MX2014012671A - Mejoramiento del crecimiento de infantes. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones y métodos para mejorar el crecimiento de infantes. Particularmente, la presente invención describe el uso de insulina para promover el crecimiento de infantes de bajo peso al nacimiento, que incluyen infantes prematuros y pequeños para infantes de edad gestacional (SGA) sobre el índice esperado.

Description

MEJORAMIENTO DEL CRECIMIENTO DE INFANTES CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones y métodos para mejorar el crecimiento de infantes, particularmente a suplemento de insulina y fórmulas que comprenden el mismo para infantes prematuros y pequeños para infantes de edad gestacional (SGA), las cuales son efectivas para promover el crecimiento del recién nacido.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La lactancia materna es conocida como la forma natural y aconsejable para soportar el crecimiento sano y desarrollo de infantes debido a sus ventajas nutricionales e inmunológicas (ESPGHAN Committee on Nutrition: Agostoni C. et al. Breast-feeding: A commentary by the ESPGHAN Committee on Nutrition. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2009.49: 112-25). La leche materna proporciona la dieta más adecuada para los requerimientos nutricionales del infante. También proporciona el infante con protección inmune contra un amplio rango de enfermedades relacionadas con la infección (Shulman R. J. Pediatr Res 1990. 28: 171-5), y se encuentra también por proporcionar beneficios a largo plazo en el área de ciertos desarrollo cognitivos. También se sabe que la composición de la leche humana cambia durante las primeras pocas semanas después del parto de un bebé. La leche humana es referida como calostro durante los primeros 5 dias después del nacimiento, la leche es de transición durante los 6-14 dias después del nacimiento, y posteriormente la leche madura. Durante cada etapa de la lactancia, la composición de la leche humana correspondiente difiere considerablemente. El calostro y la leche de transición, por ejemplo, tiene menos densidades calóricas que la leche madura, asi como también concentraciones superiores de proteínas e inferiores de carbohidratos. Las vitaminas y minerales así como también las concentraciones hormonales también varían en los tres grupos de leche humana definidos. Sin embargo, la lactancia materna no siempre es posible, particularmente cuando los bebés son de nacimiento prematuro o con un peso bajo al nacer.

Existen muchas diferentes fórmulas nutricionales infantiles que son comercialmente disponibles o conocidas de otro modo en la téenica de fórmulas infantiles. Estas fórmulas infantiles comprenden un intervalo de nutrientes para cubrir las necesidades nutricionales del infante en crecimiento, y típicamente incluyen lípidos, carbohidratos, proteínas, vitaminas, minerales, y otros nutrientes útiles para el crecimiento y desarrollo óptimo del infante. Mientras que se hacen esfuerzos para elaborar las fórmulas infantiles comerciales en composición a la leche humana madura, no son idénticas, típicamente debido a las condiciones de procesamiento de la fórmula. Uno de estos componentes perdido de las fórmulas infantiles comerciales es la insulina, conocida por estar presente en su forma activa en la leche materna.

Las observaciones en madres lactantes y ratas lactantes han mostrado que la insulina de la leche de mamífero es biológicamente activa, y que los enterocitos inmaduros tienen una sensibilidad incrementada a la insulina (Buts J. P. et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr 1997. 25:230-2). La insulina estimula la proliferación de células epiteliales intestinales, y la actividad de la lactasa ileal se incrementa cuando la insulina porcina se agrega a piensos administrados a cerdos recién nacidos (Shehadeh N. et al, Pediatr Diabetes 2001. 2: 175-177; Corps A. N. and Brown K. D. J Endocrinol 1987. 113:285-90). Además, la insulina de portada por la leche afecta la maduración del páncreas e induce el desarrollo de amilasa pancreática en ratas (Kinouchi T. et al., JPGN 2000.30:515-521). Se ha mostrado previamente que la concentración de insulina en leche humana es significantemente superior (60.23±41.05pU/ml) comparado con la leche de vaca (16.32±5.98pU/ml) y que la insulina es difícilmente detectada en fórmulas infantiles. El intervalo de valores de insulina en la leche materna humana toma de 3 a 30 días después que el suministro fue entre 6.45 a 305.65pU/ml. En el estudio adicional, se ha evaluado además si la concentración de la insulina humana en la leche materna es afectada por la edad gestacional o edad postnatal. La leche materna se analizó para determinar los niveles de insulina al día 3 y 10 post-parto. La concentración de la insulina en la leche humana (HMI), en ya sea el día 3 o día 10 post-parto, no fue influenciada por la edad gestacional al suministro asi como también la edad materna, origen étnico, modo de suministro, ganancia de peso en el embarazo o indice de masa corporal materna (BMI). La concentración de HMI disminuyó post-parto entre el dia 3 y 10, sin embargo esta disminución fue solamente significante para madres gue se alivian en término (grupo de edad gestacional 31-41). De este modo, los infantes prematuros están expuestos a una concentración similar de insulina a la que los infantes de término están (Shahadeh N et al., 2003. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed 88:F214-F216). El calostro humano contiene concentraciones de insulina superiores, hasta aproximadamente 600pU/ml (Read L C. et al, 1984. Pediatr Res 18(2): 133-139).

La administración de la insulina entérica puede ser de beneficio en reducir la intolerancia a la alimentación en infantes prematuros (Shulman R J. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 2002. 86:F131-F133), y puede suprimir el desarrollo de diabetes autoinmune en ratones (Schatz D. A. et al., Cleve Clin J Med 1996.63:270-4). La insulina oralmente administrada usualmente no es absorbida en el intestino (LarkEin M. Lancet 1997.349: 1676), y los efectos observados pueden ser locales y limitados al periodo de amamantamiento (Shehadeh N. et al, 2001, ibid). Todavía, la suplementación de la insulina oral en ratones no amamantados incrementa los niveles en suero de la insulina y tiene un efecto favorable en los niveles del lípido en suero, sugiriendo un efecto sistémico para la insulina tomada oralmente en esta población. Esto está de acuerdo con observaciones en ratas adultas, de un transporte intestinal transcelular (pero no paracelular) de insulina.

Mientras no se hicieron observaciones con respecto a efectos negativos a largo plazo de insulina oral, la administración de insulina oral a infantes prematuros de 4 a 28 días de edad a una concentración tan alta como 4 U/kg/día, la actividad de lactasa incrementada puede ser de beneficio para reducir la intolerancia a la alimentación sin inducir la hipoglicemia u otros efectos adversos (Shulman 2002, ibid). Analizando el efecto de la insulina administrada en los parámetros de la masa mucosa y en la expresión de las hidrolasas de la membrana del borde en cepillo (BMM) en un modelo de rata de amamantamiento del intestino maduro también demostró la seguridad de la insulina oral dada en el intervalo farmacológico de ~10 veces superior que la absorción diaria estimada de insulina transmitida por la leche demostrando la seguridad de la suplementación de la insulina oral (Buts J P et al., 1997. J Pediatr Gastroenterol Nutr 25:230-2). Además, este estudio demostró que la insulina es capaz de mejorar las enzimas BBM intestinales prematuramente especialmente cuando se da en su vehículo apropiado (leche de rata).

Las Patentes Estadounidenses Nos. 6,365,177 y 6,399,090 por un inventor de la presente invención describen una fórmula infantil en un polvo o forma de solución que comprende componentes nutricionales y un suplemento de insulina. La concentración de insulina está en el intervalo de 10 hasta 1000 mq/ml de solución (particularmente 30-100 m?/ml de solución) o 83-7,500 m?/gramos de polvo (particularmente 250-750 mIG/gramos de polvo), y cuando se alimenta a un infante la oportunidad de que el infante desarrolle diabetes se reduce.

Las Publicaciones de Solicitudes Estadounidenses Nos. 20070248652 y 20060147494 describen métodos para la encapsulación de ingredientes activos, que incluyen insulina, y formulaciones que comprenden las mismas usadas para mejorar el estado de salud y desempeño de crecimiento de organismos humanos y no humanos.

La Patente Estadounidense No.8,026,211 describe un método para incrementar la función intestinal, particularmente en un sujeto que sufre de malíuncionamiento intestinal o desnutrición, administrando oralmente y/o entéricamente una cantidad terapéuticamente efectiva de insulina .

Los bebés recién nacidos que pesan menos de 2,500 g son considerados de bajo peso al nacer (LBW), y están en riesgo incrementado de problemas serios de salud como los neonatos, incapacidades permanentes y aún la muerte. Ciertos bebés de LBW pueden además ser clasificados en bebés de Muy Bajo Peso al Nacer (VLBW), nacen de al menos 1,500 g, y bebés de Peso Extremadamente Muy Bajo al Nacer (ELBW), nacen de menos de 1000 g. El índice de neonatos de LBW muestra diferencias alrededor del mundo. Por ejemplo, la Organización Mundial de la Salud (WHO) estimó que 16.5% de los nacimientos en regiones menos desarrolladas en el año 2000 fueron de LBW. Por el contrario, alrededor de 1 de cada 12 (8.3%) bebés que nacieron en 2005 en los Estados Unidos fue nacido con LBW. El índice de bebés con LBW se incrementó, particularmente en regiones más desarrolladas tales como los Estados Unidos, que se cree resulta predominantemente de un incremento en el parto prematuro de embarazos múltiples artificialmente concebidos.

Distinto del antecedente genético de padres pequeños, las principales razones para el bajo peso al nacer son nacimiento prematuro, es decir, un bebé nace antes de 34 semanas completas del primer día del último periodo menstrual, y la restricción del crecimiento fetal es decir, bebés que pueden ser de término completo pero son de bajo peso, también conocido bebés pequeños por edad gestacional (SGA) o bebés pequeños por fecha. Pequeños por edad gestacional (SGA) es definido como un peso al nacer y/o longitud de 2 desviaciones estándares (SDs) por debajo de la media de referencia de la población especifica del género por edad gestacional. La SGA puede ser el resultado del retardo del crecimiento intrauterino (IUGR), nacimiento prematuro o ambos.

Las últimas semanas de la gestación normal son caracterizadas por un rápido crecimiento del embrión. De este modo, los infantes prematuros están expuestos a la vida extra-uterina durante un periodo que normalmente está caracterizado por el rápido crecimiento intra-uterino. Para sobrevivir, el gasto de energía del infante cambia desde el crecimiento que promueven las acciones a estrategias de supervivencia, y esta tasa de bajo crecimiento resulta en ensamble persistente de escuealae en la característica que incluye composición corporal, sensibilidad a la insulina, presión sanguínea, etc.

La Publicación de la Solicitud Internacional (PCT) No. WO 1998/044917 describe un método para mejorar el crecimiento de infantes prematuros que involucra la administración de ciertos ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga. Se prefiere que los infantes sean administrados con una fórmula infantil que contiene una combinación de ácido docohexaenoico y ácido araquidónico.

La Publicación de Solicitud Internacional (PCT) No. WO 2012/052060 describe un método para incrementar el indice de crecimiento de un infante humano, particularmente infantes humanos prematuros o de bajo peso, por la administración entérica de la lipasa estimulada por la sal biliar humana recombinante (rhBSSL).

La Publicación de Solicitud Internacional (PCT) No. WO 2012/150245 describe composiciones farmacéuticas que comprenden un antagonista del canal de potasio sensible a DTR (K-ATP) y métodos para tratar hiperglicemia y/o promover el crecimiento de un prematuro y/o pequeño para infante de edad gestacional.

Existe una necesidad no cubierta para fórmulas alimenticias capaces de asistir al infante prematuro para superar el retardo del crecimiento durante los primeros meses post-natales y reducir la extensión de o incidencia de efectos de salud adversos a largo plazo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención relates al uso de insulina para promover el crecimiento y maduración de infantes de bajo peso al nacer, que incluyen prematuro y pequeño para infantes de edad gestacional (SGA).

La presente invención se basa en parte en el descubrimiento inesperado de que infantes prematuros y/o SGA alimentados con la fórmula enriquecida con insulina durante los primeros 1-4 meses desde el nacimiento resultan en incremento en peso, longitud y circunferencia de la cabeza sobre el indice de crecimiento. Además, la presente invención describe ahora que la insulina a un intervalo de concentración se asemeja a aquella de los calostros de mama humanos o leche de maduración significantemente mejorada del tracto gastrointestinal, resultando en una disminución en el tiempo requerido para transformar el infante a alimentación completa entérica, libre parenteral y permitir la liberación más fácil del infante que porta bajo peso al nacer desde el hospital. La presente invención muestra por primera vez que la insulina administrada oralmente a infantes prematuros o de otro modo infantes que tienen bajo peso promueve el crecimiento del infante en un primero periodo de crecimiento crucial de uno a seis meses.

De este modo, de conformidad con un aspecto, la presente invención proporciona un método para mejorar el indice de crecimiento de un infante humano de bajo peso al nacer, que comprende administrar insulina oralmente al infante cuando es recién nacido, de este modo mejorando el indice de crecimiento del infante sobre el indice esperado.

De conformidad con ciertas modalidades, el infante de bajo peso al nacer se selecciona a partir del grupo que consiste de un infante humano prematuro y pequeño para un infante humano de edad gestacional (SGA).

De conformidad con modalidades típicas, mejorar el índice de crecimiento comprende una medida arriba del esperado para el infante prematuro o SGA de al menos uno del peso del infante, altura y circunferencia de la cabeza.

De conformidad con otras modalidades, la medida de al menos una de crecimiento, altura y circunferencia de la cabeza, se toma en la edad del infante de al menos uno mes, dos meses, tres meses o cuatro meses. De conformidad con otras modalidades, la medida se toma en la edad de al menos tres meses. De conformidad con ciertas modalidades típicas la medida se toma en la edad de seis meses. De conformidad con algunas modalidades, se logra una pluralidad de estas medidas arriba de lo esperado.

De conformidad con modalidades adicionales, mejorar el índice de crecimiento comprende una medida arriba de la esperada para el infante prematuro o SGA para maduración gastrointestinal. De conformidad con ciertas modalidades, la medida de la maduración gastrointestinal del infante se establece por el número de días requeridos para lograr la alimentación entérica completa. De conformidad con estas modalidades, administrar insulina a un infante de bajo peso de conformidad con las enseñanzas de la presente invención reduce el número de dias requerido para lograr la alimentación entérica completa comparada con el número esperado de dias.

De conformidad con modalidades adicionales, administrar insulina a un infante de bajo peso de conformidad con las enseñanzas de la presente invención reduce el periodo de hospitalización del infante comparado con el periodo de hospitalización esperando.

De conformidad con las enseñanzas de la presente invención, la insulina puede ser administrada directamente, dentro de una composición y/o dentro de una fórmula infantil. Cualquier método para administración entérica conocido en la téenica puede ser usado de conformidad con las enseñanzas de la presente invención. De conformidad con ciertas modalidades típicas, la insulina o una composición que comprende insulina es mezclada con una fórmula infantil para formar una fórmula enriquecida con insulina. De conformidad con ciertas modalidades especificas, la insulina es encapsulada en un material encapsulante. Los materiales encapsulantes son típicamente seleccionados a partir del grupo que consiste de polisacáridos, leche en polvo, proteínas del suero, lípidos, goma Arábiga y celulosa microcristalina. Otros materiales de encapsulación son bien conocidos en la técnica también están abarcados dentro del alcance de la presente invención.

De conformidad con una modalidad, la insulina es microencapsulada dentro de una matriz de maltodrextrina (MD) para formar un suplemento de la insulina. De conformidad con otra modalidad, la matriz además comprende anti-oxidante, típicamente vitamina C. Esta matriz proporciona la insulina encapsulada con una estabilidad a largo plazo y resistencia a la exposición a altas temperaturas (arriba de 42°C) en términos de actividad preservada.

Cualquier fórmula infantil como se conoce en la téenica puede ser usada como una fórmula basal para producir la fórmula enriquecida con insulina. Típicamente, la fórmula infantil está en una forma de polvo seco reintegrado en el agua para formar una fórmula líquida previa previo al uso.

De conformidad con ciertas modalidades, la insulina se administra como una fórmula enriquecida con insulina líquida a un intervalo de concentración desde 50microIU/ml (mlu/ml) hasta 600microIU/ml (ml?/ml). De conformidad con algunas modalidades, la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 50pIU/ml hasta 400pIU/ml. De conformidad con otras modalidades, la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 75pIU/ml hasta 126pIU/ml. De conformidad con ciertas modalidades típicas, la fórmula enriquecida con insulina comprende IOOmI?/ml de insulina. De conformidad con otras modalidades típicas, la fórmula enriquecida con insulina comprende 400pIU/ml de insulina. De conformidad con ciertas modalidades típicas, la insulina es biológicamente activa.

El intervalo de concentración de insulina descrito en la presente está la concentración de insulina significantemente inferior (hasta 4 órdenes de magnitud) comparada hasta entonces con la de insulina conocida por mejorar la maduración gastrointestinal prematura.

De este modo, de conformidad con ciertas modalidades, la presente invención proporciona un método para mejorar el índice de maduración gastrointestinal de un infante de bajo peso al nacer que comprende administrar oralmente al infante cuando es recién nacido una composición líquida que comprende insulina a una concentración desde 50pIU/ml hasta 600pIU/ml.

De conformidad con ciertas modalidades típicas, la maduración mejorada de la maduración gastrointestinal resulta en la reducción del número de días requerido para lograr la alimentación entérica completa del infante. De conformidad con modalidades adicionales, la maduración mejorada de la maduración gastrointestinal resulta en reducir el número de la hospitalización del sujeto.

De conformidad con ciertas modalidades, la insulina es insulina de mamífero seleccionada a partir del grupo que consiste de insulina humana e insulina bovina. De conformidad con ciertas modalidades típicas, la insulina es insulina humana. De conformidad con estas modalidades, la insulina es insulina humana recombinante o semi-sintética.

La insulina o fórmula enriquecida con insulina de la presente invención puede ser administrada por alimentación normal, o, cuanto esto no es posible, mediante un tubo nasogástrico.

Los métodos de la presente invención están dirigidos a infantes recién nacidos durante las semanas de inicio o meses de vida, típicamente durante al menos el primer mes de vida, o durante al menos los primeros dos meses de vida, y que incluye hasta aproximadamente 3 meses, hasta 4 meses, hasta 5 meses y hasta 6 meses de vida o más. Se entenderá explícitamente que la duración de administración de insulina o fórmula enriquecida de insulina de conformidad con las enseñanzas de la presente invención puede imitar la duración de amamantamiento, es decir, en la medida que la alimentación por botella sea mutuamente deseada por la madre y el niño.

De conformidad con ciertas modalidades, la insulina es administrada como una fórmula líquida enriquecida en insulina a un volumen de alimentación diario promedio similar a aquel de los infantes amamantados durante las semanas o meses iniciales de vida. De conformidad con ciertas modalidades, la fórmula enriquecida con insulina es administrada junto con amamantamiento. De conformidad con otras modalidades, la fórmula enriquecida con insulina es administrada como la única nutricional. De conformidad con modalidades aún adicionales, la fórmula enriquecida con insulina es administrada junto con la alimentación parenteral. De conformidad con modalidades aún adicionales, la fórmula enriquecida con insulina es administrada en combinación con alimento adicional.

Otros objetos, características y ventajas de la presente invención llegarán a ser claros a partir de la siguiente descripción y dibujos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las Figura 1 muestra la media del peso observado comparado con la media del peso esperado al nacimiento.

(*) - La diferencia entre los valores medios observados y esperados. El efecto no es significante.

(**) - La diferencia entre los valores medios observados y esperados es significante a P < 0.001.

La Figura 2 muestra la media de la longitud observada comparada con la media de la longitud esperada al nacimiento.

(*) - La diferencia entre los valores medios observados y esperados. El efecto no es significante. (**) -La diferencia entre los valores medios observados y esperados es significante a P < 0.025.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Antes de explicar al menos una modalidad de la invención en detalle, se entiende que la invención no está la invención no está limitada en su aplicación a los detalles expuestos en la siguiente descripción o ejemplificados por los Ejemplos. La invención es capaz de otras modalidades o de ser practicada o llevada a cabo en varias formas. También, se entiende que la freaseologia y terminología empleada en la presente es para el propósito de la descripción y no debe ser considerada como limitante.

La presente invención describe por primera vez que la insulina, a un intervalo de concentración de 50-600pIU por mi de una fórmula infantil, mejora el crecimiento de infantes de bajo peso al nacer, que incluye pequeños por edad gestacional (SGA) e infantes prematuros cuando la fórmula enriquecida con insulina es administrada durante las primeras semanas o meses del infante.

Hasta ahora los efectos de la administración oral de insulina a infantes y/o infantes prematuros incluyen un incremento de función intestinal en infantes sanos y no sanos, una reducción de intolerancia de alimentación en infantes prematuros y una reducción en el riesgo de desarrollar diabetes en una etapa posterior de vida. La presente invención describe un resultado adicional e inesperado de la administración de la insulina a infantes de bajo peso al nacer. Uno de los obstáculos principales para el crecimiento normal de infantes de bajo peso al nacer reside en su lento desarrollo durante las primeras semanas y meses de vida, el cual tiene un efecto a largo plazo en una variedad de parámetros de crecimiento. Se muestra ahora que dando al infante de bajo peso al nacer una fórmula que imita el calostro y/o leche de la mama en términos de la concentración de insulina significantemente mejora su crecimiento en esta etapa critica, y de este modo puede prevenir el efecto deletéreo a largo plazo del bajo peso al nacer. La presente invención además muestra que estas concentraciones de insulina son altamente efectivas en el mejoramiento de la maduración del tracto gastrointestinal de infantes de bajo peso al nacer, un fenómeno hasta ahora mostrado solamente con concentraciones de insulina significantemente superior.

Definiciones Como se usa en la presente, el término "bajo peso al nacer" con respecto a infantes se refiere a bebés que nacen pesando menos de 2,500 g, e incluye bebés que nacen con muy bajo peso al nacer de menos de 1,500 g, y de bebés que nacen con peso extremadamente bajo al nacer de menos de 1000 g. El término además incluye infantes y pequeños prematuros para infantes de edad gestacional (SGA).

Como se usa en la presente, el término "infante prematuro" se refiere a un infante que nace a 34 semanas de gestación o menos. Como se usa en la presente, el término incluye infantes prematuros que nacen pequeños para edad gestacional (SGA) e infantes prematuros que nance apropiados para edad gestacional (AGA).

El término "pequeño para edad gestacional (SGA)" se refiere a bebés que tienen un peso y/o longitud al nacer al menos 2 desviaciones estándares por debajo de la media para la edad gestacional.

Como se usa en la presente, el término "insulina" se refiere a una hormona de polipéptido, la cual es naturalmente secretada por las isletas de Langerhans y funciones en la regulación del metabolismo de carbohidratos y grasas, particularmente la conversión de glucosa a glicógeno. La insulina puede ser insulina nativa (purificada o sintética o recombinante) o análogos de la misma. De conformidad con ciertas modalidades, el término insulina se refiere a insulina de mamífero. De conformidad con ciertas modalidades típicas, el término insulina se refiere a insulina humana recombinante y a análogos de la misma, la cual es biológicamente activa.

Como se usa en la presente, el término "IU" (Unidad Internacional) se refiere al equivalente biológico de aproximadamente 45.5 mg de insulina cristalina pura (exactamente l/22mg).

El término "incrementa" o "mejora" (por ejemplo, peso corporal) se refiere al menos 0.05%, 0.1%, 0.5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20% incrementa en una medida examinada de la presente invención que incluye peso corporal, altura, circunferencia de la cabeza y maduración gastrointestinal de gastrointestinal de un infante comparado a su valor esperado. Se entiende explícitamente que de conformidad con ciertas modalidades, el mejoramiento de la maduración gastrointestinal se mide por una reducción en el número de días requerido para transformar el infante de bajo peso al nacer en un alimento entérico completo. Como se usa en la presente, el término "alimento entérico completo" se refiere al alimento entérico en una cantidad de aproximadamente 130-170, típicamente aproximadamente 140-160ml/Kg/día. De conformidad con otras ciertas modalidades, el mejoramiento de la maduración gastrointestinal se evalúa de conformidad con el volumen de residuos gástricos (residuos que se dejaron en el estómago del infante desde la comida previa). El volumen del residuo gástrico está inversamente correlacionado con la maduración gastrointestinal.

Como se usa en la presente el término "valor de medida esperada" con respecto al peso corporal, altura, y circunferencia de la cabeza, se refiere, de conformidad con ciertas modalidades, al valor esperado obtenido a partir de las tablas de referencia de crecimiento del Centro de Control y Prevención de Enfermedades (CDC) (http://www.cdc.gov/growthcharts) de conformidad con el género del infante, edad gestacional y percentil del peso al nacer (BW). De conformidad con otras modalidades, el término "valor medido esperado" con respecto al peso corporal, altura y circunferencia de la cabeza se refiere al valor esperado de conformidad con lo estándares de crecimiento de la Organización Mundial de la Salud (WHO) (WHO Multicentre Growth Reference Study Group; WHO Child Growth Standards: Methods and Development. Length/height-for-age, weight-for-age, weight-for-length, weight-for-height and body mass index-for-age: Methods and development. Geneva: World Health Organization, 2006. Available at: http://www.who.int/childgrowth/standards/technical_report/en/ index.html; de Onis M, Garza C, Onyango AW, et al, editors. WHO Child Growth Standards. Acta Paediatr Suppl 2006; 450: 1-101).

De conformidad con un aspecto, la presente invención proporciona un método para mejorar el indice de crecimiento de infantes humanos de bajo peso al nacer, que comprende administrar oralmente insulina al infante cuando está recién nacido de este modo mejorando el indice de crecimiento del infante sobre el intervalo esperado.

De conformidad con ciertas modalidades, la insulina es administrada dentro de una fórmula liquida formando una fórmula liquida enriquecida con insulina. De conformidad con algunas modalidades, la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 50qIU/ml a bqqml?/ml. De conformidad con algunas modalidades, la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 50 IU/ml a 500 IU/ml. De conformidad con modalidades adicionales, la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 50qIU/ml a 400qIU/ml. De conformidad con otras modalidades, la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 75qIU/ml a 125gIU/ml. De conformidad con ciertas modalidades típicas, la fórmula enriquecida con insulina comprende IOOmI?/ml de insulina. De conformidad con otras modalidades típicas, la fórmula enriquecida con insulina comprende 400pIU/ml de insulina. De conformidad con ciertas modalidades típicas, la insulina es biológicamente activa.

De conformidad con ciertas modalidades, la insulina es insulina de mamífero seleccionada a partir del grupo que consiste de insulina humana and insulina bovina. De conformidad con ciertas modalidades típicas, la insulina es insulina humana. De conformidad con estas modalidades, la insulina es insulina humana recombinante o semi-sintética.

La concentración de insulina en calostros humanos después del parto de término completo se encontró por estar en el intervalo desde aproximadamente 400yU/ml hasta 600pUI/ML (Ontsouka C E et al., 2004. Somestic. Animal Endocrinol 16: 155-175; Read 1984, ibid). La concentración de insulina en la leche después del parto de término completo se encontró por ser inferior, a un promedio de aproximadamente 60 mlu/ml. Los valores similares se midieron en leche de mama de madres de infante prematuro, con respecto de la edad gestacional (Shehadeh N. et al. 2003. ibid; Shehadeh N. et al. 2006 J Pediatr Gastroenterol Nutr 43:276-281).

La insulina se ha sugerido como uno de los factores tróficos presentes en el calostro de varias especies de mamífero, que incluyen humanos y cerdos. Su concentración en el calostro humano y en cerdos es 3-30 veces mayor que en suero (la concentración en suero humano está en el intervalo de 7-24 mlu/ml) y disminuye en paralelo para disminuir en la actividad trófica del calostro. Shulman (1990, ibid) demostró que la masa ileal intestinal y actividad de lactasa incrementan en cerdos miniatura recién nacidos en respuesta a la administración oral de 85mU/ml de insulina. El incremento en la masa ileal fue bastante significante para afectar la masa intestinal pequeña total, la cual se encontró por ser superior en grupos tratados con insulina comparado con grupos no tratados. En estos y otros estudios, se ha mostrado que la absorción oral de insulina en las concentraciones examinadas no afecta el azúcar en la sangre o nivel de insulina, indicando que la insulina no es absorbida sistemáticamente en cualquier grado significante. Shulman (2002, ibid) muestra que la administración entérica de insulina a una alta concentración de 4U/ml a infantes humanos prematuros mejora la función gastrointestinal, como se mide por la actividad de lactasa incrementada. Cualquier método como se conoce en la téenica para el suministro oral de un compuesto a un infante puede ser usado de conformidad con las enseñanzas de la presente invención. De conformidad con ciertas modalidades, la insulina es administrada dentro de una fórmula infantil enriquecida con insulina semisólida. De conformidad con otras modalidades, la insulina es administrada como fórmula infantil liquida enriquecida con insulina. De conformidad con algunas modalidades, la fórmula infantil es administrada a un volumen de alimentación diario promedio similar a aquel de los infantes amamantados durante las semanas iniciales o meses de vida.

Los cálculos de las cantidades de fórmula óptima para ser administradas a infantes recién nacidos hasta de 6 meses de edad se basan en el consumo de energía y proteína como se observó en infantes sanos que reciben leche materna como la única nutrición. Asumiendo el contenido de energía de la fórmula por ser 60-75 kcal/100 mi (de conformidad con el contenido mínimo de proteína permitido en los Estados Unidos) el consumo de fórmula recomendado es entre 115 hasta 215 ml/Kg/día (Report of the Scientific Committee on Food on the Revisión of Essential Requirements of Infant Formulae and Follow-on Formulae, May 2003).

Como se muestra en la sección de Ejemplos posteriormente, en conjunto con los resultados previos, no se observaron eventos adversos en todos los infantes quienes participaron en los estudios hasta 6 meses de seguimiento. La adición de insulina a la fórmula infantil no causa hipoglicemia, y no estimula la producción de los anticuerpos anti-insulina.

De conformidad con modalidades típicas, mejorar el índice de crecimiento comprende una medida arriba de la esperada para infantes prematuros y/o SAG de al menos uno del peso del infante, altura y circunferencia en la edad de seis meses. De conformidad con algunas modalidades, se logra una pluralidad de estas medidas arriba de lo esperado.

Con relación al crecimiento esperado de conformidad con las tablas de crecimiento CDC, los infantes alimentados con insulina mostraron crecimiento mejorado en el peso, longitud y circunferencia de la cabeza. Con relación al crecimiento esperado en los 6 meses, el efecto más fuerte fue en el peso (18.1%) seguido por la circunferencia de la cabeza (17.6%) y después por longitud (8.1%).

Los datos del estudio previo presentado posteriormente se compararon con los valores esperados tomados a partir de tablas publicadas. Los datos presentados en estas tablas pueden diferir de los indices de crecimiento medidos en el sitio, particularmente debido a las diferencias en las poblaciones (las tablas CDC se refieren a la Población Estadounidense mientras el estudio se realizó en Israel). Además, el crecimiento esperado tomado de las tablas publicadas CDC no en especifico con respecto a la gestación y pluralidad de nacimientos. Los datos obtenidos a partir de un estudio de control pueden de este modo proporcionar aún efecto más significante de administración de insulina de conformidad con las enseñanzas de la presente invención.

De manera inesperada, la presente invención además muestra que la baja concentración de insulina en el intervalo de hasta 400pU/ml, el cual se asemeja a la concentración de la insulina de calostros y leche de mama humana, es altamente efectiva en el mejoramiento de la maduración del tracto gastrointestinal de infantes prematuros y SGA, un fenómeno hasta ahora demostrado con concentraciones de insulina significantemente superiores (por ejemplo, Shulman 2002, ibid).

Como se presenta en la sección de Ejemplo posteriormente, la administración de la insulina a 400pU/ml resultó en la reducción de los dias requeridos para transformar el infante prematuro tratado con una alimentación entérica completa. Este resultado es de alta significancia ya que permite la dada de alta temprana del infante prematuro a partir de la unidad de cuidados intensivos y aún a partir del hospital al cuidado doméstico, y de este modo reduciendo el riesgo de contaminación. La dada de alta del infante temprana es también de forma significante en el punto de vista económico, reduciendo significantemente el costo involucrado en el prematuro o de otro modo bajo para la hospitalización del infante al nacimiento.

La insulina es apenas detectable en fórmulas infantiles actualmente disponibles (Shehadeh N. 2001. Acta Paediatr. 90:93-95). Las fórmulas infantiles son típicamente producidas a partir de leche bovina, en las cuales la concentración de insulina es baja (típicamente menos de un tercio) comparado con su concentración en leche humana. Además, las condiciones bruscas involucradas en la producción de las fórmulas resultan en la pérdida de la insulina, particularmente de insulina biológicamente activa.

De este modo, de conformidad con ciertas modalidades actualmente típicas, la insulina es encapsulada dentro del material encapsulante proporcionando estabilidad a la insulina. Como se usa en la presente, el término "estabilidad de la insulina" se refiere a mantener al menos 60%, 70%, 80%, 85%, 90% 95% o 100% de la actividad inicial de la insulina. Los métodos para encapsular insulina se conocen en la téenica. Ejemplos de tales métodos se proporcionan en las Publicaciones de Solicitudes de Patentes Internacionales Nos. WO 2004/112494 y WO 2005/115473, asignado al Solicitante de la presente invención.

En la industria alimenticia y farmacéutica, por ejemplo, microencapsulación se usa para estabilizar el material nuclear, para controlar la sincronización e indice de la liberación del material nuclear y para separar y prevenir la interacción química entre los componentes reactivos o incompatibles de una formulación de componentes múltiples. De este modo, la microencapsulación hace posible proteger los agentes bioactivos sensibles, para asegurar contra la pérdida de actividad y enmascarar o preservar los sabores y aromas. La encapsulación puede ser usada para preservar la actividad biológica del ingrediente activo, tal como agentes que promueven el crecimiento contra cualquiera de los siguientes o similares factores destructivos: temperatura adversa, presión, humedad, pH, concentración osmótica, concentración iónica, degradación química, presencia de metales, tensoactivos y queladores, radiación (que incluyen pero no se limitan a UV, IR, luz visible), degradación enzimática y microbiana y combinaciones de los mismos.

La liberación del ingrediente bioactivo encapsulado puede ocurrir espontáneamente en el tracto digestivo, o puede ser el resultado de eventos ambientales.

De conformidad con ciertas modalidades, una capa protectora que rodea o que incorpora la insulina es específicamente diseñada para degradar, o sufrir liberación controlada como una respuesta a la exposición al cambio en la condición ambiental. El cambio en la condición ambiental puede ser tiempo, temperatura, contenido de humedad, presión, o pH, intensidad iónica, actividad enzimática, o una combinación de los mismos. De conformidad con otras modalidades, la insulina es encapsulada en un material diseñado para protegerla de la digestión en el sistema digestivo del infante y para liberar la insulina solamente como una respuesta a un incremento en pH. La insulina puede ser además encapsulada con otro material encapsulante, diseñado para proteger el núcleo de la temperatura incrementada. La persona experta en la téenica, podría reconocer que el orden de los activadores ambientales que liberan el compuesto activo no es rígido y depende de las condiciones ambientales de manufacturación, condiciones ambientales de integración en productos alimenticios, condiciones ambientales de almacenamiento después de la integración en productos alimenticios, ubicación de suministro deseado dentro del sistema gastrointestinal, sincronización y actividad fisiológica deseada.

Cualguier factor que puede afectar el atrapamiento de la insulina en una matriz biodegradable y de este modo afecta su carga inicial, liberación subsecuente, o una combinación de los mismos, puede ser utilizado. Tales factores pueden comprender entre otros, la concentración de solvente inicial, su tamaño molecular y polaridad, la temperatura y presión bajo la cual el solvente es removido, número de peso molecular promedio (MWn) de la matriz biodegradable, y su indice de polidispersidad. Cuando la matriz biodegradable es un polímero, el tamaño y polaridad de la insulina, la relación de monómero y distribución a lo largo de la cadena del copolimero, o una combinación de los mismos, también puede ser considerada. Además, una relación D/L dentro de cada monómero de un polímero biodegradable afectará los índices de liberación. La relación de término D/L se refiere a la relación de moléculas monoméricas que afecta la dirección (D-derecha, L-izquierda) en la cual unos lentes polarizados cruzados serán rotados cuando se observa un monómero ópticamente activo único como ácido láctico. Puesto que la mayoría de los mamíferos tienen enzimas específicas D, tal relación afectará el índice de digestión del biopolímero biodegradable, afectando su peso molecular y consecuentemente su viscosidad, de este modo afectando el índice de liberación de la insulina atrapada.

Los varios materiales pueden ser usados como el material encapsulado como se describe, por ejemplo, en el documento WO 2004/112494 y WO 2005/115473 citados anteriormente. De conformidad con ciertas modalidades actualmente preferidas, la insulina es microencapsulada dentro de una matriz de maltodextrina (MD) y vitamina C como se describe en el documento WO 2005/115473.

La insulina encapsulada puede ser mezclada con cualquier fórmula infantil como se conoce en la téenica. La encapsulación puede también proteger la insulina en una manera que, cuando una fórmula liquida que contiene la insulina encapsulada es consumida por un infante SGA, la insulina es protegida, al menos parcialmente, durante su pasaje a través del tracto gastrointestinal o estómago del recién nacido de manera que suficiente cantidad de la insulina es todavía activa para ejercer su actividad que mejora el crecimiento como se describe en la presente.

Los siguientes ejemplos son presentados con el fin de ilustrar más completamente algunas modalidades de la invención. Deben, en ninguna forma ser construidos, sin embargo, como limitantes el alcance amplio de la invención. Un experto en la técnica puede fácilmente contemplar muchas variaciones y modificaciones de los principios descritos sin apartarse del alcance de la invención.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Estudio Clínico: efecto de la insulina en parámetro de crecimiento Población de estudio Se examinó efecto de la fórmula enriquecida con insulina en infante. El criterio de inclusión para participar en el estudio incluye: infantes sanos de 34-42 semanas de gestación ("infantes que nacen de término"); peso de nacimiento arriba de 1,650 g, típicamente entre 1750 gramos y 2500 gramos; ninguna malformación congénita principal o cualquier otro signo de enfermedad; edad cronológica sobre 240 horas; la madre no está dispuesta a amamantar al bebé durante el periodo de estudio y firmó un consentimiento informado. Infante con un índice de sospecha de infección antes del enrolamiento, diabetes maternal, y medicaciones dadas hasta el día 1 del estudio, fueron excluidos.

Resultados observados con respecto al peso, longitud, y circunferencia de la cabeza, se compararon con valores esperados los cuales se obtuvieron a partir de las tablas de referencia de crecimiento CDC (ibid) de conformidad con el género del infante, edad gestacional y percentil del peso al nacimiento (BW). Se usó interpolación o extrapolación para determinar el percentil y la ganancia esperada de cada infante. Los valores esperados son específicos al percentil medido al nacimiento. El percentil de cada BW se evaluó de conformidad con el género, edad gestacional y multiplicidad (individual o doble) usando tablas publicadas para Israel (Dolberg S. et al, IMAJ, 7, 2005, 311-314). Ninguno de tales datos estuvieron disponibles con respecto a los percentiles de longitud y circunferencia de cabeza. Por lo tanto se asume que el percentil en BW de cada infante es aplicable a cada una de las otras dos medidas de crecimiento.

El estudio se condujo de conformidad con los lineamientos de la Declaración de Helsinki en investigación Biomédica que involucra sujetos humanos (South Africa revisión 1996) y de conformidad con las directrices del GCP ICH.

Diseño de Estudio El estudio de grupo único, etiqueta abierta, no aleatorizado, de centro múltiple, fase I, para evaluar la seguridad de la fórmula enriquecida con insulina en infantes de bajo peso al nacimiento se condujo en Rabin Medical Center and Laniado Hospital, Israel. El efecto posible de la fórmula enriquecida con insulina en el crecimiento de infantes de bajo peso al nacer, nacido en término (al menos 34 semanas de gestación) también se examinó en este estudio. Los padres de infantes elegibles, quienes cubren el criterio de estudio, se invitaron a participar en el estudio después de firmar un Informe Consentido Informado (ICF). A partir del dia de estudio 1, los infantes recibieron la fórmula infantil enriquecida con insulina (Materna, Maabarot, Israel). Se alimentaron con la fórmula por los primeros 4 meses sin la adición del alimento complementario. El género del infante, origen de la familia, edad gestacional al nacimiento, medicaciones maternales, edad maternal, se registraron las enfermedades crónicas en la familia y la condición del infante después del enrolamiento.

El estándar de cuidado de los infantes en la guardería no cambió durante el periodo de observación. Al día del estudio 1 y 2, y a las 1, 4, 8, 12, 16 y 24 semanas, los padres del infante se les pidió llegar a la sala neonatal para examinaciones de seguimiento. Durante el estudio, se registraron el peso del infante, longitud, circunferencia de la cabeza, niveles de glucosa en sangre, conteo en sangre, grasa en sangre, química de sangre, aminoácidos en sangre, anticuerpos de insulina, y niveles en suero, así como también consumo de alimento, vómito, regurgitación y frecuencia de heces se midieron y evaluaron.

El efecto posible de la fórmula enriquecida con insulina en crecimiento se evaluó con respecto para ganancia en peso, longitud y circunferencia de la cabeza. Asumiendo que el efecto más grande debe ser notado a los 6 meses de edad (el último seguimiento), se aplicaron pruebas de significancia a la diferencia entre el crecimiento observado y esperado a los 6 meses. Además, con el fin de considerar diferencias en crecimiento durante el tratamiento (primeros 4 meses), y después del tratamiento (después de 2 meses), se aplicaron pruebas similares al crecimiento durante los primeros 4 meses.

Los infantes se retiraron del estudio si ha ocurrido algún evento adverso serio o cualquier deterioro en la condición clínica del infante. Ellos fueron seguidos en posibles efectos secundarios y medidas eficacias hasta 6 meses de dad. No se observaron eventos adversos serios. Un estudio aleatorizado, de doble ciego, de centro múltiple para estudiar el efecto de la fórmula infantil enriquecida con insulina en el crecimiento de infantes de bajo peso se planeó que tomara lugar en Israel en 2005 (encabezado por Prof Sirota, Schneider Hospital) . Debido al bajo índice de reclutamiento (solamente 8 infantes prematuros), el estudio se terminó. Sin embargo, no se registraron eventos adversos (que no incluyen hipoglicemia) durante el tiempo en que los infantes fueron alimentados con la fórmula enriquecida con insulina.

El producto del estudio InsuMeal es un polvo seco, compuesto de insulina (Actrapid® HM (ge), Insulina humana biosintética, Solución para Inyección. Concentración de 100lU/ml, manufacturada por Novo Nordisk), microencapsulada dentro de una matriz de Maltodextrina 18 (MD Pharmagrade, con polisacárido de almidón de maíz, manufacturado por Cargill Ltd.) y Vitamina C (grado Farmacéutico) que se mezcla con una fórmula para bebé - Pre ium 1, manufacturado por Materna Ltd. El proceso de microencapsulación permite la protección de bioactividad de la insulina hasta su inmersión y consumo dentro de la fórmula infantil. InsuMeal se agrega a 60 mi de agua tibia hervida, y después la fórmula tiene la concentración de 90pU de Insulina/ml de fórmula; imitando niveles de insulina fisiológica representativa en leche materna.

Datos Los datos presentados en las Tablas 1-4 posteriormente se obtuvieron a partir de 11 infantes de quienes solamente 10 cubren el criterio de inclusión. El peso al nacimiento de uno (no. 28) fue 1,550 gr., mientras el valor mínimo para inclusión se expuso a 1,750 gr. Tal infante se excluyó a partir de los análisis inferencial.

Además, otro infante (no.22) se excluyó a partir de los análisis inferenciales relacionados con la circunferencia de la cabeza. Tal exclusión como se explica abajo se basa en el hecho de que la circunferencia de la cabeza medida al nacimiento es más probablemente un valor atípico.

Las mediciones hechas en estos infantes son presentados en las tablas, pero excluidos de los análisis inferenciales relevantes (medias, intervalos de confianza y pruebas de significancia). La Tabla 1 presenta las medidas de crecimiento (peso, longitud y circunferencia de la cabeza) para todos los infantes reclutados en el estudio.

Tabla 1 - Medidas de crecimiento por edad Métodos de Análisis El punto final primario con respecto a la eficacia se estableció como crecimiento en término de registro Z (corregido para edad gestacional) durante los primeros 6 meses. Sin embargo, el efecto de tratamiento también se evaluó para cambio en registros Z durante los primeros 4 meses, y durante el periodo de 4 a 6 meses.

Bajo distribución normal el valor Z representa la distancia (de, por ejemplo, el peso, de la media) en unidades de desviación estándar (SD). Sin embargo, la distribución actual de pesos de infantes tiene un extremo izquierdo más largo que aquel de la distribución normal. Con el fin de corregir los valores Z asociados con percentiles bajos, las fórmulas y parámetros publicados CDC (L, M, S) que permiten el cálculo del valor Z correcto (Kuczmarski R J et al.2000. CDC growth charts for the United States: Methods and development. National Center for Health Statistics. Vital Health Stat 11(246).2002). Estos valores publicados están relacionados con recién nacidos de término. Aunque los valores Z estimados no son aplicables como medidas pronosticadoras, son útiles para comparar dos grupos de tratamientos con respecto a la ganancia en peso.

Los valores de registro Z se evaluaron para cada infante de conformidad con el género y la edad corregida para gestación corta. Estos parámetros son presentados en las tablas CDC para mes completa de edad cronológica. Por consiguiente, la edad se corrigió por un intervalo de semanas. Por ejemplo, el valor Z para un infante en 6 meses de edad (cronológico) nacido después de 38 semanas de gestación se evaluó usando parámetros presentados en las tablas CDC para bebés de término de 5-5.99 meses de edad. La Tabla 2 presenta para cada infante el registro Z corregido por edad cronológico. La media y su 95% de intervalo de confianza (CI) de Z se presentan para cada edad en el fondo de la tabla. El infante No. 28 se excluyó de las medias y CI de todas las medidas como no cubrieron el criterio de inclusión con respecto al peso de nacimiento. El infante No. 22 se excluyó con respecto a medias y CIs de circunferencia de la cabeza. La exclusión del No. 22 se refiere al registro Z extremadamente largo de la circunferencia de la cabeza al nacimiento (Z=1.82). El valor Z se asemeja a un valor atípico, ya que es bastante más grande que el intervalo de valores Z (-0.98 a -3.42) de los otros 10 infantes. También es muy raro, incluso con respecto a la población general a tener eso o una circunferencia de cabeza más grande al nacer de los otros 10 infantes. Los análisis estadísticos se aplicaron a los registros Z asumiendo la distribución-t. Sin embargo, para facilidad de interpretación las medidas de crecimiento se presentaron también como percentiles (Tabla Tabla 2 - Medidas de Crecimiento en terminos de registro Z corregido para la gestación corta, por mes de edad cronológica Tabla 3 - Medidas de crecimiento en término de percentil corregido para gestación corta, por mes de edad cronológica Se evaluaron la media y 95% de intervalo de confianza (CI) del registro Z para cada una de las tres medidas por edad (nacimiento, 4 meses y 6 meses).

Los análisis se realizaron bajo la hipótesis de que el crecimiento natural de cada infante se espera permanezca en el mismo percentil; es decir, el registro Z se espera sea estable durante el crecimiento. De este modo, el efecto de la alimentación suplementado se evaluó como la diferencia entre el registro Z en 6 meses y que al nacimiento. La media (y 95% de CI) de la diferencia en los registros Z se evaluó y probó para significancia al 5% de nivel usando ensayo-t de dos extremos. El crecimiento durante cada uno de los otros dos periodos fue similarmente evaluado y probado por significancia por las diferencias apareadas en registros Z. La Tabla 4 presenta la diferencia media en el registro Z y su 95% de intervalo de confianza para cada una de las tres medidas.

Tabla 4: Valor de significancia, media y 95% de intervalo de confianza de crecimiento en terminos de registros Z (corregido para gestación) en cada periodo Resultados Efectos secundarios No se observaron ninguno de los efectos secundarios primarios que incluyen hipoglicemia o anticuerpos de insulina en cualguiera de los infantes. Los ensayos hematológicos que incluyen conteo de sangre completa y células blancas de la sangre fueron normales. La química general que incluyen niveles de glucosa, albúmina, globulina, SGot, GGT, ALP, Na, K, Ca, UA, creatinina, amilasa, aminoácidos, anticuerpos anti-insulina, y perfil lipido, todos estuvieron dentro del intervalo normal. Historial para dormir e irritabilidad, reacción alérgica, o infección gastrointestinal se evaluaron y no se observó la anormalidad. Un efecto lateral secundario posible único fue visto en un infante con respecto a triglicéridos (328 mg/dL).

Peso El peso de todos los 10 infantes analizados fue más grande que el esperado. En la edad de 6 meses, la media y los limites de 95% de confianza de la diferencia (en Kg) entre los valores observados y esperados fueron 0.67 (0.37; 0.96). Los resultados son altamente significante, P 0.001 (Figura 1)- Los resultados se refieren a ganancia en peso durante los primeros 4 meses mostró que el crecimiento de 6 de los 10 infantes fue más largo que el esperado. La media y el 95% de intervalo de confianza de la diferencia entre la ganancia neta observada y esperada (en Kg) a 4 meses fueron 0.23 (-0.12; 0.59). El efecto en 4 meses no es significante (Figura 1).

Longitud Diez de once infantes se incluyeron en la comparación de longitud. En la edad de 6 meses, la media y límites de 95% de confianza de la diferencia apareada entre el crecimiento de longitud esperada y observado (en cm) fueron: 1.33 (0.21; 2.45), P<0.025 (Figura 2).

Circunferencia de la cabeza Diez de once infantes se incluyeron en la comparación de la circunferencia de la cabeza. La media y límites de 95% de confianza de la diferencia entre el crecimiento esperado y observado (en cm) en la edad de 6 meses fueron: 0.85 (-0.65; 2.35). La diferencia no es significante.

Con el fin de considerar la posibilidad de que los resultados son fuertemente afectados por un exceso de edad corregida para la edad gestacional, los análisis también se aplicaron a los datos asumiendo la gestación de término completo. La Tabla 5 presenta los registros Z de cada medida de crecimiento. La Tabla 6 presenta la significancia del cambio en el registro Z en cada periodo así como también la media y 95% de CI de los cambios. Los resultados son altamente significantes (P 0.001) para 6 meses de crecimiento en peso y en circunferencia de la cabeza. Durante los 6 meses el peso medio se movió del percentil 1.0 hasta el percentil 25.8; durante que el tiempo del crecimiento medio en la circunferencia fue del percentil 1.7 al percentil 7.8. El cambio en longitud, aunque no casi significante (P<0.11), incrementado desde el percentil 4.9 hasta el 9.2.

De este modo, los resultados indican claramente que el crecimiento mejorado de bajo de los infantes no se refiere a la sobre corrección de la edad.

Tabla 5 - Medidas de crecimiento en terminos de registro Z no corregido para gestación corta, por mes de edad cronológica Excluido de la media y evaluación CI ^Excluido de la media y evaluación CI con relación con la circunferencia de la cabeza.

Tabla 6 - Valor de significancia, media e intervalo de 95% de confianza de crecimiento en terminos de registros Z (no corregido para gestación) en cada periodo.

En conclusión, el crecimiento durante los 6 meses es significante para cada una de las tres medidas. En promedio el crecimiento en peso durante los 6 meses movió los infantes del percentil 1.0 a, 25.8. El crecimiento medio en longitud fue desde 4.9 a 33.4 percentil. El crecimiento medio en la circunferencia de la cabeza fue del percentil 1.7 al 23.4.

EJEMPLO 2: Estudio clínico: efecto de la insulina en parámetros de crecimiento de infantes prematuros de bajo peso al nacimiento Se condujo un estudio controlado de placebo de blindado doble, aleatorizado, de dos ramas, de centro único, para evaluar el efecto de la fórmula infantil enriquecida con insulina en infantes prematuros. En este estudio, la población de infantes incluyó también bebés que tienen peso de nacimiento extremadamente bajo (el criterio de inclusión incluye bebés que pesan más de 750 gramos). La insulina se dio a un intervalo de concentración el cual está imitando la concentración de calostro (a 400pU/ml). La meta primaria del estudio fue determinar si el suplemento de insulina a la fórmula oral básica para prematuro mejora la maduración gastrointestinal. La maduración gastrointestinal se evaluó por la capacidad de los infantes prematuros para lograr la alimentación entérica completa (150-160 ml/kg/dia).

Diseño del Estudio Los padres de los infantes prematuros elegibles quienes cubrieron el criterio del estudio descritos posteriormente, fueron invitados a participar en el estudio después de la firma de una Forma de Consentimiento Informado (ICF). Los infantes fueron hospitalizados en la sala del hospital neonatal en la misma manera como los infantes prematuros cuyos padres eligieron no participar en el estudio. Los infantes fueron aleatoriamente asignados a uno de los dos grupos de tratamiento: el producto de estudio - InsuMeal™ como un grupo de ensayo y suplemento de placebo como un grupo de control. Los padres, el equipo médico que trata a los infantes y el monitor de estudio se blindaron a la rama de tratamiento. A partir del dia de estudio 1, los infantes en el grupo de prueba recibieron el aditivo InsuMeal™ mezclado con la fórmula Materna para prematuro (RTF) lista para alimentar y el grupo de control recibió un suplemento de placebo mezclado con la misma fórmula Materna para prematuros RTF.

El género del infante, origen familiar, edad gestacional al nacimiento, medicaciones maternales, edad materna, enfermedades crónicas en la familia y la condición del infante, peso, longitud y circunferencia de la cabeza después del enrolamiento, fueron registrados.

Durante el estudio, el peso del infante, absorción de alimento, consumo de alimento, niveles de glucosa en sangre, nutrición parenteral recibida (TPN), residuos gástricos y datos de las heces (frecuencia y consistencia), vómito y regurgitación, fueron evaluados diariamente desde el punto de inicio del estudio hasta el dia 28 del alta, asi como también en los 3 meses de seguimiento después de la visita, 2.5 mi de sangre se extrajeron para evaluar además los niveles de glucosa en la sangre, conteo de sangre completa, perfil lipido, química general en sangre, aminoácidos, y anticuerpos anti-insulina. La longitud del infante y la circunferencia de la cabeza se midieron al dia 1, 7, 14, 21 y 28 asi como también a los 3 y 6 meses de visita. Se completó también una examinación física. 33 infantes prematuros, de edades hasta de 7 días de edad, que nacieron entre 26-33 semanas de embarazo, pesando más de 750 gramos, quienes estuvieron libres de alto índice de sospecha de infección que mostraron condición estable se enrolaron en este estudio.

La aleatorización se llevó a cabo por diseño de bloque. Cada sitio recibió un bloque aleatoriamente seleccionado de tamaño 4 en el cual los números ID de infantes consecutivos se alojaron en cada uno de uno de los dos grupos (InsuMeal/placebo). Una vez que el enrolamiento de los cuatro bloques de infante es completado, el sitio recibió un bloque adicional.

Un sujeto se retiró debido a complicaciones de salud; 32 sujetos se incluyeron en los análisis, 15 hombres y 17 mujeres de edades entre 1-7 días de edad.

Criterio de Inclusión El siguiente criterio tiene que cubrirse con el fin de ser incluido en el estudio: 1. Infantes prematuros que nacen después de 26-33 semanas de gestación. Edad gestacional apareada (+2 semanas) entre las fechas maternales y ultrasonido prenatal temprano. 2. Peso al nacimiento > 750 gr. 3. Edad postnatal < 7 días. 4. Fracción de oxígeno inspirado < 0.60 en el enrolamiento. 5. El infante está en una condición cardiovascular estable. 6. Sin lactancia después del día de estudio 1. 7. Sin compresión de corazón y pecho o cualquiera de fármacos de resucitación dados al infante durante el suministro. 8. Forma consentida informada firmada por los padres o custodios legales.

Criterio de exclusión Los infantes quienes cubrieron uno o más de los siguientes criterios se excluyeron del estudio: 1. Infantes prematuros de edad de <26 o >33 semanas de gestación. El apareamiento de edad gestacional (±2 semanas) entre las fechas maternales y el ultrasonido prenatal temprano. 2. Peso al nacimiento <750 gramos. 3. Edad postnatal· > 7 dias. 4. Fracción de oxigeno inspirado >0.60 en el enrolamiento. 5. El infante está en inestabilidad cardiovascular. 6. Lactancia después del día de estudio 1. 7. Malformación congénita principal - infantes con trastorno endocrino o metabólico genético diagnosticado antes del enrolamiento (que incluye trastornos diagnosticados después del enrolamiento pero que se conocen por ser congénitos). 8. Alto índice de sospecha de infección antes del enrolamiento.

Alimentación oral completa 9. Infante que desarrolla enterocolitis necrotizante o es sospechoso de tener enterocolitis necrotizante. 10. Diabetes maternal. 11. El infante es pretratado con insulina. 12. NPO, nada pero os por cualquier razón en la entrada del estudio. 13. Compresión de corazón y pecho o cualquiera de los fármacos de resucitación dados al infante durante el suministro. 14. Participación en otro estudio clínico.

Productos de ensayo Los productos de estudio incluyeron InsuMeal™ y placebo. InsuMeal™ es un aditivo a base de insulina propuesto para ser mezclado con 90 mi de fórmula infantil para prematuro RTF (fabricante: Nestle Alemania, importador: Materna Laboratories, Israel. Once InsuMeal™ se agrega a la fórmula, la fórmula tiene la concentración de 400 m? de Insulina/ml de la fórmula; imitando los niveles de insulina en la leche materna.

El aditivo InsuMeal™ comprende tres componentes: (a) Insulina humana, la cual es una proteína grande (5,800 Daltons) compuesta de dos cadenas de polipéptidos unidas por dos enlaces disulfuro. La insulina es un componente promotor de la salud natural presente en leches de mamíferos, a concentraciones de nanogramos por mililitros. La insulina es también clasificada como una hormona peptídica cuando se inyecta en dosificaciones terapéuticas por individuos diagnosticados con Diabetes Mellitus. (b) La maltodextrina la cual es una mezcla de polisacáridos, se produce por la hidrólisis parcial del almidón. La maltodextrina es comúnmente usada como un componente en la fórmula infantil y se disuelve inmediatamente en líquido. (c) La Vitamina C o ácido L-ascórbico es un nutriente esencial para humanos. En organismos vivos, el ascorbato es un anti-oxidante, puesto que protege el cuerpo contra el estrés oxidativo, y es un cofactor en varias reacciones enzimáticas vitales. En la formulación de InsuMeal™ la vitamina C es usada como un indicador para la oxidación de insulina.

El placebo consiste de Maltodextrina y vitamina C.

El InsuMeal™ se usó de conformidad con las definiciones de estudio y protocolo de alimentación únicamente. La administración de la fórmula comenzará en el día del estudio 1 y continuará a través de los siguientes 28 días o el día de el alta si se logra previo al día 28.

El InsuMeal™ se mantuvo a temperatura ambiente y fuera del alcance del niño. El InsuMeal™ no tiene contraindicaciones.

Producto de administración El contenido del sobre de estudio (InsuMeal/placebo), comercializado para infante, se agregó por las enfermeras de la unidad de cuidados intensivos neonatales (NICU) en una botella de vidrio de 90 mi de fórmula Materna para infantes prematuros RTF, directo antes de cada comida. Una vez agregada, la botella se cerró y se sacudión bien para asegurar que el aditivo se disolvió completamente. Los infantes recibieron una nueva botella de vidrio de 90 mi + aditivo por comida. Se usaron botellas y chupones para alimentación estándar. Una vez que el infante ha terminado la comida, lo dejado sobre la fórmula se mantuvo en la botella de vidrio por 24 horas para uso de laboratorio únicamente. Si el infante se encontró por estar estable y bien, la botella se desechó, de otro modo el patrocinador se informó y recolectó la botella para examinación.

Protocolo de alimentación Iniciando al nacimiento, el infante prematuro recibió nutrición parenteral (PN). La PN podría ser detenida antes de que el recién nacido alcance las alimentaciones entéricas completas (150cc/kg/dia). Por los primeros 3 días consecutivos que el infante fue alimentado (podría ser previo al estudio, el recibió al menos 10 ml/Kg/día de fórmula para prematuros o leche humana. Durante el estudio, el infante recibió el producto del estudio o placebo como se describe anteriormente. Cuando el recién nacido ha absorbido exitosamente el alimento, la alimentación diaria se incrementó por 10-25ml/Kg/día para completar la alimentación completa de 140-160 ml/Kg/día o día de estudio 28, o hasta el día del alta (si se libera antes del día 28), la Tabla 7 abajo resume los detalles del protocolo de alimentación: Tabla 7: Detalles del Protocolo de Alimentación *No todos los infantes obtienen grasa desde el día 1 en la NICU Métodos Estadísticos Todas las variables medidas y parámetros suministrados fueron tabulados por estadísticas descriptivas. Las variables categóricas fueron presentadas en tablas de sumario que incluyen tamaño de la muestra, frecuencias absolutas y relativas por el grupo de estudio y total. Las variables continuas se presentaron en tablas de sumario que incluyen tamaño de la muestra, media aritmética, desviación estándar, mediana, mínimos y máximos por el grupo de estudio y total.

Los siguientes ensayos estadísticos se usaron en los análisis de los datos presentados en este estudio: La Prueba-T apareada se aplicó para ensayar la significancia estadística de los cambios a partir de la línea base para las variables cuantitativas dentro de cada grupo de estudio.

Se aplicó la prueba de Suma de Rango Wilcoxon no paramérica y prueba-T de dos muestras para probar las diferencias entre los grupos de estudio para los parámetros cuantitativos.

Se aplicó la prueba de chi-cuadrada para ensayar la significancia estadística de las diferencias en frecuencia de las variables categóricas entre los grupos de estudio.

Se calculó el área bajo la curva (AUC) para los cambios de peso absolutos así como también relativos desde el día 1.

Todos los ensayos aplicados fueron de dos colas, y el valor p de 5% o menos se consideró estadísticamente significante, y el valor p de 5% o menos se consideró estadísticamente significante. Los datos se analizaron usando SAS® versión 9.1 (SAS Institute, Cary North Carolina).

Resultados Datos demográficos La distribución del peso del valor de referencia y demográficos del sujeto se proporcionan en las tablas 8-9 abajo. De los 34 sujetos, 46.9% fueron hombres (53.3% y 41.2% en los grupos de control y tratamiento, respectivamente); la edad de los hombres en el primer día del estudio fue alrededor de 5 días en ambos grupos de estudio (intervalo 1 -7 días); el peso medio al nacimiento fue 1470.7 y 1464.3 gr en el grupo de tratamiento y grupo de placebo, respectivamente. No se observaron diferencias estadísticamente significantes entre los grupos (valor-P = 0.9570). El número promedio de días de tratamiento 24.7 y 25.5 en el grupo de control y tratamiento, respetivo. No se observaron diferencias estadísticamente significantes entre os grupos de estudio (valor-P = 0.5887).

Tabla 8: Datos Demográficos Tabla 9: Peso al nacimiento Efecto de la insulina en el peso corporal A. Efecto de la insulina en el peso corporal en la edad del infante de 28 días.

Los resultados medios para el cambio en el peso con relación el peso al primer dia (dia 1) son presentados en la Tabla 10. Los resultados demuestran un mayor incremento en peso desde el dia 1 hasta el dia 28 en el grupo que recibió InsuMeal™ comparado con el grupo que recibe placebo.

Tabla 10: Cambio en el peso por visitas, todos los infantes Se obtuvieron resultados similares para los análisis del subgrupo de infantes con peso al nacimiento por debajo de 1,300 gr (Tabla 11). Aquí, el mayor incremento en el peso a partir del dia 1 hasta el dia 28 en el grupo que recibió InsuMeal™ comparado con el grupo que recibió placebo fue aún más pronunciado.

Tabla 11: Cambio en el peso por visitas, peso al nacimiento del infante <1300 gr.

B. Efecto de la insulina en el peso corporal en la edad del infante de tres meses La diferencia entre los grupos de control y ensayo con respecto al peso ganado durante los primeros 3 meses se basó en la diferencia Z3-Z0, donde Z0 es el valor en el nacimiento y Z3 es el valor Z a los 3 meses. La media y 95% del limite de confianza (CL) se evaluaron para cada edad y para el peso ganado. Estos datos son presentados en la Tabla 12. La ganancia media en el grupo InsuMeal™ fue aproximadamente dos veces como aquel del grupo de Placebo (0.76 contra 0.32 SDs). La diferencia entre los dos grupos de tratamiento es significante a P=0.077.

Tabla 12 - Media y 95% del valor Z (de peso) al nacimiento y a los tres meses de edad en cada grupo.

Estos resultados soportan el hallazgo presentado en el Ejemplo 1 posteriormente, mostrando que la alimentación de los infantes de bajo peso al nacimiento, que incluyen infantes prematuros con fórmula enriquecida con insulina, acelera la ganancia de peso del infante durante los primeros meses de vida cruciales, conduciendo al desarrollo normal posterior.

Efecto de la insulina en la maduración gastrointestinal La meta adicional del estudio fue examinar el efecto de la insulina oralmente administrada en la maduración gastrointestinal de infantes de bajo peso al nacer, prematuros. La medida para la maduración gastrointestinal fue el número de dias requeridos para lograr la completa alimentación entérica, definido como consumir oralmente la fórmula infantil a un volumen de al menos 150ml/Kg/día. El número medio de dias para lograr la completa alimentación entérica fue 6.4 en el grupo que recibe insulina comprado con 7.9 en el grupo de placebo (Tabla 13). Los resultados demuestran una tendencia del tiempo reducido requerida para alcanzar la completa administración entérica en el grupo de tratamiento comparado con el grupo de control, pero sin significancia estadística (valor-P=0.2085).

Tabla 13: Número de días para lograr la completa alimentación entérica (>=150ml/Kg/día), todos los Infantes Los análisis del subgrupo de infantes con peso al nacimiento < 1300 gr (Tabla 14) y del infante presentado por género (datos no mostrados) mostraron resultados similares como para los análisis realizados para todos los infantes.

Tabla 14: Número de días para lograr la alimentación enterica completa , Infantes La maduración y el crecimiento del infante fue además evaluado por el número de dias de hospitalización requeridos hasta que el infante prematuro podría ser dado de alta. Una tendencia para el número reducido de días al alta se observó en el grupo que recibió insulina: 28.8 días comparado con 33.6 días en el grupo que recibe el tratamiento con placebo (Tabla 15). La diferencia no alcanzó la significancia estadística (valor-P=0.2192).

Tabla 15: Número de días al alta, todos los infantes Los análisis del subgrupo para los infantes con peso al nacimiento < 1300 gr, demostró, sin embargo, una diferencia estadísticamente significante en el número de días al alta: 35.8 días para el grupo que recibe insulina y 47.0 para el que recibe placebo (Tabla 16; valor P = 0.0447).

Tabla 16: Número de días al peso al nacimiento del infante < 1300 gr Los resultados presentados anteriores demuestran claramente el efecto benéfico de la insulina dada a un intervalo de concentración imitando aquella del calostro y leche materna humana en el índice de crecimiento del infante de bajo peso al nacimiento. En particular, el mejoramiento del crecimiento durante los primeros uno a seis meses del infante de bajo peso al nacer conduce a un cierre cercano de apertura de desarrollo, alcanzando el índice de crecimiento de infantes que tienen peso normal temprano, de este modo evitando las complicaciones a largo plazo típicamente asociadas con el bajo peso al nacimiento. No se observaron efectos deletéreos resultantes a partir de la administración de la insulina.

La descripción anterior de las modalidades específicas así revelará completamente la naturaleza general de la invención que otros pueden, aplicando el conocimiento actual, modificar fácilmente y/o adaptar para varias aplicaciones de tales modalidades específicas sin experimentación indebida y sin apartarse del concepto genérico, y, por lo tanto, tales adaptaciones y modificación deben y están propuestas para ser comprendidas dentro del significado e intervalo de equivalentes de las modalidades descritas. Se entiende que la fraseología o terminología empleada en la presente es para los propósitos de descripción y no de limitación. Las medias, materiales, y etapas para llevar a cabo varias funciones descritas pueden tomar una variedad de formas alternativas sin apartarse de la invención.

Claims (26)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes.

1. Un método para mejorar el índice de crecimiento de un infante humano de bajo peso al nacimiento, caracterizado porque comprende administrar oralmente insulina al infante cuando es recién nacido, de este modo mejorando el índice de crecimiento del tal infante sobre el índice de crecimiento esperado.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el infante de bajo peso al nacer se selecciona a partir del grupo que consiste de un infante humano prematuro y pequeño para un infante humano de edad gestacional (SGA).

3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque mejorar el índice de crecimiento comprende una medida arriba de la esperada para el infante de bajo peso al nacer de al menos uno del peso del infante, altura y circunferencia de la cabeza.

4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la medida se toma en la edad del infante de al menos 1 mes.

5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la medida se toma en la edad del infante de al menos 3 meses.

6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la medida se toma en la edad de seis meses.

7. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque se logra una pluralidad de medidas arriba de la esperada.

8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la insulina es encapsulada en una matriz encapsulante.

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la matriz encapsulante comprende material encapsulante seleccionado a partir del grupo que consiste de polisacárido, leche en polvo, proteina de suero, lipido, goma arábiga, o celulosa microcristalina.

10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el material encapsulante es maltodextrina, y en donde la matriz además comprende anti oxidante.

11. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 u 8, caracterizado porque la insulina es mezclada con una fórmula infantil para formar una fórmula enriquecida en insulina.

12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 50pIU/ml hasta 600pIU/ml.

13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 50 mlu/ml hasta 400pIU/ml.

14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la fórmula enriquecida con insulina comprende insulina a un intervalo de concentración desde 75pIU/ml hasta 125pIU/ml.

15. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12-14, caracterizado porque mejorar el indice de crecimiento comprende una medida arriba de la esperada para el infante de bajo peso al nacimiento para maduración qastrointestinal.

16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la medida de la maduración gastrointestinal del infante se establece por el número de dias requeridos para lograr la alimentación entérica completa.

17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el número de dias requeridos para lograr la alimentación entérica completa se reduce comparado con el número esperado de dias.

18. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque mejorar el indice de crecimiento resulta en la reducción del periodo de hospitalización del infante comparado con el periodo de hospitalización esperado.

19. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la insulina es biológicamente activa.

20. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la insulina es insulina de mamífero seleccionada a partir del grupo que consiste de insulina humana and insulina bovina.

21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la insulina es insulina humana.

22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la insulina humana se selecciona a partir del grupo que consiste de insulina humana recombinante e insulina humana semi-sintética.

23. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 u 11, caracterizado porque la insulina es administrada mediante una ruta seleccionada a partir de la alimentación normal y un tubo nasogástrico.

24. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la insulina es administrada durante al menos el primer mes después de la gestación hasta durante seis meses después de la gestación.

25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la insulina es administrada durante los primeros meses después de la gestación.

26. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la insulina es administrada durante los seis meses después de la gestación.