KR20250057777A - 돌연변이된 폴리펩티드, 이를 포함하는 조성물, 및 그 용도(mutated polypeptides, compositions comprising the same, and uses thereof) - Google Patents

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필립 알. 존슨
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인테리우스 바이오테라퓨틱스, 인코포레이티드
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Abstract

본원에서는 이종 바이러스 당단백질 및 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자가 제공되고, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 포함하는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 줄기 부분은 변이 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 줄기 부분은 유연한 폴리펩티드 도메인을 포함할 수 있다. 화학식 T-S1을 포함하는 표적화 모이어티는 바이러스 입자에 혼입되어 이러한 입자를 특정 세포 유형에 표적화하는 데 도움이 될 수 있다. 또한 본원에서는 동일한 것을 포함하는 조성물 및 동일한 것을 사용하는 방법이 제공된다.

Description

돌연변이된 폴리펩티드, 이를 포함하는 조성물, 및 그 용도(MUTATED POLYPEPTIDES, COMPOSITIONS COMPRISING THE SAME, AND USES THEREOF)
관련 출원
[0001] 본 출원은 2022년 7월 25일에 출원된 미국 특허 가출원 제 63/391,930호, 2022년 7월 25일에 출원된 미국 특허 가출원 제63/391,939호, 2023년 5월 23일에 출원된 미국 특허 가출원 제63/503,815호, 2023년 6월 13일에 출원된 미국 특허 가출원 제 63/507,783호의 혜택을 주장하며, 이들 각각은 본원에 전체적으로 참조로 포함된다.
전자적으로 제츨된 서열 목록에 대한 참조
[0002] 본 출원에는 XML 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록이 포함되어 있으며, 본원에서 그 전체가 참조로 포함된다. 2023년 7월 20일에 생성된 대응 XML 사본의 이름은 "INH-020WO_SL.xml"이고 크기는 114,351바이트이다.
분야
[0003] 본원에 제공된 구현예는 이종 바이러스 당단백질(heterologous viral glycoprotein)과 화학식 T-S1을 갖는 표적화 모이터티를 포함하는 바이러스 입자와 관련되며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분(stalk portion)이다. 줄기 부분은 변이 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 줄기 부분은 유연한 펩티드 도메인을 포함할 수 있다. 본원에 제공된 구현예는 또한 본원에 제공된 바이러스 입자를 포함하는 조성물 및 이를 사용하는 방법에 관한 것이다.
[0004] 수포구내염 바이러스(Vesicular stomatitis virus; VSV)는 랍도 바이러스 계통(Rhabdovirus family)의 베시큘로바이러스(Vesiculovirus) 속(genus)에 속하는 외피형 음성 가닥 RNA 바이러스(enveloped, negative-strand RNA virus)이다. 이는 곤충, 소, 말, 돼지를 감염시킬 수 있는 아르보바이러스(arbovirus)이다. VSV 게놈은 5개의 구조 단백질을 암호화하는데, 본원에는 단일 막관통 당단백질(single transmembrane glycoprotein)(G)이 포함된다. 이 당단백질은 아미노 말단 신호 펩티드, 약 450개 아미노산의 엑토도메인, 단일 알파 나선형 막관통 세그먼트 및 작은 바이러스 내 카복시-말단(carboxy-terminal) 도메인을 갖는 전형적인 I형 막 당단백질(classic type I membrane glycoprotein)이다. 신호 펩티드는 내질망(endoplasmic reticulum)의 루멘(lumen)에서 절단되고(cleaved), 본래의 성숙 당단백질은 엑토도메인, 막관통 도메인, 바이러스 내 도메인으로 구성된다.
[0005] G는 바이러스 감염의 초기 단계에서 중요한 역할을 한다(Albertini, A. A. V., Baquero, E., Ferlin, A., and Gaudin, Y. (2012). Molecular and Cellular Aspects of Rhabdovirus Entry. Viruses 4, 117-139.). 이는 본원에서 전문이 참조로 포함된다. 첫째, 특정 수용체에 바이러스가 부착되는 것을 담당한다. 결합 후, 바이러스는 클라트린 매개 세포 내포 경로(clathrin-mediated endocytic pathway)를 통해 세포로 들어간다. 세포 내 포낭(endocytic vesicle)의 산성 환경에서 G는 바이러스와 엔도솜 막(endosomal membranes) 사이의 융합을 촉발하여 감염의 후속 단계를 위해 세포질(cytosol)에 유전체를 방출한다. 융합은 둘 다 삼량체인 전향 후융합(pre-toward a post-fusion) 구성으로부터 저-pH-유도 대형 구조적 전이에 의해 촉매화되며(Roche, S., Bressanelli, S., Rey, F. A., and Gaudin, Y. (2006). Crystal structure of the low-pH form of the vesicular stomatitis virus glycoprotein G. Science 313, 187-191. Roche, S., Rey, F. A., Gaudin, Y., and Bressanelli, S. (2007). Structure of the prefusion form of the vesicular stomatitis virus glycoprotein g. Science 315, 843-848) 이들 각각은 본원에서 전체적으로 참조로 포함된다).
[0006] G 엑토도메인의 폴리펩티드 사슬은 융합 도메인(FD), 플렉스트린 호몰로지 도메인(PHD), 삼량체화 도메인(TrD)의 세 가지 별개의 도메인으로 접힌다. 구조적 전이 동안 FD, PHD 및 TrD는 3차 구조(tertiary structure)를 유지한다. 그럼에도 불구하고 낮은 pH 유도 구조 변화(Roche et al., 2006; Roche et al., 2007) 동안 다시 접히는 힌지 세그먼트(S1~S5)의 2차 변화로 인해 상대적 방향에서 큰 재배열을 겪는다.
[0007] 저밀도지단백질 수용체(low-density lipoprotein receptor; LDL-R)와 이 수용체 패밀리의 다른 구성원은 VSV 수용체 역할을 하는 것으로 나타났다(Finkelshtein, D., Werman, A., Novick, D., Barak, S., and Rubinstein, M. (2013). LDL 수용체와 그 패밀리 구성원들은 VSV에 대한 세포 수용체 역할을 한다(Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 110, 7306-731. 이는 본원에서 전문이 참조로 포함됨). VSV-G는 다른 바이러스의 유사형을 판별하는 데 사용될 수 있으며, VSV-G 유사형 렌티바이러스(VSV-G-LV)는 VSV와 동일한 광범위한 적응성(tropism)을 보인다. 그러나 이러한 광범위한 적응성은 특정 세포 유형을 선택적으로 표적화하는 것을 방해할 수 있다. 따라서 LDL 수용체와의 결합을 폐지하는 바이러스를 유사형화(pseudotype)하는 데 사용할 수 있는 변형된(돌연변이 또는 돌연변이) VSV-G 단백질이 필요하다. 본 구현예들은 이러한 필요성과 다른 필요성들을 충족한다.
[0008] 일부 구현예에서는 바이러스 입자(viral particle)가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 표적화 모이어티(targeting moiety)를 포함하며, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식(formula)을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다.
[0009] 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 변이 Fc 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 CD8 또는 CD28 막관통 도메인을 포함하되, 이에 제한되지 않는 막관통 도메인(transmembrane domain)을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질(variant Fc protein)은 효과기 돌연변이(effector mutation)를 포함하는데, 여기서 효과기 돌연변이는 Fc 단백질과 Fc 상호작용 단백질(예: FcγR, C1q, FcRβ 또는 FcRn) 간의 상호작용을 억제한다.
[0010] 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 변이 IgG1 Fc 단백질이다.
[0011] 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 104와 최소 80% 동일성, 서열 번호 104와 최소 85% 동일성, 서열 번호 104와 최소 90% 동일성, 서열 번호 104와 최소 95% 동일성, 서열 번호 104와 최소 98% 동일성, 또는 서열 번호 104와 최소 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[0012] 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 변이 IgG2 Fc 단백질이다.
[0013] 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 변이 IgG4 Fc 단백질이다.
[0014] 일부 구현예에서, T-S1 화학식을 갖는 표적화 모이어티는 L1-Fc-L2-X1 화학식을 갖는 줄기 부분 S1을 포함하며, 여기서 L1은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 변이 Fc 단백질이며, L2는 링커이거나 존재하지 않고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, T-S1 화학식을 갖는 표적화 모이어티는 T-L1-Fc-L2-X1화학식을 갖는다.
[0015] 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 ECD는 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 막관통 단백질의 막관통 도메인이고, ICD는 세포 내 도메인 또는 바이러스 입자의 외피(envelop)에 표적화 모이어티를 혼입하는 것을 용이하게 하는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 갖는 표적화 모이어티는 T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는다.
[0016] 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하며, 여기서 L3은 유연한 펩티드 링커이고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 T-S1의 화학식을 갖는 표적화 모이어티는 T-L3-X1의 화학식을 갖는다.
[0017] 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 ECD는 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 막관통 단백질의 막관통 도메인이고, ICD는 세포 내 도메인 또는 바이러스 입자의 외피에 표적화 모이어티를 혼입하는 것을 용이하게 하는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 T-L3-X1의 화학식을 갖는 표적화 모이어티는 T-L3-ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는다.
[0018] 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 30의 HCDR1, 서열 번호 31의 HCDR2, 서열 번호 32의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 폴리펩티드, 또는 이들 중 임의의 변이체(variant)를 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 33의 LCDR1, 서열 번호 34의 LCDR2, 및 서열 번호 35의 LCDR3, 또는 이들 중 임의의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄는 서열 번호 36과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 경쇄는 서열 번호 37과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CD7에 결합하는 표적화 모이어티는 서열 번호 38과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, CD7에 결합하는 표적화 모이어티는 서열 번호 39와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
[0019] 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 42의 HCDR1, 서열 번호 43의 HCDR2, 서열 번호 44의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 폴리펩티드, 또는 이들 중 임의의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 45의 LCDR1, 서열 번호 46의 LCDR2, 및 서열 번호 47의 LCDR3, 또는 이들 중 임의의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄는 서열 번호 48과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 경쇄는 서열 번호 49와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CD8에 결합하는 표적화 모이어티는 서열 번호 50과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, CD8에 결합하는 표적화 모이어티는 서열 번호 51과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
[0020] 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질(heterologous viral glycoprotein)은 본원에서 제공하는 바와 같은 SVCV-G 폴리펩티드다.
[0021] 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 VSV-G 폴리펩티드다. 일부 구현예에서, VSV-G 폴리펩티드는 서열 번호 2의 위치 I182, T214 및 T352에서 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 위치 182에서의 치환은 I182D 또는 I182E이다. 일부 구현예에서, 위치 214에서의 치환은 T214N이다. 일부 구현예에서, 위치 352에서의 치환은 T352A이다.
[0022] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 입자는 또한 관심 있는 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 있는 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 있는 이종 분자는 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 89와 최소 95% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 90과 최소 95% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항원 결합 도메인(antigen binding domain)을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 94와 최소 95% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역과 서열 번호 95와 최소 95% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 갖는 항원 결합 도메인을 포함한다.
[0023] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 92와 최소 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 93과 최소 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 96과 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 97과 최소 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 항원 결합 도메인을 포함한다.
[0024] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 최소 85% 동일성, 서열 번호 99와 최소 90% 동일성, 서열 번호 99와 최소 95% 동일성, 서열 번호 99와 최소 99% 동일성, 또는 서열 번호 99와 최소 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[0025] 일부 구현예에서는 세포를 감염시키는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 본원에서 제공하는 바와 같이 세포를 바이러스 입자와 접촉시키는 단계를 포함한다.
[0026] 일부 구현예에서는, 대상(subject)의 세포를 감염시키는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본원에서 제공하는 바와 같이 바이러스 입자를 포함하는 약학 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
[0027] 일부 구현예에서는, 관심 있는 이종 분자를 세포에 전달하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 본원에서 제공하는 바와 같이 세포를 바이러스 입자와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 바이러스 입자는 관심 있는 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다.
[0028] 일부 구현예에서는, 대상의 세포에 관심 이종 분자를 전달하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 본원에서 제공하는 바와 같이 대상에게 바이러스 입자를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 바이러스 입자는 관심 있는 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다.
[0029] 일부 구현예에서는 대상의 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 본원에서 제공하는 바와 같이 대상에게 바이러스 입자를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 바이러스 입자는 질환 또는 장애를 치료하기 위한 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다.
[0030] 일부 구현예에서는, 이종 분자를 표적 세포에 전달하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 본원에서 제공하는 바와 같이 세포를 바이러스 입자와 접촉시키는 단계를 포함하며, 여기서 바이러스 입자는 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다.
[0031] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 결합 도메인(targeting binding domain)은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 26의 변이체는 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 27의 변이체는 N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 28의 변이체는 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 또한 서열 번호 61 또는 서열 번호 62에서 선택된 서열을 포함하는 막관통 도메인을 포함한다.
[0032] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하며, 여기서 L1은 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 75 또는 서열 번호 76에서 선택된 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고, L2는 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 75 또는 서열 번호 76에서 선택된 서열을 포함하는 링커이거나, 존재하지 않으며, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 서열 번호 26의 변이체는 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 27의 변이체는 N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 28의 변이체는 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 59 또는 서열 번호 60에서 선택된 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나, 이의 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인이거나, 이의 단편이고, ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나, ICD는 존재하지 않는다.
[0033] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하며, 여기서 L1은 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고, L2는 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 서열 번호 26의 변이체는 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 27의 변이체는 N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 28의 변이체는 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 60의 서열을 갖는 세포 외 도메인 또는 이의 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인 또는 이의 단편이고, ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프(env incorporation motif)를 포함하거나, ICD는 존재하지 않는다.
[0034] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 23 또는 서열 번호 25에서 선택된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 39를 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하며, 여기서 L1은 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이고, Fc는 서열 번호 104의 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고, L2는 링커이며 존재하지 않고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 60의 서열을 갖는 세포 외 도메인이고, TM은 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인이고, ICD는 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함한다.
[0035] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공되는데, 여기서 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 표적화 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 98과 적어도 90% 동일성, 서열 번호 98과 적어도 95% 동일성, 서열 번호 98과 적어도 99% 동일성, 또는 서열 번호 98과 적어도 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[0036] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공되는데, 여기서 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 표적화 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 98과 적어도 90% 동일성, 서열 번호 98과 적어도 95% 동일성, 서열 번호 98과 적어도 99% 동일성, 또는 서열 번호 98과 적어도 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[0037] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L3-X1 화학식을 포함하며, 여기서 L3은 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57 또는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이거나, 이의 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이고, ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나, ICD는 존재하지 않는다.
[0038] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 50 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L3-X1 화학식을 포함하며, 여기서 L3은 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57 또는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이거나, 이의 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이고, ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나, ICD는 존재하지 않는다.
[0039] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52, 또는 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L3-X1 화학식을 포함하며, 여기서 L3은 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57 또는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이거나, 이의 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이고, ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나, ICD는 존재하지 않는다.
[0040] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52, 또는 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하며, 여기서 L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이거나, 이의 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이고, ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나, ICD는 존재하지 않는다.
[0041] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 23 또는 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하며, 여기서 L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이고, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이고, ICD는 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함한다.
[0042] 일부 구현예에서는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질과 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 52 또는 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하며, 여기서 L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드 링커이다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인(X1)을 포함하는 폴리펩티드는 ECD-TM-ICD의 화학식을 가지며, 여기서 ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이고, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이고, ICD는 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함한다.
[0043] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 입자는 관심 있는 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 있는 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 있는 이종 분자는 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 최소 85% 동일성, 서열 번호 99와 최소 90% 동일성, 서열 번호 99와 최소 95% 동일성, 서열 번호 99와 최소 99% 동일성, 또는 서열 번호 99와 최소 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[0044] 도 1A 및 도 1B는 LDL-R에 결합된 VSV-G의 결정 구조를 나타낸다. 도 1A는 LDL-R의 CR3에 결합된 VSV-G의 결정 구조를 나타낸다. 도 1B는 LDL-R의 CR2에 결합된 VSV-G의 결정 구조를 나타낸다.
[0045] 도 2A 및 도 2B는 VSV-G:LDL-R 결합 계면에 음전하 아미노산을 첨가한 것이 자연적 향성(native tropism) 및 융합성(fusogenicity)에 미치는 영향을 보여준다. 도 2A는 SupT1 세포에서 VSV-G 구조물의 적정(titration)을 보여준다. 도 2B는 도 2A의 적정에서 계산된 각 구조물의 기능적 역가(functional titer)를 보여준다.
[0046] 도 3은 다양한 균주의 다양한 VSV-G 단백질의 엑토도메인 정렬을 보여준다.
[0047] 도 4는 다양한 VSV-G 돌연변이가 CD7 바인더와 결합한 바이러스 구조의 혈청 안정성에 미치는 영향을 보여준다.
[0048] 도 5는 다양한 VSV-G 돌연변이가 CD7 바인더와 결합한 바이러스 구조의 혈청 안정성에 미치는 영향을 보여준다.
[0049] 도 6은 다양한 라브도바이러스(rhabdovirus) G 단백질이 단독으로 또는 CD7 바인더와 함께 SupT1 및 PBMC 세포에 형질도입(transduce)되는 능력을 보여준다.
[0050] 도 7A-L은 본원에 개시된 바와 같이 CD7 바인더를 포함하는 예시적인 벡터로 형질도입된(transduced) 인간 PBMC의 유세포 분석 데이터를 나타낸다.
[0051] 도 7M은 본원에 개시된 바와 같이 CD7 바인더를 포함하는 예시적인 벡터로 형질도입된 인간 PBMC의 유세포 분석 데이터를 보여준다.
[0052] 도 8A-L은 본원에 개시된 바와 같이 CD7 바인더를 포함하는 예시적인 벡터로 형질도입된 비인간 영장류 PBMC의 유세포 분석 데이터를 보여준다.
[0053] 도 8M은 본원에 개시된 바와 같이 CD7 바인더를 포함하는 예시적인 벡터로 형질도입된(transduced) 비인간 영장류 PBMC의 유세포 분석 데이터를 보여준다.
[0054] 도 9A는 본원에 개시된 바와 같이 CD8 결합제를 포함하는 예시적인 벡터로 형질도입된 인간 PBMC의 유세포 분석 데이터를 나타낸다.
[0055] 도 9B는 본원에 개시된 바와 같이 CD8 결합제를 포함하는 예시적인 벡터로 형질도입된 비인간 영장류 PBMC의 유세포 분석 데이터를 보여준다.
[0056] 도 10A는 변이된 Fc 줄기를 갖는 CD7 바인더를 함유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 SupT1 세포, 인간 및 비인간 영장류 PBMC를 형질도입(tranduce)시키는 능력을 보여준다. 도 10B는 CD7 바인더가 없는 경우 세포의 형질도입(transduction)을 설명한다. 도 10C는 SupT1 적정에서 계산된 MOI 측면에서 인간 및 비인간 영장류 PBMC의 형질도입을 설명한다. VSV-G*는 VSV-G(I182E, T214N, T352A)를 나타낸다.
[0057] 도 11A는 유연한 줄기를 가진 CD7 바인더를 함유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 SupT1 세포, 인간 및 비인간 영장류 PBMC를 형질도입시키는 능력을 보여준다. 도 11B는 CD7 바인더가 없는 경우 세포의 형질도입을 설명한다. 도 11C는 SupT1 적정에서 계산된 MOI 측면에서 인간 및 비인간 영장류 PBMC의 형질도입을 설명한다. VSV-G*는 VSV-G(I182E, T214N, T352A)를 나타낸다.
[0058] 도 12A는 길이가 다른 유연한 줄기를 가진 CD7 바인더를 함유하는 바이러스 입자가 다른 IgG 기반 바인더와 비교하여 SupT1 세포로의 형질도입 능력을 나타내는 도면이다. 도 12B는 다양한 길이의 유연한 줄기를 가진 CD7 바인더를 함유하는 바이러스 입자가 다른 IgG 기반 바인더와 비교하여 활성화된 PBMC 세포를 형질도입하는 능력을 보여준다.
[0059] 도 13A는 변이된 Fc 줄기를 갖는 CD7 바인더를 함유하는 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 입자가 SupT1 세포, 인간 및 비인간 영장류 PBMC를 형질도입시키는 능력을 보여준다. 도 13B는 CD7 바인더가 없는 경우 세포의 형질도입을 설명한다. 도 13C는 SupT1 적정으로부터 계산된 MOI를 기준으로 한 인간 및 비인간 영장류 PBMC의 형질도입을 설명한다.
[0060] 도 14A는 유연한 줄기를 가진 CD7 바인더를 함유하는 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 입자가 SupT1 세포, 인간 및 비인간 영장류 PBMC를 형질도입시키는 능력을 보여준다. 도 14B는 CD7 바인더가 없는 경우 세포의 형질도입을 설명한다. 도 14C는 SupT1 적정으로부터 계산된 MOI를 기준으로 한 인간 및 비인간 영장류 PBMC의 형질도입을 설명한다.
[0061] 도 15A-D는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자(패널 A 및 B)와 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 입자(패널 C 및 D)가 SupT1 세포와 인간 및 비인간 영장류 PBMC를 형질도입하는 능력을 비교한 것이다. VSV-G*는 VSV-G(I182E, T214N, T352A)를 나타낸다.
[0062] 도 16A-D는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자(패널 A 및 B)와 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 입자(패널 C 및 D)가 SupT1 세포와 인간 및 비인간 영장류 PBMC를 형질도입하는 능력을 비교한 것이다. VSV-G*는 VSV-G(I182E, T214N, T352A)를 나타낸다.
[0063] 도 17A는 활성화된 PBMC에서 WT-VSV-G에 의해 구동되는 GFP 전달을 제거하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자의 능력과 CD7 바인더를 포함시키면 GFP 형질도입이 회복되는 것을 보여준다. 도 17B는 VSV-G*, CD-7 바인더 유사형 렌티바이러스 입자에 의해 형질도입된 특정 세포 집단을 설명한다.
[0064] 도 18A 및 도 18B는 대조군 SupT1 세포와 비교하여 B-세포 세포주 패널에서 GFP의 오프 타겟 형질도입(transduction)을 비교한 것이다. 도 18A는 변이된 Fc 줄기를 갖는 CD7 바인더를 함유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자에 대한 데이터를 설명한다. VSV-G*는 VSV-G(I182E, T214N, T352A)를 나타낸다. 도 18B는 변이된 Fc 줄기를 포함하는 CD7 바인더를 함유하는 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 입자에 대한 데이터를 설명한다.
[0065] 도 19A 및 도 19B는 대조군 SupT1 세포와 비교하여 B-세포 세포주 패널에서 CAR20-T2A-GFP 구조의 오프 타겟 형질도입(transduction)을 비교한 것이다. 도 19A는 변이된 Fc 줄기를 갖는 CD7 바인더를 함유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자에 대한 데이터를 설명한다. VSV-G*는 VSV-G(I182E, T214N, T352A)를 나타낸다. 도 19B는 변이된 Fc 줄기를 포함하는 CD7 바인더를 함유하는 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 입자에 대한 데이터를 설명한다.
[0066] 도 20A 및 도 20B는 변이된 Fc 줄기를 갖는 CD7 바인더를 함유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자에 의한 오프 타켓 형질도입의 평가를 설명한다. 도 20A는 CD7 음성 B-세포 종양 세포주가 유사형 렌티바이러스 입자에 의해 형질도입되지 않았음을 보여준다. 도 20B는 B세포 악성 종양이 있는 환자로부터 분리된 1차 PBMC가 유사형 렌티바이러스 입자에 의해 형질도입되지 않았음을 보여준다.
[0067] 도 21A 및 도 21B는 대조군 SupT1과 비교하여 B-세포 세포주 패널에서 GFP의 오프 타겟 형질도입(transduction)을 비교한 것이다. 도 21A는 유연한 줄기를 가진 CD7 바인더를 함유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자에 대한 데이터를 설명한다. VSV-G*는 VSV-G(I182E, T214N, T352A)를 나타낸다. 도 21B는 유연한 줄기를 가진 CD7 바인더를 함유하는 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 입자에 대한 데이터를 설명한다.
[0068] 도 22A 및 도 22B는 대조군 SupT1과 비교하여 B-세포 세포주 패널에서 CAR20-T2A-GFP 구조의 오프 타겟 형질도입을 비교한 것이다. 도 22A는 유연한 줄기를 가진 CD7 바인더를 함유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자에 대한 데이터를 설명한다. VSV-G*는 VSV-G(I182E, T214N, T352A)를 나타낸다. 도 22B는 유연한 줄기를 가진 CD7 바인더를 함유하는 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 입자에 대한 데이터를 설명한다.
[0069] 도 23A-C는 본원에 제공된 CD20 CAR 구조체로 형질도입된 PBMC가 림프종 세포주를 사멸시키는 능력을 보여준다. 도 23A는 변이된 Fc 줄기를 가진 CD7 바인더를 보유한 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자에 의해 생성된 CAR 양성 PBMC의 분해를 보여준다. 도 23B는 CAR20 양성 PBMC가 Raji 림프종 세포를 사멸시키는 능력을 보여준다. 도 23C는 CAR20 양성 PBMC가 Daudi 림프종 세포를 사멸시키는 능력을 보여준다.
[0070] 도 24A 및 24B는 본원에서 제공하는 바와 같이 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진(transgene)을 이용하여 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 Daudi 림프종 세포(도 24A) 또는 Raji 림프종 세포(도 24B)를 사멸시키는 능력을 설명한다. CAR20 구조체(construct)는 본원에서 제공하는 바와 같이 리툭시맙 또는 CD20AB1 SEQ ID NO 92 또는 93을 포함하는 항원 결합 도메인을 활용했다.
[0071] 도 25A-C는 CAR-내성 B 세포 종양 생성 위험을 평가하기 위한 실험 결과를 보여준다. 도 25A는 실험 설계를 보여준다. 도 25B는 CAR20 양성 PBMC가 GFP 또는 CAR20 및 GFP를 발현하는 B 세포를 사멸시키는 능력을 보여준다. 도 23C는 나머지 세포의 GFP 평가 결과를 보여준다.
[0072] 도 26A 및 26B는 본원에 제공된 바와 같이 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진을 이용하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 huCD34 NSG 마우스에서 생체 내 B-세포를 고갈시키는 능력을 보여준다. B 세포는 CD20(도 26A) 또는 CD19(도 26B)에 대한 평가를 통해 검출되었다.
[0073] 도 27A 및 27B는 본원에서 제공하는 바와 같이 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진을 이용하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 huCD34 NSG 마우스에서 생체 내 B-세포를 고갈시키는 능력을 보여준다. 도 27A는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 CD20+ B 세포를 고갈시킬 수 있음을 보여준다. 도 27B는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자를 주입한 마우스에서 CAR20+ 세포가 생성되었으며, 이 세포는 연구 기간 동안 혈액 샘플에서 검출 가능했다.
[0074] 도 28A 및 28B는 본원에 제공된 바와 같이 CD7 바인더 및 CD20-CAR 트랜스진을 이용하여 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 생체 내에서 종양 형성을 예방하는 능력을 보여준다. 도 28A는 실험 설계를 설명한다. 도 28B는 Raji 종양 주입 전에 본원에 제공된 대로 i.v. 렌티바이러스 입자를 투여받은 마우스가 대조군(GFP) 벡터를 받은 마우스 또는 처리되지 않은 마우스보다 종양 부담이 상당히 낮았음을 보여준다. 종양 부담은 IVIS 이미징을 통해 측정되었다.
[0075] 도 29A-D는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 본원에서 제공하는 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진(transgene)을 활용하여 생체 내에서 확립된 Raji 종양을 제거하는 능력을 보여준다. 도 29A는 실험 설계를 설명한다. 도 29B는 Raji 종양 주입 후 6일 후에 본원에 제공된 대로 i.v. 렌티바이러스 입자를 투여받은 마우스의 종양 부담이 검출 한계 이하로 감소했음을 보여준다. 도 29C는 다양한 바이러스 농도를 사용한 유사한 연구의 결과를 보여준다. 도 29D는 가장 높은 바이러스 농도를 투여받은 마우스가 연구 기간 동안 혈액 샘플에서 검출 가능한 CAR20 양성 세포를 발생했음을 보여준다. IVIS 이미징을 통해 측정한 종양 부담.
[0076] 도 30A-F는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 본원에서 제공하는 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진을 활용하여 NHP에서 생체 내 B-세포를 고갈시키는 능력을 보여준다. 도 30A는 동물 1에 대한 데이터를 보여준다. 도 30B는 동물 2에 대한 데이터를 설명한다. 도 30C는 동물 3에 대한 데이터를 설명한다. 도 30D는 동물 4에 대한 데이터를 설명한다. 도 30E는 동물 5에 대한 데이터를 설명한다. 도 30F는 동물 6에 대한 데이터를 설명한다.
[0077] 도 31은 NHP의 PBMC에서 프로바이러스(provirus) DNA의 검출을 설명한다. 도 31의 동물은 도 30A-F와 동일한 동물에 대응한다.
[0078] 도 32A-F는 본원에서 제공하는 바와 같이 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진을 활용하여 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 NHP의 생체 내 B-세포를 고갈시키는 능력을 설명한다. 도 32A는 동물 1에 대한 데이터를 설명한다. 도 32B는 동물 2에 대한 데이터를 설명한다. 도 32C는 동물 3에 대한 데이터를 설명한다. 도 32D는 동물 4에 대한 데이터를 설명한다. 도 32E는 완충액만 받은 대조군 동물 1에 대한 데이터를 설명한다. 도 32F는 완충액만 받은 대조군 동물 2에 대한 데이터를 설명한다.
[0079] 도 33은 NHP의 PBMC에서 프로바이러스 DNA의 검출을 설명한다. 도 33의 동물은 도 32A-D와 동일한 동물에 대응한다.
[0080] 도 34A-H는 본원에서 제공하는 바와 같이 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진을 활용하여 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 NHP의 생체 내 B-세포를 고갈시키는 능력을 설명한다. 도 34A는 동물 1에 대한 데이터를 설명한다. 도 34B는 동물 2에 대한 데이터를 설명한다. 도 34C는 동물 3에 대한 데이터를 설명한다. 도 34D는 동물 4에 대한 데이터를 설명한다. 도 34E는 동물 5에 대한 데이터를 설명한다. 도 34F는 동물 6에 대한 데이터를 설명한다. 도 34G는 완충액만 받은 대조군 동물 1에 대한 데이터를 설명한다. 도 34H는 완충액만 받은 대조군 동물 2에 대한 데이터를 설명한다.
[0081] 도 35는 NHP의 PBMC에서 프로바이러스 DNA의 검출을 설명한다. 도 35의 동물은 도 34A-H와 동일한 동물에 대응한다.
[0082] 도 36A-D는 서로 다른 CD20 CAR 트랜스진을 받은 다양한 NHP 집단에서 CD20 CAR 특이적 면역 반응을 평가한 결과를 보여준다. 도 36A는 서열 번호 96의 항원 결합 도메인을 갖는 CD20 CAR 분자를 투여받은 동물의 혈장에서 항-CD20 특이 항체의 검출을 설명한다. 도 36B는 T 세포 반응의 지표인 서열 번호 96의 항원 결합 도메인을 갖는 CD20 CAR 분자를 투여받은 동물에서의 INF-γ 및 TNF-α 수준을 나타낸다. 도 36C는 서열 번호 92의 항원 결합 도메인을 갖는 CD20 CAR 분자를 투여받은 동물의 혈장에서 항-CD20 특이 항체의 검출을 설명한다. 도 36D는 T 세포 반응의 지표인 서열 번호 92의 항원 결합 도메인을 갖는 CD20 CAR 분자를 투여받은 동물에서의 INF-γ 및 TNF-α 수준을 나타낸다.
[0083] 도 37은 시노몰구스 마카크(cynomolgus macaque)에 대한 B세포 고갈 연구 결과를 보여준다. 이 데이터는 인간화 CAR 트랜스진에 면역 반응을 일으키지 않은 3개 동물로부터 얻은 것으로, 면역 반응이 없는 상황에서 본원에서 제공하는 대로 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진을 활용하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 B-세포의 지속적인 고갈을 자극할 수 있음을 나타낸다.
[0084] 도 38A-D는 본원에서 제공하는 바와 같이 CD7 바인더와 CD20-CAR 트랜스진을 활용하여 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 입자가 NHP의 생체 내 B-세포를 고갈시키는 능력을 설명한다. 도 38A는 동물 1에 대한 데이터를 설명한다. 도 38B는 동물 2에 대한 데이터를 설명한다. 도 38C는 완충액만 받은 대조군 동물 1에 대한 데이터를 설명한다. 도 38D는 완충액만 받은 대조군 동물 2에 대한 데이터를 설명한다.
[0085] 도 39는 NHP의 PBMC에서 프로바이러스 DNA의 검출을 설명한다. 도 39의 동물은 도 38A-D와 동일한 동물에 대응한다.
[0086] 본원에는 이종 바이러스 당단백질과 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자가 제공되며, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고, S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, S1은 예를 들어, 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인에 연결될 수 있는 돌연변이형 Fc 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, S1은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드를 포함한다. 돌연변이형 Fc 폴리펩티드나 유연한 폴리펩티드를 바이러스 입자에 혼입하면 바이러스 입자가 특정 세포 유형을 표적으로 삼는 것을 촉진하는 데 도움이 될 수 있다.
[0087] 또한, 바이러스 입자는 VSV-G 단백질을 포함할 수 있으며, 이를 사용하여, 예를 들어, 렌티바이러스와 같은 바이러스의 유사형을 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 유사형 바이러스 유사 입자는 수포성 구내염 뉴저지 바이러스 균주, 수포성 구내염 인디애나 바이러스 균주, 수포성 구내염 알라고아스 바이러스 균주, 수포성 구내염 마라바 바이러스 균주 또는 수포성 구내염 카라하스 바이러스 균주의 바이러스 당단백질을 사용하여 유사형화된다(pseudotyped). 이러한 단백질의 예는 본원에 제공된다.
[0088] 본원에 제공된 것과 같은 돌연변이 VSV-G 단백질을 포함하는 유사형 바이러스(pseudotyped viruses)는 표적화 모이어티와 함께 사용되어 세포 또는 조직에서의 표적의 발현을 기반으로 유사형 바이러스와 특정 세포 또는 조직의 융합을 용이하게 할 수 있다. 본원에 제공된 바와 같이, 표적화 모이어티는 Fc 단백질에 연결될 수 있으며, 이는 바이러스 표면에 표적화 모이어티가 부착되도록 하는 막관통 도메인을 포함하는 줄기 단백질(stalk protein)이라고 할 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 단백질은 본원에서 제공하는 것과 같은 Fc 효과기 돌연변이를 포함한다.
[0089] 달리 정의되지 않는 한, 모든 기술 및 과학 용어는 개시된 구현예가 속하는 기술 분야의 통상의 기술을 가진 자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
[0090] 본 문서에서 사용되는 용어 "a" 또는 "an"은 문맥상 명확히 달리 표시되지 않는 한 "적어도 하나" 또는 "하나 또는 그 이상"을 의미한다.
[0091] 본원에서 사용되는 용어 "약(about)"은 수치 값이 대략적이며 작은 변이가 개시된 구현예의 실시에 상당한 영향을 미치지 않음을 의미한다. 수치적 제한이 사용되는 경우, 맥락상 달리 표시되지 않는 한 "약"은 수치 값이 ±10%까지 달라질 수 있고 개시된 구현예의 범위 내에 유지될 수 있음을 의미한다. 또한, 문구가 "약 x에서 y"로 표현될 때 "약"이라는 용어는 x와 y를 모두 수식하며 문맥상 다르게 명시되지 않는 한 "약 x에서 약 y"라는 문구와 상호 교환하여 사용할 수 있다.
[0092] 본원에서 사용되는 "개인(individual)" 또는 "대상(subject)" 또는 "환자(patient)"라는 용어는 서로 바꿔 사용되며, 쥐, 래트(rat), 기타 설치류, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말 또는 인간과 같은 영장류를 포함한 포유류를 포함하는 모든 동물을 의미한다.
[0093] 본원에서 사용되는 용어 "포함하는(comprising)"(및 "포함하다", "포함한다", "포함된"과 같은 포함하는 것의 모든 형태), "갖는(having)"(및 "갖다", "갖는다"와 같은 갖는 것의 모든 형태), "포함하는(including)"(및 "포함하다", "포함한다"와 같은 포함하는 것의 모든 형태), 또는 "함유하는(containing)"(및 "함유하다", "함유한다"와 같은 포함하는 것의 모든 형태)은 포괄적이거나 개방적이며 추가적이고 언급되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다. "포함하다(comprise)" 또는 "포함하는"의 전환부를 사용하는 모든 단계 또는 구성은 "구성되는(consisting of)" 또는 "구성된다(consists)"의 전환부와 동일한 것을 설명하는 것으로도 말할 수 있다.
[0094] 본원에서 사용되는 용어 "접촉(contacting)"은 시험관 내 시스템 또는 생체 내 시스템에서 두 요소를 결합하는 것을 의미한다. 예를 들어, 본원에 설명된 바이러스 또는 벡터를 개인 또는 환자 또는 세포와 "접촉"하는 것은 바이러스를 인간과 같은 개인 또는 환자에게 투여하는 것뿐만 아니라, 예를 들어, 세포를 포함하는 세포 제제 또는 정제된 제제를 포함하는 샘플에 화합물을 도입하는 것을 포함한다.
[0095] 본원에서 사용되는 용어 "융합된(fused)" 또는 "연결된(linked)"은 서로 다른 도메인 또는 이종 서열을 갖는 단백질과 관련하여 사용될 때 단백질 도메인이 펩티드 결합 또는 기타 공유 결합으로 서로 연결된 동일한 펩티드 사슬의 일부임을 의미한다. 도메인 또는 섹션(section)은 서로 직접 연결되거나 융합될 수 있으며, 다른 도메인 또는 펩티드 서열이 두 도메인 또는 서열 사이에 있을 수도 있으며, 그러한 서열은 여전히 서로 융합되거나 연결되어 있는 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 다양한 도메인 또는 단백질은 서로 직접 연결되거나 융합되거나, 본원에 설명된 글리신/세린 서열과 같은 링커 서열이 두 도메인을 함께 연결한다.
[0096] "질환(disease)"은 동물이 항상성을 유지할 수 없는 건강 상태이며, 질환이 개선되지 않으면 동물의 건강이 계속 악화된다. 반면, 동물의 "장애(disorder)"는 동물이 항상성을 유지할 수 있지만 동물의 건강 상태가 장애가 없는 경우보다 좋지 않은 건강 상태이다. 장애를 치료하지 않으면 반드시 동물의 건강 상태가 더 악화되는 것은 아니다.
[0097] "유효량(Effective amount)" 또는 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, 본원에서 설명된 바와 같이 특정 생물학적 결과를 달성하거나 치료적 또는 예방적 이점을 제공하는 데 효과적인 화합물, 제형, 물질 또는 조성물의 양을 지칭한다. 이러한 결과에는 포유류에 투여될 때 조성물이 없는 상태에서 검출된 면역 세포 활성화와 비교하여 검출 가능한 수준의 면역 세포 활성화를 유발하는 양이 포함될 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 면역 반응은 수많은 기술분야에서 인정된 방법을 통해 쉽게 평가할 수 있다. 숙련된 기술자는 본원에 투여되는 조성물의 양이 다양하며 치료되는 질환이나 상태, 치료되는 포유류의 나이 및 건강과 신체 상태, 질환의 심각성, 투여되는 특정 화합물 등과 같은 여러 요인에 따라 쉽게 결정될 수 있음을 이해할 것이다.
[0098] "암호화(Encoding)"는 유전자, cDNA 또는 mRNA와 같은 폴리뉴클레오티드에서 특정 뉴클레오티드 서열의 고유한 특성을 말하며, 이는 정의된 뉴클레오티드 서열(즉, rRNA, tRNA 및 mRNA) 또는 정의된 아미노산 서열과 그로 인해 발생하는 생물학적 특성을 갖는 생물학적 과정에서 다른 폴리머와 거대 분자를 합성하기 위한 템플릿 역할을 한다. 따라서 유전자는 대응 유전자에 대응하는 mRNA의 전사 및 번역이 세포 또는 다른 생물학적 시스템에서 단백질을 생성하는 경우 단백질을 암호화한다. mRNA 서열과 뉴클레오티드 서열이 동일하고 일반적으로 서열 목록에 제공되는 코딩 가닥과 유전자나 cDNA의 전사를 위한 템플릿으로 사용되는 비코딩 가닥(non-coding strand)은 모두 대응 유전자나 cDNA의 단백질이나 다른 생성물을 암호화한다고 할 수 있다.
[0099] "발현 벡터(Expression vector)"는 발현될 뉴클레오티드 서열에 작동적으로 연결된 발현 제어 서열을 포함하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 말한다. 발현 벡터는 발현을 위한 충분한 cis-작용 요소를 포함한다. 발현을 위한 다른 요소는 숙주 세포 또는 시험관 내 발현 시스템에서 공급될 수 있다. 발현 벡터에는 코스미드, 플라스미드(예: 네이키드 또는 리포좀에 포함된 플라스미드) 및 바이러스(예: 센다이 바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스)와 같이 재조합 폴리뉴클레오티드를 혼입하는 기술 분야에 공지된 모든 벡터가 포함된다.
[00100] 본원에서 사용되는, 세포가 체외에서 형질도입, 형질 감염(transfected) 또는 형질 전환(transformed)되는 것과 관련하여 사용되는 "체외(ex vivo)"라는 문구는 세포가 대상 외부에서 형질도입, 형질 감염 또는 형질 전환되는 것을 의미하며, 즉 세포가 형질도입, 형질 감염 또는 형질 전환되기 전에 대상으로부터 제거되는 것을 의미한다.
[00101] 본원에서 사용되는 "동일성(Identity)"은 두 개의 중합체 분자 간의 하위 단위 서열 동일성(예: 두 개의 핵산 또는 아미노산 분자 간, 예를 들어 두 개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 분자 간)을 의미한다. 두 아미노산 서열이 동일한 위치에 동일한 잔기를 갖는 경우, 예를 들어 두 폴리펩티드 분자의 위치가 아르기닌으로 채워져 있는 경우, 이들은 대응 위치에서 동일하다. 두 아미노산 또는 두 핵산 서열이 정렬에서 동일한 위치에 동일한 잔기를 갖는 동일성 또는 정도는 종종 백분율로 표현된다. 두 아미노산 또는 두 핵산 서열 사이의 동일성은 일치하거나 동일한 위치의 수의 직접적인 함수이다. 예를 들어, 두 서열의 위치 절반이 동일하다면 두 서열은 50% 동일하다. 위치들의 90%(예: 10개 중 9개)가 일치하거나 동일하다면 두 아미노산 서열은 90% 동일하다.
[00102] "실질적으로 동일하다(substantially identical)"는 기준 아미노산 서열(예를 들어, 본원에 기술된 아미노산 서열 중 하나) 또는 핵산 서열(예를 들어, 본원에 기술된 핵산 서열 중 하나)과 최소 50%의 동일성을 나타내는 폴리펩티드 또는 핵산 분자를 의미한다. 일부 구현예에서, 이러한 서열은 비교에 사용된 서열과 아미노산 수준이나 핵산 수준에서 적어도 60%, 80% 또는 85%, 또는 90%, 95% 또는 심지어 99% 동일하다. 특정 서열와 관련된 기타 동일성 백분율은 본원에 설명되어 있다.
[00103] 서열 동일성은 서열 분석 소프트웨어(예: Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705, BLAST, BESTFIT, GAP, 또는 PILEUP/PRETTYBOX programs)를 사용하여 측정/결정할 수 있다. 이러한 소프트웨어는 다양한 치환, 결실 및/또는 기타 수정에 상동성 정도를 할당하여 동일하거나 유사한 서열들을 매칭시킨다. 보존적 치환에는 일반적으로 다음 군 내에서의 치환이 포함된다: 글리신, 알라닌; 발린, 이소류신, 류신; 아스파르트산, 글루탐산, 아스파라긴, 글루타민; 세린, 트레오닌; 리신, 아르기닌; 페닐알라닌, 티로신. 동일성의 정도를 결정하는 모범적인 방법으로 BLAST 프로그램을 사용할 수 있으며, 여기서 e3와 e100 사이의 확률 점수는 밀접하게 관련된 서열을 나타낸다. 일부 구현예에서, 서열 동일성은 기본 설정을 사용하여 BLAST를 사용하여 결정된다.
[00104] 본원에 제공된 구현예에는 다양한 단백질을 포함하는 조성물이 포함되며, 이들 단백질은 어떤 경우에는 본원에 개시된 아미노산 서열과 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 따라서, 특정 구현예에서는, 특정 서열에 따라, 서열 동일성의 정도는 바람직하게는 본원에 개시된 서열 번호에 대해 50% 이상(예를 들어, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상)이다. 이러한 백분율 외에도 본원에는 다른 동일성 백분율이 제공된다. 폴리펩티드 간의 동일성은 MPSRCH 프로그램(Oxford Molecular)에 구현된 스미스-워터맨 상동성 검색 알고리즘을 통해 결정할 수 있으며, 이는 갭 오픈 페널티 - 12 및 갭 확장 페널티 = 1의 매개변수를 사용하는 아핀 갭(affine gap) 검색을 사용한다.
[00105] 이들 단백질은 개시된 단백질과 비교했을 때 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 등)의 보존적 아미노산 치환, 즉 한 아미노산을 관련 측쇄를 갖는 다른 아미노산으로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 유전적으로 부호화된 아미노산은 일반적으로 4가지 계열로 구분된다. (1) 산성 아미노산, 즉 아스파르트산, 글루타민산; (2) 염기성 아미노산, 즉 라이신, 아르기닌, 히스티딘; (3) 비극성 아미노산, 즉 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프로린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판; (4) 전하를 띠지 않는 극성 아미노산, 즉 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신. 페닐알라닌, 트립토판, 티로신은 때때로 방향족 아미노산으로 함께 분류된다. 일반적으로, 이러한 패밀리 내의 단일 아미노산의 치환은 생물학적 활성에 큰 영향을 미치지 않는다. 단백질은 개시된 단백질 서열에 비해 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 등)의 단일 아미노산 결실을 가질 수 있다. 단백질은 또한 개시된 단백질 서열에 비해 하나 이상(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 등)의 삽입(예: 각각 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산)을 포함할 수 있다.
[00106] 본원에서 사용된, 생체 내에서 세포가 형질도입, 형질 전환 또는 형질 전환되는 것과 관련하여 "생체 내(in vivo)"라는 문구는 세포가 형질도입, 형질 감염 또는 형질 전환되기 전에 세포가 대상으로부터 제거되지 않고 대상 내에서 형질도입, 형질 감염 또는 형질 전환되는 것을 의미한다.
[00107] "단리된(Isolated)"이란 자연 상태로부터 변형되거나 제거된 것을 의미한다. 예를 들어, 살아있는 동물에 자연적으로 존재하는 핵산이나 펩티드는 "단리된" 것이 아니라, 자연 상태의 공존하는 물질에서 부분적으로 또는 완전히 단리된 동일한 핵산이나 펩티드는 "단리된" 것이다. 단리된 핵산이나 단백질은 상당히 정제된 형태로 존재할 수도 있고, 예를 들어 숙주 세포와 같은 비자연적 환경에서 존재할 수도 있다.
[00108] 본원에서 사용되는 "렌티바이러스(lentivirus)"는 분열하지 않는 세포를 감염시킬 수 있는 레트로바이러스 패밀리에 속하는 속(genus)을 말한다. 렌티바이러스의 비제한적인 예로는 HIV, SIV, FIV 등이 있다. 렌티바이러스에서 유래한 벡터 또는 바이러스-유사 입자는 세포에 형질감염되어 유전자나 다른 분자를 전달하고 이를 시험관 내(생체 외)나 생체 내에서 세포에 발현시키는 데 사용될 수 있다.
[00109] 본원에서 사용되는 용어 "변형된(modified)"은 본원에 제공된 분자 또는 세포의 변화된 상태 또는 구조를 의미한다. 분자는 화학적, 구조적, 기능적(예: 돌연변이, 치환, 삽입 또는 결실(예: 내부 결실 절단))을 포함하여 여러 가지 방법으로 변형될 수 있다. 세포는 핵산의 도입이나 이종 단백질의 발현을 통해 변형될 수 있다.
[00110] 본원에서 사용되는 용어 "조절(modulating)"은 치료 또는 화합물이 없는 대상의 반응 수준과 비교했을 때 대상의 반응 수준이 증가하거나 감소하는 것을 매개하는 것을 의미하며, 그렇지 않으면 동일하지만 치료되지 않은 대상의 반응 수준과 비교하는 것을 의미한다. 이 용어는 대상(예: 인간)에게 유익한 치료 반응을 매개함으로써 원래 신호 또는 반응을 교란하고 및/또는 영향을 미치는 것을 포함한다.
[00111] 달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열"에는 서로의 비독립 버전(degenerate versions)이고 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 모든 뉴클레오티드 서열이 포함된다. 단백질이나 RNA를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이라는 문구에는 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이 어떤 버전에서 인트론을 포함할 수 있는 정도로 인트론이 포함될 수도 있다.
[00112] "올리고뉴클레오티드"라는 용어는 일반적으로 짧은 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 뉴클레오티드 서열이 DNA 서열(즉, A, T, C, G)로 표현될 때, 이는 또한 "U"가 "T"를 대체하는 대응 RNA 서열(즉, A, U, C, G)을 제공한다는 것을 이해할 수 있을 것이다.
[00113] 조성물의 "비경구적(Parenteral)" 투여에는 예를 들어 피하 주사(s.c.), 정맥 주사(i.v.), 근육 주사(i.m.), 또는 흉골 내 주사 또는 주입 기술이 포함된다.
[00114] 본원에서 사용되는 용어 "폴리뉴클레오티드"는 뉴클레오티드 사슬로 정의된다. 더욱이, 핵산은 뉴클레오티드의 중합체이다. 따라서, 본원에서 사용되는 용어 "핵산"과 "폴리뉴클레오티드"는 상호 교환 가능한다. 본원에서 사용되는 폴리뉴클레오티드는 당업계에서 이용 가능한 모든 방법을 통해 얻은 모든 핵산 서열을 포함하되 이에 제한되지 않으며, 본원에는 재조합 방법, 즉 클로닝 기술 및 PCR을 사용하여 재조합 라이브러리 또는 세포 게놈에서 핵산 서열을 클로닝하는 것, 이와 유사한 것, 그리고 합성적 수단이 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
[00115] 본원에서 사용되는 용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 상호 교환 가능하게 사용되며, 펩티드 결합에 의해 공유 결합된 다수의 아미노산 잔기로 구성된 화합물을 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어는 짧은 사슬(예: 펩티드, 올리고펩티드 및 올리고머라고도 함)과 긴 사슬을 모두 지칭한다. 긴 사슬은 단백질이라고 하며 단백질에는 여러 유형이 있다. "폴리펩티드"에는 예를 들어 생물학적으로 활성인 단편, 실질적으로 동일한 폴리펩티드, 올리고펩티드, 호모다이머, 헤테로다이머, 폴리펩티드 변이체, 변형된 폴리펩티드, 유도체, 유사체, 융합 단백질 등이 포함된다. 폴리펩티드에는 천연 펩티드, 재조합 펩티드, 합성 펩티드 또는 이들의 조합이 포함된다.
[00116] 명확히 달리 명시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 "이종 바이러스 구조 단백질" 및 "이종 바이러스 당단백질"이라는 용어는 동의어로 사용되며 상호 교환 가능한다. 따라서, 명확히 달리 언급되지 않는 한, "이종 바이러스 구조 단백질"을 지칭하는 구현예는 "이종 바이러스 당단백질"을 지칭하는 것으로 이해되며 그 반대의 경우도 마찬가지이다.
[00117] 본원에서 사용되는 용어 "유사형화(pseudotyped)" 또는 "유사형화 바이러스 입자"는 외피를 갖는 다른 바이러스에서 유래한 당단백질을 함유하는 바이러스 입자 또는 부모 바이러스와 다른 바이러스의 외피 당단백질을 암호화하는 바이러스 벡터를 지칭한다. 따라서 벡터 입자의 숙주 범위는 당단백질이 사용하는 세포 표면 수용체의 유형에 따라 확장되거나 변경될 수 있다. 예를 들어, 바이러스는 본원에 제공된 바와 같이 VSV-G 돌연변이 단백질로 유사형화될 수 있다.
[00118] 본원에서 항체와 관련하여 사용되는 용어 "특이적으로 결합한다"는 것은 특정 항원을 인식하지만 샘플 내의 다른 분자를 실질적으로 인식하거나 결합하지 않는 항체를 의미한다. 예를 들어, 한 종의 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 하나 이상의 종의 항원에도 결합할 수 있다. 그러나 이러한 종간 반응성 자체는 항체의 특이적 분류를 변경하지 않는다. 또 다른 예로, 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 항원의 다른 대립유전자 형태에도 결합할 수 있다. 그러나 이러한 교차 반응성 자체는 항체의 특이적 분류를 변경하지 않는다. 어떤 경우에는 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합"이라는 용어가 항체, 단백질 또는 펩티드와 제2 화학종 간의 상호작용을 언급하는 데 사용될 수 있으며, 이는 상호작용이 화학종의 특정 구조(예: 항원 결정인자 또는 에피토프)의 존재에 따라 달라짐을 의미한다. 예를 들어, 항체는 일반적으로 단백질이 아니라 특정 단백질 구조를 인식하고 결합한다. 항체가 에피토프 "A"에 대해 특이적이라면, 표지된 "A"와 항체를 포함하는 반응에서 에피토프 A(또는 자유롭고 표지되지 않은 A)를 포함하는 분자가 존재하면 항체에 결합된 표지된 A의 양이 감소한다. 일부 구현예에서, 돌연변이 VSV-G 단백질을 포함하는 바이러스 입자를 표적으로 삼는 데 사용될 수 있는 본원에 기술된 표적화 모이어티 또는 바이러스의 유사형을 결정하는 데 사용되는 다른 바이러스 구조 단백질은 표적에 특이적으로 결합될 수 있다.
[00119] "대상(subject)"이라는 용어에는 면역 반응을 유발할 수 있는 생물(예: 포유류)을 포함한 살아있는 유기체가 포함된다. 본원에서 사용되는 "대상" 또는 "환자"는 인간 또는 비인간 포유류일 수 있다. 예를 들어, 비인간 포유류에는 가축과 애완동물, 즉 양, 소, 돼지, 개, 비인간 영장류, 고양이, 및 뮤린 포유류가 포함된다. 일부 구현예에서는 대상이 인간이다.
[00120] 본 문서에서 사용되는 "치료적"이라는 용어는 치료 및/또는 예방을 의미한다. 치료 효과는 질환 상태의 억제, 완화 또는 근절을 통해 얻어진다.
[00121] 본원에서 사용되는 용어 "형질감염(transfected)" 또는 "형질전환(transformed)" 또는 "형질도입(transduced)"은 외인성 핵산이 세포로 전달되거나 도입되는 과정을 말한다. "형질감염" 또는 "형질전환" 또는 "형질도입" 세포는 외인성 핵산으로 형질감염, 형질전환 또는 형질도입된 세포이다. 세포에는 1차 대상 세포와 그 자손이 포함된다. 일부 구현예에서, 형질감염, 형질전환 또는 형질도입은 생체 내에서 수행되거나 발생한다.
[00122] 본 문서에서 사용되는 용어인 질환 "치료"는 대상이 경험하는 질환 또는 장애의 적어도 하나의 징후나 증상의 빈도 또는 심각성을 줄이는 것을 의미한다.
[00123] "벡터"는 단백질이나 펩티드를 암호화하는 분리된 핵산을 포함하는 물질의 구성이다. 기술 분야에는 선형 폴리뉴클레오티드, 플라스미드, DNA 및 RNA를 포함하되 이에 제한되지 않는 다양한 벡터가 알려져 있다. 바이러스 벡터의 예로는 센다이 바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 아데노 연관 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터 등이 있지만, 이에 제한되지는 않는다.
[00124] "운반체(carrier)" 또는 "전달 비히클(delivery vehicle)"에는 바이러스 입자, 바이러스, 폴리리신 화합물 및 리포좀이 포함되며, 이는 핵산을 세포로 전달하는 것을 용이하게 한다. 운반체 또는 전달 비히클은 단백질이나 펩티드를 세포에 전달하는 데 사용될 수도 있다.
[00125] 범위: 본 개시의 전체에 걸쳐 구현예의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시될 수 있다. 범위 형식의 설명은 단지 편의와 간략함을 위한 것이며, 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안 된다. 따라서 범위에 대한 설명은 대응 범위 내의 모든 가능한 하위 범위와 개별 수치 값을 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 1~6과 같은 범위에 대한 설명은 1~3, 1~4, 1~5, 2~4, 2~6, 3~6 등의 하위 범위 및 대응 범위 내의 개별 숫자(예: 1, 2, 2.7, 3, 4, 5, 5.3, 6)도 구체적으로 개시한 것으로 간주해야 한다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다. 달리 명확하게 언급되지 않는 한, 개시된 범위에는 범위의 끝점도 포함된다.
[00126] 일부 구현예에서는 변이된 Fc 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드가 제공된다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 폴리펩티드는 서열 번호 26(IgG1 Fc), 서열 번호 27(IgG2 Fc), 또는 서열 번호 28(IgG4 Fc)의 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩티드의 변이체이다. 일부 구현예에서, 대응 변종은 N-말단 결실을 포함한다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 최대 100개까지의 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산 시 최대 98개까지의 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26의 N-말단으로부터 계산된 98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 90-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 75-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 60-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 50-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 40-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 30-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 10-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 5-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, N-말단 결실은 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 계산된 1-98개 아미노산 잔기를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 폴리펩티드는 다음의 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV (서열 번호 105)
[00127] 일부 구현예에서, 변이 Fc 폴리펩티드는 서열 번호 105의 서열을 하나도 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 폴리펩티드는 서열 번호 105의 전체 서열을 포함하지 않는다. 본원에서 사용된 "N-말단에서 계산된"이라는 문구는 참조 서열의 N-말단 결실과 관련하여 Fc 폴리펩티드에 대한 EU 번호 매기기 체계와 같은 번호 매기기 체계에 따라 제1 잔기가 다른 번호를 가지더라도 참조 서열의 제1 잔기를 잔기 1로 처리한다는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, "N-말단 결실은 서열 번호 26의 N-말단으로부터 계산할 때 3개의 아미노산 잔기를 포함하지 않는다"라는 문구는 서열 번호 26의 처음 3개 잔기인 "ASK" 잔기가 결실된다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 변이된 Fc 폴리펩티드는 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 L234, L235, M297, P329, I253, H310 또는 H435에 대응하는 위치에서 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 위치는 Fc 폴리펩티드의 EU 넘버링을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 L234, L235, M297, P329, I253, H310 및 H435에 대응하는 돌연변이 위치를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 L234 및 L235에 대응하는 위치에서 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 M297에 대응하는 위치에서 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 P329에 대응하는 위치에서 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 I253에 대응하는 위치에서 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 H310에 대응하는 위치에서 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 H435에 대응하는 위치에서 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 L234A, L235A, M297A, P329G, I253A, H310A 또는 H435A에 대응하는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 바와 같이 N-말단 결실이 있거나 없는 변이 Fc 폴리펩티드는 L234A, L235A, M297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 변이체 폴리펩티드는 서열 번호 103의 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하되, Fc 변이체는 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하지 않고, 변이체는 L234A, L235A, M297A, P329G, I253A, H310A, 또는 H435A에 대응하는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 변이체 폴리펩티드는 서열 번호 103의 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하되, Fc 변이체는 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하지 않고, 변이체는 L234A, L235A, M297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 변이체 폴리펩티드는 서열 번호 104의 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하지만, Fc 변이체는 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, Fc 변이체 폴리펩티드는 서열 번호 104의 서열을 포함하지만, Fc 변이체는 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하지 않는다. 본원에서 사용되는 Fc 폴리펩티드에서 언급된 위치는 EU 넘버링 체계에 따른 위치를 나타낸다. EU 넘버링 체계는 해당 기술 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 서열 번호 104의 폴리펩티드에서, 위치 234는 서열 번호 104의 잔기 19를 지칭하고, 위치 235는 서열 번호 104의 잔기 20을 지칭하며, 나머지도 이와 같은 방식으로 지칭된다.
[00128] 본원에 제공된 바와 같이, Fc 변이체는 일부 구현예에서 표적화 모이어티와 같은 다른 단백질에 융합되거나 연결될 수 있다. Fc 변이체는 세포막이나 렌티바이러스의 외피와 같은 바이러스 외피에 삽입될 수 있도록 세포막 도메인 및/또는 세포 내 도메인에 융합되거나 연결될 수도 있다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 Fc 변이체 폴리펩티드의 N-말단에 연결되거나 융합된다. 일부 구현예에서, Fc 변이체 폴리펩티드는 Fc 변이체 폴리펩티드의 C-말단의 막관통 도메인에 연결된다.
[00129] 일부 구현예에서는, 본원에서 기술된 것과 같은, 상기 및 하기 기술된 것을 포함하여, 본원에서 제공되는 변이 Fc 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자가 제공된다.
이종 바이러스 당단백질과 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자
[00130] 일부 구현예에서는 이종 바이러스 당단백질과 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고, S1은 줄기 부분이다. 일부 구현예에서, S1은 변이 Fc 단백질을 포함하며, 여기서 변이 Fc 단백질은 CD8 또는 CD28 막관통 도메인과 같은 막관통 도메인을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 따라서, 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 변이체 Fc - 막관통 도메인의 N-말단에서 C-말단으로의 방향을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이체 Fc 단백질은 효과기 돌연변이를 포함하는데, 여기서 효과기 돌연변이는 Fc 단백질과 Fc 상호작용 단백질, 예를 들어 FcγR, C1q, FcRβ, 또는 FcRn 사이의 상호작용을 억제한다.
[00131] 일부 구현예에서, S1 줄기 부분은 막관통 도메인을 통해 바이러스 입자의 표면에 부착된다. 예를 들어, 막관통 도메인은 외피 바이러스(예: 렌티바이러스 또는 본원에 제공된 다른 바이러스)의 외피를 통과하거나 삽입될 수 있다. 따라서, 막관통 도메인에 연결된 S1 줄기 부분은 외피형 바이러스의 바깥쪽 표면에 존재한다.
[00132] 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 IgG1 Fc, IgG2 Fc 또는 IgG4 Fc 단백질의 변이체이다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 26(IgG1 Fc), 서열 번호 27(IgG2 Fc), 또는 서열 번호 28(IgG4 Fc)의 서열 변이를 포함한다.
[00133] 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 변이 IgG1 Fc 단백질(서열 번호 26)이다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 다음으로 구성된 군에서 선택된 돌연변이에 대응하는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다: 서열 번호 26의 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A(Kabat 의 EU 넘버링 인덱스에 따름. Edelman, G M et al. “The covalent structure of an entire gammaG immunoglobulin molecule."　Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America　vol. 63,1 (1969): 78-85. doi:10.1073/pnas.63.1.78. 전체가 참조로 본원에 포함됨). 서열 번호 26의 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A 돌연변이 중 하나가 존재하거나 존재하지 않을 수 있으며, 돌연변이는 어떠한 조합으로든 결합될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 26의 L234A 및 L235A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 26의 N297A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 26의 P329G에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 SEQ ID N: 26의 L234A, L235A, N297A 및 P329G에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 26의 I253A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 26의 H310A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 26의 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 26의 I253A, H310A 및 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 26의 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다.
[00134] 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질을 포함하는 변이 Fc 단백질은 IgG1 Fc 서열의 절단(truncation)을 포함한다. 절단은 IgG1 Fc 서열의 N-말단, C-말단 또는 둘 다에서 원하는 수의 아미노산 결실(deletion)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질을 포함하는 변이 Fc 단백질은 서열 번호 26의 절단을 포함한다. 절단은 서열 번호 26의 N-말단, C-말단 또는 둘 다에서 임의의 수의 아미노산 결실을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 26의 N-말단에서 아미노산 결실을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 26의 C-말단에서 아미노산을 결실시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 26의 N-말단과 C-말단 모두에서 아미노산을 결실시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 26의 절단은 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함한다:
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 번호 103)
[00135] 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 L19A, L20A, N82A, P114G, I38A, H95A 및 H220A로 구성된 군에서 선택된 서열 번호 103에 대한 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 위치 L19, L20, N82, P114, I38, H95 및 H220은 서열 번호 103에만 참조되는 것으로 이해되어야 한다. 숙련된 기술자라면 Kabat의 EU 번호 체계에 따라 번호가 매겨진 위치 L234, L235, N297, P329, I253, H310 및 H435가 각각 서열 번호 103의 위치 L19, L20, N82, P114, I38, H95 및 H220에 대응한다는 것을 쉽게 알 수 있을 것이다. 서열 번호 103의 L19A, L20A, N82A, P114G, I38A, H95A 및 H220A 돌연변이 중 하나가 존재하거나 존재하지 않을 수 있으며, 돌연변이는 임의의 조합으로 결합될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 103의 L19A 및 L20A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 103의 N82A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc는 서열 번호 103의 P114G에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc는 서열 번호 103의 L19A, L20A, N82A 및 P114G에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 103의 I38A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 103의 H95A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 103의 H220A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 103의 I38A, H95A 및 H220A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 103의 L19A, L20A N82A, P114G, I38A, H95A 및 H220A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG1 Fc 단백질은 서열 번호 103의 L19A, L20A N82A, P114G, I38A, H95A 및 H220A 각각에 대응하는 돌연변이를 포함한다. L19A, L20A N82A, P114G, I38A, H95A 및 H220A를 각각 포함하는 예시적인 변이 IgG1 단백질은 서열 번호 104의 아미노산 서열에 아래와 같이 표시된다.
EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMASRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLAQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSPGK (서열 번호 104)
[00136] 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 변이 IgG2 Fc 단백질(서열 번호 27)이다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질은 다음으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다: N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A. 이는 대응 위치가 Kabat의 EU 넘버링 인덱스에 따라 번호가 매겨진 서열 번호 27에 대응하기 때문이다.
서열 번호 27의 N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A 돌연변이 중 어느 것이든 존재하거나 존재하지 않을 수 있으며, 돌연변이는 어떠한 조합으로든 결합될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질은 서열 번호 27의 N297A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질은 서열 번호 27의 P329G에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질은 서열 번호 27의 N297A 및 P329G에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질은 서열 번호 27의 I253A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질은 서열 번호 27의 H310A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질은 서열 번호 27의 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질은 서열 번호 27의 I253A, H310A 및 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다.
[00137] 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질을 포함하는 변이 Fc 단백질은 IgG2 Fc 서열의 절단을 포함한다. 절단은 IgG2 Fc 서열의 N-말단, C 말단 또는 둘 다에서 원하는 수의 아미노산을 결실시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 변이 IgG2 Fc 단백질을 포함하는 변이 Fc 단백질은 서열 번호 27의 절단을 포함한다. 절단은 서열 번호 27의 N-말단, C-말단 또는 둘 다에서 임의의 수의 아미노산을 결실시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 27의 N-말단에서 아미노산을 결실시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 27의 C-말단에서 아미노산을 결실시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 27의 N-말단과 C-말단 모두에서 아미노산을 결실시키는 것을 포함한다.
[00138] 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 변이 IgG4 Fc 단백질(서열 번호 28)이다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 다음으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다: S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A. 이러한 위치는 Kabat의 EU 넘버링 인덱스에 따라 번호가 매겨진 서열 번호 28에 대응한다. 서열 번호 28의 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A 돌연변이 중 하나가 존재하거나 존재하지 않을 수 있으며, 돌연변이는 어떠한 조합으로든 결합될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 S228P에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 L235E에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 N297A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 P329G에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 S228P, L235E, N297A 및 P329G에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 I253A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 H310A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질은 서열 번호 28의 I253A, H310A 및 H435A에 대응하는 돌연변이를 포함한다.
[00139] 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질을 포함하는 변이 Fc 단백질은 IgG4 Fc 서열의 절단을 포함한다. 절단은 IgG4 Fc 서열의 N-말단, C-말단 또는 둘 다에서 임의의 수의 아미노산을 결실시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 변이 IgG4 Fc 단백질을 포함하는 변이 Fc 단백질은 서열 번호 28의 절단을 포함한다. 절단은 서열 번호 28의 N-말단, C-말단 또는 둘 다에서 임의의 수의 아미노산을 결실시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 28의 N-말단에서 아미노산을 결실시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 28의 C-말단에서 아미노산을 결실시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 절단은 서열 번호 28의 N-말단과 C-말단 모두에서 아미노산을 결실시키는 것을 포함한다.
[00140] 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질을 포함하는 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-X1의 화학식으로 주어지며, 여기서 L1은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 변이 Fc 단백질이고, L2는 링커이거나 존재하지 않고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 따라서, T-S1 화학식을 포함하는 표적화 모이어티는 T-L1-Fc-L2-X1 화학식으로도 제공될 수 있는데, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고, L1은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 변이 Fc 단백질이고, L2는 링커이거나 존재하지 않고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 따라서, 일부 구현예에서 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-X1의 화학식으로 주어질 수 있다는 것을 이해해야 한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인 T는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 본원에 제공된 바와 같다.
[00141] 일부 구현예에서, L1 및 L2는 각각 독립적으로 폴리펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드 링커는 (GGGGA)n (서열 번호 54), (GGGGS)n (서열 번호 55), (EAAAK)n (서열 번호 73), A(EAAAK)nA (서열 번호 74), (XP)n (서열 번호 75)를 포함하고, 여기서 X는 Ala, Lys 또는 Glu, GSAGSAAGSGEF (서열 번호 56), KESGSVSSEQLAQFRSLD (서열 번호 57), EGKSSGSGSESKST (서열 번호 58), AEAAAKEAAAKA (서열 번호 76), 또는 이들의 조합이고, 각각의 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, 각 n은 독립적으로 1이다. 일부 구현예에서, 각 n은 독립적으로 독립적으로 2이다. 일부 구현예에서, 각 n은 독립적으로 3이다. 일부 구현예에서, 각 n은 독립적으로 4이다. 일부 구현예에서, 각 n은 독립적으로 5이다. 일부 구현예에서, 각 n은 독립적으로 5보다 크다. 일부 구현예에서는 L1이 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, L1은 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, L1은 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각 n은 독립적으로 1이다. 일부 구현예에서, L1은 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55) 이고, 여기서 각 n은 독립적으로 2이다. 일부 구현예에서, L1은 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각 n은 독립적으로 3이다. 일부 구현예에서, L1은 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 4이다. 일부 구현예에서, L1은 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 5이다. 일부 구현예에서, L1은 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 5보다 크다. 일부 구현예에서는 L2가 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, L2는 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, L2는 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 1이다. 일부 구현예에서, L2는 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 2이다. 일부 구현예에서, L2는 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 3이다. 일부 구현예에서, L2는 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 4이다. 일부 구현예에서, L2는 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 5이다. 일부 구현예에서, L2는 (GGGGA)n (서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각각의 n은 독립적으로 5보다 크다.
[00142] 일부 구현예에서, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 ECD는 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않는다. TM은 막관통 단백질의 막관통 도메인이고, ICD는 단백질의 세포 내 도메인 또는 바이러스 입자의 외피에 표적화 모이어티를 혼입하는 것을 용이하게 하는 단백질이거나 존재하지 않는다. 따라서, 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1이라는 화학식으로 주어질 수 있는 T-S1 화학식을 포함하는 표적화 모이어티는 T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD라는 화학식으로 주어질 수도 있는데, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고, L1은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 변이 Fc 단백질이고, L2는 링커이거나 존재하지 않고, ECD는 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 막 관통 단백질의 막관통 도메인이고, ICD는 단백질의 세포 내 도메인이거나 바이러스 입자의 외피에 표적화 모이어티를 혼입하는 것을 용이하게 하는 단백질이거나 존재하지 않는다. 따라서, 일부 구현예에서 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식으로 주어질 수 있다는 것을 이해해야 한다.
[00143] 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 변이된 Fc 영역을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식으로 주어지며, 여기서 L3은 유연한 펩티드 링커이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드다. 따라서 일부 구현예에서, T-S1 화학식을 포함하는 표적화 모이어티는 T-L3-X1 화학식으로도 제공될 수 있는데, 여기서 T는 표적화 결합 도메인이고, L3은 유연한 펩티드 링커이고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드다. 따라서, 일부 구현예에서 줄기 부분 S1은 화학식 L3-X1로 주어질 수 있다는 것을 이해해야 한다. 일부 구현예에서, S1 줄기 부분은 막관통 도메인을 통해 바이러스 입자의 표면에 부착된다.
[00144] 일부 구현예에서, 유연한 펩티드 링커 L3은 임의의 유연한 펩티드 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54), (GGGGS)n (서열 번호 55), GSAGSAAGSGEF (서열 번호 56), KESGSVSSEQLAQFRSLD (서열 번호 57), EGKSSGSGSESKST (서열 번호 58), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하되 이에 제한되지 않는 유연한 링커 군에서 선택되며, 여기서 각각의 n은 독립적으로 1-4에서 선택된 정수이다. 일부 구현예에서, 각 n은 독립적으로 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9 또는 1-10에서 선택된 정수이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 일부 구현예에서, n은 6이다. 일부 구현예에서, n은 7이다. 일부 구현예에서, n은 8이다. 일부 구현예에서, n은 9이다. 일부 구현예에서, n은 10이다. 일부 구현예에서, 각 n은 독립적으로 10보다 크다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 1이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 2이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 3이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 4이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 5이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 6이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54) 이고 n은 7이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 8이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 9이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 10이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54)이고 n은 10보다 크다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 1이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 2이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 3이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 4이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 5이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 6이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n(서열 번호 55)이고 n은 7이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 8이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 9이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고 n은 10이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS)n(서열 번호 55)이고 n은 10보다 크다. 일부 구현예에서, L3은 GSAGSAAGSGEF (서열 번호 56)이다. 일부 구현예에서, L3은 KESGSVSSEQLAQFRSLD (서열 번호 57)이다. 일부 구현예에서, L3은 EGKSSGSGSESKST (서열 번호 58)이다.
[00145] 일부 구현예에서, 유연한 링커 L3은 임의의 유연한 펩티드 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54), (GGGGS)n (서열 번호 55), GSAGSAAGSGEF (서열 번호 56), KESGSVSSEQLAQFRSLD (서열 번호 57), EGKSSGSGSESKST (서열 번호 58), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 유연한 링커의 군으로부터 선택될 수 있으며, 여기서 각 n은 독립적으로 1-4에서 선택되는 정수이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA) n (서열 번호 54)이고 n은 1이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA) n (서열 번호 54)이고 n은 2이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA) n (서열 번호 54)이고 n은 3이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA) n (서열 번호 54)이고 n은 4이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS) n (서열 번호 55)이고 n은 1이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS) n (서열 번호 55)이고 n은 2이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS) n (서열 번호 55)이고 n은 3이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS) n (서열 번호 55)이고 n은 4이다. 일부 구현예에서, L3은 GSAGSAAGSGEF (서열 번호 56)이다. 일부 구현예에서, L3은 KESGSVSSEQLAQFRSLD (서열 번호 57)이다. 일부 구현예에서, L3은 KESGSVSSEQLAQFRSLD (서열 번호 57)이다.
[00146] 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA)n (서열 번호 54), (GGGGS)n (서열 번호 55), GSAGSAAGSGEF (서열 번호 56), KESGSVSSEQLAQFRSLD (서열 번호 57), EGKSSGSGSESKST (서열 번호 58) 또는 이들의 임의의 조합을 포함하되 이에 제한되지 않는 유연한 링커 군에서 선택되며, 여기서 각각의 n은 독립적으로 1, 2 또는 4 중에서 선택된 정수이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA) n (서열 번호 54)이고 n은 1이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA) n (서열 번호 54)이고 n은 2이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGA) n (서열 번호 54)이고 n은 4이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS) n (서열 번호 55)이고 n은 1이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS) n (서열 번호 55)이고 n은 2이다. 일부 구현예에서, L3은 (GGGGS) n (서열 번호 55)이고 n은 4이다. 일부 구현예에서, L3은 GSAGSAAGSGEF (서열 번호 56)이다. 일부 구현예에서, L3은 GSAGSAAGSGEF (서열 번호 56)이다. 일부 구현예에서, L3은 EGKSSGSGSESKST (서열 번호 58)이다.
[00147] 일부 구현예에서, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 ECD는 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 막관통 단백질의 막관통 도메인이고, ICD는 단백질의 세포 내 도메인 또는 바이러스 입자의 외피에 표적화 모이어티를 혼입하는 것을 용이하게 하는 단백질이거나 존재하지 않는다. 따라서, 일부 구현예에서, T-L3-X1이라는 화학식으로 표현될 수 있는 T-S1 화학식을 포함하는 표적화 모이어티는 T-L3-ECD-TM-ICD라는 화학식으로 표현될 수도 있는데, 여기서 T는 표적화 결합 도메인이고, L3은 유연한 펩티드 링커이고, ECD는 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 막관통 단백질의 막관통 도메인이고, ICD는 단백질의 세포 내 도메인이거나 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 단백질이거나 존재하지 않는다. 따라서, 일부 구현예에서 줄기 부분 S1은 L3-ECD-TM-ICD의 화학식으로 주어질 수 있다는 것을 이해해야 한다.
[00148] 일부 구현예에서는 ECD가 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, ECD는 임의의 적절한 세포외 도메인 또는 그 단편일 수 있다. 일부 구현예에서, ECD는 막관통 도메인과 비교하여 다른 단백질에서 유래한다. ECD 도메인은 전체 ECD 도메인 또는 그 단편일 수 있다. 일부 구현예에서, ECD 도메인은 CD8 또는 CD28 ECD 도메인 또는 그 단편이다. 일부 구현예에서, ECD 도메인은 CD8 ECD 도메인 또는 그 단편이다. 일부 구현예에서, CD8 ECD 도메인은 FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (서열 번호 59)의 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, CD8 ECD 도메인은 FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (서열 번호 59)의 폴리펩티드로 구성되거나 필수적으로 이것으로만 구성된다. 일부 구현예에서, ECD 도메인은 길이가 25-45개 아미노산인 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, ECD는 FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (서열 번호 59)의 펩티드와 적어도 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일한 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, ECD 도메인은 CD28 ECD 도메인 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, CD28 ECD 도메인은 KIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP (서열 번호 60)의 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, CD28 ECD 도메인은 KIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP (서열 번호 60)의 폴리펩티드로 구성되거나 필수적으로 이로만 구성된다. 일부 구현예에서, ECD 도메인은 길이가 25-45개 아미노산인 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, ECD는 KIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP (서열 번호 60)의 펩티드와 적어도 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일한 폴리펩티드를 포함한다.
[00149] 일부 구현예에서, TM은 임의의 적절한 막관통 도메인 또는 그 단편일 수 있다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 CD8 또는 CD28 TM 도메인 또는 그 단편이다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 CD8 TM 도메인 또는 그 단편이다. 일부 구현예에서, CD8 TM 도메인은 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN(서열 번호 61)의 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, CD8 TM 도메인은 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN (서열 번호 61)의 폴리펩티드로 구성되거나 필수적으로 이로만 구성된다. 일부 구현예에서, TM은 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN (서열 번호 61)의 펩티드와 적어도 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일한 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 CD28 TM 도메인 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, CD28 TM 도메인은 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (서열 번호 62)의 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, CD28 TM 도메인은 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (서열 번호 62)의 폴리펩티드로 구성되거나 필수적으로 이로만 구성된다. 일부 구현예에서, TM은 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (서열 번호 62)의 펩티드와 적어도 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일한 폴리펩티드를 포함한다.
[00150] 일부 구현예에서, TM 도메인은 ECD와 동일한 단백질에서 유래한다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 ECD와 다른 단백질에서 유래한다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 CD8 또는 CD28 TM 도메인 또는 이의 단편이고, ECD 도메인은 CD8 또는 CD28 ECD 도메인 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN (서열 번호 61) 의 펩티드와 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하고, ECD 도메인은 FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (서열 번호 59)의 펩티드와 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN (서열 번호 61) 의 펩티드와 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하고, ECD 도메인은 KIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP (서열 번호 60)의 펩티드와 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV (서열 번호 62) 의 펩티드와 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하고, ECD 도메인은 FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (서열 번호 59)의 펩티드와 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, TM 도메인은 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV(서열 번호 62)의 펩티드와 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하고, ECD 도메인은 KIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP(서열 번호 60)의 펩티드와 약 또는 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일하다.
[00151] 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 세포 막관통 단백질의 세포 내 도메인(ICD) 또는 그 단편에 연결된다. 일부 구현예에서는 ICD가 없다. 일부 구현예에서는 ICD가 TM 도메인과 동일하거나 다른 단백질에서 유래한다. 일부 구현예에서는 ICD가 Env 혼입 모티프를 포함한다. Env 혼입 모티프는 단백질이 바이러스의 외피에 혼입되는 것을 촉진하는 데 도움이 되는 분자(예: 폴리펩티드)이다. Env 혼입 모티프의 비제한적 예는 NRVRQGYS(서열 번호 63)의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드이다. 이는 제한적이지 않은 예이며, GGTETSQVAPA(서열 번호 64)와 같이 이에 제한되지 않고 다른 펩티드 서열도 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, Env 혼입 모티프는 서열 번호 63, 서열 번호 64 또는 이들의 조합의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, Env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, Env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함한다.
[00152] 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인 "T"는 원하는 표적에 결합하는 데 사용될 수 있는 모든 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서 T는 다음에 결합하는 모든 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드 또는 그 단편이다: CD7, CD8, cKit(CD117), CD4, CD3, CD5, CD6, CD2, TCR 알파, TCR 베타, TCR 감마, TCR 델타, CD10, CD34, CD110, CD33, CD14, CD68, CCR7, CD62L, CD25, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7 또는 CXCR3, 급성 백혈병이나 림프종에는 발현되지만 조혈 전구 세포에는 발현되지 않는 당화된 CD43 에피토프; 비조혈암에 발현되는 당화된 CD43 에피토프; 키나제 앵커 단백질 4(AKAP-4); 아드레노 수용체 베타 3(ADRB3); AFP; 이형성 림프종 키나제(ALK); 안드로겐 수용체; 안지오포이에틴 결합 세포 표면 수용체 2(Tie 2); 데스모글레인 1(Dsgl)에 대한 자가 항체; 데스모글레인 3(Dsg3)에 대한 자가 항체; B7H3(CD276); 비오틴; 골수 기질 세포 항원 2(BST2); BST1/CD157; 암/고환 항원 1(NY-ESO-1); 암/고환 항원 2(LAGE-1a); 탄산탈수효소 IX(CA1X); 암태아 항원(CEA); CCCTC-결합 인자(아연 핑거 단백질)-유사(BORIS 또는 각인 부위 조절자 형제); CCR4;CD5;CD19;CD20;CD22;CD24;CD30;CD32(FCGR2A);CD33;CD34;CD38;CD44v6;CD72;CD79a;CD79b;CD97;CD99;CD123;CD171;CD179a;CD179b-IGLll;CD200R;CD276/B7H3;CD300 분자 유사 패밀리 멤버 f(CD300LF);CDH1-CD324;CDH6;CDH17;CDH19; 염색체 X 개방 판독 프레임 61(CXORF61); 클라우딘 6(CLDN6); 클라우딘l8.2(CLD18A2 또는 CLDN18A.2); CMV pp65; C-MYC 에피토프 태그; 크립토; CS1(CD2 하위 집합 1 또는 CRACC 또는 SLAMF7 또는 CD319 또는 19A24라고도 함); CSF2RA(GM-CSFR-알파); C형 렉틴 도메인 패밀리 12 멤버 A(CLEC12A); C형 렉틴 유사 분자-1(CLL-1 또는 CLECL1); 사이클린 Bl; 시토크롬 P450 IB 1(CYP1B 1); DLL3; EBV-EBNA3c; EGF-bke 모듈- 뮤신 유사 호르몬 수용체 유사 2(EMR2); 연장 인자 2 돌연변이(ELF2M); 에프린 B2; 에프린 A형 수용체 2(EphA2); 상피 성장 인자 수용체(EGFR); 상피 성장 인자 수용체 변이 III(EGFRviii); 상피 세포 접착 분자(EPCAM); ERG; ETS 전좌 변이 유전자 6은 염색체 12p에 위치(ETV6-AML); IgA 수용체의 Fc 단편(FCAR 또는 CD89); Fc 수용체 유사 5(FCRL5); 섬유아세포 활성화 단백질 알파(FAP); FITC; Fms 유사 티로신 키나제 3(FLT3); 엽산 수용체 알파(FRa 또는 FR1); 엽산 수용체 베타(FRb); 난포 자극 호르몬 수용체(FSHR); Fos 관련 항원 1; 푸코실-GM1; G 단백질 결합 수용체 클래스 C 군 5 멤버 D(GPRC5D); G 단백질 결합 수용체 20(GPR20); GAD; 갱글리오시드 G2(GD2); 갱글리오시드 GD3(aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(l-4 )bDGlcp(l-l)Cer); 강글리오시드 GM3(aNeu5Ac(2-3)bDClalp(l-4)bDGlcp(l-l)Cer); GD3; GFRalpha4; 당단백질 100(gplOO); 글리피칸-3(GPC3); 생식선 자극 호르몬 수용체(CGHR 또는 GR); GpA33; GpNMB; GPRC5D; 구아닐릴 고리화효소 C(GCC); 열충격 단백질 70-2 돌연변이(mut hsp70-2); A형 간염 바이러스 세포 수용체 1(HAVCR1); GloboH 글리코세라마이드(GloboH)의 육당류 부분; 고분자량 흑색종 관련 항원(HMWMAA); HIV1 외피 당단백질; HLA; HLA-DOA; HLA-A; HLA-A2; HLA-B; HLA-C; HLA-DM; HLA-DOB; HLA-DP; HLA-DQ; HLA-DR; HLA-G; HTLVL-Tax; 인간 유두종 바이러스 E6(HPV E6); 인간 유두종 바이러스 E7(HPV E7); 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT); IgE; IL13Ra2; ILl lRa; 면역글로불린 람다 유사 폴리펩티드 1(IGLL1); 인플루엔자 A 헤마글루티닌(HA); 인슐린 유사 성장 인자 1 수용체(IGF-I 수용체); 인터루킨 11 수용체 알파(IL-llRa); 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL-13Ra2 또는 CD213A2); 장 카르복실 에스테라제; KIT (CD117); KSHV K8.1; KSHV-gH; LAMP1; 레구마인; 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 하위 패밀리 A 멤버 2 (LILRA2); 백혈구 관련 면역글로불린 유사 수용체 1 (LAIR1); 황체형성호르몬 수용체 (LHR); 루이스(Y) 항원; 류스 항원; LiVL; 로커스 K 9 (LY6K); 저전도도 염화물 채널; 림프구 항원 6 복합체; 림프구 항원 75 (LY75); 림프구 특이적 단백질 티로신 키나제 (LCK); 유선 분화 항원(NY-BR-1); T 세포 1(MelanA 또는 MARTI)에 의해 인식되는 흑색종 항원; 흑색종 관련 항원 1(MAGE-A1); 흑색종 암 고환 항원-1(MAD-CT-1); 흑색종 암 고환 항원-2(MAD-CT-2); 흑색종 세포 사멸 억제제(ML-IAP); 메조텔린; MPL; 뮤신 1 세포 표면 관련(MUC1); N-아세틸 글루코사미닐-트랜스퍼라제 V(NA17); 넥틴-4; 신경 세포 접착 분자(NCAM); NKG2D; NYBR1; O-아세틸-GD2 갱글리오시드(OAcGD2); 후각 수용체 51E2(OR51E2); 중단점 클러스터 영역(BCR)과 Abelson 쥐 백혈병 바이러스 온코진 동족체 1(Abl)(bcr-abl)로 구성된 온코진 융합 단백질; P53 돌연변이; 쌍을 이룬 상자 단백질 Pax-3(PAX3); 쌍을 이룬 박스 단백질 Pax-5(PAX5); 파넥신 3(PANX3); PDL1; P-글리코단백질; 태반 특이적 1(PLAC1); 혈소판 유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFR-베타); 폴리시알산; 프로아크로신 결합 단백질 sp32(OY-TES1); 프로스타아제; 전립선 암종 항원-1(PCT A-1 또는 갈렉틴 8); 전립선 줄기 세포 항원(PSCA); 전립선 특이 막 항원(PSMA); 전립선 산성 인산가수분해효소(PAP); 프로스타인; 프로테아제 세린 21(테스티신 또는 PRSS21); 프로테아솜(프로솜 마크로페인) 서브유닛 베타 유형 9(LMP2); PTK7; Ras G12V; Ras 동족 패밀리 멤버 C(RhoC); 래트 육종(Ras) 돌연변이; 고급 당화 양이온 최종산물 수용체(RAGE-1); 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1); 수용체 티로신 단백질 키나제 ERBB2 또는 Her-22/neu; 신장 유비쿼터스 1(RU1); 신장 유비쿼터스 2(RU2); 육종 전위 중단점; 세린 2(TMPRSS2) ETS 융합 유전자; 시알릴 루이스 접착 분자(sLe); SLAMF4; SLAMF6; Slea(CA19.9 또는 시알릴 루이스 항원); 정자 단백질 17(SPA17); T 세포 3(SART3)에 의해 인식되는 편평세포암 항원; 단계-특이적 배아 항원-4(SSEA-4); STEAP1; Survivin; 활막육종 X 중단점 2(SSX2); TCR 감마 대체 판독 프레임 단백질(TARP); TCR-베타1 사슬; TCR-베타2 사슬; TCR-델타 사슬; TCR-감마 사슬; TCR감마-델타; 텔로머라제; TGFbetaR2; TNT 항체에 의해 인식되는 항원; 갑상선 자극 호르몬 수용체(TSHR); Timl-/HVCR1; 조직 인자 1(TF1); Tn ag; Tn 항원((Tn Ag) 또는 (GalNAca-Ser/Thr)); TNF 수용체 패밀리 멤버 B 세포 성숙(BCMA); 트랜스글루타미나제 5(TGS5); 막관통 프로테아제; TROP2; 종양 내피 마커 1(TEM1/CD248); 종양 내피 마커 7 관련(TEM7R); 종양 단백질 p53(p53); 종양 관련 당단백질 72(TAG72); 티로시나제; 티로시나제 관련 단백질 2(TRP-2); 유로플라킨 2(UPK2); 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2); V-myc 조류 골수종증 바이러스 종양 유전자 신경모세포종 유래 동족체(MYCN); 윌름스 종양 단백질(WT1); 또는 X 항원 패밀리 구성원 1A(XAGE1). 일부 구현예에서, 표적화 모이어티 "T"는 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인 "T"는 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인 "T"는 항체이다. 본 개시의 맥락에서 "항체"는 두 개의 동일한 중쇄, 두 개의 동일한 경쇄 및 두 개의 항원 결합 단편을 포함하는 "완전한" 항체를 지칭할 뿐만 아니라 Fab, Fv, scFv 및 Fd 단편을 포함하되 이에 제한되지 않는 모든 이소형의 항체, 항체 단편, 키메라 항체, 인간화 항체, 단일 사슬 항체(scAb), 단일 도메인 항체(dAb), 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체, 이중 특이적 항체, 다중 특이적 항체 및 항체의 항원 결합 부분과 비항체 단백질을 포함하는 융합 단백질을 지칭한다는 것을 이해해야 한다. 일부 구현예에서, 항체는 scFv, Fab, VHH, 단일 도메인 항체 등을 포함하는 군에서 선택된다. 일부 구현예에서, 항체는 scFv이다. 일부 구현예에서, 항체는 Fab이다. 일부 구현예에서, 항체는 VHH이다. 일부 구현예에서, 항체는 단일 도메인 항체이다.
[00153] 일부 구현예에서, T-S1의 식으로 표현되는 폴리펩티드는 바이러스 입자의 표면에 존재할 때 다이머를 형성할 수 있다. 다이머는 예를 들어 폴리펩티드 분자의 줄기 부분 사이의 상호 작용에 의해 형성될 수 있다. 예를 들어, 줄기 부분이 본원에서 제공하는 바와 같이 Fc 도메인 또는 변이된 Fc 도메인을 포함하는 경우, 폴리펩티드 분자의 Fc 도메인은 바이러스 표면에서 서로 상호 작용하여 다이머를 형성한다. 어떤 특별한 이론에 얽매이지 않고도, 일부 구현예에서는 다이머가 표적 결합 도메인(T)을 통해 표적 단백질에 대한 결합성이 증가하여 다이머를 형성하지 않거나 형성할 수 없는 폴리펩티드와 비교했을 때 특이성을 향상시킬 수도 있다. 따라서 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 T-S1의 화학식을 갖는 두 개의 폴리펩티드를 포함하는 다이머를 포함하는데, 다이머는 호모다이머 또는 헤테로다이머일 수 있다. 일부 구현예에서, 호모다이머는 정확히 동일한 아미노산 서열을 갖는 T-S1의 화학식을 갖는 두 개의 폴리펩티드를 지칭한다. 다이머는 서로 다른 표적화 결합 도메인(T) 또는 두 개의 서로 다른 S1 부분(예: 두 개의 서로 다른 Fc 도메인, 변이 Fc 도메인 포함)을 갖는 두 개의 폴리펩티드에 의해 형성될 수도 있다. 서로 다른 표적 결합 도메인 또는 서로 다른 Fc 도메인을 갖는 두 개의 폴리펩티드에 의해 형성된 다이머는 헤테로다이머라고 할 수 있다. 일부 구현예에서, 헤테로다이머는 T-S1의 화학식을 갖는 제1 폴리펩티드와 T-S1의 화학식을 갖는 제2 폴리펩티드에 의해 형성되고, 여기서 제1 폴리펩티드는 제1 표적 결합 도메인과 제1 S1 폴리펩티드를 갖고, 제2 폴리펩티드는 제2 표적 결합 도메인과 제2 S1 폴리펩티드를 갖는다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 결합 도메인은 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 결합 도메인은 다르다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 결합 도메인은 동일한 표적에 결합하지만, 다른 에피토프에서 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 S1 폴리펩티드는 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 S1 폴리펩티드는 상이하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 S1 폴리펩티드는 서로 동일하나, Fc 도메인이 다르다. 본원에서 사용될 수 있는 Fc 도메인은, 일부 구현예에서는, 다이머를 형성하지 않도록 조작될 수도 있다.
[00154] 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 바이러스 입자는 유사형 바이러스 입자이다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 파라믹소바이러스 패밀리 바이러스의 바이러스 당단백질을 사용하여 유사형화된다. 일부 구현예에서, 유사형화 바이러스-유사 입자는 홍역 바이러스와 같은 모르빌리바이러스의 바이러스 당단백질을 사용하여 유사형화된다. 일부 구현예에서, 유사형화 바이러스-유사 입자는 홍역 바이러스의 바이러스 당단백질을 사용하여 유사형화된다. 일부 구현예에서, 유사형 바이러스-유사 입자는 니파 바이러스, 시더 바이러스 또는 헨드라 바이러스와 같은 헤니파바이러스의 바이러스 당단백질을 사용하여 유사형화된다. 일부 구현예에서, 유사형 바이러스 유사-입자는 니파 바이러스의 바이러스 당단백질을 사용하여 유사형화된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 폴리펩티드 또는 항체는 링커를 통해 파라믹소바이러스 패밀리 바이러스의 외피(envelope) 당단백질 G 또는 H에 연결된다. 일부 구현예에서, 파라믹소바이러스 패밀리 바이러스는 홍역 바이러스와 같은 모르빌리바이러스이다. 일부 구현예에서, 파라믹소바이러스 패밀리 바이러스는 니파바이러스, 시더바이러스 또는 헨드라바이러스와 같은 헤니파바이러스이다.
[00155] 본원에 규정된 바와 같이, 바이러스는 야생형이든 돌연변이형이든 VSV-G 단백질로 유사형화될 수 있다. 어떤 특별한 이론에 얽매이지 않고, 위치 182에 돌연변이를 포함하는 바이러스(예: 렌티바이러스)의 유사형을 결정하는 데 사용할 수 있는 돌연변이 VSV-G 단백질은 바이러스가 표적화 모이어티를 포함할 때 바이러스의 유사형을 결정하고 세포에 형질도입하는 데 사용될 수 있다. 이 돌연변이는 VSV-G의 자연적 보조 수용체(co-receptor)인 LDL-R에 대한 친화성을 억제하거나 감소시킨다. 제시된 돌연변이 VSV-G 단백질은 일부 구현예에서 표적 세포를 형질감염하여 표적 세포에 이종 분자를 전달하는 데 사용될 수 있다.
[00156] 일부 구현예에서, 서열 번호 1과 비교했을 때 위치 198에 돌연변이가 포함되거나, 서열 번호 2와 비교했을 때 위치 182에 돌연변이가 포함된 VSV-G 단백질이 제공된다. 서열 번호 1은 전장 단백질이고 서열 번호 2는 VSV-G 단백질의 엑토도메인이다. 서열 번호 1의 N-말단에 표시된 MKCLLYLAFLFIGVNC (서열 번호 65)의 16-mer(16-mer) 신호 펩티드(서열 번호 65)가 결실되어 서열 번호 2의 단백질이 남게 된다. 따라서 돌연변이가 서열 번호 2의 맥락에서 언급될 수 있지만, 리더 서열을 포함하는 서열 번호 1의 맥락에서도 발생한 것으로 이해해야 하며, 따라서 서열 번호 2에 대해 언급된 위치보다 16개 더 많은 위치 번호가 된다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 VSV-G 단백질이 LDL 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 2와 비교했을 때 I182D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 2와 비교했을 때 I182E 돌연변이이다.
[00157] 일부 구현예에서, 서열 번호 10과 비교했을 때 위치 198에 돌연변이가 포함되거나, 서열 번호 11과 비교했을 때 위치 182에 돌연변이가 포함된 VSV-G 단백질이 제공된다. 서열 번호 10은 전장 단백질이고 서열 번호 11은 VSV-G 단백질의 엑토도메인이다. 서열 번호 10의 N-말단에 표시된 MLSYLIFALVVSPILG(서열 번호 66)의 16-mer 신호 펩티드는 결실되어 서열 번호 11의 단백질이 남는다. 따라서 돌연변이가 서열 번호 11의 맥락에서 언급될 수 있지만, 리더 서열을 포함하는 서열 번호 10의 맥락에서도 발생한 것으로 이해해야 하며, 따라서 서열 번호 11에 대해 언급된 위치보다 16개 더 많은 위치 번호가 된다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 LDL 수용체(LDL-R)에 대한 VSV-G 단백질의 결합을 억제 또는 감소시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 11과 비교했을 때 T182D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 11과 비교했을 때 T182E 돌연변이이다.
[00158] 일부 구현예에서는, 서열 번호 12와 비교했을 때 위치 198에 돌연변이가 포함되거나, 서열 번호 13과 비교했을 때 위치 182에 돌연변이가 포함된 VSV-G 단백질이 제공된다. 서열 번호 12는 전장 단백질이고 서열 번호 13은 VSV-G 단백질의 엑토도메인이다. 서열 번호 12의 N-말단에 표시된 MLRLFLFCFLALGAHS(서열 번호 67)의 16-mer 신호 펩티드는 결실되어 서열 번호 13의 단백질이 남는다. 따라서 돌연변이가 서열 번호 13의 맥락에서 언급될 수 있지만, 리더 서열을 포함하는 서열 번호 12의 맥락에서도 발생한 것으로 이해해야 하며, 따라서 서열 번호 13에 대해 언급된 위치보다 16개 더 많은 위치 번호가 된다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 VSV-G 단백질이 LDL 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 13과 비교했을 때 A182D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 13과 비교했을 때 A182E 돌연변이이다.
[00159] 일부 구현예에서, 서열 번호 14와 비교했을 때 위치 203에 돌연변이가 포함되거나, 서열 번호 15와 비교했을 때 위치 182에 돌연변이가 포함된 VSV-G 단백질이 제공된다. 서열 번호 14는 전장 단백질이고 서열 번호 15는 VSV-G 단백질의 엑토도메인이다. 서열 번호 14의 N-말단에 표시된 MKMKMVIAGLILCIGILPAIG(서열 번호 68)의 21-mer 신호 펩티드가 결실되어 서열 번호 15의 단백질이 남게 된다. 따라서 돌연변이는 서열 번호 15의 맥락에서 언급될 수 있지만, 리더 서열을 포함하는 서열 번호 14의 맥락에서도 이루어진 것으로 이해되어야 하며, 따라서 서열 번호 15에 대해 언급된 위치보다 21개 더 많은 위치 번호가 될 것이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 VSV-G 단백질이 LDL 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 15와 비교했을 때 V182D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 15와 비교했을 때 V182E 돌연변이이다.
[00160] 일부 구현예에서, 서열 번호 16과 비교했을 때 위치 199에 돌연변이가 포함되거나, 서열 번호 17과 비교했을 때 위치 182에 돌연변이가 포함된 VSV-G 단백질이 제공된다. 서열 번호 16은 전장 단백질이고 서열 번호 17은 VSV-G 단백질의 엑토도메인이다. 서열 번호 16의 N-말단에 표시된 MTPAFILCMLLAGSSWA(서열 번호 69)의 17-mer 신호 펩티드가 결실되어 서열 번호 17의 단백질이 남게 된다. 따라서 돌연변이는 서열 번호 17의 맥락에서 언급될 수 있지만, 리더 서열을 포함하는 서열 번호 16의 맥락에서도 만들어진 것으로 이해되어야 하며, 따라서 서열 번호 17에 대해 언급된 위치보다 17개 더 많은 위치 번호가 될 것이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 VSV-G 단백질이 LDL 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 17과 비교했을 때 V182D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 17과 비교했을 때 V182E 돌연변이이다.
[00161] 일부 구현예에서, 서열 번호 18과 비교했을 때 위치 199에 돌연변이가 포함되거나, 서열 번호 19와 비교했을 때 위치 182에 돌연변이가 포함된 VSV-G 단백질이 제공된다. 서열 번호 18은 전장 단백질이고 서열 번호 19는 VSV-G 단백질의 엑토도메인이다. 서열 번호 18의 N-말단에 표시된 MNFLLLTFIVLPLCSHA(서열 번호 70)의 17-mer 신호 펩티드가 결실되어 서열 번호 19의 단백질이 남게 된다. 따라서 돌연변이는 서열 번호 19의 맥락에서 언급될 수 있지만, 리더 서열을 포함하는 서열 번호 18의 맥락에서도 만들어진 것으로 이해되어야 하며, 따라서 서열 번호 19에 대해 언급된 위치보다 17개 더 많은 위치 번호가 될 것이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 VSV-G 단백질이 LDL 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 19와 비교했을 때 V182D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 19와 비교했을 때 V182E 돌연변이이다.
[00162] 일부 구현예에서, 서열 번호 20과 비교했을 때 위치 199에 돌연변이가 포함되거나, 서열 번호 21과 비교했을 때 위치 182에 돌연변이가 포함된 VSV-G 단백질이 제공된다. 서열 번호 20은 전장 단백질이고 서열 번호 21은 VSV-G 단백질의 엑토도메인이다. 서열 번호 20의 N-말단에 표시된 MLVLYLLLSLLALGAQC의 17-mer 신호 펩티드(서열 번호 71)가 결실되어 서열 번호 21의 단백질이 남게 된다. 따라서 돌연변이는 서열 번호 21의 맥락에서 언급될 수 있지만, 리더 서열을 포함하는 서열 번호 20의 맥락에서도 만들어진 것으로 이해되어야 하며, 따라서 서열 번호 21에 대해 언급된 위치보다 17개 더 많은 위치 번호가 될 것이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 VSV-G 단백질이 LDL 수용체(LDL-R)에 결합하는 것을 억제하거나 감소시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 21과 비교했을 때 I182D 돌연변이이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 서열 번호 21과 비교했을 때 I182E 돌연변이이다.
[00163] 본원에 사용된 바와 같이, 폴리펩티드가 참조 서열과 비교했을 때 돌연변이가 있다고 할 때, 이러한 비교는 기본 매개변수를 사용하는 BlastP, ClustalW 또는 ClutalOmega 정렬 소프트웨어를 사용하는 정렬을 기반으로 한다. 예를 들어, 위치 182는 서열 번호 2에서 찾을 수 있으며, 도 3에 도시된 바와 같이 다른 균주와 비교해서 찾을 수도 있다. 도 3은 다양한 VSV-G 단백질 균주의 엑토도메인의 야생형 서열의 클러스터 정렬을 보여준다. 볼드체로 밑줄 친 잔기는 다양한 균주의 서열 번호 2의 위치 182에 정렬되는 잔기이다. 서열 번호 2는 인디애나 균주의 VSV-G 단백질의 엑토도메인을 나타낸다. 서열 번호 11은 뉴저지 균주의 VSV-G 단백질의 엑토도메인을 나타낸다. 서열 번호 13은 마라바 균주의 VSV-G 단백질의 엑토도메인을 나타낸다. 서열 번호 15는 카라하스 균주의 VSV-G 단백질의 엑토도메인을 나타낸다. 서열 번호 17은 알라고아 균주의 VSV-G 단백질의 엑토도메인을 나타낸다. 서열 번호 19는 코칼 균주의 VSV-G 단백질의 엑토도메인을 나타낸다. 서열 번호 21은 모레톤 균주의 VSV-G 단백질의 엑토도메인을 나타낸다. 따라서, 서열 번호 2와 비교했을 때 잔기 182에 정렬되는 잔기도 본원에 제공된 바와 같이 돌연변이될 수 있다.
[00164] 일부 구현예에서, 서열 번호 2와 비교했을 때 위치 182에서의 돌연변이는 알라닌이 아니다. 일부 구현예에서, 서열 번호 2와 비교했을 때 위치 182에서의 돌연변이는 발린이 아니다.
[00165] 일부 구현예에서, 서열 번호 2와 비교한 위치 182에서의 돌연변이는 I182S, I182H, I182T, I182Q 또는 I182N이다. 일부 구현예에서, 서열 번호 11과 비교한 위치 182에서의 돌연변이는 T182S, T182H, T182Q 또는 T182N이다. 일부 구현예에서, 서열 번호 13과 비교한 위치 182에서의 돌연변이는 A182S, A182H, A182T, A182Q 또는 A182N이다. 일부 구현예에서, 서열 번호 15와 비교한 위치 182에서의 돌연변이는 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N이다. 일부 구현예에서, 서열 번호 17과 비교했을 때 위치 182에서의 돌연변이는 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N이다. 일부 구현예에서, 서열 번호 19와 비교했을 때 위치 182에서의 돌연변이는 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N이다. 일부 구현예에서, 서열 번호 21과 비교했을 때 위치 182에서의 돌연변이는 I182S, I182H, I182T, I182Q 또는 I182N이다. 일부 구현예에서, 위치 182에서의 돌연변이는 소수성 잔기가 아니다. 일부 구현예에서, 위치 182에서의 돌연변이는 하전된 잔기이다. 일부 구현예에서, 위치 182에서의 돌연변이는 음전하를 띤 잔기이다.
[00166] 돌연변이는 인디애나 균주의 VSV-G 단백질인 서열 번호 1 또는 서열 번호 2를 참조하여 설명될 수 있지만, 이 돌연변이는 다른 VSV-G 단백질 균주에서도 사용될 수 있다. 예를 들어, 돌연변이는 VSV-G의 뉴저지 균주, VSV-G의 마라바 균주, VSV-G의 카라하스 균주, VSV-G의 알라고아 균주, VSV-G의 코칼 균주 또는 VSV-G의 모레톤 균주에서 발생할 수 있다. 일부 구현예에서, 각각의 서열들은 본원에 제공된 대로이다. 이들의 예는 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 20200216502에서 찾을 수 있으며, 이는 본원에 참조로 포함된다. 예를 들어, VSV-G의 뉴저지 균주의 야생형 전장 또는 엑토도메인은 각각 서열 번호 10 및 서열 번호 11이고, VSV-G의 마라바 균주의 야생형 전장 또는 엑토도메인은 각각 서열 번호 12 및 서열 번호 13이고, VSV-G의 카라하스 균주의 야생형 전장 또는 엑토도메인은 각각 서열 번호 14 및 서열 번호 15이고, VSV-G의 알라고아 균주의 야생형 전장 또는 엑토도메인은 각각 서열 번호 16 및 서열 번호 17이고, VSV-G의 코칼 균주의 야생형 전장 또는 엑토도메인은 각각 서열 번호 18 및 서열 번호 19이고, VSV-G의 모레톤 균주의 야생형 전장 또는 엑토도메인은 각각 서열 번호 각각 20 및 서열 번호 21이다.
[00167] 서열 번호 2와 비교했을 때 위치 182에 돌연변이를 포함하는 VSV-G 단백질은 또한 본원에서 전문이 참조로 포함된 미국 특허 출원 공개 번호 20200216502에 기술된 것과 같은 다른 돌연변이를 포함할 수 있다. 예를 들어, VSV-G 단백질은 서열 번호 2의 위치 8, 47, 209 및/또는 354에 대응하는 위치에서 돌연변이를 포함할 수 있다.
[00168] 일부 구현예에서, 위치 8에서의 치환은 서열 번호 2의 서열에서 대응 위치에 표시된 아미노산과 다른 아미노산에 의한 치환이며 Y는 제외된다. 일부 구현예에서, 위치 209에서의 치환은 서열 번호 2의 대응 위치에 표시된 아미노산과 다른 아미노산에 의한 치환이며 H는 제외된다. 일부 구현예에서, 위치 47에서의 치환은 서열 번호 2의 서열에서 대응 위치에 표시된 아미노산과 다른 아미노산으로 이루어지며, K 또는 R은 제외된다. 일부 구현예에서, 위치 354에서의 치환은 서열 번호 2의 서열에서 대응 위치에 표시된 아미노산과 다른 아미노산으로 이루어지며, K 또는 R은 제외된다.
[00169] 일부 구현예에서, 치환은 위치 47 또는 위치 354에서, 또는 위치 47과 354 모두에서 A, G, F 또는 Q로 치환된다. 일부 구현예에서, 치환은 A 또는 Q이다.
[00170] 일부 구현예에서, 위치 8에서의 치환은 알라닌, 즉 H8A이다.
[00171] 일부 구현예에서, 위치 47에서의 치환은 Q 또는 N, 즉 K47Q 또는 K47N이다.
[00172] 일부 구현예에서, 단백질은 위치 10에서 돌연변이(치환)를 포함한다. 일부 구현예에서, 치환/돌연변이는 Q10A, Q10R 또는 Q10K이다.
[00173] 일부 구현예에서, 서열 번호 2와 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 2(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 1)와 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 I182D 또는 I182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 I182S, I182H, I182T, I182Q 또는 I182N 돌연변이를 포함한다.
[00174] 일부 구현예에서, 서열 번호 11과 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 11(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 10)과 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 T182D 또는 T182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 T182S, T182H, T182Q 또는 T182N 돌연변이를 포함한다.
[00175] 일부 구현예에서, 서열 번호 13과 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 13(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 12)과 비교했을 때 적어도 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 A182D 또는 A182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 A182S, A182H, A182T, A182Q 또는 A182N 돌연변이를 포함한다.
[00176] 일부 구현예에서, 서열 번호 15와 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 15(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 14)와 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 V182D 또는 V182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N 돌연변이를 포함한다.
[00177] 일부 구현예에서, 서열 번호 17과 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 17(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 16)과 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 V182D 또는 V182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N 돌연변이를 포함한다.
[00178] 일부 구현예에서, 서열 번호 19와 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 19(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 18)와 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 V182D 또는 V182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N 돌연변이를 포함한다.
[00179] 일부 구현예에서, 서열 번호 21과 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 21(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 20)과 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 I182D 또는 I182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 I182S, I182H, I182T, I182Q 또는 I182N 돌연변이를 포함한다.
바이러스 당단백질(Viral Glycoproteins)
[00180] 돌연변이 VSV-G 단백질은 예를 들어 렌티바이러스를 포함하되 이에 제한되지 않는 바이러스의 유사형을 결정하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서는, 본원에서 제공하는 바와 같은 돌연변이 VSV-G 단백질을 포함하는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 서열 번호 1과 비교하여 위치 198에 돌연변이를 포함하는 VSV-G 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 2와 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 2(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 1)와 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 2와 비교하여 I182D 또는 I182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 I182S, I182H, I182T, I182Q 또는 I182N 돌연변이를 포함한다.
[00181] 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 서열 번호 10과 비교하여 위치 198에 돌연변이를 포함하는 VSV-G 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 11과 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 11(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 10)과 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 11과 비교하여 T182D 또는 T182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 T182S, T182H, T182Q 또는 T182N 돌연변이를 포함한다.
[00182] 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 서열 번호 12와 비교하여 위치 198에 돌연변이를 포함하는 VSV-G 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 13과 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 13(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 12)과 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 13과 비교하여 A182D 또는 A182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 A182S, A182H, A182T, A182Q 또는 A182N 돌연변이를 포함한다.
[00183] 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 서열 번호 14와 비교하여 위치 203에 돌연변이를 포함하는 VSV-G 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 15와 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 15(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 14)와 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 15와 비교하여 V182D 또는 V182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N 돌연변이를 포함한다.
[00184] 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 서열 번호 16과 비교하여 위치 199에 돌연변이를 포함하는 VSV-G 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 17과 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 17(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 16)과 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 17과 비교하여 V182D 또는 V182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N 돌연변이를 포함한다.
[00185] 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 서열 번호 18과 비교하여 위치 199에 돌연변이를 포함하는 VSV-G 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 19와 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 19(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 18)와 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 19와 비교하여 V182D 또는 V182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 V182S, V182H, V182T, V182Q 또는 V182N 돌연변이를 포함한다.
[00186] 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 서열 번호 20과 비교하여 위치 199에 돌연변이를 포함하는 VSV-G 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 21과 비교했을 때 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 단백질은 위치 182에서 돌연변이를 포함하고, 서열 번호 21(또는 전장 단백질을 사용하는 경우 서열 번호 20)과 비교했을 때 적어도 또는 약 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 21과 비교하여 I182D 또는 I182E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 I182S, I182H, I182T, I182Q 또는 I182N 돌연변이를 포함한다.
[00187] 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 또한 서열 번호 2의 위치 214 및/또는 352에 대응하는 위치에서 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 2의 위치 214에 대응하는 잔기는 T214이다. 일부 구현예에서, 서열 번호2의 위치 352에 대응하는 잔기는 T352이다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 서열 번호 2와 비교했을 때 T214N 돌연변이에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 서열 번호 2와 비교했을 때 T352A 돌연변이에 대응하는 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 서열 번호 2와 비교하여 T214N 및 T352A 돌연변이를 포함한다. 이러한 돌연변이는 본원에 제공된 바와 같이 다른 돌연변이와 결합될 수 있다. 일부 구현예에서, T214N 및/또는 T352A 돌연변이는 I182E 또는 I182D 돌연변이와 결합된다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 서열 번호 22 및 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는데, 이는 각각 I182D 또는 I182E를 T214N 및 T352A 돌연변이와 결합한다. 리더 서열은 단백질 처리 과정에서 제거되는 서열과 함께 아래에 표시되어 있다.
VSV-G 단백질_ I196D, T230N 및 T368A 돌연변이(리더 서열 및 조정된 넘버링 포함)
MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLDSMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYENGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTAERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK (서열 번호 24)
VSV-G 단백질_I182D, T214N 및 T352A 돌연변이(리더 서열 없음)
KFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLDSMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYENGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTAERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK (서열 번호 22)
I196E, T230N 및 T368A 돌연변이가 있는 VSV-G 단백질(리더 서열 및 조정된 넘버링 포함)
MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLESMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYENGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTAERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK (서열 번호 25)
I182E, T214N 및 T352A 돌연변이가 있는 VSV-G 단백질(리더 서열 없음)
KFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLESMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYENGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTAERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK (서열 번호 23)
[00188] 본원에 설명된 VSV-G 단백질의 다른 균주는 또한 서열 번호 2의 T214N 및/또는 T352A에 대응하는 돌연변이를 포함할 수 있으며, 서열 번호 22 및 서열 번호 23에 예시되어 있다.
[00189] 일부 구현예에서, 조성물은 Hwang et al., Gene Ther 2013 Aug;20(8):807-15. (Epub 2013 Jan 31)에 기술된 바와 같은 돌연변이를 포함하며, 이는 본원에서 전문이 참조로 포함된다. 예를 들어, 돌연변이는 서열 번호 1에 대응하는 위치 230, 368, 66 및/또는 162에 있을 수 있다. 리더 서열이 제거되면 위치는 서열 번호 2와 비교하여 16개 위치가 줄어든다. 일부 구현예에서, 대응 위치의 돌연변이는 예를 들어 T230N, T368A, K66T, S162T 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 T230N 및 T368A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 폴리펩티드는 K66T, S162T, T230N 및 T368A를 포함한다. 이러한 위치들은 전체 길이 단백질(서열 번호 1)의 위치들에 대응한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 T230N 돌연변이, T368A 돌연변이, K66T 돌연변이, S162T 돌연변이 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, VSV-G 단백질은 서열 번호 2의 위치 182에 대응하는 돌연변이 외에도 하나 이상의 돌연변이를 더 포함하며, 본원에서 전문이 참조로 포함된 미국 특허 출원 공개 제20200216502호에 기술된 것과 같은 돌연변이가 포함된다. 예를 들어, VSV-G 단백질은 또한 서열 번호 2의 위치 8, 47, 209 및/또는 354에 대응하는 위치에서 돌연변이를 더 포함할 수 있다.
[00190] 일부 구현예에서, 위치 8에서의 치환은 서열 번호 2의 서열에서 대응 위치에 표시된 아미노산과 다른 아미노산에 의한 치환이며 Y는 제외된다. 일부 구현예에서, 위치 209에서의 치환은 서열 번호 2의 대응 위치에 표시된 아미노산과 다른 아미노산에 의한 치환이며 H는 제외된다. 일부 구현예에서, 위치 47에서의 치환은 서열 번호 2의 서열에서 대응 위치에 표시된 아미노산과 다른 아미노산으로 이루어지며, K 또는 R은 제외된다. 일부 구현예에서, 위치 354에서의 치환은 서열 번호 2의 서열에서 대응 위치에 표시된 아미노산과 다른 아미노산으로 이루어지며, K 또는 R은 제외된다. 일부 구현예에서, 치환은 위치 47 또는 위치 354에서 이루어지거나, 또는 위치 47과 354 모두에서 A, G, F 또는 Q로 치환된다. 일부 구현예에서, 치환은 A 또는 Q이다. 일부 구현예에서, 위치 8에서의 치환은 알라닌, 즉, H8A이다. 일부 구현예에서, 위치 47에서의 치환은 Q 또는 N, 즉, K47Q 또는 K47N이다. 일부 구현예에서, 단백질은 위치 10에서 돌연변이(치환)를 포함한다. 일부 구현예에서, 치환/돌연변이는 Q10A, Q10R 또는 Q10K이다.
[00191] 또한, 일부 구현예에서는 VSV-G 단백질이나 그 돌연변이체 대신, 바이러스를 다른 바이러스 구조 단백질로 유사형화할 수 있다.
[00192] 예를 들어, 바이러스 입자는 카프 바이러스(carp virus) G(SVCV-G) 단백질의 스프링 바이러스혈증(Spring viremia)으로 유사형화될 수 있으며, 바이러스가 표적화 모이어티를 포함할 때 세포를 형질감염할 수 있다. 제공된 카프 바이러스 G 단백질의 스프링 바이러스혈증은 일부 구현예에서 표적 세포의 형질도입을 유도하고 표적 세포에 이종 분자를 전달하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서는, 서열 번호 52를 포함하는 카프 바이러스 G 단백질의 스프링 바이러스혈증이 제공된다. 서열 번호 52는 전장 단백질이고 서열 번호 53은 N-말단 신호 펩티드가 제거된 카프 바이러스 G 단백질의 스프링 바이러스혈증의 엑토도메인(ectodomain)이다. 따라서 일부 구현예에서, 단백질은 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 카프 바이러스 G 단백질의 스프링 바이러스혈증은 렌티바이러스를 포함하되 이에 제한되지 않는 바이러스의 유사형을 만드는 데 사용될 수 있다. 따라서 일부 구현예에서, 본원에 제공된 바와 같이 카프 바이러스 G 단백질의 스프링 바이러스혈증을 포함하는 바이러스 입자가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 서열 번호 52 또는 서열 번호 53을 포함하거나, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53의 서열과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 카프 바이러스 G 단백질의 스프링 바이러스혈증을 포함한다.
[00193] 카프 바이러스의 스프링 바이러스혈증 서열 - G (서열 번호 52-리더 서열 포함)
MSIISYIAFLLLIDSNLGIPIFVPSGRNISWQPVIQPFDYQCPIHGNLPNTMGLSATKLTIKSPSVFSTDKVSGWICHAAEWKTTCDYRWYGPQYITHSIHPISPTIDECRRIIQRIASGTDEDLGFPPQSCGWASVTTVSNTNYRVVPHSVHLEPYGGHWIDHEFNGGECREKVCEMKGNHSIWITEETVQHECAKHIEEVEGIMYGNVPRGDVMYANNFIIDRHHRVYRFGGSCQMKFCNKDGIKFARGDWVEKTAGTLTTIHDNVPKCVDGTLVSGHRPGLDLIDTVFNLENVVEYTLCEGTKRKINKQEKLTSVDLSYLAPRIGGFGSVFRVRNGTLERGSTTYIRIEVEGPIVDSLNGTDPRTNASRVFWDDWELDGNIYQGFNGVYKGKDGKIHIPLNMIESGIIDDELQHAFQADIIPHPHYDDDEIREDDIFFDNTGENGNPVDAVVEWVSGWGTSLKFFGMTLVALILIFLLIRCCVACTYLMKRSKRPATESHEMRSLV
[00194] 카프 바이러스의 스프링 바이러스혈증 서열 - G(서열 번호 53-리더 서열 없음):
IPIFVPSGRNISWQPVIQPFDYQCPIHGNLPNTMGLSATKLTIKSPSVFSTDKVSGWICHAAEWKTTCDYRWYGPQYITHSIHPISPTIDECRRIIQRIASGTDEDLGFPPQSCGWASVTTVSNTNYRVVPHSVHLEPYGGHWIDHEFNGGECREKVCEMKGNHSIWITEETVQHECAKHIEEVEGIMYGNVPRGDVMYANNFIIDRHHRVYRFGGSCQMKFCNKDGIKFARGDWVEKTAGTLTTIHDNVPKCVDGTLVSGHRPGLDLIDTVFNLENVVEYTLCEGTKRKINKQEKLTSVDLSYLAPRIGGFGSVFRVRNGTLERGSTTYIRIEVEGPIVDSLNGTDPRTNASRVFWDDWELDGNIYQGFNGVYKGKDGKIHIPLNMIESGIIDDELQHAFQADIIPHPHYDDDEIREDDIFFDNTGENGNPVDAVVEWVSGWGTSLKFFGMTLVALILIFLLIRCCVACTYLMKRSKRPATESHEMRSLV
표적화 모이어티
[00195] 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 T-S1의 화학식을 갖는 표적화 모이어티를 포함하는데, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이다. 표적화 모이어티는 돌연변이 VSV-G 단백질 또는 SVCV-G 단백질을 포함하는 바이러스 입자를 표적화 모이어티가 결합하는 표적을 발현하는 세포로 표적화하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 항체, scFv 항체, 항원 결합 도메인, 앵커린 반복(ankyrin repeat)(예: DARPIN), VHH 도메인 항체, 나노바디, 단일 도메인 항체, FN3 도메인 또는 이들의 임의의 조합이다. 표적 결합 도메인은 본원에서 제공하는 바와 같이 변이된 Fc 단백질(예: L1-Fc-L2-X1)을 통해 또는 본원에서 제공하는 바와 같이 유연한 폴리펩티드(예: L3-X1)를 통해 바이러스 표면에 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 모르빌리바이러스(morbillivirus)(예: 홍역 바이러스(Measles virus)) 또는 헤니파바이러스(henipavirus)(예: 니파 바이러스, 시더 바이러스 또는 헨드라 바이러스)와 같은 파라믹소바이러스계(Paramyxoviridae family) 바이러스의 외피 당단백질 G 또는 H에 부착(융합 또는 연결)된다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 뉴저지 수포구내염 바이러스, 인디애나 수포구내염 바이러스, 알라고아스 수포구내염 바이러스, 마라바 수포구내염 바이러스, 카라하스 수포구내염 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 스포도프테라 프루기페르다 라브도바이러스 분리체 Sf G, 초파리 옵스쿠라 시그마바이러스 10A, 우한 곤충 바이러스 7, 퍼치 바이러스 또는 카프 바이러스의 스프링 바이러스혈증과 같은 라브도바이러스계 바이러스의 당단백질에 부착(융합 또는 연결)될 수 있다. 일부 구현예에서, VSV 단백질은 돌연변이된 단백질, 예를 들어 본원에 제공된 단백질이다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 에볼라 바이러스와 같은 필로바이러스계 바이러스의 당단백질 또는 마추포 바이러스와 같은 아레나바이러스계 바이러스의 당단백질에 부착된다.
[00196] 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 scFv이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 VHH이다.
[00197] 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 다음에 결합한다: CD7, CD8, cKit(CD117), CD4, CD3, CD5, CD6, CD2, TCR 알파, TCR 베타, TCR 감마, TCR 델타, CD10, CD34, CD110, CD33, CD14, CD68, CCR7, CD62L, CD25, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7 또는 CXCR3, 급성 백혈병이나 림프종에는 발현되지만 조혈 전구 세포에는 발현되지 않는 당화된 CD43 에피토프; 비조혈암에 발현되는 당화된 CD43 에피토프; 키나제 앵커 단백질 4(AKAP-4); 아드레노 수용체 베타 3(ADRB3); AFP; 이형성 림프종 키나제(ALK); 안드로겐 수용체; 안지오포이에틴 결합 세포 표면 수용체 2(Tie 2); 데스모글레인 1(Dsgl)에 대한 자가 항체; 데스모글레인 3(Dsg3)에 대한 자가 항체; B7H3(CD276); 비오틴; 골수 기질 세포 항원 2(BST2); BST1/CD157; 암/고환 항원 1(NY-ESO-1); 암/고환 항원 2(LAGE-la); 탄산탈수효소 IX(CA1X); 암태아 항원(CEA); CCCTC-결합 인자(아연 핑거 단백질)-유사(BORIS 또는 각이니 부위 조절자의 형제); CCR4; CD5; CD19; CD20; CD22; CD24; CD30; CD32(FCGR2A); CD33; CD34; CD38; CD44v6; CD72; CD79a; CD79b; CD97; CD99; CD123; CD171; CD179a; CD179b-IGLll; CD200R; CD276/B7H3; CD300 분자 유사 패밀리 멤버 f(CD300LF); CDH1-CD324; CDH6; CDH17; CDH19; 염색체 X 개방 판독 프레임 61(CXORF61); 클라우딘 6(CLDN6); 클라우딘18.2(CLD18A2 또는 CLDN18A.2); CMV pp65; C-MYC 에피토프 태그; 크립토; CS1(CD2 하위 집합 1 또는 CRACC 또는 SLAMF7 또는 CD319 또는 19A24라고도 함); CSF2RA(GM-CSFR-알파); C-형 렉틴 도메인 패밀리 12 멤버 A(CLEC12A); C-형 렉틴 유사 분자-1(CLL-1 또는 CLECL1); 사이클린 Bl; 시토크롬 P450 IB 1(CYP1B 1); DLL3; EBV-EBNA3c; EGF-bke 모듈-뮤신 유사 호르몬 수용체 유사 2(EMR2) 함유; 연장 인자 2 돌연변이(ELF2M); 에프린 B2; 에프린 A형 수용체 2(EphA2); 상피세포 접착 분자(EPCAM); ERG; 12p 염색체에 위치한 ETS 전좌 변이 유전자 6(ETV6-AML); IgA 수용체의 Fc 단편(FCAR 또는 CD89); Fc 수용체 유사 5(FCRL5); 섬유아세포 활성화 단백질 알파(FAP); FITC; Fms 유사 티로신 키나제 3(FLT3); 엽산 수용체 알파(FRa 또는 FR1); 엽산 수용체 베타(FRb); 난포 자극 호르몬 수용체(FSHR); Fos 관련 항원 1; 푸코실-GM1; G 단백질 결합 수용체 클래스 C 군 5 멤버 D(GPRC5D); G 단백질 결합 수용체 20(GPR20); GAD; 갱글리오시드 G2(GD2); 갱글리오시드 GD3(aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(l-4 )bDGlcp(l-l)Cer); 갱글리오시드 GM3(aNeu5Ac(2-3)bDCalp(l-4)bDGlcp(l-l)Cer); GD3; GFRalpha4; 당단백질 100(gplOO); 글리피칸-3(GPC3); 생식선 자극 호르몬 수용체(CGHR 또는 GR); GpA33; GpNMB; GPRC5D; 구아닐릴 고리화효소 C (GCC); 열충격 단백질 70-2 돌연변이 (mut hsp70-2); A형 간염 바이러스 세포 수용체 1 (HAVCR1); GloboH 글리코세라마이드 (GloboH)의 육당류 부분; 고분자량 흑색종 관련 항원 (HMWMAA); HIV1 외피 당단백질; HLA; HLA-DOA; HLA-A; HLA-A2; HLA-B; HLA-C; HLA-DM; HLA-DOB; HLA-DP; HLA-DQ; HLA-DR; HLA-G; HTLVL-Tax; 인간 유두종 바이러스 E6 (HPV E6); 인간 유두종 바이러스 E7(HPV E7); 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT); IgE; IL13Ra2; IL11Ra; 면역글로불린 람다 유사 폴리펩티드 1(IGLL1); 인플루엔자 A 헤마글루티닌(HA); 인슐린 유사 성장 인자 1 수용체(IGF-I 수용체); 인터루킨 11 수용체 알파(IL-llRa); 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL-13Ra2 또는 CD213A2); 장내 카르복실 에스테라제; KIT(CD117); KSHV K8.1; KSHV-gH; LAMP1; 레구마인; 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 하위 패밀리 A 멤버 2(LILRA2); 백혈구 관련 면역글로불린 유사 수용체 1(LAIR1); 황체형성호르몬 수용체(LHR); 루이스(Y) 항원; 류스 항원(Lews Ag); LiVL; Locus K 9(LY6K); 저전도도 염화물 채널; 림프구 항원 6 복합체; 림프구 항원 75(LY75); 림프구 특이적 단백질 티로신 키나제(LCK); 유선 분화 항원(NY-BR-1); T 세포 1(MelanA 또는 MARTI)에 의해 인식되는 흑색종 항원; 흑색종 관련 항원 1(MAGE-A1); 흑색종 암 고환 항원-1(MAD-CT-1); 흑색종 암 고환 항원-2(MAD-CT-2); 흑색종 세포 사멸 억제제(ML-IAP); 메소텔린; MPL; 뮤신 1 세포 표면 관련(MUC1); N-아세틸 글루코사미닐-트랜스퍼라제 V(NA17); 넥틴-4; 신경 세포 접착 분자(NCAM); NKG2D; NYBR1; O-아세틸-GD2 갱글리오시드(OAcGD2); 후각 수용체 51E2(OR51E2); 중단점 클러스터 영역(BCR)과 Abelson 쥐 백혈병 바이러스 온코진 동족체 1(Abl)(bcr-abl)로 구성된 온코진 융합 단백질; P53 돌연변이; 쌍을 이룬 상자 단백질 Pax-3(PAX3); 쌍을 이룬 상자 단백질 Pax-5(PAX5); 파넥신 3(PANX3); PDL1; P-당단백질; 태반 특이적 1(PLAC1); 혈소판 유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFR-베타); 폴리시알산; 프로아크로신 결합 단백질 sp32(OY-TES1); 프로스타제; 전립선 암종 항원-1(PCT A-1 또는 갈렉틴 8); 전립선 줄기 세포 항원(PSCA); 전립선 특이 막 항원(PSMA); 전립선 산성 인산가수분해효소(PAP); 프로스타인; 프로테아제 세린 21(테스티신 또는 PRSS21); 프로테아솜(프로솜 마크로페인) 서브유닛 베타 유형 9(LMP2); PTK7; Ras G12V; Ras 동족 패밀리 멤버 C (RhoC); 쥐 육종 (Ras) 돌연변이; 고급 당화 양이온 최종산물 수용체 (RAGE-1); 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1 (ROR1); 수용체 티로신 단백질 키나제 ERBB2 또는 Her-22/neu; 신장 유비쿼터스 1 (RU1); 신장 유비쿼터스 2 (RU2); 육종 전위 중단점; 세린 2 (TMPRSS2) ETS 융합 유전자; 시알릴 루이스 접착 분자 (sLe); SLAMF4; SLAMF6; Slea(CA19.9 또는 Sialyl Lewis 항원); 정자 단백질 17(SPA17); T 세포 3(SART3)에 의해 인식되는 편평세포암 항원; 단계 특이적 배아 항원-4(SSEA-4); STEAP1; Survivin; 활막 육종 X 중단점 2(SSX2); TCR 감마 대체 판독 프레임 단백질(TARP); TCR-베타1 사슬; TCR-베타2 사슬; TCR-델타 사슬; TCR-감마 사슬; TCR감마-델타; 텔로머라제; TGFbetaR2; TNT 항체에 의해 인식되는 항원; 갑상선 자극 호르몬 수용체 (TSHR); Timl-/HVCR1; 조직 인자 1 (TF1); Tn ag; Tn 항원 ((Tn Ag) 또는 (GalNAca-Ser/Thr)); TNF 수용체 패밀리 멤버 B 세포 성숙 (BCMA); 트랜스글루타미나제 5 (TGS5); 막관통 프로테아제; TROP2; 종양 내피 마커 1(TEM1/CD248); 종양 내피 마커 7 관련(TEM7R); 종양 단백질 p53(p53); 종양 관련 당단백질 72(TAG72); 티로시나아제; 티로시나아제 관련 단백질 2(TRP-2); 유로플라킨 2(UPK2); 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2); V-myc 조류 골수세포종 바이러스 종양 유전자 신경모세포종 유래 동족체(MYCN); 윌름스 종양 단백질(WT1); 또는 X 항원 패밀리 멤버 1A(XAGE1). 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 CD8에 결합한다.
[00198] 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 면역 세포와 같은 세포에 존재하는 표적에 결합한다. 일부 구현예에서, 세포는 면역 세포, 예를 들어, T 세포, B 세포; NK 세포, 수지상 세포, 호중구, 대식세포, 암 세포; 또는 예를 들어, CD3+ T 세포; CD4+ T 세포; CD7+ T 세포, CD8+ T 세포; CD19+ B 세포; CD19+ 암 세포; CD20+ B 세포; CD20+ 암 세포; CD30+ 폐 상피 세포; CD34+ 조혈 줄기 세포(haematopoietic stem cell); CD105+ 내피 세포; CD105+ 조혈 줄기 세포; CD117+ 조혈 줄기 세포; CD133+ 암 세포; EpCAM+ 암 세포; GluA2+ 뉴런; GluA4+ 뉴런; 조혈 줄기 세포; 간세포; Her2/Neu+ 암 세포; NKG2D+ 자연 살해 세포; SLC1A3+ 성상세포(astrocyte); SLC7A10+ 지방세포(adipocyte)이다. 일부 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 B 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 CD7+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포이다.
CD7 결합 폴리펩티드(CD7 binding polypeptides)
[00199] 일부 구현예에서, 표적화 모이어티(예: 폴리펩티드)은 CD7에 결합한다.
[00200] 일부 구현예에서, CD7에 결합하는 폴리펩티드는 비인간 영장류 CD7에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, CD7에 결합하는 폴리펩티드는 인간 CD7에 결합하는 항체이다. 인간 CD7(UniProtKB P09564)의 서열은 다음과 같다(서열 번호 29):
MAGPPRLLLLPLLLALARGLPGALAAQEVQQSPHCTTVPVGASVNITCSTSGGLRGIYLRQLGPQPQDIIYYEDGVVPTTDRRFRGRIDFSGSQDNLTITMHRLQLSDTGTYTCQAITEVNVYGSGTLVLVTEEQSQGWHRCSDAPPRASALPAPPTGSALPDPQTASALPDPPAASALPAALAVISFLLGLGLGVACVLARTQIKKLCSWRDKNSAACVVYEDMSHSRCNTLSSPNQYQ (서열 번호 29).
[00201] 일부 구현예에서, 폴리펩티드가 결합하는 CD7은 세포 표면에 발현된다. 일부 구현예에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD7+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, NK 세포, 알파-베타 T 세포, 감마-델타 T 세포, 림프 전구 세포, 조혈 줄기 세포, 골수 세포, 단핵구, 대식세포, 중앙 기억 T 세포, 효과기 기억 T 세포, 줄기 세포 유사 기억 T 세포, 나이브(naive) T 세포, 활성화된 T 세포, 조절 T 세포(TReg), 말단 분화된 효과기 기억 T 세포(TEMRA), 상주 기억 T 세포(TRM) 또는 T 세포CD8+CCR7+이다.
[00202] 일부 구현예에서, 항체는 Fc 영역을 포함한다. Fc 영역은 항체의 중쇄 또는 경쇄에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 IgG Fc이다. 일부 구현예에서, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4에서 선택된다. 일부 구현예에서, IgG fc는 IgG1 Fc이다. 일부 구현예에서, 항체는 본원에 제시된 바와 같은 Fc 불변 영역, 예를 들어 서열 번호 26, 27 또는 28 또는 본원에 제공된 바와 같은 이의 돌연변이체를 포함한다.
[00203] 일부 구현예에서, 폴리펩티드(예: CD7-결합 폴리펩티드)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체(예: 항-CD7 항체)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체는 CD7에 결합하는 재조합 항체이다. 일부 구현예에서, CD7 단백질은 인간 CD7 단백질이다. 일부 구현예에서, CD7 단백질은 비인간 CD7 단백질(예: 마우스, 래트, 돼지, 개, 비인간 영장류)이다. 본원에서 사용되는 용어 "재조합 항체(recombinant antibody)"는 자연적으로 발생하지 않는 항체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 용어 "재조합 항체"는 인간 대상으로부터 분리되지 않은 항체를 지칭한다.
[00204] 일부 구현예에서는 항체 또는 그 항원 결합 단편이 제공되는데, 여기서 항체 또는 항체 단편은 Kabat 넘버링에 따른 CDR을 설명하는 다음 표에서 선택된 펩티드를 포함한다.
[00205] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 위 표에 제공된 것과 같은 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 위 표에 제공된 것과 같은 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함하고 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 상기 표에 제공된 바와 같은 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함하고 인간 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 33-35에서 선택된 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 33의 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 34의 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 35의 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 30-32에서 선택된 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 30의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 31의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 항체 결합 단편은 서열 번호 32의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 본 명세서 전체의 구현예에서 참조되는 CDR은 Chothia 및 IMGT와 같이 서로 다른 형식을 특징으로 하는 CDR과 상호 교환될 수 있다.
[00206] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 LCDR1은 서열 번호 33의 서열을 갖고, LCDR2는 서열 번호 34의 서열을 갖고, LCDR3은 서열 번호 35의 서열을 갖는다.
[00207] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 HCDR1은 서열 번호 30의 서열을 갖고, HCDR2는 서열 번호 31의 서열을 갖고, HCDR3은 서열 번호 32의 서열을 갖는다.
[00208] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 항체 결합 단편은 다음을 포함한다: (i) 앞서 언급된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열의 조합 중 어느 하나를 갖는 경쇄; 및 (ii) 앞서 언급된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열의 조합 중 어느 하나를 갖는 중쇄.
[00209] 다른 CDR 모티프는 위의 표에 나와 있지 않은 것을 포함하여 어떠한 조합으로든 결합될 수 있다. 예를 들어, 다음 구현예들은 이러한 조합의 비제한적인 예로 제공된다.
[00210] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: (i) 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 여기서 경쇄 CDR1 서열은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖고; 경쇄 CDR2는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖고; 경쇄 CDR3 서열은 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖고; 및 (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 여기서 중쇄 CDR1 서열은 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖고; 중쇄 CDR2 서열은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖고; 중쇄 CDR3 서열은 서열 번호 32의 아미노산 서열을 갖는다(또는 상기 중 어느 것의 변이체).
[00211] 앞의 문단에서는 Kabat 시스템의 CDR을 언급했지만, IMGT와 CHOTHIA 명칭에서 동등한 CDR 서열를 사용할 수 있다.
[00212] 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역 CDR1은 다른 경쇄 CDR1 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역 CDR2는 다른 경쇄 CDR2 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역 CDR3은 다른 경쇄 CDR3 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 CDR1은 다른 중쇄 CDR1 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 CDR2는 다른 중쇄 CDR2 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 CDR3는 다른 중쇄 CDR3 서열 중 임의의 하나로 대체된다.
[00213] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 다음 서열 중 하나를 갖는 중쇄 가변 영역 펩티드 또는 그 변이체를 포함한다:
[00214] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 다음 서열 중 하나를 갖는 경쇄 가변 영역 펩티드 또는 그 변이체를 포함한다:
[00215] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 36의 VH 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 37의 VL 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하는데, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열 또는 이의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하며, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열을 포함한다.
[00216] VH 및 VL 서열은 scFv 형식을 포함하되 이에 제한되지 않는 어떠한 형식이든 될 수 있는데, 여기서 VH 및 VL 영역은 펩티드 링커로 연결된다. 본원에 제공된 다양한 펩티드를 연결하는 데 사용될 수 있는 펩티드 링커의 예는 다음을 포함하나 이에 제한되지 않는다: (GGGGS)n (서열 번호 55). 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 일부 구현예에서, 가변 영역은 펩티드 링커로 연결되지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 36 및 서열 번호 37을 포함한다.
[00217] 본원에 제공된 바와 같이, 이의 폴리펩티드, 항체 또는 항원 결합 단편은 상기 서열들의 변이체일 수 있다.
[00218] 폴리펩티드 또는 항체의 서열은 인간 IgG 항체를 생성하도록 변형될 수 있다. 본원에 제공된 서열의 변환은 다른 유형의 항체를 생성하도록 변형될 수 있다. CDR은 또한 다른 항체, 단백질 또는 분자에 연결되어 CD7에 결합하는 항체 단편을 생성할 수 있다.
[00219] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드 또는 항체는 엔지니어링된 바이러스 입자의 표면 상의 표적화 모이어티이다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 표적 세포에 결합하는 것을 허용한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 본원에 제공된 폴리펩티드 또는 항체와 같은 CD7 결합 모이어티이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하거나:
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTSIHWYQQRTNDSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNSWPTTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYPFTSYWIHWVKQRPGRGLEWLGRIDPNSGDTKYNEKFKNKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSPYYSNDNSMDYWGQGTSVTVSS (서열 번호 38)
또는 서열 번호 38과 실질적으로 유사하거나, 서열 번호 38의 활성 단편이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 38의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 38의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 38의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 38에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 38에 제시된 표적 결합 도메인("T")은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 항-CD7 항체이다.
[00220] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드 또는 항체는 조작된 바이러스 입자의 표면 상의 표적화 모이어티다. 일부 구현예에서, 조작된 바이러스 입자는 유사형 바이러스 유사 입자이다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 타겟 세포에 결합하는 것을 허용한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 본원에서 제공된 폴리펩티드 또는 항체와 같은 CD7 결합 모이어티이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 39의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하거나,
QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYPFTSYWIHWVKQRPGRGLEWLGRIDPNSGDTKYNEKFKNKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSPYYSNDNSMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTSIHWYQQRTNDSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNSWPTTFGGGTKLEIKR (서열 번호 39)
또는 서열 번호 39와 실질적으로 유사하거나, 서열 번호 39의 활성 단편이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 39의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 39의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 39에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 39에 제시된 표적 결합 도메인("T")은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 항-CD7 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 인간 CD7에 결합한다.
CD8 결합 폴리펩티드
[00221] 일부 구현예에서, 표적화 모이어티(예: 폴리펩티드)은 CD8에 결합할 수 있다.
[00222] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 CD8-알파에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 CD8-베타에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 CD8 헤테로다이머(heterodimer)에 결합한다. 일부 구현예에서, CD8 헤테로다이머는 CD8-알파 및 CD8-베타 서브유닛을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 CD8-알파 호모다이머(homodimer)에 결합한다. 일부 구현예에서, CD8에 결합하는 폴리펩티드는 비인간 영장류 CD8에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 비인간 영장류 CD8에 결합하는 항체는 비인간 영장류 CD8-알파에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 비인간 영장류 CD8에 결합하는 항체는 비인간 영장류 CD8-베타에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 비인간 영장류 CD8에 결합하는 항체는 비인간 영장류 CD8-알파 호모다이머에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 비인간 영장류 CD8에 결합하는 항체는 비인간 영장류 CD8 헤테로다이머에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, CD8에 결합하는 폴리펩티드는 인간 CD8에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 인간 CD8에 결합하는 항체는 인간 CD8-알파에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 인간 CD8에 결합하는 항체는 인간 CD8-베타에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 인간 CD8에 결합하는 항체는 인간 CD8-알파 호모다이머에 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 인간 CD8에 결합하는 항체는 인간 CD8 헤테로다이머에 결합하는 항체이다. 인간 CD8-알파(UniProtKB Q8TAW8)의 서열은 다음과 같다(서열 번호 40):
MALPVTALLLPLALLLHAARPSQFRVSPLDRTWNLGETVELKCQVLLSNPTSGCSWLFQPRGAAASPTFLLYLSQNKPKAAEGLDTQRFSGKRLGDTFVLTLSDFRRENEGCYFCSALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVVKSGDKPSLSARYV (서열 번호 40).
[00223] 인간 CD8-베타(UniProtKB Q8TD28)의 서열은 다음과 같다(서열 번호 41):
MRPRLWLLLAAQLTVLHGNSVLQQTPAYIKVQTNKMVMLSCEAKISLSNMRIYWLRQRQAPSSDSHHEFLALWDSAKGTIHGEEVEQEKIAVFRDASRFILNLTSVKPEDSGIYFCMIVGSPELTFGKGTQLSVVDFLPTTAQPTKKSTLKKRVCRLPRPETQKGPLCSPITLGLLVAGVLVLLVSLGVAIHLCCRRRRARLRFMKQLYK (서열 번호 41).
[00224] 일부 구현예에서, 폴리펩티드가 결합하는 CD8은 세포 표면에 발현된다. 일부 구현예에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD7+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, NK 세포, 알파-베타 T 세포, 감마-델타 T 세포, 림프 전구 세포, 조혈 줄기 세포, 골수 세포, 단핵구, 대식세포, 중앙 기억 T 세포, 효과기 기억 T 세포, 줄기 세포 유사 기억 T 세포, 나이브(naive) T 세포, 활성화된 T 세포, 조절 T 세포(TReg), 말단 분화된 효과기 기억 T 세포(TEMRA), 상주 기억 T 세포(TRM) 또는 T 세포 CD8+CCR7+이다. 일부 구현예에서, 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 CD8+ 세포이다.
[00225] 일부 구현예에서, 항체는 Fc 영역을 포함한다. Fc 영역은 항체의 중쇄 또는 경쇄에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 IgG Fc이다. 일부 구현예에서, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4에서 선택된다. 일부 구현예에서, IgG Fc는 IgG1 Fc이다. 일부 구현예에서, 항체는 본원에서 제시된 바와 같은 Fc 불변 영역, 예를 들어 서열 번호 26, 27 또는 28 또는 그 변이체를 포함한다.
[00226] 일부 구현예에서, 폴리펩티드(예: CD8-결합 폴리펩티드)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체(예: 항-CD8 항체)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체는 CD8에 결합하는 재조합 항체이다. 일부 구현예에서, CD8 단백질은 인간 CD8 단백질이다. 일부 구현예에서, CD8 단백질은 비인간 CD8 단백질(예: 마우스, 래트, 돼지, 개, 비인간 영장류)이다. 본원에서 사용되는 용어 "재조합 항체"는 자연적으로 발생하지 않는 항체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 용어 "재조합 항체"는 인간 대상으로부터 분리되지 않은 항체를 지칭한다.
[00227] 일부 구현예에서는 항체 또는 그 항원 결합 단편이 제공되는데, 여기서 항체 또는 항체 단편은 Kabat 넘버링에 따른 CDR을 설명하는 다음 표에서 선택된 펩티드를 포함한다.
[00228] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 위 표에 제공된 것과 같은 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 위 표에 제공된 것과 같은 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함하고 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 위 표에 제공된 바와 같은 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함하고 인간 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 45-47에서 선택된 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 45의 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 46의 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 47의 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 42-44에서 선택된 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 42의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 서열 번호 43의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 항체 결합 단편은 서열 번호 44의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 본 명세서 전체의 구현예에서 참조되는 CDR은 Chothia 및 IMGT와 같이 서로 다른 형식을 특징으로 하는 CDR과 상호 교환될 수 있다.
[00229] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 LCDR1은 서열 번호 45의 서열을 갖고, LCDR2는 서열 번호 46의 서열을 갖고, LCDR3은 서열 번호 47의 서열을 갖는다.
[00230] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 HCDR1은 서열 번호 42의 서열을 갖고, HCDR2는 서열 번호 43의 서열을 갖고, HCDR3은 서열 번호 44의 서열을 갖는다.
[00231] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 항체 결합 단편은 다음을 포함한다: (i) 앞서 언급된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열의 조합 중 하나를 갖는 경쇄; 및 (ii) 앞서 언급된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열의 조합 중 하나를 갖는 중쇄.
[00232] 상이한 CDR 모티프들은 위 표에 설명되지 않은 임의의 조합을 포함하는 임의의 조합과 결합될 수 있다. 예를 들어, 다음의 구현예들은 이러한 조합들의 비제한적인 예로서 제공된다.
[00233] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다: (i) 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역으로, 여기서 경쇄 CDR1 서열은 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖고; 경쇄 CDR2는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖고; 경쇄 CDR3 서열은 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖고; 및 (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역으로, 여기서 중쇄 CDR1 서열은 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖고; 중쇄 CDR2 서열은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖고; 중쇄 CDR3 서열은 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖고; 또는 상기 중 어느 것의 변이체를 갖는다.
[00234] 앞의 문단에서는 Kabat 시스템의 CDR을 언급했지만, IMGT와 CHOTHIA 명칭에서 동등한 CDR 서열들을 사용할 수 있다.
[00235] 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역 CDR1은 다른 경쇄 CDR1 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역 CDR2는 다른 경쇄 CDR2 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역 CDR3은 다른 경쇄 CDR3 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 CDR1은 다른 중쇄 CDR1 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 CDR2는 다른 중쇄 CDR2 서열 중 임의의 하나로 대체된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 CDR3는 다른 중쇄 CDR3 서열 중 임의의 하나로 대체된다.
[00236] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 다음 서열 중 하나를 갖는 중쇄 가변 영역 펩티드 또는 그 변이체를 포함한다:
[00237] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 다음 서열 중 하나를 갖는 경쇄 가변 영역 펩티드 또는 그 변이체를 포함한다:
[00238] 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 48의 VH 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 49의 VL 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하며, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열 또는 이의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하며, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열 또는 이의 변이체를 포함하고, 폴리펩티드, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열을 포함한다.
[00239] VH 및 VL 서열은 scFv 형식을 포함하되 이에 제한되지 않는 어떠한 형식이든 될 수 있는데, 여기서 VH 및 VL 영역은 펩티드 링커로 연결된다. 본원에 제공된 다양한 펩티드를 연결하는 데 사용될 수 있는 펩티드 링커의 예는 (GGGGS)n (서열 번호 55)을 이에 제한되지 않으며, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 일부 구현예에서, 가변 영역은 펩티드 링커로 연결되지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 48 및 서열 번호 49를 포함한다.
[00240] 본원에 제공된 바와 같이, 폴리펩티드, 항체 또는 항원 결합 단편은 상기 서열들의 변이체일 수 있다.
[00241] 폴리펩티드 또는 항체의 서열은 인간 IgG 항체를 생성하도록 변형될 수 있다. 본원에 제공된 서열의 변환(conversion)은 다른 유형의 항체를 생성하도록 변형될 수 있다. CDR은 다른 항체, 단백질 또는 분자와 연결되어 CD8에 결합하는 항체 단편을 생성할 수도 있다.
[00242] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드 또는 항체는 엔지니어링된 바이러스 입자의 표면 상의 표적화 모이어티다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 표적 세포에 결합하는 것을 허용한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 본원에서 제공된 폴리펩티드 또는 항체와 같은 CD8 결합 모이어티이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하거나:
NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDGFGNSFMNWYQQKPGQSPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASRYTFTDYNLHWVKLSHEKSLEWIGFIYPYNGGTGYNQKFKNKAKLTVDYSSSTAYMELRSLTSVDAAVYYCARDHRYNEGVSFDYWGQGTTLTVSS (서열 번호 50)
또는 서열 번호 50과 실질적으로 유사하거나, 서열 번호 50의 활성 단편이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 50의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 50의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 50의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 50에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 50에 제시된 표적 결합 도메인("T")은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 항-CD8 항체이다.
[00243] 일부 구현예에서, 본원에서 제공하는 폴리펩티드 또는 항체는 조작된 바이러스 입자의 표면 상의 표적화 모이어티다. 일부 구현예에서, 조작된 바이러스 입자는 유사형 바이러스 유사 입자이다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 표적 세포에 결합하는 것을 허용한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 본원에서 제공하는 폴리펩티드 또는 항체와 같은 CD8 결합 모이어티이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하거나:
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASRYTFTDYNLHWVKLSHEKSLEWIGFIYPYNGGTGYNQKFKNKAKLTVDYSSSTAYMELRSLTSVDAAVYYCARDHRYNEGVSFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSNIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDGFGNSFMNWYQQKPGQSPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKR (서열 번호 51)
또는 서열 번호 51과 실질적으로 유사하거나, 서열 번호 51의 활성 단편이다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 51의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 51의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 51의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인("T")은 서열 번호 51에 제시된 것과 같은 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 51에 제시된 것과 같은 표적 결합 도메인("T")은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 항-CD8 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 인간 CD8에 결합한다.
Fc 도메인을 포함하는 표적화 모이어티
[00244] 일부 구현예에서, VH 및 VL 폴리펩티드는 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분 S1에 연결된다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 영역이다. 본원에는 Fc 영역의 비제한적인 돌연변이가 제공된다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 영역은 본원에서 제공하는 바와 같이 서열 번호 26, 서열 번호 27 또는 서열 번호 28의 변이인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 26의 변이체는 본원에서 제공하는 바와 같이 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 27의 변이체는 본원에서 제공하는 바와 같이 N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 28의 변이체는 본원에서 제공하는 바와 같이 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 본원에 제공된 바와 같이, 중쇄는 Fc 영역에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 또한 막관통 도메인을 포함한다(예를 들어, 이에 연결됨). 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 추가로 포함하는 Fc 영역은 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에 제공된 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에 제공된 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에 제공된 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드다. 본원에 제공된 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있으며, 여기서 ECD는 본원에 제공된 바와 같이 세포외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에 제공된 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에 제공된 바와 같이 세포내 도메인이거나 존재하지 않는다. ECD의 예로는 본원에 제공된 바와 같이 CD8 및/또는 CD28 세포외 도메인이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. TM의 예로는 본원에 제공된 CD8 및/또는 CD28 막관통 도메인을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, X1은 TM을 포함하고 ECD 및 ICD는 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, X1은 ECD, TM을 포함하고, ICD는 없다. 일부 구현예에서, X1은 TM과 ICD를 포함하고, ECD는 없다. 일부 구현예에서, X1은 ECD, TM, ICD를 포함한다. 다음의 구현예에서는 ECD, ICD, 또는 둘 다가 선택적으로 존재하지 않을 수 있다는 것을 이해해야 한다. 따라서, X1이 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD를 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD; ii) CD8 및/또는 CD28 TM 및 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD(여기서 ECD는 없음); iii) CD8 및/또는 CD28 ECD 및 CD8 및/또는 CD28 TM(여기서 ICD는 없음); 및 iv) ECD와 ICD가 모두 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 마찬가지로, X1이 CD8 및/또는 CD28 TM과 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD를 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) CD8 및/또는 CD28 TM과 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD; 및 ii) ICD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 마찬가지로, X1이 CD8 및/또는 CD28 ECD와 CD8 및/또는 CD28 TM을 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) CD8 및/또는 CD28 ECD와 CD8 및/또는 CD28 TM; 및 ii) ECD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 특정 ECD, TM 또는 ICD가 제시되지 않는 구현예에서도 이전 설명은 사실임을 더 잘 이해해야 한다. 예를 들어, X1이 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD; ii) ECD 및 ICD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM; iii) CD8 및/또는 CD28 TM 및 ECD가 없는 ICD; 및 iv) ECD 및 ICD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 마찬가지로, X1이 CD8 및/또는 CD28 TM과 ICD를 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) CD8 및/또는 CD28 TM과 ICD; 및 ii) ICD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 마찬가지로, X1이 ECD와 CD8 및/또는 CD28 TM을 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) ECD와 CD8 및/또는 CD28 TM; 및 ii) ECD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 명확하게 언급되지 않는 한, 앞의 예와 설명은 뒤에 오는 모든 구현예에 적용될 수 있다.
[00245] 일부 구현예에서, X1은 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 ECD, TM 및 ICD를 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하며, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하며, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다.
[00246] 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에 제공된 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에 제공된 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에 제공된 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된 본원에서 제공된 VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에서 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공되는 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00247] 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 본원에 제공된 바와 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본문에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공되는 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00248] 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에 제공된 바와 같은 링커이거나 Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에 제공된 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에 제공된 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, 이들은 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되어 본원에서 제공되는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00249] 일부 구현예에서, VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하는 폴리펩티드가 제공되며, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
[00250] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VH 펩티드와 VL 펩티드는 서열 번호 33-35의 서열을 갖는 경쇄 CDR 및/또는 서열 번호 30-32의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VH 펩티드와 VL 펩티드는 서열 번호 33의 서열을 갖는 경쇄 CDR1; 서열 번호 34의 서열을 갖는 경쇄 CDR2; 서열 번호 35의 서열을 갖는 경쇄 CDR3; 및/또는 서열 번호 30의 서열을 갖는 중쇄 CDR1; 서열 번호 31의 서열을 갖는 중쇄 CDR2; 및 서열 번호 32의 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 또는 VL 사슬의 CDR은 본원에서 제공하는 조합에 명시된 바와 같다.
[00251] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VL 펩티드는 서열 번호 33의 서열을 갖는 LCDR1, 서열 번호 34의 서열을 갖는 LCDR2, 서열 번호 35의 서열을 갖는 LCDR3을 포함하고, VH 펩티드는 서열 번호 30의 서열을 갖는 HCDR1, 서열 번호 31의 서열을 갖는 HCDR2, 서열 번호 32의 서열을 갖는 HCDR3을 포함한다.
[00252] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VL 펩티드는 서열 번호 33의 서열을 갖는 LCDR1(최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함), 서열 번호 34의 서열을 갖는 LCDR2(최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함, 서열 번호 35의 서열을 갖는 LCDR3(최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함)을 포함하고, VH 펩티드는 서열 번호 30의 서열을 갖는 HCDR1(최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함), 서열 번호 31의 서열을 갖는 HCDR2(최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함), 서열 번호 32의 서열을 갖는 HCDR3(최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함)을 포함한다.
[00253] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열을 포함하고 VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열을 포함한다.
[00254] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드는 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드는 인간 CD7에 결합한다.
[00255] 본원에 제공된 바와 같이, 본원에 기재된 다양한 폴리펩티드(VH 또는 VL)는 펩티드 링커로 연결될 수 있거나, 펩티드 링커로 연결되지 않고 대신 연속적인 서열로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 (GGGGS)n (서열 번호 55)의 서열을 포함하며, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 연결된 펩티드 형식은 VH-Z-VL 또는 VL-Z-VH의 화학식으로 표현될 수 있으며, 여기서 Z는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, Z는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다.
[00256] 일부 구현예에서, VL-Z-VH의 식으로 표현되는 연결된 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 72) 를 통해 서열 번호 37에 명시된 경쇄 가변 영역에 연결된 서열 번호 36에 명시된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커를 통해 VH에 연결된 VL을 포함하는 폴리펩티드는 아래에 명시된 서열을 갖는다. DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTSIHWYQQRTNDSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNSWPTTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYPFTSYWIHWVKQRPGRGLEWLGRIDPNSGDTKYNEKFKNKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSPYYSNDNSMDYWGQGTSVTVSS (서열 번호 38).
[00257] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 38에 제시된 폴리펩티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD7 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 인간 CD7에 결합한다.
[00258] 일부 구현예에서, VH-Z-VL의 식으로 표현되는 연결된 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 72)를 통해 서열 번호 36에 제시된 중쇄 가변 영역에 연결된 서열 번호 37에 제시된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커를 통해 VL에 연결된 VH를 포함하는 폴리펩티드는 아래에 제시된 서열을 갖는다. QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYPFTSYWIHWVKQRPGRGLEWLGRIDPNSGDTKYNEKFKNKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSPYYSNDNSMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTSIHWYQQRTNDSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNSWPTTFGGGTKLEIKR (서열 번호 39).
[00259] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 39에 제시된 폴리펩티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD7 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 인간 CD7에 결합한다.
[00260] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에서 제공되는 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 상기 Fc 영역은 추가로 본원에서 제공되는 것과 같은 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 본원에서 제공하는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에서 제공하는 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00261] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에서 제공되는 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 상기 Fc 영역은 본원에서 제공되는 것과 같은 막관통 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에서 제공하는 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00262] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공하는 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 상기 Fc 영역은 본원에서 제공하는 것과 같은 막관통 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하고, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM을 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)과 ICD를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00263] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공하는 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 상기 Fc 영역은 본원에서 제공하는 것과 같은 막관통 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 막관통 도메인을 더 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그의 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 바와 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00264] 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이며, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나,
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDSAQVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYPFTSYWIHWVKQRPGRGLEWLGRIDPNSGDTKYNEKFKNKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSPYYSNDNSMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTSIHWYQQRTNDSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNSWPTTFGGGTKLEIKRASGGGGSGGGGSGGGGSEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMASRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLAQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNAYTQKSLSLSPGKKIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNRVRQGYS (서열 번호 98)
또는 서열 번호 98과 실질적으로 유사하거나, 서열 번호 98의 활성 단편이다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함한다.
[00265] 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이며, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다.
[00266] 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는, 여기서 T는 VH 및 VL을 포함하는 표적 결합 도메인이고, S1은 줄기 부분이며, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-S1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, 폴리펩티드의 줄기 부분 "S1"은 서열 번호 98의 아미노산 284-634에 대응한다.
[00267] 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고, L1은 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 도메인이고, L2는 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다.
[00268] 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는, 여기서 T는 VH 및 VL을 포함하는 표적 결합 도메인이고, L1은 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 도메인이고, L2는 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, X1은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 아미노산에 대응한다. 서열 번호 98의 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 존재하지 않고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 존재하지 않고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 98% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 존재하지 않고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 존재하지 않고, X1은 서열 번호 98의 아미노산 543-634에 대응한다.
[00269] 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고, L1은 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 도메인이고, L2는 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, ECD는 세포 외 도메인이고, TM은 막관통 도메인이고, ICD는 env 혼입 모티프를 포함하는 세포 내 도메인이며, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 98% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공되는 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다.
[00270] 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드, 여기서 T는 VH 및 VL을 포함하는 표적 결합 도메인이고, L1은 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 도메인이고, L2는 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, ECD는 세포 외 도메인이고, TM은 막관통 도메인이고, ICD는 env 혼입 모티프를 포함하는 세포 내 도메인이며, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 아미노산에 대응함 서열 번호 98의 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 존재하지 않으며, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 존재하지 않으며, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 존재하지 않으며, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634를 포함한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 98의 아미노산 284-301을 포함하고, Fc는 서열 번호 98의 아미노산 302-542를 포함하고, L2는 없으며, ECD는 서열 번호 98의 아미노산 543-584를 포함하고, TM은 서열 번호 98의 아미노산 585-612를 포함하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 98의 아미노산 627-634을 포함한다.
[00271] 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고, L1은 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 도메인이고, L2는 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, ECD는 세포 외 도메인이고, TM은 막관통 도메인이고, ICD는 env 혼입 모티프를 포함하는 세포 내 도메인이며, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 아미노산 서열 서열 번호 39를 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 아미노산 서열 서열 번호 39를 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 아미노산 서열 서열 번호 39를 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 아미노산 서열 서열 번호 39를 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 폴리펩티드의 표적 결합 도메인 "T"는 아미노산 서열 서열 번호 39를 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다.
[00272] 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에 제공된 폴리펩티드는, 여기서 T는 VH 및 VL을 포함하는 표적 결합 도메인이고, L1은 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에 제공된 바와 같은 변이 Fc 도메인이고, L2는 폴리펩티드 링커이거나 존재하지 않고, ECD는 세포 외 도메인이고, TM은 막관통 도메인이고, ICD는 env 혼입 모티프를 포함하는 세포 내 도메인이고, 서열 번호 98의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하고, 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 아미노산 서열을 포함한다. 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다. 일부 구현예에서, T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 포함하는 본원에서 제공된 폴리펩티드는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 표적 결합 도메인의 VH는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 25-150에 대응하고, 표적 결합 도메인의 VL은 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 172-283에 대응하고, L1은 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 284-301에 대응하고, Fc는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 302-542에 대응하고, L2는 없고, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 543-584에 대응하고, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 585-612에 대응하고, ICD는 서열 번호 98의 아미노산 613-634를 포함하고, 여기서 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 98의 아미노산 627-634에 대응한다.
[00273] 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 본원에 제공된 바와 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00274] 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드; 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드; 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 추가로 막관통 도메인을 포함하는 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 막관통 도메인을 더 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되어, 본원에서 제공하는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에서 제공하는 것과 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00275] 일부 구현예에서, VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하는 폴리펩티드가 제공되며, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
[00276] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VH 펩티드와 VL 펩티드는 서열 번호 45-47의 서열을 갖는 경쇄 CDR 및/또는 서열 번호 42-44의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VH 펩티드와 VL 펩티드는 서열 번호 45의 서열을 갖는 경쇄 CDR1; 서열 번호 46의 서열을 갖는 경쇄 CDR2; 서열 번호 47의 서열을 갖는 경쇄 CDR3; 및/또는 서열 번호 42의 서열을 갖는 중쇄 CDR1; 서열 번호 43의 서열을 갖는 중쇄 CDR2; 및 서열 번호 44의 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 또는 VL 사슬의 CDR은 본원에서 제공하는 조합에 제시된 바와 같다.
[00277] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VL 펩티드는 서열 번호 45의 서열을 갖는 LCDR1, 서열 번호 46의 서열을 갖는 LCDR2, 서열 번호 47의 서열을 갖는 LCDR3을 포함하고, VH 펩티드는 서열 번호 42의 서열을 갖는 HCDR1, 서열 번호 43의 서열을 갖는 HCDR2, 서열 번호 44의 서열을 갖는 HCDR3을 포함한다.
[00278] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VL 펩티드는 LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하고, 서열 번호 45의 서열을 갖는 LCDR1 은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열 번호 46의 서열을 갖는 LCDR2는 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열 번호 47의 서열을 갖는 LCDR3은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고; VH 펩티드는 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하고, 서열 번호 42의 서열을 갖는 HCDR1은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열 번호 43의 서열을 갖는 HCDR2는 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열 번호 44의 서열을 갖는 HCDR3은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
[00279] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열을 포함하고 VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열을 포함한다.
[00280] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드는 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드는 인간 CD8에 결합한다.
[00281] 본원에 기재된 바와 같이, 본원에 기재된 다양한 폴리펩티드(VH 또는 VL)는 펩티드 링커로 연결될 수 있거나, 펩티드 링커로 연결되지 않고 대신 연속적인 서열로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 (GGGGS)n (서열 번호 55)의 서열을 포함하며, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 연결된 펩티드 형식은 VH-Z-VL 또는 VL-Z-VH의 화학식으로 표현될 수 있으며, 여기서 Z는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, Z는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다.
[00282] 일부 구현예에서, VL-Z-VH의 식으로 표현되는 연결된 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 72) 를 통해 서열 번호 49에 명시된 경쇄 가변 영역에 연결된 서열 번호 48에 명시된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커를 통해 VH에 연결된 VL을 포함하는 폴리펩티드는 아래에 명시된 서열을 갖는다. NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDGFGNSFMNWYQQKPGQSPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASRYTFTDYNLHWVKLSHEKSLEWIGFIYPYNGGTGYNQKFKNKAKLTVDYSSSTAYMELRSLTSVDAAVYYCARDHRYNEGVSFDYWGQGTTLTVSS (서열 번호 50).
[00283] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 50에 제시된 폴리펩티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD8 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 인간 CD8에 결합한다.
[00284] 일부 구현예에서, VH-Z-VL의 식으로 표현되는 연결된 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 72)를 통해 서열 번호 48에 제시된 중쇄 가변 영역에 연결된 서열 번호 49에 제시된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커를 통해 VL에 연결된 VH를 포함하는 폴리펩티드는 아래에 제시된 서열을 갖는다. EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASRYTFTDYNLHWVKLSHEKSLEWIGFIYPYNGGTGYNQKFKNKAKLTVDYSSSTAYMELRSLTSVDAAVYYCARDHRYNEGVSFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSNIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDGFGNSFMNWYQQKPGQSPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKR (서열 번호 51).
[00285] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 51에 제시된 폴리펩티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD8 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 인간 CD8에 결합한다.
[00286] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에서 제공되는 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 상기 Fc 영역은 추가로 본원에서 제공되는 것과 같은 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 동일성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00287] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에서 제공되는 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 상기 Fc 영역은 본원에서 제공되는 것과 같은 막관통 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 동일성은 본원에서 제공하는 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00288] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공된 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공된 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 상기 Fc 영역은 본원에서 제공된 것과 같은 막관통 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM을 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)과 ICD를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 50에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00289] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공된 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공된 것과 같은 Fc 영역을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 상기 Fc 영역은 본원에서 제공된 것과 같은 막관통 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 추가로 막관통 도메인을 포함하며, L1-Fc-L2-X1의 화학식을 가지며, 여기서 L1은 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, Fc는 본원에서 제공하는 바와 같은 변이 Fc 영역이고, L2는 본원에서 제공하는 바와 같은 링커이거나 존재하지 않고, X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 51에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 Fc 영역(L1-Fc-L2-X1)을 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L1, Fc, L2, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
유연한 폴리펩티드를 구성하는 표적화 모이어티
[00290] 일부 구현예에서, VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 L3-X1의 화학식으로 표현되며, 여기서 L3은 본원에 제공된 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에 제공된 바와 같다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. ECD의 예로는 본원에서 제공하는 CD8 및/또는 CD28 ECD가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. TM의 예로는 본원에 제공된 바와 같은 CD8 및/또는 CD28 막관통 도메인을 포함하되 이에 제한되지 않는다. 다음의 구현예에서는 ECD, ICD, 또는 둘 다가 선택적으로 존재하지 않을 수 있다는 것을 이해해야 한다. 따라서, X1이 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD를 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD; ii) CD8 및/또는 CD28 TM 및 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD(여기서 ECD는 없음); iii) CD8 및/또는 CD28 ECD 및 CD8 및/또는 CD28 TM(여기서 ICD는 없음); 및 iv) ECD와 ICD가 모두 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 마찬가지로, X1이 CD8 및/또는 CD28 TM과 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD를 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) CD8 및/또는 CD28 TM과 Env 혼입 모티프를 포함하는 ICD; 및 ii) ICD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 마찬가지로, X1이 CD8 및/또는 CD28 ECD와 CD8 및/또는 CD28 TM을 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) CD8 및/또는 CD28 ECD와 CD8 및/또는 CD28 TM; 및 ii) ECD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 특정 ECD, TM 또는 ICD가 언급되지 않는 구현예에서도 이전 설명은 사실임을 더 잘 이해해야 한다. 예를 들어, X1이 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD; ii) ECD 및 ICD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM; iii) ECD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD; 및 iv) ECD 및 ICD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 마찬가지로, X1이 CD8 및/또는 CD28 TM과 ICD를 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) CD8 및/또는 CD28 TM과 ICD; 및 ii) ICD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 마찬가지로, X1이 ECD와 CD8 및/또는 CD28 TM을 포함하는 구현예는 다음의 X1 구성원을 포함하는 것으로 이해된다: i) ECD와 CD8 및/또는 CD28 TM; 및 ii) ECD가 없는 CD8 및/또는 CD28 TM. 명확하게 언급되지 않는 한, 앞의 예와 설명은 뒤에 오는 모든 구현예에 적용될 수 있다.
[00291] 일부 구현예에서, X1은 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 ECD, TM 및 ICD를 포함하며, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하며, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, X1은 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다.
[00292] 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 유연한 폴리펩티드(L3)는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하며, L3-X1의 화학식으로 표현되고, 여기서 L3은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에 제공된 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있으며, 여기서 ECD는 본원에 제공된 바와 같이 세포외 도메인 또는 그 단편이거나, 존재하지 않는다; TM은 본원에 제공된 바와 같이 막관통 도메인이고; ICD는 본원에 제공된 바와 같이 세포내 도메인이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 VH 및 VL 폴리펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된 본원에서 제공되는 VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에서 제공되는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, X1, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00293] 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드와 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드와 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드와 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 37에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 본원에 제공된 바와 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, X1, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00294] 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 추가로 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 L3-X1의 식으로 표현되는데, 여기서 L3은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 내 도메인이거나, 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드, 및 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되어, 본원에서 제공하는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, X1, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00295] 일부 구현예에서, VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하는 폴리펩티드가 제공되며, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
[00296] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VH 펩티드와 VL 펩티드는 서열 번호 33-35의 서열을 갖는 경쇄 CDR 및/또는 서열 번호 30-32의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VH 펩티드와 VL 펩티드는 서열 번호 33의 서열을 갖는 경쇄 CDR1; 서열 번호 34의 서열을 갖는 경쇄 CDR2; 서열 번호 35의 서열을 갖는 경쇄 CDR3; 및/또는 서열 번호 30의 서열을 갖는 중쇄 CDR1; 서열 번호 31의 서열을 갖는 중쇄 CDR2; 및 서열 번호 32의 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 또는 VL 사슬의 CDR은 본원에서 제공하는 조합에 명시된 바와 같다.
[00297] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VL 펩티드는 서열 번호 33의 서열을 갖는 LCDR1, 서열 번호 34의 서열을 갖는 LCDR2, 서열 번호 35의 서열을 갖는 LCDR3을 포함하고, VH 펩티드는 서열 번호 30의 서열을 갖는 HCDR1, 서열 번호 31의 서열을 갖는 HCDR2, 서열 번호 32의 서열을 갖는 HCDR3을 포함한다.
[00298] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VL 펩티드는 LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하는데, 여기서 서열 번호 33의 서열을 갖는 LCDR1은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열 번호 34의 서열을 갖는 LCDR2는 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열 번호 35의 서열을 갖는 LCDR3은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하며, VH 펩티드는 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하는데, 서열 번호 30의 서열을 갖는 HCDR1은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열 번호 31의 서열을 갖는 HCDR2는 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열 번호 32의 서열을 갖는 HCDR3은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
[00299] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 36의 서열을 포함하고 VL 펩티드는 서열 번호 37의 서열을 포함한다.
[00300] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드는 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드는 인간 CD7에 결합한다.
[00301] 본원에 기재된 바와 같이, 본원에 기재된 다양한 폴리펩티드(VH 또는 VL)는 펩티드 링커로 연결될 수 있거나, 펩티드 링커로 연결되지 않고 대신 연속적인 서열로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 (GGGGS)n (서열 번호 55)의 서열을 포함하며, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 연결된 펩티드 형식은 VH-Z-VL 또는 VL-Z-VH의 화학식으로 표현될 수 있으며, 여기서 Z는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, Z는 (GGGGS)n (서열 번호 55)이고, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다.
[00302] 일부 구현예에서, VL-Z-VH의 식으로 표현되는 연결된 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 72)를 통해 서열 번호 37에 명시된 경쇄 가변 영역에 연결된 서열 번호 36에 명시된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커를 통해 VH에 연결된 VL을 포함하는 폴리펩티드는 아래에 제시된 서열을 갖는다. DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTSIHWYQQRTNDSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNSWPTTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYPFTSYWIHWVKQRPGRGLEWLGRIDPNSGDTKYNEKFKNKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSPYYSNDNSMDYWGQGTSVTVSS (서열 번호 38).
[00303] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 38에 제시된 폴리펩티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD7 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 인간 CD7에 결합한다.
[00304] 일부 구현예에서, VH-Z-VL의 식으로 표현되는 연결된 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 72)를 통해 서열 번호 36에 제시된 중쇄 가변 영역에 연결된 서열 번호 37에 제시된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커를 통해 VL에 연결된 VH를 포함하는 폴리펩티드는 아래에 제시된 서열을 갖는다. QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYPFTSYWIHWVKQRPGRGLEWLGRIDPNSGDTKYNEKFKNKATLTVDKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSPYYSNDNSMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQSIGTSIHWYQQRTNDSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNSWPTTFGGGTKLEIKR (서열 번호 39).
[00305] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 39에 제시된 폴리펩티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD7 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 비인간 영장류 CD7에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD7 항체는 인간 CD7에 결합한다.
[00306] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에서 제공하는 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 L3-X1의 식으로 표현되는데, 여기서 L3은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에 제공된 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있으며, 여기서 ECD는 본원에 제공된 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 본원에 제공된 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에 제공된 바와 같이 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 38의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, ECD, TM 및 ICD의 동일성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00307] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에서 제공하는 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 L3-X1의 식으로 표현되는데, 여기서 L3은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 내 도메인이거나, 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 39의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에서 제공하는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, ECD, TM 및 ICD의 동일성은 본원에서 제공하는 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00308] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공하는 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 L3-X1의 식으로 표현되는데, 여기서 L3은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 38에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에 제공된 바와 같은 면역세포에 결합힌다.
[00309] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39 에 제시된 것과 같은 서열을 같는 서열을 포함하고 본원에서 제공된 것과 같은 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 L3-X1의 식으로 표현되는데, 여기서 L3은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나, 존재하지 않는다. TM은 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 내 도메인이거나, 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고, ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하며, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 39에 제시된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에서 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00310] 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드와 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 L3-X1의 식으로 표현되는데, 여기서 L3은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나, 존재하지 않는다. TM은 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 내 도메인이거나, 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드와 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드 및 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48에 제시된 서열을 갖는 VH 펩티드와 서열 번호 49에 제시된 서열을 갖는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되어 본원에서 제공하는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, X1, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00311] 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드; 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드; 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 추가로 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 L3-X1의 식으로 표현되는데, 여기서 L3은 본원에서 제공하는 바와 같은 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에서 제공하는 바와 같은 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에서 제공하는 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 여기서 ECD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않는다. TM은 본원에서 제공하는 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에서 제공하는 바와 같이 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결된다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 연결되고, 여기서 ICD는 본원에서 제공하는 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 펩티드 및 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하는 VL 펩티드는 ECD, TM 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)에 고정되어, 본원에서 제공하는 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, X1, ECD, TM 및 ICD의 정체성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00312] 일부 구현예에서, VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하는 폴리펩티드가 제공되며, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다.
[00313] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VH 펩티드와 VL 펩티드는 서열 번호 45-47의 서열을 갖는 경쇄 CDR 및/또는 서열 번호 42-44의 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드와 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 단, VH 펩티드와 VL 펩티드는 서열 번호 45의 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 46의 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 서열 번호 47의 서열을 갖는 경쇄 CDR3 및/또는 서열 번호 42의 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 43의 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 44의 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 또는 VL 사슬의 CDR은 본원에서 제공하는 조합에 명시된 바와 같다.
[00314] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드 및 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, 단, VL 펩티드는 서열 번호 45의 서열을 갖는 LCDR1, 서열 번호 46의 서열을 갖는 LCDR2, 및 서열 번호 47의 서열을 갖는 LCDR3을 포함하고, 그리고 VH 펩티드는 서열 번호 42의 서열을 갖는 HCDR1, 서열 번호 43의 서열을 갖는 HCDR2, 및 서열 번호 44의 서열을 갖는 HCDR3을 포함한다.
[00315] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드 및 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고, 단, VL 펩티드는 서열 번호 45의 서열을 갖는 LCDR1(여기서 LCDR1은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함), 서열 번호 46의 서열을 갖는 LCDR2(여기서 LCDR2은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함), 및 서열 번호 47의 서열을 갖는 LCDR3(여기서 LCDR3은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함)을 포함하고, 그리고 VH 펩티드는 서열 번호 42의 서열을 갖는 HCDR1(여기서 HCDR1은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함), 서열 번호 43의 서열을 갖는 HCDR2(여기서 HCDR2는 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함), 및 서열 번호 44의 서열을 갖는 HCDR3(여기서 HCDR3은 최대 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함)을 포함한다.
[00316] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 VH 펩티드 및 VL 펩티드를 포함하고, 여기서 VH 펩티드는 서열 번호 48의 서열을 포함하고 VL 펩티드는 서열 번호 49의 서열을 포함한다.
[00317] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드는 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리펩티드는 인간 CD8에 결합한다.
[00318] 본원에 제공된 바와 같이, 본원에 기재된 다양한 폴리펩티드(VH 또는 VL)는 펩티드 링커로 연결되거나 펩티드 링커로 연결되지 않고 대신 연속적인 서열로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 (GGGGS)n(서열 번호 55)의 서열을 포함하고, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 연결된 펩티드 형식은 VH -Z-VL 또는 VL-Z-VH의 식으로 표현될 수 있고, 여기서 Z는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, Z는 (GGGGS)n(서열 번호 55)이고, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다.
[00319] 일부 구현예에서, VL-Z-VH의 식으로 표현되는 연결된 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 72)를 통해 서열 번호 49에 기재된 경쇄 가변 영역에 연결된 서열 번호 48에 기재된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커를 통해 VH에 연결된 VL을 포함하는 폴리펩티드는 아래에 기재된 서열을 갖는다.
NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDGFGNSFMNWYQQKPGQSPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASRYTFTDYNLHWVKLSHEKSLEWIGFIYPYNGGTGYNQKFKNKAKLTVDYSSSTAYMELRSLTSVDAAVYYCARDHRYNEGVSFDYWGQGTTLTVSS(서열 번호 50).
[00320] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 50에 기재된 폴리펩티드는 항체 또는 그 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD8 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 인간 CD8에 결합한다.
[00321] 일부 구현예에서, VH-Z-VL의 식으로 표현되는 연결된 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 72)를 통해 서열 번호 48에 기재된 중쇄 가변 영역에 연결된 서열 번호 49에 기재된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커를 통해 VL에 연결된 VH를 포함하는 폴리펩티드는 아래에 기재된 서열을 갖는다.
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASRYTFTDYNLHWVKLSHEKSLEWIGFIYPYNGGTGYNQKFKNKAKLTVDYSSSTAYMELRSLTSVDAAVYYCARDHRYNEGVSFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSNIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDGFGNSFMNWYQQKPGQSPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKR(서열 번호 51).
[00322] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 51에 기재된 폴리펩티드는 항체 또는 그 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD8 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 비인간 영장류 CD8에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD8 항체는 인간 CD8에 결합한다.
[00323] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에 제공한 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 화학식 L3-X1로 표시되고, 여기서 L3은 본원에 제공한 바와 같이 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에 제공한 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고, 여기서 ECD는 본원에 제공한 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인이고, 그리고 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 50의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3 -X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공한 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, ECD, TM, 및 ICD의 동일성은 본원에 제공한 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00324] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에 제공한 바와 같은 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 화학식 L3-X1로 표시되고, 여기서 L3은 본원에 제공한 바와 같이 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에 제공한 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고, 여기서 ECD는 본원에 제공한 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고, TM은 본원에 제공된 바와 같이 막관통 도메인이고, ICD는 본원에 제공된 바와 같은 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3 -X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 51의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함하고 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공한 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, ECD, TM, 및 ICD의 동일성은 본원에 제공한 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00325] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 본원에 제공한 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 화학식 L3-X1로 표현되고, 여기서 L3은 본원에 제공한 바와 같이 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에 제공한 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고, 여기서 ECD는 본원에 제공한 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인이고, 그리고 ICD는 본원에 제공한 바와 같이 세포 내 도메인이거나 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 50에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공한 것과 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, ECD, TM, 및 ICD의 동일성은 본원에 제공한 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
[00326] 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 본원에 제공한 바와 같이 유연한 폴리펩티드(L3)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고, 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 더 포함하는 유연한 폴리펩티드는 화학식 L3-X1로 표현되고, 여기서 L3은 본원에 제공한 바와 같이 유연한 폴리펩티드이고 X1은 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이다. 본원에 제공한 바와 같이, X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고, 여기서 ECD는 본원에 제공한 바와 같이 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나, 존재하지 않고, TM은 본원에 제공한 바와 같이 막관통 도메인이고, 그리고 ICD는 본원에 제공한 바와 같이 세포 내 도메인이거나, 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 바와 같은 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 바와 같은 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM. 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공한 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 서열 번호 51에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 CD8 및/또는 CD28 ECD, CD8 및/또는 CD28 TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하고, 여기서 ICD는 본원에 제공된 바와 같은 Env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열 번호 51에 기재된 서열을 갖는 서열을 포함하고 ECD, TM, 및 ICD를 포함하는 유연한 폴리펩티드(L3-X1)를 포함하는 줄기 부분(S1)을 포함하는 폴리펩티드는 본원에 제공된 바와 같은 바이러스 입자의 표면에 고정된다. 일부 구현예에서, L3, ECD, TM, 및 ICD의 동일성은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 본원에 제공된 것과 같은 면역 세포에 결합한다.
발현된 관심 폴리펩티드 표현
[00327] 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질 및 표적 모이어티를 포함하는 바이러스 입자는 이종 관심 분자 또는 "화물"을 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 표적 모이어티는 본원에 제공된 바와 같다. 본원에 사용된 이종 관심 분자는 핵산 분자에 의해 암호화될 수 있는 모든 생성물을 지칭한다. 비제한적인 예로서, "화물" 또는 "이종 관심 분자"는 siRNA, shRNA, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 바이러스 페이로드, 바이러스 게놈, 또는 이들의 조합을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 이종 관심 분자는 siRNA, shRNA, 비코딩 RNA(예: CRISPR 시스템용 가이드 RNA), 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 바이러스 페이로드, 바이러스 게놈, 키메라 항원 수용체("CAR"), 또는 이들의 조합이다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 CAR이다.
[00328] 본원에 사용된 "키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"은 직접 또는 간접적으로(예: 힌지 또는 막관통 도메인을 통해 면역 세포를 활성화 또는 자극할 수 있는 세포 내 신호 전달 도메인에 융합됨) 융합된 항원-결합 도메인을 지칭한다. 가장 일반적으로, CAR의 세포 외 결합 도메인은 쥐 또는 인간화 단일 클론 항체의 가변 중쇄 및 경쇄 영역을 융합하여 얻은 단일 쇄 가변 단편(single chain variable fragment, scFv)으로 구성된다. 또는, scFv는 Fab에서 유래한 것(항체에서 유래한 것 대신, 예를 들어 Fab 라이브러리에서 얻은 것)으로 사용될 수 있다. 다양한 구현예에서, 이 scFv는 막관통 도메인에 융합된 다음 세포 내 신호 전달 도메인에 융합된다. 그러나, 항원 결합 도메인은 세포의 표적에 결합할 수 있는 모든 분자일 수 있다. 예를 들어, CAR의 항원 결합 도메인은 항체, scFv 항체, 항원 결합 도메인, 안키린 반복(예: DARPIN), VHH 도메인 항체, 나노바디, 단일 도메인 항체, FN3 도메인, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 일부 구현예에서, CAR은 항원 결합 시 CD3z 신호만을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 공동 자극(예: CD28 또는 CD137) 및 활성화(CD3z)를 모두 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 다중 공동 자극(예: CD28 및 CD137) 및 활성화(CD3z)를 제공하는 것을 포함한다. 다양한 구현예에서, CAR은 항원에 대한 높은 친화력 또는 결합력을 갖도록 선택된다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 CD20에 결합한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 CD20 항체, 또는 그 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 본원에 제공한 바와 같고, 예컨대 scFv 항체, 항원 결합 도메인, 안키린 반복(예: DARPIN), VHH 도메인 항체, 나노바디, 단일 도메인 항체, FN3 도메인, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하되 이에 제한되지 않는다.
[00329] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 VH 도메인, VL 도메인, 또는 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 89와 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 그 사이의 임의의 값 또는 범위를 포함한다.
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYAMHWVRQAPGKGLEWVSTISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKKSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDIQYGNYYYGMDVWGQGTTVTVSS(서열 번호 89)
[00330] 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 89와 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 89와 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 89와 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 89와 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 89의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00331] 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 90과 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 그 사이의 임의의 값 또는 범위를 포함한다.
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPITFGQGTRLEIK(서열 번호 90)
[00332] 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 90과 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 90과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 90과 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 90과 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 90의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00333] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 도메인은 링커 펩티드에 의해 연결되지 않는다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 도메인은 본원에 제공된 바와 같은 링커 펩티드에 의해 연결되고, 여기에는 (GGGGS)n(서열 번호 55)가 포함되지만 이에 제한되지 않고, 여기서 각 n은 독립적으로 1-5이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 3이다. 일부 구현예에서, n은 4이다. 일부 구현예에서, n은 5이다.
[00334] VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고 서열 번호 90과 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고 서열 번호 90과 적어도 90%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 95%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 98%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 99%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90의 서열을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 90%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 98%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 99%의 동일성을 갖는 VH 도메인 을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 90%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 90%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 90%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 90%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 95%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 95%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 98%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 98%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89와 적어도 99%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90과 적어도 99%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
[00335] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 VH-Z-VL의 화학식을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역이고, Z는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 91)를 포함하는 링커이고, 그리고 VL은 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역이다. 일부 구현예에서, VH-Z-VL의 화학식을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 아래에 기재된 아미노산 서열을 갖는다:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYAMHWVRQAPGKGLEWVSTISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKKSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDIQYGNYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPITFGQGTRLEIK(서열 번호 92)
[00336] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 92의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 92의 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 92의 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 92의 서열과 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 92의 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함한다.
[00337] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 VL-Z-VH의 화학식을 포함하고, 여기서 VL은 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역이고, Z는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 91)를 포함하는 링커이고, 그리고 VH는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역이다. 일부 구현예에서, VL-Z-VH의 화학식을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 아래에 기재된 아미노산 서열을 갖는다:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPITFGQGTRLEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYAMHWVRQAPGKGLEWVSTISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKKSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDIQYGNYYYGMDVWGQGTTVTVSS(서열 번호 93)
[00338] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 93의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 93의 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 93의 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 93의 서열과 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 93의 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함한다.
[00339] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 VH 도메인, VL 도메인, 또는 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 94와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 그 사이의 임의의 값 또는 범위를 포함한다.
DIVLTQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVNYMDWYQKKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKGSTS(서열 번호 94)
[00340] 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 94와 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 94와 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 94와 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 94와 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 94의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00341] 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 95와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 그 사이의 임의의 값 또는 범위를 포함한다.
EVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGQGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSADYYCARSNYYGSSYWFFDVWGAGTTVTVSS(서열 번호 95)
[00342] 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 95와 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 95와 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 95와 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 95와 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 95의 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00343] VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 90%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 98%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 99%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95의 서열을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 90%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 98%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 99%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 75%, 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 90%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 90%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 90% 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 90%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 95%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 98%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 98%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94와 적어도 99%의 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95와 적어도 99%의 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 94의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 서열 번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
[00344] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 VH-Z-VL의 화학식을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역이고, Z는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 91)를 포함하는 링커이고, 그리고 VL은 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역이다. 일부 구현예에서, VH-Z-VL의 화학식을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 아래에 기재된 아미노산 서열을 갖는다:
DIVLTQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVNYMDWYQKKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKGSTSGGGGSGGGGSGGGGSSEVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGQGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSADYYCARSNYYGSSYWFFDVWGAGTTVTVSS(서열 번호 96)
[00345] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 96의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 96의 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 96의 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 96의 서열과 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 96의 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함한다.
[00346] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 VL-Z-VH의 화학식을 포함하고, 여기서 VL은 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역이고, Z는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호 91)를 포함하는 링커이고, 그리고 VH는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역이다. 일부 구현예에서, VL-Z-VH의 화학식을 포함하는 CAR의 항원-결합 도메인은 아래에 기재된 아미노산 서열을 갖는다:
SEVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGQGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSADYYCARSNYYGSSYWFFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVNYMDWYQKKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSFNPPTFGGGTKLEIKGSTS(서열 번호 97)
[00347] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 97의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 97의 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 97의 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 97의 서열과 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 97의 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함한다.
[00348] 일부 구현예에서, CAR의 항원-결합 도메인은 리툭시맙, 오크렐리주맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 토시투모맙, 또는 우블리툭시맙을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 리툭시맙을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 오파투무맙을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 4-1BB 도메인도 포함한다.
[00349] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나:
MALPVTALLLPLALLLHAARPGSEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYAMHWVRQAPGKGLEWVSTISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKKSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDIQYGNYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPITFGQGTRLEIKSGLDFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(서열 번호 99)
서열 번호 99와 실질적으로 유사하거나, 또는 서열 번호 99의 활성 단편이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함한다.
[00350] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당한다.
[00351] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당한다.
[00352] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다.
[00353] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다.
[00354] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다.
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(서열 번호 101)
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(서열 번호 102)
일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다.
[00355] 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고, VL은 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, 그리고 CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고, VL은 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 CAR의 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 VH는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 24-145에 해당하고 VL은 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 161-267에 해당하고, CAR의 힌지 도메인은 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 272-326에 해당하고, CAR의 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 327-354에 해당하고, CAR의 공동 자극 도메인은 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 355-396에 해당하고, 그리고 CAR의 신호 전달 도메인은 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 99의 아미노산 397-508에 해당한다.
[00356] 앞선 구현예 중 어느 하나에서, CAR의 항원 결합 도메인은 CAR의 힌지 도메인에 직접 융합될 수 있다. 앞선 구현예 중 어느 하나에서, CAR의 항원 결합 도메인은 본원에 제공된 것과 같은 폴리펩티드 링커를 통해 CAR의 힌지 도메인에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드 링커는 SGLD(서열 번호 100)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드 링커는 항원 결합 도메인의 C-말단을 힌지 영역의 N-말단에 연결한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 폴리펩티드 링커는 VH의 C-말단을 힌지 영역의 N-말단에 연결한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 VH 및 VL을 포함하고, 폴리펩티드 링커는 VL의 C-말단을 힌지 영역의 N-말단에 연결한다.
[00357] 이는 본질적으로 단지 예시일 뿐이고 현재 구현예에 제한되지 않으며, 임의의 키메라 항원 수용체는 본원에 제공된 바이러스 입자 및 벡터와 함께 전달될 수 있다. 이는 CAR의 비제한적 예이고, 임의의 CAR 구성은 핵산 분자에 의해 암호화될 수 있다.
[00358] 일부 구현예에서, 유사형 바이러스 입자는 관심 화물을 암호화하는 이종 핵산 분자를 더 포함한다. 핵산 분자는 표적 유전자의 발현을 조절하는 데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 화물은 세포의 활성을 조절하거나 표적 세포의 표면으로 운반되는 단백질을 발현하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 핵산은 siRNA 또는 shRNA를 포함할 수 있다. 핵산은 또한 관심 화물을 암호화할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 관심 화물은 폴리펩티드 또는 그 일부, 단백질 또는 그 일부, 키메라 항원 수용체 또는 그 일부, 또는 종양 항원 또는 그 일부를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 관심 화물은 바이러스에 의해 생성되는 항체이고, 이는 바이러스에 감염된 세포에 의해 분비될 수 있다. 용어 "단백질"은 세포 환경에서 기본 기능을 수행하는 임의의 폴리펩티드를 지칭할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 관심 핵산 화물에 의해 암호화된 단백질은 효소, 핵 수용체, 수송체, 리보솜 단백질, 막 결합 단백질, 세포질 단백질, G-단백질 결합 수용체, 전압 개폐 이온 채널, 분비 단백질, 미토콘드리아 단백질, 사이토카인, 키메라 항원 수용체, 종양 항원, 또는 이들의 일부 또는 키메라 종을 포함할 수 있다.
[00359] 어떤 특별한 이론에 얽매이지 않고, 본원에 제공된 바와 같이 이종 바이러스 당단백질을 포함하고 본원에 제공된 바와 같이 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자는 표적 세포에서 관심 이종 분자를 발현하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, CAR은 본원에 제공된 바와 같이 VSV-G 단백질 또는 SVCV-G 단백질로 유사형화된 바이러스 입자에 의해 표적화된 T 세포에서 발현될 수 있다. T 세포가 의도된 표적인 경우, 바이러스 입자는 CD2, CD3, CD4, CD5, CD7 또는 CD8과 같으나 이에 제한되지 않는 T 세포 표면의 표적에 결합하는 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 표적은 CD2이다. 일부 구현예에서, 표적은 CD3이다. 일부 구현예에서, 표적은 CD4이다. 일부 구현예에서, 표적은 CD5이다. 일부 구현예에서, 표적은 CD6이다. 일부 구현예에서, 표적은 CD7이다. 일부 구현예에서, 표적은 CD8이다. 일부 구현예에서, CD7을 표적화하는 표적화 모이어티는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, CD8을 표적화하는 표적화 모이어티는 본원에 제공된 바와 같다.
[00360] 일부 구현예에서, 유사형 바이러스 입자는 재조합 렌티바이러스이다. 일부 구현예에서, 재조합 유사형 바이러스 입자는 복제가 가능하다. 일부 구현예에서, 재조합 유사형 바이러스 입자는 복제가 불가능하다.
Fc 도메인을 포함하는 표적화 부분을 포함하는 대표적인 바이러스 입자
[00361] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 바이러스 입자는 이종 바이러스 당단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고, 여기서 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52, 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함하고; 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질을 포함하고; 여기서 서열 번호 26의 변이체는 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; 여기서 서열 번호 27의 변이체는 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; 여기서 서열 번호 28의 변이체는 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; 그리고 여기서 변이 Fc 단백질은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62에서 선택된 서열을 포함하는 막관통 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 24의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 26의 변이체이고 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 27의 변이체이고 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 28의 변이체이고 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 또한 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00362] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 상기 입자는 이종 바이러스 당단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고, 여기서 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52, 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함하고; 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L1은 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 75, 또는 서열 번호 76에서 선택된 서열을 포함하는 링커이거나, 존재하지 않고; Fc는 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고; 여기서 서열 번호 26의 변이체는 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; 여기서 서열 번호 27의 변이체는 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; 여기서 서열 번호 28의 변이체는 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; L2는 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 75, 또는 서열 번호 76에서 선택된 서열을 포함하는 링커이거나, 존재하지 않고; 그리고 X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 59, 서열 번호 60의 서열을 갖는 세포 외 도메인, 또는 그 임의의 단편이거나, 존재하지 않고; TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인 또는 그 임의의 단편이고, 그리고 ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나 ICD가 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 24의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T는 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 26의 변이체이고 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 27의 변이체이고 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 28의 변이체이고 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ECD는 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ICD는 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, ICD가 존재하고 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ICD가 존재하고 env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00363] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 상기 입자는 이종 바이러스 당단백질 및 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고, 여기서 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52, 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함하고; 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L1은 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고; Fc는 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고; 여기서 서열 번호 26의 변이체는 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; 여기서 서열 번호 27의 변이체는 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; 여기서 서열 번호 28의 변이체는 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고; L2는 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고; 그리고 X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 60의 서열을 갖는 세포 외 도메인, 또는 그 단편이거나 존재하지 않고; TM은 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인 또는 그 단편이고, 그리고 ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나 ICD가 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 22의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 24의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T는 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, T는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, L1은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 26의 변이체이고 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 27의 변이체이고 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 변이 Fc 단백질은 서열 번호 28의 변이체이고 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, L2는 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ECD는 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ICD는 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, ICD는 존재하고 env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ICD는 존재하고 env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00364] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 상기 입자는 이종 바이러스 당단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하며, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고, 여기서 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 23 또는 서열 번호 25의 서열을 포함하고; 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L1은 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이고; Fc는 서열 번호 104의 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고; L2는 링커이고 존재하지 않고; 그리고 X1은 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 60의 서열을 갖는 세포 외 도메인이고; TM은 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인이고, 그리고 ICD는 바이러스 입자의 외피에 표적화 모이어티를 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이며, 여기서 ICD는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00365] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 상기 입자는 이종 바이러스 당단백질 및 표적화 모이어티를 포함하고, 여기서 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 표적화 모이어티는 서열 번호 98과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 98과 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00366] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 상기 입자는 이종 바이러스 당단백질 및 표적화 모이어티를 포함하고, 여기서 이종 바이러스 당단백질은 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 표적화 모이어티는 서열 번호 98과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 98과 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
유연한 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 대표적인 바이러스 입자
[00367] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 바이러스 입자는 이종 바이러스 구조 단백질 및 표적화 모이어티를 포함하고, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고; 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L3은 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 또는 서열 번호 58에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 유연한 펩티드 링커이고; 그리고 X1은 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나, 그 단편이거나, 존재하지 않고; TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 막관통 도메인, 또는 그 단편이고; 그리고 ICD는 바이러스 입자의 외피에 표적화 모이어티를 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 ICD는 env 혼입 모티프를 포함하고, 상기 env 혼입 모티프는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00368] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 바이러스 입자는 이종 바이러스 구조 단백질 및 표적화 모이어티를 포함하고, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고; 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 50 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L3은 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 또는 서열 번호 58에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 유연한 펩티드 링커이고; 그리고 X1은 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나, 그 단편이거나, 존재하지 않고; TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 막관통 도메인, 또는 그 단편이고; 그리고 ICD는 바이러스 입자의 외피에 표적화 모이어티를 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 ICD는 env 혼입 모티프를 포함하고, 상기 env 혼입 모티프는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00369] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 바이러스 입자는 이종 바이러스 구조 단백질 및 표적화 모이어티를 포함하고, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52, 또는 서열 번호 53의 서열을 포함하고; 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L3은 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 또는 서열 번호 58에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 유연한 펩티드 링커이고; 그리고 X1은 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나, 그 단편이거나, 존재하지 않고; TM은 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는 막관통 도메인이거나, 그 단편이고; 그리고 ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 ICD는 env 혼입 모티프를 포함하고, 상기 env 혼입 모티프는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 22의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 24의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 54의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 57의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 58의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 62의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 최소 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00370] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 바이러스 입자는 이종 바이러스 구조 단백질 및 표적화 모이어티를 포함하고, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52, 또는 서열 번호 53의 서열을 포함하고; 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고, 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50, 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 유연한 펩티드 링커이고; 그리고 X1은 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나 그 단편이거나 존재하지 않고; TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 막관통 도메인이거나 그 단편이고; 그리고 ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않는 경우, 여기서 ICD는 env 혼입 모티프를 포함하고, 상기 env 혼입 모티프는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 22의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 24의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 50의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 51의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공한 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00371] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고 바이러스 입자는 이종 바이러스 구조 단백질 및 표적화 모이어티를 포함하고, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 23 또는 서열 번호 25의 서열을 포함하고; 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고, 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 유연한 펩티드 링커이고; 그리고 X1은 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나, 그 단편이거나, 존재하지 않고; TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 막관통 도메인, 또는 그 단편이고; 그리고 ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 ICD는 env 혼입 모티프를 포함하고, 상기 env 혼입 모티프는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 23의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 25의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00372] 일부 구현예에서, 바이러스 입자가 제공되고, 바이러스 입자는 이종 바이러스 구조 단백질 및 표적화 모이어티를 포함하고, 여기서 표적화 모이어티는 T-S1의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 52 또는 서열 번호 53의 서열을 포함하고; 여기서 T는 표적 결합 도메인이고 S1은 줄기 부분이고, 여기서 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 줄기 부분 S1은 L3-X1의 화학식을 포함하고; 여기서 L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는 유연한 펩티드 링커이고; 그리고 X1은 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나, 그 단편이거나, 존재하지 않고; TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는 막관통 도메인, 또는 그 단편이고; 그리고 ICD는 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 ICD는 env 혼입 모티프를 포함하고, 상기 env 혼입 모티프는 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 52의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종 바이러스 구조 단백질은 서열 번호 53의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 결합 도메인은 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, L3은 서열 번호 55의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, ECD는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, TM은 서열 번호 61의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, env 혼입 모티프는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같다. 일부 구현예에서, 관심 이종 분자는 본원에 제공된 바와 같은 CAR이다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[00373] 일부 구현예에서, 본원에 제공한 바와 같은 외피 유사형 바이러스 입자 또는 벡터, 즉 본원에 제공한 VSV-G 돌연변이 단백질을 포함하는 입자를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
[00374] 일부 구현예에서, 관심 화물을 세포에 전달하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 이 방법은 본원에 제공한 바와 같이 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터, 또는 이를 포함하는 약학 조성물과 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다.
[00375] 일부 구현예에서, 대상의 세포에 관심 화물을 전달하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 이 방법은 대상에게 본원에 제공된 바와 같은 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터, 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 화물은 키메라 항원 수용체이거나 본원에 달리 제공된 바와 같다.
[00376] 일부 구현예에서, 대상의 T-세포에 키메라 항원 수용체를 전달하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 이 방법은 대상에게 본원에 제공한 바와 같은 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터, 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 이종 핵산 분자를 포함한다.
[00377] 또한, 본원에는 본원에 제공한 바와 같은 돌연변이 VSV-G 단백질을 암호화하는 핵산 분자도 제공된다.
[00378] 돌연변이 VSV-G 단백질을 포함하는 바이러스 유사 입자 또는 벡터를 만드는 방법도 제공된다. 일부 구현예에서, 이 방법은 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터를 생산하기에 충분한 조건하에 본원에 제공된 돌연변이 VSV-G 단백질을 암호화하는 핵산 분자로 패키징 세포주를 형질감염 또는 형질도입하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 이 방법은 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터를 생산하기에 충분한 조건하에 본원에 제공된 다수의 핵산 분자로 패키징 세포주를 형질감염 또는 형질도입하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 이 방법은 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터를 단리하는 단계를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 또한 표적화 모이어티 및/또는 생산된 바이러스 벡터에 의해 전달될 화물을 암호화하는 핵산 분자를 포함한다.
암 치료 방법
[00379] 또한, 본원에는 대상의 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 이 방법은 본원에 제공된 바와 같이 대상에게 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터를 투여하거나, 이를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 유사형 바이러스 유사-입자 또는 바이러스 벡터는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 이종 핵산 분자를 포함한다.
[00380] 일부 구현예에서, 이 방법은 본원에 제공된 바와 같이 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터에 의해 형질도입된 면역 세포를 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 본원에 제공한 바와 같이 유사형 바이러스-유사 입자 또는 바이러스 벡터에 의해 형질도입되기 전에 대상으로부터 먼저 단리된다.
[00381] 또한, 본원에는 질환을 치료할 필요가 있는 대상의 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
[00382] 일부 구현예에서, 제공된 방법에는 질환을 치료할 필요가 있는 대상의 질환을 치료하는 방법이 포함되지만 이에 제한되지는 않고, 여기에는 질환을 치료하기 위해 본원에 제공된 바이러스 입자(들)를 대상에게 투여하는 단계가 포함된다.
[00383] 특정 구현예에서, 질환은 암이다. 또한, 본원에 제공된 조성물은 종양 세포(들)에 대한 세포-매개 면역 반응과 같이 질환을 치료하거나 완화하는 것이 바람직한 암과 관련된 임의의 병태를 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 치료할 암의 유형에는 암종, 모세포종, 육종, 특정 백혈병 또는 림프 악성 종양, 양성 및 악성 종양, 악성 종양, 예를 들어 육종, 암종, 및 흑색종이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 다른 대표적인 암에는 유방암, 전립선암, 난소암, 자궁경부암, 피부암, 췌장암, 대장암, 신장암, 간암, 뇌암, 림프종, 백혈병, 폐암, 갑상선암 등이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 암은 비고형 종양(예컨대, 혈액 종양) 또는 고형 종양일 수 있다. 성인 종양/암 및 소아 종양/암도 포함된다. 한 구현예에서, 암은 혈액 종양이다. 한 구현예에서, 암은 암종이다. 한 구현예에서, 암은 육종이다. 한 구현예에서, 암은 백혈병이다. 한 구현예에서, 암은 고형 종양이다.
[00384] 고형 종양은 일반적으로 낭종이나 액체 영역을 함유하지 않는 비정상적인 조직 덩어리이다. 고형 종양은 양성 또는 악성일 수 있다. 다양한 유형의 고형 종양은 이를 형성하는 세포 유형에 따라 명명된다(예컨대, 육종, 암종, 및 림프종). 육종 및 암종과 같은 고형 종양의 예로는 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 대장암종, 림프 악성 종양, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간세포암종, 편평세포암종, 기저세포암종, 선암종, 땀샘암종, 수질성 갑상선암종, 유두상 갑상선암종, 갈색세포종, 피지선암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 수질성 암종, 기관지암종, 신세포암종, 간세포암, 담관암종, 융모막암종, 윌름즈 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 세미노마, 방광암종, 흑색종, 중추신경계 종양(예컨대, 신경교종(예컨대, 뇌간 신경교종 및 혼합형 신경교종), 교모세포종(다형성 교모세포종이라고도 함), 성상세포종, 중추신경계 림프종, 생식세포종, 수질모세포종, 슈반종 두개인두종, 상피세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 과소교종, 뇌막종, 신경모세포종, 망막모세포종 및 뇌 전이)이 있다.
[00385] 본원에 개시된 방법에 의한 치료에 적합한 암종에는 식도암종, 간세포암종, 기저세포암종(피부암의 한 형태), 편평세포암(다양한 조직), 방광암종(전이세포암종(방광의 악성 신생물) 포함), 기관지암종, 결장암종, 대장직장암종, 위암종, 폐암종(폐의 소세포암종 및 비소세포암종 포함), 부신피질암종, 갑상선암종, 췌장암종, 유방암종, 난소암종, 전립선암종, 선암종, 땀샘암종, 피지선암종, 유두암종, 유두선암종, 낭선암종, 수질암종, 신세포암종, 관상암종 또는 담관암종, 융모암종, 정자세포종, 배아암종, 윌름스 종양, 자궁경부암종, 자궁암종, 고환암종, 골형성암종, 상피암종, 및 비인두암종이 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
[00386] 특정 예시적 구현예에 있어서, 본원에 제공된 조성물은 골수종, 또는 골수종과 관련된 병태를 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 골수종 또는 이와 관련된 병태의 예로는, 제한 없이, 경쇄 골수종, 비분비성 골수종, 미확인 의미의 단일 클론성 감마병증(monoclonal gamopathy of undertermined significance, MGUS), 형질세포종(예: 단독, 다중 단독, 골수외 형질세포종), 아밀로이드증, 및 다발성 골수종을 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 다발성 골수종을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종은 불응성 골수종이다. 일부 구현예에 있어서, 다발성 골수종은 재발성 골수종이다.
[00387] 특정 예시적 구현예에서, 본원에 제공된 조성물을 사용하여 생성된 생체 내 변형 면역 세포는 흑색종 또는 흑색종과 관련된 병태를 치료하는 데 사용된다. 흑색종 또는 이와 관련된 병태의 예로는 표재 확산성 흑색종, 결절성 흑색종, 악성 흑자 흑색종, 말단 흑자성 흑색종, 무색소성 흑색종, 또는 피부 흑색종(예: 피부, 눈, 외음부, 질, 직장 흑색종)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 흑색종은 피부 흑색종이다. 일부 구현예에서, 흑색종은 불응성 흑색종이다. 일부 구현예에서, 흑색종은 재발성 흑색종이다.
[00388] 일부 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 육종 또는 육종과 관련된 병태를 치료하는 데 사용된다. 육종 또는 이와 관련된 병태의 예로는, 제한 없이, 혈관육종, 연골육종, 척삭종, 내피육종, 유잉 육종, 섬유육종, 위장관 기질 종양, 평활근육종, 지방육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 중피종, 악성 말초신경초 종양, 점액육종, 골형성 육종, 골육종, 다형성 육종, 횡문근육종, 활막종, 활막 육종, 및 기타 연부조직 육종이 포함된다. 일부 구현예에서, 육종은 활막 육종이다. 일부 구현예에서, 육종은 점액성/원형 세포 지방육종, 분화/역분화 지방육종, 또는 다형성 지방육종과 같은 지방육종이다. 일부 구현예에서, 육종은 점액성/원형 세포 지방육종이다. 일부 구현예에서, 육종은 불응성 육종이다. 일부 구현예에서, 육종은 재발성 육종이다.
[00389] 일부 구현예에서, 대상은 조성물을 투여하기 전에 질환 또는 병태, 예를 들어 종양을 표적으로 하는 치료제로 치료되었다. 일부 양태에서, 대상은 다른 치료제에 불응성이 있거나 반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상은 지속적이거나 재발된 질환을 갖고 있다. 예를 들어, 화학 요법, 방사선 요법, 및/또는 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT), 예를 들어, 이종 HSCT를 포함한 또 다른 치료적 개입으로 치료한 후이다. 일부 구현예에서, 투여는 대상이 또다른 요법에 내성을 갖게 되었음에도 불구하고 대상을 효과적으로 치료한다.
[00390] 일부 구현예에서, 대상은 다른 치료제에 반응하고, 치료제를 이용한 치료는 질환 부담을 감소시킨다. 일부 양태에서, 대상은 처음에는 치료제에 반응하지만, 시간이 지남에 따라 질환 또는 병태의 재발을 보인다. 일부 구현예에서, 대상은 재발하지 않았다. 이러한 일부 구현예에서, 대상은 재발 위험이 높은 것과 같이 재발 위험이 있는 것으로 결정되므로, 조성물은 예방적으로 투여된다. 예를 들어, 재발 가능성을 줄이거나 예방하기 위해 투여된다. 일부 양태에서, 대상은 또 다른 치료제로 이전에 치료를 받지 않았다.
[00391] 조성물의 투여는 당업자에게 알려진 편리한 방식으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 에어로졸 흡입, 주사, 섭취, 수혈, 삽입 또는 이식을 통해 대상에게 투여될 수 있다. 본원에 설명된 조성물은 환자에게 동맥 내, 피하, 피내, 종양 내, 림프절 내, 골수 내, 근육 내, 정맥 내(iv) 주사, 복강 내, 비강 내, 두개 내, 또는 골 내로 투여될 수 있다. 다른 경우에, 조성물은 대상의 국소 질환 부위, 림프절, 장기, 종양 등에 직접 주사된다.
[00392] 질환의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 복용량은 치료할 질환의 유형, 질환의 심각성 및 경과, 조성물이 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 요법, 대상의 임상 병력 및 치료에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 조성물은 일부 구현예에서 대상에게 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 적절하게 투여된다.
[00393] 일부 구현예에서, 조성물은 조합 치료의 일부로 투여되고, 예컨대, 항체 또는 생산된 세포 또는 수용체 또는 작용제, 예컨대 세포독성제 또는 치료제와 같은 또 다른 치료적 개입과 동시에 또는 순차적으로, 임의의 순서로 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물(들)은 하나 이상의 추가 치료제와 공동-투여되거나 또 다른 치료적 개입과 관련하여 동시에 또는 순차적으로 임의의 순서로 투여된다. 일부 맥락에서, 조성물은 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 강화하거나 그 반대의 경우와 같이, 시간적으로 충분히 가까운 또 다른 요법과 공동-투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 작용제는 예를 들어 지속성을 강화하기 위해 IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 이 방법은 화학 요법제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 이 방법은 화학 요법제의 투여를 포함하지 않는다.
[00394] 특정 구현예에서, 조성물은 면역 체크포인트 항체(예: 항-PD1, 항-CTLA-4, 또는 항-PDL1 항체)와 함께 대상에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 바이러스 벡터는 예를 들어 PD-1(예정사 1 단백질)을 표적으로 하는 항체 또는 항체 단편과 함께 투여될 수 있다. 항-PD-1 항체의 예로는 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®, 이전에는 람브롤리주맙, MK-3475로도 알려짐), 및 니볼루맙(BMS-936558, MDX-1106, ONO-4538, OPDIVO®) 또는 그 항원-결합 단편이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 조성물은 항-PD-L1 항체 또는 그 항원-결합 단편과 함께 투여될 수 있다. 항-PD-L1 항체의 예로는 BMS-936559, MPDL3280A(TECENTRIQ®, Atezolizumab), 및 MEDI4736(Durvalumab, Imfinzi)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 조성물은 항-CTLA-4 항체 또는 그 항원-결합 단편과 함께 투여될 수 있다. 항-CTLA-4 항체의 예로는 Ipilimumab(상표명 Yervoy)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 소분자, siRNA, miRNA, 및 CRISPR 시스템을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 유형의 면역 체크포인트 조절제도 사용될 수 있다. 면역 체크포인트 조절제는 바이러스 벡터 전, 후, 또는 동시에 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 면역 체크포인트 조절제를 포함하는 복합 치료는 본원에 제공된 조성물을 포함하는 요법의 치료 효능을 증가시킬 수 있다. 다른 치료제는 본원에 제공된 조성물이 대상에게 투여되는 동시에, 전, 또는 후에 투여될 수 있다.
[00395] 특정 구현예에서, 대상은 2차 치료를 제공받는다. 2차 치료에는 화학 요법, 방사선 요법, 수술, 및 약물이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 대상은 2차 치료를 제공받지 않는다.
[00396] 일부 구현예에서는, 시클로포스파미드 및/또는 플루다라빈을 투여하는 것과 같은 림프구 제거 단계 없이 본 방법을 수행한다.
[00397] 일부 구현예에서, 조성물에 의해 암호화된 CAR로 형질도입되지 않은 특정 면역 세포를 사멸시키기 위해 조성물을 투여한 후 대상에게 컨디셔닝 요법을 투여할 수 있다. 이는 관심 핵산 화물에 의해 암호화된 선택 마커를 포함함으로써 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 컨디셔닝 요법은 대상에게 유효량의 시클로포스파미드를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 컨디셔닝 요법은 대상에게 유효량의 플루다라빈을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 컨디셔닝 요법은 대상에게 시클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
[00398] 일부 구현예에서, 본 개시의 특정 용량 요법은 조성물 투여 후 림프구 제거 단계를 포함한다. 예시적인 구현예에서, 림프구 제거 단계는 시클로포스파미드 및/또는 플루다라빈의 투여를 포함한다.
[00399] 일부 구현예에서, 림프구 제거 단계는 약 200 mg/m2/일과 약 2000 mg/m2/일 사이의 용량(예: 200 mg/m2/일, 300 mg/m2/일, 또는 500 mg/m2/일)으로 시클로포스파미드를 투여하는 것을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 시클로포스파미드의 용량은 약 300 mg/m2/일이다. 일부 구현예에서, 림프구 제거 단계는 약 20 mg/m2/일과 약 900mg/m2/일 사이의 용량(예: 20 mg/m2/일, 25 mg/m2/일, 30mg/m2/일, 또는 60mg/m2/일)으로 플루다라빈을 투여하는 것을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 플루다라빈의 용량은 약 30 mg/m2/일이다.
[00400] 일부 구현예에서, 림프구 제거 단계는 약 200 mg/m2/일과 약 2000mg/m2/일 사이의 용량(예: 200 mg/m2/일, 300 mg/m2/일, 또는 500 mg/m2/일)으로 시클로포스파미드를 투여하고, 약 20 mg/m2/일과 약 900 mg/m2/일 사이의 용량(예: 20 mg/m2/일, 25 mg/m2/일, 30 mg/m2/일, 또는 60 mg/m2/일)으로 플루다라빈을 투여하는 것을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 림프구 제거 단계는 약 300 mg/m2/일의 용량으로 시클로포스파미드를 투여하고, 약 30 mg/m2/일의 용량으로 플루다라빈을 투여하는 것을 포함한다.
[00401] 예시적인 구현예에서, 시클로포스파미드의 용량은 3일 동안 300 mg/m2/일이고, 플루다라빈의 용량은 3일 동안 30 mg/m2/일이다.
[00402] CAR T 세포 사용의 부작용 중 하나는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)으로 알려진 면역 활성화의 시작일 수 있다는 것이 당업계에 알려져 있다. CRS는 염증성 사이토카인을 증가시키는 면역 활성화이다. CRS는 알려진 온타겟 독성으로, 그 발달은 효능과 상관관계가 있을 가능성이 높다. 임상 및 실험실 측정은 경미한 CRS(전신적 증상 및/또는 2등급 장기 독성)에서 중증 CRS(sCRS; 3등급 이상 장기 독성, 공격적인 임상적 개입, 및/또는 잠재적으로 생명을 위협함)까지 다양하다. 임상적 특징은 다음과 같다: 고열, 불쾌감, 피로, 근육통, 메스꺼움, 식욕 부진, 빈맥/저혈압, 모세혈관 누출, 심장 기능 장애, 신장 기능 장애, 간부전, 및 파종성 혈관내 응고(Disseminated Intravascular Coagulation). 인터페론-감마, 과립구 대식세포 집락-자극 인자, IL-10, 및 IL-6을 포함한 사이토카인의 극적인 상승은 CAR T-세포 주입 후 나타났다. CRS 시그니처 중 하나는 IL-6(심각한 상승), IFN-감마, TNF-알파(중간), IL-2(경미한)를 포함한 사이토카인의 상승이다. 페리틴 및 C-반응성 단백질(C-reactive protein, CRP)을 포함한 임상적으로 이용 가능한 염증 마커의 상승도 CRS 증후군과 상관관계가 있는 것으로 관찰되었다. CRS의 존재는 일반적으로 적응성 전달 세포의 확장 및 점진적 면역 활성화와 상관관계가 있다. CRS 중증도는 주입 시점의 질환 부담에 따라 결정되는 것으로 입증되었는데, 종양 부담이 높은 환자는 더 많은 sCRS를 경험하기 때문이다.
[00403] 따라서, 일부 구현예에서, 이 방법은 CRS 진단 후, 생체 내에서 생성된 세포(예: CAR T 세포)의 항종양 효능을 저하시키지 않고 통제되지 않는 염증의 생리적 증상을 완화하기 위한 적절한 CRS 관리 전략을 포함한다. CRS 관리 전략은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 전신성 코르티코스테로이드를 투여하여 초기 항종양 반응을 손상시키지 않고 sCRS(예: 3등급 CRS)의 증상을 빠르게 역전시킬 수 있다.
[00404] 일부 구현예에서, 항-IL-6R 항체가 투여될 수 있다. 항-IL-6R 항체의 한 예는 식품의약국에서 승인한 단일클론 항체인 토실리주맙(Tocilizumab)이고, 아틀리주맙(Actemra 또는 RoActemra로 판매)으로도 알려져 있다. 토실리주맙은 인터루킨-6 수용체(interleukin-6 receptor, IL-6R)에 대한 인간화된 단일클론 항체이다. 토실리주맙 투여는 CRS의 거의-즉각적인 역전을 입증했다.
[00405] CRS는 일반적으로 관찰된 증후군의 심각도에 따라 관리되고 개입은 그에 따라 맞춤화된다. CRS 관리 결정은 실험실 수치에만 근거하지 않고 임상적 징후와 증상 및 개입에 대한 반응에 근거할 수 있다.
[00406] 경증에서 중등도의 경우는 일반적으로 적절한 증상 완화를 위해 필요에 따라 체액 요법, 비스테로이드성 항염제(non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID) 및 항히스타민제를 사용한 증상 관리로 치료한다. 더 중증인 경우는 어느 정도의 혈역학적 불안정성을 갖는 환자를 포함하고; 혈역학적 불안정성이 있는 경우, 토실리주맙을 투여하는 것이 권장된다. CRS의 1차 관리로는 토실리주맙을 사용할 수 있고, 일부 구현예에서는, 60분 동안 8 mg/kg IV의 표시된 용량(800 mg/용량을 초과하지 않음)으로 투여하고; 토실리주맙은 8시간마다 반복할 수 있다. 토실리주맙의 제1 용량에 대한 반응이 최적이 아닌 경우, 토실리주맙의 추가 용량을 고려할 수 있다. 토실리주맙은 단독으로 투여하거나 코르티코스테로이드 요법과 함께 투여할 수 있다. 지속적이거나 진행성 CRS 증상이 있거나 12~18시간 내에 임상적 개선이 충분하지 않거나 토실리주맙에 대한 반응이 좋지 않은 환자는 일반적으로 히드로코르티손 100 mg IV 또는 메틸프레드니솔론 1~2 mg/kg과 같은 고용량 코르티코스테로이드 요법으로 치료할 수 있다. 더 중증인 혈역학적 불안정성이나 더 중증인 호흡기 증상이 있는 환자의 경우, 환자는 CRS 과정 초기에 고용량 코르티코스테로이드 요법을 투여받을 수 있다. CRS 관리 지침은 발표된 표준(Lee et al. (2019) Biol Blood Marrow Transplant, doi.org/10.1016/j.bbmt.2018.12.758; Neelapu et al. (2018) Nat Rev Clin Oncology, 15:47; Teachey et al. (2016) Cancer Discov, 6(6):664-679)을 기반으로 할 수 있다.
[00407] CAR-T 요법으로 치료받은 환자에서 대식세포 활성화 증후군(Macrophage Activation Syndrome, MAS) 또는 혈구식세포성 림프구증(Hemophagocytic lymphohistiocytosis, HLH)과 일치하는 특징이 관찰되었고(Henter, 2007), 이는 CRS의 임상적 증상과 일치한다. MAS는 CRS에서 발생하는 면역 활성화에 대한 반응인 것으로 보이므로, CRS의 증상으로 간주해야 한다. MAS는 HLH(면역 자극에 대한 반응이기도 함)와 유사하다. MAS의 임상적 증후군은 고등급의 비완화성 발열, 세 가지 계통 중 적어도 두 가지에 영향을 미치는 혈구 감소증, 및 간비장비대가 특징이다. 이는 혈청 페리틴, 가용성 인터루킨-2 수용체, 및 트리글리세리드가 높고, 순환하는 자연 살해 세포(NK) 활동이 감소하는 것과 연관이 있다.
[00408] 일부 구현예에서는, 암의 치료를 필요로 하는 대상의 암을 치료하는 방법이 제공되고, 이 방법은 본원에 제공된 바이러스 입자(들)와 같은 조성물 중 하나를 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
[00409] 본원에 개시된 조성물은 약학 조성물을 포함할 수 있고, 예를 들어 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 약학적 제형을 포함할 수 있다.
[00410] 용어 "약학적 제형"은 그 안에 함유된 유효 성분의 생물학적 활동이 효과적일 수 있도록 하는 형태의 제제를 지칭하고, 제형이 투여될 대상에게 허용할 수 없을 정도로 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는다. "약학적으로 허용되는 담체"는 유효 성분 이외의 약학적 제형의 성분으로, 대상에게 독성이 없는 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용되는 담체에는 완충제, 부형제, 안정제, 또는 방부제가 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 일부 양태에서, 담체의 선택은 특정 세포 및/또는 투여 방법에 따라 부분적으로 결정된다. 따라서, 다양한 적합한 제형이 있다. 예를 들어, 약학 조성물은 방부제를 함유할 수 있다. 적합한 방부제는 예를 들어 메틸파라벤, 프로파일파라벤, 벤조산나트륨, 및 염화벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 두 개 이상의 방부제의 혼합물이 사용된다. 방부제 또는 그 혼합물은 일반적으로 전체 조성물의 중량 기준으로 약 0.0001% 내지 약 2%의 양으로 존재한다. 담체는 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에 설명되어 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 일반적으로 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이고, 인산염, 구연산염, 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 방부제(예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로파일 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(잔기 약 10개 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 포도당, 만노스, 또는 덱스트린을 포함한 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 자당, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온; 금속 착물(예: Zn-단백질 착물); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol, PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
[00411] 일부 양태에서 완충제는 조성물에 포함된다. 적합한 완충제는 예를 들어 구연산, 구연산나트륨, 인산, 인산칼륨, 및 다양한 다른 산과 염을 포함한다. 일부 양태에서, 두 개 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 그 혼합물은 일반적으로 전체 조성물의 중량 기준으로 약 0.001% 내지 약 4%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학 조성물을 제조하는 방법은 알려져 있다. 예시적인 방법은 예를 들어 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)에 더 자세히 설명되어 있다.
[00412] 제형은 수용액을 포함할 수 있다. 제형 또는 조성물은 또한 조성물로 치료되는 특정 징후, 질환, 또는 병태에 유용한 하나 초과의 유효 성분을 함유할 수 있고, 바람직하게는 각각의 활성이 서로에게 부정적인 영향을 미치지 않는 조성물과 보완적인 활성을 갖는 성분이다. 이러한 유효 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 적절히 조합하여 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학 조성물은 아스파라기나제, 부설판, 카르보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 및/또는 빈크리스틴과 같은 화학 요법제와 같은 다른 약학 활성제 또는 약물을 더 포함한다. 일부 구현예에서 약학 조성물은 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 데 효과적인 양, 예컨대 치료적으로 유효하거나 예방적으로 유효한 양으로 조성물을 함유한다. 일부 구현예에서 치료 또는 예방 효능은 치료 대상의 주기적 평가에 의해 모니터링된다. 원하는 용량은 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여, 또는 조성물의 연속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 화학 요법제를 포함하지 않는다.
[00413] 제형에는 경구, 정맥 내, 복강 내, 피하, 폐, 경피, 근육 내, 비강 내, 협측, 설하, 또는 좌약 투여를 위한 제형이 포함된다. 일부 구현예에서, 조성물은 비경구적으로 투여된다. 본원에 사용된 용어 "비경구적"에는 정맥 내, 근육 내, 피하, 직장, 질, 및 복강 내 투여가 포함된다. 일부 구현예에서, 조성물은 정맥 내, 복강 내, 또는 피하 주사를 통한 말초 체계 전달을 사용하여 대상에게 투여된다. 일부 구현예에서 조성물은 멸균 액체 제제, 예를 들어 등장성 수용액, 현탁액, 에멀전, 분산액, 또는 점성 조성물로 제공되고, 일부 양태에서는 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액체 제제는 일반적으로 젤, 다른 점성 조성물, 및 고체 조성물보다 제조하기 쉽다. 또한, 액체 조성물은 특히 주사로 투여하기에 다소 더 편리하다. 반면, 점성 조성물은 특정 조직과 더 긴 접촉 기간을 제공하기 위해 적절한 점도 범위 내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은 담체를 포함할 수 있고, 이는 예를 들어 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로파일렌 글리콜, 액상 폴리에틸렌 글리콜) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.
[00414] 멸균 주사액은 조성물을 용매에 혼입하여 제조할 수 있고, 예컨대 멸균수, 생리식염수, 포도당, 덱스트로스 등과 같은 적합한 담체, 희석제, 또는 부형제와 혼합하여 제조할 수 있다. 조성물은 투여 경로와 원하는 제제에 따라 습윤제, 분산제, 또는 유화제(예: 메틸셀룰로스), pH 완충제, 겔화제 또는 점도 향상 첨가제, 방부제, 향미제, 및/또는 색상과 같은 보조 물질을 함유할 수 있다. 일부 양태에서는 표준 텍스트를 참조하여 적합한 제제를 제조할 수 있다.
[00415] 항균 보존제, 산화 방지제, 킬레이트제, 및 완충제를 포함하여 조성물의 안정성 및 무균성을 향상시키는 다양한 첨가제를 첨가할 수 있다. 미생물의 작용 예방은 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 및 소르브산에 의해 보장될 수 있다. 주사형 약학적 형태의 장기 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 사용하여 가져올 수 있다.
[00416] 생체 내 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 무균이다. 무균성은 예를 들어 무균 여과막을 통한 여과를 통해 쉽게 달성할 수 있다.
[00417] 본원에 제공된 구현예는 표적 세포와 융합할 수 있는 유사형 바이러스를 사용하여 관심 유전자 또는 기타 이종 서열을 전달할 수 있기 때문에 여러 가지 목적으로 사용될 수 있다.
열거된 구현예
[00418] 일부 구현예에서는, 다음의 구현예가 제공된다:
1. 이종 바이러스 당단백질 및 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서, 여기서 표적화 모이어티가 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분인 바이러스 입자.
2. 구현예 1에 있어서, 줄기 부분 S1이 변이 Fc 단백질을 포함하고, 여기서 변이 Fc 단백질이 예컨대 CD8 또는 CD28 막관통 도메인에 제한되지 않는 막관통 도메인, 및 효과기 돌연변이를 포함하고, 여기서 효과기 돌연변이가 Fc 단백질과 Fc 상호작용 단백질, 예컨대 FcR, C1q, FcR, 또는 FcRn 사이의 상호작용을 억제하는 바이러스 입자.
3. 구현예 2에 있어서, S1 줄기 부분이 막관통 도메인을 통해 바이러스 입자의 표면에 부착되는 바이러스 입자.
4. 구현예 2 또는 3에 있어서, Fc 단백질이 IgG1 Fc, IgG2 Fc, 또는 IgG4 Fc 단백질인 바이러스 입자.
5. 구현예 2 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 변이 Fc 단백질이 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 서열의 변이체를 포함하는 바이러스 입자.
6. 구현예 2 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 변이 Fc 단백질이 변이 IgG1 Fc 단백질인 바이러스 입자.
7. 구현예 6에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
8. 구현예 6 또는 7에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 26의 L234A 및 L235A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
9. 구현예 6 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 26의 N297A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
10. 구현예 6 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 26의 P329G에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
11. 구현예 6 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 26의 L234A, L235A, N297A, 및 P329G에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
12. 구현예 6 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 26의 I253A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
13. 구현예 6 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 26의 H310A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
14. 구현예 6 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 26의 H435A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
15. 구현예 6 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 26의 I253A, H310A, 및 H435A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
16. 구현예 6 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 103과 적어도 70%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 서열 번호 103의 L19A, L20A, N82A, P114G, I38A, H95A, 및/또는 H220A에 해당하는 하나 이상의 돌연변이를 더 포함하는 바이러스 입자.
17. 구현예 6 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 104와 적어도 80%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 98%의 동일성, 또는 서열 번호 104와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
18. 구현예 2 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 변이 Fc 단백질이 변이 IgG2 Fc 단백질인 바이러스 입자.
19. 구현예 18에 있어서, 변이 IgG2 Fc 단백질이 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
20. 구현예 18 또는 19에 있어서, IgG2 Fc 단백질이 서열 번호 27의 N297A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
21. 구현예 18 또는 19에 있어서, IgG2 Fc 단백질이 서열 번호 27의 P329G에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
22. 구현예 18 내지 21 중 어느 하나에 있어서, IgG2 Fc 단백질이 서열 번호 27의 N297A 및 P329G에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
23. 구현예 18 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG2 Fc 단백질이 서열 번호 27의 I253A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
24. 구현예 18 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG2 Fc 단백질이 서열 번호 27의 H310A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
25. 구현예 18 내지 24 중 어느 하나에 있어서, IgG2 Fc 단백질이 서열 번호 27의 H435A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
26. 구현예 18 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG2 Fc 단백질이 서열 번호 27의 I253A, H310A, 및 H435A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
27. 구현예 2 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 변이 Fc 단백질이 변이 IgG4 Fc 단백질인 바이러스 입자.
28. 구현예 27에 있어서, 변이 IgG4 Fc 단백질이 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
29. 구현예 27 또는 28에 있어서, IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 S228P에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
30. 구현예 27 내지 29 중 어느 하나에 있어서, IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 L235E에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
31. 구현예 27 내지 30 중 어느 하나에 있어서, IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 N297A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
32. 구현예 27 내지 31 중 어느 하나에 있어서, IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 P329G에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
33. 구현예 27 내지 32 중 어느 하나에 있어서, IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 S228P, L235E, N297A, 및 P329G에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
34. 구현예 27 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 I253A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
35. 구현예 27 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 H310A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
36. 구현예 27 내지 35 중 어느 하나에 있어서, IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 H435A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
37. 구현예 27 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 변이 IgG4 Fc 단백질이 서열 번호 28의 I253A, H310A, 및 H435A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
38. 구현예 2 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 화학식 T-S1을 갖는 표적화 모이어티가 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 갖는 줄기 부분 S1을 포함하고, 여기서:
L1이 링커이거나 존재하지 않고,
Fc가 변이 Fc 단백질이고,
L2가 링커이거나 존재하지 않고, 그리고
X1이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고,
화학식 T-S1을 갖는 표적화 모이어티가 T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 갖는 바이러스 입자.
39. 구현예 38에 있어서, L1 및 L2가 각각 독립적으로 폴리펩티드 링커인 바이러스 입자.
40. 구현예 39에 있어서, 폴리펩티드 링커가 (GGGGA)n(서열 번호 54), (GGGGS)n(서열 번호 55), (EAAAK)n(서열 번호 73), A(EAAAK)nA(서열 번호 74), (XP)n(서열 번호 75)을 포함하고, 여기서 X가 Ala, Lys, 또는 Glu, GSAGSAAGSGEF(서열 번호 56), KESGSVSSEQLAQFRSLD(서열 번호 57), EGKSSGSGSESKST(서열 번호 58), AEAAAKEAAAKA(서열 번호 76), 또는 이들의 조합이고, 여기서 각각의 n이 독립적으로 1-5인 바이러스 입자.
41. 구현예 38 내지 40 중 어느 하나에 있어서, L1이 존재하지 않는 바이러스 입자.
42. 구현예 38 내지 40 중 어느 하나에 있어서, L1이 (GGGGA)n(서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n(서열 번호 55)이고, 그리고
여기서 각 n이 독립적으로 1-5인 바이러스 입자.
43. 구현예 38내지 42 중 어느 하나에 있어서, L2가 존재하지 않는 바이러스 입자.
44. 구현예 38 내지 42 중 어느 하나에 있어서, L2가 (GGGGA)n(서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n(서열 번호 55)이고, 그리고
여기서 각 n이 독립적으로 1-5인 바이러스 입자.
45. 구현예 38 내지 44 중 어느 하나에 있어서, X1이 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서:
ECD가 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고,
TM이 막관통 단백질의 막관통 도메인이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고,
여기서 T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 갖는 표적화 모이어티가 T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 바이러스 입자.
46. 구현예 45에 있어서, ECD가 존재하지 않는 바이러스 입자.
47. 구현예 45에 있어서, ECD가 CD8 또는 CD28의 세포 외 도메인 또는 그 단편인 바이러스 입자.
48. 구현예 47에 있어서, ECD가 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
49. 구현예 47에 있어서, ECD가 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
50. 구현예 45 내지 49 중 어느 하나에 있어서, TM이 CD8 또는 CD28의 막관통 도메인 또는 그 단편인 바이러스 입자.
51. 구현예 50에 있어서, TM이 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
52. 구현예 50에 있어서, TM이 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
53. 구현예 45 내지 52 중 어느 하나에 있어서, ICD가 존재하지 않는 바이러스 입자.
54. 구현예 45 내지 52 중 어느 하나에 있어서, ICD가 Env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
55. 구현예 54에 있어서, Env 혼입 모티프가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
56. 구현예 1에 있어서, 줄기 부분 S1이 L3-X1의 화학식을 포함하고, 여기서:
L3이 유연한 펩티드 링커이고, 그리고
X1이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고,
화학식 T-S1을 갖는 표적화 모이어티가 T-L3-X1의 화학식을 갖는 바이러스 입자.
57. 구현예 56에 있어서, L3이 (GGGGA)n(서열 번호 54), (GGGGS)n(서열 번호 55), GSAGSAAGSGEF(서열 번호 56), KESGSVSSEQLAQFRSLD(서열 번호 57), EGKSSGSGSESKST(서열 번호 58), 또는 이들의 임의의 조합의 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 각각의 n이 독립적으로 1-4인 바이러스 입자.
58. 구현예 57에 있어서, n이 1, 2, 또는 4인 바이러스 입자.
59. 구현예 56 내지 58 중 어느 하나에 있어서, X1이 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서:
ECD가 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고,
TM이 막관통 단백질의 막관통 도메인이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고,
여기서 T-L3-X1의 화학식을 갖는 표적화 모이어티가 T-L3-ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 바이러스 입자.
60. 구현예 59에 있어서, ECD가 존재하지 않는 바이러스 입자 .
61. 구현예 59에 있어서, ECD가 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나, CD8 또는 CD28인 바이러스 입자.
62. 구현예 61에 있어서, ECD가 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
63. 구현예 61에 있어서, ECD가 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
64. 구현예 59 내지 63 중 어느 하나에 있어서, TM이 CD8 또는 CD28의 막관통 도메인 또는 그 단편인 바이러스 입자.
65. 구현예 64에 있어서, TM이 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
66. 구현예 64에 있어서, TM이 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
67. 구현예 59 내지 66 중 어느 하나에 있어서, ICD가 존재하지 않는 바이러스 입자.
68. 구현예 59 내지 66 중 어느 하나에 있어서, ICD가 Env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
69. 구현예 68에 있어서, Env 혼입 모티프가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
70. 구현예 1 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 면역 세포에 결합하고, 여기서 면역 세포가 T 세포, B 세포; NK 세포, 수지상 세포, 호중구, 대식세포, 암 세포; 또는 예를 들어, CD3+ T 세포; CD4+ T 세포; CD7+ T 세포, CD8+ T 세포; CD19+ B 세포; CD19+ 암 세포; CD20+ B 세포; CD20+ 암 세포, CD30+ 폐 상피 세포; CD34+ 조혈 줄기 세포; CD105+ 내피 세포; CD105+ 조혈 줄기 세포; CD117+ 조혈 줄기 세포; CD133+ 암 세포; EpCAM+ 암 세포; GluA2+ 뉴런; GluA4+ 뉴런; 조혈 줄기 세포; 간세포; Her2/Neu+ 암 세포; NKG2D+ 자연 살해 세포; SLC1A3+ 성상세포; SLC7A10+ 지방세포 중 어느 하나인 바이러스 입자.
71. 구현예 1 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 CD7, CD8, cKit(CD117), CD4, CD3, CD5, CD6, CD2, TCR 알파, TCR 베타, TCR 감마, TCR 델타, CD10, CD34, CD110, CD33, CD14, CD68, CCR7, CD62L, CD25, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, 또는 CXCR3, 급성 백혈병 또는 림프종에는 발현되지만 조혈 전구 세포에는 발현되지 않는 글리코실화된 CD43 에피토프; 비조혈 암에는 발현되는 글리코실화된 CD43 에피토프; 키나제 앵커 단백질 4(A kinase anchor protein 4, AKAP-4); 아드레노셉터 베타 3(Adrenoceptor beta 3, ADRB3); AFP; 이형성 림프종 키나제(Anaplastic lymphoma kinase, ALK), 안드로겐 수용체; 안지오포이에틴-결합 세포 표면 수용체 2(Tie 2); 데스모글레인 1에 대한 자가 항체(Dsgl); 데스모글레인 3에 대한 자가 항체(Dsg3); B7H3(CD276); 비오틴; 골수 기질 세포 항원 2(Bone marrow stromal cell antigen 2, BST2); BST1/CD157; 암/고환 항원 1(NY-ESO-1); 암/고환 항원 2(LAGE-la); 탄산탈수효소 IX(CA1X); 암태아 항원(Carcinoembryonic antigen, CEA); CCCTC-결합 인자(아연 손가락 단백질)-유사(BORIS 또는 lmprinted Sites 조절자의 형제(Brother of the Regulator of lmprinted Sites)); CCR4; CD5; CD19; CD20; CD22; CD24; CD30; CD32 (FCGR2A); CD33; CD34; CD38; CD44v6; CD72; CD79a; CD79b; CD97; CD99; CD123; CD171; CD179a; CD179b-IGLll; CD200R; CD276/B7H3; CD300 분자-유사 패밀리 구성원 f(CD300LF); CDH1-CD324; CDH6; CDH17; CDH19; X 염색체 오픈 리딩 프레임 61(Chromosome X open reading frame 61, CXORF61); 클라우딘 6(CLDN6); 클라우딘18.2(CLD18A2 또는 CLDN18A.2); CMV pp65; C-MYC 에피토프 태그; 크립토; CS1(CD2 하위 집합 1 또는 CRACC 또는 SLAMF7 또는 CD319 또는 19A24라고도 함); CSF2RA(GM-CSFR-알파); C형 렉틴 도메인 패밀리 12 구성원 A(C-type lectin domain family 12 member A, CLEC12A); C형 렉틴-유사 분자-1(CLL-1 또는 CLECL1); 시클린 Bl; 시토크롬 P450 IB 1(CYP1B 1); DLL3; EBV-EBNA3c; EGF-bke 모듈-함유 뮤신-유사 호르몬 수용체-유사 2(EGF-bke module- containing mucin-like hormone receptor-like 2, EMR2); 연장 인자 2 돌연변이(Elongation factor 2 mutated, ELF2M); 에프린 B2; 에프린 A형 수용체 2(EphA2); 상피 성장 인자 수용체(EGFR); 상피 성장 인자 수용체 변이 III(EGFRviii); 상피 세포 접착 분자(EPCAM); ERG; 염색체 12p에 위치한 ETS 전좌-변이 유전자 6(ETV6-AML); IgA 수용체의 Fc 단편(FCAR 또는 CD89); Fc 수용체-유사 5(FCRL5); 섬유아세포 활성화 단백질 알파(FAP); FITC; Fms 유사 티로신 키나제 3(FLT3); 엽산 수용체 알파(Fra 또는 FR1); 엽산 수용체 베타(FRb); 난포 자극 호르몬 수용체(FSHR); Fos-관련 항원 1; 푸코실-GM1; G 단백질 결합 수용체 클래스 C 그룹 5 구성원 D(GPRC5D); G 단백질-결합 수용체 20(GPR20); GAD; 갱글리오시드 G2(GD2); 갱글리오시드 GD3(aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(l-4 )bDGlcp(l-l)Cer); 갱글리오시드 GM3(aNeu5Ac(2-3)bDClalp(l- 4)bDGlcp(l-l)Cer); GD3; GFRalpha4; 당단백질 100(gplOO); 글리피칸-3(GPC3); 생식선 자극 호르몬 수용체(CGHR 또는 GR); GpA33; GpNMB; GPRC5D; 구아닐릴 고리화효소 C(GCC); 열충격 단백질 70-2 돌연변이(mut hsp70-2); A형 간염 바이러스 세포 수용체 1(HAVCR1); globoH 글리코세라미드(GloboH)의 육당류 부분; 고분자량-흑색종 연관 항원(HMWMAA); HIV1 외피 당단백질; HLA; HLA-DOA; HLA-A; HLA-A2; HLA-B; HLA-C; HLA-DM; HLA-DOB; HLA-DP; HLA-DQ; HLA-DR; HLA-G; HTLVl-Tax; 인간 유두종 바이러스 E6(HPV E6); 인간 유두종 바이러스 E7(HPV E7); 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT); IgE; IL13Ra2; Ill lRa; 면역글로불린 람다-유사 폴리펩티드 1(IGLL1); 인플루엔자 A 헤마글루티닌(HA); 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체(IGF-I 수용체); 인터루킨 11 수용체 알파(IL-llRa); 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL-13Ra2 또는 CD213A2); 장내 카르복실 에스테라제; KIT(CD117); KSHV K8.1; KSHV-gH; LAMP1; 레구마인; 백혈구 면역글로불린-유사 수용체 서브패밀리 A 구성원 2(LILRA2); 백혈구-연관 면역글로불린-유사 수용체 1(LAIR1); 황체형성호르몬 수용체(LHR); 루이스(Y) 항원; 류스 Ag; Livl; 로커스 K 9(LY6K); 저전도성 염화물 채널; 림프구 항원 6 복합체; 림프구 항원 75(LY75); 림프구-특이적 단백질 티로신 키나제(LCK); 유선 분화 항원(NY-BR-1); T 세포 1(MelanA 또는 MARTI)에 의해 인식되는 흑색종 항원; 흑색종-연관 항원 1(MAGE-A1); 흑색종 암 고환 항원-1(MAD-CT-1); 흑색종 암 고환 항원-2(MAD-CT-2); 흑색종 세포 사멸 억제제(ML-IAP); 메조텔린; MPL; 뮤신 1 세포 표면 연관(MUC1); N-아세틸 글루코사미닐-트랜스퍼라제 V(NA17); 넥틴-4; 신경 세포 접착 분자(NCAM); NKG2D; NYBR1; O-아세틸-GD2 갱글리오시드(OacGD2); 후각 수용체 51E2(OR51E2); 중단점 클러스터 영역(BCR) 및 Abelson 쥐 백혈병 바이러스 종양 유전자 동족체 1(Abl)(bcr-abl)로 구성된 종양 유전자 융합 단백질; P53 돌연변이; 쌍을 이룬 상자 단백질 Pax-3(PAX3); 쌍을 이룬 상자 단백질 Pax-5(PAX5); 파넥신 3(PANX3); PDL1; P-글리코단백질; 태반-특이 1(PLAC1); 혈소판-유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFR-베타); 폴리시알산; 프로아크로신 결합 단백질 sp32(OY-TES1); 프로스타제; 전립선 암종 종양 항원-1(PCT A-1 또는 갈렉틴 8); 전립선 줄기 세포 항원(PSCA); 전립선-특이 막 항원(PSMA); 전립선 산성 인산가수분해효소(PAP); 프로스타인; 프로테아제 세린 21(테스티신 또는 PRSS21); 프로테아솜(프로솜 마크로페인) 서브유닛 베타 유형 9(LMP2); PTK7; Ras G12V; Ras 동족체 패밀리 구성원 C(RhoC); 쥐 육종(Ras) 돌연변이; 고급 글리코실 양이온 최종산물 수용체(RAGE-1); 수용체 티로신 키나제-유사 고아 수용체 1(ROR1); 수용체 티로신-단백질 키나제 ERBB2 또는 Her-22/neu; 신장 유비쿼터스 1(RU1); 신장 유비쿼터스 2(RU2); 육종 전좌 중단점; 세린 2(TMPRSS2) ETS 융합 유전자; 시알릴 루이스 접착 분자(sLe); SLAMF4; SLAMF6; Slea(CA19.9 또는 시알릴 루이스 항원); 정자 단백질 17(SPA17); T 세포 3에 의해 인식되는 편평세포 암 항원(SART3); 단계-특이적 배아 항원-4(SSEA-4); STEAP1; Survivin; 활막 육종 X 중단점 2(SSX2); TCR 감마 대체 판독 프레임 단백질(TARP); TCR-베타1 사슬; TCR-베타2 사슬; TCR-델타 사슬; TCR-감마 사슬; TCR감마-델타; 텔로머라제; TGF베타R2; TNT 항체에 의해 인식되는 항원; 갑상선 자극 호르몬 수용체(TSHR); Timl-/HVCR1; 조직 인자 1(TF1); Tn ag; Tn 항원((Tn Ag) 또는 (GalNAca-Ser/Thr)); TNF 수용체 패밀리 구성원B 세포 성숙(BCMA); 트랜스글루타미나제 5(TGS5); 막관통 프로테아제; TROP2; 종양 내피 마커 1(TEM1/CD248); 종양 내피 마커 7-관련(TEM7R); 종양 단백질 p53(p53); 종양-연관 당단백질 72(TAG72); 티로시나제; 티로시나제-관련 단백질 2(TRP-2); 유로플라킨 2(UPK2); 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2); V-myc 조류 골수종증 바이러스 종양 유전자 신경모세포종 유래 동족체(MYCN); 윌름스 종양 단백질(WT1); 또는 X 항원 패밀리 구성원 1A(XAGE1)에 결합하는 바이러스 입자.
72. 구현예 71에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 CD7에 결합하는 바이러스 입자.
73. 구현예 72에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 다음을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: (i) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 또는 전술한 것 중 임의의 것의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 여기서 중쇄 CDR1 서열이 서열 번호 30의 아미노산 서열을 갖고, 중쇄 CDR2가 서열 번호 31의 아미노산 서열을 갖고, 그리고 중쇄 CDR3 서열이 서열 번호 32의 아미노산 서열을 가짐; 및 (ii) 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 또는 전술한 것 중 임의의 것의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 여기서 경쇄 CDR1 서열이 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 CDR2 서열이 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖고, 그리고 경쇄 CDR3 서열이 서열 번호 35의 아미노산 서열을 가짐.
74. 구현예 73에 있어서, 중쇄가 서열 번호 36과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 폴리펩티드가 서열 번호 30에 기재된 HCDR1, 서열 번호 31에 기재된 HCDR2, 및 서열 번호 32에 기재된 HCDR3의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
75. 구현예 73 또는 74에 있어서, 경쇄가 서열 번호 37과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 폴리펩티드가 서열 번호 33에 기재된 LCDR1, 서열 번호 34에 기재된 LCDR2, 및 서열 번호 35에 기재된 LCDR3의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
76. 구현예 73 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 폴리펩티드가 서열 번호 36과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 37과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 폴리펩티드가 서열 번호 30에 기재된 HCDR1, 서열 번호 31에 기재된 HCDR2, 서열 번호 32에 기재된 HCDR3, 서열 번호 33에 기재된 LCDR1, 서열 번호 34에 기재된 LCD2, 및 서열 번호 35에 기재된 LCDR3의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
77. 구현예 73 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 경쇄 및 중쇄가 다음을 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 36과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 37과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
78. 구현예 73 내지 77 중 어느 하나에 있어서, 경쇄 및 중쇄가 다음을 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 36과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 37과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
79. 구현예 73 내지 78 중 어느 하나에 있어서, 경쇄 및 중쇄가 다음을 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 36과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 37과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
80. 구현예 73 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 경쇄 및 중쇄가 다음을 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 36을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 37을 포함하는 경쇄 가변 영역.
81. 구현예 73 내지 80 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 펩티드 링커와 같은 링커에 의해 연결되고, 이는 예를 들어 글리신/세린 링커일 수 있는 바이러스 입자.
82. 구현예 81에 있어서, 펩티드 링커가 (GGGGS)n의 서열을 포함하고, 여기서 n이 독립적으로 1-5인 바이러스 입자.
83. 구현예 73 내지 80 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 서로 직접 연결되고 링커에 의해 연결되지 않는 바이러스 입자.
84. 구현예 72 내지 82 중 어느 하나에 있어서, CD7에 결합하는 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 38과 적어도 90%의 서열 동일성, 서열 번호 38과 적어도 95%의 서열 동일성, 서열 번호 38과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 38에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
85. 구현예 72 내지 82 중 어느 하나에 있어서, CD7에 결합하는 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 39와 적어도 90%의 서열 동일성, 서열 번호 39와 적어도 95%의 서열 동일성, 서열 번호 39와 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 39에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
86. 구현예 71에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 CD8에 결합하는 바이러스 입자.
87. 구현예 86에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 다음을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 또는 이들 중 임의의 것의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄, 여기서 중쇄 CDR1 서열이 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖고, 중쇄 CDR2가 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖고, 그리고 중쇄 CDR3 서열이 서열 번호 44의 아미노산 서열을 가짐; 및 (ii) 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 또는 이들 중 임의의 것의 변이체를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄, 여기서 경쇄 CDR1 서열이 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 CDR2 서열이 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖고, 경쇄 CDR3 서열이 서열 번호 47의 아미노산 서열을 가짐.
88. 구현예 87에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 48과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄를 포함하고, 여기서 폴리펩티드가 서열 번호 42에 기재된 HCDR1, 서열 번호 43에 기재된 HCDR2, 및 서열 번호 44에 기재된 HCDR3의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
89. 구현예 87 또는 88에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 49와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 폴리펩티드가 서열 번호 45에 기재된 LCDR1, 서열 번호 46에 기재된 LCDR2, 및 서열 번호 47에 기재된 LCDR3의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
90. 구현예 87 내지 89 중 어느 하나에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 48과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 49와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 폴리펩티드가 서열 번호 42에 기재된 HCDR1, 서열 번호 43에 기재된 HCDR2, 서열 번호 44에 기재된 HCDR3, 서열 번호 45에 기재된 LCDR1, 서열 번호 46에 기재된 LCD2, 및 서열 번호 47에 기재된 LCDR3의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
91. 구현예 87 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 48과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 49와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
92. 구현예 87 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 48과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 49와 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
93. 구현예 87내지 90 중 어느 하나에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 48과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 49와 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
94. 구현예 86에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 경쇄와 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 중쇄가 서열 번호 48을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 그리고 경쇄가 서열 번호 49를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 바이러스 입자.
95. 구현예 87 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 펩티드 링커와 같은 링커에 의해 연결되는 바이러스 입자.
96. 구현예 95에 있어서, 펩티드 링커가 글리신/세린 링커인 바이러스 입자.
97. 구현예 95 또는 96에 있어서, 펩티드 링커가 (GGGGS)n(서열 번호 55)의 서열을 포함하고, 여기서 각 n이 독립적으로 1-5인 바이러스 입자.
98. 구현예 87 내지 94 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 서로 직접 연결되고 링커에 의해 연결되지 않은 바이러스 입자.
99. 구현예 86 내지 97 중 어느 하나에 있어서, CD8에 결합하는 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 50과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 50과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 50과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 50에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
100. 구현예 86 내지 97 중 어느 하나에 있어서, CD8에 결합하는 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 51과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 51과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 51과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 51에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
101. 구현예 1 내지 100 중 어느 하나에 있어서, 표적 결합 도메인(T)이 항체 또는 그 항원-결합 단편, 예컨대 scFv 항체인 바이러스 입자.
102. 구현예 1 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 이종 바이러스 당단백질이 SVCV-G 폴리펩티드인 바이러스 입자.
103. 구현예 102에 있어서, SVCV-G 폴리펩티드가 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
104. 구현예 102 또는 103에 있어서, SVCV-G 폴리펩티드가 서열 번호 52와 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
105. 구현예 102 또는 103에 있어서, SVCV-G 폴리펩티드가 서열 번호 53과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
106. 구현예 102 또는 103에 있어서, SVCV-G 폴리펩티드가 서열 번호 52 또는 서열 번호 53을 포함하는 바이러스 입자.
107. 구현예 102, 103, 또는 106 중 어느 하나에 있어서, SVCV-G 폴리펩티드가 서열 번호 52를 포함하는 바이러스 입자.
108. 구현예 102, 103, 또는 106 중 어느 하나에 있어서, SVCV-G 폴리펩티드가 서열 번호 53을 포함하는 바이러스 입자.
109. 구현예 1 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 이종 바이러스 당단백질이 VSV-G 폴리펩티드인 바이러스 입자.
110. 구현예 109에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 위치 182에서 돌연변이에 해당하는 돌연변이를 포함하는 서열 번호 2의 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
111. 구현예 109에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2와 적어도 70%의 동일성을 갖고 서열 번호 2와 비교하여 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
112. 구현예 110 또는 111에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2와 비교하여 I182E 또는 I182D 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
113. 구현예 109 내지 112 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 1과 적어도 70%의 동일성을 갖고 서열 번호 1과 비교하여 위치 198에서 돌연변이를 포함하는 서열을 포함하는 바이러스 입자.
114. 구현예 109 내지 113 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 서열과 비교하여 I182D 또는 I182E에 해당하는 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
115. 구현예 109 내지 114 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 4의 서열과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 서열을 포함하는 바이러스 입자.
116. 구현예 109 내지 114 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 4의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
117. 구현예 109 내지 114 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 5의 서열과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 서열을 포함하는 바이러스 입자.
118. 구현예 109 내지 114 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 5의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
119. 구현예 109 내지 111 또는 113 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 3의 서열과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 서열을 포함하는 바이러스 입자.
120. 구현예 109 내지 111 또는 113 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 53의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
121. 구현예 109 내지 120 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 US 2020/0216502에 기재된 돌연변이에 해당하는 VSV-G 단백질의 돌연변이를 더 포함하는 바이러스 입자.
122. 구현예 109 내지 121 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2와 비교하여 8, 10, 47, 209 및/또는 354 위치에 해당하는 VSV-G 단백질의 돌연변이를 더 포함하는 바이러스 입자.
123. 구현예 109 내지 122 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 위치 8에 해당하는 돌연변이를 더 포함하고, 여기서 돌연변이가 서열 번호 2의 해당 위치에서 표시된 아미노산과 다른 아미노산(Y 제외)인 바이러스 입자.
124. 구현예 109 내지 123 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 위치 209에 해당하는 돌연변이를 더 포함하고, 여기서 돌연변이가 서열 번호 2의 해당 위치에서 표시된 아미노산과 다른 아미노산(H 제외)인 바이러스 입자.
125. 구현예 109 내지 124 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 위치 47에 해당하는 돌연변이를 더 포함하고, 여기서 돌연변이가 서열 번호 2의 해당 위치에서 표시된 아미노산과 다른 아미노산(K 또는 R 제외)인 바이러스 입자.
126. 구현예 109 내지 125 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 위치 354에 해당하는 돌연변이를 더 포함하고, 여기서 돌연변이가 서열 번호 2의 해당 위치에서 표시된 아미노산과 다른 아미노산(K 또는 R 제외)인 바이러스 입자.
127. 구현예 109 내지 126 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 위치 10에 해당하는 돌연변이를 더 포함하고, 여기서 돌연변이가 서열 번호 2의 해당 위치에서 표시된 아미노산과 다른 아미노산(Q 또는 N 제외)인 바이러스 입자.
128. 구현예 109 내지 127 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 단백질이 위치 47 또는 위치 354, 또는 위치 47과 354 둘 다에서 치환을 포함하고, 여기서 각 위치가 독립적으로 A, G, F, Q, 또는 N으로 치환되는 바이러스 입자.
129. 구현예 109 내지 128 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 단백질이 위치 8에서 치환을 포함하고, 여기서 치환이 H8A, H8I, H8V, H8L 등인 바이러스 입자.
130. 구현예 109 내지 129 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 단백질이 위치 47에 치환을 포함하고, 여기서 상기 치환이 K47Q 또는 K47N인 바이러스 입자.
131. 구현예 109 내지 130 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 단백질이 H8A 및/또는 K47Q 치환 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
132. 구현예 109 내지 131 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 단백질이 Q10A, Q10R, 또는 Q10K 치환과 같은 위치 10에 치환을 포함하는 바이러스 입자.
133. 구현예 109 내지 132 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 단백질이 서열 번호 2의 위치 214 및/또는 352에서의 돌연변이에 해당하는 돌연변이를 더 포함하는 바이러스 입자.
134. 구현예 133에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 T214N 및/또는 T352A 돌연변이를 포함하는 바이러스 입자.
135. 구현예 109에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 위치 I182 및 T214, 및 T352 중 적어도 하나에 치환을 포함하는 바이러스 입자.
136. 구현예 135에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2의 위치 I182, T214, 및 T352에서 치환을 포함하는 바이러스 입자.
137. 구현예 135 또는 136에서, 위치 182에서의 치환이 I182D 또는 I182E이고, 위치 214에서의 치환이 T214N이고, 그리고 위치 352에서의 치환이 T352A인 바이러스 입자.
138. 구현예 135 내지 137 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24 또는 서열 번호 25의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
139. 구현예 135 내지 137 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 22의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
140. 구현예 135 내지 137 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 23의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
141. 구현예 135 내지 137 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 24의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
142. 구현예 135 내지 137 중 어느 하나에 있어서, VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 25의 서열을 포함하는 바이러스 입자.
143. 구현예 1 내지 142 중 어느 하나에 있어서, 바이러스 입자가 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함하는 바이러스 입자.
144. 구현예 141에 있어서, 관심 이종 분자가 siRNA, shRNA, 비코딩 RNA(예: CRISPR 시스템용 가이드 RNA), 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 바이러스 페이로드, 바이러스 게놈, 또는 이들의 조합인 바이러스 입자.
145. 구현예 143 또는 144에 있어서, 관심 이종 분자가 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, "CAR")인 바이러스 입자.
146. 구현예 145에 있어서, CAR이 항체 또는 그 단편을 포함하는 항원 결합 도메인을 포함하는 바이러스 입자.
147. 구현예 146에 있어서, 항체 또는 그 단편이 항체, scFv 항체, 항원 결합 도메인, 안키린 반복, VHH 도메인 항체, 나노바디, 단일 도메인 항체, 또는 FN3 항체인 바이러스 입자.
148. 구현예 146 또는 147에 있어서, CAR의 항원 결합 도메인이 CD20에 결합하는 바이러스 입자.
149. 구현예 148에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
150. 구현예 148에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
151. 구현예 148에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
152. 구현예 148에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
153. 구현예 149 내지 152 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 서로 직접 연결되어 있고 링커에 의해 연결되지 않은 바이러스 입자.
154. 구현예 149 내지 152 중 어느 하나에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 서열 번호 92와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 92와 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 92와 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 92에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
155. 구현예 149 내지 152 중 어느 하나에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 서열 번호 93과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 93과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 93과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 93에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
156. 구현예 148에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 94의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
157. 구현예 148에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 94의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
158. 구현예 148에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 94의 아미노산 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
159. 구현예 148에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자: 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
160. 구현예 156 내지 159 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 서로 직접 연결되고 링커에 의해 연결되지 않은 바이러스 입자.
161. 구현예 156 내지 159 중 어느 하나에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 서열 번호 96과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 96과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 96과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 96에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
162. 구현예 156 내지 159 중 어느 하나에 있어서, CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 서열 번호 97과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 97과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 97과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 97에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
163. 구현예 145 내지 162 중 어느 하나에 있어서, CAR이 힌지 도메인, 막관통 도메인, 공동 자극 도메인, 및 신호 전달 도메인을 더 포함하는 바이러스 입자.
164. 구현예 163에 있어서, 힌지 도메인이 서열 번호 59의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
165. 구현예 163 또는 164에 있어서, 막관통 도메인이 서열 번호 61의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
166. 구현예 163 내지 165 중 어느 하나에 있어서, 공동 자극 도메인이 서열 번호 101의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
167. 구현예 163 내지 166 중 어느 하나에 있어서, 신호 전달 도메인이 서열 번호 102의 아미노산 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
168. 구현예 148에 있어서, CAR이 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
169. 세포를 감염시키는 방법으로서, 상기 방법이 구현예 1 내지 168 중 어느 하나의 바이러스 입자와 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
170. 대상에서 세포를 감염시키는 방법으로서, 상기 방법이 대상에게 구현예 1 내지 168 중 어느 하나의 바이러스 입자를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
171. 관심 이종 분자를 세포에 전달하는 방법으로서, 상기 방법이 세포를 구현예 1 내지 168 중 어느 하나의 바이러스 입자와 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 바이러스 입자가 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 방법.
172. 대상에서 세포에 관심 이종 분자를 전달하는 방법으로서, 상기 방법이 대상에게 구현예 1 내지 168 중 어느 하나의 바이러스 입자를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 바이러스 입자가 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 방법.
173. 구현예 169 내지 172 중 어느 하나에 있어서, 세포가 면역 세포인 방법.
174. 구현예 169 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 세포가 T 세포, B 세포; NK 세포, 수지상 세포, 호중구, 대식세포, 암 세포이거나; 또는 예를 들어 CD3+ T 세포; CD4+ T 세포; CD7+ T 세포, CD8+ T 세포; CD19+ B 세포; CD19+ 암 세포; CD20+ B 세포; CD20+ 암 세포, CD30+ 폐 상피 세포; CD34+ 조혈 줄기 세포; CD105+ 내피 세포; CD105+ 조혈 줄기 세포; CD117+ 조혈 줄기 세포; CD133+ 암 세포; EpCAM+ 암 세포; GluA2+ 뉴런; GluA4+ 뉴런; 조혈 줄기 세포; 간세포; Her2/Neu+ 암 세포; NKG2D+ 자연 살해 세포; SLC1A3+ 성상세포; SLC7A10+ 지방세포인 방법.
175. 대상에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 대상에게 구현예 1-168 중 어느 하나의 바이러스 입자를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 바이러스 입자가 질환 또는 장애를 치료하기 위한 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 방법.
176. 구현예 175에 있어서, 질환 또는 장애가 암(예를 들어, T 세포 또는 B 세포 장애 또는 본원에 설명한 다른 유형의 암), 면역 장애, 자가-면역 장애, 대사 장애 등인 방법.
177. 표적 세포에 이종 분자를 전달하는 방법으로서, 상기 방법이 세포를 구현예 1 내지 168 중 어느 하나의 바이러스 벡터 또는 입자와 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 입자가 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 방법.
178. 이종 바이러스 당단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 이종 바이러스 당단백질이 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함하고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질을 포함하고,
여기서 서열 번호 26의 변이체가 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
여기서 서열 번호 27의 변이체가 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
여기서 서열 번호 28의 변이체가 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
여기서 변이 Fc 단백질이 서열 번호 61 또는 서열 번호 62에서 선택된 서열을 포함하는 막관통 도메인을 더 포함하는 바이러스 입자.
179. 이종 바이러스 당단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 이종 바이러스 당단백질이 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함하고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하고, 여기서:
L1이 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 75, 또는 서열 번호 76에서 선택된 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고,
Fc가 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고,
여기서 서열 번호 26의 변이체가 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
여기서 서열 번호 27의 변이체가 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
여기서 서열 번호 28의 변이체가 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
L2가 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 73, 서열 번호 74, 서열 번호 75, 또는 서열 번호 76에서 선택된 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고, 그리고
X1이 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 59 또는 서열 번호 60에서 선택된 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나 그 단편이거나 존재하지 않고,
TM이 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인 또는 그 단편이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나 ICD가 존재하지 않는 바이러스 입자.
180. 이종 바이러스 당단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 이종 바이러스 당단백질이 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53에서 선택된 서열을 포함하고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50 또는 서열 번호 51에서 선택된 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하고, 여기서:
L1이 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고,
Fc가 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 변이체인 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고,
여기서 서열 번호 26의 변이체가 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
여기서 서열 번호 27의 변이체가 N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
여기서 서열 번호 28의 변이체가 S228P, L235E, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하고,
L2가 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이거나 존재하지 않고, 그리고
X1이 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 60의 서열을 갖는 세포 외 도메인이거나 그 단편이거나 존재하지 않고,
TM이 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인 또는 그 단편이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하거나 ICD가 존재하지 않는 바이러스 입자.
181. 구현예 178 내지 180 중 어느 하나에 있어서, 변이 Fc 단백질이 서열 번호 104와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 98%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
182. 이종 바이러스 당단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 이종 바이러스 당단백질이 서열 번호 23 또는 서열 번호 25의 서열을 포함하고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 39의 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하고, 여기서:
L1이 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이고,
Fc가 서열 번호 104의 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고,
L2가 링커이고 존재하지 않고,
X1이 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 60의 서열을 갖는 세포 외 도메인이고,
TM이 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD가 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
183. 이종 바이러스 당단백질 및 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서, 여기서;
이종 바이러스 당단백질이 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
표적화 모이어티가 서열 번호 98과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 98과 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
184. 이종 바이러스 당단백질 및 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서, 여기서;
이종 바이러스 당단백질이 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 52 또는 서열 번호 53과 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고
표적화 모이어티가 서열 번호 98과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 98과 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
185. 이종 바이러스 구조 단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 38 또는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L3-X1의 화학식을 포함하고, 여기서
L3이 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 또는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, 그리고
X1이 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이거나 그 단편이거나 존재하지 않고,
TM이 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인 또는 그 단편이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 서열을 포함하는 아미노산을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
186. 구현예 185에 있어서, 여기서:
T가 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하고,
L3이 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하고,
ECD가 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고,
TM이 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고
ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
187. 구현예 185에 있어서, 여기서:
T가 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고,
L3이 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하고,
ECD가 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고,
TM이 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고
ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
188. 이종 바이러스 구조 단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 50 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L3-X1의 화학식을 포함하고, 여기서
L3이 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 또는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, 그리고
X1이 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이거나 그 단편이거나 존재하지 않고,
TM이 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인 또는 그 단편이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 서열을 포함하는 아미노산을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
189. 구현예 188에 있어서,
T가 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하고,
L3이 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하고,
ECD가 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고,
TM이 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고
ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
190. 구현예 188에 있어서,
T가 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하고,
L3이 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하고,
ECD가 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하고,
TM이 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고
ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
191. 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 이종 바이러스 구조 단백질이 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53의 서열을 포함하고,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L3-X1의 화학식을 포함하고, 여기서
L3이 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 56, 서열 번호 57, 또는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, 그리고
X1이 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이거나 그 단편이거나 존재하지 않고,
TM이 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인 또는 그 단편이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 서열을 포함하는 아미노산을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
192. 이종 바이러스 구조 단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 이종 바이러스 구조 단백질이 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 52 또는 서열 번호 53의 서열을 포함하고,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 50 또는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L3-X1의 화학식을 포함하고, 여기서
L3이 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, 그리고
X1이 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 59의 아미노산 서열 또는 그 단편을 포함하는 세포 외 도메인이거나 존재하지 않고,
TM이 서열 번호 61의 아미노산 서열 또는 그 단편을 포함하는 막관통 도메인이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고, 여기서 ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 서열을 포함하는 아미노산을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
193. 이종 바이러스 구조 단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 이종 바이러스 구조 단백질이 서열 번호 23 또는 서열 번호 25의 서열을 포함하고,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L3-X1의 화학식을 포함하고, 여기서
L3이 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, 그리고
X1이 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이고,
TM이 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 서열을 포함하는 아미노산을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
194. 이종 바이러스 구조 단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
여기서 이종 바이러스 구조 단백질이 서열 번호 52 또는 서열 번호 53의 서열을 포함하고,
여기서 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
여기서 표적 결합 도메인이 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 줄기 부분 S1이 L3-X1의 화학식을 포함하고, 여기서
L3이 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 유연한 펩티드 링커이고, 그리고
X1이 화학식 ECD-TM-ICD를 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
ECD가 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 세포 외 도메인이고,
TM이 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이고, 그리고
ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 여기서 ICD가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 서열을 포함하는 아미노산을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 바이러스 입자.
195. 구현예 178 내지 194 중 어느 하나에 있어서, 바이러스 입자가 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함하는 바이러스 입자.
196. 구현예 195에 있어서, 관심 이종 분자가 CAR인 바이러스 입자.
197. 구현예 195에 있어서, CAR이 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 바이러스 입자.
198. 변이 Fc 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드.
199. 구현예 198에 있어서, 변이 Fc가 IgG1 Fc, IgG2 Fc, 또는 IgG4 Fc의 변이체인 폴리펩티드.
200. 구현예 198 또는 구현예 199에 있어서, 변이 Fc가 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 Fc 폴리펩티드의 변이체인 폴리펩티드.
201. 구현예 198-200 중 어느 하나에 있어서, 변이체가 N-말단 결실을 포함하는 폴리펩티드.
202. 구현예 201에 있어서, N-말단 결실이 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 최대 100개의 아미노산 잔기를 포함하지 않는 폴리펩티드.
203. 구현예 201에 있어서, N-말단 결실이 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 최대 98개의 아미노산 잔기를 포함하지 않는 폴리펩티드.
204. 구현예 201에 있어서, N-말단 결실이 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 N-말단으로부터 최대 1-98개의 아미노산 잔기를 포함하지 않는 폴리펩티드.
205. 구현예 198 내지 204 중 어느 하나에 있어서, 변이 Fc가 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하지 않는 폴리펩티드.
206. 구현예 198 내지 205 중 어느 하나에 있어서, 변이 Fc가 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
207. 구현예 198 내지 206 중 어느 하나에 있어서, 변이 Fc 폴리펩티드가 L234, L235, M297, P329, I253, H310, 또는 H435 에 해당하는 위치에서 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 폴리펩티드.
208. 구현예 207에 있어서, 변이 Fc 폴리펩티드가 N-말단 결실을 포함하지 않는 폴리펩티드.
209. 구현예 207에 있어서, 변이 Fc 폴리펩티드가 N-말단 결실을 포함하는 폴리펩티드.
210. 변이 Fc 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드로서, 변이 Fc 폴리펩티드가 서열 번호 103의 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 변이 Fc 폴리펩티드가 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하지 않고, 그리고 여기서 변이 Fc 폴리펩티드가 L234A, L235A, M297A, P329G, I253A, H310A, 또는 H435A에 해당하는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 폴리펩티드.
211. 변이 Fc 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드로서, 변이 Fc 폴리펩티드가 서열 번호 103의 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 변이 Fc 폴리펩티드가 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하지 않고, 그리고 변이 Fc 폴리펩티드가 L234A, L235A, M297A, P329G, I253A, H310A, 또는 H435A에 해당하는 돌연변이를 포함하는 폴리펩티드.
212. 변이 Fc 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드로서, 여기서 변이 Fc 폴리펩티드가 서열 번호 104의 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 105 의 아미노산 서열을 포함하지 않는 폴리펩티드.
213. 변이 Fc 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드로서, 변이 Fc 폴리펩티드가 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하고 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하지 않는 폴리펩티드.
214. 구현예 198 내지 213 중 어느 하나의 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 입자.
[00419] 다음 실시예는 본원에 설명된 화합물, 조성물 및 방법을 예시하는 것이지만 제한하는 것은 아니다. 당업자에게 알려진 다른 적합한 변형 및 적응은 다음 구현예의 범위 내에 있다.
실시예
[00420] 실시예 1: VSV-G의 182번 위치 돌연변이는 LDL-R 상호작용을 없애지만 융합 특성은 유지한다. 플라스미드/서열. 모든 VSV-G 플라스미드는 pCMV-VSV-G 외피 벡터(Cell Bio Labs, 카탈로그 RV-110)에서 유래하였다. 점 돌연변이 및 그 조합은 부위 지정 돌연변이(New England Biolabs)를 사용하여 도입하였다. 개별 돌연변이 H8A 및 K47Q는 이전에 VSV-G를 부분적으로 "맹검"하여 VSV의 기본 세포 수용체인 LDL-R에 대한 결합을 감소시키는 것으로 나타났다(PMID: 29531262, DOI: 10.1038/s41467-018-03432-4). 이 실험에서는 CD7을 표적으로 하는 scFv(클론 MT701)와 CD28 막관통 도메인을 갖는 IgG "줄기"가 융합된 단일 바인더 분자를 사용하였다.
[00421] 세포. HEK293T 세포는 10% FBS가 포함된 DMEM에서 배양하였다. SupT1 세포는 10% FBS가 포함된 RPMI 배지에서 유지하였다. 인간 PBMC는 AllCells에서 구입하여 20 ng/mL IL-2(Peprotech)가 보충된 X-Vivo 10(Lonza)에서 배양하였다. PBMC는 항-CD3/CD28 Dynabeads(Cell Therapy Systems)를 사용하여 형질도입 48시간 전에 활성화하였다.
[00422] 렌티바이러스 입자 생성. VSV-G 당단백질 및 바인더 분자를 공동-발현하는 재조합 렌티바이러스 입자는 Lipofectamine 3000(ThermoFisher Scientific)을 사용하여 HEK293T 세포로 플라스미드 절단을 통해 생성하였다. 총 5개의 플라스미드가 형질감염되었다: (1) VSV-G 당단백질을 발현하는 플라스미드, (2) 바인더 단백질을 발현하는 플라스미드, (3) eGFP를 암호화하는 렌티바이러스 전이 게놈을 발현하는 플라스미드, (4) gag-pol을 발현하는 플라스미드, 및 (5) rev를 발현하는 플라스미드. 형질감염된 세포 상층액을 48시간 후에 수확하였다. 세포 상층액의 바이러스는 수크로스 쿠션을 통한 원심분리로 농축하고 PBS에 재현탁하였다. 렌티바이러스 입자 역가는 Lenti-X p24 Rapid Titer Kit(Takara Bio, San Jose, CA)를 사용하여 결정하였다.
[00423] 렌티바이러스 형질도입 검정. 농축된 렌티바이러스의 10배 희석(세포 배양 배지에서) 시리즈를 수행하여 SupT1 및 활성화된 인간 PBMC를 감염시키는 데 사용하였다. 배지는 6시간 후에 교체했고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 4일과 7일에 유세포 분석기로 분석했다. 세포는 생존력 염색과 항-CD7 항체로 염색하여 CD7 양성 세포(PeCy7 마우스-항-인간 CD7, 클론 CD7-6B7, BD Biosciences)를 검출하였다. eGFP 발현을 측정하여 형질도입 효율을 계산하였다.
[00424] 구조에 따른 새로운 블라인딩 돌연변이 설계. LDL-R의 CR2 및 CR3에 결합된 VSV-G의 공개된 결정 구조를 사용하여(각각 pdb 50YL 및 50Y9), LDL-R의 결합 계면을 향해 측쇄가 배향된 VSV-G의 두 추정 위치를 식별하였다(도 1). 잔기 Q10(서열 번호 2)은 CR2 및 CR3 모두의 잔기와 여러 상호 작용을 형성하는 것으로 나타났다. CR3에서, 이는 양전하 아르기닌 잔기와의 상호 작용을 포함하였다. 따라서, 세 가지 치환을 테스트하였다: LDL-R 결합을 잠재적으로 안정화하는 측쇄 상호 작용을 줄이기 위한 Q10A 및 정전기적 반발을 생성하기 위한 Q10R 및 Q10K.
[00425] 잔기 I182(서열 번호 2)는 CR2 및 CR3 모두에서 여러 잔기와 접촉하는 것으로 나타났다. 세 가지 치환을 테스트하였다: LDL-R 결합을 잠재적으로 안정화하는 측쇄 상호 작용을 줄이기 위한 I182A 및 LDL-R의 주요 결합 계면에 대한 정전기적 반발을 생성하기 위한 I182D 및 I182E.
[00426] 결합 계면에서 음전하를 추가하면 융합성을 변경시키지 않고 기본적 향성을 제거한다. CD7+ T 세포주 SupT1에서 바이러스 상층액을 적정하면 잔기 I182에 대한 구조적 예측이 검증되었다. 보상 바인더 분자가 없는 경우, WT VSV-G는 3.0e8의 역가에 도달했지만 I182D 및 I182E는 모두 약 3자리 더 낮았다(도 2). 잔기 I182에서 치환은 융합성을 유지했는데, 바인더가 바이러스를 CD7로 재지시하는 경우 역가가 1e8로 회복되었다.
[00427] 데이터는 도 2에 설명되어 있고, 이는 결합 계면에 음전하를 추가하면 융합성을 변경하지 않고 기본적 향성을 제거하는 것을 도시한다. 도 2a는 SupT1 세포에서 VSV-G 구조의 적정을 보여준다. 그래프는 p24 항원에 대한 각 바이러스 입력량에서 GFP를 발현하는 SupT1 세포의 백분율을 나타낸다. 점선/빈 원은 VSV-G 구조만을 나타내고, 실선/채워진 원은 CD7 표적화 분자가 trans로 발현된 동일한 구조를 나타낸다. 도 2b는 A의 적정에서 계산된 각 구조의 기능적 역가를 보여주고, 농축된 바이러스 상층액당 mL(TU/mL)의 형질도입 단위로 표현된다.
[00428] 따라서 이러한 예는 돌연변이 위치 182가 LDL-R 상호 작용을 없애기에 충분하면서도 표적 세포의 표적에 결합하는 표적화 모이어티와 결합할 때 융합유전자 특성을 유지한다는 것을 보여준다.
[00429] 실시예 2: 혈청 안정 VSV-G 단백질
[00430] WT VSV-G는 순수 인간 혈청에 의한 불활성화에 민감한 것으로 보고되었고, 불활성화 범위는 시험 매개변수에 따라 최소 변화에서 약 100배 감소까지 다양하다. 따라서, i) 위치 I182에서의 치환이 혈청에 유사한 민감성을 갖는 변이 VSV-G를 생성하는지 여부 및 ii) 알려진 혈청 안정화 VSV-G 돌연변이를 I182 치환된 구조에 혼입하면 구조의 혈청 안정성에 영향을 미치는지 여부를 평가하였다.
[00431] WT VSV-G, 혈청 안정 VSV-G(T214N, T352A), LDL-R 탈표적화 VSV-G(I182E), 및 LDL-R 탈표적화 혈청 안정 VSV-G(I182E, T214N, T352A)는 순수 혈청 또는 열 불활성화 혈청(heat inactivated serum, HI)의 존재 또는 부재하에서 SupT1 세포를 감염시키는 능력에 대해 테스트되었다(도 4). 예상대로 WT VSV-G는 혈청이 존재하는 상태에서 투여했을 때 감염성 백분율이 극적으로 감소했지만 혈청이 열 불활성화되었을 경우 감염성이 약간 회복되었다(도 4, 열 1-3). IgG1 Fc 줄기(WT)에 CD7 표적화 모이어티를 포함시켜도 혈청 불활성화가 회복되지 않았다(도 4, 열 4-6). T214N 및 T352A 돌연변이를 보유한 VSV-G 구조는 순수 또는 HI 혈청을 구별하지 않고 혈청이 존재할 때 감염성이 유사하게 감소하는 것으로 나타났다(도 4, 열 7-9). 그러나, 표적화 모이어티를 포함시키면 두 혈청 조건에서 불활성화를 부분적으로 복구할 수 있었다(도 4, 열 10-12). 놀랍게도, LDL-R 탈표적화 VSV-G(I182E)는 두 혈청 조건이 존재할 때 감염성 백분율이 감소하지 않았지만(도 4, 열 13-15), 순수 혈청이 존재할 때 혈청이 없거나 HI 혈청 조건에 비해 감염성이 증가했다. 알려진 혈청 안정 돌연변이를 VSV-G(I182E, T214N, T352A)에 추가로 포함시키면 혈청이 존재할 때 혈청이 없을 때보다 감염성이 증가했다(도 4, 열 16-18). 또한, I182E, T214N, T352A 구조는 HI 혈청이 존재할 경우 감염성이 증가하는 것으로 나타났고(도 4, 열 18), 이는 삼중 돌연변이 구조가 검사된 다른 구조보다 혈청 안정성이 더 높다는 것을 나타낸다.
[00432] 본 발명의 바이러스 구조에 혈청 안정화 돌연변이를 포함하는 효과를 더욱 특성화하기 위해, WT VSV-G, VSV-G(I182E), 및 VSV-G(I182E, T230N, T352A)를 벡터의 더 낮은 용량에서 평가하였다(도 5). 이전 평가와 일치하게, WT VSV-G는 혈청이 없는 조건에 비해 혈청에서 감염성이 감소한 것으로 나타났다(도 5, 열 1 및 2). 그러나, 혈청의 열 불활성화(heat inactivation, HI)는 WT VSV-G 감염성에 복구 효과가 있는 것으로 나타났다(도 5, 열 3). 이전 평가와 더욱 일치하게, VSV-G(I182E)는 혈청이 없는 조건에 비해 혈청이 있는 경우 감염성이 향상된 것으로 나타났다(도 5, 열 4 및 5). HI 혈청의 존재는 또한 혈청이 없는 경우에 비해 감염성이 증가했지만, 순수 혈청보다 효과가 더 작았다(도 5, 열 6). VSV-G(I182E, T214N, T352A)는 또한 혈청 및 HI 혈청 조건에서 혈청이 없는 조건에 비해 감염성이 증가한 것으로 나타났고(도 5, 열 7-9). 이는 이전 평가와 일치한다. 또한, 각각의 혈청이 없는 조건과 비교했을 때, VSV-G(I182E, T230N, T352A)는 VSV-G(I182E)에 비해 감염성이 더 높은 백분율로 증가하였고, 이는 세 가지 돌연변이를 모두 포함하면 I182E만 있는 경우보다 혈청 안정성이 더 높아짐을 시사한다.
[00433] 따라서, 이러한 예는 i) LDL-R 탈표적화 돌연변이 I182E가 WT VSV-G에서 관찰되는 혈청 불활성화에 대해 예상치 못한 수준의 보호를 제공한다는 것, ii) LDL-R 탈표적화 돌연변이 I182E가 T230N + T352A 돌연변이의 혈청 안정화 효과를 없애지 않는다는 것, 및 iii) 결합 돌연변이 구조 VSV-G(I182E, T230N, T352A)가 I182E 단독 또는 T230N + T352A 단독보다 더 큰 혈청 안정화 효과를 갖는 것으로 보인다는 것을 보여준다. 따라서, VSV-G(I182E, T230N, T352A)는 교대 융합성 없이 기본적 향성을 제거할 수 있고, 또한 더 안정적인 프로파일을 보여주고 혈청에서 중화되지 않는다.
[00434] 실시예 3: 잉어 바이러스 G 단백질의 봄 바이러스병은 세포 특이적 융합을 촉진할 수 있다.
[00435] 방법
[00436] 플라스미드/서열. 모든 랍도바이러스 GP 서열은 코돈 최적화되었고 Genscript에 의해 합성되었다. 서열은 아래에 표시되어 있고, 등록 번호는 다음 표에 나와 있으며, 이는 본원에 참조로 그 전체가 통합되어 있다. 표 1:
표 1. 사용된 라도바이러스 당단백질 서열.

랍도바이러스 		Genbank 등록
열대거세미나방 랍도바이러스 단리 Sf - G KF947078.1
검은 초파리 시그마 바이러스 10A - G GQ410979.1
우한 곤충 바이러스 7 - G YP_009301742.1
농어 랍도바이러스 - G YP_007641366.1
잉어 바이러스의 봄 바이러스병 - G CAA85735.1
[00437] 표적화 모이어티는 CD28 막관통 도메인을 포함하는 IgG 기반 Fc 줄기를 통해 막에 고정된 항-CD7 항체(단일 사슬 형태의 클론 MT701)를 포함한다.
[00438] 세포. HEK293T 세포는 10% FBS가 포함된 DMEM에서 배양하였다. SupT1 세포는 10% FBS가 포함된 RPMI 배지에서 유지하였다. 인간 PBMC는 AllCells에서 구입하여 20 ng/mL IL-2(Peprotech)가 보충된 X-Vivo 10(Lonza)에서 배양하였다. PBMC는 항-CD3/CD28 Dynabeads(Cell Therapy Systems)를 사용하여 형질도입 48시간 전에 활성화하였다.
[00439] 렌티바이러스 입자 생성. 랍도바이러스-G 당단백질 및 바인더 분자를 공동-발현하는 재조합 렌티바이러스 입자는 Lipofectamine 3000(ThermoFisher Scientific)을 사용하여 HEK293T 세포로 플라스미드 절단을 통해 생성되었다. 총 5개의 플라스미드가 형질감염되었다: (1) 랍도바이러스 G 당단백질을 발현하는 플라스미드, (2) 바인더 단백질을 발현하는 플라스미드(표시된 경우), (3) CAR20을 암호화하는 렌티바이러스 전이 게놈을 발현하는 플라스미드, (4) gag-pol을 발현하는 플라스미드, 및 (5) rev를 발현하는 플라스미드. 형질감염된 세포 상층액을 48시간 후에 수확하였다. 세포 상층액의 바이러스는 수크로스 쿠션을 통한 원심분리로 농축하고 x-vivo 배지에 재현탁하였다. 렌티바이러스 입자 역가는 Lenti-X p24 Rapid Titer Kit(Takara Bio, San Jose, CA)를 사용하여 결정했다.
[00440] 렌티바이러스 형질도입 검정. 농축된 렌티바이러스의 5배 희석(세포 배양 배지에서) 시리즈를 수행하여 SupT1 및 활성화된 인간 PBMC를 감염시키는 데 사용하였다. 배지는 6시간 후에 교체하였고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 4일과 7일에 유세포 분석기로 분석하였다. 세포는 생존력 염색, CD7 양성 세포를 검출하기 위한 항-CD7 항체, 및 형질도입 효율의 척도로서 CAR20 발현을 검출하기 위한 항-CAR 항체로 염색하였다.
[00441] 결과:
[00442] SVCV-G는 인간 세포로의 융합을 매개한다. 대부분의 비포유류 랍도바이러스 G 단백질은 잉어 바이러스 G(SVCV-G)의 봄 바이러스병을 제외하고 인간 세포에서의 형질도입을 매개하지 못하였다. 이 당단백질은 CD7 바인더가 없는 경우 형질도입이 매우 비효율적(맹검 VSV-G I182E보다 약 1 log 낮음)이기 때문에 SupT1 또는 인간 PBMC 세포를 단독으로 표적화하지 않았다. CD7 바인더가 매개하는 표적화된 형질도입은 재표적화된 VSV-G I182E와 비슷한 역가에 도달하였다.
[00443] 이 놀랍고 예상치 못한 결과는 면역 세포를 스스로 감염시킬 수 없는 바이러스 구조 단백질이 바이러스가 항-CD7 scFv를 포함하는 것과 같은 표적화 모이어티를 발현할 때 세포를 감염시키는 데 사용될 수 있음을 보여준다. 이 결과는 예측할 수 없었고, 다른 비인간 랍도바이러스 GP 단백질을 이용한 감염을 유도하기에 항-CD7 scFv 표적화 모이어티의 존재가 충분하지 않았기 때문에 항-CD7 scFv 자체의 효과가 아닌 것으로 나타났다. 데이터는 도 6에 나와 있다.
[00444] 실시예 4: CD7 표적화 모이어티는 Fc 줄기에 연결되어 PBMC를 형질도입할 수 있다.
[00445] 플라스미드 및 서열의 생성.
[00446] CD7 바인더의 CDR을 포함한 아미노산 서열은 질량 분석법(Rapid Novor)을 통해 결정되었다. CD7 바인더 서열은 인간 발현을 위한 코돈 최적화를 사용하여 IDT 또는 GenScript(Piscataway, NJ)에서 합성되었고 바이러스 당단백질 또는 IgG-기반 줄기에 삽입되었고 G4S 링커로 둘러싸여 있었다. 바이러스 당단백질의 예로는 CD7 바인더가 세포 외 영역에 부착된 Nipah-G 단백질이 있다. IgG-기반 줄기의 예로는 CD8 또는 CD28 막관통 영역과 CD7 바인더가 세포 외 영역에 부착된 모티프를 혼입한 외피가 있는 인간 IgG1 Fc 다이머가 있다. 생성된 바인더는 CMV 프로모터의 지시에 따라 발현되었다.
[00447] 조작된 렌티바이러스 입자의 생성.
[00448] 세포 표면에 혼입된 CD7 바인더를 발현하는 재조합 렌티바이러스 입자는 Lipofectamine 3000(ThermoFisher Scientific)을 사용하여 HEK293T 세포에 플라스미드 절단을 통해 생성되었다. 일부 구현예에서, 총 5개의 플라스미드가 형질감염되었다: (1) IgG 줄기가 있는 CD7 바인더를 발현하는 플라스미드 또는 Nipah-G 단백질에서 CD7 바인더를 발현하는 플라스미드, (2) 탈표적화된 VSV-G 단백질을 발현하는 플라스미드, (3) eGFP를 발현하는 렌티바이러스 게놈, (4) gag-pol을 발현하는 플라스미드, (5) rev를 발현하는 플라스미드. 일부 구현예에서는, 총 5개의 플라스미드가 형질감염되었다: (1) Nipah-G 단백질이 있는 CD7 바인더를 발현하는 플라스미드, (2) Nipah-F 단백질을 발현하는 플라스미드, (3) eGFP를 발현하는 렌티바이러스 게놈, (4) gag-pol을 발현하는 플라스미드, (5) rev를 발현하는 플라스미드. 형질감염 후 6시간 후에 배지를 교체하고 48시간 후에 세포를 수확하였다. 배지의 바이러스는 수크로스 쿠션을 통한 원심분리로 농축하고 배지에 재현탁시켰다. 렌티바이러스 입자 역가는 Lenti-X p24 Rapid Titer Kit(Takara Bio, San Jose, CA)를 사용하여 결정하였다.
[00449] CD7 바인더는 인간 및 비인간 영장류 PBMC에 모두 부착되어, CD7+ 세포 형질도입을 유도하였다.
[00450] 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지하였다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지하였다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 인간 및 비인간 영장류 세포를 감염시켰다. 배지는 24시간 후에 교체했고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 4일과 7일에 유세포 분석기로 분석하였다. 세포는 항-CD7 항체로 염색하여 CD7 양성 세포(PE-Cy7 마우스-항-인간 CD7, 클론 MT-701, Biolegend)뿐만 아니라 GFP 발현을 검출하였다. 세포 생존력도 결정하였다. CD7 바인더는 Nipah-를 갖는 Nipah-G와 같은 Paramyxoviridae 당단백질(도 7a-d 및 도 8a-d) 또는 VSV-G와 같은 Rhabdoviridae 당단백질(도 7i-l 및 도 8i-l)에 부착되었고, 이들은 단독으로 사용된 바인더에 비해 인간 PBMC(도 7a-l) 또는 NHP PBMC(도 8a-l)를 성공적으로 형질도입시켰다. 단독 바인더(도 7e-h 및 도 8e-h)는 형질도입을 보이지 않았다. IgG 줄기가 있는 CD7을 테스트했을 때, 단독 바인더(위쪽 행)는 다시 인간(도 7m) 또는 NHP PBMC(도 8m)에 형질도입을 하지 않았지만, 맹검 VSV-G와 함께 투여했을 때, 인간(도 7m, 아래 패널) 및 NHP PBMC(도 8m, 아래 패널) 모두에서 형질도입이 관찰되었다.
[00451] 이러한 실시예 및 구현예는 폴리펩티드를 사용하여 CD7에 결합하고 바이러스 입자를 CD7을 발현하는 세포로 표적화하여 CD7을 발현하는 세포에 형질도입될 수 있음을 보여준다.
[00452] 실시예 5: CD8 표적화 모이어티는 Fc 줄기에 연결되어 PBMC를 형질도입할 수 있다.
[00453] 플라스미드 및 서열의 생성.
[00454] CD8 바인더의 CDR을 포함한 아미노산 서열은 질량 분석법(Rapid Novor)을 통해 결정되었다. CD8 바인더 서열은 인간 발현을 위한 코돈 최적화를 사용하여 IDT 또는 GenScript(Piscataway, NJ)에서 합성되었고 바이러스 당단백질 또는 IgG-기반 줄기에 삽입되었으며 G4S 링커로 둘러싸여 있었다. 바이러스 당단백질의 예로는 CD8 바인더가 세포 외 영역에 부착된 Nipah-G 단백질이 있다. IgG-기반 줄기의 예는 인간 IgG1 Fc 이합체에 CD8 또는 CD28 막관통 영역 및 외피 혼입 모티프를 포함하고, CD8 바인더가 세포 외 영역에 부착된 형태였다. 생성된 바인더는 CMV 프로모터의 지시에 따라 발현되었다.
[00455] 조작된 렌티바이러스 입자의 생성.
[00456] 표면에 혼입된 CD8 바인더를 발현하는 재조합 렌티바이러스 입자는 Lipofectamine 3000(ThermoFisher Scientific)을 사용하여 HEK293T 세포로 플라스미드 절단을 통해 생성되었다. 일부 구현예에서, 총 5개의 플라스미드를 형질감염시켰다: (1) IgG 줄기가 있는 CD8 바인더를 발현하는 플라스미드, (2) 탈표적화된 VSV-G 단백질을 발현하는 플라스미드, (3) eGFP를 발현하는 렌티바이러스 게놈, (4) gag-pol을 발현하는 플라스미드, (5) rev를 발현하는 플라스미드. 일부 구현예에서, eGFP를 발현하는 렌티바이러스 게놈을 CAR 분자로 대체하였다. 형질감염 후 6시간 후에 배지를 교체하고 48시간 후에 세포를 수확하였다. 배지의 바이러스는 수크로스 쿠션을 통한 원심분리로 농축하고 배지에 재현탁시켰다. 렌티바이러스 입자 역가는 Lenti-X p24 Rapid Titer Kit(Takara Bio, San Jose, CA)를 사용하여 결정하였다.
[00457] CD8 바인더는 인간 및 비인간 영장류 PBMC에 모두 부착되어, CD8+ 세포 형질도입을 유도한다.
[00458] 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지하였다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨, 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지하였다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 인간 및 비인간 영장류 세포를 감염시켰다. 배지는 24시간 후에 교체했고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 6일 차에 유세포 분석기로 분석하였다. 세포는 항-CD8 항체로 염색하여 CD8 양성 세포(BV421 마우스-항-인간 CD8, 클론 RPA-T8, Biolegend)뿐만 아니라 GFP 또는 CAR20 발현을 검출하였다. 세포 생존력도 결정하였다. 탈표적화된 VSV-G를 함유한 CD8 바인더는 인간 PBMC(도 9a) 또는 NHP PBMC(도 9b)에 GFP(도 9a-9b, 위쪽 행) 및 CAR20(도 9a-9b, 아래쪽 행)을 성공적으로 형질도입하였다.
[00459] 이러한 실시예 및 구현예는 폴리펩티드가 CD8에 결합하고 바이러스 입자를 CD8을 발현하는 세포로 표적화하여 CD8을 발현하는 세포에 형질도입하는데 사용될 수 있음을 보여준다.
[00460] 실시예 6: Fc 줄기 바인더를 보유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 PBMC를 형질도입한다.
[00461] 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지되었다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지되었다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 인간 및 비인간 영장류 세포를 감염시켰다. 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유한 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고 본원에 제공된 대로 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23, 서열 번호 25)에 해당한다. 본 실시예에서 VSV-G* 유사형 렌티바이러스에 사용된 바인더 구조는 이전 실시예에서 사용된 CD7 바인더 구조와 동일하다. 배지는 24시간 후에 교체되었고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 7일 차에 유세포 분석기로 분석하여 CAR 형질도입을 확인하였다. CAR 발현은 평가된 모든 인간 및 비인간 영장류 PBMC에서 관찰된 반면(도 10a), 바인더 단독(도 10b)은 형질도입이 나타나지 않았다. 데이터는 감염 다중도 대비 CAR 발현 백분율로도 표시된다(도 10c).
[00462] 이러한 실시예 및 구현예는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스가 다양한 인간 및 비인간 영장류 PMBC를 성공적으로 형질도입할 수 있음을 보여준다.
[00463] 실시예 7: CD7 표적화 모이어티는 유연한 줄기에 연결되어 PBMC를 형질도입할 수 있다.
[00464] 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지되었다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지되었다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 인간 및 비인간 영장류 세포를 감염시켰다. 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유한 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고 본원에 제공된 대로 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23, 서열 번호 25)에 해당한다. 24시간 후에 배지를 교체하고, 형질도입된 세포를 형질도입 후 7일 차에 유세포 분석기로 분석하여 CAR 형질도입을 확인하였다. 결합제가 없는 경우(도 11b)와 비교하여 평가된 모든 인간 및 비인간 영장류 PBMC에서 CAR 발현이 관찰되었고(도 11a), 결합제가 없는 경우(도 11b)에는 형질도입이 나타나지 않았다. 데이터는 감염 다중도 대비 CAR 발현 백분율로도 표시된다(도 11c).
[00465] 이러한 실시예 및 구현예는 유연한 줄기를 갖는 CD7 바인더가 인간 및 비인간 영장류 PBMC를 성공적으로 형질도입할 수 있음을 보여준다. 이는 IL-13을 표적 결합 도메인으로 사용하는 VSVG(K47Q, R354A) 유사형 바이러스가 유연한 (G4S)3 표면 구조를 활용할 때 IL-13Rα1을 발현하는 세포로 형질도입할 수 없다는 Dobson과 그의 동료들의 최근 보고(Dobson CS, Reich AN, Gaglione S, Smith BE, Kim EJ, Dong J, Ronsard L, Okonkwo V, Lingwood D, Dougan M, Dougan SK, Birnbaum ME. Antigen identification and high-throughput interaction mapping by reprogramming viral entry. Nat Methods. 2022 Apr;19(4):449-460. doi: 10.1038/s41592-022-01436-z. Epub 2022 Apr 8. PMID: 35396484; PMCID: PMC9012700) which showed that a VSVG (K47Q, R354A)에 비추어 볼 때 놀랍고 예상치 못한 결과이다. G4S 반복의 수가 형질도입에 필수적인 변수인지 확인하기 위해, 0 내지 4개의 G4S 반복을 보유하는 다양한 구조체를 활용하였다(도 12). 각각 항-CD7 결합 도메인이 있는 다양한 G4S 줄기를 포함하는 바이러스는 HEK293T 세포에서 항-CD20 CAR(CAR20)을 암호화하는 VSV-G*, xHIV 패키징, rev, 및 SIN 렌티벡터 게놈으로 구성된 패키징 플라스미드 세트와 함께 형질전환되었다. 대조 샘플은 바인더가 없는 단독 패키징 세트, 항-CD7 결합 도메인이 있는 IgG Fc 줄기가 있는 패키징 세트, 또는 VSV-G*를 VSV-G 야생형으로 치환한 바인더가 없는 패키징 세트였다. 바이러스 상층액은 20% 수크로스 쿠션에서 원심 분리하여 정제하고 X-Vivo 배지에 재현탁시켰다. 재현탁된 바이러스는 p24 검정으로 분석하여 용액 내 바이러스 단백질 함량을 확인하였다. p24 질량으로 10배 희석한 바이러스를 SupT1 및 인간 PBMC에 지시된 대로 투여하였다. 유세포 분석법을 사용하여 형질도입 후 7일 차에 표면에 CAR20 단백질이 있는 세포 분획을 평가하였다. SupT1 세포에서(도 12a), (G4S)1은 (G4S)2 또는 (G4S)3 구조보다 더 큰 CAR 발현을 초래하였다. 놀랍게도, (G4S)4 유연한 줄기를 보유한 구조는 (G-4S)1-3에 대해 확립된 추세를 따르지 않았고 대신 (G4S)4 유연한 줄기 구조는 테스트된 다른 (G4S)n 구조보다 더 큰 CAR 발현을 초래하였다. 유사한 결과가 인간 PBMC에서도 발견되었다(도 12b).
[00466] 실시예 8: Fc 줄기 바인더를 보유하는 SVCV-G 유사형 렌티바이러스는 PBMC를 형질도입한다.
[00467] 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지하였다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지하였다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 인간 및 비인간 영장류 세포를 감염시켰다. 본 실시예의 SVCV-G 유사형 렌티바이러스에 사용된 CD7 바인더 구조는 이전 실시예에서 사용된 것과 동일하다. 배지는 24시간 후에 교체했고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 7일 차에 유세포 분석기로 분석하여 CAR 형질도입을 확인하였다. CAR 발현은 평가된 모든 인간 및 비인간 영장류 PBMC에서 관찰된 반면(도 13a), 바인더가 없는 경우(도 13b) 형질도입이 나타나지 않았다. 데이터는 감염 다중도 대비 CAR 발현 백분율로도 표시된다(도 13c).
[00468] 이러한 실시예 및 구현예는 i) SVCV-G 유사형 렌티바이러스가 PMBC를 성공적으로 형질도입할 수 있고 ii) 본 개시의 변이 Fc 줄기가 단지 VSV-G 유사형 구현예에만 제한되지 않는다는 것을 보여준다.
[00469] 실시예 9: CD7/유연한 줄기 바인더를 보유하는 SVCV-G 유사형 렌티바이러스는 PBMC를 형질도입한다.
[00470] 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지하였다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1mM 피루브산 나트륨 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지하였다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 인간 및 비인간 영장류 세포를 감염시켰다. SVCV-G 유사형 렌티바이러스에 사용된 바인더 구조는 이전 실시예 4에서 사용된 것과 동일하다. 배지는 24시간 후에 교체했고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 7일 차에 유세포 분석기로 분석하여 CAR 형질도입을 확인하였다. CAR 발현은 평가된 모든 인간 및 비인간 영장류 PBMC에서 관찰된 반면(도 14a), 바인더가 없는 경우(도 14b) 형질도입이 나타나지 않았다. 데이터는 감염 다중도 대비 CAR 발현 백분율로도 표시된다(도 14c).
[00471] 이러한 실시예 및 구현예는 i) SVCV-G 유사형 렌티바이러스가 PMBC를 성공적으로 형질도입할 수 있고 ii) 유연한 줄기 구조가 VSV-G 유사형 구현예에만 제한되지 않는다는 것을 보여준다.
[00472] 실시예 10: SVCV-G 유사형 렌티바이러스는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스와 비슷하다.
[00473] Fc 줄기가 있는 CD7 바인더를 보유하는 SVCV-G 및 VSV-G* 유사형 렌티바이러스의 형질도입 효율을 비교하였다. 렌티바이러스 생성 및 세포 형질도입 검정은 이전 실시예와 같이 수행하였다. 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유하는 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고, 본원에 제공된 바와 같이 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23, 서열 번호 25)에 해당한다. 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지되었다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지되었다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 인간 및 비인간 영장류 세포를 감염시켰다. 배지는 24시간 후에 교체되었고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 7일 차에 유세포 분석기로 분석하여 CAR 형질도입을 확인하였다. CAR 발현은 SupT1 세포뿐만 아니라 여러 인간 PBMC 세포주 및 비인간 영장류 PBMC 세포주에서 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 구조 간에 비슷하였다(도 15).
[00474] 유연한 줄기를 갖는 CD7 바인더를 보유하는 SVCV-G 및 VSV-G* 유사형 렌티바이러스의 형질도입 효율도 비교하였다. 렌티바이러스 생성 및 세포 형질도입 검정은 이전 실시예와 같이 수행하였다. 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유하는 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고, 본원에 제공된 바와 같이 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23, 서열 번호 25)에 해당한다. 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2를 함유하는 X-Vivo10 배지에서 유지하였다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지되었다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 인간 및 비인간 영장류 세포를 감염시켰다. 배지는 24시간 후에 교체되었고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 7일 차에 유세포 분석기로 분석하여 CAR 형질도입을 확인하였다. CAR 발현은 SupT1 세포뿐만 아니라 여러 인간 PBMC 세포주 및 비인간 영장류 PBMC 세포주에서 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 구조 간에 비슷하였다(도 16).
[00475] 이러한 실시예 및 구현예는 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 바이러스 입자가 모두 본 개시의 변이 Fc 줄기 또는 본 개시의 유연한 펩티드 줄기와 함께 CD7 바인더를 사용할 때 유사한 효능으로 SupT1 및 PBMC 세포를 형질도입할 수 있음을 보여주고, 이는 VSV-G* 및 SVCV-G 구조 모두가 광범위한 세포 유형을 형질도입하는 데 유용할 수 있음을 시사한다.
[00476] 실시예 11: Fc 줄기 바인더를 보유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스로 형질도입된 PBMC의 PBMC 형질도입 프로파일.
[00477] 의도된 세포 표적이 형질도입되었는지 확인하기 위해, 1차 인간 PBMC에 서열 번호 98의 서열을 갖는 CD7 바인더를 보유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스를 형질도입한 후 트랜스진(GFP) 발현을 평가하였다. 인간 PBMC 세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지하였다. 농축 렌티바이러스를 사용하여 PBMC를 감염시켰다. 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유하는 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고, 본원에 제공된 바와 같이 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23, 서열 번호 25)에 해당한다. 배지는 24시간 후에 교체했고, 형질도입된 세포는 유세포 분석법으로 분석하였다.
[00478] 도 17a에 도시된 바와 같이, 야생형 VSV-G를 포함하는 바이러스 입자는 강력한 트랜스진 발현을 보였고, 이는 VSV-G* 당단백질을 사용하여 제거되었다. CD7 바인더를 포함시키면 GFP 트랜스진 발현이 회복되었다. 이 데이터는 VSV-G* 당단백질이 WT-VSV-G 당단백질의 무차별 반응성을 제거할 수 있고, 지시된 바인더를 포함시키면 표적 트랜스진 발현이 초래됨을 다시 한번 보여준다. GFP 양성 PBMC는 세포 유형에 따라 추가로 평가되었다. 도 17b에 도시된 바와 같이, 서열 번호 98의 서열을 갖는 CD7 바인더를 보유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 이들 세포 유형 각각에 대한 GFP 양성, 세포 마커 양성 세포 집단에 의해 입증된 바와 같이 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 및 NK 세포를 성공적으로 형질도입하였다. 이 데이터는 본원에 제공된 바이러스 입자가 PBMC에서 의도한 CD7 양성 세포 표적을 성공적으로 형질도입할 수 있는 능력을 보여준다.
[00479] 실시예 12: CD7/Fc 줄기 바인더를 보유하는 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 렌티바이러스는 최소한의 오프 타겟 형질도입을 보인다.
[00480] Fc 바인더 줄기를 사용한 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 구조를 통한 B-세포의 오프 타겟 형질도입은 여러 B-세포 집단에서 평가되었다. 사용된 VSV-G 단백질은 LDL-R에 VSV-G가 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유한 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고, 본원에 제공된 대로 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23, 서열 번호 25)에 해당한다. B-세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지되었다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨 및 100 유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지되었다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 다양한 B-세포 집단을 감염시켰다. VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 렌티바이러스에 사용된 CD7 바인더 구조는 이전 실시예에서 사용된 것과 동일하다. 배지는 24시간 후에 교체되었고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 5일 차에 유세포 분석으로 분석하여 GFP 형질도입을 확인하였다. 대조군으로, SupT1 세포도 동일한 렌티바이러스 구조로 감염시켰다. 평가된 B-세포 집단 중 어느 것도 상당한 수준의 GFP 발현을 보이지 않았다(도 18). 사용된 렌티바이러스의 최고 농도에서 SVCV-G 유사형 구조를 사용했을 때 GFP 양성 세포의 백분율은 세포주 DB에서 1%만 초과하였다.
[00481] CAR20-T2A-GFP 트랜스진을 전달하는 렌티바이러스 구조도 비슷한 방식으로 평가하였다(도 19). Fc 바인더 줄기를 사용한 VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 여전히 테스트된 모든 세포 집단에서 B-세포의 최소한의 오프 타겟 형질도입을 보였다(도 19). CAR-T2A-GFP 양성 세포의 백분율은 사용된 최고 렌티바이러스 농도에서 세포주 DB에서 1%만 초과하였다. Fc 줄기를 사용한 SVCV-G 유사형 렌티바이러스도 평가된 6개의 세포 집단 중 5개에서 B-세포의 최소한의 오프 타겟 형질도입을 보였다(도 19a). CAR-T2A-GFP 양성 세포의 백분율은 사용된 최고 렌티바이러스 농도에서 세포주 HT에서 1%만 초과하였다.
[00482] 오프 타겟 실험은 서열 번호 98의 서열을 갖는 CD7 바인더를 보유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스를 사용하여 반복되었다(도 20a). 이전 실험과 마찬가지로, VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 B-세포 종양 세포주에서 CD20 CAR의 상당한 형질도입을 나타내지 않았다. 추가 대조군으로서, 서열 번호 98의 서열을 갖는 CD7 바인더를 보유하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 또한 B-세포 악성 종양이 있는 환자의 B 세포를 부적절하게 형질도입하는 능력에 대해 테스트되었다(도 20b). PBMC는 환자 및 건강한 기증자로부터 단리되었고 바이러스 구조로 형질도입되었다. 그런 다음, CD19 양성 B 세포를 유동 선별하여 B 세포를 단리하였고, CAR20 양성 B 세포의 양을 평가하였다. 도 20b에 도시된 바와 같이, 바이러스 구조는 건강한 대조군이나 B-세포 악성 종양이 있는 대조군에서 유래한 CD19 양성 B 세포를 부적절하게 형질도입하지 않았다.
[00483] 이러한 실시예 및 구현예는 i) 본 개시의 Fc 줄기를 사용하는 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 렌티바이러스가 B-세포의 낮은 오프 타겟 형질도입을 갖고, ii) GFP 트랜스진 대신 CAR20 트랜스진을 전달해도 B-세포의 오프 타겟 형질도입이 크게 증가하지 않으며, iii) 서열 번호 98의 CD7 바인더가 B-세포의 상당한 오프 타겟 형질도입을 초래하지 않으며, iv) 본원에 제공된 바이러스 구조가 B-세포 악성 종양이 있는 환자의 기본 B-세포를 부적절하게 형질도입하지 않는다는 것을 보여준다.
[00484] 실시예 13: CD7/유연한 줄기 바인더를 보유한 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 렌티바이러스는 최소한의 오프 타겟 형질도입을 보인다.
[00485] 유연한 바인더 줄기를 사용한 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 렌티바이러스 구조를 통한 B-세포의 오프 타겟 형질도입은 여러 B-세포 집단에서 평가되었다. 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유한 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고, 본원에 제공된 대로 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23, 서열 번호 25)에 해당한다. B-세포는 5% 인간 혈청 및 20 ng/mL의 인간 IL-2가 함유된 X-Vivo10 배지에서 유지되었다. 비인간 영장류 세포는 10% FBS, 1% Pen/Strep, 1 mM 피루브산 나트륨, 100유닛/mL hIL-2가 함유된 RPMI 배지에서 유지되었다. 농축된 렌티바이러스를 사용하여 다양한 B-세포 집단을 감염시켰다. VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 렌티바이러스에 사용된 바인더 구조는 이전 실시예 4 및 6에서 사용된 것과 동일하다. 배지는 24시간 후에 교체되었고, 형질도입된 세포는 형질도입 후 5일 차에 유세포 분석으로 분석하여 GFP 형질도입을 확인하였다. 대조군으로, SupT1 세포도 동일한 렌티바이러스 구조로 감염시켰다. 평가된 B-세포 집단 중 어느 것도 상당한 수준의 GFP 발현을 보이지 않았다(도 21).
[00486] CAR20-T2A-GFP 트랜스진을 전달하는 렌티바이러스 구조도 비슷한 방식으로 평가하였다(도 20). 유연한 바인더 줄기를 사용한 VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 여전히 테스트된 모든 세포 집단에서 B-세포의 최소한의 오프 타겟 형질도입을 보였다(도 22). CAR-T2A-GFP 양성 세포의 백분율은 사용된 렌티바이러스 농도에서 B-세포 집단 중 어느 곳에서도 1%를 초과하지 않았다. 유연한 바인더 줄기를 사용한 SVCV-G 유사형 렌티바이러스도 평가된 6개 세포 집단 중 5개에서 B-세포의 최소한의 오프 타겟 형질도입을 보였다(도 22a). CAR-T2A-GFP 양성 세포의 백분율은 사용된 렌티바이러스 농도에서 Daudi, GA10, HT, Raji, 또는 Ramos 세포주에서 1%를 초과하지 않았다. B-세포 세포주 DB는 사용된 더 높은 렌티바이러스 농도 중 두 가지에서 양성률이 1%를 넘었지만, 여전히 대조군인 SupT1 세포주보다 낮은 수준을 유지하였다.
[00487] 이러한 실시예 및 구현예는 i) 유연한 바인더 줄기를 사용하는 VSV-G* 및 SVCV-G 유사형 렌티바이러스가 B-세포의 오프 타겟 형질도입이 낮고 ii) GFP 트랜스진 대신 CAR20 트랜스진을 전달해도 B-세포의 오프 타겟 형질도입이 크게 증가하지 않는다는 것을 보여준다.
[00488] 실시예 14: CD20-CAR 트랜스진 페이로드를 갖는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 시험관 내에서 CD20 양성 림프종 세포를 사멸시킨다.
[00489] CD20-CAR 트랜스진을 갖는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조가 시험관 내에서 CD20 양성 림프종 세포를 사멸시키는 능력을 평가하였다. VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조는 서열 번호 98의 서열을 갖는 CD7 바인더를 사용하였다. 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유하는 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고, 본원에 제공된 바와 같이 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23)에 해당한다. 인간 PBMC는 CD20-CAR(CAR20) 트랜스진을 갖는 렌티바이러스 구조로 형질도입되었다. CAR20 트랜스진은 서열 번호 99의 서열을 포함하였다.
[00490] CAR20 양성 세포는 먼저 렌티바이러스 구조에 의해 형질도입된 세포 집단을 식별하기 위해 평가되었다. 이전 실시예와 일치하게, CAR20 양성 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 및 KN 세포로 식별되었다. 그런 다음 CD20 양성 림프종 세포를 주어진 효과기 대 표적 비율(E:T)로 CAR20 세포에 첨가하였다. CAR20 양성 PBMC는 평가된 두 CD20 양성 림프종 세포 모두의 용량 의존적 사멸을 생성하였다(도 23b 및 23c)
[00491] 이러한 실시예 및 구현예는 서열 번호 98의 서열을 갖는 CD7 바인더를 사용하고 서열 번호 99의 CAR 트랜스진을 전달하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스가 적절한 표적 세포를 형질도입할 뿐만 아니라, CAR 구조를 발현하고 시험관 내에서 CD20 양성 림프종 세포를 강력하고 용량 의존적으로 사멸시킬 수 있는 PBMC를 생산한다는 것을 보여준다.
[00492] 실시예 15: CD20-CAR 트랜스진 페이로드를 갖는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 시험관 내에서 CD20 양성 림프종 세포를 사멸시킨다.
[00493] CD20-CAR 트랜스진을 갖는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조가 시험관 내에서 CD20 양성 림프종 세포를 사멸시키는 능력을 평가하였다. VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조는 본원에 제공된 대로 CD7 바인더를 사용하였다. 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유한 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고 본원에 제공된 대로 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23)에 해당한다. 인간 PBMC는 CD20-CAR(CAR20) 트랜스진을 운반하는 렌티바이러스 구조로 형질도입되었다. CAR20 트랜스진은 서열 번호 92 또는 서열 번호 93의 항원 결합 도메인으로 구성되었다. 그런 다음 CD20 양성 림프종 세포를 주어진 효과기 대 표적 비율(E:T)로 CAR20 세포에 첨가하였다. CAR20 양성 PBMC는 CD20 양성 림프종 세포의 용량 의존적 사멸을 생성하였다(도 24)
[00494] 이러한 실시예 및 구현예는 본 개시의 CD7 바인더를 사용하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스가 이전 실시예에서 보여준 바와 같이 적절한 표적 세포를 형질도입할 뿐만 아니라 생체 내에서 CD20 양성 림프종 세포를 강력하고 용량 의존적으로 사멸시킨다는 것을 보여준다.
[00495] 실시예 16: CAR 저항성 B-세포 종양 생성 가능성 평가
[00496] 실험은 의도치 않은 B 세포 형질도입으로 인해 CAR-저항성 B 세포 종양이 발생할 위험을 평가하기 위해 수행되었다. 실험 과정은 도 25a에 요약되어 있다. 도시된 바와 같이, 정상 B 세포는 먼저 본원에 제공된 바와 같이 바이러스 구조로 형질도입되어 GFP 트랜스진 또는 CAR20 트랜스진 및 GFP 트랜스진을 보유한 B 세포를 생성하였다. 생성된 B 세포는 그런 다음 주어진 효과기 대 표적 비율(E:T)에서 CAR20 양성 PBMC에 노출되었다. 트랜스진 양성 B 세포에 대한 농축 가능성도 평가되었다. CAR20 양성 PBMC는 이전 실시예에서 설명한 대로 서열 번호 98의 서열을 갖는 CD7 바인더를 사용하고 서열 번호 99의 서열을 갖는 CAR 트랜스진을 전달하는 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조를 사용하여 생성되었다. 결과는 도 25b 및 25c에 설명되어 있다.
[00497] 도 25b에 도시된 바와 같이, CAR20 양성 PBMC는 GFP만 양성인 B 세포를 사멸시키는 것과 유사한 효능으로 CAR20 양성 B 세포를 사멸시킬 수 있었다. 도 25c에 도시된 바와 같이, CAR20 양성 B 세포는 CAR20 양성 PBMC에서 선택적으로 제외되지 않았고, 이는 CAR20 양성 GFP 양성 조건에서 GFP에 대한 농축이 부족하다는 사실에서 입증되었다.
[00498] 본 실시예의 데이터는 본원에 제공된 바이러스 입자의 유리한 위험 프로파일을 더욱 강조한다. 이전 실시예에서 입증된 바와 같이, 본원에 제공된 바이러스 입자는 B-세포의 최소한의 오프 타겟 형질도입을 갖는다. 본 실시예의 데이터는 B-세포가 의도치 않게 형질도입되었더라도 이 형질도입이 B-세포에 대한 저항성을 부여하지 않고, B-세포는 여전히 CAR20 양성 PBMC에 취약하다는 것을 보여준다.
[00499] 실시예 17: VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 마우스의 B-세포를 고갈시킨다.
[00500] VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조가 생체 내 B-세포 집단을 고갈시키는 능력을 평가하였다. VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조는 본원에 제공된 대로 CD7 바인더를 사용하였다(즉, 서열 번호 98). 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유한 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고 본원에 제공된 대로 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23, 서열 번호 25)에 해당한다. 마우스에 GFP 트랜스진 또는 CD20-CAR 트랜스진(서열 번호 99)을 발현하는 렌티바이러스 입자를 주사하였다. 사용된 마우스는 순환하는 인간 T 세포 및 B 세포를 갖는 huCD34 NSG 마우스였다. GFP를 발현하는 렌티바이러스 구조를 받은 마우스는 CD20(도 26a) 또는 CD19(도 26b) B 세포의 손실을 보이지 않았다. CD20-CAR 트랜스진을 받은 마우스는 3주 동안 CD20 양성 B 세포(도 26a) 및 CD19 양성 B 세포(도 26b)가 모두 극적으로 손실된 것으로 나타난 것처럼 극적이고 지속적인 B 세포 손실을 보였다.
[00501] 위에서 설명한 B 세포 고갈 평가는 여러 바이러스 용량을 사용하여 반복되었다(도 27). 또한, 후속 실험에 사용된 huCD34 NSG 마우스는 두 명의 별도 인간 기증자로부터 생성되어 기증자 가변성을 평가할 수 있었다. 도 27a에서 볼 수 있듯이, 두 기증자 세트에 대해 테스트한 모든 바이러스 용량은 실험 기간 동안 극적이고 지속적인 B 세포 손실을 초래하였다. 또한 마우스는 혈액에서 CAR20 양성 세포의 존재 여부를 주기적으로 평가받았는데, 이는 생체 내에서 CAR20+ PBMC가 안정적으로 생성되었음을 나타낸다. 도 27b에서 볼 수 있듯이, 본 실시예의 마우스는 주사 후 약 14일 차부터 혈액에서 검출 가능한 CAR20+ 세포를 보였고, 이는 시험 기간 동안 지속되었다.
[00502] 본 실시예의 데이터는 본원에서 제공된 바이러스 입자가 생체 내에서 CAR20+ 세포를 생성하여 생체 내에서 B 세포를 고갈시키는 능력을 입증한다. 또한, 혈액에서 지속적인 CAR20+ 세포의 검출은 CAR 분자에 대한 면역 반응이 없는 경우 바이러스 입자에 의해 생성된 CAR20+ 세포가 유지되고 활성 상태임을 나타낸다.
[00503] 실시예 18: VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 마우스에서 확립된 종양을 제거한다.
[00504] 생체 내 효능을 더욱 특성화하기 위해, VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조가 종양 형성을 예방하는 능력을 평가하였다. 프로토콜 1일 차에 마우스에 GFP 트랜스진 또는 CD20-CAR 트랜스진(즉, 서열 번호 99)을 발현하는 바이러스 입자를 주사하였다. 9일 차에, 마우스에 Raji 종양 세포를 주입하고 종양 진행을 모니터링하였다. 실험 프로토콜은 도 28a에 나와 있다. 치료를 받지 않거나 GFP를 발현하는 렌티바이러스 구조를 투여받은 마우스는 IVIS 이미징으로 확인한 바와 같이 점진적인 종양 발달과 확산을 보였습니다. 반면, CD20-CAR 트랜스진을 발현하는 렌티바이러스 구조를 투여받은 마우스는 Raji 세포 주입 후 종양 발달을 보이지 않았다(도 28b).
[00505] 바이러스 입자가 생체 내에서 확립된 종양에 영향을 미치는 능력도 평가하였다. 마우스에 프로토콜 0일 차에 Raji 종양 세포를 주입하였다. 프로토콜 5일 차에 인간 PBMC 이식을 통해 마우스를 인간화하였고, 프로토콜 6일 차에 마우스에 바이러스 입자를 주사하지 않았거나(대조군) CD20-CAR 트랜스진을 발현하는 바이러스 입자를 주사하였다. 종양 진행은 프로토콜 30일 차에 모니터링하였다. 실험 프로토콜은 도 29a에 나와 있다. 대조군 및 바이러스 처리 마우스는 IVIS 영상으로 확인한 결과 5일 차(바이러스 투여 전), 7일 차, 8일 차에 비슷한 종양 부하를 보였고, 이는 두 그룹 모두에서 Raji 종양이 확립되었음을 나타낸다. 12일 차에 대조군 마우스는 종양 부하가 계속 증가한 반면, 바이러스 처리 마우스는 종양 부하가 극적으로 감소하였다. 감소된 종양 부하가 실험 기간 내내 지속되었다(도 29b).
[00506] 도 29a에 도시된 것과 동일한 실험적 설정이 다양한 바이러스 용량으로 반복되었다. 도 29c에 도시된 바와 같이, 사용된 두 가지 바이러스 용량 모두 확립된 Raji 종양의 고갈을 초래한다. 또한, 마우스는 시험 기간 내내 혈액에서 CAR20+ 세포의 존재 여부에 대해서도 평가되었다. 도 29d에 도시된 바와 같이, 사용된 바이러스의 가장 높은 용량에서 마우스의 혈액에서 CAR20+ 세포가 검출되었다.
[00507] 이러한 실시예 및 구현예는 본 개시의 VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조가 생체 내에서 B-세포를 적절히 표적으로 하고, 생체 내에서 종양 형성을 예방하고, 생체 내에서 확립된 종양을 제거하고, 그리고 생체 내에서 지속적이고 검출 가능한 CAR20+ 세포를 생성할 수 있음을 보여준다 .
[00508] 실시예 19: VSV-G* 유사형 렌티바이러스는 비인간 영장류의 B-세포를 고갈시킨다.
[00509] VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조가 생체 내 B-세포 집단을 고갈시키는 능력은 비인간 영장류(마카크)에서도 평가되었다. VSV-G* 유사형 렌티바이러스 구조는 본원에 제공된 대로 CD7 바인더를 사용하였다(즉, 서열 번호 98). 사용된 VSV-G 단백질은 VSV-G가 LDL-R에 결합하는 것을 방지하는 돌연변이를 보유한 변이 VSV-G 단백질이었다. 변이 VSV-G는 VSV-G*로 표시되고 본원에 제공된 대로 VSV-G(I182E, T214N, T352A)(예: 서열 번호 23)에 해당한다.
[00510] 첫 번째 코호트에서, 프로토콜 0일 차에 6마리의 수컷 마카크에게 렌티바이러스 입자를 주사하고 CD20+ 세포를 모니터링하였다. 이 실험에 사용된 CD20 CAR 구조는 서열 번호 96에 해당하는 항원 결합 도메인을 갖고 있다. 렌티바이러스 입자를 주사하면 테스트한 6마리의 모든 마카크에서 B-세포가 고갈된다(도 30a-f). PBMC는 다양한 시점에서 단리되었고 성공적인 바이러스 형질도입의 증거가 평가되었다. CAR20 양성 세포는 직접 검출되지 않았지만, 형질도입된 세포는 프로바이러스 DNA 및 알부민 유전자에 특이적인 멀티플렉스 드롭릿 디지털 PCR 검정을 사용하여 검출되었다(도 31). 이러한 결과는 CD20 CAR을 전달하는 렌티바이러스 입자가 생체 내에서 CD7 양성 세포를 성공적으로 형질도입하였고, 그 결과 생성된 CAR20 양성 CD7 양성 세포가 비인간 영장류(non-human primate, NHP)에서 B-세포를 고갈시킬 수 있음을 나타낸다. 예상대로, CAR의 비마카크 서열에 대한 면역 반응(T 세포 및 B 세포를 매개로 함)은 대부분의 NHP에서 결국 B 세포가 반등하는 것과 연관이 있다. B 세포 수의 반등은 증식 마커 Ki67+를 발현하는 B 세포의 빈도 증가와 일치하여, 순환계에서 B 세포의 증가는 전구 세포에 의한 B 세포 보충으로 인한 것임을 시사한다(데이터 미도시). 면역 반응의 증거가 있음에도 불구하고, 렌티바이러스를 투여받은 NHP 중 어느 것에서도 독성이나 기타 안전 문제의 징후가 관찰되지 않았다. 어떤 NHP도 고열, 행동 변화, 장기 기능 장애 징후, 기타 임상적 관찰 또는 신경 독성과 같은 CRS의 임상적 징후를 보이지 않았다.
[00511] 첫 번째 코호트 마카크의 결과는 두 번째 코호트에서 확인되었다(도 32a-f). 두 번째 코호트에서, 네 마리의 수컷 마카크에게 프로토콜 0일 차에 첫 번째 코호트와 동일한 렌티바이러스 구조를 주사하고 CD20+ 세포를 모니터링하였다. 두 마리의 대조군 마카크는 완충액만 투여하였다. 두 마리의 렌티바이러스 처리 동물은 프로토콜 10/11일 차에 부검하여 생물 분포에 대한 데이터를 제공하였다. 나머지 두 마리의 렌티바이러스 처리 동물은 36/37일에 부검하였다. 첫 번째 코호트의 결과와 일관되게, 렌티바이러스 벡터를 투여받은 네 마리의 NHP는 모두 B-세포가 고갈된 반면, 완충액 주사를 받은 두 마리의 동물은 그러한 고갈이 없었다. 첫 번째 코호트와 마찬가지로, 렌티바이러스 벡터 처리 동물의 단리된 PBMC에서 프로바이러스 DNA가 검출되었고(도 33), 이는 렌티바이러스 입자 주사가 표적 세포의 생체 내 형질도입을 성공적으로 유도했음을 보여준다 .
[00512] CAR 서열에 대한 면역 반응을 다루기 위해, 두 번째 CD20 CAR 구조를 세 번째 동물 코호트에서 검사하였다. 세 번째 코호트에 사용된 CD20 CAR 구조는 서열 번호 92에 해당하는 항원 결합 도메인을 갖고 있었고, CAR의 발현은 T-세포 특이적 프로모터의 제어를 받았다. 세 번째 코호트에서, 여섯 마리의 수컷 마카크에게 렌티바이러스 입자를 주사하였고, 두 마리의 수컷 마카크에게 프로토콜 0일 차에 완충액만을 주사하였고, 그들의 CD20+ 세포를 모니터링하였다(도 34a-h). 렌티바이러스 벡터를 투여받은 여섯 마리의 NHP는 모두 B-세포가 고갈된 반면, 완충액 주사를 받은 두 마리의 동물은 그러한 고갈이 없었다. 이전 코호트와 마찬가지로, 렌티바이러스 벡터 처리 동물의 단리된 PBMC에서 프로바이러스 DNA가 검출되었다(도 35). 두 번째 CD20 CAR 구조가 면역 반응을 감소시켰는지 테스트하기 위해, 코호트 2 및 코호트 3의 동물을 대상으로 혈장에서 항-CD20 CAR 항체의 존재 여부 및 CAR 특이적 T 세포 반응의 징후를 평가하였다(도 36a-d; 도 36a 및 b는 코호트 2의 데이터이고, 도 36c 및 d는 코호트 3의 데이터이다). 도 36a 및 도 36c에서 볼 수 있듯이, 두 CD20 CAR 구조 모두 혈장에서 항-CD20 항체를 생성한다. 코호트 2의 4마리 동물 모두 완충액 처리 동물보다 INFγ 및 TNF-α가 증가하여 CAR 특이적 T 세포 반응을 나타내었다(도 36b). 그러나, 코호트 3의 동물은 CAR 특이적 T 세포 반응이 둔화되었는데, 동물 4만이 대조군보다 INF-γ가 증가했고 동물 2만이 TNF-α가 증가했기 때문이다(도 36d). 이러한 결과는 서열 번호 96 또는 서열 번호 92의 항원 결합 도메인을 갖는 CD20 CAR 구조가 모두 NHP의 생체 내에서 B-세포를 고갈시킬 수 있고, 서열 번호 92의 항원 결합 도메인을 갖는 CD20 CAR이 서열 번호 96의 항원 결합 도메인을 갖는 CD20 CAR보다 NHP에서 면역원성이 낮을 수 있음을 나타낸다.
[00513] 흥미롭게도, 코호트 3의 동물 3마리는 사용된 CAR20 서열에 대한 면역 반응을 보이지 않았다. 이들은 동물 1, 동물 3, 및 동물 6이었다. 이 동물들은 혈장에서 항-CD20 CAR 항체를 최소한으로 검출했고 IFN-γ 또는 TNF-α는 검출하지 못하였다(도 36c 및 도 36d). 이 동물들의 CD20 양성 세포 수를 자세히 검사한 결과, 동물 1, 3, 및 6은 시험 기간 동안 더 지속적인 B 세포 고갈 프로파일을 보였다(도 34a-h). 동물 1의 CD20 세포 수 플롯은 도 37에 다시 나와 있다. 도시된 대로, 동물 1은 벡터 투여 후 몇 주 동안 초기 B 세포 고갈을 보였고, 시험 기간 내내 B 세포가 지속적으로 고갈되었다. 이 데이터는 CAR 구조에 대한 면역 반응이 없는 경우, 본원에 제공된 벡터 입자가 NHP에서 B 세포를 지속적으로 감소시킬 수 있음을 보여준다.
[00514] 네 번째 동물 코호트는 위와 유사한 방식으로 테스트되었다. 네 번째 코호트에 사용된 CD20 CAR 구조는 서열 번호 92에 해당하는 항원 결합 도메인을 갖고 있었고, CAR의 발현은 EF1-α 프로모터의 제어를 받았다. 네 번째 코호트에서, 두 마리의 수컷 마카크에게 렌티바이러스 입자를 주사했고, 두 마리의 수컷 마카크에게 프로토콜 0일 차에 완충액만을 주입했고, 그들의 CD20+ 세포를 모니터링하였다(도 38a-d). 이전 코호트와 마찬가지로, 렌티바이러스 벡터 처리 동물은 대조군 동물에서 관찰되지 않은 B-세포의 일시적인 고갈을 보였다. 이전 코호트와 마찬가지로, 렌티바이러스 벡터 처리 동물의 단리된 PBMC에서 프로바이러스 DNA가 검출되었다(도 39). 이 데이터는 렌티바이러스 입자를 주사하면 표적 세포의 생체 내 형질도입 및 그에 따른 B-세포의 고갈이 성공적으로 이루어진다는 것을 보여준다. 이러한 데이터를 종합해 보면, 본 출원의 바이러스 입자는 생체 내에서 원하는 표적 세포를 성공적으로 표적화할 수 있고, 본 출원의 CD20 CAR 분자를 생체 내에서 표적 세포에 성공적으로 형질도입하고, 그리고 본 출원의 CD20 CAR 분자를 포함하는 생체 내에서 생성된 표적 세포는 의도한 대로 B-세포를 성공적으로 표적화하고 고갈시킬 수 있음을 알 수 있다.
[00515] 본 명세서에는 특허, 특허 출원, 및 간행물에 대한 수많은 인용문헌이 포함되어 있다. 각각은 모든 목적을 위해 참조로 본원에 통합된다.
[00516] 본 명세서에는 본원 및 아래에 제공된 것과 같은 다양한 서열도 참조한다.
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MLSYLIFALVVSPILGKIEIVFPQHTTGDWKRVPHEYNYCPTSADKNSHGTQTGIPVELTMPKGLTTHQVDGFMCHSALWMTTCDFRWYGPKYITHSIHNEEPTDYQCLEAIKAYKDGVSFNPGFPPQSCGYGTVTDAEAHIVTVTPHSVKVDEYTGEWIDPHFIGGRCKGQICETVHNSTKWFTSSDGESVCSQLFTLVGGTFFSDSEEITSMGLPETGIRSNYFPYVSTEGICKMPFCRKPGYKLKNDLWFQITDPDLDKTVRDLPHIKDCDLSSSIVTPGEHATDISLISDVERILDYALCQNTWSKIEAGEPITPVDLSYLGPKNPGAGPVFTIINGSLHYFMSKYLRVELESPVIPRMEGKVAGTRIVRQLWDQWFPFGEVEIGPNGVLKTKQGYKFPLHIIGTGEVDNDIKMERIVKHWEHPHIEAAQTFLKKDDTEEVLYYGDTGVSKNPVELVEGWFSGWRSSIMGVLAVIIGFVILIFLIRLIGVLSSLFRQKRRPIYKSDVEMAHFR(서열 번호 10)
VSV-G 뉴저지 엑토도메인 WT:
KIEIVFPQHTTGDWKRVPHEYNYCPTSADKNSHGTQTGIPVELTMPKGLTTHQVDGFMCHSALWMTTCDFRWYGPKYITHSIHNEEPTDYQCLEAIKAYKDGVSFNPGFPPQSCGYGTVTDAEAHIVTVTPHSVKVDEYTGEWIDPHFIGGRCKGQICETVHNSTKWFTSSDGESVCSQLFTLVGGTFFSDSEEITSMGLPETGIRSNYFPYVSTEGICKMPFCRKPGYKLKNDLWFQITDPDLDKTVRDLPHIKDCDLSSSIVTPGEHATDISLISDVERILDYALCQNTWSKIEAGEPITPVDLSYLGPKNPGAGPVFTIINGSLHYFMSKYLRVELESPVIPRMEGKVAGTRIVRQLWDQWFPFGEVEIGPNGVLKTKQGYKFPLHIIGTGEVDNDIKMERIVKHWEHPHIEAAQTFLKKDDTEEVLYYGDTGVSKNPVELVEGWFSGWRSSIMGVLAVIIGFVILIFLIRLIGVLSSLFRQKRRPIYKSDVEMAHFR(서열 번호 11)
VSV-G 마라바 전체 길이 WT:
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VSV-G 마라바 엑토도메인 WT:
KFTIVFPHHQKGNWKNVPSTYHYCPSSSDQNWHNDLTGVSLHVKIPKSHKAIQADGWMCHAAKWVTTCDFRWYGPKYITHSIHSMSPTLEQCKTSIEQTKQGVWINPGFPPQSCGYATVTDAEVVVVQATPHHVLVDEYTGEWIDSQLVGGKCSKEVCQTVHNSTVWHADYKITGLCESNLASVDITFFSEDGQKTSLGKPNTGFRSNHFAYESGEKACRMQYCTQWGIRLPSGVWFELVDKDLFQAAKLPECPRGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAKLPVSPVDLSYLAPKNPGSGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDISNPIIPHMVGTMSGTTTERELWNDWYPYEDVEIGPNGVLKTPTGFKFPLYMIGHGMLDSDLHKSSQAQVFEHPHAKDAASQLPDDETLFFGDTGLSKNPVELVEGWFSSWKSTLASFFLIIGLGVALIFIIRIIVAIRYKYKGRKTQKIYNDVEMSRLGNK(서열 번호 13)
VSV-G 카라하스 전체 길이 WT:
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VSV-G 카라하스 엑토도메인 WT:
KITISFPQSLKGDWRPVPKGYNYCPTSADKNLHGDLIDIGLRLRAPKSFKGISADGWMCHAARWITTCDFRWYGPKYITHSIHSFRPSNDQCKEAIRLTNEGNWINPGFPPQSCGYASVTDSESVVVTVTKHQVLVDEYSGSWIDSQFPGGSCTSPICDTVHNSTLWHADHTLDSICDQEFVAMDAVLFTESGKFEEFGKPNSGIRSNYFPYESLKDVCQMDFCKRKGFKLPSGVWFEIEDAEKSHKAQVELKIKRCPHGAVISAPNQNAADINLIMDVERILDYSLCQATWSKIQNKEALTPIDISYLGPKNPGPGPAFTIINGTLHYFNTRYIRVDIAGPVTKEITGFVSGTSTSRVLWDQWFPYGENSIGPNGLLKTASGYKYPLFMVGTGVLDADIHKLGEATVIEHPHAKEAQKVVDDSEVIFFGDTGVSKNPVEVVEGWFSGWRSSLMSIFGIILLIVCLVLIVRILIALKYCCVRHKKRTIYKEDLEMGRIPRRA(서열 번호 15)
VSV-G 알라고아 전체 길이 WT:
MTPAFILCMLLAGSSWAKFTIVFPQSQKGDWKDVPPNYRYCPSSADQNWHGDLLGVNIRAKMPKVHKAIKADGWMCHAAKWVTTCDYRWYGPQYITHSIHSFIPTKAQCEESIKQTKEGVWINPGFPPKNCGYASVSDAESIIVQATAHSVMIDEYSGDWLDSQFPTGRCTGSTCETIHNSTLWYADYQVTGLCDSALVSTEVTFYSEDGLMTSIGRQNTGYRSNYFPYEKGAAACRMKYCTHEGIRLPSGVWFEMVDKELLESVQMPECPAGLTISAPTQTSVDVSLILDVERMLDYSLCQETWSKVHSGLPISPVDLGYIAPKNPGAGPAFTIVNGTLKYFDTRYLRIDIEGPVLKKMTGKVSGTPTKRELWTEWFPYDDVEIGPNGVLKTPEGYKFPLYMIGHGLLDSDLQKTSQAEVFHHPQIAEAVQKLPDDETLFFGDTGISKNPVEVIEGWFSNWRSSVMAIVFAILLLVITVLMVRLCVAFRHFCCQKRHKIYNDLEMNQLRR(서열 번호 16)
VSV-G 알라고아 엑토도메인 WT:
KFTIVFPQSQKGDWKDVPPNYRYCPSSADQNWHGDLLGVNIRAKMPKVHKAIKADGWMCHAAKWVTTCDYRWYGPQYITHSIHSFIPTKAQCEESIKQTKEGVWINPGFPPKNCGYASVSDAESIIVQATAHSVMIDEYSGDWLDSQFPTGRCTGSTCETIHNSTLWYADYQVTGLCDSALVSTEVTFYSEDGLMTSIGRQNTGYRSNYFPYEKGAAACRMKYCTHEGIRLPSGVWFEMVDKELLESVQMPECPAGLTISAPTQTSVDVSLILDVERMLDYSLCQETWSKVHSGLPISPVDLGYIAPKNPGAGPAFTIVNGTLKYFDTRYLRIDIEGPVLKKMTGKVSGTPTKRELWTEWFPYDDVEIGPNGVLKTPEGYKFPLYMIGHGLLDSDLQKTSQAEVFHHPQIAEAVQKLPDDETLFFGDTGISKNPVEVIEGWFSNWRSSVMAIVFAILLLVITVLMVRLCVAFRHFCCQKRHKIYNDLEMNQLRR(서열 번호 17)
VSV-G 코칼 전체 길이 WT:
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VSV-G 코칼 엑토도메인 WT:
KFSIVFPQSQKGNWKNVPSSYHYCPSSSDQNWHNDLLGITMKVKMPKTHKAIQADGWMCHAAKWITTCDFRWYGPKYITHSIHSIQPTSEQCKESIKQTKQGTWMSPGFPPQNCGYATVTDSVAVVVQATPHHVLVDEYTGEWIDSQFPNGKCETEECETVHNSTVWYSDYKVTGLCDATLVDTEITFFSEDGKKESIGKPNTGYRSNYFAYEKGDKVCKMNYCKHAGVRLPSGVWFEFVDQDVYAAAKLPECPVGATISAPTQTSVDVSLILDVERILDYSLCQETWSKIRSKQPVSPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRIDIDNPIISKMVGKISGSQTERELWTEWFPYEGVEIGPNGILKTPTGYKFPLFMIGHGMLDSDLHKTSQAEVFEHPHLAEAPKQLPEEETLFFGDTGISKNPVELIEGWFSSWKSTVVTFFFAIGVFILLYVVARIVIAVRYRYQGSNNKRIYNDIEMSRFRK(서열 번호 19)
VSV-G 모레톤 전체 길이 WT:
MLVLYLLLSLLALGAQCKFTIVFPHNQKGNWKNVPANYQYCPSSSDLNWHNGLIGTSLQVKMPKSHKAIQADGWMCHAAKWVTTCDFRWYGPKYVTHSIKSMIPTVDQCKESIAQTKQGTWLNPGFPPQSCGYASVTDAEAVIVKATPHQVLVDEYTGEWVDSQFPTGKCNKDICPTVHNSTTWHSDYKVTGLCDANLISMDITFFSEDGKLTSLGKEGTGFRSNYFAYENGDKACRMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDIYNDAKFPDCPEGSSIAAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAHLPISPVDLSYLSPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAGPIIPQMRGVISGTTTERELWTDWYPYEDVEIGPNGVLKTATGYKFPLYMIGHGMLDSDLHISSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDETLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSGWKSTIASFFFIIGLVIGLYLVLRIGIALCIKCRVQEKRPKIYTDVEMNRLDR(서열 번호 20)
VSV-G 모레톤 엑토도메인 WT:
KFTIVFPHNQKGNWKNVPANYQYCPSSSDLNWHNGLIGTSLQVKMPKSHKAIQADGWMCHAAKWVTTCDFRWYGPKYVTHSIKSMIPTVDQCKESIAQTKQGTWLNPGFPPQSCGYASVTDAEAVIVKATPHQVLVDEYTGEWVDSQFPTGKCNKDICPTVHNSTTWHSDYKVTGLCDANLISMDITFFSEDGKLTSLGKEGTGFRSNYFAYENGDKACRMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDIYNDAKFPDCPEGSSIAAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAHLPISPVDLSYLSPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAGPIIPQMRGVISGTTTERELWTDWYPYEDVEIGPNGVLKTATGYKFPLYMIGHGMLDSDLHISSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDETLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSGWKSTIASFFFIIGLVIGLYLVLRIGIALCIKCRVQEKRPKIYTDVEMNRLDR(서열 번호 21)
Fc IgG1(접근 번호 P01857)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 번호 26)
Fc IgG2(접근 번호 AAN76043)
STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 번호 27)
Fc IgG4(접근 번호 AAB59394)
STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(서열 번호 28)
서열목록 전자파일 첨부

Claims (50)

  1. 이종 바이러스 당단백질 및 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서, 상기 표적화 모이어티가 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 상기 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고, 상기 줄기 부분 S1이 변이 Fc 단백질을 포함하고, 상기 변이 Fc 단백질이 막관통 도메인 및 효과기 돌연변이를 포함하고, 상기 효과기 돌연변이가 Fc 단백질과 Fc 상호작용 단백질 사이의 상호작용을 억제하고, 선택적으로 Fc 상호작용 단백질이 FcηΣ, Γ1ρ, ΖγΣβ, 중 FcRn 중 하나이고, 그리고 상기 S1 줄기 부분이 막관통 도메인을 통해 바이러스 입자의 표면에 부착되는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  2. 제1항에 있어서, 상기 변이 Fc 단백질이 서열 번호 26, 서열 번호 27, 또는 서열 번호 28의 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  3. 제1항에 있어서, 상기 변이 Fc 단백질이 L234A, L235A, N297A, P329G, I253A, H310A, 및 H435A로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 변이 IgG1 Fc 단백질인 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  4. 제3항에 있어서, 상기 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 103과 적어도 70%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 서열 번호 103의 L19A, L20A, N82A, P114G, I38A, H95A, 및/또는 H220A에 해당하는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  5. 제4항에 있어서, 상기 변이 IgG1 Fc 단백질이 서열 번호 104와 적어도 80%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 104와 적어도 98%의 동일성, 또는 서열 번호 104와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  6. 제1항에 있어서, 상기 화학식 T-S1을 갖는 표적화 모이어티가 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 갖는 줄기 부분 S1을 포함하고, 여기서:
    L1이 링커이거나 존재하지 않고,
    Fc가 변이 Fc 단백질이고,
    L2가 링커이거나 존재하지 않고, 그리고
    X1이 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고,
    상기 화학식 T-S1을 갖는 표적화 모이어티가 T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 갖는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  7. 제6항에 있어서, 상기 L1 및 L2가 각각 독립적으로 (GGGGA)n(서열 번호 54), (GGGGS)n(서열 번호 55), (EAAAK)n(서열 번호 73), A(EAAAK)nA(서열 번호 74), (XP)n(서열 번호 75) 중 하나를 포함하는 폴리펩티드 링커이고, 상기 X가 Ala, Lys, 또는 Glu, GSAGSAAGSGEF(서열 번호 56), KESGSVSSEQLAQFRSLD(서열 번호 57), EGKSSGSGSESKST(서열 번호 58), AEAAAKEAAAKA(서열 번호 76), 또는 이들의 조합이고, 상기 각각의 n이 독립적으로 1-5인 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  8. 제6항에 있어서, 상기 L1이 (GGGGA)n(서열 번호 54) 또는 (GGGGS)n(서열 번호 55)이고, 그리고
    상기 각각의 n이 독립적으로 1-5인 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  9. 제6항에 있어서, 상기 X1이 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기서:
    ECD가 세포 표면 단백질의 세포 외 도메인 또는 그 단편이거나 존재하지 않고,
    TM이 막관통 단백질의 막관통 도메인이고, 그리고
    ICD가 표적화 모이어티를 바이러스 입자의 외피에 혼입하는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이거나 존재하지 않고,
    상기 T-L1-Fc-L2-X1의 화학식을 갖는 표적화 모이어티가 T-L1-Fc-L2-ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  10. 제9항에 있어서, 상기 ECD가 서열 번호 59 또는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  11. 제9항에 있어서, 상기 TM이 서열 번호 61 또는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  12. 제9항에 있어서, 상기 ICD가 Env 혼입 모티프를 포함하고, 상기 Env 혼입 모티프가 서열 번호 63 또는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  13. 제1항에 있어서, 상기 표적 결합 도메인(T)이 면역 세포에 결합하고, 상기 면역 세포가 T 세포, B 세포; NK 세포, 수지상 세포, 호중구, 대식세포, 암 세포; 또는 예를 들어, CD3+ T 세포; CD4+ T 세포; CD7+ T 세포, CD8+ T 세포; CD19+ B 세포; CD19+ 암 세포; CD20+ B 세포; CD20+ 암 세포, CD30+ 폐 상피 세포; CD34+ 조혈 줄기 세포; CD105+ 내피 세포; CD105+ 조혈 줄기 세포; CD117+ 조혈 줄기 세포; CD133+ 암 세포; EpCAM+ 암 세포; GluA2+ 뉴런; GluA4+ 뉴런; 조혈 줄기 세포; 간세포; Her2/Neu+ 암 세포; NKG2D+ 자연 살해 세포; SLC1A3+ 성상세포; SLC7A10+ 지방세포 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  14. 제1항에 있어서, 상기 표적 결합 도메인(T)이 CD7, CD8, cKit(CD117), CD4, CD3, CD5, CD6, CD2, TCR 알파, TCR 베타, TCR 감마, TCR 델타, CD10, CD34, CD110, CD33, CD14, CD68, CCR7, CD62L, CD25, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, 또는 CXCR3, 급성 백혈병 또는 림프종에는 발현되지만 조혈 전구 세포에는 발현되지 않는 글리코실화된 CD43 에피토프; 비조혈 암에는 발현되는 글리코실화된 CD43 에피토프; 키나제 앵커 단백질 4(A kinase anchor protein 4, AKAP-4); 아드레노셉터 베타 3(Adrenoceptor beta 3, ADRB3); AFP; 이형성 림프종 키나제(Anaplastic lymphoma kinase, ALK), 안드로겐 수용체; 안지오포이에틴-결합 세포 표면 수용체 2(Tie 2); 데스모글레인 1에 대한 자가 항체(Dsgl); 데스모글레인 3에 대한 자가 항체(Dsg3); B7H3(CD276); 비오틴; 골수 기질 세포 항원 2(Bone marrow stromal cell antigen 2, BST2); BST1/CD157; 암/고환 항원 1(NY-ESO-1); 암/고환 항원 2(LAGE-la); 탄산탈수효소 IX(CA1X); 암태아 항원(Carcinoembryonic antigen, CEA); CCCTC-결합 인자(아연 손가락 단백질)-유사(BORIS 또는 lmprinted Sites 조절자의 형제(Brother of the Regulator of lmprinted Sites)); CCR4; CD5; CD19; CD20; CD22; CD24; CD30; CD32(FCGR2A); CD33; CD34; CD38; CD44v6; CD72; CD79a; CD79b; CD97; CD99; CD123; CD171; CD179a; CD179b-IGLll; CD200R; CD276/B7H3; CD300 분자-유사 패밀리 구성원 f(CD300LF); CDH1-CD324; CDH6; CDH17; CDH19; X 염색체 오픈 판독 프레임 61(Chromosome X open reading frame 61, CXORF61); 클라우딘 6(CLDN6); 클라우딘18.2(CLD18A2 또는 CLDN18A.2); CMV pp65; C-MYC 에피토프 태그; 크립토; CS1(CD2 하위 집합 1 또는 CRACC 또는 SLAMF7 또는 CD319 또는 19A24라고도 함); CSF2RA(GM-CSFR-알파); C형 렉틴 도메인 패밀리 12 구성원 A(C-type lectin domain family 12 member A, CLEC12A); C형 렉틴-유사 분자-1(CLL-1 또는 CLECL1); 시클린 Bl; 시토크롬 P450 IB 1(CYP1B 1); DLL3; EBV-EBNA3c; EGF-bke 모듈-함유 뮤신-유사 호르몬 수용체-유사 2(EGF-bke module- containing mucin-like hormone receptor-like 2, EMR2); 연장 인자 2 돌연변이(Elongation factor 2 mutated, ELF2M); 에프린 B2; 에프린 A형 수용체 2(EphA2); 상피 성장 인자 수용체(EGFR); 상피 성장 인자 수용체 변이 III(EGFRviii); 상피 세포 접착 분자(EPCAM); ERG; 염색체 12p에 위치한 ETS 전좌-변이 유전자 6(ETV6-AML); IgA 수용체의 Fc 단편(FCAR 또는 CD89); Fc 수용체-유사 5(FCRL5); 섬유아세포 활성화 단백질 알파(FAP); FITC; Fms 유사 티로신 키나제 3(FLT3); 엽산 수용체 알파(Fra 또는 FR1); 엽산 수용체 베타(FRb); 난포 자극 호르몬 수용체(FSHR); Fos-관련 항원 1; 푸코실-GM1; G 단백질 결합 수용체 클래스 C 그룹 5 구성원 D(GPRC5D); G 단백질-결합 수용체 20(GPR20); GAD; 갱글리오시드 G2(GD2); 갱글리오시드 GD3(aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(l-4 )bDGlcp(l-l)Cer); 갱글리오시드 GM3(aNeu5Ac(2-3)bDClalp(l- 4)bDGlcp(l-l)Cer); GD3; GFRalpha4; 당단백질 100(gplOO); 글리피칸-3(GPC3); 생식선 자극 호르몬 수용체(CGHR 또는 GR); GpA33; GpNMB; GPRC5D; 구아닐릴 고리화효소 C(GCC); 열충격 단백질 70-2 돌연변이(mut hsp70-2); A형 간염 바이러스 세포 수용체 1(HAVCR1); globoH 글리코세라미드(GloboH)의 육당류 부분; 고분자량-흑색종 연관 항원(HMWMAA); HIV1 외피 당단백질; HLA; HLA-DOA; HLA-A; HLA-A2; HLA-B; HLA-C; HLA-DM; HLA-DOB; HLA-DP; HLA-DQ; HLA-DR; HLA-G; HTLVl-Tax; 인간 유두종 바이러스 E6(HPV E6); 인간 유두종 바이러스 E7(HPV E7); 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT); IgE; IL13Ra2; Ill lRa; 면역글로불린 람다-유사 폴리펩티드 1(IGLL1); 인플루엔자 A 헤마글루티닌(HA); 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체(IGF-I 수용체); 인터루킨 11 수용체 알파(IL-llRa); 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL-13Ra2 또는 CD213A2); 장내 카르복실 에스테라제; KIT(CD117); KSHV K8.1; KSHV-gH; LAMP1; 레구마인; 백혈구 면역글로불린-유사 수용체 서브패밀리 A 구성원 2(LILRA2); 백혈구-연관 면역글로불린-유사 수용체 1(LAIR1); 황체형성호르몬 수용체(LHR); 루이스(Y) 항원; 류스 Ag; Livl; 로커스 K 9(LY6K); 저전도성 염화물 채널; 림프구 항원 6 복합체; 림프구 항원 75(LY75); 림프구-특이적 단백질 티로신 키나제(LCK); 유선 분화 항원(NY-BR-1); T 세포 1에 의해 인식되는 흑색종 항원(MelanA 또는 MARTI); 흑색종-연관 항원 1(MAGE-A1); 흑색종 암 고환 항원-1(MAD-CT-1); 흑색종 암 고환 항원-2(MAD-CT-2); 흑색종 세포 사멸 억제제(ML-IAP); 메조텔린; MPL; 뮤신 1 세포 표면 연관(MUC1); N-아세틸 글루코사미닐-트랜스퍼라제 V(NA17); 넥틴-4; 신경 세포 접착 분자(NCAM); NKG2D; NYBR1; O-아세틸-GD2 갱글리오시드(OacGD2); 후각 수용체 51E2(OR51E2); 중단점 클러스터 영역(BCR) 및 Abelson 쥐 백혈병 바이러스 종양 유전자 동족체 1(Abl)(bcr-abl)로 구성된 종양 유전자 융합 단백질; P53 돌연변이; 쌍을 이룬 상자 단백질 Pax-3(PAX3); 쌍을 이룬 상자 단백질 Pax-5(PAX5); 파넥신 3(PANX3); PDL1; P-글리코단백질; 태반-특이 1(PLAC1); 혈소판-유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFR-베타); 폴리시알산; 프로아크로신 결합 단백질 sp32(OY-TES1); 프로스타제; 전립선 암종 종양 항원-1(PCT A-1 또는 갈렉틴 8); 전립선 줄기 세포 항원(PSCA); 전립선-특이 막 항원(PSMA); 전립선 산성 인산가수분해효소(PAP); 프로스타인; 프로테아제 세린 21(테스티신 또는 PRSS21); 프로테아솜(프로솜 매크로페인) 서브유닛 베타 유형 9(LMP2); PTK7; Ras G12V; Ras 동족체 패밀리 구성원 C(RhoC); 래트 육종(Ras) 돌연변이; 고급 당 양이온 최종산물 수용체(RAGE-1); 수용체 티로신 키나제-유사 고아 수용체 1(ROR1); 수용체 티로신-단백질 키나제 ERBB2 또는 Her-22/neu; 신장 유비쿼터스 1(RU1); 신장 유비쿼터스 2(RU2); 육종 전좌 중단점; 세린 2(TMPRSS2) ETS 융합 유전자; 시알릴 루이스 접착 분자(sLe); SLAMF4; SLAMF6; Slea(CA19.9 또는 시알릴 루이스 항원); 정자 단백질 17(SPA17); T 세포 3에 의해 인식되는 편평세포 암 항원(SART3); 단계-특이적 배아 항원-4(SSEA-4); STEAP1; Survivin; 활막 육종 X 중단점 2(SSX2); TCR 감마 대체 판독 프레임 단백질(TARP); TCR-베타1 사슬; TCR-베타2 사슬; TCR-델타 사슬; TCR-감마 사슬; TCR감마-델타; 텔로머라제; TGF베타R2; TNT 항체에 의해 인식되는 항원; 갑상선 자극 호르몬 수용체(TSHR); Timl-/HVCR1; 조직 인자 1(TF1); Tn ag; Tn 항원((Tn Ag) 또는 (GalNAca-Ser/Thr)); TNF 수용체 패밀리 구성원 B 세포 성숙(BCMA); 트랜스글루타미나제 5(TGS5); 막관통 프로테아제; TROP2; 종양 내피 마커 1(TEM1/CD248); 종양 내피 마커 7-관련(TEM7R); 종양 단백질 p53(p53); 종양-연관 당단백질 72(TAG72); 티로시나제; 티로시나제-관련 단백질 2(TRP-2); 유로플라킨 2(UPK2); 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2); V-myc 조류 골수종증 바이러스 종양 유전자 신경모세포종 유래 동족체(MYCN); 윌름스 종양 단백질(WT1); 또는 X 항원 패밀리 구성원 1A(XAGE1)에 결합하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  15. 제14항에 있어서, 상기 표적 결합 도메인(T)이 CD7에 결합하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  16. 제15항에 있어서, 상기 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 36과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 37과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하고, 상기 폴리펩티드가 서열 번호 30에 기재된 HCDR1, 서열 번호 31에 기재된 HCDR2, 서열 번호 32에 기재된 HCDR3, 서열 번호 33에 기재된 LCDR1, 서열 번호 34에 기재된 LCDR2, 및 서열 번호 35에 기재된 LCDR3의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  17. 제16항에 있어서, 상기 중쇄가 서열 번호 36과 적어도 90%의 서열 동일성, 적어도 95%의 동일성, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역을 포함하거나 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 경쇄가 서열 번호 37과 적어도 90%의 서열 동일성, 적어도 95%의 동일성, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역을 포함하거나 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  18. 제15항에 있어서, 상기 CD7에 결합하는 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 38과 적어도 90%의 서열 동일성, 서열 번호 38과 적어도 95%의 서열 동일성, 서열 번호 38과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 38에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  19. 제15항에 있어서, 상기 CD7에 결합하는 표적 결합 도메인(T)이 서열 번호 39와 적어도 90%의 서열 동일성, 서열 번호 39와 적어도 95%의 서열 동일성, 서열 번호 39와 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 39에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  20. 제1항에 있어서, 상기 이종 바이러스 당단백질이 VCV-G 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  21. 제20항에 있어서, 상기 VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2와 적어도 70%의 동일성을 갖고 서열 번호 2와 비교하여 위치 182에서 돌연변이를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  22. 제20항에 있어서, 상기 VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 2와 비교하여 I182E 또는 I182D 돌연변이를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  23. 제20항에 있어서, 상기 VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 4의 서열과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  24. 제20항에 있어서, 상기 VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 5의 서열과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  25. 제21항에 있어서, 상기 VSV-G 단백질이 서열 번호 2의 위치 214 및/또는 위치 352에서의 돌연변이를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  26. 제25항에 있어서, 상기 위치 182의 돌연변이가 I182D 또는 I182E이고, 위치 214의 돌연변이가 T214N이고, 그리고 위치 352의 돌연변이가 T352A인 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  27. 제26항에 있어서, 상기 VSV-G 폴리펩티드가 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24 또는 서열 번호 25의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  28. 제1항에 있어서, 상기 바이러스 입자가 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  29. 제28항에 있어서, 상기 관심 이종 분자가 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, "CAR")인 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  30. 제29항에 있어서, 상기 CAR이 항체 또는 그 단편을 포함하는 항원 결합 도메인을 포함하고, 상기 항체 또는 그 단편이 항체, scFv 항체, 항원 결합 도메인, 안키린 반복, VHH 도메인 항체, 나노바디, 단일 도메인 항체, 또는 FN3 항체인 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  31. 제30항에 있어서, 상기 CAR의 항원 결합 도메인이 CD20에 결합하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  32. 제31항에 있어서, 상기 CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자: 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성, 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역, 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성, 또는 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역, 또는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
  33. 제31항에 있어서, 상기 CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 서열 번호 92와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 92와 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 92와 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 92에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  34. 제31항에 있어서, 상기 CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 서열 번호 93과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 93과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 93과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 93에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  35. 제31항에 있어서, 상기 CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 다음을 포함하는 경쇄 및 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자: 서열 번호 94의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 94의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성, 또는 서열 번호 94의 아미노산 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄의 중쇄 가변 영역, 또는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄의 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성, 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄의 경쇄 가변 영역, 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄의 경쇄 가변 영역.
  36. 제35항에 있어서, 상기 CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 서열 번호 96과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 96과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 96과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 96에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  37. 제35항에 있어서, 상기 CD20에 결합하는 항원 결합 도메인이 서열 번호 97과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 97과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 서열, 서열 번호 97과 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 서열 번호 97에 기재된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자
  38. 제29항에 있어서, 상기 CAR이 힌지 도메인, 막관통 도메인, 공동 자극 도메인, 및 신호 전달 도메인을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  39. 제31항에 있어서, 상기 CAR이 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  40. 세포를 감염시키는 방법으로서, 상기 방법이 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 바이러스 입자와 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  41. 대상에서 세포를 감염시키는 방법으로서, 상기 방법이 대상에게 제1항의 바이러스 입자를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  42. 관심 이종 분자를 세포에 전달하는 방법으로서, 상기 방법이 세포를 제1항의 바이러스 입자와 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 바이러스 입자가 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  43. 대상에서 세포에 관심 이종 분자를 전달하는 방법으로서, 상기 방법이 대상에게 제1항의 바이러스 입자를 투여하는 단계를 포함하고, 상기 바이러스 입자가 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 면역 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  45. 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 T 세포, B 세포; NK 세포, 수지상 세포, 호중구, 대식세포, 암 세포이거나; 또는 예를 들어 CD3+ T 세포; CD4+ T 세포; CD7+ T 세포, CD8+ T 세포; CD19+ B 세포; CD19+ 암 세포; CD20+ B 세포; CD20+ 암 세포, CD30+ 폐 상피 세포; CD34+ 조혈 줄기 세포; CD105+ 내피 세포; CD105+ 조혈 줄기 세포; CD117+ 조혈 줄기 세포; CD133+ 암 세포; EpCAM+ 암 세포; GluA2+ 뉴런; GluA4+ 뉴런; 조혈 줄기 세포; 간세포; Her2/Neu+ 암 세포; NKG2D+ 자연 살해 세포; SLC1A3+ 성상세포; SLC7A10+ 지방세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  46. 대상에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 대상에게 제1항의 바이러스 입자를 투여하는 단계를 포함하고, 상기 바이러스 입자가 질환 또는 장애를 치료하기 위한 관심 이종 분자를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 암(예를 들어, T 세포 또는 B 세포 장애 또는 본원에 설명한 다른 유형의 암), 면역 장애, 자가-면역 장애, 대사 장애 등인 것을 특징으로 하는 방법.
  48. 이종 바이러스 당단백질 및 화학식 T-S1을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서,
    상기 T가 표적 결합 도메인이고 S1이 줄기 부분이고,
    상기 이종 바이러스 당단백질이 서열 번호 23 또는 서열 번호 25의 서열을 포함하고,
    상기 표적 결합 도메인이 서열 번호 39의 서열을 포함하고,
    상기 줄기 부분 S1이 L1-Fc-L2-X1의 화학식을 포함하고, 여기서:
    L1이 서열 번호 55의 서열을 포함하는 링커이고,
    Fc가 서열 번호 104의 서열을 포함하는 변이 Fc 단백질이고,
    L2가 링커이고 존재하지 않고,
    X1이 ECD-TM-ICD의 화학식을 갖는 막관통 도메인을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서:
    ECD가 서열 번호 60의 서열을 갖는 세포 외 도메인이고,
    TM이 서열 번호 62의 서열을 갖는 막관통 도메인이고, 그리고
    ICD가 표적화 모이어티가 바이러스 입자의 외피에 혼입되는 것을 용이하게 하는 세포 내 도메인 또는 단백질이고, 상기 ICD가 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 env 혼입 모티프를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  49. 이종 바이러스 당단백질 및 표적화 모이어티를 포함하는 바이러스 입자로서, 여기서;
    상기 이종 바이러스 당단백질이 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 95%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 23 또는 서열 번호 25와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 그리고
    상기 표적화 모이어티가 서열 번호 98과 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 98과 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 98과 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서, 상기 바이러스 입자가 CAR을 암호화하는 핵산 분자를 더 포함하고, 상기 CAR이 서열 번호 99와 적어도 85%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 90%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 95%의 동일성, 서열 번호 99와 적어도 99%의 동일성, 또는 서열 번호 99와 적어도 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 바이러스 입자.
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