NO763076L - - Google Patents

Description

Denne oppfinnelse vedrører orgoteinderivater.

Orgotein er trivialnavnet som navnerådet nedsatt i

U.S.A. har tildelt medlemmer av en familie av vannbppløselige protein-congenere i ialt vesentlig ren, injiserbar form, dvs.

ialt vesentlig fri for andre proteiner som er sammenblandet

med eller forbundet med dem i deres kilder. U.S. patentskrift nr. 3.758.682 har krav på farmasøytiske blandinger som om-

fatter orgotein. Forskjellige anvendelse av orgotein er om-handlet i U.S. patentskrifter nr. 3.637.441, 3.773.928, 3.773.929

og 3.781.414.

Orgotein-metallproteinene er medlemmer av en familie

av protein-congenerer som har en karakteristisk kombinasjon av fysikalske, kjemiske, biologiske og farmakodynamiske egen-

skaper. Hver av disse congenerer er fysikalskkarakterisert vedat de er en isolert, ialt vesentlig ren form av et kuleformet, buffer-virkende og vannoppløselig protein som har en sterkt kompakt naturlig struktur, hvilken, selv om den er varme-labil,

er stabil ved oppvarming i flere minutter ved 65°C ved pH 4-10. Kjemisk er hver av demkarakterisert vedå inneholde alle unntatt 0-2 av protein-aminosyrene, en liten prosentdel karbohydrat, ingen lipider, 0,1 til 1,0 % av metall tilveiebrakt av 1 til 5 grara-atomer pr. mol av ett eller flere chelaterte toverdige metaller som har en ione-radius på 0,60 til 1,00 Å, og ialt vesentlig ingen chelaterte enverdige metaller eller slike som er celle-gifter i molekylet.

I 1969 ble det oppdaget at storfe-congenerehe av orgotein-protein var et enzym som har evne til å katalysere destrueringen av superoksydradikaler i en misdannelse til molekylært oksygen og hydrogenperoksyd. Proteinet ble tildelt: navnet superoksyd-dismutase (SOD) på grunn av denne enzymatiske aktivitet, av McCord, J.M. og Pridovich, I., J. Biol. Chem. 244, 6049-6055

(1969).

Undersøkelser foretatt med 99MTc merket orgotein be-

viser at orgotein holdes i blodet i bare kort tid etter intra-venøs administrasjon. For eksempel ble i virkeligheten all radioaktivitet funnet konsentrert i nyrene innen 15 minutter etter intravenøs administrasjon. En lignende om enn mindre dramatisk oppsamling av orgoteinet i nyrene foregår også etter subkutan injeksjon. I kliniske tilfeller hvor det er ønskelig med en flerhet av injeksjoner av orgotein, for eksempel ved reumatoid artritt eller andre kroniske inflammasjonstilfeller,

er det ønskelig å holde orgoteinet i kroppsvæskene så lenge som mulig

Det har nå blitt funnet at orgotein som er tverrbundet

med seg selv eller med serum- eller vev-protein har en mye

lenger, for eksempel 3-10 ganger så lang, serum-halveringstid enn f"^ orgoteinet selv.

Et aspekt ved denne oppfinnelse, med hensyn til en blanding, vedrører oppløselig, injiserbart, tverrbundet orgotein. I følge et annet aspekt vedrørende blanding, vedrører oppfinnelsen oppløselig, injiserbart orgotein som er tverrbundet til et injiserbart serum- eller vev-protein.

I henhold til et annet aspekt vedrører denne oppfinnelse farmasøytiske blandinger som er tilpasset parenteral administrasjon, og som i blanding ned en farmasøytisk akseptabel bærer omfatter et tverrbundet orgotein eller orgotein som er tverrbundet til et serum- eller vev-protein i henhold til denne oppfinnelse.

Med hensyn til fremgangsmåté-aspekter, så vedrører denne oppfinnelse fremgangsmåter for fremstilling av de nye blandinger i henhold til denne oppfinnelse og metoder for å anvende dem.

Det var overraskende å oppdage at den sterkt Økede molekylvekt som erholdes ved tverrbindingen, ikke hadde noen skadelig virkning på den farmakodynamiske aktivitet, innbefattet anti-inflammatorisk aktivitet, til orgoteinet.

Når uttrykket "tverrbundet" brukes her, menes at et orgotein-molekyl er knyttet til minst ett annet orgotein-molekyl eller til minst ett injiserbart serum- eller vev-protein-molekyl ved en eller flere brodannende grupper. Det nøyaktige antall med brodannende grupper er ikke kritisk så lenge vannoppløseligheten beholdes. Orgoteinet er fortrinnsvis tverrbundet med gjennom-snittlig 1-5 brodannende grupper, og mest foretrukket med 1.

Den eksakte kjemiske natur til den brodannende gruppe er ikke kritisk og den kan være ikke-funksjonell men vanligvis inne-, holder den en eller flere rester av de funksjonelle grupper som

er til stede i tverrbindingsmidlet, for eksempel karbonyl. Den brodannende gruppe er fortrinnsvis rettkjedet og har en molekylvekt på mindre enn ca. 200. Det er spesielt foretrukket med brodannende grupper som er hydrokarbon, unntatt to rester i deres æ- og u> -stillinger av de to funksjonelle grupper på tverrbindingsmidlet som omsettes med proteinet for å oppnå tverr-binding.

Det er en stor mengde med tverrbindingsmidler som er egnet I til å tverrbinde orgotein med seg selv eller med serum-albumin. Med hensyn til omtale av disse, se for eksempel Finn Wold i C.H.W. Hirs (utgiver), "Methoda in Enzymology"» Vol. XI, s. 617-640

(1967), og G.E. Means, R.E. Feeney, "Chemical Modification of

Proteins", s. 39-42 (1971), og det henvises her til disse publi-kasjoner.

De følgende er eksempler på egnede tverrbindingsmidler:

diisocyahater s diisotiocyanater: (tilsvarende de ovennevnte) diimidoestere:

bis(p-nitrofenyl)disyre-diestere s

dialdehyders HOC-(CH2)n-C0H hvor n = 1 til 6, spesielt glutaraldehyd.

André er 1,5-difluor-2,4-dinitrobenzen, p,p'-difluor-m,ra',dinitrodifenylsulfon, dimetyl-adipimidat, fenol-2,4-disulfonyl-klorid, formaldehyd, Woodward's reagens K og bisdiazobenzidin.

Hvilket som helst injiserbart serum- eller vev-protein som er ikke-antigent og injiserbart, kan anvendes for å danne orgotein tverrbundet med protein. På grunn av at antigeniteten delvis er avhengig av de dyre-arter hvorfra proteinet er erholdt, dvs. protein erholdt fra en art som er forskjellig fra den mottagende pasient, kan være aniigenisk i varierende grad, og på grunn av at mennesker er en foretrukket gruppe pasienter for terapi med orgotein, erholdes de foretrukne proteiner fra mennesker. Imidlertid er proteiner fra andre pattedyr-arter,

for eksempel fra hester, kuer, hunder, katter, etc, nyttige

for fremstilling av tverrbundne produkter av orgotein-protein,

og de er spesielt egnet for terapi i disse respektive dyr. Selv om det er foretrukket med protein fra samme art som den til-tenkte pasient som utgangsmateriale, så er det ikke absolutt nødvendig at man anvendes samme art av proteiner, eiden det vanligvis er en antigenisk respons innen tolererbare grenser.

Foretrukne grupper med injiserbare proteiner er injiserbare, oppløselige globulin- og albumin-proteiner. Av disse er serum-albumin spesielt foretrukket.

Et eksempel på albumin fra mennesker som er egnet som utgangsmateriale for tverrbindings-prosessen av orgotein-albuminet i henhold til denne oppfinnelse, er stabile blodplasma protein-fraksjoner fra mennesker. Stabile plasraa-protein-fraksjoner er slike som overlever ved opp til SO°C i opp til 10 timer og som karakteristisk ialt overveiende grad består av albumin pluss små mengder av Of- og /3-g lobu liner.

En foretrukket gruppe av slike utgangsmaterialer er en ikke-homogen plasma, protein-fraksjon, for eksempel den som erholdes fra "Supernatant IV-1" ved utfeining med etanol (Cohn Method 6 prosess), hvilken protein-fraksjon har blitt rekonstituert til en 5 %-ig oppløsning (inneholdende NaCl og en stabilisator, for eksempel acetyltrypofan og/eller natriumkaprylat) og så oppvarmet til 60°C i 10 timer for å Ødelegge hepatitt-virus. Denne stabile plasma-protein-fraksjon er beskrevet i japansk p. 265.704 og U.S. p. 2.958.628. En annen gruppe med utgangsmaterialer er opp-løsninger av plasma-protein-fraksjoner som har blitt oppvarmet til ca. 60°C i kortere tidsperioder, for eksempel mellom ca. 2 og 10 timer, og disse kan også brukes.

Et annet egnet utgangsmateriale er det oppløselige albumin som erholdes ved ekstraksjon av moderkake fra mennesker med 1 % saltoppløsning og som deretter fortrinnsvis varme-behandles som beskrevet ovenfor. Med hensyn til ytterligere be skrivelse av slike utgangsmaterialer, se U.S. patentskrift nr. 3.376.775.

På grunn av sannsyningheten av at antigene effekter øker med økende molekylvekt, har de tverrbundne orgoteiner fortrinnsvis en molekylvekt på opp til 500.000, mer foretrukket opp til 200.000 og mest foretrukket opp til 100.000. Når to orgotein-molekyler blir tverrbundet sammen, er molekylvekten av det tverrbundne produkt tilnærmet 65.000. Når tre orgotein-molekyler eller ett orgotein og ett serura-albumin-molekyi blir

tverrbundet sammen, er molekylvekten til det tverrbundne produkt ca. 98.000. Når to molekyler med orgotein blir tverrbundet med et enkelt molekyl med serum-albumin, er molekylvekten ca. 131.000. I hvert tilfelle avhenger de eksakte verdier av molekylvektene av albuminet og av restene på tverrbindingsmidlet som danner den tverrbindende bro.

Molekyl-forholdet mellom orgotein og annet injiserbart serum- eller vev-protein kan bestemmes ved å bestemme den til-nærmede molekylvekt ved gelkromatografering eller ved annen kjent metode for bestemmelse av molekylvekten for proteiner og ved å bestemme innholdet av chelatert kobber og/eller sink, siden orgotein er enestående blant proteiner ved at det inneholder begge disse metaller.

De farmasøytiske blandinger i henhold til denne oppfinnelse omfatter et tverrbundet orgotein i henhold til denne oppfinnelse og en farmasøytisk akseptabel bærer. Form og karakter for denne bærer bestemmes selvsagt under hensynstagen til administråsjonsmåten.

. Den farmasøytiske blanding er fortrinnsvis i form av et sterilt injiserbart preparat * for eksempel som en steril injiserbar vandig oppløsning. Oppløsningen kan dannes i henhold til ;kjent teknikk ved anvendelse av slike bærere som nevnt ovenfor. Det sterile injiserbar® preparat kan også være en steril injiserbar oppløsning eller suspensjon i et ikke-toksisk parenteralt akseptabelt fortynningsmiddel eller oppløsningsmiddel, for eksempel 1,3-butandiol. ;Blandingene i henhold til denne oppfinnelse inneholder en effektiv enhetsdosis-mengde av et tverrbundet orgotein i henhold til denne oppfinnelse, og det tverrbundne orgotein er for eksempel til stede i en konsentrasjon som er effektiv til å frem-kalle den ønskede respons når en enhetsdosis av blandingen blir administrert på den måte som er passende for den spesielle farmasøytiske bærer. Flytende blandinger, både topiske og injiserbare^ inneholder for eksempel vanligvis ca. 0,5 til 20 mg me: d tverrbundet orgotein pr. 0,25 til 10 cm 3, fortrinnsvis ca. 0,5 til 5 em unntatt I.V.-infusjons-oppløsninger som også kan være mer fortynnet, for eksempel 0,5 til 20 mg med tverrbundet ;orgotein pr. 50-1.000 ml, fortrinnsvis 100-500 ml, med infusjons-oppløsning. Tabletter, kapsler og suppositorier inneholder vanligvis 0,1 til 25 mg, fortrinnsvis 1 til 10 mg, med tverrbundet orgotein pr. enhet. ;Tverrbundet orgotein blir vanligvis administrert ved inndrypping eller ved injeksjon, for eksempel intramuskulært, subkutant, intravenøst eller intradermalt. X.M. er foretrukket, ;unntatt j. tilfeller som sjokk hvor I .V. hoen ganger foretrekkes;på grunn av. at denne administrasjonsmåte begynner å gi virkning raskere, og ved visse lokaliserte sykdommer., for. eksempel stråling ;eller annen cystitis, hvor lokal injisering, inndrypping og/eller infusjon ofte er mer effektivt. Individuelle dosiser faller ;vanligvis innen området 0,5 til 20 mg. Det foretrukne område er for mennesker ca. 0,5 til 8 mg, og for hester ca. 5,0 10,0 mg. ;Den eksakte dosis er ikke kritisk og avhenger av sykdommens type og alvor. Tverrbundet orgotein er på.samme måte som orgotein effektiv ved behandling av en rekke forskjellige inflamraatoriske tilstander, innbefattet slike hvor syntetiske anti-inflammatoriske midler har begrenset nytte, for eksempel på grunn av toksiske bivirkninger ved langvarig anvendelse» Mer spesielt er tverrbundet orgotein effektivt til å for-bedre inflammatoriske tilstander og mildne virkningene av disse, for eksempel slike som har forbindelse med urin-organene og leddene, i forskjellige pattedyr. De er nyttige til å lindre symptomene av bg de strukturelle misdannelser som er "forbundet ;med post-traumatisk artritt, og reumatoide sykdommer så som bur-sitt, tendonitt, bsteoartritt. ;Med hensyn til ytterligere detaljer vedrørende hvorledes man skal isolere utgangs-orgotein-congenere og hvorledes man skal benytte det tverrbundne orgotein i henhold til denne oppfinnelse, innbefattet administrasjonsmåte, dosisformer, dosis-kurer og også om inflammatoriske og andre tilstander som er mottagelige for behandling med tverrbundet orgotein, se U.S. patentskrift nr. 3.758.682, som ved referanse innlemmes i denne beskrivelse. ;Det antas at en fagmann i industrien, uten ytterligere omstendelig arbeide, ved anvendelse av den forutgående beskrivelse kan benytte foreliggende oppfinnelse i full utstrekning. De følgende foretrukne spesifikke utførelser skal derfor bare betraktes som illustrerende og ikke på noen måte som begrensende fra resten av åpenbarelsen. ;Eksempel 1 - Storfe-orgotein tverrbundet med glutaraldehyd. ;Omsetningen av 0,34 mg storfe-orgotein (1,7 mg/ml) med 0,2 mg glutaraldehyd (0,1 %) i 0,2 ml av 0,01 M NaCl pluss 0,01 M fosfat-buffer-oppløsning med pH 7,5 er fullført innen 15 minutter ved romtemperatur for å gi en blanding av elektroforetisk mer anodiske &bånd 1-6) superokayd-dismutase (SOD)-arter. Produktet er en blanding av uforandret orgotein og orgotein som er tverrbundet ved en arainogruppe til ett eller to andre orgotein-molekyler, og som har molekylvolumer som tilsvarer en molekylvekt på fra ca. 30.000 (uforandret orgotein) til ca. 100.000. Orgoteinet og tverrbundet orgotein-dimer og -trimer blir separert ved gel-kroaratografi ("Sephadex G-200" eller "BioGel A 0,5"). ;Ved å følge fremgangsmåten fra eksempel 1, men ved anvendelse av de tilsvarende orgotein-congenere som stammer fra mennesker, sauer, hester, svin, hunder, kaniner, marsvin og kyllinger som utgangsmateriale, dannes det tverrbundne produkter av disse congenere i hvilke 2 eller 3 orgotein-molekyler er forbundet med hverandre med brodannende glutaraldehyd-rester. Disse dimere og trimere tverrbundne produkter separeres lett ved gel-kromatografi ved anvendelse av "Sephadex G-200". ;Eksempel 2 - Storfe-orgotein tverrbundet til storfe-serum-albumin med glutaraldehyd. ;Ved å følge fremgangsmåten fra eksempel 1 blir storfe-orgotein tverrbundet til krystallinsk storfe-serum-albumin (Miles Laboratories, Pentex Div.) ved omsetning åv en blanding av 1 mg orgotein (1,7 mg/ml), 2 mg storfe-serum-albomin (BSA, 3,3 mg/ml) og 0,6 mg glutaraldehyd (0,1 %) i 0,6 ml av 0,01 M NaCl og 0,01 M fosfat-buffer-oppløsning med pH 7,5. Elektroforese av reaksjonsblandingen viser de samme mer anodiske (SOD) aktive bånd som i eksempel 1, dvs. orgotein tverrbundet med seg selv, pluss et SOD aktivt bånd fra elektroforese med BSA, dvs. orgotein tverrbundet til storfe-serum-albuminet. ;Gel-kromatografering ("Bio-Gel A 0,5") viser at de SOD aktive arter som gir elektroforese med BSA, har et molekyl-volum som ligger mellom det til BSA og det til katalase (m.v. 100.000 - 200.000), og er henholdsvis orgotein som er tverrbundet med ett molekyl av BSA og orgotein som er tverrbundet med to molekyler av BSA, og at glutaraldehyd-orgotein-båndene som er mer anodiske enn orgotein, har et molekyl-volura på opp til flere ganger volumet til naturlig orgotein og svarer til de tverrbundne orgoteiner erholdt i eksempel 1. De forskjellige tverrbundne arter separeres ved gel-kromatografi som beskrevet ovenfor. ;Glutaraldehyd-konsentrasjoner på over 0,5 % gir mer heterogene protein-arter og lavere total SOD aktivitet, og ;dette skyldes trolig sterkere polymerisering og/eller indre-molekylære omsetninger. ;Ved å følge fremgangsmåten ovenfor i eksempel 2, men ved anvendelse av serum-albumin som stammer fra henholdsvis mennesker, sauer, svin, hunder, kaniner, marsvin og kyllinger, for eksempel det varmestabile serum-albumin fra mennesker som er beskrevet ovenfor, i stedet for BSA, erholdes storfe-orgotein-congenere ;som er tverrbundet til det valgte serum-albumin. På samme måte blir orgotein-congenere som stammer fra mennesker, storfe eller andre arter, tverrbundet med globulin fra mennesker, for eksempel gamma-globulin. ;Eksempel 3 - Orgotein tverrbundet med bis-diazobenzidin. ;Diazoniumsalter omsettes med tyrosin-, histidin og lysin-rester slik at et bifunksjonelt diazoniumsalt kan anvendes til å tverrbinde sidekjedegrupper ganske kritikkløst. ;Bis-diazobenzidin b^Lir fremstilt ved diazotering av benzidin-dihydroklorid (33 ml) i 0,15 M HC1 (10 ml) ved 0°C med natriumnitritt (25 mg) i 15 minutter. pH blir hevet til 7-8 med 6 N NaOH og fortynninger av denne 10<-2>M oppløsning blir under hurtig omrøring ved 4°C satt til 2,5 mg/ml med orgotein i 0,025 M fosfat med pH 7,5. ;Ved pH 7,5 og med 2 x 10 -4 M bis-diazobenzidin, ble orgotein-benzidin-oppløsningen sakte rød-brun. ;Gel-filtrering av reaksjonsblandingen med pH 7,5 og;-4 3 ;2 x 10 M bis-diazobenzidin gjennom en 35 cm 's "Bio-Gel A 0,5" kolonne gir en serie med protein-fraksjoner fra en m.v. på 3 x IO<4>opp til det uttømmende volum (m.v.>5 x IO<5>). Mesteparten av den gule farge kommer igjennom ved det uttømmende volum. Elektroforese viser en økning i elektroforetisk mobilitet og minskning i ;4 SOD aktivitet med økende molekyl-volum. Proteinet har i 3 x 10 m.v. ;området en bånd-struktur (bånd 1-8) som ligner svakt modifisert naturlig protein, men artene med høyere molekyl-volumer er elektroforetisk heterogene. Det tverrbundne produkt er en blanding av tverrbundne orgoteiner som består av fra to og ;opp til ca. 10 orgotein-molekyler som er knyttet sammen med brodannende p,p',aminobifenyl-grupper. ;Ved høy pH (9,2) og med bis-diazobenzidin-konsentrasjoner over 2 x 10 -4 M, utfelles orgoteinet som en brunaktig utfeining. På lignende måte utfelies det meste av proteinet ved pH 7,5 og 5,5 x _5 10 M bis-dxazobenzidin-konsentrasjoner. Bis-diazobenzidin polymeriserer således lett orgotein endog ved lavt ( < 3) molart overskudd. Imidlertid forårsaker større overskudd utfelning og tap av SOD aktivitet. ;Ved å følge fremgangsmåten i eksempel 3, men ved anvendelse av en annen orgotein-congener i stedet for storfe-orgotein, for eksempel en congener fra mennesker eller én annen art angitt i eksemplene 1 og 2, erholdes de tilsvarende congenere som er tverrbundet med en bis-diazobenzidin-rest. ;Eksempel 4 - Orgotein tverrbundet med dimetyl-suber-imidat • 2 HC1. ;Storfe-orgotein blir polymerisert med dimetyl-suberimidat ved anvendelse av lignende forhold som dem som ble anvendt av Bartholeyns & Moore, Science, 186, 444-445 (1974) på ribonuclease. ;Graden av den resulterende polymerisering, basert på gel-kroraatografering, varierer fra dimerisering og oppover. Ved å ;øke protein-konsentrasjonen og buffer-konsentrasjonen, økes den gjennomsnittlige polymerisasjonsgrad. ;Det resulterende produkt er således en blanding av tverrbundne orgoteiner som består av fra to og opp til 6 orgotein-molekyler som er forenet med brodannende -NH-(NH2=)C-CH2)g-C(«NH2)-NH-grupper, som kan separeres ved gel-kromatografering ;som beskrevet ovenfor.;Storfe-orgotein (5,5 mg) i 9,5 ml med 0,1 M fosfat-buffer med pH 10 blir omsatt med 0,5 mg dimetyl-suberimidat-dihydroklorid i 1 time ved romtemperatur. pH blir holdt ved 9,8 - 10,0 med 0,1 M NaOH. Reaksjonsblandingen blir eluert gjennom en 35 cm 's "Bio-Gel A 0,5" kolonne med 0,1 M NH^OAc med pH 8 for å stoppe omsetningen etter 1 time og separere proteinet i henhold til størrelse. Mesteparten av proteinet elueres ennu med naturlig orgotein, selv om elektroforese viser en blanding av SOD aktive . bånd (fra -4 til +3). Det gjenværende av proteinet (ca. 1/4 av den totale mengde) elueres ved høyere molekylvekt-posisjoner, hovedsakelig tilsvarende dimér. Protein med høyere molekylvekt ;er fettlignende i bånd-stillingene 1-3 ved elektroforese. ;Eksempel 5 - Orgotein tverrbundet med dimetyl-suberimidat • 2 HC1. På lignende måte som i eksempel 4, blir 20 mg storfe-orgotein omsatt med 0,5 mg dimetyl-suberimidat * 2 HC1 i 0,5 ral med 6,5 M Nå2HP04, justert til pH 10 med 0,1 M NaOH. Etter 1

time ved romtemperatur blir omsetningen stoppet ved tilsetning

av 50 A 6 N NH^OAc. Gel-kromatografering viser at det er lite upolymerisert orgotein, og orgoteinene ér primært trimerene og tetramerene så som beskrevet i eksempel 4.

Ved anvendelse av fremgangsmåten i eksemplene 4 og 5, men ved anvendelse av tilsvarende orgotein-congenere som stammer fra mennesker, sauer, hester, svin, hunder, kaniner, marsvin og kyllinger som utgangsprotein, fremstilles det tverrbundne produkter av disse congenere hvori 5 eller 6 orgotein-molekyler er knyttet sammen med brodannende suberiraidat-rester. Disse diraere, trimere, tetramere, pentamere og heksamere tverrbundne produkter separeres lett ved gel-kromatografi ved anvendelse av "Sephadex G-200"..

De foregående eksempler kan gjentas med lignende suksess ved å innsette de ålment eller spesifikt beskrevne reaktanter og/eller driftsforhold i henhold til denne oppfinnelse i stedet for dem som er anvendt i de foregående eksempler.

Av den foregående beskrivelse kan en fagmann i industrien lett konstantere de vesentlige trekk ved denne oppfinnelse, og kan, utén å avvike fra dens ånd og omfang, gjøre forskjellige for-andringer og modifikasjoner av oppfinnelsen for å avpasse den tii forskjellige anvendelser og forhold.

Claims (21)

1. Vannoppløselig, injiserbart tverrbundet orgotein som har en molekylvekt på opp til 500.000, hvori et orgotein-molekyl er intermolekylært tverrbundet ved minst én organisk brodannende gruppe med minst ett molekyl av et vannoppløselig, injiserbart, ikke-antigent protein.

2. •. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 1, hvori orgoteinet stammer fra storfe. .

3. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 1, hvori det ikke-antigene protein er orgotein.

4. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 3, hvori orgoteinet stammer fra storfe.

5. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 3, som består av 1 til 3 tverrbundne orgotein-molekyler.

6.. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 1, som er tverrbundet med globulin- eller albumin-molekyler.

7. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 6, hvori det ikke-antigene protein er serum-albumin.

8. , Tverrbundet orgotein i henhold til krav 7, hvori albuminet - er serum-albumin fra mennesker.

9. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 6, hvori orgoteinet stammer fra storfe.

10. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 7, hvori et orgotein-molekyl er tverrbundet med 1 eller 2 serum-albumin-molekyler.

11. Tverrbundet orgotein i henhold til krav 8, hvori ett orgotein-molekyl er tverrbundet med ett serum-albumin-molekyl som stammer fra mennesker.

12. Farmasøytisk blanding som omfatter, i blanding med en farmasøytisk akseptabel bærer, en anti-inflamraatorisk effektiv enhetsdosis-mengde av et tverrbundet orgotein i henhold til krav 1.

13. Fremgangsmåte for fremstilling av et vannoppløselig, injiserbart,-tverrbundet orgotein som har en molekylvekt på opp til 500.000, hvori et orgotein-molekyl er intermolekylært tverrbundet ved minst én organisk brodannende gruppe med minst ett molekyl av et vannoppløselig, injiserbart, ikke-antigent protein, karakterisert ved å omsette orgotein eller en blanding av orgotein og et annet vannoppløselig, injiserbart, ikke-antigent protein med et dlfunksjonelt tverrbindingsmiddel som danner en interraolekylesr organisk brodannende gruppe.

14. Fremgangsmåte i henhold til krav 13, hvorved det anvendes orgotein som stammer fra storfe*

15. Fremgangsmåte i henhold til krav 13, hvorved det som det ikke-antigene protein anvendes orgotein.

16. Fremgangsmåte i henhold til krav 15, hvorved det som orgotein anvendes orgotein som stammer fra storfe.

17. Fremgangsmåte i henhold til krav 15, hvorved orgotein blir tverrbundet for å danne 1 til 3 tverrbundne orgotein-molekyler.

18. Fremgangsmåte i henhold til krav 13, hvorved orgotein blir tverrbundet med globulin- eller alburain-arolekyler.

19. Fremgangsmåte i henhold til krav 18, hvorved orgotein blir tverrbundet med serum-albumin.

20. Fremgangsmåte i henhold til krav 19, hvorved orgotein blir tverrbundet med serum-albumin som stammer fra mennesker.

21. Fremgangsmåte i henhold til krav 18, hvorved det anvendes orgotein som stammer fra storfe•