KR20230092004A

KR20230092004A - 쉬스토소마 감염의 검출을 위한 단백질

Info

Publication number: KR20230092004A
Application number: KR1020237017573A
Authority: KR
Inventors: 베아트리체 그레코; 클로드 우브레이; 알렉스 루카스; 마크 피어슨; 하비에르 소티요-가예고
Original assignee: 메르크 파텐트 게엠베하
Priority date: 2020-10-27
Filing date: 2021-10-27
Publication date: 2023-06-23
Also published as: EP4237853A1; WO2022090343A1; AU2021369448A9; JP2023547188A; US20240011984A1; IL302404A; CN117203526A; ZA202305647B; CA3196094A1; AU2021369448A1

Abstract

본 발명은 쉬스토소마 감염의 검출을 위한 진단 도구의 분야에 관한 것이다. 본 발명은 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마 항체의 검출, 및 따라서 인간에서의 쉬스토소마 감염의 진단에 단독으로 또는 조합되어 유용한, 쉬스토소마 헤마토비움 항원으로부터 유래된 단백질에 관한 것이다.

Description

쉬스토소마 감염의 검출을 위한 단백질

본 발명은 쉬스토소마(Schistosoma) 감염의 검출을 위한 진단 도구의 분야에 관한 것이다. 본 발명은 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마 항체의 검출, 및 인간에서의 쉬스토소마 감염의 진단에 단독으로 또는 조합되어 유용한, 쉬스토소마 헤마토비움(Schistosoma haematobium) 항원으로부터 유래된 단백질에 관한 것이다.

쉬스토소마 속의 기생충 주혈흡충으로의 감염에 의해 초래된 주혈흡충증은 전 세계적으로 186만 장애 보정 생존 연수의 부담을 갖는다. 쉬스토소마 헤마토비움은 인간에 영향을 미치는 가장 흔한 종이며, 전 세계의 열대 및 아열대 지역 전체에 걸쳐 감염된 추정된 2억명 중 대략 절반에서 비뇨생식기 주혈흡충증을 초래한다 (Steinmann et al. Lancet Infect Dis 2006; 6(7): 411-25). 게다가, 여성에서의 에스. 헤마토비움 감염은 HIV/AIDS를 획득할 위험을 실질적으로 증가시키고 (Zirimenya et al. PLoS Negl Trop Dis 2020; 14(6): e0008383), 국제 암 연구 기관 (IARC)은 비뇨생식기 주혈흡충증을 방광의 편평 세포 암종과의 그의 연관 때문에 그룹 1 발암물질로서 인식한다 (Moller et al. International journal of cancer Journal international du cancer 1995; 60(5): 587-9). 주혈흡충증 중재 안건의 초점은 이환율 제어에서 박멸로 이동하고 있고, 공중 보건 염려로서 주혈흡충증을 제거하고 선택된 지역에서의 전파를 방해하기 위한 WHO-요구된 목적이 있다. 따라서 감염을 검출하는 방법이 질환의 새로운 사례를 진단하고, 제어 조치의 유효성을 평가하고 대규모 질환 감시에 적용하기 위해 적절히 민감성이고 이들의 실행이 신속한 것이 필수적이다.

현재 주혈흡충증의 검출에 권장된 최적 표준은 없지만, 감염을 진단하는데 널리 사용된 방법은 소변에서의 기생충 충란 (비뇨생식기 주혈흡충증) 또는 대변 (장 주혈흡충증)의 현미경 검출을 수반하며, 이는 불행히도 충란 배출의 속도에 의존적인 기술로 인해 낮은 전파의 지역에서 비교적 불량한 민감도를 나타내고 (Engels et al. Am J Trop Med Hyg 1996; 54(4): 319-24), 낮은 엔데믹화의 지역에서 진단 도구로서의 그의 가치를 제한한다. 그러나, 쉐딩된 충란의 양은 기생충 부담 및 담수 접촉의 수 및 강도에 의존한다. 더욱이, 충란-쉐딩은 나날이 달라진다. 혈액 또는 소변에서 순환 주혈흡충 항원을 검출하는 시험은 전형적으로 전통적인 현미경보다 더 민감성이지만 제한이 없는 것은 아니다. 소변에서 순환 양극성 항원 (CAA)을 검출하는 검정은 중등도 내지 고-수준 에스. 만소니(S. mansoni) 감염을 진단하는 훌륭한 능력을 갖지만, 쉬스토소마 헤마토비움 감염을 검출하는데 있어서 감소된 성능을 갖는 현장 시험으로서 이용가능하다 (Midzi et al. Trans R Soc Trop Med Hyg 2009; 103(1): 45-51). 소변에서 조 기생충 제제, 예컨대 가용성 충란 항원 (SEA)에 대한 항체를 검출하는 검정은 소변 충란 및 혈청 양극성 항원 수준과 상관관계가 있는 것으로 제시되었지만 (de Dood et al. Frontiers in immunology 2018; 9: 2635) 다른 연충 감염으로부터의 항체와 교차-반응할 수 있는 수천의 주혈흡충 단백질을 함유하는 추출물로 인해 낮은 특이도 및 재현성을 가질 수 있다. 재조합체 항원에 기반하는 소수의 면역진단이 의학적으로 중요한 주혈흡충에 대해 개발되었다 (Hinz et al. Mol Cell Probes 2017; 31: 2-21). 그러나, 기존 면역진단은 일반적으로 상이한 쉬스토소마 종들 사이를 구별하는 충분한 특이도가 결여된다. 또한 쉬스토소마 감염의 특정 경우에, 감염이 최근이거나 또는 연령-의존적 항체 반응으로 인해, 일부 감염된 개체가 단지 낮은 수준의 항체 반응만을 갖기 때문에, 면역진단이 큰 수준의 민감도를 달성하는 것이 특히 중요하다.

따라서 여전히 진단 도구 및 특히 이들의 감염의 상태와 독립적으로 감염된 모든 개체에서 쉬스토소마를 진단하는데 필요한 특이도 및 민감도를 갖고, 쉬스토소마 헤마토비움 감염과 다른 쉬스토소마 종들로 인한 감염 사이를 구별할 수 있는 단백질 또는 항원에 대한 필요가 있다.

본 발명은 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마 항체, 바람직하게는 항-쉬스토소마 헤마토비움 항체의 검출을 위한 및/또는 인간 대상체에서, 바람직하게는 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 쉬스토소마 감염을 진단하기 위한, 서열식별번호(SEQ ID NO): 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6 및 서열식별번호: 7로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질의 용도를 제공한다.

다른 측면에서, 본 발명은 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마 항체의 검출을 위한 및/또는 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 쉬스토소마 감염을 진단하기 위한 키트의 제조에서의, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질의 용도를 제공한다.

본 발명은 하기 단계를 포함하는, 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마 항체, 바람직하게는 항-쉬스토소마 헤마토비움 항체의 검출을 위한 방법을 추가로 제공한다:

a. 상기 생물학적 샘플을 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질과 접촉시키는 단계;

b. 상기 생물학적 샘플에서, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 존재 및/또는 양을 결정하는 단계.

본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 인간 대상체에서의 쉬스토소마 감염, 바람직하게는 쉬스토소마 헤마토비움 감염의 진단을 위한 방법을 제공한다:

a. 대상체로부터의 생물학적 샘플을 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질과 접촉시키는 단계;

b. 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양을 결정하는 단계.

본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는, 쉬스토소마, 바람직하게는 쉬스토소마 헤마토비움으로 감염된 대상체의 치료를 위한 방법을 제공한다:

본 발명의 방법에 따라 대상체에서 쉬스토소마 헤마토비움 감염의 존재 또는 부재를 진단하는 단계,

쉬스토소마 헤마토비움 감염의 존재로 진단된 대상체에게 쉬스토소마 헤마토비움 감염에 적절한 치료적 치료를 투여하는 단계.

본 발명은 또한 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 용도 또는 방법을 위한, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질, 및 임의로 상기 적어도 1종의 단백질을 사용하는 방법에 관한 설명서가 있는 리플렛을 포함하는 키트를 제공한다.

정의

"단백질" "폴리펩티드" 및 "펩티드"에 의해 펩티드 결합을 통해 연결된 아미노산을 포함하는 분자가 본원에서 지칭된다. 일반적으로, "펩티드"는 20개 이하의 아미노산의 서열을 지칭하는데 사용되고 "폴리펩티드"는 50개 초과의 아미노산의 서열을 지칭하는데 사용된다. 그러나, 본 출원에서, 명확성 및 읽기 용이성을 위해, 본 발명의 "단백질", "폴리펩티드" 및 "펩티드"는 모두 "단백질"로서 지칭된다. 본 발명에 따른 단백질, 폴리펩티드 및 펩티드는 정제되거나, 재조합 공정 (즉, 유기체, 숙주 세포, 또는 세포-무함유 시스템에서의 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질을 코딩하는 외인성 핵산의 발현)에 의해 생산되거나 또는 화학적 합성에 의해 생산될 수 있다.

시험, 검정 또는 진단과 관련하여, "민감도"에 의해 질환을 갖는 대상체의 총 그룹에서 질환을 갖는 진양성 대상체의 비율을 검출하는 시험의 능력이 본원에서 지칭된다. 그러므로, 이는 질환을 갖는 대상체를 확인하는 시험의 가능성에 관한 것이다.

시험, 검정 또는 진단과 관련하여, "특이도"에 의해 질환이 없는 총 대상체에서 음성 시험 결과를 갖는 질환이 없는 대상체의 비율을 정확히 검출하는 시험의 능력이 본원에서 지칭된다. 다시 말해서, 특이도는 질환이 없는 대상체에서의 음성 시험 결과의 확률을 나타낸다. 따라서, 특이도는 질환이 없는 대상체를 확인하는, 즉 관심 상태를 배제하는 시험 능력을 기재하는 진단 정확도의 측면에 관한 것이다.

"항체" 또는 "항체들"에 의해, 이뮤노글로불린이 일반적으로 본원에서 지칭된다. 존재 및/또는 양이 본 발명에 따라 결정되어야 하는 항체를 지칭할 때, 용어 "항체"는 천연 발생 항체, 즉 생물학적 샘플에 첨가되고/거나 및/또는 환자에게 주사되었을 항체와 대조적으로, 대상체의 면역 반응의 산물로서 대상체로부터의 생물학적 샘플에 존재할 항체를 지칭한다. 이 맥락에서, 용어 항체는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 이소형의 항체를 지칭한다. 바람직하게는 본 발명의 맥락에서, 존재 및/또는 양이 본 발명에 따라 결정되어야 하는 항체는 IgG 이소형의 것이다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "항-쉬스토소마 항체"는 쉬스토소마 항원에 결합할 수 있는 항체 천연 발생 항체를 지칭한다.

검정 또는 시험에서 생물학적 도구로서, 예를 들어 2차 및/또는 검출 항체로서 사용된 항체를 지칭할 때, 용어 "항체"는 기원 또는 이소형의 종과 독립적으로 해당 목적에 맞을 임의의 유형의 항체를 지칭한다.

서열

서열식별번호: 1은 MS3_013701로부터의 최소 유용한 서열에 상응한다.

서열식별번호: 2는 Sh-TSP-2로부터의 최소 유용한 서열에 상응한다.

서열식별번호: 3은 MS3_09198로부터의 최소 유용한 서열에 상응한다.

서열식별번호: 4는 MS3_10385로부터의 최소 유용한 서열에 상응한다.

서열식별번호: 5는 MS3_10186으로부터의 최소 유용한 서열에 상응한다.

서열식별번호: 6은 MS3_013701의 서열에 상응한다.

서열식별번호: 7은 Sh-TSP-2의 서열에 상응한다.

서열식별번호: 8은 MS3_09198의 서열에 상응한다.

서열식별번호: 9는 MS3_10385의 서열에 상응한다.

서열식별번호: 10은 MS3_10186의 서열에 상응한다.

도 1. 에스. 헤마토비움 단백질 어레이의 프로빙으로부터 생성된 혈청 및 소변 IgG 반응. (A) 혈청 또는 (B) 소변으로의 감염된 (에스. 헤마토비움-엔데믹) 및 비-감염된 집단 사이의 IgG 반응의 배수 변화 및 유의성을 제시하는 볼케이노 플롯. 각각의 개별 점은 단일 어레이된 항원을 나타낸다. 점선은 상이한 확률 임계치를 나타낸다 (아래에서 위로: 첫 번째 라인, p<0.05; 두 번째 라인, p<0.01; 세 번째 라인, p<0.001). (C) 모든 샘플에 대한 혈청 및 소변 IgG 반응의 상관관계를 제시하는 산점도 (혈청, n=242; 소변, n=117) 및 (D) 매치된 혈청 및 소변 샘플 (n=17).
도 2. 에스. 헤마토비움-엔데믹 집단으로부터의 혈청에서의 이. 콜라이(E. coli)-발현된 재조합체 버전의 최상위 단백질 및 에스. 헤마토비움 가용성 충란 항원 (Sh-SEA)에 대한 IgG 항체 반응. (A) 항-MS3_10385; (B) 항-MS3_10186; (C) 항-MS3_09198; (D) 항-MS3_01370; (E) 항-Sh-TSP-2; (F) 항-Sh-SEA. 충란-양성 대상체는 고 (10 ml 소변당 ≥50개의 충란) 또는 저 (10 ml 소변당 1-49개의 충란) 강도 감염을 갖는 것으로 특징규명되었다 (WHO 계층화). "충란 -ve/CAA +ve" = 보다 민감성인 순환 양극성 항원 (CAA) 검출 시험에 의해 양성 (감염된)으로서 분류되는 충란 음성 대상체. "충란 -ve/CAA -ve" = CAA 검출 시험에 의해 항원 음성으로서 확인되는 충란 음성 대상체. "비-end. -ve" = 비-엔데믹 지역으로부터의 대상체. 플롯팅된 데이터는 짐바브웨 및 가봉 코호트 둘 다의 반응을 나타낸다. 반응성 컷오프는 비-엔데믹 음성 그룹의 값의 평균 플러스 3SD로서 결정되었다 (점선). 각각의 감염된 그룹과 비-감염된 그룹 사이의 항체 수준에서의 차이의 유의성은 스튜던트 t 검정에 의해 분석되었다 *p≤0.05, **p≤0.01, ***p≤0.001, ****p≤0.0001.
도 3. 에스. 헤마토비움-엔데믹 집단으로부터의 소변에서의 이. 콜라이-발현된 재조합체 버전의 최상위 단백질 및 에스. 헤마토비움 가용성 충란 항원 (Sh-SEA)에 대한 IgG 항체 반응. (A) 항-MS3_10385; (B) 항-MS3_10186; (C) 항-MS3_09198; (D) 항-MS3_01370; (E) 항-Sh-TSP-2; (F) 항-Sh-SEA. 충란-양성 대상체는 고 (10 ml 소변당 ≥50개의 충란) 또는 저 (10 ml 소변당 1-49개의 충란) 강도 감염을 갖는 것으로 특징규명되었다 (WHO 계층화). "충란 -ve/CAA +ve" = 보다 민감성인 순환 양극성 항원 (CAA) 검출 시험에 의해 양성 (감염된)으로서 분류되는 충란 음성 대상체. "충란 -ve/CAA -ve" = CAA 검출 시험에 의해 항원 음성으로서 확인되는 충란 음성 대상체. "비-end. -ve" = 비-엔데믹 지역으로부터의 대상체. 플롯팅된 데이터는 짐바브웨 및 잔지바르 코호트 둘 다의 반응을 나타낸다. 반응성 컷오프는 비-엔데믹 음성 그룹의 값의 평균 플러스 3SD로서 결정되었다 (점선). 각각의 감염된 그룹과 비-감염된 그룹 사이의 항체 수준에서의 차이의 유의성은 스튜던트 t 검정에 의해 분석되었다 *p≤0.05, **p≤0.01, ***p≤0.001, ****p≤0.0001.
도 4. 혈청을 사용하는 비뇨생식기 주혈흡충증의 진단을 위한 현장 면역크로마토그래피 시험 (PoC-ICT)의 파일럿 개발의 결과. 가봉 코호트로부터의 ELISA-검증된 혈청 샘플을 사용하는 MS3_01370 또는 Sh-TSP-2 ICT에 대한 양성 (어두운 박스) 및 음성 (백색 박스) 결과를 제시하는 도식 (고, n=10; 저, n=22; 충란 -ve/CAA +ve, n=4; 충란 -ve/CAA -ve, n=14; 비-end. -ve, n=10). 샘플은 좌측에서 우측으로 감소하는 충란 부담에 의해 분류되었고 감염된 집단 중 FoR 백분율 (민감도)은 이미지의 우측 상에 표시된다. PoC-ICT의 간단한 설명: 스트립은 샘플 저장소에 첨가된 혈청에서 항-MS3_01370 또는 항-Sh-TSP-2 IgG의 포획 및 검출을 용이하게 하기 위해 시험 라인에서 MS3_01370 또는 Sh-TSP-2로 코팅되었다. 시험 및 대조군 라인에서의 밴드의 출현은 양성 결과로 간주되었고 오직 대조군 라인에서의 밴드는 음성 결과로 간주되었다. 시험 밴드는 최소 (+1) 내지 최대 (+4) 강도의 점수가 제공되었고 0점이 음성 결과에 제공되었다. 2개의 독립적 판독기가 시험 결과에 동의해야 한다. 수행된 모든 시험은 대조군 라인에서의 밴드의 출현에 의해 확인된 바와 같이, 유효하였다.
도 5. 상이한 진단 유체로의 에스. 헤마토비움 단백질 어레이의 프로빙으로부터 생성된 모든 점의 개별 평균 SI와 에스. 헤마토비움 감염 강도 (소변 충란 부담)의 상관관계를 제시하는 산점도. (A) 혈청. (B) 소변.
도 6. 각각의 진단 유체에서의 최소 항체 지표의 진단 성능 (곡선하 면적 - AUC)을 제시하는 수신자 작동 특징 곡선. (A) 혈청. (B) 소변.
도 7. 에스. 헤마토비움-엔데믹 집단으로부터의 인간 소변으로의 ELISA에 의해 생성된 세포-기반 재조합체 버전의 최상위 단백질의 조합에 대한 항체 반응. (A) 항-MS3_10385 + 항-MS3_10186 + 항-MS3_09198 IgG 반응. (B) 항-MS3_10385 + 항-MS3_09198 + 항-MS3_01370 + 항-Sh-TSP-2 IgG 반응. (C) 항-MS3_09198 + 항-MS3_01370 + 항 Sh-TSP-2 IgG 반응. (D) 항-MS3_01370 IgG 반응 + 항-Sh-TSP-2 IgG 반응. 충란-양성 대상체는 고 (10 ml 소변당 ≥50개의 충란) 또는 저 (10 ml 소변당 1-49개의 충란) 감염을 갖는 것으로 특징규명되었다 (WHO 계층화). "충란 -ve/CAA +ve" = 보다 민감성인 순환 양극성 항원 (CAA) 검출 시험에 의해 양성 (감염된)으로서 분류되는 충란 음성 대상체. "충란 -ve/CAA -ve" = CAA 검출 시험에 의해 항원 음성으로서 확인되는 충란 음성 대상체. "비-end. -ve" = 비-엔데믹 지역으로부터의 대상체. 플롯팅된 데이터는 짐바브웨 및 잔지바르 코호트 둘 다의 반응을 나타낸다. 반응성 컷오프는 비-엔데믹 음성 그룹의 값의 평균 플러스 3SD로서 결정되었다 (점선). 각각의 감염된 그룹과 비-감염된 그룹 사이의 반응의 유의성은 스튜던트 t 검정에 의해 분석되었다 *p≤0.05, **p≤0.01, ***p≤0.001, ****p≤0.0001.
도 8. 에스. 헤마토비움-엔데믹 집단에서의 감염된 개체로부터의 소변을 사용하는 세포-기반 재조합체 버전의 최상위 단백질 및 Sh-SEA의 조합에 대한 IgG ELISA 반응에 기반하는 인식 빈도 (FoR) 패턴. 샘플은 좌측에서 우측으로 감소하는 충란 부담에 의해 분류되었다. 각각의 항원에 대해, 어두운 막대는 짐바브웨 코호트로부터의 샘플 또는 잔지바르 코호트로부터의 샘플에 의한 인식을 나타내고 백색 막대는 코호트와 상관없이, 인식 없음을 나타낸다 (ELISA에 의해 결정된 컷오프 미만). "조합 1" = MS3_10385 + MS3_10186 + MS3_09198, "조합 2" = MS3_10385 + MS3_09198 + MS3_01370 + Sh-TSP-2, "조합 3" = MS3_09198 + MS3_01370 + Sh-TSP-2, "조합 4" = MS3_01370 + Sh-TSP-2. 감염된 집단 중 FoR 백분율 (민감도)은 패턴의 우측 상에 표시된다. "Zim" = 짐바브웨 코호트, "Zan" = 잔지바르 코호트, "모두" = 조합된 두 코호트로부터의 샘플. 적절한 비교를 용이하게 하기 위해, 데이터세트는 모든 4개의 재조합체 항원 조합에 대해 검정되지 않은 임의의 샘플을 배제하기 위해 트리밍되었다 (n=148).
도 9. 다른 주혈흡충 종에 의한 에스. 헤마토비움 진단 항원의 인식을 제시하는 혈청 IgG ELISA. "Sh" = 이 연구에서 이전에 사용된 가봉 코호트로부터의 에스. 헤마토비움-감염된 혈청 샘플. "Sm" = 에스. 만소니-감염된 혈청 샘플. "Sj" = 에스. 자포니쿰(S. japonicum)-감염된 혈청 샘플. "비-end. -ve" = 이 연구에서 이전에 사용된 비-엔데믹 지역으로부터의 혈청 샘플.

본 발명은 부분적으로 쉬스토소마 헤마토비움에 대한 항체의 검출 및/또는 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플, 예컨대 혈청 또는 소변에서의 쉬스토소마 감염의 진단에 유용한 단백질의 발견에 기반한다. 본 발명자들은, 실험적인 부분에 예시된 바와 같이, 일부 특정 단백질이 생물학적 샘플, 예컨대 소변 또는 혈청을 사용하여, 쉬스토소마 헤마토비움 감염 시 숙주 면역 반응의 부분으로서 대상체에 의해 생산된 항체, 특히 IgG를 검출하는데 효율적으로 사용될 수 있다는 것을 입증하였다. 쉬스토소마 헤마토비움 전사체의 부분인 이들 단백질 각각은 큰 민감도 및 특이도로 감염된 숙주의 항체에 의해 인식되고, 심지어 이들의 소변에서 낮은 수의 기생충 충란을 갖는 환자에서도 에스. 헤마토비움 감염의 진단을 가능하게 하며, 그러므로 감염이 여전히 초기 단계에 있을 때 새로운 사례의 검출을 용이하게 한다. 또한, 이들 단백질은 다른 쉬스토소마 종으로 인한 감염의 결과로서 발생하는 항체보다 숙주, 특히 인간에서, 에스. 헤마토비움 감염의 결과로서 발생하는 항체에 대해 더 높은 특이도를 갖는다. 본원에 개시된 단백질, 뿐만 아니라 그를 기반으로 하는 사용, 방법 및 키트는 그가 효율적인 치료 전략을 설계하는데 사용될 수 있다는 점에서 의사에 특히 유용한 특이적 및 초기 진단을 가능하게 한다.

본 발명은 따라서 단독으로 또는 조합되어 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 에스. 헤마토비움에 대해 지시된 항체의 존재를 검출하는 항원으로서 사용될 수 있고, 에스. 헤마토비움 감염을 진단하는데 사용될 수 있는 단백질에 관한 것이다. 본 발명은 본 발명을 시행하는데 유용할 수 있고 임의의 치료적 중재, 예컨대 예를 들어 에스. 헤마토비움 감염 또는 그와 연관된 감염을 위한 치료적 치료 전 예비 단계로서 사용될 수 있는 방법 및 키트를 제공한다.

본 발명은 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마 항체, 바람직하게는 항-쉬스토소마 헤마토비움 항체의 검출을 위한 및/또는 인간 대상체에서, 바람직하게는 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 쉬스토소마 감염을 진단하기 위한, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된, 바람직하게는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6 및 서열식별번호: 7로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질의 용도를 제공한다.

c. 상기 생물학적 샘플을 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질과 접촉시키는 단계;

d. 상기 생물학적 샘플에서, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 존재 및/또는 양을 결정하는 단계.

바람직하게는, 적어도 1종의 단백질은 단리된 또는 재조합체 단백질, 보다 바람직하게는 재조합체 단백질이다. "재조합체 단백질"에 의해 유전자 조작 및/또는 재조합 기술에 의해 생산된 단백질이 본원에서 지칭된다. 간단하게, 재조합 기술에 의해 단백질을 발현하는 경우, 단백질-코딩 뉴클레오티드 서열은 발현 시스템, 예컨대 적합한 세포-무함유 시스템 또는 세포 시스템에서 발현을 조절할 수 있는 프로모터 또는 다른 조절 서열과 작동가능하게 연결되도록 배치되고, 발현 시스템은 발현이 발생하기에 충분한 시간 동안 및 조건 하에 배치된다. 대안적으로, 단리된 단백질은 고체상 합성, 예컨대 일반적으로 문헌 [Merrifield, J. Amer. Chem. Soc, 85:2149-54 (1963)]에 의해 기재된 것을 사용하여 제조될 수 있지만, 관련 기술분야에 공지된 다른 동등한 화학적 합성이 또한 사용될 수 있다. 고체상 펩티드 합성은 보호된 아미노산을 적합한 수지에 커플링함으로써 펩티드의 C-말단 (또는 N-말단)으로부터 개시될 수 있다.

바람직하게는, 적어도 1종의 단백질은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6 및 서열식별번호: 7로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진, 바람직하게는 이로 이루어진 서열을 갖는다. 보다 바람직하게는, 적어도 1종의 단백질은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 6으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진, 바람직하게는 이로 이루어진 서열을 갖는다.

유리하게, 검출 및/또는 진단의 특이도 및 민감도를 증가시키기 위해, 본 발명의 용도 및/또는 방법에서 2종 이상의 본원에 정의된 바와 같은 단백질이 사용된다. 바람직하게는, 이들 실시양태에서, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 2종의 단백질이 사용된다. 더욱 바람직하게는, 이들 실시양태에서, 적어도, 서열 서열식별번호: 1 또는 서열 서열식별번호: 6을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 단백질, 및 서열 서열식별번호: 2 또는 서열 서열식별번호: 7을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 단백질이 사용된다.

본 발명의 단백질의 서열 또는 구조는, 예를 들어 N-말단 또는 C-말단 서열의 부가, 또는 관심 분자에의 접합에 의해 본 발명의 방법 및 키트에서의 이들의 사용을 용이하게 하도록 변형될 수 있다. 유리하게, 본 발명의 단백질은 언급된 서열을 포함하고 추가적인 N-말단 펩티드 서열 및/또는 추가적인 C-말단 서열을 추가로 포함한다. 이러한 실시양태에서, 추가적인 N- 말단 펩티드 서열 및/또는 추가적인 C-말단 서열은 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 20개의 아미노산을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 유리하게, 본 발명의 단백질은 리간드 또는 캐리어 단백질, 예컨대 예를 들어 비오틴, 아비딘, 스트렙타비딘, 뉴트라비딘 또는 혈청 알부민에 접합된다.

"생물학적 샘플"에 의해, 인간 대상체로부터 수득된 샘플이 본원에서 지칭된다. 생물학적 샘플은 조직 및/또는 생물학적 유체를 포함할 수 있다. 이러한 샘플은 시험관내, 생체외 또는 생체내 수득될 수 있다. 비-제한적인 예로서, 생물학적 샘플은 인간 대상체의 조직, 기관, 세포, 또는 임의의 단리된 분획으로부터 선택될 수 있다. 생물학적 샘플은 또한 혈액, 혈장, 림프, 타액, 소변, 대변, 눈물, 땀, 정자, 또는 뇌척수액, 윤활막, 흉막, 복막, 또는 심막, 및 그의 임의의 분획 또는 추출물로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 생물학적 샘플은 IgG 항체를 포함하는 생물학적 유체이다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 인간에서, IgG 항체는 혈액, 혈청, 타액, 소변, 림프액, 뇌척수액 및 복막액에서 발견될 수 있다. 보다 바람직하게는, 생물학적 샘플은 혈액, 혈장, 혈청 및 소변이다. 더욱 더 바람직하게는, 생물학적 샘플은 혈청 및 소변으로 이루어진 목록으로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는, 생물학적 샘플은 혈청이다.

상기 샘플은 관련 기술분야에 공지된 임의의 기술에 의해 수득될 수 있다. 생물학적 샘플은 관심 항체의 온전성을 보존하고/거나 이들을 추가 분석을 위해 보다 접근가능하게 만들기 위해 미리-프로세싱될 수 있다. 생물학적 샘플은 예를 들어 항체, 특히 IgG에의 접근을 용이하게 하고/거나, 이들을 농축시키기 위해 원심분리, 정제, 또는 다른 처리 단계를 겪을 수 있다. 생물학적 샘플은 또한 본 발명의 단백질과 비-특이적 방식으로 반응하는데 영향을 받기 쉬운 항체, 특히 IgG의 존재를 제한하거나 또는 낮추기 위해 미리-프로세싱될 수 있다. 생물학적 샘플은 예를 들어 사전-흡수 단계를 겪을 수 있고, 여기서 본 발명의 단백질이 재조합 생산되는 생물학적 종에 대해 반응하는 비-특이적 항체는 생물학적 샘플로부터 제거되거나 또는 차단된다. 이러한 사전-흡수 단계는 생물학적 샘플을 본 발명에 따른 단백질이 생산되고 있는 유기체로부터의 샘플 또는 추출물과 접촉시킴으로써 시행될 수 있다. 예를 들어, 생물학적 샘플은, 특히 본 발명의 단백질이 이. 콜라이에서 생산된 재조합체 단백질일 때, 이. 콜라이 용해물과 접촉됨으로써 항-이. 콜라이 항체에 대해 미리-흡착될 수 있다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 방법에서, 항체의 존재 및/또는 양은 IgG 항체의 존재 및/또는 양을 지칭한다.

항체와 관련하여 사용된, "결합할 수 있는"에 의해, 면역원성 검정의 통상적인 실험적인 조건 하에 정의된 단백질에 결합할 수 있는 항체가 본원에서 지칭된다. 바람직하게는, 항체는 본원에 정의된 바와 같은 적어도 1종의 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 정의된 단백질에 "특이적으로 결합하는" 항체는 항체-단백질 복합체의 검출을 허용하는데 충분한 양으로 및 시간 동안, 그와의 물리적 회합을 형성하거나 또는 겪는다. "특이적으로" 또는 "우선적으로"에 의해, 항체가 다른 단백질, 예컨대 예를 들어 생물학적 샘플에 함유된 다른 단백질보다 정의된 단백질에 대해 더 높은 친화도를 갖는다는 것이 의미된다. 본 발명의 맥락에서, 항체를 지칭할 때 용어 "친화도"는 상기 항체가 정의된 단백질, 또는 그의 부분에 결합하는 힘을 지정하고, 항체와 그의 항원 사이의 친화도 상수 (1/K_D로서 정의되며, 여기서 K_D는 전형적으로 정의된 바와 같은 해리 상수임)에 의해 측정되고 반응 속도 상수의 측정은 평형 또는 친화도 상수 (1/K_D)를 정의하는데 사용될 수 있다. 그의 표적에 대한 항체의 친화도는 따라서 해리 상수와 역 상관관계가 있고, 즉 K_D 값이 더 작을수록 그의 표적에 대한 항체의 친화도는 더 크다. 예를 들어, 항체는 샘플에서의 다른 단백질보다 정의된 단백질에 대해 적어도 약 1.5-배, 2-배, 2.5-배, 3-배, 또는 그 초과 더 높은 친화도를 가질 수 있다. 이러한 친화도 또는 특이도의 정도는 경쟁적 결합 검정을 포함하는 다양한 일상적인 절차에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 본 발명의 단백질이 항-쉬스토소마 항체에 특이적으로 결합하는 능력에 대해 선택되었고, 즉 본 발명의 단백질이 인간 생물학적 샘플에 존재하는 다른 항체보다 항-쉬스토소마 항체, 및 특히 항- 쉬스토소마 헤마토비움 항체에 대해 더 큰 친화도를 갖는다는 것이 이해되어야 한다.

대상체로부터의 생물학적 샘플에 존재하는 항체와 관련하여, "존재 및/또는 양을 결정하는"에 의해, 조사 하에 특이적 항체의 존재의 정성적 또는 정량적 결정이 본원에서 지칭된다. 어구, 예컨대 "항체를 포함하는 샘플" 또는 "샘플에서 항체의 존재 및/또는 양을 결정하는"은 항체가 함유되거나 또는 검출되지 않는 샘플 또는 결정을 배제하는 것으로 의미되지 않는다. 일반적인 의미에서, 본 발명은 쉬스토소마, 특히 에스. 헤마토비움으로의 감염에 대한 숙주의 면역 반응의 부분으로서 항체가 샘플에 존재하는지 여부를 결정하는 검정을 수반하고, 따라서 이러한 항체가 샘플에 존재하거나 또는 검출되지 않은 상황을 배제하는 것을 가장하지 않는다. 본 발명의 맥락에서, 본 발명에 정의된 바와 같은 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 존재 및/또는 양은 단백질 검출 칩, 비드-기반 검정, 측면 유동 장치, 및 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 분야에 공지된 임의의 적절한 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 바람직하게는, 생물학적 샘플에서의 항체의 존재 및/또는 양은 면역검정, 보다 바람직하게는 항원-기반 면역검정에 의해 검정된다. 이러한 검정은 전형적으로 단백질/항체 복합체 형성의 정량적 검출을 허용하고, 추가로, 실험적인 조건은 단백질/항체 복합체 형성이 존재가 본 발명에 따른 적어도 1종의 단백질과 결정되어야 하는 항체 사이의 특이적 결합으로부터의 검출된 결과인 것을 보장하기 위해 용이하게 설정될 수 있다.

본 발명의 맥락에서, 용어 "면역검정"은 관련 기술분야에서 일반적으로 이해되는 것, 즉 면역학적 시약, 통상적으로 항체와 그의 리간드 사이의 상호작용에 기반하여 분석물을 검출하거나 또는 측정하는 것으로 의도되는 검정을 지칭하는 것으로 해석되어야 한다. 명확성을 위해, 용어 "항원-기반 면역검정"은 본원에서 하나의 또는 여러 항원이 항체인 분석물을 검출하고/거나 정량화하는 시약으로서 사용되는 면역검정을 지칭한다. 명확성을 위해, 용어 "항체-기반 면역검정"은 하나의 또는 여러 항체가 항원인 분석물을 검출하고/거나 정량화하는 시약으로서 사용되는 면역검정을 지칭한다. 전형적으로, 항원-기반 면역검정의 경우에, 적어도 1종의 관심 항원은 고체 지지체 상에 고정화되고, 시험될 샘플은 샘플에서의 임의의 특이적 항체가 고정화된 항원에 결합하도록 하는 조건 하에 직접 접촉된다. 관심 항원에 결합할 수 있는 이러한 특이적 항체가 샘플에 존재하는 경우에, 복합체가 형성되고, 존재 및/또는 양은 직접적인 또는 간접적인 수단, 예컨대 예를 들어 2차 항체에 의해 검출될 수 있다.

예를 들어, 표준 고체 상 ELISA 및 측면 유동 면역검정은 항원-기반 면역검정 또는 항체-기반 면역검정을 수행하는데 사용될 수 있는 정량적 면역검정이고 다양한 환자 샘플로부터의 단백질 또는 항체의 양 또는 농도를 결정하는데 특히 유용하다. 이들 기술은 널리 공지되어 있고, 문헌에 철저히 기재되었고, 예를 들어 항원-특이적 효소-결합 면역흡착 검정 (항원-특이적 ELISA)은 문헌 [Engvall et al. (in The Journal of Immunology. 109 (1): 129-135 (1972))]에 의해 기재되었고 또한 측면 유동 시험으로 불리는 측면 유동 면역검정은 예를 들어 문헌 [Koszula and Gallotta (in Essays Biochem. 60(1):111-20 (2016))]에 의해 기재되었다.

바람직하게는, 항체의 존재 및/또는 양은 ELISA 또는 측면 유동 면역검정에 의해 검정된다. 바람직하게는, 본 발명에 정의된 바와 같은 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 존재 및/또는 양을 결정하는 단계는 본 발명의 적어도 1종의 단백질과 생물학적 샘플에 존재하는, 항체, 바람직하게는 IgG 사이에 형성된 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함한다.

바람직하게는, 본 발명의 적어도 1종의 단백질과 생물학적 샘플에 존재하는, 항체, 바람직하게는 IgG 사이에 형성된 복합체의 형성을 검출하는 단계는 또한 검출 항체로 불리는 2차 항체의 사용을 수반한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "2차 항체"는 생물학적 샘플에 존재하는 항-쉬스토소마 항체에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 항-인간 IgG 항체가 2차 항체로서 사용되고 본 발명의 적어도 1종의 단백질과 검정될 샘플에 존재하는 IgG 항-시소스토마(Schisostoma) 항체 사이에 형성된 복합체의 검출을 가능하게 할 수 있다는 것이 즉시 명백할 것이다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "항-인간 IgG 항체"는 인간 IgG 항체에 특이적인 항체, 즉 다른 인간 이뮤노글로불린에 대한 이들의 친화도보다 더 큰 친화도로 인간 IgG 항체에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 이러한 항-인간 IgG 항체는 전형적으로 면역검정에서 2차 항체로서 사용되고, 이들의 생산 및 사용은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 이들은 상업적으로 입수가능하다. 본 발명의 맥락에서, 상기 항-인간 IgG 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날일 수 있고, 대상체의 종 (즉 인간) 이외의 임의의 종, 예컨대 마우스, 래트 또는 염소로부터 비롯할 수 있다. 전형적으로 관련 기술분야에서 수행된 바와 같이, 항-인간 IgG 항체는 검출가능한 표지에 접합될 수 있다. 바람직하게는, 2차 항체는 항-인간 항체, 바람직하게는 항-인간 IgG 항체이다.

바람직하게는, 본 발명의 방법에서, 항체의 존재 및/또는 양은 면역검정, 바람직하게는 ELISA 또는 측면 유동 면역검정에 의해 검정되고, 항-인간 IgG 항체, 바람직하게는 검출가능한 표지에 접합된 항-인간 IgG 항체의 사용을 수반한다.

"검출가능한 표지"에 의해 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 전기적, 광학적 또는 화학적 수단에 의해 검출가능한, 분석물, 분석물 유사체, 검출 시약, 또는 결합 파트너에 결합된 분자 또는 조성물이 본원에서 지칭된다. 효소, 콜로이드 금 입자, 유색 라텍스 입자를 포함하는 표지의 예는 예를 들어 US 4,275,149, US 4,313,734, US 4,373,932 및 US 4,954,452에 개시되었다. 유용한 표지의 추가적인 예는, 제한 없이, 방사성 동위원소, 보조인자, 리간드, 화학발광 또는 형광 작용제, 단백질-흡착된 은 입자, 단백질-흡착된 철 입자, 단백질-흡착된 구리 입자, 단백질-흡착된 셀레늄 입자, 단백질-흡착된 황 입자, 단백질-흡착된 텔루륨 입자, 단백질-흡착된 탄소 입자, 및 단백질-커플링된 염료 주머니를 포함한다. 표지에의 화합물 (예를 들어, 검출 시약)의 부착은 킬레이트 등에서와 같이, 공유 결합, 흡착 공정, 소수성 및/또는 정전기 결합, 또는 이들 결합 및 상호작용의 조합을 통한 것일 수 있고/거나 연결 기를 수반할 수 있다. 바람직하게는, 검출가능한 표지는 형광단, 화학발광 및 방사성 표지로 이루어진 목록에서 선택된다. 적합한 표지의 예는 모두 면역검정에 통상적으로 사용된, 콜로이드 금, 형광단 (예컨대 예를 들어 형광 염료, 예컨대 FITC 또는 텍사스 레드, 형광 단백질, 예컨대 GFP, 또는 나노결정, 예컨대 큐닷(Qdot) 프로브) 또는 효소 (예컨대 예를 들어 홀스래디시 퍼옥시다제 (HRP)), 알칼리 포스파타제 (AP) 또는 β-갈락토시다제)를 포함한다.

본 발명의 맥락에서, 및 분야에서 통상적인 실시인 바와 같이, 관련 기술분야의 통상의 기술자는, 예를 들어 항-시소스토마 항체에 비-특이적인 단백질, 예컨대 예를 들어 소 혈청 알부민 (BSA)을 사용하고, 이러한 단백질을 검정될 샘플과 접촉시킴으로써 면역검정의 선택성 및 특이도를 보증하거나 또는 개선시키기 위해 면역검정의 조건을 설정할 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 항-시소스토마 항체에 비-특이적인 단백질은 항-시소스토마 항체에 특이적으로 결합할 가능성이 없는 단백질, 예를 들어 시소스토마 속 이외의 종으로부터의 단백질, 바람직하게는 흡충 이외의 종으로부터 비롯하는 단백질을 지칭한다.

본 발명의 맥락에서, 항-쉬스토소마 항체의 존재 및/또는 양을 결정하는 단계가 검정으로부터 생성된 데이터를 획득하는 단계, 및 상기 데이터를 항-쉬스토소마 항체의 존재 및/또는 양을 나타내는 정보로 표현하고/거나 계산하는 추가 단계를 포함할 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 예를 들어, 항-쉬스토소마 항체의 존재 및/또는 양을 결정하는 단계는 면역검정으로부터의 데이터, 예컨대 예를 들어 면역검정의 완료 후 샘플에서 검출된 검출가능한 표지의 수준에 대한 데이터를 획득하는 단계, 및 임의로 추가로 예를 들어 상기 데이터를 참조 값 또는 참조 값의 세트에 대해 비교함으로써, 이 데이터로부터 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마 항체의 존재 및/또는 양을 결정하는 단계를 포함할 수 있다. 참조 값 또는 참조 값의 세트는 미리결정된 값 또는 값의 세트, 예컨대 미리결정된 표준 값 또는 보정 목적을 위해 확립된 값의 세트일 수 있다.

실험적인 부분에 철저히 상술된 바와 같이, 본 발명자들에 의해 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서의 항- 쉬스토소마 IgG의 존재 및/또는 양이 상기 대상체에서의 쉬스토소마, 특히 쉬스토소마 헤마토비움 감염의 진단과 상관관계가 있다는 것이 확립되었다. 게다가, 본원에 개시되고, 본 발명의 항-쉬스토소마 항체의 검출을 위한 방법에 사용된 바와 같은 단백질은 쉬스토소마의 다른 종에 의한 숙주의 감염으로부터의 결과로서 생물학적 샘플에서 천연 발생한 인간 IgG 보다 항-쉬스토소마 헤마토비움 IgG에 대해 더 큰 특이도를 갖는다.

본원에 기재된 바와 같은 항-쉬스토소마 항체의 검출을 위한 방법이 쉬스토소마 감염, 특히 쉬스토소마 헤마토비움 감염 진단에 유용할 수 있고, 게다가 인간 대상체에서 쉬스토소마 만소니 또는 쉬스토소마 자포니쿰 감염으로부터 쉬스토소마 헤마토비움 감염을 구별하는데 유리하게 사용될 수 있다는 것이 즉시 명백할 것이다.

c. 대상체로부터의 생물학적 샘플을 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질과 접촉시키는 단계;

d. 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양을 결정하는 단계.

본원에 기재된 바와 같은 항-쉬스토소마 항체의 검출을 위한 방법과 관련하여 본원에 정의된 바와 같은 특색은 쉬스토소마 감염의 진단을 위한 방법에 적용된다. 바람직하게는, 항-쉬스토소마 항체의 검출을 위한 방법은 시험관내 방법이다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 쉬스토소마 감염의 진단을 위한 방법은 c) 단계 b)에서 결정된 양을 참조 샘플에 존재하는, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양과 비교하는 단계를 추가로 포함한다.

본 발명의 맥락에서, 참조 샘플에 존재하는, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양은 미리결정된 임계치 값일 수 있거나, 또는 상기 방법의 활성 단계로서 본 발명의 방법을 시행하는 과정에서 결정될 수 있다. 따라서, 실시양태에서, 본 발명에 따른 쉬스토소마 감염의 진단을 위한 방법은 c) 참조 샘플에 존재하는, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양을 결정하는 단계, 및 추가로 d) 단계 b)에서 결정된 바와 같은 항체의 양을 단계 c)에서 결정된 바와 같은 항체의 양과 비교하는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 참조 샘플은 쉬스토소마로 감염되지 않은 하나 이상의 대상체, 바람직하게는 쉬스토소마 헤마토비움으로 감염되지 않은 하나 이상의 대상체로부터의 생물학적 샘플로부터 유래된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 쉬스토소마 감염의 진단을 위한 방법은 단계 b)에서 결정된 바와 같은 양을 참조 임계치 값과 비교하는 단계를 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 참조 임계치 값은 바람직하게는 참조 샘플에 존재하는, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양이며, 여기서 참조 샘플은 쉬스토소마로 감염되지 않은 하나 이상의 대상체, 바람직하게는 쉬스토소마 헤마토비움으로 감염되지 않은 하나 이상의 대상체로부터의 생물학적 샘플로부터 유래된다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 쉬스토소마 감염의 진단을 위한 방법은 단계 c)의 비교 또는 단계 d)의 비교로부터 대상체에서의 쉬스토소마 감염의 존재 또는 부재를 진단하는 추가 단계를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 상기 진단하는 단계에서

―― 단계 c)에서 결정된 바와 같은 항체의 양 또는 참조 임계치 값보다 더 높은 단계 b)에서 결정된 양은 대상체에서의 쉬스토소마 감염의 존재를 나타내고,

―― 단계 c)에서 결정된 바와 같은 항체의 양 또는 참조 임계치 값보다 낮거나 또는 동일한 단계 b)에서 결정된 양은 대상체에서의 쉬스토소마 감염의 부재를 나타낸다.

보다 바람직하게는, 쉬스토소마 감염의 진단을 위한 방법에서:

―― 단계 c)에서 결정된 바와 같은 항체의 양 또는 참조 임계치 값은 참조 샘플에 존재하는, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양이며, 여기서 참조 샘플은 쉬스토소마 헤마토비움으로 감염되지 않은 하나 이상의 대상체로부터의 생물학적 샘플로부터 유래되고,

상기 진단하는 단계에서:

―― 단계 c)에서 결정된 바와 같은 항체의 양 또는 참조 임계치 값보다 더 높은 단계 b)에서 결정된 양은 대상체에서의 쉬스토소마 헤마토비움 감염의 존재를 나타내고,

―― 단계 c)에서 결정된 바와 같은 항체의 양 또는 참조 임계치 값보다 낮거나 또는 동일한 단계 b)에서 결정된 양은 대상체에서의 쉬스토소마 헤마토비움 감염의 부재를 나타낸다.

이용가능한 주혈흡충증 치료의 효능은 감염에 대한 원인이 되는 쉬스토소마 종에 따라 크게 달라진다는 것이 주목할 만하다. 예를 들어, 비록 프라지콴텔 및 옥삼니퀸이 쉬스토소마 만소니에 대한 효능과 관련하여 동등한 것으로 간주되지만, 옥사미니퀸은 쉬스토소마 헤마토비움에 의해 초래된 질환의 비뇨생식기 형태에 대한 효능이 결여된 것으로 제시되었다. 본 발명에 따른 쉬스토소마 헤마토비움 감염의 진단을 위한 방법은 치료적 치료를 설계하거나 또는 조정하기 위해, 치료적 중재 전 예비 단계로서 사용될 수 있다.

본 발명은 따라서 또한 하기 단계를 포함하는, 쉬스토소마, 바람직하게는 쉬스토소마 헤마토비움으로 감염된 대상체의 치료를 위한 방법을 제공한다:

본 발명의 맥락에서, 쉬스토소마 헤마토비움 감염에 적절한 치료적 치료는 프라지콴텔, 메트리포네이트, 알테수네이트 또는 메플로퀸을 포함한다. 바람직하게는, 쉬스토소마 헤마토비움 감염에 적절한 치료적 치료는 프라지콴텔, 메트리포네이트, 및 프라지콴텔 및 메트리포네이트, 알테수네이트 또는 메플로퀸로의 조합으로 이루어진 목록에서 선택된다. 더욱 바람직하게는 쉬스토소마 헤마토비움 감염에 적절한 치료적 치료는 프라지콴텔을 포함하거나 또는 이로 이루어진다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 키트는 검출가능한 표지에 접합된 항-인간 IgG 항체를 추가로 포함한다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 키트에서, 상기 적어도 1종의 단백질은 고체 지지체 상에 고정화된다.

"고체 지지체"에 의해 불용성이거나, 또는 후속 반응에 의해 불용성으로 제조될 수 있는 물질이 본원에서 지칭된다. 수많은 및 다양한 고체 지지체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 제한 없이, 니트로셀룰로스, 반응 트레이의 웰의 벽, 다중-웰 플레이트, 시험 튜브, 폴리스티렌 비드, 자기 비드, 막, 마이크로입자 (예컨대 라텍스 입자), 및 양 (또는 다른 동물) 적혈구를 포함한다. 검출 시약에 의한 접근을 허용하는데 충분한 공극률 및 포획 시약을 고정화시키는데 적합한 표면 친화도를 갖는 임의의 적합한 다공성 물질이 이 용어에 의해 고려된다. 예를 들어, 니트로셀룰로스의 다공성 구조는 광범위한 시약, 예를 들어, 포획 시약에 대한 훌륭한 흡수 및 흡착 품질을 갖는다. 나일론이 유사한 특징을 보유하고 또한 적합하다. 미세다공성 구조가 물질이 수화된 상태에서 겔 구조를 갖기 때문에 유용하다.

유용한 고체 지지체의 추가 예는 하기를 포함한다: 천연 중합체성 탄수화물 및 이들의 합성적으로 변형되거나, 가교되거나 또는 치환된 유도체, 예컨대 아가, 아가로스, 가교된 알긴산, 치환된 및 가교된 구아 검, 특히 질산 및 카르복실산과의 셀룰로스 에스테르, 혼합된 셀룰로스 에스테르, 및 셀룰로스 에테르; 가교된 또는 변형된 젤라틴을 포함하는, 질소를 함유하는 천연 중합체, 예컨대 단백질 및 유도체; 천연 탄화수소 중합체, 예컨대 라텍스 및 고무; 적합한 다공성 구조로 제조될 수 있는 합성 중합체, 예컨대, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리비닐클로라이드, 폴리비닐아세테이트 및 그의 부분적으로 가수분해된 유도체, 폴리아크릴아미드, 폴리메타크릴레이트, 상기 중축합물의 공중합체 및 삼량중합체, 예컨대 폴리에스테르, 폴리아미드, 및 다른 중합체, 예컨대 폴리우레탄 또는 폴리에폭시드를 포함하는, 비닐 중합체; 다공성 무기 물질, 예컨대 황산바륨, 황산칼슘, 탄산칼슘을 포함하는, 알칼리 토금속 및 마그네슘의 술페이트 또는 카르보네이트, 알루미늄 및 마그네슘을 포함하는 알칼리 및 알칼리 토금속의 실리케이트; 및 알루미늄 또는 산화규소 또는 수화물, 예컨대 점토, 알루미나, 활석, 고령토, 제올라이트, 실리카 겔, 또는 유리 (이들 물질은 상기 중합체성 물질을 갖는 필터로서 사용될 수 있음); 및 상기 부류의 혼합물 또는 공중합체, 예컨대 기존 천연 중합체 상에서 합성 중합체의 중합을 개시함으로써 수득된 그라프트 공중합체.

단백질은 이온 상호작용, 소수성 상호작용, 공유 연결에 의해 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 기질, 예컨대 예를 들어 폴리-리신에 흡착함으로써 고체 지지체 상에 고정화될 수 있다. 고체 지지체의 표면은 지지체에의 작용제 (예를 들어, 포획 시약)의 공유 연결을 초래하는 화학 공정에 의해 활성화될 수 있다.

달리 물리적으로 제한된 바를 제외하고, 고체 지지체는 임의의 적합한 형상, 예컨대 필름, 시트, 스트립, 또는 플레이트로 사용될 수 있거나, 또는 이는 적절한 불활성 담체, 예컨대 종이, 유리, 플라스틱 필름, 또는 직물 상으로 코팅되거나 또는 이에 연결되거나 또는 적층될 수 있다.

본 발명의 범주는 또한 특정 실시예의 하기 설명으로부터 명백할 것이다.

실시예

물질 및 방법

연구 설계 및 코호트

이 연구에 사용된 모든 샘플은 윤리적 승인된 이전 연구로부터 활용되었고 소변 샘플의 현미경 분석에 의해 결정된 바와 같은 충란 부담에 기반하여 계층화되었다 (고도, 10 ml 소변당 ≥50개의 충란; 또는 경도, 10 ml 소변당 1-49개의 충란). 충란-음성 샘플은 추가로 상향-전환 인광체 측면 유동 CAA 검정을 사용하여 순환 양극성 항원 (CAA)의 존재에 대해 시험되었고 (de Dood et al. Frontiers in immunology 2018; 9: 2635) 충란 음성/CAA 양성 또는 충란 음성/CAA 음성인 것으로 분류되었다. 단백질 어레이는 짐바브웨 및 가봉의 에스. 헤마토비움-엔데믹 지역으로부터의 혈청 및 소변 샘플로 프로빙되었다. ELISA는 짐바브웨 및 가봉으로부터의 혈청 샘플의 동일한 코호트 및 오직 짐바브웨로부터의 소변 샘플의 동일한 코호트 (가봉 소변 코호트는 어레이 프로빙으로부터 소진되었음)를 사용하여 수행되었다. 추가적인 ELISA 검증은 탄자니아합중국 잔지바르 제거 설정으로부터의 소변 샘플을 사용하여 수행되었다. 종 특이도 분석은 필리핀으로부터의 쉬스토소마 자포니쿰-감염된 샘플, 및 에티오피아로부터의 쉬스토소마 만소니-감염된 샘플을 사용하여 수행되었다. ICT 평가는 가봉 코호트로부터의 혈청 샘플로 수행되었다 (표 1).

인간 혈청 및 소변으로의 에스. 헤마토비움 단백질 어레이의 프로빙

어레이된 항원에 대한 혈청 IgG 반응은 항-인간 IgG-큐닷 접합체 (어레이 차단 완충제 중 1:100)가 2차/검출 항체로서 사용되었고 따라서 별개의 검출 시약과의 3차 인큐베이션이 필요하지 않았다는 것을 제외하고는 이전에 기재된 바와 같이 (Ochodo et al. Cochrane Database Syst Rev 2015; (3): CD009579) 인간 혈청 (어레이 차단 완충제/10% 이. 콜라이 용해물 중 1:50)으로의 프로빙에 의해 결정되었다. 소변 IgG 반응은 인간 소변 샘플이 먼저 15-배 농축되고 어레이 차단 완충제/10% 이. 콜라이 용해물 중에 1:5 희석되고 어레이에 적용되기 전에 PBS로 완충제-교환되었다는 것을 제외하고는 동일한 방식으로 프로빙 어레이에 의해 결정되었다.

에스. 헤마토비움 단백질 어레이 구축, 프로빙 및 분석

성체 에스. 헤마토비움 외피에 존재하는 단백질, 가용성 배설/분비 산물 (ES) 및 EV 뿐만 아니라 충란 단계로부터의 ES (Sotillo et al. PLoS Negl Trop Dis 2019; 13(5): e0007362), 및 에스. 만소니 주혈흡충 외피 단백체¹⁷의 에스. 헤마토비움 오르토로그는 어레이 상에 프린트하기 위해 선택되었다. 남은 단백질은 에스. 만소니 단백체 어레이로부터 선택된 단백질의 에스. 헤마토비움 오르토로그로 이루어졌다. 어레이 구축은 PCR을 사용하여 기생충 cDNA로부터 모든 유전자를 증폭시키는 대신에, 어레이된 단백질의 오픈 리딩 프레임이 상업적으로 합성되었다는 것을 제외하고는 이전에 기재된 바와 동일하였다. 기생충 추출물은 양성 대조군으로서 어레이 상에 포함되었다.

어레이된 항원에 대한 혈청 IgG 반응은 항-인간 IgG-큐닷 접합체 (어레이 차단 완충제 중 1:100)가 2차/검출 항체로서 사용되었다 것을 제외하고는 이전에 기재된 바와 같은 (Gaze et al. PLoS Pathog 2014; 10(3): e1004033) 인간 혈청 (어레이 차단 완충제/10% 이. 콜라이 용해물 중 1:50)으로의 프로빙에 의해 결정되었다. 소변 IgG 반응은 인간 소변 샘플이 먼저 15-배 농축되고 어레이 차단 완충제/10% 이. 콜라이 용해물 중에 1:5 희석되기 전에 PBS로 완충제-교환되었다는 것을 제외하고는 동일한 방식으로 프로빙 어레이에 의해 결정되었다.

에스. 헤마토비움 단백질 어레이 데이터 분석 및 생물정보학

혈청 및 소변으로의 프로빙 어레이로부터 생성된 데이터세트는 개별적으로 분석되었다. 각각의 점의 신호 강도 (SI)는 VSN 바이오컨덕터(Bioconductor) 패키지를 사용하는 GMine에서 분산 안정화 정규화 (vsn) 방법을 사용하여 배경 보정되고 변환되었다 (Proietti et al. Sci Rep 2016; 6: 38178). 항체 반응은 해당 단백질에 대한 모든 감염된 개체에 대한 평균 SI가 모든 비-엔데믹 음성의 SI의 평균 플러스 1.5 표준 편차 (SD)보다 더 큰 경우에 반응성인 것으로 간주되었다. 감염된 대 비-감염된 그룹에서의 항체 반응 사이 유의한 차이는 스튜던트 t-검정에 의해 결정되었다. 수신자-작동 특징 (ROC) 곡선 및 곡선하 면적 (AUC) 값은 ROCR R 패키지를 사용하여 각각의 항체 반응에 대해 생성되었고 이들 반응의 단백질 표적은 반응 유의성의 순서로 평가되었다.

진단 유체로서 혈청 또는 소변을 사용하여, 감염된 및 비-감염된 개체 사이를 가장 효과적으로 구별할 수 있는 항체 지표를 생산하는 항원의 세트가 확인되었다. 첫째로, 각각의 데이터세트에 대해, 비-감염된 집단과 비교하여 감염된 집단에서 유의하게 더 높은 항체 반응의 표적인 모든 항원이 선택되었다. 이들로부터, 30% 미만의 감염된 집단 및 30% 초과의 비-감염된 집단에서의 양성 빈도 (반응성)를 갖는 반응의 항원 표적은 또한 배제되었다. 이들 트리밍된 데이터세트에서의 항원은 감염된 및 비-감염된 집단 사이의 평균 SI에서의 최대 내지 최소 배수 변화 및 감염된 집단에서의 반응성 빈도에 의해 분류되었다. 각각의 데이터세트에서의 상위 5종의 항원이 서포트 벡터 머신 분류기를 설립하는데 사용되었으며, 그의 성능은 몬테 카를로 교차-검증에 의해 평가되었다 (Proietti et al. Sci Rep 2016; 6: 38178).

항체 지표 확인

진단 유체로서 혈청 또는 소변을 사용하여, 감염된 및 비-감염된 개체 사이를 가장 효과적으로 구별할 수 있는 항체 지표를 생산할 수 있는 항원의 세트가 확인되었다. 첫째로, 각각의 데이터세트에 대해, 감염된 및 비-감염된 집단 사이에 (다중 시험에 대한 보정 후) 유의하게 상향조절된 항체 반응을 유도하는 모든 항원이 선택되었다 (혈청, n = 208; 소변, n = 45). 이들로부터, 30% 미만의 감염된 집단 (혈청, n = 178; 소변, n = 7) 및 30% 초과의 비-감염된 집단 (혈청, n = 9; 소변, n = 13)에서의 양성 빈도 (반응성)를 갖는 항체 반응을 유도하는 항원은 또한 배제되었다. 이들 트리밍된 데이터세트에서의 항원 (혈청, n = 21; 소변, n = 25)은 감염된 및 비-감염된 집단 사이의 평균 SI에서의 최대 내지 최소 배수 변화 및 감염된 집단에서의 반응성 빈도에 의해 분류되었다. 각각의 데이터세트에서의 상위 5종의 항원이 서포트 벡터 머신 분류기를 설립하는데 사용되었으며, 그의 성능은 몬테 카를로 교차-검증에 의해 평가되었다. 반복하여, 15개의 샘플은 무작위로 훈련 세트로서 선택되었고 남은 샘플은 시험 세트로서 사용되었다. 모델은 이어서 훈련 데이터에 맞춰졌고, 샘플을 감염된 또는 비-감염된 것으로 분류하는데 있어 모델의 예측 정확도는 시험 세트를 사용하여 평가되었다. 이 공정은 4회 반복되었다. 모델의 예측 성능은 이어서 모든 4회의 몬테 카를로 교차-검증 실행에 걸친 ROC 곡선을 평균을 냄으로써 평가되었다.

EV-유래된 TSP의 선택

에스. 헤마토비움 EV 단백체에 존재하는 TSP는 풍부 (단백질 스펙트럼 계수)에 의해 분류되었다, 문헌에 보고된 진단 효능의 상동체를 갖는 가장 풍부한 TSP (n=3)가 추가 평가를 위해 선택되었다.

이. 콜라이에서의 재조합체 단백질 생산

면역 지표 및 EV 단백체 세트로부터 선택된 8종의 항원 (MS3_10385, MS3_10186, MS3_06193, MS3_01466, MS3_05950, MS3_09198, MS3_013701 및 Sh-TSP-2)는 이전에 기재된 바와 같이 이. 콜라이에서 발현되었다 (Pearson et al. PLoS Negl Trop Dis 2012; 6(X): e1564). MS3_06193, MS3_01466 및 MS3_05950의 발현 수율은 추가 개발을 보증하기에 너무 낮은 수준이었다.

혈청 및 소변 IgG 반응의 ELISA 검증

각각의 생물유체에서의 이. 콜라이-발현된 및 정제된 재조합체 단백질에 대한 IgG 반응은 ELISA에 의해 측정되었다. 플레이트 (그라이너(Greiner))는 항원으로 코팅되고, 혈청 (1:50)에 이어 염소 항-인간 IgG-HRP (시그카(Sigma), 1:5000)로 차단되고 프로빙되었고, TMB로 발생되었다. 각각의 항원에 대한 소변 IgG 반응은 소변 샘플이 1:10 희석되었다는 것을 제외하고는 유사한 방식으로 측정되었다. 다수의 항원에 대한 소변 IgG 반응은 동일한 방식으로 수행되었고 플레이트는 2 μg/ml로 희석된 항원으로 코팅되었다. 종 특이도 분석은 혈청 ELISA에 대해서와 같이 수행되었다. 검정은 삼중으로 수행되었고 블랭크-보정된 값은 Graphpad Prism 7을 사용하여 플롯팅되었다. 반응성 컷오프는 비-엔데믹 음성 그룹의 평균 플러스 3SD로서 결정되었다. ROC 곡선은 Graphpad Prism 7을 사용하여 생성되었다.

PoC-ICT의 파일럿 개발

PoC 시험 개발을 위해, 측면 유동 ICT가 설계되었다 (서브 사이언스(Serve Science), 태국 방콕). 접합체 패드는 금-접합된 마우스 항-인간 IgG의 10 OD로 코팅되었고, 재조합체 (1.0 mg/ml) MS3_01370.1 또는 Sh-TSP-2는 시험 라인에서 분무되었고 1.0 mg/ml 항-마우스 IgG는 대조군 라인에서 분무되었다. 혈청 (5 μl, 완충제 BS-007 중에 1:10 희석됨)은 샘플 저장소에 적용되었고, 3 방울의 완충제 BS-007은 샘플 저장소에 적용되었고 시험은 15분 후 판독되었다. 각각의 스트립에 대해, 시험 및 대조군 라인에서의 밴드는 양성 결과였고, 오직 대조군 라인에서의 밴드는 음성 결과였고 시험은 대조군 라인에서의 밴드가 없는 경우에 무효였다. 양성 시험에 대한 밴드 강도는 최대 (+4) 내지 최소 (+1) 강도의 4-점 척도에 대해 채점되었다. 0점은 음성 결과에 대해 제공되었다. 시험 결과는 2명의 독립적 및 맹검 조사자에 의해 확인되었다.

결과

수많은 어레이된 항원에 대한 혈청 및 소변 IgG 반응은 감염된 대 비-감염된 집단에서 유의하게 상승되었다 (혈청, n=208; 소변, n=45) (도 1A 및 B). 상위 20개의 가장 유의한 반응을 생산하는 항원이 열거되고 (표 2), 이들 다수는 단백체 연구에서 검출되고, 이들 중에서, 각각의 데이터세트 중 적어도 절반은 기생충 단백체의 EV 분획으로부터 확인되었다. 이들 상위 20종의 항원 중 7종 (35%)은 2개의 데이터세트 사이에서 공유되었다. 어레이를 프로빙하는데 사용된 모든 샘플로부터의 혈청과 소변 IgG 반응 사이에 유의한 상관관계가 있었으며 (R²=0.651, p<0.0001) (혈청, n=243; 소변, n=117), 이는 매치된 (n=17) 혈청 및 소변 샘플의 하위세트로부터의 반응 사이의 유의한 상관관계에 의해 지지된다 (R²=0.613, p<0.0001) (도 1C 및 D). 소변의 경우, IgG SI는 감염 강도와 유의하게 상관관계가 있었으나 (R²=0.234, p<0.05) 감염 강도와 혈청 IgG SI 사이에 상관관계가 없었다 (R²=0.087, p>0.05) (도 5).

감염된 및 비-감염된 집단 사이를 가장 효과적으로 구별할 수 있는 항체 지표는 혈청 또는 소변을 진단 유체로서 사용함으로써 확인되었다 (표 3). 이 세트로부터, 최소 4종의 항원이 어느 하나의 진단 샘플에서 0.98의 진단 정확도 (AUC)를 갖는 항체 지표를 생산할 수 있었다는 것이 결정되었다 (도 6). 이 반응의 표적인 항원은 IPSE (MS3_10186), 세르핀 (MS3_10385), 2종의 CD63-유사 TSP (MS3_09198 및 MS3_01370) 및 16 kDa 칼슘-결합 단백질 (MS3_05950)을 포함하였다. 다수의 이들 항원이 에스. 헤마토비움 EV 단백체로부터 확인되었다.

단백질 어레이 프로빙으로부터 확인된 항원의 진단 성능을 검증하기 위해, 면역 지표 또는 EV 단백체 세트로부터의 5종의 항원 (MS3_10385, MS3_10186, MS3_09198, MS3_01370 및 Sh-TSP-2)이 ELISA에 의해 IgG 반응을 측정하는데 사용되었다. 소변 IgG 반응은 추가로 에스. 헤마토비움에 대한 낮은 전파의 지역으로부터의 샘플을 사용하여 평가되었다 (Knopp et al. Lancet Glob Health 2019; 7(8): e1118-e29). 모든 재조합체 항원에 대한 혈청 항체 반응은 MS3_10186.1 및 MS3_09198.1을 제외하고, 모든 감염된 코호트에서 유의하게 반응성이었으며, 여기서 오직 고 및 중간 감염 강도 그룹에 대한 반응이 유의성에 도달하였다. 재조합체 항원 중에서, 충란 음성/CAA 양성 그룹 (가장 낮은 수준의 감염을 갖는 코호트)에서 가장 유의하게 반응성인 항체 반응은 Sh-TSP-2에 대한 것이었다. 정제된 재조합체 항원에 대한 항체 반응 중에서, 감염된 및 비-감염된 집단 사이를 구별하는 가장 큰 능력을 갖는 것 (조합된 짐바브웨 및 가봉 코호트 둘 다)은 MS3_0371 및 Sh-TSP-2에 대한 것이었으며, 각각 0.93 및 0.97의 AUC를 생성한다 (표 4). 감염된 집단 중에서 인식 빈도 (FoR) 패턴 분석은, 이들 분자의 높은 AUC 값과 일치하게, MS3_0170 및 Sh-TSP-2가 가장 빈번히 인식된 2종의 재조합체 항원이었고, 특히 Sh-TSP-2의 경우, 이는 보다 낮은 감염 강도를 갖는 개체에 의한 보다 큰 인식으로 인한 것이었다는 것을 밝혀냈다 (데이터는 제시되지 않음). 모든 재조합체 항원에 대한 특이도는 시험된 모든 코호트에서 모든 검정에 대한 엄격한 반응성 컷오프 세트 (모든 비-엔데믹 음성 샘플의 평균 + 3SD)로 인해 100%이었다.

표 4: ELISA에 의해 결정된 쉬스토소마 헤마토비움-엔데믹 집단으로부터의 개체의 혈청을 사용하는 항원의 진단 정확도.

고 및 중간 감염 강도 그룹에서의 모든 재조합체 항원에 대한 소변 IgG 반응은 대조군과 비교하여 유의하게 반응성이었다. 추가적으로, 저 및 충란 음성/CAA 양성 감염 강도 그룹 둘 다에서의 항-Sh-TSP-2 반응은 또한 대조군과 비교하여 유의하게 상승되었다 (도 3). 모든 재조합체 항원에 대한 항체 반응에 대한 AUC 값은 짐바브웨 코호트에서 높았고 (>0.89) Sh-TSP-2 (0.93)를 제외하고 모든 재조합체 항원에 대해 잔지바르에서의 제거 설정으로부터의 코호트에서 온건하였다 (0.57-0.69) (표 5).

표 5: ELISA에 의해 결정된 쉬스토소마 헤마토비움-엔데믹 집단으로부터의 개체의 소변을 사용하는 항원의 진단 정확도.

소변의 경우, Sh-TSP-2의 높은 진단 성능은 FoR 패턴 분석에 반영되었으며, 이는, 혈청 코호트에 대해, 저 감염 강도 그룹에서 시험된 모든 다른 것을 초과하는, 이 항원의 인식을 제시한다 (데이터는 제시되지 않음). 시험된 분자의 FoR 패턴에서의 차이를 고려하면, 항원의 다양한 조합은 이들 칵테일이 감염된 집단 중에서 보다 높은 양성률을 끌어내고 진단 성능을 증가시킬 것인지 여부를 관찰하기 위해 시험되었다. 모든 항원 조합은 대조군과 비교하여, 모든 감염된 코호트로부터 유의한 반응을 초래하였다 (도 7). 그러나, 이들 조합의 사용은 Sh-TSP-2 단독과 비교하여 감염된 집단에서의 AUC 또는 FoR 값의 증가를 초래하지 않았다 (표 6, 도 8). 혈청 ELISA에서와 같이, 시험된 모든 코호트에서의 모든 재조합체 항원에 대한 특이도는 절대적이었다.

표 6: ELISA에 의해 결정된 쉬스토소마 헤마토비움-엔데믹 집단으로부터의 개체의 소변을 사용하는 항원 조합의 진단 정확도.

에스. 만소니 또는 에스. 자포니쿰으로 단일-감염된 개체로부터의 혈청에서의 Sh-TSP-2 및 MS3_01370 (2종의 최고-성능 항원)의 인식의 정도. 두 항원은 에스. 자포니쿰 감염 및, Sh-TSP-2의 경우, 에스. 만소니 감염으로부터의 혈청 항체에 의해 유의하게 더 적은 정도로 인식되었다 (도 9).

마지막으로, Sh-TSP-2 및 MS3_01370의 진단 성능이 현장-적합성 포맷으로 번역될 수 있는지 여부가 평가되었다. PoC-ICT는 감염된 사람의 혈청에 존재하는 이들의 동족의 항체를 포획하고 검출하기 위해 시험 라인에서 코팅된 각각의 항원으로 설계되었다 (ICT 설계는 제조업체에 의해 권장된 바와 같이 이 유체와의 사용을 위해 최적화되었음). Sh-TSP-2 또는 MS3_01370으로 코팅된 ICT는 샘플링된 코호트로부터의 모든 수준의 감염 강도에서, 심지어 소변 여과에 의해 충란 음성이고 오직 CAA에 대해 양성인 개체에서 항체를 검출하였다 (각각 89% 및 75% 민감도). ICT의 두 세트는 100% 특이도를 표시하였으며, 시험된 모든 비-엔데믹 샘플에 대해 음성 결과를 반환한다.

SEQUENCE LISTING <110> ARES TRADING S.A. <120> PROTEINS FOR THE DETECTION OF SCHISTOSOMA INFECTION <130> P20-121 WO-PCT <150> EP20204189.3 <151> 2020 10 27 <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 345 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 1 Arg Thr Gly Tyr Gln Ile Gly Lys Thr Met Arg Leu Lys Ser Thr Ser 1 5 10 15 Ser Ser Trp Asn Ser Ser Glu Ala Gln Gln Glu Met Lys Ser Leu Tyr 20 25 30 Gln Glu Leu Asn Asn Ser Leu Thr Ser Glu Lys Thr Phe Leu Asn Glu 35 40 45 Lys Glu Glu Asn Val Val Arg Ile Ser Thr Gly Ile Phe Val Gln Lys 50 55 60 Thr Tyr Glu Val Glu Arg Arg Phe Thr Glu Ser Ile Ala Asn Asp Phe 65 70 75 80 Glu Gly Glu Leu Lys Gln Val Asp Phe Ser Gln Arg Thr Ser Ala Thr 85 90 95 Val Asp Ile Asn Asp Trp Val Asp Gln Gln Ser Asn Gly Leu Leu Glu 100 105 110 Lys Phe Phe Thr Asp Asp Ile Pro Asp Asp Thr Ala Met Ile Leu Val 115 120 125 Asn Val Phe Tyr Phe Arg Asp Phe Trp Gln Ser Pro Phe Glu Pro His 130 135 140 Tyr Thr Arg Met Glu Asn Phe Asp Ile Ser Ser Asp His Gln Ile Thr 145 150 155 160 Val His Met Met Thr Gln Glu Gly Val Met Lys Tyr Gly Lys Phe Glu 165 170 175 Asp Glu Gly Phe Glu Ile Val Ser Lys Pro Leu Asn Asn Thr Arg Phe 180 185 190 Thr Phe Val Ile Val Leu Pro Leu Glu Lys Trp Ser Leu Asn Gly Ala 195 200 205 Thr Glu Leu Leu Asn Gly Asn Lys Val Leu Ser Glu Tyr Val Lys Asn 210 215 220 Leu Lys Glu Thr Thr Val Ser Leu Arg Leu Pro Lys Phe Thr Leu Lys 225 230 235 240 Asn Thr Leu Asp Leu Val Pro Thr Leu Lys Ser Ile Gly Val Val Asp 245 250 255 Leu Phe Asp Pro Val Lys Ser Asp Leu Ser Gly Ile Thr Pro Asn His 260 265 270 Asn Leu Tyr Val Asn Lys Phe Ile Gln Thr Asn Val Phe Lys Leu Asn 275 280 285 Glu Ser Gly Ile Glu Ala Thr Thr Val Thr Ser Pro Ile Phe Val Pro 290 295 300 Ile Ser Ala Ile Ile Pro Glu Val Asp Phe His Val Thr His Pro Phe 305 310 315 320 Ile Cys Phe Ile Tyr Asp Gln Gln Leu Thr Met Pro Ile Met Ala Ala 325 330 335 Lys Val Met Asn Pro Ile Leu Gln Ser 340 345 <210> 2 <211> 112 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 2 Cys Lys Tyr Cys Leu Arg Leu Tyr Asp Gly Thr Tyr Glu Asn Gly Ser 1 5 10 15 Tyr Thr Asp Val Tyr Lys Ser Val Gly Ser Leu Ser Pro Pro Trp Ile 20 25 30 Pro Gly Ser Val Cys Val Pro Leu Ile His Asp Ser Lys Arg Gln Pro 35 40 45 Pro Tyr Trp Arg Leu Tyr Glu Asp Val Asn Tyr Ser Gly Lys Asp Thr 50 55 60 Ala Ile Gly His Gly Ala Cys Ile Asp Asp Phe Thr Lys Ser Gly Leu 65 70 75 80 Lys Arg Ile Ser Ser Ile Gln Lys Cys Val Tyr Gly Glu Asn Gly Met 85 90 95 Val Gln Cys Ile Ser Glu Ser Lys Arg Gly Arg Lys Tyr Cys Arg Tyr 100 105 110 <210> 3 <211> 74 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 3 Lys Asp Arg Ile Asp Ser Glu Ile Asp Ala Leu Met Thr Gly Ala Leu 1 5 10 15 Asp Lys Pro Thr Pro Glu Ile Thr Glu Phe Met Asp Leu Ile Gln Ser 20 25 30 Ser Phe His Cys Cys Gly Ala Lys Gly Pro Gln Asp Tyr Gly Pro Asn 35 40 45 Ile Pro Ala Ser Cys Arg Gly Glu Thr Thr Val Tyr His Glu Gly Cys 50 55 60 Val Pro Val Phe Gly Ala Phe Leu Lys Arg 65 70 <210> 4 <211> 81 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 4 Arg Asp Glu Val Lys Ser Gln Phe Leu Ser Leu Val Lys Ser Ser Val 1 5 10 15 Asn Glu Tyr Ser Lys Asn Pro Asp Phe Lys Asn Phe Leu Asp Lys Ile 20 25 30 Gln Gln Glu Phe Gln Cys Cys Gly Ser Glu Ser Ser Ser Asp Tyr Thr 35 40 45 Ser Ser Gly Gln Thr Val Pro Asp Ser Cys Lys Asp Thr Lys Thr Lys 50 55 60 Ala Ile Tyr Ser Asp Gly Cys Ser Tyr Lys Val Ile Ser Phe Phe Glu 65 70 75 80 Lys <210> 5 <211> 78 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 5 Glu Lys Pro Lys Val Lys Lys His Val Thr Asp Ala Leu Arg Glu Phe 1 5 10 15 Val Lys Glu Tyr Ser His Asp Glu His Val Ser Lys Val Leu Asp Glu 20 25 30 Val Gln Gln Lys Leu Gln Cys Cys Gly Ala Asp Ser Ser Lys Asp Tyr 35 40 45 Val Thr Pro Pro Pro Glu Ser Cys Phe Lys Asp Gly Gln Ile Phe Lys 50 55 60 Glu Gly Cys Val Lys Lys Val Ser Asp Leu Ser Lys Met His 65 70 75 <210> 6 <211> 225 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 6 Met Ala Ser Leu Ser Cys Gly Tyr Lys Cys Leu Gln Ile Leu Leu Val 1 5 10 15 Ile Phe Asn Ile Leu Val Phe Ala Cys Gly Ile Ala Leu Ile Val Ile 20 25 30 Gly Ser Leu Ser Gln Val Ala Ile Asn Asn Tyr Ser Ser Gly Ile Asp 35 40 45 Ser Ser Ile Lys Gly Leu Val Ile Phe Val Ile Val Leu Gly Cys Phe 50 55 60 Leu Phe Leu Leu Gly Phe Leu Gly Phe Cys Gly Ala Cys Thr Lys Asn 65 70 75 80 Thr Cys Cys Leu Ile Leu Tyr Ala Ile Leu Leu Ser Ile Met Val Ala 85 90 95 Ala Glu Ile Ala Ala Gly Ile Thr Ala Ala Val Leu Arg Asp Glu Val 100 105 110 Lys Ser Gln Phe Leu Ser Leu Val Lys Ser Ser Val Asn Glu Tyr Ser 115 120 125 Lys Asn Pro Asp Phe Lys Asn Phe Leu Asp Lys Ile Gln Gln Glu Phe 130 135 140 Gln Cys Cys Gly Ser Glu Ser Ser Ser Asp Tyr Thr Ser Ser Gly Gln 145 150 155 160 Thr Val Pro Asp Ser Cys Lys Asp Thr Lys Thr Lys Ala Ile Tyr Ser 165 170 175 Asp Gly Cys Ser Tyr Lys Val Ile Ser Phe Phe Glu Lys Tyr Ile Val 180 185 190 Ala Val Leu Val Ala Ala Phe Val Phe Ala Ile Leu Gln Leu Leu Cys 195 200 205 Ile Val Phe Ala Ile Cys Val Ile Arg Ala Ile Lys Ser Gly Asp Ser 210 215 220 Asp 225 <210> 7 <211> 219 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 7 Met Ala Leu Gly Cys Gly Tyr Lys Cys Ser Gln Cys Leu Leu Val Ile 1 5 10 15 Phe Asn Cys Gly Ala Phe Ile Cys Gly Leu Gly Leu Ile Val Val Gly 20 25 30 Ala Leu Gly Leu His Ser Val Val Asn His Trp Lys Asp Ile Glu Pro 35 40 45 Pro Leu Gln Ser Leu Ile Ile Phe Ile Ile Val Leu Gly Cys Phe Leu 50 55 60 Phe Val Leu Gly Ala Leu Gly Met Phe Gly Ala Cys Thr Lys Asn Val 65 70 75 80 Cys Leu Leu Thr Thr Tyr Cys Ile Leu Leu Ser Ile Leu Ile Val Ala 85 90 95 Glu Ile Ala Ala Gly Ile Phe Ala Ile Leu Glu Lys Pro Lys Val Lys 100 105 110 Lys His Val Thr Asp Ala Leu Arg Glu Phe Val Lys Glu Tyr Ser His 115 120 125 Asp Glu His Val Ser Lys Val Leu Asp Glu Val Gln Gln Lys Leu Gln 130 135 140 Cys Cys Gly Ala Asp Ser Ser Lys Asp Tyr Val Thr Pro Pro Pro Glu 145 150 155 160 Ser Cys Phe Lys Asp Gly Gln Ile Phe Lys Glu Gly Cys Val Lys Lys 165 170 175 Val Ser Asp Leu Ser Lys Met His Leu Asn Ala Ile Ile Ile Ser Val 180 185 190 Phe Leu Phe Ser Leu Val Gln Met Ile Cys Leu Val Phe Ala Val Cys 195 200 205 Val Leu Leu Ala Val Lys Arg Gly Asp Asp Glu 210 215 <210> 8 <211> 218 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 8 Met Ala Thr Leu Gly Thr Gly Met Arg Cys Leu Lys Ser Cys Val Phe 1 5 10 15 Val Leu Asn Ile Ile Cys Leu Leu Cys Ser Leu Val Leu Ile Gly Ala 20 25 30 Gly Ala Tyr Val Glu Val Lys Phe Ser Gln Tyr Gly Asp Asn Leu His 35 40 45 Lys Val Trp Gln Ala Ala Pro Ile Ala Ile Ile Val Val Gly Val Ile 50 55 60 Ile Leu Ile Val Ser Phe Leu Gly Cys Cys Gly Ala Ile Lys Glu Asn 65 70 75 80 Val Cys Met Leu Tyr Met Tyr Ala Phe Phe Leu Ile Ile Leu Leu Ile 85 90 95 Ala Glu Leu Ala Ala Ala Ile Val Ala Val Val Tyr Lys Asp Arg Ile 100 105 110 Asp Ser Glu Ile Asp Ala Leu Met Thr Gly Ala Leu Asp Lys Pro Thr 115 120 125 Pro Glu Ile Thr Glu Phe Met Asp Leu Ile Gln Ser Ser Phe His Cys 130 135 140 Cys Gly Ala Lys Gly Pro Gln Asp Tyr Gly Pro Asn Ile Pro Ala Ser 145 150 155 160 Cys Arg Gly Glu Thr Thr Val Tyr His Glu Gly Cys Val Pro Val Phe 165 170 175 Gly Ala Phe Leu Lys Arg Asn Leu Val Ile Val Ala Cys Val Ala Phe 180 185 190 Gly Val Cys Phe Phe Gln Leu Leu Ser Ile Val Ile Ala Cys Cys Leu 195 200 205 Gly Arg Gln Ile Lys Glu Tyr Glu Asn Val 210 215 <210> 9 <211> 372 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 9 Gly Gly Asp Asn Phe Leu Thr Cys Pro Leu Gly Ile Leu Phe Thr Leu 1 5 10 15 Gly Ile Leu Leu Gly Ser Gly Gly Ala Gln Gly Arg Thr Gly Tyr Gln 20 25 30 Ile Gly Lys Thr Met Arg Leu Lys Ser Thr Ser Ser Ser Trp Asn Ser 35 40 45 Ser Glu Ala Gln Gln Glu Met Lys Ser Leu Tyr Gln Glu Leu Asn Asn 50 55 60 Ser Leu Thr Ser Glu Lys Thr Phe Leu Asn Glu Lys Glu Glu Asn Val 65 70 75 80 Val Arg Ile Ser Thr Gly Ile Phe Val Gln Lys Thr Tyr Glu Val Glu 85 90 95 Arg Arg Phe Thr Glu Ser Ile Ala Asn Asp Phe Glu Gly Glu Leu Lys 100 105 110 Gln Val Asp Phe Ser Gln Arg Thr Ser Ala Thr Val Asp Ile Asn Asp 115 120 125 Trp Val Asp Gln Gln Ser Asn Gly Leu Leu Glu Lys Phe Phe Thr Asp 130 135 140 Asp Ile Pro Asp Asp Thr Ala Met Ile Leu Val Asn Val Phe Tyr Phe 145 150 155 160 Arg Asp Phe Trp Gln Ser Pro Phe Glu Pro His Tyr Thr Arg Met Glu 165 170 175 Asn Phe Asp Ile Ser Ser Asp His Gln Ile Thr Val His Met Met Thr 180 185 190 Gln Glu Gly Val Met Lys Tyr Gly Lys Phe Glu Asp Glu Gly Phe Glu 195 200 205 Ile Val Ser Lys Pro Leu Asn Asn Thr Arg Phe Thr Phe Val Ile Val 210 215 220 Leu Pro Leu Glu Lys Trp Ser Leu Asn Gly Ala Thr Glu Leu Leu Asn 225 230 235 240 Gly Asn Lys Val Leu Ser Glu Tyr Val Lys Asn Leu Lys Glu Thr Thr 245 250 255 Val Ser Leu Arg Leu Pro Lys Phe Thr Leu Lys Asn Thr Leu Asp Leu 260 265 270 Val Pro Thr Leu Lys Ser Ile Gly Val Val Asp Leu Phe Asp Pro Val 275 280 285 Lys Ser Asp Leu Ser Gly Ile Thr Pro Asn His Asn Leu Tyr Val Asn 290 295 300 Lys Phe Ile Gln Thr Asn Val Phe Lys Leu Asn Glu Ser Gly Ile Glu 305 310 315 320 Ala Thr Thr Val Thr Ser Pro Ile Phe Val Pro Ile Ser Ala Ile Ile 325 330 335 Pro Glu Val Asp Phe His Val Thr His Pro Phe Ile Cys Phe Ile Tyr 340 345 350 Asp Gln Gln Leu Thr Met Pro Ile Met Ala Ala Lys Val Met Asn Pro 355 360 365 Ile Leu Gln Ser 370 <210> 10 <211> 134 <212> PRT <213> Schistosoma haematobium <400> 10 Met Phe Leu Ile Ala Leu Leu Ser Tyr Thr Leu Ile Asn Gln Leu Gly 1 5 10 15 Ile Thr Lys Ser Asn Pro Cys Lys Tyr Cys Leu Arg Leu Tyr Asp Gly 20 25 30 Thr Tyr Glu Asn Gly Ser Tyr Thr Asp Val Tyr Lys Ser Val Gly Ser 35 40 45 Leu Ser Pro Pro Trp Ile Pro Gly Ser Val Cys Val Pro Leu Ile His 50 55 60 Asp Ser Lys Arg Gln Pro Pro Tyr Trp Arg Leu Tyr Glu Asp Val Asn 65 70 75 80 Tyr Ser Gly Lys Asp Thr Ala Ile Gly His Gly Ala Cys Ile Asp Asp 85 90 95 Phe Thr Lys Ser Gly Leu Lys Arg Ile Ser Ser Ile Gln Lys Cys Val 100 105 110 Tyr Gly Glu Asn Gly Met Val Gln Cys Ile Ser Glu Ser Lys Arg Gly 115 120 125 Arg Lys Tyr Cys Arg Tyr 130

Claims

인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마(Schistosoma) 항체의 검출을 위한 또는 인간 대상체에서 쉬스토소마 감염을 진단하기 위한, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질의 용도.
하기 단계를 포함하는, 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플에서의 항-쉬스토소마 항체의 검출을 위한 방법:
a. 상기 생물학적 샘플을 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질과 접촉시키는 단계;
b. 상기 생물학적 샘플에서, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 존재 및/또는 양을 결정하는 단계.
하기 단계를 포함하는, 인간 대상체에서의 쉬스토소마 감염의 진단을 위한 방법:
e. 대상체로부터의 생물학적 샘플을 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질과 접촉시키는 단계;
f. 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양을 결정하는 단계.
제1항 또는 제2항에 있어서, 항-쉬스토소마 항체가 항-쉬스토소마 헤마토비움(Schistosoma haematobium) 항체인 용도 또는 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 쉬스토소마 감염이 쉬스토소마 헤마토비움 감염인 용도 또는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 단백질이 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 6 및 서열식별번호: 7로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 것인 용도 또는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 2종의 단백질이 사용되는 것인 용도 또는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하기가 사용되는 것인 용도 또는 방법:
―― 서열 서열식별번호: 1 또는 서열 서열식별번호: 6을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 단백질, 및
―― 서열 서열식별번호: 2 또는 서열 서열식별번호: 7을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 단백질.
제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, c) 참조 샘플에 존재하는 상기 적어도 1종의 단백질에 결합할 수 있는 항체의 양을 결정하는 단계, 및 추가로 d) 단계 b)에서 결정된 바와 같은 항체의 양을 단계 c)에서 결정된 바와 같은 항체의 양과 비교하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 b)에서 결정된 바와 같은 양을 참조 임계치 값과 비교하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 용도 또는 방법을 위한, 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9 및 서열식별번호: 10으로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 서열을 갖는 적어도 1종의 단백질, 및 임의로 상기 적어도 1종의 단백질을 사용하는 방법에 관한 설명서가 있는 리플렛을 포함하는 키트.
제11항에 있어서, 상기 적어도 1종의 단백질이 고체 지지체 상에 고정화되는 것인 키트.
제11항 또는 제12항에 있어서, 검출가능한 표지에 접합된 항-인간 IgG 항체를 추가로 포함하는 키트.