MD4812C1 - Derivaţi nucleozidici 4'-substituiţi în calitate de inhibitori ai transcriptazei inverse a HIV - Google Patents

Abstract

Invenţia se referă la derivaţi nucleozidici 4'-substituiţi cu formula IIIIsau la săruri farmaceutic acceptabile ale acestora, în care substituenţii sunt definiţi în descriere. Invenţia de asemenea se referă la utilizarea acestora pentru inhibarea transcriptazei inverse a HIV, profilaxia infecţiei cu HIV, tratamentul infecţiei cu HIV şi profilaxia, tratamentul şi întârzierea debutului sau a evoluţiei SIDA şi/sau ARC.

Description

Retrovirusul, desemnat virus al imunodeficienţei umane (HIV), în special tulpinile cunoscute sub denumirea HIV de tip 1 (HIV-1) şi de tip 2 (HIV-2), au fost etiologic legate de boala imunosupresivă cunoscută ca sindromul imunodeficienţei dobândite (SIDA). Persoanele seropozitive HIV sunt iniţial asimptomatice, dar de obicei se dezvoltă complexul asociat de SIDA (ARC), urmat de SIDA. Persoanele afectate prezintă imunosupresie severă, care le face extrem de susceptibile la infecţii oportuniste epuizante şi în cele din urmă fatale. Replicarea virusului HIV de către o celulă gazdă impune integrarea genomului viral în ADN al celulei gazdă. Deoarece HIV este un retrovirus, ciclul de replicare al HIV necesită transcrierea ARN al genomului viral în ADN cu o enzimă cunoscută ca transcriptază inversă (RT).

Transcriptaza inversă are trei funcţii enzimatice cunoscute: enzima acţionează ca ADN polimeraza ARN-dependentă, ca o ribonuclează şi ca ADN polimeraza dependentă de ADN. În rolul său de ADN polimerază ARN-dependentă, RT transcrie o singură bandă de copie de ADN al ARN viral. Ca o ribonuclează, RT distruge ARN viral original şi eliberează AND, produs doar din ARN original. Şi, ca o ADN polimerază dependentă de ADN, RT produce o a doua catenă complementară de ADN, folosind prima catenă de ADN ca matrice. Cele două catene formează ADN dublu catenar, care este integrat în genomul celulei gazdă de către enzima integraza.

Este cunoscut faptul, că compuşii care inhibă funcţiile enzimatice ale RT HIV vor inhiba replicarea HIV în celulele infectate. Aceşti compuşi sunt utili în profilaxia sau tratamentul infecţiei cu HIV la om. Printre compuşii aprobaţi pentru utilizare în tratamentul infecţiei cu HIV şi SIDA sunt inhibitori de RT (NRTI), cum ar fi 3'-azido-3'-deoxitimidină (AZT), 2',3'-dideoxiinozină (DDI), 2',3'- dideoxicitidină (DDC), d4T, 3TC, abacavir, emtricitabină şi tenofovir diizoproxil fumarat, precum şi inhibitorii de RT nenucleozidici (nnNRTI), cum ar fi nevirapină, delavirdină şi efavirenz.

Alţi compuşi utili în profilaxia şi tratamentul infecţiei cu HIV, cum ar fi, de exemplu, derivaţii nucleozidici 2′-fluor-4′-substituiţi au fost dezvăluiţi în EP 2177527 A1 2010.04.21.

Deşi fiecare dintre medicamentele menţionate este eficient în tratarea infecţiei cu HIV şi SIDA, persistă necesitatea elaborării unor medicamente antivirale HIV suplimentare, inclusiv a inhibitorilor de RT adiţionali. O problemă deosebită este dezvoltarea tulpinilor mutante de HIV, care sunt rezistente la inhibitorii cunoscuţi. Utilizarea preparatelor anti-retrovirale pentru tratarea SIDA conduce deseori la virusuri, care sunt mai puţin sensibili la inhibitori. Această rezistenţă este, de obicei, rezultat al mutaţiilor, care se produc în segmentul transcriptazei inverse al genei pol. Utilizarea în continuare a compuşilor antivirali pentru a preveni infecţia cu HIV va conduce în mod inevitabil la apariţia unor noi tulpini rezistente de HIV. Prin urmare, există o necesitate specială de inhibitori noi de RT, eficienţi împotriva tulpinilor mutante de HIV.

Prezenta invenţie se referă la derivaţi nucleozidici 4'-substituiţi şi la utilizarea acestora pentru inhibarea transcriptazei inverse a HIV, profilaxia infecţiei cu HIV, tratamentul infecţiei cu HIV şi profilaxia, tratamentul şi întârzierea debutului sau evoluţiei SIDA şi/sau ARC.

Prezenta invenţie se referă la compuşi având formula de structură II:

II

sau la o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, în care:

X reprezintă O;

Y reprezintă -C≡CH;

R1 reprezintă -H,

sau o modificare promedicamentoasă sub formă de mono-, di- sau trifosfat;

R2 reprezintă -H;

R3 reprezintă -H;

R4 reprezintă -NH2;

R5 reprezintă -H, -Cl, -F sau -NH2 şi

R9 reprezintă -H, -F, -Cl, -I, -Br sau CH3.

În alte variante de realizare prezenta invenţie se referă la compuşii cu formula II sau la o sare farmaceutic acceptabilă a acestora, în care

(a) R1 reprezintă -H sau

sau o modificare promedicamentoasă sub formă de mono-, di- sau trifosfat;

(b) R1 reprezintă

sau o modificare promedicamentoasă sub formă de mono-, di- sau trifosfat;

(c) R1 reprezintă .

În alte variante de realizare prezenta invenţie se referă la compuşi cu formula II sau la o sare farmaceutic acceptabilă a acestora, în care:

sau (b) R1 reprezintă

sau o modificare promedicamentoasă sub formă de mono-, di- sau trifosfat;

sau (c) R1 reprezintă

sau o modificare promedicamentoasă sub formă de trifosfat;

sau (d) R1 reprezintă o modificare promedicamentoasă a grupelor

Toate formulele de structură, variantele şi clasele lor, descrise în prezenta descriere, includ sărurile farmaceutic acceptabile ale compuşilor, definiţi aici. Referinţa la compuşii cu formula II în prezentul context cuprinde compuşii cu toate variantele şi clasele acestora. Referinţa la compuşii prezentei invenţii sub formă de formulă specifică sau variantă concretă, de exemplu, formula II sau variantele ei, sau oricare altă formulă structurală generică, sau la un compus concret, descris sau revendicat în prezenta descriere, cuprinde un compus concret sau compuşii specifici, cuprinşi în volumul formulei sau variantei ei, incluzând sărurile acestora, în particular sărurile farmaceutic acceptabile, solvaţii (inclusiv hidraţii) unor asemenea compuşi şi formele de săruri solvate, în cazul în care asemenea forme sunt posibile, dacă nu se indică altceva.

Prezenta invenţie include fiecare din compuşii din exemplele, descrise în prezenta descriere, şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora. Invenţia, de asemenea, cuprinde compoziţiile farmaceutice cu conţinut de cantitate eficientă de compus, conform prezentei invenţii, sau de săruri farmaceutic acceptabile ale acestuia şi un purtător farmaceutic acceptabil.

Când orice variabilă (de exemplu, R <7>, R <X>, R <Y>) apare de mai multe ori în orice constituent sau în formula II sau în orice altă formulă, care depictează şi descrie compuşii prezentei invenţii, definiţia lor în fiecare apariţie este independentă de definiţia lor în orice altă apariţie. De asemenea, combinaţiile de substituenţi şi/sau variabile sunt permise numai dacă astfel de combinaţii rezultă cu compuşi stabili.

Cu excepţia cazului în care se spune în mod expres contrar, substituirea cu un substituent numit este permisă pe orice atom dintr-un inel (de exemplu, cicloalchil, arii sau heteroaril) cu condiţia ca o astfel de substituţie inelară să fie permisă chimic şi să aibă drept rezultat un compus stabil.

Aşa cum ar fi recunoscut de un specialist în domeniu, unii dintre compuşii prezentei invenţii pot exista ca tautomeri. Toate formele tautomerice ale acestor compuşi, fie izolate individual sau în amestecuri, sunt în domeniul de aplicare al prezentei invenţii. De exemplu, în cazurile în care un substituent -OH este permis pe un inel heteroaromatic şi tautomerismul ceto-enol este posibil, se înţelege că puterea substituentului de fapt poate fi prezentă, în tot sau în parte, în formă oxo (=O).

Un compus "stabil" este un compus care poate fi preparat şi izolat şi ale cărui structură şi proprietăţi rămân sau pot fi menţinute în esenţă neschimbate pentru o perioadă de timp suficientă pentru a permite utilizarea compusului în scopurile descrise aici (de exemplu, terapeutice sau administrarea profilactică la un subiect). Compuşii prezentei invenţii sunt limitaţi la compuşi stabili reprezentaţi de formula II şi variantele ei.

Compuşii cu formula II pot avea unul sau câţiva centri chirali (asimetrici). Prezenta invenţie cuprinde toate formele stereoizomere ale compuşilor cu formula II. Centrele de asimetrie, care sunt prezente în compuşii cu formula II, toate pot, în mod independent unul de celălalt, să prezinte configuraţia (R) sau (S). Când legăturile cu atomul chiral de carbon sunt prezentate în formulele de structură, conform prezentei invenţii, sub formă de linii drepte, sau când denumirea compusului se citeşte fără desemnarea configuraţiilor chirale (R) sau (S) pentru atomul de carbon chiral, se va înţelege, că configuraţiile (R ) şi (S) ale fiecărui astfel de atom de carbon chiral, şi, prin urmare, fiecare enantiomer sau diastereoizomer şi amestecuri ale acestora sunt cuprinşi în formulă sau denumire. În exemplele, în care s-au obţinut asemenea stereoizomeri sau amestecuri ale acestora, poate fi identificată obţinerea unor stereoizomeri concreţi sau amestecuri ale acestora, dar aceasta în nici un mod nu limitează includerea tuturor stereoizomerilor şi amestecurilor acestora în volumul prezentei invenţii.

Invenţia include toţi enantiomerii şi diastereomerii posibili şi amestecurile a doi sau mai mulţi stereoizomeri, de exemplu, amestecuri de enantiomeri şi/sau de diastereomeri în toate rapoartele. Astfel, enantiomeri sunt un obiect al invenţiei în formă pură enantiomeric, atât sub formă de antipozi levogir şi dextrogir, sub formă de racemaţi şi în formă de amestecuri de doi enantiomeri în toate rapoartele. În cazul unei cis/trans izomerii invenţia include atât forma cis, cât şi forma trans, precum şi amestecurile acestor forme în toate proporţiile. Prepararea stereoizomerilor individuali poate fi realizată, dacă se doreşte, prin separarea unui amestec prin metode obişnuite, de exemplu, prin cromatografie sau cristalizare, cu utilizarea unor materiale omogene stereochimic pentru sinteza sau prin sinteză stereoselectivă. Opţional, obţinerea derivaţilor poate fi efectuată înainte de separarea stereoizomerilor. Separarea amestecului de stereoizomeri poate fi realizată în etapa de obţinere a compusului intermediar în procesul de sinteză a unui compus cu formula II sau se poate face pe un produs racemic final. Stereochimia absolută poate fi determinată prin cristalografia cu raze X a produselor cristaline sau a produselor intermediare cristaline obţinute, dacă este necesar, cu un reactiv care conţine un centru stereogenic de configuraţie cunoscută. Alternativ, stereochimia absolută poate fi determinată prin analiza spectroscopică a dicroismului circular oscilator (VCD). Prezenta invenţie include toţi aceşti izomeri, precum şi sărurile, solvaţii (care includ hidraţi) şi sărurile solvate ale unor astfel de racemaţi, enantiomeri, diastereomeri şi tautomeri şi amestecuri ale acestora.

Atomii dintr-un compus cu formula II pot manifesta o răspândire izotopică naturală, sau unul sau mai mulţi atomi pot fi îmbogăţiţi artificial cu un anumit izotop având acelaşi număr atomic, dar o masă atomică sau număr de masă diferit de numărul de masă sau de masa atomică găsită în general în natură. Prezenta invenţie se înţelege, că include toate variaţiile izotopice potrivite ale compuşilor cu formula II. De exemplu, diferite forme izotopice de hidrogen (H) includ protiu (1H) şi deuteriu (2H). Protiu este izotopul de hidrogen predominant găsit în natură. Îmbogăţirea cu deuteriu poate prezenta anumite avantaje terapeutice, cum ar fi creşterea în vivo a perioadei de înjumătăţire sau reducerea cerinţelor de dozare, sau poate asigura un compus util ca un standard pentru caracterizarea probelor biologice. Compuşii îmbogăţiţi izotopic cu formula generică II pot fi preparaţi fără experimentare prin tehnici uzuale bine cunoscute specialiştilor în domeniu sau prin metode similare celor descrise aici în Scheme şi Exemple, utilizând reagenţi şi/sau compuşi intermediari îmbogăţiţi izotopic.

Compuşii pot fi administraţi sub formă de săruri farmaceutic acceptabile. Termenul "sare farmaceutic acceptabilă" se referă la o sare care nu este biologic sau altfel indezirabilă (de exemplu, nu este nici toxică nici într-un alt mod nocivă pentru primitorul acesteia).

Când compuşii cu formula II conţin una sau câteva grupe acide sau bazice invenţia include, de asemenea, sărurile farmaceutic acceptabile corespunzătoare. Astfel, compuşii cu formula II, care conţin grupe acide (de exemplu, -COOH sau o grupă fenol), pot fi utilizaţi în conformitate cu invenţia, sub formă, de exemplu, dar nu se limitează, de săruri de metale alcaline, săruri de metale alcalino-pământoase sau sub formă de săruri de amoniu. Exemple de astfel de săruri includ, dar nu se limitează, săruri de sodiu, săruri de potasiu, săruri de calciu, săruri de magneziu sau săruri cu amoniac sau amine organice, cum ar fi, de exemplu, etilamină, etanolamină, trietanolamină sau aminoacizi. Compuşii cu formula II, care conţin una sau mai multe grupe de bază, adică grupe care pot fi protonate, pot fi utilizaţi în conformitate cu invenţia sub formă de săruri ale acestora de adiţie acidă cu acizi organici sau anorganici cum ar fi, de exemplu, dar fără a se limita la acestea, săruri cu acid clorhidric, acid bromhidric, acid fosforic, acid sulfuric, acid azotic, acid benzensulfonic, acid metansulfonic, acid p-toluensulfonic, acid naftalenedisulfonic, acid oxalic, acid acetic, acid trifluoracetic, acid tartric, acid lactic, acid salicilic, acid benzoic, acid formic, acid propionic, acid pivalic, acid dietilacetic, acid malonic, acid succinic, acid pimelic, acid fumaric, acid maleic, acid malic, acid sulfaminic, acid fenilpropionic, acid gluconic, acid ascorbic, acid izonicotinic, acid citric, acid adipic etc. Dacă compuşii cu formula II conţin în moleculă simultan grupe bazice şi acide invenţia include, de asemenea, adiţional la formele de sare menţionate, săruri interne sau betaine (amfioni). Sărurile se pot obţine din compuşii cu formula II prin metode uzuale, care sunt cunoscute unui specialist în domeniu, de exemplu, prin combinare cu un acid organic sau anorganic sau cu o bază într-un solvent sau un agent de dispersare, sau prin schimb de anioni sau de cationi cu alte săruri. Prezenta invenţie include, de asemenea, toate sărurile compuşilor cu formula II care, datorită compatibilităţii fiziologice reduse, nu sunt potrivite în mod direct pentru a fi utilizate în preparatele farmaceutice, dar care pot fi utilizate, de exemplu, ca produse intermediare în reacţiile chimice sau la prepararea sărurilor farmaceutic acceptabile.

O altă variantă a prezentei invenţii este un compus cu formula II, în care compusul sau sarea sa este într-o formă substanţial pură. Aşa cum se utilizează aici "substanţial pură" se înţelege, respectiv, că cel puţin aproximativ 60 mas%, de obicei cel puţin aproximativ 70 mas%, de preferinţă cel puţin circa 80 mas%, mai preferabil cel puţin aproximativ 90 mas% (de exemplu, de la circa 90 mas% până la aproximativ 99 mas%), mai preferabil cel puţin aproximativ 95 mas% (de exemplu, de la circa 95 mas% până la aproximativ 99 mas%, sau de la circa 98 mas% până la 100 mas%) şi cel mai preferabil cel puţin aproximativ 99 mas% (de exemplu, 100 mas%) din produsul, care conţine un compus cu formula II sau o sare a acestuia (de exemplu, produsul izolat dintr-un amestec de reacţie la obţinerea compusului sau sării), constă din compus sau sare.

Gradul de puritate al compusului şi sării poate fi determinat utilizând o metodă standard de analiză, cum ar fi cromatografia în strat subţire, electroforeza în gel, cromatografia lichidă de înaltă performanţă şi/sau spectrometria de masă. În cazul în care este folosită mai mult de o metodă de analiză şi metodele furnizează diferenţe semnificative în ceea ce priveşte gradul de puritate determinat, atunci mai avantajoasă este metoda care oferă cel mai înalt grad de puritate. O sare sau un compus cu o puritate de 100% este acea(acel) care nu conţine impurităţi detectabile, la determinare printr-o metodă standard de analiză. În ceea ce priveşte compusul, conform invenţiei, care are unul sau câţiva centri asimetrici şi poate apărea sub formă de amestec de stereoizomeri, un compus substanţial pur poate fi sau un amestec substanţial pur de stereoizomeri, sau un diastereomer sau enantiomer individual substanţial pur.

Mai mult decât atât, compuşii prezentei invenţii pot exista în formă amorfă şi/sau sub formă de una sau mai multe forme cristaline, şi, ca atare, toate formele amorfe şi cristaline şi amestecurile lor ale compuşilor cu formula II sunt incluse în volumul prezentei invenţii. În plus, unii dintre compuşii prezentei invenţii pot forma solvaţi cu apă (adică, hidraţi) sau cu solvenţi organici obişnuiţi. Astfel de solvaţi şi hidraţi, în special solvaţii şi hidraţii farmaceutic acceptabili ai acestor compuşi sunt, de asemenea, incluşi în volumul acestei invenţii, împreună cu formele nesolvatate şi anhidre.

Se înţelege, că compusul cu formula II (sau orice variantă a acestuia şi sărurile lor farmaceutic acceptabile), în care, de exemplu, R1 reprezintă -H sau modificarea promedicamentoasă sub formă de mono-, di- sau trifosfat, poate fi transformat intracelular/in vivo cu unul sau câteva mecanisme (de exemplu, reacţii chimice catalizate cu enzime) în nucleozid 5' trifosfat (adică, în care R1 reprezintă -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2). Fără a face legătură cu o oarecare teorie concretă, de obicei se înţelege, că nucleozid 5'trifosfatul este responsabil de inhibarea enzimei RT HIV şi pentru manifestarea activităţii antivirale după administrarea la un pacient a compusului cu formula II.

Respectiv, în prezenta descriere sunt examinate promedicamentele compuşilor prezentei invenţii [T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 14 of the A.C.S. Symposium Series , and in Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press]. Termenul “promedicament” în prezenta descriere înseamnă compusul (de exemplu, precursor al medicamentului), care poate fi sub formă de o sare farmaceutic acceptabilă, care se transformă intracelular/in vivo într-un derivat de nucleozidă 4'-substituit, care este un inhibitor al transcriptazei inverse a HIV. Nucleozid 5'trifosfatul este un exemplu de derivat de nucleozidă 4'-substituit. Transformarea in vivo se poate produce prin diferite mecanisme, de exemplu, printr-o reacţie chimică catalizată cu enzimă, o reacţie chimică metabolică şi/sau o reacţie chimică spontană (de exemplu, solvoliză), cum ar fi, de exemplu, prin hidroliză în sânge. Prezenta invenţie cuprinde promedicamentele, care se transform prin conversie intracelulară/in vivo într-un derivat de nucleozid 4'-substituit al compusului cu formula II, care este inhibitor al transcriptazei inverse a HIV. De exemplu, derivaţii de nucleozid 4'-substituită cu formula II includ, dar nu se limitează la, compuşii cu formula II, în care:

a) R1 reprezintă -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2;

b) R1 reprezintă -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2, şi R2 reprezintă -H; şi/sau

c) R1 reprezintă -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2, R2 reprezintă -H, R4 reprezintă -NH2 şi R5 reprezintă -H sau -NH2.

Promedicamentele compuşilor cu formula II pot manifesta solubilitate, absorbţie şi/sau lipofilicitate mai înaltă, comparativ cu compuşii ca atare, conducând, astfel, la o creşterea accesibilităţii biologice şi eficienţei. Când compusul conţine, de exemplu, o grupă hidroxi, promedicamentul poate fi un derivat al grupei hidroxi, cum ar fi un ester (-OC(O)R), un ester al acidului carboxilic (-OC(O)OR), un ester al acidului fosforic (-O-P(=O)(OH)2), un eter (-OR) sau un promedicament mono-fosfat, cum ar fi fosforamidat (pot fi transformaţi in vivo în nucleozid monofosfatul respectiv).

De exemplu, în cazul în care compusul cu formula II conţine o grupă funcţională alcoolică, promedicamentul poate fi format prin substituirea unui sau a câţiva atomi de hidrogen din grupa de alcool cu o grupă, cum ar fi, de exemplu, (C1-C6)alcanoiloximetil, 1-((C1-C6)alcanoiloxi)etil, 1-metil-1-((C1-C6)alcanoiloxi)etil, (C1-C6)alkoxicarboniloximetil, N-(C1-C6)alcoxicarbonilaminometil, succinoil, (C1-C6)alcanoil, α-amino(C1-C4)alchil, α-amino(C1-C4)alchilen-aril, arilacil şi α-aminoacil sau α-aminoacil-α-aminoacil, în care fiecare grupă α-aminoacil este selectată independent dintre L-aminoacizii naturali sau glicosil (radicalul, rezultat din eliminarea grupei hidroxil al formei hemiacetal a carbohidratului).

Termenul “modificare promedicamentoasă a mono-, di- sau trifosfatului”, cum se utilizează în această descriere, include, dar nu se limitează la, promedicamente 5'-alcool-derivate, cum ar fi, -P(O)(-O-C1-C6alchil)2; -P(O)(-NH-(grupa α-aminoacil))(-O-aril), cunoscute ca promedicamente de tip “McGuigan”; -P(O)(-O-(C1-C6 alchilen)-S-acil)(-NH-arilalchil); promedicamente S-acil-2-tioetil (SATE); esteri ciclici ai acidului fosforic, care formează o punte între două grupe hidroxil ale ribozei, cum ar fi:

,

în care esterii ciclici ai acidului fosforic formează o punte între grupa 3'-OH şi grupele 5'-OH şi aceştea sunt descrişi în US Patent No. 7,879,815; International Publication Nos. WO2005/003047, WO2008/082602, WO2010/0081628, WO2010/075517 and WO2010/075549; Mehellou, Chem. Med. Chem., 5:1841-1842 (2005 ); Bobeck et al., Antiviral Therapy 15:935-950 (2010); Furman et al., Future Medicinal Chemistry, 1:1429-1452 (2009); and Erion, Microsomes and Drug Oxidations, Proceedings of the International Symposium, 17th, Saratoga Springs, NY, United States, July 6-10, 2008, 7-12 (2008).

În cazul în care derivatul 4'-substituit include o grupă funcţională amino, promedicamentul se poate forma prin înlocuirea atomului de hidrogen din grupa amino cu o grupă, cum ar fi, de exemplu, R-carbonil-, RO-carbonil-, NRR'-carbonil-, în care R şi R' fiecare independent reprezintă (C1-C10)alchil, (C3-C7) cicloalchil, benzil, α-aminoacil natural, -C(OH)C(O)OY1, în care Y1 reprezintă H, (C1-C6)alchil sau benzil, -C(OY2)Y3, în care Y2 reprezintă (C1-C4) alchil şi Y3 reprezintă (C1-C6)alchil; carboxi (C1-C6)alchil; amino(C1-C4)alchil sau mono-N- sau di-N,N-(C1-C6)alchilaminoalchil; -C(Y4)Y5, în care Y4 reprezintă H sau metil şi Y5 reprezintă mono-N- sau di-N,N-(C1-C6)alchilamino morfolino; piperidin-1-il sau pirolidin-1-il, etc.

Esterii farmaceutic acceptabili ai prezenţilor compuşi includ grupele următoare: (1) esterii acidului carboxilic obţinuţi prin esterificarea grupei hidroxi a compusului hidroxil, în care fragmentul necarbonil al porţiunii acidului carboxilic a grupei esterice se selectează dintre alchil cu catenă liniară sau ramificată (de exemplu, metil, etil, n-propil, izopropil, t-butil, sec-butil sau n-butil), alcoxialchil (de exemplu, metoximetil), aril (de exemplu, benzil), ariloxialchil (de exemplu, fenoximetil), aril (de exemplu, fenil opţional substituit cu, de exemplu, halogen, C1-4alchil, -O-(C1-4alchil) sau amino); (2) esterii sulfonaţi, cum ar fi alchil- sau aralchilsulfonil (de exemplu, metansulfonil); (3) esterii aminoacizilor (de exemplu, L-valil sau L-izoleucil); (4) esterii acidului fosforic şi (5) esterii mono-, di- sau trifosfaţi. Esterii fosfaţi pot fi ulterior esterificaţi, de exemplu, cu C1-20 alcool sau cu un derivat reactiv al acestuia, sau cu 2,3-di (C6-24)acil glicerol.

În cazul, în care derivatul 4'-substituit al deoxiribozei conţine grupa funcţională a acidului carboxilic, promedicamentul poate conţine un ester, format prin înlocuirea atomului de hidrogen al grupei acide cu o grupă, cum ar fi, de exemplu, (C1-C8)alchil, (C2-C12)alcanoiloximetil, 1-(alcanoiloxi)etil având 4 până la 9 atomi de carbon, 1-metil-1-(alcanoiloxi)-etil având 5 până la 10 atomi de carbon, alcoxicarboniloximetil având 3 până la 6 atomi de carbon, 1-(alcoxicarboniloxi)etil având 4 până la 7 atomi de carbon, 1-metil-1-(alcoxicarboniloxi)etil având 5 până la 8 atomi de carbon, N-(alcoxicarbonil)aminometil având 3 până la 9 atomi de carbon, 1-(N-(alcoxicarbonil)amino)etil având 4 până la 10 atomi de carbon, 3-ftalidil, 4-crotonolactonil, gamma-butirolacton-4-il, di-N,N-(C1-C2)alchilamino(C2-C3)alchil (cum ar fi, β-dimetilaminoetil), carbamoil-(C1-C2)alchil, N,N-di (C1-C2)alchilcarbamoil-(C1-C2)alchil şi piperidino-, pirolidino- sau morfolino(C2-C3)alchil, etc.

Alte exemple includ următoarele: când compusul cu formula II conţine grupa acidului carboxilic, promedicamentul poate fi un ester sau o amidă, şi, când compusul cu formula II conţine o grupă amino primară sau un alt azot potrivit, care poate transformat, promedicamentul poate reprezenta amidă, carbamat, uree, imină sau baza Mannich. Metodele obişnuite de selectare şi preparare a derivaţilor potriviţi de promedicamente sunt descrise, de examplu, în Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, Elsevier, 1985; J. J. Hale et al., J. Med. Chem. 2000, vol. 43, pp. 1234-1241; C. S. Larsen and J. Ostergaard, "Design and application of prodrugs" in: Textbook of Drug Design and Discovery, 3rd edition, edited by C. S. Larsen, 2002, pp. 410-458; şi Beaumont et al., Current DrugMetabolism 2003, vol. 4, pp. 461-458.

Respectiv, compuşii în volumul formulelor de structură generice, variantelor compuşilor şi compuşilor concreţi, descrişi şi revendicaţi în prezenta invenţie, cuprind săruri, toţi stereoizomerii şi tautomerii posibili, formele fizice (de exemplu, formele amorfe şi cristaline), formele solvate şi hidrate ale acestora şi orice combinaţie a acestor forme, precum şi sărurile acestora, în cazul în care asemenea forme sunt posibile, dacă nu se specifică altceva.

Invenţia cuprinde, de asemenea, un compus al prezentei invenţii sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, pentru utilizare în tratamentul sau profilaxia infecţiei cu HIV, pentru inhibarea transcriptazei inverse a HIV sau pentru tratamentul, profilaxia sau întârzierea debutului SIDA.

Invenţia cuprinde, de asemenea, un compus al prezentei invenţii sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, pentru utilizare în prepararea unui medicament pentru tratamentul sau profilaxia infecţiei cu HIV, pentru inhibarea transcriptazei inverse a HIV sau pentru tratamentul, profilaxia sau întârzierea debutului SIDA la un subiect care are nevoie de aceasta.

Invenţia se referă, de asemenea, la o compoziţie farmaceutică, care conţine o cantitate eficientă de un compus al prezentei invenţii sau de o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia şi un purtător farmaceutic acceptabil, care conţine suplimentar o cantitate eficientă de un agent suplimentar anti-HIV, selectat din grupa constând din agenţi antivirali anti-HIV, imunomodulatori şi agenţi antimicrobieni. In cadrul acestei variante de realizare a invenţiei agentul anti-HIV reprezintă un agent antiviral, selectat din grupa constând din inhibitori ai proteazei HIV, inhibitori ai transcriptazei inverse a HIV, inhibitori ai integrazei HIV, inhibitori ai fuziunii HIV, inhibitori de intrare HIV şi inhibitori de maturare a HIV.

Orice descriere de mai sus sau care urmează, care se referă la un compus cu formula II se aplică şi la fiecare din variantele acesteia.

Alte realizări ale prezentei invenţii includ următoarele:

(a) O compoziţie farmaceutică cu conţinut de o cantitate eficientă de compus cu formula II, având semnificaţiile definite anterior sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia şi un purtător farmaceutic acceptabil.

(b) O compoziţie farmaceutică care conţine produsul preparat prin combinarea (de exemplu, amestecarea) unei cantităţi eficiente de compus cu formula II, având semnificaţiile definite anterior sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia şi un purtător farmaceutic acceptabil.

(c) Compoziţie farmaceutică, conform (a) sau (b), care conţine în continuare o cantitate eficientă de un agent anti-HIV selectat din grupa constând din agenţi antivirali HIV, imunomodulatori şi agenţi antiinfecţioşi.

(d) Compoziţie farmaceutică, conform (c), în care agentul anti-HIV este un agent antiviral selectat din grupa constând din: inhibitori de protează a HIV, inhibitori nucleozidici de transcriptază inversă HIV, inhibitori non-nucleozidici de transcriptază inversă HIV, inhibitori de integrază HIV, inhibitori de fuziune HIV, inhibitori de intrare HIV şi inhibitori de maturare a HIV.

(e) O combinaţie care conţine (i) un compus cu formula II, având semnificaţiile definite anterior, sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestui şi (ii) un agent anti-HIV selectat din grupa constând din agenţi antivirali HIV, imunomodulatori şi agenţi antiinfecţioşi; în care compusul şi agentul anti-HIV fiecare sunt într-o cantitate care face combinaţia eficientă pentru inhibarea transcriptazei inverse a HIV, pentru tratamentul sau profilaxia unei infecţii cu HIV, sau pentru tratamentul, profilaxia sau întârzierea debutului sau progresării SIDA..

(f) O combinaţie, conform (e), în care agentul anti-HIV este un agent antiviral selectat din grupa constând din: inhibitori de protează HIV, inhibitori nucleozidici de transcriptază inversă HIV, inhibitori non-nucleozidici de transcriptază inversă HIV, inhibitori de integrază HIV, inhibitori de fuziune HIV, inhibitori de intrare HIV şi inhibitori de maturare a HIV.

(g) Un compus cu formula II sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia pentru utilizare în inhibarea transcriptazei inverse HIV.

(h) Un compus cu formula II sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia pentru utilizare în profilaxia sau tratamentul infecţiei cu HIV (de exemplu, HIV-1).

(i) Un compus pentru utilizare, conform (h), în care compusul cu Formula II este administrat în combinaţie cu o cantitate eficientă de cel puţin un alt antiviral HIV selectat din grupa constând din inhibitori ai proteazei HIV, inhibitori ai integrazei HIV, inhibitori non-nucleozidici ai transcriptazei inverse HIV, inhibitori nucleozidici ai transcriptazei inverse HIV, inhibitori ai fuziunii HIV, inhibitori de intrare HIV şi inhibitori de maturare HIV.

(j) Un compus cu formula II sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia pentru utilizare în profilaxia, tratamentul sau întârzierea debutului sau progresiei SIDA.

(k) Un compus pentru utilizare, conform (j), în care compusul este administrat în combinaţie cu o cantitate eficientă de cel puţin un alt antiviral HIV selectat din grupa formată din inhibitori ai proteazei HIV, inhibitori ai integrazei HIV, inhibitori non-nucleozidici ai transcriptazei inverse HIV, inhibitori nucleozidici ai transcriptazei inverse HIV, inhibitori ai fuziunii HIV, inhibitori de intrare HIV şi inhibitori de maturare HIV.

(l) O compoziţie farmaceutică, conform (a), (b), (c) sau (d) sau o combinaţie, conform (e) sau (f) pentru utilizare în inhibarea transcriptazei inverse HIV.

(m) O compoziţie farmaceutică, conform (a), (b), (c) sau (d) sau o combinaţie, conform (e) sau (f), pentru utilizare în profilaxia sau tratamentul infecţiei cu HIV (de exemplu, HIV-1 ).

(n) O compoziţie farmaceutică, conform (a), (b), (c) sau (d) sau o combinaţie, conform (e) sau (f), pentru utilizare în profilaxia, tratamentul sau întârzierea debutului sau progresiei SIDA .

Prezenta invenţie, de asemenea, include compusul cu formula II, sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, (i) pentru uz în, (ii) pentru uz ca medicament pentru sau (iii) pentru uz în prepararea unui medicament pentru: (a) terapie (de exemplu, a corpului uman), (b) medicină, (c) inhibarea transcriptazei inverse a HIV, (d) tratamentul sau profilaxia infecţiei cu HIV sau (e) tratamentul, profilaxia sau întârzierea debutului sau progresiei SIDA. În aceste utilizări compuşii prezentei invenţii pot fi opţional utilizaţi în combinaţie cu unul sau mai mulţi agenţi anti-HIV selectaţi dintre agenţii antivirali HIV, agenţii antiinfecţioşi şi imunomodulatori.

Adiţional realizările prezentei invenţii includ compoziţii farmaceutice, combinaţii şi setul de utilizări prevăzut în (a)-(n) anterior şi utilizările de la (i) (a)-(e) până la (iii) (a)-(e), prevăzute în paragraful precedent, în care compusul prezentei invenţii, folosit în aceasta, este un compus din una dintre variantele de realizare, aspectele, clasele, subclasele sau manifestările descrise mai sus. În toate aceste exemple de realizare, compusul poate fi utilizat opţional în formă sau ca sare farmaceutic acceptabilă.

Variantele adiţionale ale prezentei invenţii includ fiecare dintre compoziţiile, combinaţiile farmaceutice, metodele şi utilizările prevăzute în paragrafele precedente, în care compusul prezentei invenţii sau sarea sa, utilizată în aceasta, sunt substanţial pure. Referitor la o compoziţie farmaceutică cu conţinut de un compus cu formula II sau de sare şi un purtător farmaceutic acceptabil şi opţional unul sau mai mulţi excipienţi, se înţelege că termenul "substanţial pur" se referă la un compus cu formula II sau la o sare ca atare.

Toate aceste variante suplimentare ale prezentei invenţii includ compoziţiile farmaceutice, combinaţiile şi utilizările prezentate în (a) - (n) anterior şi utilizările (i) (a) - (e) până la (iii) (a) - (e) prezentate anterior, în care HIV de interes este HIV-1. Astfel, de exemplu, în compoziţia farmaceutică (d), compusul cu formula II este folosit într-o cantitate eficientă împotriva HIV-1 şi agentul anti-HIV este un agent antiviral HIV-1 selectat din grupa constând din inhibitori ai proteazei HIV-1, inhibitori ai transcriptazei inverse a HIV-1, inhibitori ai integrazei HIV-1, inhibitori de fuziune a HIV-1 şi inhibitori de intrare HIV-1. Compuşii cu formula II pot fi, de asemenea, agenţi utili contra HIV-2.

Termenul "administrare" şi variante ale acesteia (de exemplu, "administrarea" unui compus) cu referire la un compus cu formula II înseamnă furnizarea compusului la un individ care necesită tratament sau profilaxie şi include atât autoadministrarea, cât şi administrarea la un pacient de către o altă persoană. Când un compus este furnizat în combinaţie cu unul sau mai mulţi agenţi activi (de exemplu, agenţi antivirali utili pentru tratarea sau profilaxia infecţiei cu HIV sau SIDA), "administrare" şi variantele acesteia sunt fiecare înţelese ca incluzând furnizarea de compus şi de alţi agenţi în acelaşi timp sau în momente diferite. Când agenţii unei combinaţii sunt administraţi în acelaşi timp, ei pot fi administraţi împreună într-o singură compoziţie sau pot fi administraţi separat.

Aşa cum este utilizat în prezentul context, termenul "compoziţie" presupune să cuprindă un produs care conţine ingredientele specificate, precum şi orice produs care rezultă din combinarea ingredientelor specificate.

Ingredientele potrivite pentru includerea într-o compoziţie farmaceutică sunt ingredientele farmaceutic acceptabile, ceea ce înseamnă că ingredientele trebuie să fie compatibile între ele şi să nu fie nocive pentru persoana care le primeşte.

Prin "farmaceutic acceptabil" se înţelege că ingredientele compoziţiei farmaceutice trebuie să fie compatibile între ele şi să nu fie dăunătoare destinatarului acestora.

Termenul "subiect", aşa cum este utilizat în prezentul context, se referă la un animal, de preferinţă la un mamifer, mai preferabil fiind un om, care poate fi obiect al tratamentului, observaţiei sau experimentului.

Termenul "cantitate eficientă", aşa cum este utilizat în prezentul context, înseamnă o cantitate suficientă pentru a inhiba transcriptaza inversă a HIV, pentru a inhiba replicarea HIV, pentru a exercita un efect profilactic şi/sau pentru a exercita un efect terapeutic după administrare. Într-o variantă de realizare, cantitatea eficientă este o "cantitate terapeutic eficientă", care reprezintă o cantitate de compus eficientă pentru inhibarea transcriptazei inverse a HIV, pentru inhibarea replicării HIV (oricare dintre cele anterioare, care poate fi denumită aici "cantitate eficientă de inhibare"), pentru tratarea infecţiei cu HIV, tratarea SIDA, întârzierea debutului SIDA şi/sau progresiei SIDA la un pacient.

Într-o altă variantă de realizare, cantitatea eficientă este o "cantitate profilactic eficientă", care reprezintă o cantitate de compus eficientă pentru profilaxia infecţiei cu HIV sau pentru profilaxia SIDA la un pacient. Se înţelege, că o cantitate eficientă poate fi în acelaşi timp atât o cantitate terapeutic eficientă, de exemplu, pentru tratamentul infecţiei cu HIV, cât şi o cantitate profilactic eficientă, de exemplu, pentru reducerea sau prevenirea riscului de a dezvolta SIDA.. Atunci când compusul cu formula II este administrat sub formă de sare, referinţele la cantitatea de compus sunt la forma liberă (adică, forma care nu este sare) a compusului.

În utilizarea, conform prezentei invenţii, (de exemplu, inhibarea transcriptazei inverse a HIV, tratamentul sau profilaxia infecţiei cu HIV, inhibarea replicării HIV, tratamentul, profilaxia, sau întârzierea debutului sau progresării SIDA) compuşii prezentei invenţii, opţional sub formă de sare, pot fi administraţi prin orice mijloace care produc contactul agentului activ cu locul de acţiune a agentului. Ei pot fi administraţi prin orice mijloace uzuale disponibile pentru utilizare în combinaţie cu produse farmaceutice, fie ca agenţi terapeutici individuali sau într-o combinaţie de agenţi terapeutici. Aceştia pot fi administraţi solitar, dar, de obicei, sunt administraţi cu un purtător farmaceutic selectat în funcţie de calea de administrare selectată şi practica farmaceutică standard. Compuşii, conform invenţiei, pot, de exemplu, fi administraţi oral, parenteral (inclusiv în injecţii subcutanate, intravenoase, intramusculare, intrasternale sau prin tehnici de infuzie), prin spray de inhalare, sau rectal, sub formă de o doză unitară de dozare a unei compoziţii farmaceutice conţinând o cantitate eficientă de compus şi purtători, adjuvanţi şi vehicule uzuale farmaceutic acceptabile netoxice, oricare dintre acestea metode de administrare pot fi prezentate sub formă de o singură doză, o data pe zi sau mai rar, cum ar fi o dată pe săptămână sau o dată pe lună, de exemplu, dar nu se limitează la aceasta, în limitele dozelor şi cantităţilor descrise anterior. Preparatele lichide potrivite pentru administrare orală (de exemplu, suspensii, siropuri, elixiruri, etc.) pot fi preparate prin metode cunoscute în domeniu şi pot folosi oricare dintre mediile uzuale, cum ar fi apă, glicoli, uleiuri, alcooli, etc. Preparatele solide potrivite pentru administrare orală (de exemplu, pulberi, pilule, capsule şi tablete) pot fi preparate prin metode cunoscute în domeniu şi pot folosi excipienţi solizi, cum ar fi amidonuri, zaharuri, caolină, lubrifianţi, lianţi, agenţi de dezintegrare, etc. Compoziţiile parenterale pot fi preparate prin metode cunoscute în domeniu şi de obicei folosesc apă sterilă ca purtător şi opţional alte ingrediente, cum ar fi agenţi, care contribuie la ameliorarea solubilităţii. Soluţiile injectabile pot fi preparate prin metode cunoscute în domeniu, în care purtătorul conţine o soluţie salină, soluţie de glucoză sau o soluţie care conţine un amestec de soluţie salină şi glucoză. O altă descriere a metodelor potrivite pentru prepararea compoziţiilor farmaceutice utilizate în prezenta invenţie şi a ingredientelor adecvate pentru utilizare în compoziţiile respective sunt prezentate în Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, edited by A. R. Gennaro, Mack Publishing Co., 1990 şi în Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, published by Pharmaceutical Press and Philadelphia College of Pharmacy at University of the Sciences, 2012, ISBN 978 0 85711-062-6 şi ediţiile anterioare.

Formulările compuşilor cu formula II, care rezultă cu suprasaturarea medicamentului şi/sau dizolvarea rapidă, pot fi utilizate pentru a facilita absorbţia orală a medicamentului. Abordările de formulare pentru a cauza o suprasaturare medicamentoasă şi/sau dizolvare rapidă includ, dar nu se limitează la acestea, sisteme de nanoparticule, sisteme amorfe, soluţii solide, dispersii solide şi sisteme de lipide. Astfel de abordări şi tehnici de formulare pentru prepararea acestora sunt bine cunoscute în domeniu. De exemplu, dispersiile solide pot fi preparate folosind excipienţi şi metode descrise în lucrări de sinteză (de exemplu, A.T.M. Serajuddin, J Pharm Sci, 88:10, pp. 1058-1066 (1999)). Sistemele de nanoparticule bazate atât pe uzură, cât şi pe sinteză directă, de asemenea, au fost descrise în literatura de specialitate, cum ar fi Wu et al (F. Kesisoglou, S. Panmai, Y. Wu, Advanced Drug Delivery Reviews, 59:7 pp. 631-644 (2007)).

Compuşii cu formula II şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt inhibitori ai transcriptazei inverse a HIV. Compuşii pot fi utilizaţi pentru inhibarea transcriptazei inverse a HIV şi pentru inhibarea replicării HIV in vitro şi in vivo. În particular, compuşii cu formula II inhibă funcţia polimerazei transcriptazei inverse a HIV-1. Studierea compuşilor din Exemplele, conform prezentei invenţii, în analiza descrisă în testul de polimerază RT, ilustrează capacitatea compuşilor prezentei invenţii de a inhiba activitatea ADN polimerazei dependente de ARN a transcriptazei inverse a HIV-1. Compuşii cu formula II pot fi, de asemenea, agenţi utili contra HIV-2.

Compuşii cu formula II pot fi administraţi într-un interval de dozare de 0.001 până la 1000 mg/kg greutate corporală de mamifer (de exemplu, fiinţă umană) pe zi sau la alte intervale de timp, în funcţie de circumstanţe, într-o singură doză sau în doze divizate. Un exemplu de diapazon de dozare este de la 0.01 până la 500 mg/kg greutate corporală pe zi sau la alte intervale de timp în funcţie de circumstanţe, administrate oral sau prin alte căi de administrare într-o singură doză sau în doze divizate. Un alt interval de dozare este de la 0,1 până la 100 mg/kg greutate corporală pe zi sau la alte intervale de timp, în funcţie de circumstanţe, administrate oral într-o singură doză sau în doze divizate. Pentru administrare orală (de exemplu, tablete sau capsule) sau alte căi de administrare, compoziţiile pot fi furnizate conţinând 1.0 până la 500 miligrame de ingredient activ, în special 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400 şi 500 miligrame de ingredient activ pentru ajustarea simptomatică a dozei la pacientul care trebuie tratat. Nivelul specific de doză şi frecvenţa dozării pentru orice pacient individual pot varia şi vor depinde de o diversitate de factori, incluzând activitatea compusului specific folosit, stabilitatea metabolică şi durata de acţiune a acelui compus, vârsta, greutatea corporală, starea de sănătate generală, sexul, dietă, modul şi timpul de administrare, viteza de excreţie, combinaţia de medicamente, severitatea stării individuale şi terapia anterioară administrată de persoană. În unele cazuri, în funcţie de eficienţa compusului sau reacţia individuală, poate apărea necesitatea devierii în sus sau în jos de la doza determinată. Compuşii prezentei invenţii pot fi administraţi într-o singură doză, o dată pe zi sau mai rar, cum ar fi o dată în săptămână sau o dată în lună, de exemplu, dar nelimitându-se, în dozele şi în cantităţile menţionate anterior. Mai mult decât atât, compusul poate fi formulat pentru eliberare imediată sau modificată, cum ar fi eliberare prelungită sau controlată.

Cum s-a menţionat anterior, prezenta invenţie se referă, de asemenea, la utilizarea unui compus cu formula II cu unul sau mai mulţi agenţi anti-HIV. Un "agent anti-HIV" este orice agent, care este direct sau indirect eficient în inhibarea HIV, în tratamentul sau profilaxia infecţiei cu HIV şi/sau în tratamentul, profilaxia sau întârzierea debutului sau progresării SIDA. Se înţelege, că un agent anti-HIV este eficient în tratarea, prevenirea sau întârzierea instalării sau progresiei infecţiei cu HIV sau SIDA şi/sau a bolilor sau afecţiunilor care rezultă din acesta sau asociate cu acestea. De exemplu, compuşii acestei invenţii pot fi administraţi în mod eficient fie în perioade de preexpunere şi/sau de postexpunere, în combinaţie cu cantităţi eficiente de unul sau mai mulţi agenţi anti-HIV selectaţi dintre agenţii antivirali HIV, imunomodulatori, agenţii antiinfecţioşi sau vaccinurile utile pentru tratarea infecţiei cu HIV sau SIDA. Preparatele antivirale HIV potrivite pentru utilizare în combinaţie cu compuşii prezentei invenţii includ, de exemplu, cele enumerate în tabelul 1 în continuare:

Tabelul 1

Agenţi antivirali pentru tratarea infecţiei cu HIV sau SIDA

Denumirea Tipul abacavir, ABC, Ziagen® nRTI abacavir +lamivudină, Epzicom® nRTI abacavir + lamivudină + zidovudină, Trizivir® nRTI amprenavir, Agenerase® PI atazanavir, Reyataz® PI AZT, zidovudină, azidotimidină, Retrovir® nRTI Capravirină nnRTI darunavir, Prezista® PI ddC, zalcitabină, dideoxicitidină, Hivid® nRTI ddI, didanosină, dideoxiinozină, Videx® nRTI ddI (enterosolubile), Videx EC® nRTI delavirdină, DLV, Rescriptor® nnRTI dolutegravir, Tivicay® InI doravirină, MK-1439 nnRTI efavirenz, EFV, Sustiva®, Stocrin® nnRTI efavirenz + emtricitabină + tenofovir DF, Atripla® nnRTI + nRTI EFdA (4'-etinil-2-fluor-2'-deoxiadenozină) nRTI Elvitegravir InI emtricitabină, FTC, Emtriva® nRTI emtricitabină + tenofovir DF, Truvada® nRTI emvirină, Coactinon® nnRTI enfuvirtid, Fuzeon® FI Didanozină enterosolubilă, Videx EC® nRTI etravirină, TMC-125 nnRTI fosamprenavir calciu, Lexiva® PI indinavir, Crixivan® PI lamivudină, 3TC, Epivir® nRTI lamivudineă+ zidovudină, Combivir® nRTI Lopinavir PI lopinavir + ritonavir, Kaletra® PI maraviroc, Selzentry® EI nelfinavir, Viracept® PI nevirapin, NVP, Viramune® nnRTI PPL-100 (cunoscut, de asemenea, ca PL-462) (Ambrilia) PI raltegravir, MK-0518, Isentress™ InI Rilpivirină nnRTI ritonavir, Norvir® PI sacuinavir, Invirase®, Fortovase® PI stavudin, d4T,didehidrodeoxitimidină, Zerit® nRTI tenofovir DF (DF = dizoproxil fumarat), TDF, Viread® nRTI Tenofovir, hexadeciloxipropil (CMX-157) nRTI Tenofovir alafenamid fumarat (GS-7340) nRTI tipranavir, Aptivus® PI Vicriviroc EI

EI = inhibitor de intrare; FI = inhibitor de fuziune; InI = inhibitor de integrază; PI = inhibitor de protează; nRTI = inhibitor nucleozidic de transcriptază inversă; nnRTI = inhibitor non-nucleozidic de transcriptază inversă. Unele dintre medicamentele enumerate în tabel sunt utilizate într-o formă de sare, de exemplu, sulfat de abacavir, mesilat de delavirdină, sulfat de indinavir, sulfat de atazanavir, mesilat de nelfinavir, mesilat de sacuinavir.

Se înţelege că scopul combinaţiilor compuşilor prezentei invenţii cu agenţi anti-HIV nu se limitează la agenţii antivirali HIV enumeraţi în tabelul A, dar include în principiu orice combinaţie cu orice compoziţie farmaceutică utilă pentru tratamentul sau profilaxia SIDA. Agenţii antivirali HIV şi alţi agenţi vor fi, de regulă, folosiţi în aceste combinaţii în intervalele şi regimurile de doză ale acestora uzuale examinate în literatura de specialitate, incluzând, de exemplu, dozele descrise în ediţia Physicians' Desk Reference, Thomson PDR, Thomson PDR, 57th edition (2003), the 58th edition (2004), or the 59th edition (2005 ) şi ediţiile ulterioare Physicians' Desk Reference (68th ed.). (2014), Montvale, NJ: PDR Network. Intervalele de dozare pentru un compus al invenţiei în aceste combinaţii pot fi aceleaşi cu cele menţionate mai sus.

Compuşii prezentei invenţii sunt de asemenea utili în prepararea şi executarea testelor de screening pentru compuşii antivirali. De exemplu, compuşii prezentei invenţii sunt utili pentru izolarea mutanţilor enzimei, care sunt excelente instrumente de screening pentru compuşii antivirali mai puternici. Mai mult decât atât, compuşii prezentei invenţii sunt utili pentru stabilirea sau determinarea locului de legare a altor agenţi antivirali la transcriptaza inversă a HIV, de exemplu, prin inhibare competitivă.

Abrevierile şi acronimele utilizate în prezenta descriere includ:

ACN = acetonitril aq = apos AcOH = acid acetic AIBN = azobisizobutironitril CHAPS = acid 3- ((3-Colamidopropil)dimetilamoniu)-1-propansulfonic m-CPBA = acid 3-cloroperbenzoic Me = metil CSH = hibrid cu suprafaţă încărcată MeOH = metanol DAST = trifluorură de (dietilamino)sulf Me-THF = 2-metiltetrahidrofuran DCE = 1,2-dicloroetan min = minute DCM = diclorometan MHz = megahertz DEAD = dietil azodicarboxilat mL sau ml = millilitru DIBAL-H = hidrură de diizobutilaluminu mol = moli DIPEA = diizopropiletilamină mmol = milimoli DMF = N,N-dimetilformamidă NaH = hidrură de sodiu periodinan Dess-Martin = 1,1,1-triacetoxi-1,1-dihidro-1,2-benziodxol-3(1H)-onă NBS = N-bromsuccinimidă NIS - N-iodsuccinimidă DMAP = 4-dimetilaminopiridină NHS = ser normal uman DMSO = dimetil sulfoxid NMP = N-metil-2-pirolidinonă EDTA = acid etilendiamintetraacetic RNM = rezonanţă nuclear magnetică EtOAc = acetat de etil NTP = nucleozid trifosfat EA = acetat de etil dNTP = 2'-deoxi nucleozid trifosfat EGTA = etilen glicol acid tetraacetic PBS = tampon fosfat salin EtOH = etanol PE, eter de petrol = eter de petrol FBS = ser fetal de bovină Ppm = părţi per milion HIV = virusul imunodeficienţei umane PPTS = acid 4-toluensulfonic HPLC = cromatografia lichidelor de înaltă performanţă r.t. = temperatura camerei hr = oră RT = transcriptază inversă h = oră TBAF = fluorură de tetrabutilamoniu Hz = hertz t-BuOH = terţ-butanol IBX = acid 2-iodxibenzoic TEA = trietilamină LCAP = procentul ariei în cromatografia lichidelor THF = tetrahidrofuran TFA = acid trifluoroacetic LCMS sau LC-MS = cromatografia lichidelor - spectroscopia de masă CSS = cromatografie în strat subţire L = litru TBS-Cl = clorură de t-butildimetilsilil LDA = diizopropilamidă de litiu TBDMS-Cl = clorură de t-butildimetilsilil LiHMDS = hexametildisilazidă de litiu TMSCl = clorură de trimetilsilil

Compuşii prezentei invenţii pot fi preparaţi prin metode bine cunoscute în domeniul chimiei organice, de exemplu, J. March, 'Advanced Organic Chemistry' 6th Edition, John Wiley and Sons. În timpul secvenţelor sintetice poate fi necesar şi/sau dezirabil să se protejeze grupele reactive sau sensibile pe oricare dintre moleculele implicate. Aceasta se realizează cu grupe de protecţie uzuale, cum ar fi cele descrise în T.W. Greene and P.G.M. Wutts 'Protective Groups in Organic Synthesis' 4th Edition, John Wiley and Sons. Grupele de protecţie sunt îndepărtate în mod opţional într-o etapă ulterioară convenabilă, folosind metode bine cunoscute în domeniu.

Compuşii prezentei invenţii pot fi preparaţi cu uşurinţă conform următoarelor Scheme de reacţie şi exemplele sau modificările acestora, utilizând materii prime, reagenţi uşor disponibili şi metode de sinteză uzuale. În aceste reacţii, de asemenea, este posibilă utilizarea variantelor, care sunt înseşi cunoscute celor cu pregătire obişnuită în domeniu, dar nu sunt menţionate mai detaliat. Mai mult decât atât, pentru un specialist în domeniu vor fi evidente şi alte metode de preparare a compuşilor, conform prezentei invenţii, din următoarele Scheme de reacţie şi exemple. Dacă nu se indică altfel, toate variabilele au semnificaţiile definite anterior.

Schema 1

Lactolul 1-1 poate fi transformat în 1-2 utilizând soluţie de HCl în metanol. Grupele hidroxi ale compusului intermediar 1-2 pot fi apoi protejate cu transformarea ulterioară a 1'-OMe în 1'-Cl, utilizând HCl gazos, rezultă 1-4. Compusul intermediar 1-4 poate interacţiona cu diferite heterocicluri substituite (1-5) in prezenţa unei baze potrivite cu formarea compusului intermediar 1-6. 6-Clor al compusului intermediar 1-6 poate fi transformat în R4, utilizând o sinteză chimică potrivită cu deprotejarea ulterioară a grupelor hidroxil cu obţinerea compusului intermediar 1-7. Compusul intermediar 1-7 poate fi în mod diferit protejat cu obţinerea 1-8. Oxidarea 1-8 rezultă cu aldehida 1-9, care apoi poate fi supusă reacţiei de aldolare cu formaldehidă cu reducerea ulterioară şi formarea 1-10. Oxidarea selectivă a grupei hidroxi în poziţia alfa cu transformarea ulterioară a aldehidei în alchin rezultă cu 1-11. Deprotejarea finală a 3'-alcoolului rezultă cu 1-13 ţintă.

Schema 2:

Lactona 2-1 poate fi tratată cu anion al diferitor heterocicluri cu formarea compuşilor intermediar de tip 2-2. Compusul intermediar 2-2 poate fi transformat în 2-3 prin tratare cu acid în prezenţa silanilor. Deprotejarea 2-3 cu protejarea ulterioară diferită a 3' şi 5' hidroxililor rezultă cu 2-5. Deoxigenarea 2-5 rezultă cu 2-6, care poate fi deprotejat cu protejare diferită ulterioară cu formarea 2-8. Oxidarea alcoolului terminal rezultă cu 2-9 şi reacţia ulterioară a aldolului cu formaldehdă şi reducerea rezultă cu 2-10. Oxidarea selectivă a alcoolului în poziţia alfa rezultă cu aldehida 2-11, care poate fi apoi transformată în acetilenă 2-12. Deprotejarea generală rezultă cu 2-13.

Schema 3:

Compuşii intermediari de tip 3-1 (sintetizaţi utilizând metodele din Schema 1) sunt transformaţi în oxime de tip 3-2. Dehidratarea oximei rezultă cu compuşii 3-3, care pot expuşi deprotejării finale cu formarea compuşilor 3-4 ţintă.

Schema 4:

Compuşii intermediari de tip 4-1 (sintetizaţi utilizând metodele din Schema 2) sunt transformaţi în oxime de tip 4-2. Dehidratarea oximei rezultă cu compuşii 4-3, care pot expuşi deprotejării finale cu formarea compuşilor 4-4 ţintă.

Schema 5:

Compuşii intermediari de tip 5-1 (Sintetizaţi utilizând metodele din schemele precedente) pot fi transformaţi în trifosfaţi 5-2 utilizând metodele cunoscute din literatură.

Schema 6:

Compuşii intermediari de tip 6-1 (sintetizaţi utilizând metodele din schemele precedente) pot fi transformaţi în trifosfaţi 6-2 utilizând metodele cunoscute din literatură.

Proceduri generale chimice: Toţi reagenţii au fost fie achiziţionaţi din surse comerciale obişnuite sau sintetizaţi, conform metodelor descrise în literatură, începând de la regenţi comerciali. Reagenţii comerciali au fost utilizaţi fără purificare suplimentară. Dacă nu se indică altfel, procentul este procentul din greutatea componentului, calculate pentru componentul dat şi greutatea totală a compoziţiei, temperatura este în °C sau este o temperatură a mediului ambiant şi presiunea este cea atmosferică sau aproape egală cu cea atmosferică. Spectrele 1H RMN au fost obţinute cu un Varian VRMN System 400 (400 MHz) şi sunt exprimate ca ppm în raport cu Me4Si cu număr de protoni, multiplicităţi şi constante de cuplare în Hertz indicate în paranteză. În cazul, în care se prezintă datele CL/SM, analizele au fost realizate utilizând Agilent 6110A SMD sau un spectrometru de masă Applied BiosysteSM API-100. Ionul iniţial este dat. CLÎP preparativă a fost realizată cu un sistem Waters de CLÎP echipat cu o coloană Waters Xselect.C18, de obicei folosind gradient de eluţie cu apă/acetonitril conţinând 0,075% acid trifluoracetic. Flash cromatografia pe coloană a fost realizată utilizând silice preambalat în fază normală de la Biotage, Inc. sau silice vrac de la Fisher Scientific. Dacă nu se indică altfel, cromatografia pe coloană a fost realizată utilizând un gradient de eluare eter de petrol/acetat de etil, de la 100% eter de petrol până la 100% acetat de etil. Termenul "temperatura camerei" în exemple se referă la temperatura ambiantă, care de obicei era în intervalul de la aproximativ 20°C până la aproximativ 26°C.

COMPUSUL INTERMEDIAR A

(2R,3S,5R)-5-clor-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoat (compusul intermediar A)

Etapa 1: Sinteza (2R,3S)-2-(hidroximetil)-5-metoxitetrahidrofuran-3-olului

La o soluţie agitată de (4S,5R)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2,4-diol (7.0 g, 52.2 mmol) in metanol anhidru (105 mL) într-o atmosferă de azot, se adaugă în picături cu agitare 0ºC timp de 5 minute clorură de acetil (0.614 g, 7.83 mmol) şi amestecul format se agită la 0ºC timp de 3 ore. Apoi pentru neutralizarea amestecului de reacţie se adaugă bicarbonat de sodiu solid. Faza organică se colectează prin filtrare şi apoi se concentrează sub presiune redusă, rezultă un reziduu sub formă de sirop. Reziduul se purifică prin cromatografie pe silica gel (100-200 ţol) cu amestec diclormetan/metanol (20/1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 4.98-5.04 (m, 1H), 4.21-4.23 (m, 0.4H), 4.07-4.09 (m, 0.6H), 3.83-3.89 (m, 1H), 3.50-3.66 (m, 2H), 3.27-3.32 (m, 3H), 2.23-2.29 (m, 0.6H), 2.08-2.12 (m, 0.4H), 1.98-2.03 (m, 0.4H), 1.77-1.83 (m, 0.6H).

Etapa 2: Sinteza (2R,3S)-5-metoxi-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatului

La o soluţie agitată de (2R,3S)-2-(hidroximetil)-5-metoxitetrahidrofuran-3-ol (6.5 g, 43.9 mmol) in piridină uscată (45 mL) într-o atmosferă de azot, se adaugă în picături la 0ºC timp de 15 minute clorură de 4-metilbenzoil (20.35 g, 132 mmol). Amestecul format se încălzeşte treptat până la 30ºC şi apoi se agită timp de 16 ore. Soluţia formată se concentrează sub presiune redusă. Reziduul format se diluează cu acetat de etil (400 mL) şi apoi se spală cu soluţie apoasă de acid clorhidric (1 mol/L, 2x100 mL), soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu (2 x100 mL) şi soluţie salină saturată (100 mL), respectiv. Faza organică se colectează, se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru, se filtrează şi se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe silica gel (100-200 ţol) eter de petrol/acetat de etil (20:1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 7.90-7.99 (m, 4H), 7.20-7.26 (m, 4H), 5.58-5.61 (m, 0.47H), 5.39-5.42 (m, 0.55H), 5.18-5.24 (m, 1H), 4.46-4.65 (m, 3H), 3.43 (s, 1.61H), 3.36 (s, 1.33H), 2.52-2.60 (m, 1H), 2.17-2.43 (m, 7H).

Etapa 3: (2R,3S,5R)-5-clor-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoat (compusul intermediar A)

La o soluţie agitată de (2R,3S)-5-metoxi-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoat (4.0 g, 10.41 mmol) in eter dietilic anhidru (20 mL) într-un balon cu trei gâturi cu fundul rotund cu un volum de 100 mL se introduce HCl (gaz). Produsul se precipită lent timp de 40 minute la 0ºC. Substanţa solidă se filtrează şi se spală cu eter dietilic uscat (3 x 20 mL), se usucă într-un vid înalt timp de 2 ore, se obţine compusul intermediar A sub formă de substanţă solidă.

1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 7.96 (d, J=9.0Hz, 2H), 7.90 (d, J=8.1Hz, 2H), 7.19-7.27 (m, 4H), 6.47 (d, J=5.1Hz, 1H), 5.54-5.58 (m, 1H), 4.85 (dd, J=3.3Hz, J=7.2Hz, 1H), 4.68 (dd, J=3.3Hz, J=12.0Hz, 1H), 4.59 (dd, J=4.2Hz, J=12.0Hz, 1H), 2.83-2.92 (m, 1H), 2.74 (d, J=15.0Hz, 1H), 2.42 (d, J=3.6Hz, 6H).

EXEMPLUL 1: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (1)

Etapa 1: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoatului

La o suspensie de hidrură de sodiu (60% dispersie în ulei mineral, 0.272 g, 6.79 mmol) in acetonitril anhidru (50 ml) într-o atmosferă de azot într-un balon cu trei gâturi cu fund rotund cu un volum de 250 ml se adaugă 4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (0.948 g, 6.17 mmol) şi amestecul se agită la temperatura ambientală timp de 30 minute. Se adaugă in porţii cu agitare (2R,3S,5R)-5-clor-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoat (2.4 g, 6.17 mmol). Amestecul de reacţie se încălzeşte până la 50ºC şi se agită timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi CLSM. Evaporarea amestecului de reacţie rezultă cu un reziduu uleios, care se purifică prin cromatografie pe silica gel cu acetat de etil/eter de petrol (1:6, v/v), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 8.64 (s, 1H), 7.98 (d, J=8.1Hz, 2H), 7.92 (d, J=8.1Hz, 2H), 7.43 (d, J=3.6Hz, 1H), 7.20-7.30 (m, 4H), 6.82 (dd, J=5.7Hz, J=8.1Hz, 1H), 6.60 (d, J=3.9Hz, 1H), 4.60-4.76 (m, 3H), 2.86-2.96 (m, 1H), 2.74-2.82 (m, 1H), 2.43 (d, J=5.4Hz, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 506.43 [M+H]+.

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

(2R,3S,5R)-5-(4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil) tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatul (2.18 g, 4.31 mmol) se adaugă într-o bombă de oţel cu un volum de 80 ml şi se răceşte până la -40ºC. În aceasta se adaugă amoniu izopropanolic (saturat la -40ºC, 60 ml). După agitare la 90ºC şi timp de 15 ore, amestecul de reacţie se răceşte până la temperatura camerei şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel cu diclormetan/metanol (4/1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.04 (s, 1H), 7.34 (d, J=3.6Hz, 1H), 7.04 (br, 2H), 6.58 (d, J=3.6Hz, 1H), 6.48 (dd, J=6.0Hz, J=8.0Hz, 1H), 5.24 (d, J=3.6Hz, 1H), 5.16 (t, J=4.2Hz, 1H), 4.34 (d, J=2.0Hz, 1H), 3.82 (dd, J=4.0Hz, J=6.4Hz, 1H), 3.48-3.58 (m, 2H), 2.48-2.54 (m, 1H), 2.13-2.17 (m, 1H).

Etapa 3: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-aminei.

(2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (950 mg, 3.796 mmol) şi imidazol (775.4 mg, 11.388 mmol) se adaugă într-un balon cu fundul rotund de 25 mL într-o atmosferă de azot. În balon se injectează DMF anhidru (8 mL), apoi se adaugă clorură de t-butildimetilsilil(1716.4 mg, 11.388 mmol). După agitarea amestecului la 25ºC timp de 3 ore, acesta se diluează cu acetat de etil (40 mL), se spală cu apă (20 mL x 2), NaHCO3 apos (saturat, 20 mL x 2) şi soluţie salină saturată (20 mL x 2), respectiv. Stratul organic se colectează şi se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează sub presiune redusă, rezultă produsul brut. Produsul brut apoi se purifică prin cromatografie pe silica gel cu acetat de etil/eter de petrol (35% până la 42% acetat de etil in eter de petrol), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 8.32 (s, 1H), 7.32 (d, J=3.9Hz, 1H), 6.69 (t, J=6.6Hz, 1H), 6.39 (d, J=3.6Hz, 1H), 5.29 (br, 2H), 4.56-4.61 (m, 1H), 3.96 (dd, J=3.5Hz, J=7.0Hz, 1H), 3.74-3.84 (m, 2H), 2.42-2.51 (m, 1H), 2.30-2.38 (m, 1H), 0.92 (d, J=4.2Hz, 18H), 0.08-0.1 (m, 12H). LC-MS: (ES, m/z): 497.71 [M+H]+.

Etapa 4: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-amină (1.2 g, 2.506 mmol) in THF (24 mL) se adaugă în picături la 0ºC timp de 10 minute o soluţie răcită în prealabil de acid trifluoroacetic/apă (1/2, v/v, 9 mL). Amestecul format se agită la 0ºC timp de 4 ore şi apoi se co-evaporă cu toluen la o temperatură sub 25ºC de trei ori cu formarea unui sirop. Produsul brut se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel cu acetat de etil/diclormetan (1/1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.03 (s, 1H), 7.34 (d, J=3.9Hz, 1H), 7.03 (brs, 2H), 6.58 (d, J=3.6Hz, 1H), 6.46 (dd, J=5.7Hz, 1H), 5.19 (t, J=5.7Hz, 1H), 4.51-4.53 (m, 1H), 3.79-3.83 (m, 1H), 3.47-3.57 (m, 2H), 2.55-2.64 (m, 1H), 2.10-2.17 (m, 1H), 0.9 (s, 9H), 0.11 (s, 6H).

Etapa 5: Sinteza (2S,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (100 mg, 0.274 mmol) in acetonitril anhidru (10 mL) într-o atmosferă de azot într-un balon cu fundul rotund de 25 mL se adaugă acid 2-Iodxibenzoic (230 mg, 0.823 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la temperatura de fierbere timp de 0.5 ore şi apoi se răceşte până la temperatura camerei. Substanţele solide se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară. LC-MS: (ES, m/z): 363.20 [M+H]+ , 381.20 [M+H+H2O]+.

Etapa 6: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (100 mg, 0.276 mmol, brută) in 1,4-dioxan (1 mL) se adaugă soluţie de formaldehidă (0.3 mL, 4.00 mmol), apoi se adaugă în picături timp de 1 minut soluţie de hidroxid de sodiu (0.3 mL, 0.600 mmol, 2 M). Amestecul format se agită la 25ºC timp de 3 ore. După finalizarea reacţiei amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia acidului acetic acid, se diluează cu acetat de etil şi se spală succesiv cu apă, NaHCO3 apos saturat şi soluţie salină saturată, se usucă deasupra Na2SO4 şi se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se dizolvă repetat în etanol anhidru (2 mL) şi in porţii la 0ºC se adaugă borhidrură de sodiu (20.87 mg, 0.552 mmol). După agitare timp de 1 oră la 25ºC, amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia acidului acetic acid, se diluează cu cloroform (20 mL), se spală cu apă şi soluţie salină saturată. Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 şi se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin CSS preparativă cu diclormetan/metanol (20/1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.03 (s, 1H), 7.37 (d, J=3.6Hz, 1H), 7.02 (brs, 2H), 6.57 (d, J=3.6Hz, 1H), 6.50 (dd, J=5.7Hz, J=8.1Hz, 1H), 5.12 (dd, J=5.1Hz, J=6.3Hz, 1H), 4.59-4.60 (m, 1H), 4.38 (dd, J=5.1Hz, J=6.3Hz, 1H), 3.46-3.61 (m, 4H), 2.70-2.75 (m, 1H), 2.13-2.20 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.09 (s, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 395.20 [M+H]+ .

Etapa 7: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (100 mg, 0.253 mmol) in acetonitril anhidru (20 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă acid 2-Iodxibenzoic (284 mg, 1.014 mmol). Amestecul format se agită la 30ºC timp de 36 ore. CLSM indică o parte mică de diol-nucleozid iniţial şi produsul de bază fiind compusul ţintă. Amestecul se filtrează, se spală cu diclormetan. Filtratul se colectează şi se concentrează sub presiune redusă, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 393.28 [M+H]+ .

Etapa 8: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (100 mg, 0.248 mmol, brută) in metanol anhidru (10 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă carbonat de potasiu (68.04 mg, 0.492 mmol). Amestecul se răceşte până la 0ºC, apoi se adaugă în picături timp de 2 minute dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (94.56 mg, 0.492 mmol). După agitarea amestecului format la 25ºC peste noapte, se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin CSS preparativă (metanol/diclormetan = 1/15), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 8.24 (s, 1H), 7.04 (d, J=3.6Hz, 1H), 6.35 (d, J=3.6Hz, 1H), 6.31 (dd, J=5.7Hz, J=9.3Hz, 1H), 5.48 (br, 2H), 4.73 (d, J=4.2Hz, 1H), 4.03 (d, J=12.6Hz, 1H), 3.80 (d, J=12.3Hz, 1H), 3.13-3.23 (m, 1H), 2.58 (s, 1H), 2.22-2.28 (m, 1H), 0.95 (s, 9H), 0.15 (d, J=7.2Hz, 6H).

Etapa 9: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (60 mg, 0.154 mmol) in THF anhidru (2 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă în picături timp de 1 minut la o temperatură ambientală 1M soluţie de fluorură de tetrabutilamoniu (0.309 mL, 0.309 mmol). Soluţia formată se agită la această temperatură timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. După consumarea completă a nucleozidului iniţial, amestecul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin CSS preparativă (metanol/diclormetan = 1/9), se obţine compusul brut din titlu, care se purifică în continuare prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, X-select CSH Column, 19*150mm, 5 µm; faza mobilă, apă cu 10 mmol bicarbonat de amoniu şi acetonitril (5% până la 20% acetonitril timp de 7.5 min, până la 95% timp de 2 min); Detector, UV 254 şi 220 nm, rezultă compusul 1 sub formă de substanţă solidă.

1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.05 (s, 1H), 7.31 (d, J=3.6Hz, 1H), 7.03 (brs, 2H), 6.58 (d, J=3.6Hz, 1H), 6.50 (t, J=6.3Hz, 1H), 5.40-5.49 (m, 2H), 4.49 (dd, J=6.0Hz, J=11.4Hz, 1H), 3.51-3.66 (m, 2H), 3.46 (s, 1H), 2.55-2.59 (m, 1H), 2.28-2.39 (m, 1H). LC-MS: (ES, m/z): 275.20 [M+H]+ .

EXEMPLUL 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (2)

Etapa 1: Sinteza 4-clor-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidinei

4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin (5 g, 32.6 mmol) şi SELECTFLUOR® (1-clormetil-4-fluor-1,4-diazoniabiciclo[2.2.2]octan bis(tetrafluorborat)) (17.30 g, 48.8 mmol) se plasează într-un balon cu fund rotund de 500 mL într-o atmosferă de azot. La acesta se adaugă acetonitril uscat (150 mL) şi acid acetic uscat (50 mL). Amestecul se încălzeşte la 70°C şi se agită timp de 16 ore. După răcire până la temperatura camerei, solvenţii sub presiune redusă şi reziduul se coevaporă cu toluen. Produsul solid brut se dizolvă intr-un amestec de diclormetan/acetat de etil (1:1) şi se filtrează printr-un strat de. Fazele organice combinate se evaporă sub presiune redusă. Produsul brut se purifică apoi prin cromatografie pe silica gel cu amestec de diclormetan/acetat de etil (5:1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 12.48 (brs, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.71 (t, J=2.6Hz, 1H). F-RNM: (376MHz, d6-DMSO, ppm): δ -170.76 (s, 1F). LC-MS: (ES, m/z): 172.00 [M+H]+.

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-clor-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoatului

La o suspensie de hidrură de sodiu (60% dispersie în ulei mineral) (0.177 g, 4.41 mmol) in acetonitril anhidru (40 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă 4-clor-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (0.688 g, 4.01 mmol) in porţii şi amestecul se agită la temperatură ambientală timp de 30 minute. Apoi se adaugă in porţii compusul intermediar A (1.56 g, 4.01 mmol). Apoi amestecul de reacţie se încălzeşte până la 50°C şi se agită timp de 2 ore, substanţele volatile se elimină sub presiune redusă, reziduul se purifică apoi prin cromatografie pe silica gel cu amestec de acetat de etil/eter de petrol (1/1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 8.62-8.68 (m, 1H), 7.91-7.99 (m, 4H), 7.26-7.29 (m, 4H), 7.16-7.18 (m, 2H), 6.84-6.88 (m, 1H), 5.74-5.76 (m, 1H), 4.60-4.74 (m, 3H), 2.74-2.79 (m, 2H), 2.43-2.46 (m, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 524.30 [M+H]+.

Etapa 3: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

Într-o bombă se oţel cu un volum de 80 mL se adaugă (2R,3S,5R)-5-(4-clor-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoat (2.0 g, 3.82 mmol). Conţinutul se răceşte până la -40°C. La acesta se adaugă soluţie saturată de amoniu în i-PrOH (60 mL). După încălzire până la 80°C şi agitare timp de 18 ore, amestecul format se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe silica gel cu amestec de diclormetan/metanol (5/1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.06 (s, 1H), 7.33 (d, J=2.0Hz, 1H), 6.99 (brs, 2H), 6.54 (t, J=6.0Hz, 1H), 5.24 (d, J=4.4Hz, 1H), 4.99 (t, J=5.6Hz, 1H), 4.30-4.33 (m, 1H), 3.78-3.81 (m, 1H), 3.47-3.56 (m, 2H), 2.37-2.44 (m, 1H), 2.12-2.17 (m, 1H). F-RNM: (376MHz, d6-DMSO, ppm): δ -167.49 (s, 1F).

Etapa 4: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-aminei

(2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (538 mg, 2.006 mmol) şi imidazol (819 mg, 12.03 mmol) se plasează într-un balon cu fundul rotund şi volumul de 25 mL într-o atmosferă de azot. În acesta se adaugă DMF uscat (5 mL), apoi se adaugă în porţii terţ-butilclordimetilsilan (1209 mg, 8.02 mmol). Amestecul format se agită la 25°C timp de 3 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi CLSM. După finalizarea reacţiei amestecul se diluează cu acetat de etil (40 mL), se spală cu apă (20 mL x 2), soluţie apoasă saturată de NaHCO3 ( 20 mL x 2) şi soluţie salină saturată (20 mL x 2) respectiv. Stratul organic se colectează, se usucă deasupra Na2SO4 anhidru şi se concentrează sub presiune redusă. Produsul brut se purifică apoi prin cromatografie pe silica gel cu amestec de acetat de etil/eter de petrol (28% până la 41% acetat de etil in eter de petrol), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.07 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.99 (brs, 2H), 6.54 (t, J=6.0Hz, 1H), 4.49 (s, 1H), 3.60-3.78 (m, 3H), 2.51-2.53 (m, 1H), 2.16-2.20 (m, 1H), 0.88 (d, J=4.2Hz, 18H), 0.11 (s, 6H), 0.04 (s, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 497.71 [M+H]+.

Etapa 5: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-amină (900 mg, 1.812 mmol) in THF (12 mL) se adaugă în picături cu agitare la 0°C timp de 10 minute acid trifluoracetic apos (acid trifluoracetic/apă=1/1, v/v, 6 mL). Amestecul format se agită la 0°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. După finalizarea reacţiei amestecul format se coevaporă cu toluen (50 mL x 3) în vid, timp în care se menţine temperatura sub 25°C pentru eliminarea substanţelor volatile. Reziduul se purifică prin cromatografie pe silica gel cu amestec de acetat de etil/eter de petrol (52% până la 58% acetat de etil in eter de petrol), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.07 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.99 (brs, 2H), 6.53 (t, J=6.9Hz, 1H), 5.04 (t, J=5.6Hz, 1H), 4.47-4.51 (m, 1H), 3.76-3.79 (m, 1H), 3.44-3.57 (m, 2H), 2.45-2.51 (m, 1H), 2.11-2.16 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.11 (s, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 383.26 [M+H]+.

Etapa 6: Sinteza (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (360 mg, 0.941 mmol) in acetonitril anhidru (12 mL) într-o atmosferă de argon se adaugă acid 2-iodxibenzoic (791 mg, 2.82 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la temperatura de fierbere timp de 35 minute. Amestecul de reacţie se răceşte până la temperatura camerei şi substanţele solide se filtrează. Filtratul se colectează şi apoi se concentrează în vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

Etapa 7: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehideă (400 mg, 1.051 mmol, crude) in 1,4-dioxan (4 mL) se adaugă soluţie de formaldehidă (1.2 mL, 16.01 mmol), apoi se adaugă în picături timp de 5 minute soluţie de hidroxid de sodiu (1.2 mL, 2 M, 2.400 mmol). Amestecul format se agită la 25ºC timp de 3 ore şi apoi amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia acidului acetic. Amestecul format se diluează cu acetat de etil, se spală succesiv cu apă, soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi soluţie salină saturată. Faza organică se usucă deasupra Na2SO4 şi se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se dizolvă in etanol (10 mL) şi in porţii la 0ºC se adaugă borhidrură de sodiu (80 mg, 2.103 mmol). După agitare timp de 1 oră la 25ºC amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia acidului acetic acid şi apoi se diluează cu cloroform şi se spală succesiv cu apă şi soluţie salină saturată. Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 şi se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe silica gel cu amestec de diclormetan/metanol (30/1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.06 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.99 (brs, 2H), 6.57 (t, J=3.6Hz, 1H), 4.99 (t, J=4.8Hz, 1H), 4.55-4.59 (m, 1H), 4.39 (t, J=5.1Hz, 1H), 3.45-3.55 (m, 4H), 2.57-2.65 (m, 1H), 2.17-2.20 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).

Etapa 8: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2- (hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (120 mg, 0.291 mmol) in acetonitril anhidru (8 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă acid 2-iodxibenzoic (326 mg, 1.164 mmol). Amestecul format se agită la 30ºC timp de 24 ore şi apoi se filtrează şi se spală cu diclormetan. Filtratul se colectează şi se concentrează sub presiune redusă, se obţine compusul din titlu, care se utilizează direct în etapa următoare a reacţiei fără purificare adiţională. CL-SM: (ES, m/z): 411.43 [M+H]+ .

Etapa 9: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (110 mg, 0.268 mmol, brută) in metanol anhidru (8 mL) într-o atmosferă de argon se adaugă carbonat de potasiu (111 mg, 0.804 mmol). Amestecul se răceşte până la 0ºC, apoi se adaugă în picături timp de 1 minut dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (154 mg, 0.804 mmol). După agitarea amestecului la 25ºC peste noapte, amestecul format se concentrează în vid şi apoi se purifică prin CSS preparativă (metanol/diclormetan = 1/15), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.07 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.03 (br, 2H), 6.56 (t, J=6.3Hz, 1H), 5.43 (t, J=6.0Hz, 1H), 4.61 (t, J=5.4Hz, 1H), 3.58-3.67 (m, 1H), 3.49-3.53 (m, 1H), 3.47 (s, 1H), 2.52-2.61 (m, 1H), 2.23-2.31 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.11 (d, J=2.4Hz, 6H). CL-SM: (ES, m/z): 407.30 [M+H]+ .

Etapa 10: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (40 mg, 0.098 mmol) in THF anhidru (2 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă în picături cu agitare timp de 1 minut la temperatura camerei soluţie de TBAF/THF (0.118 mL, 0.118 mmol) şi soluţia formată se agită la această temperatură timp de 2 ore. După finalizarea reacţiei, amestecul format se concentrează în vid şi reziduul se purifică prin CSS preparativă (metanol/diclormetan = 1/10), se obţine produsul brut (28 mg). Produsul brut se purifică apoi prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, X-select CSH Column, 19*150 mm, 5 µm; faza mobilă, apă cu 10 mmol bicarbonat de amoniu şi acetonitril (5% până la 35% acetonitril timp de 7.5 min, până la 95% timp de 2 min); Detector, UV 254 şi 220 nm. Fracţiile conţinute în produs se colectează şi se liofilizează, se obţine compusul 2 sub formă de substanţă solidă.

1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ8.07 (s, 1H), 7.30 (d, J=1.6Hz, 1H), 7.02 (br, 2H), 6.55 (t, J=5.8Hz, 1H), 6.05 (br, 1H), 5.31-5.45 (m, 1H), 4.46 (t, J=6.6Hz, 1H), 3.58 (dd, J=11.8Hz, J=29.4Hz, 2H), 3.47 (s, 1H), 2.44-2.51 (m, 1H), 2.29-2.36 (m, 1H). F-RNM: (376MHz, d6-DMSO, ppm): δ -167.23 (s, 1F). CL-SM: (ES, m/z): 293.10 [M+H]+, 315.10 [M+Na]+ .

EXEMPLUL 3: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (3)

Etapa 1: 5-brom-4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină

4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidina (1 g, 6.51 mmol) se suspendează în DCM uscat (20 mL) apoi la temperatura mediului ambiant într-o atmosferă de azot se adaugă NBS (N-bromsuccinimidă) (1.275 g, 7.16 mmol). Amestecul se încălzeşte până la temperatura de fierbere şi se agită 16 ore. După consumarea completă a deaza-pirimidinei, amestecul se răceşte până la temperatura mediului ambiant şi se menţine timp de 30 min. Precipitatul se colectează prin filtrare, se spală cu DCM (2 x 20 mL), se usucă în vid, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 233.90 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 12.98 (brs, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.96 (s, 1H).

Etapa 2: Sinteza 4-clor-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidinei

5-brom-4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidina (232 mg, 0.998 mmol) se dizolvă in THF uscat (10 mL) şi se răceşte până la -78 oC într-o atmosferă de azot. La aceasta se adaugă în picături cu agitare timp de 5 minute soluţie de n-butillitiu în hexani (2.5 M, 0.88 mL, 2.196 mmol). Amestecul se agită timp de circa 40 minute apoi se adaugă iodmetan (212 mg, 1.497 mmol). Soluţia apoi se încălzeşte lent până la temperatura camerei timp de 2 ore. Pentru stingerea reacţiei se adaugă apă (2 mL). Substanţele volatile se elimină in vid la o temperatură sub 40oC cu formarea unei suspensii. Suspensia se dizolvă repetat in EtOAc (50 mL) şi se spală cu apă (2 x 15 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL). Stratul organic se colectează, se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează in vid, se formează o pulbere, care se recristalizează din MeOH, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 168.00 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 12.22 (brs, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 2.41 (d, J = 0.90 Hz, 1H).

Etapa 3: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-clor-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatului

La o suspensie agitată de hidrură de sodiu (60% dispersie in ulei, 0.453 g, 11.32 mmol) in CAN anhidru (50 mL) se adaugă in porţii într-o atmosferă de azot 4-clor-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (1.724 g, 10.29 mmol) şi amestecul se agită la 25°C timp de 30 minute. La soluţia transparentă formată se adaugă în porţii la 25°C compusul intermediar A (4.0 g, 10.29 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 50°C şi se agită timp de 3 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Amestecul se concentrează în vid cu formarea unei substanţe solide, care se purifică prin cromatografie pe coloana pe silica gel, utilizând amestec de acetat de etil/eter de petrol (1:6, v/v), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 520.25 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 8.55 (s, 1H), 7.90-7.99 (m, 4H), 7.20-7.30 (m, 4H), 7.11 (s, 1H), 6.81 (dd, J = 6.0Hz, J = 8.4Hz, 1H), 5.76 (dd, J = 1.5Hz, J = 3.6Hz, 1H), 4.73-4.79 (m, 1H), 4.54-4.64 (m, 2H), 2.79-2.88 (m, 1H), 2.68-2.75 (m, 1H), 2.43(d, J = 3.0Hz, 6H), 2.33 (d, J = 0.9Hz, 3H).

Etapa 4: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

Într-o bombă de oţel de 150 mL se plasează (2R,3S,5R)-5-(4-clor-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoat (4.5 g, 7.79 mmol). Conţinutul se răceşte până la -40°C. La acesta se adaugă soluţie de amoniu în 2-propanol (i-PrOH/NH3 lichid = 1/1, v/v, 120 mL). Bomba se etanşează şi amestecul se încălzeşte până la 90°C şi se agită timp de 40 ore. După finalizarea reacţiei amestecul se răceşte până la 0°C şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând DCM/MeOH (4/1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 265.10 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.00 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.58 (brs, 2H), 6.45 (dd, J = 6.0Hz, J = 8.1Hz, 1H), 5.21 (d, J = 3.3Hz, 1H), 5.05 (t, J = 5.1Hz, 1H), 4.32-4.36 (m, 1H), 3.78 (d, J = 2.1Hz, 1H), 3.44-3.57 (m, 2H), 2.39-2.51 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.06-2.13 (m, 3H).

Etapa 5: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-aminei

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1.7 g, 6.43 mmol) şi 1H-imidazol (1.752 g, 25.7 mmol) in DMF uscat (10 mL) se adaugă cu agitare la 25°C într-o atmosferă de azot terţ-butilclordimetilsilan (2.91 g, 19.30 mmol). Amestecul format se agită la 25°C timp de 3 ore şi apoi se diluează cu acetat de etil (100 mL), se spală cu apă (2 x 30 mL), soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 2 x 30 mL) şi soluţie salină saturată (30 mL), respectiv. Stratul organic se colectează şi se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează, se obţine un produs brut. Produsul brut se purifică apoi prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (28% până la 41% EA in PE), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 493.30 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 8.24 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.67 (dd, J = 6.3Hz, J = 7.2Hz, 1H), 5.37 (br, 2H), 4.54-4.57 (m, 1H), 3.94 (dd, J = 3.3Hz, J = 6.3Hz, 1H), 3.72-3.82 (m, 2H), 2.37-2.46 (m, 4H), 2.25-2.32 (m, 1H), 0.91 (2s, 18H), 0.10 (s, 12H).

Etapa 6: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-(terţ-butildimetilsilil)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de 7-((2R,4S,5R)-4-(terţ-butildimetilsilil)-5-((terţ-butildimetilsilil)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-amină (2.5 g, 5.07 mmol) in THF (30 mL) se adaugă în picături cu agitare la 0°C timp de 10 minute o soluţie răcită în prealabil de acid trifluoracetic/apă (1/1, v/v, 15 mL). Amestecul format se agită la 0°C timp de 3 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Soluţia formată se coevaporă cu toluen (3 x 100 mL), timp în care temperatura internă se menţine sub 25°C. Produsul brut format se purifică apoi prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (50% până la 58% EA in PE), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 493.30 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, CD3OD, ppm): δ 8.18 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.59 (dd, J = 6.0Hz, J = 7.8Hz, 1H), 4.56-4.60 (m, 1H), 3.93 (dd, J = 3.9Hz, J = 6.6Hz, 1H), 3.65-3.70 (m, 2H), 2.45-2.54 (m, 1H), 2.42 (d, J = 0.9Hz, 3H), 2.23-2.31 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.11 (s, 6H).

Etapa 7: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-(terţ-butildimetilsilil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o suspensie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-(terţ-butildimetilsilil)tetrahidrofuran-2-il)metanol (600 mg, 1.585 mmol) in CAN anhidru (12 mL) se adaugă într-o atmosferă de azot IBX (888 mg, 3.17 mmol). Amestecul se încălzeşte până la temperatura de fierbere şi se agită timp de 55 minute. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul se răceşte până la temperatura camerei şi substanţele solide se filtrează. Filtratul se colectează şi apoi se concentrează în vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 377.15 [M+H]+, 409.15 [M+H+MeOH]+.

Etapa 8: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-(terţ-butildimetilsilil)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-(terţ-butildimetilsilil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (420 mg, crude) in 1,4-dioxan (12 mL) şi apă (3 mL) într-un balon cu fund rotund cu volumul de 50 mL se adaugă formaldehidă apoasă (37 mas/mas%, 6 mL), apoi se adaugă în picături timp de 2 minute o soluţie de hidroxid de sodiu (2 N, 6 mL, 0.12 mmol). Amestecul format se agită la 25°C timp de 3 ore. După consumarea completă a nucleozid-aldehidei iniţiale amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia AcOH (circa 0.8 mL). Amestecul format se diluează cu AcOEt (50 mL) şi se spală succesiv cu apă (30 mL), soluţie apoasă saturată de NaHCO3 (20 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL). Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se dizolvă repetat în EtOH anhidru (8 mL) şi in porţii la 0°C se adaugă borhidrură de sodiu (84.4 mg, 2.23 mmol). După agitare timp de 1 oră la 25°C, amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia AcOH. Amestecul se concentrează în vid, se distribuie între CHCl3 (50 mL) şi apă (30 mL). Stratul apos se extrage repetat cu CHCl3 (2 x 20 mL). Stratul organic combinat se spală succesiv cu apă şi soluţie salină saturată, se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând diclormetan/metanol (5.5% MeOH in DCM), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 409.35 [M+H]+, 431.35 [M+Na]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.00 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.56 (br, 2H), 6.48 (dd, J = 6.0Hz, J = 8.4Hz, 1H), 6.45-6.47(m, 1H), 5.02 (t, J = 5.5Hz, 1H), 4.58 (t, J = 2.7Hz, 1H), 4.35 (dd, J = 4.5Hz, J = 6.3Hz, 1H), 3.42-3.60 (m, 4H), 2.58-2.63 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.09-2.16 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).

Etapa 9: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

((3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolul (140 mg, 0.343 mmol) într-o atmosferă de azot se suspendează în CAN uscat (15 mL), apoi se adaugă acid 2-iodilbenzoic (240 mg, 0.857 mmol). Amestecul se agită la 30 °C timp de 20 ore. Substanţa solidă se filtrează, se spală cu CHCl3 (2 x 20 mL). Filtratul combinat se concentrează în vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 407.25 [M+H]+.

Etapa 10: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (120 mg, ~0.236 mmol, brută) in MeOH uscat (15 mL) la 0°C într-o atmosferă de azot se adaugă K2CO3 (82 mg, 0.590 mmol), apoi în picături cu agitare la 0°C timp de 2 minute se adaugă o soluţie de dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (91 mg, 0.472 mmol) in MeOH (2 mL). Amestecul format se încălzeşte lent până la 25oC şi se agită timp de 16 ore. Amestecul se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (30%-50% EA in PE), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 403.25 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.01 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.60(br, 2H), 6.49 (dd, J = 6.0Hz, J = 7.2Hz, 1H), 5.48 (t, J = 5.7Hz, 1H)，4.62 (t, J = 5.7Hz, 1H), 3.57-3.68 (m, 1H), 3.48-3.52 (m, 1H), 3.45 (s, 1H), 2.49-2.62 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.21-2.31 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.12 (d, J = 6.0Hz, 6H).

Etapa 11: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (3)

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (27 mg, 0.067 mmol) in THF uscat (1 mL) în picături cu agitare la 0°C se adaugă soluţie de fluorură de tetra-butilamoniu în THF (1.0 M, 0.067 mL, 0.067 mmol). Amestecul format se agită la 25°C timp de 30 minute. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Soluţia formată se concentrează în vid. Produsul brut se purifică prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, XBridgeTM C18 Column, 19*150 mm, 5 µm; faza mobilă, apă cu 10 mmol bicarbonat de amoniu şi acetonitril (30% până la 70% acetonitril timp de 10 min, până la 95% timp de 2 min, până la 5% timp de 1.5 min); viteza fluxului: 20 mL/min; Detector, UV 254 şi 220nm. Fracţiile cu conţinut de produs se colectează şi se liofilizează, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 289.05 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.00 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.58 (br, 2H), 6.48 (t, J = 6.60Hz, 1H), 5.45 (d, J = 5.1Hz, 1H), 5.38 (t, J = 6.0Hz, 1H), 4.46 (q, J = 5.4Hz, 1H), 3.50-3.64 (m, 2H), 3.44 (s, 1H), 2.44-2.54 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.24-2.32 (m, 1H).

EXEMPLUL 4: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului(4)

Etapa 1: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(2,4-diclor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatului

La o suspensie agitată de hidrură de sodiu (60% dispersie în ulei mineral, 0.509 g, 12.73 mmol) in acetonitril anhidru(125 mL) in porţii într-o atmosferă de azot se adaugă 2,4-diclor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (2.176 g, 11.57 mmol) şi amestecul se agită la temperatura mediului ambiant timp de 30 minute. La soluţia transparent menţionată în porţii cu agitare se adaugă compusul intermediar A (4.5 g, 11.57 mmol). Amestecul de reacţie se lasă să se agite la temperatura mediului ambiant timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Evaporarea amestecului de reacţie rezultă cu un reziduu uleios, care se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (1/6, v/v), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 540.20 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, CDCl3, ppm): δ 8.01 (d, J = 8.0Hz, 2H), 7.93 (d, J = 8.0Hz, 2H), 7.43 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.22-7.37 (m, 4H), 6.80 (dd, J = 6.0Hz, J = 8.0Hz, 1H), 6.61 (d, J = 4.0Hz, 1H), 5.76 (t, J = 2.8Hz, 1H), 4.76 (dd, J = 3.6Hz, J = 12.0Hz, 1H), 4.63-4.69 (m, 2H), 2.76-2.86 (m, 2H), 2.47,2.45 (2s, 6H).

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

Într-o bombă de oţel cu volumul de 250 mL se adaugă (2R,3S,5R)-5-(2,4-diclor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoat (5 g, 9.25 mmol). Conţinutul se răceşte până la -40°C. La acesta se adaugă soluţie de amoniu în izopropanol (izopropanol/amoniu lichid = 1/3, v/v, 150 mL). Conţinutul se etanşează, se încălzeşte până la 90°C şi se agită timp de 16 ore. Amestecul format se răceşte până la temperatura camerei şi se concentrează în vid. Reziduul se dizolvă repetat in MeOH (100 mL), apoi în picături la 0°C se adaugă o soluţie de metoxid de sodiu în MeOH (1.0 M, 16.89 mL, 16.89 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 25°C şi se agită timp de 2 ore. După finalizarea reacţiei, amestecul se neutralizează prin adiţia acidului acetic (0.01 mL) şi se concentrează în vid. Reziduul se suspendează in DCM/MeOH (v/v, 100/1, 150 mL). După agitare timp de 20 minute substanţa solidă se precipită. Substanţa solidă se colectează prin filtrare, se spală cu DCM şi se usucă în vid, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 285.20 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, CD3OD, ppm): δ 7.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.45 (t, J = 6.8Hz, 1H), 4.52-4.53 (m, 1H), 3.98-4.01 (m, 1H), 3.81 (dd, J = 2.4Hz, J = 12.0Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 3.2Hz, J = 12.0Hz, 1H), 2.63-2.70 (m, 1H), 2.29-2.34 (m, 1H).

Etapa 3: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-aminei

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (3.2 g, 6.74 mmol) şi imidazol (1.836 g, 27.0 mmol) in DMF uscat (10 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă TBS-Cl (3.05 g, 20.23 mmol) la temperatura mediului ambiant. Amestecul format se agită peste noapte. Amestecul de reacţie se diluează cu acetat de etil (100 mL), se spală succesiv cu apă (2 x 20 mL), soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 2 x 20 mL) şi soluţie salină saturată (2 x 20 mL). Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (35% până la 42% EA in PE), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 513.20 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, CDCl3, ppm): δ7.32 (s, 1H), 6.61 (t, J = 6.8Hz, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.44 (br, 2H), 4.59-4.61 (m, 1H), 3.91-3.99 (m, 1H), 3.77-3.88 (m, 2H), 2.44-2.51 (m, 1H), 2.34-2.37 (m, 1H), 0.93-0.95 (m, 18H), 0.11-0.12 (m, 12H). 1H-RNM: (400MHz, CD3OD, ppm): δ 7.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.45 (t, J = 6.8Hz, 1H), 4.52-4.53 (m, 1H), 3.98-4.01 (m, 1H), 3.81 (dd, J = 2.4Hz, J = 12.0Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 3.2Hz, J = 12.0Hz, 1H), 2.63-2.70 (m, 1H), 2.29-2.34 (m, 1H).

Etapa 4: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-amină (2.3 g, 4.48 mmol) in THF (40 mL) în picături cu agitare la 0°C timp de 10 minute se adaugă o soluţie răcită în prealabil de acid trifluoracetic/apă (v/v, 1/1, 20 mL). Amestecul format se agită timp de 2 ore la 0°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Soluţia formată se coevaporă cu toluen (3 x 60 mL), timp în care temperatura internă se menţine sub 25°C cu formarea unui sirop roz. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/diclormetan (1/1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 399.20 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.53 (br, 2H), 7.35 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.35 (t, J = 6.8Hz, 1H), 4.95 (t, J = 5.4Hz, 1H), 4.51-4.54 (m, 1H), 3.73-3.79 (m, 1H), 3.46-3.55 (m, 2H), 2.54-2.59 (m, 1H), 2.16-2.20 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.11 (s, 6H). 1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.53 (br, 2H), 7.35 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.35 (t, J = 6.8Hz, 1H), 4.95 (t, J = 5.4Hz, 1H), 4.51-4.54 (m, 1H), 3.73-3.79 (m, 1H), 3.46-3.55 (m, 2H), 2.54-2.59 (m, 1H), 2.16-2.20 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.11 (s, 6H).

Etapa 5: Sinteza (2S,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (600 mg, 1.504 mmol) in DMSO anhidru (3 mL) şi acetonitril (15 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă IBX (632 mg, 2.256 mmol). Amestecul se agită la temperatura mediului ambiant timp de 2.5 ore. Amestecul de reacţie se diluează cu acetat de etil (20 mL), se spală cu soluţie salină saturată (2 x 10 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se filtrează. Filtratul se concentrează în vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează direct în etapa următoare fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 415.40 [M+H2O]+.

Etapa 6: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (700 mg, brută) in 1,4-dioxan (28 mL) şi apă (7 mL) se adaugă soluţie de formaldehidă (7 mL, 93 mmol), apoi în picături timp de 5 minute se adaugă o soluţie apoasă de hidroxid de sodiu (7 mL, 2 N, 14.00 mmol). Amestecul format se agită la 25°C timp de 3 ore. După consumul complet al nucleozid-aldehidei amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia acidului acetic (0.5 mL). Amestecul se diluează cu acetat de etil (100 mL) şi se spală succesiv cu apă (2 x 20 mL), soluţie apoasă saturată de NaHCO3 (20 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL). Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4, se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se dizolvă repetat în EtOH anhidru (4 mL) şi se adaugă într-o atmosferă de azot in porţii la 0°C borhidrură de sodiu (133 mg, 3.53 mmol). După agitare timp de 1 oră la 25°C, amestecul se neutralizează prin adiţia acidului acetic (1.0 mL). Amestecul se concentrează în vid. Reziduul se diluează cu CHCl3 (100 mL) şi se spală succesiv cu apă (2 x 20 mL) şi soluţie salină saturată (1 x 20 mL). Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4, se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând DCM/MeOH (30/1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 429.30 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.51 (br, 2H), 7.38 (d, J = 3.9Hz, 1H), 6.60 (d, J = 3.6Hz, 1H), 6.40 (t, J = 6.9Hz, 1H), 4.88 (t, J = 5.5Hz, 1H), 4.62 (dd, J = 3.3Hz, J = 5.5Hz, 1H), 4.39 (t, J = 5.7Hz, 1H), 3.43-3.63 (m, 4H), 2.61-2.70 (m, 1H), 2.21-2.29 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.10 (s, 6H).

Etapa 7: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (150 mg, 0.350 mmol) in acetonitril uscat (15 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă IBX (294 mg, 1.049 mmol). Amestecul format se agită la 30°C timp de 2 ore. Amestecul se filtrează, se spală cu CHCl3 (3 x 15 mL). Filtratul se colectează şi apoi se concentrează în vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează direct în etapa următoare fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 427.30 [M+H]+.

Etapa 8: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

(2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil) oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehida (200 mg, 0.468 mmol) se dizolvă in MeOH anhidru (9 mL) apoi la 0°C într-o atmosferă de azot se adaugă carbonat de potasiu (162 mg, 1.171 mmol). La suspensie în picături cu agitare timp de 1 minut se adaugă o soluţie de dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (180 mg, 0.937 mmol) in MeOH (1 mL). Amestecul format se încălzeşte până la 30°C şi se agită timp de 16 ore. Amestecul de reacţie se concentrează în vid. Reziduul se distribuie între acetat de etil (30 mL) şi apă (10 mL). Stratul organic se colectează, se spală cu soluţie salină saturată (2 x 10 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică apoi prin CSS preparativă (MeOH/DCM = 1/15), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 423.60 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.55 (br, 2H), 7.34 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.38 (t, J = 6.4Hz, 1H), 5.32 (t, J = 6.0Hz, 1H), 4.67 (t, J = 6.0Hz, 1H), 3.58-3.61 (m, 1H), 3.48-3.52 (m, 1H), 3.47 (s, 1H), 2.60-2.63 (m, 1H), 2.31-2.35 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.11 (d, J = 3.6Hz, 6H).

Etapa 9: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (60 mg, 0.142 mmol) in THF (1 mL) în picături cu agitare la temperatura mediului ambiant se adaugă soluţie de TBAF în THF (1 M, 0.28 mL, 0.284 mmol). Soluţia formată se agită la temperatura mediului ambiant timp de 2 ore. Amestecul se concentrează în vid. Reziduul se purifică apoi prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, SunFire Prep C18 OBD Column, 5 µm, 19*150 mm; faza mobilă, apă (cu 10 mmol bicarbonat de amoniu) şi acetonitril (8% până la 40% acetonitril timp de 6 min, până la 95% timp de 1.5 min, aproape până la 5% timp de 1 min); Detector, UV 254 şi 220 nm. Fracţiile cu conţinut de produs se colectează şi se liofilizează, se obţine compusul 4 sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 309.00 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.54 (br, 2H), 7.33 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.41 (t, J = 6.4Hz, 1H), 5.52-5.53 (m, 1H), 5.26 (t, J = 6.0Hz, 1H), 4.47-4.48 (m, 1H), 3.61 (dd, J = 5.2Hz, J = 11.6Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 6.2Hz, J = 11.8Hz, 1H), 3.48 (s, 1H), 2.41-2.50 (m, 1H), 2.32-2.38 (m, 1H)

EXEMPLUL 5: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului(5)

Etapa 1: Sinteza (2R,3S,5S)-5-(5-brom-4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoatului

La o soluţie agitată de 5-brom-4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (2.32 g, 9.98 mmol, sinteza descrisă in Exemplul 3, Etapa 1) in acetonitril (30 mL) se adaugă hidrură de sodiu (0.479 g, 11.98 mmol). Amestecul format se agită timp de 30 minute la 0 °C şi se adaugă apoi (2R,3S,5R)-5-clor-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoat (4.27 g, 10.98 mmol). După agitarea amestecului format la temperatura camerei timp de 1 oră, acesta se diluează cu 200 mL acetat de etil, se spală cu soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu (60 mL) şi soluţie apoasă saturată de clorură de sodiu (60 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel cu eter de petrol\acetat de etil (1:2), se obţine compusul din titlu:

1H-RNM (300 MHz, DMSO) δ 8.65 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.84 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.24-7.39 (m, 4H), 6.76-6.79 (m, 1H), 5.74-5.76 (m, 1H), 4.51-4.68 (m, 3H), 3.05-3.15 (m, 1H), 2.74-2.79 (m, 1H), 2.37 (d, J = 1.8 Hz, 6H).

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

La soluţie saturată de NH3 în i-PrOH(15 mL) la -60°C se adaugă (2R,3S,5R)-5-(5-brom-4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil) oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoat (4.50 g, 7.69 mmol). Amestecul format se agită la 80°C timp de 12 ore şi apoi se răceşte până la temperatura camerei şi se evaporă în vid, se formează (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)

metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoat (4.2 g, 7.43 mmol) sub formă de substanţă solidă. Acest compus brut se dizolvă in 30 mL MeOH şi apoi se adaugă metanolat de sodiu (14.86 mL, 14.86 mmol). După agitarea soluţiei formate la temperatura camerei timp de 2 ore, aceasta se stinge cu acetic acid (0.1 mL) şi se concentrează în vid. Produsul brut se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel cu eter de petrol\acetat de etil (1:2), se obţine compusul din titlu:

1H-RNM (300 MHz, DMSO) δ 8.12 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 6.78 (s, 2H), 6.48-6.51 (m, 1H), 5.25 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.32 (s, 1H), 3.81 (s, 1H), 3.17(s, 1H), 2.35-2.50 (m, 1H), 2.12-2.19 (m, 1H).

Etapa 3: Sinteza 5-brom-7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-aminei

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1.3 g, 3.95 mmol), 1H-imidazol (1.076 g, 15.80 mmol) in DMF (8 mL) se adaugă terţ-butilclordimetilsilan (1.786 g, 11.85 mmol). Amestecul format se agită la temperatura camerei timp de 4 ore şi apoi diluează cu 400 mL acetat de etil, se spală cu soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu (80 mL) şi soluţie apoasă saturată de clorură de sodiu (80 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se concentrează in vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel cu acetat de etil/eter de petrol (1:4), se obţine compusul din titlu:

1H-RNM (300 MHz, DMSO) δ 8.10 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.79 (s, 2H), 6.48-6.53 (m, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.62-3.76 (m, 3H), 2.43-2.50 (m, 1H), 2.17-2.16 (m, 1H), 0.88 (d, J = 2.7 Hz, 18H), 0.10 (s, 6H), 0.05 (s, 6H).

Etapa 4: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il) metanolului

5-brom-7-((2R,4S,5R)-4-((terţbutildimetilsilil)oxi)-5-(((terţbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidro-furan-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-amina ( 1.55 g, 2.78 mmol) se dizolvă in THF (4 mL) şi apoi în picături cu agitare la 0°C timp de 10 minute se tratează cu o soluţie răcită în prealabil de acid trifluoracetic/apă (v/v = 1/1, 4 mL). După agitarea amestecului format la 0°C timp de 2 ore, acesta se coevaporă cu toluen sub 25°C, se obţine un sirop roz. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel coloana, eluare cu acetat de etil/diclormetan (1/1), se obţine compusul din titlu:

1H-RNM (300 MHz, DMSO) δ 8.19 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.28 (s, 2H), 6.50 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 4.51 (q, J = 2.7 Hz, 1H), 3.81 (s, 1H), 3.47-3.57 (m, 2H), 2.49-2.58 (m, 1H), 2.17-2.22 (m, 1H), 0.85 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).

Etapa 5: Sinteza (2R,3S)-2-(((terţ-butildifenilsilil)oxi)metil)-5-metoxi-2-feniltetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatului

La o soluţie de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (443 mg, 0.999 mmol) in acetonitril (45 mL) se adaugă acid 2-iodxibenzoic (839 mg, 3.00 mmol) se adaugă. Soluţia formată se agită la 80°C timp de 2 ore, apoi se răceşte până la 0 oC, se filtrează şi se concentrează sub presiune redusă. Rezultă compusul din titlu, care se utilizează direct în etapa următoare fără purificare suplimentară:

MS(ES,m/z): 441.08[M+H]+.

Etapa 6: Sinteza ((2S,4R)-4-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-((terţ-butildimetilsilil)oxi)ciclopentane-1,1-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (445 mg, 1.008 mmol) şi formaldehidă (1009 mg, 10.08 mmol) in dioxan (6 mL) se adaugă hidroxid de sodiu (4.03 mL, 8.07 mmol). Amestecul format se agită la temperatura camerei timp de 3 ore şi apoi se diluează cu 150 mL acetat de etil, se spală cu soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu (30 mL) şi soluţie apoasă saturată de clorură de sodiu (30 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se concentrează în vid, se formează o substanţă solidă. La soluţia de substanţă solidă menţionată in etanol (15 mL) la 0 °C se adaugă borhidrură de sodiu (109 mg, 2.88 mmol). Soluţia formată se agită la temperatura camerei timp de 2 ore, apoi se stinge cu acetic acid (0.1 mL) şi se concentrează sub presiune redusă. Produsul brut se cromatografiază pe o coloană cu silica gel cu eter de petrol\acetat de etil (1:2), se obţine compusul din titlu.

MS(ES,m/z): 473.43[M+H]+.

Etapa 7: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie de ((3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (170 mg, 0.359 mmol) in acetonitril (40 mL) se adaugă acid 2-iodxibenzoic (302 mg, 1.077 mmol. După agitarea soluţiei formate la 0°C timp de 12 ore, aceasta se răceşte până la 0ºC şi apoi se concentrează sub presiune redusă, se obţine compusul din titlu, care se utilizează direct în etapa următoare fără purificare suplimentară.

MS(ES,m/z): 471.43[M+H]+.

Etapa 8: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (170 mg, 0.361 mmol), carbonat de potasiu (125 mg, 0.902 mmol) in metanol (8 mL) la 0ºC se adaugă dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (139 mg, 0.721 mmol). Soluţia formată se agită la temperatura camerei timp de 12 ore, apoi se filtrează şi se concentrează sub presiune redusă. Compusul brut se purifică prin CSS preparativă cu eter de petrol\acetat de etil (1:2), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM (300 MHz, CD3OD, ppm) δ 8.00 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 6.44-6.47 (m, 1H), 4.62-4.66 (m, 1H), 3.61-3.71 (m, 2H), 2.90 (s, 1H), 2.25-2.55 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.57 (d, J = 3 Hz, 6H).

Etapa 9: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolul (40 mg, 0.086 mmol) şi TBAF (0.086 mL, 0.086 mmol) se dizolvă in THF (1 mL). Soluţia formată se agită timp de 2 ore la 30°C, apoi se evaporă şi se purifică în condiţiile următoare: Coloana: X Bridge C18, 19*150 mm, 5 µm; Faza mobilă A: apă/0.05% TFA, Faza mobilă B: ACN; viteza fluxului: 20 mL/min; Gradient: 30% B până la 70% B timp de 10 min; 254 nm. Aceasta rezulta cu compusul 5 sub formă de substanţă solidă:

1H-RNM (300 MHz, DMSO, ppm) δ 8.11 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.52 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.53-3.64 (m, 2H), 3.44 (s, 1H), 2.33-2.52 (m, 2H); MS (ES,m/z): 353.17 [M+H]+.

EXEMPLUL 6: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (6)

Etapa 1: Sinteza 4,5-diclor-7H-pirol[2,3-d]pirimidinei

La un amestec de 4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (2.5 g, 16.28 mmol) in DCM uscat (100 mL) se adaugă NCS (N-clorsuccinimidă) (4.35 g, 32.6 mmol) la 25°C. Amestecul format se agită timp de 16 ore la 40°C într-o atmosferă de azot. Când consumul 4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidinei este complet, amestecul se filtrează direct fără răcire. Substanţa solidă se colectează, se spală cu DCM (20 mL), se usucă în vid, se obţine 4,5-diclor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 188.01 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 12.90 (br, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.93 (d, J = 2.7Hz, 1H).

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4,5-diclor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatului

La o suspensie de NaH (60% dispersie în ulei mineral, 0.538 g, 13.46 mmol) in ACN anhidru(100 mL) într-o atmosferă de azot într-un balon cu trei gâturi cu fund rotund cu un volum de 250 mL se adaugă în porţii 4,5-diclor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (2.3 g, 12.23 mmol) şi amestecul se agită la temperatura mediului ambiant timp de 30 minute. Amestecul tulbure devine transparent şi apoi în porţii cu agitare timp de 5 minute se adaugă (2R,3S)-5-clor-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoat (compusul intermediar A, 4.76 g, 12.23 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 50°C şi se agită timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Substanţele volatile se elimină în vid. Produsul brut se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând 10%-40% acetat de etil in eter de petrol, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 540.39 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 8.64 (s, 1H), 7.91-7.99 (m, 4H), 7.39 (s, 1H), 7.25-7.30 (m, 4H), 6.80 (t, J = 6.9Hz, 1H), 5.75 (dd, J = 3.6Hz, J = 6.0Hz, 1H), 4.60-4.78 (m, 3H), 2.76-2.80 (m, 2H), 2.44 (d, J = 4.8Hz, 6H).

Etapa 3: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

Într-o bombă de oţel de 150 mL se plasează (2R,3S,5R)-5-(4,5-diclor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoat (3.6 g, 6.66 mmol). Conţinutul se răceşte până la -40°C. La acest se adaugă soluţie de amoniu în izopropanol (izopropanol/amoniu lichid = 1/3, v/v, 120 mL). Bomba se etanşează, se încălzeşte până la 90°C şi se agită timp de 16 ore. CSS indică consumul total al nucleozidului iniţial şi în calitate de produs principal se observă produsul ţintă. Amestecul format se concentrează în vid. Produsul brut se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând 2%-10% metanol in diclormetan, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 284.70 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.09 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.87 (br, 2H), 6.51 (dd, J = 6.3Hz, J = 7.8Hz, 1H), 5.25 (d, J = 4.2Hz, 1H), 5.03 (t, J = 5.6Hz, 1H), 4.30-4.34 (m, 1H), 3.81 (dd, J = 4.3Hz, J = 6.8Hz, 1H), 3.46-3.60 (m, 2H), 2.40-2.48 (m, 1H), 2.13-2.20 (m, 1H).

Etapa 4. Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-aminei

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1.7 g, 5.97 mmol) in DMF (10 mL) la 0°C într-o atmosferă de azot se adaugă succesiv 1H-imidazol (1.423 g, 20.90 mmol) şi TBDMS-Cl (2.70 g, 17.91 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 25°C şi se agită timp de 2 ore. Soluţia formată se diluează cu acetat de etil (100 mL), se spală cu apă (100 mL). Stratul apos se extrage repetat cu acetat de etil (2x100 mL). Straturile organice se combină, se spală succesiv cu soluţie apoasă saturată de NaHCO3 (2x100 mL) şi soluţie salină saturată (2x100 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând 2%-10% acetat de etil in eter de petrol, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 513.22 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.10 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 6.85 (br, 2H), 6.51 (t, J = 6.8Hz, 1H), 4.48-4.52 (m, 1H), 3.62-3.80 (m, 3H), 2.55-2.60 (m, 1H), 2.17-2.24 (m, 1H), 0.89 (s, 18H), 0.08 (d, J = 13.6Hz, 12H).

Etapa 5. Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-amină (2.42 g, 4.72 mmol) in THF (48 mL) în picături cu agitare la 0°C timp de 10 minute se adaugă o soluţie răcită în prealabil de acid trifluoracetic acid/apă (1/1, v/v, 24 mL). Amestecul format se agită la 0°C timp de 4 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Soluţia formată se coevaporă cu toluen (3x100 mL), timp în care se menţine temperatura internă sub 25°C. Materialul brut format se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând 2%-10% metanol in diclormetan, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 398.96 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.28 (s, 1H), 7.86 (br, 2H), 7.78 (s, 1H), 6.52 (t, J = 6.8Hz, 1H), 4.53 (t, J = 2.6Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 4.5Hz, J = 6.9Hz, 1H), 3.48-3.60 (m, 2H), 2.50-2.58 (m, 1H), 2.18-2.25 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.11 (s, 6H).

Etapa 6. Sinteza (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (300 mg, 0.752 mmol) in ACN anhidru (30 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă acid 2-iodxibenzoic (632 mg, 2.256 mmol). Amestecul se încălzeşte până la 85°C şi se agită timp de 20 minute. Substanţa solidă se filtrează. Filtratul se concentrează in vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 396.94 [M+H]+.

Etapa 7. Sinteza ((3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (434 mg, 0.820 mmol) in 1,4-dioxan (25 mL) intr-un balon cu fundul rotund cu volumul de 100 mL se adaugă soluţie de formaldehidă (5 mL), apoi în picături la 0°C timp de 5 minute se adaugă o soluţie de hidroxid de sodiu (2 N, 5 mL, 10.00 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 25°C şi se agită timp de 3 ore. După consumul total al nucleozid-aldehidei iniţiale, amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia AcOH. Amestecul se diluează cu acetat de etil (60 mL) şi se spală succesiv cu apă (2x20 mL), soluţie apoasă saturată de NaHCO3 (2x20 mL) şi soluţie salină saturată (2x20 mL). Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 şi se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se dizolvă repetat în EtOH anhidru (30 mL) şi in porţii la 0°C într-o atmosferă de azot se adaugă tetrahidroborat de sodiu (62.0 mg, 1.640 mmol). După agitare timp de 16 ore la 25°C, amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia de AcOH. Amestecul se concentrează în vid. Reziduul se suspendează in CHCl3 (40 mL) şi se spală succesiv cu apă (2x15 mL) şi soluţie salină saturată (2x15 mL). Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4, se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel cu diclormetan/metanol (30/1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 428.99 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.10 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.86 (br, 2H), 6.54 (t, J = 6.9Hz, 1H), 5.01 (t, J = 5.3Hz, 1H), 4.59 (dd, J = 3.0Hz, J = 5.4Hz, 1H), 4.40 (t, J = 5.6Hz, 1H), 3.42-3.61 (m, 4H), 2.60-2.69 (m, 1H), 2.18-2.25 (m, 1H), 0.89 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).

Etapa 8. Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

Într-o atmosferă de azot ((3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolul (166 mg, 0.387 mmol) se dizolvă in CAN anhidru (20 mL) şi apoi se adaugă IBX (325 mg, 1.161 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 30°C şi se agită timp de 20 ore. Substanţa solidă se filtrează. Filtratul se concentrează in vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 426.97 [M+H]+.

Etapa 9: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (160 mg, 0.375 mmol) in MeOH uscat (8 mL) se adaugă K2CO3 (129 mg, 0.937 mmol) apoi în picături la 0°C cu agitare într-o atmosferă de azot se adaugă dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (144 mg, 0.749 mmol). Amestecul format se încălzeşte lent până la 25oC şi se agită timp de 16 ore. Amestecul format se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel utilizând 30%-50% acetat de etil in eter de petrol, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 422.98 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.10 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.90 (br, 2H), 6.52 (t, J = 6.6Hz, 1H), 5.42-5.46 (m, 1H), 4.64 (t, J = 5.7Hz, 1H), 3.59-3.67 (m, 1H), 3.50-3.54 (m, 1H), 3.48 (s, 1H), 2.59-2.64 (m, 1H), 2.27-2.31 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.12 (s, 6H).

Etapa 10: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (6)

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (64 mg, 0.151 mmol) in THF (3 mL) în picături cu agitare într-o atmosferă de azot se adaugă soluţie de TBAF (1.0 M, 151 µl, 0.151 mmol). Soluţia formată se agită timp de 1 oră la 25 °C. Amestecul format se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană de silica gel şi se eluează cu DCM/MeOH (20/1 până la 5/1), se obţine produsul brut. Produsul brut se purifică ulterior prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloană, SunFire Prep C18 OBD (Optimum Bed Density) Column, 5 µm, 19*150 mm; faza mobilă, apă (cu 10 mmol bicarbonat de amoniu) şi acetonitril (10% până la 45% acetonitril timp de 5 min, până la 95% timp 1.5 min, aproape până la 5% timp de 1 min); Detector, UV 254 şi 220 nm. Fracţiile cu conţinut de produs se colectează şi se liofilizează, se obţine compusul 6 sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 308.72 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.10 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 6.88 (br, 2H), 6.52 (t, J = 6.4Hz, 1H), 5.39-5.52 (m, 2H), 4.48 (t, J = 6.6Hz, 1H), 3.59 (dd, J = 12.0 Hz, J = 28.8Hz, 2H), 3.48 (s, 1H), 2.47-2.54 (m, 1H), 2.31-2.37 (m, 1H).

COMPUSUL INTERMEDIAR B

Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului (COMPUSUL INTERMEDIAR B)

Etapa 1: Sinteza 4-clor-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidinei

La un amestec de 4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (5 g, 32.6 mmol) in DMF (60 mL) într-o atmosferă de argon la 0ºC se adaugă NIS (N-iodsuccinimidă) (7.33 g, 32.6 mmol). Amestecul format se agită în întuneric timp de 15 ore la 25ºC într-o atmosferă de argon. Amestecul de reacţie se toarnă în apă rece şi amestecul se filtrează, substanţa solidă se spală cu apă rece (3 x 50 mL) şi se usucă la 25ºC cu formarea 4-clor-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidinei sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 279.9 [M+H]+ 1. 1H-RNM: (400MHz, CD3SOCD3, ppm): 12.96 (brs, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.95 (d, J = 1.8 Hz, 1H)

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-clor-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatului

La un amestec de hidrură de sodiu (0.845 g, 21.13 mmol) şi 4-clor-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (5.37 g, 19.21 mmol) in acetonitril (150 mL) într-o atmosferă de argon la 20°C se adaugă (2R,3S,5R)-5-clor-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidro-furan-3-il 4-metilbenzoat (7.47g, 19.21 mmol). Amestecul format se agită timp de 2 ore la 50°C într-o atmosferă de argon şi apoi solventul se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografia pe coloană pe silica gel 100-200, eluare cu EA/PE (1/5), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 613.9 [M+H]+ 1. 1H-RNM: (400MHz, CDCl3, ppm): 8.63 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.32-7.25 (m, 4H), 6.82 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 6.4 Hz, 4 Hz,1H), 4.80-4.76 (m, 1H), 4.71-4.62 (m, 2H), 2.46 (s, 6H), 1.66-1.31 (m, 2H)

Etapa 3: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

(2R,3S,5R)-5-(4-clor-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoatul (12 g, 18.99 mmol) se adaugă la un amestec agitat, răcit până la -50°C de amoniu (120 mL, 240 mmol) in 2-propanol (30 mL) şi amestecul se agită la 90°C timp de 48 ore. Solventul se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se purifică cromatografia pe coloană pe silica gel 100-200, eluare cu DCM/MeOH (10/1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 377.0 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, CD3SOCD3, ppm): 8.10 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 6.79 (brs, 2H), 6.79-6.51 (dd, J = 8.1 Hz, 3 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.33 (brs, 1H), 3.81 (brs, 1H), 3.60-3.46 (m, 2H), 2.51-2.44 (m, 1H), 2.19-2.10 (m, 1H)

Etapa 4: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-aminei

La un amestec de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (6 g, 15.95 mmol) şi imidazol (4.34 g, 63.8 mmol) in DMF (30 mL) într-o atmosferă de argon la 0°C se adaugă TBS-Cl (44.7 mL, 44.7 mmol). Amestecul format se agită timp de 2 ore la 23°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se stinge cu apă (150 mL) şi se extrage cu acetat de etil (3 x 200 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (5 x 200 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, Reziduul se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu EA/PE (3:7), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 605.3 [M+H]+ 1. 1H-RNM: (400MHz, CD3SOCD3, ppm): 8.10 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.67 (brs.2H), 6.49 (t, J = 6.8 Hz,1H), 4.50 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 3.88-3.81 (m, 1H), 3.74 (dd, J = 10.8 Hz, 5.6 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 10.8 Hz, 4 Hz, 1H), 2.50-2.49 (m, 1H), 2.25-2.14 (m, 1H), 0.89 (s, 18H), 0.10-0.07 (m, 12H).

Etapa 5: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

La un amestec de 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-amină (6.6 g, 10.92 mmol) in THF (66 mL) la 0°C se adaugă o soluţie de TFA (16 mL, 208 mmol) in apă (16 mL). Amestecul format se agită timp de 4 ore la 0°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Solventul se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se dizolvă in DCM/MeOH (10/1, 150 mL) şi valoarea pH soluţiei se ajustează până la 7 cu hidrocarbonat de sodiu (5.0 g), se filtrează şi solventul se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel 100-200, eluare cu 40 - 50% EA in PE, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 491.1 [M+H]+ 1. 1H-RNM: (400MHz, CD3SOCD3, ppm): 8.14 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.88 (brs, 2H), 6.47 (dd, J = 8.4 Hz, 6 Hz, 1H), 4.51 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 3.80-3.79 (m, 1H), 3.54-3.50 (m, 2H), 2.57-2.53 (m, 1H), 2.18-2.13 (m, 1H), 0.89 (s, 9H), 0.10 (s, 6H).

Etapa 6: Sinteza (2S,3S,5R)-3-[(terţ-butildimetilsilil)oxi]-5-{4-[(dimetil-Si{4}-sulfaniliden)amino]-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il}oxolane-2-carbaldehidei

La un amestec de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (4.682 g, 9.55 mmol) şi DCC (N,N-diciclohexilcarbodiimidă) (6.1 g, 29.6 mmol) in DMSO (40 mL) într-o atmosferă de argon la 0°C se adaugă piridină (0.850 mL, 10.51 mmol) şi TFA (0.515 mL, 6.68 mmol). Amestecul format se agită timp de 14 ore la 20°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se stinge cu apă (150 mL) şi se extrage cu acetat de etil (3 x 100 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (120 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, se obţine produsul brut din titlu sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 567.0 [M+H2O+H]+

Etapa 7: Sinteza amestecului de [(3S,5R)-3-[(terţ-butildimetilsilil)oxi]-5-{4-[(dimetil-Si{4}-sulfaniliden)amino]-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il}-2-(hidroximetil)oxolan-2-il]metanol

La un amestec de (2S,3S,5R)-3-[(terţ-butildimetilsilil)oxi]-5-{4-[(dimetil-Si{4}-sulfaniliden)amino]-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il}oxolane-2-carbaldehidă (80 mg, 0.146 mmol) şi formaldehidă (0.5 mL, 0.146 mmol) in 1,4-dioxan (4 mL) la 0°C se adaugă 2 M hidroxid de sodiu (0.5 mL, 1.000 mmol). Amestecul format se agită timp de 4 ore la 20°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se stinge cu acetic acid (0.2 mL) şi se extrage cu acetat de etil (3 x 40 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie saturată de NaHCO3 (30 mL), apoi cu soluţie salină saturată (40 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, reziduul se dizolvă in etanol (4 mL). Î acest amestec într-o atmosferă de argon se adaugă tetrahidroborat de sodiu (20 mg, 0.529 mmol). Acest amestec se agită timp de 36 ore la 20°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se stinge cu acid acetic (0.05 mL) şi se extrage cu CHCl3 (3 x 40 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie saturată de NaHCO3 (30 mL), apoi cu soluţie salină saturată (40 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, se purifică prin CSS, eluare cu DCM/MeOH (12:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 581.1 [M + H]+ 1. 1H-RNM: (300MHz, CD3SOCD3, ppm): 8.09 (s, 0.6H), 7.97 (s, 0.4H), 7.69 (s, 0.6H), 7.46 (s, 0.4H), 6.66 (brs, 0.8H), 6.53-6.42 (m, 1H), 5.10 (t, J = 5.4 Hz, 0.4H), 5.02 (t, J = 5.4 Hz, 0.6H), 4.58 (brs, 1H), 4.42-4.37 (m, 1H), 3.58-3.49 (m, 4H), 2.78 (d, J = 2.7 Hz, 3H), 2.68-2.61 (m, 1H), 2.23-2.16 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.10 (s, 6H).

Etapa 8: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie de [(3S,5R)-3-[(terţ-butildimetilsilil)oxi]-5-{4-[(dimetil-Si{4}-sulfaniliden)amino]-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il}-2-(hidroximetil)oxolan-2-il]metanol (230 mg, 0.396 mmol) in DCM (2 mL) la 0°C se adaugă TFA (2 mL, 26.0 mmol). Amestecul format se agită timp de 3 ore la 20°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă, Reziduul se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu DCM/MeOH (95:5), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 521.2 [M + H]+ 1. 1H-RNM: (400MHz, CD3SOCD3, ppm): 8.12 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.10 (brs, 2H), 6.43 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.50 (dd, J = 6 Hz, 3.2 Hz, 1H), 3.50-3.37 (m, 4H), 2.59-2.52 (m, 1H), 2.17-2.11 (m, 1H), 0.80 (s, 9H), 0.00 (s, 6H).

Etapa 9: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie de ((3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (960 mg, 1.845 mmol) in acetonitril (25 mL) într-o atmosferă de argon la 18°C se adaugă IBX (1550 mg, 5.53 mmol). Amestecul format se agită timp de 18 ore la 18°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, se formează produsul brut sub formă de substanţă solidă. Acest produs brut se utilizează direct în etapa următoare fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 519.1 [M + H]+

Etapa 10: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului (COMPUSUL INTERMEDIAR B)

La un amestec de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (190 mg, 0.366 mmol) şi K2CO3 (127 mg, 0.916 mmol) in MeOH (10 mL) într-o atmosferă de argon la 0°C se adaugă dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (141 mg, 0.733 mmol). Amestecul format se agită timp de 16 ore la 18°C într-o atmosferă de argon. Culoarea amestecului se schimbă de la galben până la albastru. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS/CSS. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă, Reziduul se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu DCM/MeOH (97:3), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 515.1 [M + H]+ 1. 1H-RNM: (400MHz, CDCl3, ppm): 8.22 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.25 (dd, J = 8.8 Hz, 5.6 Hz, 1H), 5.84 (brs, 2H), 4.71 (dd, J = 5.6 Hz, 2 Hz,1H), 4.01 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 16 Hz, 1H), 3.17-3.10 (m, 1H), 2.59 (s, 1H), 2.27-2.21 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.11 (s, 6H)

EXEMPLUL 7: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (7)

La o soluţie de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (compusul intermediar B, 20 mg, 0.039 mmol) in tetrahidrofuran (3 mL) într-o atmosferă de argon la 18°C se adaugă TBAF (0.05 mL, 0.050 mmol). Amestecul format se agită timp de 0.5 ore la 18°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă, Reziduul se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu CH2Cl2/MeOH (7:1), se obţine produsul brut, care se purifică prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare:Instrument, Water-1 (26); Coloana: Xbridge RP18, 5 µm, 19 x 150 mm; faza mobilă: apă (0.05% bicarbonat de amoniu + dioxid de carbon) şi acetonitril (10% până la 40% acetonitril timp de 8 min, reţinere 100% timp de 2 min, aproape până la 10% timp de 2 min); Detector, UV 220 şi 254 nm. Fracţiile colectate se combină şi se concentrează sub presiune redusă, se formează compusul 7 sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 401.0[M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, CD3OD): δ8.10 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.68 (s, 2H), 6.49 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 5.52 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.48 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.64-3.60 (m, 1H), 3.57-3.52 (m, 1H), 3.48 (s, 1H), 2.53-2.47 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 1H).

EXEMPLUL 8: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(2,4-diamino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (8)

Etapa 1: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(2-amino-4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatului

La un amestec de 4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2-amină (2.0 g, 11.86 mmol) şi NaH (0.524 g, 13.09 mmol) in acetonitril (60 mL) într-o atmosferă de argon se agită timp de 0.5 ore la temperatura camerei într-o atmosferă de argon. La amestecul apoi se adaugă compusul intermediar A (4.628 g, 11.90 mmol), se agită timp de 10 minute la temperatura camerei apoi la 50°C timp de 2 ore. Procesul se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă, reziduul se purifică pe o coloană pe silica gel, eluare cu CH2Cl2/MeOH (92:8), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 521.1[M+H] +. 1H-RNM: (300MHz, DMSO-d6): δ 7.93(dd, J = 8.1 Hz, 4H), 7.68-7.21(m, 5H), 6.78(s, 2H), 6.57(q, J = 5.85 Hz, 1H), 6.39(d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.69(d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.63-4.43(m, 3H), 3.04-2.94(m, 1H), 2.66(dd, J = 4.95 Hz, 1H), 2.41(d, J = 7.8 Hz, 6H), 1.99(s, 1H).

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(2,4-diamino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

Un amestec de (2R,3S,5R)-5-(2-amino-4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoat (1.0 g, 0.960 mmol) şi amoniu (50 mL, 0.960 mmol) in 2-propanol (5 mL) se agită timp de 20 ore la 100°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Amestecul de reacţie se lasă să se răcească până la temperatura mediului ambiant şi se concentrează sub presiune redusă, reziduul se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu CH2Cl2/MeOH (82:18), se obţine compusul din titlu. CL-SM: (ES, m/z): 266.0[M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, DMSO-d6): δ 6.93(d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.76(s, 2H), 6.40(d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.32(q, J = 5.85 Hz, 1H), 5.70(s, 2H), 5.20(d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.29(d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.78-3.74(m, 1H), 3.55-3.41(m, 2H), 3.16(s, 1H), 2.49-2.34(m, 1H), 2.08-2.01(m, 1H).

Etapa 3: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diaminei

La un amestec de (2R,3S,5R)-5-(2,4-diamino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1.39 g, 5.24 mmol) şi TBDMS-Cl (2.369 g, 15.72 mmol) in DMF (6 mL) într-o atmosferă de argon se adaugă imidazol (1.784 g, 26.2 mmol). Amestecul format se agită timp de 16 ore la 20°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS/CSS. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă, Reziduul se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu CH2Cl2/MeOH (92:8), se obţine compusul din titlu sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 494.4 [M+H]+, 1H-RNM: (300MHz, CDCl3): δ 7.58 (s, 2H), 7.04 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 6.52 (s, 2H), 6.32 (dd, J = 6.0 Hz, 1H), 4.45 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.68 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.17 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 2.49-2.42 (m, 1H), 2.17-2.10 (m, 1H), 0.89 (s, 18H), 0.10-0.09 (m, 12H).

Etapa 4: Sinteza N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidei

La un amestec de 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diamină (138 mg, 0.279 mmol) şi DMAP (5 mg, 0.041 mmol) in piridină (5 mL) într-o atmosferă de argon se adaugă clorură de benzoil (158 mg, 1.124 mmol). Amestecul format se agită timp de 4 ore la 0°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS/CSS. Amestecul de reacţie se stinge cu apă (50 mL) şi se extrage cu acetat de etil (3 x 30 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (40 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, Reziduul se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu PE/EA (2:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 702.3[M+H]+, 1H-RNM: (300MHz, CDCl3): δ 11.11 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.73 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.66-7.43 (m, 8H), 6.62-6.54 (m, 2H), 4.56 (s, 1H), 3.84-3.64 (m, 4H), 2.81-2.72 (m, 1H), 2.26-2.22 (m, 1H), 0.90-0.83 (m, 18H), 0.11-0.01 (m, 12H).

Etapa 5: Sinteza N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidei

La un amestec de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidă (110 mg, 0.157 mmol) in THF (4 mL) la 0°C se adaugă o soluţie de TFA (0.5 mL, 6.49 mmol) in apă (0.5 mL). Amestecul format se agită timp de 4 ore la 0°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă, reziduul se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu CH2Cl2/MeOH (95:5), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 588.6[M+H]+, 1H-RNM: (300MHz, CDCl3): δ 11.11 (s, 1H),10.81 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.97 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.65-7.46 (m, 8H), 6.62-6.56( m,2H), 4.96 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.58 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 3.82-3.77 (m, 2H), 3.56-3.51 (m, 2H), 2.72-2.67 (m, 1H), 2.27-2.21 (m, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).

Etapa 6: Sinteza N,N'-(7-((2R,4S,5S)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-formiltetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidei

La un amestec de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidă (35 mg, 0.060 mmol) in acetonitril (5 mL) într-o atmosferă de argon se adaugă IBX (42 mg, 0.150 mmol). Amestecul format se agită timp de 50 minute la 50°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se lasă să se răcească până la temperatura mediului ambiant şi se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, produsul brut se utilizează direct în etapa următoare fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 618.3[M+CH3OH] +

Etapa 7: Sinteza N,N'-(7-((2R,4S)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5,5-bis(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidei

La o soluţie de N,N'-(7-((2R,4S,5S)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-formiltetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidă (35 mg, 0.060 mmol) in 1,4-dioxan (5 mL) se adaugă formaldehidă (1 mL, 0.060 mmol), NaOH (1mL, 2.000 mmol), amestecul se agită timp de 4 ore la 20°C, se răceşte până la 0°C, se stinge cu AcOH până la pH 6, se adaugă apă (40 mL) şi se extrage cu acetat de etil (3 x 40 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (30 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, reziduul se dizolvă in etanol (5.00 mL), într-o atmosferă de argon se adaugă NaBH4 (5.65 mg, 0.149 mmol). Amestecul format se agită timp de 16 ore la 20°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se lasă să se răcească până la temperatura mediului ambiant, se stinge cu AcOH până la pH 6, se adaugă apă (40 mL) şi se extrage cu acetat de etil (3 x 40 mL). Straturile organice se concentrează şi se purifică pe coloană cu silica gel, eluare cu CH2Cl2/MeOH (20:1), se formează produsul din titlu sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 618.2 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, CDCl3): δ 11.11 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.73 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.66-7.43 (m, 8H), 6.62-6.54 (m, 2H), 4.56 (s, 1H), 3.84-3.64 (m, 4H), 2.81-2.72 (m, 1H), 2.26-2.22 (m, 1H), 0.90-0.83 (m, 18H), 0.11- 0.01 (m, 12H).

Etapa 8: Sinteza N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-formil-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidei

La o soluţie de N,N'-(7-((2R,4S)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5,5-bis(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidă (30 mg, 0.049 mmol) in acetonitril (10 mL) într-o atmosferă de argon la 20°C se adaugă IBX (40 mg, 0.143 mmol). Amestecul format se agită timp de 3 ore la 25°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se lasă să se răcească până la temperatura mediului ambiant şi se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, se obţine produsul brut sub formă de substanţă solidă, care se utilizează direct în etapa următoare fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 616.2 [M+H]+

Etapa 9: Sinteza N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-etinil-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidei

La un amestec de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-formil-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidă (70 mg, 0.114 mmol) şi K2CO3 (39.3 mg, 0.284 mmol) in MeOH (5 mL) într-o atmosferă de argon la 0°C se adaugă o soluţie de dimetil (2-diazo-3-oxobutanoil)fosfonat (50.0 mg, 0.227 mmol) in MeOH (0.25 mL). Amestecul format se agită timp de 16 ore la 25°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă, Reziduul se purifică prin CSS, eluare cu CH2Cl2/MeOH (20:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 612.4[M+H] +

Etapa 10: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(2,4-diamino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (8)

La o soluţie de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-etinil-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamidă (40 mg, 0.065 mmol) in MeOH (4 mL) într-o atmosferă de argon la 20°C se adaugă o soluţie de NaOCH3 in MeOH (0.065 mL, 0.065M). Amestecul format se agită timp de 48 ore la 40°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se lasă să se răcească până la temperatura mediului ambiant şi se concentrează sub presiune redusă, Reziduul se purifică prin CSS, eluare cu CH2Cl2/MeOH (20:1), se formează compusul intermediar brut (27 mg) sub formă de substanţă solidă, care se diluează in THF (3 mL) într-o atmosferă de argon. La 20°C se adaugă o soluţie de TBAF (1M, 0.040 mL, 0.04 mmol). Amestecul format se agită timp de 0.5 ore la 20°C într-o atmosferă de argon. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS/CSS. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă, reziduul se purifică prin CSS, eluare cu CH2Cl2/MeOH (5:1), produsul brut format (15mg) apoi se purifică prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare: Instrument, Waters-2767-Prep; Coloana: Xbridge RP18, 5 µm, 19 x 150 mm; faza mobilă: apă (0.05% bicarbonat de amoniu (dioxid de carbon) şi acetonitril (5% până la 40% acetonitril timp de 8 min); Detector, UV 220 şi 254 nm. Fracţiile colectate se combină şi se concentrează sub presiune redusă, se obţine compusul 8 sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 618.2 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, CDCl3): δ 6.85 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.55 (s, 2H), 6.36 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 5.56 (s, 2H), 5.48-5.43 (m, 2H), 4.42 (q, J = 5.6 Hz, 1H), 3.61-3.49 (m, 2H), 3.44 (s, 1H), 2.47-2.40 (m, 1H), 2.26-2.21 (m, 1H).

EXEMPLUL 9: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (9)

Etapa 1: Sinteza 4-azido-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2-aminei

La o soluţie agitată de 4-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2-amină (3.5 g, 20.76 mmol) in DMSO anhidru (35 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă o soluţie de azidă de sodiu (2.025 g, 31.1 mmol) in apă (3.50 mL). Amestecul se încălzeşte până la 100°C şi se agită peste noapte. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi LCMS. Amestecul format se răceşte până la temperatura mediului ambiant. Se adaugă 250 g de gheaţă mărunţită şi amestecul se agită la 0°C timp de 30 minute. Se formează un precipitat. Precipitatul se colectează prin filtrare, se spală cu apă rece şi se usucă deasupra P2O5 în vid peste noapte, rezultă 4-azido-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2-amina sub formă de substanţă solidă, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 11.91 (brs, 1H), 7.96 (brs, 2H), 7.13 (t, J = 3.0 Hz, 1H), 6.72 (dd, J = 2.0 Hz, J = 3.2 Hz, 1H). CL-SM: (ES, m/z): 176.00 [M + H]+.

Etapa 2: Sinteza 4-azido-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidinei

Fluorura de hidrogen-piridină (70% HF in 30% Py) (12 mL, 133 mmol) se încarcă într-o butelie de teflon într-o atmosferă de azot. La aceasta se adaugă 4-azido-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-2-amină ( 3.1 g, 17.70 mmol). Amestecul se agită la temperatura mediului ambiant până soluţia devine transparentă, apoi se răceşte până la -60°C, apoi în picături timp de 10 minute se adaugă of terţ-butil nitrit (2.5 mL, 21.02 mmol). Amestecul format se agită între -60°C până la -40°C timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi LCMS. Amestecul se toană într-o soluţie apoasă rece de NaHCO3 (150 mL, saturată). Produsul brut se extrage cu acetat de etil (100 mL × 3), se spală cu soluţie salină saturată (100 mL × 2), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează în vid cu formarea unui reziduu. Reziduul apoi se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (1/4), se obţine 4-azido-2-fluor-7H-pirol[2,3-d] pirimidinei sub formă de substanţă solidă.

1H-RNM: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 12.43 (brs, 1H), 7.48 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 3.6 Hz, 1H). F-RNM: (282 MHz, d6-DMSO, ppm): δ -54.57 (s, 1F). CL-SM: (ES, m/z): 179.20 [M + H]+.

Etapa 3: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-azido-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il-4-metilbenzoatului

La o suspensie agitată de hidrură de sodiu (60% dispersie în ulei mineral) (0.272 g, 6.79 mmol) in DMF anhidru (20 mL) într-o atmosferă de azot într-un balon cu două gâturi cu fund rotund de 50 ml in porţii la 0°C se adaugă 4-azido-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidină (1.1 g, 6.18 mmol) şi amestecul se agită la această temperatură timp de 5 minute. Se adaugă cu agitare compusul intermediar A (2.4 g, 6.17 mmol). Amestecul de reacţie se încălzeşte până la 25°C şi se agită timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi LCMS. Amestecul se diluează cu acetat de etil (100 mL), se spală cu apă (70 mL). Stratul apos se extrage repetat cu acetat de etil (60 mL × 2). Stratul organic combinat se spală cu soluţie salină saturată (100 mL × 3), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează în vid. Produsul brut se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (1/10), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (400 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.32-7.23 (m, 4H), 6.74 (dd, J = 6.4 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.75-5.74 (m, 1H), 4.75-4.54 (m, 3H), 2.85-2.74 (m, 2H), 2.47-2.43 (m, 6H). F-RNM: (376 MHz, CDCl3, ppm): δ -52.26 (s, 1F, β izomer), -52.48 (s, 1F, α izomer). CL-SM: (ES, m/z): 531.42 [M + H]+.

Etapa 4: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoatului

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-azido-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoat (2.0 g, 3.77 mmol) intr-un amestec de MeOH (10 mL) şi DCM (15 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă propan-1,3-ditiol (0.816 g, 7.54 mmol), apoi în picături cu agitare timp de 10 minute la 25°C se adaugă trietilamină (0.763 g, 7.54 mmol). Amestecul se agită la 25°C timp de 30 minute. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Amestecul format se concentrează în vid. Reziduul apoi se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (42% EA in PE), se obţine compusul din titlu sub formă de pulbere.

1H-RNM: (400 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.33-7.26 (m, 4H), 7.12 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.72 (dd, J = 6.2 Hz, J = 8.2 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.75-5.72 (m, 1H), 5.36 (brs, 2H), 4.73-4.57 (m, 3H), 2.79-2.74 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.44 (s, 3H). F-RNM: (376 MHz, CDCl3, ppm): δ -52.97 (s, 1F, izomerul β), -53.10 (s, 1F, izomerul α). CL-SM: (ES, m/z): 505.63 [M + H]+.

Etapa 5: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

Într-o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoat (1.75 g, 3.47 mmol) in MeOH anhidru (10 mL) într-o atmosferă de azot cu agitare la 0°C timp de 5 minute se injectează soluţie de metoxid de sodiu în MeOH (1.0 M, 3.47 mL, 3.47 mmol). Amestecul format se lasă să se agite la 0°C până la 10°C timp de 4 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi LCMS. Amestecul format se neutralizează prin adiţia AcOH, apoi se concentrează sub presiune redusă. Reziduul apoi se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând diclormetan/metanol (6% MeOH in DCM), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.55 (brs, 2H), 7.31 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.34 (dd, J = 6.4 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 5.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.92 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.82-3.79 (m, 1H), 3.58-3.46 (m, 2H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.19-2.13 (m, 1H). F-RNM: (376 MHz, d6-DMSO, ppm): δ -53.77 (s, 1F, β izomer), -53.98 (s, 1F, α izomer). CL-SM: (ES, m/z): 269.20 [M + H]+.

Etapa 6: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-aminei

(2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidro-furan-3-olul (850 mg, 3.17 mmol) şi imidazolul (863 mg, 12.68 mmol) se încarcă într-un balon cu fund rotund cu un volum de 50 mL într-o atmosferă de azot. În balon se injectează DMF anhidru (10 mL), apoi se adaugă în porţii TBS-Cl (1433 mg, 9.51 mmol). Amestecul se agită la 25°C timp de 2 ore. După finalizarea reacţiei amestecul se diluează cu acetat de etil (60 mL), se spală cu apă (30 mL × 2), soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 30 mL × 2) şi soluţie salină saturată (30 mL × 2), respectiv. Stratul organic se colectează şi se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează sub presiune redusă, rezultă produsul brut. Reziduul apoi se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (20% EA in PE), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (300MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.55 (brs, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.31 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.55-4.50 (m, 1H), 3.80-3.61 (m, 4H), 2.64-2.55 (m, 1H), 2.23-2.17 (m, 1H), 0.90-0.87 (m, 18H), 0.11-0.06 (m, 12H). F-RNM: (282 MHz, d6-DMSO, ppm): δ -53.64 (s, 1F, β izomer), -53.78 (s, 1F, α izomer). CL-SM: (ES, m/z): 497.58 [M + H]+.

Etapa 7: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-4-amină (1.4 g, 2.82 mmol) in THF (24 mL) se adaugă în picături cu agitare la 0°C timp de 10 minute soluţie apoasă de TFA (TFA/H2O = 1/1, v/v, 12 mL). Amestecul format se lasă să se agite la 0°C. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. După agitare timp de 5 ore nucleozidul iniţial di-TBS protejat se consumă complet, apoi amestecul de reacţie se coevaporă cu toluen (50 mL × 3). Reziduul se dizolvă repetat într-un amestec de MeOH/DCM (15% MeOH in DCM, 50 mL). La 0°C se adaugă NaHCO3 (2 g) solid, apoi se adaugă apă (1 mL). Amestecul format se agită timp de 30 minute. După ajustarea pH până la 7, substanţele solide se filtrează, filtratul se colectează şi se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel utilizând acetat de etil/eter de petrol (40% EA in PE), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.57 (brs, 2H), 7.32 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.32 (dd, J = 6.0 Hz, J = 8.0 Hz, 1H), 4.99-4.96 (m, 1H), 4.52 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 3.79 (q, J = 2.4 Hz, 1H), 3.54-3.49 (m, 2H), 2.57-2.53 (m, 1H), 2.19-2.13 (m, 1H), 0.91-0.88 (m, 9H), 0.13-0.11 (m, 6H). F-RNM: (376 MHz, d6-DMSO, ppm): δ -53.71 (s, 1F, β izomer), -53.89 (s, 1F, α izomer). CL-SM: (ES, m/z): 383.36 [M + H]+.

Etapa 8: Sinteza (2S,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

TFA (0.051 mL, 0.659 mmol) într-o atmosferă de azot la temperatura camerei timp de 2 min se injectează într-o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (360 mg, 0.941 mmol), DCC (N,N-diciclohexilcarbodiimidă) (602 mg, 2.92 mmol) şi piridină (0.084 mL, 1.035 mmol) in DMSO anhidru (2 mL) şi amestecul se agită peste noapte. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi LCMS. Amestecul se filtrează pentru eliminarea diciclohexilureei şi filtratul se distribuie între acetat de etil (30 mL) şi H2O (30 mL). Stratul organic se colectează şi se spală cu soluţie salină saturată (20 mL × 2), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se evaporă sub presiune redusă, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 381.20 [M + H]+, 413.20 [M + MeOH + H]+.

Etapa 9: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (400 mg, 1.051 mmol) in 1,4-dioxan (8 mL) într-un balon cu fund rotund cu un volum de 50 mL se adaugă soluţie de formaldehidă (1.2 mL, 16.01 mmol), apoi în picături timp de 2 minute se adaugă o soluţie de hidroxid de sodiu (1.2 mL, 2.400 mmol). Amestecul format se agită la 25°C timp de 7 ore. După consumul complet al nucleozidului iniţial, amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia of AcOH. Amestecul format se diluează cu AcOEt (100 mL) şi se spală succesiv cu apă (2 × 40 mL), soluţie apoasă saturată de NaHCO3 (2 × 40 mL) şi soluţie salină saturată (50 mL). Stratul organic se usucă timp de Na2SO4 şi se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se dizolvă repetat in EtOH (3 mL) şi in porţii la 0°C se adaugă borhidrură de sodiu (199 mg, 5.26 mmol). După agitare timp de 5 ore la 25°C, amestecul de reacţie se neutralizează prin adiţia AcOH. Amestecul se concentrează sub presiune redusă, reziduul se distribuie între CHCl3 (100 mL) şi apă (50 mL). Stratul organic se spală succesiv cu apă şi soluţie salină saturată, se usucă deasupra Na2SO4 şi se evaporă sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând diclormetan/metanol (30/1), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.55 (brs, 2H), 7.34 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.35 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.90 (t, J = 3.6 Hz, 1H), 4.60 (q, J = 2.8 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 3.6 Hz, 1H), 3.60-3.43 (m, 4H), 2.69-2.62 (m, 1H), 2.23-2.17 (m, 1H), 0.92 (s, 9H), 0.09 (s, 6H). F-RNM: (376 MHz, d6-DMSO, ppm): δ -53.80 (s, 1F, izomerul β). CL-SM: (ES, m/z): 413.32 [M + H]+, 435.34 [M + Na]+.

Etapa 10: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (180 mg, 0.436 mmol) in acetonitril anhidru (15 mL) şi DMSO uscat (1.5 mL) într-un balon cu fund rotund cu un volum de 50 ml într-o atmosferă de azot, se adaugă IBX (367 mg, 1.309 mmol). Amestecul format se agită la 20°C timp de 8 ore. Amestecul de reacţie se filtrează, se spală cu diclormetan. Filtratul se colectează şi se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se dizolvă repetat in acetat de etil (40 mL), se spală succesiv cu apă (3 × 15 mL) şi soluţie salină saturată (2 × 20 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă, se obţine compusul din titlu, care se utilizează în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

1H-RNM: (400 MHz, CDCl3, ppm): δ 9.65 (s, 1H), 7.60 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 5.6 Hz, J = 9.6 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.56-5.43 (m, 3H), 4.96 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.08 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.27-3.19 (m, 1H), 2.25 (dd, J = 5.4 Hz, J = 13.0 Hz, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.11 (d, J = 5.2 Hz, 6H).

F-RNM: (376 MHz, CDCl3, ppm): δ -53.14 (s, 1F). CL-SM: (ES, m/z): 411.21 [M + H]+ .

Etapa 11: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (190 mg, 0.463 mmol) in MeOH anhidru (8 mL) într-o atmosferă de azot, se adaugă carbonat de potasiu (160 mg, 1.157 mmol). Amestecul se răceşte până la 0°C, apoi în picături timp de 1 minut se adaugă dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (178 mg, 0.926 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 25°C şi se agită peste noapte. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă şi apoi se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând metanol/diclormetan (4.8% MeOH in DCM), se obţine compusul din titlu.

1H-RNM: (400 MHz, CDCl3, ppm): δ 6.99 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.35 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.28 (dd, J = 6.0 Hz, J = 8.8 Hz, 1H), 5.45-5.33 (m, 3H), 4.76 (q, J = 2.8 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 2.0 Hz, J = 12.4 Hz, 1H), 8.16-3.79 (m, 1H), 3.12-3.06 (m, 1H), 2.70 (s, 1H), 2.33-2.27 (m, 1H), 0.94 (s, 9H), 0.16 (d, J = 8.0 Hz, 6H). F-RNM: (376 MHz, CDCl3, ppm): δ -53.26 (s, 1F). CL-SM: (ES, m/z): 407.30 [M + H]+ .

Etapa 12: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (9)

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (15 mg, 0.037 mmol) in THF anhidru (1 mL) într-o atmosferă de azot în picături cu agitare timp de 1 minut la temperatura mediului ambiant se adaugă o soluţie de TBAF în THF (0.037 mL, 0.037 mmol). Conţinutul se agită la temperatura mediului ambiant timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. După consumul complet al nucleozidului iniţial, amestecul se concentrează în vid, reziduul apoi se purifică prin CSS preparativă (MeOH/DCM = 1/15), rezultă produsul brut (10 mg). Produsul brut ulterior se purifică prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare:(1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, X-bridge C18 Column, 19*150 mm, 5 µm; faza mobilă, apă cu 10 mmol bicarbonat de amoniu şi acetonitril (5% până la 30% acetonitril timp de 5 min, aproape până la 95% timp de 2 min); Detector, UV 254 şi 220nm. Fracţiile cu conţinut de produs se colectează şi se liofilizează, se obţine compusul 9 sub formă de substanţă solidă.

1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.57 (brs, 2H), 7.28 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.35 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 5.51 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.27 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.48 (dd, J = 6.4 Hz, J = 12.0 Hz, 1H), 3.61 (dd, J = 5.6 Hz, J = 11.6 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 6.4 Hz, J = 12.0 Hz, 1H), 3.48 (s, 1H), 2.50-2.46 (m, 1H), 2.37-2.31 (m, 1H). F-RNM: (376MHz, d6-DMSO, ppm): δ -53.67 (s, 1F). CL-SM: (ES, m/z): 293.15 [M + H]+, 315.15 [M + Na]+ .

EXEMPLUL 10: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-hidroxi-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilului (10)

Etapa 1: Sinteza oximei 5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (Exemplul 1, compusul intermediar C, 50 mg, 0.127 mmol, 1.0 echiv) in piridină uscată (2.5 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă hidroclorură de hidroxilamină (26.6 mg, 0.382 mmol, 3.0 echiv). Amestecul format se agită la 30°C timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se concentrează în vid, reziduul apoi se dizolvă in acetat de etil (50 mL), se spală succesiv cu apă (2 x 30 mL) şi soluţie salină saturată (35 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin CSS preparativă (DCM/MeOH = 10/1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 408.20 [M+H]+.

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilului

La un amestec agitat de oximă de 5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (40 mg, 0.098 mmol) şi trietilamină (105 mg, 1.038 mmol) in DCM uscat (5 mL) în picături cu agitare la 20°C într-o atmosferă de azot se adaugă anhidridă 2,2,2-trifluoracetică (110 mg, 0.524 mmol). Amestecul format se agită la 20°C timp de 20 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS. Amestecul de reacţie se diluează cu DCM (30 mL), se spală succesiv cu soluţie apoasă saturată de NaHCO3 (25 mL) şi soluţie salină saturată (25 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin CSS preparativă (DCM/MeOH = 10/1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 390.11 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, CD3OD, ppm): δ 8.10 (s, 1H), 7.30 (d, J = 3.6Hz, 1H), 6.68 (t, J = 6.9Hz, 1H), 6.64 (d, J = 3.6Hz, 1H), 4.90 (t, J = 6.3Hz, 1H), 3.85(dd, J = 12.0Hz, J = 21.6Hz, 2H), 2.85-2.94 (m, 1H), 2.42-2.49 (m, 1H), 1.02 (s, 9H), 0.26 (d, J = 9.0Hz, 6H).

Etapa 3: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-hidroxi-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilului (10)

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitril (35 mg, 0.090 mmol) in THF uscat (5 mL) în picături cu agitare într-o atmosferă de azot la 15°C se adaugă o soluţie de TBAF în THF (1.0 M, 0.108 mL, 0.108 mmol). Amestecul format se agită la 15°C timp de 0.5 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin LCMS şi CSS. Amestecul de reacţie se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin CSS preparativă (DCM/MeOH = 10/1), se obţine un sirop. Produsul brut apoi se purifică prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare:(1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, SunFire C18 reverse Column, 19*150 mm, 5 µm; faza mobilă, apă cu 10 mmol bicarbonat de amoniu şi acetonitril (5% până la 20% acetonitril timp de 7.5 min, aproape până la 95% timp de 2 min, aproape până la 5% timp de 1 min); Detector, UV 254 şi 220nm. Fracţiile cu conţinut de produs se colectează şi se liofilizează, se obţine compusul din titlu 10 sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 276.10 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.07 (s, 1H), 7.34 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.33 (br, 2H), 7.08 (s, 1H), 6.64 (t, J = 7.0Hz, 1H), 6.61 (d, J = 3.6Hz, 1H), 6.27 (d, J = 4.8Hz, 1H), 5.82 (t, J = 6.0Hz, 1H), 4.61 (dd, J = 4.8Hz, J = 10.0Hz, 1H), 3.75 (dd, J = 5.6Hz, J = 12.0Hz, 1H), 3.62 (dd, J = 6.0Hz, J = 11.6Hz, 1H), 2.74-2.81 (m, 1H), 2.33-2.38 (m, 1H).

EXEMPLUL 11: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (11)

Etapa 1: Sinteza 4-(metiltio)pirol[2,1-f][1,2,4]triazinei

Sinteza 4-clorpirol[2,1-f][1,2,4]triazinei este descrisă în literatura de specialitate [WO2011/150356 A1, 2011].

Într-un balon cu fund rotund cu un volum de 500 mL se plasează o soluţie de 4-clorpirol[2,1-f][1,2,4]triazină (17 g, 110.70 mmol) şi (metilsulfanil)sodiu (15 g, 214.01 mmol) in tetrahidrofuran (300 mL). Soluţia formată se agită timp de 1 noapte la temperatura camerei. Substanţele solide se filtrează. Amestecul format se concentrează in vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel, utilizând acetat de etil/eter de petrol (1:10). Aceasta rezultă cu compusul din titlu.

CL-SM (ES, m/z): 166 [M+H]+

Etapa 2: Sinteza (3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)-2-(4-(metiltio)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-olului

La o soluţie de 4-(metiltio)pirol[2,1-f][1,2,4]triazină (1.650 g, 9.99 mmol) in THF (30 mL) la -78ºC într-o atmosferă de argon se adaugă diizopropilamidă de litiu (7.5 mL, 15.00 mmol) şi amestecul format se agită timp de 30 minute la -78ºC. După aceasta la -78ºC într-o atmosferă de argon se adaugă (3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)dihidrofuran-2(3H)-onă (4.18 g, 9.99 mmol) in THF (10 mL) şi agită 120 minute la -78 până la -50ºC. Reacţia se stinge prin adiţia clorurii de amoniu (apoase, 10 mL) şi apoi se extrage cu acetat de etil (300 mL). Stratul organic se spală cu (3 x 50 mL) soluţie salină saturată , se usucă deasupra sulfatului de sodiu şi se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe coloană cu silica gel, se eluează cu acetat de etil/eter de petrol (1:5), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 584.2 [M+H]+

Etapa 3: Sinteza 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)pirol[2,1-f][1,2,4]triazinei

La o soluţie de 3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)-2-(4-(metiltio)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-ol (3.00 g, 5.14 mmol) in DCM (30 mL) la 0ºC într-o atmosferă de azot se adaugă trietilsilan (2.390 g, 20.56 mmol) şi trifluorboran (0.697 g, 10.28 mmol). Soluţia formată se agită timp de 30 minute la 0ºC şi apoi se stinge prin adiţia bicarbonatului de sodiu (apos, 20 mL), se extrage cu DCM (200 mL). Stratul organic se spală cu 3 x 50 mL soluţie salină saturată , se usucă deasupra sulfatului de sodiu şi se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel, eluare cu acetat de etil/eter de petrol (1:10), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 568.4 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, CDCl3, ppm): δ 8.21 (s, 1H), 7.23-7.36 (m, 15H), 6.81 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.37-4.62 (m, 7H), 4.22-4.26 (m, 1H), 4.10-4.13 (m, 1H), 3.66-3.67 (m, 1H), 3.62-3.63 (m, 1H), 2.75 (s, 3H).

Etapa 4: Sinteza 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-4-aminei

O soluţie de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)pirol[2,1-f][1,2,4]triazină (4.6 g, 8.10 mmol) in 2-propanol (5 mL) la -40 0ºC timp de 60 minute într-un tub închis etanş se purjează cu amoniu (1350 mg, 79 mmol). După agitarea amestecului format timp de 16 ore la 80ºC, acesta se evaporă, se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 537.3 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, DMSO, ppm): δ 7.80(s, 1H), 7.69(s, 2H), 7.24-7.36(m, 15H), 6.88(d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.80(d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.44(d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.49-4.62(m, 6H), 4.31(t, J = 5.1 Hz,1H), 4.15-4.18(m, 1H), 4.09-4.12(m, 1H), 3.29-3.67(m, 2H).

Etapa 5: Sinteza (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diolului

La o soluţie de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amină (100 mg, 0.186 mmol) in acid acetic (2 mL) într-o atmosferă de hidrogen la 25ºC timp de 4 ore se adaugă Pd(OH)2 (10 mol %)/C (100 mg, 0.130 mmol). Amestecul se filtrează printr-un strat de celite şi filtratul se evaporă. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel, eluare cu MeOH/DCM (1:8), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 267.2 [M+H]+. 1H-RNM: (300MHz, DMSO, ppm): δ 7.79(s, 1H), 7.77(s, 2H), 6.84(d, J = 4.2 Hz, 1H), 6.68(d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.10(d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.95(d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.84(d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.76(t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.20-4.25(m, 1H), 3.94(d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.78(d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.41-3.64(m, 2H).

Etapa 6: Sinteza (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-olului

(2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol (790 mg, 2.97 mmol) şi 1H-imidazol (606 mg, 8.90 mmol) se dizolvă in DMF (20 mL) într-o atmosferă de argon şi în picături la 0ºC se adaugă.1,3-diclor-1,1,3,3-tetraizopropildisiloxan (936 mg, 2.97 mmol). După agitarea amestecului format timp de 5 ore la 25ºC într-o atmosferă de argon se adaugă apă (10 mL) şi amestecul format se diluează cu acetat de etil (400 mL). Faza organică se spală cu (3 x 60 mL) of apă şi 60 mL de soluţie salină saturată , se usucă deasupra Na2SO4 şi se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel, se eluează cu MeOH/DCM (1:20), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 509.3 [M+H]+. 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ 7.81(s, 1H), 7.70(s, 2H), 6.82(d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.61(d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.20(d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.16(d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.31-4.35(m, 1H), 4.12-4.15(m, 1H), 4.00-4.03(m, 1H), 3.88-3.91(m, 1H), 0.96-1.05(m, 28H)

Etapa 7: Sinteza O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il)-O-fenil carbonotioatului

(6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-olul (210 mg, 0.413 mmol) şi N,N-dimetilpyridin-4-amina (202 mg, 1.651 mmol) într-o atmosferă de argon se dizolvă in DCM (10 mL). În picături la 0ºC se adaugă O-fenil carboncloridtioat (143 mg, 0.826 mmol). După agitarea amestecului de reacţie la 25ºC într-o atmosferă de argon timp de 2 ore, amestecul format se diluează cu DCM (100 mL) şi apoi se spală cu 3 x 30 mL of apă şi 30 mL soluţie salină saturată. Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 şi se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica şi se eluează cu acetat de etil/eter de petrol (3:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 645.2 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ 7.83(s, 2H), 7.79(s, 1H), 7.48(t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.33(t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.14(d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.80(d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.71(d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.16(dd, J = 2.4 Hz, J = 5.6 Hz, 1H), 5.46(d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.90(dd, J = 5.6 Hz, J = 8.8Hz, 1H), 3.95-4.06(m, 2H), 3.85-3.87(m, 1H), 0.96-1.06(m, 28H).

Etapa 8: Sinteza 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-4-aminei

O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il) O-fenil carbontioatul (1.45 g, 2.248 mmol), AIBN (0.738 g, 4.50 mmol) şi tributilstananul (3.93 g, 13.49 mmol) se dizolvă in toluen (20 mL) într-o atmosferă de argon. După agitarea amestecului de reacţie la 80ºC într-o atmosferă de argon timp de 3 ore, soluţia formată se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel şi se eluează cu acetat de etil/eter de petrol (2.5:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 493.4 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ 7.81 (s, 1H), 7.79 (s, 2H), 6.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.46 (t, 1H), 4.58-4.62 (m, 1H), 3.90-4.00 (m, 1H), 3.75-3.80 (m, 2H), 2.20-2.30 (m, 1H), 2.30-2.40 (m, 1H), 0.98-1.06 (m, 28H).

Etapa 9: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (1.0 g, 2.029 mmol) se dizolvă in THF (10 mL) într-o atmosferă de argon. La amestecul de reacţie în picături la 20ºC se adaugă TBAF (0.531 g, 2.029 mmol). După agitarea soluţiei formate la 20ºC într-o atmosferă de argon timp de 2 ore, aceasta se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel şi se eluează cu DCM/MeOH (20:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 251.2 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ 7.83(s, 1H), 7.81(s, 2H), 6.84(d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.82(d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.47-5.51(m, 1H), 5.06(d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.73(t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.22(m, 1H), 3.74-3.78(m, 1H), 3.32-3.45(m, 2H), 2.16-2.20(m, 1H), 2.09-2.14(m, 1H).

Etapa 10: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-4-aminei

(2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ul (300 mg, 1.199 mmol), 1H-imidazolul (490 mg, 7.19 mmol) şi terţ-butilclordimetilsilanul (723 mg, 4.80 mmol) se dizolvă in DMF (4.0 mL) într-o atmosferă de argon. După agitarea amestecului de reacţie la 20ºC într-o atmosferă de argon timp de 5 ore, amestecul format se diluează cu acetat de etil (100 mL), se spală cu (3 X 30 mL) apă şi 30 mL de soluţie salină saturată . Stratul organic se usucă cu Na2SO4 şi se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel şi se eluează cu acetat de etil/eter de petrol (2:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 479.3 [M+H]+, 1H-RNM: (300MHz, DMSO, ppm): δ 7.82 (s, 1H), 7.75 (s, 2H), 6.82 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.48-5.53 (m, 1H), 4.42 (m, 1H), 3.78 (m, 1H), 3.48-3.62 (m, 2H), 2.22-2.27 (m, 1H), 2.04-2.10 (m, 1H), 0.78-0.89 (m, 18H), 0.00-0.10 (m, 12H)

Etapa 11: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (500 mg, 1.044 mmol) se dizolvă in THF (8.0 mL), H2O (2.0 mL) şi TFA (2.0 mL) şi se agită la 0ºC timp de 4 ore. Amestecul de reacţie se ajustează până la pH 7 cu bicarbonat de sodiu şi apoi se extrage cu acetat de etil (30 mL x3), se spală cu (3 x20 mL) apă şi 20 mL de soluţie salină saturată . Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 şi se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel şi se eluează cu acetat de etil/eter de petrol (2:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 365.3 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ 7.82(s, 1H), 7.68(s, 2H), 6.82(d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.65(d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.46-5.50(m, 1H), 4.80(t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.42(d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.74-3.78(m, 1H), 3.32-3.44(m, 2H), 2.24-2.28(m, 1H), 2.02-2.06(m, 1H), 0.85-0.90(m, 9H), 0.00-0.10(m, 6H).

Etapa 12: Sinteza (2S,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolul (270 mg, 0.741 mmol) şi IBX (270 mg, 0.963 mmol) se dizolvă in acetonitril (20.0 mL) într-o atmosferă de argon. După agitarea amestecului de reacţie la 80ºC într-o atmosferă de argon timp de 1 oră, substanţa solidă se filtrează şi filtratul se concentrează în vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează direct în etapa următoare.

CL-SM: 363.2 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ 9.59 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.73(s, 2H), 6.86 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.67-5.71 (m, 1H), 4.71 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 2.25-2.32 (m, 1H), 2.12-2.17 (m, 2H), 0.84-0.91 (m, 9H), 0.00-0.13 (m, 6H).

Etapa 13: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

(2S,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehida (200 mg, 0.552 mmol) se dizolvă in 1,4-dioxan (10 mL) la 20ºC. Apoi se adaugă formaldehidă (2.0 mL, 0.552 mmol) şi se adaugă hidroxid de sodiu (2.0 mL, 4.00 mmol). După agitarea amestecului format la 20ºC timp de 4 ore, acesta se ajustează până la pH 7 cu acid acetic. Amestecul se diluează cu acetat de etil (150 mL), apoi se spală cu 3 x 30 mL apă şi 30 mL de soluţie salină saturată . Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 şi se concentrează în vid. Reziduul se dizolvă in etanol (10 mL) la 0ºC, şi apoi la 0ºC se adaugă NaBH4 (41.7 mg, 1.103 mmol). După agitarea amestecului format la 20ºC timp de 16 ore, acesta seajustează până la pH=7 cu acid acetic şi amestecul se extrage cu acetat de etil (150 mL), apoi se spală cu (3 x 30 mL) apă şi 30 mL de soluţie salină saturată . Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 şi se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel şi se eluează cu DCM/MeOH (10:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 395.2 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ7.82 (s, 1H), 7.70 (s, 2H), 6.82 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.50-5.60 (m, 1H), 4.68 (t, 1H), 4.52 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.22 (t, 1H), 3.53-3.60 (m, 2H), 2.35-2.45 (m, 1H),2.00-2.10 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.08-0.09 (m, 6H).

Etapa 14: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

((3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolul (90 mg, 0.228 mmol) şi IBX (256 mg, 0.912 mmol) se dizolvă in acetonitril (15.0 mL) într-o atmosferă de argon. După agitarea amestecului de reacţie la 30ºC într-o atmosferă de argon timp de 48 ore, substanţa solidă se filtrează. Filtratul se concentrează în vid, se obţine compusul din titlu, care se utilizează direct în etapa următoare.

Etapa 15: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

(2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehida (80 mg, 0.204 mmol) şi K2CO3 (85 mg, 0.611 mmol) se dizolvă in metanol (10 mL) într-o atmosferă de argon. La amestecul de reacţie în picături la 0ºC se adaugă dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (78 mg, 0.408 mmol). După agitarea amestecului de reacţie la 25ºC într-o atmosferă de argon timp de 16 ore, acesta se filtrează şi se concentrează în vid. Reziduul se aplică pe o coloană cu silica gel şi se eluează cu DCM/MeOH (10:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 389.3 [M+H]+

Etapa 16: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (11)

((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolul (50 mg, 0.129 mmol) şi TBAF (33.6 mg, 0.129 mmol) se dizolvă in THF (5.0 mL) într-o atmosferă de argon. După agitarea soluţiei formate la 25ºC într-o atmosferă de argon timp de 2 ore, amestecul de reacţie se concentrează în vid. Reziduul se purifică prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, Xbridge Prep C18 Column, 19*150 mm; faza mobilă, apă (10 mmol/l NH4HCO3) şi acetonitril (5.0% până la 25.0% acetonitril timp de 8 min, până la 95.0% timp de 1.5 min, aproape până la 5.0% timp de 1.5 min); Detector, UV 254 şi 220 nm), se obţine compusul din titlu 11 sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: 275.1 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ7.82 (s, 1H), 7.69 (s, 2H), 6.82 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.60 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 4.2 Hz,1H), 5.06 (d, J = 6.8 Hz, J = 6.0 Hz, 1H ), 4.30-4.34 (m, 1H), 3.45-3.56 (m, 2H), 3.38 (s, 1H), 2.30-2.37 (m, 1H), 2.17-2.13 (m, 1H).

EXEMPLUL 12: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-hidroxi-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilului (12)

Etapa 1: Sinteza oximei de 5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă

La un amestec de compusul intermediar D (a vedea Exemplul 11) ( 70 mg, 0.178 mmol) in piridină (5 mL) într-o atmosferă de argon se adaugă hidroclorură de hidroxilamină (37.17 mg, 0.543 mmol) la 25oC. După agitarea amestecului format timp de 2 ore la 25oC, amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se diluează cu acetat de etil (100 mL), se spală cu apă (3 x 20 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se concentrează sub presiune redusă, se obţine compusul din titlu, care se utilizează fără purificare.

CL-SM: 408.2 [M+H]+

Etapa 2: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilului

La un amestec de oximă de 5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (70 mg, 0.172 mmol) in DCM (15 mL) într-o atmosferă de argon la 25oC se adaugă Et3N (69.5 mg, 0.687 mmol) şi anhidridă 2,2,2-trifluoracetică (72.2 mg, 0.344 mmol). Amestecul format se agită timp de 16 ore la 25oC şi apoi amestecul de reacţie se diluează cu DCM ( 100 mL), se spală cu soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu (3 x 20 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL), se usucă deasupra sulfatului de sodiu anhidru şi se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică pe o coloană cu silica gel, eluare cu DCM/MeOH (15:1), se obţine compusul din titlu.

CL-SM: 309.2 [M+H]+.

Etapa 3: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-hidroxi-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilului (12)

La un amestec de (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitril (50 mg, 0.128 mmol) in THF(10 mL) într-o atmosferă de argon la 25oC se adaugă TBAF ( 33.6 mg, 0.128 mmol). Amestecul format se agită timp de 2 ore la 25oC şi apoi se concentrează sub presiune redusă. Produsul brut se purifică prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare: Instrument, (1#-Pre-HPLC-011(Waters)); Coloana: Xbridge C18, 5 µm, 19 x 150 mm; faza mobilă: apă (0.05% NH4CO3) şi ACN (5.0% ACN aproape până la 40% timp de 10 min, reţinere 95% timp de 2 minute, aproape până la 5% in 2 minute); Detector, UV 220 şi 254nm. Fracţiile colectate se combină şi se concentrează sub presiune redusă, se obţine compusul din titlu 12 sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: 276.0 [M+H]+, 1H-RNM: (400MHz, DMSO, ppm): δ7.86 (s, 1H), 7.74-7.84 (s, 2H), 6.88 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.10 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.72-5.79 (m, 1H), 5.62-5.63 (m, 1H), 4.44-4.61 (s, 1H ), 3.53-3.62 (m, 2H), 2.42-2.49 (m, 1H), 2.19-2.24 (m, 1H).

EXEMPLUL 13: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfatului de amoniu (13)

Etapa 1: Sinteza 2-((4,4,6,6-tetraoxido-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinan-2-il)oxi)benzoatului (compusul intermediar E)

Într-o boxă de lucru etanşeizată într-o atmosferă de argon într-un balon cu conţinut de pirofosfat de tributilamoniu (112 mg, 0.205 mmol), dizolvat in 0.4 mL dimetilformamidă (DMF), se adaugă tributilamină uscată (0.4 mL, 1.679 mmol), se formează o soluţie transparentă. Apoi soluţia transparent cu agitare viguroasă se injectează în balonul cu conţinut de 2-clor-4H-benzo[d][1,3,2]dioxafosfinin-4-onă uscată (27.6 mg, 0.136 mmol) in dimetilformamidă (0.4 mL). Amestecul format se agită la 30°C timp de 30 minute, se obţine o soluţie de compusul intermediar E, care se utilizează direct în reacţia următoare fără oarecare tratare.

Etapa 2: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat amoniului (13)

(2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil) tetrahidrofuran-3-olul (compusul 1, 8 mg, 0.029 mmol) se introduce într-un balon cu fund rotund (10 mL) şi apoi se usucă deasupra P2O5 în vid înalt peste noapte. În acest balon se adaugă site moleculare activate 4Å (100 mg). Conţinutul se purjează cu argon şi apoi în balonul menţionat cu o seringă se transferă soluţia de compus intermediar E (2.0 echiv, proaspăt preparat) in DMF uscat (0.15 mL) şi amestecul se agită la 25°C timp de 3 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS (acetonitril:0.1 M clorură de amoniu = 7:3). După ce majoritatea nucleozidului iniţial se consumă, amestecul se răceşte până la 0°C, apoi în amestecul de reacţie se injectează soluţie de iod [3% in 0.1 mL de amestec de piridină/apă (9:1)]. După consumul iodului, se continue adiţia în picături a soluţiei de iod până la menţinerea permanent a culorii brune a iodului. Peste 15 minute se adaugă cu agitare la 10°C timp de încă 15 minute tampon de trietilbicarbonat de amoniu (1.0 M, 2 mL). Substanţele volatile se elimină în vid (temperatura internă nu depăşeşte 25°C). Reziduul se dizolvă repetat in apă (2 mL) şi se extrage cu cloroform (2 x 2 mL). Stratul apos colectat cu conţinut de produs brut se purifică apoi prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, XBridgeTM Prep OBD (Optimum Bed Density) T3 Column, 19*150 mm, 5 µm; faza mobilă, apă cu 50 mmol bicarbonat de amoniu şi acetonitril (2% până la 5.2% acetonitril timp de 5 min, aproape până la 95% timp de 2 min, aproape până la 5% timp de 1.5 min); Detector, UV 254 şi 220nm. Fracţiile cu conţinut de produs se colectează şi se liofilizează,se obţine compusul din titlu 13 sub formă de substanţă solidă.

CL-SM: (ES, m/z): 512.90 [M-H-4NH3]-. 1H-RNM: (400MHz, D2O, ppm): δ 8.06 (s, 1H), 7.38 (d, J = 3.6Hz, 1H), 6.63 (t, J = 7.6Hz, 1H), 6.58 (d, J = 3.6Hz, 1H), 4.06-4.14 (m, 2H), 2.67-2.72 (m, 1H), 2.54-2.59 (m, 1H). P-RNM: (161MHz, D2O, ppm): δ -5.86 (s, 1P), -11.49--11.39 (d, J = 15.13Hz, 1P), -19.29 (s, 1P).

Compuşii următori 14- 21 se sintetizează, utilizând metoda descrisă în Exemplul 13:

EXEMPLUL 14: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat amoniu (14).

CL-SM: (ES, m/z): 530.85 [M-H-4NH3]-. 1H-RNM: (400MHz, D2O, ppm): δ 8.00 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.62 (dd, J = 4.8Hz, J = 6.0Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 5.6Hz, J = 11.2Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 5.0Hz, J = 11.4Hz, 1H), 2.48-2.64 (m, 2H). P-RNM: (161MHz, D2O, ppm): δ -5.97--5.89 (d, J = 13.85Hz, 1P), -11.52--11.43 (d, J = 14.81Hz, 1P), -19.31 (s, 1P).

EXEMPLUL 15: (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat amoniu (15).

CL-SM: (ES, m/z): 527.00 [M - H - 4NH3]-. 1H-RNM: (400MHz, D2O, ppm): δ 7.96 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.55 (t, J = 6.6Hz, 1H), 4.11 (dd, J = 6.2Hz, J = 11.4Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 5.8Hz, J = 12.0Hz, 1H), 2.59-2.66 (m, 1H), 2.48-2.53 (m, 1H), 2.78(s, 3H). P-RNM: (161MHz, D2O, ppm): δ -5.90 (s, 1P), -11.48--11.39 (d, J = 14.49Hz, 1P), -19.32 (s, 1P).

EXEMPLUL 16: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat bis-trietilamoniu (16).

CL-SM: (ES, m/z): 546.95 [M-H-2TEA]-. 1H-RNM: (400MHz, D2O, ppm): δ 7.31 (d, J = 4.0Hz, 1H), 6.53 (d, J = 4.0Hz, 1H), 6.50 (t, J = 6.4Hz, 1H), 4.15 (dd, J = 5.8Hz, J = 10.6Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 4.8Hz, J = 11.2Hz, 1H), 2.62-2.67 (m, 1H), 2.53-2.58 (m, 1H). P-RNM: (161MHz, D2O, ppm): δ -5.86--5.77(d, J = 14.81Hz, 1P), -11.45--11.35(d, J = 15.13Hz, 1P), -19.24(s, 1P).

EXEMPLUL 17: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat amoniu (17).

CL-SM: (ES, m/z): 546.70 [M-H-4NH3]-. 1H-RNM: (400MHz, D2O, ppm): δ 7.97 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.54 (t, J = 6.0Hz, 1H), 4.01-4.13 (m, 2H), 2.52-2.62 (m, 2H). P-RNM: (161MHz, D2O, ppm): δ -5.81 (s, 1P), -11.42 (s, 1P), -19.25 (s, 1P).

EXEMPLUL 18: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-cian-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat bis-trietilamoniu (18).

CL-SM: (ES, m/z): 514.35 [M - H - 2TEA]-. 1H-RNM: (400 MHz, D2O, ppm): δ 8.04 (s, 1H), 7.29 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.70 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.87 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.21-4.16 (m, 2H), 2.99 (q, J = 7.2 Hz, 15H), 2.80-2.76 (m, 1H), 2.58-2.54 (m, 1H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 26H). P-RNM: (161 MHz, D2O, ppm): δ -5.85 (s, 1P), -11.84 (d, J = 15.30 Hz, 1P), -19.38 (s, 1P).

EXEMPLUL 19: ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat amoniu (19).

CL-SM: (ES, m/z): 512.90 [M-H-4NH3]-. 1H-RNM: (400MHz, D2O, ppm): δ 7.73 (s, 1H), 6.77 (dd, J = 4.4Hz, J = 7.4Hz, 2H), 5.73 (t, J = 7.4Hz, 1H), 4.52-4.56 (m, 1H), 3.98-4.03 (m, 2H), 2.56-2.63 (m, 1H), 2.34-2.40 (m, 1H). P-RNM: (161MHz, D2O, ppm): δ -5.79 (s, 1P), -11.24 (s, 1P), -19.21 (s, 1P).

EXEMPLUL 20: ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat amoniu (20).

CL-SM: (ES, m/z): 513.95 [M - H - 4 NH3]-. 1H-RNM: (400 MHz, D2O, ppm): δ 8.22 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 5.53 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.60-4.57 (m, 1H), 4.12-4.03 (m, 2H), 2.56-2.49 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 1H). P-RNM: (161 MHz, D2O, ppm): δ -5.82 (s, 1P), -11.32-11.23 (d, J = 13.69 Hz, 1P), -19.24 (s, 1P).

EXEMPLUL 21: ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfat amoniu (21).

CL-SM: (ES, m/z): 513.95 [M - H - 4NH3]-. 1H-RNM: (400 MHz, D2O, ppm): δ 8.23 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 5.66 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.61-4.58 (m, 1H), 4.05 (brs, 2H), 2.68-2.61 (m, 1H), 2.46-2.42 (m, 1H). P-RNM: (161 MHz, D2O, ppm): δ -5.81 (s, 1P), -11.33-11.24 (d, J = 13.85 Hz, 1P), -19.19 (s, 1P).

Denumirile formelor fără sare ale compuşilor 13-21 sunt, respectiv:

13) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 14) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 15) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 16) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 17) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 18) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-cian-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 19) ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirol[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 20) ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; şi 21) ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat.

EXEMPLUL 22: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (22)

Etapa 1: Sinteza oxidului de (aminooxi)difenilfosfină

La o soluţie agitată de hidroclorură de hidroxilamină (70 g, 1007 mmol) într-un amestec de 1,4-dioxan (100 mL) şi apă (100 mL) în picături cu agitare la 0°C timp de 30 minute se adaugă o soluţie de NaOH (38.3 g, 957 mmol) in apă (400 mL). Soluţia formată se agită la 0°C timp de 20 minute. În soluţia menţionată repede la 0°C se injectează o soluţie de difenilfosfinclorură (77 mL, 403 mmol) in 1,4-dioxan (100 mL). Amestecul format se agită viguros la temperatura mediului ambiant timp de 10 minute. Se formează un precipitat şi se colectează prin filtrare. Substanţa solidă se resuspendează in soluţie apoasă de NaOH (0.25 N, 1000 mL) şi se agită la 4°C timp de 1.5 ore. Amestecul se filtrează şi turta de filtrare se spală succesiv cu apă (3 × 1000 mL) şi eter (2 × 500 mL). Substanţa solidă se usucă în vid peste noapte, rezultă oxidul de (aminooxi)difenilfosfină.

CL-SM: (ES, m/z): 233.9 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.82-7.69 (m, 4H), 7.58-7.40 (m, 6H) P-RNM: (121 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 21.53 (s, 1P).

Etapa 2: Sinteza etil 1-amino-1H-imidazole-2-carboxilatului

La o soluţie agitată de etil 1H-imidazole-2-carboxilat (6 g, 30.9 mmol) in DMF (250 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă în picături la -10°C timp de 60 minute o soluţie de LiHMDS în THF (93 mL, 93 mmol, 1 M). Amestecul format se agită la -10°C timp de încă 30 min, şi apoi in porţii timp de 30 minute se adaugă oxid de (aminooxi)difenilfosfină (21.63 g, 93 mmol), timp în care se menţine temperatura între 0°C până la 10°C. Amestecul format se încălzeşte până la temperatura camerei şi se agită viguros timp de 16 ore. Reacţia se stinge cu apă cu gheaţă (600 mL) şi se extrage cu EtOAc (2 × 800 mL). Straturile organice combinate se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă, rezultă etil 1-amino-1H-imidazol-2-carboxilatul, care se utilizează direct în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 156.1 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 7.37 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.57 (br s, 2H), 4.33-4.27 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

Etapa 3: Sinteza imidazo [2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-onei

La un amestec agitat de etil 1-amino-1H-imidazol-2-carboxilat (6 g, 30.9 mmol) in EtOH (60 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă formamidin acetat (17.71 g, 170 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la temperatura de fierbere şi se agită peste noapte. Amestecul de reacţie se răceşte până la temperatura mediului ambiant şi se filtrează. Turta de filtru se spală succesiv cu apă (3 × 10 mL) şi EtOAc (2 × 10 mL). Substanţa solidă colectată se usucă în vid înalt peste noapte, rezultă imidazo [2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-ona.

CL-SM: (ES, m/z): 136.9 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 12.31 (br s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.98 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 0.8 Hz, 1H).

Etapa 4: Sinteza 4-clorimidazo [2,1-f][1,2,4]triazinei

Imidazo [2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-a (2.4 g, 17.63 mmol) se încarcă într-un balon cu fundul rotund de 100 mL într-o atmosferă de azot, apoi la temperatura camerei se injectează POCl3 (20 mL). Amestecul se încălzeşte până la temperatura de fierbere şi se agită timp de 16 h. Substanţele volatile se elimină sub presiune redusă. Reziduul se distribuie între EtOAc (100 mL) şi apă (30 mL). Stratul organic se spală succesiv cu soluţie apoasă rece de NaHCO3 (saturată, 3 × 20 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (5/1), se obţine 4-clorimidazo[2,1-f][1,2,4]triazină.

CL-SM: (ES, m/z): 155.0 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.81 (s, 1H), 8.65 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 0.8 Hz, 1H).

Etapa 5. Sinteza 4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazinei

La o soluţie agitată de 4-clorimidazo[2,1-f][1,2,4]triazină (20 g, 129 mmol) in THF (500 mL) într-o atmosferă de azot la temperatura camerei se adaugă NaSMe (13.60 g, 194 mmol). Amestecul format se agită la temperatura camerei timp de 72 ore. Amestecul de reacţie se stinge cu soluţie apoasă de NH4Cl (saturată, 200 mL) şi se extrage cu EtOAc (2 × 500 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (2 × 200 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (1/1), se obţine 4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazină.

CL-SM: (ES, m/z): 167.2 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.47 (s, 1H), 7.90 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H).

Etapa 6: Sinteza (3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)-2-(4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-olului

Într-o soluţie agitată de 4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazină (1 g, 6.02 mmol) in THF (25 mL) într-o atmosferă de azot la -78°C timp de 5 minute se injectează o soluţie de LDA în THF (4.5 mL, 9.0 mmol, 2 M). Amestecul format se menţine la -78 °C timp de 30 minute şi apoi se injectează o soluţie de (3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)dihidrofuran-2(3H)-onă (comercială, 3.27 g, 7.82 mmol) in THF (15 mL) şi amestecul format se agită între -78°C şi -50°C timp de 2 ore. Reacţia se stinge cu soluţie apoasă de NH4Cl (saturată, 20 mL) şi se extrage cu EtOAc (2 × 50 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (2 × 20 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (5/1), se obţine (3R,4R,5R)- 3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi) metil)-2-(4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-ol.

CL-SM: (ES, m/z): 585.1 [M + H]+.

Etapa 7: Sinteza 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazinei

Într-o soluţie agitată de (3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi) -5-((benziloxi)metil)-2-(4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-ol (1.7 g, 2.91 mmol) in DCM (30 mL) într-o atmosferă de azot se injectează la 0 oC succesiv dietil eterat trifluorură de bor (825.3 mg, 5.82 mmol) şi trietilsilan (1.35 g, 11.63 mmol). Amestecul format se agită la 0 oC timp de încă 16 ore. Reacţia se stinge cu soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 20 mL) şi se extrage cu DCM (2 × 30 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (30 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (10/1), se obţine 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazină.

CL-SM: (ES, m/z): 570.0 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.38 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.37-7.26 (m, 15H), 5.56 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.70-4.49 (m, 6H), 4.39 (q, J = 4.2 Hz, 1H), 4.34 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.15 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.70 (dd, J = 3.6 Hz, J = 10.5 Hz, 1H), 3.60 (dd, J = 3.9 Hz, J = 10.8 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H).

Etapa 8: Sinteza 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-aminei

Într-o bombă de oţel cu volum de 80 mL se încarcă 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)imidazo[2,1-f] [1,2,4]

triazină (1.4 g, 2.462 mmol). Conţinutul se răceşte până la -60°C. La acesta se adaugă amoniu izopropanolic (izopropanol/amoniu lichid = 2/3, amestecat la -60°C, 50 mL). Amestecul format se încălzeşte la 90°C şi se agită timp de 16 ore. Amestecul de reacţie se răceşte până la temperatura camerei şi apoi se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (1/1), se obţine 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amină.

CL-SM: (ES, m/z): 538.3 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.24 (br s, 1H), 8.15 (br s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.36-7.28 (m, 15H), 5.35 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.56 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.52 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 4.45 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.22-4.16 (m, 2H), 3.65 (dd, J = 3.2 Hz, J = 10.8 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 4.4 Hz, J = 10.8 Hz, 1H).

Etapa 9: Sinteza (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diolului

La o soluţie agitată de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi) -5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amină (1.2 g, 2.232 mmol) in AcOH (10 mL) se adaugă 20% Pd(OH)2/C (1.2 g). Conţinutul se purjează cu hidrogen (2 atm) şi se agită la 25°C timp de 24 ore. Substanţa solidă se filtrează şi se spală cu AcOH (2 × 15 mL). Filtratul combinat se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând DCM/MeOH (8/1), se obţine (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol.

CL-SM: (ES, m/z): 290.0 [M + Na]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.22 (br s, 1H), 8.15 (br s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 5.13-5.09 (m, 2H), 5.03 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.78 (br s, 1H), 4.32 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.99 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 3.81 (q, J = 4.4 Hz, 1H), 3.56 (dd, J = 3.2 Hz, J = 11.2 Hz, 1H), 3.46 (dd, J = 3.6 Hz, J = 11.2 Hz, 1H).

Etapa 10: Sinteza (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-olului

Într-o soluţie agitată de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminoimidazo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol (3.2 g, 11.97 mmol) şi 1H-imidazol (3.26 g, 47.9 mmol) in DMF (65 mL) într-o atmosferă de azot la 0oC se injectează 1,3-diclor-1,1,3,3-tetraizopropildisiloxan (3.97 g, 12.57 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 30 oC şi se agită timp de 5 ore. Reacţia se stinge cu apă (70 mL) şi se extrage cu EtOAc (3 × 100 mL). Stratul organic combinat se spală cu soluţie salină saturată (3 × 100 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (3/1), se obţine (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminoimidazo [2,1-f][1,2,4]triazin-7-il) -2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol.

CL-SM: (ES, m/z): 510.4 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.12 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.03 (br s, 1H), 6.39 (br s, 1H), 5.31 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.68 (dd, J = 6.0 Hz, J = 7.0 Hz, 1H), 4.47 (q, J = 2.8 Hz, 1H), 4.10-4.05 (m, 3H), 3.20 (br s, 1H), 1.15-1.05 (m, 28H).

Etapa 11: Sinteza O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il) O-fenil carbontioatului

Într-o soluţie agitată de (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminoimidazo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol (4.0 g, 7.85 mmol) şi DMAP (3.83 g, 31.4 mmol) in DCM (160 mL) într-o atmosferă de azot la 0 oC se injectează O-fenil carboncloridotioat (2.71 g, 15.69 mmol). Amestecul format se agită la 0 oC timp de încă 3 ore. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (1/3), se obţine O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il) O-fenil carbontioat.

CL-SM: (ES, m/z): 646.3 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.37 (br s, 1H), 8.28 (br s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.49 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.34 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.22 (dd, J = 2.0 Hz, J = 5.2 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 5.2 Hz, J = 8.8 Hz, 1H), 4.07-3.96 (m, 2H), 3.91-3.88 (m, 1H), 1.07-1.04 (m, 28H).

Etapa 12: Sinteza 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-aminei

Într-o soluţie agitată de O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminoimidazo [2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il) O-fenil carbontioat (350 mg, 0.542 mmol) şi AIBN (133 mg, 0.813 mmol) in toluen degazat (10 mL) într-o atmosferă de azot la temperatura camerei se injectează hidrură de tri-n-butilstaniu (314 mg, 1.084 mmol). Amestecul se încălzeşte până la 80 oC şi se agită timp de 3 ore. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (1/3), se obţine 7-((6aR,8R,9aS) -2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amină.

CL-SM: (ES, m/z): 494.5 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.23 (br s, 1H), 8.16 (br s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 5.42 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.63 (dd, J = 5.8 Hz, J = 13.0 Hz, 1H), 3.95 (dd, J = 3.2 Hz, J = 11.6 Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 6.8 Hz, J = 12.0 Hz, 1H), 3.78-3.75 (m, 1H), 2.55-2.51 (m, 1H), 2.37-2.32 (m, 1H), 1.07-1.01 (m, 28H).

Etapa 13: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

Într-o soluţie agitată de 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amină (2.7 g, 5.47 mmol) in THF (60 mL) la 0 oC se injectează fluorură de hidrogen-piridină (5.42 g, 54.7 mmol). Amestecul se încălzeşte până la temperatura mediului ambiant şi se agită timp de 20 ore. Amestecul de reacţie se răceşte până la 0 oC, se neutralizează cu NaHCO3 solid şi apoi se cu MeOH (50 mL). Substanţa solidă se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se tratează cu DCM/MeOH (20 mL, 100/1, v/v) şi se agită timp de 30 minute. Precipitatul alb se colectează şi se usucă în vid peste noapte, rezultă (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol.

1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.20 (br s, 1H), 8.13 (br s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 5.42 (dd, J = 5.8 Hz, J = 10.2 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.74 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.28-4.25 (m, 1H), 3.81-3.78 (m, 1H), 3.42 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.33-2.26 (m, 1H), 2.13-2.09 (m, 1H).

Etapa 14: Sinteza 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-aminei

(2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olul (200 mg, 0.796 mmol) şi 1H-imidazolul (217 mg, 3.18 mmol) într-o atmosferă de azot se încarcă într-un balon cu un volum de 10 mL. În amestec se injectează DMF anhidru (2.5 mL), apoi la 0°C se adaugă of terţ-butilclordimetilsilan (360 mg, 2.388 mmol). Amestecul se agită la 25°C timp de 3 h. Amestecul format se diluează cu EtOAc (50 mL), se spală cu soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 2 × 15 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL), respectiv. Stratul organic se colectează şi se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând eter de petrol/EtOAc (35%-52% EtOAc in eter de petrol), se obţine 7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amină.

CL-SM: (ES, m/z): 480.1 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.20 (br s, 1H), 8.13 (br s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 5.43 (dd, J = 5.6 Hz, J = 10.0 Hz, 1H), 4.46-4.44 (m, 1H), 3.81 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 3.63-3.51 (m, 2H), 2.45-2.36 (m, 1H), 2.16-2.10 (m, 1H), 0.89 (s, 9H), 0.86 (s, 9H), 0.10 (s, 6H), 0.02 (d, J = 3.6 Hz, 6H).

Etapa 15: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

7-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (350 mg, 0.730 mmol) se încarcă într-un balon cu fund rotund cu un volum de 25 mL, apoi se injectează THF (4 mL). Conţinutul se răceşte până la 0°C. La acesta în picături cu agitare la 0°C timp de 10 min se adaugă o soluţie răcită în prealabil de acid trifluoracetic/apă (1/1, v/v, 2 mL). Amestecul format se agită la 0°C timp de 2 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi LCMS. Soluţia formată se coevaporă cu toluen (3 × 20 mL) şi reziduul se resuspendează in soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 4 mL) şi apoi se evaporă până la uscat. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel cu EtOAc/DCM (1/1), se obţine ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol.

CL-SM: (ES, m/z): 366.2 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.09 (br s, 1H), 8.03 (br s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 5.31 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 4.70 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.69 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 3.33-3.28 (m, 2H), 2.34-2.24 (m, 1H), 2.01-1.96 (m, 1H), 0.79 (s, 9H), 0.01 (s, 6H).

Etapa 16: Sinteza (2S,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (280 mg, 0.766 mmol) in acetonitril anhidru (20 mL) într-o atmosferă de azot la temperatura camerei se adaugă IBX (644 mg, 2.298 mmol). Amestecul se încălzeşte până la 80°C şi se agită timp de 25 minute. LCMS indică consumul complet al nucleozidului iniţial. Amestecul format se răceşte până la temperatura camerei. Substanţele solide se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă, se obţine (2S,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehida, care se utilizează direct în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 363.7 [M + H]+.

Etapa 17: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2S,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (300 mg, brută) in 1,4-dioxan (4 mL) într-un balon cu fund rotund cu un volum de 25 mL la 0°C se injectează o soluţie apoasă de 37% de formaldehidă (1.0 mL), apoi o soluţie apoasă de NaOH (1.0 mL, 2.0 mmol, 2 N). Amestecul format se încălzeşte până la temperatura mediului ambiant şi se agită timp de 16 ore. După consumul complet al nucleozidului iniţial, amestecul de reacţie se neutralizează cu AcOH (~0.2 mL). Amestecul se diluează cu EtOAc (100 mL) şi se spală succesiv cu apă (2 × 25 mL), soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 25 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL). Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă, se formează produsul but. Produsul brut într-o atmosferă de azot se dizolvă repetat in EtOH (5 mL) şi se adaugă in porţii la 0°C borhidrură de sodiu (153 mg, 4.04 mmol). După agitare la temperatura mediului ambiant timp de 16 ore, amestecul de reacţie se neutralizează cu AcOH (~0.2 mL) şi se evaporă până la uscat. Reziduul se distribuie între CHCl3 (50 mL) şi apă (25 mL). Stratul apos se extrage repetat cu CHCl3 (2 × 25 mL). Stratul organic combinat se spală cu o soluţie salină saturată (40 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând DCM/MeOH (30/1), se obţine ((3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol.

CL-SM: (ES, m/z): 395.8 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.18 (br s, 1H), 8.12 (br s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 5.47 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 4.68 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.27 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.60-3.55 (m, 1H), 3.53-3.51 (m, 2H), 3.34-3.31 (m, 1H), 2.56-2.53 (m, 1H), 2.11-2.07 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.09 (d, J = 2.8 Hz, 6H).

Etapa 18: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La un amestec agitat de ((3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (180 mg, 0.455 mmol) in acetonitril (20 mL) şi DMSO (2 mL) într-o atmosferă de azot la temperatura camerei se adaugă IBX (382 mg, 1.365 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 30°C şi se agită timp de 2 ore. Substanţa solidă se filtrează, se spală cu CHCl3 (2 × 20 mL) şi filtratul combinat se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se dizolvă repetat in EtOAc (30 mL), se spală succesiv cu o soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 2 × 15 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă, se obţine (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă, care se utilizează direct în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 393.8 [M + H]+.

Etapa 19: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7aH-pirol[3,2-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

Într-un amestec agitat de (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (250 mg, 0.286 mmol, brută) şi K2CO3 (120 mg, 0.86 mmol) in MeOH (10 mL) într-o atmosferă de azot la 0°C se injectează o soluţie de dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (110 mg, 0.58 mmol) in MeOH (1 mL). Amestecul format se încălzeşte până la 30°C şi se agită timp de 16 ore. Amestecul de reacţie se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând DCM/MeOH (30/1), se obţine ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7aH-pirol[3,2-d]pirimidin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol.

CL-SM: (ES, m/z): 390.2 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.23 (br s, 1H), 8.15 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 5.54 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 5.16 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.53 (dd, J = 4.6 Hz, J = 6.2 Hz, 1H), 3.55 (dd, J = 5.2 Hz, J = 11.6 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 7.0 Hz, J = 11.8 Hz, 1H), 3.42 (s, 1H), 2.56-2.53 (m, 1H), 2.23-2.17 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.10 (d, J = 3.2 Hz, 6H).

Etapa 20. Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (22)

Într-o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (150 mg, 0.385 mmol) in THF anhidru (5 mL) într-o atmosferă de azot la 0°C se injectează o soluţie de TBAF în THF (0.385 mL, 0.385 mmol, 1 M). Amestecul se încălzeşte până la temperatura camerei şi se agită timp de 16 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS şi LCMS. Amestecul format se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin cromatografie pe coloană pe silica gel, utilizând DCM/MeOH (24/1), se obţine compusul 22 din titlu.

CL-SM: (ES, m/z): 309.00 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.21 (br s, 1H), 8.14 (br s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 5.53 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.34 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.07 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.35 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.56 (dd, J = 5.6 Hz, J = 12.0 Hz, 1H), 3.48 (dd, J = 7.0 Hz, J = 11.8 Hz, 1H), 3.41 (s, 1H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.28-2.21 (m, 1H).

EXEMPLUL 23: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (23)

Etapa 1: Sinteza (3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-olului:

Într-o suspensie agitată de NaH (60% dispersie in ulei mineral (1.878 g, 46.9 mmol) in DME anhidru (eter dimetilic) (150 mL) într-o atmosferă de azot la 0°C timp de 10 minute se injectează dietil (cianmetil)fosfonat (11.88 g, 67.1 mmol). Amestecul se încălzeşte până la 25°C şi se menţine timp de 0.5 h şi apoi în picături cu agitare la 0°C timp de 30 minute se adaugă o soluţie de (3R,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-ol (14.1 g, 33.5 mmol) in DME uscat (100 mL). Amestecul format se încălzeşte iarăşi până la 25°C şi se menţine timp de 2 ore. Amestecul format se diluează cu H2O (300 mL) şi se extrage cu Et2O (3 × 500 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (500 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând EtOAc/eter de petrol (5%-20% EtOAc in eter de petrol), se obţine 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)acetonitril.

CL-SM: (ES, m/z): 444.21 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, CDCl3, ppm): δ 7.33-7.31 (m, 15H), 4.63-4.43 (m, 6H), 4.25-4.13 (m, 2H), 3.95 (dd, J = 3.0 Hz, J = 4.8 Hz, 1H), 3.77 (dd, J = 5.4 Hz, J = 6.9 Hz, 1H), 3.53-3.45 (m, 2H), 2.78-2.75 (m, 0.4 H), 2.66 (dd, J = 4.8 Hz, J = 16.8 Hz, 0.8 H), 2.50 (dd, J = 4.8 Hz, J = 16.8 Hz, 0.8 H).

Etapa 2: Sinteza 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-(dimetilamino)acrilonitrilului

Într-o soluţie agitată de 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi) metil)tetrahidrofuran-2-il)acetonitril (12.6 g, 28.4 mmol) in DCM (90 mL) într-o atmosferă de azot la 0°C timp de 5 minute se injectează DMF uscat (2.54 mL, 32.8 mmol), apoi 1-terţ-butoxi-N,N,N',N'-tetrametilmetandiamină (19.80 g, 114 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 25°C şi se agită timp de 16 ore. Amestecul format se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând EtOAc/eter de petrol (15%-35% EtOAc in eter de petrol), se obţine 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-(dimetilamino)acrilonitril.

CL-SM: (ES, m/z): 499.25 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, CDCl3, ppm): δ 7.33-7.30 (m, 15H), 6.47 (s, 1H), 4.65-4.53 (m, 6H), 4.32 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.19-4.15 (m, 1H), 4.00-3.90 (m, 2H), 3.59-3.46 (m, 2H), 3.04 (s, 6H).

Etapa 3. Sinteza 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-hidrazinilacrilonitrilului

La o soluţie agitată de 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi) metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-(dietilamino)acrilonitril (12.9 g, 25.9 mmol) in MeOH (90 mL) se adaugă succesiv la temperatura camerei hidrat de hidrazină (21.15 g, 647 mmol), H2O (3.0 mL, 167 mmol) şi hidroclorură de hidrazină (2.66 g, 38.8 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 65°C şi se agită timp de 16 ore. Amestecul final se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se diluează cu H2O (500 mL) şi se extrage cu EtOAc (3 × 500 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (500 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă, se obţine 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-hidrazinilacrilonitril, care se utilizează direct în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 486.23 [M + H]+.

Etapa 4: Sinteza 4-[(2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-[(benziloxi)metil]oxolan-2-il]-1H-pirazol-5-aminei

2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-hidrazinilacrilonitrilul (18 g, 37.1 mmol) se introduce într-un balon cu fundul rotund cu un volum de 1000 mL, apoi se injectează ACN (200 mL). Amestecul se încălzeşte în reflux timp de 48 ore. Amestecul format se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând MeOH/DCM (2% până la 10% MeOH in DCM), se obţine 4-[(2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-[(benziloxi)metil]oxolan-2-il]-1H-pirazol-5-amină.

CL-SM: (ES, m/z): 486.23 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, CDCl3, ppm): δ 7.40-7.24 (m, 16H), 4.97 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.68 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.62-4.44 (m, 5H), 4.24-4.22 (m, 1H), 4.10-4.04 (m, 2H), 3.71 (dd, J = 3.0 Hz, J = 10.2 Hz, 1H), 3.63-3.50 (m, 1H).

Etapa 5. Sinteza 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-aminei

La un amestec de cianamidă (50 g, 1189 mmol) se adaugă trimetoximetan (505 g, 4757 mmol) şi amestecul se încălzeşte până la 105°C şi se agită timp de 5 minute. În amestecul menţionat la 105°C timp de 5 minute se introduce acid formic (4.38 g, 95 mmol). După agitarea soluţiei formate la 105°C timp de 5 ore, amestecul de reacţie se răceşte până la temperatura camerei. Substanţele solide se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Produsul se colectează prin distilare (0.1 mm Hg, 60°C până la 70°C), se obţine (E)-metil N-cianformimidat (50 g, 0.595 mol).

La o soluţie agitată de (E)-metil N-cianformimidat (21.82 g, 259 mmol) in toluen (150 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă la temperatura camerei o soluţie de 4-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirazol-5-amină (21 g, 43.2 mmol) in toluen (30 mL). Amestecul format se încălzeşte până la 90°C şi se agită timp de 20 ore. Soluţia formată se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând EtOAc/eter de petrol (30% până la 50% EtOAc in eter de petrol), se obţine 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5-((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amină.

CL-SM: (ES, m/z): 538.24 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.05 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.31-7.23 (m, 15H), 6.67 (br s, 2H), 5.33 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.67-4.50 (m, 6H), 4.35-4.29 (m, 2H), 4.15-4.11 (m, 1H), 3.72 (dd, J = 3.9 Hz, J = 10.5 Hz, 1H), 3.62 (dd, J = 4.2 Hz, J = 10.8 Hz, 1H).

Etapa 6: Sinteza (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diolului

La o soluţie agitată de 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benziloxi)-5- ((benziloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amină (10 g, 18.60 mmol) in AcOH (250 mL) se adaugă hidroxid de paladiu 20% pe carbon. Amestecul se purjează cu hidrogen (1.5-2 atm) şi se agită la 25°C timp de 14 ore. Substanţele solide se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se triturează cu DCM (150 mL) cu formarea unui precipitat alb. Precipitatul se colectează prin filtrare, se spală cu DCM şi se usucă in vid peste noapte cu formarea (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il) -5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diolului.

CL-SM: (ES, m/z): 268.10 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.76 (br s, 1H), 8.41 (br s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 4.96-4.91 (m, 2H), 4.86-4.81 (m, 2H),4.20 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.98 (q, J = 4.5 Hz, 1H), 3.78 (q, J = 3.9 Hz, 1H), 3.61-3.55 (m, 1H), 3.49-3.43 (m, 1H).

Etapa 7: Sinteza (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-olului

Într-o soluţie agitată de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5] triazin-8-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol (2.2 g, 8.23 mmol) şi 1H-imidazol (1.681 g, 24.70 mmol) in DMF uscat (100 mL) într-o atmosferă de azot la 0°C timp de 4 minute se injectează 1,3-diclor-1,1,3,3-tetraizopropildisiloxan (2.86 g, 9.06 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 25°C şi se agită timp de 3 ore. Reziduul se diluează cu H2O (50 mL) şi se extrage cu EtOAc (3 × 50 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (2 × 50 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând EtOAc/eter de petrol (30%-50% EtOAc in eter de petrol), se obţine (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol.

CL-SM: (ES, m/z): 510.25 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.72 (br s, 1H), 8.42 (br s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 5.08 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.41 (dd, J = 5.4 Hz, J = 8.1 Hz, 1H), 4.30-4.28 (m, 1H), 3.99-3.86 (m, 3H), 1.04-1.00 (m, 28H).

Etapa 8: Sinteza 8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-aminei

La o soluţie agitată de (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5] triazin-8-il)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol (3.90 g, 7.65 mmol) in DCE uscat (120 mL) într-o atmosferă de azot la temperatura camerei se adaugă 1,1'-tiocarbonildiimidazol (1.704 g, 9.56 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 85°C şi se agită timp de 1.5 ore. CSS indică consumul complet al nucleozidului iniţial. Soluţia formată se concentrează sub presiune redusă, rezultă compusul intermediar de imidazolil brut, care imediat se dizolvă iarăşi în toluen degazat (120 mL) într-o atmosferă de azot. La amestecul menţionat se adaugă AIBN (1.88 g, 11.48 mmol), apoi la 25°C timp de 2 minute se introduce tributilstanan (4.45 g, 15.30 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 80°C şi se agită timp de 3 ore. Soluţia formată se concentrează sub presiune redusă. Reziduul brut se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând EtOAc/eter de petrol (30%-50% EtOAc in eter de petrol), se obţine 8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraizopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amină.

CL-SM: (ES, m/z): 494.25 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.18 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 6.61 (br s, 2H), 5.40 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.70-4.65 (m, 1H), 4.10 (dd, J = 3.0 Hz, J = 10.8 Hz, 1H), 3.95-3.81 (m, 2H), 2.52-2.38 (m, 2H), 1.08-1.05 (m, 28H).

Etapa 9: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului

Într-o soluţie agitată de 8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraizopropil tetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amină (1.5 g, 3.04 mmol) in THF anhidru (35 mL) într-o atmosferă de azot la 0°C timp de 5 minute se injectează o soluţie de HF-piridină (1.5 mL, 11.65 mmol). Amestecul se încălzeşte până la 25°C şi se agită timp de 4 ore. Amestecul format se neutralizează prin adiţia NaHCO3 solid şi apoi se diluează cu MeOH (30 mL). Substanţa solidă nedizolvată se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă şi apoi se triturează cu EtOAc (20 mL). Se formează un precipitat alb şi se colectează prin filtrare, apoi se usucă in vid peste noapte, se formează (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olul.

CL-SM: (ES, m/z): 252.10 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.71 (br s, 1H), 8.39 (br s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 5.25 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.87 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.26-4.24 (m, 1H), 3.76-3.74 (m, 1H), 3.52-3.40 (m, 2H), 2.32-2.22 (m, 1H), 2.04-1.98 (m, 1H)

Etapa 10: Sinteza 8-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-aminei

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5] triazin-8-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (540 mg, 2.149 mmol) şi 1H-imidazol (512 mg, 7.52 mmol) in DMF (10 mL) într-o atmosferă de azot la 0°C timp de 1 minut se adaugă TBS-Cl (972 mg, 6.45 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 25°C şi se agită timp de 2 ore. Soluţia formată se diluează cu H2O (50 mL) şi se extrage cu EtOAc (3 × 50 mL). Straturile organice combinate se spală cu soluţie salină saturată (2 × 50 mL), se usucă deasupra Na2SO4 anhidru, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând EtOAc/eter de petrol (20% EtOAc in eter de petrol), rezultă 8-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amină.

CL-SM: (ES, m/z): 480.27 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.18 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 6.80 (br s, 2H), 5.49 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.98 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 3.8 Hz, J = 10.6 Hz, 1H), 3.63 (dd, J = 6.4 Hz, J = 10.8 Hz, 1H), 2.39-2.32 (m, 1H), 2.22-2.17 (m, 1H), 0.93-0.92 (m, 18H), 0.11-0.05 (m, 12H).

Etapa 11: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanolului

Într-o soluţie agitată de 8-((2R,4S,5R)-4-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-5-(((terţ-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amină (800 mg, 1.667 mmol) in THF (16 mL) la 0°C timp de 5 minute se injectează o soluţie răcită în prealabil de TFA/H2O (8 mL, v/v, 1/1). Amestecul format se agită la 0°C timp de 1.5 ore. Evoluţia reacţiei se monitorizează prin CSS. Soluţia formată se coevaporă cu toluen (3 × 50 mL) sub 25°C şi reziduul se dizolvă repetat in MeOH/DCM (20 mL, v/v, 1/2) şi amestecul se neutralizează cu NaHCO3 solid. Substanţa solidă se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Produsul brut se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând MeOH/DCM (2% până la 10% MeOH in DCM), se obţine ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol.

CL-SM: (ES, m/z): 366.19 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.70 (br s, 1H), 8.38 (br s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 5.24 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 4.92 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.75 (dd, J = 3.6 Hz, J = 4.8 Hz, 1H), 3.46-3.43 (m, 2H), 2.39-2.30 (m, 1H), 2.00-1.94 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.11 (s, 6H).

Etapa 12: Sinteza (2S,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o suspensie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5] triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (350 mg, 0.958 mmol) in ACN (40 mL) într-o atmosferă de azot la 25oC se adaugă IBX (804 mg, 2.87 mmol). Amestecul format se încălzeşte până la 80oC şi se agită timp de 1 oră. Substanţa solidă se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, se obţine (2S,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă, care se utilizează direct în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 364.17 [M + H]+.

Etapa 13: Sinteza ((3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanolului

La o soluţie agitată de (2S,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5] triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (349 mg, 0.960 mmol) in 1,4-dioxan (25 mL) într-un balon cu fund rotund cu un volum de 100 mL se injectează o soluţie apoasă de 37% de formaldehidă (5 mL), apoi la temperatura camerei timp de 5 minute se injectează soluţie apoasă de NaOH (5 mL, 2 N). Amestecul format se agită la temperatura camerei timp de 5 ore. După consumul complet al nucleozidului iniţial, amestecul de reacţie se neutralizează cu AcOH (~ 0.5 mL). Amestecul se diluează cu EtOAc (50 mL) şi se spală succesiv cu H2O (2 × 20 mL), soluţie apoasă de NaHCO3 (saturată, 2 × 20 mL) şi soluţie salină saturată (20 mL). Stratul organic se usucă deasupra Na2SO4, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se dizolvă repetat in EtOH anhidru (40 mL) şi se adaugă in porţii la 0°C într-o atmosferă de azot tetrahidroborat de sodiu (72.6 mg, 1.920 mmol). După agitare la 25°C timp de 16 ore, amestecul de reacţie se neutralizează cu AcOH (~ 0.2 mL) şi se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se distribuie între CHCl3 (30 mL) şi H2O (15 mL). Stratul apos se extrage repetat cu CHCl3 (2 × 15 mL). Stratul organic combinat se spală cu soluţie salină saturată (20 mL), se usucă deasupra Na2SO4, se filtrează şi filtratul se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând MeOH/DCM (3.5% MeOH in DCM), rezultă ((3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol.

CL-SM: (ES, m/z): 396.20 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.70 (br s, 1H), 8.38 (br s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 5.30 (dd, J = 5.1 Hz, J = 11.1 Hz, 1H), 4.84 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.22 (dd, J = 5.1 Hz, J = 6.3 Hz, 1H), 3.62-3.48 (m, 3H), 3.41-3.31 (m, 1H), 2.57-2.50 (m, 1H), 1.95 (dd, J = 5.1 Hz, J = 12.6 Hz, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.11 (s, 6H).

Etapa 14: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidei

La o suspensie agitată de ((3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5] triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (190 mg, 0.480 mmol) in ACN/DMSO (8 mL, v/v, 10/1) într-o atmosferă de azot la 25oC se adaugă IBX (404 mg, 1.441 mmol). Amestecul format se agită la 30oC timp de 7 ore. Substanţa solidă se filtrează. Filtratul se concentrează sub presiune redusă, rezultă (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă, care se utilizează direct în etapa următoare a reacţiei fără purificare suplimentară.

CL-SM: (ES, m/z): 394.18 [M + H]+.

Etapa 15: Sinteza ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanolului

La o soluţie agitată de (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5] triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehidă (189 mg, 0.480 mmol) in MeOH uscat (6 mL) într-o atmosferă de azot se adaugă K2CO3 (199 mg, 1.441 mmol), apoi la 0 oC timp de 3 minute se injectează o soluţie de dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonat (185 mg, 0.961 mmol) in MeOH (1.5 mL). Amestecul de reacţie se încălzeşte lent până la 25oC şi apoi se agită la 25 oC timp de 16 ore. Amestecul format se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând MeOH/DCM (2% până la 10% MeOH in DCM), rezultă ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol.

CL-SM: (ES, m/z): 390.19 [M + H]+. 1H-RNM: (300 MHz, CDCl3, ppm): δ 8.17 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 6.43 (br s, 2H), 5.54 (dd, J = 5.7 Hz, J = 10.5 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.76 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.70-2.61 (m, 1H), 2.54 (s, 1H), 2.20-2.14 (m, 1H), 0.95 (s, 9H), 0.12 (d, J = 6.0 Hz, 6H).

Etapa 16: Sinteza (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-olului (23)

Într-o soluţie agitată de ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5] triazin-8-il)-3-((terţ-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (120 mg, 0.308 mmol) in THF (5 mL) într-o atmosferă de azot la 0°C timp de 2 minute se injectează o soluţie de TBAF în THF (0.462 mL, 0.462 mmol, 1.0 M). Amestecul se agită la 20°C timp de 26 ore. Amestecul format se concentrează sub presiune redusă. Reziduul se purifică prin flash cromatografie pe coloană cu silica gel, utilizând MeOH/DCM (5% până la 10% MeOH in DCM), se obţine produsul brut. Produsul brut (90 mg) se purifică apoi prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Coloana, X-bridge C18 19 × 150 mm; faza mobilă, apă cu NH4HCO3 (10 mmol/L) şi ACN (4% ACN până la 9% timp de 6 min, reţinere 95% timp de 2 minute, aproape până la 5% timp de 2 minute); Detector, UV 254 şi 220 nm. Fracţiile cu conţinut de produs se colectează şi se liofilizează, peste noapte, se obţine (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol.

CL-SM: (ES, m/z): 276.10 [M + H]+. 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.71 (br s, 1H), 8.43 (br s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 5.36 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.26-5.22 (m, 2H), 4.34 (dd, J = 4.8 Hz, J = 11.2 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 5.2 Hz, J = 11.6 Hz, 1H), 3.49 (dd, J = 7.6 Hz, J = 11.6 Hz, 1H), 3.37 (s, 1H), 2.44-2.37 (m, 1H), 2.16-2.12 (m, 1H).

Analiza RT polimerazei

Proteinele RT neprocesate de tip sălbatic şi 2 proteine RT mutante au fost exprimate în celule de Escherichia coli BL21 (DE3) şi purificate. Într-o exprimare succintă, substratul heterodimeric de acid nucleic, utilizat în reacţiile polimerazei transcriptazei HIV-1, a fost generat prin alipirea primerului ADN biotinilat într-o matrice ARN de 500 de nucleotide. Enzima RT HIV-1 (concentraţia finală de 50 pM) a fost combinată cu un compus inhibitor sau DMSO (10% DMSO în amestecul final de reacţie) în tampon de analiză (62,5 mM Tris-HCI, pH 7,8, 1,25 mM ditiotreitol, 7,5 mM MgCl2, 100 mM KCI, 0,03% CHAPS, 0,125 mM EGTA). Acest amestec a fost pre-incubat timp de 30 minute la temperatura camerei pe plăci de microtitrare. Reacţia de polimerizare a fost iniţiată prin adiţia substratului matrice/primer (concentraţia finală: 16,6 nM) şi dNTP (concentraţia finală: 2 pM dCTP, dGTP, dATP şi 66,6 nM Ru-dUTP). Peste 90 de minute de incubare la 37°C, reacţiile au fost stopate prin adiţia EDTA (25 mM). Amestecul rezultat a fost incubat timp de încă 5 minute la temperatura camerei, urmată de transferul soluţiei (50 µl) pe placa de avidină blocată de la Meso Scale Discovery (MSD). Amestecurile au fost incubate la temperatura camerei timp de 60 minute înainte de cuantificarea produsului de reacţie cu un dispozitiv de vizualizare ECL 6000. Datele rezultate sunt prezentate în Tabelul 2.

Tabelul 2

Exemplul nr. Structura dNTP IC50 (nM) 13 933 14 210 15 6237 16 1820 17 842 18 4150 19 3542 20 1292 21 905

Analiza Viking/CTG

Analiza Viking:

Evaluarea activităţii antivirale într-un test de infecţie multiplă cu HIV-1. Replicarea HIV-1 a fost monitorizată folosind clona D3 MT4-gag-GFP (aici şi în continuare se indică ca MT4-GFP), care reprezintă celule MT-4, modificate pentru a ascunde gena reporter GFP, expresia căreia depinde de proteinele tat şi rev exprimate de HIV-1. Înfecţia productivă a celulei MT4-GFP cu HIV-1 are drept rezultat exprimarea GFP aproximativ peste 24 de ore după infectare.

Celulele MT4-GFP au fost menţinute la 37°C/5% CO2/90% umiditate relativă în mediul RPMI 1640 suplimentat cu 10% ser fetal bovin, 100 U/ml penicilină/streptomicină şi 400 µg/ml G418 pentru a menţine gena reporter. Pentru infectare celulele MT4-GFP au fost plasate în acelaşi mediu fără G418 şi infectate peste noapte cu virusul H9IIIB la o multiplicitate aproximativă a infectării de 0,1 în aceleaşi condiţii de incubare. Celulele au fost apoi spălate şi resuspendate sau în RPMI 1640 conţinând ser normal uman de 10% sau 50% la o densitate de 1,6 x 105 celule/ml (condiţii: 10% sau 50% NHS), sau 100% ser uman normal la 2 x 105 celule/ml (condiţie 100% NHS). Plăcile cu compuşii au fost preparate prin distribuirea compuşilor, dizolvaţi în DMSO, pe plăci cu 384 de godeuri acoperite cu poli-D-lizină (0,2 µl/godeu), folosind un dozator acustic ECHO. Fiecare compus a fost testat în 10 puncte într-o diluţie de trei ori în serie (concentraţiile finale tipice: 8,4 µM - 0,43 nM). Controalele nu au conţinut nici un inhibitor (numai DMSO), dar conţineau o combinaţie de trei agenţi antivirali (efavirenz, indinavir, precum şi un inhibitor de transfer de catenă de integrază la concentraţii finale de 4 µm fiecare). Pe plăcile cu compuşii s-au adăugat celule (50 µl/godeu) şi celulele infectate au fost menţinute la 37°C/5% CO2/90% umiditate relativă.

Celulele infectate au fost cuantificate în două puncte temporale, peste ~ 48 ore şi ~ 72 ore după infectare, prin numărarea numărului de celule verzi în fiecare godeu cu ajutorul unui scaner Acumen EX3. Creşterea numărului de celule verzi timp de ~ 24 de ore indică raportul de reproducere, R0, care, de regulă, constituie 5-15 şi cum a fost demonstrat experimental se află în faza logaritmică (datele nu sunt prezentate). Inhibarea R0 se calculează pentru fiecare godeu şi IC50 s-a determinat prin selectarea curbei neliniare cu 4 parametri.

Analiza CTG:

Evaluarea citotoxicităţii în testul cu luminecenţă pentru viabilitatea celulelor CelITiter-Glo (CTG).

Celulele MT4-GFP au fost însămânţate în RPMI 1640 suplimentat cu 10% ser bovin fetal, 100 U/ml penicilină/streptomicină peste noapte la 37°C/5% CO2/90% umiditate relativă. Celulele au fost apoi spălate şi resuspendate în RPMI 1640 cu conţinut de 10% ser uman normal la o densitate de 0,8 x 105 celule/ml. Plăcile cu compuşii au fost preparate prin distribuirea compuşilor, dizolvaţi în DMSO, în godeuri pe plăci întunecate rigide cu 384 de godeuri (Corning 3571) folosind un dozator acustic ECHO (0,2 µl/godeu). Fiecare compus a fost testat pe 10 puncte într-o diluţie triplă în serie (concentraţii finale: 8,4 µM - 0,43 nM). Controalele conţineau DMSO. Pe plăcile cu compuşi s-au adăugat celulele (50 µl/godeu) şi celulele infectate s-au menţinut la 37°C/5% CO2/90% umiditate relativă. În conformitate cu instrucţiunile producătorului peste 48 ore de incubare în plăcile cu celule s-a adăugat reagentul CTG (Promega, G7573). Semnalele de luminescenţă au fost înregistrate pe cititor de placă EnVision (PerkinElmer). LD50 au fost determinate prin selectarea curbei neliniare cu 4 parametri. Datele înregistrate sunt prezentate în Tabelul 3, în care în calitate de control s-a inclus inhibitorul nucleozidic al transcriptazei inverse a HIV AZT (azidotimidină, zidovudină).

Tabelul 3

Structura Viking, IC50 (10%NHS)(nM) CTG (µM) AZT 37 >8.4 Exemplul nr. Structura Viking, IC50 (10%NHS)(nM) CTG (µM) 1 1.3 >8.4 2 1.6 >8.4 3 485 >8.4 4 4.0 >8.4 5 209 >8.4 6 128 >8.4 7 1030 >8.4 8 194 >8.4 9 10.2 >8.4 10 128 >8.4 11 17.2 >8.4 12 735 >8.4 22 38 >8.4 23 64 >8.4

Rezistenţa antivirală

Replicarea HIV-1 a fost monitorizată folosind clona D3 MT4-gag-GFP (aici şi în continuare numită MT4-GFP), care reprezintă celule MT-4 modificate pentru camuflarea genei reporter GFP, expresia căreia depinde de proteinele tat şi rev de HIV-1. Infecţia productivă a celulei MT4-GFP cu HIV-1 are drept rezultat exprimarea GFP aproximativ peste 24 de ore după infecţie. Celulele MT4-GFP au fost menţinute la 37°C/5% CO2/ 90% umiditate relativă în RPMI 1640, suplimentat cu 10% ser fetal bovin, 100 U/ml penicilină/streptomicină şi 400 µg/ml G418 pentru a menţine gena reporter. La 72 ore din momentul realizării analizei rezistenţei (placa 72 ore) şi la 24 de ore din momentul analizei de control (placa 24 ore), celulele MT4-GFP au fost spălate şi resuspendate în RPMI 1640, conţinând 10% ser uman normal cu o densitate fie de 1,6 x 105, sau 2,4 x 105 celule/ml (10% NHS). Plăcile cu compuşii au fost preparate prin distribuirea compuşilor dizolvaţi în DMSO în godeuri pe plăci cu 384 de godeuri pentru culturi celulare (0,205 µl/godeu), utilizând un dozator acustic ECHO. Fiecare compus a fost testat după 10 puncte într-o diluţie în serie triplă (concentraţiile tipice finale: 4,2 µM - 0,21 nM). Controalele nu au inclus nici un inhibitor (numai DMSO), dar conţineau o combinaţie de trei agenţi antivirali (efavirenz, indinavir şi un inhibitor un transfer de catenă cu concentraţii finale de 4 µm fiecare). Pe plăcile cu compuşi s-au adăugat celule (50 µl/godeu) şi au fost incubate la 37°C/5% CO2/90% umiditate relativă timp de 24 de ore. Celulele au fost spălate cu 5 x 40 µl de mediu RPMI 1640 suplimentat cu 10% NHS şi 100 U/ml penicilină/streptomicină. Placa 72 ore era întoarsă înapoi în incubator la 37ºC pentru o incubare suplimentară timp de 48 de ore. 40 µl de celule din fiecare godeu al plăcii de 24 ore sau plăcii de 72 ore (peste 48 de ore de incubare după spălare) au fost transferate pe o placă acoperită cu poli-D-lizină. Celulele au fost apoi infectate cu virusul H9IIIB la o multiplicitate aproximativă de infectare de 0,1 în aceleaşi condiţii de incubare.

Celulele infectate au fost cuantificate peste ~24 de ore după infectare prin numărarea numărului de celule verzi în fiecare godeu cu ajutorul unui scaner Acumen EX3. IC50 pentru compuşii din Tabelul 4 au fost determinate prin aproximare neliniară a unei curbe cu 4 parametri.

Analiza rezistenţei antivirale este destinat pentru evaluarea rezistenţei activităţii antivirale după îndepărtarea nucleozidelor. Datele din tabelul 4 demonstrează rezistenţa antivirală a compuşilor prezentei invenţii, comparativ cu nucleozidul AZT disponibil comercial. În publicaţia Research and Therapy, 2009, 6: 5, se subliniază semnificaţia rezistenţei antivirale.

Tabelul 4

Structura IC50 24 ore (nM) IC50 72 ore (nM) Deplasare multiplă IC50 72 ore/24 ore AZT 37 4713 127 Exemplul nr. Structura IC50 24 ore (nM) IC50 72 ore (nM) Deplasare multiplă IC50 72 ore/24 ore 1 0.8 36 45 2 6.6 193 29 3 470 2500 5.3 4 9.6 360 37.5 5 22000 >42000 >1.9 6 99 970 9.8 7 17000 17000 1 8 840 29000 34.5 9 37 270 7.3 10 170 1800 10.5 11 12.4 1950 157 12 880 25000 28 22 38 350 9.2 23 64 700 10.9

Timpul de înjumătăţire a adenozin deaminazei (ADA)

Datele, prezentate în tabelul, 5 a fost obţinute în rezultatul interacţiunii compusului substratului cu ADA de tip 1 uman în prezenţa tamponului Tris-HCl (pH 7,5) la 40°C şi consumul materiei prime s-a monitorizat prin CLSM. Timpul necesar pentru transformarea 50% în produsul inozin corespunzător, se indică în tabelul 5 ca T1/2. Se ştie, că dezaminarea cu adenozindezaminază reduce potenţialul terapeutic al inhibitorilor nucleozidici similari cu adenozina, in special in vivo [25, 26, 27, 28, 29, 30]. Compuşii prezentaţi în tabelul 5 s-au dovedit a avea grade diferite de stabilitate la adenozindezaminază, comparativ cu EDA ((2R,3S,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-il)-2-etinil-2-(hidroximetil) tetrahidrofuran-3-ol) şi deoxiadenozina naturală. Este posibil ca compuşii care sunt mai rezistenţi la ADA, vor avea proprietăţi farmacocinetice mai bune.

Referinţe: Journal of Medicinal Chemistry 1996, 39, 19, 3847; Chemical Pharmaceutical Bulletin. 1994, 42, 8, 1688-1690; Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2013), 57(12), 6254-6264; Collection of Czechoslovak Chemical Communications (2006), 71(6), 769-787; Microbiologica (1995), 18(4), 359-70; J Antivir Antiretrovir S10.doi:10.4172/jaa.S10-002.

Conversia compusului 2 în produsul de inozină 2A

7-((2R, 4S, 5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluor-3H-pirol[2,3-d]pirimidin-4(7H)-onă (2A)

Tamponul Tris-HCl (pH 7.5, 5 mL) se introduce într-un balon cu fund rotund de 25-mL. Amestecul se încălzeşte până la temperatura de fierbere timp de 30 minute. Apoi amestecul se răceşte până la 30°C şi se adaugă (2R, 3S, 5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (compusul din exemplul , 7 mg, 0.024 mmol), apoi se adaugă adenozindeaminază (3 mg, ~ 33 unităţi). Amestecul format se agită la 40°C şi se agită timp de 4 zile. Amestecul de reacţie se concentrează în vid şi reziduul se purifică prin CLÎP preparativă în condiţiile următoare:Coloana: X-Bridge C18, 19*150 mm, 5 µm; faza mobilă, apă cu 10 mmol bicarbonat de amoniu şi acetonitril (6% până la 30% acetonitril timp de 5 min, reţinere 95% timp de 2 min, aproape până la 40% timp de 2 min); Detector, UV 254 şi 220nm. Fracţiile cu conţinut de produs se colectează şi se liofilizează,se obţine compusul din titlu 2A sub formă de substanţă solidă.

1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 11.58 (brs, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.22 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.44 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.26-5.22 (m, 1H), 4.39-4.35 (m, 1H), 3.55-3.45 (m, 2H), 3.42 (s, 1H), 2.41-2.24 (m, 2H). 19F-RNM: (376 MHz, d6-DMSO, ppm): δ -165.50 (s, 1F). CL-SM: (ES, m/z): 294.15 [M + H]+.

Metodele generale, descrise pentru transformarea compusului 2 în 2A, au fost aplicate pentru fiecare din compuşii substratului în tabelul 5 şi rezultau cu formarea produselor de inozină, arătaţi pentru deoxi-adenozină şi EDA, precum şi produsele de inozină 1A, 2A, 11A, 22A, şi 23A. La utilizarea metodelor descrise transformarea compuşilor 4, 8 şi 9 în 4A, 8A şi 9A, respectiv, nu se detectează (NA = substratul nu este sensibil la adenozin deaminază).

Compusul 1A: 7-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-3H-pirol[2,3-d]pirimidin-4(7H)-onă: 1H-RNM: (400 MHz, CD3OD, ppm): δ 8.31 (s, 1H), 7.37 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.62 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.69 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 12.0 Hz, J = 30.0 Hz, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.67-2.54 (m, 2H). CL-SM: (ES, m/z): 276.00 [M + H]+.

Compusul 11A: 7-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)pirol[2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-onă: 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 10.25 (brs, 1H), 7.86 (s, 1H), 6.83 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.53 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.31-5.25 (m, 1H), 5.09-5.05 (m, 1H), 4.31-4.27 (m, 1H), 3.55-3.45 (m, 2H), 3.33 (s, 1H), 2.35-2.18 (m, 2H). CL-SM: (ES, m/z): 298.00 [M + Na]+.

Compusul 22A: 7-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-onă: 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.12 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 5.45 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.06 (brs, 1H), 4.33 (brs, 1H), 3.56 -3.46 (m, 2H), 3.32 (s, 1H), 2.42-2.33 (m, 1H), 2.28-2.22 (m, 1H). CL-SM: (ES, m/z): 277.10 [M + H]+.

Compusul 23A: 8-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazol[1,5-a][1,3,5]triazin-4(3H)-onă: 1H-RNM: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): δ 8.08 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 5.30 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.25 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.24-5.11 (m, 1H), 4.32 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 3.53 (dd, J1 = 11.6 Hz, J2 = 32.0 Hz, 2H), 3.36 (s, 1H), 2.36-2.29 (m, 1H), 2.16-2.10 (m, 1H). CL-SM: (ES, m/z): 274.80 [M - H]-.

Tabelul 5

Structura (Substratul) Produsul de inozină T1/2 Deoxi-adenozină <10 min EDA <60 min Exemplul nr. Structura (Substratul) Inozină nr. Produsul de inozină T1/2 1 1A 12 zile 2 2A 16 ore 4 4A NA 8 8A NA 9 9A NA 11 11A 3 ore 22 22A 10 min 23 23A 10 min

Deşi descrierea prezentată anterior dezvăluie principiile prezentei invenţii prin exemplele, oferite în scopul ilustrării, realizarea practică a invenţiei cuprinde toate variantele uzuale, adaptările şi/sau modificările, care intră în cadrul următoarelor revendicări. Dezvăluirea sau descrierea unui compus concret în revendicări (de exemplu, o probă) fără indicarea unei stereoconfiguraţii concrete sau cu desemnarea pentru mai puţin din toate centrele chirale, se intenţionează să cuprindă racemat, amestecurile racemice, fiecare enantiomer individual, amestecurile diastereoizomere şi fiecare diastereoizomer individual al compusului, acolo unde sunt posibile astfel de forme datorită prezenţei unui sau mai multor centre asimetrice. Toate publicaţiile, brevetele şi cererile de brevet, citate în prezenta descriere, sunt încorporate prin referinţă integral în descriere.

1. EP 2177527 A1 2010.04.21

Claims (27)

1. Compus cu formula de structură II II sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, în care: X reprezintă O; Y reprezintă -C≡CH; R1 reprezintă -H, , sau o modificare promedicamentoasă sub formă de mono-, di- sau trifosfat; R2 reprezintă -H; R3 reprezintă -H; R4 reprezintă -NH2; R5 reprezintă -H, -Cl, -F sau -NH2 şi R9 reprezintă -H, -F, -Cl, -I, -Br sau CH3.

2. Compus, conform revendicării 1, sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, în care R1 reprezintă -H. 3. Compus, conform revendicării 1 sau revendicării 2, care reprezintă:

1) (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 2) (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 3) (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 4) (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 5) (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-brom-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 6) (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 7) (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-iod-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 8) (2R,3S,5R)-5-(2,4-diamino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 9) (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol; 13) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 14) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 15) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 16) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-cloro-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; 17) ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-cloro-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia.

4. Compus, conform oricăreia din revendicările precedente, sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, selectat din grupul constând din: 1, 2, 4 şi 9 şi o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia.

5. Compus, conform oricăreia din revendicările precedente, care reprezintă; .

6. Compus, conform oricăreia din revendicările precedente, care reprezintă o sare farmaceutic acceptabilă a: .

7. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care reprezintă: .

8. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care este o sare farmaceutic acceptabilă a: .

9. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care reprezintă: .

10. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care este o sare farmaceutic acceptabilă a: .

11. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care reprezintă: .

12. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care este o sare farmaceutic acceptabilă a: .

13. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, selectat din grupul constând din: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat; ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat şi ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-clor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat.

14. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care reprezintă: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat.

15. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care reprezintă: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluor-7H-pirol[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat.

16. Compus, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 4, care reprezintă: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-cloro-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil tetrahidrogen trifosfat.

17. Compoziţie farmaceutică, care conţine un compus sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 16, şi un purtător farmaceutic acceptabil.

18. Compus sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 16, pentru utilizare în terapie.

19. Compus sau o sare farmaceutic acceptabilă, conform oricăreia din revendicările de la 1 la 16, pentru utilizare în inhibarea transcriptazei inverse HIV, tratamentul sau profilaxia infecţiei cu HIV sau tratamentul, profilaxia sau întârzierea debutului SIDA.

20. Compoziţie farmaceutică, conform revendicării 17, care conţine suplimentar unul sau mai mulţi agenţi anti-HIV, selectaţi din grupul constând din agenţi antivirali anti-HIV, imunomodulatori sau agenţi anti-infecţioşi.

21. Compoziţie farmaceutică, conform revendicării 20, în care agentul antiviral anti-HIV se selectează dintre unul sau mai mulţi agenţi antivirali din grupul constând din inhibitori ai proteazei HIV, inhibitori nucleozidici ai transcriptazei inverse HIV, inhibitori non-nucleozidici ai transcriptazei inverse HIV, inhibitori ai integrazei HIV, inhibitori ai fuziunii HIV, inhibitori de intrare HIV sau inhibitori de maturare HIV.

22. Combinaţie, care cuprinde un compus sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia, conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 16, şi unul sau mai mulţi agenţi anti-HIV selectaţi dintre agenţi antivirali HIV, agenţi anti-infecţioşi şi imunomodulatori, pentru utilizare în inhibarea transcriptazei inverse HIV, tratamentul sau profilaxia infecţiei cu HIV sau tratamentul, profilaxia sau întârzierea în debutul sau progresia SIDA.

23. Combinaţie pentru utilizare, conform revendicării 22, în care agentul anti-HIV reprezintă un agent antiviral selectat din grupul constând din inhibitori ai proteazei HIV, inhibitori nucleozidici ai transcriptazei inverse HIV, inhibitori non-nucleozidici ai transcriptazei inverse HIV, inhibitori ai integrazei HIV, inhibitori ai fuziunii HIV, inhibitori de intrare HIV şi inhibitori de maturare HIV. 24. Compoziţie farmaceutică, conform revendicării 20, sau o combinaţie pentru utilizare, conform revendicării 22, în care agentul anti-HIV se selectează dintre următorii:

Denumirea abacavir, ABC, Ziagen® abacavir +lamivudină, Epzicom® abacavir + lamivudină + zidovudină, Trizivir® amprenavir, Agenerase® atazanavir, Reiataz® AZT, zidovudină, azidotimidină, Retrovir® capravirină darunavir, Prezista® ddC, zalcitabin, dideoxicitidină, Hivid® ddI, didanosin, dideoxiinosină, Videx® ddI (enterosolubile), Videx EC® delavirdină, DLV, Rescriptor® dolutegravir, Tivicai® doravirină, MK-1439 efavirenz, EFV, Sustiva®, Stocrin® efavirenz + emtricitabină + tenofovir DF, Atripla® EFdA (4'-etinil-2-fluor-2'-deoxiadenozină) Elvitegravir emtricitabină, FTC, Emtriva® emtricitabină + tenofovir DF, Truvada® emvirină, Coactinon® enfuvirtid, Fuzeon® didanozină enterosolubilă, Videx EC® etravirină, TMC-125 fosamprenavir calciu, Lexiva® indinavir, Crixivan® lamivudină, 3TC, Epivir® lamivudină + zidovudină, Combivir® Lopinavir lopinavir + ritonavir, Kaletra® maraviroc, Selzentri® nelfinavir, Viracept® nevirapin, NVP, Viramune® PPL-100 (cunoscut de asemenea ca PL-462) (Ambrilia) raltegravir, MK-0518, Isentress™ Rilpivirină ritonavir, Norvir® saquinavir, Invirase®, Fortovase® stavudină, d4T, didehidrodeoxitimidin, Zerit® tenofovir DF (DF = disoproxil fumarat), TDF, Viread® Tenofovir, hexadeciloxipropil (CMX-157) Tenofovir alafenamid fumarat (GS-7340) tipranavir, Aptivus® vicriviroc următoarele medicamente, enumerate în tabel, sunt sub formă de sare: sulfat de abacavir, mesilat de delavirdină, sulfat de indinavir, sulfat de atazanavir, mesilat de nelfinavir şi mesilat de saquinavir.

25. Compoziţie farmaceutică, conform revendicării 20, sau combinaţie pentru utilizare, conform revendicării 22, în care agentul anti-HIV este doravirină.

26. Compoziţie farmaceutică, conform revendicării 20, sau combinaţie pentru utilizare, conform revendicării 22, în care agentul anti-HIV este fumarat de tenofovir disoproxil.

27. Compoziţie farmaceutică, conform revendicării 20, sau combinaţie pentru utilizare, conform revendicării 22, în care agentul anti-HIV este fumarat de tenofovir alafenamidă.