ME00194B - Peptidno jedinjenje biološke aktivnosti, njegovo dobijanje i njegova primjena - Google Patents
Peptidno jedinjenje biološke aktivnosti, njegovo dobijanje i njegova primjenaInfo
- Publication number
- ME00194B ME00194B MEP-2008-319A MEP2008319A ME00194B ME 00194 B ME00194 B ME 00194B ME P2008319 A MEP2008319 A ME P2008319A ME 00194 B ME00194 B ME 00194B
- Authority
- ME
- Montenegro
- Prior art keywords
- compound according
- ala
- alanine
- compound
- present
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Ovaj pronalazak se odnosi na peptidno jedinjenje biološke aktivnosti, koje naročito posjeduje antimikrobiotska svojstva, na njegovo dobijanje i primjene.
Description
PEPTIDNO JEDINJENJE BIOLOŠKE AKTIVNOSTI, NJEGOVO POBIJANJE I NJEGOVA PRIMENA
Ovaj pronalazak se odnosi na peptidno jedinjenje biološke aktivnosti, a naročito na njegovo posedovanje antimikrobiotskih svojstava, na njegovo dobijanje i na njegovu primenu.
Poznato je da neki mikroorganizmi, kada se živi ordiniraju humanim ili animalnim bićima, da su u stanju da ispoljavaju koristan efekat na zdravlje domaćina, naročito time što proizvode antimikrobiotske supstance.
Ovakvi organizmi se obično nazivaju probiotski organizmi.
Brojna ispitivanja su pokazala korisne efekte ovih probiotskih organizama kod humanih ili animalnih bića, naročito pri tretmanu gastrointestinalnih premećaja, kao što su dijareja, akutna dijareja i dijareja povezana sa uzimanjem medicinskih proizvoda.
Probiotski organizmi, koji su uglavnom proučeni do danas, su bakterije mlečne kiseline, ali objavljeno je takođe da i neki drugi živi organizmi imaju koristan efekat na zdravlje.
Ovi drugi organizmi su, na primer, Bacillus subtilis, Bacillus lichemiformis, Bacillus coagulans, Bacillus cereus, Bacillus clausil, Bacillus polyfermentans.
Među ovima, već mnogo godina u farmaceutskim preparatima, koji su na tržištu pod imenom Enterogermina®, koristi se Bacillus clausii.
Ovaj farmaceutski preparat je posebno namenjen za borbu protiv gastorintestinalnih poremećaja i sastoji se od smeše četiri soja Bacillus clausii.
Antimikrobiotska biološka aktivnost ovih probiotskih organizama obično je povezana sa prirodnim stvaranjem jedinjenja sa antimikrobiotskom aktivnošću, kao što su lantibiotici. Tako, sojevi Bacillus clausii, Streptomyces mutans, Lactococcus lactis stvaraju subtilin, mutacine i nisine, respektivno.
Danas se koriste brojni antibiotici kao terapeutske supstance pri tretmanu infektivnih bolesti, ali patogeni postaju sve više rezistentni na farmaceutske agense koji se koriste. Neki od njih su već poznati kao "multi-rezistentni”, pa je ponekad izutetno teško tretirati infekcije koje oni izazivaju.
Stoga se neprestano traže novi molekuli koji imaju antibiotska svojstva.
Svrha ovog pronalaska je udovoljavanje ovom zahtevu, pružanjem jedinjenja sa antimikrobiotskom aktivnošću, koje je dobijeno iz Bacillus clausii.
Prvi predmet ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje sa antimikrobiotskom aktivnošću.
Drugi predmet ovog pronalaska se odnosi na postupak dobijanja jedinjenja iz ovog pronalaska sa antimikrobiotskom aktivnošću.
Treći predmet ovog pronalaska se odnosi na farmaceutski preparat iz ovog pronalaska koji sadrži jedinjenja sa antimikrobiotskom aktivnošću.
Četvrti predmet ovog pronalaska se odnosi na upotrebu jedinjenja iz ovog pronalaska sa antimikrobiotskom aktivnošću.
U skladu sa prvim aspektom, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje sa antimikrobiotskom aktivnošću.
Dakle, izolovan je i karakterisan molekul koji stvara Bacillus clausii, a koji ispoljava antimikorbiotsku aktivnost.
Jedinjenje iz ovog pronalaska sa antimikrobiotskom aktivnošću je peptidne prirode i može se dobiti iz kulture Bacillus clausii u pogodnom medijumu pre sporulacije, sakupljanjem supernatanta kulture posle centrifugiranja i filtriranja, pa ekstrakcijom frakcije sa antimikrobiotskom aktivnošću.
Jedinjenje iz ovog pronalaska, koje je uglavnom aktivno prema Gram-pozitivnim bakterijama, može se dobiti iz Bacillus clausii i ima molekulsku težinu od 2107,5 Da, određenu masenom spektrometrijom, postupkom MALDI TOF i ESI.
U skladu sa drugom karakteristikom, jedinjenje iz ovog pronalaska je lantibiotik, a ima lantioninske mostove i modifikovane aminokiseline u sekvenciji njegovog peptida.
U skladu sa jednom od karakteristika, jedinjenje iz ovog pronalaska sadrži sledeću sekvenciju aminokiselina i derivata aminokiselina: Phe - Dhb - Ala - Val - Dha - Phe - Ala - Abu - Pro - Gly - Ala - Gly - Glu - Dhb - Gly - Ala - Phe -Asn - Ala - Phe - Ala, gde Dhb predstavlja didehidroaminobutirat;
Dha predstavlja didehidroalanin; i
Abu predstavlja aminobutirat.
Jedinjenje iz ovog pronalaska sadrži dva lantioninska mosta, jedan između alanina u položaju 3 i alanina u položaju 7, a drugi između alanina u položaju 16 i alanina u položaju 21.
Pored toga, jedan metil-lantioninski most je prisutan između ostatka aminobutirata u položaju 8 i alanina u položaju 11. Četvrti most je prisutan između amino-vinil-cisteinske grupe C-terminala i ostatka alanina u položaju 19.
Predstavljeno sa postojećim mostovima, jedinjenje iz ovog pronalaska ima sledeću sekvenciju:
gde su Dha, Dhb i Abu definisani gore.
U skladu sa drugim aspektom, ovaj pronalazak se odnosi na postupak dobijanja jedinjenja iz ovog pronalaska.
U skladu sa ovim pronalaskom, jedinjenje iz ovog pronalaska se može ekstrahovati iz Bacillus clausii u skladu sa sledećim postupkom.
Postupak dobijanja jedinjenja iz ovog pronalaska sastoji se od sledećih koraka:
- kultivisanja sojeva Bacillus clausii u pogodnom medijumu, do sporulacije sojeva;
- sakupljanja supernatanta kulture posle centrifugiranja i filtriranja;
- ekstrakcije u čvrstoj fazi i eluiranja dobijene frakcije.
Ukoliko je potrebno, dobijena frakcija, koja odgovaraja molekulu iz ovog pronalaska, može se prečistiti tečnom hromatografijom visoke performanse (HPLC).
U skladu sa drugom realizacijom, jedinjenje iz ovog pronalaska se može dobiti konvencionalnom hemijskom sintezom, u skladu sa postupcima koji su poznati onome koje verziran u stanje tehnike.
Jedinjenje iz ovog pronalaska pokazuje antimikrobiotsku aktivnost protiv Gram-pozitivnih bakterija. Posebno, ono pokazuje antimikrobiotsku aktivnost protiv S. aureus, Enterococcus faecium, Micrococcus sp, Lactococcus lactis, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes i prema Gram-pozitivnim bakterijama usne duplje.
Zahvaljujući lantobiotskom karakteru, jedinjenje iz ovog pronalaska može da pokazuje širi spektar biološke aktivnosti, na primer, antivirusnu, antiparazitsku ili imunomodulatornu aktivnost.
Prema tome, jedinjenje iz ovog pronalaska se može koristiti za dobijanje medicinskih proizvoda.
Dakle, u skladu sa drugim aspektima, ovaj pronalazak se odnosi na medicinske proizvode koji sadrže jedinjenje iz ovog pronalaska.
Ovi medicinski proizvodi nalaze primenu u terapiji, a naročito u tretmanu i prevenciji infektivnih bolesti.
Ovi medicinski proizvodi takođe nalaze primenu u tretmanu i/ili prevenciji intestinalnih poremećaja, na primer, pri tretmanu i prevenciji intestinalne disbioze i endogenog poremećaja vitamina, kao i u adjunktivnom tretmanu prilikom obnavljanja intestinalne mikrobiotske flore, koja je izmenjena usled posledica od antibiotskog tretmana ili hemoterapije.
Oni takođe nalaze primenu u prevenciji i tretmanu dijareje, a naročito akutne dijareje i djareje povezane sa upotrebom medicinskih proizvoda.
U skladu sa drugim aspektima, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutske preparate koji sadrže aktivni princip, jedinjenje u skladu sa ovim pronalaskom, za tretman i/ili prevenciju gore opisanih patologija. Ovi farmaceutski preparati sadrže efikasne doze jedinjenja iz ovog pronalaska, kao i najmanje jedan farmaceutski efikasan dodatak.
Pomenuti dodatak se, u skladu sa farmaceutskim oblikom i željenim putem ordiniranja, bira između uobičajenih dodataka koji su poznati onom ko je verziran u stanje tehnike.
U farmaceutskim preparatima iz ovog pronalaska za oralnu, sublingvalnu, subkutanu, intramuskularnu, intravenoznu, površinsku, lokalnu, intratrahealnu, nazalnu, transdermalnu i rektalnu upotrebu, ovo jedinjenje se može ordinirati animalnim i humanim bićima, u jediničnim dozama, pomešano sa konvencionalnim farmaceutskim dodacima, za prevenciju ili tretman poremećja i bolesti pomenutih gore.
Odgovarajuće jedinične doze sadrže se u oblicima za oralni put ordiniranja, kao što su tablete, meke ili tvrde kapsule, prahovi, granule i oralni rastvori ili suspenzije; zatim u sublingvalnim, bukalnim, intratrahealnim, intraokularnim, nazalnim i inhalacionim oblicima za ordiniranje; površinskim, transdermalnim, subkutanim, intramuskularnim ili intravenoznim oblicima za ordiniranje; rektalnim oblicima za ordiniranje i kao implantati. Kod površinske primene, jedinjenje u skladu sa ovim pronalaskom se može koristiti u obliku krema, gelova, masti ili losiona.
Jedinjenje iz ovog pronalaska se može odrinirati najpodesnijim putem, sa dozom koja naročito zavisi od prirode infekcije, od vrste domaćina u pitanju, od starosti domaćina, mase i opšteg stanja, od istovremenih tretmana koji se obavljaju, kao i od odgovora domaćina na tretman i na terapeutske principe.
Obično se za ordiniranje humanim bićima preparat ordinira oralnim putem, u obliku farmaceutskog preparata spora. Na primer, u dozi može biti oko 10><109 spora na dan, na primer (1 do 8)*109 spora na dan, a naročito (2 ili 4 ili 6)x109 spora na da, u jednoj dozi ili u nekoliko doza.
Mogu postojati posebni slučajevi u kojima su više ili niže doze prikladne; i te doze su još uvek unutar obima ovog pronalaska.
U skladu sa sledećim aspektima, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu jedinjenja iz ovog pronalaska za dobijanje medicinskog proizvoda namenjenog za prevenciju i/ili tretman gore opisanih patologija.
U skladu sa sledećim aspektima, ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak tretmana gore navedenih patologija, koji se sastoji od ordiniranja pacijentu efikasne doze jedinjenja iz ovog pronalaska.
U skladu sa sledećim aspektima, jedinjenje iz ovog pronalaska se takođe može upotrebiti kao aditiv u kozmetičkim ili prehrambenim preparatima.
U skladu sa ovom upotrebom, jedinjenje iz ovog pronalaska se dodaje u količini koja je dovoljna da inhibira napredovanje rasta bakterija u kozmetičkim ili prehrambenim preparatima, obezbeđujući tako njihovu očuvanost.
Dole dati primeri ilustruju ovaj pronalazak, ne ograničavajući ga time.
1. Pobijanje molekula
Dobijanje supernatanta
0/C soj Bacillus clausii (dobijen iz farmaceutskog preparata koji se prodaje pod tržišnim nazivom Enterogermina®) kultiviše se tri dana u Mueller-Hinton-ovom medijumu, na 37°C, sa 180 o/min, dok ne dođe do sporulacije soja.
Kultura se zatim centriifugira, a supernatant filtrira kroz membranu sa veličinom pora 0,45 pm, da bi se uklonile eventualno zaostale ćelije.
Ekstrakcija
Jedinjenje sa antimikrobiotskom aktivnošću se ekstrahuje na čvrstoj fazi, u kartridžu Sep Pal plus Cis (VVaters). U tu svrhu, 150 mL supernatanta, dobijenog u prethodnom koraku, se istaloži na kartridžu, a eluiranje se obavlja sa 100% metanolom, posle tri sukcesivna ispiranja sa 25 mM NH4HC03, pH 8; 25 mM NH4HCO3 pH 8 + 10% metanol i 25 mM NH4HCO3, pH 8 + 50% metanol.
Kombinuju se sve aktivne frakcije koje se eluiraju sa 100% metanolom, pa se koncentrišu vakuum isparavanjem do faktora smanjenja zapremine 10.
Ovaj koncentrat se čuva na -20°C. Nije opažen gubitak aktivnosti posle 6 meseci skladištenja pod ovim uslovima.
Prečišćavanje
Prečišćavanje, nakon homogenizacije supstance u čvrstoj fazi obavlja se pomoću HPLC.
Prvi, semi-preparativni korak se obavlja na koloni C4 Synchropack, 100x8 mm. Sakupljaju se i kombinuju frakcije eluata koje pokazuju antimikrobiotsku aktivnost. Čistoća jedinjenja dobijenog na kraju ovog koraka je veća od 80%, a prinos ekstrakcije-prečišćavanja je oko 6 mg L"1 supernatanta.
Drugi analitički korak se obavlja na koloni Ci Bischoff 150x4,6 mm. Sakupljaju se i kombinuju frakcije eluata koje pokazuju antimikrobiotsku aktivnost. Čistoća jedinjenja dobijenog na kraju ovog koraka je veća od 90%.
2. Ispiitivanje strukture Određivanje molekulske težine
Prečišćeno jedinjenje, dobijeno u gornjem Primeru 1, ima molekulsku težinu 2107,5 Da, što je određeno masenom spektrometrijom, koristeći postupak MALD TOF, a potvrđeno masenom spektrometrijom, upotrebom postupka ESI.
UV/vidljivi apsorpcioni spektar
Jedinjenje iz ovog pronalaska absorbuje u ultravioletnoj oblasti i ima poseban pik na 265 nm, što je kompatibilno sa aromatičnim aminokiselinama u strukturi.
Sastav aminokiselina
Nakon totalne hidrolize sa 5,7 M HCI, pod vakuumom, tokom 16 h, na 115°C, prisustvo raznih aminokiselina je detektovano u strukturi prečišćenog jedinjenja.
Ispitivanje raznih enantiomernih oblika aminokiselina
Enantiomerni L i D oblici aminokiselina koje izgrađuju sekvenciju ovog jedinjenja sa antimikrobiotskom aktivnošću, ispitivani su nakon totalne kisele hidrolize, derivatizacijom sa Na-(2,4-dinitro-5-fluorofenil)-L-alanin amidom (Marfey-ev reagens) u skladu sa postupkom koji je opisao Szokan (J. Chromato., 444, 115122 (1988)). Rezultati su pokazali da su svi ostaci aminokiselina, koje izgrađuju antimikrobiotski molekul, enantiomeri L oblika.
Enzimatski i hemijski tretman strukture
Potpuni gubitak aktivnosti posle enzimatskog tretmana sa Pronase-om, potvrđuje peptidni karakter novog antibiotskog jedinjenja.
Disulfidni mostovi su isključeni, pošto se test specifičan na cistein pokazao negativnim. Nasuprot, prisustvo lantioninskih mostova, osetljivih na redukcioni tretman u alkalnom medijumu (Meyer, Anal. Biochem. 223, 185-190 (1994))može da objasni gubitak aktivnosti opažen u prisustvu p-merkaptoetanola, nakon strukturne modifikacije, detektovane pomoću HPLC sa reversnom fazom. Pad aktivnosti, ali delimičan, koji je izmeren na kraju manje drastičnog tretmana, kao što je inkubacija u neutralnom pH, u prisustvu 25 mM DTT, može biti rezultat specifične redukcije didehidro aminokiselina prisutnih u strukturi. Ova opažanja čine mogućim formulisanje hipoteze u skladu sa kojom je antimikrobiotski molekul, koji stvara Bacillus dausii, lantobiotik. Ovu familiju antibiotika normalno karakteriše prisustvo lantioninskih mostova i modifikovanih aminokiselina u njihovoj strukturi.
Sekvencija natlvnog molekula
Sekvencioniranje je obavljeno korišćenjem automatskog sekvencera Procise 491 A (Applied Biosystem), sa Edman-ovom rekurentnom degradacijom, polazeći sa N-terminala. Formirane PTH aminokiseline se analiziraju pomoću HPLC sa reversnom fazom, na koloni microbore Ci8. Sekvencioniranje antibiotskog molekula u nativnom stanju se blokira na kraju prvog koraka Edman-ove hemijske degradacije. Jedini identifikovani ostatak odgovara fenilalaninu, koji zauzima poziciju na N-terminalu.
Sekvencioniranje molekula posle hemijske modifikacije
Informacija koja se odnosi na potencijalnu sekvenciju nove antimikrobiotske supstance, koju stvara Bacillus dausii, izvodi se iz sekvencije kodiranog gena, u kombinaciji sa informacijama dobijenim iz analize sastava aminokiselina, i iz ponašanja u redukcionom medijumu, otkrivajući prisustvo post-translacionih modifikacija, karakterističnih za lantobiotike.
Prisustvo didehidro-aminiokiselina i lantioninskih mostova u strukturi je na početku blokirajuće sekvencije molekula u nativnom stanju. Didehidro-aminokiseline, kao što je Dha (didehidroalanin) i Dhb (didehidroaminobutirat) su određene tokom Edma-ove hemijske degradacije, blokirajući tako napredovanje sekvencioniranja. Ovi isti ostaci, Dha i Dhb, ne mogu da se detektuju analizom sastava aminokiselina posle totalne hidrolize iz istih razloga, a njihovo deaminovanje čini nenefikasnom reakciju derivatizacije sa 6-aminohinolil-N,N-hidroksisukcinimidil karbamatom, ili sa AQC (VVaters), specifičnim za primarne funkcije amina.
Sa ciljem prevazilaženja problema povezanih sa prisustvom modifikovanih aminokiselina i lantioninskih mostova, primenjena je dvostruka hemijska reakcija na peptidni antibiotik, pre njegovog sekvencioniranja. Korišćeni postupak je prilagođen, iz rada Smith, Eur. J. Biochem., 267, 6819-6816 (2000). U tu svrhu, 50 mmol prečišćenog peptida se razmuti u 10 pL H20 + 4 mg NaBH4. Doda se 190 pL denaturisanog i antioksidantnog rastvora (570 mg gvanidinhlorida + 0,1 ml_ N-etilmorfolina, podešenih na pH 8,5, u konačnoj zapremini od 1 mL, u vodi), a zatim se reakciona smeša tokom 72 h inkubira u struji azota, na 37°C.
Ovaj tretman specifično redukuje didehidro-aminokiseline, bez uticanja na lantanoidne mostove.
Ovako redukovan peptid se regeneriše u Prosorb koloni (Perkin Elmer), opremljenoj sa PVDF membranom. Posle ispiranja membrane sa 200 pL 0,1% TFA, peptid, absorbovan na ovom nosaču, se tokom 1 h, na 50°C, podvrgava drugoj redukciji u prisustvu etantiola (dodaje se 210 pL rastvora koji se sastoji od 280 pL metanola + 200 pL FI2O + 56 mL NaOH + 60 pL etantiola).
Kovalentna struktura antibiotskog molekula proizvedenog sa Bacillus clausll Kovalentna struktura je saglasna sa svim dobijenim podacima. Molekulska težina, izračunata na osnovu masa mono-izotopskih ostataka, je 2107,5 Da. Antimikrobiotski molekul, koji izlučuje Bacillus clausij je lantobiotik koji poseduje 4 lantioninska mosta i metilantionin, kao i 3 ostatka didehidro-aminokiseline u njegovoj strukturi. Struktura je saglasna sa nađenom masom, od 2107,5 Da, zatim sa rezultatima dobijenim posle obavljanja hemijskih modifikacija na molekulu, i sa sekvencijom aminokiselina, izvedenom na osnovu gena koji kodira njegovo stvaranje, nađenom u B. clausii. Ovu strukturu je potvrdila i NMR analiza.
Druga tri soja (N/R, SIN, T) Bacillus clausii, prisutna u farmaceutskom preparatu Enterogermina®, pokazuju isti profil antimikrobiotske aktivnosti kao i O/S soj.
Claims (12)
1. Peptidno jedinjenje koje pokazuje antimikrobiotsku aktivnost, naznačeno time, što se može dobiti iz kulture Bacillus clausii, u pogodnom medijumu do sporulacije, sakupljanjem supernatanta kulture posle centrifugiranja i filtriranja, pa ekstrakcijom frakcije sa antimikrobiotskom aktivnošću.
2. Jedinjenje prema Zahtevu 1, naznačeno time, što ima molekulsku težinu 2107,5 Da.
3. Jedinjenje prema Zahtevima 1 ili 2, naznačeno time, što predstavlja lantibiotik i ima lantioninske mostove i modifikovane aminokiseline.
4. Jedinjenje prema bilo kom od Zahteva 1 do 3, naznačeno time, što poseduje sledeću sekvenciju aminokiselina: Phe - Dhb - Ala - Val - Dha - Phe - Ala - Abu - Pro - Gly - Ala - Gly - Glu -Dhb - Gly - Ala - Phe Asn - Ala - Phe - Ala, gde Dhb predstavlja didehidroaminobutirat; Dha predstavlja didehidroalanin; i Abu predstavlja aminobutirat.
5. Jedinjenje prema Zahtevu 4, naznačeno time, što ima dva lantioninska mosta, jedan između alanina u položaju 3 i alanina u položaju 7, i drugi između alanina u položaju 16 i alanina u položaju 21; metil-lantioninski most između ostatka aminobutirata u položaju 8 i alanina u položaju 11, i četvrti most između amino-vinil-cisteinske grupe na C-terminalu i ostatka alanina u položaju 19.
6. Jedinjenje prema bilo kom od Zahteva 1 do 5, naznačeno time, što su ostaci aminokiselina enantiomeri u L obliku.
7. Postupak dobijanja jedinjenja prema bilo kom od Zahteva 1 do 6, naznačen time, što se sastoji od koraka: - kultivisanja sojeva Bacillus clausii u pogodnom medijumu, do sporulacije sojeva; - sakupljanja supernatanta kulture posle centrifugiranja i filtriranja; - ekstrakcije u čvrstoj fazi i eluiranja dobijene frakcije; - a ukoliko je potrebno, prečićavanja dobijene frakcije tečnom hromatografijom visoke performanse (HPLC).
8. Medicinski proizvod, naznačen time, što sadrži jedinjenje prema bilo kom od Zahteva 1 do 6.
9. Farmaceutski preparat, naznačen time, što sadrži jedinjenje prema bilo kom od Zahteva 1 do 6 i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv dodatak.
10. Upotreba jedinjenja prema bilo kom od Zahteva 1 do 6 za dobijanje medicinskog proizvoda namenjenog tretmanu i/ili prevenciji intestinalnih poremećaja ili infektivnih bolesti.
11. Upotreba jedinjenja prema Zahtevau 10, za tretman i/ili prevenciju intestinalne disbioze i endogenog poremećaja vitamina, za obnavljanje intestinalne mikrobiotske flore i prevenciju dijareje, a naročito akutne dijareje ili dijareje povezane sa upotrebom medicinskih proizvoda.
12. Upotreba jedinjenja prema bilo kom od Zahteva 1 do 6, kao aditiva u kozmetičkim ili prehrambenim preparatima.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT000678A ITMI20060678A1 (it) | 2006-04-06 | 2006-04-06 | Composto peptidico ad attivita' b iologica sua preparazione e sue applicazioni |
| PCT/IB2007/002003 WO2007113691A2 (en) | 2006-04-06 | 2007-04-06 | Peptide compound with biological activity, its preparation and its application |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ME00194B true ME00194B (me) | 2010-10-10 |
Family
ID=38481126
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MEP-319/08A MEP31908A (bs) | 2006-04-06 | 2007-04-06 | Peptidno jedinjenje biološke aktivnosti, njegovo dobijanje i njegova primjena |
| MEP-2008-319A ME00194B (me) | 2006-04-06 | 2007-04-06 | Peptidno jedinjenje biološke aktivnosti, njegovo dobijanje i njegova primjena |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MEP-319/08A MEP31908A (bs) | 2006-04-06 | 2007-04-06 | Peptidno jedinjenje biološke aktivnosti, njegovo dobijanje i njegova primjena |
Country Status (35)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8691773B2 (me) |
| EP (1) | EP2013234B1 (me) |
| JP (1) | JP5196407B2 (me) |
| KR (1) | KR101556414B1 (me) |
| CN (1) | CN101415725B (me) |
| AR (1) | AR060350A1 (me) |
| AT (1) | ATE535540T1 (me) |
| AU (1) | AU2007232210B2 (me) |
| BR (1) | BRPI0710846A2 (me) |
| CA (1) | CA2646892C (me) |
| CL (1) | CL2007000955A1 (me) |
| CR (1) | CR10302A (me) |
| DO (1) | DOP2007000065A (me) |
| EA (1) | EA015943B1 (me) |
| EC (1) | ECSP088785A (me) |
| GE (1) | GEP20115282B (me) |
| GT (1) | GT200800204A (me) |
| HN (1) | HN2008001516A (me) |
| IL (1) | IL194325A (me) |
| IT (1) | ITMI20060678A1 (me) |
| JO (1) | JO2739B1 (me) |
| MA (1) | MA30465B1 (me) |
| ME (2) | MEP31908A (me) |
| MX (1) | MX2008012730A (me) |
| MY (1) | MY151092A (me) |
| NI (1) | NI200800265A (me) |
| NO (1) | NO341813B1 (me) |
| NZ (1) | NZ571477A (me) |
| PE (1) | PE20080351A1 (me) |
| PY (1) | PY0709840A (me) |
| TN (1) | TNSN08377A1 (me) |
| TW (1) | TWI380994B (me) |
| UA (1) | UA92793C2 (me) |
| WO (1) | WO2007113691A2 (me) |
| ZA (1) | ZA200808328B (me) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LU92906B1 (en) | 2015-12-14 | 2017-06-20 | Luxembourg Inst Science & Tech List | Method for enzymatically modifying the tri-dimensional structure of a protein |
| CN106366168B (zh) * | 2016-08-26 | 2020-09-15 | 上海交通大学 | 羊毛硫肽类抗菌肽及其脱氢衍生物的制备方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1138560C (zh) * | 1995-06-23 | 2004-02-18 | Ambi股份有限公司 | 控制对抗生素耐药的革兰氏阳性细菌的方法和治疗感染的方法 |
| US5985823A (en) * | 1997-06-09 | 1999-11-16 | Ambi Inc. | Method for the treatment of diarrheal disease and for eliminating particular bacterial populations from the colon |
| US5932469A (en) * | 1997-06-10 | 1999-08-03 | University Of Florida | Antimicrobial polypeptide, nucleic acid, and methods of use |
| ITMI20021800A1 (it) * | 2002-08-07 | 2004-02-08 | Proge Farm Srl | Composizione farmaceutica e/o nutraceutica comprendente una associazione di microorganismi probiotici non sporigeni e spore di bacillus subtilis e/o clausii. |
| CA2404356A1 (en) * | 2002-09-18 | 2004-03-18 | Canadian Inovatech Inc. | Gram-positive antibacterial composition and method for use |
| US7354888B2 (en) * | 2004-11-10 | 2008-04-08 | Danisco A/S | Antibacterial composition and methods thereof comprising a ternary builder mixture |
-
2006
- 2006-04-06 IT IT000678A patent/ITMI20060678A1/it unknown
-
2007
- 2007-04-03 PY PY200700709840A patent/PY0709840A/es unknown
- 2007-04-03 DO DO2007000065A patent/DOP2007000065A/es unknown
- 2007-04-04 CL CL2007000955A patent/CL2007000955A1/es unknown
- 2007-04-04 AR ARP070101421A patent/AR060350A1/es not_active Application Discontinuation
- 2007-04-04 JO JO2007115A patent/JO2739B1/en active
- 2007-04-04 PE PE2007000409A patent/PE20080351A1/es not_active Application Discontinuation
- 2007-04-04 TW TW096112195A patent/TWI380994B/zh not_active IP Right Cessation
- 2007-04-06 EP EP07735006A patent/EP2013234B1/en active Active
- 2007-04-06 CA CA2646892A patent/CA2646892C/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-04-06 MX MX2008012730A patent/MX2008012730A/es active IP Right Grant
- 2007-04-06 CN CN2007800121521A patent/CN101415725B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2007-04-06 GE GEAP200710966A patent/GEP20115282B/en unknown
- 2007-04-06 WO PCT/IB2007/002003 patent/WO2007113691A2/en not_active Ceased
- 2007-04-06 AU AU2007232210A patent/AU2007232210B2/en not_active Ceased
- 2007-04-06 KR KR1020087024170A patent/KR101556414B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2007-04-06 ME MEP-319/08A patent/MEP31908A/xx unknown
- 2007-04-06 BR BRPI0710846-0A patent/BRPI0710846A2/pt active Search and Examination
- 2007-04-06 JP JP2009503687A patent/JP5196407B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-04-06 AT AT07735006T patent/ATE535540T1/de active
- 2007-04-06 NZ NZ571477A patent/NZ571477A/en not_active IP Right Cessation
- 2007-04-06 UA UAA200812913A patent/UA92793C2/ru unknown
- 2007-04-06 EA EA200870414A patent/EA015943B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-04-06 ME MEP-2008-319A patent/ME00194B/me unknown
-
2008
- 2008-09-19 CR CR10302A patent/CR10302A/es unknown
- 2008-09-24 IL IL194325A patent/IL194325A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-09-25 TN TNP2008000377A patent/TNSN08377A1/en unknown
- 2008-09-30 ZA ZA2008/08328A patent/ZA200808328B/en unknown
- 2008-10-01 EC EC2008008785A patent/ECSP088785A/es unknown
- 2008-10-02 GT GT200800204A patent/GT200800204A/es unknown
- 2008-10-03 NI NI200800265A patent/NI200800265A/es unknown
- 2008-10-03 HN HN2008001516A patent/HN2008001516A/es unknown
- 2008-10-06 US US12/245,841 patent/US8691773B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-04 MA MA31358A patent/MA30465B1/fr unknown
- 2008-11-05 NO NO20084671A patent/NO341813B1/no not_active IP Right Cessation
- 2008-11-06 MY MYPI20084458 patent/MY151092A/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Danquah et al. | Pharmaceutical applications of bioactive peptides | |
| KR20180002710A (ko) | 항균 요법 | |
| US12115209B2 (en) | ROMO1-derived antimicrobial peptides including lysine substitution and variants thereof | |
| WO1993014640A1 (fr) | Agent antibacterien et traitement d'articles au moyen de cet agent | |
| KR101629386B1 (ko) | 왕지네로부터 유래한 항균 펩타이드 스콜로펜드라신-7 및 그의 조성물 | |
| Jin et al. | Characterization of antimicrobial peptides isolated from the skin of the Chinese frog, Rana dybowskii | |
| EP2548883A2 (en) | Peptide compounds that can be used as antibacterial agents | |
| CN102046652B (zh) | 来自Actinomadura namibiensis的高度桥联的肽 | |
| JP5202649B2 (ja) | ヘリコバクター・ピロリ菌のリボソームタンパク質ｌ１由来の新しい抗生ペプチド及びその使用 | |
| ME00194B (me) | Peptidno jedinjenje biološke aktivnosti, njegovo dobijanje i njegova primjena | |
| CN105753939A (zh) | 芳香族阳离子肽及其用途 | |
| Velayutham et al. | Aquatic peptides: prospects and limitations in developing them as therapeutic products | |
| CN105837674A (zh) | 一种东方铃蟾多肽及其制备方法与应用 | |
| JP2015131796A (ja) | アンギオテンシンｉ転換酵素抑制と血圧低下に用いる短鎖活性ペプチド | |
| HK1128480B (en) | Peptide compound with biological activity, its preparation and its application | |
| WO2017048029A1 (ko) | 클라바스피린 펩타이드 유사체를 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물 | |
| JP3561519B2 (ja) | 新規ペプチドおよび免疫賦活剤 | |
| KR20160013323A (ko) | 왕지네로부터 분리한 신규 스콜로펜드라신-5 펩타이드 및 그의 조성물 | |
| Recio et al. | Bioactive peptides identified in enzymatic hydrolyzates of milk caseins and method of obtaining same. | |
| KR20080051439A (ko) | 세포 용혈활성이 감소된 항균 펩타이드 | |
| JP2005532784A (ja) | 新規の抗菌ボリシンペプチド |