NO159669B - Fremgangsmaate for isolering av stabile sulfo-adenosyl-l-methioninsalter. - Google Patents
Fremgangsmaate for isolering av stabile sulfo-adenosyl-l-methioninsalter. Download PDFInfo
- Publication number
- NO159669B NO159669B NO843366A NO843366A NO159669B NO 159669 B NO159669 B NO 159669B NO 843366 A NO843366 A NO 843366A NO 843366 A NO843366 A NO 843366A NO 159669 B NO159669 B NO 159669B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- same
- eluate
- yeast
- acid
- solution
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 238000009413 insulation Methods 0.000 title 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 16
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 15
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- FVSFGYXQNHBRHP-TWBCTODHSA-N (2S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl-sulfoamino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CN([C@@H](CCSC)C(O)=O)S(O)(=O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 FVSFGYXQNHBRHP-TWBCTODHSA-N 0.000 claims description 61
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 3
- 125000005396 acrylic acid ester group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 3
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 abstract description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 abstract description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 abstract description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 abstract description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 3
- -1 picrolonic acid anion Chemical class 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- WUUGFSXJNOTRMR-WOIOKPISSA-N 5'-deoxy-5'-methylthioadenosine Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](CSC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-WOIOKPISSA-N 0.000 description 1
- OVFUUSPKWADLNJ-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-4-nitro-2-(4-nitrophenyl)-4h-pyrazol-3-one Chemical compound O=C1C([N+]([O-])=O)C(C)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 OVFUUSPKWADLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUUGFSXJNOTRMR-UHFFFAOYSA-N 5alpha-Hydroxy-3abeta,5beta,8-trimethyl-1-(1,5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-4abetaH,7abetaH-dicyclopentano[a.d]cyclooctaen-(8) Natural products OC1C(O)C(CSC)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007791 dehumidification Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
Denne oppfinnelse angår en ny fremgangsmåte for isolering av stabile salter av sulfo-adenosyl-L-methionin (SAMe) fra gjær. Fremgangsmåten egner seg for industriell fremstilling av stabile salter av SAMe i stor skala.
Sulfo-adenosyl-L-methionin (I) er kjent som den viktigste biologiske methylgruppe-donor.
Denne spesielle egenskap har gjort forbindelsen til gjenstand for betydelig interesse, først fra et biokjemisk synspunkt og deretter på grunn av de mulige terapeutiske anvendelser av forbindelsen.
De hovedproblemer som knytter seg til bruk av dette molekyl i stor skala er dets termiske ustabilitet, selv ved vanlig romtemperatur, og kompleksiteten av dets fremstilling og rensning.
Søkeren har drevet utstrakt forskning rned sikte
på å finne frem til metoder som er anvendelige i industriell målestokk for fremstilling av stabile salter av forbindelsen.
Patenter i søkerens navn som vedrører stabile SAMe-salter
og deres fremstilling, er bl.a. US patenter nr. 3 893 999,
3 954 726 og 4 057 686. Også europeisk patentsøknad nr. 82107333.5 i søkerens navn skal nevnes.
Fremgangsmåtene som er beskrevet i de ovennevnte patentskrifter, er spesifikke for bestemte salter eller grupper av salter. Dessuten er de - selv om de gir utmerkede resultater når de anvendes i begrenset målestokk - uhensikts-messige når de benyttes for fremstilling av meget store mengder SAMe-salter.
De fremgangsmåter som hittil er blitt beskrevet, omfatter én eller flere av de følgende operasjoner:
utfeining av det SAMe som inneholdes i gjærlysater som
er anriket på SAMe (5-7 g/kg) med picrolonsyre og påfølgende eliminering av picrolonsyreanionet,
ledning av SAMe gjennom en søyle av svak syre-ioneveksler-harpiks,
rensing av SAMe-saltet ved behandling med aktivert carbon eller ved ledning av saltet gjennom en søyle av aktivert carbon,
konsentrering i vakuum ved 30-35°C,
lyofilisering av det endelige salt,
hvilke operasjoner, hvis de utføres for relativt små mengder produkt, ikke byr på spesielle vanskeligheter eller medfører uakseptable kostnader, mens de blir praktisk talt ugjennom-førlige når de skal anvendes for store produksjonsmengder, både på grunn av energikostnadene og på grunn av de store volumer som involveres.
Det er nu funnet en ny fremgangsmåte for isoler-
ing av stabile SAMe-salter, som er både økonomisk og enkel,
og kan anvendes for fremstilling i stor skala av et hvilket som helst SAMe-salt, under oppnåelse av produkter av en renhet som tidligere ikke er blitt oppnådd.
Den nye fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved at man: a) innstiller SAMe-konsentrasjonen i den som utgangsmateriale anvendte gjær på 12-20 g/kg fuktig gjær ved å til-sette fra 0,4 til 1,2 g methionin pr. liter kulturmedium og ved å gjenta tilsetningen fra tre til seks ganger,
b) fremstiller et lysat med høy SAMe-konsentrasjon
ved at den anrikede gjær behandles først med vann og ethylacetat i mengder mellom 1:20 og 1:5 av vekten av de fuktige celler, idet behandlingen får fortsette i et tidsrom mellom 15 og 45 minutter, og deretter med svovelsyre mellom 0,1N og 0,5N i et tidsrom mellom 1 og 2 timer, ved omgivelsestemperatur,
c) underkaster lysatet ultrafiltrering med membraner med et nominelt skillepunkt på 10 000, d) leder det filtrerte produkt gjennom en svakt sur harpiks med partikkelstørrelse mellom 100 og 200 mesh ved en pH på 3,5-7 og en hastighet på 1-3 volumdeler væske pr. time og eluerer med en syreoppløsning, e) leder eluatet gjennom en absorpsjonspolymer bestående av polystyren og acrylsyreestere, og eluerer med en vandig syreoppløsning, idet eluatet ledes gjennom polymeren med en hastighet på 0,2-1 volumdel væske pr. time, f) underkaster eluatet omvendt osmose under anvendelse av avsaltningsmembraner med godt skillepunkt mot NaCl inntil det er oppnådd et SAMe-innhold på 100-200 g/l i konsentratet, og behandler den konsentrerte SAMe-oppløsning med en støkio-metrisk mengde syre for å overføre SAMe fullstendig til det ønskede salt, og g) tørker den konsentrerte oppløsning av SAMe-salt i en sprøytetørker ved hjelp av avfuktet luft med innløpstemp-eratur på mellom 140 og 200°C og en utløpstemperatur på mellom 40 og 100°C.
Anrikningstrinnet (a) kan utføres på en hvilken som helst egnet gjær, for eksempel Saccharomyces cerevisiae, Torulopsis utilis, Candida utilis o.l.) under anvendelse av den kjente Schlenk-anrikningsmetode (Enzymologia, 29 , 238
(1965)), ved tilsetning av methionin.
Det har imidlertid vist seg at det er av avgjørende betydning at man ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen gjentar anrikningsoperasjonen fra tre til seks ganger, inntil det er oppnådd en endelig SAMe-ionekonsentrasjon på mellom 12 og 20 g/kg fuktig gjær.
Ved samtlige fremgangsmåter som hittil er blitt beskrevet, er det blitt benyttet som utgangsmateriale en anriket gjær inneholdende 6-7 g/kg SAMe. Noen høyere anrik-ning er ikke blitt tatt i betraktning eller blitt ansett fordelaktig ved industriell fremstilling av SAMe-salter.
Trinn (b) utføres ved at gjæren som er anriket på SAMe til 12-20 g/kg, først behandles med vann og ethylacetat og deretter med svovelsyre av mellom 0,1N og 0,5N, fortrinnsvis 0,35N, ved romtemperatur, slik at det frembringes celle-lyse og praktisk talt 100% av det tilstedeværende SAMe går
over i oppløsning.
Det benyttes mengder av vann og acetat
på mellom 1/20 og 1/5 av vekten av de fuktige celler, og behandlingen utføres i mellom 15 og 45 minutter, fortrinnsvis i 30 minutter.
Det tilsettes så svovelsyre, og lysen fortsettes i mellom 1 <p>g 2 timer, fortrinnsvis i 1,5 time.
Det er å merke at den beskrevne lyse-metode ikke er den eneste kjente metode, men er den anvendte metode fordi den utføres ved romtemperatur og under slike betingelser at oppløsningen lett lar seg filtrere fra cellerestene.
Ultrafiltreringstrinnet (c) er ikke av vesentlig betydning ved den foreliggende fremgangsmåte, men det utføres på grunn av lysatets innhold av protein-
rester. I denne forbindelse har det vist seg at slike protein-rester fester seg til harpiksen som benyttes i det neste trinn, slik at dennes aktivitet gradvis reduseres.
Ultrafiltreringen må utføres med membraner som oppviser et nominelt skillepunkt på 1 0 000, hvilke membraner kan være enten flate eller rørformede og fortrinnsvis er rørformede.
Det har vist seg at når lysatet underkastes ultrafiltrering under disse betingelser, får de harpikskolonner som anvendes i det neste trinn betydelig forlenget brukstid, hvilket i avgjørende grad reduserer produksjonskostnadene. Det ved ultrafiltrering rensede lysat ledes i trinn (d) til en kolonne av svak syre-harpiks (COOH) med partikkelstørrelse mellom 100 og 200 mesh, som foreligger i H+<->form ved en pH-verdi på mellom 3,5 og 7, fortrinnsvis 5, i en mengde av mellom 1 og 3, fortrinnsvis 2, volumdeler væske pr. time pr. volumdel harpiks.
Som nevnt er det kjent å føre SAMe-oppløsninger gjennom svak syre-ionevekslerharpikskolonner for rensnings-formål. Det har imidlertid overraskende vist seg at hvis det benyttes en harpiks med de nevnte egenskaper, men med en partikkelstørrelse på mellom 100 og 200 mesh (sammenlignet med en partikkelstørrelse på over 50 mesh som normalt benyttes), fåes det et eluat som inneholder meget rent SAMe, og som spesielt er fritt for organiske salter, polypeptider og spaltningsprodukter. De eneste restforurensninger som fåes ved behandlingen i henhold til den foreliggende oppfinnelse er 5'-deoxy-5'-methylthioadenosin (3-10%) sammen med små mengder adenin og spor av farvede forbindelser.
Mengden av harpiks som benyttes, er 10-50 1, fortrinnsvis 30 1, pr. kg SAMe.
Lysatet føres gjennom kolonnen, vaskes med destillert vann og deretter med 0,1M eddiksyre, inntil eluatet har en pH-verdi som er lavere enn 3, og deretter på ny med destillert vann, hvoretter SAMe elueres med 0,2N H2SO4.
Dersom det ønskes et annet salt enn sulfatet, foretaes det eluering med en 0,2N oppløsning av den ønskede syre.
Mengden og kvaliteten av restforurensningene etter denne behandling innebærer at behandling av det erholdte SAMe med aktivert carbon etter elueringen er overflødig, mens denne behandling ble betraktet som vesentlig ved de kjente fremgangsmåter. Dette er et annet og meget fordelaktig aspekt ved den nye fremgangsmåte, fordi det aktiverte carbon, selv om det er effektivt, tilbakeholder en mengde SAMe svarende til minst 15% av dets egen vekt, hvilket gir et betydelig tap av utbytte. Det har uventet vist seg at forurens-ningene som inneholdes i det SAMe som fåes etter gjennomled-ningen gjennom svak syre-harpiksen av partikkelstørrelse 100-200 mesh, blir fullstendig fjernet etter gjennomledning gjennom en enkel absorpsjonspolymer bestående av polystyren og acrylsyreestere. Egnede polymerer er "Amberlite" XAD2, XAD4 og XAD7, som praktisk talt ikke tilbakeholder noe SAMe fra en sterkt sur oppløsning, såsom eluatet fra trinn (d).
Trinn (e) utføres ved at eluatet føres gjennom en kolonne av den ovennevnte harpiks med en hastighet av mellom 0,2 og 1, fortrinnsvis 0,5, volumdel væske pr. time pr. volumdel harpiks.
Mengden av harpiks som benyttes, er 10-50 liter, fortrinnsvis 30 liter, pr. kg SAMe. SAMe-oppløsningen føres gjennom kolonnen og vaskes så med 20 mN H2SO4 (eller annen ønsket syre), inntil SAMe forsvinner fra eluatet.
Eluatet inneholdende ca. 10 g/l meget rent SAMe føres til det neste trinn for konsentrering.
Konsentreringstrinnet (f), hvor det gjøres bruk av omvendt osmose, utføres ved at eluatet fra trinn (e) underkastes en omvendt osmose-prosess under anvendelse av avsaltningsmembraner som gir god NaCl-avvis-
ning, hvilke membraner er i stand til å tilbakeholde SAMe praktisk talt fullstendig, mens vannet og den overskytende del av svovelsyren eller annen ekvivalent syre elimineres i permeatet.
Det foretrekkes å benytte polyamidmembraner på grunn av deres gode resistens i sterkt sure oppløsninger.
Konsentrering ved omvendt osmose gjør det mulig å konsentrere eluatet fra trinn (e) fra 10 g/l til 100-200 g/l, fortrinnsvis til 120 g/l.
Det er å merke at bruken av omvendt osmose for konsentrering av SAMe-oppløsningene oppviser to store fordeler sammenlignet med andre, tidligere kjente metoder (f.eks. konsentrering i vakuum): 1 ) Konsentrer ingen utføres ved en maksimal temperatur på 20°C, sammenlignet med de 30-35°C som er nødvendige ved konsentrering i vakuum. Dette er meget vesentlig på bak-grunn av den termiske ustabilitet av SAMe. 2) Dersom eluatet inneholder et overskudd av H2SO4 utover den støkiometriske mengde for det endelige salt, fjernes denne syre under den omvendte osmose, hvilket gjør det unødvendig å benytte bariumhydroxyd for å felle den ut, og dermed eliminerer vanskelighetene med å frafiltrere det dannede BaSC>4 og de dermed forbundne økte kostnader.
Bruken av denne konsentreringsmetode, som er meget fordelaktig ved den nye fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen, er blitt gjort mulig som følge av den spesielle grad av konsentrasjon og renhet med hvilke SAMe forlater de foregående trinn, og metoden kunne ikke ha vært benyttet ved de i faget kjente fremgangsmåter.
Den ved omvendt osmose konsentrerte SAMe-oppløsning analyseres med hensyn til dens konsentrasjon av SAMe og svovelsyre (eller annen syre, dersom et annet salt ønskes), bg passende tilsetninger av svovelsyre og/eller andre syrer foretaes for å oppnå den ønskede støkiometriske sammensetning. Eksempelvis tilpasses den støkiometriske sammensetning for dannelse av en oppløsning av SAMe-disulfat-p-toluensulfonat. Denne oppløsning føres så til det neste trinn (g), hvor det foretas sprøytetørring for å danne sluttproduktet. I trinn (g) forstøves produktet i et tørkekammer, som tilføres varm luft. Konsentrasjonen av den tilførte oppløsning (uttrykt som konsentrasjonen av SAMe-ioner) er mellom 100 og 200 g/l, fortrinnsvis 120 g/l. Temperaturen av den tilførte tørkeluft, som fortrinnsvis på forhånd er blitt avfuktet, er mellom 140 og 200°C, fortrinnsvis 160°C. Temperaturen av den utgående luft er mellom 40 og 100°C, fortrinnsvis 60°C. Under disse betingelser vil det utgående produkt ha en temperatur på mellom 40 og 50°C, og det kjøles raskt til romtemperatur med avfuktet luft. Anlegget må være utstyrt med en egnet innretning for kontinuerlig uttak av det tørre produkt.
Alle de ovennevnte betingelser er av vesentlig betydning for å forhindre at SAMe-saltet som tørres, når opp i en temperatur ved hvilken det vil kunne spaltes.
Det er å merke at sprøytetørring av SAMe-salter aldri tidligere har vært gjennomførlig, på grunn av saltenes følsomhet for høye temperaturer.
Muligheten for å benytte et slikt nytt prosesstrinn oppstår uventet som en konsekvens av den konsentrasjon ved hvilken produktet forlater trinnet hvor det foretaes omvendt osmose, og som en konsekvens av bestemmelsen av kritiske innløps- og utløpstemperaturer for luften og de betingelser med hensyn til avfukting og uttagningshastighet som tillater at produktene tørres uten å undergå noen degradering.
Det er også å merke at sprøytetørring av SAMe-saltene i henhold til oppfinnelsen fører til store kostnads-reduksjoner hva angår utstyr og energiforbruk, sammenlignet med kjente tørremetoder, spesielt sammenlignet med tørring
ved lyofilisering.
Sammenfatningsvis tilveiebringes det ved hjelp av oppfinnelsen en ny fremgangsmåte for fremstilling av SAMe-salter i industriell skala, hvilken fremgangsmåte er ny, både hva de enkelte trinn og helheten angår, og gjør det mulig å oppnå et meget rent produkt i et utbytte som aldri tidligere er blitt oppnådd, nemlig i et utbytte nær 90%, og dessuten er meget enklere og mindre kostnadskrevende enn alle tidligere kjente fremgangsmåter.
Dette overraskende resultat er blitt oppnådd ved at man har funnet frem til et visst antall kritiske parametere som styrer den nye fremgangsmåte.
For å lette forståelsen av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, og for å illustrere noen av de fordeler som oppnåes ved hjelp av denne, er det nedenfor i illustrasjons-øyemed beskrevet noen praktiske utførelsesformer av fremgangsmåten.
EKSEMPEL 1
Fremstilling av SAMe- disulfat- p- toluensulfonat.
110 liter ethylacetat og 120 liter vann settes ved romtemperatur til 720 kg gjær anriket på SAMe (17 g/kg) etter Schlenk-metoden (Enzymologia 29, 283 (1965)). Etter kraftig omrøring i 30 minutter tilsettes 1000 liter 0,35N svovelsyre, og omrøringen fortsettes i ytterligere 1,5 time. Blandingen filtreres gjennom et roterende filter, og filter-kaken vaskes med vann til det oppnås 2800 liter oppløsning, som inneholder 4,40 g/l SAMe, svarende til 99,5% av det SAMe som var tilstede i utgangsmaterialet. Den således erholdte SAMe-oppløsning (pH 2,5) føres til et ultrafiltre-ringsanlegg utstyrt med rørformede membraner med et skillepunkt på 1 0 000. Permeatet som forlater membranene, oppsamles i en egnet beholder, mens konsentratet resirkuleres kontinuerlig inntil det når et sluttvolum på 200 liter. På dette tidspunkt tilsettes destillert vann, og resirkuleringen fortsettes inntil innholdet av SAMe er fullstendig ekstrahert.
Det fåes 3 500 liter ultrafiltrert lysat, som innstilles på pH 5 ved tilsetning av 2N NaOH.
Det tilberedes en kolonne inneholdende 400 1 "Amberlite" CG 50 i H+<->form som vaskes forsiktig med destillert vann. Lysatet ledes gjennom harpikskolonnen med en hastighet av 800 l/time, hvilken hastighet holdes konstant under hele prosessen. Det føres så i rekkefølge gjennom kolonnen 400 liter destillert vann, 3200 1 0,1M eddiksyre og 400 liter destillert vann. SAMe elueres med 800 liter 0,2N svovelsyre. De 800 liter eluat som derved oppnåes, inneholder ca. 11,6 kg SAMe.
Det tilberedes en kolonne inneholdende 400 liter "Amberlite" XAD4 harpiks som på forhånd er blitt aktivert med 800 liter 0,1N NaOH og 800 liter 0,1N H2SO4 og deretter vasket forsiktig med destillert vann. Den erholdte SAMe-oppløsning ledes gjennom kolonnen med en hastighet av 200 l/time, hvilken hastighet holdes konstant under hele prosessen. Det føres så 400 liter 20 mN svovelsyre gjennom kolonnen. Eluatet inneholdende det ønskede SAMe (ca. 1000 1 inneholdende 11,3 kg SAMe) blir så oppsamlet. Den erholdte opp-løsning føres til et omvendt osmose-anlegg av den flate type inneholdende avsaltningsmembraner av polyamid. I dette anlegg konsentreres SAMe-oppløsningen til 80 liter inneholdende 11,2 kg SAMe. Det tilsettes så 1,8 kg konsentrert H2SO4 og 4,8 kg p-toluensulfonsyre. Den erholdte oppløsning føres til en sprøytetørker som tilføres luft av 160°C. Det tørrede produkt taes ut kontinuerlig fra sprøytetørkeren. Det erholdes 2,16 kg pulver, som ved analyse gir den følgende sammensetning:
svarende til SAMe•2H2SO4-p-toluensulfonsyresalt. Utbytte: ca. 90%.
EKSEMPEL 2
Fremstilling av SAMe- disulfat- di- p- toluensulfonat.
Fremgangsmåten ifølge eksempel 1 følges til og med konsentreringen ved omvendt osmose. 1,8 kg konsentrert H2SO4 og 9,6 kg p-toluensulfonsyre settes til den konsentrerte oppløsning fra den omvendte osmose. Tørringen utføres som beskrevet i eksempel 1. Det erholdes 26,5 kg pulver, som ved analyse gir følgende sammensetning:
svarende til SAMe«2H2S04«2 p-toluensulfonsyresalt. Utbytte: ca. 90%.
EKSEMPEL 3
Fremstilling av SAMe » 2, 5- sulfat
Fremgangsmåten ifølge eksempel 1 følges til og med konsentreringen ved omvendt osmose. 3,5 kg konsentrert H2SO4 sette til den konsentrerte oppløsning fra den omvendte osmose. Tørring utføres som beskrevet i eksempel 1 . Det erholdes 18,2 kg pulver, som ved analyse gir den følgende sammensetning:
svarende til saltet SAMe»2,5H2S04. Utbytte: ca. 90%.
Claims (1)
- Fremgangsmåte for isolering av stabile salter av sulfo-adenosyl-L-methionin (SAMe) med formel (I)som har biologisk funksjon som methylgruppedonor, ut fra gjær-kulturer som inneholder dette,karakterisert ved at man: a) innstiller SAMe-konsentrasjonén i den som utgangsmateriale anvendte gjær på 12-20 g/kg fuktig gjær ved å til-sette fra 0,4 til 1,2 g methionin pr. liter kulturmedium og ved å gjenta tilsetningen fra tre til seks ganger, b) fremstiller et lysat med høy SAMe-konsentrasjon ved at den anrikede gjær behandles først med vann og ethylacetat i mengder mellom 1:20 og 1:5 av vekten av de fuktige celler, idet behandlingen får fortsette i et tidsrom mellom 15 og 45 minutter, og deretter med svovelsyre mellom 0,IN og 0,5N i et tidsrom mellom 1 og 2 timer, ved omgivelsestemperatur, c) underkaster lysatet ultrafiltrering med membraner med et nominelt skillepunkt på 10 000, d) leder det filtrerte produkt gjennom en svakt sur harpiks med partikkelstørrelse mellom 100 og 200 mesh ved en pH på 3,5-7 og en hastighet på 1-3 volumdeler væske pr.time og eluerer med en syreoppløsning, e) leder eluatet gjennom en absorpsjonspolymer bestående av polystyren og acrylsyreestere, og eluerer med en vandig syreoppløsning, idet eluatet ledes gjennom polymeren med en hastighet på 0,2-1 volumdel væske pr. time, f) underkaster eluatet omvendt osmose under anvendelse av avsaltningsmembraner med godt skillepunkt mot NaCl inntil det er oppnådd et SAMe-innhold på 100-200 g/l i konsentratet, og behandler den konsentrerte SAMe-oppløsning med en støkio-metrisk mengde syre for å overføre SAMe fullstendig til det ønskede salt, og g) tørker den konsentrerte oppløsning av SAMe-salt i en sprøytetørker ved hjelp av avfuktet luft med innløpstemp-eratur på mellom 140 og 200°C og en utløpstemperatur på mellom 40 og 100°C.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT22622/83A IT1169773B (it) | 1983-08-24 | 1983-08-24 | Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO843366L NO843366L (no) | 1985-02-25 |
| NO159669B true NO159669B (no) | 1988-10-17 |
| NO159669C NO159669C (no) | 1989-01-25 |
Family
ID=11198536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO843366A NO159669C (no) | 1983-08-24 | 1984-08-23 | Fremgangsm te for isolering av stabile sulfo-adenosthioninsalter. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4621056A (no) |
| EP (1) | EP0141914B1 (no) |
| JP (1) | JPS6070097A (no) |
| KR (1) | KR900009054B1 (no) |
| AT (1) | ATE31550T1 (no) |
| AU (1) | AU569107B2 (no) |
| CA (1) | CA1223535A (no) |
| DE (1) | DE3468234D1 (no) |
| DK (1) | DK162240C (no) |
| ES (1) | ES535378A0 (no) |
| FI (1) | FI77043C (no) |
| IT (1) | IT1169773B (no) |
| MX (1) | MX7625E (no) |
| NO (1) | NO159669C (no) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1173992B (it) * | 1984-05-16 | 1987-06-24 | Bioresearch Spa | Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente idonei per uso farmaceutico orale |
| IT1173990B (it) * | 1984-05-16 | 1987-06-24 | Bioresearch Spa | Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente adatti per uso parenterale |
| US4794174A (en) * | 1987-02-10 | 1988-12-27 | Southern Research Institute | 5'deoxy-5'-substituted adenosines |
| US5180714A (en) * | 1990-10-31 | 1993-01-19 | Health Research, Inc. | Adenosine compounds for the treatment of diseases caused by parasitic protozoa |
| IT1315236B1 (it) * | 1999-10-05 | 2003-02-03 | Chementecno Srl | Processo per la purificazione di s-adenosil-l-metionina e per lapreparazione dei suoi sali farmaceuticamente accettabili. |
| IT1318535B1 (it) * | 2000-05-25 | 2003-08-27 | Chementecno Srl | Processo per la preparazione di sali farmaceuticamente accettabili di(ss,rs)-s-adenosil-l-metionina. |
| IT1317920B1 (it) * | 2000-10-20 | 2003-07-15 | Univ Roma | S-adenosilmetionina e suoi derivati per il trattamento e laprevenzione della malattia di alzheimer. |
| US6649753B2 (en) * | 2001-06-07 | 2003-11-18 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. | Stable salts of S-adenosyl-L-methionine (SAMe) and the process for their preparation |
| US6881837B2 (en) | 2001-06-07 | 2005-04-19 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. | Chemical synthesis of S-adenosyl-L-methionine with enrichment of (S,S)-isomer |
| WO2006000883A2 (en) | 2004-06-23 | 2006-01-05 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Limited | Chemical synthesis of s-adenosyl-l-methionine with enrichment of (s,s)-isomer |
| CN101374529B (zh) | 2006-01-17 | 2012-08-08 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 使s-腺苷-l-甲硫氨酸稳定化的方法以及稳定化后的组合物 |
| CN101437935B (zh) | 2006-05-16 | 2012-06-20 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 储存稳定性优良的含s-腺苷-l-甲硫氨酸的干燥酵母的制备方法及其产品以及口服用组合物 |
| EP2116593B1 (en) | 2007-01-25 | 2017-12-27 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Method for production of dry yeast containing s-adenosyl-l-methionine and having excellent storage stability, product produced by the method, and molded composition of the dry yeast |
| CN102321136B (zh) * | 2011-09-19 | 2014-10-22 | 北京化工大学 | S-腺苷-l-甲硫氨酸对甲苯磺酸硫酸双盐的制备方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE37913B1 (en) * | 1972-08-02 | 1977-11-09 | Bioresearch Sas | Salt of s-adenosyl-l-methionine |
| JPS5631897B2 (no) * | 1972-11-13 | 1981-07-24 | ||
| US3962034A (en) * | 1973-02-01 | 1976-06-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing s-adenosylmethionine or methylthioadenosine by yeast |
| IE39517B1 (en) * | 1973-06-27 | 1978-10-25 | Bioresearch Sas | Double salts of s-adenosyl-l-methhionine |
| FR2275220A1 (fr) * | 1974-06-21 | 1976-01-16 | Merieux Inst | Procede d'obtention de sels organiques de la s.adenosyl-l-methionine. nouveaux sels organiques obtenus des medicaments comprenant un ou plusieurs nouveaux sels obtenus |
| AR221676A1 (es) * | 1974-07-12 | 1981-03-13 | Bioresearch Sas | Procedimiento para la preparacion de sales estables sulfonicas y/o sulfuricas de la s-adenosil-l-metionina,particularmente utiles como donadores especificos de metilo para las reacciones bioquimicas de transferencia del grupo ch3;asi como tambien las reacciones fundamentales en el metabolismo lipilico,protilico y glucidico |
| DE2646269A1 (de) * | 1975-10-16 | 1977-04-28 | Yamasa Shoyu Kk | Stabilisierte s-adenosyl-l-methionin- zubereitung und verfahren zur herstellung derselben |
| JPS53107485A (en) * | 1977-02-28 | 1978-09-19 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Preparation of s-adenosyl-l-methionine salt |
| GB2001976B (en) * | 1977-08-03 | 1982-03-10 | Yamasa Shoyu Kk | S-adenosyl-l-methionine compositions and production thereof |
| JPS5699499A (en) * | 1980-01-10 | 1981-08-10 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Composition containing s-adenosyl-l-methionine, and its preparation |
| IT1137640B (it) * | 1981-08-24 | 1986-09-10 | Bioresearch Srl | Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo |
| IT1137892B (it) * | 1981-08-24 | 1986-09-10 | Bioresearch Srl | Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo |
| IT1139974B (it) * | 1981-09-11 | 1986-09-24 | Bioresearch Srl | Derivati della s-adenosilmetionina,processo per la preparazione e composizioni terapeutiche che li contengono come principio attivo |
| GB2116172B (en) * | 1982-02-25 | 1986-07-09 | Nippon Zeon Co | Microbial cells containing s-adenosyl methionine in high concentrations and process for production of s adenosyl methionine |
-
1983
- 1983-08-24 IT IT22622/83A patent/IT1169773B/it active
-
1984
- 1984-08-01 AT AT84109109T patent/ATE31550T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-01 DE DE8484109109T patent/DE3468234D1/de not_active Expired
- 1984-08-01 EP EP84109109A patent/EP0141914B1/en not_active Expired
- 1984-08-02 US US06/637,051 patent/US4621056A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-08-03 CA CA000460362A patent/CA1223535A/en not_active Expired
- 1984-08-22 MX MX8411264U patent/MX7625E/es unknown
- 1984-08-22 FI FI843315A patent/FI77043C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-23 AU AU32328/84A patent/AU569107B2/en not_active Ceased
- 1984-08-23 ES ES535378A patent/ES535378A0/es active Granted
- 1984-08-23 KR KR1019840005106A patent/KR900009054B1/ko not_active Expired
- 1984-08-23 NO NO843366A patent/NO159669C/no unknown
- 1984-08-23 DK DK402884A patent/DK162240C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-08-24 JP JP59175326A patent/JPS6070097A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU3232884A (en) | 1985-02-28 |
| KR850001750A (ko) | 1985-04-01 |
| NO843366L (no) | 1985-02-25 |
| ATE31550T1 (de) | 1988-01-15 |
| FI77043C (fi) | 1989-01-10 |
| DK402884D0 (da) | 1984-08-23 |
| IT8322622A0 (it) | 1983-08-24 |
| JPS6070097A (ja) | 1985-04-20 |
| EP0141914A1 (en) | 1985-05-22 |
| EP0141914B1 (en) | 1987-12-23 |
| AU569107B2 (en) | 1988-01-21 |
| JPH0421478B2 (no) | 1992-04-10 |
| DE3468234D1 (en) | 1988-02-04 |
| DK162240C (da) | 1992-03-02 |
| IT8322622A1 (it) | 1985-02-24 |
| KR900009054B1 (ko) | 1990-12-17 |
| FI843315A0 (fi) | 1984-08-22 |
| US4621056A (en) | 1986-11-04 |
| MX7625E (es) | 1990-03-27 |
| IT1169773B (it) | 1987-06-03 |
| DK402884A (da) | 1985-02-25 |
| ES8506044A1 (es) | 1985-06-16 |
| FI77043B (fi) | 1988-09-30 |
| CA1223535A (en) | 1987-06-30 |
| ES535378A0 (es) | 1985-06-16 |
| FI843315A7 (fi) | 1985-02-25 |
| NO159669C (no) | 1989-01-25 |
| DK162240B (da) | 1991-09-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO159669B (no) | Fremgangsmaate for isolering av stabile sulfo-adenosyl-l-methioninsalter. | |
| FI81381C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av stabila sulfoadenosyl-l-metionin (same)-salter. | |
| AU2020279483B2 (en) | Purification of oligosaccharides from a fermentation broth by using filtration | |
| JP4777588B2 (ja) | （ｓｓ，ｒｓ）−ｓ−アデノシル−ｌ−メチオニンの薬剤として許容される塩の調製方法 | |
| US20050242032A1 (en) | Method of desalting | |
| AU2001265848A1 (en) | Process for the preparation of pharmaceutically acceptable salts of (SS,RS)-S-adenosyl-L-methionine | |
| Drost-Hansen et al. | Temperature effects in membrane phenomena | |
| JPS62126193A (ja) | Ｌ−ラムノ−スの製造方法 | |
| DE60022960T2 (de) | Verfahren für die Aufreinigung von S-Adenosyl-L-methionin und für die Herstellung von pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon | |
| DE3141030C2 (no) | ||
| CN109234330A (zh) | 一种食用级葡萄糖的连续生产方法 | |
| EP0075262A2 (de) | Verfahren zur Herstellung von 5'-Ribonucleotiden | |
| CN113881725B (zh) | 一种电渗析制备1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法 | |
| JPH01215293A (ja) | エリスリトールの分離・回収方法 | |
| CA1155112A (en) | Process for the purification of glucosaminoglucans | |
| CN116023419B (zh) | 一种高纯度丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法 | |
| DE3329218C2 (de) | Verfahren zur Reinigung von S-Adenosyl-L-methionin | |
| CN206447882U (zh) | 阿莫西林合成母液中手性对羟基苯甘氨酸的回收装置 | |
| Ferreira et al. | Salt pan brine water sulphated polysaccharides retrieved at pilot scale: Ability to stimulate in vitro human macrophages and salmon head kidney cells | |
| CN117756656B (zh) | 一种药用无水甜菜碱的制备方法 | |
| CN118126099A (zh) | 一种d-核糖的制备方法 | |
| CN121796944A (zh) | 一种东革阿里的低温连续萃取工艺 | |
| CH655016A5 (de) | Verfahren zum einengen einer waessrigen loesung eines beta-lactam-antibiotikums. | |
| DE4142489A1 (de) | Ein nadp-abhaengiger proteinkatalysator (enzym) von definierter struktur zur redoxreaktion an cyclitolen, ketocyclitolen und cyclolactolen | |
| CZ100897A3 (cs) | Způsob přípravy a výroby dihydroxyacetonu |