LV14461B - Līdzeklis efektīvai augsta glutamāta līmeņa pazemināšanai asinīs - Google Patents

Description

IZGUDROJUMA APRAKSTS

Izgudrojums attiecināms uz medicīnas nozari, skar terapiju un parafarmācijas rūpniecību, proti, līdzekļa izstrādi, kas pazemina augstu glutamāta līmeni asinīs.

Glutamāts ir aminoskābe, kuru satur CNS (centrālās nervu sistēma) struktūras. Glutamāts ir svarīgākais uzbudinošais neirotransmiters, kas nelielā daudzumā kairina muguras smadzeņu neironus, galvas smadzeņu garozu, smadzenītes un citas CNS struktūras [lļ.

Ilgstoša stresa ietekmē neironu kairinājums nepāriet, glutamāta līmenis nepazeminās, sākas N-metil-D-aspartāta (NMDA) receptoru patoloģiska hiperaktivācija. Glutamāta bojājošā iedarbība izpaužas, kad tā līmenis asinīs paaugstinās 5-10 reizes [2]. Normai atbilstošs glutamāta līmenis ir no 2,32 līdz 3,14 mmol/l, bet augsts līmenis - no 15,7 mmol/l un augstāks.

Tehnikas līmenis

Glutamāts izdalās specifiskās sinaptiskās struktūrās un savstarpēji mijiedarbojas ar glutamāta jutīgiem N-metil-D-aspartāta (NMDA) postsinaptisko membrānu receptoriem [1], Fizioloģiskos apstākļos NMDA receptori aktivējas ar milimolārām glutamāta koncentrācijām, kurš atrodas sinaptiskajā spraugā dažu milisekunžu laikā. Mediatora pārpalikums tiek izvadīts pēc 30 minūtēm.

Patoloģiskas impulsācijas gadījumā NMDA receptori hiperakti vizējas ar funkcijas traucējumiem, šajā gadījumā kairinošais neirotransmiters glutamāts var izraisīt neironu bojājumus vai bojāeju [3], šī iemesla dēļ paaugstināta glutamāta līmeņa bojājošā iedarbība uz neironiem tiek apzīmēta ar terminu “kairinošo aminoskābju toksitāte” vai “eksaitotoksitāte”.

Eksaitotoksitāte - patoloģisks process, kurā nervu šķiedru Šūnas tiek bojātas pānnērigas glutamāta stimulācijas rezultātā [4], NMDA receptoru hiperaktivācija ar glutamātu, kuru pavada masīvu [Ca²⁺] ieplūde un vairākkārtīga [Ca²⁺] koncentrācijas paaugstināšanās šūnās, izraisa virkni šūnas iekšējo fermentu sistēmu (proteāžu, nukleāžu, lipāžu) aktivāciju, kas iniciē citodeģeneratīvu procesu kaskādi un šūnas līzi [5], Glutamāta atbrīvošanas mehānisms eksocitozes ceļā (iekššūnu satura izeja ārpus) piemīt ne tikai neironiem, bet ari gliālajām šūnām. Eksocitozes rezultātā notiek strauja ārpusšūnu glutamāta koncentrācijas paaugstināšanās, papildus glutamāta receptoru hiperaktivācija un tai sekojoša neirodeģeneratīvu šūnas reakciju sērija.

Paaugstināta glutamāta koncentrācija asinīs - virs 15,7 mmol/1 atspoguļo nervu šūnu kopējo kairināmību. Glutamāts efektīvi funkcionē kā neirotransmiters, kad tā ārpusšūnas koncentrācija ir zemāka par to (zem 15,7 mmol/1), kas izsauc neironu bojājumus [6]. Glutamāta līmenis asinīs tiek noteikts pēc Lund metodes [7].

Lund metode [7] apvieno glutamāta ekstrakciju ar organiskiem šķīdinātājiem un to turpmāku spektrofotometrisku noteikšanu ar fluometrisko detektoru. Heparinizētas asinis tiek centrifugētas 10 minūtes 4 C°, plazmas deproteinizācija tiek veikta ar sulfasalicilskābi (30 mg/ml plazmā). Tiek izmantoti reaktīvi: Tris-hidrazīna buferis - 1,0 ml, betaNicotinamīda adenīn-dinukleotīda šķīdums (NAD) - 0,1 ml, adenozīna-S'-difosfata šķīdums (ADP) - 0,01 ml un ūdens.

Reakcijas gaita:

1. Glutamāts oksidējas ar glutamināzi ūdens klātbūtnē līdz atbrīvojas αΖ/ά-ketogIutarāts. Vienlaicīgi notiek NAD⁺ līdz NADH.

2. Konversijas intensitāte NAD⁺ NADH tiek mērīta spektrofotometriski un ir proporcionāla glutamāta daudzumam asinīs.

Glutamāta līmeni asinīs nosaka, lai objektīvi novērtētu un monitorētu eksaitotoksitāti, lai noteiktu likumsakarības starp kairinājuma procesiem, glutamāta līmeni un klīnikas attīstību. Eksaitotoksitāte klīniski izpaužas ar dažādām stresa reakcijām, veģetatīviem traucējumiem, neiroloģiskām patoloģijām, kuras tiek diagnosticētas, klīniski veicot objektīvus izmeklējumus (neiroloģiskais stāvoklis, psihiskais stāvoklis, patoloģiskie refleksi, psihisku un kognitīvu spēju traucējumi).

Izmeklējumi liecina, ka glutamāta līmenis asinīs ir būtiski paaugstināts dažādu veidu depresiju gadījumos, sāpju stresa, posttraumatiskā stresa sindroma (PTSD (Posttraumatic Stress Disorder)), insulta u.c. gadījumos [8-9].

Konkrēti, PTSD (Posttraumatic Stress Disorder) - simptomu komplekss, kas var attīstīties pēc viena vai vairākiem traumatiskiem notikumiem. PTSD patofizioloģija un patoģenēze saistītas ar pārkairinošo procesu ietekmes pārsvaru. Saskaņā ar diagnostikas standartu DSM-IV [10,11] PTSD pamatsimptomi attīstās kompleksā ar hipertrofetām psihofizioloģiskām reakcijām: uzmācīgas atmiņas, ilūzijas, halucinācijas, izvairīšanās vai nejūtīgums, pārlieks mundrums, kas izpaužas ne mazāk kā vienu mēnesi. PTSD klīniskā diagnostika atbilstoši DSM-IV, tiek veikta, izmantojot klīnisko novērtējumu skalu PCL-M.

PCL-M skala iekļauj 17 jautājumus, tiek rekomendēta kā diagnostikas instruments, izmeklējot PTSD slimniekus un nosakot PTSD attīstības risku [11],

Ar līdzekļa izpēti, kas pazemina augstu glutamāta līmeni asinīs, nodarbojas pētnieki Japānas zinātniskajos institūtos [12], Kanādā [13], ASV [14] un citās valstīs [15-19].

Eksperimentālos modeļos ar žurkām tika pētīta fermentu kompleksa pielietojamības iespēja (Glutamate dehydrogenase, glutamate oxaloacetate transaminases GOT, glutamate pyruvate transaminases u.c.), lai pazeminātu ārpusšūnu glutamāta līmeni smadzeņu audos [20]. Eksperimenta procesā tika noteikts reakcijas atgriezeniskais raksturs: fermenta GOT ietekmē glutamāts pārvērtās ηΖ/ίζ-ketoglutarātā, kura uzkrāšanās iniciēja atpakaļreakciju ar paaugstināta glutamāta daudzuma izveidošanos. Ketoglutarāts ari iekļaujas citronskābes ciklā, jebkuras ketoglutarāta koncentrācijas izmaiņas un transamināzes funkcionēšana nav savienojami ar organisma dzīvotspēju. [21], Šie pētījumi liecināja, ka smadzeņu audos saglabājās augsts glutamāta līmenis.

Ja asinīs ir augsts glutamāta līmenis, tad eksaitotoksitāte tiek pamatota ar glutamātjutīgu NMDA receptoru hiperaktivāciju. Tika veikti glutamātjutīgu NMDA receptoru antagonistu pētījumi, kuri spēj bloķēt NMDA receptorus un normalizēt neirotransmisiju [16-18]. Eksperimentālos modeļos ar žurkām tika parādīts, ka NMDA antagonistu klīniskais pielietojums receptoros nav iespējams, jo šie preparāti pilnībā bloķē neirotransmisiju un izsauc smagas blaknes (psihomotoru kavēfibu, halucinācijas, pastiprina krampju gatavību epilepsijas gadījumā, komu) [22-23].

Tika pētīta dažādu grupu antidepresantu izmantošana patoloģisko simptomu korekcijai, kurus izsauc paaugstināts glutamāta līmenis asinīs. Eksperimentālos modeļos ar žurkām tika parādīts, ka tricikliskais antidepresants (amitriptilms) [24], kuru izmanto ari pāruzbudinātības simptomu ārstēšanai (trauksme, bailes, uzmācīgas, sāpīgas atmiņas, murgaini sapņi), paaugstina glutamāterģisko neirotransmisiju ar transporta olbaltumu EAAT3. Amitriptilīns nesamazina augstu glutamāta līmeni asinīs [25-26]. Eksperimentālos modeļos ar žurkām tika parādīts, ka serotonīna atpakaļsaistes inhibitors tianeptīhs spēj bloķēt daudzu stresa izsauktu glutamāterģisko neirotransmisiju izmaiņas hipokampā [27]. Pie tam tianeptīns nepazemina augstu glutamāta līmeni asinīs.

Antidepresanti neietekmē glutamāta līmeņa paaugstināšanos un nenovērš eksaitotoksiskos procesus (pārkairinājumu) [ 28,29].

Ir zināms, ka selēns kā antioksidants, tiek izmantots grūtniecības patoloģiju profilaksē [30], aptaukošanās un dislipidēmiju gadījumos [31-32], deguna polipozes ārstēšanā [33].

Ir zināma selēna kā antioksidanta un bioloģiski aktīvas piedevas izmantošana [34-36], Organiskais selēns Latvijā ir reģistrēts kā uztura bagātinātājs, kā ari tiek rekomendēts lietošanai kā antioksidants.

Nav zināms līdzeklis augsta glutamāta līmeņa pazemināšanai asinīs.

Izgudrojuma izklāsts

Paaugstināts glutamāta līmenis asinīs (augstāks par 15,7 mmol/1) noved pie hroniska neironu kairinājuma stāvokļa, kuru pavada NMDA receptoru hipofunkcija, un ir cēlonis dažādu saslimšanu attīstībai: piramidāliem traucējumiem, neiroloģiskam deficītam, deģenerativiem procesiem un neitronu bojājumiem.

Izgudrojuma mērķis un tehniskais rezultāts:

• izstrādāt līdzekli, kas pazemina augstu glutamāta līmeni asinīs, • izstrādāt optimālu komponentu attiecību jaunā sastāva maksimālai efektivitātei, • izstrādāt zāļu formu jaunā sastāva pielietošanai, • saglabāt jaunā sastāva tehnoloģiskās īpašības un stabilitāti 36 mēnešu laikā.

Izvirzītais mērķis tiek sasniegts, izstrādājot jaunu līdzekli augsta glutamāta līmeņa pazemināšanai asinīs, kas satur selēnu un E vitamīnu šādā komponentu masas attiecībā, mg:

selēns 0,l-0,2mg

E vitamīns (a^h-tokoferols) 5,0 - 10,0 mg.

Pie tam līdzekļa sastāvā iekļauts organiskais selēns.

Izklāstītie dati, kas saistīti ar selēna un E vitamīna 1) optimālo attiecību noteikšanas un 2) selēna izmantošanas optimālās formas noteikšanas sarežģītību - labi zināma speciālistiem, kuri nodarbojas ar līdzekļa izstrādi, kas pazemina augstu glutamāta līmeni asinīs.

Izpētes procesā un jaunajā sastāvā tika izmantots gan organiskais, gan neorganiskais selēns.

Eksperimentā tika pētītas dažādas jaunā sastāva zāļu formas. Konkrēti, tika izmantota kapsulu forma, kuras sastāvā tika iekļauts selēns un E vitamīns: selēns 0,1-0,2 mg un E vitamīns - 5-10 mg. Tika izgatavota ari zāļu forma, kad vienlaikus tiek nozīmētas selēna tabletes un E vitamīna kapsulas tādās pašās attiecībās.

Izgudrojuma izpildes ieteicamie piemēri

Selēns Latvijā ir reģistrēts kā uztura bagātinātājs, kā ari tiek rekomendēts plašai pielietošanai kā antioksidants. Saskaņā ar PVO (Pasaules Veselības organizācijas) ieteikumiem patiesi drošs un efektīvs selēna lietošanas līmenis ir tāds, kad selēna atkarīgā fermenta glutationperoksidāzes (GPX) aktivitāte ir 66% (2/3) no maksimālās.

E vitamīnam (fl//ū-tokoferols) piemīt antioksidanta īpašības. Tas inhibē organismā tauku oksidāciju un pārskābju veidošanos. Ir zināma E vitamīna pielietošana aknu un grūtniecības patoloģiju gadījumos, kā ari neauglības ārstēšanā.

Lai jaunajam līdzeklim atrastu komponentu sastāvdaļas, izgudrojuma optimālās formas izstrādes procesā, tika pētīts organiskais un neorganiskais selēns. Organisma apgāde ar selēnu var notikt organiska savienojuma veidā, kas sastāv no aminoskābēm (selēnmetionīns, selēncisteīns u.c.), kā ari neorganisku sāļu veidā (nātrija selenīta vai selenāta) formā. Gan organiskais, gan neorganiskais selēns viegli uzsūcas kuņģa un zarnu traktā [38].

Slimnieki, jauno E vitamīnu un organisko selēnu saturošo līdzekli, uzņēma vienu reizi dienā per os, jaunā līdzekļa uzņemšana nebija atkarīga no ēdiena uzņemšanas laika. Kursa ilgums bija 2-4 mēnešus, jau pēc 2 jaunā līdzekļa uzņemšanas mēnešiem tika konstatēta efektīva glutamāta līmeņa samazināšanās asinīs (no 18,9 mmol/1 līdz 3,1 mmol/1, p<0,05). Pētījuma procesā netika konstatētas jaunā līdzekļa pielietošanas blaknes.

Tika pētīts ari jaunais līdzeklis ar E vitamīnu un neorganisko selēnu (selenīta nātrija veidā), slimnieki to uzņēma vienu reizi dienā per os. Jaunā līdzekļa uzņemšana nebija atkarīga no ēdiena uzņemšanas laika. 6 nedēļas pēc ārstēšanas kursa sākuma 5 no 18 slimniekiem parādījās blaknes - kā selēna un/vai ķiploka piegarša mutē. Glutamāta līmenis asinīs pazeminājās līdz 4,1 mmol/1, p<0,05. Glutamāta līmeņa pazemināšanās efektivitāte asinīs jaunā līdzekļa sastāvā ar neorganisko selēnu vidēji bija par 10-12% zemāka, salīdzinot ar glutamāta līmeņa pazemināšanās efektivitāti asinīs, izmantojot jaunā līdzekļa sastāvā organisko selēnu.

Izklāstītie dati par sarežģītību, kas saistīta ar optimālo jaunā sastāva pielietošanas formu - labi zināma speciālistiem, kuri nodarbojas ar jaunu līdzekļu meklēšanu augsta glutamāta līmeņa pazemināšanai asinīs. Eksperimentāli tika atrasta optimālā selēna forma, kuras izmantošana līdzekļa sastāvā dod iespēju efektīvi pazemināt augstu glutamāta līmeni asinīs.

Lai izstrādātu optimālo devu un jaunā sastāva komponentu attiecību, tika mērīts selēna atkarigs ferments glutationperoksidāze (GPX). Saskaņā ar PVO (Pasaules Veselības organizācijas) ieteikumiem nepieciešamā un pietiekošā selēna deva ir tāda, kad GPX aktivitāte sastāda 66% (2/3) no maksimālās [37]. Jaunā sastāva izstrādes procesā tika izmantots organiskais selēns 0,1-0,2 mg dienā. Selēna pielietošanas efektivitāte tika kontrolēta ar glutationperoksidāzes aktivitāti [38].

Nozīmējot organisko selēnu, kura deva dienā ir 0,5 - 0,75 mg, netika konstatēts selēna atkarīgās glutationperoksidāzes aktivitātes pieaugums un netika efektīvi pazemināts augstais glutamāta līmenis asinīs. Glutamāta līmenis asinīs nedaudz pazeminājās, tomēr salīdzinot ar normu, joprojām tas palika paaugstināts (18,9 mrnol/1). Selēna daudzuma samazināšanās, kas ir mazāka par 0,1 mg, izraisa jaunā preparāta aktivitātes samazināšanos un netiek pavadīta ar nepieciešamo selēna atkarīgās glutationperoksidāzes aktivitātes pieaugumu. Palielinot selēna daudzumu virs 0,2 mg, atsevišķos gadījumos tika izsauktas blaknes kā ķiploku un/vai rauga piegaršas parādīšanās. Tieši izgudrojumā norādītā selēna deva izraisīja selēna atkarīgās glutationperoksidāzes aktivitātes pieaugumu, tā sasniedza maksimumu, pārejot platofazē. Proti, palielinot selēna devu, selēna atkarīgās glutationperoksidāzes aktivitāte nepalielinās. Tas liecina, ka jaunā līdzekļa sastāvā iekļautā organiskā selēna deva - 0,1— 0,2 mg, no efektivitātes viedokļa ir optimāla.

Tika noskaidrots, ka selēna aktivitāte palielinās E vitamīna (u//h-tokoferols, deva 5-10 mg) klātbūtnē. E vitamīna pielietošana jaunajā sastāvā mazākā koncentrācijā (mazāk kā 5 mg) neizraisīja efektīvu augsta glutamāta līmeņa pazemināšanos asinīs. Devas palielināšana virs 10 mg sagādāja grūtības jaunā līdzekļa kapsulu formas ražošanā - bija vērojama jaunā līdzekļa sastāvdaļu noslāņošanās. Efektīva augsta glutamāta līmeņa pazemināšanās asinīs tika konstatēta, pielietojot jauno organisko selēnu saturošu līdzekli, kura deva - 0,1- 0,2 mg un E vitamīnu, kura deva - 5-10 mg. Iespējams, ka E vitamīns kā efektīvs antioksidants, daļēji pārņēma masīvos brīvos radikāļus, atbrīvojot selēnu glutamāta piesaistei un transportam. Tādējādi, izmantojot jauno līdzekli, tika sasniegta efektīva augsta glutamāta līmeņa pazemināšanās asinīs.

Eksperimentāli tika atrasts jaunā līdzekļa sastāvs, kas satur organisko selēnu, kura deva - 0,1-0,2 mg dienā un E vitamīnu, kura deva - 50-100 mg. Šis jaunais līdzeklis tika izmantots augsta glutamāta līmeņa pazemināšanai asinīs.

Eksperimentāli atrastā jaunā līdzekļa sastāva komponentu attiecība deva iespēju saglabāt jaunā līdzekļa tehnoloģiskās īpašības un stabilitāti 36 mēnešu laikā.

Piemērs I-II

Jaunā līdzekļa sastāvā ietilpst:

selēns 0,1-0,2 mg

E vitamīns (a//d-tokoferols) 5,0 -10,0 mg.

Sastāva sagatavošanas paņēmiens:

Lai sagatavotu sastāvu, laboratorijas glāzē tiek nosvērts selēns 1,0 - 2,0 mg. Atsevišķi tiek nosvērts aZ/b-tokoferols (E vitamīns) daudzumā 50,0 - 200,0 mg. Lai izveidotu vienveidīgu masu, abi komponenti tiek sajaukti. Ērtākas izmantošanas nolūkos, jaunais līdzeklis var būt izgatavots kapsulu veidā.

Jaunā līdzekļa izmantošanas procesā ir pieļaujama ari komponentu atsevišķa izmantošana, t.i., selēna tabletes (0,1 - 0,2 mg) un E vitamīna kapsulas (5,0 -10,0 mg).

Konkrēti piemēri, kas liecina, ka izmantojot jauno līdzekli, ir iespēja pazemināt augstu glutamāta līmeni asinīs.

Piemērs 1. Slimnieks P„ diagnoze - PTSD (Posttraumatic Stress Disorder), posttraumatisks stresa sindroms, tas ir hipertrofetu psihofirioloģisku reakciju komplekss, kas var attīstīties pēc traumatiska stresa izraisītiem pārdzīvojumiem: ilūzijas, halucinācijas, izvairīšanās vai nejūtīgums, kas ilgst ne mazāk kā vienu mēnesi. Izmeklējot slimnieku, konstatēja augstu glutamāta līmeni asinīs (24,6 mmol/1). Pacients jauno selēnu un E vitamīnu saturošu līdzekli saņēma sastāva veidā, 2 mēnešu laikā per os 1 reizi dienā. Tika izmeklēts atkārtoti, glutamāta līmenis asinīs ticami (p<0,05) pazeminājās un pēc 2 mēnešiem bija 3,1 mmol/1. Statistiski ticams glutationperoksidāzes aktivitātes pieaugums bija 19,93±12,48 U/g Hb (p<0,05 Wilcoxon Signed Ranks Tēst): pirms jaunā sastāva izmantošanas glutationperoksidāzes aktivitāte bija 38,64 ± 10,72 U/g Hb, pēc 2 mēnešiem pēc jaunā līdzekļa pielietošanas aktivitāte bija 58,57±14,64 U/g Hb. Klīniskie izmeklējumi, izmantojot vērtēšanas skalu PCZ-Af [10-11], apstiprināja PTSD simptomu izzušanu.

Pielietojot jauno selēnu un E vitamīnu saturošu līdzekli sastāva veidā, konstatēja augsta glutamāta līmeņa pazemināšanos asinīs (no 24,6 mmol/1 līdz 3,1 mmol/1, p<0,05) un pāruzbudinājuma izpausmju korekciju, kas izpaudās kā slimnieka klīniskā stāvokļa uzlabošanās. PTSD sindroms netika konstatēts (nebija trauksmes un veģetatīvu traucējumu).

Piemērs 2. Slimnieks M.. diagnoze - PTSD (Posttraumatic Stress Disorder), posttraumatisks stresa sindroms. Izmeklējot slimnieku, konstatēja augstu glutamāta līmeni asinīs (26,7 mmol/1), 4 mēnešus pacients saņēma jauno līdzekli kapsulu veidā ar E vitamīnu, vienlaicīgi uzņemot tabletes ar selēnu. Pēc 4 mēnešiem tika izmeklēts atkārtoti, glutamāta līmenis asinīs ticami pazeminājās un bija 2,8 mmol/1. Klīniskie izmeklējumi, izmantojot vērtēšanas skalu PCL-M [10-11J, apstiprināja PTSD simptomu izzušanu.

Pielietojot jauno līdzekli kapsulu veidā ar E vitamīnu, vienlaicīgi uzņemot tabletes ar selēnu, konstatēja augsta glutamāta līmeņa pazemināšanos asinīs (no 26,7 mmol/1 līdz 2,8 mmol/1) un pāruzbudinājuma izpausmju korekciju, kas izpaudās kā slimnieka klīniskā stāvokļa uzlabošanās. PTSD sindroms pēc jaunā līdzekļa pielietošanas netika konstatēts (nebija trauksmes un veģetatīvu traucējumu).

Visi laboratorijas testi tika veikti Rīgas Stradiņa universitātes bioķīmijas laboratorijā. Par līdzekli, kas pazemina augstu glutamāta līmeni asinīs tika izmantots jaunais organisko selēnu un E vitamīnu saturošs līdzeklis. Pētījumi tika veikti ar Rīgas Stradiņa universitātes Ētikas komisijas atļauju. Izmeklējumu protokols, piekrišanas protokols un dalības anketa atbilst Eiropas Direktīvai «Teicama klīniskā prakse” un Helsinku Deklarācijai. Interešu konflikts nepastāv.

Lai izpētītu jaunā līdzekļa iedarbības efektivitāti saistībā ar augsta glutamāta līmeņa pazemināšanos asinīs, tika izmeklēti 18 pacienti, 9 no tiem saņēma jauno līdzekli 2-4 mēnešus, bet cita grupa - 9 slimnieki to nesaņēma. Pacientu diagnoze — PTSD (Posttraumatic Stress Disorder) - posttraumatisks stresa sindroms.

Lai monitorētu kairināmības procesus un noteiktu atkarību starp kairināmības procesu, glutamāta līmeni un PTSD attīstību, visu 18 pacientu asinīs tika noteikts glutamāta līmenis. Glutamāta līmenis asinīs tika noteikts pēc Lund metodes [7]. Metode apvieno glutamāta ekstrakciju ar organiskiem šķīdinātājiem un to turpmāku spektrofotometrisku noteikšanu ar fhiometrisko detektoru Schoeffel GM 970. Tika izmantotas kolonas Nucleosil 120-508; 4,6S250 mm ar daļiņu izmēru 5 mkm. Lai iegūtu plazmu, heparinizētas asinis tika centrifugētas 10 minūtes 4° C, plazmas deproteinizācija tika veikta ar sulfasalicilskābi (30 mg/ml plazmā).

Sākumā visiem 18 slimniekiem ar PTSD tika konstatēts augsts (no 15,8 līdz

30,2 mmol/1) glutamāta līmenis asinīs. Lai slimniekiem ar PTSD (PTSD slimnieku grupa, n=9) pazeminātu glutamāta līmeni asinīs, tika nozīmēts jaunā līdzekļa ārstniecības kurss 1 reizi dienā 2-4 mēnešus. Jaunais līdzeklis bija labi panesams, kā ari tam netika novērotas blaknes un kontrindikācijas. Jaunā līdzekļa sastāvā bija organiskais selēns un E vitamīns. Kontroles grupa (PTSD slimnieku kontroles grupa n=9) jauno līdzekli nesaņēma. Ticams (p<0,05) pazeminājums (no 2,8 līdz 4,0 mmol/1) glutamata līmenim asinīs (norma no 2,32 līdz 3,14 mmol/1) tika konstatēts slimniekiem, kuri uzņēma jauno līdzekli (n=9). Slimniekiem, kuri neuzņēma jauno līdzekli (kontroles grupa, n=9), saglabājās paaugstināts glutamata līmenis asinīs (no 16,2 līdz 28,9 mmol/1).

Pētījuma rezultātu statistiskā apstrāde tika veikta, izmantojot SPSS 16,0 datorprogrammu. Tika izmantotas variāciju statistikas metodes, izmantojot pāra un neatkarīgo Stjūdenta t-kritēriju, korelācijas analīzē. Par ticamības kritēriju tika uzskatīts līmenis p<0,05. Salīdzinot variāciju rindas, tika ņemtas vērā ticamas atšķirības (p<0,05).

Rūpnieciskais pielietojums

Par līdzekli, kas pazemina paaugstinātu glutamata līmeni asinīs var tikt izmantots jaunais līdzeklis, kas satur organisko selēnu un E vitamīnu. Jaunā līdzekļa uzņemšanas laiks nav atkarigs no ēdiena uzņemšanas laika. Jaunā līdzekļa uzņemšanas kurss, lai pazeminātu augstu glutamata līmeni asinīs, ilgst 2-4 mēnešus, nepieciešamības gadījumā var tikt pagarināts līdz 6 mēnešiem.

Jaunais līdzeklis ir labi panesams, tam nepiemīt blaknes un kontrindikācijas. Jaunais līdzeklis satur organisko selēnu un E vitamīnu.

Rūpnieciskās formas sastāvam, kurš pazemina augstu glutamata līmeni asinīs:

• jaunais līdzeklis var tikt izmantots sastāva veidā, kas satur organisko selēnu 0,1-0,2 mg un E vitamīnu (αΖ/α-tokoferols) - 5,0-10,0 mg; lai pielietošana būtu ērtāka, jaunais līdzeklis var būt izgatavots kapsulu veidā, • iespējams vienlaicīgi uzņemt tabletes, kuras satur 0,1 mg selēna un kapsulas ar E vitamīnu devā 5,0-10,0 mg.

Informācijas avoti

1. Hediger MA, Welboume TC (1999) Introduction: glutamate transport, metabolism, and physiological responses. Am J Physiol.; 277(4 Pt 2):F477-80.

2. Takasaki, Y., Matsuzavva, Y., Iwata, S., O'hara, Y., Yonetani, S. & Ichimura, M. (1979) Toxicological studies of monosodium L-glutamate in rodents: relationship betvveen routes of administration and neurotoxicity. In: Glutamic Acid: Advances in

Biochemistry and Physiology (Filer, L. J., Jr., Garattini, S., Kāre, M. R., Reynolds, W. A. & Wurtman, R. J., eds.), pp. 255-275, Raven Press, New York.

3. Kullmarm D. M., Min Μ. Y., Asztely F. andRusakov D. A. (1999) Extracellular glutamate diffusion determinēs the occupancy of glutamate receptors at CA1 synapses in the hippocampus. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 354, 395-402.

4. Li QY, Pedersen C., Day B., Patel M. (2001) Dependence of excitotoxic neurodegeneration on mitochondrial aconitase inactivation. J Neurochem 78(4):746-55.

5. Anwyl R. Modulation of vertebrate neuronal calcium channels by transmitters // Brain Res. Brain Res. Rev. 1991. V.16. Ne 3. P. 265-2817.

6. Bovvie D., Mayer M.L. Inward rectification of both AMPA and kainate subtype glutamate receptors generated by polyamine-mediated ion channel block // Neuron. 1995. V.15. N°2. P. 453-462.

7. Lund, P., (1986) L-Glutamine and L-Glutamate: UV-Method with Glutaminase and Glutamate Dehydrogenase. In Methods of Enzymatic Analysis, Volume 8, H. U. Bergmeyer, (ed). VCH, Verlagsgesellschafl, Weinheim, pp 357-363.

8. F Wesseldijk, D Fekkes, FJ Huygen, M van de Heide-Mulder, FJ Zijlstra Increased plasma glutamate, glycine, and arginine Ievels in complex regional pain syndrome type

1. Acta Anaesthesiol Scand (2008) 52: 688-94.

9. J. S. Kim, W. Schmid-Burgk, D. Claus and Η. H. Increased seram glutamate in depressed patients Komhuber EUROPEAN ARCHIVES OF PSYCHIATRY AND CLINICAL NEUROSCIENCE Volume 232, Number 4, 299-304, DOI:

10.1007/BF00345492.

10. American Psychiatric Association (2000). Diagnostic and statistical manual of mental disorders (Revised 4th ed.) 309.81. Washington, DC: Author.

11. Weathers, F. W., Keane, Τ. M., & Davidson, J. Clinician-administered PTSD scale: A review of the first ten years of research. Depression and Anxiety 2001; 13:132-156.

12. Nakayama R., Yano T, Ushijima K., Abe E., Terasaki H. Effects of dantrolene on extracellular glutamate concentration and neuronal death in the rat hippocampal CA1 region subjected to transient ischemia. Anesthesiology. 2002 Mar;96(3):705-10.

13. Tauskela JS, Brunette F, O'Reilly N, Mealing G, Comas T, Gendron TF, Monette R, Morley P. An alternative Ca2+-dependent mechanism of neuroprotection by the metalloporphyrin class of superoxide dismutase mimetics. FASEB J. 2005 Oct; 19(12): 1734-6. Epub 2005 Aug 4.

14. Baker, A.J., Moulton, R.J., MacMillan, V.H., Shedden, P.M., 1993. Excitatory amino acids in cerebrospinal fluid following traumatic brain injury in humāns. J. Neurosurg. 79, 369-372.

15. Waggas AM. Neuroprotective evaluation of extract of ginger (Zingiber officinale) root in monosodium glutamate-induced toxicity in different brain areas male albino rats. Pak J Biol Sci. 2009 Feb 1; 12(3):201-12.

16. Pauwels PJ, Leysen JE. Blockade of nitric oxide formation does not prevent glutamateinduced neurotoxicity in neuronal cultures from rat hippocampus. Neurosci Lett. 1992;143(l-2):27-30.

17. Pittenger C, Sanacora G, Krystal JH. The NMDA receptor as a therapeutic target in major depressive disorder. GNS Neurol Disord Drug Targets. 2007;6(2): 101-15.

18. Gottlieb, M., Wang, Y., Teichberg, V.I., 2003. Blood-mediated scavenging of cerebrospinal fluid glutamate. J. Neurochem. 87, 119-126 Experimental Neurology 203(2007)213-220.

19. Parsons C.G., Danysz W., Quack G. Memantine is a clinically well tolerated N-methylD-aspartate (NMDA) receptor antagonist — a rev iew of preciinical data. Neuropharmacology 1999; 38: 3: 735-767.

20. Pat. WO 99/21565, Al, A61K38/00.

21. Haiper's fllustrated Biochemistry, 28th Edition By Robert K. Murray, Victor W. Rodwell, Dāvid Bender, Kathleen M. Botham, P. Antbony Weil, Peter J. Kennelly Publisher: McGraw-Hill Medical 2009; chapter 29.

22. Chrysanthy Ikonomidou and Prof Lechoslaw Tursk Why did NMDA receptor antagonists fail clinical trials for stroke and traumatic brain injury? The LancetNeurology Volume 1, Issue 6, October 2002, Pages 383-386.

23. Palmer GC. Neuroprotection by NMDA receptor antagonists in a variety of neuropathologies. Curr Drug Targ 2: 241-271,2001.

24. Baik HJ, Lee SA, Washington JM, Zuo ZY. Amitriptyline inhibits the activity of the rat glutamate transporter EAAT3 expressed in Xenopus oocytes. J Pharm Pharmacol. 2009 May;61(5):577-81.

25. Giambattista Bonanno, Roberto Giambelli, Luča Raiteri, Ettore Tiraboschi et alChronic Antidepressants Reduce Depolarization-Evoked Glutamate Release and Protein Interactions Favoring Formation of SNARE Complex in Hippocampus The Journal of Neuroscience, March 30, 2005,25(13): 3270 -327.

26. Valentīna S Barbiero, Roberta Giambelli, Laura Musazzi, Ettore Tiraboschi et al, Chronic Antidepressants Inducē Redistribution and Differential Activation of aCaM Kinase II between Presynaptic Compartments Neuropsychopharmacology (2007) 32, 2511-2519; doi:10.1038/sj.npp,1301378; published Online 14 March2007.

27. McEwen BS, Chattarji S Molecular mechanisms of neuroplasticity and pharmacological implications: the example of tianeptine. European Neuropsychopharmacology: the Journal of the European Coilege of Neuropsychopharmacology; 2004;14(5): 497-502.

28. Skolniek P, Popik P, Trullas R. Glutamate-based antidepressants: 20 years on. Trends Pharmacol Sci. 2009 Nov;30(l 1):563-9.

29. Reznikov L., Grillo C., Piroli G. et al Acute stress-mediated inereases in extracellular glutamate Ievels in the rat amygdala: differential effects of antidepressant treatment Eur JNeurosci (2007) 25: 3109-14.

30. Poston L, Igosheva N, Mistry HD, Seed PT, Shennan AH, Rana S, Karumanchi SA, Chappell LC. Role of oxidative stress and antioxidant supplementationin pregnancy disorders Am J Clin Nutr. 2011 May 25. [Epub ahead of print]

31. Savory LA, Keir CJ, Whiting P, Finer N, McEneny J, Ashton T. Selenium Supplementation and Exercise: Effect on Oxidant Stress in Overweight Adults. Obesity (Silver Spring). 2011 May 19.

32. Loef AL Schrauzer GN, Walach H, Selenium and Alzheimer's Disease: A MetaAnalysis. J Alzheimers Dis. 2011 May 13. [Epub ahead of print]

33. Sagit M, Erdamar H, Saka C, Yalcin S, Akin I. Effect of antioxidants on the clinical outeome of patients with nasal polyposis. J Laryngol Otai. 2011 Jun 14:1-5. [Epub ahead of print]

34. Pat RU 2007110338, Α, 2008A23K1/00.

35. Pat RU 2340340, Cl, 2008 A61K31/405.

36. Pat RU 2343735, Cl, 2009, A23L1/30.

37. Trace elements in human nutrition and health. -Geneva, WH0.- 1996343P.

38. Paglia D.E., Valentīne W.N. (1967) Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase. J. Lab. Clin. Med. 70:158-169.

Claims (2)

1. PRETENZIJA

   1. Līdzeklis augsta glutamāta līmeņa pazemināšanai asinīs raksturīgs ar to, ka satur selēnu un E vitamīnu šādā komponentu masas attiecībā, mg:

   selēns 0,1 - 0,2 mg

   E vitamīns (aZ/ū-tokoferols) 5,0 -10,0 mg.
2. 2. Līdzeklis saskaņā ar 1. pretenziju raksturīgs ar to, ka satur organisko selēnu.