NO115786B - - Google Patents

Description

Fremgangsmåte for utvinning av nystatin.

Denne oppfinnelse angår fremstilling

av det antifungale antibiotikum fungicidin, (nystatin) ved en fremgangsmåte ved hvilken det ønskede produkt fås med godt utbytte og av bra renhet.

Antibiotikumet fungicidin (nystatin) og dets fremstilling av Streptomyces noursei er beskrevet i engelsk patent nr. 714 189. Se også E. L. Hazen og R. Brown: «Fungicidin, An Antibiotic Produced by a Soil Actinomycete», Proe. Soc. Exptl. Biol. Med. 76:93 (1950) og R. Brown, E. L. Hazen og A. Mason: «Effeet of Fungicidin (Nystatin) in Mice Injected with Lethal Mixtures of Aureomycin and Candida albicans», Science

117:609 (1953). Dette antibiotikum kalles i den følgende beskrivelse bare «nystatin».

Rå konsentrater av nystatin kan frem-stilles ved at den fraskilte mycelium ekstraheres med flere porsjoner metanol, og at metanoloppløsningen deretter felles fraksjonert med etylacetat, hvoretter utfellingen vaskes med 0,85 pst.'s NaCl-opp-løsning, løses opp igjen i metanol og atter felles fraksjonert ved hjelp av eter, eller kulturvæsken med mycelium ekstraheres med et organisk oppløsningsmiddel som er ikke-blandbart med vann. Se herom ovennevnte engelske patent nr. «714 189. Av det resultererende rå konsentrat kan det opp-nås små utbytter av aktivt krysetallinsk materiale ved fordeling mellom butanol og saltoppløsning, og ved partiell utfelling fra metanol. Krystallinsk nystatin av stor renhet er fått ved å fordele delvis renset ny-statinkonsentrat i et tofaset system, som er fått ved å blande n-butanol, metanol, vann og heksan, og la denne blanding stå og fordampe i luft inntil det samler seg krys-taller i mellomlagsflaten. Se James D. Dut-cher et al. «Antibiotics Annual» 1953—1954, side 191—194, Medical Encyclopedia., Inc., New York, N. Y.

De foran beskrevne metoder gir krystallinsk nystatin, men de har den ulempe åt det fås med meget litet utbytte og sammen med forurensninger.

Dessuten er reaksjonene vanskelige å kontrollere, og ikke av den art som man ønsker å arbeide med i større skala.

Oppfinnerne har ved sine undersøkelser på området funnet at nystatin kan utvin-nes ved ekstrahering av den hele fermen-teringsmasse ved hjelp av et med vann blandbart organisk opløsningsmiddel, ved anvendelse av den nedenfor beskrevne fremgangsmåte.

Eksempel:

Til den samlede mengde fermenterings-produkt som fås ved fermentering av Streptomyces noursei i et vandig nærings-medium av soyamel-glukose settes det et like stort volum isopropanol. Deretter sen-kes blandingens pH til ca. 5 ved hjelp av fosforsyre. Etter ca. 1 times omrøring heves pH til ca. 7 ved tilsetning av natri-umhydroksyd. Den resulterende oppløs-ning filtreres. Herved fjernes en stor del av forurensningene. Deretter fjernes iso-propanolen fra filtratet, fortrinsvis under vakuum ved en temperatur av ca. 30° C eller lavere. Når alkoholen fjernes, faller det ut et delvis krystallisert nystatin av 65—70 pst.'s renhet, med et utbytte av ca.

70—75 pst. Utfellingen filtreres eller sen-trifugeres fra, vaskes med litt vann, vaskes derpå med aceton, og tørkes. Metanol kan anvendes i stedet for isopropanol, men ut-byttet blir langt mindre, ned til en størrel-sesorden av ca. 50—55 pst. Det foretrekkes også å anvende isopropanol, eller normal propanol, i stedet for andre med vann blandbare organiske opløsningsmidler (f. eks. etanol, metanol, aceton, osv.) fordi propanolene fjerner (feller ut) langt mere av forurensningene, f. eks. av proteiner, sakkarider osv., som nedsetter et godt utbytte av nystatin som har god renhetsgrad.

Senkningen av pH ved tilsetning av surt stoff, så man får pH 4—6 og fortrinsvis 4,5—5,5, hjelper til med å løse opp nystatinet i det vandig-organiske oppløs-ningsmedium. Reguleringen av pH til ca. 6,5—7,5, fortrinsvis 7, ved tilsetning av al-kalisk stoff hjelper til med å felle ut nystatinet når det organiske oppløsnings-middel fjernes. Hvilke som helst ekviva-lente sure og alkaliske stoffer kan brukes for regulering av pH til de ovennevnte ønskede verdier. Mengden av med vann blanbart organisk oppløsningsmiddel som anvendes sammen med den nystatinholdige blanding kan variere fra ca. 40—75 pst. eller mere, beregnet i forhold til det samlede volum av oppløsningsmiddel og reaksjonsblanding. De fordelaktigste meng-der som kan anvendes av et spesielt opp-løsningsmiddel i forbindelse med en spesi-ell reaksjonsblanding kan fastsettes ved forutgående forsøk.

Claims (1)

1. Fremgangsmåte for utvinning av nystatin fra en ved fermentering av Streptomyces noursei erholdt fermenterings-blanding, ved hvilken den hele fermenter-ingsblanding tilsettes et med vann blandbart organisk oppløsningsmiddel, som isopropanol, karakterisert ved at man regulerer det resulterende vandig-organiske oppløs-ningsmediums pH til 4—6, fortrinsvis 5, deretter til 6,5—7,5, fortrinsvis 7, filtrerer blandingen fra uoppløst materiale, fjerner det organiske oppløsningsmiddel fra det resulterende filtrat og samler opp den resulterende utfelling.