MX2014010141A - Compuestos de oxazolidin-2-ona y sus usos de los mismos como inhibidores de pi3ks. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de pirimidina sustituidos por oxazolidin-2-ona que actúan como inhibidores de PI3K (cinasa de fosfatidil-inositol-3), así como a composiciones farmacéuticas de los mismos, a los métodos para su elaboración y usos, para el tratamiento de las condiciones, enfermedades y trastornos dependientes de PI3K.

Description

COMPUESTOS DE OXAZOLIDIN-2-ON A Y USOS DE LOS MISMOS COMO INHIBIDORES DE PI3Ks CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos de pirimidina sustituidos por oxazolidin-2-ona que actúan como inhibidores de PI3K (cinasa de fosfatidil-inositol-3), así como a las composiciones farmacéuticas de los mismos, a los métodos para su elaboración y uso para el tratamiento de condiciones, enfermedades y trastornos dependientes de PI3K.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las cinasas de fosfatidil-inositol-3 (PI3Ks) comprenden una familia de cinasas de lípido que catalizan la transferencia de fosfato hasta la posición D-3' de los lípidos de inositol para producir fosfoinositol-3-fosfato (PIP), fosfoinositol-3,4-difosfato (PIP2), y fosfoinositol-3,4,5-trifosfato (PIP3) que, a su vez, actúan como segundos mensajeros en las cascadas de señalización mediante las proteínas de acoplamiento que contienen homología de pleckstrina, FYVE, Phox y otros dominios enlazadores de fosfolípido en una variedad de complejos de señalización a menudo en la membrana de plasma (Vanhaesebroeck y colaboradores, Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001); Katso y colaboradores, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17: 615 (2001)). De las dos PI3Ks Clase 1, las PI3Ks Clase 1A son heterodímeros compuestos de una subunidad catalítica p110 (isoformas a, ß, d) constitutivamente asociada con una subunidad reguladora que puede ser ?85a, ?55a, ?50a, ?85ß o ?55?. La subclase Clase 1B tiene un miembro de la familia, un heterodímero compuesto de una subunidad catalítica ?110? asociada con una de dos subunidades reguladoras, p 101 o p84 (Fruman y colaboradores, Annu Rev. Biochem. 67: 481 (1998); Suire y colaboradores, Curr. Biol. 15: 566 (2005)). Los dominios modulares de las subunidades p85/55/50 incluyen los dominios de Homología con Src (SH2) que se enlazan con los residuos de fosfotirosina en un contexto de secuencia específico sobre las cinasas de tirosina citoplásmicas y receptoras activadas, dando como resultado la activación y localización de las PI3Ks Clase 1A. La PI3K Clase 1B es directamente activada por los receptores acoplados con proteína-G que se enlazan con un diverso repertorio de ligandos peptídicos y no peptídicos (Stefens y colaboradores, Cell 89: 105 (1997)); Katso y colaboradores, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17: 615-675 (2001)). En consecuencia, los productos de fosfolípido resultantes de PI3K Clase I se enlazan con los receptores corriente arriba con actividades celulares corriente abajo, incluyendo la proliferación, sobrevivencia, quimiotaxis, tráfico celular, movilidad, metabolismo, respuestas inflamatorias y alérgicas, transcripción y traducción (Cantley y colaboradores, Cell 64: 281 (1991); Escobedo y Williams, Nature 335:85 (1988); Fantl y colaboradores, Cell 69: 413 (1992)).

En muchos casos, PIP2 y PIP3 recluían la Akt, el producto del homólogo humano del oncogén viral v-Akt, hacia la membrana de plasma, en donde actúa como un punto nodal para muchas sendas de señalización intracelulares im portantes para el crecimiento y la sobrevivencia (Fantl y colaboradores, Cell 69: 41 3-423(1 992); Bader y colaboradores, Nature Rev. Cáncer 5: 921 (2005) ; Vivanco y Sawyer, Nature Rev. Cáncer 2: 489 (2002)) . La reg ulación aberrante de PI3K, que con frecuencia aumenta la sobrevivencia a través de la activación de Akt, es uno de los eventos más prevalecientes en el cáncer humano, y se ha demostrado que se presenta en múltiples niveles. El gen supresor de tumor PTEN, q ue desfosforila las fosfoinositídas en la posición 3' del anillo de inositol, y al hacerlo de esa manera antagoniza la actividad de PI 3K, se suprime funcionalmente en una variedad de tumores. En otros tumores, se amplifican los genes para la isoforma p 1 1 0a, PIK3CA, y para Akt, y se ha demostrado un aumento de la expresión de proteína de sus productos genéticos en varios cánceres humanos. Adicionalmente, se han descrito mutaciones y la translocalización de p85a que sirven para aumentar el complejo p85-p1 1 0 en los cánceres humanos. Finalmente, se han descrito mutaciones en mal sentido somáticas en PIK3CA que activan las sendas de señalización corriente abajo a frecuencias significativas en una amplia diversidad de cánceres humanos (Kang y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 1 02 : 802 (2005); Samuels y colaboradores, Science 304: 554 (2004); Samuels y colaboradores, Cáncer Cell 7: 561 -573 (2005)).

En algunos tumores de la isoforma p1 1 0IS, PIK3CB se amplifica o se sobre-expresa. En adición , los estudios indican que los tumores impulsados por la pérdida de PTEN pueden ser sensibles a ?1 1 0ß en lugar de ?110a. (Jia y colaboradores, Nature, 454:776-779 (2008). Wee y colaboradores, PNAS 105 (35), 13057-13062 (2008); Liu y colaboradores, Nature Rev. Drug Discovery 8: 627-644 (2009)).

Tanto ?110d como p110y se expresan primordialmente en el sistema hematopoiético y parecen tener funciones significativas en la señalización de los leucocitos (Liu y colaboradores, Blood 110(4), 1191-1198 (2007)). Sin embargo, también tienen funciones en algunos cánceres (Knobbe y colaboradores, Brain Pathol. 13, 507-518 (2003); Kang y colaboradores, PNAS 103(5), 1289-1294 (2006)). la expresión de ?110d está restringida a los leucocitos señalando hacia su función potencial en las enfermedades mediadas por los leucocitos (Vanhaesebroeck y colaboradores, PNAS 94(9), 4330-4335 (1997)). ?110d se sobre-regula en los blastocitos en los pacientes con leucemia mieloide aguda, en donde tiene una función clave en la sobrevivencia celular (Sujobert y colaboradores, Blood 106(3), 1063-1066 (2005)) indicando su potencial como un objetivo en la leucemia y en otras malignidades hematológicas. la activación de ?110d tiene una función importante en el desarrollo de malignidades de células-B y, por consiguiente, se podría utilizar la inhibición de ?110d para tratar las malignidades de células-B, tales como leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no de Hodgkin (NHL), mieloma de células de plasma, y linfoma de Hodgkin (NH) Castillo y colaboradores, Expert Opin. Investig. Drugs 21, 15-22 (2012)).

Estas observaciones muestran que la desregulación de la cinasa de fosfo-i nositol-3 y los com ponentes corriente arriba y corriente abajo de esta send a de señalización es una de las desregulaciones m ás com u nes asociadas con los cánceres hu m anos y las enfermedades proliferativas (Parsons y colaboradores, Nature 436: 792 (2005); Hennessey y colaboradores, Nature Rev. Drug Disc. 4: 988-1 004 (2005)) .

La Solicitud I nternacional de Patente Publicada N úmero WO2007/084786 describe moléculas de pirimidina sustituidas que inhiben PI 3K.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Sigue existiendo u na necesidad de compuestos q ue in hiban la actividad de más de una de las isoformas de P I3K Clase I (alfa , beta, delta y gamma) , debido a que se considera que estos compuestos tienen la capacidad para evitar los mecanismos de adaptación debido a la reconexión de la senda a través de las otras isoformas, comparándose con los compuestos con una especificidad única , por ejemplo, la especificidad para un miembro de la familia de PI3K Clase I .

También puede ser conveniente el aumento de la potencia de inhibición de cuando menos una de las isoformas de PI3K (es decir, que inhiben cuando menos una isoforma de PI3K en concentraciones más bajas, en especial una o ambas de las isoformas alfa y beta). En el caso de los tumores desprovistos de PTEN , por ejemplo, aunq ue las isoforma impulsora es p 1 1 0b, una eficacia completa podría requerir de la participación de las otras isoformas Clase IA. También existe una necesidad de compuestos que inhiban potentemente la cinasa PI3Kalfa, por ejemplo, para el tratamiento de los cánceres que sean primordialmente impulsados por las formas oncogénicas del gen que codifica p110a (por ejemplo, H1047R o E545K de PIK3CA), así como de los tumores que muestren un aumento en el número de copias de PIK3CA.

También son deseables los compuestos que muestren una inhibición selectiva a favor de una o más isoformas de PI3K (por ejemplo, cuando menos dos, de preferencia tres de las isoformas alfa, beta, delta y gamma, por ejemplo, las isoformas alfa, beta y delta), comparándose con mTOR, debido a que el efecto inhibidor de mTOR en términos generales reduce la ventana de seguridad, más especialmente cuando el compuesto inhibe mTOR más fuertemente que PI3K (proporción desfavorable).

Adicionalmente, se desean inhibidores de PI3K que tienen un efecto reducido, en particular que no poseen un efecto fuera del objetivo, tal como el enlace de tubulina, debido a que ese efecto puede provocar efectos de toxicidad no relacionados con la inhibición de PI3K en el objetivo y, por consiguiente, estos compuestos pueden requerir de un control cuidadoso adicional de la dosificación para asegurar que el efecto terapéutico sea controlable y que se pueda atribuir a la inhibición de PI3K. Por consiguiente, existe una necesidad de compuestos que tengan un efecto fuera del objetivo reducido o débil, o que no tengan ningún efecto fuera del objetivo.

Deseablemente, se buscan compuestos que exhiban una mejor inhibición de cuando menos una (por ejemplo, PI3Kalfa), pero en especial dos (por ejemplo, P13Kalfa y PI3Kbeta) o tres (por ejemplo, PI3Kalfa, PI3Kbeta y PI3Kdelta), o de todas las cuatro PI3Ks Clase I (PI3Kalfa, PI3Kbeta, PI3Kdelta y PI3Kgamma), así como un efecto fuera del objetivo reducido (en particular, una ausencia de ese efecto).

La presente invención proporciona compuestos y composiciones farmacéuticas de los mismos, cuyos compuestos son inhibidores de PI3K. La invención también proporciona combinaciones que comprenden estos compuestos. La invención proporciona además los compuestos de la invención, para utilizarse en métodos para tratar, prevenir o mitigar una enfermedad mediada por PI3K, tal como cáncer, los cuales comprenden administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad efectiva de un compuesto inhibidor de PI3K de la invención. La invención también proporciona intermediarios útiles en la preparación de los compuestos de la invención.

La presente invención proporciona, en un aspecto, un compuesto de la fórmula (I): en donde: R1 = en donde R1a = H o -CH3, o en donde D = deuterio; R2 = H, y R3 = H; R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH; o R4 = -CH2OH, y R5 = H; o R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C(OH) (CH3)2y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C(OH) (CH3)2, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 se unen y forman -(0?2)4-; o R4 = ?, y R5 = ?; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH; o R2 = H, y R4 = H; y R3 y R5 se unen y forman el grupo o el grupo R3 = H, y R5 = H; y R2 y R4 se unen y forman el grupo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La línea ondulada indica el punto de unión de la morfolina y también en donde está presente, el punto de unión de otros grupos mostrados, con el resto de la molécula.

A través de toda la divulgación de la presente el signo " = " tiene el significado convencional de "igual" y, en las definiciones de la invención, puede ser reemplazado por "es igual a" o "es" o "representa". A manera de ejemplo, la frase "R3 = H" se puede leer como "R3 es H", o "R3 representa H".

Los compuestos de la fórmula (I) se consideran adecuados, por ejemplo, para utilizarse en el tratamiento de las enfermedades dependientes de la cinasa PI3, en especial de las enfermedades proliferativas, tales como cáncer, por ejemplo, las enfermedades tumorales.

La invención se puede apreciar más completamente haciendo referencia a la siguiente descripción, incluyendo las definiciones mencionadas y los ejemplos concluyentes. Las modalidades descritas son para tomarse de una manera independiente, colectiva, o en cualquier combinación, a menos que se informe de otra manera. Como se utilizan en la presente, los términos "incluyendo", "conteniendo" y "comprendiendo" se utilizan en la presente en su sentido abierto, no limitante.

A menos que se especifique de otra manera, el término "compuestos de la presente invención" o "un compuesto de la presente invención", y similares, se refiere a los compuestos de la fórmula (I), y de las subfórmulas de la misma (por ejemplo, las fórmulas (IA) y (??')), y a las sales de los compuestos, así como a los compuestos isotópicamente marcados (incluyendo las sustituciones con deuterio).

Los compuestos de la invención tienen la estereoquímica ilustrada en la fórmula (I), y en las subfórmulas de la misma, a menos que se informe de otra manera.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es la gráfica de calorimetría de exploración diferencial del material cristalino del Ejemplo 10.

La Figura 2 es la gráfica de difracción en polvo de rayos-X del material cristalino del Ejemplo 10.

La Figura 3 es la gráfica de calorimetría de exploración diferencial del material cristalino del Ejemplo 18, lote A.

La Figura 4 es la gráfica de difracción en polvo de rayos-X del material cristalino del Ejemplo 18, lote A.

La Figura 5 es la gráfica de calorimetría de exploración diferencial del material cristalino del Ejemplo 18, lote B.

La Figura 6 es la gráfica de difracción en polvo de rayos-X del material cristalino del Ejemplo 18, lote B.

La Figura 7 es la gráfica de calorimetría de exploración diferencial del material cristalino del Ejemplo 18, lote C.

La Figura 8 es la gráfica de difracción en polvo de rayos-X del material cristalino del Ejemplo 18, lote C.

La Figura 9 es la gráfica de calorimetría de exploración diferencial del material cristalino del Ejemplo 18, lote D.

La Figura 10 es la gráfica de difracción en polvo de rayos-X del material cristalino del Ejemplo 18, lote D.

La Figura 11 es la gráfica de calorimetría de exploración diferencial del material cristalino del Ejemplo 18, lote E.

La Figura 12 es la gráfica de difracción en polvo de rayos-X del material cristalino del Ejemplo 18, lote E.

DESCRIPCIÓN DETALLADA En la presente, se describen diferentes modalidades de la invención. Se reconocerá que las características especificadas en cada modalidad se pueden combinar con otras características especificadas para proporcionar otras modalidades de la presente invención. También se describen diversas modalidades de la invención (enumeradas) en la presente.

La presente invención proporciona, en un aspecto, un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en O R1 = en donde D = deuterio; R2 = H, y R3 = H; R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH; o R4 = -CH2OH, y R5 = H; o R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = _CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C(OH) (CH3)2L y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C(OH) (CH3)2, o R4 = H o -CH3, y R5 = H o -CH3; o R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 se unen y forman -(CH2)4-; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH; o R2 = H, y R4 = H; y R3 y R5 se unen y forman el grupo o el grupo R3 = H, y R5 = H; y R2 y R4 se unen y forman el grupo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad preferida de ese aspecto, se proporciona compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde: R1 = en donde R1a = H o -CH3 en donde D = deuterio; R2 = H, y R3 = H; R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH; o R4 = -CH2OH, y R5 = H; o R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; 4 = .CH3J -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C(OH) (CH3)2, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 se unen y forman -(CH2)4-; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH; o R2 = H, y R4 = H; y R3 y R5 se unen y forman el grupo o el grupo R3 = H, y R5 = H; y R2 y R4 se unen y forman el grupo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad más preferida de ese aspecto, proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) en donde R1 = en donde R a = H o -CH en donde D = deuterio; R2 = H, y R3 = H; R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH; o R4 = -CH2OH, y R5 = H; o R2 = _CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C(OH) (CH3)2, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 se unen y forman -(CH2)4-; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad preferida adicional, se proporciona un compuesto de la fórmula (I): en donde: R1 = H o -CH3 deuterio; -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R )4 _ H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R >3 _ H, y R4 = H; R R5 se unen y forman -(CH2) -; R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad preferida alternativa adicional, proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula (I): en R - 3 o R = en donde D = deuterio; R4 = H, y Rs = -CH30 -CHaOH; 0 R4 = -CH2OH, y R5 = H; o R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = R5 = H o -CH3; o R3 = R4 = H; R2 y R5 se unen y forman -(CH2)4-; o R4 = R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3. y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Con respecto a la fórmula (I) en cualquiera de las modalidades anteriormente mencionadas, se proporciona la siguiente descripción detallada.

R1a En una modalidad, R1a es H.

En otra modalidad, R1a es -CH3.

En una modalidad preferida R1a es H.

Otras modalidades de la presente invención, se describen a continuación.

En una modalidad, R1 = en donde R1a = H o -CH: o en donde D = deuterio; R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 = -(CH2)4-; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra modalidad, R1 = en donde R = H o -CH o en donde D = deuterio; R2 = ¦CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R 4 _ H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En todavía una modalidad adicional, R1 = en donde R1a = H o -CH-o en donde D = deuterio; R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En todavía una modalidad adicional, R1 = en donde R1a = H o -CH- H2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo En otra modalidad, R1 = en donde R1a = H o -CH3 R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo En otra modalidad de preferencia, R1 = en donde R1a = H o -CH3 R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3l -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = CH3o -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo En otra modalidad de preferencia, R1 = donde R1a = H o -CH R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2CH2OH, y R5 = H, o una sal farmacéuticamente aceptable del En una modalidad, en donde R1a = H o -CH3 en donde D = deuterio; R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(0)H R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = R5 = H o -CH3; o R2 y R5 -(CH2)4-; o R4 = R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3. y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra modalidad, R1 = en donde R1a = H o -CH3 en donde D = deuterio; R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3) -CH2CH2OH, -CH2OC(0)H R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = R5 = H o -CH3; o R4 = R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En todavía una modalidad adicional, en donde R1a = H o -CH3 o en donde D = deuterio; R2 = _CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH30 -CH2OH, 0 R4 = R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En todavía una modalidad adicional, R1 = en donde R1a = H o -CH3, R2 = _CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra modalidad, R1 = en donde R a = H o -CH; R2 = -CH3 O -CH2OH; R3 = H; )4 - ¦CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R = H, y R = -CH3 o -CH2OH, o R4 = R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra modalidad de preferencia, R1 = en donde R1a = H o -CH3, R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = CH3 o -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra modalidad de preferencia, R1 = en donde R1a = H o -CH3, R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, y R5 = H, o una sal farmacéuticamente aceptable del En otra modalidad preferida, R = en donde R1a = H o -CH3 R2 = -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, y R5 = H, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad, se proporcionan los compuestos siguiente fórmula (??'): (??') en donde R a, R2, R3, R4 y R5, son como se describen en cualquiera de las modalidades anteriormente mencionadas.

En una modalidad, R1a puede ser hidrógeno, proporcionando por consiguiente, los compuestos de la siguiente fórmula (IA): (??) en donde: R2 = -CH3) -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad de los compuestos de la fórmula (IA), R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3l -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En otra modalidad de los compuestos de la fórmula (IA), R2 = -CH3 o -CH2OH; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = CH3 o -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra modalidad de los compuestos de la fórmula (IA), R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2CH2OH, y R5 = H, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra modalidad de los compuestos de la fórmula (IA), R2 = -CH3; R3 = H; R4 = -CH2CH2OH, y R5 = H, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

De una manera alternativa, en una modalidad, en donde R1a puede ser hidrógeno, se proporcionan los compuestos de la siguiente fórmula (IA): en donde: R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En una modalidad de los compuestos de la fórmula (IA), R2 = -CH3 o -CH2OH¡ R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En otra modalidad de los compuestos de la fórmula (IA), R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3 o -CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = CH3 o -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra modalidad de los compuestos de la fórmula (IA), R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, y R5 = H, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En una modalidad preferida de los compuestos de la fórmula (IA), R2 = -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, y R5 = H, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Otras modalidades (enumeradas) se proporcionan como sigue: Modalidad 1. Un compuesto de la fórmula (I): o R1 = en donde D = deuterio; R2 = H, y R3 = H; R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH; o R4 = -CH2OH, y R5 = H; o R2 = _CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C(OH) (CH3)2, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C(OH) (CH3)2, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 se unen y forman -(CH2)4-; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH; R2 = H, y R4 = H; y R3 y R5 se unen y forman el grupo o el grupo R3 = H, y R5 = H; y R2 y R4 se unen y forman el grupo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 2. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 1, donde: R2 = _CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 = -(CH2)4-; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 3. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 1 o con la modalidad 2, en donde: R2 = -CH3l -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 4. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 3, en donde: R2 = -CH3> -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H¡ R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 5. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 4, de la fórmula (??'): (??'), en donde R1a = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 6. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 1, de la fórmula (IA): (IA) en donde: R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC(0)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 7. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 6, en donde: R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y Rs = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 8. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 7, en donde: R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = CH3 o -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 9. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 8, en donde: R2 = -C H3 o -CH2OH ; R3 = H ; R4 = -C H3 o -CH2CH2OH , y R5 = H , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Modalidad 10. Un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con la modalidad 1 , el cual se selecciona a partir de: (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidin il-6-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona , (S)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4, 5']-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5, 5-dimetil-oxazolidin-2-ona, 3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-4,5'-bipirimidin-6-il)-4-(hidroxi-metil)-4-metil-oxazolidin-2-ona racémica, (S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-4,5'-bipirimidin-6-il)-4-(hidroxi-metil)-4-metil-oxazolidin-2-ona (estereoqu ímica absoluta no determinada), (R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-4,5'-bipirimidin-6-il)-4-(hidroxi-metil)-4-metil-oxazolidin-2-ona (estereoq u ímica absoluta no determinada) , (3aS, 7aS)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-hexahid ro-benzo-oxazol-2-ona, (S)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-metoxi-metil-oxazolidin-2-ona , (4S,5S)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-rnetil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-amino-2-morfol¡n-4-¡l-4,-trifluoro-met¡l-[415']-b¡pir¡midinil-6-il)-4-hidroxi-metil-oxazolid¡n-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-(D8-morfol¡n-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bip¡r¡m¡din¡l-6-¡l)-4-hidrox¡-met¡l-5-metil-oxazol¡d¡n-2-ona, (S)-3-(2'-amino-2-morfol¡n-4-il-4,-tr¡fluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-(2-hidroxi-etil)-oxazolid¡n-2-ona, (4S,5R)-3-[2,-am¡no-2-((S)-3-met¡l-morfolin-4-il)-4'-tr¡fluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il]-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-am¡no-2-morfolin-4-il-4,-tr¡fluoro-met¡l-[4,5']-bip¡r¡m¡dinil-6-il)-5-metil-2-oxo-oxazol¡d¡n-4-¡l-metil-éster de ácido fórmico, (S)-3-[2'-am ino-2-((S)-3-metii-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipir¡midinil-6-il]-4-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-am¡no-2-morfolin-4-il-4*-trifluoro-metil-[4>5']-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-4-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2,-amino-2-morfoGm-4-il-4,-tr?fluoro-metil-[4,5,]-bipirimidinil-6-il)-5-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-amino-2-D8-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2·-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoGO-metil-[4,5,]-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5S)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-4-metil-oxazolidin-2-ona, (R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-oxazolidin-2-ona, (3aR,6aR)-3-(2'-amino-2-morfolino-4,-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-tetrahidro-furo-[3,4-d]-oxazol-2(3H)-ona, (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2,-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-6-hidroxi-hexahidro-2H-ciclopenta-[d]-oxazol-2-ona racémica, (3aR,6R,6aR)(2,-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-6-hidroxi-hexahidro-2H-ciclopenta-[d]-oxazol-2-ona, (3aS,6S,6aS)(2,-am¡no-2-morfolino-4,-(tr¡fluoro-met¡l)-[4,5,-bipirimid i n]-6-il)-6-h id roxi-hexah id ro-2H -ciclope nta-[d]-oxazol-2-ona, y (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirirnidin]-6-il)-5-(2-hidroxi-etil)-4-metil-oxazolidin-2-ona.

Modalidad 11. Un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con la modalidad 1, el cual se selecciona a partir de: (4S,5R)-3-[2'-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidin¡l-6-il]-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, y (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxi-etil)-4-metil-oxazolidin-2-ona.

Modalidad 12. Un compuesto que se selecciona a partir de: (4S,5R)-3-[2"-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimid inil-6-il]-4-hid roxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, y (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxi-etil)-4-metil-oxazolid in-2-ona.

Modalidad 13. El compuesto de (4S ,5R)-3-[2'-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il]-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona.

Modalidad 14. El compuesto de (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-hid roxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona.

Modalidad 15. El compuesto de (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4, 5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-hid roxi-etil)-4-metil-oxazolidin-2-ona.

Modalidad 16. U na sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de la modalidad 1 3, de la modalidad 14 , o de la modalidad 1 5.

En todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona una forma cristalina del compuesto obtenido a partir del Ejemplo 1 0, que tiene un espectro de difracción de rayos-X sustancialmente igual al espectro de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 2.

En todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona una forma cristalina del compuesto obtenido a partir del Ejemplo 18, lote A, que tiene un espectro de difracción de rayos-X sustancialmente igual al espectro de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 4.

En todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona una forma cristalina del compuesto obtenido a partir del Ejemplo 18, lote B, que tiene un espectro de difracción de rayos-X sustancialmente igual al espectro de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 6.

En todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona una forma cristalina del compuesto obtenido a partir del Ejemplo 18, lote C, que tiene un espectro de difracción de rayos-X sustancialmente igual al espectro de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 8.

En todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona una forma cristalina del compuesto obtenido a partir del Ejemplo 18, lote D, que tiene un espectro de difracción de rayos-X sustancialmente igual al espectro de difracción en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 10.

En todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona una forma cristalina del compuesto obtenido a partir del Ejemplo 18, lote E, que tiene un espectro de difracción de rayos-X sustancialmente igual al espectro de difracción en polvo de rayos-X m ostrado en la Figu ra 1 2.

El térm ino "esencialmente ig ual", con referencia a las posiciones de los picos de difracción de rayos-X, sign ifica q ue se toman en cuenta la posición de pico típica y la variabilidad de la intensid ad . Por eje m plo , una persona experta en la m ateria apreciará que las posiciones de picos (2 T) mostrarán alguna variabilidad inter-aparatos, típicamente de tanto como 0.2°. Además, una persona experta en la materia apreciará que las intensidades de picos relativas mostrarán una variabilidad inter-aparatos, así como una variabilidad debida al grado de cristalinidad , a la orientación preferida , a la superficie de muestra preparada , y a otros factores conocidos por los expertos en este campo , y se deben tomar como medidas cualitativas solamente.

Las modalidades específicas son proporcionadas por los compuestos específicos ejemplificados descritos en la presente.

La presente invención proporciona compuestos y formulaciones farmacéuticas de los mismos que son útiles en el tratamiento de las enfermedades, las condiciones y/o los trastornos en donde la PI3K contribuya a la patogénesis de la enfermedad descrita en la presente.

Los compuestos de la presente invención se pueden sintetizar mediante las rutas sintéticas que incluyen procesos análogos a aquéllos bien conocidos en el campo de la qu ímica, en particular a la luz de la descripción contenida en la presente. Los materiales de partida están generalmente disponibles en las fuentes comerciales, tales como Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wis.) o se preparan fácilmente empleando los métodos bien conocidos por los expertos en este campo (por ejemplo, se preparan mediante los métodos descritos en términos generales en Louis F. Fieser y Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, volúmenes 1 a 19, Wiley, Nueva York (Ediciones 1967-1999), o Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlín, incluyendo los suplementos (también disponibles por medio de la base de datos en línea Beilstein)).

Para propósitos ilustrativos, los esquemas de reacción ilustrados más adelante proporcionan las rutas potenciales para sintetizar los compuestos de la presente invención así como los intermediarios clave. Para conocer una descripción más detallada de los pasos de reacción individuales, véase la sección de Ejemplos más adelante. Los expertos en este campo apreciarán que se pueden utilizar otras rutas sintéticas para sintetizar los compuestos de la invención. Aunque en los esquemas se ilustran materiales de partida y reactivos específicos y se discuten más adelante, se pueden sustituir con otros materiales de partida y reactivos para proporcionar una variedad de derivados y/o condiciones de reacción. En adición, muchos de los compuestos preparados mediante los métodos descritos más adelante se pueden modificar adicionalmente a la luz de esta divulgación utilizando la química convencional bien conocida por los expertos en este campo.

En la preparación de los compuestos de la presente invención, puede ser necesaria la protección de la funcionalidad remota (por ejemplo, los grupos amino, hidroxilo o carboxilo primarios o secundarios) de los intermediarios. La necesidad de dicha protección variará dependiendo de la naturaleza de la funcionalidad remota y de las condiciones de los métodos de preparación. Los grupos protectores de amino adecuados (NH-Pg) incluyen acetilo, trifluoro-acetilo, terbutoxi-carbonilo (BOC), benciloxi-carbonilo (CBz), y 9-fluorenil-metilen-oxi-carbonilo (Fmoc). Los grupos protectores de hidroxilo adecuados incluyen los trialquil-silil-éteres, en donde uno o dos de los grupos alquilo pueden ser reemplazados por fenilo. Los grupos protectores de carboxilo (C(O)O-Pg) adecuados incluyen los alquil-ésteres (por ejemplo, metilo, etilo, o terbutilo), los bencil-ésteres, los silil-ésteres, y similares. La necesidad de esta protección es determinada fácilmente por un experto en la materia. Para una descripción general de los grupos protectores y su uso, véase T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Nueva York, 1991.

El Esquema 1 (a continuación) describe una ruta potencial para producir los compuestos de la fórmula (??'), en donde R1-R5 son como se definen anteriormente. En los casos en donde está presente un grupo protector, se agrega un paso de desprotección, para convertir el IA' protegido en el ??'.

Esquema 1 De una manera alternativa, los compuestos de la fórmula (??') también se pueden sintetizar invirtiendo los pasos mostrados en el esquema I, es decir, primero el acoplamiento de Suzuki, seguido por la reacción de Buchwald con el Ib.

Para aquellas oxazolidin-2-onas Ib que no estén comercialmente disponibles, el esquema 2 que se encuentra a continuación, proporciona un proceso para la preparación de los intermediarios en donde R2 a R5 son como se definen anteriormente. Si está presente un grupo hidroxilo primario en cualquiera de R2 a R5, es precedente un paso de protección selectiva, como se ejemplifica en el esquema 3. El grupo amina se puede proteger en un paso precedente adicional como se muestra en el esquema 4, en donde también se muestra un grupo protector de hidroxilo diferente.

Esquema D- Esquema 3 D-a Esquema 4 El producto protegido del esquema 3 se puede ciclar con trifosgeno como se muestra en general en el esquema 2, y como se muestra específicamente en el esquema 5, para proporcionar un ejemplo de un intermediario Ib.

Esquema 5 El producto doblemente protegido del esquema 4 se puede ciclar con hidruro de sodio como se muestra en el esquema 6, para proporcionar un ejemplo de un intermediario Ib.

El esquema 7 ¡lustra una ruta alternativa para el intermediario doblemente protegido del esquema 4, el cual entonces se puede ciclar como ya se mostró en el esquema 6.

Esquema 7 El siguiente esquema 8 proporciona la síntesis del intermediario de éster borónico B .

Intermediario B Esquema 8 La reacción del producto ciclado del esquema 6 con el intermediario de 4,6-dicloro-pirimidina (por ejemplo, el intermediario A o el producto a partir del paso 10.1, ambos referidos más adelante en la presente), como se muestra en el esquema 1, puede proporcionar intermediarios adicionales, y unos específicos se muestran como sigue: Además, la reacción de los intermediarios formados como se muestra en el esquema 1 con el Intermediario B, proporciona un producto protegido ??', como sigue: Por consig uiente, un compuesto intermediario de la invención cluye un compuesto de las siguientes fórmulas: en donde R1 a y R4 son como se definen anteriormente en la presente, Hal es halógeno, tal como cloro, y PG es un grupo protector, por ejemplo, un grupo protector de sililo formando, por ejemplo, trialq uil-silil-éteres, en donde uno o dos de los grupos alquilo pueden ser reemplazados por fenilo, por ejemplo, un grupo protector de alq uil-difenil-silil-éter, específicamente dimetil-terbutil-sililo, o difenil-terbutil-sililo.

Otro compuesto intermediario de la invención incluye un compuesto de las siguientes fórmulas: Se pueden prever otros compuestos intermediarios similarmente protegidos, como se ilustra anteriormente en la presente, con referencia a las fórmulas de la presente, si está presente un grupo hidroxilo primario en cualquiera de R2 a R5. Estos compuestos protegidos también se incluyen en la divulgación. Por ejemplo, cuando R4 es el grupo -CH2CH2OH, éste se puede proteger para proporcionar los compuestos en donde R4 es -CH2CH20-PG, en donde PG es como se define anteriormente, por ejemplo: La desprotección del grupo hidroxilo protegido de terbutil difenil-sililo o terbutil-dimetil-sililo (desprotección general de los silil éteres) del producto protegido I ?' , para proporcionar, por ejemplo, el producto final, se puede lograr utilizando HF«piridina (por ejemplo, en tetrahidrofurano (THF)) o HCI.

Los compuestos de la presente invención, o los intermediarios utilizados en la presente, se pueden aislar y utilizar como el compuesto por sí mismo (por ejemplo, la forma de base libre) o como su sal si, por ejemplo, el valor de pKA del compuesto es tal para permitir la formación de la sal. Como se utilizan en la presente, los términos "sal" o "sales" se refieren a una sal de adición de ácido o de adición de base de un compuesto de la invención. Las "sales" incluyen en particular las "sales farmacéuticas aceptables". El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales que conservan la efectividad biológica y las propiedades de los compuestos de esta invención y que típicamente no son biológicamente o de otra manera indeseables. Los compuestos de la presente invención pueden ser capaces de formar las sales de adición de ácido en virtud de la presencia de un grupo amino. Se prefieren los compuestos de la invención por sí mismos.

Los ácidos inorgánicos y los ácidos orgánicos para la formación de las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen, por ejemplo, las sales de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, cloruro/clorhidrato, clorteofilonato, citrato, etandisulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, lauril-sulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metil-sulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato ácido/fosfato diácido, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfosalicilato, tartrato, tosilato y trifluoro-acetato.

Los ácidos inorgánicos para la derivación de sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares.

Los ácidos orgánicos para la derivación de sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metan-sulfónico, ácido etan-sulfónico, ácido toluen-sulfónico, ácido sulfosalicílico, y similares. Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables se pueden formar con bases inorgánicas y orgánicas.

Las bases inorgánicas para la derivación de sales incluyen, por ejemplo, las sales de amonio y de los metales a partir de las columnas I a XII de la Tabla Periódica. En ciertas modalidades, las sales se pueden derivar a partir de sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, hierro, plata, zinc, y cobre; las sales particularmente adecuadas incluyen las sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio.

Las bases orgánicas para la derivación de sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias, y terciarias, aminas sustituidas, incluyendo las aminas sustituidas que se presentan naturalmente, aminas cíclicas, resinas básicas de intercambio de iones, y similares. Ciertas aminas orgánicas incluyen isopropil-amina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietil-amina, Usina, meglumina, piperazina y trometamina.

En los casos en donde se puedan formar las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención, se pueden sintetizar a partir de un compuesto progenitor, una fracción básica o ácida, mediante los métodos químicos convencionales. En términos generales, estas sales se pueden preparar mediante la reacción de las formas de ácido libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base apropiada (tal como hidróxido, carbonato, o bicarbonato de Na, Ca, Mg, o K, o similares), o mediante la reacción de las formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Estas reacciones típicamente se llevan a cabo en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de los dos. En términos generales, es recomendable el uso de medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo, cuando sea practicable. Las listas de las sales adecuadas adicionales se pueden encontrar, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20a Edición, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); y en "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).

A menos que se indique de otra manera, cualquier fórmula dada en la presente, pretende representar las formas no marcadas.

Las formas isotópicamente marcadas de los compuestos con deuterio se muestran con deuterio (D), como un sustituyente en lugar de H. Se puede preparar otros compuestos isotópicamente marcados de la presente invención y tienen las estructuras ilustradas por las fórmulas dadas en la presente, excepto que uno o más átomos son reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa seleccionados. Los ejemplos de los isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invención incluyen los isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor, y cloro, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36CI, 125l, respectivamente. La invención pueden incluir diferentes compuestos isotópicamente marcados, como se definen en la presente, por ejemplo, aquéllos en donde hay isótopos radioactivos presentes, tales como 3H, 13C, y 1 C. Estos compuestos isotópicamente marcados son útiles en los estudios metabólicos (con 1 C), en los estudios de cinética de reacción (con, por ejemplo, 2H o 3H), en las técnicas de detección o de formación de imágenes, tales como tomografía por emisión de positrones (PET) o tomografía computarizada con emisión de un solo fotón (SPECT), incluyendo los ensayos de distribución del fármaco o del sustrato en el tejido, o en el tratamiento radioactivo de los pacientes. En especial, puede ser particularmente deseable un 18F o un compuesto marcado para los estudios de PET o SPECT. Los compuestos isotópicamente marcados de esta invención se pueden preparar en términos generales llevando a cabo lOS procedim ientos que se dan a con ocer en los esquemas o en los Ejem plos y en las preparaciones que se describen m ás adelante , m ediante la utilización de un reactivo isotópicamente marcado fácilmente disponible para sustituir a un reactivo no isotópicamente m arcado, por ejem plo, morfolina m arcada con deuterio (D8-m orfolina) .

Adicionalm ente, la sustitución con isótopos más pesad os, en particular deuterio (es decir, 2H o D) puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, un aumento de la vida media in vivo, requerimientos de dosificación reducida, una inhibición reducida de CYP (competitiva o dependiente del tiempo) o una mejora en el índice terapéutico. Por ejemplo, la sustitución con deuterio puede modular los efectos secundarios indeseables del compuesto no deuterado, tal como la inhibición competitiva de CYP, la inactivación de CYP dependiente del tiempo, etc. Se entiende que el deuterio en este contexto se considera como un sustituyente en los compuestos de la presente invención. La concentración de este isótopo más pesado , específicamente deuterio, se puede definir por el factor de enriquecimiento isotópico. El término "factor de en riquecimiento isotópico", como se utiliza en la presente, significa la proporción entre la abundancia isotópica y la abundancia natu ral de u n isótopo especificado. Si un sustituyente en un compuesto de esta invención es denotado como deuterio, este compuesto tiene un factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio designado de cuando menos 3,500 (52.5 por ciento de incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado), de cuando menos 4,000 (60 por ciento de incorporación de deuterio), de cuando menos 4,500 (67.5 por ciento de incorporación de deuterio), de cuando menos 5,000 (75 por ciento de incorporación de deuterio), de cuando menos 5,500 (82.5 por ciento de incorporación de deuterio), de cuando menos 6,000 (90 por ciento de incorporación de deuterio), de cuando menos 6,333.3 (95 por ciento de incorporación de deuterio), de cuando menos 6,466.7 (97 por ciento de incorporación de deuterio), de cuando menos 6,600 (99 por ciento de incorporación de deuterio), o de cuando menos 6,633.3 (99.5 por ciento de incorporación de deuterio).

Adicionalmente, los compuestos de la presente invención, incluyendo sus sales, también se pueden obtener en la forma de sus hidratos, o pueden incluir otros solventes utilizados para su cristalización. Los compuestos de la presente invención pueden formar, inherentemente o por diseño, solvatos, con los solventes farmacéuticamente aceptables (incluyendo agua). Estas moléculas de solvente son aquéllas comúnmente utilizadas en la técnica farmacéutica, que son conocidas como inocuas para el receptor, por ejemplo, agua, etanol, y similares. El término "hidrato" se refiere al complejo en donde la molécula de solvente es agua. El término "solvato" se refiere a un complejo molecular de un compuesto de la presente invención (incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables del mismo) con una o más moléculas de solvente incorporadas en la estructura de la celosía cristalina. Las moléculas de solvente en el solvato pueden estar presentes en un arreglo regular y/o en un arreglo no ordenado. El solvato puede comprender una cantidad ya sea estequiométrica o no estequiométrica de las moléculas de solvente. Por ejemplo, un solvato con una cantidad no estequiométrica de las moléculas de solvente puede resultar de la pérdida parcial del solvente a partir del solvato. Los solvatos se pueden presentar como dímeros u oligómeros, los cuales comprenden más de una molécula o el compuesto de acuerdo con la presente invención, dentro de la estructura de la celosía cristalina.

Los compuestos de la presente invención, incluyendo las sales, hidratos y solvatos de los mismos, pueden formar, inherentemente o por diseño, polimorfos.

Como se utiliza en la presente, "polimorfo" se refiere a las formas cristalinas que tienen la misma composición química pero diferentes arreglos espaciales de las moléculas, átomos, y/o iones que formen el cristal.

Como se utiliza en la presente, "amorfo" se refiere a una forma sólida de una molécula, átomo, y/o iones, que no es cristalina. Un sólido amorfo no exhibe un patrón de difracción de rayos-X definitivo. Los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen aquéllos en donde el solvente de cristalización puede ser isotópicamente sustituido por ejemplo, D20, d6-acetona, d6-DMSO.

Será reconocido por los expertos en la materia que los compuestos de la presente invención contienen centros quirales y, como tales, existen en formas isoméricas. Como se utiliza en la presente, el término "isómeros" se refiere a diferentes compuestos que tienen la misma fórmula molecular pero que difieren en el arreglo y configuración de los átomos. También como se utiliza en la presente, el término "un isómero óptico" o "un estereoisómero" se refiere a cualquiera de las diferentes configuraciones estereoisoméricas, las cuales pueden existir para un compuesto dado de la presente invención. Se entiende que un sustituyente se puede unir en un centro quiral de un átomo de carbono. Por consiguiente, los compuestos de la invención incluyen los enantiómeros, mostrados mediante la indicación de las configuraciones estereoespecíficas en los centros quirales en la ilustración estructural de los compuestos de la invención, en donde un enlace de cuña punteado indica que el sustituyente o átomo unido está por debajo del plano y un enlace de cuña sólido indica que el sustituyente o átomo unido está por arriba del plano.

Los "enantiómeros" son un par de estereoisómeros que son imágenes de espejo que no se pueden sobreponer una en la otra. Una mezcla de 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla "racémica". El término se utiliza para designar una mezcla racémica donde sea apropiado.

Los "diaestereoisómeros" son los estereoisómeros que tienen cuando menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes de espejo uno del otro.

La estereoquímica absoluta se especifica de acuerdo con el sistema R-S de Cahn-Ingold-Prelog. Cuando un compuesto es un enantiómero puro, la estereoquímica en cada átomo de carbono quiral se puede especificar mediante cualquiera de R o S. Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta se desconoce, pueden ser designados como (+) o (-) dependiendo de la dirección (dextrógira o levógira) en la que rotan la luz polarizada en el plano en la longitud de onda de la línea de sodio D. Algunos de los compuestos descritos en la presente contienen uno o más centros o ejes asimétricos y, por consiguiente, pueden dar lugar a enantiómeros, diaestereómeros, y otras formas estereoisoméricas que se puedan definir en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o (S)-.

Cualquier átomo asimétrico (por ejemplo, un átomo de carbono quiral, o similares) de los compuestos de la presente invención puede estar enantioméricamente enriquecido, por ejemplo, la configuración (R) o (S). En ciertas modalidades, cada átomo asimétrico tiene un exceso enantiomérico de cuando menos el 50 por ciento, un exceso enantiomérico de cuando menos el 60 por ciento, un exceso enantiomérico de cuando menos el 70 por ciento, un exceso enantiomérico de cuando menos el 80 por ciento, un exceso enantiomérico de cuando menos el 90 por ciento, un exceso enantiomérico de cuando menos el 95 por ciento, o un exceso enantiomérico de cuando menos el 99 por ciento en la configuración (R) o (S) descrita para el átomo asimétrico específico (por ejemplo, átomo de carbono quiral).

De conformidad con lo anterior, un compuesto de la presente invención puede estar en la forma de un enantiómero sustancialmente puro.

Cualesquiera mezclas de isómeros resultantes se pueden separar con base en las diferencias fisicoquímicas de los constituyentes, en los isómeros ópticos puros o sustancialmente puros, por ejemplo, mediante cromatografía y/o cristalización fraccionaria.

Los isómeros (R) y (S) ópticamente activos se pueden preparar utilizando sintones quirales o reactivos quirales, o se pueden resolver empleando las técnicas convencionales. Cualesquiera racematos resultantes de los productos finales o intermediarios se pueden resolver en los antípodas ópticos mediante los métodos conocidos. Por ejemplo, los métodos conocidos incluyen la separación de las sales diaestereoméricas de los mismos, obtenidas con un ácido o una base ópticamente activa, y la liberación del compuesto ácido o básico ópticamente activo. En particular, por consiguiente, se puede emplear una fracción básica para resolver los compuestos de la presente invención en sus antípodas ópticos, por ejemplo, mediante la cristalización fraccionaria de una sal formada con un ácido ópticamente activo, por ejemplo, ácido tartárico, ácido dibenzoil-tartárico, ácido diacetil-tartárico, ácido di-0,0'-p-toluoil-tartárico, ácido mandélico, ácido mélico o ácido canfor-10-sulfónico. Los productos racémicos también se pueden resolver mediante crom atografía q uiral , por ejem plo , cromatografía de l íq uidos a alta presión (H P LC ), utilizando un adsorbente q u iral.

Si el com puesto contiene un doble enlace , el sustituyente puede estar en la config uración E o Z. S i el com puesto contiene un cicloalquilo d isustituido , el sustituyente de cicloalq ui lo puede tener u na configu ración c/s o trans. También se pretende incluir todas las formas tautoméricas.

Los compuestos de la invención que contienen grupos capaces de actuar como donadores y/o aceptores para los enlaces de hidrógeno, pueden ser capaces de formar co-cristales con los formadores de co-cristales adecuados. Estos co-cristales se pueden preparar a partir de los compuestos de la presente invención mediante los procedimientos de formación de co-cristales conocidos. Estos procedimientos incluyen molienda, calentamiento, co-sublimación , co-fusión , o poner en contacto los compuestos en solución de la presente invención con el formador de co-cristales bajo condiciones de cristalización , y el aislamiento de los co-cristales formados de esta manera. Los formadores de co-cristales adecuados incluyen aquéllos descritos en la Publicación Internacional Número WO 2004/0781 63. Por consiguiente, la invención proporciona además co-cristales, los cuales comprenden un compuesto de la presente invención .

Los compuestos de la fórmula (I) inhiben las cinasas PI3 (PI 3K) , y por consiguiente, pueden ser útiles en el tratamiento de las enfermedades dependientes de cinasa de proteína o de l ípido, en especial las enfermedades dependientes de las cinasas PI3 clase I, PI3Kalfa, PI3Kbeta, PI3Kdelta y PI3Kgamma o uno o más de los miembros de cinasa individuales de las mismas, o cualquier combinación de cualesquiera dos o más de las cinasas mencionadas.

Los compuestos que inhiben la actividad de más de una de las isoformas de PI3K Clase I (alfa, beta, delta y gamma), en particular sustancialmente equipotentes sobre los miembros de la clase IA p110a, p110b y p110d, y opcionalmente así como el miembro de la clase IB p 110 g , se consideran benéficos debido a que se considera que estos compuestos tienen la capacidad para impedir los mecanismos de adaptación debido a la reconexión de la senda a través de las otras isoformas, comparándose con los compuestos con una especificidad única, por ejemplo, una especificidad para un miembro de la familia de PI3K Clase I. "Equipotente" significa que los compuestos inhiben varias isoformas hasta un grado comparable, por ejemplo, como se mide en un ensayo enzimático o celular descrito en la presente.

El aumento de la potencia de inhibición de cuando menos una de las isoformas de PI3K (es decir, inhiben cuando menos una isoforma de PI3K en concentraciones más bajas) también puede ser conveniente. En el caso de los tumores desprovistos de PTEN, por ejemplo, aunque las isoforma impulsora es p110b, una eficacia completa podría requerir de la participación de las otras isoformas de la clase IA. Por ejemplo, podría ser conveniente la potencia sobre las isoformas alfa y beta.

También existe una necesidad de compuestos que inhiban potentemente la cinasa PI3Kalfa, por ejemplo, para el tratamiento de los cánceres que sean primordialmente impulsados por las formas oncogénicas del gen que codifica p110a (por ejemplo, PIK3CA H1047R o E545K), así como de los tumores que muestren un aumento en el número de copias de PIK3CA.

Es deseable que los compuestos de la presente invención exhiban la actividad de cinasa PI3 mencionada sin que exhiba actividad sobre mTOR, o que cuando menos exhiban una selectividad favorable para inhibir una o más de las cinasas PI3 clase I sobre mTOR. Por ejemplo, son deseables los compuestos que muestren una inhibición selectiva a favor de una o más isoformas de PI3K (por ejemplo, de cuando menos dos, de preferencia tres, por ejemplo, de las isoformas alfa, beta y delta) comparándose con mTOR, debido a que el efecto inhibidor de mTOR en términos generales reduce la ventana de seguridad, más especialmente cuando el compuesto inhibe mTOR más fuertemente que PI3K (proporción desfavorable).

Adicionalmente, se desean inhibidores de PI3K que tengan un efecto fuera del objetivo reducido, o que no posean un efecto fuera del objetivo, tal como que no posean enlace de tubulina, debido a que tal efecto puede provocar efectos de toxicidad no relacionados con la inhibición de PI3K en el objetivo y, por consiguiente, estos compuestos pueden requerir de un control cuidadoso adicional de la dosificación para asegurar que el efecto terapéutico sea controlable y que se pueda atribuir a la inhibición de PI3K. Los compuestos de la presente invención, cuando se miden empleando los procedimientos descritos en la presente, muestran un efecto fuera del objetivo (enlace de tubulina) débil o no observable.

Se desean compuestos que inhiban la actividad de más de una de las isoformas de PI3K Clase I (alfa, beta, delta y gamma), en particular sustanciaimente equipotentes sobre los miembros de la clase IA p110a, p110b y p110d, y opcionalmente asi como sobre el miembro de la clase IB p110g, y que en adición tengan un efecto fuera del objetivo reducido, o que no posean un efecto fuera del objetivo, tal como que no posean enlace de tubulina, o que posean un enlace de tubulina reducido.

Deseablemente, se buscan compuestos que exhiban una inhibición mejorada de cuando menos una PI3K clase 1 (por ejemplo, PI3Kalfa), pero en especial dos (por ejemplo, PI3Kalfa y PI3Kbeta) o tres (por ejemplo, PI3Kalfa, PI3Kbeta y PI3Kdelta), o de todas las cuatro PI3Ks clase 1 (PI3Kalfa, PI3Kbeta, PI3Kdelta y PI3Kgamma), así como un efecto fuera del objetivo reducido (en particular, una ausencia de efecto fuera del objetivo) (por ejemplo, un enlace de tubulina reducido o ausente). Deseablemente, es conveniente que estos compuestos también muestren una inhibición selectiva a favor de una o más isoformas de PI3K (por ejemplo, de cuando menos dos, de preferencia tres, por ejemplo, de las isoformas alfa, beta y delta) comparándose con mTOR.

En consecuencia, en un aspecto adicional, se puede utilizar un compuesto de la presente invención (por ejemplo, en la elaboración de un medicamento) para el tratamiento de las enfermedades, condiciones o los trastornos asociados con la inhibición o antagonismo de las cinasas PI3 en un sujeto (por ejemplo, en un mamífero, de preferencia en un ser humano). Debido a la relevancia para la inhibición de la cinasa PI3, los compuestos de la presente invención, por consiguiente, se consideran útiles en el tratamiento de las enfermedades proliferativas, tales como cáncer. Las enfermedades/condiciones particulares para el tratamiento mediante los compuestos de la presente invención incluyen un tumor benigno o en especial maligno, tumores sólidos, un carcinoma del cerebro, riñon, hígado, glándula suprarrenal, vejiga, mama, estómago (en especial tumores gástricos), esófago, ovarios, colon, recto, próstata, páncreas, pulmón (por ejemplo, cáncer pulmonar no microcelular, cáncer pulmonar microcelular), vagina, tiroides, sarcoma, glioblastomas, mieloma múltiple o cáncer gastrointestinal, en especial carcinoma de colon o adenoma colo-rectal, o un tumor de cuello y cabeza, otras enfermedades, tales como síndrome de Vacaden, enfermedad de Lhermitte-Duclos y síndrome de Bannayan-Zonana (o enfermedades en donde la senda de PI3K/PKB se activa de una manera aberrante), hiperplasia de próstata, una neoplasia, en especial de carácter epitelial, de preferencia carcinoma mamario o carcinoma de células escamosas, malignidades de células-B tales como leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma no de Hodgkin (NHL), mieloma de células de plasma, y linfoma de Hodgkin (NH) o una leucemia. Los compuestos deseablemente son capaces de provocar la regresión de los tumores y de prevenir la formación de metástasis tumoral y el crecimiento de (también micro-) metástasis. También es posible utilizar los compuestos de la fórmula (I) en el tratamiento de enfermedades del sistema inmunológico hasta donde estén involucradas varias o, en especial, las cinasas de lípido individuales y/o cinasas de proteína serina/treonina (adicionales).

Como se utiliza en la presente, el término "un", "uno", "el" y términos similares utilizados en el contexto de la presente invención (en especial en el contexto de las reivindicaciones), se deben interpretar para cubrir tanto el singular como el plural, a menos que se indique de otra manera en la presente o que sea claramente contradicho por el contexto.

Todos los métodos descritos en la presente, se pueden llevar a cabo en cualquier orden adecuado a menos que se indique de otra manera en la presente o que sea de otra manera claramente contradicho por el contexto. El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o del lenguaje de ejemplo (por ejemplo, "tales como") proporcionado en la presente, pretende meramente iluminar mejor la invención y no presenta una limitación sobre el alcance de la invención reclamada de otra manera.

Los compuestos de la presente invención son típicamente utilizados como una composición farmacéutica (por ejemplo, un compuesto de la presente invención, y cuando menos un vehículo farmacéuticamente aceptable).

Por consiguiente, en otro aspecto, la presente invención pro orciona una composición farmacéutica, la cual comprende un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Un compuesto de la presente invención se puede proporcionar en una composición en una forma amorfa. Un compuesto de la presente invención se puede proporcionar en una composición en su forma libre, es decir, no en la forma de una sal (la forma de base libre). Un compuesto de la presente invención se puede proporcionar en una composición en su forma libre, es decir, no en la forma de una sal (la forma de base libre), y el cual también esté en una forma amorfa.

Como se utiliza en la presente, el término "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, tensoactivos, antioxidantes, conservadores (por ejemplo, agentes antibacterianos, agentes anti-fúngicos), agentes isotónicos, agentes retardantes de absorción, sales, conservadores, estabilizantes de fármacos, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegración, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, tintes, agentes reguladores (por ejemplo, ácido maleico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido acético, bicarbonato de sodio, fosfato de sodio, y similares), y similares, y combinaciones de los mismos, reconocidos en general como seguros (GRAS), como serían conocidos por los expertos en este campo (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edición, ack Printing Company, 1990, páginas 1289- 1329). Excepto hasta donde cualquier vehículo convencional sea incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en las composiciones terapéuticas o farmacéuticas. Para los propósitos de esta invención, los solvatos e hidratos se consideran como las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la presente invención y un solvente (es decir, solvato) o agua (es decir, hidrato).

Las formulaciones se pueden preparar empleando los procedimientos convencionales de disolución y mezcla. Por ejemplo, la sustancia de fármaco a granel (es decir, el compuesto de la presente invención o la forma estabilizada del compuesto (por ejemplo, un complejo con un derivado de ciclodextrina u otro agente formador de complejo conocido)) se disuelve en un solvente adecuado en la presencia de uno o más de los excipientes descritos anteriormente. El compuesto de la presente invención típicamente se formula en formas de dosificación farmacéuticas para proporcionar una dosificación fácilmente controlable del fármaco, y para dar al paciente un producto elegante y fácilmente manejable.

La composición farmacéutica se puede formular para vías de administración particulares, tales como administración oral, administración parenteral, y administración rectal, etc. En adición, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden configurar en una forma sólida (incluyendo, sin limitación, cápsulas, tabletas, pildoras, gránulos, polvos o supositorios), o en una forma líquida (incluyendo, sin limitación, soluciones, suspensiones o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas se pueden someter a las operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización y/o pueden contener diluyentes inertes, agentes lubricantes, o agentes reguladores convencionales, así como adyuvantes, tales como conservadores, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes y reguladores del pH, etc.

Típicamente, las composiciones farmacéuticas son tabletas o cápsulas de gelatina que comprenden el ingrediente activo junto con: a) diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina; b) lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o de calcio y/o polietilenglicol; para tabletas también, c) aglutinantes, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metil-celulosa, carboxi-metil-celulosa de sodio y/o polivinil-pirrolidona; si se desea, d) desintegrantes, por ejemplo, almidones, agar, ácido algínico, o su sal sódica, o mezclas efervescentes; y/o e) absorbentes, colorantes, saborizantes y edulcorantes. Las tabletas pueden tener ya sea un recubrimiento de película o bien un recubrimiento entérico de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica.

Se pueden utilizar soluciones del ingrediente activo, y también suspensiones, y en especial soluciones o suspensiones acuosas isotónicas, siendo posible, por ejemplo, en el caso de las composiciones liofilizadas que comprenden al ingrediente activo solo o junto con un vehículo, por ejemplo, manitol, que estas soluciones o suspensiones se produzcan antes de usarse. Las composiciones farmacéuticas se pueden esterilizar y/o pueden comprender adyuvantes, por ejemplo, conservadores, estabilizantes, agentes humectantes y/o emulsionantes, solubilizantes, sales para regular la presión osmótica y/o reguladores; y se preparan de una manera conocida por sí misma, por ejemplo, por medio de los procesos convencionales de disolución o liofilización. Estas soluciones o suspensiones pueden comprender sustancias incrementadoras de viscosidad, tales como carboxi-metil-celulosa de sodio, carboxi-metil-celulosa, hidroxi-propil-metil-celulosa, dextrano, polivinil-pirrolidona o gelatina.

Las suspensiones en aceite comprenden como el componente de aceite, los aceites vegetales, sintéticos o semi-sintéticos acostumbrados para propósitos de inyección. Se pueden mencionar como tales en especial los ésteres de ácidos grasos líquidos que contienen como el componente de ácido, un ácido graso de cadena larga que tiene de 8 a 22 átomos de carbono, en especial de 12 a 22 átomos de carbono, por ejemplo, ácido láurico, ácido tridecílico, ácido mirístico, ácido pentadecílico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido behénico, o los ácidos insaturados correspondientes, por ejemplo, ácido oleico, ácido elaídico, ácido erúcico, ácido brasídico o ácido linoleico, si se desea con la adición de antioxidantes, por ejemplo, vitamina E, beta- caroteno o 3,5-d¡terbut¡l-4-hidrox¡-tolueno. El componente alcohol de esos ésteres de ácidos grasos tiene un máximo de 6 átomos de carbono, y es un mono- o poli-hidroxilo, por ejemplo, un mono-, di- o tri-hidroxilo; un alcohol, por ejemplo, metanol (MeOH), etanol, propanol, butanol o pentanol; o los isómeros de los mismos, pero en especial glicol y glicerol. Por consiguiente, se deben mencionar los siguientes ejemplos de los ésteres de ácidos grasos: oleato de etilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, "Labrafil M 2375" (trioleato de glicerol de polioxietileno, Gattefossé, París), "Miglyol 812" (triglicérido de ácidos grasos saturados con una longitud de cadena de 8 a 12 átomos de carbono, Hüls AG, Alemania), pero en especial aceites vegetales, tales como aceite de semilla de algodón, aceite de almendra, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de ajonjolí, aceite de semilla de soya, y más especialmente aceite de cacahuate.

Las composiciones inyectables se preparan de la manera acostumbrada bajo condiciones estériles; se aplica lo mismo también a introducir las composiciones en ampolletas o frascos y sellar los contenedores.

Las composiciones farmacéuticas para su administración oral se pueden obtener mediante la combinación del ingrediente activo con vehículos sólidos, si se desea se granula una mezcla resultante, y se procesa la mezcla, si se desea o es necesario, después de la adición de los excipientes apropiados, en tabletas, núcleos de grageas, o cápsulas. También es posible que se incorporen en vehículos de plástico que permitan que los ingredientes activos se difundan o se liberen en cantidades medidas.

Las composiciones adecuadas para su administración oral incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la invención, en la forma de tabletas, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elíxires. Las composiciones destinadas para uso oral se preparan de acuerdo con cualquier método conocido en la materia para la elaboración de composiciones farmacéuticas, y estas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados a partir del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservadores, con el objeto de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y de buen sabor. Las tabletas pueden contener el ingrediente activo en mezcla con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos que sean adecuados para la elaboración de tabletas. Estos excipientes son, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y desintegrantes, por ejemplo, almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina o acacia; y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas son no recubiertas o se recubren mediante las técnicas conocidas para retardar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal y de esta manera proporcionar una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material de retardo de tiempo, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso oral se pueden presentar como cápsulas de gelatina duras en donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o con un medio de aceite, por ejemplo, aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de oliva.

Las composiciones farmacéuticas para su administración tópica se pueden obtener mediante la combinación del ingrediente activo con un vehículo líquido (por ejemplo, un vehículo líquido acuoso) para disolver o dispersar el ingrediente activo, junto con los ingredientes de formulación opcionales adicionales, tales como solventes/solubilizantes, agentes gelificantes, aceites, estabilizantes, reguladores y conservadores para proporcionar, por ejemplo, una solución, loción, crema, gel o ungüento. Las composiciones farmacéuticas para su administración tópica se pueden proporcionar, por ejemplo, para la aplicación dérmica. Las composiciones farmacéuticas para su administración tópica pueden comprender de aproximadamente el 0.1 por ciento a aproximadamente el 2 por ciento de ingrediente activo, siendo el ingrediente activo en especial un compuesto de la fórmula (I), en particular, un compuesto descrito en los ejemplos individuales en la presente.

La composición (o formulación) farmacéutica para su aplicación se puede empacar en una variedad de formas dependiendo del método empleado para administrar el fármaco. En términos generales, un artículo para distribución incluye un recipiente que tenga depositada en el mismo la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Los recipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en este campo, e incluyen materiales tales como frascos (de plástico y vidrio), ampolletas, bolsas de plástico, cilindros metálicos, y similares. El recipiente también puede incluir un ensamblaje a prueba de forzaduras para prevenir el acceso indiscreto al contenido del paquete. En adición, el recipiente tiene depositada en el mismo una etiqueta que describe el contenido del recipiente. La etiqueta también puede incluir las advertencias apropiadas.

La composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la presente invención se puede formular para utilizarse como una administración parenteral. Las composiciones farmacéuticas (por ejemplo, una formulación intravenosa (iv)) se pueden someter a las operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización y/o pueden contener diluyentes inertes convencionales, o agentes reguladores, así como adyuvantes, tales como conservadores, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes y reguladores del pH bien conocidos por aquéllos con experiencia en la materia.

La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras, las cuales comprenden los compuestos de la presente invención como ingredientes activos, debido a que el agua puede facilitar la degradación de ciertos compuestos. Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras de la invención se pueden preparar utilizando ingredientes anhidros o con un bajo contenido de humedad y condiciones de baja humedad. Una composición farmacéutica anhidra se puede preparar y almacenar de tal manera que se mantenga su naturaleza anhidra. De conformidad con lo anterior, las composiciones anhidras se empacan utilizando materiales conocidos para prevenir su exposición al agua, de tal manera que se puedan incluir en klts de formulación adecuados. Los ejemplos de los empaques adecuados incluyen, pero no se limitan a, láminas herméticamente selladas, plásticos, recipientes de dosis unitarias (por ejemplo, frascos), paquetes de burbujas, y paquetes de tiras.

La invención proporciona además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden uno o más agentes que reducen la velocidad a la cual se descompondrá el compuesto de la presente invención como un ingrediente activo. Estos agentes, los cuales son referidos en la presente como "estabilizantes", incluyen, pero no se limitan a, antioxidantes, tales como ácido ascórbico, reguladores del pH, o reguladores del sales, etc.

Un compuesto de la presente invención, en particular, un compuesto descrito en los ejemplos individuales en la presente, se puede proporcionar en una forma amorfa.

Un compuesto de la presente invención, en particular, un compuesto descrito en los ejemplos individuales en la presente, se puede formular como una suspensión convencional, nanosuspensión y dispersión sólida, por ejemplo, como sigue.

Suspensión convencional: 1.) Se pesó la cantidad requerida del material cristalino del Ejemplo 18, Lote E, con el objetivo de obtener una concentración de la formulación de 3 miligramos/mililitro. 2.) Entonces se dispersó el material cristalino del Ejemplo 18, Lote E, en carboxi-metil-celulosa al 0.5 por ciento [peso/peso]/ Tween 80 al 0.5 por ciento [peso/peso]/agua. 3. ) La suspensión se puso en vórtex para homogeneizar. 4. ) La suspensión se sónico utilizando un sonicador de sonda para reducir tamaño de partículas (2 minutos).

Nanosuspensión: 1.) 32 miligramos del material cristalino del Ejemplo 18, Lote E, se pesó precisamente en un aparato de molienda de canicas hecho a la medida. 2.) Se agregaron 2.148 gramos de medio de molienda de zirconia de 0.2 milímetros al aparato de molienda. 3.) Se agregaron 0.608 mililitros de HPMC 603 (hidroxi-propil-metil-celulosa grado 603) al 1 por ciento [peso/volumen] HPMC 603 / SDS (dodecil-sulfato de sodio) al 0.05 por ciento [peso/peso] / agua, al aparato de molienda. 4. ) Los aparatos de molienda se cerraron y se pusieron en un molino giratorio. 5. ) La muestra se molió durante 4 horas a 400 revoluciones por minuto (rpm) 6. ) La nanosuspensión se recolectó utilizando una jeringa. Dispersión sólida: 1. ) Se pesaron 30 miligramos del material cristalino del Ejemplo 18, Lote E, en un frasco de liof ilización . 2. ) Se agregaron 30 miligramos de HPMC 603 (hidroxi-propil-metil-celulosa grado 603), al mismo frasco. 3. ) Se agregaron 5.6 mililitros de dioxano al frasco. El frasco se cerró con una tapa. 4. ) La muestra se agitó en condiciones ambientales durante 12 horas. 5. ) La solución obtenida se secó por congelación de acuerdo con las siguientes condiciones: Cuando se proporciona un compuesto de la invención como una dispersión sólida, se prepara , por ejemplo, mediante la combinación del compuesto con un vehículo (tal como un polímero, por ejemplo, hidroxi-propil-metil-celulosa (H PMC)), y un solvente, y la mezcla se seca por congelación (con la intención de proporcionar el compuesto en una forma amorfa , en lugar de proporcionarlo en una forma cristalina), por razones de estabilidad, puede ser conveniente aumentar la proporción de la cantidad del vehículo a la cantidad del compuesto para evitar la re-cristalización del compuesto después de reposar.

En ciertas instancias, puede ser conveniente administrar el compuesto de la presente invención en combinación con cuando menos un agente farmacéutico (o terapéutico) adicional (por ejemplo, un agente anti-proliferativo o contra el cáncer, o una terapia adjunta típicamente empleada en quimioterapia). El compuesto de la presente invención se puede administrar ya sea simultáneamente con, o antes o después de, uno o más agentes terapéuticos adicionales. De una manera alternativa, el compuesto de la presente invención se puede administrar por separado, por la misma o diferente vía de administración, o juntos en la misma composición farmacéutica que los otros agentes.

Los agentes contra el cáncer adicionales incluyen, pero no se limitan a: Inhibidores de los receptores HER2 y HER3: Como se ejemplificó recientemente en los modelos de cáncer de mama positivo para HER2, la inhibición de PI3K conducirá a la reactivación de la senda, a través de una inducción de transcripción de HER2 / HER3 dependiente de FoxO, implicando el uso de inhibidores de HER2 en este establecimiento (Serra y colaboradores, 2011 Oncogene 30; Chandarlapaty y colaboradores, 2011 Cáncer Cell 19; Chakrabarty y colaboradores 2012, PNAS 109). Por ejemplo, el trastuzumab (vendido bajo la marca comercial registrada Herceptin® por Genentech/Roche), pertuzumab (vendido bajo la marca comercial registrada PerjetaMR, por Genentech/Roche), el conjugado de anticuerpo-fármaco Trastuzumab Emtansine (T-DM1) de Genentech/ Roche, erlotinib (vendido bajo la marca comercial registrada Tarceva®, por Genentech/Roche, gefitinib (vendido bajo la marca comercial registrada lressaMR, por AstraZeneca), OR10703, neratinib (también conocido como HKI-272, (2E)-N-[4-[[3-cloro-4-[(piridin-2-il)-metoxi]-fenil]-amino]-3-ciano-7-etoxi-quinolin-6-il]-4-(dimetil-amino)-but-2-enamida, y descrita en la Publicación Internacional del TCP Número WO 05/028443), lapatinib o ditosilato de lapatinib (vendido bajo la marca comercial registrada Tykerb® por GlaxoSmithKIine). Esta combinación es útil, por ejemplo, en los cánceres de mama positivos para HER2 y en los cánceres gástricos amplificados por HER2. Como un objetivo terapéutico, HER3 (ErbB3) se presenta con el desafío de tener una cinasa de tirosina inactiva, precluyendo, por consiguiente, la utilidad de inhibidores de cinasa de tirosina miméticos de ATP (TKIs). Para circunvenir este desafío están las estrategias mediadas por anticuerpos que tienen como objetivo bloquear el enlace del ligando a ErbB3 (por ejemplo, MM-121) o bloquear la dimerización de ErbB3 con ErbB2 en las células que sobre-expresan ErbB2 (por ejemplo, pertuzumab).

Sub-reguladores de los receptores de estrógeno/ inhibidores de aromatasa: Por ejemplo, Fulvestrant (vendido bajo el nombre comercial Faslodex®), Letrozol (vendido bajo la marca comercial registrada Femara® por Novartis) o Exemestano (vendido bajo la marca comercial registrada Aromasin® por Pfizer). Esta combinación es útil en el tratamiento, por ejemplo, del cáncer de mama positivo para ER. El fundamento para la combinación es que tiene como objetivo resolver la resistencia a hormonas relacionada con la PI3K.

Inhibidores de cinasa de cinasa de proteína activada por mitógeno (MEK): Por ejemplo, XL-518 (Cas No. 1029872-29-4, disponible en ACC Corp.), AZD6244 o selumetinib (AstraZeneca), GSK1120212 (GlaxoSmithKMne), AZD8330 (AstraZeneca), o MEK162. Esta combinación es útil en el tratamiento, por ejemplo, de pulmón con mutante KRAS, cáncer colo-rectal (CRC), y cánceres pancreáticos.

Inhibidores de Bcl2/BclXL: Por ejemplo, ABT737 (Abbott). Anti-andrógenos: Por ejemplo, Nilutamida (vendida bajo los nombres comerciales Nilandron® y Anandron®), bicalutamida (vendida bajo el nombre comercial Casodex®), flutamida (vendida bajo el nombre comercial FulexinMR), MDV3100 (Enzalutamida, vendida bajo el nombre comercial Xtandi® por Medivation), y Abiraterona (vendida bajo el nombre comercial Zytiga® por Janssen). Esta combinación es útil en el tratamiento, por ejemplo, de cáncer de próstata dependiente de hormonas con inactivación de PTEN. El fundamento para la combinación tiene como objetivo resolver el ruido entre las sendas de PI3K y el Receptor de Andrógeno.

Inhibidores de proteína de choque por calor 90 (HSP90): Por ejemplo, Tanespimicina (17-al¡l-am¡no-17-desmetoxi-geldanamicina, también conocida como KOS-953 y 17-AAG, disponibles en SIGMA, y descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 4,261,989), y etil-amida del ácido 5-(2,4-dihidroxi-5-iso-propil-fenil)-4-(4-morfolin-4-il-metil-fenil)-isoxazol-3-carboxílico (también conocida como AUY922 y descrita en la Publicación Internacional del TCP Número WO2004/072051 ). Esta combinación es útil en el tratamiento, por ejemplo, de los cánceres de pulmón dependientes del receptor del factor de crecimiento endotelial (EGFR), o para inhibir el EGRmut que llega a ser refractario para los inhibidores de EGR, o en el cáncer de mama positivo para HER2, o en el cáncer gástrico positivo para HER2.

Agentes anti-neoplásicos de taxano: Por ejemplo, Cabazitaxel (propanoato de 1 -hidroxi-7IS, 10B-dimetoxi-9-oxo-5B,20-epoxitax-11 -eno-2a,4, 13a-tr¡-¡l-4-acetato-2-benzoato-1 S-^R.SSJ-S-ífíterbutoxiJ-carbonill-amino^-hidroxi-S-fenilo), larotaxel (benzoato de (2a,3?,4a,5ß,7a,10ß,13a)-4,10-bis-(acetiloxi)-13-({(2R,3S)-3-[(ter-butoxi-carbonil)-amino]-2-hidroxi-3-fenil-propanoil}-oxi)-1 -hidroxi-9-oxo-5,20-epoxi-7, 19-ciclotax-11 -en-2-ilo); Agentes anti-mitóticos: Por ejemplo, Docetaxel (vendido bajo el nombre comercial Taxotere® por Sanofi-Aventis), útil para el tratamiento de cáncer de mama.

Alcaloides de plantas: Por ejemplo, paclitaxel (vendido bajo los nombres comerciales Taxol y OnxalMR), y Paclitaxel enlazado a proteína (vendido bajo el nombre comercial Abraxane®), y útil para el tratamiento de cáncer de próstata, vinblastina (también conocida como sulfato de vinblastina, vincaleucoblastina y VLB, vendida bajo los nombres comerciales Alkaban-AQ® y Velban®), vincristina (también conocida como sulfato de vincristina, LCR, y VCR, vendida bajo los nombres comerciales Oncovin® y Vincasar Pfs®), y vinorelbina (vendida bajo el nombre comercial Navelbine®).

Anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento tipo insulina-1 (IGF-1R): Por ejemplo, Figitumumab (también conocido como CP-751,871, disponible en ACC Corp.), y robatumumab (CAS No.934235-44-6).

Inhibidores de PARP (polimerasa de poli-ADP-ribosa): Por ejemplo, BSI-201 (iniparib), y olaparib. Esta combinación es útil, por ejemplo, para resolver la posible inducción de la maquinaria de daño del ADN mediante los inhibidores de PI3K.

Los agentes terapéuticos adecuados para terapia adjunta incluyen esferoides, agentes anti-inflamatorios, anti-histaminas, antieméticos, y otros agentes bien conocidos por aquéllos con experiencia en este campo para utilizarse con el fin de mejorar la calidad del cuidado para los pacientes que sean tratados para las enfermedades, condiciones, o trastornos descritos en la presente.

Debido a que la activación de la senda de PI3K/Akt impulsa la sobrevivencia celular, la inhibición de la senda en combinación con terapias que impulsen la apoptosis en las células de cáncer, incluyendo radioterapia y quimioterapia, puede dar como resultado mejores respuestas (G hobrial y colaboradores, CA Cáncer J . C lin 55: 1 78-1 94 (2005)) . Com o un ejem plo, la combinación de u n inhibidor de cinasa PI3 con carboplatina dem ostró efectos sinérgicos en los ensayos tanto de proliferación com o de apoptosis in vitro, así como eficacia tumoral in vivo, en un modelo de xenoinjerto de cáncer de ovario (Westfall y Pielner, Mol . Cáncer Ther. 4: 1 764-1 771 (2005)) . Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en conjunto con radioterapia.

El compuesto de la presente invención o la composición farmacéutica del mismo se puede administrar por las siguientes vías: administración enteral , tal como nasal ; rectal u oral; parenteral, tal como intramuscular o intravenosa; o tópica , tal como dérmica. El compuesto de la presente invención o la composición farmacéutica del mismo, para utilizarse en los seres humanos , de preferencia se administra oralmente (por ejemplo, en una forma de tableta) .

La composición o u na combinación farmacéutica de la presente invención puede estar en una dosificación unitaria de aproximadamente 1 miligramo a aproximadamente 1 ,000 miligramos de ingrediente(s) activo(s) para un sujeto de aproximadamente 50 kilogramos a aproximadamente 70 kilogramos, o de aproximadamente 1 miligramo a aproximadamente 500 miligramos, o de aproximadamente 1 miligramo a aproximadamente 250 miligramos, o de aproximadamente 1 miligramo a aproximadamente 1 50 miligramos, o de aproximadamente 0.5 miligramos a aproximada-mente 1 00 miligramos, o de aproximadamente 1 miligramo a aproximadamente 50 miligramos de ingredientes activos. Una dosificación unitaria también puede ser de aproximadamente 50 miligramos a aproximadamente 1,000 miligramos de ingrediente(s) activo(s) para un sujeto de aproximadamente 50 kilogramos a aproximadamente 70 kilogramos, o de aproximadamente 50 miligramos a aproximadamente 500 miligramos, o de aproximadamente 50 miligramos a aproximadamente 250 miligramos, o de aproximadamente 50 miligramos a aproximadamente 150 miligramos, o de aproximadamente 50 miligramos a aproximadamente 100 miligramos de ingredientes activos. Una dosificación unitaria también puede ser de aproximadamente 100 miligramos a aproximadamente 500 miligramos de ingrediente(s) activo(s) para un sujeto de aproximadamente 50 kilogramos a aproximadamente 70 kilogramos, o de aproximadamente 200 miligramos a aproximadamente 500 miligramos, o de aproximadamente 300 miligramos a aproximadamente 500 miligramos, o de aproximadamente 300 miligramos a aproximadamente 400 miligramos de ingredientes activos. Estas dosificaciones se pueden proporcionar como la dosificación diaria total, y se pueden proporcionar en una dosificación unitaria o en dosificaciones divididas. La dosificación puede depender de la forma de dosificación particular utilizada para suministrar los ingredientes activos. En general, la dosificación terapéuticamente efectiva de un compuesto, de la composición farmacéutica, o de las combinaciones de los mismos, depende de la especie del sujeto, del peso corporal, de la edad y condición individual, del trastorno o la enfermedad que se esté tratando, o de la gravedad de la misma. La dosificación también puede depender de la biodisponibilidad del ingrediente activo en la especie que se esté tratando. Un médico, farmacéutico, clínico o veterinario de una experiencia ordinaria, puede determinar fácilmente la cantidad efectiva de cada uno de los ingredientes activos necesaria para prevenir, tratar, o inhibir el progreso del trastorno o de la enfermedad.

Las propiedades de dosificación anteriormente citadas se pueden demostrar en pruebas in vitro e in vivo utilizando convenientemente mamíferos, por ejemplo, ratones, ratas, perros, monos u órganos aislados, tejidos y preparaciones de los mismos. Los compuestos de la presente invención se pueden aplicar in vitro en la forma de soluciones, por ejemplo, soluciones acuosas preparadas a partir de, por ejemplo, una solución de suministro de sulfóxido de dimetilo (DMSO) 10 m , e in vivo ya sea enteralmente, parenteralmente, de una manera conveniente intravenosamente, por ejemplo, como una suspensión o en solución acuosa. La dosificación in vitro puede estar en el intervalo de concentraciones de entre aproximadamente 10"3 molar y aproximadamente 10~9 molar. Una cantidad terapéuticamente efectiva in vivo, dependiendo de la vía de administración, puede estar en el intervalo de entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 500 miligramos/kilogramo, o de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 100 miligramos/ kilogramo.

En general, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la presente invención, se administra a un paciente que necesite tratamiento. El término "una cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto de la presente invención se refiere a una cantidad del compuesto de la presente invención que provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de la actividad de una enzima, o de la actividad de una proteína, o de la actividad de un complejo de proteína, o que mitigará los síntomas, aliviará las condiciones, hará más lento o retardará el progreso de la enfermedad, o prevendrá una enfermedad, etc.

En todavía otro aspecto, se proporciona un método para el tratamiento de cáncer en un mamífero, el cual comprende administrar a un mamífero que necesite dicho tratamiento, una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención.

Como se utiliza en la presente, el término "sujeto" se refiere a un animal. Típicamente, el animal es un mamífero. Un sujeto también se refiere, por ejemplo, a primates (por ejemplo, a seres humanos, masculinos o femeninos), reses, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, peces, aves y similares. En ciertas modalidades, el sujeto es un primate. De preferencia, el sujeto es un ser humano.

Como se utiliza en la presente, el término "inhibir", "inhibición" o "inhibiendo" se refiere a la reducción o supresión de una condición, síntoma, o trastorno, o enfermedad dada, o a una disminución significativa en la actividad de la línea base de una actividad o proceso biológico.

Como se utiliza en la presente, el término "tratar", "tratando" o "tratamiento" de cualquier enfermedad o trastorno, se refiere a: (i) mitigar la enfermedad o el trastorno (es decir, hacer más lento o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o de cuando menos uno de los síntomas clínicos de la misma); (ii) aliviar o mitigar cuando menos un parámetro físico, incluyendo aquéllos que puedan no ser discernióles por el paciente; o (iii) prevenir o retardar el establecimiento o desarrollo o progreso de la enfermedad o del trastorno. En general, el término "tratar" o "tratamiento" describe el manejo y cuidado de un paciente para el propósito de combatir la enfermedad, la condición, o el trastorno, e incluye la administración de un compuesto de la presente invención, para prevenir el establecimiento de los síntomas o complicaciones, para aliviar los síntomas o complicaciones, o para eliminar la enfermedad, la condición, o el trastorno.

Como se utiliza en la presente, un sujeto está "en necesidad de" un tratamiento si este sujeto se beneficiaría biológicamente, médicamente o en su calidad de vida a partir de dicho tratamiento (de preferencia, el sujeto es un ser humano).

Otro aspecto de la invención es un producto que comprende un compuesto de la presente invención, y cuando menos otro agente terapéutico (o agente farmacéutico) como una preparación combinada para su uso simultáneo, separado, o en secuencia, en terapia, para mejorar la apoptosis.

En las terapias de combinación de la invención, el compuesto de la presente invención y el otro agente terapéutico pueden ser elaborados y/o formulados por el mismo o por diferentes fabricantes. Más aún, el compuesto de la presente invención y el otro agente terapéutico (o agente farmacéutico) se pueden reunir en una terapia de combinación: (i) antes de liberar el producto de combinación a los médicos (por ejemplo, en el caso de un kit que comprenda el compuesto de la invención y el otro agente terapéutico); (ii) por los médicos mismos (o bajo la guía del médico) poco antes de la administración; (iii) en los pacientes mismos, por ejemplo, durante la administración en secuencia del compuesto de la invención y el otro agente terapéutico.

De conformidad con lo anterior, la invención proporciona el uso de un compuesto de la presente invención, para el tratamiento de una enfermedad o condición mediante la inhibición o antagonización de PI3K, en donde el medicamento se prepara para su administración con otro agente terapéutico. La invención también proporciona el uso de otro agente terapéutico, en donde el medicamento se administra como una combinación de un compuesto de la presente invención con el otro agente terapéutico.

Las modalidades de la presente invención se ilustran mediante los siguientes ejemplos. Se debe entender, sin embargo, que las modalidades de la invención no están limitados a los detalles específicos de estos ejemplos, debido a que otras variaciones de las mismas serán conocidas o evidentes a la luz de la presente divulgación, para un experto ordinario en este campo.

EJEMPLOS A menos que se especifique de otra manera, los materiales de partida están generalmente disponibles en las fuentes comerciales, tales como Aldrich Chemicals Co. ( ilwaukee, Wis.), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, N.H.), Acros Organics (Fairlawn, N.J.), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, Inglaterra), Tyger Scientific (Princeton, N.J.), Chem-lmpex International, Inc. (Wood Dale, ILO), y AstraZeneca Pharmaceuticals (Londres, Inglaterra).

Las abreviaturas utilizadas en los siguientes ejemplos tienen los significados correspondientes enlistados a continuación.

AcOH ácido acético AICI3 tricloruro de aluminio API ionización a presión atmosférica Boc terbutoxi-carbonilo Salmuera solución saturada de cloruro de sodio (a temperatura ambiente) br. s singulete amplio nBuOH n-butanol lBu terbutilo CDI carbonil-di-imidazol Celite marca comercial registrada de Celite Corp. (World Minerals Inc.), Santa Barbara, CA, EUA, para auxiliar de filtración basado en tierra diatomácea CH3CN acetonitrilo conc. concentrado d doblete DCE dicloro-etano DCM dicloro-metano DEA dietil-amina DIEA N,N-dietil-isopropil-amina DMAP 4-dimetil-amino-piridina DME dimetoxi-etano DMF N,N-dimetil-formamida DMSO sulfóxido de dimetilo ES-MS espectrometría de masas con eletroaspersion Et etilo Et3N trietil-amina Et20 dietil-éter EtOAc acetato de etilo EtOH etanol H hora(s) HPLC cromatografía de líquidos de alto rendimiento Hyflo Hyflo Super Cel® iPr isopropilo K2C03 carbonato de potasio KOH hidróxido de potasio K3PO4 fosfato de potasio LAH hidruro de litio y aluminio LC cromatografía de líquidos Me metilo Mel yoduro de metilo MeOH metanol MgS04 sulfato de magnesio m multiplete min minuto(s) mL mililitro(s) m.p. punto de fusión (p.f.) MS espectrometría de masas NaH hidruro de sodio NaHC03 bicarbonato de sodio Na2C03 carbonato de sodio NaHMDS hexametil-disilazano de sodio NaOH hidróxido de sodio Na2S04 sulfato de sodio MgS04 sulfato de magnesio NaOAc acetato de sodio NBS N-bromo-succinimida NH4CI cloruro de amonio NH4OH hidróxido de amonio RMN resonancia magnética nuclear POCI3 oxicloruro de fósforo (III) RT temperatura ambiente Rf factor de retención en TLC s sing u lete scC02 C02 súper-crítico t triplete TBAF fluoru ro de tetrabutil-amonio TBDPSCI cloru ro de terbutil-difenil-sililo TBM E terbutil-metil-éter TEA trietil-amina TEM PO 2 ,2,6,6-tetrametil-piperidin iloxilo TFA ácido trifluoro-acético TH F tetrahidrofu rano TLC cromatografía de capa delgada TMS trimetil-si I i lo T SCI cloruro de trimetil-sililo tR tiempo de retención TsCI cloruro de p-toluen-sulfonilo TsOH ácido p-toluen-sulfónico UV ultravioleta Método general 1H-RM N : Las mediciones se llevaron a cabo en un espectrómetro Bruker UltrashieldMR 400 (400 M Hz), Bruker UltrashieldMR 600 (600 MHz) o en un espectrómetro de 500 MHz DRX Bruker CryoProbe (500 M Hz) , utilizando o no trimetil-silano como un estándar interno. Los cambios qu ímicos (valores-d) se reportan en ppm campo abajo a partir de tetrametil-silano, las constantes de acoplamiento (J) se dan en Hz, el patrón de división de espectros está designado como singulete (s), doblete (d), doblete de dobletes (dd), triplete (t), cuadruplete (q), multiplete o más señales traslapadas (m), señal amplia (br). Los solventes se dan entre paréntesis.

TLC: Se llevó a cabo con placas de vidrio previamente recubiertas con gel de sílice 60 F254 (Merck, Darmstadt, Alemania), utilizando el sistema de solventes mencionado respectivo. La visualización se hizo en términos generales mediante luz ultravioleta (UV) (254 nanómetros).

Condiciones de HPLC: LC-MS 1: Columna: Acquity HSS T3, 2.1 x 50 milímetros, 1.8 mieras. Flujo: 1.2 mililitros / minuto. Temperatura de la columna: 50°C. Gradiente: Del 2 por ciento al 98 por ciento de B en 1.4 minutos, 98 por ciento de B durante 0.75 minutos, del 98 por ciento al 2 por ciento de B en 0.04 minutos, 2 por ciento de B durante 0.01 minutos; A = agua + ácido fórmico al 0.05 por ciento + acetato de amonio 3.75 mM, B = acetonitrilo + ácido fórmico al 0.04 por ciento.

Barrido completo de detección: 215 a 350 nanómetros.

LC-MS 2: Columna: Acquity HSS T3, 2.1 x 50 milímetros, 1.8 mieras.

Flujo: 1.2 mililitros / minuto. Temperatura de la columna: 50°C. Gradiente: Del 2 por ciento al 98 por ciento de B en 1.4 minutos, 98 por ciento de B durante 0.75 minutos, del 98 por ciento al 2 por ciento de B en 0.04 minutos, 2 por ciento de B durante 0.01 minutos; A = agua + ácido fórmico al 0.05 por ciento + 0.05 por ciento acetato de amonio, B = acetonitrilo + ácido fórmico al 0.04 por ciento.

Barrido completo de detección: 215 a 350 nanómetros.

LC-MS 3: Columna: Acquity HSS T3, 2.1 x 50 milímetros, 1.8 mieras. Flujo: 1.0 mililitro / minuto. Temperatura de la columna: 60°C. Gradiente: del 5 por ciento al 98 por ciento de B en 1.4 minutos, 98 por ciento de B durante 0.75 minutos, del 98 por ciento al 5 por ciento de B en 0.04 minutos, 5 por ciento de B durante 0.01 minutos; A = agua + ácido fórmico al 0.05 por ciento + acetato de amonio 3.75 mM, B = acetonitrilo + ácido fórmico al 0.04 por ciento.

Barrido completo de detección: 215 a 350 nanómetros.

HPLC 1: Columna: Cromolith Performance RP18e, 4.6 x 100 milímetros, flujo: 2.0 mililitros / minuto. Gradiente: Del 2 por ciento al 100 por ciento de B en 4.5 minutos, 100 por ciento de B durante 1 minuto, A = agua + ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento, B = acetonitrilo + ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento.

Detección: 215 nanómetros.

UPLC 1: Columna: Acquity UPLC HSS T3 C18, 1.7 mieras, 2.1 x 50 milímetros, flujo: 1.0 mililitro / minuto. Gradiente: del 5 por ciento al 100 por ciento de B en 1.5 minutos, 100 por ciento de B durante 1 minuto, A = agua + ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento, B = acetonitrilo + ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento.

Detección: 218 nanómetros.

Intermediario A: 4-(4,6-dicloro-pirimidin-2-il)-morfolina El Intermediario A está comercialmente disponible o se puede preparar empleando el sig uiente procedimiento.

A una solución de 2,4,6-tricloro-pirimidina (5.0 mililitros, 42.6 milimoles) en mesitileno (80 mililitros) a 165°C, se le agregó por goteo una solución de morfolina (4.83 mililitros, 55.4 milimoles) en mesitileno (20 mililitros), y la suspensión se agitó a 1 65°C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se trató con H20 , EtOAc y NaHC03. La capa orgánica se lavó con H20 y salmuera, se secó (Na2S04) , se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 1 00:0 ? 7:3). El residuo se trituró en hexano y se filtró, para proporcionar el compuesto del título (3.36 gramos, 33 por ciento) . ÍR: 1 . 1 1 minutos (LC-M S 1 ) ; ESI-MS : 234.2 [M + H]+ (LC-MS 1 ) .

Intermediario B: 5-(4,4.5,5-tetrametil-ri .3,21-dioxaborolan-2-il)-4-trifluoro-metil-pirimidin-2-il-amina A una suspensión del producto a partir del paso B.1 (16.2 gramos, 66.3 milimoles), bis-pinacolato-diboro (18.5 gramos, 72.9 milimoles), y KOAc (19.5 gramos, 199 milimoles) en dioxano (300 mililitros), bajo argón, se le agregó el aducto de PdCI2(dppf) CH2CI2 (2.4 gramos, 2.98 milimoles), y la mezcla se agitó a 115°C durante 4 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta 50°C, y se trató con EtOAc. La suspensión resultante se filtró sobre Hyflo, y se lavó con EtOAc. Se concentraron los filtrados combinados. El residuo se suspendió en NaOH 2 N, se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos, y entonces se agregaron Et20 y H20, y la mezcla binaria se filtró a través de Hyflo. Las fases del filtrado se separaron. El pH de la capa acuosa resultante se ajustó de 5 a 6 con HCI 4N, y entonces se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con H20 y salmuera, se secó (Na2S0 ), se filtró, y se concentró. El residuo se trituró en Et20 y hexano, y se filtró, para proporcionar el compuesto del título (8.33 gramos, 42 por ciento). tR: 1.00 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 290.3 [ + H]+ (LC-MS 1).

Paso B1: 5-bromo-4-trifluoro-metil-pirimidin-2-il-amina A una solución de la 2-amino-4-trifluoro-metil-pirimidina (25 gramos, 0.15 moles) en CH3CN (800 mililitros), se le agregó por goteo (durante 2.5 horas) NBS (34.8 gramos, 0.195 moles) disuelto en 200 mililitros de CH3CN en la oscuridad. La mezcla se agitó durante 4.5 horas a temperatura ambiente en la oscuridad, y entonces el solvente se evaporó. El residuo se disolvió en EtOAc y H20, y la mezcla binaria se transfirió a un embudo separador. La capa acuosa se separó y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se lavaron con H20 y salmuera, se secaron con Na2S04, se filtraron, y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice utilizando un gradiente de hexano/ EtOAc, 9:1 a 3:2. Las fracciones puras combinadas se evaporaron, y el residuo se suspendió en 40 mililitros de hexano, se agitó durante 10 minutos, se filtró, y se lavó con 20 mililitros de hexano, 2 veces, para dar el producto del título como un sólido color beige (31.2 gramos, 85 por ciento). tR: 0.82 minutos (LC-MS 1).

Ejemplo 1 : (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4 rifluoro-metil-[4.5'1-bipirimidinil-6-il)-4-metil-oxazol¡din-2-ona Una solución del producto a partir del paso 1.1 (350 miligramos, 1.16 milimoles), el intermediario B (449 miligramos, 1.51 milimoles), Na2C03 (2M, 1.7 mililitros, 3.48 milimoles), y PdCI2(dppf)-CH2CI2 (95 miligramos, 0.17 milimoles) en DME (10 mililitros), bajo argón, se agitó a 80°C durante 1 hora. La mezcla se diluyó en EtOAc, y se extrajo con NaHC03 saturado. La capa orgánica se lavó con H20 y salmuera, se secó (Na2S04), se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (CH2CI2/EtOH, 99.5:0.5 -* 98:2). El residuo se trituró en hexano, se filtró, y se secó. El residuo se purificó mediante HPLC de preparación (Waters Sun Fire C18, 30 x 100 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento-agua/acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 100 por ciento en 20 minutos), para proporcionar el compuesto del título (260 miligramos, 52 por ciento). tR: 0.93 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 426.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 1.1: (S)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona A una solución de la (S)-4-metil-2-oxazolidinona (432 miligramos, 4.19 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) (10 mililitros), se le agregó lentamente NaH (al 60 por ciento en aceite mineral, 201 miligramos, 5.02 milimoles), bajo una atmósfera de argón, y la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, y se agregó el Intermediario A (1 gramo, 4.19 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, y se extrajo con H20. La capa orgánica se lavó con H20 y salmuera, se secó (Na2S0 ), se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 97:3 ? 1:1), para proporcionar el compuesto del título (605 miligramos, 47 por ciento). tR: 1.00 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 299.2/301.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 2: (S)-3-(2'-am¡no-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-f4,5'1-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5.5-dimetil-oxazolidin-2-ona Una solución del producto a partir del paso 2.1 (28 miligramos, 0.04 milimoles), y TBAF (2 mililitros, 2.0 milimoles, 1 M en tetrahidro-furano (THF)) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/MeOH, 100:0 ? 95:5), para dar el producto del título. tR: 0.89 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 470.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 2. : (S)-3-(2'-am¡no-2-morfolin-4-¡l-4'-trifluoro-metil-r4.5'1-bipirimidinil-6-il)-4-(terbutil-difenil-silaniloxi-metih-5.5-dimetil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento empleado para el Ejemplo 1, pero utilizando el producto a partir del paso 2.2. La mezcla se llevó a cabo a 100°C durante 40 minutos. Después de la extracción, el residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/ EtOAc, 100:0 ? 30:70), para dar el producto del título. tR: 1.45 minutos (LC-MS 1); ESl-MS: 708.4 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 2.2: (S)-4-(terbut¡l-difenil-silaniloxi-metil)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-i0-5.5-dimetil-oxazolidin-2-ona Una solución del producto a partir del paso 2.3 (95 miligramos, 0.25 milimoles), el intermediario A (58 miligramos, 0.25 milimoles), Xantphos (10 miligramos, 0.02 milimoles), Pd2dba3 (4.5 miligramos, 4.95 micromoles), y Cs2C03 (121 miligramos, 0.37 milimoles) en dioxano bajo argón, se agitó a 100°C durante 3 horas. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc, y se extrajo con una solución saturada de NaHC03. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04), se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 100:0 ? 0:100), para dar el producto del título (85 miligramos, 56 por ciento). tR: 1.54 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 581.4/583.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 2.3: (S)-4-(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-5,5-dimet¡l-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento empleado en el paso 6.2, pero utilizando el producto a partir del paso 2.4, y utilizando Et3N en lugar de imidazol. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró y se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 100:0 ? 55:45), para dar el producto del título. tR: 1.33 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 384.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 2.4: (S)-4-hidroxi-metil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona Una solución del producto a partir del paso 2.5 (110 miligramos, 0.59 milimoles), y HCI (4M en dioxano, 5 mililitros, 20 milimoles), se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo se utilizó sin mayor purificación.

Paso 2.5: (S)-1, ,5.5-tetrametil-d¡hidro-oxazolo-f3,4-cl-oxazol-3-ona A una solución del producto a partir del paso 2.6 (190 miligramos, 0.73 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) (6 mililitros), bajo argón a 0°C, se le agregó NaH (88 miligramos, 2.20 milimoles, al 60 por ciento en aceite), y la mezcla se agitó a 0°C durante 6 horas. La mezcla de reacción se apagó con H20 y se concentró. El residuo se trituró en EtOAc, y se filtró. La solución filtrada se secó (Na2S04), se filtró, y se concentró. El producto se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 100:0? 60:40).

Paso 2.6: Terbutil-éster del ácido (S)-4-(1 -hidrox¡-1 -metil-etil)-2,2-dimetil-oxazolidina-3-carboxílico A una solución del (S)-4-metilo-2,2-dimetil-oxazolidina-3,4-dicarboxilato de 3-terbutilo (500 miligramos, 1.93 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (15 mililitros), bajo argón a 0°C, se le agregó por goteo bromuro de metil-magnesio (1.4 mililitros, 4.24 milimoles), y la mezcla se agitó a 0°C durante 2 horas. La reacción se apagó con una solución saturada de NH4CI, y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2S04), se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 100:0 ? 65:35). tR: 1.01 minutos (LC-MS 1); ESl-MS: 260.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 3: 3-(2'-am¡no-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-4.5'-bipirimidin-6-il)-4-(hidroxi-metil)-4-metil-oxazolid¡n-2-ona racémica Una solución del Intermediario B (68 miligramos, 0.21 milimoles), el producto a partir del paso 3.1 (120 miligramos, 021 milimoles), una solución de Na2C03 2M (317 microlitros, 0.63 milimoles), y tetraquis (15 miligramos, 0.01 milimoles) en DME (2 mililitros), se agitó a 80°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se diluyó en EtOAc y se agregó Na2S04. La suspensión resultante se filtró, y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió con tetrahidro- furano (THF) (2 mililitros), y se agregó TBAF (212 microlitros, 0.21 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, y se concentró. El producto crudo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/EtOH, 99:1 ? 96:4). El residuo se trituró en dicloro-metano (DCM)/hexano, para proporcionar el compuesto del título. tR: 0.85 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 456.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 3.1 : 4-(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 2.2, pero utilizando un producto a partir del paso 3.2. Después de la extracción, el residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc: 9:1 ? 1:1), para dar el compuesto del título.

Paso 3.2: 4-(terbutil-difenil-silaniloxi-metin-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 6.4, pero utilizando la 4-(hidrox¡-metil)-4-metil-oxazolidin-2-ona, y utilizando dicloro-metano (DCM) en lugar de ?,?-dimetil-formamida. La mezcla de reacción se extrajo con Et20. La capa orgánica se lavó con H20 y salmuera, se secó (Na2S04), se filtró, y se concentró. El sólido resultante se trituró en hexano, y se filtró, para proporcionar el compuesto del título. tR: 1.20 minutos (LC-MS 1); ESl-MS: 339.2/341.2 [M + Hf (LC-MS 1).

Ejemplo 3A: Primer enantiómero que se eluvó de 3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-4.5'-bipirimidin-6-il)-4-(hidroxi-metil)-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta no determinada.

Se obtuvo el compuesto del título después de la separación de SFC quiral de preparación del producto racémico del Ejemplo 3. (Columna: Chiralpak AD-H, 30 x 250 milímetros. Flujo de 80 mililitros / minuto. scC02/MeOH, 85:15). tR: 3.97 minutos (Columna: Chiralpak AD-H, 4.6 x 250 milímetros. Flujo de 3 mililitros / minuto. scC02/ MeOH, 85:15).

Ejemplo 3B: Segundo enantiómero que se eluvó de 3-(2'-amino- 2-m orfolino-4'-(triflu oro-metí l)-4,5'-bipirim id i n-6-il)-4-(h id roxi-m et¡l)-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta no determinada.

Se obtuvo el compuesto del título después de la separación de SFC quiral de preparación del producto racémico del Ejemplo 3. (Columna: Chiralpak AD-H, 30 x 250 milímetros. Flujo de 80 mililitros / minuto. scC02/MeOH, 85:15). tR: 4.49 minutos (Columna: Chiralpak AD-H, 4.6 x 250 milímetros. Flujo de 3 mililitros / minuto. scC02/ MeOH, 85:15).

Ejemplo 4: (3aS,7aS)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-f4,5'l-bipirimidinil-6-il)-hexahidro-benzo-oxazol-2-ona Una solución del producto a partir del paso 4.1 (60 miligramos, 0.17 milimoles), el intermediario B (54 miligramos, 0.17 milimoles), Na2C03 (2M, 260 microlitros, 0.52 milimoles), y tetraquis de paladio (10 miligramos, 8.7 micromoles) en DME (1.5 mililitros), bajo argón se agitó a 80°C durante 2 horas en un frasco sellado. La mezcla de reacción se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (CH2CI2/EtOH, 99.8:0.2 ? 97.5:2.5). El residuo se disolvió en dicloro-metano (DCM) (2 mililitros), y entonces se trató en hexano (4 mililitros). Los cristales se filtraron y se lavaron con hexano (3 mililitros), para dar el compuesto del título (36 miligramos, 44 por ciento). tR: 1.10 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 466.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 4.1: (3aS.7aS)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-in-hexahidro-benzo-oxazol-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 2.2, pero utilizando un producto a partir del paso 4.2. La reacción se llevó a cabo a 100°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de Hyflo y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc: 9:1 ? 1:1), para dar el compuesto del título. tR: 1.20 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 339.2/341.2 [ + H]+ (LC-MS 1).

Paso 4.2 (3aS,7aS)-Hexahidro-benzo-oxazol-2-ona El (1 S,2S)-2-amino-ciclohexanol (750 miligramos, 6.51 milimoles), y el cloroformato de 2-nitro-fenilo (1378 miligramos, 6.84 milimoles) se agitaron en DCE (15 mililitros) con DIEA (2.39 mililitros, 13.68 milimoles) en un frasco sellado a 90°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se vertió en un embudo separador con 50 mililitros de EtOAc y 50 mililitros de una solución saturada de NaHC03. La capa acuosa se lavó con 50 mililitros de EtOAc. Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con 50 mililitros de H20, 50 mililitros de salmuera, se secaron con Na2S04, se filtraron, y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc: 7:3 —» 3:7), para dar el compuesto del título (770 miligramos, 5.13 milimoles). tR: 0.69 minutos (LC-MS 1); 1H RMN (400 MHz, <dmso>) d ppm 1.19 -1.44 (m, 3 H) 1.45 -1.61 (m, 1 H) 1.65 (d, J = 9.77 Hz, 1 H) 1.76 (d, J = 11.34 Hz, 1 H) 1.82 -1.93 (m, 1 H) 1.93 -2.10 (m, 1 H) 3.03 - 3.23 (m, 1 H) 3.74 (td, J = 11.34, 3.52 Hz, 1 H) 7.53 (br. s., 1 H) Ejemplo 5: (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-r4,5'1-bipirimidinil-6-il)-4-metoxi-metil-oxazolidin-2-ona En un frasco para microondas, a una solución del producto a partir del paso 5.1 (116 miligramos, 0.28 milimoles), y el Intermediario B (90 miligramos, 0.31 milimoles) en DME (2.1 mililitros), se le agregaron una solución saturada de Na2C03 (0.7 mililitros), y PdCI2(dppf)2.CH2Cl2 (23 miligramos, 0.03 milimoles). La mezcla se burbujeó con argón durante 5 minutos. Se agitó a 120°C durante 15 minutos bajo irradiación con microondas. La mezcla de reacción se absorbió en dicloro-metano (DCM) y agua. Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo dos veces más con algo de dicloro-metano (DCM). Entonces las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/MeOH: 100 por ciento ? 95 por ciento de dicloro-metano (DCM)). El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea en fase inversa (MeCN/H20: 10 por ciento ? 100 por ciento de MeCN), para dar el compuesto del título (19 miligramos, 13 por ciento). tR: 0.91 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 456.1 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 5. : (S)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirim¡din-4-il)-4-metoxi-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 2.2, pero utilizando un producto a partir del paso 5.2. La reacción se llevó a cabo a 115°C durante 80 minutos. La mezcla de reacción se concentró y se absorbió con dicloro-metano (DCM)/agua. Las capas se separaron, y el la capa acuosa se extrajo tres veces con dicloro-metano (DCM). Las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc: 100 por ciento ? 60 por ciento de heptano), para dar el compuesto del título (116 miligramos, 22 por ciento). tR: 0.98 minutos (LC-MS 1); ESI-MS:329.2 [M + H]+ (LC-MS 1). Paso 5.2: (S)-4-metoxi-metil-oxazolidin-2-ona Se agregó TsOH (800 miligramos, 4.21 milimoles) a una solución amarilla del producto a partir del paso 5.3 (1.013 gramos, 4.13 milimoles) en metanol (MeOH) (10 mililitros). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 90 minutos. Entonces se agregó TsOH (140 miligramos, 0.74 milimoles), y se agitó durante 70 minutos a temperatura ambiente. Entonces se removió el solvente y el residuo se disolvió en dicloro-metano (DC ) (6 mililitros) con trietil-amina (1.44 mililitros, 10.32 milimoles). Se agregó lentamente una solución de trifosgeno (0.613 gramos, 2.07 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (4 mililitros) a la mezcla. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas 30 minutos. La reacción se apagó con unas cuantas gotas de agua. Entonces se acidificó hasta un pH = 4 con la adición del regulador, y entonces las capas se separaron. La primera capa acuosa se extrajo una vez más con algo de dicloro-metano (DCM). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/MeOH: 100 por ciento ? 90 por ciento DCM), para dar el compuesto del título (231 miligramos, 38 por ciento). ESI-MS: 132.1 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 5.3: Terbutil-éster del ácido (S)-4-metoxi-metil-2.2-d¡met¡l-oxazolidina-3-carboxílico Se agregó NaH (265 miligramos, 6.63 milimoles) a una solución amarilla de (S)-1 -Boc-2,2-dimetil-4-hidroxi-metil-oxazolidina (AstaTech Inc., Bristol, Pensilvania) (1 gramo, 4.19 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (10 mililitros). Entonces la mezcla se agitó durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se agregó yoduro de metilo (323 microlitros, 5.19 milimoles) a la suspensión amarilla, y la mezcla se agitó durante 2 horas y media a temperatura ambiente. Entonces se agregó agua para apagar la reacción. El solvente se removió. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/MeOH: 5 por ciento ? 10 por ciento de MeOH), para dar el compuesto del título (1.013 gramos, 94 por ciento). Esl-MS: 246.1 [M + H]+ (LC-MS 1); 1H RMN (400 MHz, <CDCI3>) d ppm 1.48 (s, 9 H) 1.53 (br. s., 6 H) 3.30 (m, 1 H) 3.36 (s, 3 H) 3.41 - 3.63 (m, 2 H) 3.88 - 4.00 (m, 2 H) Ejemplo 6: (4S,5S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-r4.5'l-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazol¡din-2-ona Una solución del producto a partir del paso 6.1 (600 miligramos, 0.82 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (5 mililitros) se trató con HF.piridina en tetrahidrofurano (THF) (7.14 mililitros, 57.5 milimoles) durante 4 días a temperatura ambiente en un frasco de plástico. Entonces, la mezcla de reacción se agregó por goteo a una mezcla agitada de una solución saturada de NaHC03 (300 mililitros) y EtOAc (200 mililitros). Entonces se agregó NaHC03 sólido hasta un pH de aproximadamente 8, y se separaron las capas. La capa acuosa se lavó con 100 mililitros de EtOAc, los extractos orgánicos se combinaron y se lavaron con agua y salmuera. Se secaron entonces sobre Na2S04, se filtraron, y se evaporaron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/EtOH: 99:1 ? 95:5). Las fracciones se combinaron y se concentraron. El residuo se sonicó en dicloro-metano (DCM), y entonces se agregó hexano. Los cristales obtenidos se filtraron y se volvieron a purificar 3 veces mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/EtAOc: 9:1 ? 3:7, luego Hexano/THF: 9:1 ? 1:1, y luego Hexano/THF: 7:3 ? 1:1), para dar el compuesto del título (243 miligramos, 64 por ciento). tR: 0.80 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 456.6 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 6. : (4S.5S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-r4.5'1-bipirimidinil-6-¡l)-4-(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-5-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el Ejemplo 1, pero utilizando un producto a partir del paso 6.2. La reacción se llevó a cabo a 80°C durante 1 hora. Después de la extracción, el residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/EtOH: 95.5:0.5 ? 97:3), para dar el compuesto del título. tR: 1.43 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 694.5 [M + Hf (LC-MS 1).

Paso 6.2: (4S.5S)-4-(terbut¡l-difenil-silaniloxi-metil)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-p¡rimídin-4-il)-5-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 2.2, pero utilizando un producto a partir del paso 6.3. La reacción se llevó a cabo a 100°C durante 3 horas 30 minutos. La mezcla de reacción se absorbió con EtOAc, y se lavó con una solución saturada de NaHC03 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/ EtOAc: 100 por ciento ? 30 por ciento de heptano.), para dar el compuesto del título (116 miligramos, 22 por ciento). tR: 1.51 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 567.4/569.5 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 6.3: (4S.5S)-4-aerbutil-difenil-si[aniloxi-metil)-5-metil-oxazolidin-2-ona El producto a partir del paso 6.4 (3.2 gramos, 9.31 milimoles) se disolvió en dicloro-metano (DCM) (32 mililitros), y se trató con Et3N (3.25 mililitros, 23.29 milimoles). La solución se inundó con Argón y se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Entonces, se trató con trifosgeno (1.382 gramos, 4.66 milimoles), y se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se apagó con una solución saturada de NH4CI (10 mililitros), y se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente. La capa de agua se separó, y la capa orgánica se lavó con agua. La capa acuosa combinada se extrajo 3 veces con dicloro-metano (DCM). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2S04, se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc: 100 por ciento ? 50 por ciento de heptano), para dar el compuesto del título (2.22 gramos, 61 por ciento). tR: 1.28 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 387.3 [M + 18] + (LC-MS 1).

Paso 6.4: (2S,3S)-3-amino-4-(terbutil-difenil-silaniloxi)-butan-2-ol El D-treoninol (2 gramos, 19.02 milimoles) se disolvió en N,N-dimetil-formamida (DMF) (15 mililitros), se trató con imidazol (3.89 gramos, 57.1 milimoles), y se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Entonces, se agregó por goteo TBDPS-CI (5.13 mililitros, 19.97 milimoles) a la solución de la reacción bajo argón. La solución de la reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Entonces se diluyó en EtOAc, y se lavó dos veces con una solución saturada de NaHC03 y una vez con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2S0 , se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/ EtOAc: 100 por ciento ? 0 por ciento de heptano.), para dar el compuesto del título (3.21 gramos, 47 por ciento). tR: 0.98 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 344.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 7: (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-f4.5'1-bip¡rimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-oxazolidin-2-ona Una solución del producto a partir del paso 7.1 (200 miligramos, 0.35 milimoles), el intermediario B (131 miligramos, 0.39 milimoles), Na2C03 (2M, 526 microlitros, 1.05 milimoles), y tetraquis de paladio (24 miligramos, 0.21 milimoles) en DME (4 mililitros), bajo argón, se agitó a 80°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se trató con Na2S0 , se diluyó en EtOAc, y las partes insolubles se filtraron. La torta del filtro se lavó tres veces con EtOAc, y el filtrado se evaporó. Entonces el residuo se disolvió en tetrahidrofurano (THF) y se agregó una solución de TBAF (1N, 351 microlitros, 0.35 milimoles). La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. El solvente se removió, y el residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/EtOH: 99:1 ? 95:5), para dar el compuesto del título. tR: 0.74 minutos (LC-MS 1). Paso 7.1 : (R)-4-(terbutil-difenil-silaniloxi-met¡l)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-iQ-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 2.2, pero utilizando un producto a partir del paso 7.2. La reacción se llevó a cabo a 100°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró, y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc: 9:1 ? 6:4), para dar el compuesto del título. tR: 1.53 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 553.4/555.5 [ + H]+ (LC-MS 1).

Paso 7.2: (R)-4-(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 6.4, pero utilizando la (S)-4-(hidroxi-metil)-oxazolidin-2-ona (SpeedChemical Corp. Shanghai), y dicloro-metano (DCM), en lugar de la ?,?-dimetil-formamida. La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua, y se extrajo dos veces con Et20. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc: 98:2 ? 4:6). El residuo se trató con hexano y Et20. Los cristales obtenidos se filtraron para dar el compuesto del título. tR: 1.26 minutos (LC-MS 1), 1H RMN (400 MHz, DMSO) d ppm 0.98 (s, 9 H) 3.51 - 3.63 (m, 2 H) 3.88 (dd, J = 8.60, 4.30 Hz, 1 H) 4.14 (dd, J = 8.60, 4.69 Hz, 1 H) 4.30 - 4.38 (m, 1 H) 7.37 - 7.50 (m, 6 H) 7.57 - 7.65 (m, 4 H) 7.71 (s, 1 H).

Ejemplo 8: (4S,5R)-3-(2'-amino-2-(D8-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil- [4,5'1-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía a la secuencia completa descrita en el Ejemplo 6, pero utilizando un producto a partir del paso 8.1 en lugar del intermediario A, y el D-alo-treoninol en lugar del D-treoninol. tR: 0.79 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 464.5 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 8.1: 4-(4.6-d¡cloro-pirimidin-2-il)-D8-morfolina La 2,4,6-tricloro-pirimidina se disolvió en EtOH con Et3N y D8-morfolina. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora . E ntonces se diluyó con una solución satu rada de NaH C03 y se extrajo dos veces con EtOAc. Los extractos orgánicos se combinaron y se lavaron con salmuera . Entonces se secaron sobre Na2S04, se filtraron , y se concentraron . El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc: 0 por ciento de hexano? 40 por ciento) . tR: 0.94 min utos (LC-MS 1 ); ESI-MS: 242.3/244.2 [M + H]+ (LC-MS 1 ) .

Ejemplo 9: (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-met¡l-f4.5'l-bipirimid¡nil-6-il)-4-(2-hidroxi-eti0-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analog ía al procedimiento descrito en el Ejemplo 6, pero utilizando un producto a partir del paso 9.1 . La extracción se llevó a cabo en dicloro-metano (DCM). El residuo se purificó mediante HPLC de preparación (H20/ACN) , y entonces mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/MeOH , 100.0? 95:5). tR: 0.78 minutos (LC-MS 1 ); ESI-MS: 456.2 [M + H]+ (LC-MS 1 ) .

Paso 9.1 : (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-r4.5'1-bipirimidinil-6-i0-4-(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-f 1 ,31-oxazinan-2-ona El compuesto del título se preparó en analog ía al procedimiento descrito para el Ejemplo 1 , pero utilizando un producto a partir del paso 9.2. La reacción se llevó a cabo a 1 20°C durante 15 minutos. La mezcla de reacción se disolvió en dicloro-metano (DCM) , y se extrajo con H20. La capa orgánica se secó (Na2S04) , se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 8:2 -? 4:6) . tR: 1 .54 minutos (LC-MS 1 ) ; ESl-MS: 694.3 [M + H]+ (LC-MS 1 ).

Paso 9.2: (S)-4-(terbutil-difenil-silan¡loxi-meti0-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirimid in-4-il)-ri ,31-oxazinan-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 2.2, pero utilizando un producto a partir del paso 9.3. La reacción se llevó a cabo a 115°C durante 2.5 horas. La mezcla se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC de preparación (H20/ACN), entonces mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 9:1 ? 0:100). tR: 1.49 minutos (LC-MS 1); ESI- S: 567.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 9.3: (S)-4-(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-ri .31-oxazinan-2-ona A una solución del producto a partir del paso 9.4 (900 miligramos, 2.03 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (40 mililitros), bajo argón, se le agregó NaH al 60 por ciento en aceite (160 miligramos, 4.0 milimoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc, y se extrajo con H20. La capa orgánica se secó (Na2S04), se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 100:0 ? 0:100). tR: 1.23 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 370.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 94: Terbutil-éster del ácido f(S)-1 -(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-3-hidroxi-propill-carbámico A una solución del producto a partir del paso 9.5 (40 gramos, 73 milimoles) en terbutil-metil-éter (TBM E) (400 mililitros) a 0°C, se le agregó por goteo LiBH4 (2M en tetrahidrofurano (TH F) , 74 mililitros, 146 milimoles), y la mezcla se agitó a 0°C durante 10 minutos, entonces se calentó hasta la temperatura ambiente, y se agitó du rante 5 horas. La mezcla de reacción se apagó con H20 , y entonces con una solución de ácido cítrico 0.5M . La mezcla se extrajo con terbutil-metil-éter (TBM E) . La capa orgán ica se secó (MgS04), se filtró, y se concentró. El producto se utilizó sin mayor purificación .

Paso 9.5: Bencil-éster del ácido (S)-3-terbutox¡-carboníl-amino-4-(terbutil-difenil-silaniloxi)-butirico El prod ucto del título se preparó en analog ía al procedimiento descrito para el paso 6.4. Rf: 0.7 (hexano/EtOAc, 8 :2).

Paso 9.6: Bencil-éster del ácido (S)-3-terbutoxi-carbonil-amino-4- hidroxi-butírico A una solución del 4-bencil-éster de ácido Boc-L-aspártico (100 gramos, 309 milimoles) en DME (1.8 L) a -20°C, se le agregó NMM (34 mililitros, 309 milimoles), y entonces por goteo cloro-formato de isobutilo (40 mililitros, 309 milimoles), y la mezcla se agitó a -20°C durante 20 minutos. La mezcla de reacción se filtró, y el filtrado se enfrió hasta -20°C. Se agregó en porciones NaBH4 (17.5 gramos, 463 milimoles), a -20°C. La mezcla se dejó calentar, y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se apagó con una solución de ácido cítrico al 20 por ciento, y entonces se extrajo con AcOEt. La capa orgánica se lavó con una solución de NaHC03, H20 y salmuera, se secó (MgS04), se filtró, y se concentró. El producto se utilizó sin mayor purificación para el siguiente paso.

Ejemplo 10: (4S.5R)-3-r2'-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4.5'1-bipirimidinil-6-in-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía a la secuencia entera descrita para el Ejemplo 6, pero utilizando el producto a partir del paso 10.1 en lugar del intermediario A, y el D-alo-treoninol en lugar del D-treoninol. La mezcla se agregó por goteo a una solución saturada de Na2C03. Después de la adición, se agregó una solución saturada de NaHC03 (el pH final fue de alrededor de 7 a 8. Se diluyó con agua, y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró, y se evaporó. El residuo se purificó mediante HPLC de preparación (Waters Sun Fire C18, 30 x 100 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento-agua/acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 100 por ciento en 20 minutos). El residuo se recristalizó en Et20/hexano (3 / 1). Los cristales se filtraron y se lavaron con hexano, para dar el compuesto del título. tR: 2.89 minutos (HPLC 1); ESI-MS: 470.3 [M + H]+ (LC-MS 1); p.f.217.7°C (establecimiento).

Paso 10.1: (S)-4-(4.6-dicloro-p¡r¡midin-2-il)-3-metil-morfolina La 2,4,6-tricloro-pirimidina (100 miligramos, 053 milimoles) se disolvió en dioxano (2 mililitros) con di-isopropil-etil-amina (DIPEA) (280 microlitros, 1.6 milimoles), y (S)-3-metil-morfolina (54 miligramos, 0.53 milimoles). La mezcla de reacción se calentó a 130°C bajo irradiación con microondas durante 15 minutos. Entonces se diluyó con EtOAc, y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC de preparación (Waters Sun Fire C18, 30 x 100 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento- agua/acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 100 por ciento en 20 minutos), para proporcionar el compuesto del título (45 miligramos, 34 por ciento). t : 3.70 minutos (HPLC 1); ESI-MS: 248.2/250.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 1 (para propósitos de comparación): 3-(2'-amino-2- morfolin-4-¡l-4'-trifluoro-met¡l-f4.5'1-bipirimidinil-6-il)-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al Ejemplo 5 (incluyendo el paso 5.1), pero utilizando el producto a partir del paso 11.1. La reacción se llevó a cabo a 100°C durante 1 hora. La extracción se llevó a cabo en EtOAc. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 100:0? 0:100). tR: 0.87 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 412.4 [M + H]+ (LC-MS 1). Paso 11.1: 3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-in-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía a la secuencia entera descrita para el paso 2.2, pero utilizando oxazolidin-2-ona. tR: 0.93 minutos (LC-MS 1 ) ; ESl-MS: 285.5/287.4 [M + H]+ (LC-MS 1 ) . Ejemplo 1 2 : (4S .5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-tr¡fluoro-metil- f4.5'l-bipirimidinil-6-il)-5-metil-2-oxo-oxazolidin-4-il-metil-éster de ácido fórmico El compuesto del Ejemplo 1 8 (47 miligramos, 0.1 0 milimoles) se disolvió en ácido fórmico (80 microlitros, 2.09 milimoles) , y se almacenó a 5°C durante 4 días. Entonces se dejó calentar hasta la temperatura ambiente, y se almacenó durante 2 d ías. Se absorbió entonces con EtOAc, y se lavó con una solución saturada de NaHC03 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC de preparación (Waters Sun Fire C18, 30 x 100 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento-agua/acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 70 por ciento en 20 minutos), para proporcionar el compuesto del título (57 miligramos, 80 por ciento). tR: 0.88 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 484.4 [M + H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 13: (S)-3-r2'-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-m-4'-trifluoro-metil-r4,5'l-bipirimidinil-6-in-4-met¡l-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía a la secuencia entera descrita para el Ejemplo 11, pero utilizando el producto a partir del paso 10.1 en lugar del intermediario A, y la (S)-4-metil-2-oxazolidinona en lugar de la oxazolidin-2-ona. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/EtOH: 99.8 / 0.2 ? 98 / 2), y entonces mediante HPLC de preparación (Waters Sun Fire C18, 30 x 100 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento-agua/acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 100 por ciento en 20 minutos), para proporcionar el compuesto del título (35 miligramos, 32 por ciento). tR: 0.98 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 440.1 [M + H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 14: (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-r4.5'1-b¡pirimid¡nil-6-il)-5-hidroxi-metil-oxazol¡din-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el Ejemplo 6, pero utilizando el producto a partir del paso 14.1. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/MeOH, 100:0 ? 95:5). tR: 0.77 minutos (LC-MS 1); ESl-MS: 442.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 14.1 : (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-r4.5'l-b¡pirimidinil-6-in-5-(terbutil-difenil-silaniloxi-metih-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el Ejemplo 5, pero utilizando el producto a partir del paso 14.2. La reacción se llevó a cabo a 100°C en un baño de un aceite durante 1 hora. La extracción se llevó a cabo en EtOAc. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 100:0 ? 0:100). tR: 1.40 minutos (LC-MS 1); ESl-MS: 680.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 1 .2: (S)-5-(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-3-(6-cloro-2-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 2.2, pero utilizando el producto a partir del paso 14.3. Después de la extracción, el residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/ EtOAc, 100:0 ? 40:60). tR: 1.49 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 553.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 14.3: (S)-5-(terbutil-difenil-silaniloxi-metil)-oxazolidin-2-ona A una solución del producto a partir del paso 14.4 (2.72 gramos, 8.27 milimoles), y Et3N (2.88 mililitros, 20.67 milimoles) en dicloro-metano (DCM), bajo argón, se le agregó por goteo trifosgeno (982 miligramos, 3.31 milimoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla de reacción se apagó con una solución de NH4CI. La capa orgánica se secó (Na2S04), se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 100:0 ? 0:100). tR: 1.21 minutos (LC-MS 1); ESl-MS: 373.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 14.4: (S)-1 -amino-3-(terbutil-difenil-silaniloxi)-propan-2-ol El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 6.4, pero utilizando el (S)-3-amino-propano-1 ,2-diol, y utilizando Et3N en lugar de imidazol. Después de la extracción, el residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/MeOH, 100:0 ? 90/10). tR: 0.93 minutos (LC-MS 1); ESl-MS: 330.2 [M + H]+ (LC-MS 1). Ejemplo 15: (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-r4.5'1-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-4-met¡l-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía a la secuencia entera descrita para el Ejemplo 6, pero utilizando el producto a partir del paso 15.1 en lugar del D-treoninol. tR: 0.98 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 344.3 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 15.1: (2R.3S)-3-amino-butano-1.2-diol El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento del paso 19.1, pero utilizando el producto a partir del paso 15.2. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/EtOH: 99.8 / 0.2 ? 98 / 2), y entonces mediante HPLC de preparación (Waters Sun Fire C18, 30 x 100 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento-agua/acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 100 por ciento en 20 minutos), para proporcionar el compuesto del título (35 miligramos, 32 por ciento). tR: 0.98 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 440.1 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 15.2: N-bencil-N-USM -((FO-2.2-dimet¡l-M .31-dioxolan-4-¡n-etiM-hidroxilamina El compuesto del título es el segundo isómero formado durante el paso 19.2 (1.07 gramos, 57 por ciento). tR: 0.91 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 252.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 16: (S)-3-(2'-am¡no-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-r4.5'1-bipirimidinil-6-il)-5-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al Ejemplo 11, pero utilizando el producto a partir del paso 16.1 en lugar de la (R)-4-metil-2-oxazolidinona. La reacción se llevó a cabo a 100°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se absorbió con EtOAc. Se lavó dos veces con una solución saturada de NaHC03 y una vez con salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc: 0 por ciento? 85 por ciento de EtOAc), para dar el compuesto del título (9.6 miligramos, 58 por ciento). tR: 0.94 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 426.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Paso 16.1: (S)-5-metil-oxazol¡din-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 6.3, pero utilizando (S)-1-amino-propan-2-ol. La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 3 horas. La reacción se apagó con una solución saturada de NH4CI (10 mililitros), y se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente. La capa de agua se separó, y la capa orgánica se lavó con agua. Las capas acuosas combinadas se extrajeron 3 veces con dicloro-metano (DCM). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/ EtOAc: 0 por ciento ? 100 por ciento de EtOAc), para dar el compuesto del título (38 miligramos, 9 por ciento). RMN (400 MHz, <DMSO>) d ppm 1.27 (d, J = 6.25 Hz, 3 H) 2.94 - 3.08 (m, 1 H) 3.48 - 3.58 (m, 1 H) 4.62 (m, 1 H) 7.37 (br. s., 1 H) Ejemplo 17: (S)-3-(2'-amino-2-D8-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-f4.5'-bipirimidin1-6-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el Ejemplo 4, pero utilizando el producto a partir del paso 17.1. Después de completarse, la mezcla de reacción se filtró a través de Celite, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/ EtOH, 99.5:0.5 ? 98:2). El residuo se trituró en dicloro-metano (DCM) y se lavó con hexano, para proporcionar el compuesto del título. tR: 0.89 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 434.4 [M + Hf (LC-MS 1); Rf: 0.67 (DCM/EtOH, 95:5).

Paso 17.1 : (S)-3-(6-cloro-2-D8-morfolin-4-il-pirimidin-4-in-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 2.2, pero utilizando el producto a partir del paso 8.1 y (S)-4-metil-2-oxazolidinona. La extracción se llevó a cabo en dicloro-metano (DCM). El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/ EtOAc, 9:1 ? 7:3). tR: 0.97 minutos (LC-MS 1); ESI-MS: 307.3/309.3 [M+H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 18: (4S.5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-tr¡fluoro-metil-r4.5'l-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía a la secuencia entera descrita para el Ejemplo 6, pero utilizando el D-alo-treoninol en lugar del D-treoninol. La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 33 horas. La mezcla se agregó por goteo a una solución satu rada de Na2C03. Después de la adición , el pH fue de alrededor de 7 a 8. Se diluyó con agua, y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró, y se evaporó. El residuo se purificó mediante H PLC de preparación (Waters Sun Fire C1 8, 30 x 1 00 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento-agua / acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 60 por ciento en 20 minutos) . Las fracciones se combinaron y se basificaron con una solución de NaHC03 al 5 por ciento . El producto se precipitó y se filtró. Para eliminar el paladio residual, el producto se disolvió en dicloro-metano (DCM) / metanol (MeO H) (4 / 1 ), y se pasó a través de un cartucho SPE de M P-Tiol de Polymerlabs, y entonces se evaporó el solvente. Se produjo un número de lotes basándose en este método, y varios se procesaron para proporcionar el material cristalino como sigue.

Lote A: Para la preparación de este lote, el producto no se pasó a través de un cartucho SPE de M P-Tiol de Polymerlabs. Las fracciones puras obtenidas después de la HPLC de preparación se combinaron y se trataron con Na HC03. El CH3CN se evaporó sobre lo cual , el producto se cristalizó. El producto se recolectó mediante filtración , se lavó con agua, y se secó, para dar el compuesto del título como un sólido blanco, p.f. 221 .3°C (establecimiento).

Lote B: Para la preparación de este lote, el producto no se pasó a través de un cartucho SPE de M P-Tiol de Polymerlabs. Las fracciones pu ras obtenidas después de la H PLC de preparación se com binaron y se trataron con N aHC03 sólido. El CH3CN se evaporó, sobre lo cual , el producto se cristalizó. La mezcla acuosa se mantuvo durante 1 hora en el refrigerador, se filtró, se lavó con agua , y se secó bajo un alto vacío (HV) durante la noche , para proporcionar un sólido blanco, m = 298 miligramos, p.f. 249.9°C (establecimiento).

Lote C: Para la preparación de este lote , el prod ucto no se pasó a través de un cartucho SPE de M P-Tiol de Polymerlabs. Las fracciones puras obtenidas después de la H PLC de preparación se combinaron y se evaporaron . El resid uo se absorbió en CH3CN , y entonces se agregó agua que conten ía ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento, seguida por NaHC03 sólido. La solución se concentró y el precipitado se filtró, se lavó con agua , y se secó, para dar el producto del título como u n sólido blanco, p.f. 237.9°C (establecimiento) .

Lote D: Después de pasar a través del cartucho SPE de MP-Tiol de Polymerlabs, el solvente se evaporó. El residuo se disolvió en CH3CN y entonces se diluyó con la misma cantidad de agua. El CH3CN se evaporó y, justo antes de la cristalización del producto, se agregaron algu nos cristales del Lote B . Entonces se evaporó completamente el CH3CN , y la suspensión se enfrió en el refrigerador. Entonces se filtró, se recolectó, y se secó bajo un alto vacío (HV) durante la noche, para proporcionar el producto del título como un sólido blanco, p.f.259.0°C (establecimiento).

Lote E: El mismo procedimiento que se describe para el Lote C, pero se agregaron algunos cristales del Lote D con el objeto de inducir la cristalización. El producto del título se obtuvo como un sólido blanco, p.f.258.8°C (establecimiento).

Ejemplo 19: (4S.5S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil- [4.5'l-bipirimid)nil-6-il)-5-hidroxi-metil-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía a la secuencia entera descrita para el Ejemplo 6, pero utilizando el producto a partir del paso 19.1 en lugar de D-treoninol. La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 16 horas 30 minutos. La mezcla se agregó por goteo a una solución saturada de Na2C03. Después de la adición, se diluyó con agua, y se extrajo dos veces con EtOAc. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró, y se evaporó. El residuo se purificó mediante HPLC de preparación (Waters Sun Fire C18, 30 x 100 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento-agua / acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 80 por ciento en 20 minutos), para dar el compuesto del título (16.3 miligramos, 75 por ciento). t : 2.79 minutos (HPLC 1); ESI-MS: 456.1 [M + H]+.

Paso 19.1: (2S.3S)-3-amino-butano-1.2- diol El producto a partir del paso 19.2 se agitó en HCI en solución en EtOH durante 2 horas a temperatura ambiente. El solvente se removió, para dar el compuesto del título como una sal de HCI (303 miligramos, 100 por ciento). 1H RMN (400 MHz, <dmso>) d ppm 1.08 (d, J = 6.65 Hz, 3 H) 3.18 - 3.33 (m, 1 H) 3.33 - 3.45 (m, 1 H) 3.61 -3.72 (m, 1 H) 7.85 (br. s., 2 H) Paso 19.2: (S)-1 -((S)-2.2-dimetil-M .31-dioxolan-4-il)-etil-amina El producto a partir del paso 19.3 (producto 2, que se eluyó al final, 538 miligramos, 2.14 milimoles) se disolvió en AcOH (25 mililitros) con Pd/C (100 miligramos), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 11 horas bajo condiciones de H2. Entonces se filtró sobre Celite, y entonces el solvente se removió, para dar el compuesto del título (311 miligramos, 100 por ciento). 1H RMN (400 MHz, <dmso>) d ppm 0.90 -1.04 (m, 3 H) 1.16 -1.38 (m, 6 H) 2.76 -2.90 (m, 1 H) 3.75 (dd, J = 13.86, 7.22 Hz, 2 H) 3.90 (br. s., 1 H); tR: 3.13 minutos (HPLC 1).

Paso 19.3: N-bencil-N-KR)-1 -((S)-2.2-dimetil-M .31-dioxolan-4-il)-etill- hidroxilam ina v N-bencil-N-í(S)-1 -((S)-2.2-dim etil-M .31-d ioxolan-4-il)-etill-hidroxilamina Producto 1 Producto 2 A una solución bien agitada de 1 .48 gramos (6.29 milimoles) del producto a partir del paso 1 9.4 en 80 mililitros de Et20, se le agregaron 6.29 mililitros (6.29 milimoles) de Et2AICI 1 M en hexanos en una porción , y se continuó la agitación durante 1 5 minutos. La mezcla entonces se enfrió hasta -60°C, y se trató con 6.29 mililitros (1 8.87 milimoles) de bromuro de metil-magnesio 3 M en Et20. La mezcla se agitó durante 2 horas a -60°C , y entonces se dejó calentar lentamente hasta la temperatura ambiente con agitación durante la noche. Después de eso, la reacción se trató con NaO H (2 M , 40 mililitros). Después de agitar durante 1 5 minutos a temperatura ambiente, la mezcla se extrajo 3 veces con 120 mililitros de Et20. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron , y se concentraron al vacío. El residuo se disolvió en metanol (MeOH) , y se purificó mediante HPLC de preparación en fase inversa en 8 inyecciones (H20 [ + ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento] / CH3CN , 97:3 a 50:50 en 20 minutos): Las fracciones 1 a 3 se recolectaron juntas y se basificaron con aproximadamente 2 gramos de NaHC03, antes de concentrarse. La capa resultante se extrajo con 1 50 mililitros de Et20 2 veces, y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y se evaporaron a sequedad, para dar 1.01 gramos de un aceite incoloro, el cual se cristalizó lentamente (aproximadamente 99 por ciento puro de acuerdo con 1H RMN; HPLC Rt = 2.36; ESI-MS: 252.2 [M + H]+ (LC-MS 1))-> Producto 1.

Las fracciones 5 a 7 se recolectaron juntas y se basificaron con aproximadamente 2 gramos de NaHC03, antes de concentrarse. La suspensión resultante se extrajo con 150 mililitros de Et202 veces, y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y se evaporaron a sequedad, para dar 363 miligramos de un sólido blanco (aproximadamente 99 por ciento puro de acuerdo con 1H RMN; HPLC Rt = 2.44; ESI-MS: 252.3 [M + H]+ (LC-MS 1))-> producto 2.

Paso 19.4: Óxido de (S,Z)-N-((2,2-dimetil-1.3-dioxolan-4-il)-metilen)-1 -fenil-metan amina 1-50 gramos (11.53 milimoles) de (R)-2,2-dimetil-1.3-dioxolano- 4-carboxaldehído (Fluorochem, Hadfield, Reino Unido (UK)) se disolvieron en 60 mililitros de dicloro-metano (DCM), y se trataron con 1.64 gramos (11.53 milimoles) de sulfato de sodio. La mezcla de reacción se inundó con argón, y se trató con una solución de 1.42 gramos (11.53 milimoles) de N-bencil-hidroxilamina (preparada a partir de la sal de clorhid rato comercialmente dispon ible) en 20 m ililitros de CH2CI2. La mezcla de reacción se agitó bajo argón a temperatura ambiente durante 16.5 horas, y entonces se filtró. Se agregó gel de sílice al filtrado, y se absorbió previamente, antes de purificarse mediante cromatografía sobre gel de sílice (gradiente: Heptano/EtOAc, del 0 por ciento al 1 00 por ciento en 30 minutos) . Las fracciones 20 a 80 se recolectaron y se evaporaron a sequedad , y se secaron al vacío durante la noche , para dar 1 .48 g ramos de un sólido blanco (aproximadamente 100 por ciento puro de acuerdo con la H PLC , Rt = 1 .43) ; ESI- S: 236.2 [ + H]+ (LC-MS 1 )) Ejemplo 20: (R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil- r4,5'l-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analog ía a la secuencia entera descrita para el Ejemplo 6, pero utilizando (R)-3-amino- propano-1 ,2-diol en lugar de D-treoninol . La reacción se llevó a cabo a temperatu ra ambiente durante 16 horas. Entonces la mezcla de reacción se apagó cuidadosamente con NaHC03. Entonces se diluyó con EtOAc, y se lavó dos veces con una solución saturada de NaHC03 y u na vez con salmuera . La capa orgánica se secó sobre Na2S04, se filtró, y se evaporó. El residuo se pu rificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (DCM/EtOH: 0 por ciento ? 10 por ciento de MeOH), para dar el compuesto del título (22.8 miligramos, 38 por ciento). tR: 0.77 minutos (HPLC 1); ESI-MS: 442.2 [M + H]+ (LC-MS 1).

Ejemplo 21 : 3aR.6aR)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'- trifluoro-metil)-r4.5'-bipirim¡din1-6-¡l)-tetrahidro-furo-r3.4-dl-oxazol-2(3H)-ona Una solución de la (3aR,6aR)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-il)-tetrahidro-furo-[3,4-d]-oxazol-2(3H)-ona (100 miligramos, 0.306 milimoles), el intermediario B (115 miligramos, 0.398 milimoles), K3PO4 (195 miligramos, 0.918 milimoles), y PdCI2(dppf)-CH2CI2 (25 miligramos, 0.031 milimoles) en DME/H20 (2.2 mililitros), bajo argón, se agitó a 80°C durante 1.5 horas. La mezcla se diluyó en EtOAc, y se extrajo con NaHC03 saturado. La capa orgánica se lavó con H20 y salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró, y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano-EtOAc, 70:30? 0:100), para proporcionar el compuesto del título como un sólido incoloro (88 miligramos, 62 por ciento): tR = 0.84 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 454 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 21.1: (3aR.6aR)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-¡D- tetrahidro-furo-f3.4-d1-oxazol-2(3H)-ona A una solución de la (3aR,6aR)-tetrahidro-furo-[3,4-d]-oxazol-2(3H)-ona (500 miligramos, 3.87 milimoles), 4-(4,6-dicloro-pirimidin-2-il)-morfolina (1088 miligramos, 4.65 milimoles), y Cs2C03 (2.14 gramos, 6.58 milimoles) en dioxano (20 mililitros), se le agregaron, después de la desgasificación con argón, el 4,5-bis-(difenil-fosf¡no)-9,9-dimetil-xanteno (157 miligramos, 0.271 milimoles), y Pd2(dba)3 (70.9 miligramos, 0.077 milimoles), y la mezcla de reacción se calentó durante 6 horas a 85°C. La mezcla de reacción se agregó a una solución acuosa de NaHC03 al 10 por ciento, y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS0 , se filtraron, y se concentraron. El producto crudo se trituró en metanol (MeOH) durante la noche, se filtró, y se secó, para proporcionar el compuesto del título como un sólido incoloro (1.12 gramos, 87 por ciento): t = 0.92 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 327, 329 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 21.2: (3aR.6aR)-tetrahidro-furo-r3.4-d1-oxazol-2(3H)-ona A una solución del (3R,4R)-4-amino-tetrahidrofuran-3-ol (1.1 gramos, 7.88 milimoles), y DIEA (4.54 mililitros, 26.0 milimoles) en CH2CI2 (30 mililitros), se le agregó carbonato de bis-(tricloro-metilo) (1.75 gramos, 5.91 milimoles) disuelto en CH2CI2 (5 mililitros), a temperatura ambiente, durante un período de 30 minutos. Después de agitar durante 0.5 horas a 25°C, la mezcla de reacción se agregó a una solución acuosa de K2C03, se agitó durante 1 hora, y el CH2CI2 se evaporó. La fase acuosa se lavó con Et20 y después se evaporó a sequedad. El residuo se trituró con EtOH/THF, 1:1, las sales inorgánicas se removieron mediante filtración a través de un tapón de gel de sílice, y el filtrado se concentró, para proporcionar el compuesto del título como un sólido color beige (930 miligramos, 90 por ciento): ESI-MS: 147 [M + NH]+.

Ejemplo 22: (3aR*,6R*.6aR*)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin1-6-il)-6-hidroxi-hexahidro-2H-ciclopenta-rdl-oxazol-2-ona A una solución de la (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-6-((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-hexahidro-2H-ciclopenta-[d]-oxazol-2-ona (810 miligramos, 1.253 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (12 mililitros), se le agregó por goteo TBAF 1M en tetrahidrofurano (THF) (1.0 mililitros, 1.0 milimoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a 0°C y durante 2 horas a temperatura ambiente antes de la evaporación. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano-tetrahidrofurano (THF), 60:40 ? 0:100). El residuo se trituró en Et20, se filtró, y se secó. El residuo se purificó mediante HPLC de preparación (Waters Sun Fire C18, 30 x 100 milímetros, 5 mieras; ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento-agua/acetonitrilo; gradiente de acetonitrilo del 5 al 100 por ciento en 20 minutos), para proporcionar el compuesto del título (430 miligramos, 72 por ciento); tR = 0.93 minutos (UPLC 1), tR = 0.81 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 468 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 22.1 : (3aR*.6R*.6aR*)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-r4.5'-bip¡rimidinl-6-il)-6-((terbutil-dimetil-s¡lil)-oxi)-hexahidro-2 H -ciclope nta-rdl-oxazol-2-? na El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el Ejemplo 21 a partir de la (3aR*,6R*, 6aR*)-6-((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4- il)-hexahidro-2H-ciclopenta-[d]-oxazol-2-ona y el intermediario B, y utilizando Pd(PPh3)4 en lugar de PdCI2(dppf)-CH2Cl2, y Na2C03 en lugar de K3P04, para proporcionar el compuesto del título después de la cristalización a partir de EtOAc/hexano, como un sólido blanco: tR = 1.62 minutos (UPLC 1), tR = 1.47 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 582 [ + H]+ (LC-MS 3).

Paso 22.2: (3aR*.6R*.6aR*)-6-((terbutil-d¡metil-silil)-oxi)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-in-hexahidro-2H-ciclopenta-fd1-oxazol-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 21.1 a partir de la (3aR*,6R*, 6aR*)-6-((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-hexahidro-2H-ciclopenta-[d]-oxazol-2-ona y el intermediario A: tR = 1.76 minutos (UPLC 1), tR = 1.58 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 455, 457 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 22.3: (3aR*.6R*.6aR*)-6-((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-hexah¡dro-2H-ciclopenta-rd1-oxazol-2-ona una suspensión de la (3aR*,6R*,6aR*)-6-((terbutil-dimetil- silil)-oxi)-3-((2-nitro-fenil)-sulfonil)-hexahid ro-2 H-ciclopenta-[d]-oxazol-2-ona (1 .47 gramos , 3.32 m ilimoles) , y Cs2C03 (2.164 gramos, 6.64 milimoles) en ? ,?-d imetil-formamida (DMF) (25 mililitros), se le agregó N-acetil-L-cisteína (0.921 gramos, 5.65 milimoles) , y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatu ra ambiente. La mezcla de reacción se evaporó, y el residuo se suspendió en una solución saturada de NaHC03, y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron , y se concentraron . Se obtuvo el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 90: 10 ? 50:50) , como un aceite amarillo (0.84 gramos, 98 por ciento) : TLC (heptano/EtOAc, 1 : 1 ) Rf = 0.28.

Paso 22.4: (3aR*.6R* .6aR*)-6-((terbutil-dimetil-silil)-oxi)-3-((2-nitro-fenil)-sulfonil)-hexahidro-2H-ciclopenta-fd1-oxazol-2-ona A una solución de la (3aR*,6R*,6aR*)-6-hidroxi-3-((2-nitro-fenil)-sulfonil)-hexahidro-2H-c¡clopenta-[d]-oxazol-2-ona (1 .2 gramos, 3.66 milimoles) , y 2,6-lutidina (0.851 mililitros, 7.31 milimoles) en CH2CI2 (25 mililitros) , se le agregó por goteo, a 0°C , el trifluoro-metan-sulfonato de terbutil-dimetil-sililo (1 .091 mililitros, 4.75 mili-moles). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a 0°C , seguido por 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2, y se lavó con el una solución acuosa de NaH2P04 al 20 por ciento y H20, se secó sobre MgS0 , se filtró, y se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la cristalización a partir de EtOAc/heptano, como un sólido blanco (1.5 gramos, 88 por ciento): TLC (heptano/EtOAc, 1:1) Rf = 0.54; tR = 1.58 minutos (UPLC 1), tR = 1.43 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 460 [M + NH4]+ (LC-MS 3).

Paso 22.5: (3aR*.6R*.6aR*)-6-hidroxi-3-((2-nitro-fenil)-sulfonin-hexahidro-2H-ciclopenta-fd1-oxazol-2-ona A una solución del (1 R*,2S*,5S*)-6-oxabiciclo-[3.1.0]-hexan-2-il-((2-nitro-fenil)-sulfonil)-carbamato de terbutilo (2.0 gramos, 5.10 milimoles) en metanol (MeOH) (40 mililitros), se le agregó Amberlyst 15 (4.0 gramos), y la suspensión resultante se agitó durante 1.5 horas a 25°C. La mezcla de reacción se filtró y se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano-EtOAc, 90:10? EtOAc), como un sólido color beige (1.24 gramos, 73 por ciento): TLC (heptano/EtOAc, 1:2) Rf = 0.36; tR = 0.80 minutos (UPLC 1), tR = 0.77 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 346 [M + NH4]+ (LC-MS 3).

Paso 22.6: (1 R*.2S*.5S*)-6-oxabiciclo-r3.1.01-hexan-2-il-((2-nitro- fenil)-sulfonil)-carbamato de terbutilo A una suspensión del ciclopent-2-en-1 -il-((2-n itro-fe n il)-sulfonil)-carbamato de terbutilo (2.75 gramos, 7.46 milimoles), y NaHC03 (1.254 gramos, 14.93 milimoles) en CH2CI2 (60 mililitros), se le agregó, en una porción, ácido meta-cloroperoxi-benzoico (2.58 gramos, 14.93 milimoles). La mezcla de reacción resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2, y se lavó con una solución acuosa de Na2S03 al 20 por ciento, una solución saturada de NaHC03, y agua. La fase orgánica se secó sobre MgS04 y se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la cristalización a partir de EtOAc como cristales blancos (2.01 gramos, 68 por ciento): TLC (heptano-EtOAc, 1:1) Rf = 0.48; tR = 1.20 minutos (UPLC 1), t„ = 1.12 minutos (LC-MS 3); ESl-MS: 329 [M-isobutileno]+ (LC-MS 3).

Paso 22.7: Ciclopent-2-en-1 -il-((2-nitro-fenil)-sulfonil)-carbamato de terbutilo A una suspensión de trifenil-fosfina (3.09 gramos, 11.77 milimoles), 2-nitro-fenil-sulfonil-carbamato de terbutilo (3.40 gramos, 11.23 milimoles), y ciclopent-2-enol (0.900 gramos, 10.70 milimoles) en tolueno (60 mililitros), se le agregó por goteo, a -20°C, el azodicarboxilato de dietilo (1.948 mililitros, 12.30 milimoles). La mezcla de reacción se agitó a -20°C durante 2 horas, seguido por 3 horas a 0°C. La mezcla de reacción se concentró, y se obtuvo el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 95:5 ? 3:1), como un sólido blanco (2.79 gramos, 67 por ciento): ÍR = 1.34 minutos (UPLC 1), tR = 1.24 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 386 M + NH4]+ (LC-MS 3).

Ejemplo 22A: Primer enantiómero que se eluvó sobre Chiralpak AD de (3aR.6R.6aR)- v (3aS.6S.6aS)-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-r4.5'-bipirimidinl-6-il)-6-hidroxi-hexahidro-2H-ciclopenta-fdl-oxazol-2-ona Estereoquímica absoluta no determinada.

Se obtuvo el compuesto del título después de la separación mediante HPLC de preparación quiral del producto racémico del Ejemplo 22. (Columna: Chiralpak AD, 20 mieras, 5 x 500 milímetros.

Flujo de 70 mililitros / minuto. Heptano/EtOH/DEA, 20:80:0.01). tR: 17.7 minutos (Columna: Chiralpak AD-H, 4.6 x 250 milímetros. Flujo de 1.2 mililitros / minuto. Heptano/EtOH, 70:30).

Ejemplo 22B: Segundo enantiómero que se eluvó sobre Chiralpak AD de (3aR.6R.6aFO- v (3aS,6S.6aS)-(2'-amino-2-morfolino-4'- (trifluoro-metil)-r4,5'-bipirimidin1-6-il)-6-hidroxi-hexahidro-2H-ciclopenta-rdl-oxazol-2-ona Estereoquímica absoluta no determinada.

Se obtuvo el compuesto del título después de la separación mediante HPLC de preparación quiral del producto racémico del Ejemplo 22. (Columna: Chiralpak AD, 20 mieras, 5 x 500 milímetros. Flujo de 70 mililitros / minuto. Heptano/EtOH/DEA, 20:80:0.01). tR: 23.3 minutos (Columna: Chiralpak AD-H, 4.6 x 250 milímetros. Flujo de 1.2 mililitros / minuto. Heptano/EtOH, 70:30).

Ejemplo 23: (4S,5R)-3-(2'-am¡no-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-r4,5'-bipirimidin1-6-il)-5-(2-hidroxi-etil)-4-metil-oxazolidin-2-ona A una solución de la (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-etil)-4-metil-oxazolidin-2-ona (2.1 gramos, 3 milimoles) en tetrahidro-furano (THF) (20 mililitros), se le agregó por goteo TBAF 1 M en tetrahidrofurano (THF) (3 mililitros, 3 milimoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a 0°C antes de la evaporación. El residuo se purificó mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc/MeOH , 90:10:1 ? 0:100:10). El producto purificado se recristalizó a partir de metanol (MeOH), para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (1.17 gramos, 83 por ciento): tR = 0.80 minutos (UPLC 1), tR = 0.82 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 470 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 23.1 : (4S.5R)-3-(2'-am¡no-2-morfol¡no-4'-arífluoro-metil)-r4.5'-bipirimidinl-6-il)-5-(2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-etil)-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el Ejemplo 22.1 a partir de la 4S,5R)-5-(2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-etil)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona y el intermediario B, para proporcionar el compuesto del título después de la cristalización a partir de MeOH: tR = 1.72 minutos (UPLC 1), tR = 1.55 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 708 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 23.2: (4S.5R)-5-(2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-et¡l)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimid¡n-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 21.1 a partir de una mezcla de 4:1 de los diaestereoisómeros (4S,5R) y (4S.5S) de la 5-(2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-etil)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona y el intermediario A, para proporcionar, después de la remoción del diaestereoisómero (4S.5S) mediante dos recristalizaciones a partir de THF/MeOH, solamente el diaestereoisómero (4S.5R) del compuesto del título: tR = 1.88 minutos (UPLC 1), tR= 1.64 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 581, 583 [M+H]+ (LC-MS 3); 1H RMN (400 MHz, D SO-d6): d 1.08 (s, 9H), 1.36 (d, 3H), 2.02 (m, 2H), 3.70-3.90 (m,10H), 4.82 (m, 2H), 7.40-7.50 (m, 6H), 7.51 (s, 1H), 7.67 (m, 4H).

Paso 23.3: (4S.5R)- v (4S.5S)-5-(2-((terbutil-difenil-sil¡D-oxi)-etil)-4-metil-oxazolidin-2-ona A una solución de una mezcla de 4:1 de los diaestereoisómeros (4S.5R) y (4S.5S) de la 5 - (2-( (te rb u ti I -d ife n i I -s i I i I ) -ox i )-et i I )-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona (4.1 gramos, 7.8 milimoles) en acetonitrilo (40 mililitros), se le agregó una solución de (NH4)2Ce(N03)6 (10.71 gramos, 19.5 milimoles) en H20 (20 mililitros) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas a 0-5°C. La mezcla se agregó a agua helada, y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. Se obtuvo el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 10:1 ? EtOAc), como una mezcla de 4:1 de los diaestereómeros (2.2 gramos, 71 por ciento): TLC (hexano-EtOAc, 1:1) Rf = 0.23; tR = 1.47 minutos (UPLC 1), tR = 1.33 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 401 [M + NH4]+ (LC-MS 3).

Paso 23.4: (4S.5R)- v (4S.5S)-5-(2-((terbutil-d¡fenil-silil)-oxi)-et¡n-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazol¡din-2-ona A una solución de una mezcla de 4:1 de los diaestereómeros (4S.5R) y (4S.5S) de la 5-(2-hidroxi-etil)-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona (2.65 gramos, 10 milimoles) en N,N-dimet¡l- formamida (DMF) (30 mililitros), se le agregaron imidazol (1.73 gramos, 25 milimoles), y TBDPSCI (3.57 gramos, 13 milimoles) a 0-5°C. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró, y el aceite residual se disolvió en terbutil-metil-éter (TBME), y se lavó con una solución acuosa de KHSO4 al 10 por ciento, H20, una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secó sobre gS04l se filtró, y se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (heptano/EtOAc, 20:1 ? 2:1), como una mezcla de 4:1 de los diaestereómeros (4.18 gramos, 80 por ciento): TLC (hexano/EtOAc, 3:1) Rf = 0.27; tR = 1.70 minutos (UPLC 1), tR = 1.52 minutos (LC- S 3); ESI-MS: 526 [M+Na]+ (LC-MS 3).

Paso 23.5: (4S.5R)- v (4S.5S)-5-(2-hidroxi-etin-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona Una mezcla de 4:1 de la (4S,5R)- y (4S,5S)-5-alil-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona (2.67 gramos, 10 milimoles) en CH2CI2-MeOH, 2:1 (40 mililitros), se ozonizó a -78°C. Después de la formación completa del ozónido, se agregó NaBH4 (0.57 gramos, 15 milimoles), y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, y se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agregó a una solución acuosa de K2C03 al 20 por ciento, y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre gS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo claro (2.65 gramos, 99 por ciento): TLC (EtOAc) Rf = 0.28; tR = 0.68 minutos (UPLC 1), tR = 0.69 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 266 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 23.6: (4S.5R^- v (4S.5Sl-5-alil-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona A una solución de una mezcla de 4:1 del ((2S,3R)-3-hidroxihex- 5-en-2-il)(4-metoxi-bencil)-carbamato de bencilo y el ((2S,3S)-3-hidroxihex-5-en-2-il)(4-metoxi-bencil)-carbamato de bencilo (3.55 gramos, 9.5 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (60 mililitros), se le agregó, bajo argón, a -50°C, una solución 1 de NaHMDS en tetrahidrofurano (THF) (10.5 mililitros). Después de agitar la mezcla de reacción durante 0.5 horas a -40°C, la mezcla se agregó a una solución acuosa fría de KHS04 al 10 por ciento, y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. Se obtuvo el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 10:1 ? 1:1), como un aceite incoloro (2.4 gramos, 97 por ciento): TLC (hexano/EtOAc, 1:1) Rf = 0.42; tR = 1.03 minutos (UPLC 1), tR = 0.99 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 262 [M + H]+ (LC-MS 3); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 1.06 (d, 2.4H), 1.13 (d, 0.6H), 2.30 a 2.40 (m, 2H), 3.25 (m, 0.2H), 3.66 (m, 0.8H, fuerte NOE para la señal en 4.54), 3.75 (s, 3H), 4.07 (d, 1H), 4.10 (m, 0.2H), 4.48 (d, 1H), 4.54 (m, 0.8H), 5.05-5,20 (m, 2H), 5.23 (m, 0.2H), 5.78 (m, 0.8H), 6.92 (d, 2H), 7.22 (d, 0.4H), 7.24 (d, 1.6H).

Paso 23.7: (2S.3R)- v (2S.3S)-4-metoxi-bencil-(1 -oxo-propan-2-¡n-carbamato de bencilo A una solución del (S)-4-metoxi-bencil-(1 -oxo-propan-2-il)-carbamato de bencilo (3.86 gramos, 10 milimoles) en tetrahidro-furano (THF) (30 mililitros), se le agregó polvo de zinc (1.64 gramos, 25 milimoles), una solución acuosa saturada de NH4CI (5 mililitros), y bromuro de alilo (2.2 mililitros, 25 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a 25-30°C. La mezcla de reacción se diluyó con H20, y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con una solución acuosa de KHS04 al 10 por ciento, H20, NaHC03 y salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. Se obtuvo el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? 2:1), como un aceite incoloro, (3.5 gramos, 97 por ciento): tR = 1.25 minutos y 1.27 minutos (UPLC 1) (mezcla de 4:1 de los diaestereoisómeros (2S.3R) y (2S.3S)), TLC (hexano/EtOAc, 1:1) Rf = 0.51; tR = 1.68 minutos y 1.69 minutos (LC- S 3); ESI-MS: 370 [ + H]+ (LC-MS 3).

Paso 23.8: (S)-4-metoxi-bencil-(1 -oxo-propan-2-il)-carbamato de bencilo A una solución del (S)-(1 -hidroxi-propan-2-il)(4-metoxi-benc¡l)-carbamato de bencilo (11.8 gramos, 35.5 milimoles) en CH2CI2, se le agregaron NaHC03 (3.28 gramos, 39 milimoles), KBr (0.25 gramos, 2.1 milimoles), y TEMPO 0.168 gramos, 1.07 milimoles). La mezcla de reacción se enfrió hasta 0-5°C, y se agregó la solución acuosa de NaCIO al 5 por ciento (85 mililitros, 71 milimoles), dentro de 30 minutos. Después de agitar durante 1 hora a 0-5°C, la mezcla de reacción se agregó a una solución de Na2S203, y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con una solución acuosa de NaH2P04, H20 y salmuera, se secaron sobre MgS0 , se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo (11.2 gramos, 96 por ciento): TLC (hexano/EtOAc, 1:1) Rf = 0.55; tR = 1.29 minutos (UPLC 1), tR= 1.15 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 328 [ + H]+ (LC-MS 3).

Paso 23.10: (SM1 -hidroxi-propan-2-ilU4-metoxi-bencin-carbamato de bencilo A una solución del ácido (S)-2-(((benciloxi)-carbonil)(4-metoxi-bencil)-amino)-propanoico [439589-23-8] (16 gramos, 41.9 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (150 mililitros), se le agregó lentamente, bajo argón, dimetil-sulfuro de borano (8.4 mililitros, 84 milimoles) a 0-5°C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a 0-5°C, seguido por 3 horas a 40-45°C. El exceso de borano se destruyó mediante la adición cuidadosa de metanol, y la mezcla de reacción se evaporó 3 veces con 200 mililitros de metanol (MeOH) y 2 veces con CHCI3. Se obtuvo el compuesto del título después de secar como un aceite incoloro (13.7 gramos, 99 por ciento): TLC (hexano/EtOAc, 1:1) Rf = 0.22; tR = 1.06 minutos (UPLC 1), tR = 1.02 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 330 [M + H]+ (LC-MS 3).

Ejemplo 24: primer diaestereoisómero que se eluvó en la LC-MS 3 de la (4S.5R)-3-(2'-am¡no-2-morfo[ino-4'-(trifluoro-metil)-r4.5'-bipirimidin1-6-¡l)-5-((R)-2-hidroxi-propil)-4-metil-oxazol¡din-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo no determinada, configuración (R) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el Ejemplo 23, a partir de la (4S,5R)-3-(2'-am¡no-2-morfol¡no-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-((R)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona y TBAF, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc 5:1 ? EtOAc/MeOH , 10:1), y de la recristalización a partir de metanol, el compuesto del título como un sólido blanco: TLC (EtOAc) Rf = 0.50; tR = 0.88 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 484 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 24.1 : (4S.5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-nrifluoro-met¡n-r4.5'-bipirim¡dinl-6-il)-5-((R)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo protegido no determinada, configuración (R) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 22.1 a partir de la (4S,5R)-5-((R)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona y el intermediario B, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? EtOAc), el compuesto del título como una espuma color amarillo claro: TLC (hexano/EtOAc, 1:1) R, = 0.45; tR = 1.57 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 722 [ + H]+ (LC-MS 3).

Paso 24.2: (4S.5R)-5-((R)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirim¡din-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo protegido no determinada, configuración (R) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 21.1 a partir de la (4S,5R)-5-((R)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona y el intermediario A, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20: 1 ? 3: 1 ) , el com puesto del título como un aceite incoloro : TLC (hexano/EtOAc, 1 : 1 ) R, = 0.65; tR = 1 .67 minutos (LC-MS 3) ; ESI-MS. 595, 597 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 24.3: (4S.5R)-5-((R)-2-((terbutil-difenil-silih-oxi)-proDin-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo protegido no determinada, configuración (R) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analog ía al procedimiento descrito para el paso 23.3 a partir de la (4S,5R)-5-((R)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona para proporcionar, después de la pu rificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20: 1 ? EtOAc) , el compuesto del título como un aceite incoloro: TLC (hexano/EtOAc, 1 : 1 ) Rf = 0.28; tR = 1 .38 minutos (LC-MS 3) ; ES I-MS: 41 5 [M + NH4]+ (LC-MS 3).

Paso 24.4: (4S.5R)-5-((R)-2-((terbut¡l-difenil-sil¡n-oxi)-Dropih-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo protegido no determinada, configuración (R) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 23.4 a partir de la (4S,5R)-5-((R)-2-hidroxi-propil)-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolid¡n-2-ona (contaminada con el 15 por ciento del primer diaestereoisómero (2S,4S,5R) que se eluyó a partir del paso 24.5), para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? EtOAc), el compuesto del título como un aceite incoloro: TLC (hexano/EtOAc, 3:1) Rf = 0.26; tR = 1.55 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 540 [M + Na]+ (LC-MS 3).

Paso 24.5: (4S.5R)-5-((S)- v (4S.5R)-5-((R)-2-hidroxi-propin-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona La estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo después de reducción de la cetona no fue determinada, la configuración (S) fue arbitrariamente asignada al primer producto que se eluyó del diaestereoisómero (4S,5R,5S).

El primer producto que se eluyó es el diaestereoisómero (4S,5R,5S): Segundo producto que se eluyó, mezcla de diaestereoisómeros (2R,4S,5R) (configuración (2R) arbitrariamente asignada para la fracción de 2-hidroxi-propilo): contaminado con el primer diaestereoisómero (4S,5R,5S) que se eluyó: El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 23.5 a partir de una mezcla de 3:1 de los diaestereoisómeros (4S.5R) y (4S,5S) de la 3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-5-(2-metil-alil)-oxazolidin-2-ona, para proporcionar, después de múltiples separaciones de la mezcla de isómeros 3:3:1:1, mediante cromatografía por evaporación instantánea (gel de sílice RediSep Rf Gold; hexano/EtOAc, 1:1 ? EtOAc y tolueno/EtOAc, 3:1 ? EtOAc), los dos diaestereoisómeros menores individuales (2S,4S,5S) y (2R,4S,5S) y los dos diaestereoisómeros mayores individuales (2S,4S,5R) y (2R,4S,5R), como aceites incoloros: Primer diaestereoisómero (2S,4S,5R) del compuesto del título que se eluyó (configuración (2S) arbitrariamente asignada para la fracción de 2-hidroxi-propilo): TLC (EtOAc) Rf = 0.39; tR = 0.752 minutos (UPLC 1); tR = 0.76 minutos (LC-MS 3); ESI- S: 280 [M + H]+ (LC-MS 3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 1.12 (d, 3H), 1.28 (d, 3H), 1.5-1.63 (m, 1H), 1.81 (m, 1H), 1.90 (d, 1H), 3.68 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 4.03 (d, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.60 (ddd, 1H), 4.79 (d, 1H), 6.89 (d, 2H), 7.22 (d, 2H).

Segundo diaestereoisómero (2R,4S,5R) del compuesto del título que se eluyó (configuración (2R) arbitrariamente asignada para la fracción de 2-hidroxi-propilo) contaminada con el 15 por ciento del primer diaestereoisómero (2S,4S,5R) que se eluyó: TLC (EtOAc) Rf = 0.35; tR = 0.742 minutos y 0.752 minutos (UPLC 1); tR = 0.75 minutos y 0.76 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 280 [M + H]+ (LC-MS 3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 1.12 (d, 3H), 1.28 (d, 3H), 1.50-1.64 (m, 1H), 1.81 (m, 0.15H), 1.90 (d, 0.15H). 1.94 (m, 0.85H), 2.21 (d, 0.85H), 3.67 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 4.01 (m, 1H), 4.13 (m, 1H), 4.73 (m, 0.85H), 4.79 (d, 0.15H), 4.80 (d, 1H), 6.90 (d, 2H), 7.22 (d, 2H).

Paso 24.6: Diaestereoisómeros (4S.5R) v (4S.5S) de la 3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-5-(2-metil-alil)-oxazol¡din-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 23.6 a partir de una mezcla de 3:1 de los diaestereoisómeros (2S.3R) y (2S.3S) del ((2S)-3-hidroxi-5-metil-hex-5-en-2-il)(4-metoxi-bencil)-carbamato de bencilo, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? 1:1), el compuesto del título como una mezcla de 3:1 de los diaestereoisómeros (4S,5R) y (4S,5S): tR = 1.112 minutos (UPLC 1); tR = 1.05 minutos (LC-MS 3); ESl-MS: 276 [M + H]+ (LC-MS 3); H RMN (400 MHz, CDCI3): d 1.13 (d, 2.2H), 1,20 (d, 0.8H), 1.76 (s, 0.8H), 1.80 (s, 2.2H), 2.23 (ddd, 0.25H), 2.27 (dd, 0.75H), 2.39 (dd, 0.25H) 2.46 (dd, 0.75H), 3.28 (m,0.25H), 3.68 (m, 0.75H), 3.83 (s, 3H), 3.99 (d, 0.75H), 4.04 (d, 0.35H), 4.14 (m, 0.25H), 4.62 (m, 0.75H), 4.70-4.90 (m, 4H), 6.90 (d, 2H), 7.25 (d, 2H).

Paso 24.7: Diaestereómeros (2S.3R) y (2S.3S) de (3-hidroxi-5-metil-hex-5-en-2-il)(4-metoxi-bencil)-carbamato de bencilo El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 23.7 a partir del (S)-4-metoxi-bencil-(1 -oxo-propan-2-il)-carbamato de bencilo y el 3-bromo-2-metil-prop-1-eno, para proporcionar el compuesto del título como una mezcla de 3:1 de los diaestereómeros (2S,3R) y (2S,3S): tR = 1.322 minutos (isómero mayor), y 1.329 minutos (isómero menor) (UPLC 1); tR = 1.23 minutos (isómero mayor), y 1.24 minutos (isómero menor) (LC-MS 3); ESI-MS: 384 [M + H]+ (LC-MS 3).

Ejemplo 25: Segundo producto que se eluvó en la LC MS 3, el cual es una mezcla de 9:1 de (4S.5R)- y (4S,5S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-r4.5'-bip¡rimidin1-6-il)-5-((S)-2-hidroxi-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo no determinada, configuración (S) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el Ejemplo 23, a partir de una mezcla de 8:1 de (4S,5R)- y (4S,5S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(tr¡fluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-((S)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-4- metil-oxazolidin-2-ona y TBAF, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc 5:1 ? EtOAc/ eOH, 10:1), y de la recristalización a partir de metanol, el compuesto del título como un sólido blanco: TLC (EtOAc) Rf = 0.50; tR = 0.87 minutos (diaestereómero (4S.5S) menor), y 0.89 minutos (diaestereómero (4S.5R) mayor) (LC-MS 3); ESI-MS: 484 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 25.1: (4S.5R)- v (4S.5S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-r4,5'-bipirimidin1-6-il)-5-((S)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona La estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo protegido no fue determinada, configuración (S) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 22.1, a partir de una mezcla de 7:1 de (4S.5R)- y (4S,5S)-5-((R)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona y el intermediario B, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? EtOAc), el compuesto del título como una mezcla de 8:1 de los diaestereoisómeros (4S,5R) y (4S,5S): TLC (hexano/EtOAc, 1:1) Rf = 0.45; tR = 1.58 minutos (LC-MS 3); ESI- S: 722 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 25.2: (4S.5R)- v (4S.5S)-5-((S)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-3-(6-cloro-2-morfol¡no-pirimidin-4-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo protegido no determinada, configuración (S) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 21.1, a partir de una mezcla de 7:1 de (4S.5R)- y (4S,5S)-5-((S)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona y el intermediario A, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? 3:1), y de la cristalización a partir de MeOH/THF, el compuesto del título como una mezcla de 7:1 de los diaestereoisómeros (4S.5R) y (4S.5S): TLC (hexano/EtOAc, 1:1) Rf = 0.65; tR = 1.67 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 595, 597 [M + H] + (LC-MS 3).

Paso 25.3: (4S.5R)- v (4S.5S)-5-((S)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-prop¡l)-4-metil-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxí-propilo protegido no determinada, configuración (S) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 23.3, a partir de una mezcla de 7:1 de (4S.5R)- y (4S,5S)-5-((S)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? 2:1), el compuesto del título como un aceite incoloro, como una mezcla de 10:1 de los diaestereoisómeros (4S.5R) y (4S.5S): TLC (hexano/EtOAc, 1:1) Rf = 0.30; tR = 1.38 minutos (LC-MS 3); ESl-MS: 415 [M + NH4]+ (LC-MS 3). Paso 25.4: (4S.5R)- y (4S,5S)-5-((S)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-prop¡l)-3-(4-metoxi-bencil)-4-met¡l-oxazolidin-2-ona Estereoquímica absoluta de la fracción de 2-hidroxi-propilo protegido no determinada, configuración (S) arbitrariamente asignada.

El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 23.4, a partir de una mezcla de 7:1 de (4S.5R)- y (4S,5S)-5-((S)-2-hidroxi-propil)-3-(4-metoxí-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona preparada en el paso 24.5, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? EtOAc), el compuesto del título como una mezcla de 7:1 de los diaestereoisómeros (4S.5R) y (4S.5S): TLC (hexano/EtOAc, 3:1) Rf = 0.26; tR = 1.56 minutos (LC-MS 3); ESl-MS: 540 [M + Na]+ (LC-MS 3). Ejemplo 26: (4S.5R)- v (4S.5S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'- (trifluoro-met¡n-r4.5'-b¡pirimidinl-6-¡l)-5-(2-hidroxi-2-met¡l-propin-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 22.1, a partir de una mezcla de 5:1 de (4S.5R)- y (4S,5S)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-il)-5-(2-h¡droxi-2-met¡l-propil)-4-metil-oxa2olidin-2-ona y el intermediario B, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc/MeOH, 90:10:1 ? 10:100:10), y de la recristalización a partir de metanol, el compuesto del título como un sólido blanco, y como una mezcla de 7:1 de los diaestereoisómeros (4S,5R) y (4S.5S): TLC (EtOAc) Rf = 0.43; tR = 0.93 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 498 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 26.1: (4S.5R)- v (4S.5S)-3-(6-cloro-2-morfolino-pirimidin-4-in-5-(2-hidroxi-2-metil-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 21.1, a partir de una mezcla de 5:1 de (4S.5R)- y (4S,5S)-5-((S)-2-((terbutil-difenil-silil)-oxi)-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona y el intermediario A, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 10:1 ? EtOAc), el compuesto del título como una espuma color amarillo claro, y como una mezcla de 5:1 de los diaestereoisómeros (4S.5R) y (4S.5S): TLC (EtOAc/MeOH, 10:1) Rf = 0.55; tR = 1.02 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 371, 373 [M + H]+ (LC-MS 3).

Paso 26.2: (4S.5R)- v MS.5S)-5-(2-hidrox¡-2-metil-propil)-4-metil-oxazolidin-2-ona El compuesto del título se preparó en analogía al procedimiento descrito para el paso 23.3, a partir de una mezcla de 5:1 de (4S.5R)- y (4S,5S)-5-(2-hidroxi-2-metil-propil)-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolidin-2-ona, para proporcionar, después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano-EtOAc, 1:1 ? EtOAc-MeOH 5:1), el compuesto del título como un aceite incoloro, como una mezcla de 5:1 de los diaestereoisómeros (4S.5R) y (4S.5S): TLC (EtOAc/MeOH , 10:1) Rf = 0.40; tR = 0.41 minutos (LC-MS 3); ESl-MS: 174 [M + H]+ (LC-MS 3). Paso 26.3: (4S.5R)- v (4S.5S)-5-(2-hidroxi-2-metil-propil)-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-oxazolid¡n-2-ona A una solución de una mezcla de 3:1 de 2-((4S,5R)-3-(4-metoxi-benc¡l)-4-metil-2-oxo-oxazolidin-5-il)-acetato de metilo y 2-((4S,5S)-3-(4-metoxí-bencil)-4-metil-2-oxo-oxazolidin-5-il)-acetato de metilo (2.0 gramos, 6.82 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (50 mililitros), se le agregó lentamente, bajo argón, una solución de cloruro de metil-magnesio 3M en tetrahidrofurano (THF) (6.82 mililitros, 20.46 milimoles) a -78°C. Después de la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. Después de la adición de una solución acuosa de NH4CI al 10 por ciento, se extrajo el producto con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con H20, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? EtOAc), como un aceite incoloro, (1.2 gramos, 59 por ciento, mezcla de 3:1 de los diaestereoisómeros (4S,5R) y (4S.5S)): TLC (CH2CI2/MeOH, 10:1) Rf= 0.43; tR = 0.80 minutos y 0.81 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 294 [? + ?G (LC-MS 3); 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 1.12 (d, 2.25H), 1.22 (d, 0.75), 1.32 (s, 1.5H), 1.34 (s, 4.5H), 1.68 (dd, 1H), 1.86 (dd, 0.25H), 1.93 (dd, 0.75H), 3.23 (m, 0.25H), 3.64 (m, 0.75H), 3.83 (s, 3H), 3.99 (d, 0.75H), 4.04 (d, 0.25H), 4.26 (d, 0.25H), 4.72 (d, 0.25H), 4.73 (m, 0.75H), 4.80 (d, 0.75H), 6.89 (d, 0.5H), 6.90 (d, 1.5H), 7.23 (d, 0.5H), 7.24 (1.5H).

Paso 26.4: 2-((4S.5R)-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-2-oxo-oxazolidin-5-il)-acetato de metilo y 2-((4S.5S)-3-(4-metoxi-bencil)-4-metil-2-oxo-oxazolidin-5-il)-acetato de metilo A una suspensión de una mezcla de 3:1 de (3R.4S)- y (3S,4S)-3-hidroxi-4-((4metoxi-bencil)-amino)-pentanoato de metilo (4.1 gramos, 10.74 milimoles) en CH2CI2 (80 mililitros), se le agregó DIEA (8.44 mililitros, 48.3 milimoles), y a 0°C, una solución de carbonato de bis-(tricloro-metilo) (2.389 gramos, 8.05 milimoles) disuelto en CH2CI2 (10 mililitros). Después de agitar durante 0.5 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se agregó a una solución saturada de NaHC03, y el producto se extrajo con CH2CI2. Los extractos combinados se lavaron con H20, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía por evaporación instantánea (hexano/EtOAc, 20:1 ? EtOAc) como una espuma color amarillo claro (2.02 gramos, 63 por ciento, mezcla de 3:1 de los diaestereoisómeros (4S.5R) y (4S,5S)): TLC (tolueno/EtOAc, 1:1) Rf = 0.47; tR = 0.84 minutos (LC-MS 3); ESI-MS: 294 [M + H]+ (LC-MS 3); H RMN (400 MHz, CDCI3): d 1.11 (d, 2.25H), 1.27 (d, 0.75H), 2.57 (dd, 0.25H), 2.67 (dd, 0.75H), 2.75 (dd, 0.25H), 2.81 (dd, 0.75H), 3.34 (m, 0.25H), 3.70 (s, 0.75H), 3.73 (s, 2.25H), 3.77 (m, 0.75H), 3.83 (s, 3H), 3.99 (d, 0.75H), 4.04 (d, 0.25H), 4.44 (m, 0.25H), 4.75 (d, 0.25H), 4.78 (d, 0.75H), 4.88 (m, 0.75H), 6.90 (d, 2H), 7.22 (d, 0.5H), 7.23 (d, 1.5H).

Paso 26.5: (3R.4S)- y (3S.4S)- 3-hidroxi-4-((4-metoxi-bencil)-amino)-pentanoato de metilo A una suspensión del clorhidrato de (3R,4S)-4-amino-3-hidroxi-pentanoato de metilo [111061-25-7] (2.17 gramos, 11.8 milimoles) en CH2CI2 (60 mililitros), y metanol (MeOH) (60 mililitros), se le agregó NaOAc (1.357 gramos, 16.54 milimoles), y después de 10 minutos de agitación, p-anisaldehído (1.37 mililitros, 11.2 milimoles) y tamiz molecular (2 gramos). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. Después de la adición de 2 mililitros de AcOH, se agregó NaBH3CN (1.11 gramos, 17.7 milimoles), en porciones, durante un período de 30 minutos. Después de agitar durante 30 minutos adicionales a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró, el filtrado se acidificó con HCI 4N acuoso, y se evaporó a sequedad. El residuo se lavó primero con Et20, luego se suspendió en CH2CI2/MeOH, 1:1, y el material inorgánico se filtró. El filtrado se concentró para proporcionar el compuesto del título después de secarse a 50°C durante 4 horas, como un sólido color beige (2.9 gramos, 80 por ciento, mezcla de 3:1 de los diaestereoisómeros (3R.4S) y (3S.4S)): tR = 0.46 minutos (diaestereoisómero (3R.4S)), y 0.48 minutos (diaestereoisómero (3S,4S)) (LC-MS 3); ESI-MS: 268 [M+H]+ (LC-MS 3).

Los datos de 1H RMN para los compuestos de los ejemplos anteriores se proporcionan en la siguiente Tabla. 4 Propiedades físicas adicionales Los materiales cristalinos obtenidos a partir de los ejemplos 1 0 y 1 8, lotes A - E se caracterizaron adicionalmente como sigue.

Determinación del punto de fusión : El punto de fusión se determinó mediante calorimetría de exploración diferencial (DSC) . La calorimetría de exploración diferencial (DSC) se midió utilizando un TA I nstruments, DSC 2000 , Serie No. 100036. Una muestra de 1 a 5 miligramos se pesó en una bandeja de aluminio estándar (bandeja + tapa, TA 900786.901, 900779.901). El instrumento se operó utilizando el software Thermal Advantage Q-Serie V.2.6.0.367 y el software Thermal Advantage V4.6.9. Los eventos térmicos se caracterizaron utilizando el Universal Analysis V4.3A Build 4.3.0.6. Las muestras se midieron contra una bandeja vacía. La muestra se trató de acuerdo con el siguiente protocolo: Paso 1: EQUILIBRAR A -40°C.

Paso 2: CALENTAMIENTO A 10°C/minuto/ 300°C.

Modulación: No Las gráficas obtenidas se muestran en las Figuras 1, 3, 5, 7, 9 y 11.

Difracción en polvo de ravos-X (PXRD): Una cantidad de muestra de aproximadamente 2 a 5 miligramos se coloca sobre un portaobjetos de vidrio del objetivo, y se centró en el haz de rayos-X en un Bruker D8 GADDS Discover con un ánodo de CuKa (Serie No. 002482). La distancia de la Muestra-Detector fue de 30 centímetros. Se registraron dos marcos entre 5o y 40° 2-theta. Los marcos se fusionaron utilizando el software GADDS 4.1.27. La evaluación se condujo utilizando EVA 10.0.0.

Las gráficas obtenidas se muestran en las Figuras 2, 4, 6, 8, 10 y 12.

Los picos 2-theta [°] representativos se proporcionan en la siguiente tablas: Referencia: Figura 2 (PXRD Ejemplo 10) Referencia: Figura 4 (PXRD Ejemplo 18A) Referencia: Figura 6 (PXRD Ejemplo 18B) Referencia: Figura 8 (PXRD Ejemplo 18C) Referencia: Figura 10 (PXRD Ejemplo 18D) Referencia: Figura 12 (PXRD Ejemplo 18E) Actividad Biológica La eficacia de los compuestos de la presente invención como inhibidores de cinasa PI3 se puede demostrar como sigue: Preparación de dil uciones de los compuestos (384 pozos) Los compuestos de prueba se disolvieron en sulfóxido de dimetilo (D SO) (1 0 mM), y se transfirieron a tubos Matrix en forma de V o de fondo plano de 1 .4 mililitros portadores de un chip Matrix 2D único mediante cubos de compuestos Novartis individuales. Los números de estos chips se vincularon distintivamente a los Números de Novartis Pharma . Las soluciones de suministro se almacenaron a -20°C si no se utilizaron inmediatamente. Para el proced imiento de prueba, los frascos se descongelaron y se identificaron mediante un escáner en donde se generó una hoja de cálculo que guió los siguientes pasos del procesamiento.

Los compuestos se diluyeron manualmente en sulfóxido de dimetilo (DMSO) para los experimentos individuales (96 pozos hicieron posibles 10 compuestos en 8 concentraciones (puntos individuales)) como se describe, o bien se prepararon como se describe a continuación si se probaban para su perfilación en 384 pozos. Este formato hizo posible el ensayo de máximo 40 compuestos de prueba individuales en 8 concentraciones (puntos individuales), incluyendo 4 compuestos de referencia. El protocolo de dilución incluyó la producción de "placas de pre-dilución" , "placas maestras" y "placas de ensayo" .

Placas de pre-di lución: Se utilizaron placas de polipropileno de 96 pozos como las placas de pre-dilución. Se preparó un total de 4 placas de pre-dilución, incluyendo 10 compuestos de prueba cada una, en las posiciones de la placa A1-A10, un compuesto estándar en A11, y un control de sulfóxido de dimetilo (DMSO) en A12. El patrón de los pasos de dilución se resume en la Tabla 1. Se han escrito programas para ejecutar estos pasos de pipeta en los robots HamiltonSTAR.

Tabla 1 Patrón de dilución para las placas de pre-dilución El DMSO se saturó con H20 hasta una concentración del 10 por ciento. Vol: Volumen, Conc: Concentración. Proporción Dil.: Proporción de dilución. Conc. Fin.: Concentración final.

Placas maestras: 100 microlitros de las diluciones de los compuestos individuales, incluyendo el compuesto estándar y los controles de las 4 "placas de pre-dilución", se transfirieron a una "placa maestra" 384, incluyendo las siguientes concentraciones 1,820, 564, 182, 54.6, 18.2, 5.46, 1.82 y 0.546 µ?, respectivamente, en sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 90 por ciento.

Placas de ensayo: Luego se prepararon "placas de ensayo" idénticas pasando por pipeta 50 nanolitros de cada una de las diluciones de los compuestos de las "placas maestras" hacia las "placas de ensayo" de 384 pozos. Los compuestos se mezclaron con 4.5 microlitros de los componentes de los ensayos más 4.5 microlitros de enzima, correspondiendo a una dilución de 1:181 que hizo posible la concentración final de 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.03, 0.01 y 0.003 µ?, respectivamente. La preparación de las "placas maestras" fue manejada por el robot Matrix PlateMate Plus, y la replicación de las "placas de ensayo" por el robot HummingBird.

Método para generar las construcciones de expresión Las ??3?a, ??3?ß, PI3K5 humanas catalíticamente activas, y mTOR, se clonaron, se expresaron, y se purificaron como se describe (Maira SM, Stauffer F, Brueggen J, Furet P, Schnell C, Fritsch C, Brachmann S, Chéne P, de Pover A, Schoemaker K, Fabbro D, Gabriel D, Simonen M, Murphy L, Finan P, Sellers W, García-Echeverría C (2008), Mol Cáncer Ther. 7: 1851-63, y Maira SM, Pecchi S, Brueggen J, Huh K, Schnell C, Fritsch C, Nagel T, Wiesmann M, Brachmann S, Dorsch M, Chéne P, Schoemaker K, de Pover A, Menezes D, Fabbro D, Sellers W, García-Echeverría C, Voliva CF (2011), Mol. Cáncer Ther. aceptado).

Ensayos bioquímicos para PI3Kalfa, PI3Kbeta El reactivo de detección de ATP basado en la luminiscencia KinaseGlo se obtuvo en Promega (Número de Catálogo V6714, Lote No. 236161) a través de Catalys, Wallisellen, Suiza. El (L-alfa-fosfatidil-inositol (Pl), hígado, bovino) se obtuvo en Avanti Polar Lipid (Número de Catálogo 840042C, Lote # LPI-274), el fosfatidil-inositol-4,5-bis-fosfato (PIP(4,5)2 (Avanti, Cat. No. 840046X) o el L-a-fosfatidil-inositol (Pl) se obtuvo en Avanti Polar Lipid (Número de Catálogo 840042C, Lote # LPI-274). La L-a-fosfatidil-serina (PS) fue de Avanti Polar Lipid (Número de Catálogo 840032C), el n-octil-glucósido de Avanti Polar Lipid (Número de Catálogo 10634425001). La luminiscencia es una lectura bien establecida para determinar las concentraciones de ATP y, por consiguiente, se puede utilizar para seguir la actividad de muchas cinasas independientemente de su sustrato. El Ensayo de Cinasa Luminiscente KinaseGlo (Promega, Madison/WI, EUA) es un método de HTS homogéneo para medir la actividad de cinasa mediante la cuantificación de la cantidad de ATP restante en solución en seguida de una reacción de cinasa.

Se dosificaron 50 nanolitros de las diluciones de los compuestos sobre placas de estireno no enlazante (NBS) negras de 384 pozos de bajo volumen (Costar Cat. No. NBS#3676) como se describe en la sección 8.2. El L-a-fosfatidil-inositol (Pl), proporcionado como una solución de 10 miligramos/mililitro en metanol (MeOH), se transfirió hacia dentro de un tubo de vidrio, y se secó bajo un haz de nitrógeno. Entonces se volvió a suspender en octil-glucósido al 3 por ciento mediante vórtex, y se almacenó a 4°C. Se agregaron 5 microlitros de una mezcla de PI/OG con los subtipos PI3Ka y PI3Kb. Las reacciones de cinasa se iniciaron mediante la adición de 5 microlitros de mezcla-ATP que contenía, en un volumen final, 10 microlitros de TRIS-HCI 10 mM, pH de 7.5, MgCI2 3 mM, NaCI 50 mM, CHAPS al 0.05 por ciento, DTT 1 mM, y ATP 1 µ?, y se desarrollaron a temperatura ambiente. Las reacciones se detuvieron con 10 microlitros de KinaseGlo, y las placas se leyeron 10 minutos después en un lector Synergy2 utilizando un tiempo de integración de 0.1 segundos por pozo. Se agregaron 2.5 µ? de NVP-BGT226 (estándar) a las placas de ensayo, para generar la inhibición del 100 por ciento de la reacción de cinasa, y la inhibición del 0 por ciento fue dada por el vehículo de solvente (sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 90 por ciento en agua). Se utilizó NVP-BGT226 como un compuesto de referencia y se incluyó en todas las placas de ensayo en la forma de 16 puntos de dilución por duplicado.

Los valores IC50 del porcentaje de inhibición de cada compuesto en 8 concentraciones (usualmente 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 y 0.003 µ?) n = 2, se derivaron mediante el ajuste de una curva sigmoidal de respuesta a la dosis a una gráfica de la lectura del ensayo sobre la concentración del inhibidor como se describe. Todos los ajustes se llevaron a cabo con el programa XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, Reino Unido (UK)).

Ensayos bioquímicos para PI3Kdelta, PI3Kgamma El Kit de Ensayo de Cinasa Universal TR-FRET AdaptaMR se adquirió en Invitrogen Corporation (Carlsbad/CA, EUA) (Número de Catálogo PV5099). El kit contiene los siguientes reactivos: Anticuerpo Adapta Eu-anti-ADP (anticuerpo anti-ADP marcado con europio en solución salina regulada con HEPES, Cat. No. PV5097), rastreador de ADP marcado con Alexa Fluor® 647 (rastreador de ADP marcado con Alexa Fluor® 647 en solución salina regulada con HEPES, Cat. No. PV5098), regulador de dilución de TR-FRET registrado, pH de 7.5 (Número de Catálogo PV3574).

El sustrato PIK3CD de fosfatidil-inositol se obtuvo en Invitrogen (vesículas que consisten en Pl 2 mM en HEPES 50 mM, pH de 7.5; Cat. No. PV5371). El sustrato PIK3CG de fosfatidil-inositol-4,5-bisfosfato (PIP(4,5)2 se obtuvo en Invitrogen (PIP2:PS vesículas unilamelares grandes que consisten en PIP2 1 mM: PS 19 mM en HEPES 50 mM, pH de 7.5, MgCI2 3 mM, EGTA 1 mM; Cat. No. PV5100).

La transferencia de energía de resonancia con fluorescencia resuelta en el tiempo (TR-FRET) es una tecnología basada en la transferencia de energía entre dos tintes adyacentes, a partir de un electrón excitado en un tinte (el donador) hasta un electrón de un tinte adyacente (el aceptor) a través de la resonancia, y entonces se libera como un fotón. Esta transferencia de energía se detecta mediante un aumento en la emisión de fluorescencia del aceptor, y una disminución en la emisión de fluorescencia del donador. Los ensayos de transferencia de energía de resonancia resuelta en el tiempo (TR-FRET) para las cinasas de proteína utilizan quelatos de lantánidos de terbio o europio de un largo tiempo de vida como la especie donadora, los cuales superan la interferencia a partir de la auto-fluorescencia del compuesto o la dispersión de luz a partir de los compuestos precipitados, mediante la introducción de un retardo después de la excitación mediante una fuente de excitación de foco de destello. Los resultados se expresan con frecuencia como una proporción de las intensidades de los fluoróforos del aceptor y el donador. La naturaleza radiométrica de este valor corrige las diferencias en los volúmenes de ensayo entre los pozos, así como corrige los efectos del apagado debidos a los compuestos coloreados. El ensayo AdaptaM se puede dividir en dos fases: una fase de reacción de cinasa y una fase de detección de ADP. En la fase de reacción de cinasa, todos los componentes de la reacción de cinasa se agregan al pozo, y la reacción se deja incubar durante un período de tiempo establecido específico para cada cinasa. Después de la reacción, se agrega al pozo de ensayo una solución de detección de anticuerpo anti-ADP marcado con Eu, rastreador de ADP marcado con Alexa Fluor® 647, y EDTA (para detener la reacción de cinasa). El ADP formado mediante la reacción de cinasa desplazará al rastreador de ADP marcado con Alexa Fluor® 647 a partir del anticuerpo, dando com o resultado una d ism in ución en la señal de TR-FRET. En la presencia de un inh ibidor, se red uce la cantidad de ADP formado m ediante la reacción de cinasa, y la interacción del anticuerpo-rastreador intacta resu ltante m antiene u na alta señal de TR-FRET. En el ensayo Ada ptaM R, el donador (anticuerpo de europio anti-ADP) se excita a 340 nanómetros, y transferirá su energ ía al aceptor (rastreador de ADP marcado con Alexa Fluor® 647) . La emisión a partir del Alexa Fluor® 647 se puede monitorear con un filtro centrado en 665 nanómetros debido a que se localiza entre los picos de emisión del donador, los cuales se mide a 61 5/620 nanómetros.

Se dosificaron 50 nanolitros de las diluciones de los compuestos sobre una placa de poliestireno blanca de pequeño volumen de 384 pozos, como se describe en la sección 2.2. Entonces se incuban 5 microlitros de PI3Kg y PI3Kd y sustrato de l ípido (Pl o PI P2: PS), seguidos por 5 microlitros de ATP (volumen final del ensayo de 1 0 microlitros) a temperatura ambiente. El regulador de reacción estándar para el ensayo de TR-FRET Adapta R conten ía Tris-HCI 1 0 mM , pH de 7.5, MgCI2 3 mM , NaCI 50 mM , DTT 1 mM , CHAPS al 0.05 por ciento. Las reacciones se detuvieron con 5 microlitros de una mezcla de EDTA que conten ía el anticuerpo anti-ADP marcado con Eu y el rastreador de ADP marcado con Alexa Fluor® 647 en el regulador de dilución de TR-FRET (registrado por IVG) . Las placas se leen de 1 5 a 60 minutos más tarde en un lector Synergy2 utilizando un tiempo de integración de 0.4 segundos y un retraso de 0.05 segundos. El control para la inhibición del 100 por ciento de la reacción de cinasa se llevó a cabo mediante el reemplazo del PI3K por el regulador de reacción estándar. El control para la inhibición del 0 por ciento fue dado por el vehículo de solvente de los compuestos (sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 90 por ciento en H20). El compuesto estándar NVP-BGT226 se utilizó como un compuesto de referencia y se incluyó en todas las placas de ensayo en la forma de 16 puntos de dilución por duplicado.

Los datos se analizan utilizando el software Excel fit o Graphpad Prism. Los valores EC50 se derivaron mediante el ajuste de una curva sigmoidal de respuesta a la dosis a una gráfica de la lectura del ensayo sobre la concentración del inhibidor. Todos los ajustes se llevaron a cabo con el programa XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, Reino Unido (UK)). La determinación de los valores EC50 del porcentaje de inhibición de cada compuesto en 8 concentraciones (usualmente 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 y 0.003 µ?) n = 2, se derivaron mediante el ajuste de una curva sigmoidal de respuesta a la dosis a una gráfica de la lectura del ensayo sobre la concentración del inhibidor. Todos los ajustes se llevaron a cabo con el programa XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, Reino Unido (UK)).

Ensayo bioquímico para mTOR Los ensayos de TR-FRET para las cinasas de proteína utilizan quelatos de lantánido de terbio o europio de largo tiempo de vida como la especie donadora, los cuales superan la interferencia por la autofluorescencia del compuesto o la dispersión de luz a partir de los compuestos precipitados, mediante la introducción de un retraso después de la excitación mediante una fuente de excitación de foco de destello. Los resultados se expresan con frecuencia como una proporción de las intensidades de los fluoróforos del aceptor y el donador. La naturaleza radiométrica de este valor corrige las diferencias en los volúmenes de ensayo entre los pozos, así como corrige los efectos del apagado debidos a los compuestos coloreados.

Los ensayos de enlace se basan en el enlace y desplazamiento de los inhibidores de cinasa competitivos con ATP marcados con Fluor® 647 a la cinasa de interés. Los "Rastreadores de Cinasa" de Invitrogen se han desarrollado para dirigirse a una amplia gama de objetivos de cinasa, y se basan en los inhibidores de cinasa competitivos con ATP, haciéndolos adecuados para la detección de cualesquiera compuestos que se enlacen al sitio de ATP o a un sitio aloestérico que altere la conformación del sitio de ATP. Los inhibidores que se enlazan al sitio de ATP incluyen los inhibidores de cinasa tanto del Tipo I, que se enlazan exclusivamente con el sitio de ATP, como los inhibidores del Tipo II (por ejemplo, Gleevec®/ Imatinib, Sorafenib, BIRB-796), que se enlazan tanto con el sitio de ATP como con el sitio hidrofóbico expuesto en la conformación DFG-fuera(no activa). Los inhibidores del Tipo III son los compuestos que no compiten con el ATP, y son regularmente referidos como inhibidores aloestéricos. Un estudio de 15 diversos inhibidores de Tipo I I I demostró q ue se detectaron todos salvo un com puesto en el ensayo de en lace con u na potencia eq uivalente a los ensayos de actividad . La única excepción fue un com puesto com petitivo con el sustrato y, por consigu iente , no es u n verdadero inhibidor aloestérico .

En contraste con la mayor parte de la actividad basada en la fluorescencia de los ensayos de cinasa , los ensayos de enlace de cinasa de E u3+ LanthaScreen® se pueden leer contin uamente, lo cual facilita la evaluación de los compuestos con una cinética de enlace lenta. También , a diferencia de la mayoría de los ensayos de actividad , los ensayos de enlace se pueden llevar a cabo utilizando preparaciones de cinasa ya sea activa o no activada, las cuales hacen posible la caracterización de los compuestos que se enlazan preferencialmente a las cinasas no activadas, tales como Gleevec®/ imatinib, y algunos inhibidores aloestéricos.

En el ensayo de enlace de cinasa LanthascreenM R, el donador (anticuerpo Eu3+ anti-GST) se excita a 340 nanómetros, y transferirá su energía al aceptor (inhibidor de cinasa competitivo con ATP marcado con Alexa Fluor® 647 = Rastreador-314). La emisión a partir del Rastreador-314 (inhibidor Alexa Fluor® 647) se puede monitorear con un filtro centrado en 665 nanómetros debido a que se localiza entre los picos de emisión del donador, los cuales se miden a 61 5/620 nanómetros. El enlace de ambos, el Rastreador-314 y el anticuerpo Eu3+ anti-GST, a la cinasa, da como resultado un alto grado de FRET a partir del fluoróforo del donador de Eu3+ al fluoróforo del aceptor Alexa-Fluor® 647 sobre el Rastreador-314. El enlace de un inhibidor a la cinasa compite por el enlace con el rastreador, lo cual da como resultado una pérdida de FRET.

Se dosificaron 50 nanolitros de las diluciones de los compuestos sobre placas de poliestireno blancas de pequeño volumen de 384 pozos, como se describe en la sección 2.2. Entonces se incubaron 5 microlitros de GST-mTOR y anticuerpo de europio anti-GST, seguidos por 5 microlitros del Rastreador-314 (volumen final del ensayo de 10 microlitros), a temperatura ambiente. El regulador de reacción estándar para el ensayo de enlace de cinasa LanthascreenMR contenía HEPES 50 mM, pH de 7.5, MgCI2 5 mM, EGTA 1 mM, Pluronic F-127 al 0.01 por ciento. Las placas se leen 60 minutos más tarde en un lector Synergy2 utilizando un tiempo de integración de 0.2 microsegundos y un retraso de 0.1 micro-segundos.

Para calcular la proporción de emisión, la señal emitida a 665 nanómetros a partir del aceptor (Rastreador-314 marcado con Alexa Fluor® 647) se divide entre la señal emitida a 620 nanómetros a partir del donador (anticuerpo de Eu3+ anti-GST).

El control para la inhibición del 0 por ciento fue dado por el vehículo de solvente de los compuestos (sulfóxido de dimetilo (DIVISO) al 90 por ciento en H20). El control para la inhibición relativa del 100 por ciento se llevó a cabo mediante la adición de 10 µ? en la mezcla que contenía GST-mTOR y anticuerpo de europio anti-GST. Se da un control adicional para la inhibición absoluta del 0 por ciento por el anticuerpo de Eu anti-GST sin GST-mTOR.

Ensayos cel ulares para PI3Kalfa, beta y delta AlphaScreen (Ensayo Homogéneo de Proximidad Luminiscente Amplificado, ALP HA, Perkin Elmer) es una tecnolog ía de ensayo de proximidad basado en perlas no radioactivas, para estudiar las interacciones biomoleculares en un formato de placa de microtitulación homogénea. El nombre de marca SureFire denota los ensayos AlphaScreen que se adaptan para cuantificar la fosforilación de las proteínas celulares endógenas en los lisados celulares, utilizando pares de anticuerpos emparejados, los cuales consisten en un anticuerpo anti-fosfo-cinasa y un anticuerpo anti-cinasa. El ensayo permite hacer la caracterización de la señalización de cinasa en las células, así como la medición de los efectos del inhibidor de cinasa. La tecnolog ía AlphaScreen proporciona varias ventajas sobre las técnicas de ensayo convencionales, tales como ELISA, debido a que evita los tardados procedimientos de lavado y reduce el manejo de placas. Adicionalmente, es miniaturizable cuando menos hasta un formato de 384 pozos, y proporciona sensibilidad bajando hasta el rango femtomolar, dependiendo de la afinidad de los anticuerpos incluidos en el kit de ensayo AlphaScreen SureFire individual. Se alcanza una alta sensibilidad mediante un mecanismo de amplificación intrínseca, el cual involucra la producción de moléculas de oxígeno sing uletes. Los kits de ensayo SureFire están comercialmente disponibles para los objetivos específicos, e incluyen pares de anticuerpos validados (PerkinElmer) . Este reporte describe los procedimientos comunes aplicados para los ensayos AlphaScreen SureFire, y los pasos semi-automatizados respectivos para la perfilación rutinaria de los inhibidores de cinasa en ensayos basados en células.

Las líneas celulares de Rata-1 que sobre-expresaban establemente las isoformas de PI3K clase I activadas de Rata-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110 delta (Rata-1_PI3Kdelta), y Rata-1 pBABEpuro Myr-HA-hp110alfa (Rata-1_PI3Kalfa), y Rata-1 pBABEpuro yr-HA-hp110 beta (Rata-1 _PI3beta), se prepararon como se describe (Maira SM, Stauffer F, Brueggen J, Furet P, Schnell C, Fritsch C, Brachmann S, Chéne P, de Pover A, Schoemaker K, Fabbro D, Gabriel D, Simonen M, urphy L, Finan P, Sellers W, García-Echeverría C (2008), Mol Cáncer Ther. 7: 1851-63, y Maira SM, Pecchi S, Brueggen J, Huh K, Schnell C, Fritsch C, Nagel T, Wiesmann M, Brachmann S, Dorsch M, Chéne P, Schoemaker K, de Pover A, Menezes D, Fabbro D, Sellers W, García-Echeverría C, Voliva CF (2011), Mol. Cáncer Ther., aceptado). Todas las líneas celulares se cultivaron en un medio de crecimiento Complete (DMEM alto en glucosa, suero bovino fetal al 10 por ciento (volumen/volumen), MEM NEAA al 1 por ciento (volumen/volumen), HEPES 10 mM, L-glutamina 2 mM, puromicina (10 microgramos/mililitro para Rata-1_PI3Kdelta y Rata-1_PI3Kalfa, 4 microgramos/mililitro para Rata-1_PI3beta), Pen/Strep al 1 por ciento (volumen/volumen)), hasta una confluencia del 90 por ciento a 37°C / C02 al 5 por ciento / humedad del 90 por ciento en una incubadora con C02 humidificada, y se dividieron dos veces por semana.

Se utilizaron los siguientes materiales para la detección de p-AKT(S473) en los Usados celulares de Rata-1: medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) alto en glucosa (Gibco Invitrogen, Basilea, Suiza, Cat. No. 41965), Suero bovino fetal inactivado por calor, Calificado (Hl FBS; Gibco Invitrogen, Basilea, Suiza, Lote No. 16140), aminoácidos no esenciales MEM (NEAA; Gibco Invitrogen, Basilea, Suiza, Cat. No. 11140), HEPES (Gibco Invitrogen, Basilea, Suiza, Cat. No. 15630), Penicilina/Estreptomicina (Pen/Strep, 100x; Gibco Invitrogen, Basilea, Suiza, Cat. No. 15140-122), L-Glutamina (Gibco Invitrogen, Basilea, Suiza, Cat. No. 25030), Puromicina (Sigma Aldrich, Buchs, Suiza, Cat. No. P9620), sulfóxido de dimetilo (DMSO) (MERCK, Dietikon, Suiza, Cat. No. 8.02912.2500), H20, MilliQ- H20 a menos que se informe de otra manera (MILLIPORE QGARDOOR1, Millipore, Zug, Suiza), albúmina de suero bovino (BSA; Sigma Aldrich, Buchs, Suiza Cat. No. A8412), p-Akt 1/2 SureFire (Ser473) Kit de Ensayo (PerkinElmer, Schwerzenbach, Suiza, Cat. No. TGRAS50K).

El ensayo SureFire de p-Akt(S473) mide la fosforilación de a Akt 1/2 celular endógena en Ser473 en los Usados celulares. Utilizando células de Rata-1 que expresaban establemente las versiones marcadas con myr-HA de las isoformas subunitarias catalíticas p110 PI3Kdelta, PI3Kalfa, o PI3Kbeta humanas, el ensayo se desarrolló como un protocolo de dos placas en un formato de 384 pozos.

Para la prueba de los compuestos, las células se sembraron en una densidad de 4,000 (Rata-1_PI3Kdelta), 7,500 (Rata-1 _PI3Kalfa), o 6,200 (Rata-1_PI3Kbeta) células en 20 microlitros del medio de crecimiento Complete en placas de 384 pozos tratadas con el cultivo celular, y se hicieron crecer a 37°C / C02 al 5 por ciento / humedad del 90 por ciento durante 24 horas. Poco antes de la transferencia de los compuestos, se removió el medio Complete, se agregaron 30 microlitros de regulador de ensayo (DMEM alto en glucosa, 1x MEM NEAA, HEPES 10 mM, L-glutamina 2 mM, albúmina de suero bovino (BSA) al 0.1 por ciento (peso/volumen)), y se transfirieron 10 microlitros de las diluciones previas de los compuestos a las células. Para la prueba después de febrero de 2010, el regulador de ensayo fue sustituido por el medio de crecimiento Complete, el cual reveló resultados similares (no se muestran los datos). Después del tratamiento con el compuesto durante 1 hora, las células se Usaron mediante la adición de 20 microlitros de regulador de lisis complementado con albúmina de suero bovino (BSA) al 0.24 por ciento (peso/volumen). La detección de p-AKT(Ser473) se llevó a cabo con el kit de ensayo de p-Akt 1/2 (Ser473) SureFire de acuerdo con las instrucciones del fabricante, utilizando 5 microlitros del lisado celular en un volumen de detección total de 12 microlitros.

Los valores IC50 del porcentaje de inhibición de cada compuesto en 8 concentraciones (usualmente 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 y 0.003 µ?) n = 2, se derivaron mediante el ajuste de una curva sigmoidal de respuesta a la dosis a una gráfica de la lectu ra del ensayo sobre la concentración del inhibidor com o se describe. Todos los ajustes se llevaron a cabo con el prog rama XLfit4 (I D Business Solutions , G uildford , Rei no U n ido (U K)).

Ensayo celular para mTOR Se desarrolló un ensayo basado en células (formato de 384 pozos) para la determinación de los efectos del compuesto sobre la actividad de cinasa celular de mTOR en células M EF (fibroblastos embrionarios de ratón) derivadas a partir de ratones que carecían de TSC 1 (complejo de tuberoesclerosis 1 ) , un potente supresor de la actividad de cinasa de mTOR. Debido a la falta de TSC 1 , la cinasa de mTOR se activa constitutivamente, dando como resultado la fosforilación permanente de Thr 389 de S6 cinasa 1 (S6K1 ) , que es uno de los objetivos corriente abajo de mTO R.

Utilizando un Kit Su reFire q ue hace posible la determinación de la fosforilación de Thr389 sobre S6K1 , se desarrolló, se validó, y se implemento un ensayo en el formato Alpha-Screen q ue permite hacer la determinación cuantitativa de fosfo-T389 de S6K1 en los lisados celulares. El tratamiento de las células M EF TSC 1 -/- con los inhibidores específicos de mTOR (o inhibidores de la senda de mTOR), de una manera dependiente de la dosis, reduce los niveles de fosfo-T389 en S6K1 , permitiendo hacer el cálculo de los valores IC50. Éstos estuvieron de acuerdo con los valores obtenidos con el ensayo bioqu ímico de mTOR de enlace de ATP, haciendo posible hacer una comparación cuantitativa de la potencia de los inhibidores de mTOR .

Las células TSC1-/- MEFs (Kwiatkowski, D. J., Zhang, H., Bandura, J. L., Heiberger, K. M., Glogauer, M., el-Hashemite, N., y Onda, H. (2002) Hum. Mol. Genet. 11, 525-534) se cultivaron en un medio DMEM alto en glucosa complementado con suero bovino fetal (FBS) al 10 por ciento (Invitrogen), Glutamina 2 mM, y Penicilina/Estreptomicina al 1 por ciento (peso/volumen) a 37°C, con C02 al 5 por ciento.

El kit SureFire para la determinación de la fosforilación de P70S6cinasa se adquirió en Perkin Elmer (p70S6K p-T389, #TGR70S50K), y el ensayo se llevó a cabo de acuerdo con las instrucciones del proveedor y de acuerdo con el método genérico para los ensayos SureFire. Poco después, se transfirieron 5 microlitros del lisado celular por pozo a las placas Proxi-plates blancas de 384 pozos (para la lectura luminiscente), y se mezclaron con 7 microlitros de A y 5 microlitros de B (volumen final: 12 microlitros). Después de 3 horas de incubación en la oscuridad a temperatura ambiente, se leyó la luminiscencia con el Lector Envision (Perkin Elmer). Las células no tratadas se utilizaron como control (control alto), y las células tratadas con BEZ235 3 µ? se utilizaron como el control bajo. La ventana de ensayo entre las señales obtenidas para los controles alto y bajo, se definió como el 100 por ciento, y los efectos del compuesto se expresaron como el porcentaje de inhibición. Los valores IC5o se calcularon a partir de las curvas de respuesta a la dosis mediante una extrapolación gráfica.

Los resultados obtenidos utilizando los ensayos anterio rmente descritos se proporcionan en las siguientes tablas , en do nde SE M es el error estándar del promedio, y n es el número de mediciones de los datos.

Bioquímica PI3Kalfa una medición separada diferente dio un valor de <0.003 µ? Bioquímica PI3Kbeta Bioquímica PI3Kdelta Bioquímica PI3Kgamma * 2 de los 3 valores > 9.1. No hubo cálculo de SEM posible. ** Ambos valores > 9.1. No hubo cálculo de SEM posible.

Ensayo celular PI3Kalfa Ensayo celular PI3Kbeta * Cuarta medición 3.9 µ?, ausente.

** El segundo valor fue > 10. Por consiguiente, no fue posible el cálculo de SEM.

Ensayo celular PI3Kdelta * El segundo valor fue > 10. Por consiguiente no fue posible el cálculo de SEM.

Ensayo celular mTOR * El segu ndo valor fue > 2.27. Por consiguiente, no fue posible e cálculo de SEM . ** 3 de los 4 valores fueron > 2.27. Por consiguiente, no fue posible el cálculo de SEM . *** 3 de los 5 valores fueron > 2.27. Por consiguiente, no fue posible el cálculo de SEM .

**** Todos los valores fueron > 2.27. Por consiguiente, no fue posible el cálculo de SEM .

El efecto fuera del objetivo (evidencia de enlace de tubulina) se midió como sigue.

Descripción del ensayo Cvtospin : Ensayo Cytospin de paro de G2/M del ciclo celular para detectar las actividades de enlace (fuera del objetivo) del enlace de tubulina de los derivados de MAPP : 5 x 1 05 células A2058 se emplacaron en un grupo de 6 pozos, con 2 mililitros de D EM (alto en glucosa conteniendo piruvato de sodio al 1 por ciento, glutamina al 1 por ciento, y suero fetal de becerro (FCS) al 1 0 por ciento). 1 8 horas más tarde, se agregaron los artículos de prueba en una concentración de 5 µ ? (salpicando 1 microlitro de u na solución 10 mM del artículo de prueba). 24 horas más tarde, las células se tripsinizaron y se transfirieron a un tubo cónico de 1 5 mililitros. Las células entonces se aglomeraron mediante centrifugación , y se volvieron a suspender con suero regu lado con fosfato (PBS)/0 (que contenía suero fetal de becerro (FCS) al 1 0 por ciento). Las células se contaron con un contador CASY, y cada una de las muestras se equilibró a 1 x 1 06 células / mililitro. Entonces se transfirieron 200 microlitros (2 x 1 05 células) a tubos Cytospin de 1 .5 mililitros (Heraeus Sepatec, Ref 1 1 52), y se centrifugaron du rante 5 minutos a 50 x g a 4°C , con un sistema Cytospin, que conten ía un sistema Sepatech (Heraeus, Ref # 3425) , ajustado encima de un portaobjetos de u n microscopio (Thermo-Scientific, Ref: # PH040820). Las células se fijaron entonces durante 1 5 min utos a temperatura ambiente, y se tiñeron con el ensayo Diff Quick® (Medion Diagnostics, Ref: #1 30832) , siguiendo las recomendaciones del fabricante. El ADN condensado que refleja el paro de G2/M se reveló mediante teñido punteado en las células, cuando se examinaron los portaobjetos bajo el microscopio. El teñido se evaluó visualmente para determinar la presencia del ADN condensado, y se le d io una calificación , en donde 0 = ADN no condensado observado (que indica que no hay actividad fuera del objetivo), 1 = (que indica una actividad fuera del objetivo débil), 2 = (que indica una actividad fuera del objetivo media), 3 = cantidad grande de ADN condensado observada (que indica una actividad fuera del objetivo fuerte).

Los datos obtenidos empleando este método se muestran en la siguiente tabla: n.d. = no se hizo.

Claims (16)

1. REIVINDICACIONES Un compuesto de la fórmula (I): en donde D = deuterio; R2 = H, y R3 = H; R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH; o R4 = -CH2OH, y R5 = H; o R2 = _CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC (O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 0 -CH2 C(OH)(CH3)2y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3, -CH2OH, -CH2CH(OH)CH3 o -CH2C (OH)(CH3)2, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 se unen y forman -(CH2)4-; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH; o R2 = H, y R4 = H; y R3 y R5 se unen y forman el grupo: o el grupo: R3 = H, y R5 = H; y R2 y R4 se unen y forman el grupo: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde: R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC (O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R3 = H, y R4 = H; R2 y R5 = -(CH2)4-; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o con la reivindicación 2, en donde: R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC (O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3; o R4 = H, y R5 = H; y R2 = -CH2OH, y R3 = -CH3; o R2 = H o -CH3, y R3 = -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 4. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde: R2 = -CH3, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH o -CH2OC (O)H; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 5. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, de la fórmula (??'): (??'), en donde R1a = H o -CH3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, fórmula (IA): H o -CH2OC (O)H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 6, en donde: R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = -CH3 o -CH2OH, o R4 = H o -CH3 y R5 = H o -CH3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, en donde: R2 = -CH3 o -CH2OH; R3 = H; R4 = -CH3, -CH2OH o -CH2CH2OH, y R5 = H, o R4 = H, y R5 = CH3 o -CH2OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 9. Un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1, el cual se selecciona a partir de: (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipir¡midinil-6-¡l)-4-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']- bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona, 3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-4,5'-bipirimidin-6-il)-4-(hidroxi-metil)-4-metil-oxazoMdin-2-ona racé mica, (S)-3-(2'-amino-2-morfolino-4,-(trifluoro-metil)-4,5'-bipirimidin-6-il)-4-(hidroxi-metil)-4-rnetil-oxazolidin-2-ona (estereoquímica absoluta no determinada), (R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4,-(trifluoro-metil)-4,5'-bipirimidin-6-¡l)-4-(hidroxi-metil)-4-metil-oxazolidin-2-ona (estereoquímica absoluta no determinada), (3aS,7aS)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirim¡dinil-6-il)-hexahidro-benzo-oxazol-2-ona, (S)-3-(2'-amino-2-morfol¡n-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-metoxi-met¡l-oxazolidin-2-ona, (4S,5S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-¡l-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-(D8-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-h¡droxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2,-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-(2-hidroxi-etil)-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-[2,-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il]-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']- bip¡r¡m¡dinil-6-¡l)-5-met¡l-2-oxo-oxazol¡d¡n-4-il-metil-éster de ácido fórmico, (S)-3-[2'-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il]-4-metil-oxazolidin-2-ona, (8)-3-(2'-3G????-2-?t??G????-4-??-4'-?G?????G?-G??6???-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-4-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2,-am¡no-2-morfol¡n-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-5-metil-oxazolidin-2-ona, (S)-3-(2'-amino-2-D8-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-4-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5,]-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5S)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-met¡l-4-metil-oxazolidin-2-ona, (R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4,-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-5-hidroxi-metil-oxazolidin-2-ona, (3aR,6aR)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-tetrahidro-furo-[3,4-d]-oxazol-2(3H)-ona, (3aR*,6R*,6aR*)-3-(2,-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-met¡l)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-6- idroxi-hexahidro-2H-ciclopenta-[d]-oxazol-2-ona racémica, (3aR,6R,6aR). (2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-6-hidroxi-hexahidro-2H-ciclopenta-[d]- oxazol-2-ona, (3aS,6S,6aS)(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidiri]-6-il)-6-hidroxi-hexahiclro-2H-ciclopenta-[cl]-oxazol-2-ona, y (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bip¡r¡m¡din]-6-¡l)-5-(2-h¡droxi-et¡l)-4-met¡l-oxazol¡din-2-ona. 10. Un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado a partir de: (4S,5R)-3-[2'-amino-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il]-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolin-4-il-4'-trifluoro-metil-[4,5']-bipirimidinil-6-il)-4-hidroxi-metil-5-metil-oxazolidin-2-ona, o (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluoro-metil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-5-(2-hidroxi-etil)-4-metil-oxazolidin-2-ona. 11. Una composición farmacéutica, la cual comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. 12. Una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más agentes terapéuticamente activos adicionales. 13. Un método para el tratamiento de cáncer, el cual comprende administrar a un sujeto, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10. 14. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para utilizarse como un medicamento. 15. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para utilizarse en el tratamiento de cáncer. 16. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer.