LU84357A1 - Formulations pharmaceutiques comprenant de l'insuline humaine,un c-peptide humain et de la pro-insuline humaine - Google Patents

Description

2

Le diabète sucré est un trouble métabolique caractérisé par le fait que les tissus du corps ne parviennent pas à oxyder les carbohydrates au régime normal. Son facteur le plus important est une défi— 5 cience en insuline. Au cours des 60 dernières années, les personnes souffrant du diabète ont été considérablement aidées en recevant des quantités réglées d’insuline, Actuellement, l’insuline utilisée par les diabétiques a été isolée du pancréas des animaux, 10 généralement des bovidés et des porcs. L'insuline des bovidés et des porcs a une structure différente de celle de l’insuline produite par le pancréas humain. Récemment, par la méthodologie de l'ADN (ADN = acide désoxyribonucléique) recombinant, il est devenu pos-15 sible de préparer de l’insuline identique à celle produite par le pancréas humain. L'utilisation de cette insuline permettra, au diabétique, d'imiter le système naturel plus étroitement que ce n’était possible jusqu'à présent, 20 Néanmoins, il est admis depuis longtemps que la seule administration d'insuline à un diabétique est insuffisante pour rétablir et/ou maintenir - l'état métabolique normal. Bien que l'insuline mani feste son effet sur le métabolisme des carbohydrates, 25 le diabète sucré provoque des troubles supplémentaires dont la plupart, sinon tous, sont en relation avec la structure et la fonction des vaisseaux sanguins. Les déficiences conduisant à ces troubles sont rarement corrigées complètement par la thérapie classique à 30 l'insuline.

Les anomalies vasculaires associées au diabète sont souvent appelées "complications du diabète". Elles consistent généralement en changements micro-angiopathiques donnant lieu à des lésions de la rétine 35 et des reins, La neuropathie représente une complica- / 3 tion diabétique supplémentaire qui peut être en relation ou non, directement ou indirectement, avec les changements micro-angiopathiques précités· Parmi les manifestations spécifiques des complications du dia-5 bète, il y a, par exemple : (l) les maladies de l’oeil, notamment la rétinopathie, la formation de la cataracte, le glaucome et les paralysies musculaires extra-oculaires ; (2) les maladiés de la bouche, notamment la gingivite, l’apparition accrue de caries dentaires, 10 la périodontite et une plus forte résorption de l’os alvéolaire ; (3) les neuropathies motrice, sensorielle et autonome $ (4) la maladie des grands vaisseaux ; (5) la micro-angiopathie 3 (6) des maladies de la peau, notamment le xanthome du diabète sucré, la nécro-15 biose lipoïdique du diabète sucré, la furonculose, la mycose et le prurit 3 (7) des maladies des reins, notamment la glomérulosclérose diabétique, la néphro-sclérose artériolaire et la pyélonéphrite 3 et (8) des problèmes au cours de la grossesse, notamment 20 un accroissement des naissances de gros bébés, des mises au monde d’enfants morts-nés, des fausses couches, des mortalités néo-natales et des défauts congénitaux.

Bon nombre et peut-être la totalité des complications diabétiques résultent du fait qu’à elle 25 seule, l’insuline ne parvient pas à ramener le corps à son équilibre hormonal naturel.

La présente invention concerne des compositions pharmaceutiques permettant d'atteindre et de maintenir, chez un sujet diabétique, un état plus 30 proche de l'homéostase hormonale naturelle que celui I pouvant être obtenu par l'administration d’insuline seule.

Dès lors, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant, en association j 35 avec un support pharmaceutiquement acceptable, de l’in- 1 / 4 suline humaine, un C-peptide humain et de la pro-insu-line humaine, le rapport molaire entre l’insuline humaine et ce C-peptide humain étant d’environ 1:4 a environ 4 ï 1> tandis que le rapport pondéral entre 5 l’insuline humaine et la pro-insuline humaine se situe entre environ 1:100 et environ 100:1.

Les trois constituants essentiels des compositions pharmaceutiques de la présente invention sont l’insuline humaine, le C-peptide humain et la pro-10 insuline humaine.

L’administration d’une combinaison d’insuline humaine, d’un C-peptide humain et de pro-insuline humaine en utilisant une composition suivant la présente invention permet d’obtenir une utilisation plus 15 naturelle du glucose et un meilleur contrôle du glucose qu’avec l’insuline seule, atténuant ainsi les complications diabétiques néfastes qui ont été décrites ci-dessus.

La pro-insuline humaine peut être obtenue de 20 diverses manières, notamment par synthèse organique, par isolation du pancréas humain selon la méthodologie classique et, plus récemment, selon la méthodologie à l’acide désoxyribonucléique recombinant.

Dans ses grandes lignes, la production de 25 pro-insuline en adoptant la méthodologie à l’acide désoxyribonucléique recombinant consiste à obtenir, par isolation et/ou par construction, une séquence de codage d’acide désoxyribonucléique pour la séquence des acides aminés de la pro-insuline humaine.

30 On introduit ensuite l’acide désoxyribonucléique de pro-insuline humaine en phase de lecture dans un véhicule approprié de clonage et d’expression. Le véhicule est utilisé pour transformer un micro-organisme approprié, après quoi le micro-organisme transformé 35 est soumis à des conditions de fermentation conduisant //? /// Λ* * 5 à : (a) la production de copies supplémentaires du vecteur contenant le gène de pro-insuline et (b) 1*expression de la pro-insuline ou un produit précurseur de la pro-insuline.

5 Si le produit d'expression est un précur seur de pro-insuline, il comprendra généralement la séquence des acides aminés de la pro—insuline humaine réunie, à sa terminaison amino, à un fragment d'une protéine normalement exprimée dans la séquence de 10 gènes dans laquelle le gène de pro-insuline a été introduit. La séquence d'acides aminés de la proinsuline est réunie au fragment de protéine par l'intermédiaire d'un siège spécifiquement clivable, notamment la méthionine. Ce produit est habituellement 15 appelé ''produit génétique fusionné".

La séquence des acides aminés de la proinsuline est clivée du produit génétique fusionné en utilisant du bromure de cyanogène, après quoi les fractions sulfhydryle de la cystéine de la séquence 20 des acides aminés de la pro-insuline sont stabilisées ! par transformation en leurs S-sulfonates correspon dants .

| On purifie le S-sulfonate de pro-insuline obtenu, puis on transforme le S-sulfonate de pro-25 insuline purifié en pro-insuline par formation des trois liaisons disulfure correctement localisées,

La pro-insuline obtenue est ensuite purifiée.

De même, un deuxième constituant actif de i f la composition de la présente invention, à savoir 30 l'insuline humaine, peut être obtenu de diverses ma- j nières, notamment par synthèse organique, par isola- I tion du pancréas humain selon des techniques classi- I ques, par transformation d'insuline animale isolée,

B

P par transformation de pro-insuline humaine et par la j 35 méthodologie à l'acide désoxyribonucléique reeombi- I / î w 6 nant.

Toutefois, lorsqu'elle est produite, la pro-insuline humaine peut être clivée par voie enzymatique, par exemple, en utilisant de la trypsine et 5 de la carboxypeptidase B pour produire l'insuline humaine#

En adoptant la méthodologie à l'acide déso— * xyribonucléique recombinant d'une manière analogue à celle décrite ci-dessus pour la production de pro-10 insuline humaine, on peut préparer l'insuline humaine par l'expression et l'isolation séparées de la chaîne A et de la chaîne B de l'insuline humaine en formant ensuite leurs liaisons disulfure correctes.

L'insuline humaine peut également être pré-15 parée à partir de l'insuline de porcs# L'insuline humaine se différencie de l'insuline de porcs par un seul acide aminé, c'est-à-dire l'acide carboxy-amino-terminal de la chaîne B# L'alanine, c'est-à-dire l'acide aminé B-30 de l'insuline de porcs, est clivée 20 et remplacée par la thréonine. A cet égard, on se référera, par exemple, au brevet des Etats-Unis d'Amérique n° 3*276.961.

Un troisième constituant actif de la composition de la présente invention, à savoir le C—peptide 25 humain, est une portion d'un peptide présent dans la pro-insuline humaine et auquel sont réunies les chaînes A et B de 1*insuline. Ce dernier peptide, appelé "peptide de liaison" est éliminé au cours de la production d'insuline humaine à partir de pro-insuline.

30 Le peptide de liaison présent dans la pro-insuline humaine répond à la formule :

Arg-Ar g- Glu-Ala-Glu-As p-L eu- Gin-Va 1- Gly- Gln-Va 1-Glu-Leu-Gly—Gly-Gly-Pro-Gly-Ala-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Ala-L eu— Glu— Gly—S er—L eu—Gin—Lys —Arg.

/fi / // 35 7

Le C-peptide humain présent dans la composition de l’invention se différencie du peptide de liaison par l’élimination de quatre acides aminés, à savoir i deux à chaque extrémité. Dès lors, le C-peptide humain 5 a la structure suivante : ' Glu-Ala-Glu-Asp-Leu-Gin-Val-Gly-Gln-Val-Glu-Leu-G1y-

Gly-Gly-Pro-Gly-Ala-Gly-S er-L eu-Gln~Pro~L eu-Ala-L eu-Glu- Gly-S er-L eu- Gin .

Le C-peptide humain qui est un constituant 10 de la composition de l’invention, peut être obtenu par synthèse chimique [voir, par exemple, N, Yanaihara, C, Yanaihara, M, Sakagami, N, Sakura, T, Hashimoto et T. Nishida, "Diabetes” 27 (supplément l), 149-160 (1978)] ou à partir de pro-insuline humaine par suite 15 de son clivage en vue de former l’insuline humaine.

Le C-peptide humain peut également être obtenu conjointement avec l'insuline humaine par le I clivage enzymatique de la pro-insuline humaine, ainsi qu'on l'a décrit ci-dessus, 20 Les compositions de la présente invention contiennent l'insuline humaine, le C-peptide humain I et la pro-insuline humaine. L’insuline et la pro- , insuline humaines sont présentes dans un rapport pon déral se situant entre environ 1:100 et environ 100:1, 25 De préférence, le rapport pondéral entre l'insuline et la pro-insuline humaines se situe entre environ 1:2 et environ 100:1, mieux encore, entre environ I 1:1 et environ 20:1 et, de manière tout particulière-

Iment préférée, entre environ 4:1 et environ 20:1, On 30 mentionnera ci-après d’autres intervalles préférés I pour le rapport pondéral entre l'insuline et la pro insuline humaines : environ 1:30 à environ 100:1 ; environ 1:15 a environ 100:1 ; environ 1:10 à environ I 100:1 ; environ 1:30 à environ 20:1 5 environ 1:15 à ! I 35 environ 20:1 et environ 1:10 à environ 20:1, // 8 / Afk 8

Dans la composition de la présente invention, le rapport molaire entre l’insuline humaine et le C-peptide humain se situe entre environ 1:4 et environ 4:1. De préférence, le rapport molaire entre l'insu-5 line humaine et le C-peptide humain se situe entre environ 1:2 et environ 2:1, mieux encore, entre environ 1:1 et environ 2:1.

Comme on l’a indiqué, les compositions de la présente invention sont utiles pour favoriser l'ob-10 tention de l’homéostase hormonale naturelle et ainsi empêcher ou atténuer ou encore freiner sensiblement les complications diabétiques bien connues qui ont été mentionnées ci-dessus.

Il est admis que certains diabétiques sont 15 inaptes à recevoir efficacement de l’insuline par injection sous-cutanée par suite de la présence, à l'endroit de l'injection, de protéases qui détruisent rapidement l'insuline avant qu'elle ait pu être absorbée dans le courant sanguin et transportée vers 20 les sièges récepteurs. Si ces diabétiques doivent absolument recevoir de l’insuline, ils devront la recevoir par injection intraveineuse. Les injections intraveineuses répétées et indispensables sont inopportunes par suite de l’effet néfaste qu’elles exer-25 cent sur les veines du receveur avec les infections qui y sont associées. On a découvert que la proinsuline humaine n’était pas dégradée par ces protéases dégradant l’insuline et que, partant, elle pouvait être administrée par injection sous-cutanée.

30 Sa stabilité et, dès lors, sa disponibilité favorisent l'obtention d’une homéostase hormonale naturelle.

De plus, étant donné que l'insuline et la pro-insuline ensemble forment des complexes, on peut escompter que la pro—insuline assurera une protection pour l'insuline 35 qui est dégradable dans d'autres conditions.

/1* ί i \ 9 s ι I A la suite d'études récentes [Podlecki et I al., "Diabetes11, 31, supplément 2, 126A (1982)], on I a egalement note que la pro-insuline humaine se si tuait à l'intérieur de tissus cibles, par exemple, 5 des cellules de graisse. Bien que son action intra cellulaire particulière à une échelle moléculaire soit encore indéterminée, ces découvertes étayent davantage la description donnée dans la présente spécification selon laquelle la pro-insuline humaine 10 joue un rôle actif et est indispensable pour l'obtention de l'homéostase hormonale naturelle.

Outre le fait qu'elles favorisent l'obtention de l'homéostase hormonale naturelle, les compositions de l'invention dans lesquelles le rapport pondé-15 ral entre l'insuline et la pro-insuline humaines est égal ou inférieur à environ 1:1, offrent l'avantage supplémentaire d'exercer un effet hypoglycémique de très longue durée. Dans les compositions préférées offrant cet avantage supplémentaire, le rapport pon-20 déral entre l'insuline et la pro-insuline humaines se situe entre environ 1:100 et environ 1:1. D'autres rapports pondéraux préférés entre l'insuline et la pro-insuline humaines se situent entre environ 1:30 et environ 1:1, plus particulièrement entre environ 25 1:30 et environ 1:10 ou entre environ 1:10 et environ 1:1. Grâce à ces compositions, il est moins nécessaire de recourir à des additifs classiques pour la formulation de l'insuline, par exemple, la protamine qui est présente dans l'insuline NPH (protamine neutre 30 Hagedorn) ou le zinc en excès qui est présent dans l'insuline retard. Ces deux additifs sont artificiels et non physiologiques.

Dans 11 Diabetes11 31 , supplément 2, 135A (1982), Schlüter et al. décrivent des études démon-35 trant que la fixation du récepteur d'insuline humaine } /fl I // il η

!| U

10 est favorisée par la présence de pro-insuline humaine· Ces résultats étayent également davantage la description de la présente spécification selon laquelle la disponibilité et la présence de la pro-insuline humai-5 ne favorisent ou rétablissent l'homéostase hormonale naturelle.

Bien entendu, la quantité dans laquelle les compositions de la présente invention doivent être utilisées pour maintenir l'homéostase hormonale na~ 10 turelle ou pour atteindre un état se rapprochant plus étroitement de l'homéostase hormonale naturelle chez un sujet diabétique, dépendra de la gravité de l'état diabétique. De plus, cette quantité variera en fonction du mode d'administration. Enfin, la quantité de 15 composition administrée et la fréquence de cette administration seront laissées au choix du médecin particulier. Toutefois, en règle générale, le dosage se situera dans l'intervalle donnant environ 0,02 à environ 5 unités d'activité d'insuline humaine par kg du 20 poids du corps et par jour, de préférence, entre environ 0,1 et environ 1 unité d'activité d'insuline humaine par kg du poids du corps et par jour.

On administre la composition par voie parentérale, notamment, par voie sous-cutanée, par voie 25 intramusculaire et par voie intraveineuse. Les compositions de la présente invention comprennent les ingrédients actifs, à savoir l'insuline humaine, le C-peptide humain et la pro-insuline humaine, ensemble avec un support pharmaceutiquement acceptable pour ces 30 derniers et éventuellement avec d'autres ingrédients thérapeutiques. La quantité totale des ingrédients actifs présents dans la composition se situe entre environ 99*99 et environ 0,01$ en poids. Le support doit être acceptable en ce sens qu'il doit être com-35 patible avec d'autres composants de la composition et i

Il ! il ne doit pas être néfaste pour le receveur de celle-ci.

Les compositions de la présente invention, qui sont appropriées pour une administration par voie 5 parentérale, comprennent avantageusement des suspensions et/ou des solutions aqueuses stériles des ingrédients pharmaceutiquement actifs, ces solutions ou suspensions étant, de préférence, rendues isotoni— ques avec le sang du receveur en utilisant générale— 10 ment du chlorure de sodium, de la glycérine, du glucose, du mannitol, du sorbitol et des agents analogues connus. En outre les compositions peuvent contenir l'un ou l'autre adjuvant tel que des agents tampons, des agents de conservation, des agents dispersants, 15 des agents favorisant un début rapide de l'activité, des agents favorisant une prolongation d'activité et d'autres agents connus. Comme agents spécifiques de conservation, on mentionnera, par exemple, le phénol, le m-crésol, le p-hydroxybenzoate de méthyle et autres. 20 Comme agents tampons spécifiques, on mentionnera, par exemple, le phosphate de sodium, l'acétate de sodium, le citrate de sodium et autres.

• De plus, on peut utiliser un acide tel que l'acide chlorhydrique, ou une base telle que l'hydro-25 xyde de sodium pour régler le pH. En règle générale, le pH de la composition aqueuse se situera entre environ 2 et environ 8, de préférence, entre environ 6,8 et environ 8,

Parmi d'autres additifs appropriés, on men-30 tionnera, par exemple, l'ion zinc bivalent dont la quantité, s'il est présent, se situe généralement entre environ 0,01 mg et environ 0,5 mg par 100 unités d'insuline humaine, de même qu'un sel de protamine (par exemple, sous forme de son sulfate) dont la 35 quantité, s'il est présent, se situe généralement £ 12 entre environ 0,1 mg et environ 3 mg par 100 unités d’activité d’insuline humaine.

On donnera ci-après des exemples de compositions pharmaceutiques particulières suivant la pré-5 sente invention.

Exemple 1

Formulation d’insuline humaine régulière neutre/ C-peptide humain/pro-insuline humaine [rapport molaire entre l’insuline humaine et le C-peptide humain = 10 1:4 et rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-insuline humaine = 100:1 à 40 unités d’insuline par cm3]·

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on mélange : 15 Insuline zinc humaine (28 unités/mg) 400 unités C-peptide humain 30 mg

Pro-insuline humaine 0,14 mg

Phénol(distillé) 20 mg

Glycérine 1Ô0 mg 20 Eau et soit de l’acide chlorhydrique à 10$, soit de l'hydroxyde de sodium à 10$ : quantité suffisante pour obtenir une composition d’un volume de 10 cm3 et d’un pH final de 7~7,8.

Exemple 2 25 Formulation d'insuline humaine régulière neutre/ C-peptide humain/pro-insuline humaine [rapport molaire entre l’insuline humaine et le C-peptide humain = l:lj rapport pondéral entre l'insuline humaine et la proinsuline humaine = 20:1 à 100 unités d’insuline par 30 cm3]*

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on mélange :

Insuline zinc humaine (28 unités/mg) 1,000 unités C-peptide humain 19 mg 35 Pro-insuline humaine 1,8 mg / 13 i i

Phénol (distillé) 20 mg

Glycérine 100 mg

Eau et soit de 1*acide chlorhydrique à 10$, soit de 1*hydroxyde de sodium à 10$ : quantité suffisante 5 pour obtenir une composition d’un volume de 10 cm3 et d’un pH final de 7-7*8.

Exemple 3

Formulation d'insuline humaine protamine-zinc/C-pepti— de humain/pro-insuline humaine [rapport molaire entre 10 l’insuline humaine et le C-peptide humain =1:1 j rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-i insuline humaine = 20:1 à 40 imités d'insuline par cm3"|.

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on mélange : 15 Insuline zinc humaine (28 unités/mg) 400 unités j! C-peptide humain 8 mg j Pro-insuline humaine 0,7 mg

Phénol (distillé) 25 mg

Oxyde de zinc 0,78 mg 20 Glycérine l60 mg

Sulfate de protamine 4-6 mg

Phosphate de sodium (cristaux) 38 mg

Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10$, soit de 1'hydroxyde de sodium à 10$ : quantité suffisante 25 pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm3 et d'un pH final de 7,1-7*4· ’ Exemple 4

Formulation d'insuline humaine protamine—zinc/C-pep- j ' tide humain/pro-insuline humaine [rapport molaire 30 entre l'insuline humaine et le C-peptide humain =2:1 ; rapport pondéral entre l'insuline humaine et la proinsuline humaine = 1:1 à 100 unités d'insuline par cm3].

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on j mélange : 35 j 1 j Lj i yf / t /\i I. / n.

14

Insuline zinc humaine (28 unités/mg) 1.000 unités C-peptide humain 9 mg

Pro-insuline humaine 36 mg

Phénol (distillé) 25 mg 5 Oxyde de zinc 2,0 mg

Glycérine 160 mg

Sulfate de protamine 10-15 mg

Phosphate de sodium (cristaux) 38 mg

Eau et soit de 1* acide chlorhydrique à 10$, soit de 10 l'hydroxyde de sodium à 10% : quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm3 et d'un pH final de 7*1“7*4·

Exemple 5

Formulation d'insuline humaine isophane-protamine-15 zinc/C-peptide humain/pro-insuline humaine [rapport molaire entre l'insuline humaine et le C-peptide humain =1:1 ; rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-insuline humaine = 4:1 à 40 unités d'insuline par cm3]· 20 Pour préparer 10 cm3 de la composition, on mélange :

Insuline zinc humaine (28 unités/mg) 400 unités C-peptide humain 8 mg

Pro-insuline humaine 3*0 mg 25 m-crésol (distillé) 16 mg

Phénol (distillé) 6,5 mg _

Glycérine 160 mg

Sulfate de protamine 1,2-2,4 mg

Phosphate de sodium (cristaux) 3S mg 30 Eau et soit de l'acide chlorhydrique à lOS, soit de l'hydroxyde de sodium ä 10% : quantité suffisante pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm3 et d'un pH final de 7,1-7,4.

/// /// 35 : 15 t

Exemple 6

Formulation d’insuline humaine isophane-protamine-zinc/C-peptide humain/pro-insuline humaine [rapport molaire entre l'insuline humaine et le C-peptide 5 humain = 4 î1 J rapport pondéral entre 1'insuline hu- maine et la pro-insuline humaine =1:2 à 100 unités d'insuline par cm3]·

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on mélange : 10 Insuline zinc humaine (28 unités/mg) 1.000 unités C-peptide humain 5 mg

Pro-insuline humaine 71 mg m-crésol (distillé) 16 mg

Phénol (iistillé) 6,5 mg 15 Glycérine l60 mg

Sulfate de protamine 3*0-6,0 mg

Phosphate de sodium (cristaux) 38 mg

Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10$, soit de 1'hydroxyde de sodium à 10$ : quantité suffisante 20 pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm3 et d'un pH final de 7*1-7*4·

Exemple 7

Formulation d'une suspension d'insuline zinc humaine/ C-peptide humain/pro-insuline humaine [rapport molai-25 re entre l'insuline humaine et le C-peptide humain = 1:2 ; rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-insuline humaine = 1:10 à 40 unités d'insuline par cm3]·

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on 30 mélange :

Insuline zinc humaine (28 unités/mg) 400 unités C-peptide humain 15 mg

Pro-insuline humaine 143 mg

Acétate de sodium (anhydre) 16 mg 35 Chlorure de sodium (granulaire) 70 mg 16 p-hydroxybenzoate de méthyle 10 mg

Oxyde de zinc 0,63 mg

Eau et soit de 1*acide chlorhydrique à 10$, soit de 1'hydroxyde de sodium à 10$ : quantité suffisante 5 pour obtenir une composition d’un volume de 10 cm3 et d’un pH final de 7*2-7*5*

Exemple 8

Formulation d’une suspension d’insuline zinc humaine/ C-peptide humain/pro-insuline humaine [rapport molaire 10 entre l’insuline humaine et le C-peptide humain = 1:1 J rapport pondéral entre l'insuline humaine et la proinsuline humaine = 20:1 à 100 unités d’insuline par cm3] ·

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on 15 mélange :

Insuline zinc humaine (28 unités/mg) 1*000 unités C-peptide humain 19 mg

Pro-insuline humaine 1,8 mg

Acétate de sodium (anhydre) 16 mg 2 0 Chlorure de sodium (granulaire) 70 mg p-hydroxybenzoate de méthyle 10 mg

Oxyde de zinc 1,6 mg * Eau et soit de l’acide chlorhydrique à 10$, soit de 1'hydroxyde de sodium à 10$ : quantité suffisante 25 pour obtenir une composition d’un volume de 10 cm3 et d'un pH final de 7*2-7,5*

Exemple 9

Formulation d'insuline humaine régulière neutre/C-pep-tide humain/pro-insuline humaine [rapport molaire 30 entre l'insuline humaine et le C-peptide humain = 1:4* rapport pondéral entre l'insuline humaine et la proinsuline humaine = 100:1 à 40 unités d'insuline par cm3] ·

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on 35 mélange : 17

Insuline sodium humaine (28 unités/mg) 400 unités C-peptide humain 30 mg

Pro-insuline humaine 0,14 mg

Phénol (distillé) 20 mg 5 Glycérine l60 mg * Eau et soit de 1*acide chlorhydrique à 10$, soit de l'hydroxyde de sodium à 10$ : quantité suffisante pour obtenir une composition d,un volume de 10 cm3 et d»un pH final de 7-7,8.

10 Exemple 10

Formulation d'insuline humaine régulière neutre/C-pep-tide humain/pro-insuline humaine [rapport molaire entre 1'insuline humaine et le C-peptide humain = 1:1J rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-15 insuline humaine = 20:1 à 100 unités d'insuline par cm3] .

Pour préparer 10 cm3 de la composition, on mélange :

Insuline sodium humaine (28 unités/mg) 1.000 unités 20 C-peptide humain 19 mg

Pro-insuline humaine 1,8 mg

Phénol (distillé) 20 mg

Glycérine 160 mg | Eau et soit de l'acide chlorhydrique à 10$, soit de ; · 25 1'hydroxyde de sodium à 10$ ; quantité suffisante ; pour obtenir une composition d'un volume de 10 cm3 et | d'un pH final de 7-7,8.

| i i s i 30 ! s s i i i ! I // i //

i LF

Claims (19)

1. Composition pharmaceutique comprenant, en association avec un support pharmaceutiquement acceptable, de 1*insuline humaine, un C-peptide hu- 5 main et de la pro—insuline humaine, le rapport mo laire entre 1»insuline humaine et le C-peptide humain étant d’environ 1ï4 à environ 4’lj tandis que le rap-port pondéral entre l’insuline humaine et la proinsuline humaine se situe entre environ 1:100 et en-10 viron 100:1.

2. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport molaire entre l’insuline humaine et le C-peptide humain se situe entre environ 1:2 et environ 2:1, 15

3· Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport molaire entre l’insuline humaine et le C-peptide humain se situe entre environ 1:1 et environ 2:1.

4. Composition suivant la revendication 1, 20 caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro—insuline humaine se situe entre environ 1:10 et environ 100:1.

* 5· Composition suivant la revendication 4> caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’in-25 suline humaine et la pro—insuline humaine se situe entre environ 1:2 et environ 100:1.

6. Composition suivant l’une quelconque des revendications 1 et 4> caractérisée en ce que le rapport pondéral entre 1'insuline humaine et la pro-30 insuline humaine se situe entre environ 1:1 et environ 20:1.

7· Composition suivant l’une quelconque des revendications 1 et 4j caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l'insuline humaine et la pro-35 insuline humaine se situe entre environ 4:1 et envi- //! /fi h!r fv ron 20:1*

8, Composition suivant la revendication 1, ! caractérisée en ce qu'elle contient l’ion zinc biva lent. 5

9· Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu’elle contient un sel de prota— i mine,

10« Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’in— 10 suline humaine et la pro-insuline humaine se situe ? entre environ 1:30 et environ 100:1. (

11. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’insuline humaine et la pro-insuline humaine se situe 15 entre environ 1:15 et environ 100:1.

12, Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’insuline humaine et la pro-insuline humaine se situe entre environ 1:30 et environ 20:1. 20

13· Composition suivant la revendication 1, ! caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’in- it suline humaine et la pro-insuline humaine se situe * entre environ 1:15 et environ 20:1.

14· Composition suivant la revendication 1, 25 caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’in-I suline humaine et la pro-insuline humaine se situe i I1 entre environ 1:10 et environ 20:1.

15· Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’in-30 suline humaine et la pro-insuline humaine se situe entre environ 1:100 et environ 1:1.

16«, Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’insuline humaine et la pro-insuline humaine se situe 135 entre environ 1:30 et environ 1:1. /

17, Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’insuline humaine et la pro-insuline humaine se situe entre environ 1:30 et environ 1:10, 5

18, Composition suivant la revendication lâ * caractérisée en ce que le rapport pondéral entre l’insuline humaine et la pro-insuline humaine se situe * entre environ 1:10 et environ 1:1,

19, Composition pharmaceutique suivant l'une 10 quelconque des revendications 1 à 18, en substance comme décrit dans la spécification ci-dessus en se référant à l’un ou l’autre des exemples, * • A //