LU601702B1 - Coccidioides albicans Stamm LQB-025 und seine Anwendung - Google Patents

Abstract

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf das technische Gebiet der biologischen Bekämpfung von Pflanzenschädlingen und insbesondere auf einen Coccidioides albicans-Stamm LQB-025 und seine Anwendung. Der durch die vorliegende Erfindung bereitgestellte Stamm wurde am 30. März 2016 im General Microbiology Centre des China Microbial Strain Deposit Management Committee mit der Hinterlegungsnummer CGMCC Nr. 12110 hinterlegt.Die vorliegende Erfindung sieht auch die Anwendung des Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 bei der Bekämpfung des Reisstengelbohrers und des Reiskäfers sowie bei der Herstellung von Insektiziden vor. Der Coccidioides albicans-Stamm LQB-025, der durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird, ist in der Lage, gleichzeitig eine hohe Pathogenität gegen den Reisstängelbohrer und den Reisrüssler aufzuweisen, und verbessert die Vorbeugungs- und Bekämpfungswirkung gegen den Reisstängelbohrer und den Reisrüssler erheblich.

Description

Coccidioides albicans Stamm LQB-025 und seine Anwendung LU601702

Technischer Bereich

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf das technische Gebiet der biologischen

Bekämpfung von Pflanzenschädlingen, insbesondere auf den Coccidioides albicans-Stamm LQB- 025 und dessen Anwendung.

Technologie im Hintergrund

Der Stängelbohrer (Chilo suppressalis Walker), der zur Familie der Schmetterlinge (Lepidoptera) gehört und allgemein als Herzwurm, Stängelbohrer usw. bekannt ist, ist einer der schwerwiegendsten Schädlinge an Reis in China. Neben Reis kann der Stängelbohrer auch

Wildreis, Mais, Sorghum, Zuckerrohr, Raps, Ackerbohnen, Weizen sowie Schilf, Scheunengras,

Lees Gras und andere Unkräuter schädigen. Die Larven des Stängelbohrers verursachen Schäden an verwelkten Blattscheiden, verwelkten Sämlingen und weißen Ähren, indem sie die

Blattscheiden, Herzblätter und Stängel von Reis befallen, und in der Reifezeit schädigen sie die

Pflanze durch halbfaule Stacheln, was zu erheblichen Ertragseinbußen führt. Der Stängelbohrer kann die Reiserträge in der Regel um 5-10 % verringern, in schweren Fällen sogar um 20-30 %.

Reis Wasser Rüsselkäfer (Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel) gehört zu Coleoptera,

Rüsselkäfer Familie, Sumpf Rüsselkäfer Unterfamilie, Reis Wasser Rüsselkäfer Gattung, vor allem für das Wachstum von Reis und anderen Getreidepflanzen, die erwachsenen nagen an den

Blättern des Reises, Larven ernähren sich von den Reiswurzeln, mit einer langen Zeit der

Beschädigung, Reproduktion und Verbreitung von schnell, resistent gegen Drogen und Widerstand und andere Merkmale. In der Regel durch Reis verursacht Ertragsminderung von 15-20 Prozent, schwerwiegende Ertragsminderung von mehr als 50 Prozent, oder sogar das Aussterben, ist ein wichtiger Quarantäneschädling auf Reis, ernsthafte Auswirkungen auf das Wachstum und die

Entwicklung von Reis und Reisproduktion, Reis Rüsselkäfer hat sich zu einer großen potenziellen

Bedrohung für Chinas Reisproduktion, China wird als einer der wichtigsten, um die Prävention und Kontrolle der fünf invasiven fremden Organismen in den letzten Jahren zu stärken aufgeführt.

Gegenwärtig basiert die Bekämpfung von Reiszünsler und Reiskäfer im Reisanbau hauptsächlich auf chemischer Bekämpfung. Der langfristige Einsatz von Chemikalien führt jedoch nicht nur dazu, dass die Schädlinge gegen eine Vielzahl der gängigen Insektizide resistent werden, sondern auch zu häufigen Ausbrüchen von Stängelbohrer und Reiskäfer, was zu einem kontinuierlichen Anstieg des Medikamenteneinsatzes führt. Darüber hinaus wird durch den

Einsatz von Chemikalien auch die Umwelt verschmutzt, was der Nachhaltigkeit der landwirtschaftlichen Produktion nicht zuträglich ist. Daher ist es von großer Bedeutung, eine umweltfreundliche, schadstofffreie und hocheffiziente biologische Bekämpfungsmethode zu finden, die gleichzeitig zwei Reisschädlinge bekämpfen kann.

Beauveria Bassiana ist ein Fadenpilz, der zur Gattung Beauveria spp. im Unterstamm

Deuteromycotina, Klasse Hyphomycetes, Ordnung Moniliales, Familie Moniliaceae gehört.

Beauveria spp. ist ein entomopathogener Breitspektrum-Pilz, der sich hauptsächlich ungeschlechtlich vermehrt, indem er Konidien produziert, aber auch sexuell, um Fruchtkörper zu bilden. C. albicans hat eine starke Pathogenität, kann Epidemien unter den Wirten auslösen, verschmutzt die Umwelt nicht und ist leicht in großem Maßstab zu produzieren, weshalb C. albicans weithin bei der Schädlingsbekämpfung in der landwirtschaftlichen Produktion eingesetzt wird und ein sehr effizientes mikrobielles Insektizid ist. C. albicans hat eine gewisse

Wirtsspezialisierung, Studien haben gezeigt, dass verschiedene Herkunftsregionen, verschiedene

Wirtsquellen von Stämmen von Schädlingen auf das Ziel der Pathogenität der Unterschied ist sehr signifikant, verschiedene Stämme der tödlichen Zeit (LT90) kann mehrere Male auf zehn Mal dé/601 702

Unterschied.

Derzeit, wenn die Verwendung von C. albicans für die Schädlingsbekämpfung vor Ort, ist es oft wegen der Herstellung von entsprechenden spezialisierten Stämme für verschiedene Ziel-

Schädlinge, die Unannehmlichkeiten zu einem gewissen Grad verursacht und ist nicht förderlich für die Anwendung von C. albicans für die weitere Förderung der biologischen Kontrolle.

In Anbetracht dessen wird die vorliegende Erfindung vorgeschlagen.

Inhalt der Erfindung

Ein erstes Ziel der vorliegenden Erfindung ist es, einen Stamm LQB-025 von Coccidioides albicans bereitzustellen, der in der Lage ist, gleichzeitig eine hohe Pathogenität gegen den

Reisschädlingsstängelbohrer und den Reiswasserrüssler zu haben, der in der Lage ist, die

Vorbeugung und den Bekämpfungseffekt gegen den Reisschädlingsstängelbohrer und den

Reiswasserrüssler wesentlich zu verbessern, und der biologisch gut charakterisiert, umweltfreundlich, nicht verschmutzend und nicht leicht zu einer Arzneimittelresistenz zu führen ist.

Um den oben genannten Zweck zu erreichen, ist die technische Lösung, die in der vorliegenden Erfindung angenommen wird, wie folgt:

Ein Coccidioides albicans-Stamm LQB-025, wobei der Coccidioides albicans-Stamm LQB- 025 am 30. März 2016 im General Microbiology Centre of China Microbial Species Deposit

Management Committee hinterlegt wurde, mit der Hinterlegungsnummer CGMCC No. 12110.

Ferner zeigt die Koloniekultur des Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 im Frühstadium ein flauschiges Aussehen und bildet später eine cremig-pulvrige Sporenschicht mit gleichmäßiger

Dicke der Sporenschicht, die in der Mitte leicht erhaben ist; das Myzel ist hyalin mit Entmischung und Verzweigung und ist farblos und glatt; der Konidienstiel ist meist flaschenförmig und steht entweder einzeln oder in Gruppen; und das Konidium ist einzellig, farblos und kugelförmig oder oval mit einer Größe von 2 - 3 um x 2 - 2,5 um.

Verwendung des oben genannten Coccidioides albicans Stammes LQB-025 bei der

Bekämpfung des Stängelbohrers.

Verwendung des oben genannten Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 bei der

Bekämpfung des Reiswasserrüsslers.

Verwendung des oben genannten Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 bei der

Herstellung von Insektiziden.

Fügen Sie ein oder mehrere Dispergiermittel, Benetzungsmittel, Emulgatoren, Entschäumer,

Regulator usw. als Hilfsmittel oder Adsorptionsträger in das Pulver aus Coccidioides albicans-

Sporenpulver ein, das in einem bestimmten Verhältnis gemischt wird, und verarbeiten Sie es dann zu Pulver, benetzbarem Pulver, Suspensionsmittel oder Mikropartikelmittel.

Der Gehalt an Konidien des Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 in dem Insektizid beträgt 40-10 Milliarden Sporen/g des Fungizids.

Die vorteilhaften Wirkungen der vorliegenden Erfindung im Vergleich zum Stand der Technik sind: (1) Der Coccidioides albicans-Stamm LQB-025, der durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird, ist ein Coccidioides albicans-Stamm mit hoher Pathogenität für den

Reisstängelbohrer und den Reiskäfer, der die Kontrollwirkung des ursprünglichen, im Labor konservierten Stammes (Stamm XJ8) auf den Reisstängelbohrer und den Reiskäfer wesentlich verbessert und deutlich übertrifft, und der Stamm hat gute biologische Eigenschaften und ist umweltfreundlich, nicht umweltverschmutzend und nicht leicht zu produzier& 601 702

Medikamentenresistenz. (2) Der Coccidioides albicans-Stamm LQB-025, der durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird, kann für die Herstellung von Insektiziden verwendet werden, die bequem zu verwenden sind, und hat eine gute Wirkung auf die Vorbeugung und Bekämpfung von

Reisstängelbohrer und Reiskäfer, die die Hauptschädlinge von Reis sind.

Beschreibung der beigefügten Zeichnungen

Um die technischen Lôsungen in den spezifischen Ausführungsformen oder im Stand der

Technik der vorliegenden Erfindung deutlicher zu veranschaulichen, werden die begleitenden

Zeichnungen, die bei der Beschreibung der spezifischen Ausführungsformen oder des Standes der

Technik verwendet werden, im Folgenden kurz beschrieben. Natürlich sind die begleitenden

Zeichnungen in der folgenden Beschreibung einige der Ausführungsformen der vorliegenden

Erfindung, und für eine Person von gewôhnlichem Fachwissen auf dem Gebiet, kônnen andere begleitende Zeichnungen auf der Grundlage dieser Zeichnungen ohne kreative Arbeit erhalten werden.

Bild 1 zeigt die Koloniemorphologie von Coccidioides albicans LQB-025, die durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird;

Bild 2 zeigt ein morphologisches Diagramm der Konidien von Coccidioides albicans LQB- 025, die durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt werden.

Detaillierte Beschreibung

Die technischen Lösungen der vorliegenden Erfindung werden im Folgenden in Verbindung mit den beigefügten Zeichnungen klar und vollständig beschrieben, und es ist offensichtlich, dass die beschriebenen Ausführungsformen ein Teil der Ausführungsformen der vorliegenden

Erfindung und nicht alle Ausführungsformen sind. Ausgehend von den Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung fallen alle anderen Ausführungsformen, die von einer Person mit normaler

Fachkenntnis auf dem Gebiet der Technik ohne schöpferische Arbeit erzielt werden, in den

Schutzbereich der vorliegenden Erfindung.

Der Coccidioides albicans-Stamm LQB-025, der durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird, wurde am 30. März 2016 unter der Hinterlegungsaummer CGMCC No. 12110 beim General Microbiology Centre of the China Microbial Strain Deposit Management Committee hinterlegt.

Ausführungsform 1 Isolierung und Identifizierung von Coccidioides albicans Stamm LQB- 025 (1) Isolierung und Aufreinigung

Nachdem die natürlich infizierten adulten Reiskäfer, die auf den Reisfeldern in der Stadt

Gongzhuling, Provinz Jilin, gesammelt wurden, ausreichend versteift waren, wurde die weiße pulverförmige Substanz auf der Körperoberfläche vorsichtig in einen sterilisierten Dreieckskolben geschüttelt, der eine sterilisierende wässrige Lösung mit 0,1 % Tween-80 enthielt, und die Sporen von C. albicans wurden durch ausreichendes Schütteln gleichmäßig dispergiert. Nach der

Gradientenverdünnung der vorbereiteten Sporensuspension tauchte man einen sterilen Spreizstab in verschiedene Verdünnungen der C. albicans-Sporenlösung und verteilte sie gleichmäßig auf der

PDA-Mediumplatte, die man zur Kultivierung in eine Umgebung mit einer Temperatur von 26°C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 90 % stellte.

Wenn eine einzelne Kolonie herauswächst, wird sie mit einer sterilen Inokulationsnadel entnommen und auf eine neue PDA-Medium-Platte zur individuellen Kultivierung übertragen;

anschließend wird die Kultivierung fortgesetzt, um sicherzustellen, dass keine anderdyt/601 702

Streubakterien vorhanden sind.

Der erhaltene C. albicans-Stamm wurde auf das PDA-Schrägmedium übertragen und 10-15

Tage lang bei 25°C und 90 % relativer Luftfeuchtigkeit kultiviert und dann im 4°C-Kühlschrank gelagert, nachdem eine große Anzahl von Konidien herausgewachsen war. (2) Morphologische Identifizierung:

Der isolierte Coccidioides albicans LQB-025-Stamm wurde auf PDA-Platten beimpft und bei 26°C kultiviert, um die morphologischen Merkmale der Kolonie, die sporenproduzierende

Struktur sowie die Form und GrôBe der Sporen zu beobachten.

Der isolierte Coccidioides albicans LQB-025-Stamm wurde 15 Tage lang in einem Inkubator bei 26°C und 95 % relativer Luftfeuchtigkeit inokuliert, und die Platte wurde mit 0,1 % wässrigem

Tween-80 gespült, zentrifugiert und in 0,1 % wässrigem Tween-80 resuspendiert und zu einer

Sporensuspension von 1x10” Sporen/ml verdünnt. Nach der Beimpfung der Platte mit PDA-

Medium wurde sie in einen Inkubator gestellt, um die morphologischen Merkmale der Kolonie, die sporenbildende Struktur sowie die Form und Größe der Sporen zu beobachten.

Bild 1 zeigt die Koloniemorphologie von Coccidioides albicans LQB-025, die durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird; Bild 2 zeigt die Konidienmorphologie von Coccidioides albicans LQB-025, die durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird. Wie in den Bildern 1 und 2 gezeigt, änderte sich die Kolonie allmählich von weiß zu cremeweiB, war anfangs flauschig und bildete später eine cremig-pulvrige Sporenschicht mit gleichmäBiger Dicke der Sporenschicht und einem leicht erhabenen Zentrum; das Myzel war transparent, mit Entmischung und

Verzweigung und war farblos und glatt; der Konidienstiel war meist vasenfôrmig und war entweder einzeln oder in Gruppen angeordnet; und die Konidiophoren waren einzellig, farblos und hatten eine kugelfôrmige oder ovale Form und eine Größe von 2 - 3 um x 2 - 2,5 um. (3) ITS-Sequenzbestimmung und molekulare Identifizierung des Stammes:

Die DNA des Stammes wurde nach den Richtlinien des Biotek Fungal Genomic DNA

Extraction Kit extrahiert. Die Primer ITS4 und ITSS wurden für die rRNA-Amplifikation verwendet.

Die extrahierte DNA diente als Vorlage für die PCR-Amplifikation und Sequenzierung mit universellen Primern für die pilzliche ITS5-Region.

Das PCR-Reaktionssystem umfasste 20 ul, und die Reaktionsbedingungen waren wie folgt:

Vordenaturierung bei 95°C für 8 min; 95°C für 30 s, 52°C für 30 s, 72°C für 30 s, 33 Zyklen;

Verlängerung bei 72°C für 10 min.

Die Sequenzen der Primer ITS4 und ITSS sind in SEQ ID Nr.: 1 und SEQ ID Nr: 2 dargestellt;

SEQ ID Nr: 1: TCCTCCGCTTATTGATATATGC (5' bis 3' Ende)

SEQ ID Nr.: 2: GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG (S' bis 3' Ende)

Die ITS-Sequenzierungsergebnisse des C. albicans-Stammes der vorliegenden Erfindung sind in den Sequenzierungsergebnissen mit 99,3 % Homologie mit C. tritici in der NCBI-

Datenbank dargestellt, was zeigt, dass es sich bei dem Stamm um C. albicans (Beauveria bassiana) handelt.

Ausfiihrungsform 2 Biologische Indikatoren des C. albicans-Stammes LQB-025

Die Sporenproduktion, die Sporenauskeimungsrate, die Stammwachstumsrate und die

Pathogenität von C. albicans-Stäimmen sind wichtige Indikatoren, die die hervorragenden

Figenschaften des Stammes widerspiegeln. (1) Bestimmung der Sporenproduktion

Die Sporenproduktion des Stammes spiegelt die Vermehrungsfähigkeit des Stammes, dt&}601 702

Fähigkeit der Sporen, sich in der Umwelt zu verbreiten, und das Ausmaß der Verbreitung wider und ist einer der wichtigsten Indikatoren zur Messung der Vor- und Nachteile eines Stammes.

Zunächst wurden C. albicans-Stimme zu Konidiensuspensionen in einer Konzentration von 51x10” Sporen/ml mit 0,1% Tween-80 sterilem Wasser aufbereitet. Das feste PDA-Plattenmedium wurde mit 200 uL Konidiensuspension beimpft, mit einem sterilisierten Glasstab gleichmäBig verteilt und dann 10-15 Tage lang bei einer Temperatur von 25°C und einer relativen

Luftfeuchtigkeit von 90% gelagert. Mit einem Perforator mit einem Durchmesser von 0,8 cm in der Mitte der Kolonie bis zum Rand des Mittelpunkts wurde ein bestimmter Bereich der Kolonie entnommen, in einen kleinen Dreieckskolben übertragen, 0,1 % steriles Tween-80-Wasser hinzugefügt und im Vortex-Oszillator vollständig in Schwingung versetzt, um die Sporen gleichmäßig in der Sporensuspension zu verteilen. Jede Petrischale wurde an drei Punkten entsprechend dem Dreieck beprobt, und jeder Stamm wurde fünfmal wiederholt, und die Anzahl der Sporen wurde mittels Hämatokritplatte bestimmt, die schlieBlich in die durchschnittliche

Sporenproduktion pro Quadratzentimeter jedes Stammes umgerechnet wurde. Der Originalstamm

XJ8, der in unserem Labor aufbewahrt wird, wurde als Kontrollstamm (CK) für den Versuch verwendet.

Die Sporenproduktion der C. albicans-Stämme ist in Tabelle 1 dargestellt.

Tabelle 1 Sporenproduktion von C. albicans-Stimmen.

EE

Sporenproduktion (x10%/cm?)

Unterschied

Stämme

Wiederho/Wiederho/Wiederho| Wiederhol |Wiederho

Mittelwert 5% 1% eo [inet con nen po | 79 [78 [3m | 30 | 30 [wen [wa

PA jar [vw [aw [av [ow [oem EE

Wie aus Tabelle 1 ersichtlich, betrug die durchschnittliche Sporenproduktion des C. albicans-

Stammes LQB-025 2,97x10%cm?, was signifikant höher war als die des CK-Stammes mit einer durchschnittlichen Sporenproduktion von 2,33x10%/cm?, wobei der Unterschied zum CK-Stamm hoch signifikant war. (2) Bestimmung der Sporen-Keimungsrate

Die Geschwindigkeit der Sporenkeimung spiegelt die Infektion und Pathogenität des

Stammes wider und ist ein wichtiger Index zur Messung des Potenzials eines Stammes.

Der C. albicans-Stamm wurde in eine Konidiensuspension mit einer Konzentration von 1x10’

Sporen/ml mit 0,1% Tween-80 sterilem Wasser hergestellt, und dann in das flüssige Medium beimpft, (25+1)°C Oszillationskultur (150r/min), und die Anzahl der gekeimten Sporen wurde mikroskopisch nach 14h untersucht. Mirror Verdünnung zu jedem Sichtfeld von 20-30 Sporen, jedes Mal, wenn der Spiegel Inspektion von fünf Sichtfeldern, nicht weniger als 100 Sporen, um sichtbare Knospe Rohrlänge gleich oder größer als die Lange der Spore Durchmesser als die Spore wurde als Standard, Statistiken der Spore Keimrate gekeimt. Der in unserem Labor aufbewahrte

Originalstamm XJ8 wurde als Kontrollstamm (CK) verwendet.

Die Sporenkeimungsrate des C. albicans-Stammes ist in Tabelle 2 dargestellt.

Tabelle 2 Sporenkeimungsrate von C. albicans-Stimmen

. Signifikanter-J601702

Keimrate (%) .

Unterschied

Stämme - - - - -

Wiederho|Wiederho|Wiederho[Wiederho|Wiederho

Mittelwert 5% 1% lungl | lung I | lung II | lung IV | lung V

LQB-025 | 9432 | 9528 | 94.69 | 9487 | 9595 | 95.02+0.26 a | A 94.16 | 91.14 | 95.17 | 9635 | 96.09 | 9458031 | a | A

Wie aus Tabelle 2 hervorgeht, betrug die durchschnittliche Sporenkeimungsrate des C. albicans-Stammes LQB-025 95,02 % und die durchschnittliche Sporenkeimungsrate des CK-

Stammes 94,58 %, was keinen großen Unterschied darstellt und nicht signifikant ist. (3) Bestimmung der Wachstumsrate des Stammes

Die Schnelligkeit des Nährstoffwachstums des Stammes ist einer der wichtigsten Indikatoren, der die hervorragenden Eigenschaften der Stämme widerspiegelt.

Der Coccidioides albicans-Stamm wurde auf ein PDA-Schrägmedium beimpft und bei einer

Temperatur von 25°C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 90 % kultiviert. Nach 10-15 Tagen

Kultivierung wurden die Konidien entnommen, um eine Konidiensuspension mit einer

Konzentration von 1x10’ Konidien/ml in 0,1 % Tween-80 sterilem Wasser herzustellen. Dann wurden SuL der Konidiensuspension mit einer Konzentration von 1x10’ Konidien/ml mit einer

Mikropipette aufgesaugt und in die Mitte des PDA-Festmediums beimpft, ein Punkt pro Schale, und für jeden Stamm wurden 5 Wiederholungen durchgeführt. Anschließend wurde die Schale 8

Tage lang bei einer Temperatur von 25 °C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 90 % gelagert, und der Durchmesser der Kolonie wurde mit einem Messschieber über Kreuz gemessen, die

Wachstumsrate wurde aufgezeichnet und die durchschnittliche Wachstumsrate (mm/d) berechnet.

Der in unserem Labor aufbewahrte Originalstamm XJ8 wurde als Kontrollstamm (CK) verwendet.

Die Wachstumsraten der C. albicans-Stämme sind in Tabelle 3 aufgeführt.

Tabelle 3 Wachstumsraten von C. albicans-Stämmen a Signifikanter

Durchschnittliche Wachstumsrate (mm/d) .

Unterschied

Stämme - - - - -

Wiederho| Wiederhol [Wiederho|Wiederho| Wiederhol . 1%

Mittelwert 5% lung I ung II | lung III | lung IV | ung V

LQB-025 | 3.619 3.704 3.704 | 3.816 3.687 3.706+0.13 La | A 3.470 | 3.606 | 3.694 | 3.670 | 3.405 3.570+0.10 |» | B

Anmerkung: Die Daten in derselben Spalte, gefolgt von unterschiedlichen Kleinbuchstaben (GroBbuchstaben), zeigen an, dass der Unterschied auf dem Niveau von Poos (Poo1) durch den

Duncan-Test signifikant ist, so wie in der folgenden Tabelle.

Wie aus Tabelle 3 ersichtlich ist, war die Wachstumsrate des C. albicans-Stammes LQB-025 schneller, mit einer durchschnittlichen Wachstumsrate von 3,706 mm/d, die signifikant hoher war als die durchschnittliche Wachstumsrate des CK-Stammes in der Kontrollgruppe. Nach der

Messung der neuen komplexen polaren Abweichung nach Duncan erreichten die Unterschiede zwischen der Kolonie-Wachstumsrate des Stammes LQB-025 und des CK-Stammes auf dem

Niveau von a = 0,01 ein hoch signifikantes Niveau. (4) Bestimmung der insektiziden Aktivität in Innenräumen

Die Pathogenität des Stammes steht in direktem Zusammenhang mit der insektizidd/601702

Wirkung des Stammes, die ein äußerst wichtiger Indikator fiir die hervorragenden Eigenschaften des Stammes ist.

Insekten für den Versuch: Uberwinternde überlebende Stängelbohrerlarven wurden im

Frühjahr von Reisstoppeln gesammelt und dann verpuppt, gefiedert, Eier gelegt und geschlüpft, nachdem sie aus der Stagnation in Innenräumen freigelassen wurden, wurden die Larven mit künstlichem Futter aufgezogen, und wenn sie sich bis zum Alter von 3 Jahren entwickelt hatten, wurden sie dem Biotest von C. albicans-Stämmen in Innenräumen unterzogen; adulte Reis-

Wasserkäfer, die im Frühjahr vom Feld gesammelt wurden, und dann die gesunden und aktiven lebenden Würmer wurden als das Insekt für den Versuch ausgewählt, nachdem sie für 10 d in

Innenräumen aufgezogen wurden.

Der C. albicans-Stamm wurde auf ein PDA-Plattenmedium beimpft und 10-15 Tage lang bei 25°C und 90 % relativer Luftfeuchtigkeit bebrütet. Anschließend wurden die Konidien zu einer

Konidiensuspension mit einer Konzentration von 1,5x10° Konidien/ml in 0,1 % sterilem Tween- 80-Wasser verarbeitet. Die Konidiensuspension wurde in ein autoklaviertes Halssprühgerät gegossen, und die Larven des dritten Stadiums des Stängelbohrers (oder der erwachsenen

Reiskäfer) für den Test wurden in ein sterilisiertes Emaille-Tablett gelegt, und dann wurde die

Sprühinokulation mit einem Halssprühgerät für jeden Stamm durchgeführt (drei Mal pro

Wiederholung je nach Sprühgerät), und es wurden vier Wiederholungen für jeden Stamm eingerichtet, mit 20 Larven des dritten Stadiums des Stängelbohrers (oder der erwachsenen

Reiskäfer) für jede Wiederholung. Nach der Sprühinokulation wurden die Larven des 3. Stadiums (oder die erwachsenen Reiskäfer) einzeln in mit Filterpapierstreifen versehene Fingerröhrchen gesetzt. Die Öffnung des Fingerrohrs wurde mit einem Wattebausch verschlossen, um die

Belüftung aufrechtzuerhalten. Die Kontrollen wurden mit der gleichen Menge an sterilem Wasser mit 0,1 % Tween-80 geimpft. Sowohl die Behandlungen als auch die Kontrollen wurden bei einer

Temperatur von 25 °C und 90 % relativer Luftfeuchtigkeit bebrütet. Die Fingerröhrchen wurden drei Tage lang mit Wasser gefüllt, um eine hohe Luftfeuchtigkeit aufrechtzuerhalten, und die

Anzahl der infizierten toten Würmer wurde ab dem zweiten Tag täglich untersucht und gezählt, und die Anzahl der steifen Würmer wurde für eine kumulative Gesamtzahl von 15 Tagen aufgezeichnet, und schließlich wurde die kumulative Mortalitätsrate gezählt. Der Originalstamm

XJ8, der in unserem Labor aufbewahrt wird, wurde als Kontrollstamm (CK) für den Versuch verwendet.

Die Pathogenität von C. albicans-Stämmen gegen den Stängelbohrer ist in Tabelle 4 dargestellt.

Die Pathogenität von C. albicans-Stämmen gegen den Reiswurzelbohrer ist in Tabelle 5 dargestellt.

Tabelle 4 Pathogenität von C. albicans-Stämmen gegen Stängelbohrer

Anzahl Korrigi Zeit bis der Todesfälle | erte Toxizität zur

Sterblich Korrelati

Stämm | Testwür ; Sterblic | Korrelatio Sterblic keit onskoeffi e mer Wi | Wi | Wi | Wi hkeitsra | nsgleichun hkeit (%) zient (Kopf) | ed | ede | ede | ede te (%) |g (Tage)

olu | lun | lun | lun LU601 702 ng |gll|8 |g

I IT | IV

LQB- y = 1.084x |r = | 5.290. 19 119 |19 | 18 | 93.75 93 Aa 025 +0.546 0.9842 54 y=0.885x |r = | 5.880.

CK 19 |18 | 17 | 18 | 90.00 89.47b +1.075 0.9759 53

Aus Tabelle 4 und Tabelle 5 geht hervor, dass die Pathogenität des C. albicans-Stammes EH

M-068 sowohl beim Stängelbohrer als auch beim Reiswurzelbohrer stärker war, mit einer

Mortalitätsrate von 93,75 % bzw. 75,00 % und einer korrigierten Mortalitätsrate von 93,42 % bzw. 73,68 %, die höher waren als die des Kontrollstammes (CK) beim Stängelbohrer und beim

Reiswurzelbohrer, wobei sich alle Werte signifikant vom Kontrollstamm (CK) unterschieden.

Tabelle 5 Pathogenität von C. albicans-Stäimmen auf den Reiswurzelbohrer.

Anzahl der

Todesfälle Co

Zeit bis

Anzah ; ; | Korrigi

Wi | Wi | Wi . Toxizität zur lder | Wi Sterblich erte Korrelati

Stämm ede | ede | ede . Korrelatio Sterblic

Testw | ed keit Sterblic onskoeffi . e rho | rho | rho nsgleichun hkeit ürmer | erh (%) | hkeitsra zient lun | lun | lun g (Tage) (Kopf) | olu te (%) g | 8 | 8 LToo ng

Im | HI | IV

I y =

LQB- r= 8.03+ 14 | 15 | 15 | 16 | 75.00 | 73.68a | 0.746x + 025 0.9616 0.77 0.287 y = r= 9.14+

CK 15 | 14 | 14 | 14 | 7125 | 69.74b | 0.682x + 0.9963 0.88 0.051

Aus Tabelle 4 ist ersichtlich, dass der LT9o-Wert des C. albicans-Stammes EH M-068 auf den

Stängelbohrer nur 5,29 Tage beträgt, was niedriger ist als der LT90-Wert des CK-Stammes von 5,88

Tagen; aus Tabelle 5 ist ersichtlich, dass der LTeo-Wert des C. albicans-Stammes EH M-068 auf den Stängelbohrer nur 8,03 Tage beträgt, was niedriger ist als der LT90-Wert des CK-Stammes von 9,14 Tagen.

Zusammenfassend lässt sich feststellen, dass der C. albicans-Stamm EH M-068 eine gute

Kontrollwirkung auf den Stängelbohrer und den Reiswurzelbohrer hat.

Ausführungsform 3 Bekämpfung von Stängelbohrer und Reiskäfer durch ein mit deh/601702

Paenibacillus sp. Stamm LQB-025 hergestelltes Insektizid 1) Feldtestmethode:

Im Mai-Juni 2016 wurde in der Stadt Gongzhuling in der Provinz Jilin ein Reisfeld mit einer

Fläche von 300m? als Testbasis ausgewählt und insgesamt sechs Behandlungen nach dem

Zufallsprinzip durchgeführt. Die Behandlungen I bis IV wurden alle mit Insektiziden behandelt, die den erfindungsgemäßen Coccidioides albicans-Stamm LQB-025 enthielten, wobei der Gehalt an Konidien des Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 in den Insektiziden 5 Milliarden

Sporen/g des Pilzes betrug. Die Behandlungen I bis IV wurden mit 62,5 g/mu, 125 g/mu, 250 g/mu bzw. 500 g/mu besprüht, während die Behandlung V mit einem Biopestizid und die Behandlung

VI mit Wasser als Kontrollversuch besprüht wurde. Die Behandlungen I bis VI wurden mit einer

Rückenspritze gleichmäßig auf die Stängel und Blätter des Reisfeldes gespritzt, und eine

Anwendung erfolgte eine Woche nach dem Einpflanzen der Reissetzlinge (25. Mai), eine weitere alle 7 Tage. Im Stadium der Trächtigkeit (30. Juni) wurde einmal gesprüht, danach noch einmal im Abstand von 7 Tagen. (2) Erhebungsmethode

Die Dichte der adulten Reiskäfer in den verschiedenen Behandlungen wurde 3 Tage nach der ersten und zweiten Anwendung (d.h. am 28. Mai und 5. Juni) erhoben, wobei 5 Punkte in jedem

Feld nach dem Zufallsprinzip untersucht wurden und 100 Reispflanzenbüschel an jedem Punkt standen;

Am 25. Juli untersuchten wir den Grad der Schädigung durch den Reiswurzelbohrer in Bezug auf das verwelkte Herz, die verwelkte Blattscheide und die weiße Ähre.

Wirksamkeit der Insektizide gegen den Reiswurzelbohrer auf dem Feld Tabelle 5.

Insektizide gegen Stängelbohrer Feldwirksamkeit Tabelle 6.

Tabelle 5 Insektizide gegen den Reiswurzelbohrer Feldwirksamkeit der Situation Tabelle

Anzahl der Zahl der Anzahl der erwachsenen erwachsenen erwachsenen

Insekten vor der Käfer nach 3 Käfer nach 10 | Kontrollwirkung

Behandlung

Behandlung Tagen Tagen (%) (Kopf/100 (Kopf/100 (Kopf/100

Büsche) Büsche) Büschel)

Behandlung IM | 68 | M | 18 | 7% 6

Behandlung IV 75 39 16 78.67 € 1 «x | TT | 8 | EL

Wie aus Tabelle 5 ersichtlich, wurden die Behandlungen I bis IV mit Insektiziden behandelt, die den erfindungsgemäßen Coccidioides albicans-Stamm LQB-025 enthielten. Die Population der adulten Reiskäfer auf dem Feld begann 3 Tage nach der ersten Anwendung zu sinken, und 3

Tage nach der zweiten Anwendung war die adulte Population signifikant reduziert; Bei dd/601702

Behandlungen I bis IV betrug der Bekämpfungseffekt auf dem Feld 3 Tage nach der zweiten

Anwendung 46,25 %, 64,29 %, 77,94 % bzw. 78,67 %.

Mit der Erhöhung der Insektizid-Spritzmenge nahm die Wirkung der Feldkontrolle auf den

Reiswurzelkäfer zu. Zusätzlich zu Behandlung 1 war der Feldkontroll-Effekt gegen den

Reiswurzelkäfer etwas geringer als bei den Behandlungen 2 bis 4, der Feldkontroll-Effekt gegen den Reiswurzelkäfer betrug mehr als 60 %, was viel höher war als bei der Kontrollgruppe ohne

Insektizide; obwohl der Feldkontroll-Effekt von Behandlung 5, bei der chemische Pestizide gegen den Reiswurzelkäfer eingesetzt wurden, 98,75 % erreichte, aber die Kosten fiir chemische

Pestizide sind hoch und sie können die Umwelt verschmutzen.

Tabelle 6 Feldkontrollwirkung von Insektiziden gegen Stängelbohrer

Proz

Ver ents

Gesa | blü | atz . Mittl

Ver Rate Wei mtza | hte | der | Verwel Verwel ere wel der | We | Bspit | Anteil hl | He | verw kte kungsra Wirk kte verwelk | iBe | zigk | weißer der | rz- | elkte | Herzrat te der . - samk

Sc ; ten Ah | eit Ahren

Pfla | Pfl | 2 e Scheide eit hei Scheide | re (% | (%) nzen | anz | Herz | (%) (%) (% de (%) ) en en ) (% )

Beh andl 998 | 12 | 1.20 | 47.83a | 14 1.40 46.15a 5 | 0.50 | 37.50a | 43 83 ung

I

Beh andl | 1186 0.76 | 60.87b | 10 | 0.84 | 61.54b | 4 | 0.34 55.56b | 5932 ung

IT

Beh andl | 1008 0.79 | 65.20c 0.89 | 6538 | 3 | 0.30 | 66.67c | 65.76 ung

III

Beh andl | 1106 | 7 | 0.63 | 69.57c 0.72 | 69.23c | 3 | 027 | 66.67c | 68.49 ung

IV andl ung LU601702 wll

Ec 0

Wie aus Tabelle 6 ersichtlich ist, wurden bei den Behandlungen I bis IV unter Verwendung von Insektiziden, die mit dem erfindungsgemäßen C. albicans-Stamm LQB-025 hergestellt wurden, die drei Indizes für die Verwelkungsrate des Herzens, die Verwelkungsrate der Scheide und die Rate der weißen Ahren der Reispflanzen im Vergleich zur Kontrollgruppe CK deutlich reduziert. Unter ihnen erreichte die durchschnittliche präventive Wirkung der Behandlung drei und vier auf den Reisstängelbohrer mehr als 65%, was zeigt, dass das Insektizid, das mit dem

Coccidioides albicans-Stamm LQB-025 hergestellt wurde und durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird, eine offensichtliche Wirkung auf den Reisstängelbohrer hat. Obwohl die durchschnittliche Wirksamkeit chemischer Pestizide gegen den Reisstängelbohrer in Behandlung 585,54% erreichte, sind chemische Pestizide teuer und verursachen leicht Umweltverschmutzung.

Wie aus den kombinierten Tabellen 5 und 6 ersichtlich ist, haben die Insektizide, die den

Coccidioides albicans-Stamm LQB-025 enthalten, der durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird, offensichtliche Auswirkungen sowohl auf den Reiskäfer als auch auf den

Stängelbohrer, die die Hauptschädlinge im Reisproduktionsprozess sind.

Schließlich ist zu beachten, dass die obigen Ausführungsformen nur zur Veranschaulichung der technischen Lösungen der vorliegenden Erfindung dienen und diese nicht einschränken.

Obwohl die vorliegende Erfindung im Detail unter Bezugnahme auf die vorstehenden

Ausführungsformen beschrieben wurde, sollte der Fachmann verstehen, dass es immer noch möglich ist, die in den vorstehenden Ausführungsformen aufgezeichneten technischen Lösungen zu modifizieren oder einige oder alle der darin enthaltenen technischen Merkmale durch gleichwertige zu ersetzen; Und diese Änderungen oder Ersetzungen nehmen nicht das Wesentliche der entsprechenden technischen Lösungen aus dem Anwendungsbereich der technischen

Lösungen der Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung.

Claims (5)

Ansprüche LU601702

1. Einen Coccidioides albicans-Stamm LQB-025, dadurch gekennzeichnet, dass der Coccidioides albicans-Stamm LQB-025 am 30. März 2016 im General Microbiology Center des China Microbial Strain Deposit Control Committee mit der Hinterlegungsnummer CGMCC No. 12110 hinterlegt wurde.

2. Der Coccidioides albicans-Stamm LQB-025 nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Kolonien des Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 in der frihen Phase der Kultur ein flauschiges Aussehen aufweisen und in einer späteren Phase eine cremige, pulverfôrmige Sporenschicht mit einer gleichmäßigen Dicke der Sporenschicht und einem leicht erhabenen Zentrum bilden; Das Mycel ist hyalin, mit Entmischung und Verzweigung, farblos und glatt, mit einer Breite von 2,7-3,6 um; der Konidienstiel ist meist flaschenfôrmig, einzeln oder gebündelt; und die Konidien sind einzellig, farblos, kugelfôrmig oder eifôrmig, mit einer Größe von 2-3 pmx2 - 2,5 um.

3. Die Anwendung des Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 gemäß Anspruch 1 bei der Bekämpfung des Stängelbohrers.

4. Die Anwendung des Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 gemäß Anspruch 1 bei der Bekämpfung des Reiswasserrüsslers.

5. Die Anwendung des Coccidioides albicans-Stammes LQB-025 gemäß Anspruch 1 bei der Herstellung von Insektiziden.