NO176523B - Fremgangsmåte for fremstilling av tricykloforbindelsen FR-900523 - Google Patents
Fremgangsmåte for fremstilling av tricykloforbindelsen FR-900523 Download PDFInfo
- Publication number
- NO176523B NO176523B NO900194A NO900194A NO176523B NO 176523 B NO176523 B NO 176523B NO 900194 A NO900194 A NO 900194A NO 900194 A NO900194 A NO 900194A NO 176523 B NO176523 B NO 176523B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- streptomyces
- strain
- agar
- substance
- ifo
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 241000187391 Streptomyces hygroscopicus Species 0.000 claims description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 claims description 10
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 37
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 37
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 17
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 16
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 16
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 16
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 13
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 13
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 12
- 241000946837 Kitasatospora misakiensis Species 0.000 description 11
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 11
- 241001058051 Streptomyces glebosus Species 0.000 description 11
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 8
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 8
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 8
- 241000970280 Streptomyces antimycoticus Species 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 6
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 241001647839 Streptomyces tsukubensis Species 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 5
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 5
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 5
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 5
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 4
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 4
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 4
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 4
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 4
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 4
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 4
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 4
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 4
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 4
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 4
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 3
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 3
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 3
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 3
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 2
- 241000958270 Kitasatospora aburaviensis Species 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 2
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- OZECDDHOAMNMQI-UHFFFAOYSA-H cerium(3+);trisulfate Chemical compound [Ce+3].[Ce+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O OZECDDHOAMNMQI-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 2
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 2
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- CFZGEMKIQUVTCC-UHFFFAOYSA-N octacos-18-ene-2,3,10,16-tetrone Chemical compound CCCCCCCCCC=CCC(=O)CCCCCC(=O)CCCCCCC(=O)C(C)=O CFZGEMKIQUVTCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KVNYFPKFSJIPBJ-UHFFFAOYSA-N ortho-diethylbenzene Natural products CCC1=CC=CC=C1CC KVNYFPKFSJIPBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Inorganic materials [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 2
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 2-aminopurine Chemical compound NC1=NC=C2N=CNC2=N1 MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100456322 Mus musculus Nr3c2 gene Proteins 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 239000006159 Sabouraud's agar Substances 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000970273 Streptomyces avellaneus Species 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 150000001868 cobalt Chemical class 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N dimagnesium;dioxido-bis[[oxido(oxo)silyl]oxy]silane Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[O-][Si](=O)O[Si]([O-])([O-])O[Si]([O-])=O GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- -1 etc) Chemical compound 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005243 fluidization Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000391 magnesium silicate Substances 0.000 description 1
- 229940099273 magnesium trisilicate Drugs 0.000 description 1
- 229910000386 magnesium trisilicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019793 magnesium trisilicate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av en hittil ukjent tricykloforbindelse med farmakologisk aktivitet.
Mer spesifikt angår oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av en hittil ukjent tricykloforbindelse som har farmakologisk aktivitet, så som immunosuppressiv aktivitet, antibikrobiell aktivitet og lignende.
Ett formål med den foreliggende oppfinnelse er følgelig å fremstille den hittil ukjente tricykloforbindelse som er nyttig til behandling og forebyggelse av motstandsdyktighet ved transplantasjon, "graft-versus-host11 -sykdommer ved knokkelmarg-transplantasjon, autoimmune sykdommer, infeksjons-sykdommer lignende.
Med hensyn til den foreliggende oppfinnelse skal det bemerkes at den utspringer fra og er basert på erkjennelsen av visse hittil ukjente spesifikke forbindelser, stoffene FR-900506 og FR-900523. Nærmere bestemt ble stoffene FR-900506 og FR-900523 først isolert i ren form fra dyrkningsvæsker som ble frembragt ved fermentering av hittil ukjente arter som hører til slekten Streptomyces.
Som et resultat av omfattende undersøkelser til belysning av de kjemiske strukturer av stoffene FR-900506 og FR-900523 har det lykkes nærværende oppfinnere å bestemme deres kjemiske struktur og å fremstille tricykloforbindelsen med formel I.
Den hittil ukjente tricykloforbindelsen fremstilt ifølge oppfinnelsen har nedenstående formel I
Den omhandlede tricykloforbindelse med formel I kan ifølge oppfinnelsen fremstilles ved følgende fremgangsmåte:
I) Fermenteringsprosesser:
Streptomyces Fermentering \ FR-900523 hygroscopicus subsp.
yakushimaensis, FERM BP-928
eller mutanter derav med de
samme vesentlige morfologiske og
biokjemiske egenskaper.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen for fremstilling av tricykloforbindelsen med formel I forklares nærmere nedenfor.
I) Fermenteringsprosess
Stoffet FR-900523 fremstilles ved i et næringsmedium å fermentere Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nummer 7238.
Mikroorganismen
Nærmere opplysninger om den mikroorganisme som anvendes til fremstilling av stoffet FR-900523, er anført nedenfor.
Den mikroorganisme som kan anvendes for fremstilling av stoffet FR-900523 er stammen Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nummer 7238 som nylig er blitt isolert fra en jordprøve innsamlet i Yakushima, Kagoshima Prefecture, Japan.
En lyofilisert prøve av den nylig isolerte Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nummer 7238 er deponert i Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology (No. 1-3, Higashi 1-chome, Yatabemachi, Tsukuba-gun, Ibaraki Prefecture, Japan) under deponerings-nummeret FERM P-8043 (deponeringsdato 12. januar 1985) og er derefter den 19. oktober 1985 blitt konvertert til deponering i henhold til Budapest-traktaten hos samme deponerings-myndighet under det nye deponeringsnummer FERM BP-928.
Det er klart at fremstillingen av det hittil ukjente stoff FR-900523 ikke er begrenset til anvendelsen av den bestemte organisme som er beskrevet her og som kun er anført som eksempel. Oppfinnelsen angår også anvendelsen av alle mutanter med de samme vesentlige morfologiske og biokjemiske egenskaper som er i stand til å produsere stoffet FR-900523, herunder både naturlige mutanter og kunstige mutanter som kan fremstilles ut fra den beskrevne organisme ved konvensjonelle metoder så som røntgenbestråling, ultrafiolett bestråling, behandling med N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin, 2-amino-purin og lignende.
Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nr. 7238 har følgende morfologiske, kulturmessige, biologiske og fysiologiske egenskaper.
1) Morfologiske egenskaper:
Til denne taksonomiske undersøkelse ble det hovedsaklig benyttet de metoder som er beskrevet av Shirling og Gottlieb (E.B. Shirling og D. Gottlieb, "Methods for characterization of Streptomyces species", International Journal of Systematic Bacteriology 16, 1966, s. 313-340).
Morfologiske iakttakelser ble foretatt med lys- og elektronmikroskoper på kulturer som var dyrket ved 3 0°C i 14 dager på havremelsagar, gjær/maltekstraktagar og uorganiske salter/stivelsesagar. De modne sporoforer var moderat korte og dannet Retinaculiaperti og spiraler med ca. 20 sporer i hver kjede. Det såes hygroskopisk sporemasse i luft-myceliet på havremelsagar og uorganiske salter/stivelsesagar. Overflate-uregelmessigheter på sporene var en mellomting mellom meget korte, tykke pigger og vorter.
2) Kulturkj ennetegn:
Kulturkjennetegn ble observert på ti medier som beskrevet av Shirling og Gottlieb (loe. eit.) og av Waksmann (S.A. Waksman, The Actinomycetes, bind 2, "Classification, identification and description of genera and species", The Williams and Wilkins Co. Baltimore, 1961).
Inkubasjon ble utført ved 3 0"C i 14 dager. De ved denne undersøkelse anvendte farvenavn er basert på Guide to Color Standard (manual utgitt av Nippon Shikisai Kenkyusho, Tokyo). Kolonier hørte til den grå farveserie når de ble dyrket på havremelsagar, gjær/maltekstraktagar og uorganiske salter/- stivelsesagar. Det ble ikke dannet oppløselig pigment i de undersøkte medier. Resultatene er vist i tabell 1.
Cellevegganalysen ble foretatt i henhold til de av Becker et al., samt Yamaguchi beskrevne metoder (B. Becker, M.P. Lechevalier, R.E. Gordon og H.A. Lechevalier, "Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates", Appl. Microbiol. 12, 1964, s. 421-423, og T. Yamaguchi, "Comparison of the cell wall composition of morphologically distinct Actinomycetes",
J. Bacteriol. 89, 1965, s. 444-453). Analyse av helcelle-hydrolysater av stamme nr. 7238 viste tilstedeværelse av LL-diaminopimelinsyre. Følgelig antas celleveggen hos denne stamme å være av type I.
3) Biologiske og fysiologiske egenskaper.
De fysiologiske egenskaper hos stamme nr. 7238 ble bestemt i henhold til de av Shirling og Gottlieb beskrevne metoder som er nevnt ovenfor. Resultatene er vist i tabell 2.. Tempera tur-område og optimal temperatur for vekst ble bestemt på gjær/ maltekstraktågar under anvendelse av en temperaturgradient-inkubator (fremstilt av Toyo Kagaku Sangyo Co., Ltd.). Temperaturområdet for vekst var 18-36°C med en optimal temperatur på 28°C. Stivelseshydrolyse og gelatin-væskedannelse var positive. Det ble ikke dannet noe melanoidpigment.
Utnyttelsen av karbonkilder ble undersøkt i henhold til
de av Pridham og Gottlieb beskrevne metoder (T.G. Pridham og D. Gottlieb, "The utilization of carbon compounds by some Actinomycetales as an aid for species determination",
J. Bacteriol. 56, 1948, s. 107-114). Veksten ble iakttatt efter 14 dagers inkubasjon ved 3 0°C.
Karbonkilde-utnyttelsen hos denne stamme er vist summarisk i tabell 6. D-glukose, sakkarose, laktose, maltose, D-trehalose, inositol, inulin og salicin kunne utnyttes av stamme nr. 7238.
Symboler:
+ = utnyttelse
= tvilsom utnyttelse
- = ingen utnyttelse
Mikroskopundersøkelser og analyse av celleveggsammensetningen i stamme nr. 7238 viser at denne stamme tilhører slekten Streptomyces Waksman og Henrici 1943.
Følgelig ble det foretatt en sammenligning av denne stamme med forskjellige Streptomyces-arter i lys av de offentlig-gjorte beskrivelser (International Journal of Systematic Bacteriology 18, 1968, s. 69-189 og 279-392, og 19, 1969 s. 391-512 samt Bergey<1>s Manual of Determinative Bacteriology,
8. utgave 19 74) .
Som et resultat av sammenligningen anses stamme nr. 7238 for å ligne Streptomyces antimycoticus Waksman 19 57 og Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus Ohmori et al., 1962. Kulturkjennetegnene for stamme nr. 7238 ble derfor ytterligere sammenlignet med de tilsvarende stammer Streptomyces antimycoticus IFO 12839 og Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13 786 som vist i tabell 1, 2 og 3 ovenfor. Ut fra ytterligere sammenligninger kunne stamme nr. 7238 skjelnes fra Streptomyces antimycoticus IFO 12839 og Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 på følgende punkter.
i) Forskjell fra Streptomyces antimycoticus IFO 12839
Kulturkjennetegnene for stamme nr. 7238 er forskjellige fra Streptomyces antimycoticus IFO 12839 på gjær/maltekstrakt-agar, glukose/asparaginagar, glycerol/asparaginagar, potet/ dekstroseagar og tyrosinagar.
Med hensyn til karbonkilde-utnyttelse kan stamme nr. 7238 utnytte maltose, hva Streptomyces antimycoticus IFO 12839 ikke kan. Dessuten kan stamme nr. 7238 ikke utnytte glycerol, D-fruktose, rhamnose, raffinose, D-galaktose, D-mannose, mannitol og natriumsuccinat, mens Streptomyces antimycoticus IFO 128 39 kan utnytte dem.
ii) Forskjell fra Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786
Kulturkjennetegnene for stamme nr. 7238 er forskjellige fra Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13 786 på gjær/maltekstraktagar, potet/dekstroseagar og tyrosinagar.
Melkepeptonisering er negativ for stamme nr. 7238 men er positiv for Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786. Stamme nr. 7238 kan vokse i nærvær av 7 % NaCl, mens derimot Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 1378 6 ikke kan vokse under samme betingelser.
Med hensyn til karbonkilde-utnyttelse kan stamme nr. 7238 utnytte laktose, inulin og salicin, mens Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 ikke kan utnytte dem.
Stamme nr. 7238 kan ikke utnytte glycerol, D-xylose, D-fruktose, raffinose, D-galaktose, D-mannose, mannitol og natriumsuccinat men Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 kan utnytte dem.
Stamme nr. 7238 danner imidlertid hygroskopisk sporemasse
i luftmyceliet på havremelsagar og uorganiske salter/stivelses-agar, og videre er de morfologiske og kulturmessige kjennetegn for stamme nr. 7238 meget lik kjennetegnene for Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 1378 6. Derfor anses stamme nr. 7238 for å tilhøre Streptomyces hygroscopicus, men stamme nr. 7238 er forskjellig fra Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786, selv om denne kjente stamme er den som ligner stamme nr. 7238 mest av Streptomyces hygroscopicus-underartene. Ut fra ovennevnte fakta anses stamme nr. 7238 for å være en ny art av Streptomyces hygroscopicus og har fått betegnelsen Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis subsp. nov. under henvisning til den jord som ble innsamlet i Yakushima og fra hvilken organismen er isolert.
Fremstilling av stoffet FR-900523.
Det hittil ukjente stoff FR-900523 fremstilles ved å
dyrke stammen Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nr. 7238 FERM BP-928 i et vandig næringsmedium som inneholder kilder til assimilerbart karbon og nitrogen, fortrinnsvis under aerobe betingelser (f.eks. rystekultur, submers kultur, etc) .
De foretrukne karbonkilder i næringsmediet er karbo-hydrater så som glukose, sakkarose, laktose, glycerol, stivelse, dekstrin og lignende. Andre kilder som kan inkorporeres er maltose, D-trehalose, inositol, inulin, salicin og lignende.
De foretrukne nitrogenkilder er gjærekstrakt, pepton, glutenmel, bomullsfrømel, soyabønnemel, maisstøpevæske, tørr-gjær, hvetekim, fjærmel ("feather meal"), jordnøttpulver, etc. samt uorganiske og organiske nitrogenforbindelser så som ammoniumsalter (f.eks. ammoniumnitrat, ammoniumsulfat, ammoniumfosfat, etc), urinstoff, aminosyrer og lignende.
Karbon- og nitrogen-kildene behøver ikke, selv om de med fordel anvendes i kombinasjon, å bli anvendt i sin rene form, da mindre rene materialer som inneholder spor av vekstfaktorer og betydelige mengder mineralske næringsstoffer også er egnet til anvendelse. Hvis det ønskes, kan det til mediet settes mineralsalter så som natrium- eller kalsium-karbonat, natrium-eller kalium-fosfat, natrium- eller kalium-klorid, natrium-eller kalium-jodid, magnesiumsalter, kobbersalter, koboltsalt og lignende. Hvis det er nødvendig, især hvis dyrkningsmediet skummer meget, kan det tilsettes et antiskummiddel så som flytende parafin, en fet olje, vegetabilsk olje, mineralolje eller silikon.
Submerse aerobe dyrkningsbetingelser foretrekkes som betingelser for fremstillingen av stoffene FR-900520 og FR-900523 i store mengder. Til produksjon i små mengder anvendes en ryste- eller overflate-kultur i en kolbe eller flaske. Når dyrkningen utføres i store tanker foretrekkes det videre å anvende den vegetative form av organismen til inokulering i produksjonstankene for å unngå forsinket vekst under produk-sjonen av stoffet FR-900523. Det er således ønskelig først å fremstille et vegetativt inokulum av organismen ved inokulasjon av en. relativt liten mengde dyrkningsmedium med sporer eller mycelier av organismen, og dyrke dette inokulerte medium, og derefter overføre det dyrkede vegetative inokulum aseptisk til store tanker. Det medium, i hvilket det vegetative inokulum fremstilles, er i det vesentlige det samme som, eller er forskjellig fra, det medium som anvendes til fremstilling av stoffet FR-900523.
Agitasjon og luftning av dyrkningsblandingen kan foretas på flere forskjellige måter. Agitasjon kan foretas med en rører eller et lignende mekanisk agitasjonsutstyr, ved å dreie eller ryste fermenteringsbeholderen, med forskjellig pumpe-utstyr eller ved å lede steril luft gjennom mediet. Luftning kan utføres ved å lede steril luft gjennom fermenterings-blandingen.
Fermenteringen utføres vanligvis ved en temperatur på ca. 20-40°C, fortrinnsvis 25-35°C, i ca. 50-150 timer, hvilket kan varieres avhengig av fermenteringsbetingelsene og -måle-stokken .
Det således fremstilte stoffet FR-90052 3 kan isoleres fra dyrkningsmediet ved konvensjonelle metoder som vanligvis anvendes til isolering av andre kjente biologisk aktive stoffer. Det fremstilte stoffet FR-900523 finnes hovedsakelig i det dyrkede mycelium, følgelig kan stoffet FR-900523 isoleres og opprenses fra myceliet, som fås efter filtrering eller sentrifugering av dyrkningsvæsken, ved en vanlig metode så som konsentrasjon under redusert trykk, lyofilisering, ekstraksjon med et vanlig oppløsningsmiddel, pH-innstilling, behandling med en vanlig harpiks (f.eks. anion- eller kation-bytterharpiks, ikke-ionisk adsorpsjonsharpiks, etc), behandling med et vanlig adsorbent (f.eks. aktivt kull, kisel-syre, silikagel, cellulose, aluminiumoksyd, etc), krystalli-sasjon, omkrystallisasjon og lignende.
Stoffet FR-900523 kan især fraskilles ved å oppløse de materialer som inneholder begge produkter fremstillet ved fermentering i et hensiktsmessig oppløsningsmiddel så som etylacetat, n-heksan og lignende, hvorefter denne oppløsning underkastes kromatografi, f.eks. på silikagel i en kolonne med et hensiktsmessig organisk oppløsningsmiddel, så som etylacetat og n-heksan eller en blanding derav. Det således fra-skilte stoff FR-900523 kan opprenses ytterligere ved en konvensjonell metode, f.eks. omkrystallisasjon, re-kromatografi, høytrykks-væskekromatografi og lignende.
Stoffet FR-900523
1) Form og farve:
Farveløse nåler
2) Elementæranalyse:
C, 64,57; H, 8,24; N, 1,81
3) Farvereaksjon:
Positiv: ceriumsulfatreaksjon, svovelsyrereaksjon,
Ehrlich-reaksjon, Dragendorff-reaksjon og jod-dampreaksj on.
Negativ: ferrikloridreaksjon og ninhydrinreaksjon.
4) oppløselighet:
Oppløselig: metanol, etanol, aceton, etylacetat,
kloroform, dietyleter og benzen.
Tungt oppløselig: n-heksan og petroleter
Uoppløselig: vann.
5) Smeltepunkt: 152-154"C.
6) Spesifikk dreiningsevne: [oc]q<3>= -73,0° (c = 0,65 i CHCl-j) .
7) Ultrafiolett absorbsjonsspektrum: Totalabsorbsjon.
8) Infrarødt absorbsjonsspektrum (CHCl^): vmaks <=>
3670, 3580, 3510, 2930, 2875, 2825, 1745, 1722, 1700, 1647, 1450, 1380, 1350, 1330, 1307, 1285, 1170, 1135, 1090, 1050, 1030, 1000, 990, 978, 960, 930, 915, 888, 870 og 850 cm"<1>.
9) <i>3C-NMR-spektrum (CDCl3): (ppm) =
213,82 (s) + 213,32 (s), 196,31 (s) + 193,34 (s), 168,96 (s) + 168,85 (s), 164,84 (s) + 165,98 (s), 137,80 (s) + 138,41 (s), 132,89 (s) + 131,96 (s), 129,62 (d) + 130,03 (d) , 124,51 (d) + 124 ,84 (d) , 97,13 (s) + 98,67 (s) , 84,38 (d), 76,69 (d) + 78,06 (d), 75,45 (d) + 76,91 (d) , 73, 89 (d) + 73,70 (d) , 73,70 (d) , 73,09 (d) + 72,84 (d) , 70,40 (d) + 69,24 (d) , 56,75 (d) + 52,89 (d) , 56,93 (g) + 57,43 (q), 56,61 (q) + 56,56 (q) , 56,24 (q) + 55,94 (q) , 48,58 (t) + 48,32 (t) , 47,14 (d) + 47,38 (d) , 40,23 (d) + 40,65 (d) , 27,85 (t) + 26,32 (t) , 26,48 (d) + 26,64 (d) , 24,68 (t), 21,33 (t) + 20,83 (t), 20,63 (q) + 19,77 (q), 16,24 (q) + 16,34 (q) , 15,70 (q) + 15,96 (q) , 15,51 (q) + 15,96 (q), 14,31 (q) + 14,18 (q), 9,64 (q) + 10,04 (q) ,
hvilket spektrum er vist i fig. 1.
10) <1>H-NMR-spektrum: er vist i fig. 2. 11) Tynnskiktkromatografi:
12) Stoffets egenskap: nøytralt stoff.
Med hensyn til stoffet FR-900523 skal det bemerkes at hva angår målinger av 13C- og ^-H-NMR-spektre, viser stoffet signalpar ved forskjellige kjemiske skift-verdier, og at det ved måling ved tynnskiktkromatografi og høytrykks-væske-kromatografi viste henholdsvis en enkelt flekk ved tynn-skiktkromatograf i og en enkelt topp ved høytrykks-væske-kromatografi.
Ut fra ovenstående fysiske og kjemiske egenskaper og den tidligere vellykkede bestemmelse av stoffet FR-900506's kjemiske struktur, kunne det bestemmes at stoffet FR-900523 har følgende kjemiske struktur:
1,14-dihydroksy-12-[2-(4-hydroksy-3-metoksycykloheksyl)-1-metylvinyl]-2 3,25-dimetyoksy-13,19,17,21,27-pentametyl-li ,28-dioksa-4-azatricyklo[22.3.1.04'9]oktacos-18-en-2,3,10,16-tetraon.
Tricykloforbindelsen med formel I har farmakologisk aktivitet så som immunosuppressiv aktivitet, antimikrobiell aktivitet og lignende og er derfor nyttig til behandling og forebyggelse av resistens ved transplantasjon av organer eller vev, så som hjerter, nyrer, lever, ryggmarg, hud, etc., "graft-versus-host"-sykdommer ved ryggmargstransplantasjon autoimmune sykdommer så som revmatoid artritt, systemisk lupus erythematosus, Hashimotos thyroiditis, disseminert sclerose, myastenia gravis, type I diabetes, uveitis, etc, infeksjons-sykdommer som er forårsaket av patogene mikroorganismer og lignende.
Som eksempler til påvisning av slike formakologiske aktiviteter er det i det følgende angitt noen farmakologiske testdata for tricykloforbindelsen.
Test 1
Undertrykkelse forårsaket av tricykloforbindelsene I ved in vitro blandet lymfocytt-reaksjon (MLR)
MLR-testen ble utført på mikrotiterplater hvor hver brønn inneholder 5 x IO<5> C57BL/6-responder-celler (H-2<b>), 5 x IO<5 >mitomycin C-behandlede (25 jug/ml mitomycin C ved 37°C i 30 minutter og vasket 3 ganger med RPMI 1640-medium) BALB/C-stimulatorceller (H-2<d>) i 0,2 ml RPMI 1640-medium beriket med 10% føtalt kalveserum, 2 mM natriumhydrogenkarbonat, 50 enheter/ml penicillin og 50 /ig/ml streptomycin. Cellene ble inkubert ved 37°C i en fuktig atmosfære med 5% karbondioksyd og 95% luft i 68 timer og radioaktivt merket med 0,5 iiCi <3>H-thymidin 4 timer før isolering av cellene. Den omhandlede forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen, ble oppløst i etanol og ytterligere fortynnet i RPMI 164 0-medium og satt til kulturene, hvilket ga sluttkonsentrasjoner på 0,1 ug/ml eller derunder.
Resultatene er vist i tabell 4. Tricykloforbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen undertrykte muse-MLR.
Test 2
Antimikrobiell aktivitet av tricykloforbindelsen I
Den antimikrobielle aktivitet av tricykloforbindelsen I mot forskjellige fungi ble bestemt ved en agar-serie-for-tynningsmetode i en Sabouraud-agar. Minimale inhiberende konsentrasjoner (MIC) ble uttrykt som nq/ ml efter inkubasjon ved 30°C i 24 timer.
Tricykloforbindelsen fremstilt ifølge den foreliggende oppfinnelse utviste antimikrobiell aktivitet mot fungi, f.eks. Aspergillus fumigatus IFO 5840 og Fusarium oxysporum IFO 5942, hvilket er vist i nedenstående tabell 5.
Et farmasøytisk preparat inneholdende tricykloforbindelsen (I) fremstilt ifølge oppfinnelsen kan f.eks. være i fast, halvfast eller flytende form, som inneholder tricykloforbindelsen I fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse, som aktiv bestanddel i blanding med en organisk eller uorganisk bærer eller excipiens som er egnet til ekstern, enteral eller parenteral anvendelse. Den aktive bestanddel kan f.eks. være blandet med vanlige ikke-toksiske, farmasøytisk godtagbare bærere for tabletter, pellets, kapsler, suppositorier, oppløsninger, emulsjoner, suspensjoner og en hvilken som helst annen form som er egnet til anvendelse. De bærere som kan anvendes er vann, glukose, laktose, akasie-gummi, gelatin, mannitol, stivelsespasta, magnesiumtrisilikat, talkum, maisstivelse, keratin, kolloidalt silisiumdioksyd, potetstivelse, urinstoff og andre bærere som er egnet til anvendelse ved fremstilling av preparater i fast, halvfast eller flytende form, og dessuten kan det anvendes hjelpe-stoffer, stabilisatorer, fortykningsmidler, farvestoffer og parfymer. Den aktive forbindelse inkorporeres i det farma-søytiske preparat i en mengde som er tilstrekkelig til å fremkalle den ønskede virkning på sykdommens forløp eller pasientens tilstand.
Til administrasjon av dette preparat til mennesker, foretrekkes det å administrere det parenteralt eller enteralt. Selv om dosen av den terapeutisk virksomme mengde av tricykloforbindelsen I varierer med, og også avhenger av, alderen og tilstanden av hver enkelt pasient som skal behandles, gis det generelt en daglig dose på ca. 0,01 - 1000 mg, fortrinnsvis 0,1 - 500 mg og især 0,5 - 100 mg, av den aktive bestanddel til behandling av sykdommer, og det administreres generelt en gjennomsnittlig enkeltdose på ca. 0,5 mg, 1 mg,
5 mg, 10 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg og 500 mg.
Oppfinnelsen belyses nærmere ved nedenstående referanser og eksempler.
Referanse 1
Isolering av Streptomyces tsukubaensis nr. 9993.
Streptomyces tsukubaensis nr. 9993 ble isolert under anvendelse av fortynningsplate-teknikker som beskrevet i det følgende.
Ca. 1 g jord, som var samlet inn i Toyosato-cho, Tsukuba Gun, Ibaraki Prefecture, Japan, ble satt til et sterilt reagensglass og volumet ble bragt opp på 5 ml med sterilt vann. Blandingen ble derefter grundig blandet i 10 sekunder med en rørformet vibrator og blandingen fortsattes i 10 minutter. Supernatanten ble suksessivt fortynnet 100 ganger med sterilt vann. Den fortynnede oppløsning (0,1 ml) ble utplatet på Czapek-agar beriket med thiamin-hydroklorid (30 g sakkarose, 3 g natriumnitrat, 1 g dikalumfosfat, 0,5 g magnesiumsulfat, 0,5 g kaliumklorid, 0,01 g ferrosulfat, 0,1 g thiamin-hydroklorid, 20 g agar, 1000 ml ledningsvann; pH-verdi 7,2) i en Petri-skål. De voksende kolonier som utviklet seg på platene efter 21 dagers inkubasjon ved 30°C, ble overført til skråagar [gjær/maltekstraktagar (ISP-medium 2)] og ble dyrket i 10 dager ved 30°C. Blant de isolerte kolonier kunne det finnes Streptomyces tsukubaensis nr. 9993.
Streptomyces tsukubaensis nr. 9993 har følgende morfologiske, kulturmessige, biologiske og fysiologiske egenskaper: 1) Morfologiske egenskaper
De metoder som er beskrevet av Shirling og Gottlieb (E.B. Shirling og D. Gottlieb "Methods for characterization of Streptomyces species", International Journal of Systematic Bacteriology 16, 1966, s. 313-340), ble i hovedsaken anvendt til denne taksonomiske undersøkelse.
Morfologiske iakttakelser ble foretatt med lys- og elektron-mikroskoper på kulturer som var dyrket ved 30°C i 14 dager på havremelsagar, gjær/maltekstraktagar og uorganiske salter/stivelsesagar. De modne sporoforer dannet Rectiflexi-biles med 10-50 eller over 50 sporer i hver kjede. Sporene var avlange eller sylindriske, 0,5-0,7 x 0,7-0,8 /xm i størrelse, bestemt ved elektronmikroskopisk observasjon. Sporeoverflåtene var glatte.
2) Kulturkjennetegn
Kulturkjennetegn ble observert på ti slags medier som beskrevet av Shirling og Gottlieb nevnt ovenfor, samt av Waksman (S.A. Waksman, The Actinomycetes, bind 2, "Classification identification and description of genera and species", The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1961).
Inkubasjon ble utført ved 30°C i 14 dager. De ved denne undersøkelse anvendte farvenavn er basert på Guide to Color
Standard (manual utgitt av Nippon Shikisai Kenkyusho, Tokyo). Koloniene tilhørte den grå farveserie når de ble dyrket på havremelsagar, gjær/maltekstraktagar og uoroganiske salter/- stivelsesagar. Det ble dannet oppløselig pigment i gjær/malt-ekstraktagar men ikke i andre medier. Resultatene er anført i tabell 6.
Cellevegganalyse ble foretatt i henhold til de av Becker
et al., samt Yamaguchi beskrevne metoder (B. Becker, M.P. Lechevalier, R.E. Gordon og H.A. Lechevalier, "Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates", Appl. Microbiol, 12, 1964, s. 421-423, og T. Yamaguchi, "Comparison of the cell wall composition of morphologically distinct Actinomycetes", J. Bacteriol. 89, 1965, s. 444-453). Analyse av helcelle-hydrolysater av stamme nr. 9993 viste tilstedeværelsen av LL-diaminopimelinsyre. Følgelig antas celleveggen på denne stamme å være av type I.
3) Biologiske og fysiologiske egenskaper
De fysiologiske egenskaper hos stamme nr. 9993 ble bestemt
i henhold til de av Shirling og Gottlieb beskrevne metoder som er nevnt ovenfor. Resultatene er vist i tabell 7. Temperatur-område og optimal temperatur for vekst ble bestemt på gjær/- maltekstrakt-agar under anvendelse av en temperaturgradient-inkubator (fremstilt av Toyo Kagaku Sangyo Co., Ltd).
Temperaturområdet for vekst var 18-3 5°C med en optimal temperatur på 28°C. Melkepeptonisering og gelatin-væskedanrielse var positive. Melanoidpigment-dannelse var negativ.
Utnyttelsen av karbonkilder ble undersøkt i henhold til de av Pridham og Gottlieb beskrevne metoder (T.G. Pridham og D. Gottlieb, "The utilization of carbon compounds by some Actinomycetales as an aid for species determination", J. Bacteriol. 5_6, 1948, 2. 107-1 14). Veksten ble iakttatt efter
14 dagers inkubasjon ved 30°C.
Karbonkilde-utnyttelsen hos denne stamme er vist summarisk i tabell 8. Glycerol, maltose og natriumsuccinat kunne utnyttes av stamme nr. 9993. Endvidere ble også iakttatt tvilsom utnyttelse av D-glukose, sakkarose, D-mannose og salicin.
Mikroskopundersøkelser og analyse av celleveggsammensetningen hos stamme nr. 999 3 viser at denne stamme tilhører slekten Streptomyces Waksman og Henrici 1943.
Følgelig ble det foretatt en sammenligning av denne stamme med forskjellige Streptomyces-arter i lys av de offentlig-gjorte beskrivelser (International Journal of Systematic Bacteriology 18, 1968, s. 69-189 og 279-392, og 19, 1969, s. 391-512, samt Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. utgave 1974) .
Som et resultat av sammenligningen anses stamme nr. 9993 for å ligne Streptomyces aburaviensis Nishimura et al., Streptomyces misakiensis Nakamura. Kulturkjennetegnene for stamme nummer 9993 ble derfor sammenlignet med de tilsvarende stammer Streptomyces aburaviensis IFO 12830, Streptomyces avellaneus IFO 13451 og Streptomyces misakiensis IFO 12891. Som et resultat herav lignet stamme nummer 999 3 Streptomyces misakiensis IFO 12891 mest. Stamme nummer 9993 ble derfor ytterligere sammenlignet med Streptomyces misakiensis IFO 12891 som vist i tabell 6,7 og 8 ovenfor. Ut fra ytterligere sammenligninger kunne stamme nummer 9993 skjelnes fra Streptomyces misakiensis IFO 12891 på følgende punkter, hvorfor stamme nummer 9993 anses for å være en hittil ukjent Streptomyces-art som har fått betegnelsen Streptomyces tsukubaensis sp. nov., idet der henvises til den jord som ble innsamlet i Tsukuba-gun, hvorfra organismen er isolert.
Forskjell fra Streptomyces misakiensis IFO 12891.
Kulturkjennetegn for stamme nummer 9993 er forskjellige fra Streptomyces misakiensis IFO 12891 på havremelsagar, gjær/malt-ekstraktagar, glukose/asparagin-agar, Czapek-agar og potet/dekstrose-agar.
Stivelseshydrolyse forårsaket av stamme nummer 9993 er negativ, men er positiv for Streptomyces misakiensis IFO 12891.
Gelatin-væskedannelse forårsaket av stamme nr. 9993 er positiv, men er negativ for Streptomyces misakiensis IFO 12891.
Med hensyn til karbonkilde-utbyttelse kan stamme nummer 9993 utnytte glycerol, maltose og natriumsuccinat, men Streptomyces misakiensis IFO 12891 ikke kan utnytte dem. Dessuten kan stamme nr. 9993 ikke utnytte D-galaktose og inulin, mens derimot Streptomyces misakiensis IFO 12891, kan utnytte dem.
Fermentering
Et dyrkningsmedium på 160 ml inneholdende 1% glycerol, 1% oppløselig stivelse, 0,5% glukose, 0,5% bomullsfrømel, 0,5% tørrgjær, 0,5% maisstøpevann og 0,2% kalsiumkarbonat (innstillet på pH 6,5) ble helt i hver av 20.500 ml Erlen- . meyerkolber og sterilisert ved 120°C i 30 minutter. En podeøye-full skråagarkultur av Streptomyces tsukubaensis nummer 9993, FERM BP-927 ble inokulert i hvert av mediene og dyrket ved 30°C i 4 dager på et roterende rysteapparat. Den resulterende kultur ble inokulert i et medium på 150 1 inneholdende 4,5% oppløselig stivelse, 1% maisstøpevann, 1% tørr-gjær, 0,1% kalsiumkarbonat og 0,1% Adekanol™ (antiskummiddel fremstilt av Asahi Denka Co) i en 2 00 liters krukke-fermentor som på forhånd var blitt sterilisert ved 120°C i 20 minutter, og kulturen ble dyrket ved 30°C i 4 dager under lufting med 150 l/minutt og omrysting ved 250 omdr./minutt.
Isolering og opprensning
Den således oppnådde dyrkningsvæske ble filtrert ved hjelp av 5 kg diatoméjord. Myceliekaken ble ekstrahert med 50 1 metanol, hvilket ga 50 1 ekstrakt. Metanolekstrakten fra myceliet og filtratet ble kombinert og ledet gjennom en 10 liters kolonne av en ikke-ionisk adsorbsjonsharpiks (Diaion™ HP-20, fremstilt av Mitsubishi Chemical Industries Ltd.). Efter vask med 30 1 vann og 30 1 vandig metanol ble det utført eluering med metanol. Eluatet ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga 2 1 restvann. Dette residuum ble ekstrahert med 2 1 etylacetat. Etylacetatekstrakten ble konsentrert under redusert trykk til et oljeaktig residuum. Det oljeaktige residuum ble blandet med en to ganger så stor vektmengde sur silikagel (spesiell silikagel, kvalitet 12, fremstilt av Fuji Devison Co), og denne blanding ble oppslemmet i etylacetat. Efter avdampning av oppløsningsmidlet ble det resulterende tørre pulver underkastet kolonnekromatografi på 800 ml av den samme sure silikagel som var pakket med n-heksan. Kolonnen ble eluert med 3 1 n-heksan, en blanding av n-heksan og etylacetat (9:1 vol/vol, 3 1 og 4:1 vol/vol, 3 1) og 3 1 etylacetat. Fraksjonene inneholdende den ønskede forbindelse ble oppsamlet og konsentrert under redusert trykk til et oljeaktig residuum. Det oljeaktige residuum ble oppløst i en blanding av n-heksan og etylacetat (1:1 vol/vol, 3 0 ml) og underkastet kolonnekromatografi på 500 ml silikagel (.fremstilt av Merck & Co., Ltd., 0,063-0,037 mm) pakket med samme oppløsningsmiddel-system.
Det ble utført eluering med en blanding av n-heksan og etylacetat (1:1 vol/vol, 2 1 og 1:2 vol/vol, 1,5 1). Fraksjoner inneholdende den første omhandlede forbindelse ble oppsamlet og konsentrert under redusert trykk til en gulaktig olje. Det oljeaktige residuum ble blandet med to ganger sin vekt av sur silikagel og denne blanding ble oppslemmet i etylacetat. Efter avdampning av oppløsningsmidlet ble det resulterende tørre pulver kromatografert på sur silikagel som var pakket og eluert med n-heksan. Fraksjoner inneholdende den ønskede forbindelse ble oppsamlet og konsentrert under redusert trykk, hvilket ga 1054 mg rått FR-900506-stoff i form av et hvitt pulver.
100 mg av dette råprodukt ble underkastet høytrykks-væskekromatografi. Det ble utført eluering under anvendelse av en kolonne (diameter 8 x 500 mm) med Lichrosorb™ SI 60 (fremstilt Merck & CO.) som bærer. Denne kromatografi ble overvåket med en UV-detektor ved 230 nm og den mobile fase var en blanding av metylenklorid og dioksan (85:15 vol/vol) med en strømningshastighet på 5 ml/minutt. De aktive fraksjoner ble oppsamlet og inndampet. Høytrykks-væskekromatografi ble gjentatt og dette ga 14 mg av det rensede FR-900506-stoff i form av et hvitt pulver.
Fysiologiske og kjemiske egenskaper hos stoff FR-900506.
Det ved ovenstående fremgangsmåte fremstilte stoffet FR-900506 har følgende fysiske og kjemiske egenskaper: FR-900506
1) Form og farve:
Hvitt pulver
2) Elementæranalyse
Beregnet: C, 64,72; H, 8,78; N, 1,59
Funnet: C, 64,59; H, 8,74; N, 1,62
3) Farvereaksjon:
Positiv: ceriumsulfatreaksjon, svovelsyrereaksjon, Ehrlich-
reaksjon, Dragendorff-reaksjon og joddampreaksjon.
Negativ: ferrikloridreaksjon, ninhydrinreaksjon og Molish-reaksjon.
4) Oppløselighet:
Oppløselig: metanol, etanol, aceton, etylacetat, kloroform,
dietyleter og benzen.
Tungt oppløselig: heksan, petroleter.
Uoppløselig: vann
5) Smeltepunkt: 85-90°C
6) Spesifikk dreiningsevne: [a]^<3>= -73° (c = 0,8 i CHC13).
7) Ultrafiolett absorbsjonsspektrum: Totalabsorbsjon
8) Infrarødt absorbsjonsspektrum (CHCl3): <v>maks<=><3>680, 3580, 3520, 2930, 2870, 2830, 1745, 1720, 1700, 1645, 1450, 1380, 1350, 1330, 1310, 1285, 1170, 1135, 1090, 1050, 1030, 1000, 990, 960 (skulder) og 918 cm"<1>.
<9*><13>C-NMR-spektrum (CDCl3): 6 (ppm)= ;212,59 (s) + 212,45 (s), 196,18 (s) + 192,87 (s), 169,07 (s) + 168,90 (s) , 164,90 (s) + 166,01 (s) , 138,89 (s) + 139,67 (s), 135,73 (d) + 135,60 (d), 132,52 (s) + 131,99 (s), 130,27 (d) + 130,21 (d) , 122,87 (d) + 123,01 (d) , 116,57 (t) + 116,56 (t), 97,35 (s) + 98,76 (s), 84,41 (d) 77,79 (d) + 78,22 (d) , 75,54 (d) + 76,97 (d) , 73,93 (d) + 73,09 (d), 73,72 (d) + 72,57 (d), 70,05 (d) + 69,15 (d), 56,75 (d) , 53,03 (d) + 53,13 (d), 48,85 (t) + 48,62 (t) , 40,33 (d) + 40,85 (d), 39,40 (t), 31,58 (t), 30,79 (t), 27,72 (t) + 26,34 (t), 26,46 (d), 24,65 (t), 20,45 (q) ;+ 19,73 (q), 14,06 (q) + 14,23 (q), 9,69 (q) + 9,98 (q), hvilket spektrum er vist i fig. 3. ;1<0>* <1>H-NMR-spektrum er vist i fig. 4.
11) Tynnskiktkromatografi:
12) Stoffets egenskap: nøytralt stoff.
Med hensyn til stoffet FR-9 00506 skal det bemerkes at hva angår målinger av 13 C- og 1H-NMR-spektre, oppviste stoffet signalpar ved forskjellige kjemiske skift-verdier.
Det således karakteriserte stoff FR-9 00506 har følgende ytterligere egenskaper: i) Målinger av <13>C-NMR-spektre ved 25°C og 60°C viste at intensiteten av hvert par av de forskjellige signaler deri ble forandret.
ii) Målinger av tynnskiktkromatografi og høytrykks-væskekromato-grafi viste at stoffet FR-9 00506 forekommer som henholdsvis en enkelt flekk ved tynnskiktkromatografi og en enkelt topp ved høytrykks-væskekromatografi.
Dette hvite pulver av stoffet FR-900506 kunne omdannes til krystallform ved omkrystallisasjon fra acetonitril, hvilke krystaller har følgende fysiske og kjemiske egenskaper:
1) Form og farve:
Farveløse prismer.
2) Elementæranalyse:
Beregnet: C, 64,30; H, 8,92; N, 1,77
Funnet: C, 64,20; H, 8,86; N, 1,72.
3) Smeltepunkt: 127-129°C.
4) Spesifikk dreiningsevne:[a]^<3>= -84,4° (c = 1,02 i CHCl3).
5) <13>C-NMR-spektrum (CDCl3) 5 (ppm)=
211,98 (s) + 211,74 (s), 196,28 (s) + 193,56 (s), 168,97
(s) + 168,81 (s), 164,85 (s) + 165,97 (s), 138,76 (s) + 139,51 (s), 135,73 (d) + 135,63 (d) , 132,38 (s) + 131,90 (s) , 130,39 (d) + 130,17 (d), 122,82 (d) + 122,96 (d),
116,43 (t) , 97,19 (s) + 98 , 63 (s) , 84 ,29 (d) , 77,84 (d) + 78,21 (d), 77,52 (d) + 76,97 (d), 69,89 (d) + 69,00 (d), 56, 63 (d) + 54,87 (d) , 52,97 (d) + 52,82 (d) , 48,76 (t) + 48,31 (t), 40,21 (d) + 40,54 (d), 31,62 (t), 30,72 (t), 24,56 (t), 21,12 (t) + 20,86 (t), 20,33 (q) + 19,74 (q), 16,17 (q) + 16,10 (q), 15,88 (q) + 15,75 (q), 13,89 (q) + 14,05 (q), 9,64 (q) + 9,96 (q),
hvilket spektrum er vist i fig. 5.
6) -iH-NMR-spektrum: er vist i fig. 6.
Andre fysiske og kjemiske egenskaper, dvs. farvereaksjon, oppløselighet, UV-spektrum, IR-spektrum, tynnskiktkromatografi og egenskap hos de farveløse prismer av stoffet FR-900506, var de samme som egenskapene hos det hvite pulver av stoffet under identiske betingelser.
Ut fra ovenstående fysiske og kjemiske egenskaper og røntgendiffraksjonsanalyse, kunne det bestemmes at stoffet FR-900506 har følgende kjemiske struktur:
17- allyl-1,14-dihydroksy-12-[2-(4-hydroksy-3-metoksy-cykloheksyl)-1-metylvinyl]-23,25-dimetoksy-13,19,21,27-tetrametyl-11,28-dioksa-4-azatricyklo[22.3.1.0 4 ' 9]oktacos-18- en-2,3,10,16-tetraon.
Eksempel 1
Isolering av Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nummer 72 38
Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nummer 72 38 ble isolert under anvendelse av fortynningsplate-teknikker som beskrevet i det følgende.
Ca. lg jord, som var innsamlet i Yakushima, Kagoshima, Prefecture, Japan, ble satt til et sterilt reagensglass og volumet ble brakt opp på 5 ml med sterilt vann. Blandingen ble derefter grundig blandet i 10 sekunder med en rørformet vibrator og blandingen ble fortsatt i 10 minutter. Supernatanten ble suksessivt fortynnet 100 ganger med sterilt vann. Den fortynnede oppløsning (0,1 ml) ble utplatet på Czapek-agar tilsatt thiamin-hydroklorid (30 g sakkarose, 3 g natriumnitrat, 1 g dikaliumfosfat, 0,5 g magnesiumsulfat,
0,5 g kaliumklorid, 0,01 g ferrosulfat, 0,1 g thiamin-hydroklorid, 2 0 g agar, 1000 ml ledningsvann; pH-verdi 7,2) i en Petri-skål. De voksende kolonier som utviklet seg på platene efter 21 dagers inkubasjon ved 30°C ble overført til skråagar [gjær/maltekstraktagar (ISP-medium 2)] og ble dyrket i 10 dager ved 30°C. Blant de isolerte kolonier kunne det finnes Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nr. 7238.
Fermentering
Et dyrkningsmedium på 160 ml inneholdende 1% glycerol, 1% oppløselig stivelse, 0,5% glukose, 0,5% bomullsfrømel, 0,5% tørrgjær, 0,5% maisstøpevann og 0,2% kalsiumkarbonat (innstilt på pH 6,5) ble helt i hver av 20 500 ml Erlenmeyerkolber og sterilisert ved 12CC i 3 0 minutter. En podeøye-full skråagarkultur av Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis nr. 7238, FERM BP-928 ble inokulert i hvert av mediene og dyrket ved 30°C i 4 dager på et roterende rysteapparat. Den resulterende kultur ble inokulert i et medium på 150 1 inneholdende 4,5% glukose, 1% maisstøpevæske, 1% tørr-gjær, 1% glutenmel, 0,5% hvetekim, 0,1% kalsiumkarbonat og 0,1% Adekanol™ (antiskummiddel fremstilt av Asahi Denka Co) i en 200 liters krukke-fermentor som på forhånd var blitt sterilisert ved 120°C i 2 0 minutter, og kulturen ble dyrket ved 30°C i 4 dager under luftning med 150 l/minutt og omrysting ved 250 omdr./minutt.
Isolering og opprensning
Den således utvundne dyrkningsvæske ble filtrert ved
■hjelp av 5 kg diatoméjord. Myceliekaken ble ekstrahert med 50 1 aceton, hvilket ga 50 1 ekstrakt. Acetonekstrakten fra myceliet og filtratet (135 1) ble kombinert og ledet gjennom en 10 liters kolonne av en ikke-ionisk adsorpsjonsharpiks (Diaion™ HP-20, fremstilt av Mitsubishi Chemical Industries Ltd.). Efter vask med 30 1 vann og 30 1 vandig aceton ble det utført eluering med aceton. Eluatet ble inndampet under redusert trykk, hvilket ga 2 1 restvann. Dette residuum ble ekstrahert med 4 1 etylacetat. Etylacetatekstrakten ble konsentrert under redusert trykk til et oljeaktig residuum. Det oljeaktige residuum ble blandet med en to ganger så stor vektmengde sur silikagel (spesiell silikagel, kvalitet 12, fremstilt av Fuji Devison Co.), og denne blanding ble oppslemmet i et etylacetat. Efter avdamping av oppløsnings-midlet ble det resulterende tørre pulver underkastet kolonnekromatografi på 800 ml av den samme sure silikagel, som var pakket med n-heksan. Søylen ble eluert med 3 1 n-heksan, en blanding av n-heksan og etylacetat (4:1 vol/vol, 3 1) og 3 1 etylacetat. Fraksjonene inneholdende stoffene FR-900520 og FR-900523 ble oppsamlet og konsentrert under redusert trykk til et oljeaktig residuum. Det oljeaktige residuum ble oppløst i en blanding av n-heksan og etylacetat (1:1 vol/vol, 50 ml) og underkastet kolonnekromatografi på 1000 ml silikagel (fremstilt av Merck & Co., Ltd., 0,210-0,063 mm) pakket med samme oppløsningsmiddelsystem. Det ble utført eluering med en blanding av n-heksan og etylacetat (1:1 vol/vol, 3 1 og 1:2 vol/vol, 3 1) og 3 1 etylacetat. Fraksjoner inneholdende de ønskede forbindelser ble oppsamlet og konsentrert under redusert trykk, hvilket ga 4,5 g av et gulaktig pulver. Dette
pulver ble oppløst i 20 ml metanol og blandet med 10 ml vann. Blandingen ble kromatografert på 500 ml reversfase-silikagel YMC™ (0,250-0,074 mm, fremstilt av Yamamura Chemical Institute), som var pakket og eluert med en blanding av metanol og vann (4:1 vol/vol).
Det ble utført kromatografi på reversfase-silikagel, og de resulterende fraksjoner inneholdende stoffet FR-900523 ble .oppsamlet og konsentrert under redusert trykk, hvilket ga 0,51 g råprodukt av FR-900523-stoff i form av et blekgult pulver. Dette råprodukt ble oppløst i 3 ml acetonitril og utsatt for 70 ml reversfase-silikagel YMC™ som var pakket og eluert med en blanding av acetonitril, tetrahydrofuran og 50 mM fosfatbufferoppløsning (pH 2,0) (3:2,5 vol/vol). Fraksjoner inneholdende den ønskede forbindelse ble oppsamlet og ekstrahert med etylacetat. Denne ekstrakt ble konsentrert under redusert trykk, hvilket ga 190 mg av gulaktig-hvitt pulver. Det gulhvite pulver ble igjen kromatografert på reversfase-silikagel YMC™, hvilket ga 80 mg av et hvitt pulver. Dette hvite pulver ble oppøst i en liten mengde dietyleter og fikk stå natten over ved romtemperatur hvilket ga 56 mg krystaller. Omkrystallisasjon av dietyleter ga 34 mg FR-900523-stoff i form av farveløse nåler.
Claims (1)
- Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse FR-900523med formel Ikarakterisert ved at Streptomyces hygroscopicus subsp. yåku shimaensis, FERM BP-928 eller mutanter derav med de samme vesentlige morfologiske og biokjemiske egenskaper dyrkes i et vandig næringsmedium inneholdende kilder for assimilerbart karbon og nitrogen, fortrinnsvis under aerobe betingelser, og stoffet FR-900523 utvinnes på konvensjonell måte.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO900194A NO176523C (no) | 1985-02-05 | 1990-01-15 | Fremgangsmåte for fremstilling av tricykloforbindelsen FR-900523 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB858502869A GB8502869D0 (en) | 1985-02-05 | 1985-02-05 | Ws 7238 substances |
| NO85854833A NO168372C (no) | 1984-12-03 | 1985-12-02 | Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive tricykloforbindelser |
| NO900194A NO176523C (no) | 1985-02-05 | 1990-01-15 | Fremgangsmåte for fremstilling av tricykloforbindelsen FR-900523 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO900194L NO900194L (no) | 1986-06-04 |
| NO900194D0 NO900194D0 (no) | 1990-01-15 |
| NO176523B true NO176523B (no) | 1995-01-09 |
| NO176523C NO176523C (no) | 1995-04-19 |
Family
ID=26288765
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO90900195A NO169074C (no) | 1985-02-05 | 1990-01-15 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive tricykloforbindelser |
| NO900194A NO176523C (no) | 1985-02-05 | 1990-01-15 | Fremgangsmåte for fremstilling av tricykloforbindelsen FR-900523 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO90900195A NO169074C (no) | 1985-02-05 | 1990-01-15 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive tricykloforbindelser |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| NO (2) | NO169074C (no) |
-
1990
- 1990-01-15 NO NO90900195A patent/NO169074C/no not_active IP Right Cessation
- 1990-01-15 NO NO900194A patent/NO176523C/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO900194D0 (no) | 1990-01-15 |
| NO176523C (no) | 1995-04-19 |
| NO900195D0 (no) | 1990-01-15 |
| NO169074B (no) | 1992-01-27 |
| NO169074C (no) | 1992-05-06 |
| NO900195L (no) | 1986-06-04 |
| NO900194L (no) | 1986-06-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR930010705B1 (ko) | Fr-900520 물질의 제조방법 | |
| EP0349061A2 (en) | Immunosuppressant agent | |
| JPH0338276B2 (no) | ||
| US4987139A (en) | FK-520 microbial transformation product | |
| US4975372A (en) | Microbial transformation product of L-683,590 | |
| US5221625A (en) | Cyclcic FR-900520 microbial biotransformation agent | |
| US5494820A (en) | Streptomyces braegensis strain and its cultivation in a process for producing C9 -desoxo-FK-520 | |
| NO176523B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av tricykloforbindelsen FR-900523 | |
| EP0403242A1 (en) | New L-683,590 microbial transformation product | |
| US5252612A (en) | Microbial immunosoppressant agent | |
| US5283183A (en) | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent | |
| EP0478235A2 (en) | A directed biosynthesis for an immunomycin derivative | |
| US5268370A (en) | Microbial transformation product of L-679,934 | |
| US5290689A (en) | New cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent | |
| US5268282A (en) | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent | |
| US5268281A (en) | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent | |
| EP0378320A2 (en) | Microbial transformation product | |
| CA2007678A1 (en) | Microbial transformation product of l-679,934 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |