NL8201874A - Werkwijze ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur langs microbiologische weg alsmede daarvoor geschikte micro-organismen. - Google Patents
Werkwijze ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur langs microbiologische weg alsmede daarvoor geschikte micro-organismen. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8201874A NL8201874A NL8201874A NL8201874A NL8201874A NL 8201874 A NL8201874 A NL 8201874A NL 8201874 A NL8201874 A NL 8201874A NL 8201874 A NL8201874 A NL 8201874A NL 8201874 A NL8201874 A NL 8201874A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- oxo
- hydroxy
- pregnadiene
- obtaining
- mycobacterium
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J13/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a carbon-to-carbon double bond from or to position 17
- C07J13/007—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a carbon-to-carbon double bond from or to position 17 with double bond in position 17 (20)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/005—Degradation of the lateral chains at position 17
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/06—Hydroxylating
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/863—Mycobacterium
- Y10S435/865—Mycobacterium fortuitum
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
- 1 -
4 f V
t
Werkwijze ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur langs microbiologische weg alsmede daarvoor geschikte micro-organismen.
In het Amerikaans octrooischrift 4.029.549 is een werkwijze beschreven ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-4-pregneen-20-carbonzuur (9-hydroxybisnorzuur) met behulp van Mycobacterium fortuitum NRRL B-8119. De toepassing van voornoemd 5 micro-organisme ter verkrijging van de methylester van 9-hydroxybisnorzuur is beschreven in het Amerikaans octrooischrift 4.214.051. In het Amerikaans octrooischrift 4.035.236 is een werkwijze beschreven ter verkrijging van 9-hydroxy-4-androsteen-3,17-dion (9-hydroxyandrosteendion) eveneens met behulp van • 10 Mycobacterium fortuitum NRRL B-8119. In de Europese octrooiaanvrage 79104372.2 is een tweestaps fermentatiemethode beschreven ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur met de formule op het formuleblad. Daarbij wordt eerst een sterol omgezet tot 3-oxo-4,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur door fermen-15 tatie met Mycobacterium NRRL B-8054 waarna de hydroxylgroep op de 9a-plaats wordt ingevoerd onder gebruikmaking van verschillende micro-organismen.
De uitvinding heeft eveneens betrekking op een werkwijze ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadieen-20 20-carbonzuur maar dan in êén enkele stap.
De werkwijze volgens de uitvinding, heeft het kenmerk, dat een mutant van Arthrobacter, Bacillus, Brevibacterium, Corynebacterium, Microbacterium, Mycobacterium, Nocardia, Protaminobacter, Serratia en Streptomyces die in staat is om de 25 C-17 zijketen van steroïden selectief af te breken onder vorming van 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)pregnadieen-20carbonzuur als voornaamste produkt, in een waterig voedingsmedium onder aerobe omstandigheden bij aanwezigheid van een steroid met een C-17 zijketen.
De wildstammen van voornoemde micro-organismen 30 ontleden sterolen niet-selectief tot klein-moleculige verbindingen 8201874 • k - 2 - bijvoorbeeld vater en kooldioxyde. Mutanten van deze vildstammen kunnen vorden verkregen volgens voorbeeld 1 van bovengenoemd Amerikaans octrooischrift 4.029.5^9 vaarin de vorming van Mycobacterium fortuitum NRRL B-8119 is beschreven. Deze mutanten 5 kunnen dan verder vorden gemuteerd zoals hierna beschreven. Als voorbeeld van zo'n dubbelmutant kan vorden genoemd Mycobacterium fortuitum NRRL B-12^33. Dit nieuve micro-organisme kan vorden gebruikt voor de êênstaps fermentatie volgens de uitvinding om 9-hydroxy-3-oxo-U,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur met de formule 10 op het formuleblad te verkrijgen.
Mycobacterium fortuitum NRRL B-12^33 vordt verkregen door mutatie van Mycobacterium fortuitum NRRL B-8119. Daartoe vordt Mycobacterium fortuitum NRRL B-8119 gekveekt in een medium bestaande (per liter) uit 8 g bouillon, 1 g gistextrakt, 15 5 g glycerol, 0,1 gev./vol.# Tveen 80 en gedestilleerd vater bij 31° C. Het medium vordt tevoren gesteriliseerd door 20 min. auto-claveren onder een druk van 105 kPa. De cellen vorden gekveekt
Q
tot een dichtheid van ongeveer 5 x 10 /ml en daarna verzameld op een steriel 0,2 micron filter. De cellen vorden dan gevassen 20 met een gelijk volume steriel 0,1 M natriumnitraat dat 0,1 gev./ vol.2* Tveen 80 bevat (pH 5*6) en opnieuv gesuspendeerd in de helft van dezelfde buffer. N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine vordt toegevoegd tot een concentratie van 100 g/ml waarna de celsuspensie 1 uur bij 31° C vordt geïncubeerd. Na afloop vorden 25 de cellen gevassen met 2 vol.dln. steriele 0,1 M kaliumfosfaat- buffer die 0,1 gev./vol.% Tveen 80 (pH 7) bevat en daarna opnieuv gesuspendeerd in de helft van het volume van dezelfde buffer.
Een medium vordt bereid dat (per liter) 8 g voedingsbouillon, 5 g natriumchloride, 5 g glycerol en gedestilleerd vater bevat. Agar 30 vordt toegevoegd tot een hoeveelheid van 15 g/1 vaarna het medium 20 min. vordt geautoclaveerd onder een druk van 105 kPa. Na afloop vordt het medium uitgeschonken in steriele Petri-schalen. De gemuteerde cellen vorden op dit medium gekveekt en gevormde kolonies vorden door kleinschalige fermentaties geselecteerd op 35 hun vermogen om sterolen om te zetten tot 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)- 8201874 - 3 - pregnadieen-20-carbonzuur. Eet steroid wordt aangetoond door dunnelaagchromatografie over silicagel van methyleenchloride-extrakten van de fermentaties met als loopmiddel een mengsel van methyleenchloride, aceton en azijnzuur (212:38:1).
5 Op soortgelijke wijze kunnen andere geschikte mutanten worden verkregen, mits wordt uitgegaan van een mutant die de sterold-ring intact laat, zoals Mycobacterium fortuitum NRRL B—8119 dat 9e-hydroxyandrosteendion vormt. Door een tweede mutatie wordt een mutant verkregen die de C-17 zijketen afbreekt.
10 Het verschil tussen de dubbelmutant en de mutant waaruit deze is verkregen komt hoofdzakelijk tot uitdrukking in de wijze waarop het steroid-molecuul wordt aangetast. Voor wat hun morfologie en geneesmiddel-gevoeligheid betreft, kunnen zij in grote trekken overeenkomen zo· niet identiek zijn. Myco- MMi 15 bacterium fortuitum NRRL B-8119 en B-12U33 zijn beide zuurbesten-dige, niet-motiele, niet-sporevormende micro-organismen behorende tot de familie der Mycobacteriaceae van de orde der Actinomycetales. Volgens Runyon's klassificatie (E.H. Runyon, Med. Clin. North America ^3, 273 (1959)) kunnen beide mutanten worden ondergebracht 20 in de niet-chromogene groep IV, dat wil zeggen dat zij bij lage temperatuur snel groeien op betrekkelijk eenvoudige media onder vorming van niet-gepigmenteerde kolonies.
Mycobacterium fortuitum NRRL N-8119 en zijn mutant NRRL B-12U33 zijn op 4 mei 1981 gedeponeerd bij het 25 Northern Regional Research Laboratory (NRRL) van het Amerikaanse Departement voor Landbouw in Peoria, Illinois. Subcultures worden op aanvraag ter beschikking gesteld maar mogen niet zonder toestemming binnen het kader van de onderhavige uitvinding worden gebruikt.
9-Hydroxy-3-oxo-i+ ,17(20 )-pregnadieen-20-carbon-30 zuur ontleent zijn betekenis daaraan, dat het kan worden omgezet tot waardevolle corticoïden, bijvoorbeeld hydrocorti sonacetaat zoals beschreven in bovengenoemde Europese octrooiaanvrage 79101*372.2.
Geschikte steroïden waarvan de C-17 zijketen 35 met een micro-organisme volgens de uitvinding kan worden afgebroken 8201874 ψ « - k - I omvatten sitosterol, cholesterol, stigmasterol en/of campesterol.
Voorbeeld a) Mycobacterium fortuitum NBRL B-121+33 vordt gekweekt bij 28° C in een medium bestaande uit 8,0 g bouillon, 5 5*0 g glycerol, 1,0 g gistextrakt en 1,0 g Tween 80 in 1 1 gedes tilleerd water (pH 7*0). Met 10 ml van de verkregen cultuur wordt ruw sitosterol omgezet in een kolf die 100 ml bevat van een medium bestaande uit 8,0 g Ucon, 5,0 g Cerelose, 3,0 g NH^Cl, 3,0 g CaCOg, 3,0 g Na^citraat.2H20, 2.0 g Tween 80, 1,0 g soja-10 boonmeel, 0,5 g KHgPO^, 0,5 g ureum en 30,0 g ruw sitosterol per liter kraanwater (pH 7»0). De kolf wordt 336 uren geschud in een rotatieschudinrichting bij 28° C.
b) Na afloop wordt de fermentatievloeistof (1200 ml) aangezuurd en twee keer geëxtraheerd met een gelijk 15 volume methyleenchloride waarbij respectievelijk 29,2 g en 8,9 g ruw produkt wordt verkregen. Het eerste produkt wordt opnieuw opgelost in methyleenchloride en de oplossing wordt gewassen met een verzadigde natriumwaterstofcarbonaatoplossing. De waterige wasvloeistoffen worden verzameld, aangezuurd met 1+ N zoutzuur en 20 geëxtraheerd met methyleenchloride. De extractoplossing wordt gedroogd boven magnesiumsulfaat en gefiltreerd. Het filtraat wordt ingedampt en het vaste gele residu wordt onder methyleenchloride fijngewreven tot een bleekgeel poeder. Het poeder wordt omgekristalliseerd in een mengsel van methyleenchloride en methanol waarbij 25 achtereenvolgens drie fracties worden verkregen in een hoeveelheid van respectievelijk 3,8 g, 2,1 g en 2,8 g. Deze bevatten blijkens NMR respectievelijk 90 J», 35 % en 10 % 9-hydroxy-3-oxo-l+, 17(20 )-pregnadieen-20-carbonzuur. De eerste fractie wordt nog drie keer omgekristalliseerd in een mengsel van methyleenchloride en methanol 30 waarbij 1,8 g 9-hydroxy-3-oxo-i+ ,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur met een smeltpunt van 2l+0-2l+2° C wordt verkregen. J_ a_/^: 1+0,7 ° (methanol). Het massaspectrum vertoont een moleculair ion bij m/e 358 (CggH^).
Bij herhaling met cholesterol, stigmasterol en/ 35 of campesterol in plaats van sitosterol, en met dubbel-mutanten 8201874 - 5 - van Arthrobacter, Bacillus, Brevibacterium» Corynebacterium» Nocardia, Protaminobacter, Serratia en Streptomyces in plaats van de dubbelmutant Mycobacterium fortuitum NRRL B-121*33 verkregen door mutatie van Mycobacterium fortuitum NRRL B-8119» wordt 5 eveneens 9-hydroxy-3-oxo-lf,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur verkregen.
10 8201874
Claims (5)
1. Werkwijze ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-U,1?(20)-pregnadieen-20-carbonzuur door microbiologische omzetting van sterolen met behulp van een mutant microorganisme 5 met het kenmerk, dat een mutant van Arthrobacter,^Bacillus, Breyibacterium, Corynebacterxum^Mycobacterium, Nocardia, Protaminobacter, Serratia, of Streptomyces, die in staat is steroxden met een C-17 zijketen selectief om te zetten tot 9-hydroxy-3-oxo-U,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur,wordt gekweekt 10 in een waterig voedingsmedium onder aerobe omstandigheden bij aanwezigheid van één of meer passend gekozen steroxden.
2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat een mutant van Mycobacterium wordt gekweekt bij aanwezigheid van één of meer steroxden met een C-17 zijketen.
3. Werkwijze volgens conclusie 2, met het ken merk, dat Mycobacterium fortuitum NRRL B-12U33 wordt gekweekt bij aanwezigheid van één of meer steroxden met een C-17 zijketen. 1*. Werkwijze volgens één der voorgaande conclusies, met hetkenmerk, dat sitosterol, cholesterol, stigma- 20 sterol en/of campesterol wordt omgezet.
5. Mycobacterium fortuitum NRRL B-12U33.
6. Werkwijzen, produkten en micro-organismen zoals beschreven in de beschrijving en het voorbeeld. 25 8201874
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/262,018 US4429041A (en) | 1981-05-11 | 1981-05-11 | Process of producing 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadiene-20-carboxylic acid |
| US26201881 | 1981-05-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8201874A true NL8201874A (nl) | 1982-12-01 |
Family
ID=22995838
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8201874A NL8201874A (nl) | 1981-05-11 | 1982-05-07 | Werkwijze ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur langs microbiologische weg alsmede daarvoor geschikte micro-organismen. |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4429041A (nl) |
| JP (1) | JPS57198099A (nl) |
| CH (1) | CH650803A5 (nl) |
| DD (1) | DD202308A5 (nl) |
| DE (1) | DE3215065A1 (nl) |
| FR (1) | FR2505360A1 (nl) |
| GB (1) | GB2098218B (nl) |
| HU (1) | HU189135B (nl) |
| IE (1) | IE53238B1 (nl) |
| IT (1) | IT1189273B (nl) |
| NL (1) | NL8201874A (nl) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4425429A (en) * | 1981-07-24 | 1984-01-10 | The Upjohn Company | Composition of matter and process |
| US4755463A (en) * | 1982-05-25 | 1988-07-05 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing steroids |
| US4444884A (en) * | 1982-05-25 | 1984-04-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing steroids |
| IL94272A (en) * | 1989-05-11 | 1994-04-12 | Richter Gedeon Vegyeszet | 9ALPHA-hydroxy-3-oxo-4,24(25)-stigmastadien-26-oicacid derivatives, a process for preparating same and pharmaceutical compositions containing same |
| ATE190622T1 (de) * | 1990-08-18 | 2000-04-15 | Schering Ag | Verfahren zur herstellung von 20-methyl-5,7- pregnadien-3$g(b),21-diol-derivativen |
| USD524604S1 (en) * | 2004-08-27 | 2006-07-11 | Wilton Industries, Inc. | Dish |
| USD515873S1 (en) * | 2004-08-27 | 2006-02-28 | Wilton Industries, Inc. | Dish |
| USD517372S1 (en) * | 2004-08-27 | 2006-03-21 | Wilton Industries, Inc. | Dish |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4035236A (en) | 1975-10-24 | 1977-07-12 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione |
| US4029549A (en) | 1976-03-26 | 1977-06-14 | The Upjohn Company | Process of producing 9α-hydroxy-3-ketobisnorchol-4-en-22-oic with mycobacterium fortuitum |
| US4214051A (en) * | 1977-10-21 | 1980-07-22 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-OH BN acid methyl ester |
| US4255344A (en) * | 1978-11-08 | 1981-03-10 | Mitsubishi Chemical Industries, Limited | 9-α-Hydroxy steroids |
-
1981
- 1981-05-11 US US06/262,018 patent/US4429041A/en not_active Expired - Fee Related
-
1982
- 1982-04-20 GB GB8211334A patent/GB2098218B/en not_active Expired
- 1982-04-22 DE DE19823215065 patent/DE3215065A1/de active Granted
- 1982-04-29 CH CH2628/82A patent/CH650803A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-05-07 NL NL8201874A patent/NL8201874A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-05-10 HU HU821456A patent/HU189135B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-05-10 IE IE1109/82A patent/IE53238B1/en unknown
- 1982-05-10 JP JP57076752A patent/JPS57198099A/ja active Granted
- 1982-05-10 IT IT48374/82A patent/IT1189273B/it active
- 1982-05-10 FR FR8208077A patent/FR2505360A1/fr active Granted
- 1982-05-10 DD DD82239720A patent/DD202308A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE821109L (en) | 1982-11-11 |
| HU189135B (en) | 1986-06-30 |
| DE3215065C2 (nl) | 1989-11-30 |
| DD202308A5 (de) | 1983-09-07 |
| IT1189273B (it) | 1988-02-04 |
| IT8248374A0 (it) | 1982-05-10 |
| US4429041A (en) | 1984-01-31 |
| FR2505360B1 (nl) | 1984-01-06 |
| FR2505360A1 (fr) | 1982-11-12 |
| GB2098218A (en) | 1982-11-17 |
| IT8248374A1 (it) | 1983-11-10 |
| IE53238B1 (en) | 1988-09-14 |
| GB2098218B (en) | 1985-02-27 |
| JPS57198099A (en) | 1982-12-04 |
| JPH0157960B2 (nl) | 1989-12-08 |
| CH650803A5 (de) | 1985-08-15 |
| DE3215065A1 (de) | 1983-01-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4029549A (en) | Process of producing 9α-hydroxy-3-ketobisnorchol-4-en-22-oic with mycobacterium fortuitum | |
| NL8201874A (nl) | Werkwijze ter verkrijging van 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadieen-20-carbonzuur langs microbiologische weg alsmede daarvoor geschikte micro-organismen. | |
| US4345029A (en) | Mycobacterium phlei mutants convert sterols to androsta-1,4-diene-3,17-dione and androsta-4-ene-3,17-dione | |
| US4293644A (en) | Process for preparing androst-4-ene-3,17-dione | |
| US4425429A (en) | Composition of matter and process | |
| US4098647A (en) | Composition of matter and process | |
| US4062729A (en) | Microbial transformation of steroids | |
| US4405525A (en) | Composition of matter and process | |
| US4062880A (en) | 9α-Hydroxy-bis-nor-cholanic acid | |
| US4042459A (en) | Composition of matter and process | |
| US4358538A (en) | Mycobacterium fortuitum mutant | |
| US4345033A (en) | Mycobacterium fortuitum mutant | |
| US4431591A (en) | 24-Nor-1,4-choladiene-3,22-dione | |
| US4345030A (en) | Microorganism mutant conversion of sterols to androsta-4-ene-3,17-dione | |
| US4304860A (en) | Process for the microbial transformation of steroids | |
| US4423146A (en) | Composition of matter and process | |
| US4293646A (en) | Composition of matter and process | |
| US4176123A (en) | Steroid intermediates | |
| US4867914A (en) | Pregnane derivatives and method of producing the same | |
| US4097335A (en) | Microbial transformation of steroids | |
| US4223092A (en) | Process for preparing 9α-OH BN acid methyl ester | |
| GB2104526A (en) | 6-fluoro-9-hydroxyandrost-4- ene-3,17-diones and microbial preparation thereof | |
| US4345034A (en) | Mycobacterium fortuitum mutant | |
| US4443541A (en) | Process for preparing an indenedione and a mycobacterium culture therefor | |
| JPS6117478B2 (nl) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BA | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| BV | The patent application has lapsed |