MX2012013305A - Terapia combinada y metodo para evaluar resistencia al tratamiento. - Google Patents

Terapia combinada y metodo para evaluar resistencia al tratamiento.

Info

Publication number
MX2012013305A
MX2012013305A MX2012013305A MX2012013305A MX2012013305A MX 2012013305 A MX2012013305 A MX 2012013305A MX 2012013305 A MX2012013305 A MX 2012013305A MX 2012013305 A MX2012013305 A MX 2012013305A MX 2012013305 A MX2012013305 A MX 2012013305A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
biomarker
compound
patient
nucleic acid
cells
Prior art date
Application number
MX2012013305A
Other languages
English (en)
Inventor
John Frederick Boylan
Wei He
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of MX2012013305A publication Critical patent/MX2012013305A/es

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57557—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer of other specific parts of the body, e.g. brain
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5412—IL-6
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5421—IL-8
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

La presente invención se relaciona con un método para determinar la resistencia de un paciente al tratamiento con 2, 2-dimetil-N-((S)-6-oxo-6, 7-dihidro-5H-dibenzo[b, d]azepin-7-il)-N' -(2, 2, 3, 3, 3-pentafluoro-propil)-malonamida al cuantificar los niveles de un biomarcador o biomarcadores que se encuentran en una muestra biológica obtenida del paciente, el biomarcador es 1L6 y/o 1L8. La presente invención también se relaciona con una terapia combinada para un paciente que padece de un trastorno proliferativo que comprende la administración al paciente, de 2, 2-dimetil-N-((S)-6-oxo-6, 7- dihidro-5H-dibenzo [b, djazepin-7-il)-N' -(2, 2, 3, 3, 3-pentafluoro-propil)-malonami da y un agente anti-1L6 y/o anti1L8.

Description

TERAPIA COMBINADA Y MÉTODO PARA EVALUAR RESISTENCIA AL TRATAMIENTO La presente invención se relaciona con un método y un kit para determinar la resistencia de un paciente al tratamiento con 2 , 2 -dimetil-N- { (S) -6-0x0-6 , 7-dihidro-5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il) - '- (2, 2, 3, 3, 3 -pentafluoro-propil) -malonamida. La invención también se relaciona con una terapia combinada para tratar a un paciente que padece de un trastorno proliferativo que comprende la administración de 2 , 2-dimetil-N- ( (S) -6-0x0-6 , 7-dihidro-5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il ) -N' - (2 , 2 , 3 , 3 , 3 -pentafluoro-propil) -malonamida y al menos un agente anti-IL6 y un agente anti-IL-8.
Antecedentes de la Invención La proteína Notch es una proteina transmembranal presente en la mayor parte de organismos, incluyendo mamíferos, que tiene una función en la regulación de la expresión génica. Mediante la unión de un ligando al dominio extracelular Notch, la proteína Notch es escindida sólo fuera de la membrana por la Enzima Convertidora del Factor Alfa de Necrosis Tumoral (TACE, por sus siglas en inglés) al liberar el dominio extracelular que permanece en interacción con el ligando. Entonces, la gamma-secretasa escinde la proteína sólo dentro la membrana, liberando el dominio intracelular (conocido como Notch intracelular activo o "ICN") . El ICN desplaza al núcleo celular y activa el factor de transcripción CSL, induciendo asi la transcripción génica.
Una señalización Notch defectuosa se ha implicado en diversos trastornos, incluyendo trastornos proliferativos . Como tal, la inhibición de la señalización Notch es un área de gran interés en la oncología. La inhibición de gamma-secretasa bloquea la vía de señalización Notch y, ya que tal, los inhibidores de gamma-secretasa tienen la actividad antiproliferativa.
El compuesto 2 , 2-dimetil-N- ( (S) -6-oxo-6 , 7 -dihidro- 5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il) -N' -(2,2,3,3, 3-pentafluoro-propil) -malonamida, (también referido aquí como "Compuesto I"), es un potente inhibidor selectivo de gamma-secretasa, inhibiendo Señalización de Notch en células tumorales . Se sabe que los xenoinjertos sometidos a tratamiento con el Compuesto muestran expresión reducida de genes asociados con la angiogénesis consistente con la capacidad del Compuesto I para inhibir la angiogénesis tumoral . Luistro et al., Cáncer Research, 69:7672-80 (2009). De manera interesante, estos estudios mostraron poco cambio del perfil génico angiogénico para el xenoinjerto H460a.
La interleucina-6 (IL6) e interleucina-8 (IL8) son citocinas potentes que desempeñan funciones importantes en tales trastornos diversos como infección e inmunidad, inflamación, enfermedad autoinmunitaria y cáncer. Los solicitantes tienen descubrió que la expresión elevada de cada uno de IL6 e IL8 confiere la resistencia al tratamiento con el Compuesto I .
Breve Descripción de la Invención La presente invención se relaciona con un método para determinar la resistencia de un paciente al tratamiento con 2 , 2-dimetil-N- ( (S) -6-oxo-6 , 7-dihidro-5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il) -N' - (2 , 2 , 3 , 3 , 3-pentafluoro-propil) -malonamida, que comprende cuantificar el nivel de un biomarcador que se encuentra en una muestra biológica obtenida del paciente, el biomarcador es IL6 o IL8.
La presente invención también se relaciona con un kit para usarlo en ayudar en la determinación de la resistencia de un paciente al tratamiento con 2 , 2-dimetil-N- ( (S) -6-oxo-6 , 7-dihidro-5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il) -N'-(2,2,3,3,3-pentafluoro-propil) -malonamida, donde el kit comprende a un agente para detectar un biomarcador que es IL6 o IL8.
Además, la presente invención se relaciona con un método para tratar un paciente que padece de un trastorno proliferativo, que comprende la administración al paciente: (A) Compuesto I; y (B) un agente anti-IL6 o anti-IL8.
Además, la presente invención se relaciona con una combinación secuencial o simultánea de Compuesto (A) I; y (B) un agente anti-IL6 y/o anti-IL8 para uso como un medicamento, particularmente como medicamento para usarlo en el tratamiento contra un trastorno proliferativo como cáncer, sobre todo tumores sólidos, más particularmente pecho, colorectal, pulmonar, y tumores de la próstata.
Un aspecto aún adicional de la presente invención es un kit que comprende: (A) Compuesto I; y (B) un agente anti-IL6 o anti-IL8.
En todavía un aspecto adicional, la presente invención se relaciona con el uso de una combinación del Compuesto (A) I; y (B) un agente anti-IL6 y/o anti-IL8 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento contra un trastorno proliferativo, particularmente cáncer, más particularmente tumores sólidos como pecho, colorectal, pulmonar, y tumores de la próstata.
Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 representa los resultados de un ensayo de citocina en matriz llevado a cabo en líneas celulares NCI-H460a y A549.
La Figura 2 representa la cantidad de IL6 e IL8 secretada como se cuantifica de diversas líneas celulares al usar el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.
La Figura 3 representa la cantidad del ARNm que codifica para IL6 e IL8 como se cuantifica de diversas líneas celulares al usar qRT-PCR.
La Figura 4 representa la cantidad de IL6 e IL8 secretada como se cuantifica de células H460a, A549 células parenterales , células de control de A549, A549 IL6 sobreexpresion de células y A549 IL8 sobreexpresion de células al usar el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.
La Figura 5 representa el efecto del tratamiento con el Compuesto I y el efecto del tratamiento con Taxol® en el crecimiento tumoral de la recepción de modelos del xenoinjerto: células de H460a, A549 células parenterales, A549 controlan células, A549 IL6 sobreexpresion de células, A549 IL8 sobreexpresion de células, y un 1:1 la mezcla de A549 IL6 sobreexpresion de células y A549 IL8 sobreexpresion de células.
La Figura 6 representa la cantidad del ARNm que codifica para IL8 y la cantidad de IL8 secretado como se cuantifica de células H460a parenterales, células de H460a que reciben un vector de control y células H460a con expresión génica reducida de IL8.
La Figura 7 representa el efecto en el crecimiento tumoral del tratamiento con Compuesto I como se cuantifica en H460a e IL-8 reducen la expresión modelos del xenoinjerto H460a.
La Figura 8 representa el efecto en el crecimiento tumoral de modelos del xenoinjerto H460a de tratamiento con el Compuesto I, tratamiento con anticuerpo anti-IL8 y terapia combinada con el Compuesto I y anticuerpo IL-8.
La Figura 9 representa el efecto en el crecimiento tumoral de modelos del xenoinjerto H460a de tratamiento con el Compuesto I, tratamiento con anticuerpo anti-IL6 y terapia combinada con el Compuesto I y anticuerpo IL-6.
La Figura 10 representa los niveles de IL6 y ARNm de codificación de IL8 en diversas líneas celulares como se cuantifica al usar el qRT-PCR.
La Figura 11 representa los niveles de IL6 e IL8 secretado por diversas líneas celulares como se cuantifica al usar el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.
La Figura 12 representa la regulación lentificadora del ARNm de HesI en U87MG y células de LOX siguiente el tratamiento con el Compuesto I .
La Figura 13 representa el efecto del Compuesto I tratamiento en el crecimiento tumoral de células de LOX y U87MG.
La Figura 14 representa la cantidad de IL6 e IL8 secretada cuantificado al usar el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas en células H460a, células de H460a sometidas a tratamiento con el Compuesto I, células de H460a IL8-con-expresión-génica-reducida, células de H460a IL8-con-expresión-génica-reducida sometidas a tratamiento con el Compuesto I, células de U87MG y células U87MG sometidas a tratamiento con el Compuesto I.
Descripción Detallada de la Invención Definiciones A menos que se indique otra cosa, los términos que siguen, usados en esta solicitud e incluyendo la especificación y reivindicaciones, tienen las definiciones a continuación. Debe observarse que, usadas como en la especificación y las reivindicaciones anexadas, las formas singulares "a", un, e "el" incluyen referentes plurales a menos que el contexto claramente dicte otra cosa.
Como se utiliza aquí, "Compuesto I", se refiere a 2,2-dimetil-N- ( (S) -6-0x0-6 , 7-dihidro-5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il) -N' - (2 , 2 , 3 , 3 , 3-pentafluoro-propil) -malonamida que es útil como un inhibidor de gamma-secretasa . El Compuesto I tiene la estructura que sigue: El término "biomarcador" , se refiere a una entidad objetivamente cuantificable que funciona como un indicador de un estado biológico.
El término "muestra biológica" , se refiere a una porción (p.ej, sangre, suero, tejido, flema, orina, saliva) obtenido de un paciente, del cual un biomarcador puede cuantificarse .
El término "nivel" en la referencia a un biomarcador se refiere a una medida de la concentración, actividad, nivel de expresión o cantidad de un biomarcador que se encuentra. El nivel puede determinarse cuantitativamente, por ejemplo al cuantificar la concentración o la masa del biomarcador que se encuentra en una muestra, o por ejemplo al determinar la cantidad de ARNm que codifica para el biomarcador que se expresa en una población celular relevante o tejido. Alternativamente, el nivel puede determinarse más cualitativamente, p.ej, como ser mayor o a continuación un nivel límite permisible del conjunto. El nivel límite permisible puede corresponder a un promedio o el nivel de mediana del biomarcador en pacientes sanos, o puede corresponder al nivel en donde un diagnóstico de enfermedad se elabora.. Un biomarcador es el para encontrarse a un "nivel elevado" si el nivel cuantificado es mayor un nivel límite permisible del conjunto.
El término "paciente", incluye mamíferos y aves. El término "mamíferos", medios cualquier miembro de la clase mammalia incluyendo, entre otros, humanos; primates no humanos como chimpancés y otros monos y especies del chango; animales del rancho como ganado, caballos, ovejas, cabras y cerdos; animales domésticos como conejos, perros y gatos; animales de laboratorio que incluyen roedores, como ratas, ratones y cobayos; y lo similar. El término "paciente" no denota una edad particular o sexo.
Como se utiliza aquí, el término "portador farmacéuticamente aceptable" , indica que el portador indicado no tiene propiedades que harían que un médico razonablemente prudente evite la administración de lo mismo a un paciente, teniendo en cuenta la enfermedad o afecciones de someterse a tratamiento y la respectiva ruta de administración.
Como se utiliza aquí, el término "terapéuticamente efectivo", significa una cantidad de un compuesto, o combinación o composición, que es efectiva para producir un efecto terapéutico deseado mediante administración a un paciente, por ejemplo, contener el crecimiento, o dan como resultado el encogimiento, de tumor canceroso o que aumentan la vida útil del paciente.
Los términos "trastorno proliferativo celular" y "trastorno proliferativo" , refiérase a trastornos que se asocian con cierto nivel de proliferación celular anormal. En una modalidad, el trastorno proliferativo es cáncer.
Los términos "cáncer" y "canceroso", refiérase a o describa el estado fisiológico en mamíferos que es por lo común caracterizado por el crecimiento celular no regulado / proliferación. Los ejemplos de cáncer incluyen, entre otras cosas, el cáncer colorrectal, el melanoma y cáncer de la tiroides.
El término "para inhibir el crecimiento celular o la proliferación" , los medios que disminuyen el crecimiento de una célula o la proliferación en al menos el 10%, el 20%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 70%, el 80%, el 90%, el 95% o el 100%, e incluyen la muerte celular de inducción.
La frase "reducida sustancialmente" o "sustancialmente diferente, " como se utiliza aquí, se refiere a un suficientemente el elevado grado de la diferencia entre dos valores numéricos (generalmente un asociado con una molécula y otro asociado con una molécula de la referencia / molécula de comparación) tal que el experto en la técnica tomaría en cuenta que la diferencia entre los dos valores es de la significancia estadística dentro del contexto de la característica biológica cuantificada por los valores.
El término "tumor", se refiere a todo el crecimiento celular neoplásico y proliferación, o de neoplasia maligna o benigno, y todas las células precancerosas y cancerosas y tejidos. Los términos "cáncer", "canceroso", "el trastorno proliferativo celular, " "el trastorno proliferativo, " y "tumor" no son mutuamente exclusivos como lo referido aquí.
Método para determinación de resistencia La presente invención se relaciona en parte a un método para determinar la resistencia de un paciente al tratamiento con 2, 2-dimetil-N- ( (S) -6-???-6, 7-dihidro-5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il) -N'-(2, 2, 3,3, 3-pentafluoro-propil) -malonamida (aquí también referido como "Compuesto I"), que comprende cuantificar el nivel de un biomarcador que se encuentra en una muestra biológica obtenida del paciente, el biomarcador es IL6 o IL8.
En una modalidad de la invención, el nivel del biomarcador que se encuentra en la muestra se compara con un nivel límite permisible para el biomarcador y, de ser mayor, el paciente se considera de tener la resistencia in vivo al tratamiento con el Compuesto I. Con objetivos aquí incluyendo en las reivindicaciones, "la resistencia in vivo" se refiere a un efecto eficaz in vivo reducido del tratamiento con el Compuesto I .
En una modalidad de la invención, el biomarcador es IL6 y el nivel límite permisible para IL6 es de aproximadamente 500pg/ml.
En una modalidad de la invención, el biomarcador es IL8 y el nivel límite permisible para IL8 es de aproximadamente 50pg/ml.
El nivel de un biomarcador puede determinarse basado en la cantidad de la propia proteína o por su respectivo ARNm.
Las proteínas pueden cuantificarse directamente por métodos físicos/químicos como electroforésis en gel, HPLC, espectrometría de masas y métodos proteómicos ; métodos del inmunoensayo, como ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas, ensayos competitivos, ensayos tipos sándwich, y lo similar; y por ensayos de actividad biológica (por ejemplo, como un ligando y/o una enzima) , al cuantificar esa actividad en la muestra biológica por métodos conocidos en la técnica, sistemas del ensayo a través de dos híbridos, y lo similar. Los ensayos comerciales están disponibles para muchos o la mayor parte de los biomarcadores anteriormente mencionados, o se describen en la técnica. Las muestras biológicas adecuadas incluyen la sangre, el suero, la orina, y lo similar.
Alternativamente, uno puede determinar el nivel de ARNm que corresponde a los biomarcadores proteicos anteriormente mencionados. La determinación del nivel de transcripción del ARNm puede llevarse a cabo al usar cualquier método cuantitativo o semicuantitativo adecuado, incluyendo entre otras cosas el Northern blot; métodos de análisis en micromatriz; PCR DE TEMPERATURA AMBIENTE, qRT-PCR y otro DNA cuantitativo y semicuantitativo y métodos de amplificación del ARNm; y lo similar. Por ejemplo, para llevar a cabo el PCR DE TEMPERATURA AMBIENTE, uno puede extraer ARN total de la muestra biológica, tratarlo con DNasel y convertirlo al ADNc al usar una transcriptasa inversa como la transcriptasa inversa del Multiescribano (Applied Biosystems Inc., Ciudad Adoptiva, California) . Un ADNc "SYBR" ensayo del PCR cuantitativo en tiempo real verde puede llevarse a cabo entonces al usar el ADNc como la plantilla, y analizado al usar un PRISM ABI 7900 Detector de la Secuencia.
En una modalidad de la presente invención, el paciente es un mamífero, por ejemplo un humano.
En una modalidad de la invención, el biomarcador cuantificado es IL6.
En una modalidad de la invención, el biomarcador cuantificado es IL8.
En una modalidad de la invención, tanto IL6 como IL8 se cuantifican.
En una modalidad de la invención, la muestra biológica es la sangre En una modalidad de la invención, la muestra biológica es el suero.
En una modalidad de la invención, la muestra biológica es la orina.
En una modalidad de la invención, el biomarcador se cuantifica al cuantificar la cantidad de la proteina presente en la muestra.
En una modalidad de la invención, el biomarcador se cuantifica al cuantificar el nivel de ARNm que codifica para el biomarcador.
Kit para la determinación de resistencia La presente invención también se relaciona con un kit para usarlo en ayudar en la determinación de la resistencia de un paciente al tratamiento con 2 , 2-dimetil-N- ( (S) -6-oxo-6, 7-dihidro-5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il) -N' -(2,2,3,3,3-pentafluoro-propil) -malonamida, donde el kit comprende a un agente para detectar un biomarcador que es IL6 o IL8 en una muestra biológica obtenida del paciente.
Terapia combinada En una modalidad, la presente invención se relaciona con un método para tratar un paciente que padece de un trastorno proliferativo, que comprende la administración al paciente: (A) Compuesto I; y (B) un agente anti-IL6 o anti-IL8. En una modalidad de la presente invención, ambos un agente anti-IL6 y anti-IL8 se administran.
En otra modalidad, la presente invención se relaciona con una combinación secuencial o simultánea del Compuesto (A) I; y (B) un agente anti-IL6 y/o anti-IL8 para uso como un medicamento, particularmente como medicamento para usarlo en el tratamiento contra un trastorno proliferativo como cáncer, sobre todo tumores sólidos, más particularmente pecho, coloreetal, pulmonar, y tumores de la próstata.
Debe entenderse que el tratamiento contra un trastorno proliferativo incluye mantener o disminuir el tamaño tumoral, inducir la regresión tumoral (parcial o completo) , inhibir el crecimiento tumoral y/o aumentar la vida útil de un paciente que padece del trastorno.
La presente invención también se relaciona con un kit que comprende: (A) Compuesto I; y (B) un agente anti-IL6 o anti-IL8. En una modalidad de la presente invención, el kit comprende tanto a un agente anti-lL6 como un agente anti-IL8.
En una modalidad de la invención, el trastorno proliferativo es un tumor sólido.
En otra modalidad de la invención, el tumor sólido se selecciona a partir del grupo que comprende: tumores de cerebro, hígado, próstata, ovárica, pancreática, dérmica, pecho, colorectal, pulmonar, y la próstata.
En otra modalidad de la invención, el tumor sólido se selecciona a partir del grupo que comprende: tumores de pecho, colorectal, pulmonar, y la próstata.
En una modalidad de la presente invención, el agente anti-IL6 se administra en una cantidad que es efectiva en reducir el nivel de IL6 en el paciente.
En una modalidad de la presente invención, el agente anti-IL8 se administra en una cantidad que es efectiva en reducir el nivel de IL8 en el paciente.
En una modalidad de la presente invención, el agente anti-IL6 es un anticuerpo anti-IL6.
En una modalidad de la presente invención, el agente anti-lL8 es un anticuerpo anti-IL8.
En una modalidad de la presente invención, el agente anti-IL6 es un ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL6. El ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL6 puede ser, por ejemplo, ARN antisentido. El ácido nucleico también puede ser, por ejemplo, un ARNhc o siAR .
En una modalidad de la presente invención, el agente anti-IL8 es un ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL8. El ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL8 puede ser, por ejemplo, ARN antisentido. El ácido nucleico también puede ser, por ejemplo, un ARNhc o siARN .
En una modalidad del método de la presente invención, el Compuesto I se administra en una cantidad que es terapéuticamente efectiva para el tratamiento contra un trastorno proliferativo. Esa cantidad puede ser, por ejemplo, de aproximadamente 400ng-hr/ml hasta aproximadamente 9000ng-hr/ml, de aproximadamente 1100ng-hr/ml hasta aproximadamente 4100ng-hr/ml, o de aproximadamente 1380ng-hr/ml hasta aproximadamente 2330ng-hr/ml . En modalidades de la presente invención, Compuesto I puede administrarse en una cantidad de aproximadamente 400ng-hr/ml hasta aproximadamente 9000ng-hr/ml administrado por el período de hasta aproximadamente 21 días, de aproximadamente 1100ng-hr/ml hasta aproximadamente 4100ng-hr/ml administrado por el período de hasta aproximadamente 21 días, de aproximadamente 1380ng-hr/ml hasta aproximadamente 2330ng-hr/ml administrado por el período de hasta aproximadamente 21 días.
En una modalidad del método de la presente invención, el Compuesto I se administra una vez al día durante días 1, 2, 3, 8, 9, y 10 de un ciclo de 21 días. En otra modalidad, la administración puede ser una vez al día durante días 1 a 7 de un ciclo de 21 días. En otra modalidad, la administración puede ser una vez al día cada día.
En modalidades del método y kit de la presente invención, Compuesto I en una forma de dosificación unitaria oral farmacéutica.
En una modalidad del método de la presente invención, el paciente también es sometido a la radioterapia.
En una modalidad del método de la presente invención, el Compuesto I se administra una vez al día durante días 1, 2, 3, 8, 9, y 10 de un ciclo de 21 días en una cantidad de aproximadamente 400ng-hr/ml hasta aproximadamente 9000ng-hr/ml .
En una modalidad del método de la presente invención, el Compuesto I se administra una vez al día durante días 1-7 de un ciclo de 21 días en una cantidad de aproximadamente 400ng-hr/ml hasta aproximadamente 9000ng-hr/ml .
En una modalidad de la presente invención, el anticuerpo anti-IL6 se administra en una cantidad que es efectiva en reducir el nivel de IL6 en el paciente.
En una modalidad del método de la presente invención, el anticuerpo anti-IL6 se administra en una cantidad de aproximadamente 1 hasta aproximadamente 100mg/kg dos veces cada semana.
En una modalidad del método de la presente invención, el anticuerpo anti-IL6 se administra en una cantidad de aproximadamente 1 hasta aproximadamente 50mg/kg dos veces cada semana.
En una modalidad del método de la presente invención, el anticuerpo anti-IL6 se administra en una cantidad de aproximadamente 10 hasta aproximadamente 30mg/kg dos veces cada semana.
En una modalidad del método de la presente invención, el anticuerpo anti-IL6 se administra en una cantidad de aproximadamente 20mg/kg dos veces cada semana.
En una modalidad de la presente invención, el anticuerpo anti-IL8 se administra en una cantidad que es efectiva en reducir el nivel de IL8 en el paciente.
En una modalidad del método de la presente invención, el anticuerpo anti-IL8 se administra en una cantidad de aproximadamente 1 hasta aproximadamente I00mg/kg dos veces cada semana.
En una modalidad del método de la presente invención, el anticuerpo anti-IL8 se administra en una cantidad de aproximadamente 1 hasta aproximadamente 50mg/kg dos veces cada semana.
En una modalidad del método de la presente invención, el anticuerpo anti-IL8 se administra en una cantidad de aproximadamente 10 hasta aproximadamente 30mg/kg dos veces cada semana.
En una modalidad del método de la presente invención, el anticuerpo anti-IL8 se administra en una cantidad de aproximadamente 20mg/kg dos veces cada semana.
En una modalidad de la presente invención, el ARNhc anti-IL6 se administra en una cantidad que es efectiva en reducir el nivel de IL6 en el paciente.
En una modalidad de la presente invención, el ARNhc anti-IL8 se administra en una cantidad que es efectiva en reducir el nivel de IL8 en el paciente.
En una modalidad de la presente invención, siARN anti-IL6 se administra en una cantidad que es efectiva en reducir el nivel de IL6 en el paciente.
En una modalidad de la presente invención, siARN anti-IL8 se administra en una cantidad que es efectiva en reducir el nivel de IL8 en el paciente.
Los niveles de la dosis del Compuesto I, el agente anti-IL6 y/o el agente anti-IL8 pueden modificarse por el médico para ser inferiores o más elevado que esto declaró aquí según las necesidades del paciente y la reacción del paciente al tratamiento .
Ejemplos Las preparaciones que siguen y los ejemplos se les proporcionan para permitir a los expertos en la técnica entender más claramente y llevar a la práctica la presente invención. Éstos no deberían considerarse tan limitando el alcance de la invención, pero simplemente como ilustrativo y representativo de lo mismo.
Ejemplo 1 Este ejemplo muestra respuesta de diversos modelos diferentes del xenoinjerto al tratamiento con el Compuesto I.
Los ratones (desnudos) del nu/nu femenino obtenidos de Charles River Laboratories (Wilmington, Massachusetts) o los ratones SCID-beige hembras (Taconic, Germantown, Nueva York) se usan (10 ratones/grupo) cuando éstos tienen aproximadamente 8 a 14 semanas y pesaron aproximadamente 23 a 25 gramos. Todos los experimentos de animal se llevan a cabo de acuerdo con protocolos aprobados por el Comité de Uso y Cuidado de los animales Roche (RACUC) .
Las líneas de células cancerígenas de humano LOVO, BxPC3, HCT-116, A549, AsPC-1, iaPaCa-2, y Calu-6 se adquieren de la Colección Americana de Tipos de Cultivo. La línea celular H460a es un regalo del doctor Jack Roth (M. D.
Centro Médico de Anderson) .
Para el implante del xenoinjerto, las células se recolectan al usar el 0.05% de la tripsina, lavaron y centrifugaron en el medio de cultivo y suspendieron de nuevo en un 1:1 la mezcla de la solución salina amortiguada con fosfato (PBS) y Matrigel (BxPC-3) o en PBS por sí solo (A549, H460a, LOVO, Calu-6, HEMATOCRITO 116, MiaPaca-2 y AsPC-1) en una concentración de 1.5 - 5 x 107 células por mL. Un volumen de la suspensión celular 0.2mL (7.5 x 106 células para A549, 1 x 107 células para H460a, 3 x 106 células para Calu-6 y HCT116, 5 x 106 células para BxPC3 y AsPC-1, 6 x 106 células para MiaPaca-2 y 5 x 106 para LOVO) por ratón se implanta subcutáneamente en el flanco derecho. Todos los modelos del xenoinjerto se implantan en ratones desnudos a excepción de BxPC3( que se implanta en ratones SClD-beige. Tumores se dejan crecen para implante del montante de 8 a 26 días cuando el volumen medio alcanzó -100-150 mm3, después de los cuales los animales se aleatorizan en grupos de tratamiento.
El compuesto I (sintetizado según el procedimiento descrito en WO2005/023772 ) se formula como una suspensión en Klucel del 1.0% en agua con Tween®-80 del 0.2% para la administración (po) oral. El compuesto formulado y el vehículo se preparan cada semana y almacenado en 4 ? C.
En el modelo del xenoinjerto Calu-6, el Compuesto I se dosifica en 60mg/kg diariamente cada dos semanas durante 4 semanas ( 7 + / 7-x 2 ciclos) . Todos otros modelos del xenoinjerto se dosifican con el Compuesto I en 10mg/kg diariamente .
Las cuantificaciones tumorales y los pesos de ratón -se obtienen dos veces por semana. El análisis estadístico se determina mediante Mann-Whitney Rank Sum Test, 1 modo A OVA y montante hoc t-prueba de Bonferroni (SigmaStat, la versión 2.0, Jandel Científico, San Francisco, California). Las diferencias entre grupos se consideran significativas cuando el valor de probabilidad (p) es <0.05.
La inhibición dé crecimiento tumoral (% de TGI) se cuantifica 21 días siguiente el comienzo del tratamiento. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 1.
Tabla 1 [Actividad in vivo en modelos de xenoinjerto Como se puede observar, el xenoinjerto H 60a mostrado sin duda la menor parte de cantidad de inhibición de crecimiento tumoral siguiente tratamiento con Compuesto el I (8%) .
Ejemplo 2 Después de la identificación, en el Ejemplo 1, que el modelo del xenoinjerto H460a mostrado sin duda la menor parte de cantidad de la inhibición de crecimiento tumoral siguiente el tratamiento con el Compuesto I, un ensayo de citocina en matriz se lleva a cabo tanto en el H460a como en A549 NSCLC líneas celulares para determinar si hay algún biomarcador que separe la línea celular H460a.
Las matrices de la citocina se adquieren de RayBiotech, Inc. (Norcross, Georgia) y se usan según el protocolo de la elaboración. Las células se cultivan durante 5 días, medios celulares se recolecta y las células separadas se eliminan por centrifugación. Cuatro mililitros de medios se incuban durante la noche con la matriz seguida de lavados PBS/Tween múltiples seguidos del desarrollo de la señal.
Se determina que la línea celular H460a expresó para niveles más altos tanto de IL6 como de IL8 que A549 o un control sérico. Ver la Figura 1.
Ejemplo 3 La expresión de IL6 e IL8 se cuantifica entonces en el BXPC3, HEMATOCRITO 116, A549, AsPC-1, MiaPaCa-2 y líneas celulares Calu-6 al cuantificar el nivel de IL6 secretado y proteína IL8 al usar el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas .
Los' kits del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas IL6 se adquieren del Doblador MedSystems (BMS213/2 o BMS213INST) . Los kits del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas IL8 se adquieren del Doblador MedSystems (BMS204/3INST) o R&D Sistemas (D8000C) . Para cuantificar IL6 e IL8 secretada en el medio del cultivo tisular, las células se siembran en una densidad de medio millón en la placa de 35 mm. Al día siguiente, las células se lavan con 2 mi de PBS, luego rellenado con 1 medio recién preparado mi. Después de 24 horas, el medio se recolecta e inmediatamente se usa para el análisis del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.
Como observado de los resultados (ver la Figura 2) , las células de H460a secretan cantidades más elevadas de IL6 y proteína IL8 que las otras líneas celulares analizadas incluyendo de 4 veces mayor proteína de IL6 y de 10 veces mayor proteína de IL8 células A549 en comparación con.
Ejemplo 4 La expresión de IL6 e IL8 se cuantifica entonces en el BxPC3, HEMATOCRITO 116, A549, AsPC-1, MiaPaCa-2 y líneas celulares Calu-6 al cuantificar el nivel del ARNm al usar el qRT-PCR. El aislamiento de ARN y el PCR de la transcripción inversa (PCR DE TEMPERATURA AMBIENTE) se llevan a cabo al usar métodos de laboratorio convencionales. Las cantidades del catálogo para cada conjunto de sonda son Hesl (Hs00172878_ml) , ACTB (4333762F) , IL6 (Hs00174131_ml) , IL8 (Hs00174103_ml) y 18 (4319413E) .
Como observado de los resultados (ver la Figura 3), las células de H460a expresan para cantidades más elevadas de IL6 y ARNm IL8 que las otras líneas celulares analizadas incluyendo de 12 veces mayor ARNm de IL6 y de 8 veces mayor ARNm de IL8 células A549 en comparación con.
Ejemplo 5 A fin de analizar si la expresión de IL6 o IL8 modula la eficacia de Compuesto I tratamiento, líneas de células de A549 que sobreexpresan para -IL6 o IL8 se manipulan genéticamente y usado para elaborar modelos del xenoinjerto que se estudian para determinar si tal sobreexpresión altera la sensibilidad de las células al Compuesto I tratamiento.
IL6 y los lentivirus IL8 se elaboran al usar IL6 y plásmidos IL8 (disponible de Genecopoeia, Rockville, Maryland, USA), respectivamente. Las células de A549 se dividen en tres grupos con un grupo que recibe un control del vector, un grupo que se infecta por el lentivirus IL6 y el tercer grupo que se infecta por el lentivirus IL8. Los dos grupos posteriores formaron grupos celulares con la expresión estable de IL6 exógeno e IL8, respectivamente.
La sobreexpresión de IL6 y proteina IL8 se cuantifica por el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. Ver la Figura 4. Células de A549 que sobreexpresan para IL6 secretado de 7 veces mayor IL6 comparado con H460a. Las células de A549 que sobreexpresan para IL8 secretaron la proteína IL8 ligeramente menor que H460a. Las células de A549 que sobreexpresan para IL6 o IL8 tienen una morfología similar como células de control del vector de A549.
Una porción del IL6 que sobreexpresa para células de A549 y el IL8 que sobreexpresa para células de A549 se combina entonces para formar un cuarto grupo que contiene un 1 : 1 la mezcla de tales células.
Células de A549 que reciben el control del vector, células de A549 que sobreexpresan para IL6, células de A549 que sobreexpresan para IL8 , y un 1:1 la mezcla de células A549 que sobreexpresan para IL6 y células A549 que sobreexpresan para IL8 se siembra en una placa de seis pocilios con cada grupo que se siembra en un pocilio en aproximadamente 1 x 105 por pocilio durante el día 0. En días 4, 6, 10 y 12, todas las células se tripsinizan y se cuentan, luego se siembran en placa de nuevo- para la propagación adicional en la misma dilución. Las células de control se configuran arbitrariamente como el crecimiento del 100%. El crecimiento de todos los otros tipos celulares se expresa como una proporción al crecimiento de células de control. Todas las líneas celulares analizadas mostraron una tasa de crecimiento similar. Ver la Tabla 2.
Tabla 2 El efecto in vivo de IL6 y sobreexpresión IL8 en el Compuesto I eficacia se evalúa para cada uno de estos grupos celulares.
Las células de los cuatro grupos ya mencionados y A549 parenteral y las células H460a se utilizan elaboran modelos del xenoinjerto al usar el procedimiento descrito en el Ej emplo 1.
Los ratones se aleatorizan en diferentes grupos de tratamiento (10 ratones/grupo) : ratones A549 parenterales que reciben el vehículo (Klucel y Tween) ratones A549 una vez al día, parenterales que reciben el Compuesto I en ratones A549 una vez al día, parenterales 10mg/kg que reciben Taxol*1 en 30mg/kg cuatro veces diariamente, el vector controla ratones A549 que reciben el vehículo (Klucel y Tween) una vez al día, vector controlan ratones A549 que reciben el Compuesto I en el 10mg/kg una vez al día, vector controlan ratones A549 que reciben Taxol8 en 30mg/kg cuatro veces diariamente, IL6-sobreexpresión de ratones A549 que reciben el vehículo (Klucel y Tween) una vez al día, IL6-sobreexpresion de ratones A549 que reciben el Compuesto I en el 10mg/kg una vez ® al día, IL6-sobreexpresion de ratones A549 que reciben Taxol en 30mg/kg cuatro veces diariamente, IL8 -sobreexpresion de ratones A549 que reciben el vehículo (Klucel y Tween) una vez al día, IL8-sobreexpresion de ratones A549 que reciben el Compuesto I en el 10mg/kg una vez al día, IL8-sobreexpresi6n de ratones A549 que reciben Taxol* en 30mg/kg cuatro veces diariamente, Ratones A549 que contienen un 1:1 mezcla del xenoinjerto de IL-6 e IL-8 sobreexpresion de células de A549 que reciben vehículo (Klucel y Tween) una vez al día, ratones A549 que contienen un 1:1 mezcla del xenoinjerto de IL-6 e IL-8 sobreexpresion de células de A549 que reciben Compuesto I en ratones una vez al día, y A549 10mg/kg que contienen un 1:1 mezcla del xenoinjerto de IL-6 e IL-8 sobreexpresion de células de A549 que reciben Taxol0 en 30mg/kg cuatro veces diariamente, ratones de H460a que reciben vehículo (Klucel y Tween) una vez al día, ratones de H460a que reciben Compuesto I en ratones una vez al día, y H460a 10mg/kg que reciben Taxol ® en 30mg/kg cuatro veces diariamente.
Tumores del xenoinjerto de H460a (altos niveles tanto de IL6 como de IL8) sometido a tratamiento con el Compuesto lOmg/kg I una vez al día produjeron TGI del 9% después de 21 días. Esta resistencia está en el contraste depurado para TGI del 71% observado para tumores A549 y TGI del 61% para tumores de control del vector A549 (nivel bajo de IL6 e IL8) consistente con experimentos anteriores. La sobreexpresión de IL6 o IL8 en A549 redujo el TGI al 32% y el 45%, respectivamente. Tumores iniciados con un 1:1 la mezcla de A549 que sobreexpresa para IL6 o IL8 demostraron la resistencia completa al Compuesto I (TGI del 8%) , de acuerdo con la resistencia del xenoinjerto H460a parenteral . Taxol*" se incluye como una fiscalización de drogas positiva mostrando TGI consistente a través de diversos modelos. Ver la Figura 5.
La resistencia de A549 que sobreexpresa para IL6 o IL8 al Compuesto no soy causado por una pérdida de la inhibición Notch ya que la regulación lentificadora del ARNm Hesl siguiente el Compuesto in vi ro I tratamiento, el sello Notch que indica el bloqueo, correctamente se mantiene en estas células .
Ej emplo 6 Este ejemplo describe un estudio llevado a cabo para explorar si requieren para la expresión IL8 mantener la resistencia de células H460a.
Los lentivirus se elaboran al usar el AR hc anti-IL8 situado en pLKO.l (adquirido de Biosystems Abierto) y usado para reducir la expresión establemente la expresión IL8 en células H460a.
Como se muestra en la Figura 6, el ARNhc proporcionó una reducción de la expresión del 75% de la expresión IL8 (tanto ARNm como proteína) comparado con células parenterales H460a. IL8 -reduzca- la-expresión células H460a, sin embargo, todavía tenga más que de 2 veces mayor niveles de IL8 comparado con células A549.
Las células H460a parenterales y las células de H460a IL8 -con-exprésión-génica-reducida se implantan entonces como xenoinjertos en ratones al usar los procedimientos descritos en el Ejemplo 1. Los ratones se aleatorizan entonces en diferentes grupos de tratamiento (10 ratones/grupo) : ratones del xenoinjerto de H460a que reciben vehículo una vez al día, ratones del xenoinjerto de H460a que reciben Compuesto I en ratones del xenoinjerto H460a una vez al día, IL8-con-expresión-génica-reducida 10mg/kg que reciben vehículo ratones del xenoinjerto H460a una vez al día, e IL8-con-expresión-génica-reducida que reciben Compuesto I en 10mg/kg una vez al día.
Como se muestra en la Figura 7, cuando sometido a tratamiento con el Compuesto I en el 10mg/kg una vez al día durante 21 días, tumores derivados de células de H460a IL8-con-expresión-génica-reducida mostraron a sensibilidad mejorada tumores en comparación con de células H460a parenterales (TGI del 5% contra TGI del 24%) .
Ejemplo 7 Este ejemplo describe un estudio adicional llevado a cabo para explorar si requieren para la expresión IL8 mantener la resistencia de células H460a.
La neutralización anticuerpo anti-IL8 se adquiere de R&D sistemas (Cantidad del catálogo: MAB208) . Este anticuerpo se analiza primero in vi tro y ninguna inhibición de crecimiento se observa de células H460a sometidas a tratamiento con este anticuerpo .
Los modelos del xenoinjerto de H460a se elaboran al usar el procedimiento descrito en el Ejemplo 1. Los ratones se aleatorizan entonces en diferentes grupos de tratamiento (10 ratones/grupo) : ratones del xenoinjerto de H460a que reciben vehículo dos veces cada semana, ratones del xenoinjerto de H460a que reciben Compuesto I en 10mg/kg una vez al día, ratones del xenoinjerto de H460a que reciben anticuerpo anti-IL8 en 20mg/kg dos veces cada semana y ratones del xenoinjerto H460a que reciben Compuesto I en anticuerpo una vez al día y anti-IL8 10mg/kg en 20mg/kg dos veces cada semana .
La combinación del anticuerpo con el Compuesto mejoré la sensibilidad de tumores H460a al Compuesto I (TGI del 10% contra 43%TGI) . Esto es consistente con los datos anteriores que utilizan el AR hc de IL8. Ver la Figura 8.
Ejemplo 8 Este ejemplo describe un estudio llevado a cabo para explorar si requieren para la expresión IL6 mantener la resistencia de células H460a.
La neutralización anticuerpo anti-IL6 se adquiere de R&D sistemas (Cantidad del catálogo: MAB2061) . Este anticuerpo se analiza primero in vitro y ninguna inhibición de crecimiento se observa de células H460a sometidas a tratamiento con este anticuerpo .
Los modelos del xenoinjerto de H460a se elaboran al usar el procedimiento descrito en el Ejemplo 1. Los ratones se aleatorizan entonces en diferentes grupos de tratamiento (10 ratones/grupo) : ratones del xenoinjerto de H460a que reciben vehículo dos veces cada semana, ratones del xenoinjerto de H460a que reciben Compuesto I en 10mg/kg una vez al día, ratones del xenoinjerto de H460a que reciben anticuerpo anti-IL6 en 20mg/kg dos veces cada semana y ratones del xenoinjerto H460a que reciben Compuesto I en anticuerpo una vez al día y anti-IL6 10mg/kg en 20mg/kg dos veces cada semana .
La combinación del anticuerpo con el Compuesto mejoré la sensibilidad de tumores H460a al Compuesto I (TGI del 43% contra TGI del 47%) . Ver la Figura 9.
Ejemplo 9 Un aspecto importante de cualquier marcador de respuesta es la capacidad a exitosamente anticipadamente identifican a paciente con respuesta al tratamiento y tipos de tumor del paciente sin respuesta al tratamiento. En este ejemplo, las diferentes líneas celulares se analizan para determinar si éstos tienen un elevado nivel de expresión de IL6 y/o IL8. Entonces, los xenoinjertos se elaboran al usar células que expresan para altos niveles de IL6 e IL8 (y así pronosticado para ser pacientes sin respuesta al tratamiento al Compuesto I tratamiento) . Los modelos del xenoinjerto son sometidos a tratamiento entonces con el Compuesto I para observar si los altos niveles de IL6 e IL8 tienen algún efecto en la eficacia del tratamiento.
Aproximadamente cien líneas celulares a través de tipos tumorales múltiples son detectadas para la expresión de IL6 e IL8 por el qRT-PCR. Aproximadamente el 13% de las líneas celulares tiene la expresión más elevada al menos de 10 veces de IL6 o IL8 que A549. Dos líneas celulares, U87MG (glioblastoma) , que expresa para altos niveles de IL6 (35 vez mayor ARNm de IL6 que A549) e IL8 (85 vez mayor ARNm de IL8 que A549) , y LOX (melanoma) , que expresa para unos niveles más altos de IL8 (de 50 veces mayor ARNm de IL8 que A549) e IL6 (de 2 veces mayor ARNm de IL6 que A549) con relación a A549 (Figura 10), se seleccionan para el estudio adicional. El nivel de expresión más elevado de IL6 y/o IL8 de estas dos líneas celulares es adicional confirmado por el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (Figura 11) .
Las líneas de células cancerígenas de humano U87MG y LOX se adquieren de la Colección Americana de Tipos de Cultivo.
Los modelos del xenoinjerto se elaboran entonces al usar líneas celulares de LOX y el U87 G.
Los xenoinjertos se implantan en ratones nu/nu hembras (desnudos) , obtenidos de Charles River Laboratories (wilmington, Massachusetts) (10 ratones/grupo) cuando éstos tienen aproximadamente 8 a 14 semanas y pesaron aproximadamente 23 a 25 gramos. Todos los experimentos de animal se llevan a cabo de acuerdo con protocolos aprobados por el Comité de Uso y Cuidado de los animales Roche (RACUC) .
Para el implante del xenoinjerto, las células se recolectan al usar el 0.05% de la tripsina, lavaron y centrifugaron en el medio de cultivo y suspendieron de nuevo en un 1:1 la mezcla de la solución salina amortiguada con fosfato (PBS) y Matrigel (U87MG) o en PBS por sí solo (LOX) en una concentración de 1.5 - 5 x 107 células por mL. Un volumen de la suspensión celular 0.2mL (5x 106 células para U87MG, 2 x 106 células para LOX) por ratón se implanta subcutáneamente en el flanco derecho. Tumores se dejan crecen para implante del montante de 8 a 26 días cuando el volumen medio alcanzó -100-150 mm3, después de los cuales los animales se aleatorizan en grupos de tratamiento: ratones del xenoinjerto de U87MG que reciben vehículo (Klucel y Tween) una vez al día, ratones del xenoinjerto de U87 G que reciben Compuesto I en 10mg/kg una vez al día durante 21 días, ratones del xenoinjerto de LOX que reciben vehículo (Klucel y Tween) una vez al día, y ratones del xenoinjerto de LOX que reciben Compuesto I en 10mg/kg una vez al día durante 11 días .
Tanto U87MG como los modelos de LOX resultaron resistentes al tratamiento con el Compuesto yo como pronosticado, con un-17%TGI para tumores de MG U87 y TGI del 15% para tumores de LOX. Ver la Figura 12.
La resistencia del U87MG y células de LOX al Compuesto no soy causado por una pérdida de la inhibición Notch ya que la regulación lentificadora del ARNm Hesl siguiente el Compuesto in vitro I tratamiento, el sello Notch que indica el bloqueo, correctamente se mantiene en estas células. Ver la Figura 13.
Ejemplo 10 Los niveles séricos de IL6 e IL8 en modelos del xenoinjerto se cuantifican para determinar si éstos reflejan las diferencias de la expresión observadas in vitro de medios celulares. Los datos resultantes sugieren que la recolección sérica podría ser un enfoque clínicamente viable a la monitorización de niveles tumorales del paciente de IL6 e IL8.
Los sueros de ratón se recolectan de ratones de llevando de tumor al usar los modelos del xenoinjerto que siguen: A549, H460a, H460a IL8-con-expresión-génica-reducida, U87MG y LOX (los modelos se producen al usar los métodos descritos anteriormente) . Esto se lleva a cabo por la ponchadura sangrante o cardíaca retro-orbital en tubos del separador del suero del BD icrotainer (Catálogo #365956, Becton Dickinson, Franklin Lakes , Nueva Jersey) . La sangre se deja el coágulo para mínimo de 10 minutos y giró abajo en 9000 revoluciones por minuto durante 10 minutos en una microcentrifugadora. El suero se recolecta y colocado en 1.5 mi microcentrifugan tubos y almacenado en-80°C.
IL6 de humano secretado e IL8 en los sueros de ratón de tumores A549 son demasiado bajos para detectarse por el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. Sin embargo, IL6 de humano e IL8 que proviene de H460a, LOX y modelos del xenoinjerto U87MG fácilmente se detectan en el suero al usar el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (Figura 14) . Además, los cambios previstos de niveles séricos IL8 secretados se observan entre el modelo de H460a IL8-con-expresión-génica-reducida y el modelo H460a.
En términos generales, los niveles de IL6 e IL8 observado in vivo en el suero reflejaron las cantidades observadas in vitro de cultivos celulares. Sin embargo, realmente observamos alguna discrepancia entre IL6 e IL8 cuantificado de sueros de ratón contra de medios celulares. Por ejemplo, U87 G secretó 5-6 niveles más altos veces de IL6 e IL8 que H460a cuando es sembrado en las mismas cantidades de células en plástico; esto no se refleja en sueros de ratón .

Claims (28)

REIVINDICACIONES
1. Un método para determinar la resistencia de un paciente al tratamiento con el compuesto 2 , 2 -dimetil-N- ( (S) -6-???-6, 7-dihidro-5H-dibenzo [b,d] azepin-7-il) -N' - (2,2,3,3,3-pentafluoro-propil) -malonamida, que comprende cuantificar el nivel de un biomarcador que se encuentra en una muestra biológica obtenida del paciente, el biomarcador es IL6 o IL8.
2. Un método según la reivindicación 1, donde el paciente es un mamífero.
3. Un método según la reivindicación 1, donde el paciente es un humano.
4. Un método según la reivindicación 1, donde el biomarcador es IL6.
5. Un método según la reivindicación 1, donde el biomarcador es IL8.
6. Un método según la reivindicación 1, donde los niveles tanto de IL6 como de IL8 se cuantifican.
7. Un método según la reivindicación 1, donde la muestra biológica es la sangre
8. Un método según la reivindicación 1, donde la muestra biológica es el suero.
9. Un método según la reivindicación 1, donde la muestra biológica es la orina.
10. Un método según la reivindicación 1, donde el biomarcador se cuantifica al cuantificar la cantidad de la proteina presente en la muestra.
11. Un método según la reivindicación 1, donde el biomarcador se cuantifica al cuantificar el nivel del ARNm que codifica para el biomarcador.
12. Un método según la reivindicación 1, donde el nivel del biomarcador que se encuentra en la muestra se compara con un nivel límite permisible para el biomarcador y, de ser mayor, al paciente se le considera con resistencia in vivo al tratamiento con 2 , 2-dimetil-N- ( (S) -6-oxo-6 , 7-dihidro-5H-dibenzo [b, d] azepin-7-il) - '- (2,2,3,3, 3 -pentafluoro-propil) -malonamida .
13. Un método según la reivindicación 12, donde el biomarcador es IL6 y el nivel límite permisible para IL6 es de aproximadamente 500pg/ml.
14. Un método según la reivindicación 12 , donde el biomarcador es IL8 y el nivel límite permisible para IL8 es de aproximadamente 50pg/ml.
15. Un kit para usarlo en la ayuda para la determinación de la resistencia de un paciente al tratamiento con el compuesto 2 , 2-dimetil-N- ( (S) -6-oxo-6 , 7-dihidro-5H-dibenzo tb, d] azepin-7-il) -N' - (2 , 2, 3 , 3, 3 -pentafluoro-propil) -malonamida, donde el kit comprende un agente para detectar un biomarcador que es IL6 o IL8 en una muestra biológica obtenida del paciente.
16. Una combinación secuencial o simultánea de Compuesto (A) I; y (B) un agente anti-IL6 y/o anti-IL8 para uso como un medicamento, en particular, para usarlo en el tratamiento contra un trastorno proliferativo como el cáncer.
17. La combinación según la reivindicación 16, donde la combinación comprende tanto un agente anti-IL6 como un anti- IL8.
18. La combinación según la reivindicación 16 o 17, donde el agente anti-IL6 es un anticuerpo anti-IL6.
19. Un método según la reivindicación 16 o 17, donde el agente anti-IL8 es un anticuerpo anti-IL8.
20. La combinación según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, donde el agente anti-IL6 es un ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL6.
21. La combinación según la reivindicación 20, donde el ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL6 es ARN antisentido.
22. La combinación según la reivindicación 20, donde el ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL6 es un ARNhc o un siARN.
23. La combinación según las reivindicaciones 16, 17, o 19, donde el agente anti-IL8 es un ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL8.
24. La combinación según la reivindicación 23, donde el ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL8 es AR antisentido.
25. La combinación según la reivindicación 23, donde el ácido nucleico que interfiere con la expresión de un ácido nucleico que codifica para IL8 es ARNhc o siARN.
26. Un kit que comprende: (A) el Compuesto I; y (B) un agente anti-IL6 y/o anti-IL8.
27. El uso de una combinación de (A) el Compuesto I; y (B) un agente anti-IL6 y/o anti-IL8 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento contra un trastorno proliferativo, particularmente contra el cáncer.
28. Los novedosos métodos, combinaciones, usos y kits como aquí se describen sustancialmente .
MX2012013305A 2010-05-19 2011-05-17 Terapia combinada y metodo para evaluar resistencia al tratamiento. MX2012013305A (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34624710P 2010-05-19 2010-05-19
PCT/EP2011/057909 WO2011144583A1 (en) 2010-05-19 2011-05-17 Combination therapy and method for assessing resistance to treatment

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MX2012013305A true MX2012013305A (es) 2013-02-01

Family

ID=44063206

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2012013305A MX2012013305A (es) 2010-05-19 2011-05-17 Terapia combinada y metodo para evaluar resistencia al tratamiento.

Country Status (11)

Country Link
US (1) US8309299B2 (es)
EP (1) EP2572198B1 (es)
JP (1) JP5680744B2 (es)
KR (2) KR101539138B1 (es)
CN (1) CN102893155B (es)
BR (1) BR112012027970A2 (es)
CA (1) CA2798181A1 (es)
ES (1) ES2488628T3 (es)
MX (1) MX2012013305A (es)
RU (1) RU2587053C2 (es)
WO (1) WO2011144583A1 (es)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10933417B2 (en) 2013-03-15 2021-03-02 Nanobiosym, Inc. Systems and methods for mobile device analysis of nucleic acids and proteins
HK1218096A1 (zh) * 2013-03-15 2017-02-03 Nanobiosym, Inc. 用於移动设备分析核酸和蛋白质的系统和方法
JP6250351B2 (ja) * 2013-09-30 2017-12-20 シスメックス株式会社 好酸球性気道炎症に関する情報の取得方法およびそのような情報を取得するためのマーカー
CN106093217B (zh) * 2015-05-29 2019-02-22 中国人民解放军第三0二医院 一种评价中西药注射剂序贯联用间隔时间的方法
CN113710253A (zh) * 2019-02-04 2021-11-26 普洛迈博生物技术公司 编码嵌合抗原受体和il-6或检查点抑制剂的短发夹rna序列的核酸序列
EP4158028A4 (en) * 2020-05-28 2024-10-02 University Of Massachusetts OLIGONUCLEOTIDES FOR THE MODULATION OF SARS-COV-2
WO2025183906A1 (en) * 2024-03-01 2025-09-04 Actuate Therapeutics, Inc. Biomarkers for use in cancer therapy

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04325095A (ja) * 1991-04-26 1992-11-13 Tosoh Corp 抗ヒトｉｌ−６モノクロ−ナル抗体及び該抗体を使用するｉｌ−６の測定方法
JPH05215749A (ja) * 1992-02-07 1993-08-24 Toray Ind Inc ヒトインタ−ロイキン−８の免疫学的測定法
US6870033B1 (en) * 1997-02-21 2005-03-22 Genentech, Inc. Antibody fragment-polymer conjugates and humanized anti-IL-8 monoclonal antibodies
AU760486B2 (en) 1999-10-13 2003-05-15 Incyte Genomics, Inc. Multiplex cytokine analysis
US7349913B2 (en) * 2003-08-21 2008-03-25 Microsoft Corporation Storage platform for organizing, searching, and sharing data
KR100838852B1 (ko) * 2003-09-09 2008-06-16 에프. 호프만-라 로슈 아게 감마-세크리테이즈의 활성을 차단하는 말론아미드 유도체
JP4880484B2 (ja) * 2004-02-20 2012-02-22 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 唾液ｍＲＮＡプロファイリング、バイオマーカーならびに関連した方法およびキット
JP4839674B2 (ja) * 2004-05-14 2011-12-21 東レ株式会社 標的物質を迅速簡便に検出する方法およびそのための酵素免疫学的キット
ES2398531T3 (es) * 2006-03-27 2013-03-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Derivados de malonamida como inhibidores de gamma secretasa
AU2007299129A1 (en) * 2006-09-20 2008-03-27 F. Hoffmann-La Roche Ag 4-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-benzo[b][1,4]diazepine derivatives
KR101150574B1 (ko) * 2007-02-02 2012-05-30 에프. 호프만-라 로슈 아게 6-옥소-6,7-다이하이드로-5ｈ-다이벤조［ｂ,ｄ］아제핀-7-일 유도체
US20080300798A1 (en) * 2007-04-16 2008-12-04 Mcdevitt John T Cardibioindex/cardibioscore and utility of salivary proteome in cardiovascular diagnostics
MA33076B1 (fr) 2008-01-11 2012-03-01 Hoffmann La Roche Utilisation d'un inhibiteur de la gamma-secretase pour le traitement du cancer
CN101608222A (zh) * 2008-06-20 2009-12-23 上海主健生物工程有限公司 糖尿病遗传检测试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
US20110287025A1 (en) 2011-11-24
KR20130009884A (ko) 2013-01-23
WO2011144583A1 (en) 2011-11-24
EP2572198B1 (en) 2014-06-25
JP5680744B2 (ja) 2015-03-04
RU2587053C2 (ru) 2016-06-10
CN102893155B (zh) 2016-01-20
BR112012027970A2 (pt) 2019-09-24
CA2798181A1 (en) 2011-11-24
JP2013527454A (ja) 2013-06-27
US8309299B2 (en) 2012-11-13
EP2572198A1 (en) 2013-03-27
KR101718260B1 (ko) 2017-03-20
CN102893155A (zh) 2013-01-23
ES2488628T3 (es) 2014-08-28
HK1176403A1 (zh) 2013-07-26
KR101539138B1 (ko) 2015-07-23
RU2012151434A (ru) 2014-06-27
KR20150065931A (ko) 2015-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yu et al. IL-17A promotes psoriasis-associated keratinocyte proliferation through ACT1-dependent activation of YAP–AREG axis
Biswas et al. Targeting S100A9–ALDH1A1–retinoic acid signaling to suppress brain relapse in EGFR-mutant lung cancer
Lemma et al. MDA-MB-231 breast cancer cells fuel osteoclast metabolism and activity: A new rationale for the pathogenesis of osteolytic bone metastases
Huang et al. Irisin, an exercise myokine, potently suppresses tumor proliferation, invasion, and growth in glioma
MX2012013305A (es) Terapia combinada y metodo para evaluar resistencia al tratamiento.
ES2782003T3 (es) Compañero de diagnóstico para inhibidores de CDK4
Zhu et al. NT5DC2 knockdown inhibits colorectal carcinoma progression by repressing metastasis, angiogenesis and tumor-associated macrophage recruitment: a mechanism involving VEGF signaling
Feng et al. Low levels of AMPK promote epithelial‐mesenchymal transition in lung cancer primarily through HDAC4‐and HDAC5‐mediated metabolic reprogramming
Ding et al. Peroxiredoxin IV plays a critical role in cancer cell growth and radioresistance through the activation of the Akt/GSK3 signaling pathways
Chen et al. Myeloid-derived macrophages and secreted HSP90α induce pancreatic ductal adenocarcinoma development
Tan et al. TRA2A promotes proliferation, migration, invasion and epithelial mesenchymal transition of glioma cells
Yang et al. Abnormal mechanical stress induced chondrocyte senescence by yap loss‐mediated Mettl3 upregulation
Shen et al. Monotropein synergizes with methotrexate to attenuate synovial inflammation in adjuvant-induced arthritis mice and fibroblast-like synoviocyte via GSK-3β
JP6341859B2 (ja) がんマーカーおよびその用途
CN114624441B (zh) 跨膜蛋白43作为胰腺癌肿瘤诊断标志物的应用
CN116492471A (zh) 一种治疗braf v600e突变晚期结直肠癌的组合药物
JP7162872B2 (ja) 医薬用組成物
CN117248020B (zh) Hmgcl作为胶质瘤诊断/预后标志物和治疗靶点的应用
EP3386495A1 (en) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of systemic sclerosis
Zhang et al. LINC03047 promotes mitophagy by recruiting hnRNPF to enhance CTGF mRNA stability in hypoxic pulmonary hypertension
HK1176403B (en) Combination therapy and method for assessing resistance to treatment
Hao et al. CD36-mediated fatty acid metabolic reprogramming activates synovial fibroblasts and promotes rheumatoid arthritis progression
Ma et al. Ghrelin/GHSR system attenuates collagen-induced arthritis in mice and ameliorates inflammation in human rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes
JP2019131502A (ja) 医薬用組成物
CN121227703A (zh) 敲低C5/C5a表达的制剂在制备胶质母细胞瘤治疗药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
FG Grant or registration