MD636Z

MD636Z - Procedeu de obţinere a glicozidelor flavonoide din Linaria vulgaris Mill.

Info

Publication number: MD636Z
Application number: MDS20120181A
Authority: MD
Inventors: Наталия МАЩЕНКО; Павел КИНТЯ; Елена КОЗАР; Леся БЕСПАЛКО; Леонид ГРИВЕНКОВ
Original assignee: Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы
Priority date: 2012-12-21
Filing date: 2012-12-21
Publication date: 2013-12-31
Also published as: MD636Y

Abstract

Invenţia se referă la chimia bioorganică şi poate fi utilizată pentru obţinerea glicozidelor flavonoide din Linaria vulgaris Mill.Procedeul, conform invenţiei, constă în aceea cămateria primă proaspăt colectată se mărunţeşte şi se supune extracţiei cu metanol de 3 ori, a câte 5 ore, la temperatura de 35…40°C, după care extractele se unesc şi se concentrează în vid la temperatura de 40°C până la un volum constant, apoi se extrag cu benzen substanţele balast, iar fracţiile obţinute se cromatografiază pe coloană de poliamidă cu eluarea în sistemul apă-metanol în raport de 4:1 şi se analizează în strat subţire de silicagel cu cloroform-metanol în raport de 3:1, respectiv, după care fracţiile ce conţin glicozide se unesc şi se concentrează în vid la temperatura de 40°C în prezenţa butanolului.

Description

Invenţia se referă la chimia bioorganică şi poate fi utilizată pentru obţinerea glicozidelor flavonoide din Linaria vulgaris Mill.

Este cunoscut procedeul de obţinere a linarozidelor din plante de Linaria vulgaris Mill. uscate la aer liber prin extragerea cu butanol saturat cu apă şi percolarea extractului concentrat pe coloană cu silicagel [1].

Dezavantajul procedeului cunoscut constă în aceea că se obţine o cantitate mică de glicozide, conţine un număr mai mare de operaţii costisitoare, extracţia cu butanol saturat cu apă duce la o diminuare a glicozidelor.

Problema pe care o soluţionează invenţia propusă constă în sporirea extracţiei, adică a cantităţii şi calităţii de glicozide flavonoide din Linaria vulgaris Mill.

Esenţa invenţiei constă în aceea că materia primă proaspăt colectată se mărunţeşte şi se supune extracţiei cu metanol de 3 ori, a câte 5 ore, la temperatura de 35…40°C, după care extractele se unesc şi se concentrează în vid la temperatura de 40°C până la un volum constant, apoi se extrag cu benzen substanţele balast, iar fracţiile obţinute se cromatografiază pe coloană de poliamidă cu eluarea în sistemul apă-metanol în raport de 4:1 şi se analizează în strat subţire de silicagel cu cloroform-metanol în raport de 3:1, respectiv, după care fracţiile ce conţin glicozide se unesc şi se concentrează în vid la temperatura de 40°C în prezenţa butanolului.

Rezultatul invenţiei constă în obţinerea glicozidelor flavonoide din Linaria vulgaris Mill. în cantităţi şi de calitate sporite faţă de cea mai apropiată soluţie.

Avantajul constă în aceea că în cea mai apropriată soluţie din 2 kg de masă vegetală se obţin 0,22 g/masă uscată, iar în procedeul revendicat din 0,5 kg de materie primă proaspăt colectată se obţin 3,75 g/masă uscată. Procedeul revendicat conţine un număr redus de etape faţă de cea mai apropiată soluţie, reactivele utilizate sunt mai ieftine, iar glicozidele flavonoide obţinute sunt mai pure şi într-o cantitate mai mare. Prin utilizarea reagentului universal, şi anume a metanolului se obţine o cantitate mai mare de glicozide flavonoide şi spectrul activităţii biologice a lor este mai larg.

Glicozidele flavonoide au fost obţinute din plante de Linaria vulgaris Mill. (fam. Scrophulariaceae) colectate în perioada înfloririi (iunie - iulie). Materia primă vegetală proaspătă se extrage la temperatura de 35…40°C cu metanol de 3 ori, a câte 5 ore. Extractul obţinut se concentrează în vid până la uscare, restul uscat obţinut se extrage cu benzen, iar fracţiile liofile se cromatografiază consecutiv pe coloane de poliamidă - Woelm cu eluarea în sistemul apă-metanol în raport de 4:1. Controlul asupra extragerii complete a produsului finit se efectuează prin cromatografiere în strat subţire de silicagel - Silufol cu ajutorul unui reactiv specific. Fracţiile obţinute unite conţin 6 glicozide flavonoide, ceea ce a fost confirmat cu ajutorul cromatografiei în strat subţire de silicagel în prezenţa martorilor autentici.

Exemplu de realizare a invenţiei

O cantitate de 0,5 kg de Linaria vulgaris Mill., materie primă proaspăt colectată (plantă întreagă) în timpul înfloririi, se mărunţeşte şi se extrage la temperatura de 35…40°C cu metanol în raport de 1:1, procedura repetându-se de 3 ori, a câte 5 ore. Extractele unificate se concentrează în vid la temperatura de 40°C până la volum apos constant. Rămăşiţa se extrage cu benzen de 2 ori câte 400 ml pentru îndepărtarea substanţelor de balast. Restul apos se concentrează în vid până la volumul de 100 ml şi se aplică pe coloană de poliamidă - Woelm (4 x 50 cm).

Eluarea se efectuează în sistemul apă-metanol în raport de 4:1. Fracţiile colectate câte 10 ml se analizează în strat subţire de silicagel pe plăci de Silufol în amestecul de solvenţi cloroform-metanol în raport de 3:1. Cromatogramele se developează cu reactivul benzidinic, care constă din benzidină - 0,5 g, acid acetic - 20 ml, etanol - 80 ml şi reactivul Ehrlich ce conţine p-dimetilaminobenzaldehidă - 1 g, acid clorhidric - 2 ml, etanol - 98 ml, după care plăcile se încălzesc până la 100°C. Eluarea se efectuează până la manifestarea reacţiei negative la prezenţa glicozidelor. Fracţiile cu conţinut de glicozide flavonoide se unesc şi se concentrează în vid la temperatura de 40°C, în prezenţa butanolului. Produsul final obţinut este suma glicozidelor flavonoide de 3,75 g care constă din 6 substanţe (glicozide flavonoide) cu următoarele valori ale fracţiilor pe plăci de Silufol: 0,27; 0,37; 0,45; 0,46; 0,48; 0,67 în sistemul de solvenţi cloroform:metanol în raport de 3:1. Suma glicozidelor flavonoide se testează cu privire la determinarea activităţii biologice pentru cultura de salată verde. Pentru aceasta, se tratează seminţele cu soluţie de glicozide flavonoide şi se determină capacitatea germinativă a seminţelor necondiţionate sau cu termen îndelungat de păstrare. Cu acest scop, seminţele de salată verde înmuiate în soluţii de glicozide flavonoide de diferite concentraţii (10-1…10-5%) timp de 2 ore, apoi spălate dublu cu apă, se usucă timp de 20…60 min şi se plasează pe foi de hârtie de filtru înmuiate cu apă distilată. Pentru încolţire se utilizează metoda de role de hârtie. Capacitatea de germinare s-a determinat la ziua a 10-a, iar energia de germinaţie la ziua a 4-a. Rezultatele testării sunt prezentate în tabel.

Tabel

Influenţa soluţiei de glicozide flavonoide asupra seminţelor de salată verde (soiul Moskovskii parnikovîi) cu termen îndelungat de păstrare

Substanţa Concentraţia substanţei, % Termenul de păstrare a seminţelor (4 ani) Energia de germinare, % Germinarea, % Apă Martor 8 65 Moldstim 0,1 8 59 0,01 25 73 0,001 31 74 0,0001 26 70 0,00001 20 68 Suma glicozidelor flavonoide 0,1 10 67 0,01 31 85 0,001 34 91 0,0001 26 74 0,00001 22 65

Analizând datele obţinute se observă că la tratarea înainte de semănat a seminţelor de salată verde cu calităţi reduse de germinare (păstrate timp de 4 ani) cu soluţii apoase de glicozide flavonoide cel mai semnificativ efect se obţine la utilizarea soluţiei cu concentraţia de 0,001%, la care energia germinativă şi germinaţia generală a seminţelor a sporit cu 26% în comparaţie cu martorul.

1. Maschenko N., Kintia P., Guriev A., Marchenko A., Basarello C., Piacente S., Pizza C. Glycosides from Linaria vulgaris Mill. Chemistry Journal of Moldova, v. 3; Nr. 2, 2008, p. 98...100

Claims

Procedeu de obţinere a glicozidelor flavonoide din Linaria vulgaris Mill., care constă în aceea că materia primă proaspăt colectată se mărunţeşte şi se supune extracţiei cu metanol de 3 ori, a câte 5 ore, la temperatura de 35…40°C, după care extractele se unesc şi se concentrează în vid la temperatura de 40°C până la un volum constant, apoi se extrag cu benzen substanţele balast, iar fracţiile obţinute se cromatografiază pe coloană de poliamidă cu eluarea în sistemul apă-metanol în raport de 4:1 şi se analizează în strat subţire de silicagel cu cloroform-metanol în raport de 3:1, respectiv, după care fracţiile ce conţin glicozide se unesc şi se concentrează în vid la temperatura de 40°C în prezenţa butanolului.