KR940000006B1 - 치료학적으로 활성인 화합물의 조성물. - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

치료학적으로 활성인 화합물의 조성물.

[도면의 간단한 설명]

제1도는 본 발명에 의한 아스피린의 흡수율/유지율의 증가를 나타낸 시험치의 히스토그램.

제2도는 시간에 대한 혈청살리실레이트의 증가를 나타낸 도면.

제3도는 시간에 대한 혈장피록시캄농도의 증가를 나타낸 도면.

제4도는 시간에 대한 혈장피록시캄의 흡수율/유지율의 증가를 나타낸 도면.

제5도는 알돈 성분을 함유함으로써 생기는 3T3 섬유아세포에 의하여 아스콜빈산의 증가된 흡수율을 나타낸 도면.

[발명의 상세한 설명]

본 발명은 새로운 물질의 조성과 사용방법에 관한 것으로서, 더욱 상세히는 어떤 치료학적으로 활성인 화합물의 효과를 개선하기 위한 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 상기 화합물을 신체내에서 치료학적으로 효과적인 수준으로 만들고 유지시켜주는 방법에 관한 것이다.

구체적으로 본 발명은 항생물질, 비타민, 아미노산, 소염제, 진통제, 해열제등과 같이 치료학적으로 활성인 화합물의 개량된 조성물과 그 사용방법에 관한 것으로서, 특히 비타민-C를 함유하는 개량된 조성물과 그의 사용방법에 관한 것이다.

예방이나 약물치료에 있어서, 약물 또는 다른 치료학적으로 동물이나 인체에서 활성인 화합물의 초기 생리학적 유효수준을 설정한 다음, 목적하는 생리적 결과를 얻는데 필요한 기간동안 유효수준을 유지하는 것을 일반적으로 바람직하다.

흡수율이나 유지율(배출율의 감소) 혹은 이들 두가지 경우 모두가 개선되면, 이들은 보통 생리학적으로 그리고 치료학적으로 매우 유익하다. 또한, 치료제의 불필요한 부작용을 감소 혹은 제거시킬 수 있다면 더욱 유익하다.

본 발명에서 통상의 지식을 가진자들에게 본 발명의 실시와 원리를 최초로 예를들어 설명하기 위하여 비타민-C 요법을 개량하는데 본 발명을 이용하는 것이 상세히 설명될 것이나, 아래에서 충분히 밝혀지듯이 본 발명이 그 분야의 응용에만 제한 되어지는 것은 아니다.

종래의 기술자들은 비타민-C가 생리학적 반응에 포한된 300개 이상의 별개의 대사기전(메카니즘)을 입증한 바 있다. 이 메카니즘들은 1740년 로버-트 린드에 의하여 처음으로 관찰된 괴혈병 치료 효과로부터 시작하여 극히 최근에 발견된 산화방지제의 자유라디칼 포착반응, 교원질(collagen) 형성에 있어서 효소와의 반응, 다핵 백혈구내에서의 에너지 대사항진, 그리고 철분 흡수 촉진에 이르기까지의 범위에 걸친 것이다.

그와 같은 대사반응에서의 임상적 효과는 널리 인식되어 있고 보고된 바도 있다. 예로서, 자유라디칼 포착효과는 신체가 발암물질을 뇨로 배출되는 무독성 유도체로 전환시킬 수 있도록 하고 그 결과 흡연이나 다른 주위의 오염물질 및 극단적인 온도에의 노출에 의한 영향을 줄인다.

동물학은 체내효소가 아스콜빈산염(아스코메이트)을 (종량성장을 억제시키는 것으로 입증된) 산화생성물로 전환시킨다는 사실을 입증하였다.

따라서 인간의 신체내에서 비타민-c 및 그의 유도체들의 효과적인 수준을 만들어주고 유지시켜주는 것이 건강에 도움이 된다는 사실에 대하여는 과학적으로 의심의 여지가 없다. 상당한 농도의 비타민-c가 부신, 난소, 뇌, 뇌하수체, 간장, 비장, 혈구, 혈청 및 세포외의 폐액에 존재하는 것이 관찰되어 왔다. 대부분의 동물은 혈당을 아스콜빈산으로 전환시킴으로서 바로 비타민-C를 만들어 낼 수 있는 간장효소를 가지고 있으나 사람은 이러한 효소를 기지고 있지 않다.

그 결과 상술한 바와 같이 다양한 대사반응을 하기 위하여, 체내에 필요한 비타민-C는 사람들이 음식물로부터 섭취하는 수 밖에 없다. 뿐만 안니라 인체는 비타민-C를 저장할 능력도 갖고 있지 않다. 만일 대사가 안된다면 비타민-c는 배설되는 수 밖에 없다. 인체내에서의 비타민-C 및 그 유도체들이 낮은 수준이면 바람직스럽지 못한 생리적 반응들이 일어나며, 아주 낮은 수준일 경우 예를들면 괴혈병으로 인한 죽음과 같은 극단적인 반응이 생기게 된다.

이러한 정상적인 비타민-C의 요구를 별도로 하더라도, 체내에시의 상기 정상적인 비타민-C 수준을 만들어 주고 유지시켜주는 일은 치료학적인 대사작용에서는 중요한 것이다.

그러나, 이와 같이 상기 정상적인 농도를 만들어 주고 유지시켜주기란 다음과 같은 이유로 곤란한 것이다. 즉, 인체는 비타민-C(아스콜빈산)의 허용치를 초과하면 위의 자극과 염증으로부터 생기는 설사와 다른 부작용이 생기기 때문에 비타민-C에 대해 제한된 범위만의 내용성을 가지기 때문이다.

본 발명자는 유기 음이온이 분비되는 신장 관상분비경로를 통하여 대사작용됨이 없이 신체로부터 정상적으로 배설되는 치료학적으로 활성인 화합물의 체내 수준을 만들고/또는 유지하는 효과를 개선하는 조성물 및 방법을 발견한 것이다. 그러한 치료학적으로 활성인 화합물은 약 5000 이하의 분자량을 가지며, 산성관능기를 갖고, 생리적 pH=7.4에서 pKa≤6의 값을 갖는다.

본 발명의 조성물은 상기 치료학적으로 활성인 화합물과 L-트레온산, L-크시론산 및 L-리크손산, 상기 산들의 무독성 식용염, 상기 산들의 알도노-락톤 및 알도노-락티드 중에서 선택된 적어도 한개의 화합물을 포함한다.

본 발명의 방법에 대한 바람직한 실시예에 있어서 본 발명자가 발견한 방법은 인체나 동물체에 본 조성물을 생리학적으로 유효한 함량을 투여하는 단계를 포함한다.

본 방법에 따라 첫단계로 신체내에 알돈화합물을 투여하여 체내 유효수준을 만든 다음, 그 후 치료학적으로 활성인 화합물을 투여하였다.

본 발명자는 더욱이 인체내에서 비타민-C(그의 유도체를 포함한)를 높은 수준으로 만들고 유지시키는 것을 개선하는 조성물 및 방법을 발견하였다. 간단히 말하여, 본 발명의 이러한 구체 예에 의하면, 본인이 발견한 조성물은 비타민C 활성을 갖는 화합물과, L-트레온산, L-크시론산 및 L-리크손산, 상기 산들의 식용가능염, 상기 산들의 알도노-락톤 및 알도로-락티드 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물로 구성되어 있다.

다른 바람직한 실시예에 따르면, 인체내에서의 비타민-C 수준을 달성하기 위한 방법은 치료대상체에 본 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

여기서 사용된 "비타민C 활성을 갖는 화합물"이란 항 괴혈병의 활성을 나타내는 비타민-C(L-아스콜빈산)와 그 유도체들을 뜻한다. 예로서 그 유도체들은 무수 아스콜빈산과, 칼슘, 나트륨, 마그네슘, 칼륨 및 아연의 아스콜빈산염 등의 먹을 수 있는 아스콜빈산의 염과 같은 산화생성물, L-아스콜빈산 2-0-포스페이트, L-아스콜빈산 6-헥사데카노에이트, L-아스콜빈산 모노스테아레이트, L-아스콜빈산 디팔미테이트와 같은 무기 및 유기산과의 비타민-C의 에스테르 등을 의미한다.

아스콜빈산과 그 유도체의 대사물질은 알돈산, 알도노-락톤, 알도노-락티드 및 알돈산의 먹을 수 있는 염을 포함한다.

뒤에 설명되는 바와 같이, 본 발명의 조성은 세가지 특수한 알돈산(L-트레온산, L-크시론산 및 L-리크손산)에 부합되는 이들 대사물질이 하나 또는 그 이상 존재하는 것으로서 특징지워진다.

알도노-락톤은 다음과 같은 구조식을 갖는다.

본 발명의 조성에서 하나 또는 둘 이상의 상기 대사물질의 존재는 그러한 조성물을 확인하는데 편리한 것이고, 또한 바라는 결과 즉, 비타민-C 혹은 다른 치료학적 활성화합물을 흡수/유지하는 것을 개선하는데 필요한 것이다.

본 발명의 개량된 비타민-C 조성물의 제조에 적당한 방법은 탄산칼슘, 중탄산 소-다 등의 무독성 금속 화합물과 더불어 L-아스콜빈산을 40-89℃의 고온에서 산화조건하에서 아스콜빈산의 충분한 양을 그에 상응하는 염 즉, 칼슘 또는 아스콜빈산나트륨으로 전환되도록 가열하고, 반응혼합물을 건조하여 6.0-7.5의 중성 pH의 고체 생성물을 얻는다. 바람직하기는 금속염의 반응물에 대하여 화학 양론적으로 과량인 금속염 반응물을 제공하는 것이다. 반응결과 생긴 생성물은 보다 높은 아스코르빈산염의 활성을 가진 것으로, 아스코르빈산 요오드 시금물(assay)은 공정 변수에 따라 50-480mg/500mg 시료의 범위로 갖는다. 산화 조건에 있어서 오래 가열하면 보다 낮은 아스코르빈산 요오드 시금물을 얻는다.

본 발명의 조성물은 낮은 아스콜빈산 내성을 가진 환자에게 비타민C를 투여할 경우 유용하게 나타난다.

신장결석을 형성하려는 경향이 있는 환자는 옥살산요소 수준의 상승을 야기시키는 아스콜빈산과 그의 통상적인 유도체인 아스콜빈산칼슘을 복용할 때 특히 곤란을 받게된다.

본 발명의 조성물은 종래 기술조성물과 방법의 사용시에 나타나는 뇨(urine)에서의 옥살산염 (옥사레이트)수준의 상승이 일어나지 않도록 투여할 수 있는 것이다.

본 발명의 조성물은 신장 결석 성향이 있는 치료대상체에 대하여 아스콜빈산염의 적당한 체내수준을 만들어 주고 유지시켜주는 수단으로서 특히 적절하다. 본 발명의 비타민-C 조성물은 또한 관절염과 같은 염증의 치료에도 유용하다.

비타민-C 합성물의 흡수율, 내용성 및/혹은 유지율을 향상시키는 알돈화합물의 유효성은 또한 약 5000이하의 분자량을 가지며, 산성관능기를 갖고, pKa≤6인 치료학적으로 활성화합물의 특징을 개선시키는데 응용되어질 수 있다. 이와 같은 개선의 생리적 메카니즘은 유기음이온용 신장관상 분비경로를 거쳐 신체로부터 대사되지 않은 치료학적 활성 화합물의 정상적인 배출이 억제되고 체내조직의 세포벽을 통한 이들 성분들의 흡수가 개선된 데 있다.

알돈화합물은 분명히 흡수율을 향상시키고 신장배출을 억제하는 두가지 효과를 제공하고 있다. 다양한 신장분비선에 대한 일반적인 설명은 Hirsch와 Hook씨가 기고한 Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics[Vol. 171, p. 103(1970)]의 논문에 기재되어 있다.

본 발명의 조성물에서 필요한 알돈화합물의 양은 치료학적으로 효과적인 비율이다. 정확한 비율은 치료학적으로 활성인 화합물의 정확한 성질과 본 기술분야에서 통상의 지식을 가진자들에게서 일어날 수 있는 다른 요인들에 따라 어느 정도 변할 것이다. 일반적으로 감소된 신장분비율 및/또는 증가된 신체 흡수율은 매우 작은 양의 알돈화합물에 의해서도 어느 정도 개선된다.

이러한 특징들은 알돈화합물의 비율을 증가시킴으로써 개선되어지는 것이고, 그 상한선은 치료학적 활성 성분이 지나치게 희석되어 적절한 최소한의 함량이 투여되지 않을 정도가 되지 않게 하는 실제적인 고려하에 설정된다. 현재의 최선의 정보에 의하면 본 발명의 조성물에 있어서 알돈화합물의 비율은 1중량% 이하에서부터 24중량%까지 변할 수 있다.

실제적인 치료효과는 알돈화합물의 농도 0.10중량% 범위내에서 관측되어졌고 현재 바람직한 알돈화합물의 범위는 약 1중량%부터 약 7중량%까지이다. 본 발명 조성물은 그 조성물의 성분을 간단하게 물리적으로 혼합하여 제조할 수 있다.

비타민-C의 경우 그 조성물은 실제실시예에서 상술한 기술에 따라 원래의 상태에서 바로(in situ) 제조할 수 있다. 본 발명에 따라 개선될 수 있는 대표적인 치료학적 활성화합물의 비제한적 실시예는 pKa≤6을 가지며, 카르복실기, 엔-디올기, 페놀기 등의 산성관능기를 갖는 화합물을 포함한다.

그러한 화합물은 광범위하고 다양한 구조와 제약학적 이용성을 갖는다.

예로서,

본 발명의 실시에 사용하기 적당한 상기 설명한 유형의 치료학적 활성화합물은 본 분야에 통상의 지식을 가진자에 의한 일상적인 시험에 의하여 쉽게 선택되고 확인 될 수 있다. 특정한 화합물이 대사가 이루어지지 않은 채 배출되는가의 여부는 오줌검사로 알 수 있다. 더욱이 그 선택은 실시예 14에서 기술된 평활근 시험과 실시예 12 및 13에 기술된 동물연구에 의하여 확인될 수 있다.

다음 실시예들은 본 발명의 실시를 실예를 들어 구체적으로 설명하기 위하여 나타낸 것이며 그 범위를 제한 하려는 의도는 아니다.

[실시예 1]

80갤론의 스팀가열 스테인레스스틸 반응기에 44℃의 뜨거운 물 60lbs를 가하고, 110.23lbs의 아스콜빈산-U.S.P 를 뜨거운 물에 일부씩 가한다. 그 결과 생긴 슬러리는 기계적으로 교반하고 70℃가 되도록 가압스팀 (15psi)으로 가열한다.

액상의 아스콜빈산 슬러리에 231bs의 탄산칼슘을 가한다. 탄산염의 첨가는 3-4분이 소요된다. 반응생성물은 회색을 나타내며 CO₂의 발생으로 많은 기포의 형성이 뚜렷하다. 8분간의 교반 후 대부분의 기포형성이 가라않고 그 반응 혼합물은 적갈색을 나타내게 된다. 이 때 그 액체온도는 80℃이다. 반응생성물의 온도가 98℃될 때까지 15분간 교반과 가열을 계속하며, 8.251bs의 탄산칼슘을 추가로 가한 후 교반하면서 20분간 더 유지한다.

기포가 가라앉은 후 반응생성물은 이중드럼의 스팀가열식 건조기 (표면온도는 대략 250℃ F로 펌핑된다. 이 펌핑과 건조과정은 35분이 필요하다. 건조된 생성물은 엷은 황갈색이고 그 수율은 대체로 1201bs이다.

아스콜빈산의 반응을 촉진시키기 위하여 공기에 의하여 반응 혼합물 사이에 기포를 발생시킬 수 있다. 500m1 증류수에 녹인 5.00g의 시료를 즉시 분석한다. 건조과정 중 수집된 물질은 표준온도적정법에 의하면 500mg에 대하여 400mg의 무수아스콜빈산칼슘을 나타내며 pH는 7.0을 나타낸다.

[실시예 2]

다음 실시예는 실시예 1의 생성물(시험물질)을 시험용 L-아스콜빈산가 구연산(위약)의 표준 복용량을 복용시킨 후 여러 시점에서 내세포와 혈청 아스콜빈산염 수준, 추출되는 아스코르빈산뇨 및 옥살산뇨 배설을 측정하면서 L-아스콜빈산과 구연산(위약)과 비교한 임상실험을 기술한 것이다.

[임상실험의 요약 ]

27세부터 45세까지의 12명을 대상으로 하였다. 모두에게 조사되기전 1주일간 비타민-C의 함량이 낮은 식사(감귤류의 제품과 푸른잎이 많은 식물의 다량섭취를 피하도록 함)를 하도록 하였다.

하룻밤의 단식 후, 혈액과 24시간 후 뇨 샘플을 채취하였다. 백혈구와 24시간 아스코르빈산뇨와 24시간 옥살산뇨 수준을 측정한 후 혈청 아스콜빈산 염 수준과 관련시켰다.

12명은 다음과 같은 세 그룹으로 나우어졌으며, 그 내용은 다음과 같다.

a) 테스트 그룹 : 1일 4000MG*의 실시예 1 생성물

b) 아스콜빈산염 그룹 : 1일 3000MG의 아스콜빈산

c) 구연산 그룹 : 1일 3000MG의 구연산

4000MG*는 L-아스콜빈산 3000MG데 대한 아스콜빈산염:요오드시험)과 균등량이다.

12명 모두가 저 비타민-C 식사를 계속하였으며 혈액 샘플은 지정된 공급물의 아침식사후 0,4,8 및 24시간만에 채취되었다. 뇨의 24시간 아스콜빈산염 및 옥살산염 수준을 측정하였다. (참가자의 작업상황으로 인한 2일-수일까지 변하는)세척기간 경과 후 그들 그룹을 다음과 같이 다른 추가물질로 바꾸었다.

3) 테스트 그룹을 구연산 그룹으로 전환

b) 구연산그룹을 아스콜빈산염 그룹으로 전환

C) 아스콜빈산염 그룹을 테스트 그룹으로 전환

추가물질은 세 그룹에 의해 동일 수준(실시예 1의 생성물 4000MG, L-아스콜빈산 3000MG 및 구연산 3000MG)으로 취하였다.

혈액샘플은 추가 섭취후 0,4,8 및 24시간 만에 다시 채취하였다. 24시간 뇨는 또한 기간말이 12명의 전 임상실험인으로 부터 수집되었다. 다시 모든 표본에 대하여 아스콜빈산염파 옥살산염 수준의 각각의 농도를 분석을 하였다.

[분석방법 ]

분석방법은 크리니컬 케미스트리, 프린시플즈 앤드 테크닉(Clinical Chemistry, Principles and Techniques)[리차드 제이. 헨리, 도날드 디 . 캔논, 및 제임스 더블유. 윈델만, 하아퍼 앤드로우 출판사, 1974, p.1393-p.1398]와 스탠다드 메소드 어브크리니컬 케미스트리 (Standard Method of Clinical Chemistry), (제이 . 에스. 로우 저, 아카데믹프레스 출판사, 1961. Vol 3, P.35]에 기술되어 있다.

24시간 뇨 옥살산염의 정량을 하려면 뇨의 표면을 옥살산염을 선택적으로 결합하는 흡착제와 같이 진탕시킨다. 추출된 뇨는 버리고 옥살산염을 묽은 알칼리로 희석시킨 흡착제로 용출시킨다.

옥살산염 (옥사레이트)은 옥살산염 산화효소에 의하여 과산화수소와 CO₂로 용출된다. 과산화수소는 590NM에서 최대흡수력을 갖는 인다민 염료를 얻기 위하여 과산화효소의 존재하에 3-메틸-2-벤조티오조리논 하이드라존(MBTH) 및 3(디메틸아미노)벤조산(DMAB)과 반응한다.

뇨 옥사레이트 테스트는 다음 문헌에서 설명되어 있다.

옥사릭 애시드 인 바이오로지 앤드 메드신(Oxalic Acid in Viology and Medicine)[호제킨슨 에이., Academic Press, 1977].

유리너리 옥사레이트 익스크레션 바이 메인 플로잉 아스콜빈 애시드 인제스쳔(Urinary Oxalate Excretion by Main Follow-ing Ascorbine Ingestion)[더블유. 디. 로버트슨 ; 지. 에이. 크리스토우스키, Prog. Soc. Exp. Bil. Med. 85 ; 190, 1954]

디 이펙트 어브 아스콜빅 애시드 온 옥사레이트 메타볼리즘인 휴면 바이오 케미스트리 앤드 크리니컬 패톨로지(The Effect of Ascorbic Acid on Oxalate Metabolism in Human Bio-chemistry and Clinical Pathology) (제이. 코스텔로, 런던 국제회의 발표, 1971, P.270-P.273].

임상실험의 결과는 아래와 같다.

[표 Ⅰ]

상기 임상실험 연구로 부터 얻어진 결과는 다음과 같다.

혈청 아스코-베이트 수준 :

4,8,24시간 및 7일후 테스트 그룹은 구연산그룹과 L-아스콜빈산 그룹과 비교하였을때 높은 혈청 아스코-베이트 수준을 갖는다.

백혈구 아스코-베이트 수준 :

모든 그룹에 있어서 8시간 후의 백혈구 아스로-베이트 그룹은 평균적으로 감소를 나타냈으나, 테스트 그룹만은 가장 적은 감소퍼센트를 나타내었다. 4시간 및 24시간 측정 및 7일간의 수준은 그 테스트 그룹이 가장 높은 백혈구 수준을 유지할 수 있음을 나타내었다.

24시간째 백혈구 아스코-베이트 :

구연산, L-아스콜빈산 및 테스트그룹 모두 섭취 24시간 후 동일한 결과를 얻었다.

백혈구 아스로-베이트 수중에 있어서는 구연산 그룹과 L-아스콜빈산 그룹 모두 감소를 나타냈으나 테스트그룹은 베이스라인에 비하여 횔씬 높은 수준을 유지하였다.

L--아스코르빈산 및 시험 그룹의 섭취 7일 후

백혈구 아스코-베이트의 평균% 변화는 테스트그룹이 L-아스콜빈산 그룹에서 보다 시험그룹에서 훨씬 높았다.

24시간 뇨 아스코-베이트 산출 :

테스트 그룹이 구연산염과 L-아스코-베이트 그룹보다 아스코-베이트 생산이 적다.

7일-24시간 뇨 아스코-베이트 산출 :

테스트 그룹이 구연산염 그룹과 L-아스코베이트 그룹보다 아스코-베이트 산출이 적다.

24시간 뇨 옥사레이트 산출 :

옥사레이트 산출은 아스코-베이트 그룹과 비교하여 테스트 그룹에서 현저하게 감소하였다. 이 사실은 추가로 시험생성물을 취하는 동안에는 테스트그룹이 L-아스콜빈산을 취한 사람보다 신장결석을 갖는 옥사레이트를 형성할 기회가 적다는 것을 의미한다.

7일-24시간 옥사레이트 산출 :

시험생성물의 공급을 연장하는 것이 L-아스콜빈산을 공급하는 것보다 뇨 옥사레이트의 배설을 작게 한다.

[실시예 3]

교반기와 온도계가 장치된 2ℓ짜리 반응기에 30m1증류수와 440g(2.5moles) L-아스콜빈산을 주입한다.

슬러리를 교반한 것에 정밀하게 분쇄된 탄산칼슘을 반응부생물인 CO₂가 일정하게 방출될 수 있을 만큼의 비율로 중량하고 이때의 반응온도는 약 20℃를 유지한다.

또한 25-37.5g의 탄산칼슘을 첨가하여 현탁시킨다(L-아스콜빈산을 충전시켜서 완전한 반응을 하는데 필요한 양의 약 20-30%에 해당되는 양임.)

이때의 온도는 80℃까지 상승하나 탄산칼슘이 가해지면서 60-70℃의 범위내로 유지된다. 가해지는 탄산칼슘의 총량은 125g(1.25mo1es)이다.

반응 혼합물을 12-36시간동안 60-80℃ 사이의 온도로 유지된 얕은 용기에 옮기고 그 사이 혼합물의 pH는 6.0-7.0까지 상승시킨다. 이때의 여분의 물은 진공상태에 제거시킨다.

건조된 제품은 엷은 황갈색을 띠며, 반응하지 않는 탄산칼슘을 제외하고는 물에 잘 녹으며 중성용액이 된다.

[실시예 4]

실시예 3의 생성물을 사용한 임상적인 연구는 실시예 2에서 설명한 것과 같은 결과를 얻는다.

[실시예 5]

실시예 1과 3의 생성물을 다음과 같이 정성분석한다.

녹지 않은 과잉의 탄산칼슘은 여과한 후 크로마토그라피로 생성물로 부터 분리시키고 잔류물은 핵자기공명(NMR) 분광분석을 하게 된다.

가능성이 있는 성분의 구조를 분광분석에 의하여 탐지하여 구조를 만들고, 그 밝혀진 화합물을 합성한다. 이들 밝혀진 화합물의 NMR스펙트럼이 얻어진 후 시험표본의 NMR 스펙트럼과 비교하게 된다. 스펙트럼의 결합을 이용하여 시험표본의 성분을 확인하는데 사용한다.

사용된 기법은 1H와 13C NMR이다. 밝혀진 알돈산 염은 L-트레온산, L-크시론산 및 L-리크손산의 칼슘염이다.

[실시예 6]

본 실시예에서도, 아스코르빈산에 첨가되는 반응물을 바꾸어서 합리적인 양으로 무독하며 먹을 수 있는 아스코르빈산에 대응되는 상이한 염을 얻는 것 외에 실시예 1의 방법이 반복된다.

반 응 물 염

중탄산 소-다 아스콜빈산 소-다

탄산 마그네슘 아스콜빈산 마그네슘

중탄산 칼륨 아스콜빈산 칼륨

산화 아연 아스콜빈산 아연

이들 생성물은 실시예 5에서 밝혀진 것과 대응되는 알돈산염을 포함한다.

[실시예 7]

실시예 1,4 및 6의 생성물에 대하여 정량분석을 하였다.

생성물은 지정된 조성물을 갖는다.

알돈산 유도체는 상기 잔류물에서 다음과 같은 대략적인 비율을 갖는 다음의 산 유도체를 포함한다.

산 (유도체) 중 량 부

트레온산 8

크시론산 2

리크손산 3

이들 알돈산의 한가지 혹은 그 이상이 상호간에 또는 아스코-베이트에 연결되거나, 아스코-베이트가 상기에 연결되어질 수도 있다.

[실시예 8]

실시예 1에서의 생성물로한 동물사육연구는 실시예 2의 인체에서의 연구와 비슷한 결과를 보여준다.

[실시예 9]

실시예 7에서 발견된 성분과 동일한 중량비로 시약급의 아스콜빈산 칼슘을 다음물질과 혼합함으로서 시험 생성물이 합성되는 것을 제외하고는 실시예 2의 공정이 반복된다.

테스트 A-트레온산 (칼슘염)

테스트 B-크시론산 (칼슘염)

테스트 C-리크손산 (칼슘염)

이들 시험화합물을 사용하고 또한 추가적인 조절을 위해서 순수한 아스콜빈산 칼슘을 사용하여 실시예 2의 시험을 반복했다.

본 시험은 혼합된 아스코베이트와 알돈산 생성물의 생리적 활성이 알돈성분에 기인한다는 사실과 이들 알돈성분의 어느 한 가지가 비타민 성분의 흡수와 유지를 증가시키는 원인이 된다는 것을 확인한 것이다.

[실시예 10]

본 실시예는 아스피린의 흡수/유지에 대한 실시를 설명한 것이다. 16마리의 위스타(Wistar)종 횐 쥐[8마리의 수컷(242-333mg)과 8마리의 암컷(295-345mg)]를 연구가 시작되기 전 1주일 동안 환경적응을 시켰다. 이 기간중 쥐들에 퓨리나(R) 설치류 식물(Purina(R) Rodent Chow)과 임의량의 물을 먹이면서 자동 수 세식인 스테인레스 우리속에 가두어 키웠다. 우리는 온도 700+/-2℉. 상대습도 60-80%에서 12시간-12시간의 명암의 광(光)의 주기를 유지하였다.

암컷 4마리와 수컷 4마리의 8마리의 쥐를 무작위로 두 그룹으로 나누어서 대사작용 시험 우리속에 넣었다. A 그룹에는 2.0ml의 증류수에 54mg/kg의 U.S.P. 아스피린을 녹여 먹이고 AM 그룹에는 2.0ml의 증류수에 트레온산 칼슘(아스콜빈산의 대사물) 15mg/kg을 추가한 54mg/kg의 U.S.P. 아스피린을 먹었다.

혈액시료는 혈청 살리실레이트 분석을 위하여 U.S.P. 아스피린 투여후 1,2,3 및 4시간 마다 채취하였다. 또한 같은 시간내에 살리실레이트 분석용 뇨가 생성되면 뇨를 모았다. 효과적으로 최대량의 뇨를 배설시키기 위하여 쥐들에 강제로 3ml의 물을 1,2,3,4 시간마다 더 먹였다.

혈액과 뇨를 수거하여 나트레슨법(method of Natleson)으로 분석했다[Natelson, S. Tchniques of Clinical Chemistry, ed. 3. p.649, Charles C. Thomas, Pub(1971)]. 본 시험은 4시간째 수거 후 끝났다.

모든 통계치는 통계분석시스템 (SAS Institute, Inc , Box 8000, Cary, NC, 2751l) 소프트웨어를 이용하여 계산되었다. (측정모델이 반복되는)ANOVA 방법을 양 그룹간의 살리실레이트의 농도의 차이를 측정하는데 사용하였다.

표 1는 양 그룹의 A와 AM의 각 쥐에 대한 샘플링 할때마다의 실제혈청 살리실레이트 농도를 나티낸 것이다. 각 그룹에 대한 평균치 (X)와 표준편차(SD) 그리고 시간이 주어져 있다.

각 시료 채취시의 혈청내 살리실레이트 농도에 대한 양 그룹의 차이를 나타내는 유의수준(P)이 다음 각 히스토그램에 나타나 있다. 제2도는 양 그룹의 쥐들에 대한 시간경과 후의 혈청 실리실레이트에 대한 도면이며, 표준편차를 나타내는 막대가 그려져있다. 초기 섭취율(위장에서의)은 섭취 후 첫 시간에서의 직선화된 커-브로부터 계산되어질 수 있다.

뇨 살리실레이트에 대한 데이터는 상세하게 나타나 있지 않으나 아래에서 논의될 것이다. 동물의 성별로 인한 혈청 살리실레이트의 중요한 차는 없기 때문에 수컷과 암컷으로 분류되지 않는다.

[표 Ⅱ]

AM 그룹은 U.S.P. 아스피린에 대하여 초기에 더 높은 섭취와 흡수를 나타낸다는 사실이 데이터로부터 밝혀진다. 이 그룹은 A 그룹이 4.40mg/hr 라는 낮은 섭취율을 갖는 동안 11.76mg/hr의 높은 섭취율을 갖는다. AM 그룹 곡선은 두 과정을 나타내는 2개의 상이한 상(biphasic)을 나타내는 곡선이다. 커브의 첫부분은 위장게통에 의한 흡수나 섭취와 관계가 있다. A 그룹에 비하여 AM 그룹에서 가속되는 섭취율을 볼 수 있는데 이는 각 혈청의 도면으로 부터 명백하다. 커-브의 두번째 부분은 다른 신체부분으로의 분배와 신장에서의 배출과 관계가 있다. 이점 (2시간째)에서의 커-브상의 차는 A 그룹에서의 신장에 의하여 감소된 살리실레이트 배출에 기인한 것이다. 이 그룹은 이 시점에서 감소하고 있는 U.S.P. 아스피린 그룹 보다 높은 수준에서 살리실레이트의 안정된 농도에 접근하고 있는 것같이 보인다.

두 그룹의 배출비율의 차는 중요하다. A 그룹(최고점의 대수로 부터 계산된) 혈장농도의 감소비율은 1.30mg/hr이나, AM 그룹은 0.05mg/hr이며, 이러한 배출비율은 대사물질이 없을때에 비하여 대략 26배나 된다.

뇨 살리실레이트 분석은 A 그룹에 비하여 AM 그룹에서 시간외 배출되는 살리실레이트 양이 더 적은 경향을 나타낸다. 투여 후 첫시간에서 A 그룹의 뇨는 대체로 9.lmg%이고, AM 그룹은 5.0mg%이다. 이 수치는 AM 그룹에서 보다 높은 혈청수준을 나타내고 A 그룹에서는 낮은 혈청수준을 나타내는 것과 일치된다.

상기 결과는 대사물질의 존재가 위장상피 세포에 국부적으로 작용하면서 아스피린의 흡수를 증가시킨다는 것을 알 수 있다. 대사물질 그 자체는 흡수되어 혈액 내 농도를 증가시킨 후 신장에서 억제효과를 나타낸다. 이러한 효과는 신장메카니즘에 의하여 아스피린의 배출을 감소시킨다. 신장에서의 배출을 억제하기까지의 시간지체가 예상되는 바 이는 AM 그룹 도면의 2시간째의 하강부분에서 나타난다.

2-3시간 사이에서의 상승은 신장에서의 배출작용이 억제되고 흡수가 계속됨으로서 생기는 것이다.

AM 그룹에서의 향상된 혈청 살리실레이트 수준은 흡수의 증가보다 오히려 배출이 감소된 결과이다.

AM 그룹의 흡수비율은 A 그룹의 그것보다 2.67배 더 크며 AM 그룹의 배출 비율은 A 그룹의 것보다 26배 적다. 그러므로 감소된 신장에서의 배출은 증가된 흡수비율 보다 혈청 살리실레이트 수준을 유지하는 데 더욱 효과가 있다.

앞으로 진행되는 시험은 알돈산 화합물의 투여가 아스피린의 흡수율을 증가시킬 뿐 아니라 신장의 유기 음이온 운반조직을 제어한다는 사실을 입증한다.

상기 사실의 결과로서 신장의 기부(基部)세관에 위치한 분비과정을 통하여 배출되는 비율의 감소로 인해 아스피린 혈액수준이 더욱 오랜시간동안 유지되어진다.

[실시예 11]

다양한 종과 나이를 갖는 180마리의 개에게 실시예 1의 생성물 3X 30mgs/kg를 먹였다. 모든 개는 동작 장애로 고통을 받고 있던 것들이었다.

그 효과는 개들의 상태에 대한 소유주들의 보고외에 새로운 임상적인 수치 측정에 나타나는 실제적인 증후변화에 의해서 측정된다. 측정은 투여후 7일째와 그후 다시 6주후에 실시되었다. 마지막 측정은 6개월 이상 경과후에 하였다.

진단그룹 :

급성 또는 만성의 많은 여러가지 병증이 치료되었다.

증후가 급속히 변하는 급성질환에 있어서는 추가투여로 인한 효과인지 다른 인자로 인한 효과인지 구별하기가 어렵다는 것을 발견하게 되었다.

그래서 본 시험은 증상이 오랫동안 안정되고 투여와 관계없이 증상이 계속되어진다고 생각되는 잘 변하지 않는, 이미 알려진 원인을 갖는 병증에 대하여만 연구되었다.

다음과 같은 2차 영구변화를 갖는 관절손상, 관절증, 척추증상, 히프형성장애, 2차 영구변화를 갖는 오래된 디스크, 지지조직 및 운동조직에서의 "훈치오라에서"(funtio laesa)와 노인성 퇴행성 변화의 결과로서 나타나는 근육위축 등과 같은 만성질환을 갖는 동물이 선택되었다.

100마리의 개가 상기 기준에 따라 나뉘어졌고 종별과 나이는 이 보고에서 고려되지 않았다.

[표 Ⅲ]

본 실시예에서는 투여된 실시예 1의 생성물이 상기한 종류의 증상을 갖는 개들이 대부분 갖는 관절과 골격조직에서의 만성적 변형으로 인한 통증을 치료한다는 사실을 나타낸다.

칼슘-아스코베이트만이나 L-아스콜빈산만으로는 상기한 치료가 되지 않는다.

[실시예 12]

10마리의 수컷 (375-411gms) Wister 종 흰 쥐가 연구시작 7일전 부터 길들어졌었다. 이 기간중 쥐들은 퓨리나(R) 설치류식물[Purina(R) Rodent Chow]과 임의량의 물이 먹어졌고 자동 수세식인 스테인레스 우리속에 넣어졌다. 그 우리는 70±2℉, 상대습도 60-80%, 명암의 시간비는 12시간대 2시간의 광주기로 유지 되었다 .

쥐들은 5마리씩 2 그룹으로 무작위로 나누어졌으며 Nalgene(R) 우리속에 놓여졌다.

A 그룹에게는 0.6mg/kg의 U.S.P. 피록시캄이, AM 그룹에게는 15mg/kg의 칼슘 트레오네이트가 추가된 0.6mg/kg의 U.S.P. 피록시캄이 먹여졌다.

혈장 피록시캄 분석을 위하여 투여 후 4,6,8 및 10시간만에 혈장 시료가 채취되었다. 피록시캄 분석에 선택적 HPLC가 사용되었고, 데이타는 SAS를 이용하여 분석 정리되었다. 두 그룹 사이의 혈장 피록시캄 농도의 차이를 결정에는 ANOVA 반복측정방법이 이용되었다.

표 IV는 각 셈플링 시간에서의 A와 AM 그룹의 각 쥐들에 대한 혈장농도를 나타낸다.

각 그룹에 대한 평균치 (X)와 시간이 주어졌다. 제3도는 표 IV에 나타난 자료에 대한 혈장의 도면이다.

피록시캄의 혈장 수준의 초기상승은 A 그룹에 비하여 AM 그룹에서 훨씬 크다.

AM 그룹에서 4시간째에 피리크(peak) 피록시캄 혈장수준이 2배로 증가한다. 이 수준은 떨어지기 시작하여 그 후 6시간 지점을 지나 8시간째 지점에서 A 그룹과 일치한다. 그러나 AM 혈장수준은 8시간이 지나면서 다시 상승한다. 이러한 사실은 피록시캄 혈장 수준에 트레오네이트(threonate)의 효과가 존재한다는 것을 나타낸다. 통계적인 차이는 P.≤0.07.이 되는 10시간 후에야 나타난다. 이것은 트레오네이트 효과가 발생한다는 강한 증거이다.

[표 Ⅳ]

[실시예 13]

10마리의 수컷(420-456 gms) Wister 종 흰 쥐가 연구시작 7일전부터 길들여졌다. 이 기간중 쥐들은 퓨리나[Purina(R) 설치류식품(R) Rodent Chowl]과 임의량의 물이 먹어졌고 자동수세식인 스테인레스 우리 속에 넣어졌다.

쥐들은 무작위로 5마리씩 2 그룹으로 나뉘어졌다. A 그룹의 쥐들은 시험시작 3일전부터 매일 1.0ml의 증류수가 먹여졌다.

AM그룹의 쥐들에게는 또한 3일간 캄슘 트레오네이트 15mg/kg/ml가 매일투여됐다.

트레오네이트 함량은 15mg/kg 씩 투여될 수 있도록 체중의 증가에 대하여 조절되었다.

4일째 되는날 A 그룹의 쥐들은 0.6mg/kg의 피록시캄이 투여되었고 AM 그룹은 0.6mg/kg의 피록시캄과 15mg/kg의 트레오네이트가 투여되었다.

혈장시료는 혈장 피록시캄 분석을 위하여 4,6,8 및 10시간 마다 채취되고 피록시캄 분석에 선택적 HPLC가 사용되었으며, 자료는 SAS 기법에 의하여 통계적으로 분석되었다. 두 그룹사이의 혈장 피록시캄 농도차이를 결정하는 측정기법은 반복되는 ANOVA 기법이 이용되었다.

표 V는 그룹 A와 AM(대사산물이 전처리된)이 각 쥐들에서의 실존하는 혈장 피록시캄 농도를 나타낸다. 각 시점에서의 각 그룹에 대한 평균치(X)가 주어졌으며 제4 도는 표 V의 자료로부터 얻어지는 혈장도면이다.

전처리된 AM 그룹이 전처리되지 않는 그룹보다 더 높은 피록시캄 혈장수준을 갖는다는 것을 혈장 도면으로부터 알 수 있다. AM 그룹은 보다 높은 흡수비율을 가지며 10시간 이상 높은 혈장수준을 유지하였다. 높은 혈장수준의 차이는 평균 약 60%이다. 이 높은 수준은 P.<0.05에서 통계적으로 분명하다.

칼슘 트레오네이트로 전처리한 것은 피록시캄(Feldene)의 혈장수준을 괄목하게 증가시켰고 10시간이 지나도록 유지시켰다.

[표 Ⅴ]

[실시예 14]

3 T 3 쥐 섬유아세포를 담은 25㎠의 T자형 플라스크가 37℃에서 1시간 동안 100mg%(1mg/ml) 칼슘 L-트레오네이트(pH 7.4)로 배양되어졌다.

대조표준 그룹은 대조기능으로서 Riner's와 같이 배양되어졌다.

배양액이 다시 옮겨지고 각 플라스크에 1.25mg%의 아스콜빈산이 가하여진다(5μl의 14 C-L 아스콜빈산이 가하여지고 10.0mCi/mmol, 0.05mCi/ml). pH치l는 7.62로 고정되고 플라스크는 20분간 37℃에서 유지되어졌다.

플라스크는 4ml HBSS(-)로 세척 후 5분간 0.1ml의 트립신-DETA로 트립신화된다. 세포 효소반응을 정지시키기 위하여 4ml의 냉 HBSS(-)에 다시 현탁시켜 세포는 1000G에서 10분간 원심분리 되어진다. 다음 세척되어 4ml HBSS(-)에 현탁되어진다.

다시 원심분리 되어지고(1000G에서 10분간) 1.0ml 증류수에 다시 현탁하여 90초간 고주파 분해시킨다.

각 샘플의 0.5ml는¹⁴C를 측정하는데 사용되고 0.5ml는 부레드 훠드(Brad ford)법을 사용한 단백질 분석에 사용된다.

세포속에 흡수된¹⁴C는 계산결과 다음과 같은 결과를 가져왔다.

[표 Ⅵ]

결국, 트레오네이트를 함유한 플라스크로의 세포에서의¹⁴C-L-아스콜빈산의 흡수율은 대조표본용액을 함유한 세포에서보다 1.86배 더 크다. 이 결과는 통계적으로 중요하며 스튜텐트의 T-실험, 알파=0.05), 제5도의 그래프로 나타내어진다.

Claims (4)

1. (a)(i) 분자량이 5000 이하이고 (ii) 산성관능기를 가지며 생리학적 pH=7.4에서 pKa≤6이고 (iii)유기음이온의 신장 관상 분비경로를 경유하면서 대사되지 않고 정상적으로 방출되는 치료학적 활성화합물 : 및 (b) L-트레온산(L-threonic acid), L-크실론산(L-xylonic acid), L-리크손산(I--Iyxonic acid) 상기 화합물들로부터의 식용 가능한 무독성 염, 상기 화합물들로부터의 알도노-락톤 및 알도노-락티드 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물로 구성된 치료학적 조성물.
2. (a)(i) 디히드로아스코르빈 산 (ii) L-아스코르빈산과 이로부터의 식용 염 증에서 선택된 비타민 C활성을 가지는 화합물의 유효량과 ; (b) L-트레온 산, L-크실론 산 및, L-리크손 산의 알도노-락톤과 상기 L-트레온 산, L-크실론 산 및 L-리크손 산의 식용염 중에서 선택된 적어도 하나의 화합물의(상기 비타민 C 화합물의 인체 홉수율의 증가에 대한) 유효량으로 구성된 비타민 C 조성물.
3. 상기 제2항에 있어서, 알돈 화합물의 양이 상기 비타민 C 화합물의 흡수율을 증가시키는데에 효과적인 것을 특징으로 하는 비타민 C 조성물.
4. 상기 제2항에 있어서, 알돈 화합물의 양이 상기 비타민 C 화합물의 배출율을 감소시키는데에 효과적인 것을 특징으로 하는 비타민 C 조성물.