3v2-eGFP (n=6). SKV 단독 치료와 비교하였을 때, SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체를 이용한 치료에서 생존 증가의 이점이 나타났고 (P<0.05); 그러나, SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체와 SKV-12m3v2-eGFP 단독을 비교하였을 때, 생존에서 통계학적으로 유의적인 차이는 없었다. 모든 통계 테스트는 GraphPad Prism 8.2를 사용한 로그-순위 (Mantel-Cox) 테스트를 사용하여 수행되었다.
SKV-12m3v2-eGFP + 항-PD-1 항체 그룹에서 초기 종양이 완전히 퇴행한 6 마리의 마우스의 반대쪽 옆구리에 5 × 105 개의 MC38 세포로 재-공격했을 때, 2 마리의 마우스에서 종양 성장이 나타났고, 4 마리의 마우스는 종양에 대항하는 저항성을 유지했다.
6.27. 실시예 27 - MC-38 마우스 모델의 종양 용적에서 막 결합된 IL-12p35-TM 하위단위 대비(versus) IL12p70-TM 하위단위를 발현시키는 SKV 효능 비교
이 연구의 목적은 MC38 종양 모델에서 SKV-mIL12p35와 SKV-mIL12p70 및 SKV의 효능을 비교하여, 2 개의 IL12 하위단위의 면역 자극 잠재력과 관련된 종양 제어 및 생존에 있어서 차이가 있는 지를 평가하는 것이다. MC38 결장직장 암 세포 (5 x 105)를 Matrigel의 1:1 혼합물 100μl에 재현탁하고, 무혈청 DMEM 배지를 C57BL/6 마우스의 오른쪽 옆구리에 SC로 주입했다. 종양은 대략 3x3mm가 될 때까지 7 일 동안 성장하도록 두었다. 그 다음, 동물들을 4개 치료군으로 무작위화시키고, PBS, SKV, SKV-mIL12p35 또는 SKV-mIL12p70으로 처치하였다. 마우스당 1 x 107 PFU를 전달하기 위해 100μl에 바이러스를 PBS로 희석시키고, 그 다음 총 부피를 종양 중앙으로 주입하여 단일 바늘 트랙을 생성시켰다. 이들 결과는 도 51에 나타낸다. 대조군 PBS 처리된 마우스와 비교하여, SKV, SKV-mIL12p35 및 SKV-mIL12p70 처리된 마우스 모두 종양 부피 감소를 나타냈다. SKV-mIL12p35 및 SKV-mIL12p70 처리는 모두 SKV 단독 처리보다 더 효과적이었다. SKV-mIL12p35 및 SKV-mIL12p70 처리된 마우스는 종양 부피에서 유사한 감소를 나타냈다.
6.28. 실시예 28 - 이형성 프라임-부스트 종양용해성 백신 요법에서 SKV
예비 결과에서 SKV는 이형성 백신에서 면역 반응을 촉발시키거나 또는 부스트시키는데 사용될 수 있음을 보여주었다. 오브알부민 (OVA)을 이형성 프라임-부스트 조합에서 외부 항원으로 이용하였다. 동물을 1 일에 프라이밍하고, 8-10 일에 평가한 다음, 14 일에 부스팅하고, 부스트-후 21-24 일에 시점에서 다시 평가했다. 건강한 C57 블랙 마우스는 프라임 또는 부스트로써 PBS (대조군), OVA를 발현하는 아데노바이러스, OVA를 발현하는 야생형 Copenhagen 균주 OVA 또는 CopMD5p3p (SKV 백본)를 발현시키는 우두 바이러스로 처리되었다. 사량체 분석은 21 일차에 OVA 특이적 반응을 평가하여 수행되었다. 마우스를 10 일에 평가한 결과, CopMD5p3p 또는 SKV 백본 (Copenhagen 바이러스는 아님)은 1 일차에 프라임을 투여하고, 그 다음 14 일차에 면역 부스트된 C57BL/6 마우스에서 프라임 및 부스터 설정 모두에서 면역 반응이 유도되었음을 보여주었다(도 52에 나타냄). CopMD5p3p (SKV 백본)은 촉발시킬 수 있고(prime), 그리고 프라임 반응은 Maraba MG1 종양용해성 라도바이러스에 의해 부스트될 수 있다. CopMD5p3p (SKV 백본)는 아데노바이러스 프라임 반응을 촉발시킬 수 있다. CopMD5p3p (SKV 백본)는 외부 항원에 대한 면역 반응을 촉발시키고,부스팅하는 면에서 부모계 Copenhagen 바이러스를 능가했다.
6.29. 실시예 29 - IT 투여 대비(vs) IV 투여의 경우 SKV-123 형질전환유전자의 생체분포
SKV-123으로 처리한 결과로 발현된 형질전환유전자 (항-CTLA-4 항체, FLT3L 및 IL-12-TM)의 생체 분포에 대한 다양한 투여 경로 (IV 대비 IT)의 효과를 연구했다. 암컷 BALB/c 마우스에게 CT26-LacZ 종양 세포들 (3 x 105 세포)을 생착시키고, 후속적으로 2주 후 SKV-123를 제공한다 (용량 1 x 108 PFU): 연구 1일차, 3일차 및 5일차 IV 주사, 또는 연구 1일차 및 3일차 IT 주사. 혈액 및 조직은 종양-보유 그룹에서 2일, 4일, 6일, 8일 및 22 일차에 수거하였다. 종양 비-보유 그룹에서 28 일차 및 43 일차에 비장을 수거하였다. 혈액 샘플 (심장 천자를 통하여 수거)에서 혈청을 분리하고, 조직을 FLT3L 및 항-CTLA-4 항체 발현에 대한 ELISA를 수행하기 위해 균질화했다. ELISA는 PCR에 의해 바이러스 게놈에 대해 양성으로 테스트된 샘플에서만 수행되었다. IL-12-TM 생체 분포의 경우, 조직을 2일, 4일, 8일, 22일, 28일 및 43 일차에 수거했다. IL-12-TM 형질전환유전자 발현의 웨스턴 블랏 분석을 위해 조직을 균질화했다. 웨스턴 블랏팅은 PCR에 의해 바이러스 게놈에 대해 양성으로 테스트된 샘플에서만 수행되었다. 항-투블린은 로딩 대조군으로 이용되었다. 투블린은 비장 및 꼬리 샘플에서 검출될 수 없었지만, 그러나 단백질의 존재는 이동 후 블랏의 Ponceau 착색으로 확인되었다. 1 일 및 3 일에 IV 주사에 의해 투여된 SKV-123은 혈청에서 항 -CTLA-4 항체 및 FLT3L의 검출 가능한 수준 (도 53A, 53B) 그리고 2 일차에 마우스 종양에서 더 낮은 농도로 검출되었다 (도 53C, 53D). FLT3L은 비장 및 꼬리에서 2 일차에, IV 처리 후 4 일차에 또한 검출될 수도 있다 (도 53C, 53D). 항-CTLA-4 항체는 IV 또는 IT 처리와 무관하게 4일차 혈청에서 여전히 검출가능하였다 (도 53A). SKV-123의 IT 처리는 4 일차에 종양에서 FLT3L 농도를 초래한 반면 (도 53F), 항-CTLA-4 항체 농도는 낮지만 검출 가능했 (도 53E). 종양-선택적 형질전환유전자 발현은 뮤린 종양 모델에서 입증되었는데, 이때 치료요법적 페이로드 농도는 해당 종양에서 취득했고 (예를 들면, >7.5ng/ml FLT3L), 전신 순환계에서는 임의의 탐지가능한 형질전환유전자 산물은 없었다.
IL-12-TM에 대한 웨스턴 블랏팅은 간에서 오로지 비-특이적 밴드 만을 보였으며 (도 54A), IL-12-TM은 동물의 종양, 비장, 폐 또는 꼬리에서 검출되지 않았다 (도 54A-54D). 면역컴피턴트 종양-보유 마우스에서 SKV-123의 생체분포는 IT 처리된 동물의 경우 해당 종양에 국한되며, 그리고 IV-처리 후 처음 며칠 동안 매우 낮은 수준으로 종양 및 제한된 수의 다른 조직으로 국한되었다.
바이러스 게놈은 평가된 어느 시점에서도 뇌, 심장, 신장, 난소, 사타구니 림프절, 골수 또는 혈청에서 검출되지 않았다. 바이러스 게놈은 9 일차 시점에 한 가지 샘플을 제외하고는, 오로지 4 일차 시점에 종양 샘플에서만 검출되었다. 게놈은 주로 2 일차 및 4 일차 시점에 일부 꼬리, 폐, 비장 및 간 샘플에서 검출되었다. 23 일차 수거 그룹의 어떤 샘플에서도 게놈이 검출되지 않았다.
SKV-123 바이러스에 대한 바이러스 역가는 IV 주사에 의한 치료-후 2 일차 꼬리에서 가장 높았으며, 비장, 폐 및 간에서 검출가능한 낮은 수준을 보였다. 4 일차, 역가는 오로지 IV 주사 그룹의 꼬리에서만 검출되었다. 이들 두가지 투여 경로에 있어서, 종양에서 바이러스 역가가 검출되었으며, IV 주입에 비교하여, IT 주입-후 역가는 더 높게 나타났다. 바이러스는 폐에서 두 가지 투여 경로에 대해 유사한 수준으로 또한 검출되었다.
이 연구에서 조사된 환경으로의 배출 샘플 (혈청, 소변, 타액)에는 검출가능한 바이러스 게놈이나 또는 복제되는 바이러스는 함유되어 있지 않았다.
6.30. 실시예 30 - 인간화된 마우스 모델에서 종양 용적에서의 SKV-123v2 효능
인간화된 마우스 모델에서 종양 성장에 있어서 SKV-123v2 효능을 연구하였다. NOD scid 감마 (NSG) 마우스는 인간과 유사한 면역 체계를 발달시키기 때문에 인간 PBMCs로 치료할 수 있는 면역결핍 실험실 마우스 브랜드다. 암컷 NSG 마우스에 인간 PBMCs를 이식한 다음, 2 주 후에 1 x 107 UM-UC-3 이종이식편 인간 방광 종양 세포를 피하에 생착시켰다. 종양 부피 (mm3)는 타원체 구 (l x w 2)/2 = mm3 식을 사용하여 계산되었으며, 여기서 l 및 w는 각 측정에서 수집 된 더 큰 치수와 더 작은 치수를 나타낸다. 종양이 최소 100mm3 일 때, 마우스에게 1x108 PFU의 SKV-123v2 또는 염수 대조군을 3 주 동안 격일로 IV 주사로 처리했다. 마우스 기본 건강 상태를 평가하고, 연구 과정 동안 종양 부피를 측정했다. 종양은 이식 4 일째부터 시작하여, 치료 첫날부터 일주일에 두 번 측정되었다. 21 일째에 SKV-123v2 처리된 동물은 164 mm3의 평균 종양 부피를 가졌으며, 이는 비히클 처리된 대조군과 비교하여, -8.4 %의 차이에 상응하는 것이며, 32 일차에 관찰된 효과가 관찰되었으며, 이는 대조군과 비교하여 -53.2 %의 차이에 상응한다 (도 55).
6.31. 실시예 31 - 종양 세포와 정상 세포에서 SKV-123v2의 시험관내 감염성 비교
인간 정상 세포(PBMC, PrEC) 그리고 암 세포(786-O, HeLa) 의 SKV-123v2 바이러스 감염 후, 바이러스 복제, 세포독성, 형질전환유전자 발현 및 사이토킨 생성에 대해 시험관내에서 특징화되었다. 인간 냉동 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)는 Lonza (Cat#: CC-2702)에서 구입하였다. 인간 전립선 상피 세포 (PrEC)는 Lonza (Cat. #: CC-2555)에서 구입하였다. 786-O 인간 신장 선암종 세포는 ATCC (Cat. #:CRL-1932)에서 구입하였다. HeLa 인간 자궁경부암 세포는 ATCC (Cat. #: CCL-2)에서 구입하였다.
24-웰플레이트 상에 세포를 씨딩하였다. 다음 4가지 시점에서 세포 생존력 및 사이토킨 발현이 평가되었다: 감염-후 6 hr, 24 hr, 48 hr 및 72 hrs. 생존 세포 수/mL 및 각 세포 현탁액의 생존율 퍼센트를 결정하기 위해, 세포 현탁액을 각각 0.6mL의 ViCell 컵에 넣고, 샘플을 기기에 기록했다. 희석액이 준비되었다. 단일 층의 합류가 > 80%일 때 (세포 씨딩 후 24hrs), 세포를 감염시켰다. 감염 당일, 바이러스는 아래 표 47에 요약된 바와 같이, 적절한 투여량으로 희석되었다. 감염은 24-웰 플레이트 상에서 실행되었다.
Figure pct00310
사이토킨 프로파일링은 표시된 시점에서 수행되었다. 감염된 세포 상청액을 분취하여, -20 ℃에 보관하고, IL-18 (HD42)과 함께 Human Cytokine Array/Chemokine Array 42-Plex를 사용하여 분석을 위해 Eve Technologies로 보냈다. FLT3L 및 이필리무맙 발현은 ELISA 검정을 이용하여 평가되었다. 알라마르 블루(Alamar Blue)를 사용하여 각 수확 시점에서 세포 생존율을 수행하고, Fluoroskan에서 판독하여 처리되지 않은 대조군 웰과 비교하여, 처리된 웰의 생존력 %를 결정했다. 상이한 세포주 간의 복제 역동학을 평가하기 위해 바이러스 역가를 결정하였다.
정상 세포는 감염시 세포 생존력을 최대화하기 위해, 혈청 성장 인자의 존재 하에서, 그리고 접촉 저해 없는 상태에서 배양되었다. 테스트 조건 및 SKV-123v2 감염 실험에 사용된 등가 세포 밀도에서 PrEC (전립선 상피 세포)는 거의 HeLa 암 세포만큼 높은 증식률을 보여주었다. 이러한 조건 하에서 배양될 때 테스트된 정상 세포주의 표현형을 더 잘 특정하기 위해, 동반 연구에서 PrEC 세포 및 PBMCs에 대해 BrdU 통합을 측정하는 증식 분석을 수행했다. 암 세포주 및 PBMCs와 비교하여, PrEC에서 SKV-123v2의 중간 복제는 시험관내 감염 조건에서 관찰된 정상 세포주의 상대적 증식 속도와 상관 관계가 있다.
상기 결과는 786-O 세포주 및 HeLa 암 세포주가 용량 의존적, 그리고 시간 의존적 방식으로 세포 생존력의 감소에 의해 입증된 바와 같이, SKV-123v2 바이러스 감염에 민감하다는 것을 보여준다 (도 56). 786-O 세포 생존력은 테스트된 모든 MOI에서 시간 경과에 따라 감소한 반면, HeLa 세포 생존력은 MOI 1 및 0.1에서 SKV-123v2 바이러스 감염시 감소했다. 정상 인간 PBMCs는 MOIs 1, 0.1, 그리고 0.01으로 SKV-123v2 바이러스 감염 후 높은 세포 생존력에 의해 증명된 바와 같이, 감염에 저항성이 있었다 (도 56). 정상 인간 PrECs는 암 세포주와 비교할 때, SKV-123v2 바이러스 감염에 덜 민감했다. 감염-후 최대 48 시간까지, 임의의 MOI (1, 0.1 및 0.01)에서 세포 생존력의 감소는 관찰되지 않았다. 감염-후 72 hr 시점에서, MOI 1 및 0.1의 SKV-123v2 바이러스 감염 시 세포 생존력이 감소되었다 (도 56).
SKV-123v2 바이러스는 인간의 정상 PrECs와 비교할 때, 더 높은 비율로 암 세포주에서 감염되고 복제되었다 (도 57). 그들은 786-O 세포주 및 HeLa 암 세포주에 감염되었고, 인간의 정상 PrECs와 비교할 때, 10 배 이상의 수준으로 복제되었다. SKV-123v2 바이러스는 MOIs 1, 0.1, 그리고 0.01에서 인간의 정상 PBMCs에서 복제되지 않았다 (도 59).
항-CTLA-4 항체 및 FLT3L (SKV-123v2 바이러스-감염된 세포에 의해 만들어진 두 가지 형질전환유전자 산물) 생성을 각 MOI 및 시점에서 세포 상청액에서 모니터링하였다. SKV-123v2 바이러스 감염으로 정상 세포 (PrEC 세포 또는 PBMCs)와 비교하였을 때, 암 세포에서 항-CTLA-4 항체 및 FLT3L이 더 많이 생성되었다(도 58 및 도 59). PBMC 세포 상청액에서는 항-CTLA-4 항체 또는 FLT3L이 검출되지 않을 수 있다. FLT3L 및 항-CTLA-4 항체 형질전환유전자 산물 농도는 SKV-123v2 감염에 대한 세포 민감성과 관련되어 있었다.
상기 사이토킨 프로파일링 실험에서 SKV-123v2 바이러스-감염된 암 세포에서 정상 세포보다 더 높은 수준의 세포 독성이 관찰되었다.
세포주 PrEC는 특히 바이러스 감염에 반응하여, EGF, G-CSF, IL-1a, IL-1RA, IL-4, 그리고 IL-18을 생성시키고, 이들 사이토킨의 농도가 낮거나 또는 무시할 수준인 경우에만 HeLa, 786-0, 그리고 PBMCs에서 검출가능하다. PrEC 및 786-0는 감염에 반응하여 IL-8, TGF-α, 그리고 TNFα를 생산하는 유일한 세포주들이며, 한편 유일하게 PrEC 및 PBMC만 IP-10을 생산하였다. PrEC는 EGF의 용량-의존적 생산을 보였으며, 더 높은 MOI에서 바이러스 감염으로 생산은 증가했다. EGF 농도는 24 시간에서 72 시간 사이에 동일한 투여 그룹 내에서 일관되게 유지되었으며, 바이러스의 MOI 1에 감염된 세포의 경우, 72 시간 시점에서 약간 증가했다. PrEC 세포의 경우, IL-1a 생성은 감염-후 48시간 동안 기선으로 대부분 일관되게 유지되었으며, 그 다음 72 시간 시점에서 증가되었고, MOI 1에서 최대 농도가 관찰되었다. 마찬가지로, PrEC에 의한 IL-1RA 및 IL-18 생산은 감염-후 72 시간에 농도가 극적으로 증가한 것으로 나타났으며 (더 높은 MOI 0.1 및 1 감염에서 24 시간 시점에서 약간의 IL-1RA 증가) 또는 이 시점 이전에는 무시할 수 있었다. IL-1RA의 생산은 72 시간 시점에서 용량-의존적인 것처럼 보였지만, MOI 1에서 바이러스의 경우 MOI 0.1과 비교하여 IL-18 생산은 감소되었다. PrEC는 처리되지 않은 대조군과 비교하여, 모든 투여 그룹에서 감염-후 6 시간 시점에 IL-4 생산이 감소되었다. 그러나, IL-4 생산은 24 시간 시점에서 기선 이상으로 증가했으며, 감염-후 72 시간 시점까지 높게 유지되었다.
대안으로, PrEC를 제외한 모든 세포주들이 MCP-1을 만들었다. HeLa 세포와 786-0 세포에서, 기선에서 고 농도의 MCP-1이 생산되었으며, 바이러스 감염에 의한 영향은 없었다. PBMCs에서, MCP-1은 높은 투여량의 바이러스에 의해 기선 이상으로 유도되었다: 24 시간 시점에서 MOI 1의 바이러스, 감염-후 72시간 시점에서 MOI 0.1 및 1의 바이러스.
몇 가지 사이토킨은 감염-후 24 시간 및 72 시간 시점에서 기선 이상으로 증가되었지만, 그러나 48 시간 시점에서는 증가되지 않았다(또는 단지 미미하게). HeLa 세포에서, 이들 사이토킨은 FGF-2 (MOI 1에서, 한편 더 낮은 투여량에서는 72 시간 시점에서만 생산을 유도할 수 있었다) 그리고 IL-6 (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1 농도는 시간 경과에 걸쳐 일정하였다)이었다. PrEC 세포에서, 이들 사이토킨은 G-CSF (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1 농도는 시간 경과에 걸쳐 일정하였다), TGF-α (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1 농도는 시간 경과에 걸쳐 일정하였다), TNFα (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1은 시간 경과에 따라 증가되었다), 그리고 IP-10 (오직 MOI 0.1 및 0.1에서; MOI 1은 낮은 농도를 만들었다)이었다. 786-0 세포에서, 이들 사이토킨은 FGF-2 (오직 MOI 0.1 및 1에서; 최저 용량 MOI 0.01은 72시간 시점에서만 생산을 유도하였다), IL-8 (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 1 농도는 시간 경과에 걸쳐 일정하였다) 그리고 TGF-α (오직 MOI 0.01 및 0.1에서), TNFα (오직 MOI 0.01 및 0.1에서; MOI 농도는 시간 경과에 기선 수준이었다)이었다. PBMCs에서, 상기 사이토킨은 IP-10이었다 (오직 MOI 1에서만).
HeLa 세포 및 786-0 세포에서 IFNα2 생산은 감염-후 24 시간 시점에서 정점을 찍은 후, 시간-경과에 따라 감소한 반면, PrEC 세포에서는 IFNα2 생산은 72 시간 시점에서 가장 높았다. 이들 세 가지 세포주 모두에서 MOI 0.1 또는 1에서 더 높은 투여량은 투여군 중에서 가장 낮은 사이토킨 생산을 나타냈다.
IFNγ 생산은 모든 세포주에서 낮았으며, 786-0 세포에서 24 시간 시점에서 정점 생산을 보인 후, 그 다음 시간 경과에 따라 감소했다.
6.32. 실시예 32 - 재조합 백시니아 바이러스의 생성
이 실시예에서 설명된 방법 및 기술을 사용하여 표 45에 설명된 벡터를 만들었다. 표 45에 요약된 바와 같이, 각각의 벡터는 복제-컴피턴트이고, 해당 벡터에 함유된 형질전환유전자(들)를 발현시키고, 표시된 바와 같이 암 세포주들에서 세포 독성을 나타내는 것으로 입증되었다. 하기 설명된 검증을 사용하여 표 45에 요약된 데이터를 만들었다.
재조합
거의 합류된 (80-90 %) U2OS 세포의 단층들은 변형될 우두 바이러스 (예를 들면, SKV 바이러스)로 2 시간 동안 먼저 감염된다. 감염 후, 표적화 DNA (도 60)는 감염된 세포로 형질감염된다. 다음 날 (형질감염-후 12-18 hrs), 형질감염 배지를 제거하고, 새로운 배지를 세포에 추가한다. 둘 째날 (형질감염-후 ~48 hrs) 세포를 냉동시키고, 해동시켜, 플라크 정제한다.
플라크 정제 및 증폭
재조합 백시니아 바이러스를 식별해내기 위해, 형광 마커를 이용하여 플라크들을 스크리닝한다. 이전 단계의 감염/형질 감염 혼합물의 연속 희석액 (1:10)을 U2OS 세포의 합류 단층에 2 hr 동안 첨가한 후, 배지를 오버레이 배지로 교체하여 플라크가 형성되도록 한다. 이틀 후, 형광 플라크를 골라서 연속 희석하고, U2OS 세포의 새로운 단층에 추가한 다음 오버레이 배지를 추가한다. 이러한 플라크 정제 과정은 모든 플라크가 형광이 될 때까지 반복된다. 형광 마커를 제거하기 위해 적절한 재조합 효소를 위의 단계 (즉, 재조합)에서 설명한 바와 같이, 형광 바이러스로 형질감염시킨다. 비-형광 플라크를 선별하기 위해, 플라크 정제 과정을 지속한다.
그 다음, 순수한 재조합 바이러스의 플라크는 확장을 위해 다른 세포주 (예를 들면, HeLa 세포)의 단층 감염에 사용되며, 이 단계에서는 오버레이가 추가되지 않는다. 감염된 세포에 가시적인 세포 변성 효과가 일단 보이면, 세포 용해물을 수거하고, 바이러스 역가적정(tittering)에 의해 재조합 바이러스 농도가 결정된다.
형질전환유전자 발현
재조합 바이러스를 다양한 농도(예를 들면, MOI 0.01, 0.1 또는 1)에서, 다양한 시간 (예를 들면, 감염-후 6 hrs, 24 hrs, 48 hrs 및 72 hrs) 동안 다양한 암 세포 (예를 들면, HeLa, U2OS, 786-O, 등등)를 감염시키는데 이용한다. 형질전환유전자 생성과 관련된 검증을 위해 세포 용해물 (웨스턴 블랏용) 그리고 세포 상청액 (ELISA용)을 냉동시키고, -80 oC에 보관한다. 가용성 단백질 (예를 들면, FLT3L, 항-CTLA-4 항체)을 인코딩하는 형질전환유전자의 경우 ELISA 키트를 이용하여 형질전환유전자 생성을 정량화시킨다. 세포 제한된 (예를 들면, 세포 내부 또는 막 결합된) 단백질 산물 (예를 들면, 막 결합된 IL-12)을 인코딩하는 형질전환유전자의 경우, 세포 용해물의 웨스턴 블랏을 이용하여 형질전환유전자 생성을 정량화시킨다.
암 세포 계통 세포독성
암 세포주 세포독성은 감염된 세포에 대한 광학 현미경으로 보이는 가시적 세포 병리 효과에 의해 결정된다. 세포 용해물을 수거하고, 바이러스 역가적정(tittering)에 의해 재조합 바이러스 농도가 결정될 수 있다.
일부 구체예들
본 명세서에 언급된 모든 간행물 및 특허 출원은 각각의 독립적 공개, 또는 특허 출원이 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되도록 지시된 것과 동일한 정도로 본 명세서에 참조 문헌으로 인용된다.
본 발명은 본 명세서의 특정 구체예들과 연계되어 설명되지만, 추가 변형이 가능하며, 본 출원은 일반적으로 본 발명의 원리에 따라 발명의 임의의 변형, 사용 또는 채택을 포괄하도록 의도되며, 본 발명으로부터 이러한 벗어남은 본 발명이 속하는 분야내 공지의 또는 관습적 실행 범위 안에 있고, 그리고 본 발명에서 앞서 제공된, 그리고 다음의 청구범위 안에 있는 필수 특징에 적용될 수 있기 때문에 이러한 것들을 포함하는 것으로 의도된다.
일부 구체예들은 청구 범위 내에 있다.
SEQUENCE LISTING <110> OTTAWA HOSPITAL RESEARCH INSTITUTE TURNSTONE BIOLOGICS CORP <120> MODIFIED ORTHOPOXVIRUS VECTORS <130> 14596-051-228 <140> <141> <150> 62/930,524 <151> 2019-11-04 <150> 62/872,699 <151> 2019-07-10 <150> 62/784,372 <151> 2018-12-21 <160> 632 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 272 <212> PRT <213> Vaccinia virus <400> 1 Met Arg Tyr Ile Ile Ile Leu Ala Val Leu Phe Ile Asn Ser Ile His 1 5 10 15 Ala Lys Ile Thr Ser Tyr Lys Phe Glu Ser Val Asn Phe Asp Ser Lys 20 25 30 Ile Glu Trp Thr Gly Asp Gly Leu Tyr Asn Ile Ser Leu Lys Asn Tyr 35 40 45 Gly Ile Lys Thr Trp Gln Thr Met Tyr Thr Asn Val Pro Glu Gly Thr 50 55 60 Tyr Asp Ile Ser Ala Phe Pro Lys Asn Asp Phe Val Ser Phe Trp Val 65 70 75 80 Lys Phe Glu Gln Gly Asp Tyr Lys Val Glu Glu Tyr Cys Thr Gly Leu 85 90 95 Cys Val Glu Val Lys Ile Gly Pro Pro Thr Val Thr Leu Thr Glu Tyr 100 105 110 Asp Asp His Ile Asn Leu Tyr Ile Glu His Pro Tyr Ala Thr Arg Gly 115 120 125 Ser Lys Lys Ile Pro Ile Tyr Lys Arg Gly Asp Met Cys Asp 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Vaccinia virus <400> 91 Met Pro Ile Phe Val Asn Thr Val Tyr Cys Lys Asn Ile Leu Ala Leu 1 5 10 15 Ser Met Thr Lys Lys Phe Lys Thr Ile Ile Asp Ala Ile Gly Gly Asn 20 25 30 Ile Ile Val Asn Ser Thr Ile Leu Lys Lys Leu Ser Pro Tyr Phe Arg 35 40 45 Thr His Leu Arg Gln Lys Tyr Thr Lys Asn Lys Asp Pro Val Thr Arg 50 55 60 Val Cys Leu Asp Leu Asp Ile His Ser Leu Thr Ser Ile Val Ile Tyr 65 70 75 80 Ser Tyr Thr Gly Lys Val Tyr Ile Asp Ser His Asn Val Val Asn Leu 85 90 95 Leu Arg Ala Ser Ile Leu Thr Ser Val Glu Phe Ile Ile Tyr Thr Cys 100 105 110 Ile Asn Phe Ile Leu Arg Asp Phe Arg Lys Glu Tyr Cys Val Glu Cys 115 120 125 Tyr Met Met Gly Ile Glu Tyr Gly Leu Ser Asn Leu Leu Cys His Thr 130 135 140 Lys Asn Phe Ile Ala Lys His Phe Leu Glu Leu Glu Asp Asp Ile Ile 145 150 155 160 Asp Asn Phe Asp Tyr Leu Ser Met Lys Leu Ile Leu Glu Ser Asp Glu 165 170 175 Leu Asn Val Pro Asp Glu Asp Tyr Val Val Asp Phe Val Ile Lys Trp 180 185 190 Tyr Ile Lys Arg Arg Asn Lys Leu Gly Asn Leu Leu Leu Leu Ile Lys 195 200 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site <220> <221> misc_feature <222> (153470)..(153619) <223> remaining portion of the B8R gene <220> <221> misc_feature <222> (153514)..(153528) <223> potential transcription regulatory sequences of the B9R gene <220> <221> misc_feature <222> (153638)..(153667) <223> potential transcription regulatory sequences of the B9R gene <220> <221> misc_feature <222> (156094)..(156489) <223> remaining portion of the B14R gene <220> <221> misc_feature <222> (156490)..(156904) <223> remaining portion of the B29R (ITR) gene <400> 210 tcagacacac gctttgagtt ttgttgaatc gatgagtgaa gtatcatcgg ttgcaccttc 60 agatgccgat ccgtcgacat acttgaatcc atccttgacc tcaagttcag atgattcctt 120 gcacatgtct ccgatacgaa cgctaaactc tagattcttg acacattttg tatcgacgat 180 cgttgaaccg atgatatctt cgtaactcac tttcttatga gagatgttag acccgagtac 240 tggatgggtc ttgatgtcgc tgtctttctc ttcttcgcta catctgatgt cgatagacac 300 ctcacagtct ttgatcatag ccagagcttc ttcacgagtg atcgcgggag agtccttacc 360 ttgtcctggg gacacgctgg acaatctagc attcactgtg tttccatcag 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ggattcatcc tgttgtctaa atctctttag aatgttatcg atgatgtagt ggttatattc 4680 tctggaatcg tacgaagtaa tactacgcat tacgtcgaca agagtatgac gtctctcaat 4740 aagaagatta acgatttcca tgtctacatt atatggggtt actctaaatc gcttgtttag 4800 ataatacgcc tctaatatag ggctgacgtc gtatactcta cacgtgtcca catcctttat 4860 taataataat ttaacaatct ctatatctat ggttgagaaa gaccagtagt attggatggg 4920 taaagatcct ccttcgtctc tgccatggat ggaaacattg ttattgatca aacatttaat 4980 tacatccttg gatagagatt gagattctct atgagacgat atatagtaat gaagagagtt 5040 cttacacata tcactgttgt acatacaggt acgaaatacg taaccggtgc tgtaacattc 5100 tgatttaaga agccatagca atacttctgg tctcggatta ggcgtcgtta cgtatatatc 5160 caccaatccg agaccattga ttgcataatt cgtattcttg gacggacgta tccgtttatc 5220 cacaattagg tattttagca gacgtaagtc gatattatcc gaagacagat cgaaatcatt 5280 tatattcgac ttgagttcgt tagaggaatt cgaatagctg gatatcagta gatgcacaat 5340 ctgagatttt acgtatctat gcttactgta tgctcctagc ggagttaatc cttcgttgtt 5400 tctacaaagt ctctcgactc cgcgagagag taacagtcga acaatcttaa tgtctgtatc 5460 gcatttattg gagacgtaac aatgtagcgc attgtttcct cgtctatcta tatgttttga 5520 taagttgtga cacgtttcaa tctctagttt tatttttttg tacgtcacat cttcatccag 5580 tagacgacat agaatagtgc actctctacc acaataatcc atagctattc tggtgctaat 5640 tattcctatt tcacgaaaaa tgatgaaggc aatcattcct cataagatga taaaaagtgt 5700 agtgagagag catgaaggag atttagtatt tagcagtgcg gatatgatcc aagagggtga 5760 gatagtcgtt ctcgttcaga atctttcgca gcataagtag tatgtcgata tacttatcgt 5820 tgaagactct tccagagacg atagctgatt gagtacaaag tccaatgatt gcacgaagtt 5880 cttcggcggt tttcatggag tcatttctga tgaaacattt aatgatctcc acgcaattgt 5940 cgatattgtc ccacggaagt gaatccttca actcaccacc aaagagctcc gttgcatcag 6000 ttctgaaaga gatgagaagc ctgtagagag accctgcgct ttctctatgg gtccatctat 6060 gagaaaccca caggatgtat tcagtcagac aatgtctgac gtcggccacg gtattcaggg 6120 agtccttagt agcgtggcaa tgacagggtc tgaactgggc acaaggaaag gccattgtaa 6180 aggtagacct gtagccgttt atgctaatag agggctttaa tttccatttt tttaatgggt 6240 tgtggatgag gaatgagagt gatatcatat tgagatacgt agttatgtag aggtgtattt 6300 cctatattat ttactttcgg tttcatattt taccaactct ttaataaatt tcttttcacg 6360 atgcatctta ttgaatgacg ttttctcata agtggacata tagatgcaga agtaatgaag 6420 aaaagtatta cctctatcat ctacataatt agggtctgct ccttttttta acaacttata 6480 cagtacgtag tagtagttta tcggttttaa atcaagtcta gaatatatag tggattaata 6540 tatttttata ttagctaaag ctatctatac tatcagaaag catatcattc tcaacttcat 6600 catgagttaa atatttgtgt aatggatgtc atgaacatta aacgtattca tgacatactc 6660 ctttaatagg ttttttaaaa cagatgattc aaatccttca ttcattagat aacagtgtaa 6720 cggagtcgta ccttctacta gtttgtttat atcacagcat tctacaaaca gtctaaacaa 6780 tagagaagac ggacagactt taacgtataa atgacacatg ttatcgatat tcgttgatga 6840 attattatta aacgtagtta tgataaatga ttctaacgac atctctcgct agagataaaa 6900 tctagtatcg tatcattaaa catctttgca tcatactcgc atagcatagt ttttcataat 6960 taatacaata tttaaaagac ttattcggaa agtattttaa tacatgtatc atcgatggag 7020 atccatatga ggagtcactt gtagttcttc agtagtaata acagtgctat catcgatagt 7080 ataattatat gtagaaggtt catatgttgt tgtaattgga gtaactgttg gtagttcttc 7140 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catatcatca ttgtgtaaac taaataacgt cttctatgta tttagtaagg acattggata 154320 tgtggaaaag tatgatggtg catggaagtt agtacatgat cgtctccccg ctataaaggc 154380 attatcaact tctccttatt gattgaaaat gaaaatataa atagttttta tgtatagcag 154440 tattacccta tagttttatt gcttactact aacatggata cagatacaga tacagataca 154500 gatacagata cagatacaga tacagataca gatgttacaa atgtagaaga tatcataaat 154560 gaaatagata gagagaaaga agaaatacta aaaaatgtag aaattgaaaa taataaaaac 154620 attaacaaga atcatccaag tggatatatt agagaagcac tcgttattaa tacaagtagt 154680 aatagtgatt ccattgataa agaagttata gaatgtatca gtcacgatgt aggaatatag 154740 atcatatcta ctaattttta taatcaatac aaaacataaa aaacaactcg ttattacata 154800 gcaggcatgg aatccttcaa gtattgtttt gataacgatg gcaagaaatg gattatcgga 154860 aatactttat attctggtaa ttcaatactc tataaggtca gaaaaaattt cactagttcg 154920 ttctacaatt acgtaatgaa gatagatcac aaatcacaca agccattgtt gtctgaaata 154980 cgattctata tatctgtatt ggatcctttg actatcgaca actggacacg ggaacgtggt 155040 ataaagtatt tggctattcc agatctgtat ggaattggag 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gttagcgctc agaatatctc attcaaatcc ataaataaag 155940 tatatgggcg atattctgcc gtgtttaaag atttcttttt gggaaaaatt ggcgataagt 156000 ttcaaactgt tgacttcact gattgtcgca ctatagatgc aatcaacaag tgtgtagata 156060 tctttactga ggggaaaatc aatccactat tggatgaacc attgtctcct agcaattagt 156120 gccgtatact ttaaagcaaa atggttgacg ccattcgaaa aggaatttac cagtgattat 156180 cccttttacg tatcaccaac ggaaatggta gatgtaagta tgatgtctat gtacggcgag 156240 ctatttaatc acgcatctgt aaaggaatca ttcggcaact tttcaatcat agaactgcca 156300 tatgttggag atactagtat gatggtcatt cttccagaca agattgatgg attagaatcc 156360 atagaacaaa atctaacaga tacaaatttt aagaaatggt gtaactctct ggatgctatg 156420 tttatagatg ttcacattcc caagtttaag gtaacaggct cgtataatct ggtggatact 156480 ctagtaaaga tccgctgatg gaaacacagt gaatgctaga ttgtccagcg tgtccccagg 156540 acaaggtaag gactctcccg cgatcactcg tgaagaagct ctggctatga tcaaagactg 156600 tgaggtgtct atcgacatca gatgtagcga agaagagaaa gacagcgaca tcaagaccca 156660 tccagtactc gggtctaaca tctctcataa gaaagtgagt tacgaagata tcatcggttc 156720 aacgatcgtc gatacaaaat gtgtcaagaa tctagagttt agcgttcgta tcggagacat 156780 gtgcaaggaa tcatctgaac ttgaggtcaa ggatggattc aagtatgtcg acggatcggc 156840 atctgaaggt gcaaccgatg atacttcact catcgattca acaaaactca aagcgtgtgt 156900 ctga 156904 <210> 211 <211> 727 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> Signal peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(490) <223> heavy chain sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (469)..(491) <223> T2A sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (491)..(512) <223> Signal peptide sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (513)..(727) <223> light chain sequence <400> 211 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val 20 25 30 Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr 35 40 45 Phe Ser Ser Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly 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tcttgcgcag cgtctggttt tactttctcg tcctacacta tgcattgggt tcgtcaggct 180 ccgggaaagg gattggagtg ggtaacattt ataagttacg acggtaataa taaatactat 240 gcagacagtg tgaagggacg tttcactata tctcgagata atagtaagaa cactttgtat 300 ttgcagatga attcattgag agcggaagat acagcaattt actactgcgc cagaaccgga 360 tggttgggtc cctttgacta ttggggacag ggtactcttg ttacggtgtc ttctgcttca 420 acaaagggtc cctctgtctt cccgcttgcg ccctcatcaa aatcgacgtc gggtggaacc 480 gctgccttgg gatgcttggt taaggactat ttccccgaac ctgtcaccgt gtcttggaat 540 tccggtgctc taacgtctgg tgtgcacact ttccctgccg ttttacaaag ttccggacta 600 tattcacttt cgtccgtagt aactgttcca agttcgtccc ttggaacaca gacctatata 660 tgcaacgtaa accacaaacc ctccaatacc aaagtcgata aaagagttga gcctaaatcc 720 tgcgacaaaa cacacacctg cccaccttgc ccggcccctg aacttcttgg aggaccatct 780 gtattccttt tcccaccgaa gcctaaggac accttgatga tatccagaac tcccgaagtc 840 acgtgcgtag tagtcgatgt gagtcacgaa gatccggaag tcaagtttaa ctggtatgta 900 gacggagtag aggttcataa cgccaagacc aagccaagag aagaacaata taactcgact 960 tacagagtcg 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atggatctag tccgtggacg ttcggtcagg gtaccaaggt cgagataaaa 1860 agaactgtgg ccgcaccctc cgtgtttatc tttccccctt ccgacgaaca gctaaagtcg 1920 ggtactgcat cggtggtatg tttacttaac aacttttacc cacgagaggc caaggtacaa 1980 tggaaggtgg ataacgcctt acaatcagga aactcacaag agtccgtcac cgagcaagat 2040 tccaaggaca gtacatactc gttatcctcg acattaacat tgagtaaggc ggattatgag 2100 aagcataagg tttacgcatg cgaagtgacg caccaaggac tttcatcccc cgtcaccaag 2160 tctttcaatc gtggtgagtg ctga 2184 <210> 215 <211> 783 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <221> misc_feature <222> (703)..(765) <223> B7-1 transmembrane domain <220> <221> misc_feature <222> (703)..(780) <223> B7-1 cytoplasmic domain <400> 215 atgtgtcccg cgcgatcgtt attgttagtt gcgacgttgg tcctacttga ccatctatca 60 ctagcgcgta atttgcccgt tgccacacca gatcccggaa tgtttccttg cttacatcat 120 agtcagaact tacttcgtgc agtctccaac atgttacaga aagcccgaca gaccttagag 180 ttctatccct gtacttccga agagatagat cacgaggaca taacgaaaga 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gcatcgaatc ttcaagacga agagctttgt ggtggactat ggcgtcttgt acttgcccaa 240 agatggatgg agcgactaaa aaccgttgcc ggttcaaaga tgcagggttt actagagcgt 300 gtgaatacgg aaattcattt tgttacgaaa tgtgcgttcc aacccccacc cagttgcttg 360 cgtttcgtgc agactaatat ctctcgttta ctacaagaaa catccgagca actagtggcg 420 ctaaagccct ggataacacg tcaaaacttt agtcgttgct tggagttaca gtgccaaccc 480 ggtgccccac gacctcaaag tcctggtcca gcggcttgcg gagcccttac ctggcctcga 540 ccgcatccgg ccgaaccatg a 561 <210> 217 <211> 470 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 217 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala 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Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 515 Arg Ile Ala Glu Cys Ile Leu Gly Met 1 5 <210> 516 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 516 Ile Gly Arg Ile Ala Glu Cys Ile Leu Gly Met Asn Pro Ser Arg 1 5 10 15 <210> 517 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 517 Tyr Val Asp Phe Arg Glu Tyr Glu Tyr Tyr 1 5 10 <210> 518 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 518 Phe Leu Asp Arg Phe Leu Ser Cys Met 1 5 <210> 519 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 519 Ser Leu Ile Ala Ala Ala Ala Phe Cys Leu Ala 1 5 10 <210> 520 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 520 Val Val Met Ser Trp Ala Pro Pro Val 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Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 555 aaaattgaaa tttta 15 <210> 556 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 556 ttttattttt tttttttgga atataaata 29 <210> 557 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 557 aaaattgaaa ttttattttt tttttttgga atataaata 39 <210> 558 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 558 aaaattgaaa aaata 15 <210> 559 <211> 50 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 559 ttttattttt tttttttgga atataaatat ccggtaaaat tgaaaaaata 50 <210> 560 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (3)..(3) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (10)..(10) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (18)..(21) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 560 ttnttttttn tttttttnnn ntataaat 28 <210> 561 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 561 ttgtattttc ttttgttggc atataaat 28 <210> 562 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 562 tttattgtaa gctttttcca ttttaaat 28 <210> 563 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 563 tcattttgtt tttttctatg ctataaat 28 <210> 564 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 564 taaaaattta aaatatatta tcacttcagt 30 <210> 565 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 565 aaaaaactga tattatataa atattttagt 30 <210> 566 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (7)..(7) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (14)..(14) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (18)..(30) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 566 nnaaaantga aaanatannn nnnnnnnnnn 30 <210> 567 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 567 aaaaaaatga taaagtaggt tcagttttat 30 <210> 568 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 568 taaaaagtga aaaacaatat tatttttatc 30 <210> 569 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 569 aaaattaaaa aataacttaa tttattattg 30 <210> 570 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 570 Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu 1 5 10 15 Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 571 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 571 Pro Arg Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp 1 5 10 15 Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 572 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 572 Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro 1 5 10 15 Gly Pro <210> 573 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 573 Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 578 Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <210> 579 <211> 846 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 579 atggagacag atactctatt gctatgggtt ttgttattat gggtgccggg ttccacggga 60 attcgtcgtg ctgacattgt tttaacacag tctccaggta ccctatcatt gtcccctggt 120 gagcgtgcca cgcttagttg cagagcctct cagtctgtgg gatcaagtta tttagcttgg 180 tatcaacaaa aacctggaca agcacctcgt ttgttaatat atggtgcatt cagtagagca 240 actggaattc ctgatcgatt ctcaggatct ggatctggaa cagacttcac acttaccatc 300 tcacgtcttg aacccgagga ctttgcggtc tactactgcc agcagtatgg ttcgtcgcct 360 tggactttcg gacaaggaac caaagttgaa atcaagcgag gaggaggtgg atcgggtggt 420 ggaggatccg gtggaggtgg aagtgaagcg aagctagtcg aatctggagg tggtgtagtg 480 cagcctggac gttcgcttcg actatcctgt gctgcttcag gatttacctt ttcatcttac 540 acgatgcact gggtgcgtca agcgcctggt aaaggactag agtgggtcac 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ctgatatcgt tatgacccag accacgctat cattaccagt tagtctaggt 120 gaccaggcca gtatcagttg ccgttcatct cagtccattg tacactcaaa cggaaacacc 180 tacttggagt ggtatcttca gaaacctggt caatctccca agcttctaat ttacaaagtg 240 tctaaccgat tttctggtgt gccggatcga ttttcgggtt ctggtagtgg aacggatttc 300 acgctaaaaa tatcccgagt cgaagctgaa gacctaggag tatattattg ctttcaagga 360 tctcacgtcc cgtacacctt tggtggagga accaagcttg aaataaagcg aggaggtgga 420 ggatcaggag gaggtggttc gggtggtggt ggttccgagg cgaagttaca ggagtcggga 480 cccgtattag tgaagcctgg tgcgagtgtc aaaatgagtt gcaaagccag tggttacacc 540 ttcacagact attacatgaa ctgggtgaag cagtctcacg gaaaatcttt agagtggata 600 ggagtaatta acccgtacaa tggtgatacg agttacaacc agaagttcaa aggtaaggcg 660 accttgacgg tcgataaatc ctctagtact gcgtacatgg aactaaactc tttaacctct 720 gaggattctg ccgtatatta ttgtgccaga tattatggtt cgtggttcgc atattgggga 780 cagggaactt taattacggt ctcgacagcc aaaacgactc ccccctcagt ttatcccctt 840 gctcctagaa gttaa 855 <210> 582 <211> 284 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 582 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Ile Arg Arg Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Thr 20 25 30 Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg 35 40 45 Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp 50 55 60 Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val 65 70 75 80 Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 85 90 95 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu 100 105 110 Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly 115 120 125 Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ala Lys Leu Gln Glu Ser Gly 145 150 155 160 Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala 165 170 175 Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser 180 185 190 His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Val 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gtacacctgt cacaaaggag gcgaggttct aagccattcg 300 ctcctgctgc ttcacaaaaa ggaagatgga atttggtcca ctgatatttt aaaggaccag 360 aaagaaccca aaaataagac ctttctaaga tgcgaggcca agaattattc tggacgtttc 420 acctgctggt ggctgacgac aatcagtact gatttgacat tcagtgtcaa aagcagcaga 480 ggctcttctg acccccaagg ggtgacgtgc ggagctgcta cactctctgc agagagagtc 540 agaggggaca acaaggagta tgagtactca gtggagtgcc aggaggacag tgcctgccca 600 gctgctgagg agagtctgcc cattgaggtc atggtggatg ccgttcacaa gctcaagtat 660 gaaaactaca ccagcagctt cttcatcagg gacatcatca aacctgaccc acccaagaac 720 ttgcagctga agccattaaa gaattctcgg caggtggagg tcagctggga gtaccctgac 780 acctggagta ctccacattc ctacttctcc ctgacattct gcgttcaggt ccagggcaag 840 agcaagagag aaaagaaaga tagagtcttc acggacaaga cctcagccac ggtcatctgc 900 cgcaaaaatg ccagcattag cgtgcgggcc caggaccgct actatagctc atcttggagc 960 gaatgggcat ctgtgccctg cagtgttcct ggagtagggg tacctggggt gggcgccaga 1020 aacctccccg tggccactcc agacccagga atgttcccat gccttcacca ctcccaaaac 1080 ctgctgaggg ccgtcagcaa catgctccag aaggccagac aaactctaga attttaccct 1140 tgcacttctg aagagattga tcatgaagat atcacaaaag ataaaaccag cacagtggag 1200 gcctgtttac cattggaatt aaccaagaat gagagttgcc taaattccag agagacctct 1260 ttcataacta atgggagttg cctggcctcc agaaagacct cttttatgat ggccctgtgc 1320 cttagtagta tttatgaaga cttgaagatg taccaggtgg agttcaagac catgaatgca 1380 aagctgctga tggaccctaa gaggcagatc tttctagatc aaaacatgct ggcagttatt 1440 gatgagctga tgcaggccct gaatttcaac agtgagactg tgccacaaaa atcctccctt 1500 gaagaaccgg atttttataa aactaaaatc aagctctgca tacttcttca tgctttcaga 1560 attcgggcag tgactattga tagagtgatg agctatctga atgcttccgg aggaggtgga 1620 tcgggtggtg gaggatctgg tggaggtgga agtctgctcc catcctgggc cattacctta 1680 atctcagtaa atggaatttt tgtgatatgc tgcctgacct actgctttgc ctaa 1734 <210> 584 <211> 577 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (552)..(572) <223> B7-1 transmembrane domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (552)..(577) <223> B7-1 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<400> 585 atgtgtcagt ctcgatacct tcttttccta gcaaccttag cgttattgaa tcatctttca 60 ttagcgcgtg tcattccggt ctccggtccc gcccgttgcc tttcgcaaag tcgtaacttg 120 cttaagacta cggatgatat ggtcaaaact gctagagaaa agttaaaaca ctactcgtgt 180 acggctgaag acatagacca cgaagacatc acgcgagatc aaacaagtac cctaaagact 240 tgcttaccgc tagagcttca taaaaacgag agttgcctag cgacccgaga gacatcttca 300 acaaccagag gatcttgtct accccctcag aagacttctc taatgatgac cttgtgcctt 360 ggtagtatat atgaagattt aaagatgtac cagactgaat ttcaggcaat caatgcggca 420 ttacaaaacc acaaccatca gcagataata ttagataaag gaatgcttgt agccattgac 480 gaacttatgc agtctctaaa ccacaacggt gagacacttc gtcagaaacc tccggttggt 540 gaggcagatc cttaccgtgt gaaaatgaag ttgtgcattc tattgcatgc attttcgacg 600 cgtgtggtca ccatcaacag agtcatgggt tatctaagtt ctgctggtgg aggtggaagt 660 ggaggtggag gaagtggtgg aggaggaagt accttagtgt tgtttggagc aggtttcggt 720 gcagtcataa cggttgtcgt tatcgtggtg atcataaaat gtttctgcaa gtga 774 <210> 586 <211> 257 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (231)..(257) <223> transmembrane and cytoplasmic domain <400> 586 Met Cys Gln Ser Arg Tyr Leu Leu Phe Leu Ala Thr Leu Ala Leu Leu 1 5 10 15 Asn His Leu Ser Leu Ala Arg Val Ile Pro Val Ser Gly Pro Ala Arg 20 25 30 Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp Asp Met Val 35 40 45 Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr Ala Glu Asp 50 55 60 Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr Leu Lys Thr 65 70 75 80 Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu Ala Thr Arg 85 90 95 Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro Gln Lys Thr 100 105 110 Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys 115 120 125 Met Tyr Gln Thr Glu Phe Gln Ala Ile Asn Ala Ala Leu Gln Asn His 130 135 140 Asn His Gln Gln Ile Ile Leu Asp Lys Gly Met Leu Val Ala Ile Asp 145 150 155 160 Glu Leu Met Gln Ser Leu Asn His Asn Gly Glu Thr Leu Arg Gln Lys 165 170 175 Pro Pro Val Gly Glu Ala Asp Pro 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360 aaaaataaga cctttttaaa gtgcgaagca ccaaattatt ccggacgatt tacatgttca 420 tggttagttc aacgaaatat ggatttaaaa ttcaatatca agtcaagttc tagttccccg 480 gattcccgag cggttacttg cggtatggcc agtttgagtg ccgagaaagt cacactagac 540 cagcgagatt atgagaaata ttccgtttcc tgccaggagg acgtaacttg tccgactgcc 600 gaggagactt tgccgataga gcttgcctta gaggcccgac agcagaataa gtacgagaat 660 tactctacct cttttttcat ccgagacatc atcaaacctg acccaccaaa gaatttgcaa 720 atgaaaccct taaaaaactc acaggtggag gtgtcctggg aatatcctga ctcttggtct 780 accccccatt cttacttttc ccttaagttc ttcgttagaa tacaacgtaa aaaagagaag 840 atgaaagaaa cggaagaagg ttgcaaccag aaaggagcat ttctagttga aaagacctct 900 acggaagtcc agtgtaaagg tggaaatgtg tgtgtgcaag cccaggaccg atattacaac 960 agttcgtgtt cgaagtgggc ttgcgtgccg tgtcgtgtcc gatctgtacc aggagtcgga 1020 gttcctggag taggtcgtgt aataccggta tccggaccag ctcgttgctt atctcaatcg 1080 cgaaacctac ttaaaacaac cgatgacatg gtgaagacag cgagagaaaa gcttaaacat 1140 tattcctgta ccgccgaaga catcgatcat gaggatatca cgagagacca gacctcgaca 1200 cttaagacat gcttgccact agaacttcat aaaaatgagt cttgcttagc aacgcgagaa 1260 acgtcgtcta cgacgcgtgg ttcatgtttg ccgccccaaa agacatcctt gatgatgacg 1320 ttgtgtcttg gatccatcta tgaggattta aaaatgtacc agacagaatt tcaggctatc 1380 aatgcagctc tacagaatca taatcaccag cagattatct tagacaaggg aatgttagta 1440 gcaatcgatg agcttatgca atccttgaat cataacggag aaacattacg acaaaagcct 1500 ccggtcggtg aagcggatcc atatcgtgtg aagatgaaat tatgtatatt gttgcacgcc 1560 tttagtacgc gtgtggtcac cataaaccga gtaatgggat acttgtcctc ggcgggaggt 1620 ggtggttctg gtggaggtgg atcaggtggt ggtggttcaa ccttggttct ttttggtgcg 1680 ggtttcggtg ccgtgattac tgtcgtcgtc atagtcgtca ttattaaatg tttttgtaag 1740 taa 1743 <210> 588 <211> 580 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (554)..(580) <223> transmembrane and cytoplasmic domain <400> 588 Met Cys Pro Gln Lys Leu Thr Ile Ser Trp Phe Ala Ile Val Leu Leu 1 5 10 15 Val Ser Pro Leu Met Ala Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val Tyr Val 20 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Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro 245 250 255 Asp Ser Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe Phe Val 260 265 270 Arg Ile Gln Arg Lys Lys Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu Gly Cys 275 280 285 Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu Val Gln 290 295 300 Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Asn 305 310 315 320 Ser Ser Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg Ser Val 325 330 335 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Arg Val Ile Pro Val Ser Gly 340 345 350 Pro Ala Arg Cys Leu Ser Gln Ser Arg Asn Leu Leu Lys Thr Thr Asp 355 360 365 Asp Met Val Lys Thr Ala Arg Glu Lys Leu Lys His Tyr Ser Cys Thr 370 375 380 Ala Glu Asp Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Arg Asp Gln Thr Ser Thr 385 390 395 400 Leu Lys Thr Cys Leu Pro Leu Glu Leu His Lys Asn Glu Ser Cys Leu 405 410 415 Ala Thr Arg Glu Thr Ser Ser Thr Thr Arg Gly Ser Cys Leu Pro Pro 420 425 430 Gln Lys Thr Ser Leu Met Met Thr Leu Cys Leu Gly Ser Ile Tyr Glu 435 440 445 Asp Leu Lys 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tgaccaacga ccgtaggaaa ctctagaggg taagaaaaat caatcgcttt 180 atagagacca tcagaaagag gtttaatatt tttgtgagac catcgaagga gaaagagata 240 aaactttttt acgactccat cagaaagagg tttaatattt ttgtgagacc atcgaaggag 300 aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca 360 tcgaaggaga aagagataaa acttttttac gactccatca gaaagaggtt taatattttt 420 gtgagaaagg agaaagagat aaaacttttt tacgactcca tcagaaagag gtttaatatt 480 tttgtgagac catcgaagga gaaagagata aaactttttt acgactccat cagaaagagg 540 tttaatattt ttgtgagacc atcgaaggag aaagagataa aactttttta cgactccatc 600 agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca tcgaaggaga aagagataaa acttttttac 660 gactccatca gaaagaggtt taatattttt gtgagaccat cgaaggagac tccatcagaa 720 agaggtttaa tatttttgtg agaaaggaga aagagataaa acttttttac gactccatca 780 gaaagaggtt taatattttt gtgagaaagg agaaagagat aaaacttttt tacgactcca 840 tcagaaagag gtttaatatt tttgtgagac catcgaagga gaaagagata aaactttttt 900 acgactccat cagaaagagg tttaatattt ttgtgagacc atcgaaggag aaagagataa 960 aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca tcgaagagag 1020 aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt tgtgagacca 1080 tcgaagagag aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt ttaatatttt 1140 tgtgagacca tcgaagagag aaagagataa aactttttta cgactccatc agaaagaggt 1200 ttaatatttt tgtgagacca tcgaagagag aaagagataa aactttttta cgactactcc 1260 atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 1320 ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga 1380 taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 1440 gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 1500 ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 1560 ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga 1620 ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 1680 atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 1740 ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga 1800 taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 1860 gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 1920 ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 1980 ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga 2040 ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 2100 atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 2160 ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga 2220 taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga 2280 gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga 2340 ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat 2400 ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc atcagaaaga 2460 ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt ttacgactcc 2520 atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagaga taaaactttt 2580 ttacgactcc atcagaaaga ggtttaatat ttttgtgaga ccatcgaaga gagaaagata 2640 aaactttttt acgactccat 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gatccgtcga catacttgaa tccatccttg acctcaagtt 4380 cagatgattc cttgcacatg tctccgatac gaacgctaaa ctctagattc ttgacacatt 4440 ttgtatcgac gatcgttgaa ccgatgatat cttcgtaact cactttctta tgagagatgt 4500 tagacccgag tactggatgg gtcttgatgt cgctgtcttt ctcttcttcg ctacatctga 4560 tgtcgataga cacctcacag tctttgatca tagccagagc ttcttcacga gtgatcgcgg 4620 gagagtcctt accttgtcct ggggacacgc tggacaatct agcattcact gtgtttccat 4680 cagcggattc tgagatggat ttaatctgag gacatttggt gaatccaaag ttcattctca 4740 gacctccacc gatgatggag taataagtgg taggaggatc tacatcctcg actgatgtgg 4800 aatcatcttc tgattccacc tcgggatctg gatctgactc ggactctgta atttccgtta 4860 cggattggca aatcttatca ttggtcggtg tttggtcttg ctttgtgact ttgataataa 4920 catcgattcc catatgatgt ttgttttctt cttccgtaca cgaggaggag gatgaggatg 4980 attgctgaag actggcaggc acatgcatgc caggacgata tattgtttca taattgctat 5040 tgattgagta ctgttcttta tgattctact tccttaccat gcaataaatt agaatatatt 5100 ttctactttt acgagaaatt aattattgta tttattattt atgggtgaaa aacttactat 5160 aaaaagcggg tgggtttgga attagtgatc agtttatgta tatcgcaact accgggcata 5220 tggctatcga catcgagaac attacccaca tgataagaga ttgtatcagt ttcgtagtct 5280 tgagtattgg tattactata tagtatatag atgtcgacgc tagatataca gtctccgaat 5340 gcggcatgat accgtcatca ttctttgctt tcgttaactg tttggaggaa gaatctttgt 5400 tattgcattt aatctcgaaa ttcagagtgc acacctttct cctgtaaaga atcctgaagt 5460 cgctacctta ttaagaacgg agaagtatcc atcacgaaat acgggattac agtctttatg 5520 attcatagta atagttagtt ccgacgttga gatggattca ctgagaccgg tagtggtcgt 5580 ccgagtacac gacgtgtcgt tgacgggata cagattaatt tccacatcga tatagttaaa 5640 ggtatttctg ggtacgggtt cgcatttatc tgcggaagag acggtgtgag aatatgttcc 5700 gagaccacac ggagaacaga tgacgtctcc ggatactccg tatcctattc cacattttgt 5760 ttgggaaaca catgccttgc atccggatga tcctttgaga agacaataat atccgggaga 5820 gcattcacag attctattgt gagtagtgtt acacgatcgc gtcttccgtt acaacttaga 5880 caagcgggta aatgattatt gcgagatgtg aaggtacccg aaccacacgg cgtacattgt 5940 gtgttagtct tgctatcgca taatctggaa gcgtatgttc ccggacacaa attatggcgt 6000 ttgtattcgt tgtctttaca ctttccatcg gatggtgcat gcggtgctat atctcttccg 6060 tttattatta tacatgagag aaacaatata tacgagtata atacggactt cataatttaa 6120 taatgtagta atcgttgtcg tgttcctgtt tcctacttct ccaatcatat agatattttc 6180 tttctatcat ggataatatt tgtaatggtt ctttccgtac aacatactgt ttagatgata 6240 ttgcgcataa tttccggagg caaatacgat agtctagatt gaccgatggt agactctaat 6300 ttattgagtg ctttgtcgac gagtttactt ttacgctcca tcgatagatg gcactgttct 6360 atgagatcgt cgtacatggg aaatgaaatg tgtctgtccg aatgtatggc ttcaagatag 6420 ctgtgatacc gtatacaggt cggtgtcgga gattcgaatc tctttgaggc gacttatgtc 6480 acgatgatgg aatctatctt atcgaatgat atatttttca taaatacact tttatagtcc 6540 tcgtttaaac agaatttact atgtagttcc gcgaatgact cgtcccttaa taggcagtag 6600 gctagtatct tttttacgta gtaatcgtcg tagggagaga attctgacat cttgtagaac 6660 aacgatttaa tcataggtag agatactttc agtctgtggt ggatgatgtc attcacaaca 6720 tccgccttgt atatgatgtt tctgttttca aacaccaagt cgaataccgt ctttagtcgg 6780 aaggttgatg tcgtatccga tgtatgaggc aacattgttg ttacaatttt gaaaggcggt 6840 atatgtattc gtctttctga 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catactgtcg cgaacgatgc tcacaatctc gtccatctcg 7740 cccatctcat acatttcatc atttactttt tcataattag agatgtacga aagaaaaaga 7800 aaaagaaaaa gaaaaacaga acaatatatt tttttagtaa tgtttatgcg agacatataa 7860 aataaactcc gtgtttatga tgccggtaaa tgtttttatc atcttggacg gaatcgattt 7920 tgtaatatgt catggaaaca aatgaaacag gacattatca ctccatgata aattatttaa 7980 tggagtaata aagtatctcc atgggtaatt tcgaaatcaa gttatcgtct gtattaatgt 8040 tgtccactat ggagtcgatc ctctcactgt tctttacagt ttctgtaatg atggacgtta 8100 gttctttttt gtaccatttg atgtcggatt ctttgcgtat ctcagtctgt ggcgtttgct 8160 tcgtttaaat aatatatcaa acatggagac gcctgatatg taggcattct tcattctatt 8220 aatgtctact ctatagcgct ttagttcctt atgatgaccg gcgatatcat acttacttta 8280 gaaggaaaat catcatctag gattaaggcg tatctgatac aggcgaataa tggttcagga 8340 tatagatagc gtatatctct attaaatgcg tcaatcatag tctctagagt gggatggtag 8400 ctaagtaata aatcaactat cctcgttttg ttttctcttt ggtaactgct tttctggatg 8460 gccgtattga ttatcgagcg tgatgttgta acactcgctc catattccaa taaccgcttt 8520 gcaaattgta tattattgac 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aaacaactag gaaattggtt tatgatgtat aattttttta gtttttatag 60 attctttatt ctatacttaa aaaatgaaaa taaatacaaa ggttcttgag ggttgtgtta 120 aattgaaagc gagaaataat cataaattat ttcattatcg cgatatccgt taagtttgta 180 tcgta 185 <210> 627 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 627 Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val 1 5 <210> 628 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 628 Val Leu Pro Asp Val Phe Ile Arg Cys 1 5 <210> 629 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 629 Met Leu Asn Phe Ser Leu Cys Leu Tyr Pro Val Phe Ile Leu Asn Lys 1 5 10 15 Leu Val Leu Arg Thr Gln Ser Ile Ile Leu His Thr Ile Asn Asn Ala 20 25 30 Ser Ile Lys Asn Arg 35 <210> 630 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 630 aaaaatgaaa 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Claims (250)

  1. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산, 이 핵산은 다음을 포함한다:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
    (b) 3′ 역전된 말단 반복 (ITR)에서 다음 유전자들에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
    (c) 세포독성 T-림프구 연합된 단백질 4 (CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  3. 청구항 2에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터인, 핵산.
  4. 청구항 2에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터인, 핵산.
  5. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
    (d) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  6. 청구항 5에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터인, 핵산.
  7. 청구항 1-6중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
  8. 청구항 1-7중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드하는, 핵산.
  9. 청구항 1-8중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  10. 청구항 1-8중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되는, 핵산.
  11. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
    (c) 인터루킨 12 (IL-12) 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  12. 청구항 11에 있어서, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  13. 청구항 12에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터인, 핵산.
  14. 청구항 13에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한, 핵산.
  15. 청구항 13에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  16. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
    (d) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  17. 청구항 16에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한, 핵산.
  18. 청구항 16에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  19. 청구항 11-18중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
  20. 청구항 11-19중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된, 핵산.
  21. 청구항 11-20중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함하는, 핵산.
  22. 청구항 11-21중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 핵산.
  23. 청구항 11-22중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  24. 청구항 11-22중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된, 핵산.
  25. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R; 그리고
    (c) FMS-유사 티로신 키나제 3 리간드 (FLT3L)를 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  26. 청구항 25에 있어서, 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  27. 청구항 26에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터인, 핵산.
  28. 청구항 26에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
  29. 청구항 26에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
  30. 청구항 26에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
  31. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자; 그리고
    (d) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터이며;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  32. 청구항 31에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
  33. 청구항 31에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
  34. 청구항 31에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
  35. 청구항 25-34중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
  36. 청구항 25-35중 임의의 한 항에 있어서, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 핵산.
  37. 청구항 25-36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  38. 청구항 25-36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된, 핵산.
  39. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  40. 청구항 39에 있어서, 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  41. 청구항 40에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터인, 핵산.
  42. 청구항 40에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터인, 핵산.
  43. 청구항 39-42중 임의의 한 항에 있어서, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  44. 청구항 43에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터인, 핵산.
  45. 청구항 44에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함하는, 핵산.
  46. 청구항 44에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  47. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는
    (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터다.
  48. 청구항 47에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R인, 핵산.
  49. 청구항 47 또는 48에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함하는, 핵산.
  50. 청구항 47 또는 48에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  51. 청구항 39-50중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
  52. 청구항 39-51중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된, 핵산.
  53. 청구항 39-52중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함하는, 핵산.
  54. 청구항 39-53중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드하는, 핵산.
  55. 청구항 39-54중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  56. 청구항 39-54중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되는, 핵산.
  57. 청구항 39-56중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 핵산.
  58. 청구항 39-57중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  59. 청구항 39-57중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된, 핵산.
  60. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
    (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  61. 청구항 60에 있어서, 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  62. 청구항 61에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터인, 핵산.
  63. 청구항 61에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터인, 핵산.
  64. 청구항 60-63중 임의의 한 항에 있어서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  65. 청구항 64에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터인, 핵산.
  66. 청구항 64에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
  67. 청구항 64에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
  68. 청구항 64에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
  69. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자; 그리고
    (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며; 및/또는
    (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
  70. 청구항 69에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터인, 핵산.
  71. 청구항 69 또는 70에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
  72. 청구항 69 또는 70에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
  73. 청구항 69 또는 70에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
  74. 청구항 60-73중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
  75. 청구항 60-74중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드하는, 핵산.
  76. 청구항 60-75중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  77. 청구항 60-75중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되는, 핵산.
  78. 청구항 60-77중 임의의 한 항에 있어서, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 핵산.
  79. 청구항 60-78중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  80. 청구항 60-78중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된, 핵산.
  81. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
    (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  82. 청구항 81에 있어서, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  83. 청구항 82에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터인, 핵산.
  84. 청구항 83에 있어서, 이때 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한, 핵산.
  85. 청구항 83에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  86. 청구항 81-85중 임의의 한 항에 있어서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  87. 청구항 86에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터인, 핵산.
  88. 청구항 86에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
  89. 청구항 86에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
  90. 청구항 86에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
  91. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
    (d) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는
    (ii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
  92. 청구항 91에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한, 핵산.
  93. 청구항 91에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  94. 청구항 91-93중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
  95. 청구항 91-93중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
  96. 청구항 91-93중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
  97. 청구항 81-96중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
  98. 청구항 81-97중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된, 핵산.
  99. 청구항 81-98중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함하는, 핵산.
  100. 청구항 81-99중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 핵산.
  101. 청구항 81-100중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  102. 청구항 81-100중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된, 핵산.
  103. 청구항 81-102중 임의의 한 항에 있어서, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 핵산.
  104. 청구항 81-103중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  105. 청구항 81-103중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된, 핵산.
  106. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B8R, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
    (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이다.
  107. 청구항 106에 있어서, 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  108. 청구항 107에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터인, 핵산.
  109. 청구항 107에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터인, 핵산.
  110. 청구항 106-109중 임의의 한 항에 있어서, 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  111. 청구항 110에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터인, 핵산.
  112. 청구항 111에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한, 핵산.
  113. 청구항 111에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  114. 청구항 106-113중 임의의 한 항에 있어서, 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함하는, 핵산.
  115. 청구항 114에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터인, 핵산.
  116. 청구항 114에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
  117. 청구항 114에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
  118. 청구항 114에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
  119. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
    (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터, pS 프로모터, 또는 LEO 프로모터이며;
    (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 후기 프로모터이며; 및/또는
    (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터, B19R 프로모터, E3L 프로모터, F11L 프로모터, 또는 B2R 프로모터다.
  120. 청구항 119에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터인, 핵산.
  121. 청구항 119 또는 120에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열, F17R 프로모터, 또는 D13L 프로모터를 포함한, 핵산.
  122. 청구항 119 또는 120에 있어서, 이때 상기 후기 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  123. 청구항 119-122중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터인, 핵산.
  124. 청구항 119-122중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B19R 프로모터인, 핵산.
  125. 청구항 119-122중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터인, 핵산.
  126. 청구항 106-125중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
  127. 청구항 106-126중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 막-결합된, 핵산.
  128. 청구항 106-127중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 IL-12 p35 또는 IL-12 p70을 포함하는, 핵산.
  129. 청구항 106-128중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 211로 제시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 인코드하는, 핵산.
  130. 청구항 106-129중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  131. 청구항 106-129중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 214로 제시되는, 핵산.
  132. 청구항 106-131중 임의의 한 항에 있어서, 이때 IL-12 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 212로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 핵산.
  133. 청구항 106-132중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  134. 청구항 106-132중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 215로 제시된, 핵산.
  135. 청구항 106-134중 임의의 한 항에 있어서, 이때 FLT3L은 서열 식별 번호: 213으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 핵산.
  136. 청구항 106-135중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된 서열을 포함하는, 핵산.
  137. 청구항 106-135중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 서열 식별 번호: 216으로 제시된, 핵산.
  138. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  139. 청구항 138에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있는, 핵산.
  140. 청구항 1-10, 39-80, 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  141. 청구항 11-24, 39-59, 및 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  142. 청구항 25-38 및 60-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  143. 청구항 1-10, 39-80, 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  144. 청구항 11-24, 39-59, 및 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  145. 청구항 25-38 및 60-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  146. 청구항 1-10, 39-80, 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  147. 청구항 11-24, 39-59, 및 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  148. 청구항 25-38 및 60-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  149. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  150. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  151. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  152. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  153. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  154. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  155. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  156. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  157. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  158. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  159. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  160. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  161. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  162. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  163. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  164. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  165. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  166. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  167. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  168. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  169. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  170. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  171. 청구항 39-59 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  172. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  173. 청구항 60-80 및 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  174. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  175. 청구항 81-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  176. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  177. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  178. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자, 상기 제 2 형질전환유전자, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  179. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  180. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  181. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  182. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  183. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산
  184. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  185. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  186. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  187. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  188. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  189. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  190. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자와 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  191. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  192. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  193. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  194. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  195. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  196. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 12형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  197. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  198. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  199. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  200. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  201. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 1 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  202. 청구항 106-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하는, 핵산.
  203. 청구항 1-202중 임의의 한 항에 있어서, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 50%의 결손인, 핵산.
  204. 청구항 1-202중 임의의 한 항에 있어서, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 60%의 결손인, 핵산.
  205. 청구항 1-202중 임의의 한 항에 있어서, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 70%의 결손인, 핵산.
  206. 청구항 1-202중 임의의 한 항에 있어서, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 80%의 결손인, 핵산.
  207. 청구항 1-202중 임의의 한 항에 있어서, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 75%의 결손인, 핵산.
  208. 청구항 1-202중 임의의 한 항에 있어서, 이때 B8R 유전자내 결손은 B8R 유전자 결손 서열의 적어도 80%의 결손인, 핵산.
  209. 청구항 1-208중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 Copenhagen 균주 백시니아 바이러스의 게놈으로부터 유래된, 핵산.
  210. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자;
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자; 그리고
    (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
    (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
    (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
  211. 청구항 210에 있어서, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있는, 핵산.
  212. 청구항 210 또는 211에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  213. 청구항 210 또는 211에 있어서, 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R과 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고, 그리고 상기 제 2 형질전환유전자와 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하는, 핵산.
  214. 청구항 212 또는 213에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있는, 핵산.
  215. 청구항 212 또는 213에 있어서, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있는, 핵산.
  216. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
    (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
    (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
    (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
  217. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 C2L과 F3L 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
    (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
    (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
    (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
  218. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
    (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 상류에 있고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
    (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
    (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
  219. 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산에 있어서, 다음을 포함하는 핵산:
    (a) 다음 유전자들: C2L, C1L, N1L, N2L, M1L, M2L, K1L, K2L, K3L, K4L, K5L, K6L, K7R, F1L, F2L, F3L, B14R, B15R, B16R, B17L, B18R, B19R, 및 B20R에서 결손, 그리고 B8R 유전자에서 임의선택적으로 결손;
    (b) 3′ ITR에서 다음 유전자에서 결손: B21R, B22R, B23R, B24R, B25R, B26R, B27R, B28R, 및 B29R;
    (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 제 1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 형질전환유전자, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열은 해당 제 1 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 1 형질전환유전자는 부분적 B14R 백시니아 유전자와 B29R 백시니아 유전자 사이에 존재하고;
    (d) IL-12 폴리펩티드를 인코딩하는 제 2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 형질전환유전자, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열은 해당 제 2 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 그리고 이때 상기 제 2 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고; 그리고
    (e) FLT3L을 인코딩하는 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 3 형질전환유전자;
    이때 C2L, F3L, B14R, 및 B29R 백시니아 유전자에서 결손은 부분 결손이고, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열은 해당 제 3 뉴클레오티드 서열의 측면에 있는 내생적 백시니아 바이러스 유전자와 동일한 방향으로 있고, 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 B8R 유전자내 결손 좌에 존재하고, 그리고 이때 상기 제 3 형질전환유전자는 상기 제 2 형질전환유전자의 하류에 있고; 그리고
    이때 상기 핵산은 다음을 더 포함한다:
    (i) 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 1 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 H5R 프로모터이며;
    (ii) 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 2 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 서열 식별 번호: 561의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 후기 프로모터이며; 그리고
    (iii) 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터를 포함하는 뉴클레오티드 서열, 이때 상기 제 3 뉴클레오티드 서열에 작동가능하도록 연계된 적어도 하나의 프로모터는 B8R 프로모터 및 B19R 프로모터다.
  220. 청구항 1-219중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 624의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  221. 청구항 1-105중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 재조합 백시니아 바이러스 게놈은 서열 식별 번호: 210의 백시니아 바이러스 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  222. 청구항 1-221중 임의의 한 항에 따른 재조합 백시니아 바이러스 게놈을 포함하는 핵산을 포함하는 바이러스.
  223. 청구항 1-221중 임의의 한 항에 따른 핵산을 포함하는 패키징 세포주.
  224. 청구항 222의 바이러스를 포함하는 패키징 세포주.
  225. 청구항 222의 바이러스와 생리학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  226. 청구항 1-221중 임의의 한 항에 따른 핵산과 이 핵산을 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
  227. 청구항 222의 바이러스와, 이 바이러스를 숙주 세포에서 발현시키기 위해 전술한 키트의 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
  228. 청구항 222의 바이러스, 그리고 치료요법적으로 유효량의 이 바이러스를 포유류 암 환자에게 투여하고, 이로 인하여 전술한 암을 치료하기 위해 사용자에게 지침을 주는 포장 삽입물을 포함하는 키트.
  229. 청구항 228에 있어서, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자인, 키트.
  230. 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 청구항 222의 바이러스의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  231. 포유류 환자에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 상기 방법은 이 포유류 환자에게 청구항 225의 약제학적 조성물의 치료요법적으로 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  232. 청구항 230 또는 231에 있어서, 이때 상기 포유류 환자는 인간 환자인, 방법.
  233. 청구항 230-232중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암은 백혈병, 림프종, 간암, 뼈암, 폐암, 뇌암, 방광암, 위장암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 자궁암, 두경부암, 담낭암, 후두암, 입술 및 구강암, 안구암, 흑색종, 췌장암, 전립선암, 결장직장암, 고환암, 그리고 인후암으로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
  234. 청구항 230-233중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 면역 체크포인트 억제제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  235. 청구항 234에 있어서, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 OX40 리간드, ICOS 리간드, 항-CD47 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CD40/CD40L 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-Lag3 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 그리고 항-Tim-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
  236. 청구항 234에 있어서, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
  237. 청구항 234에 있어서, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
  238. 청구항 234에 있어서, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
  239. 청구항 234에 있어서, 이때 상기 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
  240. 청구항 219-228중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 인터루킨을 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  241. 청구항 240에 있어서, 이때 상기 인터루킨은 IL-1 알파, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12 p35, IL-12 p40, IL-12 p70, IL-15, IL-18, IL-21, 그리고 IL-23으로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
  242. 청구항 240에 있어서, 이때 상기 인터루킨은 IL-12 p35, IL-12 p40, 그리고 IL-12 p70으로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
  243. 청구항 240-242중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 인터루킨은 막-결합된, 방법.
  244. 청구항 230-243중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 인터페론을 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  245. 청구항 244에 있어서, 이때 상기 인터페론은 IFN-알파, IFN-베타, IFN-델타, IFN-입실론, IFN-타우, IFN-오메가, IFN-제타, 그리고 IFN-감마로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
  246. 청구항 230-245중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 상기 포유류 환자에게 사이토킨을 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  247. 청구항 246에 있어서, 이때 상기 사이토킨은 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질인, 방법.
  248. 청구항 247에 있어서, 이때 TNF 수퍼패밀리 구성원 단백질은 TRAIL, Fas 리간드, LIGHT (TNFSF-14), TNF-알파, 그리고 4-1BB 리간드로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
  249. 청구항 246에 있어서, 이때 상기 사이토킨은 GM-CSF, Flt3 리간드, CD40 리간드, TGF-베타, VEGF-R2, 그리고 cKit로 구성된 군에서 선택되는, 방법.
  250. 청구항 246에 있어서, 이때 상기 사이토킨은 Flt3 리간드인, 방법.
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