KR20250069578A - 신규분해약물 접합체 - Google Patents

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KR20250069578A
KR20250069578A KR1020257010924A KR20257010924A KR20250069578A KR 20250069578 A KR20250069578 A KR 20250069578A KR 1020257010924 A KR1020257010924 A KR 1020257010924A KR 20257010924 A KR20257010924 A KR 20257010924A KR 20250069578 A KR20250069578 A KR 20250069578A
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amino acid
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네이선 피쉬킨
민수 김
쿨루드 타크루리
제임스 팔라치노
동기 최
다영 김
한결 정
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오름테라퓨틱 주식회사
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Abstract

본 개시내용은 CD56에 특이적으로 결합하는 결합 모이어티에 접합된 신규분해약물을 제공한다. 신규분해약물 접합체를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 화합물 및 조성물은 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태, 예를 들어 암을 치료하는데 유용하다.

Description

신규분해약물 접합체
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2022년 10월 6일자로 출원된 미국 가출원 번호 63/378,663의 우선권 혜택을 주장하며, 이 출원은 본원에 참조로 이 전체가 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록의 참조
본 출원과 함께 출원된, 전자적으로 제출된 서열 목록(이름 4547_026PC01_Seqlisting_ST26; 크기: 25,060 바이트; 및 작성일: 2023년 10월 4일)의 내용은 이 전체가 참조로 본원에 포함된다.
분야
본 개시내용은 신규분해약물(neoDegrader)이 CD56에 특이적으로 결합하는 결합 모이어티에 접합되는 신규분해약물 접합체를 제공한다. 접합체를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 접합체 및 조성물은 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는데 유용하다.
단백질 분해는 면역조절 이미드 약물의 유효성에 의해 치료 전략으로서 검증되었다. 이들 화합물은 세레블론(CRBN)에 결합하고 CRL4CRBNE3 유비퀴틴 리가제에 의해 매개된 기질 단백질의 모집 및 유비퀴틴화를 촉진하는 능력이 있다. 면역조절 이미드가 리가제와 신생기질 사이의 단백질 상호작용을 재프로그래밍하는 소수성 패치로서 결합 계면을 채우는 "분자 접착제"로 작용하는 것으로 생각된다.
암에 대한 신규 치료제로서 이들 화합물에 대한 흥분에도 불구하고, 지금까지는 다발성 골수종 및 골수이형성 증후군(MDS)과 같은 혈액학적 악성종양에 사용하는 것으로 제한되어 왔다. 다른 종양단백질을 분해하여 기능할 수 있는 화합물 라이브러리를 확장하는 것은 약물 개발의 활발한 영역이며, 이중 많은 것은 '약물화할 수 없는(undruggable)'으로 간주되어 왔다. 따라서 이러한 대체 종양단백질을 표적화하고 다양한 암을 치료할 수 있는 새로운 화합물이 계속해서 필요하다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 접합체:
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 식중:
a는 1 내지 10의 정수이고;
n은 0 또는 1이고;
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH, O, S, 및 CF2로부터 선택되고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R10은 -CH3, -C(O)R30, -N(R40)2, -(CH2)n'OH, -(CH2)n'N(R40)2, -(CH2)n'Q(CH2)m'OH, -(CH2)n'Q(CH2)m'SH, 및 -(CH2)n'Q(CH2)m'N(R40)2로부터 선택되고; 여기서:
R30은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
각 R40은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
Q는 O, S, 또는 NR40이고;
n'는 1-6이고;
m'는 2-5이고;
R20은 수소, -(CH2CH2O)v'-CH3, C2-C6알케닐, C1-C6알킬; C2-C6알키닐, 벤질, C3-C6사이클로알킬, 및 C3-C6사이클로알킬(C1-C3알킬)로부터 선택되고, 여기서 v'는 1 내지 24이고;
X는 -NR200-, =C(CH3)-, -Q'-(CH2)n''-, 및 -Q'(CH2)m''Q''(CH2)n''-로부터 선택되고; 여기서:
Q' 및 Q''는 각각 독립적으로 O, S, 또는 N(R200)v이고, 여기서:
v는 1 또는 2이고;
각 R200은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
n"는 1 내지 6의 정수이고;
m"는 2 내지 6의 정수이고;
여기서 각 기의 좌측은 L에 부착되고 우측은 A에 부착되며;
단, X가 NH 또는 -Q'-(CH2)n"-인 경우, R1은 할로이고;
각 Y는 독립적으로 S 또는 O이고;
L은 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커이고;
L50은 절단가능한 링커이고;
Bm은 CD56에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 모이어티이다.
일부 양태에서, 결합 모이어티는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
일부 양태에서, a는 2 내지 8의 정수이다.
일부 양태에서, L은 절단불가능한 링커이다.
일부 양태에서, L은
및
으로 이루어지는 군에서 선택되고;
식중:
p는 1 내지 10의 정수이고;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, L은 이다.
일부 양태에서, p는 5이다.
특정 양태에서, 접합체는 L이 절단가능한 링커인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다. 일부 양태에서, 절단가능한 링커는 프로테아제에 의해 절단가능하다. 일부 양태에서, L은
으로 이루어지는 군에서 선택되고;
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고,
Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 각각 독립적으로 부재하거나 L- 또는 D-배열에서 자연 발생 아미노산 잔기이고, 단 Z1, Z2, Z3, 및 Z4 중 적어도 두 개는 아미노산 잔기이고;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 독립적으로 부재하거나 L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-리신, D-리신, 및 글리신으로 이루어진 군에서 선택되고; 단 Z1, Z2, Z3, 및 Z4 중 적어도 두 개는 아미노산 잔기이다.
일부 양태에서, Z1은 부재하거나 글리신이고; Z2는 부재하거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌, 및 글리신으로 이루어진 군에서 선택되고; Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어진 군에서 선택되고; Z4는 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-리신, D-리신, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어진 군에서 선택된다.
일부 양태에서, L은 이다.
일부 양태에서, q는 5이다.
일부 양태에서, L은 생물환원성 링커이다.
일부 양태에서, L은
으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고;
R, R', R'' 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 2개의 같은자리 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있으며;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, L은 산 절단가능한 링커이다.
일부 양태에서, L은
및 으로 이루어지는 군으로부터 선택되고
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고,
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, L은 클릭-투-릴리스(click-to-release) 링커이다. 일부 양태에서, L은
으로부터 선택되고,
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고,
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, L은 피로포스파타제 절단가능한 링커이다. 일부 양태에서, L은
이고,
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, L은 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커이다. 일부 양태에서, L은
및
으로부터 선택되고;
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고;
----은 부재하거나 결합이고;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, L은
또는
이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이며;
X는 -N(R200)v(CH2)m"O(CH2)n"-이고; 여기서:
v는 1이고;
m" 및 n"는 2이고;
R200은 메틸이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이며;
X는 -N(R200)v(CH2)m"O(CH2)n"-이고; 여기서:
v는 2이고;
m" 및 n"는 2이고;
각 R200은 메틸이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이며;
X는 -O(CH2)n"-이고; 여기서:
n"는 2이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이며;
X는 -S(CH2)n"-이고; 여기서:
n"는 2이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고;
X는 -NR200-이고; 여기서:
R200은 메틸이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이며;
X는 -NR200-이고; 여기서:
R200은 수소이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이며;
X는 -NR2-이고; 여기서:
R2는 수소이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고;
X는 -C(CH3)=이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (I)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중:
A는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고;
X는 -N(R200)(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
n"는 1이고;
m"는 2이고;
R200은 메틸이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (II)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 여기서 절단가능한 링커는 프로테아제에 의해 절단가능하다. 일부 양태에서, L50은
및
으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
식중:
q는 2 내지 10이고;
Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5는 각각 독립적으로 부재하거나 L- 또는 D-배열의 자연 발생 아미노산 잔기이고, 단, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이며;
은 모 분자 모이어티에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5는 독립적으로 부재하거나, L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-리신, D-리신 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이다.
일부 양태에서,
Z1은 부재하거나 글리신이고;
Z2는 부재하거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
Z4는 L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-리신, D-리신, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
Z5는 부재하거나 글리신이다.
일부 양태에서, L50은
이다.
일부 양태에서, q는 4이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (II)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중 L50은 생물환원성 링커이다. 일부 양태에서, L50은
으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
식중:
q는 2 내지 10이고;
R, R', R'', 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6알킬)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 2개의 같은자리 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있고;
은 모 분자 모이어티에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, L50은
이다.
일부 양태에서, q는 2이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (II)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중 L50은 클릭-투-릴리스 링커이다. 일부 양태에서, L50은
이고;
식중:
q는 2 내지 10이고;
은 모 분자 모이어티에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, 접합체는 화학식 (II)의 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이고, 식중 L50은 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커이다. 일부 양태에서, L50은
및
로부터 선택되고;
식중:
q는 2 내지 10이고;
----는 부재하거나 결합이며;
은 모 분자 모이어티에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, a는 3 내지 4이다.
일부 양태에서, a는 8이다.
일부 양태에서, 결합 부분은 서열번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) CDR1, 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2, 및 서열번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및/또는 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 양태에서, IgG 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (i) EU 넘버링에 따른 N297A 돌연변이 및/또는 (ii) EU 넘버링에 따른 LALA (L234A 및 L235A) 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 조작된 시스테인을 포함하는 불변 영역 또는 서열번호:14-20 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서 결합 모이어티는 (i) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 또는 (ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 하기인 접합체를 제공한다:
식중 Bm은 항체 CD56-B이고 a는 3-8임. 일부 양태에서 a는 3, 4, 또는 8이다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 적어도 하나의 접합체를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 Bm 당 신규분해약물의 평균 수는 3-8이다. 일부 양태에서, Bm 당 신규분해약물의 평균 수는 약 3 내지 약 4이다. 일부 양태에서, Bm 당 신규분해약물의 평균 수는 약 8이다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 대상체에게 본원에 제공된 접합체 또는 조성물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 약학적으로 허용가능한 양을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 양태에서, 암은 CD56-양성 암이다. 일부 양태에서, 암은 신경내분비암 (임의로 여기서 신경내분비암은 신경모세포종 또는 신경내분비 전립선암임), 폐암 (임의로 여기서 폐암은 소세포 폐암 (SLCL)임), 또는 육종이다. 일부 양태에서, 본 방법은 본원에 제공된 접합체 또는 조성물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 투여 전, 후 또는 동시에 대상체에게 약학적으로 허용가능한 양의 추가 제제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 추가 제제는 세포독성제 또는 면역 반응 조절제이다. 일부 양태에서, 면역 반응 조절제는 관문 억제제이다. 일부 양태에서, 관문 억제제는 PD-1 억제제, PD-L1 억제제, CTLA-4 억제제, TIM3 억제제, 및/또는 LAG-3 억제제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 용도를 위한 약제의 제조에서 본원에 제공된 접합체 또는 조성물의 용도를 제공한다.
도 1은 화합물 (III)- 항체 CD56-A 접합체의 분포를 나타내는 천연 SEC-MS 그래프를 도시한다.
도 2는 화합물 (III) - 항체 CD56-A 접합체와 비교하여 항체 CD56-A (경쇄 및 중쇄)의 환원 LC-MS를 도시한다.
도 3은 화합물 (III)- 항체 CD56-B 접합체에 대한 접합된 종의 분포를 나타내는 천연 SEC-MS 그래프를 도시한다.
도 4는 화합물 (III) - 항체 CD56-B 접합체와 비교하여 항체 CD56-B (경쇄 및 중쇄)의 환원 LC-MS를 도시한다.
도 5a는 NCI-H660 세포주에 대해 접합체 (VIII) 및 화합물 (IV) - 항체 CD56-B DAR8 접합체의 활성을 도시한다.
도 5b는 실시예 10의 각 용량 그룹에 대한 시간에 따른 개별 종양 부피를 도시한다.
도 5c는 실시예 10에 설명된 연구 과정에 따른 각 용량 그룹에서 마우스에 대한 평균 체중을 도시한다.
도 6a는 NCI-H1048 세포주에 대해 접합체 (VI) 의 활성을 도시한다.
도 6b는 실시예 11의 각 용량 그룹에 대한 시간에 따른 개별 종양 부피를 도시한다.
도 6c는 실시예 11에 설명된 연구 과정에 따른 각 용량 그룹에서 마우스에 대한 평균 체중을 도시한다.
도 7은 화합물 (IV-1) - 항체 CD56-B 접합체에 대한 접합된 종의 분포를 나타내는 천연 SEC-MS 그래프를 도시한다.
도 8은 화합물 (IV) - 항체 CD56-B 접합체에 대한 접합된 종의 분포를 나타내는 천연 SEC-MS 그래프를 도시한다.
도 9a는 IMR32 인간 신경모세포종 암 종양 세포에 대해 접합체 (IX)의 활성을 도시한다.
도 9b는 실시예 12의 각 용량 그룹에 대한 시간 경과에 따른 개별 종양 부피를 도시한다.
도 9c는 실시예 12에 설명된 연구 과정에 따른 각 용량 그룹에서 마우스에 대한 평균 체중을 도시한다.
본 개시내용은 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 접합체:
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이고, 식중:
a는 1 내지 10의 정수이고;
n은 0 또는 1이고;
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH, O, S, 및 CF2로부터 선택되고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R10은 -CH3, -C(O)R30, -N(R40)2, -(CH2)n'OH, -(CH2)n'N(R40)2, -(CH2)n'Q(CH2)m'OH, -(CH2)n'Q(CH2)m'SH, 및 -(CH2)n'Q(CH2)m'N(R40)2로부터 선택되고; 식중:
R30은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
각 R40은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
Q'는 O, S, 또는 NR40이고;
n'는 1-6이고;
m'는 2-5이고;
R20은 수소, -(CH2CH2O)v'-CH3, C2-C6알케닐, C1-C6알킬; C2-C6알키닐, 벤질, C3-C6사이클로알킬, 및 C3-C6사이클로알킬(C1-C3알킬)로부터 선택되고, 여기서 v'는 1 내지 24이고;
X는 -NR200-, =C(CH3)-, -Q'-(CH2)n''-, 및 -Q'(CH2)m''Q''(CH2)n''-로부터 선택되고; 여기서:
Q' 및 Q''는 각각 독립적으로 O, S, 또는 N(R200)v이고, 여기서:
v는 1 또는 2이고;
각 R200은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
n''는 1 내지 6의 정수이고;
m''는 2 내지 6의 정수이고;
여기서 각 기의 좌측은 L에 부착되고 우측은 A에 부착되며;
단, X가 NH 또는 -Q'-(CH2)n''-인 경우, R1은 할로이고;
각 Y는 독립적으로 S 또는 O이고;
L은 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커이고;
L50은 절단가능한 링커이고;
Bm은 CD56에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 모이어티이다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는 항체 또는 항원-결합 단편이다.
본 개시내용은 또한 접합체를 포함하는 조성물, 및 접합체를 사용하고 제조하는 방법을 제공한다.
I. 정의.
본 설명을 보다 쉽게 이해할 수 있도록, 특정 용어가 먼저 정의된다. 추가 정의는 상세한 설명 전반에 걸쳐 기재된다.
단수 형태 실체는 하나 이상의 해당 실체를 지칭하는 것에 유의해야 하고; 예를 들어, "뉴클레오타이드 서열"은 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 단수 형태, 용어 "하나 이상", 및 "적어도 하나"는 본원에 교환 가능하게 사용될 수 있다. 청구범위가 임의의 선택적 요소를 배제하도록 작성될 수 있다는 점을 더 유의해야 한다. 따라서, 이러한 서술은 청구범위 요소의 인용이나 부정적인 제한의 사용과 관련하여 "유일하게", "단지" 등과 같은 배타적인 용어를 사용하기 위한 선행 근거로서 제공하기 위한 것이다.
또한, 본원에 사용된 "및/또는"은 서로의 유무에 관계없이 두 개의 특정한 특성 또는 구성요소 각각의 구체적인 개시내용으로서 간주되어야 한다. 따라서, 본원에 "A 및/또는 B"와 같은 문구에 사용된 경우 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독) 및 "B"(단독)를 포함하는 것으로 한다. 유사하게, 'A, B 및/또는 C'와 같은 문구에 사용된 용어 '및/또는'은 하기 양태를 각각 포괄하는 것으로 한다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); C(단독).
양태가 표현 '포함하는'과 함께 본원에 기재되는 경우, '로 이루어진' 및/또는 '로 본질적으로 이루어진'과 관련하여 기재된 다른 유사한 양태가 또한 제공되는 것으로 이해된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용과 관련되는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press, The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press, 및 Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press는 당업자에게 본 개시내용에 사용된 많은 용어의 일반적인 사전을 제공한다.
단위, 접두사, 및 기호는 국제단위계(SI)에 인정된 형식으로 표시된다. 숫자 범위에는 범위를 정하는 숫자가 포함된다. 값의 범위가 언급되는 경우, 해당 범위의 언급된 상한과 하한 사이에 있는 각각의 정수 값 및 이들 각각의 분수가 또한 이들 값 사이의 각각의 하위범위와 함께 구체적으로 개시되는 것으로 이해되어야 한다. 임의의 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 범위에 포함되거나 배제될 수 있고, 범위 중 어느 하나가 포함되거나, 둘 모두가 포함되지 않거나, 또는 둘 모두가 포함되는 각 범위도 본 개시내용 내에 포괄된다. 따라서, 본원에 인용된 범위는 인용된 종점을 포함하는 범위 내의 모든 값에 대한 약칭으로 이해된다. 예를 들어, 1 내지 10의 범위는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로 이루어지는 군으로부터 임의의 수, 숫자의 조합 또는 하위-범위를 포함하는 것으로 이해된다.
값이 명시적으로 언급되는 경우, 언급된 값과 거의 동일한 수량 또는 언급된 양인 값도 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 이해되어야 한다. 조합이 개시되는 경우, 해당 조합 중 요소들의 각 하위조합이 또한 구체적으로 개시되고 본 개시내용의 범위 내에 있다. 반대로, 상이한 요소 또는 요소들의 그룹이 개별적으로 개시되는 경우, 이들의 조합이 또한 개시된다. 개시내용의 임의의 요소가 복수의 대안을 가진 것으로 개시되는 경우, 각 대안이 단독으로 배제되거나 다른 대안과 임의의 조합으로 배제되는 해당 개시내용의 예도 또한 본원에 개시되는 것이며; 개시내용의 하나 초과의 요소가 그러한 배제를 가질 수 있으며, 이러한 배제를 갖는 요소들의 모든 조합이 본원에 개시되는 것이다.
본원에 사용된 용어 "표적화된 단백질 분해제" 및 "신규분해약물"은 분해를 위해 단백질을 표적화할 수 있는 E3 유비퀴틴 리가제와 3원 복합체를 형성하는 분자를 지칭한다. 예로는 분자 접착제 및 PROTAC을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 분자 접착제의 예로는 CC-90009, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 메지그도마이드(CC-92480), 이베르도마이드(CC-220), DKY709, 및 WO2021/198965에 개시된 화합물 P1을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용된 용어 "DAR"은 접합체의 약물 항체 비율을 지칭하며, 이는 각 결합 모이어티(예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)에 연결된 신규분해약물-링커 복합체의 평균 수이다. 특정 양태에서, 본원에 기재된 접합체의 DAR은 1 내지 10이다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 접합체의 DAR은 1 내지 8이다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 접합체의 DAR은 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 또는 10이다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 또한 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 관심 표적 항원 또는 이의 일부에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 지칭하며, 이러한 표적으로는 암 세포를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 본원에 개시된 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 서브클래스일 수 있다. 면역글로불린은 모든 종에서 유래될 수 있다. 그러나, 일 양태에서 면역글로불린은 인간, 뮤린, 또는 토끼 기원인 것이다.　
"온전한 항체"는 항원-결합 가변 영역 뿐만 아니라 경쇄 불변 도메인(CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 항체이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다.　
"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항-이디오타입(항-Id) 항체, CDR(상보적 결정 영역), 및 암 세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 상기 임의의 것의 에피토프-결합 단편, 단일-쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.　
나노바디로도 알려져 있는 용어 "단일 도메인 항체"는 약 12 kDa 내지 약 15 kDa의 분자량을 갖는 단일 단량체성 가변 항체 도메인으로 이루어지는 항체 단편이다. 단일 바디 항체는 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄를 기반으로 할 수 있다. 단일 도메인 항체의 예는 VHH 단편 및 VNAR 단편을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "단클론 항체"는 실질적으로 동종 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉 집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단클론 항체는 매우 특이적이어서, 단일 항원 부위에 대해 유도된다. 또한, 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 유도되는 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제제와 달리, 각 단클론 항체는 항원의 단일 결정인자에 대해 유도된다. 이들의 특이성 외에도, 단클론 항체는 다른 항체에 의해 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어 "단클론"은 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 수득되는 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체 생산을 요구하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 개시내용에 따라 사용될 단클론 항체는 하이브리도마 방법에 의해 만들어질 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 만들어질 수 있다. "단클론 항체"는 또한 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.　
본원에 단클론 항체는 구체적으로 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 한편, 쇄(들)의 나머지가, 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체, 뿐만 아니라 이러한 항체의 단편에서 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 "키메라" 항체를 포함한다. 본원에 관심 있는 키메라 항체는 비인간 영장류(예를 들어 구대륙 원숭이, 유인원 등)로부터 유래된 가변 도메인 항원-결합 서열 및 인간 불변 영역 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.　
단클론 항체(MAb)를 생산하기 위해 다양한 방법이 사용되었다. 단일 유형의 항체를 생산하는 클로닝된 세포주를 지칭하는 하이브리도마 기술은 마우스(뮤린), 햄스터, 랫트, 및 인간을 포함하는 다양한 종의 세포를 사용한다. MAb를 제조하는 또 다른 방법은 재조합 DNA 기술을 포함하는 유전 공학을 사용한다. 이러한 기술로 만들어진 단클론 항체는, 그 중에서도, 키메라 항체 및 인간화된 항체를 포함한다. 키메라 항체는 한 종류 이상의 종으로부터 DNA 인코딩 영역을 조합한다. 예를 들어, 키메라 항체는 마우스로부터 가변 영역을 유도하고 인간으로부터 불변 영역을 유도할 수 있다. 인간화 항체는 비인간 부분을 포함하더라도 주로 인간에서 유래한다. 키메라 항체와 마찬가지로, 인간화 항체는 완전한 인간 불변 영역을 포함할 수 있다. 그러나 키메라 항체와 달리, 가변 영역은 부분적으로 인간으로부터 유래될 수 있다. 인간화 항체의 비인간 합성 부분은 종종 뮤린 항체의 CDR에서 유래한다. 어쨌든, 이러한 영역은 항체가 특정 항원을 인식하고 결합할 수 있도록 하는 데 중요하다. 진단 및 단기 요법에 유용하지만, 뮤린 항체는 유해한 면역원성 반응의 위험을 증가시키지 않고는 장기간 사람에게 투여할 수 없다. 인간 항-마우스 항체(HAMA)라고 하는 이 반응은 인간 면역계가 뮤린 항체를 이물질로 인식하고 공격할 때 발생한다. HAMA 반응은 독성 쇼크 또는 심지어 사망까지 유발할 수 있다.
키메라 및 인간화 항체는 투여된 항체의 비인간 부분을 최소화함으로써 HAMA 반응의 가능성을 감소시킨다. 게다가, 키메라 및 인간화 항체는 항체 의존성 세포의 세포독성과 같은 2차 인간 면역 반응을 활성화하는데 추가 이점을 가질 수 있다.　
온전한 항체는 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인할 수 있는 해당 생물학적 활성을 지칭하는 하나 이상의 "이펙터 기능"을 가질 수 있다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체(예: B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함한다.　
그들의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 온전한 항체는 상이한 "클래스"로 배정될 수 있다. 온전한 항체에는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM의 5가지 주요 클래스가 있으며, 이들 중 몇몇은 "서브클래스"(아이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 추가로 분할될 수 있다. 항체의 상이한 클래스에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 뮤로 지칭된다. 면역글로불린의 상이한 클래스의 아단위 구조 및 삼차원 구성은 잘 알려진다.　
용어 "약"은 대략적으로, 대충, 주위, 또는 영역내를 의미하기 위해 본원에 사용된다. 용어 '약'이 수치 범위와 함께 사용되는 경우, 기재된 수치 값 위 및 아래로 경계를 확장하여 해당 범위를 수식한다. 일반적으로, 용어 "약"은 언급된 값의 위 및 아래의 수치 값을 위 또는 아래로 (더 높거나 더 낮은) 예를 들어 10%의 분산에 의해 수식할 수 있다.
용어 "투여", "투여하는", 및 이의 문법적 변형은 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)와 같은 조성물을 약학적으로 허용가능한 경로를 통해 대상체에게 도입시키는 것을 지칭한다. 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)와 같은 조성물을 대상체에게 도입시키는 것은 종양내, 경구, 폐, 비강내, 비경구(정맥내, 동맥내, 근육내, 복강내, 또는 피하), 직장, 림프내, 척수강내, 안구 주위 또는 국소를 포함하는 임의의 적합한 루트에 의해 이루어진다. 투여는 자가 투여와 또 다른 것에 의한 투여를 포함한다. 적합한 투여 루트는 조성물 또는 제제가 의도된 기능을 수행하도록 허용한다. 예를 들어, 적합한 루트가 정맥내인 경우, 대상체의 정맥에 조성물 또는 제제를 도입시킴으로써 조성물이 투여된다.
본원에 사용된 바와 같이, 하나 이상의 관심 값에 적용되는 용어 "대략적으로"는 언급된 기준 값과 유사한 값을 지칭한다. 특정 양태에서, "대략적으로"라는 용어는 문맥에서 달리 언급되거나 달리 명백하지 않은 한(이러한 수가 가능한 값의 100%를 초과하는 경우는 제외함), 언급된 기준 값의 어느 한 방향(초과 또는 미만)으로 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 이하에 속하는 값의 범위를 지칭한다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함하는 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 정의되었다. 따라서, 폴리펩타이드의 아미노산이 동일한 측쇄 패밀리의 또 다른 아미노산으로 대체되는 경우, 치환은 보존적인 것으로 간주된다. 또 다른 양태에서, 일련의 아미노산은 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성이 상이한 구조적으로 유사한 일련의 아미노산으로 보존적으로 대체될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "보존된"은 비교되는 두 개 이상의 서열의 동일한 위치에서 변경됨이 없이 발생하는 것들인 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 폴리펩타이드 서열 각각의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기를 지칭한다. 상대적으로 보존된 뉴클레오타이드 또는 아미노산은 서열의 다른 곳에 나타나는 뉴클레오타이드 또는 아미노산보다 더 관련된 서열 간에 보존되는 것이다.
일부 양태에서, 두 개 이상의 서열은 서로 100% 동일한 경우 "완전히 보존된" 또는 "동일한" 것이라고 한다. 일부 양태에서, 두 개 이상의 서열은 서로 적어도 약 70% 동일한, 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 또는 적어도 약 95% 동일한 경우 "고도로 보존된"이라고 한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 서열이 서로 적어도 약 30% 동일한, 적어도 약 40% 동일한, 적어도 약 50% 동일한, 적어도 약 60% 동일한, 적어도 약 70% 동일한, 적어도 약 80% 동일한, 적어도 약 90% 동일한, 또는 적어도 약 95% 동일한 경우 "보존된"이라고 한다. 서열의 보존은 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드의 전체 길이에 적용할 수 있거나 이의 일부, 영역, 또는 특성에 적용할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "신규분해약물 접합체"는 링커를 통해 결합 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)에 부착된 신규분해약물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "연결하는" 및 "접합하는"은 교환가능하게 사용되며 각각 신규분해약물 및 결합 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)를 포함하는 2개 이상의 모이어티의 공유 또는 비-공유 부착을 지칭한다. 일부 양태에서
용어 "아미노산 서열 변이체"는 천연 서열 폴리펩타이드와 어느 정도 상이한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일상적으로, 아미노산 서열 변이체는 천연 항체의 적어도 하나의 수용체 결합 도메인 또는 천연 수용체의 적어도 하나의 리간드 결합 도메인과 적어도 약 70% 서열 동일성을 보유할 것이고, 전형적으로 이러한 수용체 또는 리간드 결합 도메인과 적어도 약 80%, 보다 전형적으로 적어도 약 90% 서열 상동성일 것이다. 아미노산 서열 변이체는 천연 아미노산 서열의 아미노산 서열 내의 특정 위치에 치환, 결실, 및/또는 삽입을 보유한다. 아미노산은 통상적인 이름, 1-문자 및 3-문자 코드로 표시된다.　
"서열 동일성"은 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 필요한 경우 서열을 정렬하고 갭을 도입한 후 동일한, 아미노산 서열 변이체 잔기의 백분율로서 정의된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당업계에 잘 알려진다. 하나의 이러한 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에서 제작한 "Align 2"이며, 이는 1991년 12월 10일자로 워싱턴 디.씨. 20559에 소재하는 미국 저작권청에 사용자 문서와 함께 제출되었다.　
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 설명하는데 사용된다. 예시적 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 더욱이, FcR은 IgG 항체 (감마 수용체)를 결합하는 것일 수 있고, 대립유전자 변이체 및 대안적으로 이들 수용체의 스플라이싱된 형태를 포함하여, FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 서브클래스의 수용체를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하고, 이는 이의 세포질 도메인 내에서 주로 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 이의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신계 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRlIB는 이의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신계 억제 모티프(ITIM)를 함유한다. 장래에 식별되는 것을 포함하는 다른 FcR은 본원에 용어 "FcR"에 의해 포함된다. 용어는 또한 모체의 IgG를 태아에게 전달하는 역할을 하는 신생아 수용체인 FcRn을 포함한다.　
"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재 하에 표적을 용해시키는 분자의 능력을 지칭한다. 보체 활성화 경로는 동족 항원과 복합체화된 분자(예를 들어, 항체)에 보체 시스템의 제1 구성요소(C1q)가 결합함으로써 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정이 수행될 수 있다.　
"천연 항체"는 일반적으로 2개의 동일한 경쇄(L)와 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. 각 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 이황화 연결의 수는 상이한 면역글로불린 아이소타입의 중쇄에 따라 변동된다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄 내의 이황화 가교를 갖는다. 각 중쇄는 하나의 말단에서 가변 도메인(VH) 다음에 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각 경쇄는 가변 도메인을 하나의 말단에서 (VL) 그리고 불변 도메인을 이의 다른 말단에서 갖는다. 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.　
용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 부분이 항체 사이에서 서열이 광범위하게 상이하고 그의 특정 항원에 대한 각 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다는 사실을 지칭한다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인 전체에 고르게 분포되어 있지 않다. 그것은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인에서 모두 초가변 영역으로 불리는 3개의 분절에 집중되어 있다. 가변 도메인의 더욱 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역 (FR)이라고 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 각각은 3개의 초가변 영역에 의해 연결된, 크게는 β-시트 입체배치를 채택한 4개의 FR을 포함하여, β-시트 구조를 연결하고, 일부 경우에는 β-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 각 쇄에서 초가변 영역은 FR에 의해 밀접하게 함께 유지되고, 다른 쇄의 초가변 영역과 함께, 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다. 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하는 것이 아니라, 항체 의존성 세포의 세포독성(ADCC)에서 항체의 참여와 같이 다양한 이펙터 기능을 나타낸다.　
본원에 사용된 용어 "초가변 영역"은 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기(예를 들어, 경쇄 가변 도메인에서 잔기 24-34(L1), 50-56(L2) 및 89-97(L3) 그리고 중쇄 가변 도메인에서 31-35(H1), 50-65(H2) 및 95-102(H3); Kabat 등 상기) 및/또는 "초가변 루프"로부터의 해당 잔기(예를 들어, 경쇄 가변 도메인에서 잔기 26-32(L1), 50-52(L2) 및 91-96(L3) 그리고 중쇄 가변 도메인에서 26-32(H1), 53-55(H2) 및 96-101(H3))를 포함한다. "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 초가변 영역 잔기 외에 다른 해당 가변 도메인 잔기이다.　
항체의 파파인 소화는 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는 "Fab" 단편으로 불리는 두 개의 동일한 항원-결합 단편, 및 용이하게 결정화하는 이의 능력이 이름에 반영된 잔여 "Fc" 단편을 생성한다. 펩신 처리는 2개의 항원-결합 부위를 가지며 여전히 항원을 가교결합시킬 수 있는 F(ab')2 단편을 산출한다.　
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 긴밀한 비공유 회합으로 하나의 중쇄와 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 이러한 구성에서, 각 가변 도메인의 3개의 초가변 영역은 상호작용하여 VH-VL 이량체 표면 상의 항원 결합 부위를 한정한다. 종합적으로, 6개의 초가변 영역은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 3개의 초가변 영역만을 포함하는 Fv의 절반)조차도 전체 결합 부위보다 낮은 친화도일지라도 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.　
Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 포함한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에 몇 개의 잔기를 부가함으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 적어도 1종의 유리 티올 기를 갖는 Fab'에 대한 본원에서의 지정이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 그들 사이의 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 알려져 있다.　
임의의 척추동물 종으로부터의 항체의 "경쇄"는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파 및 람다라고 불리는 2개의 명확하게 구별되는 유형 중 하나로 배정될 수 있다.　
"단일-쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하고, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩타이드 쇄에 존재한다. Fv 폴리펩타이드는 scFv가 항원 결합에 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH 도메인과 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함할 수 있다.　
용어 "디아바디"는 두 개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭하고, 이 단편은 동일한 폴리펩타이드 쇄(VH-VL)에서 가변 경쇄 도메인(VL)에 연결된 가변 중쇄 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 쇄 상에서 2 개의 도메인 사이 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커를 이용함으로써, 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 이루고 2 개의 항원-결합 부위를 생성하도록 유도된다.　
비-인간(예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 인간화는 뮤린 항원 결합 정보를 비-면역원성 인간 항체 수용체로 전달하는 방법이며, 많은 치료적으로 유용한 약물을 초래하였다. 인간화 방법은 일반적으로 6개의 모든 뮤린 상보성 결정 영역(CDR)을 인간 항체 프레임워크로 전달하는 것으로 시작된다. 이러한 CDR-그라프팅된 항체는 일반적으로 항원 결합에 대하여 그들의 원래 친화도를 유지하지 않으며, 실제로, 친화도는 종종 심하게 손상된다. CDR 외에도, 선별된 비-인간 항체 프레임워크 잔기는 또한 적절한 CDR 입체형태를 유지하기 위해 포함되어야 한다. 그라프팅된 CDR의 구조적 입체형태를 지원하기 위해 주요 마우스 프레임워크 잔기를 인간 수용체로 전달하면 항원 결합 및 친화도가 회복되는 것으로 나타났다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수혜자의 초가변 영역으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도 및 역량을 갖는 비인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 랫트, 토끼 또는 비인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기에 의해 대체되는 인간 면역글로불린(수혜자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 더 나아가, 인간화 항체는 수혜자 항체에서 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 수행능을 추가로 개선하기 위해 수행된다. 일반적으로, 인간화 항체는 실질적으로 적어도 하나, 그리고 전형적으로는 2개의 모든 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기에서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 것과 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 한 부분, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 임의로 또한 포함할 것이다.　
"단리된" 항체는 이의 천연 환경의 구성요소로부터 확인되고 분리되고/거나 회수된 항체이다. 이의 천연 환경의 오염물질 성분은 항체에 대하여 진단적 또는 치료적 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 특정 양태에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의해 결정된 항체의 95중량% 초과, 또는 99중량% 초과까지, (2) 기체상 단백질 시퀀서를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의한 균질성까지 정제될 것이다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 적어도 1종의 구성요소가 존재하지 않기 때문에 재조합 세포 내에서 원위치에 항체를 포함한다. 그러나, 보통 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.　
"암"은 신체에서 비정상 세포의 제어되지 않는 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 광범위한 그룹을 지칭한다. 조절되지 않은 세포 분열과 성장은 주변 조직을 침범하고 림프계나 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 또한 전이할 수 있는 악성 종양의 형성을 초래한다. 본원에 사용된 "암"은 원발성, 전이성 및 재발성 암을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "면역 반응"은 외래 제제에 대한 척추동물 내의 생물학적 반응을 지칭하고, 이 반응은 이들 제제 및 이들 제제에 의해 유발된 질환에 대하여 유기체를 보호한다. 면역 반응은 면역계의 세포(예를 들어, T 림프구, B 림프구, 자연 살해(NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 또는 호중구)의 작용 및 침범하는 병원체, 병원체에 감염된 세포 또는 조직, 암성 또는 기타 비정상 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우, 정상 인간 세포 또는 조직을 척추동물의 신체에서 선택적으로 표적화, 결합, 손상, 파괴, 및/또는 제거를 초래하는 이러한 세포 또는 간에 의해 생성되는 가용성 거대분자(항체, 사이토카인, 및 보체 포함)의 작용에 의해 매개된다. 면역 반응은, 예를 들어 T 세포, 예를 들어 CD4+또는 CD8+ T 세포와 같은 효과기 T 세포 또는 Th 세포의 활성화 또는 억제, 또는 Treg 세포의 억제를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "T 세포" 및 "T 림프구"는 교환가능하고 흉선에 의해 생성되거나 처리되는 임의의 림프구를 지칭한다. 일부 양태에서, T 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 양태에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 양태에서, T 세포는 NKT 세포이다.
"대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 용어 "비인간 동물"은 척추동물 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 및 설치류 예컨대 마우스, 랫트 및 기니피그를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 양태에서, 대상체는 인간이다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에 교환가능하게 사용된다.
용어 "치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 투약량"은 원하는 생물학적, 치료적, 및/또는 예방성 결과를 제공하는 제제(예를 들어, 본원에 개시된 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체)의 양을 지칭한다. 그 결과는 질환의 징후, 증상, 또는 원인 중 하나 이상의 감소, 호전, 완화, 약화, 지연, 및/또는 경감, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변경일 수 있다. 고형 종양과 관련하여, 유효량은 종양을 수축시키고/시키거나 (종양 성장을 억제하는 것과 같이) 종양의 성장 속도를 감소시키거나 다른 원치 않는 세포 증식을 예방하거나 지연시키기에 충분한 양을 포함한다. 일부 양태에서, 유효량은 종양 발달을 지연시키기에 충분한 양이다. 일부 양태에서, 유효량은 종양 재발을 예방하거나 지연시키기에 충분한 양이다. 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 조성물의 유효량은 예를 들어, (i) 암세포 수를 감소시키고/시키거나; (ii) 종양 크기를 감소시키고/시키거나; (iii) 말초 기관으로 암세포 침윤을 억제하고, 지체시키고, 어느 정도 둔화시키고, 중단시킬 수 있고/있거나; (iv) 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도 둔화)하고 중단시킬 수 있고/있거나; (v) 종양 성장을 억제하고/하거나; (vi) 종양의 발생 및/또는 재발을 예방 또는 지연시키고/시키거나; (vii) 암과 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬 수 있다.
일부 양태에서, "치료적 유효량"은 암의 유의미한 감소 또는 암, 예컨대 진행성 고형 종양의 진행의 둔화(퇴행)에 영향을 미치는 것으로 임상적으로 입증된 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체의 양이다. 질환 퇴행을 촉진하는 치료적 제제의 능력은 숙련된 의사에게 알려진 다양한 방법을 사용하여, 예컨대 임상 시험 동안의 인간 대상체에서, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서, 또는 시험관내 검정에서 제제의 활성을 검정함으로써 평가될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "표준 치유"는 의료 전문가에 의해 특정 유형의 질환에 대한 적절한 치료로서 인정되고 의료 전문가가 널리 사용하는 치료를 지칭한다. 이 용어는 임의의 하기 용어: "모범 사례", "표준 의료적 치유", 및 "표준 요법"과 교환가능하게 사용될 수 있다.
예로써, "항암제"는 대상체에서 암 퇴행을 촉진하거나 추가 종양 성장을 예방한다. 특정 양태에서, 약물의 치료적 유효량은 암을 제거하는 시점까지 암 퇴행을 촉진한다.
치료와 관련하여 용어 "효과적" 및 "유효성"은 약리학적 유효성 및 생리학적 안전성을 모두 포함한다. 약리학적 유효성은 환자의 암 퇴행을 촉진하는 약물의 능력을 지칭한다. 생리학적 안전성은 약물 투여로 인해 초래되는 세포, 기관 및/또는 유기체 수준에서의 독성, 또는 다른 부정적인 생리학적 효과(유해 효과)의 수준을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "면역 관문 억제제"는 하나 이상의 관문 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해 또는 조절하는 분자를 지칭한다. 관문 단백질은 T 세포 활성화 또는 기능을 조절한다. CTLA-4 및 이의 리간드 CD80 및 CD86; 및 PD-1 및 이의 리간드 PD-L1 및 PD-L2와 같은 수많은 관문 단백질이 알려져 있다. Pardoll, D.M., Nat Rev Cancer 12(4):252-64 (2012). 이들 단백질은 T-세포 반응의 공동-자극 또는 억제 상호작용에 책임이 있다. 면역 관문 단백질은 자가-관용 및 생리학적 면역 반응의 지속기간 및 진폭을 조절하고 유지한다. 면역 관문 억제제는 항체를 포함하거나 항체로부터 유래된다.
용어 "치료하다" 또는 "치료"는 치료적 처치 및 예방성 또는 예방적 조치 모두를 지칭하며, 여기서 목적은 바람직하지 않은 생리학적 변화 또는 장애, 예컨대 암의 발생 또는 확산을 예방하거나 둔화(약화)시키는 것이다. 본 개시내용의 목적을 위해, 유익하거나 원하는 임상적 결과는 증상의 경감, 질환 정도의 축소, 질환의 안정화된(즉, 악화되지 않는) 상태, 질환 진행의 지연 또는 둔화, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 (부분적이든 전체적이든 상관없는) 차도를 검출 가능하든지 검출 불가능하든지 간에 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. '치료'는 또한 치료를 받지 않는 경우 예상되는 생존과 비교하여 생존 연장을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 자는 이미 병태 또는 장애를 가진 자 뿐만 아니라 병태 또는 장애를 가지기 쉬운 자, 또는 병태 또는 장애가 방지되어야 하는 자를 포함한다.　
II. 신규분해약물
본 개시내용은 본원에 개시된 하나 이상의 신규분해약물 및 결합 모이어티의 접합체를 제공한다.
일부 양태에서, 신규분해약물은 "G1에서 S상 전이 단백질 1" 상동체 (GSPT1)를 분해한다. 인간 GSPT1은 UniProt 기탁번호 P15170으로 지정되었다. 인간 GSPT1은 서열번호:1의 아미노산 서열을 가질 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (X)의 신규분해약물:
및/또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고; 식중:
n은 0 또는 1이고;
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH 및 CF2로부터선택되고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R10은 -CH3, -C(O)R30, -N(R40)2, -(CH2)n'OH, -(CH2)n'N(R40)2, -(CH2)n'Q(CH2)m'OH, -(CH2)n'Q(CH2)m'SH, 및 -(CH2)n'Q(CH2)m'N(R40)2로부터 선택되고; 식중:
R30은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
각 R40은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
Q는 O, S, 또는 NR40이고;
n'는 1-6이고;
m'는 2-5이고;
각 Y는 독립적으로 S 또는 O이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "C2-C6알케닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소에서 유래된 기를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "C1-C6알콕시"는, 본원에 사용된 바와 같이, 산소 원자를 통해 부착된 C1-C6알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "C1-C6알콕시C1-C6알킬"은 C1-C6알킬 기를 통해 부착된 C1-C6알콕시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "C1-C6알키닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중결합을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소에서 유래된 기를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "C2-C6알케닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소에서 유래된 기를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "C3-C6사이클로알킬"은 3 내지 6개의 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 포화 단환식, 탄화수소 고리 시스템을 지칭한다. 대표적 예는 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 및 사이클로헥실을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "C4-C10사이클로알킬"은 4 내지 10개의 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 포화 단환식 탄화수소 고리 시스템을 지칭한다. 사이클로알킬 기의 대표적 예는 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 및 사이클로헥실을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 7 내지 10개의 원자를 함유하는 사이클로알킬 기는 단환식 또는 융합된, 스피로환식, 또는 가교된 이환식 구조일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "C3-C6사이클로알킬(C1-C3알킬)"은 C1-C3알킬 기를 통해 부착된 C3-C6사이클로알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "할로"는 F, Cl, Br, 또는 I를 지칭한다.
III. 신규분해약물 접합체
본 개시내용은 본원에 개시된 하나 이상의 신규분해약물 및 결합 모이어티의 접합체를 제공한다. 이들 접합체는 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 리가제에 의해 매개된 기질 단백질의 모집 및 유비퀴틴화를 촉진하는 세레블론(CRBN)에 결합하여 단백질을 분해할 수 있다. 이들 제제는 "분자 접착제"로 작용하여, 리가제와 신생기질 사이의 단백질 상호작용을 재프로그래밍하는 소수성 패치로서 결합 계면을 채운다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 접합체:
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 식중:
a는 1 내지 10의 정수이고;
n은 0 또는 1이고;
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH, O, S, 및 CF2로부터 선택되고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R10은 -CH3, -C(O)R30, -N(R40)2, -(CH2)n'OH, -(CH2)n'N(R40)2, -(CH2)n'Q(CH2)m'OH, -(CH2)n'Q(CH2)m'SH, 및 -(CH2)n'Q(CH2)m'N(R40)2로부터 선택되고, 식중:
R30은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
각 R40은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
Q는 O, S, 또는 NR40이고;
n'는 1-6이고;
m'는 2-5이고;
R20은 수소, -(CH2CH2O)v'-CH3, C2-C6알케닐, C1-C6알킬; C2-C6알키닐, 벤질, C3-C6사이클로알킬, 및 C3-C6사이클로알킬(C1-C3알킬)로부터 선택되고, 여기서 v'는 1 내지 24이고;
X는 -NR200-, =C(CH3)-, -Q'-(CH2)n''-, 및 -Q'(CH2)m''Q''(CH2)n''-로부터 선택되고; 여기서:
Q' 및 Q''는 각각 독립적으로 O, S, 또는 N(R200)v이고, 여기서:
v는 1 또는 2이고;
각 R200은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
n''는 1 내지 6의 정수이고;
m''는 2 내지 6의 정수이고;
여기서 각 X 기의 좌측은 L에 부착되고 우측은 A에 부착되며;
단, X가 NH 또는 -Q'-(CH2)n''-인 경우, R1은 할로이고;
각 Y는 독립적으로 S 또는 O이고;
L은 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커이고;
L50은 절단가능한 링커이고;
Bm은 CD56에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 모이어티이다.
III.A. 링커
본 개시내용의 신규분해약물은 링커를 통해 결합 모이어티에 연결될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "링커"는 결합 모이어티(Bm)를 화학식 (I)의 접합체 내에서 기 X에 또는 화학식 (II)의 접합체 내에서 글루타르아마이드 고리의 질소 원자에 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티를 지칭한다.
특정 양태에서, 링커는 이종이작용성 기를 함유할 수 있다. 본 개시내용에서, 용어 "이종이작용성 기"는 이의 일부인 링커를 결합 모이어티에 연결하는 화학적 모이어티를 지칭한다. 이종이작용성 기는 화학적 모이어티의 양쪽 끝에 서로 다른 반응성 기를 갖는 것이 특징이다. "Bm"에 대한 부착은 화학적 또는 효소적 접합 또는 이 둘의 조합을 통해 달성될 수 있다. 화학적 접합은 이종이작용성 기의 반응 핸들과 결합 모이어티의 표면 상에 있는 접근가능한 아미노산 잔기의 제어된 반응을 포함한다. 화학적 접합의 예는 라이신 아미드 커플링, 시스테인 커플링, 및 유전 공학에 의해 혼입된 비-천연 아미노산을 통한 커플링을 포함하지만 이에 제한되지는 않으며, 여기서 원하는 반응 핸들이 있는 비-천연 아미노산 잔기는 "Bm"상에 설치된다. 효소적 접합에서, 효소는 링커와 결합 모이어티의 접근가능한 아미노 잔기의 커플링을 매개한다. 효소적 접합의 예는 소르타제를 사용한 트랜스펩타이드화, 미생물 트랜스글루타미나제를 사용한 트랜스펩타이드화, 및 N-글리칸 조작을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 화학적 접합 및 효소적 접합은 또한 순차적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 효소적 접합은 후속 화학적 접합에 활용되기 위해 "Bm"에 고유한 반응 핸들을 설치하는 데 또한 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 이종이작용기성 기는 다음으로부터 선택된다:
식중:
은 링커의 나머지 부분에 대한 부착 지점이고;
은 Bm에 대한 부착 지점임.
특정 양태에서, 링커 "L"은 절단불가능하다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "절단불가능한 링커"는 안정한, 공유 방식으로 신규분해약물에 결합 모이어티를 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티이며, 본원에 "절단가능한 링커"로서 정의된 범주에 속하지 않는다. 따라서, 절단불가능한 링커는 산-유도 절단, 광-유도 절단, 생물환원 절단, 펩티다제-유도 절단, 에스테라제-유도 절단, 및 이황화 결합 절단에 대해 실질적으로 내성이 있다. "절단에 대해 실질적으로 내성"은 링커에서 또는 링커를 인접하는 화학적 결합이 항체 신규분해약물 접합체 집단의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 95%, 가장 바람직하게는 적어도 99%가 산, 광불안정성 절단제, 생물환원제, 펩티다제, 에스테라제 또는 절단가능한 링커에서 화학적 결합(예를 들어, 이황화 결합)을 절단하는 화학적 또는 생리학적 화합물에 의해 위에 설명된 임의의 제제로 처리한 후 몇 시간에서 며칠 동안 절단불가능하게 남아있음을 의미한다. 특정 양태에서 링커는 신규분해약물 및/또는 결합 모이어티가 활성 상태로 남아 있을 수 있는 조건에서 산-유도 절단, 광-유도 절단, 생물환원 절단, 효소적 절단 등에 민감하지 않다. 절단불가능한 링커로부터 생성된 신규분해약물 접합체 대사물은 항체로부터 잔류 아미노산을 함유한다. 이들 대사물은 이들이 전달되는 표적 세포에서 독특하고 예상치 못한 특성을 나타낼 수 있다.
당업자는 절단불가능한 링커와 절단가능한 링커를 용이하게 구별할 것이다.
절단불가능한 링커의 예는 SMCC(석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트) 링커, 석신이미드 티오에테르 링커, 및 다음과 같은 링커를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다:
및 ;
식중:
p는 1 내지 10의 정수이고;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
일부 양태에서, L은 다음이다:
.
일부 양태에서, p는 5이다.
특정 양태에서 L 및 L50은 절단가능한 링커일 수 있다. 일부 양태에서, 링커는 신규분해약물 및/또는 결합 모이어티가 활성 상태로 남아 있을 수 있는 조건에서 산-유도 절단, 광-유도 절단, 생물환원 절단, 효소적 절단 등에 민감할 수 있다.
일부 양태에서, 절단가능한 링커는 효소적으로 절단될 수 있다. 일부 양태에서, 절단가능한 링커는 프로테아제, 펩티다제, 에스테라제, 베타-글루쿠로니다제, 글리코시다제, 포스포디에스테라제, 포스파타제, 피로포스파타제, 또는 리파제에 의해 절단될 수 있다.
일부 양태에서, 절단가능한 링커는 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 프로테아제의 예는 카텝신 B, VAGP 테트라펩타이드 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
특정 양태에서, 절단가능한 링커는 펩타이드를 함유한다. 일부 양태에서, 펩타이드는 링커의 절단 부위이고, 이로써 리소좀 효소와 같은 세포내 프로테아제에 노출 시 약물의 방출을 용이하게 한다. 펩타이드는 특정 효소, 예를 들어, 종양-연관 프로테아제, 카텝신 B, C 및 D, 또는 플라스민 프로테아제에 의한 효소적 절단을 위해 설계되고 최적화될 수 있다. 두 개의 아미노산을 갖는 펩타이드의 예는 알라닌-알라닌(ala-ala), 발린-알라닌(val-ala), 발린-시트룰린(vc 또는 val-cit), 알라닌-페닐알라닌(af 또는 ala-phe); 페닐알라닌-리신(fk 또는 phe-lys); 페닐알라닌-호모라이신(phe-homolys); 및 N-메틸-발린-시트룰린(Me-val-cit)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 세 개의 아미노산을 갖는 펩타이드의 예는 글리신-발린-시트룰린(gly-val-cit), 아스파르트산-발린-시트룰린(asp-val-cit), 알라닌-알라닌-아스파라긴(ala-ala-asn), 알라닌-페닐알라닌-리신(ala-phe-lys), 글리신-글리신-페닐알라닌(gly-gly-phe), 및 글리신-글리신-글리신(gly-gly-gly)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 네 개의 아미노산을 갖는 펩타이드의 예는 글리신-글리신-발린-시트룰린(gly-gly-val-cit) 및 글리신-글리신-페닐알라닌-글리신(gly-gly-phe-gly)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 다섯 개의 아미노산을 갖는 펩타이드의 예는 글리신-글리신-발린-시트룰린-글리신(gly-gly-val-cit-gly) 및 글리신-글리신-페닐알라닌-글리신-글리신(gly-gly-phe-gly-gly)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 위의 아미노산 조합은 역순으로(즉, cit-val) 또한 존재할 수 있다.
본 개시내용의 펩타이드는 아미노산 잔기의 L-이성질체 또는 D-이성질체를 포함할 수 있다. 용어 "자연-발생 아미노산"은 Ala, Asp, Asx, Cit, Cys, Glu, Phe, Glx, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, 및 Tyr을 지칭한다. "D-"　는 자연 발생("L-") 아미노산의 배열과 대조적으로 "D"(우선성) 배열을 갖는 아미노산을 지정한다. 본원에 기재된 아미노산은 상업적으로 구입하거나(Sigma Chemical Co., Advanced Chemtech), 당업계에 알려진 방법을 사용하여 합성될 수 있다.
특정 양태에서, 링커 L 및 L50은
및 으로부터 선택된 프로테아제 절단가능한 링커이고;
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고,
Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5는 각각 독립적으로 부재하거나 L- 또는 D-배열의 자연 발생 아미노산 잔기이고, 단, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이며;
은 화학식 (I)의 접합체 내에서 기 X에 대한 또는 화학식 (II)의 접합체 내에서 글루타르아미드 고리의 질소 원자에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 양태에서, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5는 독립적으로 부재하거나, L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-리신, D-리신, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이다.
일부 양태에서, Z1은 부재하거나 글리신이고, Z2는 부재하거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌, 및 글리신으로부터 선택되고; Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, 및 글리신으로부터 선택되고; Z4는 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-리신, D-리신, L-페닐알라민, D-페닐알라닌, 및 글리신으로부터 선택되고; Z5는 부재하거나 글리신이다.
일부 양태에서, L은
이다.
일부 양태에서, q는 5이다.
일부 양태에서, L50은
이다.
일부 양태에서, q는 4이다.
특정 양태에서, L은 피로포스파타제 절단가능한 링커이다.
일부 양태에서, L은 다음인 피로포스파타제 절단가능한 링커이다:
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
특정 양태에서, L은 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커이다.
일부 양태에서, L은 다음으로부터 선택된 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커이다:
및
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고;
----은 부재하거나 결합이고;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
일부 양태에서, L은
이다.
특정 양태에서, L50은 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커이다.
일부 양태에서, L50은
및
으로부터 선택된 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커이고;
식중:
q는 2 내지 10이고;
----은 부재하거나 결합이고;
은 화학식 (II)의 접합체 내에서 글루타르아미드 고리의 질소 원자에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 양태에서, L 및 L50은 생물환원성 링커이다. 생물환원성 링커는 혈장 대비 세포내 구획에서 환원 잠재성의 차이를 이용한다. 종양 세포의 세포질에 존재하는 환원된 글루타티온은 정상 세포의 세포질에 존재하는 것보다 최대 1000배 더 높고, 종양 세포는 또한 세포 구획에서 환원에 기여할 수 있는 효소를 함유한다. 링커는 전신 순환 동안 접합체를 온전하게 유지하고, 글루타티온의 높은 세포내 농도에 의해 선택적으로 절단되어 종양 부위에서 비-독성 전구약물로부터 활성 약물을 방출한다.
일부 양태에서, L 및 L50은 다음으로부터 선택된 생물환원성 링커이다:
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고;
R, R', R'', 및 R'''은 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6알킬)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 2개의 같은자리 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께, 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있고;
은 화학식 (I)의 접합체 내에서 기 X에 대한 또는 화학식 (II)의 접합체 내에서 글루타르아미드 고리의 질소 원자에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
일부 양태에서, L50은
이다.
일부 양태에서, q는 2이다.
특정 양태에서, L은 산-절단가능한 링커이다. 산-절단가능한 링커는 혈액 순환의 중성 pH에서 안정하게 유지되도록 특이적으로 설계되지만, 세포 구획의 산성 환경에서 가수분해를 거쳐 세포독성 약물을 방출한다.
일부 양태에서, L은
및 으로부터 선택된 산-절단가능한 링커이고;
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고;
은 X에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 양태에서, L 및 L50은 클릭-투-릴리스 링커이고, 여기서 신규분해약물의 방출은 테트라진 또는 관련된 화합물에 의해 화학적으로 촉발된다.
일부 양태에서, L 및 L50은
으로부터 선택된 클릭-투-릴리스 링커이고;
식중:
q는 2 내지 10의 정수이고;
은 화학식 (I)의 접합체 내에서 기 X에 대한 또는 화학식 (II)의 접합체 내에서 글루타르아미드 고리의 질소 원자에 대한 부착 지점이고;
은 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
III.B. 결합 모이어티
본 개시내용은 결합 모이어티에 접합된 신규분해약물을 제공한다. 본원에 사용된 용어 "결합 모이어티"는 세포 표면 마커 또는 수용체를 인식하고 이에 결합하는 임의의 분자를 지칭한다. 특정 양태에서, 결합 모이어티는 CD56에 결합한다. 결합 모이어티는, 신규분해약물을 특정 세포, 조직 또는 위치로 표적화하는 것 외에도, 표적 세포 또는 경로에 대한 항증식성(세포증식억제 및/또는 세포독성) 활성과 같은 특정 치료적 효과를 또한 가질 수 있다. 특정 양태에서, 결합 모이어티는 카르복실산, 아민, 티올, 또는 화학적 반응성 아미노산 모이어티 또는 측쇄와 같은 적어도 하나의 화학적 반응성 기를 포함할 수 있거나 포함하도록 조작될 수 있다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는, 주어진 표적 세포 집단에 대하여, CD56과 결합하거나 복합체화하는 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. CD56과의 특이적 결합 또는 복합체화 후, CD56을 발현하는 세포는 신규분해약물 접합체의 흡수를 허용하며, 이는 그 다음 세포 내로 내재화된다.
일부 양태에서, 기 "Bm"은 CD56에 특이적으로 결합할 수 있는 모이어티일 수 있다. 일부 양태에서, 기 "Bm"은 CD56에 결합하는 펩타이드 또는 단백질일 수 있다.
특정 양태에서, 기 "Bm"은 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편일 수 있다. 항체는 특이적 항원을 인식하고 이에 결합할 수 있는 면역 체계에 의해 생성되는 단백질이다. 표적 항원은 일반적으로 다수의 항체 상의 CDR에 의해 인식되는 에피토프라고도 불리는 수많은 결합 부위를 갖고 있다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각각의 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서, 하나의 항원은 1 초과의 상응하는 항체를 가질 수 있다. 본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 단클론 항체, 단일 도메인 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 구체적으로 포함한다. 항체는 뮤린, 인간, 인간화, 키메라 항체일 수 있거나, 또는 다른 종에서 유래될 수 있다.
신규분해약물에 접합될 수 있는 단클론성 항체는 특정 항원성 결정기 (예를 들어, CD56)에 대한 항체의 균질한 집단이다. 관심 항원에 대한 단클론 항체(mAb)는 배양물 중 연속 세포주에 의한 항체 분자의 생산을 제공하는 당업계에 알려진 임의의 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 이들은 하이브리도마 기술, 인간 B 세포 하이브리도마 기술, 및 EBV-하이브리도마 기술을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 이러한 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 면역글로불린 클래스 및 이의 임의의 서브클래스일 수 있다. 본 개시내용에 사용하기 위해 mAb를 생산하는 하이브리도마는 시험관내 또는 생체내에서 배양될 수 있다.　
유용한 단클론 항체는 인간 단클론 항체, 인간화 단클론 항체, 항체 단편, 또는 키메라 인간-마우스(또는 다른 종) 단클론 항체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 인간 단클론 항체는 당업계에 알려진 임의의 수많은 기술에 의해 제조될 수 있다.　
항체는 또한 이중특이적 항체일 수 있다. 이중특이적 항체를 제조하는 방법은 당업계에 알려진다. 전장 이중특이적 항체의 전통적 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동발현을 기반으로 하며, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다. 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 모음으로 인해, 이들 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생산하며, 그 중 하나만이 올바른 이중특이적 구조를 갖는다. 일반적으로 친화도 크로마토그래피 단계를 사용하여 수행되는 올바른 분자의 정제는 다소 번거롭고 생성물 수율이 낮다.　
다른 접근법에 따르면, 원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인(항체-항원 조합 부위)은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 힌지, CH2, 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과 이루어질 수 있다. 제1 중쇄 불변 영역(CH1)은 융합체 중 적어도 하나에 존재하는 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유할 수 있다. 면역글로불린 중쇄 융합체 및 원하는 경우 면역글로불린 경쇄를 인코딩하는 서열을 갖는 핵산은 별도 발현 벡터에 삽입되고 적합한 숙주 유기체에 공동-형질감염된다. 이는 작제에 사용된 3개의 폴리펩타이드 쇄의 불균등한 비율이 최적 수율을 제공하는 경우 양태들에서 3개의 폴리펩타이드 단편의 상호 비율을 조정하는 데 큰 유연성을 제공한다. 그러나, 적어도 2개의 폴리펩타이드 쇄를 동일한 비율로 발현시켜 높은 수율을 초래하는 경우 또는 비율이 특별한 의미가 없는 경우 하나의 발현 벡터에서 2개 또는 모두 3개의 폴리펩타이드 쇄에 대한 코딩 서열을 삽입하는 것이 가능하다.　
이중특이적 항체는 한쪽 아암에 제1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄, 및 다른 쪽 아암에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제2 결합 특이성 제공)을 가질 수 있다. 이 비대칭 구조는 원치 않는 면역글로불린 쇄 조합으로부터 원하는 이중특이적 화합물의 분리를 용이하게 하는데, 이는 이중특이적 분자의 절반에만 있는 면역글로불린 경쇄의 존재가 용이한 분리 방식을 제공하기 때문이다. 이러한 기술을 사용하여, 이중특이적 항체는 본원에 정의된 바와 같은 질환의 치료 또는 예방에서 신규분해약물에 대한 접합을 위해 제조될 수 있다.　
하이브리드 또는 이작용성 항체는 생물학적으로, 즉 세포 융합 기술에 의해 유래되거나, 화학적으로, 특히 가교제 또는 이황화-브릿지 형성 시약을 사용하여 유래될 수 있으며, 전체 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.　
항체는 암 세포 항원, 바이러스 항원, 미생물 항원 또는 종양 세포 또는 기질에 결합된 다른 항체에 면역특이적으로 결합하는 항체의 기능적으로 활성인 단편, 유도체 또는 유사체일 수 있다. 이와 관련하여, "기능적으로 활성"은 단편, 유도체 또는 유사체가 단편, 유도체 또는 유사체가 유래된 항체가 인식하는 것과 동일한 항원을 인식하는 항-항-이디오타입 항체를 유도해낼 수 있음을 의미한다. 구체적으로, 예시적 양태에서, 면역글로불린 분자의 이디오타입의 항원성은 항원을 특이적으로 인식하는 CDR 서열의 C-말단인 프레임워크 및 CDR 서열의 결실에 의해 향상될 수 있다. 어떤 CDR 서열이 항원을 결합시키는지 결정하기 위해, CDR 서열을 함유하는 합성 펩타이드는 당업계에 알려진 임의의 결합 검정 방법에 의해 항원과의 결합 검정에 사용될 수 있다.
다른 유용한 항체는 항체 단편, 예컨대 비제한적으로 항체 분자의 펩신 소화에 의해 생성될 수 있는 가변 영역, 경쇄 불변 영역 및 중쇄의 CH1 도메인을 함유하는 F(ab')2 단편, 및 F(ab')2 단편의 이황화 브릿지를 환원시켜 생성될 수 있는 Fab 단편을 포함한다. 다른 유용한 항체는 항체의 중쇄 및 경쇄 이량체, 또는 이의 임의의 최소 단편 예컨대 Fv 또는 단일 쇄 항체(SCA), 또는 항체와 동일한 특이성을 갖는 임의의 다른 분자이다.　
추가적으로, 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 만들어질 수 있는 인간 및 비-인간 부분을 모두 포함하는 키메라 및 인간화 단클론 항체와 같은 재조합 항체는 유용한 항체이다. 키메라 항체는 뮤린 단클론 및 인간 면역글로불린 불변 영역에서 유래한 가변 영역을 갖는 것과 같이 서로 다른 동물 종에서 서로 다른 부분이 유래된 분자이다. 인간화 항체는 비-인간 종 유래의 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 및 인간 면역글로불린 분자 유래의 프레임워크 영역을 갖는 비-인간 종 유래의 항체 분자이다. 이러한 키메라 및 인간화 단클론 항체는 당업계에 알려진 재조합 DNA 기술에 의해 생성될 수 있다.
완전한 인간 항체는 내인성 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자를 발현할 수 없지만 인간 중쇄 및 경쇄 유전자를 발현할 수 있는 트랜스제닉 마우스를 사용하여 생산될 수 있다. 트랜스제닉 마우스는 선택된 항원, 예를 들어 본 개시내용의 폴리펩타이드의 전부 또는 일부를 사용하여 정상적인 방식으로 면역화된다. 항원에 대해 지시된 단클론 항체는 기존의 하이브리도마 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 트랜스제닉 마우스에 의해서 번식된 인간 면역글로불린 트랜스젠은 B 세포 분화 동안 재배열하고, 그 후 종류 변환 및 체세포 돌연변이를 겪는다. 따라서, 이러한 기술을 사용하여, 치료적으로 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 생산하는 것이 가능하다. 인간 항체를 생산하기 위한 이 기술의 개요에 대하여, Lonberg and Huszar, 1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93을 참조한다. 다른 인간 항체는 예를 들어 Abgenix, Inc.(캘리포니아주 프리먼트) 및 Genpharm(캘리포니아주 새너제이)에서 상업적으로 수득될 수 있다.　
선택된 에피토프를 인식하는 완전한 인간 항체는 "가이드된 선택"으로서 지칭된 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 이 접근법에서 선택된 비-인간 단클론 항체 예를 들어 마우스 항체는 동일한 에피토프를 인식하는 완전한 인간 항체의 선택을 가이드하는 데 사용된다. 인간 항체는 또한 파지 디스플레이 라이브러리를 포함하여 당업계에 알려진 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다.　
항체는 항체 또는 이의 기능적 활성 단편의 융합 단백질일 수 있으며, 예를 들어, 여기서 항체는 항체가 아닌 또 다른 단백질(또는 이의 부분, 예컨대 단백질의 적어도 10개, 20개 또는 50개 아미노산 부분)의 아미노산 서열에 대해 N-말단 또는 C-말단 어느 한쪽에서 공유 결합(예를 들어, 펩타이드 결합)을 통해 융합된다. 항체 또는 이의 단편은 불변 도메인의 N-말단에서 다른 단백질에 공유 연결될 수 있다.　
항체는 변형되는, 즉 이러한 공유 부착이 항체가 이의 항원 결합 면역특이성을 유지하도록 하는 한, 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 변형되는 유사체 및 유도체를 포함한다. 예를 들어, 하지만 제한하려는 것은 아닌, 항체의 유도체 및 유사체는 추가로 변형된, 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 알려진 보호/차단 기에 의한 유도체화, 단백질분해 절단, 세포 항체 단위 또는 다른 단백질에 대한 연결 등에 의해 변형된 것을 포함한다. 특정 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 투니카마이신 존재 하의 대사 합성 등을 포함하되 이에 제한되지는 않는 알려진 기술에 의해 임의의 수많은 화학적 변형이 수행될 수 있다. 추가적으로, 유사체 또는 유도체는 하나 이상의 비천연 아미노산을 함유할 수 있다.　
신규분해약물 접합체에서의 항체는 Fc 수용체와 상호작용하는 아미노산 잔기에 변형(예를 들어, 치환, 결실 또는 부가)을 갖는 항체를 포함할 수 있다. 특히, 항체는 항-Fc 도메인과 FcRn 수용체 사이의 상호작용에 관여하는 것으로 식별된 아미노산 잔기에 변형이 있는 항체를 포함한다. 암 세포 항원에 면역특이적인 항체는 상업적으로 수득될 수 있거나, 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술과 같은 당업자에게 알려진 임의의 방법에 의해 생산될 수 있다. 암 세포 항원에 면역특이적인 항체를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열은, 예를 들어 GenBank 데이터베이스 또는 이와 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물로부터 또는 일상적인 클로닝 및 시퀀싱에 의해 수득될 수 있다.　
특정 양태에서, 신규분해약물 접합체의 항체는 단클론 항체, 예를 들어 뮤린 단클론 항체, 키메라 항체, 또는 인간화 항체일 수 있다. 일부 양태에서, 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fab 단편일 수 있다.　
알려진 항-CD56 항체는 본원에 기재된 신규분해약물에 접합될 수 있다. CD56-발현 암 세포 항원에 면역특이적인 항체는 상업적으로 수득될 수 있거나, 예를 들어 재조합 발현 기술과 같은 당업자에게 알려진 임의의 방법에 의해 생산될 수 있다. 암 세포 항원에 면역특이적인 항체를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열은, 예를 들어 GenBank 데이터베이스 또는 이와 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물로부터 또는 일상적인 클로닝 및 시퀀싱에 의해 수득될 수 있다. 항-CD56 항체의 예는 로르보투주맙이다.
일부 양태에서, 결합 모이어티는 표 A에 있는 항체의 6개 CDR(즉, 가변 중쇄 또는 중쇄의 3개 CDR 및 동일한 항체의 가변 경쇄 또는 경쇄의 3개 CDR)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
용어 "Kabat 넘버링" 및 유사한 용어는 당업계에서 인식되고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄 가변 영역에서 아미노산 잔기를 넘버링하는 체계를 지칭한다. 일부 양태에서, CDR은 Kabat 넘버링 체계에 따라 결정될 수 있다(예를 들어, Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 및 Kabat EA 등, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조). Kabat 넘버링 체계를 사용하면, 항체 중쇄 분자 내의 CDR은 임의로 35 (Kabat 넘버링 스킴에서 35A 및 35B로 지칭됨) 다음에 하나 또는 두 개의 추가 아미노산을 포함할 수 있는 아미노산 위치 31 내지 35 (CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65(CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102 (CDR3)에 전형적으로 존재한다. Kabat 넘버링 체계를 사용하면, 항체 경쇄 분자 내의 CDR은 아미노산 위치 24 내지 34 (CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56 (CDR2) 및 아미노산 위치 89 내지 97 (CDR3)에 전형적으로 존재한다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는 표 A에 있는 항체의 6개 Kabat-정의된 CDR(즉, 가변 중쇄 또는 중쇄의 3개 Kabat-정의된 CDR 및 동일한 항체의 가변 경쇄 또는 경쇄의 3개 Kabat-정의된 CDR)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은 면역글로불린 구조 루프의 위치를 지칭하는 Chothia 넘버링 스킴에 따라 결정될 수 있다(예를 들어, Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B 등, (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C 등, (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A 등, (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82; 및 미국 특허 제7,709,226호 참조). 전형적으로, Kabat 넘버링 규약을 사용하는 경우 Chothia CDR-H1 루프는 중쇄 아미노산 26 내지 32, 33 또는 34에 존재하고, Chothia CDR-H2 루프는 중쇄 아미노산 52 내지 56에 존재하며, Chothia CDR-H3 루프는 중쇄 아미노산 95 내지 102에 존재하는 반면, Chothia CDR-L1 루프는 경쇄 아미노산 24 내지 34에 존재하고, Chothia CDR-L2 루프는 경쇄 아미노산 50 내지 56에 존재하며, Chothia CDR-L3 루프는 경쇄 아미노산 89 내지 97에 존재한다. Kabat 넘버링 규약을 사용하여 넘버링한 경우 Chothia CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 달라진다(이것은 Kabat 넘버링 스킴이 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문이며; 35A와 35B가 모두 없다면, 루프는 32에서 끝나고; 35A만 있다면, 루프는 33에서 끝나며; 35A와 35B가 모두 있다면, 루프는 34에서 끝남).
일부 양태에서, 결합 모이어티는 표 A에 있는 항체의 6개 Chotia-정의된 CDR(즉, 가변 중쇄 또는 중쇄의 3개 Chotia-정의된 CDR 및 동일한 항체의 가변 경쇄 또는 경쇄의 3개 Chotia-정의된 CDR)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이며, 여기서 Chotia 및 Kabat CDR은 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는 표 A에 있는 항체의 Kabat CDR과 Chothia CDR의 조합을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 CDR은 Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136 및 Lefranc M-P 등, (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212에 기재된 바와 같은 IMGT 넘버링 체계에 따라 결정될 수 있다. IMGT 넘버링 스킴에 따르면, VH-CDR1은 위치 26 내지 35에 있고, VH-CDR2는 위치 51 내지 57에 있고, VH-CDR3은 위치 93 내지 102에 있고, VL-CDR1은 위치 27 내지 32에 있고, VL-CDR2는 위치 50 내지 52에 있고, VL-CDR3은 위치 89 내지 97에 있다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는, 예를 들어 Lefranc M-P (1999) 상기 및 Lefranc M-P 등, (1999) 상기에 기재된 바와 같은 표 A에 있는 항체의 6개 IMGT-정의된 CDR(즉, 가변 중쇄 또는 중쇄의 3개의 IMGT-정의된 CDR 및 동일한 항체의 가변 경쇄 또는 경쇄의 3개의 IMGT-정의된 CDR)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은 MacCallum RM 등, (1996) J Mol Biol 262: 732-745에 따라 결정될 수 있다. 또한, 예를 들어, Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," in Antibody Engineering, Kontermann and Dubel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)을 참조한다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는, 예를 들어 MacCallum RM 등의 방법에 의해 결정된 표 A에 있는 항체의 6개 MacCallum-정의된 CDR(즉, 가변 중쇄 또는 중쇄의 3개의 MacCallum-정의된 CDR 및 동일한 항체의 가변 경쇄 또는 경쇄의 3개의 MacCallum-정의된 CDR)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은 Kabat CDR과 Chothia 구조 루프 사이의 절충을 나타내는 AbM 초가변 영역을 지칭하는 AbM 넘버링 스킴에 따라 결정될 수 있으며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular Group, Inc.)에 의해 사용된다. 일부 양태에서, 결합 모이어티는 AbM 넘버링 스킴에 의해 결정된 표 A에 있는 항체의 6개의 AbM-정의된 CDR(즉, 가변 중쇄 또는 중쇄의 3개의 AbM-정의된 CDR 및 동일한 항체의 가변 경쇄 또는 경쇄의 3개의 AbM-정의된 CDR)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 양태에서, 결합 모이어티는 CD56에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD56에 결합하고 표 A에 제공된 항-CD56 항체의 6개의 CDR (예를 들어, 서열번호:2 내지 7의 아미노산 서열을 포함하는 6개의 CDR)을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD56에 결합하고 표 A에 제공된 항-CD56 항체의 VH (예를 들어, 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VH)를 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD56에 결합하고 표 A에 제공된 항-CD56 항체의 VL (예를 들어, 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VH)을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD56에 결합하고 표 A에 제공된 항-CD56 항체의 VH 및 VL (예를 들어, 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL)을 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD56에 결합하고 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD56에 결합하고 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 불변 영역을 포함한다. 링커는 불변 영역의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CH1 도메인을 포함한다. 링커는 CH1 도메인의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CH2 도메인을 포함한다. 링커는 CH2 도메인의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CH3 도메인을 포함한다. 링커는 CH3 도메인의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CL 도메인을 포함한다. 링커는 CL 도메인의 아미노산에 부착될 수 있다.
일부 양태에서, 불변 영역, CH1 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 CL 도메인은 조작된 불변 영역, CH1 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인 또는 CL 도메인이다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 중쇄 불변 영역을 포함한다. 링커는 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 중쇄 불변 영역의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 IgG 중쇄 불변 영역을 포함한다. 링커는 IgG 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 IgG 중쇄 불변 영역의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 링커는 IgG1 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 IgG1 중쇄 불변 영역의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 링커는 IgG4 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 IgG4 중쇄 불변 영역의 아미노산에 부착될 수 있다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 경쇄 불변 영역을 포함한다. 링커는 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 경쇄 불변 영역의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카파 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다. 링커는 카파 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 경쇄 불변 영역의 아미노산에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 감마 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 감마 경쇄 불변 영역을 포함한다. 링커는 감마 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 감마 경쇄 불변 영역의 아미노산에 부착될 수 있다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 EU 넘버링에 따른 중쇄 위치 S239에서 조작된 시스테인을 포함한다. 링커는 S239C에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 EU 넘버링에 따른 중쇄 위치 K334에서 조작된 시스테인을 포함한다. 링커는 K334C에 부착될 수 있다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 야생형 Fc 도메인에 비해 감소된 이펙터 기능을 갖는 Fc 도메인을 포함한다. 이러한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 감소된 독성을 가질 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EU 넘버링에 따른 N297A 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 EU 넘버링에 따른 LALA (L234A 및 L235A) 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 EU 넘버링에 따른 N297A 돌연변이 및 EU 넘버링에 따른 LALA (L234A 및 L235A) 돌연변이를 포함한다.
따라서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호:13, 서열번호:14, 또는 서열번호:15의 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호:16의 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호:17의 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호:18의 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호:19의 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 링커는 EU 넘버링에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 Q295에 부착될 수 있다.
분자 표적 또는 관심 항원을 "결합시키는" 항체는 항체가 항원을 발현하는 세포를 표적화하는 데 유용하도록 충분한 친화도로 해당 항원을 결합시킬 수 있는 것이다.
본 개시내용에서, 기 "Bm"은 하나 초과의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 양태에서, "Bm"은 1 내지 10개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 양태에서, "Bm"은 1 내지 9개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 양태에서, "Bm"은 1 내지 8개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 양태에서, "Bm"은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 양태에서, "Bm"은 7 또는 8개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 양태에서, "Bm"은 4개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 양태에서, "Bm"은 5개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 양태에서, "Bm"은 6개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 양태에서, "Bm"은 7개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 양태에서, "Bm"은 8개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 양태에서, "Bm"은 9개의 신규분해약물에 접합된다.
IV. 조성물 및 사용 방법
본원에 기재된 접합체는 약학적으로 또는 약학적으로 허용가능한 염의 형태일 수 있다. 일부 양태에서, 이러한 염은 무기 또는 유기 산 또는 염기에서 유래된다.
적합한 산 부가 염의 예는 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠 술포네이트, 바이술페이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캠퍼 술포네이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 다이글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 염산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소산염, 2-하이드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말리에이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐-프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 토실레이트 및 운데카노에이트를 포함한다.
적합한 염기 부가염의 예는 암모늄 염; 나트륨 염 및 칼륨 염과 같은 알칼리 금속 염; 칼슘 염 및 마그네슘 염과 같은 알칼리 토금속 염; 디사이클로헥실아민 염, N-메틸-D-글루카민과 같은 유기 염기를 가진 염; 및 아르기닌, 라이신 등과 같은 아미노산을 가진 염을 포함한다.
예를 들어, 버지(Berge)는 하기 FDA-승인된 시판 염을 나열한다. 음이온 아세테이트, 베실레이트(벤젠설포네이트), 벤조에이트, 비카보네이트, 비타트레이트, 브로마이드, 칼슘 에데테이트(에틸렌디아민테트라아세테이트), 캄실레이트(캄포설포네이트), 카보네이트, 클로라이드, 시트레이트, 디하이드로클로라이드, 에데테이트(에틸렌디아민테트라아세테이트), 에디실레이트(1,2-에탄디설포네이트), 에스톨레이트(라우릴 설페이트), 에실레이트(에탄설포네이트), 푸마레이트, 글루셉테이트(글루코헵토네이트), 글루코네이트, 글루타메이트, 글리콜릴아르사닐레이트(글리콜아미도페닐아르소네이트), 헥실레조시네이트, 하이드라바민(N,N'디(데하이드로아비에틸)에틸렌디아민), 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드록시나프토에이트, 아이오다이드, 이세티오네이트(2-하이드록시에탄설포네이트), 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트(메탄설포네이트), 메틸브로마이드, 메틸나이트레이트, 메틸설페이트, 무케이트, 납실레이트(2-나프탈렌설포네이트), 니트레이트, 파모에이트(엠보네이트), 판토테네이트, 포스페이트/디포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 서브아세테이트, 석시네이트, 설페이트, 탄네이트, 타르트레이트, 테오클레이트(8-클로로테오필리네이트) 및 트리에티오다이드; 유기 양이온 벤자틴(N,N'-디벤질에틸렌디아민), 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민(N-메틸글루카민) 및 프로카인; 및 금속 양이온 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨 및 아연.
버지는 추가적으로 하기 비-FDA-승인된 시판(미국 이외의 지역) 염을 나열한다: 음이온 아디페이트, 알지네이트, 아미노살리실레이트, 안하이드로메틸렌시트레이트, 아레콜린, 아스파르테이트, 비설페이트, 부틸브로마이드, 캄포레이트, 디글루코네이트, 디하이드로브로마이드, 디석시네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 하이드로플루오라이드, 하이드로아이오다이드, 메틸렌비스(살리실레이트), 나파디실레이트(1,5-나프탈렌디설포네이트), 옥살레이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 페닐에틸바르비투레이트, 피크레이트, 프로피오네이트, 티오시아네이트, 토실레이트 및 운데카노에이트; 유기 양이온 벤에타민(N-벤질펜에틸아민), 클레미졸(1-p-클로로벤질-2-피롤리딘-1'-일메틸벤즈이미다졸), 디에틸아민, 피페라진 및 트로메타민(트리스(하이드록시메틸)아미노메탄); 및 금속 양이온 바륨 및 비스무트.
본원에 기재된 신규분해약물 접합체를 포함하는 약학적 조성물은 또한 투여 방식에 따라 상이할 수 있는 적합한 담체, 부형제, 및 보조제를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 약학적 조성물은 적합한 비경구 투약 형태로서 제형화될 수 있다. 상기 제형은 당업계에 알려진 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 약학적 조성물은 혈류로, 근육으로, 또는 직접 기관으로 투여될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 수단은 정맥내, 동맥내, 복강내, 척수강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 및 피하를 포함한다. 비경구 투여에 적합한 장치는 바늘 주사기, 무침 주사기, 및 주입 기술을 포함한다.
비경구 조성물은 전형적으로 염, 탄수화물 및 완충제와 같은 부형제를 함유할 수 있는 수성 용액이다. 그러나 조성물은 또한 멸균 비수성 용액으로 제형화되거나 발열원이 없는 멸균수와 같은 적합한 비히클과 함께 사용되기 위해 건조 형태로 제형화될 수 있다.
예를 들어, 동결건조에 의한 멸균 조건 하의 비경구 조성물의 제조는 당업자에게 잘 알려진 표준 기술을 사용하여 용이하게 달성될 수 있다.
비경구 투여용 조성물은 즉시 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다. 변형 방출 제형은 지연 방출, 지속 방출, 펄스 방출, 제어 방출, 표적 방출, 및 프로그래밍된 방출을 포함한다. 따라서, 조성물은 활성제의 변형 방출을 제공하는 이식 저장소로서 투여하기 위한 고체, 반고체, 또는 요변성 액체로서 제형화될 수 있다.
비경구 제형은 비경구 투여 형태에 사용되는 다른 적합한 약학적으로 허용가능한 부형제, 예컨대 비제한적으로 보존제와 혼합될 수 있다.
또 다른 양태에서, 약학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 펠릿, 현탁액, 용액, 에멀젼 등과 같은 적합한 경구 투약 형태로서 제형화될 수 있다. 다른 적합한 담체, 예컨대 붕해제, 희석제, 킬레이트화제, 결합제, 활택제, 윤활제, 충전제, 증량제, 부착 방지제 등이 존재할 수 있다.
경구 투약 제형은 또한 감미제, 비히클/습윤제, 착색제, 향미제, 보존제, 점도 향상제/증점제 등과 같은 다른 적합한 약학적 부형제를 함유할 수 있다.
본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 다양한 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 개시내용의 특정 접합체는 효능 발현, 약동학(예를 들어, 흡수, 분포, 대사, 배설), 용해성(예를 들어, 수용성), 다른 약제와의 상호작용(예를 들어, 약물-대사 효소 억제 작용), 안전성(예를 들어, 급성 독성, 만성 독성, 유전적 독성, 생식 독성, 심장 독성, 발암성, 중추 독성) 및/또는 안정성(예를 들어, 화학적 안정성, 효소에 대한 안정성) 측면에서 우수할 수 있고 약제로서 유용할 수 있다.
본 개시내용의 신규분해약물 접합체는 질환, 예를 들어, 암, -예를 들어, CD56-양성 암의 예방 또는 치료를 위한 제제와 같은 약제로서 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 암은 신경내분비암 (예를 들어, 신경모세포종 또는 신경내분비 전립선암), 폐암 (예를 들어, 소세포 폐암 (SCLC)), 또는 육종이다.
또한, 본 개시내용의 신규분해약물 접합체는 비-약물 요법과 동시에 사용될 수 있다. 정확하게 말하면, 접합체는 (1) 수술, (2) 안지오텐신 II 등을 이용한 고혈압 화학 요법, (3) 유전자 요법, (4) 온열 요법, (5) 냉동 요법, (6) 레이저 소작 및 (7) 방사선 요법과 같은 비-약물 요법과 조합할 수 있다.
예를 들어, 전술한 수술 전후 등에 본 개시내용의 신규분해약물 접합체를 사용함으로써, 내성 출현 예방, 무질환 생존 연장, 암 전이 또는 재발 억제, 수명 연장 등과 같은 효과가 제공될 수 있다.
또한, 하기 지지 요법과 본 개시내용의 신규분해약물 접합체를 이용한 치료를 조합하는 것이 가능하다: (i) 각종 감염성 질환의 합병증을 위한 항생제(예를 들어, 판스포린 등과 같은 -락탐 유형, 클라리트로마이신과 같은 마크로라이드 유형 등)의 투여, (ii) 영양실조 개선을 위한 고칼로리 수혈, 아미노산 제제 또는 일반 비타민 제조물 투여, (iii) 통증 완화를 위한 모르핀 투여, (iv) 구역질, 구토, 식욕 부진, 설사, 백혈구 감소증, 혈소판 감소증, 헤모글로빈 농도 감소, 탈모, 간병증, 신장병증, DIC, 발열 등과 같은 부작용 호전용 약학적 제제 투여 및 (v) 암 등의 다제 내성을 억제하기 위한 약학적 제제의 투여.
일부 양태에서, 본 개시내용의 접합체는 표준 치유 요법, 예를 들어 하나 이상의 치료적 제제(예를 들어 항암제 및/또는 면역조절제)와 조합하여 사용될 수 있다. 따라서, 특정 양태에서, 본원에 개시된 종양을 치료하는 방법은 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 본 개시내용의 접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 접합체는 면역 경로의 다중 요소가 표적화될 수 있도록 하나 이상의 항암제와 조합으로 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 항암제는 면역 관문 억제제를 포함한다(즉, 특정 면역 관문 경로를 통한 신호전달을 차단한다). 본 방법에 사용될 수 있는 면역 관문 억제제의 비-제한 예는 CTLA-4 길항제(예를 들어, 항-CTLA-4 항체), PD-1 길항제(예를 들어, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체), TIM-3 길항제(예를 들어, 항-TIM-3 항체), 또는 이들의 조합을 포함한다. 조합 치료의 포괄적 및 비-제한 목록은 본 출원의 조합 치료 섹션에 자세히 개시되어 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 접합체는 추가 치료적 제제의 투여 전 또는 후에 대상체에게 투여된다. 다른 양태에서, 본 개시내용의 접합체는 추가 치료적 제제와 동시에 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 본 개시내용의 접합체 및 추가 치료적 제제는 약학적으로 허용가능한 담체에서 단일 조성물로서 동시에 투여될 수 있다. 다른 양태에서, 본 개시내용의 접합체 및 추가 치료적 제제는 별도 조성물로서 동시에 투여된다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 접합체로 치료될 수 있는 대상체는 비인간 동물 예컨대 랫트 또는 마우스이다. 일부 양태에서, 치료될 수 있는 대상체는 인간이다.
V. 신규분해약물 및 조성물의 제조 방법
일반 합성 방법 및 중간체
본 개시내용의 화합물은 본 개시내용 및 당업계의 지식에 비추어 및/또는 아래 제시된 반응식 및 합성예를 참조하여 당업자에 의해 제조될 수 있다. 예시적 합성 루트는 아래 반응식 및 실시예에 제시되어 있다. 하기 반응식 및 실시예에 나타나는 변수(예를 들어, "R" 기)가 본 출원의 다른 곳에 나타나는 변수와 독립적으로 판독되어야 한다는 점을 이해해야 한다. 당업자는 아래 제시된 반응식 및 실시예가 본원에 기재된 화합물의 제조를 어떻게 예시하는지 쉽게 이해할 것이다.
실시예
일반 합성 방법 및 중간체
본 개시내용의 화합물은 본 개시내용 및 당업계의 지식에 비추어 및/또는 아래 제시된 반응식 및 합성예를 참조하여 당업자에 의해 제조될 수 있다. 예시적 합성 루트는 아래 반응식 및 실시예에 제시되어 있다. 하기 반응식 및 실시예에 나타나는 변수(예를 들어, "R" 기)가 본 출원의 다른 곳에 나타나는 변수와 독립적으로 판독되어야 한다는 점을 이해해야 한다. 당업자는 아래 제시된 반응식 및 실시예가 본원에 기재된 화합물의 제조를 어떻게 예시하는지 쉽게 이해할 것이다.
반응식에서 사용된 약어는 일반적으로 당업계에서 사용된 관행을 따른다. 본 명세서 및 실시예에 사용된 화학적 약어는 하기와 같이 정의된다: (트리스(2-카복시에틸)포스핀)의 경우 "TCEP" 그리고 에틸렌디아민테트라아세트산의 경우 "EDTA".
실시예 1: 화합물 (III)의 합성
화합물 (III)을 본원에 참조로 전문이 포함된 WO2021/198965에 기재된 절차를 사용하여 제조하였다.
실시예 2: 화합물 (IV) 및 (IV-1)의 합성
화합물 (IV)을 본원에 참조로 전문이 포함된 WO2021/198965에 기재된 절차를 사용하여 제조하였다.
화합물 (IV-1)을 본원에 참조로 전문이 포함된 WO2022/254376에 기재된 절차를 사용하여 제조하였다.
실시예 3: 화합물 (III) - 항체 CD56-A DAR3.7 접합체 (접합체 (V))의 제조 및 특성규명
20 mM 히스티딘, 250 mM 수크로스 pH 6.5 중 10.7 mg/mL의 항체 CD56-A를 2.3 당량 TCEP와 1.5시간 동안 37 C에서 반응시켰다. 부분적으로 환원된 항체를 NAP 탈염 컬럼을 사용하여 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0으로 완충액 교환하였다. 그 다음 3.20 mg/mL 환원된 항체 + 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0 중 12 당량 화합물 (III) + 10% DMA를 주위 온도에서 1시간 동안 반응시킨 후, 0.01 부피의 100 mM N-아세틸시스테인으로 켄칭하였다.　생성된 접합체를 NAP25 컬럼에서 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5로 용출하는 2회차의 겔 여과를 사용하여 정제하였다. 접합체의 농축을 50K MWCO 원심분리 농축기를 사용하여 실시하였다. 그 다음 접합체를 0.22 um PVDF 시린지 필터를 통해 멸균 여과하였다. 최종 정제된 접합체는 천연 SEC-MS에 의해 3.7의 DAR, 4.45 mg/mL 단백질 농도, 99.6% 단량체, 및 2.3% 비접합 소분자를 가졌다(도 1). DAR을 표 1에 나타나는 각 피크 강도의 가중 평균을 사용하여 계산하였다.
실시예 4: 화합물 (III) - 항체 CD56-A DAR8 접합체 (접합체 (VI))의 제조 및 특성규명
20 mM 히스티딘, 250 mM 수크로스 pH 6.5 중 10.7 mg/mL의 항체 CD56-A를 10 당량 TCEP와 1.5시간 동안 37 C에서 반응시켰다. 완전히 환원된 항체를 NAP 탈염 컬럼을 사용하여 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0으로 완충액 교환하였다. 그 다음 3.20 mg/mL 환원된 항체 + 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0 중 12 당량 화합물 (III) + 10% DMA를 주위 온도에서 1시간 동안 반응시킨 후, 0.01 부피의 100 mM N-아세틸시스테인으로 켄칭하였다.　생성된 접합체를 NAP25 컬럼에서 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5로 용출하는 2회차의 겔 여과를 사용하여 정제하였다. 접합체의 농축을 50K MWCO 원심분리 농축기를 사용하여 실시하였다. 그 다음 접합체를 0.22 um PVDF 시린지 필터를 통해 멸균 여과하였다.　최종 정제된 접합체는 환원 LC-MS에 의해 8의 DAR, 3.16 mg/mL 단백질 농도, 98.1% 단량체, 및 0.6% 비접합 소분자를 가졌다(도 2). 도면에 도시된 바와 같이, 접합체는 각 경쇄에 부착된 1개의 링커-페이로드 분자 및 각 중쇄에 부착된 3개의 링커-페이로드를 가지며, 이는 8의 DAR과 일치한다.
실시예 5: 화합물 (III) - 항체 CD56-B DAR3.6 접합체 (접합체 (VII))의 제조 및 특성규명
20 mM 히스티딘, 250 mM 수크로스 pH 6.5 중 9 mg/mL의 항체 CD56-B를 2.3 당량 TCEP와 1.5시간 동안 37 C에서 반응시켰다. 환원된 항체를 NAP 탈염 컬럼을 사용하여 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0으로 완충액 교환하였다. 그 다음 3.20 mg/mL 환원된 항체 + 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0 중 12 당량 화합물 (III) + 10% DMA를 주위 온도에서 1시간 동안 반응시킨 후, 0.01 부피의 100 mM N-아세틸시스테인으로 켄칭하였다.　생성된 접합체를 NAP25 컬럼에서 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5로 용출하는 2회차의 겔 여과를 사용하여 정제하였다. 접합체의 농축을 50K MWCO 원심분리 농축기를 사용하여 실시하였다. 그 다음 접합체를 0.22 um PVDF 시린지 필터를 통해 멸균 여과하였다. 최종 정제된 접합체는 천연 SEC-MS에 의해 3.6의 DAR, 4.1 mg/mL 단백질 농도, 100% 단량체, 및 <2.1% 비접합 소분자를 가졌다(도 3). DAR을 표 2에 나타나는 각 피크 강도의 가중 평균을 사용하여 계산하였다.
실시예 5-1: 화합물 (III) - 항체 CD56-B DAR8 접합체 (접합체 (VIII))의 제조 및 특성규명
20 mM 히스티딘, 250 mM 수크로스 pH 6.5 중 9 mg/mL의 항체 CD56-B를 10 당량 TCEP와 1.5시간 동안 37 C에서 반응시켰다. 완전히 환원된 항체를 NAP 탈염 컬럼을 사용하여 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0으로 완충액 교환하였다. 그 다음 3.20 mg/mL 환원된 항체 + 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0 중 12 당량 화합물 (III) + 10% DMA를 주위 온도에서 1시간 동안 반응시킨 후, 0.01 부피의 100 mM N-아세틸시스테인으로 켄칭하였다.　생성된 접합체를 NAP25 컬럼에서 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5로 용출하는 2회차의 겔 여과를 사용하여 정제하였다. 접합체의 농축을 50K MWCO 원심분리 농축기를 사용하여 실시하였다. 그 다음 접합체를 0.22 um PVDF 시린지 필터를 통해 멸균 여과하였다. 최종 정제된 접합체는 환원 LC-MS에 의해 8의 DAR, 4.54 mg/ml 단백질 농도, 99% 단량체, 및 2.88% 비접합 소분자를 가졌다(도 4). 도면에 도시된 바와 같이, 접합체는 각 경쇄에 부착된 1개의 링커-페이로드 분자 및 각 중쇄에 부착된 3개의 링커-페이로드를 가지며, 이는 8의 DAR과 일치한다.
실시예 5-2: 화합물 (IV-1) - 항체 CD56-B DAR4.0 접합체 (접합체 IX)의 제조 및 특성규명
20 mM 히스티딘, 250 mM 수크로스 pH 6.5 중 6 mg/mL의 항체 CD56-B를 2.0 당량 TCEP를 2시간 동안 37 ℃에서 반응시켰다. 환원된 항체를 Zeba 탈염 컬럼을 사용하여 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0으로 완충액 교환하였다. 그 다음 4.5 mg/mL 환원된 항체 + 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0 중 7 당량 화합물 (IV-1) + 10% DMA 를 22 ℃에서 1시간 동안 반응시켰다.　생성된 접합체를 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5, 10% DMA로, 그 다음 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5로 용출하는 Zeba 탈염 컬럼을 사용하는 2회차의 여과를 사용하여 정제하였다. 접합체의 농축을 50K MWCO 원심분리 농축기를 사용하여 실시하였다. 그 다음 접합체를 0.22 um PVDF 시린지 필터를 통해 멸균 여과하였다.　최종 정제된 접합체는 천연 SEC-MS에 의해 4.1의 DAR, 5.1 mg/mL 단백질 농도, 100% 단량체, 및 <2.3% 비접합 소분자를 가졌다(도 7). DAR을 표 2-1에 나타나는 각 피크 강도의 가중 평균을 사용하여 계산하였다.
실시예 5-3: 화합물 (IV) - 항체 CD56-B DAR4.0 접합체 (접합체 (X))의 제조 및 특성규명
20 mM 히스티딘, 250 mM 수크로스 pH 6.5 중 6 mg/mL의 항체 CD56-B를 2.0 당량 TCEP를 2시간 동안 37 ℃에서 반응시켰다. 환원된 항체를 Zeba 탈염 컬럼을 사용하여 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0으로 완충액 교환하였다. 그 다음 4.5 mg/mL 환원된 항체 + 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0 중 7 당량 화합물 (IV) + 10% DMA 를 22 ℃에서 1시간 동안 반응시켰다.　생성된 접합체를 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5, 10% DMA로, 그 다음 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5로 용출하는 Zeba 탈염 컬럼을 사용하는 2회차의 여과를 사용하여 정제하였다. 접합체의 농축을 50K MWCO 원심분리 농축기를 사용하여 실시하였다. 그 다음 접합체를 0.22 um PVDF 시린지 필터를 통해 멸균 여과하였다. 최종 정제된 접합체는 천연 SEC-MS에 의해 4.0의 DAR, 4.6 mg/mL 단백질 농도, 100% 단량체, 및 <2.3% 비접합 소분자를 가졌다(도 8). DAR을 표 2-2에 나타나는 각 피크 강도의 가중 평균을 사용하여 계산하였다.
본원에 기재된 다른 접합체를 적절한 화합물 및 항체를 대체하는 상기 기재된 방법에 의해 제조할 수 있다.
실시예 6:시험관내 세포독성 검정 I
인간 SCLC 세포주(NCI-H526) 및 인간 신경모세포종(NB) 세포주(IMR32)를 사용하여 화합물 (III) - 항체 CD56-B 접합체 DAR8(접합체 (VIII)) 및 화합물 (III) - 항체 CD56-B 접합체 DAR 3.6(접합체 (VII)), 비접합 항체 CD56-B, 신규분해약물 P1(WO2021/198965로부터), CC-885, 및 화합물 (III)과 비-결합 대조군 항체(항체-NBC)를 함유하는 접합체를 비교하기 위해 세포독성 검정을 수행하였다. 세포주를 수확하였고 96-웰 플레이트에 플레이팅하였다. 밤새 인큐베이션 후, 세포를 접합체 (VIII), 접합체 (VII), 비접합 항체 CD56-B, 신규분해약물 P1, 화합물 (III) - 항체-NBC DAR3.9 접합체 (비-결합 대조군 접합체), 또는 CC-885 (Celgene)의 연속 희석물로 120시간 동안 처리하였다. 세포 생존율을 비색 WST-8 검정(Dojindo Molecular Technologies, Inc.)에 의해 결정하였다. OD450 값을 SpectraMax M5 플레이트 판독기를 사용하여 판독하였다. 값을 각 세포주에 대하여 정규화하였고, IC50 값을 Prism 소프트웨어를 사용하여 계산하였다. 표 3에 나타낸 바와 같이, 화합물 (III) - 항체 CD56-B 접합체는 NCI-H526 및 IMR32 세포주에서 세포독성 활성을 나타내었고, 비접합 항체 또는 신규분해약물 P1보다 더 강력하였다.
실시예 7:시험관내 세포독성 검정 II
5개의 소세포 폐암(SCLC) 세포주(NCI-H526, NCI-H146, NCI-H82, NCI-H1048, NCI-H510A)를 사용하여 화합물 (III)-항체 CD56-B DAR8 접합체(접합체 (VIII))와 화합물 (III)- 항체 CD56-A DAR8 접합체(접합체 (VI))를 비교하기 위해 세포독성 검정을 수행하였다. 세포주를 수확하였고 96-웰 플레이트에 플레이팅하였다. 밤새 인큐베이션 후, 세포를 접합체 (VIII), 접합체 (VI), 화합물 (III) - 항체-NBC DAR3.9 접합체 (비-결합 대조군 접합체), 또는 CC-885의 연속 희석물로 120시간 동안 처리하였다. 세포 생존율을 비색 WST-8 검정(Dojindo Molecular Technologies, Inc.)에 의해 결정하였다. OD450 값을 SpectraMax M5 플레이트 판독기를 사용하여 판독하였다. 값을 각 세포주에 대하여 정규화하였고, IC50 값을 Prism 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.
표 4에 나타낸 바와 같이, 접합체 (VIII) 및 접합체 (VI)는 모든 SCLC 세포주에서 유사한 성장 억제 효과를 가졌고, IC50-값은 1.15x10-10 내지 1.18x10-12 M 범위이었다. 동일한 세포주 패널에서, 비-결합 접합체(화합물(III)-항체-NBC DAR 3.9)로의 처리는 SCLC 성장 억제를 나타내지 않았다. 이는 접합체 (VIII) 및 접합체 (VI)의 항증식 활성이 특이적이고 항원-의존적임을 입증한다.
실시예 8: 시험관내 세포독성 검정 III
인간 SCLC 세포주(NCI-H526) 및 인간 신경모세포종(NB) 세포주(IMR32)를 사용하여 화합물 (III) - 항체 CD56-B DAR8(접합체 (VIII))과 화합물 (III)-항체 CD56-B DAR 3.6(접합체 (VII))을 비교하기 위해 세포독성 검정을 수행하였다. 세포주를 수확하였고 96-웰 플레이트에 플레이팅하였다. 밤새 인큐베이션 후, 세포를 접합체 (VIII), (접합체 VII), 화합물 (III) - 항체-NBC DAR3.9 접합체 (비-결합 대조군 접합체), 또는 CC-885의 연속 희석물로 120시간 동안 처리하였다. 세포 생존율을 비색 WST-8 검정(Dojindo Molecular Technologies, Inc.)에 의해 결정하였다. OD450 값을 SpectraMax M5 플레이트 판독기를 사용하여 판독하였다. 값을 각 세포주에 대하여 정규화하였고, IC50 값을 Prism 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.
표 5에 나타난 바와 같이, NCI-H526(SCLC) 및 IMR32(NB) 세포주에서 접합체(VIII) 및 접합체(VII)에서 항증식 효과를 관찰하였으며, 전자가 보다 강력한 효과를 나타내었다. 대조적으로, 비-결합 대조군 접합체인 화합물 (III) - 항체-NBC DAR3.9 접합체는 이들 세포주에 대해 세포독성 효과를 갖지 않았다.
실시예 9:시험관내 세포독성 검정 IV
다른 암 세포주에서 화합물 (III) - 항체 CD56-B DAR8 접합체 (접합체 (VIII))의 항증식 효과를 확인하기 위해 세포독성 검정을 수행하였다. 접합체 (VIII)로 처리하기 하루 전에 각 테스트된 암 세포주를 수확하였고 96-웰 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 접합체 (VIII)로 5일 동안 처리하였다. 그 다음 세포 생존율을 Cell Counting 키트-8 (Dojindo) 또는 CellTiter-Glo® 시약 (Promega)으로 검출하였다. 값을 각 세포주에 대하여 처리되지 않은 대조군으로 정규화하였고, IC50 값을 Prism 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.
표 6에 나타난 바와 같이, 3개의 육종 세포주(Aska-SS, SJCRH30 및 RH41), 접합체 (VIII)는 8.09 내지 2.02x10-11M 범위의 IC50 값으로 유사한 성장 억제 효과를 나타내었다. 인간 신경모세포종 세포주(KPNRTBM1, NB1, CHP134 및 IMR32)에서, 접합체(VIII)는 또한 1.23x10-10 내지 2.35x10-13 M 범위의 IC50 값을 나타내었다. 그들 중, KPNRTBM1은 접합체 (VIII)로 처리된 때 매우 민감한 항증식 효과를 가졌다. 인간 NCIH660 신경내분비 전립선암 (NEPC) 세포주에서, 접합체 (VIII)는 0.3nM의 IC50을 나타내었다. 요약하면, 접합체 (VIII)는 여러 종양 세포주에 대해 강력한 효능을 나타내었다.
실시예 10: 생체내 활성 연구 I
NCI-H660 인간 전립선암 종양 세포 (0.1 mL 중 1X107 세포)를 수컷 BALB/c 누드 마우스의 옆구리에 피하 접종하였다. 평균 종양 부피가 대략 100-150 mm3에 도달했을 때 치료를 개시하였다. 마우스를 정맥내(IV) 투여된 (20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5 중) 10 mg/㎏의 용량으로 화합물 (III) - 항체 CD56-B DAR8 접합체 (접합체 (VIII)), 또는 화합물 (IV) - 항체 CD56-B DAR8 접합체의 단일 용량으로 치료하였다. 종양 크기 및 마우스 체중을 주당 2회 측정하였다. 종양 부피(mm3)를 하기 식으로 계산하였다: (a x b2/2) 식중 'b'는 최단축이고 'a'는 최장축임. 개별 마우스에 대한 종양 부피가 ≥ 2,000mm3 또는 60일째 중 먼저 도래하는 경우 마우스를 연구에서 제외하였다.
도 5a에 도시된 바와 같이, 접합체 (VIII)는 화합물 (IV) - 항체 CD56-B DAR8 접합체보다 약간 우수한 것으로 관찰되었다. 도 5b는 각 용량 그룹에 걸쳐 시간에 따른 개별 종양 부피를 도시한다. 도 5c는 연구 과정에 걸쳐 각 용량 그룹의 마우스에 대한 평균 체중을 도시한다. 연구 기간 동안 다른 총 임상 이상은 관찰되지 않았다.
실시예 11: 생체내 활성 연구 II
NCI-H1048 인간 폐암 세포 (0.1 mL 중 3X10 6 세포)를 암컷 BALB/c 누드 마우스의 옆구리에 피하 접종하였다. 평균 종양 부피가 종양 세포 접종 후 12일째에 대략 100 mm3의 평균에 도달한 때 치료를 개시하였다. 마우스를 정맥내(IV) 투여된 (20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5 중) 10 mg/㎏의 용량으로 화합물 (III) - 항체 CD56-A 8 DAR 접합체 (접합체 (VI))의 단일 용량으로 치료하였다. 종양 크기 및 마우스 체중을 주당 2회 측정하였다. 종양 부피(mm3)를 하기 식으로 계산하였다: (a x b2/2) 식중 'b'는 최단축이고 'a'는 최장축임. 개별 마우스에 대한 종양 부피가 ≥ 2,000mm3 또는 60일째 중 먼저 도래하는 경우 마우스를 연구에서 제외하였다.
도 6a에 도시된 바와 같이, 접합체 (VI)는 종양 접종 후 36일째에 평균 종양 크기가 73mm3(TGI 97.5%, P < 0.001 대 대조군)인 유의미한 항종양 활성을 나타내었다. 도 6b는 각 용량 그룹에 걸쳐 시간에 따른 개별 종양 부피를 도시한다. 도 6c는 연구 과정에 걸쳐 각 용량 그룹의 마우스에 대한 평균 체중을 도시한다. 연구 기간 동안 다른 총 임상 이상은 관찰되지 않았다.
실시예 12: 생체내 활성 연구 III
IMR32 인간 신경모세포종 암 종양 세포 (0.1 mL 중 1X107 세포)를 암컷 BALB/c 누드 마우스의 옆구리에 피하 접종하였다. 평균 종양 부피가 대략 125 mm3에 도달한 때 치료를 개시하였다. 마우스를 정맥내(IV) 투여된 (20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% Tween-20 pH 5.5 중) 3 mg/㎏의 용량으로 화합물 (III) - 항체 CD56-B DAR8 접합체 (접합체 (VIII)), 또는 6.6 mg/kg의 용량으로 화합물 (IV-1) - 항체 CD56-B DAR3.64 접합체(접합체 (IX))의 단일 용량으로 치료하였다. 접합체 (IX) 용량화는 접합체 (VIII) 페이로드 용량화와 일치한다. 종양 크기 및 마우스 체중을 주당 2회 측정하였다. 종양 부피(mm3)를 하기 식으로 계산하였다: (a x b2/2) 식중 'b'는 최단축이고 'a'는 최장축임. 개별 마우스에 대한 종양 부피가 ≥ 2,000 mm3 또는 60일째 중 먼저 도래하는 경우 마우스를 연구에서 제외하였다.
도 9a-9c에 도시된 바와 같이, 접합체 (VIII) 및 접합체 (IX)는 유의미한 항종양 활성을 나타내었다. 3 mg/kg의 용량 수준으로 접합체 (VIII) 및 6.6 mg/kg의 용량 수준으로 접합체 (IX)는 각각 용량화 후 28일째에 0 mm3 (TGI=100%, P < 0.001 대 대조군) 및 104 mm3 (TGI=94.1%, P < 0.001 대 대조군)의 평균 종양 부피로 유의미한 항종양 활성을 나타내었다 (도 9a). 도 9b는 각 용량 그룹에 걸쳐 시간에 따른 개별 종양 부피를 도시한다. 도 9c는 연구 과정에 걸쳐 각 용량 그룹의 마우스에 대한 평균 체중을 도시한다. 연구 기간 동안 다른 총 임상 이상은 관찰되지 않았다.
개요 및 요약 섹션이 아닌, 상세한 설명 섹션이 청구범위를 해석하는데 사용되도록 의도된 것임을 이해하여야 한다. 개요 및 요약 섹션이 본 발명자(들)가 고려한 본 개시내용의 모든 예시적 양태는 아니지만, 하나 이상의 예시적 양태를 제시할 수 있고, 따라서 본 개시내용 및 첨부된 청구범위를 어떤 방식으로든 제한하도록 의도되지 않는다.
본 개시내용은 특정된 기능 및 이의 관계의 구현을 예시하는 기능적 구성 블록의 도움으로 전술되었다. 이들 기능적 구성 블록의 경계는 설명의 편의를 위해 본원에 임의로 정의되었다. 특정된 기능 및 이의 관계가 적절하게 수행되는 한 대체 경계는 정의될 수 있다.
특정 양태의 전술한 설명은 다른 사람들이 당업계 기술 내의 지식을 적용함으로써 본 개시내용의 일반적인 개념에서 벗어나지 않고 과도한 실험작업 없이 이러한 특정 양태를 다양한 적용에 대해 용이하게 수정 및/또는 조정할 수 있도록 본 개시내용의 일반적인 성격을 충분히 드러낼 것이다. 따라서 이러한 조정 및 수정은 본원에 제시된 교시 및 지침에 기초하여 개시된 양태의 균등물의 의미 및 범위 내에 있도록 의도된다. 본원의 어법 또는 용어는 설명을 위한 것이지 제한을 위한 것이 아니므로, 본 명세서의 용어 또는 어법은 교시 및 지침에 비추어 당업자에 의해 해석되어야 하는 것으로 이해되어야 한다.
본 개시내용의 폭 및 범위는 전술한 예시적 양태 중 임의의 것에 의해 제한되어서는 안 되고, 하기 청구범위 및 이들의 균등물에 따라서만 정해져야 한다.
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Claims (66)

  1. 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    식중:
    a는 1 내지 10의 정수이고;
    n은 0 또는 1이고;
    A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
    U는 NH, O, S, 및 CF2로부터 선택되고;
    R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
    R10은 -CH3, -C(O)R30, -N(R40)2, -(CH2)n'OH, -(CH2)n'N(R40)2, -(CH2)n'Q(CH2)m'OH, -(CH2)n'Q(CH2)m'SH, 및 -(CH2)n'Q(CH2)m'N(R40)2로부터 선택되고; 여기서:
    R30은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
    각 R40은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
    Q는 O, S, 또는 NR40이고;
    n'는 1-6이고;
    m'는 2-5이고;
    R20은 수소, -(CH2CH2O)v'-CH3, C2-C6알케닐, C1-C6알킬; C2-C6알키닐, 벤질, C3-C6사이클로알킬, 및 C3-C6사이클로알킬(C1-C3알킬)로부터 선택되고, 여기서 v'는 1 내지 24이고;
    X는 -NR200-, =C(CH3)-, -Q'-(CH2)n"-, 및 -Q'(CH2)m"Q"(CH2)n"-로부터 선택되고; 여기서:
    Q' 및 Q"는 각각 독립적으로 O, S, 또는 N(R200)v이고, 여기서:
    v는 1 또는 2이고;
    각 R200은 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
    n"는 1 내지 6의 정수이고;
    m"는 2 내지 6의 정수이고;
    여기서 각 기의 좌측은 L에 부착되고 우측은 A에 부착되며;
    단, X가 NH 또는 -Q'-(CH2)n"-인 경우, R1은 할로이고;
    각 Y는 독립적으로 S 또는 O이고;
    L은 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커이고;
    L50은 절단가능한 링커이고;
    Bm은 CD56에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 모이어티임.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 결합 모이어티가 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 접합체.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, a가 2 내지 8의 정수인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, L이 절단불가능한 링커인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  5. 제 4 항에 있어서, L이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    및

    식중:
    p는 1 내지 10의 정수이고;
    은 X에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  6. 제 5 항에 있어서, L이 인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  7. 제 6 항에 있어서, p가 5인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  8. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, L이 절단가능한 링커인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 절단가능한 링커가 프로테아제에 의해 절단가능한, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  10. 제 8 항 또는 제 9 항에 있어서, L이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    식중:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 각각 독립적으로 부재하거나 L- 또는 D-배열에서 자연 발생 아미노산 잔기이고, 단 Z1, Z2, Z3, 및 Z4 중 적어도 두 개는 아미노산 잔기이고;
    은 X에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  11. 제 10 항에 있어서, Z1, Z2, Z3, 및 Z4가 독립적으로 부재하거나 L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-리신, D-리신, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3, 및 Z4 중 적어도 2개가 아미노산 잔기인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  12. 제 10 항 또는 제 11 항에 있어서,
    Z1이 부재하거나 글리신이고;
    Z2가 부재하거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    Z3이 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    Z4가 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-리신, D-리신, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되는,
    접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  13. 제 10 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, L이
    인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  14. 제 13 항에 있어서, q가 5인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  15. 제 8 항에 있어서, L이 생물환원성 링커인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  16. 제 15 항에 있어서, L이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 접합체:

    식중:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    R, R', R'' 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 2개의 같은자리 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있으며;
    은 X에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  17. 제 8 항에 있어서, L이 산 절단가능한 링커인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  18. 제 17 항에 있어서, L이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    식중:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    은 X에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  19. 제 8 항에 있어서, L이 클릭-투-릴리스(click-to-release) 링커인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  20. 제 19 항에 있어서, L이 다음으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    식중:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    은 X에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  21. 제 8 항에 있어서, L이 피로포스파타제 절단가능한 링커인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  22. 제 21 항에 있어서, L이 다음인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    식중:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    은 X에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  23. 제 8 항에 있어서, L이 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  24. 제 23 항에 있어서, L이 다음으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    및

    식중:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    ----은 부재하거나 결합이고;
    은 X에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  25. 제 24 항에 있어서, L이
    또는
    인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  26. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이며;
    X는 -N(R200)v(CH2)m''O(CH2)n''-이고; 여기서:
    v는 1이고;
    m'' 및 n''는 2이고;
    R200은 메틸임.
  27. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이며;
    X는 -N(R200)v(CH2)m''O(CH2)n''-이고; 여기서:
    v는 2이고;
    m'' 및 n''는 2이고;
    각 R200은 메틸임.
  28. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이며;
    X는 -O(CH2)n"-이고; 여기서:
    n"는 2임.
  29. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이며;
    X는 -S(CH2)n"-이고; 여기서:
    n"는 2임.
  30. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고;
    X는 -NR200-이고; 여기서:
    R200은 메틸임.
  31. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이며;
    X는 -NR200-이고; 여기서:
    R200은 수소임.
  32. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이며;
    X는 -NR2-이고; 여기서:
    R2는 수소임.
  33. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고;
    X는 -C(CH3)=임.
  34. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 다음인, 화학식 (I)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고;
    X는 -N(R200)(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
    n''는 1이고;
    m''는 2이고;
    R200은 메틸임.
  35. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 절단가능한 링커가 프로테아제에 의해 절단가능한, 화학식 (II)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  36. 제 35 항에 있어서, L50이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 접합체:
    및

    식중:
    q는 2 내지 10이고;
    Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5는 각각 독립적으로 부재하거나 L- 또는 D-배열의 자연 발생 아미노산 잔기이고, 단, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이며;
    은 모 분자 모이어티에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  37. 제 36 항에 있어서, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5가 독립적으로 부재하거나, L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-리신, D-리신, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3, Z4, 및 Z5 중 적어도 2개가 아미노산 잔기인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  38. 제 36 항 또는 제 37 항에 있어서, 다음인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Z1은 부재하거나 글리신이고,
    Z2는 부재하거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    Z4는 L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-리신, D-리신, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
    Z5는 부재하거나 글리신임.
  39. 제 36 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서, L50이

    인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  40. 제 39 항에 있어서, q가 4인, 접합체.
  41. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, L50이 생물환원성 링커인, 화학식 (II)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  42. 제 41 항에 있어서, L50이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    식중:
    q는 2 내지 10이고;
    R, R', R'', 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6알킬)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 2개의 같은자리 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있고;
    은 모 분자 모이어티에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  43. 제 41 항 또는 제 42 항에 있어서, L50이

    인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  44. 제 43 항에 있어서, q가 2인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  45. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, L50이 클릭-투-릴리스 링커인, 화학식 (II)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  46. 제 45 항에 있어서, L50이 다음인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    식중:
    q는 2 내지 10이고;
    은 모 분자 모이어티에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  47. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, L50이 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커인, 화학식 (II)의 접합체인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  48. 제 47 항에 있어서, L50이 다음으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    및

    식중:
    q는 2 내지 10이고;
    ----은 부재하거나 결합이고;
    은 모 분자 모이어티에 대한 부착 지점이고;
    은 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  49. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서, a가 3 내지 4인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  50. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서, a가 8인, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  51. 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 모이어티가 서열번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 상보성 결정 영역 (CDR) 1, 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2, 및 서열번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함하는, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  52. 제 1 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 모이어티가 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및/또는 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는, 접합체.
  53. 제 2 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 IgG 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 임의로 IgG1 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 접합체.
  54. 제 2 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 (i) EU 넘버링에 따른 N297A 돌연변이 및/또는 (ii) EU 넘버링에 따른 LALA (L234A 및 L235A) 돌연변이를 포함하는, 접합체.
  55. 제 2 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 조작된 시스테인을 포함하는 불변 영역 또는 서열번호:14-20 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역을 포함하는, 접합체.
  56. 제 1 항 내지 제 55 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 모이어티가 (i) 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 또는 (ii) 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 접합체.
  57. 다음인 접합체:

    식중 Bm은 항체 CD56-B이고 a는 3-8, 임의로 3, 4 또는 8임.
  58. 제 1 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 접합체를 포함하는 조성물로서, Bm당 평균 신규분해약물(neodegrader)의 수가 3-8이고, 임의로, Bm당 평균 신규분해약물의 수가 약 3 내지 약 4이거나 Bm당 평균 신규분해약물의 수가 약 8인, 조성물.
  59. 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 약학적으로 허용가능한 양의 제 1 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항의 접합체 또는 조성물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  60. 제 59 항에 있어서, 상기 암이 CD56-양성 암인, 방법.
  61. 제 59 항 또는 제 60 항에 있어서, 상기 암이 신경내분비암 (임의로 여기서 신경내분비암은 신경모세포종 또는 신경내분비 전립선암임), 폐암 (임의로 여기서 폐암은 소세포 폐암 (SLCL)임), 또는 육종인, 방법.
  62. 제 59 항에 있어서, 제 1 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항의 접합체 또는 조성물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 투여 이전, 이후, 또는 이와 동시에 약학적으로 허용가능한 양의 추가 제제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  63. 제 62 항에 있어서, 상기 추가 제제가 세포독성제 또는 면역 반응 조절제인, 방법.
  64. 제 63 항에 있어서, 상기 면역 반응 조절제가 관문 억제제인, 방법.
  65. 제 64 항에 있어서, 상기 관문 억제제가 PD-1 억제제, PD-L1 억제제, CTLA-4 억제제, TIM3 억제제, 및/또는 LAG-3 억제제를 포함하는, 방법.
  66. 제 59 항 내지 제 65 항 중 어느 한 항의 방법에서 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서 제 1 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항의 접합체 또는 조성물의 용도.
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