KR20240077287A

KR20240077287A - 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR20240077287A
Application number: KR1020220159638A
Authority: KR
Inventors: 한상철; 오나영
Original assignee: 한상철
Priority date: 2022-11-24
Filing date: 2022-11-24
Publication date: 2024-05-31

Abstract

본 발명은 갈색거저리 추출물의 추출 공정에 관한 것으로, 갈색거저리 및 수크로오스 1 w/v% 내지 4 w/v%를 용매에 첨가하고 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및상기 혼합물에 유산균을 접종하고, 20℃내지 35℃, pH 5 내지 8에서 발효하는 단계;를 포함한다.
또한, 본 발명은 상기 추출 공정에 의해 제조된 갈색거저리 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

Description

갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물{EXTRACTION PROCESS OF TENEBRIO MOLITOR EXTRACT AND PHAMACEURICAL COMPOSITION FOR HAIR LOSS IMPROVEMENT CONTAININIG THE EXTRACT AS AN ACTIVE INGREDIENT}

본 발명은 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 유효성분의 함량이 기존의 갈색거저리 추출물에 비해 높아 모낭세포의 증식을 더욱 효과적으로 유도함으로써 탈모 치료제 또는 예방제로 사용될 수 있는 가능성을 향상시키는 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물에 관한 것이다.

탈모는 전 세계적으로 남녀 모두가 흔히 겪을 수 있는 질환으로서, 아직까지 탈모에 대한 명확한 원인은 규명되고 있지 않으며 최근 들어 오히려 탈모증으로 고민하는 사람이 점점 늘고 있으며 그 연령층도 낮아지고 있는 실정이다. 알려진 원인에 관하여서는 모근, 피지선 등의 기관에서 남성 호르몬의 작용설, 모낭(Hair follicle)의 혈류량 저하, 세균 번식이나 피지 분비 과다에 의한 두피 이상설, 유전적 요인 그리고 노화 등이 거론되어 왔다. 그 중 많이 논의되는 원인으로는 남성호르몬의 작용설로, 남성 호르몬인 디하이드로테스토스테론(DHT)이 안드로겐 수용체와 결합하여 피지의 생성 촉진과 모낭에 있는 세포들을 공격하여 탈모를 촉진시킬 수 있다.

탈모증의 치료법에 관해서도 아직까지 뚜렷한 효과를 지닌 것은 없으며, 동의보감에서는 신응양진단 등 탈모에 관계되는 몇몇 복용하는 처방들, 호마유(참깨) 등을 탈모 부위에 마사지하는 방법, 특정 한약처방을 주침(酒沈)해서 바르는 방법, 특정 혈위를 자극하는 방법 등이 소개되어 있지만 효과에 있어서는 개인적 차이가 많다고 알려져 있으며, 일반적으로 적용될 수 있는 신약 소재는 아직까지 보고되지 않고 있다.

또한, 모발을 이루는 성분이 케라틴 단백질이고 모낭세포의 건강이 탈모에 영향을 미칠 수 있으므로, 단백질 샴푸나 아미노산을 유효성분으로 다량 포함하는 테라피가 탈모 완화제로 사용될 수 있는 가능성에 대해서 활발히 논의되고 있으나, 그 중 표준화된 치료법은 아직 없다.

한편, 갈색거저리(Tenebrio molitor)는 딱정벌레목 거저리과(Mealworm beetle)에 속하는 곤충의 일종으로서, 갈색거저리의 애벌레는 흔히 밀웜(mealworm)이라 불리고 반려동물의 먹이와 식용 곤충으로 사용되고 있다. 갈색거저리는 단백질 함량이 높고, 그 유효성분이 항산화 항염, 및 탈모방지 효능을 갖는 것으로 알려져 있다.

식용곤충을 이용하여 탈모와 같은 피부 질환을 개선시키려는 시도는 계속 존재해왔고, 대한민국공개특허 제10-2021-0076247호에서는 흰점박이꽃무지(Protaetia brevitarsis) 유충의 단백 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 상처 치유, 탈모 치료, 또는 발모 촉진용 조성물을 개시하나, 단백질 가수분해효소를 이용하여 추출물을 단순 가수분해함으로써 유효성분인 저 분자량의 펩타이드를 추출하는 방법을 개시할 뿐 유산균을 이용한 사례는 개시하지 않는다.

종래의 기술은 발명자가 본 발명의 도출을 위해 보유하고 있었거나, 본 발명의 도출 과정에서 습득한 기술 정보로서, 반드시 본 발명의 출원 전에 일반 공중에게 공개된 공지 기술이라 할 수는 없을 것이다.

대한민국공개특허 제10-2021-0076247호(2021.09.28. 공개)

전술한 문제점을 해소함에 있어, 본 발명의 목적은 갈색거저리 추출물의 유효성분 함량을 증가시키는 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물을 제공함에 있다.

또한, 본 발명의 목적은 탈모 개선 효과 즉, 탈모 치료 또는 탈모 예방 효과를 강화시키는 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물을 제공함에 있다.

아울러, 본 발명의 목적은 갈색거저리 추출물이 천연 추출물로서 제조됨에 따라 독성이 없어 인체에 무해하고 모낭세포 증식 효능이 탁월하여 탈모 개선과 관련된 의약품, 의약외품, 건강기능식품, 화장품 등으로 다양하게 활용할 수 있는 가능성을 향상시키는 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 치료용 약학적 조성물을 제공함에 있다.

본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 것에 한정되지 않으며, 언급되지 아니한 다른 해결하고자 하는 과제는 이하의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 기술을 가지는 사람에 의하여 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명의 일 실시예에 따른 갈색거저리 추출물의 추출 공정은 갈색거저리를 유산균으로 발효시켜 유효성분을 추출한 갈색거저리 추출물을 제조하는 추출 공정을 제공한다.

일 구체예에서, 상기 갈색거저리 추출물의 추출 공정은 갈색거저리 및 수크로오스 1 w/v% 내지 4 w/v%를 용매에 첨가하고 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및 상기 혼합물에 유산균을 접종하고, 20℃내지 35℃, pH 5 내지 8에서 발효하는 단계;를 포함한다.

상기 갈색거저리는 동결건조물로서 분말화된 것일 수 있다.

상기 유산균은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토스바실러스 에시도 필러스(Lacto bacillus acidophilus), 락토스바실러스 불가리쿠스(Lacto bacillus bulgaricus), 스테푸토오 코커스 데레노필러스(Strepto coccus thernophilus), 비피도박테리움 롱금(Bifidobacterium longum), 또는 비피도박테리움 비피돔(Bifidobacterium bifidom)일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는 상기 유산균은 바실러스 서브틸리스일 수 있다.

상기 발효하는 단계는, 발효를 촉진시키기 위해 용매를 사용할 수 있고, 상기 용매는 바람직하게는 물일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 물에서 발효시 갈색거저리는 5 w/v% 내지 20 w/v%, 5 w/v% 내지 15 w/v%, 8 w/v% 내지 12 w/v%, 또는 10 w/v%로 사용될 수 있다.

상기 발효하는 단계는 발효를 촉진시키고 발효물의 단백질 함량을 높이기 위해, 첨가물을 추가할 수 있다.

상기 첨가물은 시트르산, 염화콜린, 아도니톨, 글루코오스, 글리세롤, 자일리톨, 또는 이들의 조합일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

일 구체예에서, 상기 첨가물은 시트르산 및 글루코오스의 조합일 수 있다. 이 경우, 시트르산과 글루코오스는 중량비로 1:0.8 내지 1:1.2, 또는 1:1일 수 있고, 시트르산 및 글루코오스 각각의 함량은 1 w/v% 내지 5 w/v%, 2 w/v% 내지 4 w/v%, 2.5 w/v% 내지 3.5 w/v%, 또는 3 w/v%일 수 있다.

일 구체예에서, 상기 첨가물은 시트르산 및 글루코오스의 조합에 염화콜린 및 글리세롤을 더 포함할 수 있다. 이 경우, 상기 염화콜린 및 글리세롤은 중량비로 1:0.8 내지 1:1.2, 또는 1:1일 수 있고, 각각의 함량은 1 w/v% 내지 5 w/v%, 2 w/v% 내지 4 w/v%, 2.5 w/v% 내지 3.5 w/v%, 또는 3 w/v%일 수 있다.

상기 유산균은 갈색거저리 중량을 기준으로 1 w/w% 내지 3 w/w%, 1.5 w/w% 내지 2.5 w/w%, 1.8 w/w% 내지 2.2 w/w%, 또는 2.0 w/w%으로 첨가하는 것일 수 있다.

상기 수크로오스는 1 w/v% 내지 4 w/v%, 1.5 w/v% 내지 3.5 w/v%, 2.0 w/v% 내지 3.5 w/v%, 2.5 w/v% 내지 3.5 w/v%, 2.8 w/v% 내지 3.2 w/v%, 또는 3 w/v%일 수 있다.

상기 발효시 온도는 20℃내지 35℃, 25℃ 내지 35℃, 28℃ 내지 32℃ 또는 30℃일 수 있다.

상기 발효시 pH는 pH5 내지 pH8, pH6 내지 pH8, pH6.5 내지 pH7.5, 또는 pH 7.0일 수 있다.

상기 발효하는 단계에서 기간은 7일 이상, 7일 내지 10일, 7일 내지 9일, 또는 8일 동안 발효하는 것일 수 있다.

상기 추출 공정에 따라 제조된 갈색거저리 추출물은 발효하는 단계에 의해 입자크기가 작아지게 됨으로써 피부에 흡수되어 모낭세포까지 전달되기 쉬운 분자량을 갖는 것을 특징으로 한다. 구체적으로 본 발명의 실시예에 따른 갈색거저리 추출물의 평균 분자량은 50kDa 내지 100 kDa, 60 kDa 내지 90 kDa, 65 kDa 내지 80 kDa, 또는 65 kDa 내지 75 kDa일 수 있다.

본 발명은 전술한 본 발명의 일 실시예에 따른 갈색거저리 추출물의 추출 공정에 의해 제조된 갈색거저리 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 용어 '개선'은 '치료' 또는 '예방'의 개념을 포함한다. 구체적으로, 상기 용어 '치료'는 상기 갈색거저리 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 질환의 증세가 호전되는 모든 행위를 의미한다. 상기 용어 '예방'은, 상기 갈색거저리 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 질환을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 조성물은 투여를 위하여, 상기 기재한 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기 담체, 보형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실 리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등 의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사 용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 상세하게는, 제형화 할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용 하여 조제될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 고형제제는 상기 갈색거저리 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 과제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로솔, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또 는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

본 발명의 조성물은 유효성분으로 포함되는 상기 갈색거저리 추출물이 천연 추출물로서 인체에 무해하기 하기 때문에 탈모 예방 또는 완화용 건강기능식품, 의약외품, 또는 화장품으로 이용될 수 있다.

상기 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색 제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일 주스 및 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 또한, 건강기능식품은 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피 자, 라면, 껌류, 아이스크림류, 스프, 음료수, 차, 기능수, 드링크제, 알콜 및 비타민 복합제 중 어느 하나의 형태일 수 있다.

또한 상기 건강기능식품은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, '식품첨가물'로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한 식품의약품안정청에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.

상기 '식품첨가물공전'에 수재된 품목으로 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산 칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고랭색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제 제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류 등을 들 수 있다.

상기 의약외품은 액상, 크림상, 페이스트상, 또는 고체상 등 피부에 적용시킬 수 있는 제형으로 제조될 수 있다. 상기 제형이 액상인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 사용될 수 있다. 상기 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 사용될 수 있다. 상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있다. 특히 스프레이 제형인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르 등과 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물이 외용제로 사용되는 경우, 피부에 적용시킬 수 있는 외용제로 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있다. 예를 들어 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 킬레이트제, 살균제, 산화방지제, 방부제, 색소 및 향료 등으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 첨가제가 추가로 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장품으로 사용되는 경우, 헤어 또는 두피용 제품으로 제공될수 있다. 상기 헤어 또는 두피용 제품은 발모제, 두피클리닉제, 두피스케일링제, 두피마사지제, 두피케어제, 세정제, 샴푸, 토 닉, 헤어컨디셔너, 헤어로션, 젤, 팩, 크림, 에센스, 파우더, 스프레이, 오일, 비누, 연고, 헤어스타일링제, 염 모제 및 펌제 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

상술한 바와 같이, 본 발명에 의한 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물은 갈색거저리 추출물의 유효성분 함량을 증가시킨다.

또한, 본 발명에 의한 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물은 탈모 개선 효과 즉, 탈모 치료 또는 탈모 예방 효과를 강화시킨다.

아울러, 본 발명에 의한 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물은 갈색거저리 추출물이 천연 추출물로서 제조됨에 따라 독성이 없어 인체에 무해하고 모낭세포 증식 효능이 탁월하여 탈모 개선과 관련된 의약품, 의약외품, 건강기능식품, 화장품 등으로 다양하게 활용할 수 있는 가능성을 향상시킨다.

본 발명의 효과는 이상에서 언급한 것에 한정되지 않으며, 언급되지 아니한 다른 효과는 이하의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 기술을 가지는 사람에 의하여 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

도 1은 발효시 첨가한 당 농도에 따른 바실러스 서브틸리스 균주의 발효 일자별 DPPH 라디칼 소거 활성을 그래프로 비교한 결과를 나타내는 도면이다.
도 2는 추출물 제조시 사용된 첨가물의 조성에 따른 DPPH 라디칼 소거 활성화 정도를 그래프로 비교한 결과를 나타내는 도면이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 갈색거저리 추출물의 모유두세포 증식 유도 정도를 그래프로 비교한 결과를 나타내는 도면이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 갈색거저리 추출물의 분자량 측정 값을 나타내는 도면이다.

본 발명에 있어 첨부된 도면은 종래 기술과의 차별성 및 명료성, 그리고 기술 파악의 편의를 위해 과장된 표현으로 도시되어 있을 수 있다. 또한, 후술되는 용어들은 본 발명에서의 기능을 고려하여 정의된 용어로서, 사용자, 운용자의 의도 또는 관례에 따라 달라질 수 있으므로, 이러한 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 기술적 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 한편, 실시예는 본 발명의 청구범위에 제시된 구성요소의 예시적 사항에 불과하고, 본 발명의 권리범위를 한정하는 것이 아니며, 권리범위는 본 발명의 명세서 전반에 걸친 기술적 사상을 토대로 해석되어야 한다.

명세서 전체에서, 어떤 구성이 어떤 구성을 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한, 그 외 다른 구성을 제외하는 것이 아니라 다른 구성들을 더 포함할 수도 있음을 의미한다.

본 발명의 실시예의 특징을 보다 명확히 설명하기 위하여, 이하의 실시예가 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가지는 사람에게 널리 알려져 있는 사항들에 관해서 자세한 설명은 생략하기로 한다.

이하, 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.

[실시예 1] 발효 기간 및 당 첨가 조건에 따른 활성화도 비교

갈색거저리 추출물의 유산균 발효에 있어서, 당 첨가에 따른 활성화 정도를 비교하기 위해 상기 제조예 1의 제조과정 중 수크로오스를 0 w/v%, 3 w/v%, 및 5 w/v%으로 첨가하고 발효 기간을 증가시키며, 유효성분 추출 정도의 지표로서 라디컬 소거 활성 정도로 측정하였다.

활성도는 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼 소거 분석으로 측정하였고, 구체적인 분석 방법은 기존에 알려진 분석법에 근거하여 설정하였다(Hayes et al., 2002, Food. Chem. Toxicol., 40(4), 535). 증류수에 추출물 10w/w%과 0.2mM DPPH을 혼합하여 15분간 암실에서 반응 시킨후 517nm에서 Microplate reader(Epoch, BioTek)로 흡광도를 측정하였다. DPPH radical 소거능은 시료 첨가군와 비첨가군를 비교하여 free radical 소거능을 백분율로 나타내었고, 양성대조군으로는 ascorbic acid(Sigma)를 사용하였다.

그 결과, 수크로오즈 3 w/v%에서 발효시킨 경우 가장 높은 활성도를 보였고, 배양 8일차에 유효성분의 용출 및 발효 수준의 한계에 도달하는 것으로 확인되었다 (도 1).

[실시예 2] 추출물 제조시 첨가물 조건에 따른 단백질 추출량 비교 1

첨가물의 조건에 따라 단백질 함량이 변화할 수 있는지 확인하기 위해, 제조예 1에서 수크로오즈 농도는 3 w/v%로 하고, 사용되는 첨가물을 달리하여 갈색거저리 추출물을 제조하고 발효시킨 후 단백질 함량을 측정하였다.

첨가물의 조건은 하기의 표 1과 같다.

조성	첨가물
대조군	무첨가
A	Citric Acid 3 w/v% + Adonitol 3 w/v%
B	Choline chloride 3 w/v% + Glycerol 3 w/v%
C	Citric Acid 3 w/v% + D-(+)Glucose 3 w/v%
D	Choline Chloride 7.5 w/v% + Xylitol 3 w/v%
E	Choline Chloride 3 w/v% + D-(+)Glucose 3 w/v%

단백질 함량은 Lowry Method를 이용하여 측정하였다. 구체적으로, 수산화나트륨 0.8g을 증류수 100㎖에 녹이고, 탄산나트륨 4g을 첨가한 제1시약을 준비하고, 황산구리 2g을 증류수 100㎖에 녹인 용액과 주석산나트륨 4g을 증류수 100㎖에 녹인 용액을 1:1로 혼합한 제2시약을 준비하였다. 각 튜브에 시료 1㎖, 10% TCA 1㎖, 제1시약과 제2시약을 50:1로 혼합한 시약 1㎖를 넣고, 끓는 물에 15분 간 중탕한 후 상온에서 식히고 3,800rpm에서 20분간 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 그런 다음 증류수 2.5㎖ 및 페놀시액 0.5㎖를 넣어 30분간 방치하고 분광광도계를 이용하여 파장 750㎚에서 blank, 표준 희석액 및 흡광도를 측정하고 단백질 함량을 도출하였다.

구분	단백질의 양 (㎍)
대조군	1520.30
조성 A	3241.23
조성 B	4945.28
조성 C	8621.28
조성 D	4681.59
조성 E	1730.64

그 결과 상기 표 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 조성 C로 제조한 추출물에서 단백질 함량이 가장 높게 측정되었다.

[실시예 3] 추출물 제조 시 첨가물 조건에 따른 단백질 추출량 비교 2

상기 실시예 2의 결과에 기반하여 첨가물의 조건을 보다 다양화 하여, 단백질 함량 변화를 확인하였다. 제조예 1에서 수크로오즈 농도는 3 w/v%로 하고, 사용된 첨가물 조건은 조성 C를 기준으로 다른 첨가물 성분을 추가로 첨가한 것으로서 하기의 표 3과 같고, 단백질 함량은 실시예 2와 동일하게 측정하였다.

구분	첨가물
조성 F	(조성 A + 조성 C)Citric Acid 3 w/v% + Adonitol 3 w/v% + Citric Acid 3 w/v% + D-(+)Glucose 3 w/v%
조성 G	(조성 B + 용매 C)Choline chloride 3 w/v% + Glycerol 3 w/v% + Citric Acid 3 w/v% + D-(+)Glucose 3 w/v%
조성 H	(용매 C + 용매 D)Citric Acid 3 w/v% + D-(+)Glucose 3 w/v% + Choline Chloride 7.5 w/v% + Xylitol 3 w/v%
조성 I	(용매 C + 용매E)Citric Acid 3 w/v% + D-(+)Glucose 3 w/v% + Choline Chloride 3 w/v% + D-(+)Glucose 3 w/v%

그 결과 상기 표 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 용매 G로 제조한 추출물에서 단백질 함량이 가장 높게 측정되었다.

구분	단백질의 양 (㎍)
조성 F	8953.4
조성 G	10275.84
조성 H	8429.13
조성 I	8312.20

[시험예 1] 추출물 제조 용매 조건에 따른 활성화도 비교

단백질 함량이 활성도와 유관성이 있는지 확인하기 위해 상기 실시예 2 및 3에서 제조된 추출물들을 대상으로 DPPH 라디칼 소거 분석으로 활성도를 측정하였다. 시험방법은 실시예 1과 동일하게 수행하였다.

그 결과, 실시예 2 및 3의 결과와 일치하여, 조성 C의 첨가물을 넣고 제조된 추출물이 우수한 활성도를 보였고, 그 중 조성 G의 첨가물을 넣고 제조한 경우 가장 높은 활성화도를 갖는 것으로 확인하였다 (도 2).

[시험예 2] 모낭세포 증식 효과의 확인

상기 실시예에 방식으로 제조된 추출물을 이용하여 모낭세포의 증식 효과를 확인하였다.

세포독성은 조성 G의 조건으로 제조된 것만을 확인하였고, 구체적으로, Humam dermal papilla cell (HDPCs, 인간 모유두 세포) 는 Innoprot사 (Spain)로부터 구매하였고, 2Х10³cells/well로 96well cell culture plate (SPL Life Sciences) 에 12시간 배양한 뒤, 갈색거저리 추출물 (0.1, 0.5, 1, 5, 10 ng/mL) 과 vehicle (DW, 대조군) 을 처리하고 24시간 배양하였다. 그 후, 각 well 마다 10 ㎕ Ez-cytox cell viability assay reagent (WST-1 assay kit, DoGenBio, Seoul, Korea)를 넣고 2시간 동안 배양한 뒤, microplate reader (Sunrise??, Tecan, MaSwitzerland) 로 450 nm 흡광도를 측정하여 세포 생존률을 계산하였다.

모유두 세포의 증식 효과를 측정하기 위해, 24 well cell culture plate에 HDPCs를 4X10³씩 분주하여 24시간 배양한 후, 상기 추출물 중 실시예 3의 조성 G 조건으로 추출된 추출물을 20 μM/ml 의 농도로 처리하여 72시간동안 배양한 후 세포 수를 측정하고 추출물을 첨가하지 않은 대조군의 세포수에 대한 비율로 증식 효과를 산출하였다.

그 결과, 하기의 표 5와 같이 세포 독성은 확인되지 않았고, 도 3에서와 같이 실시예 3의 조성 G의 조건으로 제조된 추출물은 모유두 세포의 증식을 평균 3~9% 유도할 수 있는 것으로 관찰되었다.

[시험예 3] 갈색거저리 추출물의 분자량 확인

상기 실시예 결과를 바탕으로 제조예 1의 방법으로 추출하되, 수크로오스 3%와 조성 G의 조건으로 발효시킨 것이 가장 우수한 효과를 가진 것으로 확인된 바, 본 실시예에서 생산된 갈색거저리 추출물의 분자량을 확인하였다.

분자량 측정은 고분자의 분자량 분석에 흔히 사용되는 GPC(Gel Permeation. Chromatograph)를 이용하였고, 분석 조건은 하기의 표 6과 같고, 분자량 값을 표 7 및 도 4에 나타내었다.

Mn	Mw	Mp	Polydispersity	% Area
16375	69127	64181	4.221	100.00

그 결과, 조성 G의 조건으로 제조된 갈색거저리 추출물의 평균 분자량은 약70kDa인 69,127 Da으로서 피부에 흡수되기 좋은 수준인 것으로 확인되었다.

상술한 바와 같이, 본 발명은 실시예를 참고로 하여 설명되었으나 이는 예시적인 것에 불과하며, 당해 기술이 속하는 분야에서 통상의 지식을 기초로 다양한 변형 및 균등한 다른 실시예가 가능하다는 점을 이해해야 한다. 따라서 본 발명의 진정한 기술적 보호범위는 이하 기술할 청구범위에 의하며, 상술한 발명의 구체적 내용을 토대로 정해져야 할 것이다.

본 발명은 갈색거저리 추출물의 추출 공정 및 그 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물에 관한 것으로, 화장품 원료 또는 의약품 원료 등의 추출과 관련된 산업 분야에 이용 가능하다.

Claims

갈색거저리 및 수크로오스 1 w/v% 내지 4 w/v%를 용매에 첨가하고 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및
상기 혼합물에 유산균을 접종하고, 20℃ 내지 35℃, pH 5 내지 8에서 발효하는 단계;
를 포함하는 갈색거저리 추출물의 추출 공정.
제1항에 있어서, 상기 발효하는 단계는,
상기 혼합물에 시트르산 및 글루코오스를 더 첨가하도록 구성되는 것을 특징으로 하는 갈색거저리 추출물의 추출 공정.
제2항에 있어서, 상기 발효하는 단계는,
상기 혼합물에 염화콜린 및 글리세롤을 더 첨가하도록 구성되는 것을 특징으로 하는 갈색거저리 추출물의 추출 공정.
제2항에 있어서,
상기 시트르산 및 글루코오스의 중량비는 1:0.8 내지 1:1.2인 것을 특징으로 하는 갈색거저리 추출물의 추출 공정.
제3항에 있어서,
상기 염화콜린 및 글리세롤의 중량비는 1:0.8 내지 1:1.2인 것을 특징으로 하는 갈색거저리 추출물의 추출 공정.
제1항에 있어서, 상기 유산균은,
바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 락토스바실러스 에시도 필러스(Lacto bacillus acidophilus), 락토스바실러스 불가리쿠스(Lacto bacillus bulgaricus), 스테푸토오 코커스 데레노필러스(Strepto coccus thernophilus), 비피도박테리움 롱금(Bifidobacterium longum) 및 비피도박테리움 비피돔(Bifidobacterium bifidom)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 갈색거저리 추출물의 추출 공정.
제1항에 있어서, 상기 발효하는 단계는,
상기 혼합물을 7일 이상 발효하도록 구성되는 것을 특징으로 하는 갈색거저리 추출물의 추출 공정.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 의한 갈색거저리 추출물의 추출 공정으로 제조된 갈색거저리 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 개선용 약학적 조성물.