NO790956L - Analogifremgangsmaate til fremstilling av cefalosporinanaloge eller farmasoeytisk akseptable salter derav - Google Patents

Description

Analogifremgangsmåte til fremstilling av cefalosporinanaloge eller farmasoytisk akseptable salter derav.

Foreliggende oppfinnelse vedrorer fremstilling av cefalosporin-analoge, og nærmere bestemt 7-acylamino-l-larba-3-cefem-4-karboksylsyrer med den generelle formel:

hvor

X betyr en acylgruppe med formelen X^CO, hvor X"^ betyr én av fblgende fem grupper:

(l) en cyanmetylgruppe eller en gruppe med formelen:

hvor B betyr en umettet, seksleddet, karbocyklisk gruppe valgt blant cykloheksenyl, cykloheksadienyl og fenyl eller en fem- eller seksleddet, heterocyklisk gruppe, A"<*>"betyr hydrogen, hydroksy, alkoksy med 1-4 ,karbonatomer, halogen, nitro, amino, aminometyl, metylsulfonamido eller acyloksy med 1-4 karbonatomer, n er et helt tall fra 0-5, og A betyr hydrogen, amino, hydroksy, karboksyl eller sulfoksyl,

(2) en gruppe med den generelle formel:

hvor B, A 1 og n har den ovenfor angitte betydning, og A^ 3 og A^ er like eller forskjellige og hver for seg betyr hydrogen, alkyl med 1-4 karbonatomer, en gruppe med den generelle formel -CO-A^, hvor A^ betyr alkyl med 1-4 karbonatomer, eller en gruppe med den generelle formel: hvor A^ og A^ er like eller forskjellige og hver for seg betyr hydrogen, alkyl med 1-4 karbonatomer eller alkalimetall, 3 4 eller og A sammen med nitrogenatomet hvortil de er knyttet, utgjor en gruppe med den generelle formel:

O O f

hvor A og A er like eller forskjellige og hver for seg betyr hydrogen eller alkyl med 1-4 karbonatomer, eller en gruppe med den generelle formel:

hvor kQ J betyr hydrogen, alkyl med 1-4 karbonatomer, metyl-sulfonyl eller furfurylidenimino, og A en » betyr hydrogen eller

alkyl med 1-4 karbonatomer,

(3) en gruppe med den generelle formel:

hvor B, A"1" og n har den ovenfor angitte betydning, og A"^ betyr en substituert arylgruppe eller en mono-, bis- eller tricyklisk heterocyklisk gruppe,

(4) en gruppe med den generelle formel:

hvor B, A"*" og n har den ovenfor angitte betydning, og A"<1>""<*>"betyr hydrogen, alkyl med 1-6 karbonatomer, alkenyl med 2-6 karbonatomer, alkynyl med 2-6 karbonatomer, cykloalkyl med 3-6 karbonatomer eller aryl, hvor gruppene eventuelt er substituert med egnede substituenter valgt blant karboksyl, cyan, halogen, karbamoyl og alkoksykarbonyl med 1-4 karbonatomer, eller (5) en gruppe med den generelle formel:

hvor B"<*>"betyr trifluormetyl, cyanmetyl eller en gruppe med formelen (A<1->)^—B-, hvor B, A<1>og n har den ovenfor angitte betydning, og Z betyr oksygen eller svovel,

R<1>betyr hydrogen eller en karboksylsyrebeskyttende gruppe valgt blant alkyl med 1-5 karbonatomer, halogenert alkyl med 1-5 karbonatomer, arylmetyl med 7-20 karbonatomer, som kan være substituert på fenylringen, substituert silyl og en gruppe, som lett fjernes enzymatisk eller ikke-enzymatisk in vivo, og

R 2betyr hydrogen, alkyl med 1-5 karbonatomer eller acyloksy med 1-5 karbonatomer, eller farmasøytisk akseptable salter derav.

Karbacefem-nomenklaturen henviser til Journal of the American Chemical Society bind 96, 7584, 1974. Hittil har det som karbacefem-forbindelser kun vært kjent slike som her en substituert metylgruppe i 3-stilling, slik som (-)-l-karba-cefalotin med formelen: og noen er rapportert å ha antibakteriell aktivitet (den ovennevnte referanse og J.Med.Chem., 20. 551, (1977)). Som resultat av forskjellige undersøkelser for å tilveiebringe hittil ukjente analoger til cefalosporin med kraftig antibakteriell aktivitet har oppfinnerne i denne sak tidligere gjort den oppfinnelse vedrbrende cefalosporin-analoge med nedenstående generelle formel (II), dvs. 4- eller 5-substi-tuerte karbacefemer (nummereringssystemet i nedenstående formel (II) benyttes i det fblgende); pg salter derav (japansk patentsbknad nr. 34696/78).

"hvori X1 betyr amino, azido eller ftalylimino, R<1>betyr hydro-

gen, halogen, hydroksy, lavere alkoksy, aryloksy, aralkoksy, acyloksy, alkylsulfonyloksy, arylsulfonyloksy, lavere alkyltio, aryltio, aralkyltio, lavere alkylsulfinyl, arylsulfinyl, aral-+ 45 kylsulfinyl, en sulfoniumgruppe med generell formel -S R R ,

4 5

hvor R og R er like eller forskjellige og hver for seg betyr en lavere-alkyl, aryl- eller aralkylgruppe, lavere alkyl-sulf onyl, arylsulfonyl, aralkylsulfonyl, en kvaternær ammoni-umgruppe med den generelle formel N+R^R R®, hvor R^, R^ og R Q er like eller forskjellige og hver for seg betyr en lavere-alkyl-, aryl- eller aralkylgruppe, arylseleno eller

2 1

arylseleninyl, hvor R betyr det samme som R eller lavere alkyl, som eventuelt er substituert med ett eller flere halo-genatomer, azido, nitril eller en aminogruppe med den generelle

9 10 9 10

formel N R R„ , hvor R og R er like eller., forskjellige og hver for seg betyr hydrogen, lavere alkyl, aryl eller aralkyl, og R betyr hydrogen eller en eventuelt alkyl-, aryl-, aralkyl- eller silylgruppe, og salter derav.

Som resultat av ytterligere undersøkelser har det nå vist seg at det kan oppnås hittil ukjente cefalosporin-analoge med uventet kraftig antibakteriell aktivitet ved acylering av forbindelser med den ovenfor angitte formel (II),

1 12

hvor X er NH0, R er H, R er H, lavere alkyl eller lavere

"5 1

acyloksy, og R er R .

Disse hittil ukjente forbindelser med generell formel (i) fremstilles ifblge oppfinnelsen ved at en cefalosporin-analog med den generelle formel:

1 2 hvor R og R har den ovenfor angitte betydning, eller en funksjonelt ekvivalent forbindelse (i det fblgende betegnet som 7-amino-forbindelsen) acyleres med en karboksylsyre med den generelle formel: eller et reaktivt derivat derav, hvor X 2betyr én av fblgende fem grupper: 1') cyanmetyl eller en gruppe med den generelle formel:

hvor B og n har den ovenfor angitte betydning, A. betyr hydrogen, hydroksy, beskyttet hydroksy, alkoksy med 1-4 karbonatomer, halogen, nitro, beskyttet amino, beskyttet aminometyl, metylsulfonamido eller acyloksy med 1-4 karbonatomer, og A 2'betyr hydrogen, beskyttet amino, hydroksy, karbonyl eller beskyttet sulfoksyl,

2') en gruppe med den generelle formel:

1' 3 4

hvor B, A , n, kr og A har den ovenfor angitte betydning,

3') en gruppe med den generelle formel:

hvor B, A"^, n og A^ har den ovenfor angitte betydning,

4') en gruppe med den generelle formel:

11 12 hvor B, A og n har den ovenfor angitte betydning, og A betyr hydrogen, alkyl med 1-6 karbonatomer, alkenyl med 2 - 6 karbonatomer, alkynyl med 2-6 karbonatomer, cykloalkyl med 3-6 karbonatomer, eller aryl, hvor gruppene eventuelt er substituert med egnede substituenter valgt blant beskyttet karboksyl, cyan, halogen, karbamoyl og alkoksykarbonyl med 1-3 karbonatomer, eller

5') en gruppe med den generelle formel:

hvor B betyr trifluormetyl, cyanmetyl eller en gruppe med formelen (A11^ B-, hvor B, A<11>og n har den ovenfor angitte betydning, og Z betyr oksygen eller svovel,

hvoretter, om nbdvendig, den beskyttende gruppe i X CO- og/ eller -COO^-gruppen fjernes på konvensjonell måte, og, om onsket, den dannede forbindelse overfores«til et farmasbytisk akseptabelt salt derav.

Med hensyn til B kan det som eksempler på den 5-eller 6-leddede, heterocykliske gruppe nevnes furyl, tienyl, pyrrolyl, tiazolyl, oksazolyl, isotiazolyl', -isoksazolyl, imi-dazolyl, pyrazolyl, triazolyl, tetrazolyl, pyridinyl, pyrimidi-nyl, pyrazinyl, pyridazinyl, triazinyl og 5,6-dihydro-l,4-ditiin-2-yl.

Med hensyn til A"^ kan som eksempler på den mono-, bi- eller tricykliske heterocykliske gruppe nevnes slike med fblgende formler:

som kan ha substituenter slik som de som er representert ved

a\ på ringene.

Med hensyn til R"*" kan som eksempler på halogenert alkyl nevnes klormetyl, 2,2,2-trikloretyl og 2,2,2-trifluor-etyl, som eksempler på eventuelt substituert arylmetyl med 7-20 karbonatomer nevnes benzyl, difenylmetyl og trifenyl-metyl, som kan ha en metoksygruppe, nitrogruppe osv. på fenylringen, som eksempler på substituert xilyl nevnes tri-metylxilyl og trifenylxilyl, og som eksempler på en gruppe som lett fjernes enzymatisk eller ikke-enzymatisk in vivo,

nevnes en gruppe med den generelle formel

hvor R betyr hydrogen eller alkyl med 1-6 karbonatomer,

og R^" betyr alkyl med 1-6 karbonatomer, alkoksy med 1-6 karbonatomer eller fenyl.

I tilfelle av at R"*" i den generelle formel (I) er hydrogen, eller at X er en acylgruppe med en fri karboksyl-gruppe eller aminogruppe, kan forbindelsene med den generelle formel (I) være salter av farmasbytisk akseptable uorganiske eller organiske baser eller syrer.

Forbindelsene med formel (I) inkluderer alle de stereoisomere i 6-, 7- og 4-stillingene og blandinger derav. Blant sterioisomerene har de, som har cis-konfigurasjon ved 6- og 7-stillingene, hbyere antibakterielle aktiviteter enn trans-isomere, slik at cis-isomerene er mer nyttige som antibiotika. Gruppen =N0R i acylgruppen har fblgende to geome-triske isomere, dvs. syn og anti: Da syn-isomeren er bedre enn anti-isomeren med hensyn til antibakteriell aktivitet, er syn-isomerene mer nyttige som antibiotika. I alminnelighet er det kjent at tiazolylgruppen

viser reversibel omdannelse til den nedenfor viste tiazolinyl-

gruppe, og begge behandles vanligvis som identiske. I foreliggende sammenheng representeres begge isomere; ved tiazolylgruppen

Forbindelsene med formel (I) fremstilles ved acylering av forbindelsene (II') tilsvarende formel<r>(II),

1 2

hvor X er NH9, R er H, R er H, alkyl med 1-5 karbonatomer

3 1

eller acyloksy med 1-5 karbonatomer, og R er. R , ifblge reaksjonsskjema I.

Reaks. ion. ssk. jema i

1 2

hvor R , R og X har den ovenfor angitte betydning.

Acyleringsreaksjonen (kondensasjonen) utfores ifblge en konvensjonell acyleringsmetode som anvendes innen penicillin- og cefalosporin-kjemien.

Forbindelsene med formel (I) (i det fblgende betegnet som forbindelse (I)) fremstilles således ved kondensasjon av en forbindelse med formel (II') (i det fblgende betegnet som forbindelse (II<1>)), et salt derav eller en dermed funksjonelt ekvivalent forbindelse (i det fblgende sammenfattende betegnet som "7-aminoforbindelsen") og en karboksylsyre med formelen:

eller reaktivt derivat derav, om nbdvendig etterfulgt av

fjerning av den beskyttende gruppe i X 2 - eller -CO OR 1-gruppen på konvensjonell måte. I formel (III) svarer X 2 CO til X 1CO,

dvs. X i forbindelsen med formel (I), og X o i formel (III) betyr den ovenfor definerte gruppe X"*" eller en passende beskyttet X~<*>"-gruppe i tilfelle av at X"*" inneholder grupper som er mottagelige for acylering, slik som hydroksy, amino, karboksyl eller merkapto.

Som beskyttende grupper for amino-, hydroksy- osv. i X 2-gruppen anvendes slike som benyttes innen cefalosporin-og penicillin-kjemien, og de som er vist nedenfor.

Som salter av forbindelse (II<1>) kan f.eks. nevnes uorganiske salter slik som hydroklorid, sulfat, karbonat og fosfat, og organiske salter slik som formiat, trifluoracetat og malat. Videre kan som eksempler nevnes natrium-, kalium-, kalsium- og ammoniumsaltene og saltene med organiske aminer osv. av karboksylsyrene med formel (II'), hvor R"'"er hydrogen. Saltene fremstilles på konvensjonell måte.

Som forbindelser som er funksjonelt ekvivalente med forbindelse (II'), kan f.eks. nevnes 7-monosilyl- eller 7-disilylaminoderivater av forbindelse (II')•

Som reaktive derivater av karboksylsyren med den generelle formel (III), X<2>COOH, kan f.eks. nevnes 1) et syrehalogenid, 2) et syreanhydrid, 3) et blandet syreanhydrid, 4) en aktiv ester, 5) en aktiv tioester og 6) et syreazid.

Kondensasjons- (acylerings-)reaksjoner under anvendelse av de ovennevnte derivater forklares nærmere i det fblgende :

(1) Metode_under_anyendelse_av_et

En 7-aminoforbindelse og et syrehalogenid underkastes kondensasjon i et inaktivt opplbsningsmiddel, fortrinnsvis i nærvær av en protonakseptor. Syrehalogenidet fremstilles på konvensjonell måte.

Som protonakseptor anvendes f.eks. uorganiske og organiske baser, fortrinnsvis natriumkarbonat, kaliumkarbonat, natriumhydroksyd, kaliumhydroksy, trietylamin, N-metylmorfolin

og pyridin.

Som opplbsningsmiddel kan anvendes ethvert inaktivt oppldsningsmiddel som ikke påvirker reaksjonen, fortrinnsvis vann, en eter, slik som tetrahydrofuran og dimetoksyetan, en ester, slik som etylacetat, et amid, slik som dimetylacet-

amid og heksametylfosforsyretriamid, eller et sulfoksyd slik som dimetylsulfoksyd, alene eller i kombinasjon.

Reaksjonen gjennomfbres ved en temperatur mellom

-40 og +40°C, fortrinnsvis mellom 0°C og romtemperatur.

(2) Metode_under anvendelse-av et--syreanhydrid

En 7-aminoforbindelse og et syreanhydrid underkastes kondensasjon i et inaktivt opplbsningsmiddel.

Syreanhydridet fremstilles på konvensjonell måte.

Som opplbsningsmiddel kan anvendes ethvert opplbsningsmiddel som ikke påvirker reaksjonen, fortrinnsvis de samme opplbsningsmidler som ved den ovennevnte metoden. Temperatur området for denne reaksjon er det samme som ved den ovenfor angitte metode.

Den typiske metode under anvendelse av karbodiimid slik som dicykloheksylkarbodiimid, eksemplifiseres som syre-anhydridmetoden.

(3) Me<52>^§_<y>^<ir>_§^<Y>§S§£l§§<_>§Y_<®J>_<5i>§S^Jsyreanhydrid

En 7-aminoforbindelse og et blandet syreanhydrid underkastes kondensasjon i et inaktivt opplbsningsmiddel.

Det blandede syreanhydrid fremstiller på konvensjonell måte, f.eks. ved omsetning av den tilsvarende karboksylsyre, X 2C00H, og en klormaursyreester, slik som etylklorformiat eller isobutylklorformiat, i nærvær av en base.

Som opplbsningsmiddel kan anvendes ethvert inaktivt opplbsningsmiddel som ikke påvirker reaksjonen, vanligvis et vannfritt opplbsningsmiddel eller en blanding av vann og et vannfritt opplbsningsmiddel, fortrinnsvis det samme opplbsningsmiddel som ved de ovennevnte metoder.

Temperaturområdet for denne reaksjon er det samme som ved de ovenfor angitte metoder.

(4) Metode_under_anyendelse_ay_en aktiv ester

En 7-aminoforbindelse og en aktiv ester underkastes kondensasjon i et inaktivt opplbsningsmiddel. Opplbsningsmid ler og reaksjonstemperaturer er de samme som ved de ovenfor angitte metoder 1-3.

Som den aktive ester kan f.ieks. nevnes en fenyl-ester slik som p-nitrofenylester og triklorfenylester, en metylester med en elektronegativ gruppe slik som cyanmetyl-ester, og en N-oksydiacylimidester slik som N-hydroksysuccin-imidester.

Den aktive ester fremstilles på konvensjonell måte ved at en tilsvarende karboksylsyre og en hydroksyforbindelse omsettes i nærvær av en dehydratiserende kondensasjonsreagens, slik som dicykloheksylkarbodiimid.

(5) Metode_under_anvendelse_av_en_aktiv_t

Denne metode utfores på samme måte som metode 4.

Som den mest foretrukne tioester kan nevnes p-nitrotiofenylester som fremstilles ved en blandet-syreanhydrid-metode eller dicykloheksylkarbodiimid-metode.

(6) Metode_under_anyendelse_ay_e^

En 7-aminoforbindelse og et syreazid underkastes kondensasjon i et inaktivt opplbsningsmiddel på samme måte som ved de ovenfor angitte metoder 1-5.

Syreazidet fremstilles ved omsetning av hydrazidet av en tilsvarende karboksylsyre med salpetersyrling ved en temperatur på mellom -20 og 0°C.

I tilfelle av at de ovennevnte reaktive derivater av karboksylsyren inneholder slike grupper som amino, hydroksy, karboksy eller merkapto, som er mottagelige for acylering, beskyttes disse grupper fortrinnsvis med en egnet beskyttende gruppe på konvensjonell måte for kondensasjonsreaksjonen med aminoforbindelsene.

Som egnede beskyttende grupper kan nevnes de som anvendes innen syntesen av penicilliner og cefalosporiner.

Som eksempler på den aminobeskyttende gruppe kan fortrinnsvis nevnes t-butyloksykarbonyl (Boe), benzyloksykarbonyl (Cbz), trikloretyloksykarbonyl, trityl, formyl, kloracetyl, trialkylsilyl, proton, (3-diketon og (3-ketoester. Som et eksempel på en forbindelse beskyttet med et proton kan nevnes forbindelsen med formelen:

Som eksempel på en forbindelse beskyttet med en (3-ketoester kan nevnes forbindelsen med formelen:

Som eksempler på den hydroksybeskyttende gruppe

kan nevnes benzyl, benzyloksykarbonyl, trityl, tetrahydropyranyl og t-butyl. Ettersom reaktiviteten (den nukleofile aktivitet) av de fleste aminogrupper er hoyere enn den til hydroksygruppen, er beskyttelsen av hydroksygruppen ikke absolutt nbdvendig, avhengig av den benyttede acyleringsmetode.

Som eksempler på den karboksybeskyttende gruppe

kan f.eks. nevnes t-butyl, benzyl, p-metoksybenzyl, p-nitrobenzyl og benzhydryl.

Som eksempler på den merkaptobeskyttende gruppe

kan nevnes benzyl, trityl, benzyloksykarbonyl og p-nitrobenzyl.

Fjerningen av de ovennevnte beskyttende grupper utfores på konvensjonell måte innen syntesen av penicilliner og cefalosporiner.

Som eksempler på metoder for fjerning av aminobeskyttende grupper kan nevnes fblgende: Boe fjernes ved en metode under anvendelse av en syre slik som maursyre, eddiksyre, trifluoreddiksyre og saltsyre.

Cbz fjernes ved katalytisk reduksjon eller en-meto de under anvendelse av hydrogenbromid/eddiksyre. Trityl fjernes ved en katalytisk reduksjon eller en metode under anvendelse av en syre slik som trifluoreddiksyre.

Formyl fjernes ved hydrolyse under anvendelse av en syre eller alkali.

Kloracetyl fjernes ved en.metode under anvendelse av tiourea.

Trialkylsilyl fjernes ved hydrolyse.

Et proton fjernes ved nøytralisering.

Additivet med P-diketon eller (3-ketoester fjernes ved sur hydrolyse.

Som eksempler på metoder for fjerning av hydroksybeskyttende grupper kan nevnes fblgende: Benzyl fjernes ved katalytisk reduksjon eller en metode under anvendelse av hydrogenfluorid.

Cbz fjernes ved katalytisk reduksjon eller metode under anvendelse av hydrogenbromid/eddiksyre.

Trityl fjernes ved katalytisk reduksjon eller en metode under anvendelse av trifluoreddiksyre.

Tetrahydropyranyl fjernes ved sur hydrolyse.

t-butyl fjernes ved en metode under anvendelse av en syre slik som trifluoredduksyre, hydrogenbromid/eddiksyre og saltsyre.

Som eksempler på metoder for fjerning av. karboksybeskyttende grupper kan nevnes fblgende: t-butyl fjernes ved en metode under anvendelse av en syre slik som trifluoreddiksyre.

Benzyl eller p-nitrobenzyl fjernes ved katalytisk reduksjon eller ,en metode under anvendelse av en Lewis-syre slik som AlCl^.

Benzhydryl eller p-metoksybenzyl fjernes ved katalytisk reduksjon eller en metode under anvendelse av hydrogenbromid/eddiksyre, saltsyre/metanol, trifluoreddiksyre osv.

Som eksempler på metoder for fjerning av merkaptobeskyttende grupper kan nevnes fblgende: Benzyl fjernes ved en metode under anvendelse av hydrogenfluorid osv.

Cbz fjernes ved en metode under anvendelse av hydro-

genbromid/eddiksyre, trifluoreddiksyre osv.

p-nitrobenzyl fjernes ved katalytisk reduksjon.

Den ovennevnte avbeskyttelse kan utmerket utfores samtidig med omdannelsen av R^-gruppen til hydrogen, dvs. deforestring.

Om bnsket fremmes acyleringsreaksjonen fortrinnsvis ved silylering av utgangsforbindelsen (II) med et silyl-eringsmiddel slik som trimetylklorsilan/base, he.ksametyldi-silazan og N,0-bis-trimetylsilylacetamid, for opploseliggjor-ing av utgangsmaterialet i organiske opplosningsmidler og aktivering av aminogruppen.

Utgangsforbindelsene med den generelle formel (II') kan fremstilles ved en fremgangsmåte som er beskrevet i japansk patentsøknad nr. 34 696/78. Et par eksempler er be-lyst i de etterfolgende referanse-reaksjonsskjemaer (I') og

(II').

I referanse-reaksjonsskjemaene (I') og (II<1>) er forbindelsene 6, 7, 6', 7', 11 og 12 eksempler på utgangsforbindelsene med den generelle formel (II<1>). Fremstillingen av utgangsforbindelsene er beskrevet i de etterfølgende referanseeksempler.

Forbindelse (I') tilsvarende den generelle formel (I), hvor R"^ er H, kan fremstilles ved fjerning av den kar-boksylbeskyttende gruppe ifolge reaksjonsskjema (II).

1

hvor R er en karboksylsyrebeskyttende gruppe, og R og X har den ovenfor angitte betydning.

Deforestringsreaksjonen utfores ved en konvensjonell metode benyttet innenfor syntesen av penicilliner og cefalosporiner.

Som eksempler på den reaksjon som omdanner -COOR"*" til -COOH, kan nevnes l) katalytisk reduksjon, 2) azidolyse, 3) spaltningsreaksjon med en Lewis-syre, 4) hydrolyse, 5) re duksjon under anvendelse av reduksjonsmidler og 6) en metode under anvendelse av en esterase. Hver metode er nærmere for-klart nedenfor.

1) Katalytisk reduks. jon

Gruppen COOR"<1>" omdannes til gruppen COOH i nærvær av en katalysator i en hydrogenatmosfære i et inaktivt opplbsningsmiddel. Som opplbsningsmiddel kan anvendes ethvert opplbsningsmiddel som ikke påvirker reaksjonen, fortrinnsvis etanol, vann, tetrahydrofuran, dioksan, etylacetat, eddiksyre eller blandinger derav. Som eksempler på katalysatoren kan nevnes palladium-karbon, platinaoksyd, palladium-kalsiumkarbonat og Raney-nikkel. Reaksjonen gjennomføres vanligvis ved et trykk på 1 - 50 atm. og en temperatur på.O,- 100°C, fortrinnsvis ved atmosfæretrykk og romtemperatur.

Denne metode anvendes fortrinnsvis i tilfeller hvor. R1 er benzyl, p-nitrobenzyl, difenylmetyl, p-metoksybenzyl osv.

2) Acidolyse

Gruppen COOR"'" omdannes til gruppen COOH med en syre i et inaktivt opplbsningsmiddel. Som eksempler på syren kan nevnes saltsyre, p-toluensulfonsyre og trifluoreddiksyre. Som opplbsningsmiddel kan anvendes ethvert opplbsningsmiddel som ikke påvirker reaksjonen, fortrinnsvis etylacetat, benzen, etanol, eddiksyre, dioksan, metylenklorid, kloroform eller blandinger derav.

Reaksjonen gjennomfbres ved en temperatur mellom -15 og +50°C, fortrinnsvis 0 - 25°C, i lbpet av fra 10 minutter til 5 timer, fortrinnsvis fra 30 minutter til 3 timer.

Denne metode anvendes fortrinnsvis i tilfeller hvor R"^" er t-butyl, trityl osv.

3) Spalting under anvendelse av en Lewis- syre

Gruppen COOR"'' omdannes til gruppen COOH ved spalting i nærvær av en Lewis-syre i et inaktivt opplbsningsmiddel. Som opplbsningsmiddel kan anvendes ethvert opplbsningsmiddel som ikke påvirker reaksjonen, fortrinnsvis en blanding av nitroalkan slik som nitrometan, og et halogenalkan slik som metylenklorid. Som eksempler på Lewis-syren kan nevnes aluminiumklorid, bortrifluorid, titantetraklorid og tinn- tetraklorid. Syren anvendes i en mengde på 1,0 - 1,5 molar-ekvlvalenter i forhold til forbindelse (I<1>). Reaksjonen gjennomfores fortrinnsvis i nærvær av et middel som opptar karboniumkation, slik som anisol. Reaksjonen gjennomfores ved en temperatur på 0 - 50°C, fortrinnsvis ved romtemperatur, i lbpet av 1 - 10 timer.

Denne metode anvendes fortrinnsvis i tilfeller hvor R"<*>"er p-nitrobenzyl osv.

4) Hydrolyse

Gruppen COOR<1>omdannes til gruppen COOH ved hydrolyse i nærvær av en syre eller alkali i et inaktivt opplosningsmiddel. Som eksempler på syren kan nevnes p-toluensulfonsyre, saltsyre og eddiksyre. Som opplbsningsmiddel kan anvendes ethvert opplbsningsmiddel som ikke påvirker reaksjonen, fortrinnsvis 2% vandig metanol, N,N-dimetylformamid eller eddiksyre/vann/tetrahydrofuran. Reaksjonen gjennomfores ved en temperatur på 0 - 50°C, fortrinnsvis 15 - 25°C, i lbpet av fra 10 minutter til 2 timer.

Denne metode under anvendelse av syrer anvendes

fortrinnsvis i tilfeller hvor R<1>er t-butyldimetylsilyl.

Som basen anvendes fortrinnsvis kalsiumkarbonat

i en mengde på 1 - 6 molarekvivalenter i forhold til forbindelse (II"). Som opplbsningsmiddel kan anvendes.. ethvert opplbsningsmiddel som ikke påvirker reaksjonen, fortrinnsvis tetrahydrofuran/vann, dioksan/vann eller aceton/vann. Reaksjonen gjennomfores vanligvis ved en temperatur på 0 - 30°C

i lbpet av fra 30 minutter til 24 timer.

Denne metode under anvendelse av base anvendes fortrinnsvis i tilfeller hvor R1, ér metyl, etyl osv.

5) 'Reduksjon under anvendelse av reduksjonsmidler (forskjellig fra katalytisk reduksjon)

Gruppen COOR<1>omdannes til gruppen COOH ved reduksjon i et inaktivt opplbsningsmiddel. Som eksempel på reduk-sjonsmidlet kan nevnes sink/syre. Som opplbsningsmiddel anvendes f.eks. aceton, vann, dioksan, tetrahydrofuran, etanol, acetonitril, N,N-dimetylformamid, eddiksyre eller blandinger derav. Som eksempler på syren kan nevnes saltsyre, maursyre, og eddiksyre. Reaksjonen gjennomfores ved en temperatur på

0 - 100°C, fortrinnsvis 0 - 40°C, i lbpet av 1 - 10 timer.

Den mengde sink som anvendes til reaksjonen er vanligvis 1 - 10 molarekvivalenter.

Hvis det benyttes passende reagenser, kan den beskyttende gruppe i gruppen X fjernes samtidig med deforestring-en.

De ved fremgangsmåten ifblge oppfinnelsen fremstilte forbindelser med den generelle formel (I)., hvori R1

er H, har som nevnte i det nedenstående eksempel 2 så ut-merkede antibakterielle aktiviteter overfor gram-positive og gram-negative bakterier, at de forventes å være nyttige som antiinfeksjonsmidler eller antibakterielle midler overfor disse bakterier. Forbindelsene med formel (I),, hvor R<1>er forskjellig fra H, kan også anvendes som utgangsmaterialer for fremstilling av forbindelser med formel (I), hvor R<1>er H.

De ifblge oppfinnelsen fremstilte forbindelser kan anvendes i farmasbytiske preparater inneholdende forbindelse (I) eller et farmasbytisk akseptabelt salt derav som aktiv bestanddel i forbindelse med en farmasbytisk bærer eller et farmasbytisk fortynningsmiddel. Forbindelsene kan inngis ad parenteral (intramuskulær, intraperitoneal, intra-venbs eller subkutan), oral eller rektal vei og. kan sammen-settes i doseringsformer passende til hver inngivelsesmåte. Preparater for parenteral inngivelse inkluderer sterile vandige eller ikke-vandige opplbsninger, suspensjoner eller . emulsjoner. Eksempler på ikke-vandige opplbsningsmidler eller medier er propylenglykol, polyetylenglykol, vegetabilske oljer, slik som olivenoljer, og injiserbare organiske estere slik som etyloleat. Slike doseringsformer kan også inneholde tilsetningsstoffer slik som konserverings-, befuktnings-, emulgerings- og dispergeringsmidler. De kan steriliseres, f.eks. ved filtrering gjennom et bakterie-tilbakeholdende filter,ved inkorporering av steriliseringsmidler i preparatene, ved bestråling av preparatene eller ved oppvarming av preparatene. De kan også fremstilles i form av sterile, faste blandinger, som kan opplbses i sterilt vann eller et annet sterilt injiserbart medium umiddelbart for bruk.

Midler for oral inngivelse kan foreligge i en form som er egnet til absorbsjon i mave-tarm-kanalen. Tab- bletter og kapsler til oral inngivelse kan være i enhetsdoser-ingsform og kan inneholde konvensjonelle eksipienter slik som bindemidler, f.eks. sirup, akacia, gelatin, sorbitol, tragant eller polyvinylpyrrolidon, fyllstoffer, f.eks. laktose, suk-ker, maisstivelse, kalsiumfosfat, sorbitol eller glycin, glittermidler, f.eks. magnesiumstearat, talkum, polyetylenglykol eller silisiumdioksyd, nedbrytningsmidler, f.eks. potetstivelse, eller et akseptabelt fuktningsmiddel slik som natriumlaurylsulfat. Tablettene kan overtrekkes ifblge vel-kjente metoder innen teknikken. Orale, flytende preparater kan være i form av vandige eller oljebaserte suspensjoner, oppløsninger, emulsjoner, siruper eller kan foreligge som et tbrt produkt for blanding med vann eller et annet egnet medium for bruk. Slike flytende preparater kan inneholde konvensjonelle additiver slik som suspensjonsmidler, f.eks. sorbi-tolsirup, metylcellulose, glukosesukkersirup, gelatin, hydrok-syetylcellulose, karboksymetylcellulose og aluminiumstearat-gel, emulgeringsmidler, f.eks. lecitin eller sorbitanmono-oleat, ikke-vandige medier som kan inkludere spiselige oljer, f.eks. mandelolje, kokosnbttolje, propylenglykol eller etylen-glykol, og konserveringsmidler, f.eks. metyl- eller propyl-p-hydroksybenzoat eller sorbinsyre...

Midler for rektal inngivelse er fortrinnsvis suppo-sitorier, som foruten det aktive stoff kan inneholde eksipienter slik som kokosnbttsmbr eller en suppositorievoks.

Innholdet av aktiv bestanddel i preparatene kan varieres, men det er nbdvendig at mengden av den aktive bestanddel eir slik at det oppnås en egnet doseringsform. Den valgte .dosering avhenger av den bnskede terapeutiske virkning, av inngivelsesmåten og av behandlingens varighet. Vanligvis inngis doseringer på 5 - 350 mg/kg legemsvekt daglig til pattedyr for å oppnå en antibiotisk virkning.

Som eksempler på farmasbytisk akseptable salter

av forbindelse (I) kan nevnes uorganiske salter, slik som hydroklorid, sulfat, karbonat og fosfat, og organiske salter slik som formiat og malat. Videre kan som eksempler nevnes natrium-; kalium-, kalsium- og ammoniumsalter og salter med organiske aminer av karboksylsyrene med generell formel (i), hvori R<1>er hydrogen. Saltene fremstilles på konvensjonell

måte.

Fblgende eksempler tjener til nærmere å belyse oppfinnelsen...

Eksempel 1

Fremstilling av (-)-cis-2-karboksy-7-/2-(tiofen-2-yl)acetyl-amino7-l-azabicyklo/2J-, 2,0_7okt-2-en-8-on med formelen: 88 mg (0,489 mthpl) av den aminoforbindelse som fremstilles i referenaseeksempel 8, opplbses i 2 ml avionisert vann og det tilsettes 1 ml aceton og 84 mg vandig natriumhydrogenkarbonatopplbsning. Til blandingen tilsettes.dråpevis 78 mg 2-tienylacetylklorid opplost i 0,5 ml aceton under isavkjbling. Deretter omrbres blandingen i 30 minutter og vaskes med etylacetat. Det oppnådde vandige lag innstilles til pH 2,0 med saltsyre. Den resulterende hvite suspensjon ekstraheres 3 ganger med 5 ml etylacetat. Etylacetatlaget vaskes med mettet hatriumkloridopplbsning, tbrkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av et gult oljeaktig produkt. Produktet fores på en kolonne pakket med 4,0 g silisiumdioksydgel ("Wako-gel C-200", den samme silisiumdioksydgel anvendes i fblgende eksempler og referanseeksempler) og elueres med kloroform. Den oppnådde sirup behandles med kloroform/etanol for oppnåelse av 30 mg krystaller. Krystallene identifiseres som den bnskede forbindelse på basis av fblgende egenskaper. Utbytte 20,1%.

Smeltepunkt: 181 - 183°C

IR(KBr)V£m~s: 1775, 1690, 1650, 1615

NMR (CT>30D)£(ppm): 7,16-6,88 (3H, m), 6,18 (1H, t), 3,16 (1H, d, J = 5Hz), 3,80 (1H, m), 3,37 (2H, s), 2,5-1,30 (4H, m) Eksempel 2

De antibakterielle aktiviteter av det i eksempel 1 fremstilte (<i>)-cis-2-karboksy-7-/5-(tiofen-2-yl)acetylamino7-l- azabicyklo/Zj., 2,07okt-2-en-8-on er vist nedenfor. Det anvendes regulær agarfortynningsmetode ved pH 7,0.

Eksempel 3

Fremstilling av (-)-cis-7-/2-(2-tritylamino-4-tiazolyl)-2-anti-metoksyiminoacetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/5,2,07okt-2-en-8-on:

Metode a)

75 mg (0,307 mmol) (-)-cis-7-amino-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4\ 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt som i ..referanseeksempel 9, og 135,9 mg (0,307 mmol) 2-(2-trityl-amino-4-tiazolyl)-2-anti-metoksyiminoeddiksyre opploses i 2 ml vannfritt metylenklorid, og det tilsettes 69,6 mg (0,307 -mmol) dicykloheksylkarbodiimid opplost i 1 ml vannfritt metylenklorid under omrbring og isavkjbling. Blandingen omrbres i 3 timer og får reagere ved en temperatur på 10°C natten over.

Reaksjonsblandingen vaskes med 1% vandig fosfat, mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning og mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med magnesiumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 2,57 mg råprodukt. Produktet renses ved sbylekromatografi under anvendelse av 12 g silisiumdioksydgel og et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 1:1 for oppnåelse av 73"mg ( 35, 9%) av den bnskede forbindelse som et blekgult, glassaktig stoff.

-1

IR(KBr) Y™ks: 1780, 1725, l695(sh), 1690, 1635

NMR(CDC13) i (ppm): 8,48 (d, 1H, J=6, 4Hz), 7,25 (s, 15H),

6,30 (t, 1H, J=3, 0Hz), 5,35 (t, 1H, J=6, 4Hz), 4,05 (s, 3H), 2,5-1,6 (m, 4H), 1,52 (s, 9H)

Metode b)

524,9 mg (1,18 mmol) 2-(2-tritylamino-4-tiazolyl)-,2-anti-metoksyiminoeddiksyre opplbses i 10 ml tbrket tetrahydrofuran. Til opplbsningen tilsettes 1,18 ml (1,18 mmol) IN-iN-metylmorfolin/tetrahydrofuran og 1,18 ml (1,18 mmol) IN-" isobultylklorformiat/tetrahydrofuran ved en temperatur på

-30°C, og<:>blandingen omrbres i 40 minutter. En opplosning av 235 mg (0,987 mmol) (-)^cis-7-amino-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/5., 2,07okt-2-en-8-on i 5 ml vannfritt metylenklorid tilsettes dråpevis til ovennevnte blanding. Blandingen får reagere i 30 minutter og omrbres ytterligere ved 0°C i 2 timer. Til reaksjonsblandingen tilsettes 10 ml etylacetat og blandingen vaskes med vann, mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning og mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 865 mg råprodukt.

Ved silisiumdioksydgel-kromatografi under anvendelse av 40 g silisiumdioksydgel ifblge metode a) oppnås 580 mg (87,5%)

av denbnskede forbindelse. Produktets IR- og NMR-spektra stemmer overens med spektrene for forbindelsen fremstilt ved metode a).

Eksempel 4 Fremstilling av (-)-cis-7-^2-(2-amino-4-tiazolyl)-2-anti-metoksyimino- acetamidoZ- l- azabicyklo/ fr, 2, 07okt- 2- en- 8- on- 2- karboksylsyre:

500 mg (0,754 mmol) (-)-cis-7-/2-(2-tritylamino-4-tiazolyl)-2-anti-metoksyimino-acetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 3, opplbses i en blanding av 5 ml trifluoreddiksyre, 2,5

ml vannfritt metylenklorid og 2,5 ml anisol. Oppløsningen hensettes ved 0°C i 3 timer og 40 minutter og konsentreres deretter under forminsket trykk. Til konsentratet tilsettes 5 ml 50% vandig eddiksyre. Blandingen omrbres ved romtemperatur i 3 timer og konsentreres under forminsket trykk. Konsentratet tritureres grundig med eter og filtreres for oppnåelse av 244 mg råprodukt. Produktet renses ved sbylekromatografi med 10 ml "Diaion HP-10" og et opplbsningsmiddel bestående av metanol og vann i volumforholdet 2:5 for oppnåelse av 90 mg (32,7%) av et blekgult pulver.

IR(KBr)V^ks: 1760, 1670, I63O

NMR(CD^OD) c£ (ppm): 7,47 (s, 1H), 640 (m, 1H), 5,51 (d, 1H, .

J=5, 0Hz), 4,05 (s, 3H), 4,3-3,7 (m, 1H), 2,6-1,1 (m, 4H) Eksempel 5

Fremstilling av (-)-cis-7-/TR)-2-fenyl-2-t-butyloksykarbonyl-aminoacetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4\ 2,07okt-2-en-8-on:

Metode a)

81 mg (0,34 mmol) (-)-cis-7-amino-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/3-, 2,07okt-2-en-8-on og 94,0 mg (0,34 mmol) (R)-N-t-butyloksykarbonylfenylglycin opplost i 2 ml vannfritt metylenklorid. En opplosning av 77 mg (0,34 mmol) dicykloheksylkarbodiimid i 1 ml vannfritt metylenklorid tilsettes til oppløsningen under avkjoling med is og natriumklorid. Blandingen får reagere under avkjoling med is i 2 timer og det tilsettes 2 dråper eddiksyre. Blandingen omrbres i 20 minutter og sugefiltreres. Filterkaken vaskes med 20 ml etylacetat. Filtratet og vaskeopplbsningene kombineres og tilsettes 20 ml eter. Blandingen vaskes med 1%

i vandig fosforsyre, mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning og mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 187 mg råprodukt. Produktet renses ved silisiumdioksydgel-kromatografi med 9 g silisiumdioksydgel og et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 1:1 for oppnåelse av 104 mg

(64,9%) av den bnskede forbindelse som et fargelbst, glassaktig stoff.

IR(KBr) Y™ks": 1770, 1750, 1720, 1630

NMR(CDC13) £(ppm).: 7,32 (s, 5H), 6,31 (m, 1H), 5,90 (m, 1H), 2,50-1,70 (m, 4H), 1,50 (s, 9H), 1,40 (s, 9H)

Metode b)

297,3 mg (1,18 mmol) (R)-N-t-butyloksykarbonyl-fenylglycin opplbses i 5 ml vannfritt tetrahydrofuran, og det tilsettes 1,18 ml (1,18 mmol) IN N-metylmorfolin /tetrahydrofuran og 1,18 ml (1,18 mmol) IN isobutylklorformiat/tetrahydrofuran ved -30°C. Blandingen omrbres i 30 minutter og

; ^derettertilsettes! 234 mg. (0,983 mmol) (-)-cis-7-amino-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo^Zt-, 2,Q7okt-2-en-8-on opplost i 5 ml vannfritt metylenklorid. Blandingen får reagere ved

-30°C i 45 minutter og ved 0°C i 4 timer og 15 minutter. Reaksjonsblandingen fortynnes med 15 ml metylenklorid og vaskes suksessivt med vann, IN saltsyre, vann og mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres for oppnåelse av 588 mg rå acylforbindelse. Rensing ved silisiumdioksydgel-kromatografi med 28 g silisiumdioksydgel utfores ifblge metode a) for oppnåelse av 322 mg (69,4%) av den bnskede forbindelse som et fargelbst, glassaktig stoff. Produktets. IR- og NMR-spektra stemmer overens med spektrene for forbindelsen fremstilt ved metode a).

Eksempel 6

Fremstilling av (-)-cis-7-/TR)-2-fenyl-2-aminoacetamido7-l-azabicyklo^4", 2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

280 mg (0,59 mmol) (<±>)-cis-7-ZtR)-2-fenyl-2rt-butyloksykarbonylaminoacetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-r-azabicyklo/5-,2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 5, opplbses i 2,5 ml vannfritt metylenklorid og 2,5 ml anisol, og det tilsettes 5,0 ml trifluoreddiksyre under isavkjbling. Blandingen hensettes i 4 timer, og 50 minutter under isavkjbling, hvoretter den konsentreres. Til resten tilsettes 10 ml eter, og blandingen omrbres ved romtemperatur i 1 time for dannelse av et bunnfall. Bunnfallet oppsamles ved filtrering, hvorved det oppnås 202 mg (70,9%) av den bnskede forbindelse som et blek-

gult pulver.

IR(KBr)Ym|ks: 1765, 1680, 1630

NMR(D20 med DSS som en internasjonal standard) & (ppm): 7,51 (d, 5H), 6,31 (m, 1H), 5,19 (s, 1H),,4,95 (d, 1H),

3,8-3,5 (m, 1H), 2,6-'2,9 (m, 4H) -

Atskillelse av de diasteroisomere af (-)-cis-7-/TR)-2-fenyl-2-aminoacetamido7-l-azabicyklo/Zj., 2,Q7okt-2-en-8-on-karboksylsyre: Den ovenfor fremstilte forbindelse (50 -mg) opplbses i 150 ml vann, og opplysningen underkastes hoytrykksvæskekro-matografi under anvendelse av "Bondapak C-18" som bærer og et opplosningsmiddel bestående av 7% metanol i 0,2N kalium-hydrogenfosfatopplosning, åtte ganger. Isoleringen av 2 fraksjoner kontrolleres ved en spektroskopisk analyse ved en bolgelengde på 25.4 nm. Etter fjerning av metanol under forminsket trykk lyofiliseres hver fraksjon. Det torkede materiale opploses i vann og adsorberes på en soyle pakket med 20 ml "Diaion-HP-10". Sbylen vaskes med 200 ml vann og elueres med 20% etanol. De fraksjoner som er positive for ninhydridproven, oppsamles og lyofiliseres, hvorved det oppnås 14,0 mg A-isomer og 24,6 mg B-isomer som hvite pulvere il bestående, av kaliumsalt.

A: mest polare fraksjon

/<a>7o<2>° (H20, C=0, 5): -74,2° -1

IR(KBr)Y^ks: 1750'1690'1640

PMR(D20) & (ppm): 7,51 (5H, s), 6,15 (1H, 5, J=3, 9Hz), 5,20 (1H, d, J=4, 9Hz), 5,19 (1H, s), 3,88 (1H, oktett, J=8, 3, 7, 4,9 Hz), 2,41-1,41 (4H, m)

B: minst polare fraksjon

</a7j>f° (<H>20, c=0,5): +57,2°

IRCKBr)^™^: 1760, 1690, 1640

PMR(D20)/(ppm): 7,51 (5H, s), 6,08 (1H, t, J=4, 2Hz), 5,41 (1H, d, J=4, 9Hz), 3,83 (1H, oktett, J=8,6, 3,7, 4,9 Hz), 2,28-1,01 (4H, m)

Når man tar cefalosporinenes struktur-aktivitets-forhold i betraktning, tildeles den minst^polare isomer, som

har dekstro ^a/^-verdi og sterkere antimikrobiell aktivitet enn den mest( polare isomer som vist i nedenstående tabell, absolutt 6(R)7(S) konfigurasjon.

Eksempel 7

Fremstilling av (±)-cis-7-/'CR)-2-fenyl-2-(4-etyl-2,3-diokso-l-piperazinylkarbonylamino)-acetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-1-azabicyklo/4", 2, Ojokt-2-en-8-on:

i

Metode a)

68 mg (0,286 mmol) (<i>)-cis-7-amino-2-t-butyloksy-kårbonyl-l-azabicyklo^/5-, 2,07okt-2-en-8-on og 100,4 mig" (0,286 mmol).(R)-2-fenyl-2-(4-etyl-2,3-diokso-l-piperazinylkarbonyl-amino)eddiksyre opploses i 2 ml vannfritt'metylenklorid og

det tilsettes 70 mg (0,315 mmol) dicykloheksylkarbodiimid opplost i 1 ml vannfritt metylenklorid under isavkjoling. Blandingen omrbres i 6 timer og omrbres ytterligere ved en temperatur på 10°C natten over. Reaksjonsblandingen filtreres og filterkaken vaskes med metylenklorid. Filtratet og vaskeopplbsningene kombineres og vaskes suksessivt med 1% fosforsyre, mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning og mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres for oppnåelse av 189 mg rå acylforbindelse. Produktet renses ved "silisiumdioksydgel-kromatografi under anvendelse av 9 g silisiumdioksydgel og et opplbsningsmiddel bestående h-heksan og etylacetat i volumforholdet 1:2 for oppnåelse av 43 mg mest polare isomer, 20 mg minst polare isomer og 11,1 mg av en blanding av de to

"isomere. Det totale utbytte er 54,1%."

Den mest polare isomer:

IR(CHC1,)Yc n : 1780, 1720, 1695 (sh), 1685

maks

NMR(CDC13) S(ppm): 7,73 (d, 1H!, J=7, OHz), 7,37 fs, 5H), 6,25 (m, 1H), 5,7-5,0 (m, 2H), 4,3-3,0 (m, 7H), 2,6-0,7 ,(m, 4H),

1,50 (s, 9H), 1,20 (t, 3H)

Den minst polare isomer:

.orr,"1

IR;(CHCl3)Y^<m>ks: 1780, 1695, 1685, 1620

NMR(CDC13) £ (ppm): 7,77 (d, 1H, J=8, OHz), 7,30 (m, 5H), 6,21 .(m, 1H), 5,67-5,33 (m, 2H), 4,5-3,2 (m, 7H), 3,5-1,0 (m, 4H), 1,50 (s, 9H), 1,20 ( t~ 3H)

Metode b)

428,5 mg (1,13 mmol) (R)-2-fenyl-(4-etyl-2,3-diokso-1- piperazinylkarbonylamino)eddiksyre opploses i 10 ml tbrket tetrahydrofuran og tilsettes 1,25 ml (1,25 mmol) IN N-metylmorfolin/tetrahydrofuran og 1,25 ml (1,25 mmol) IN isobutylklorformiat/tetrahydrofuran ved en temperatur på -30°C. Blandingen omrbres i 30 minutter og det tilsettes 235 mg (1,13 mmol)

(-)-cis-7-amino-2-t-butyroksykarbonyl-l-azabicykiso/4,2,Q7okt-2- en-8-on opplbst i 5 ml vannfritt metylenklorid. Blandingen

får reagere i 1 time og omrbres ved en temperatur på 10°C

natten over. Reaksjonsblandingen fortynnes med 20 ml etylacetat og vaskes suksessivt med vann, 0,1N saltsyre, mettet natriumhydrogenkarbonat og vann. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres for oppnåelse av 570 mg rå acylforbindelsé. Produktet renses og fraksjoner-es ifblge metode a), med den unntagelse at det anvendes 27 g silisiumdioksydgel for oppnåelse av 73- mg mest polare isomer og 61 mg minst polare isomer (totalutbytte 65,4%). Isomerenes IR- og NMR-spektra stemmer overens med spektrene av isomerene fremst\Lt ved metode a)

Eksempel 8

Fremstilling av (-)-cis-7-/lR)-2-fenyl-(4-etyl-2,3-diokso-l-piperazinylkarbonylamino)-acetamido7-l-azabicyklo/4\ 2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

103 mg (0,248 mmol) (<±>)-Cis-7-ZlR)-2-fenyl-2-(4-etyl-2, 3-diokso-l-piperiazinylkarbonylamino)-acetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/Zi-, 2,07okt-2-en-8-on (den minst polare isomer) fremstilt i eksempel 7, opplbses i en blanding av 5 mi trifluoreddiksyre, 5 ml metylenklorid og

-.2 dråper anisol. Blandingen får reagere ved 0°C i 2 timer og konsentreres ved forminsket trykk. Til konsentratet settes

tbrket benzen, og blandingen konsentreres igjen for oppnåelse av et oljeaktig produkt. Til produktet tilsettes eter og blandingen omrbres ved romtemperatur for dannelse av et gult bunnfall. Ved filtrering oppsamles 104 mg råprodukt som et gult pulver. Råproduktet opplbses i etylacetat og ekstraheres med 5 ml mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsaning 3

ganger. Ekstraktene vaskes med etylacetat. Den vaskede opplosning innstilles til pH 2,5 med 0,5N saltsyre under-isavkjbling og ekstraheres med 5 ml etylacetat 3 ganger. Ekstrakten vaskes med mettet natriumkloridopplbsning, torkes med magnesiumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 41 mg (46,0%) av et blekgult pulver.

om"1

IR(KBr) v/maks: 1175'1"720»l685'" 1620 (sh)

NMR(CD3OD);_J(ppm): 7,31 (s, 5H), 6,33 (t, 1H, J=4,0Hz), 5,40 (m, 2H), 4,30-3,1 (m, 7H), 2,40-0,7 (m, 4H), 1,27 (t, 3H)

Ut fra den sterke antimikrobielle aktivitet som vist i den nedenstående tabell tildeles denne forbindelse absolutt 6(R)7(S) konfigurasjon.

Eksempel 9 Fremstilling av (±)-cis-7|3-/TR)-2-f enyl-2-t-butyloksykarbonyl-aminoacetamido7-4(3-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4\2,07okt-2-en-8-on:

132 mg (0,53 mmol) (R)-N-t-butyloksykarbonylfenyl-glycin. opplbses i 5 ml vannfritt tetrahydrofuran og det tilsettes 0,53 ml (0,53 mmol) IN N-metylmorfolin og 0,53 ml (0,53'mmol) IN isobutylklorformiat ved en temperatur på 0°C. Blandingen omrbres i 15 minutter og deretter tilsettes 0,07 ml (0,5 mmol) trietylamin og 1,44 mg (0,5 mmol) hydroklorid (-)-cis-7P-amino-4|3-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/Zj., 2,07-okt-2-en-8-on, fremstilt i referanseeksempel 12.. Blandingen omrbres ved en tempe' ratur på 0 o C i 1 time og d'eretter ved en

temperatur på 5..- 10°C natten over.

Reaksjonsblandingen fortynnes med 10 ml etylacetat ag vaskes suksessivt med 10% sitronsyre, mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning og mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres for oppnåelse av en rå acylforbindelse.. Produktet

renses ved sbylekromatografi under anvendelse av 30 g silisiumdioksydgel og et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og

etylacetat i volumforholdet 3:1. Det oppnås 150 mg (61,7%) av den bnskede forbindelse som et pulver.

-1

IR(KBr)Y^ks<:>3290, 1780, 1720, 1685, 1665

NMR(CDC13)<£(ppm): 7,34 (5H, s), 6,60, 6,49 (henholdsvis 1H og d, J=7), 6,11 (henholdsvis 1H og d, J=2Hz), 5,66, 5,60 (henholdsvis 1H og\d, J=7Hz), 5,18 (2H, m), 3,86 (1H, m), 2,46 (1H, m), 1,75 (2H/<->br), 1,51 (9H, s), 1,42 (9H, s), 1,15, 0,98

(henholdsvis 3H og d, J=7,5Hz)

Eksempel 10

Fremstilling av trifluoracetatet av (-)-cis-7(3-/TR)-2-fenyl-2-aminoacetamido74(3-metyl-2-karboksy-l-azabicyklo/4\ 2,Q7okt-2-en-8-on:

100 mg (0,21 mmol) (-)-eis-7P-/rR)-2-fenyl-trbutyl-oksykarbonyl-aminoacetamido7-4(3-metyl-2-t-butyloksykarbonyfi-l-azabicyklo/4\ 2,07<->kt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 9, opplbses i 1 ml vannfritt metylenklorid, og det tilsettes 1 ml trif luoreddiksyre under avkobling i et isbad.. Blandingen hensettes ved en temperatur på 0 - 5°C i 3,5 timer under omrysting av og til. Reaksjonsblandingen konsentreres under forminsket trykk. Konsentratet tritureres med 5 ml vannfri dietyleter og eterlaget fjernes ved dekantering. Behandlingen gjentas 3 ganger og den resulterende kake torkes under forminsket trykk for oppnåelse av 70 mg (75%) av den bnskede forbindelse som pulver.

-1

IR(KBr)V^<m>k9: 3450 (sh), 3230 (sh), 3060, 2960 - 2800, 1976,

1695 (sh), 1681 (sh), 1673

NMR(DMSO-dg) £(ppm): 9,29 (1H, t, J=8Hz), 7,49 (5H, s), 6,11,

6,04 (henholdsvis 1H og d, J=2Hz), 5,30 (1H, m), 4,97 (1H, d, v J=4Hz), 3,82 (1H, br), 2,44 (br, delvis overlappende med signalet .til DMS0-d6), 1,8.2 (2H, br), 1,14, 0,91 '(henholdsvis 3H og d, J=5,7Hz)

Eksempel 11

Fremstilling av (-)-cis-7|3-j/rR-)-2-fenyl-2-t-butyloksykarbonyl-acetamido7-4a-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4\ 2,07-okt-2-en-8-on:

Det anvendes samme metode som i eksempel 9 med unntagelse av at det som utgangsforbindelse anvendes 144 mg

(*)-cis-7P-amino-4oc-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt i referanseeksempel 11. Som resultat oppnås 140 mg (57,6%) av den bnskede forbindelse.

.nm"1

IR(KBr)V^ks. 3330>1972 (sh))1782>1730, 1692, 1675

NMR(CDC13) é (ppm): 7,34 (5H, s), 6,73, 6,60 (henholdsvis 1H og d, J=7Hz), 6,28 (1H, t, J=6Hz), 5,60 (1H, m), 5,43-5,18 (2H, m), 3,82 (1H, m), 2,55 (1H, m), 1,69' (2H, m), 1,51 (9H, s), 1,41 (9H, ,s~), 1,09, 103 (henholdsvis 3H og d, J=7Hz) Eksempel 12

Fremstilling av (-)-cis-7|3-/lR)-2-fenyl-2-aminoacetamido7-4oc-metyl-2-karboksy-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on:

Det anvendes samme metode som "i eksempel 10,. med den unntagelse at det som utgangsforbindelse anvende " 80 mg (-) -cis-7(3-/TR) -2-f enyl-2-t-butyloksykarbonyl-aminoacetamido7-4oc-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-'l-azabicyklo/£, 2,07okt-2-en-8-on;, fremstilt i eksempel 11. Som resultat oppnås 73 mg (100%) av den bnskede forbindelse. IR(KBr)Y^kg: 3430, 3200, 3060, 2960-2650, 1780 (sh), 1770, 1695 (sh), 1680" NMR(DMSO-dg) S (ppm): 9,36 (1H, d, J=8Hz), 7,47 .(5H, s), 6,28 (1H, d, J=6Hz), 5,40 (1H, m), 4,98 (1H, m), 3,70 (1H, br), 2,45 (br, delvis overlappende med signalet for DMSO-dg), 1,80 (2H, m), 1,06, 0,95 (henholdsvis 3H og d, J=7,5Hz) 30 mg av den ovenfor angitte forbindelse opplbses i 100^ul vann, og opplbsningen underkastes hbytrykksvæske-kromatografi under anvendelse av "Bondapak C-18" som bærer og et opplbsningsmiddel bestående av 7% metanol i 0,.2N kalium-hydrogenfosfatopplbsning, 5 ganger. Isoleringen av de to fraksjoner kontrolleres ved hjelp av en spektroskoplsk analyse ved en bblgelengde på 254 nm. Etter fjerning av metanol under forminsket trykk lyofiliseres hver fraksjon. Det tbr-kede materiale opplbses i vann og adsorberes på en sbyle pakket med 20 ml "Diaion HP-10". Sbylen vaskes med 200 ml vann og elueres med 20% etanol. Eluatet opptas i 20.ml fraksjoner. De fraksjoner.som er positive for ninhydridprbven, oppsamles og lyofiliseres for oppnåelse av 8,9 mg (utbytte 29%) C-isomer, som elueres tidligst ved hbytrykksvæske-kromatogra-fién, og 11,4 mg (utbytte 38%) D-isomer, som elueres senere. Disse er kaliumsaltene av den bnskede forbindelse. Isomerenes spesifikke dreininger er som folger:

nrO

C-isomer"38,4° (H20, C = 0,5)

i Ro

D-isomer /a7^ +4,23 (H20, C = 0,52)

D-isomeren, som har sterkere antimikrobiell aktivitet, enn diastereoblanding (\-)-form7som vist i nedenstående tabell, tildeles absolutt 6(R)7(S) konfigurasjon.

D-isomef:

' 'orr,"1

IR(KBr)Y^ks:3420, 1766; 1695, 1633

PMR(D20) /(ppm): 7,51 (5H, s), 6,10 (1H, d, J=5,D, 5,47 (1H,

•d, J=4,7), 5,19 (1H, s), 3,89 (1H, m), 2,45 (1H, m), 1,44-1,04 (2H, m), 1,00 (3H, d, J=7,4)

Eksempel 13 - --

Fremstilling av (-)-cis-7|3-/-2-(2-tritylamino-4-tiazolyl-2-metoksyiminoacetåmido7-4a-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/Zr, 2,07okt-2-en-8-on:

Metode A

88 mg (0,35 mmol) (<±>)-cis-7p-amino-4a-metyl-2-t-butyloksykarbonylf-l-azabicyklo^4, 2,Q7okt-2-en-8-on opplbses

i 1,5 ml vannfritt metylenklorid og det tilsettes 155 mg (0,-35 mmol) 2-(2-tritylamino-4-tiazolyl)-2-anti-metoksyimino-eddiksyre. Videre tilsettes 1,5 ml vannfritt dioksan for å gjore blandingen mer homogen. Blandingen tilsettes deretter 80 mg (0,39 mmol) dicykloheksylkarbodiimid opplost i 1 ml

dioksan, og den resulterende blanding omrbres ved en temperatur på 5 - 10°C natten over. Det resulterende hvite bunnfall frafiltreres og det tilsettes 10 ml etylacetat og 5 ml eter til filtratet. Blandingen vaskes suksessivt_,med 5 ml kald 1% fosforsyre tre ganger og med mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 290 mg råprodukt som et halvfast stoff. Råproduktet fbres på en sbyle pakket med 27 g silisiumdioksydgel og elueres med en blanding av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 2:1. Eluatet konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 170 mg (72%) av den bnskede forbindelse. Metode B

243,9 mg (0,05 mmol) 2-(2-tritylamino-4-tiazolyl)-2-anti-metoksyiminoeddiksyre opplbses i 5 ml vannfritt tetra-hydrofurah]og det tilsettes 0,55 ml (0,55 mmol) IN N-metylmorfolin. Til blandingen tilsettes dråpevis 0,55.ml.(0^55mmol) IN isobutylklorformiat/tetrahydrofuran ved en temperatur på 0°C under omrbring, og blandingen omrbres i ytterligere 15 minutter. Det tilsettes 0,11 ml (0,5 mmol) trietylamin til blandingen etterfulgt av tilsetning av 144 mg (0,5 mmol) hydroklorid av (-)-cis-7(3-amino-4a-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-

azabicyklo/^,2,07okt-2-en-8-on. Blandingen omrbres ved en temperatur på 5 - 10°C natten over og konsentreres under forminsket trykk. 10 ml etylacetat tilsettes til konsentratet og den resulterende'blanding vaskes suksessivt med 5% saltsyre, mettet natriumkloridopplbsning, mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning og mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av et råprodukt. Produktet fores på en sbyle pakket med 25 g silisiumdioksydgel og elueres med en blanding av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 5:3. Eluatet konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av■250 mg (74,0%) av den bnskede forbindelse. Forbindelsens fysiske egenskaper stemmer overens med den forbindelse som ble fremstilt ved metode A.

Eksempel 14

■Fremstilling av (-)^-cis-7P-/2-(2-amino-4-tiazolyl)-2-anti-metoksyiminoacetamido7-4a-metyl-2-karboksyl-l-azabicyklo-[%, 2,Q7okt-2-en-8-on:

70 mg (0,10s mmol)'(-)-eis-7p-/2-(2-tritylamino-4-tiazoiyl)-2-anti-metoksyimino-acetamido7-4a-metyl-2-t-butyl-pksykarbonyl-l-azåbicyklo/7r, 2, Q7okt-2-en-8-on, fremstilt i eksémpel 13, opplbses i 0,5 ml vannfritt metylenklorid og 0,1 ml anisol. Blandingen avkjbles til 0°C etterfulgt av tilsetning av 0,5 ml! triifluoreddiksyre. Den resulterende blanding hensettes i isbad i 3,5 timer.

Reåksjonsblandingen konsentreres under forminsket trykk. Konsentratet tritureres med 5 ml vannfri dietyleter og filtreres for oppnåelse av et hvitt pulver. Pulveret opp loses i 2 ml 50% eddiksyre. Opplesningen hensettes ved romtemperatur i 2,5 timer og deretter ved 5 - 10°C natten over. Oppløsningen hensettes ytterligere ved romtemperatur (25°C) i 6 timer og konsentreres deretter under forminsket trykk for oppnåelse av etfglassaktig produkt. Det glassaktige produkt tritureres grundig med eter og filtreres. Filtratet torkes for oppnåelse av 20 mg (51%)"av den bnskede forbindelse.

■ -1

IR(KB<r>)v^ks<:>3480, 3300, 1770, 1680, 1635

NMR(DMSO-dg) & (ppm): 9,17 (1H, d, J=8Hz), 7,50 (1H, s), 7,24 (2H,. m), 6,31 (1H, d, J=6Hz), 5,52 (1H, m), 4,00 (3H, s), 2,65 (br, delvis overlappende med signalet for DMSO-dg), 1,06

(3H, d. J=7,5Hz)

Eksempel 15

Fremstilling av (i)-cis-7|3-/2-(2-tritylamino-4-tiazolyl)-2-metoksyiminoacetamido7-4p-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/Zi-, 2,07okt-2-en-8-on:

Det benyttes samme metode som i eksempel 13, med unntagelse av at det som utgangsforbindelse anvendes 202 mg (0,7 mmol) (-)-cis-7P-amino-4P-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4", 2, Q7okt-2-en-8-on. Som resultat oppnås 251 mg (53%) av den bnskede forbindelse.

Smeltepunkt: 201,0 - 202,0°C

IR(KBr)V^ks: 3225, 1780 (sh), 1760, 1725, 1668, 1635

NMR(CDC13^CD30D) Hppm): 7,35 (1/2H, s), 7,30 (15H,. s), 6,%

(1/2H, s), 6,14 (1H, d, J=2Hz), 5,38 (1H, d-d, J=5Hz), 4,09 (3/2H, s), 4,01 (3/2H, s), 3,96 (1H, m), 2,45 (1H, m), 2,05 (2H, m),,l,53 (9/2H, s), 1,52 (9/2H, s), 1,16 (3H, d-d,

J=7,5Hz)

Eksempel 16

Fremstilling av (-)-cis-7|3-/2-(2-amino-4-tiazolyl)-2-metoksy-iminoacetamido7-|4(3-metyl-2-karboksy-l-azabicyklo/4\ 2,07okt-2-en-8-on:

Det benyttes samme metode som i eksempel 14, med unntagelse av at det som utgangsforbindelse anvendes 70 mg (-)-cis-7P-/2-(2-tritylamino-4-tiazolyl)-2-metoksyiminoacetamido7-4(3-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/Zi-, 2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 15. Som resultat oppnås.22 mg (56%) av den bnskede forbindelse.

IR(KBr)V^ks: 3460, 3280, 1780 (sh), 1770, 1670, 1630

NMR(DMS0-d6) <f (ppm): 9,24 (1/2H, d, J=8Hz), 9,17 (1/2H, d, J=8Hz), 7,50 (1/2H, s), 7,25 (2H, m), 6,78 (1/2H, s), 6,10 (1H,: d, J=2Hz), 5,47 (1H, m), 4,00 (3/2H, s), 3,85 (3/2H, s), 2,60 (br, delvis overlappende med signalet for DMS0-dg), 1,91 (2H, m), 1,12 (3H, d-d,. J=7,5Hz)

. Eksempel 17 Fremstilling av (-)-cis-7P-/2-(2-kloracetylamino-4-tiazolyl)-2-syn-metoksyiminoacetamido7-4a-metyl-2-karboksy-l-azabicyklo-fe,2,07okt-2-en-8-on:

"'., '";• 172 mg (0,62 mmol) (2-kloracetylamino-4-tiazolyl)-2-syn-metoksyiminoeddiksyre suspenderes i 3,6 ml vannfritt diklormetan og det tilsettes 68,9 mg (0,68 mmolLtrietylamin for å gjore opplbsningen homogen. Under avkjbling i et is/

, natriumklorid-bad tilsettes 129. mg (0,62 mmol) fosforpentaklorid til blandingen under omrbring og den resulterende blandingen under omrbring•og den resulterende blanding omrbres i 1,5 timer. 13,8 ml n-heksan tilsettes til blandingen og overvæsken fjernes ved dekantering. Til resten tilsettes 1,3 ml vannfritt tetrahydrofuran for oppnåelse av en syreklorid-opplbsning.

På den annen side opplbses 160 mg (0,52 mmol) trifluoracetat (-)-cis-7(3-amino-4a-metyl-2-karboksy-l;-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt i referanseeksempel 13, i 1 ml 50% tetrahydrofuran/vann, og 209 mg (2,06 mmol) trietylamin tilsettes. Blandingen tilsettes til'syreklorid-opplbsningen under isavkjbling og omrbring. Etter omrbring ved samme temperatur i 1,5 timer innstilles blandingen til pH 4-5 med IN saltsyre og ekstraheres med 10 ml etylacetat . 3'ganger. Etylacetatekstraktene vaskes med natriumkloridopplbsning, torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under,forminsket trykk for oppnåelse av 147 mg. (52,1%) av den bnskede forbindelse.

IR(KBr)Y°mks: 17,65, 1680

PMR(DMS0-d5) é (ppm): 7,40 (1H, s), 6,32 (1H, d, J=5,2Hz), 5,53 (1H, m), 4,35 (2H, s), 3,90 (3H, s), 2,50 (1H, m), 1,90-1,27 (2H, m), 1,10 (3H, d, J=7,5Hz)

Eksempel 18

Fremstilling av (<i>)-cis-7P-/2-(2-amino-4-tiazolyl)-2-syn-metoksyiminoacetamido7-4a-metyl-l-azabicyklo/4\ 2,Q7okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre

147 mg (0,321 mmol) av den i eksempel 17 fremstilte kloracetylforbindelse opplbses i 0,5 ml dimetylsulfoksyd og 2,5 ml dimetylformamid, og det tilsettes 47 mg (0,64 mmol) tiourea ved romtemperatur under omrbring. Blandingen omrbres i 14 timer. Etter tilsetning ffi eter fjernes overvæsken ved dekantering og resten opplbses i en liten mengde dimetylsulfoksyd. Oppløsningen adsorberes på en sbyle pakket med 10 ml "Diaion HP-10". Sbylen vaskes med 240 ml vann og elueres med et opplbsningsmiddel bestående /av metanol og vann i volumfor^ holdet 1:10 til 1:2. Eluatene oppsamles og metanolen fjernes ".under forminsket trykk. Resten adsorberes igjen på en sbyle pakket med 10 ml "Diaion HP-10" og sbylen vaskes med 500 ml vann. Elueringen utfores med et opplbsningsmiddel bestående av metanol og'vann i volumforholdet 1:1. Eluatene oppsamles '-og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 50,2 mg (41,1%) av den bnskede forbindelse.

IR(KBr)y£mks: 1760, 1680, 1655

PMR(DMS0-d6) S (ppm): 9,27 (1H, d, J=9,0Hz), 7,15 (2H, br), 6,75. (1H, s), 6,31 (1H, d, J=4,2Hz), 5,58 (1H, br), 3,85

(3H, s), 2,60 (1H, m), 1,67 (2H, br), 1,08 (3H, d, J=8Hz)

Eksempel 19

Fremstilling av (-)-cis-7-/2-(2-kloracetylamino-4-tiazolyl)-2-syn-metoksyiminoacetamido7-l-azabicyklo/5, 2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

54,2 mig] (0,195 mmol) 2-kloracetylamino-4-tiazolyl-2-syn-metoksyiminoeddiksyre (syn-type) suspenderes i 0,98 ml vannfritt metylenklorid og det tilsettes 23,48 mg (0,195 mmol) trietylamin. Til reaksjonsblandingen tilsettes 40,8 mg (0,195 mmol) fosforpentaklorid under isavkjoling. Etter omrbring i 20 minutter tilsettes 3,92 ml mheksan, og overvæsken fjernes ved dekantering. Resten opplbses i 1,96 ml tetrahydrofuran for oppnåelse av en syreklorid-opplbsning. På den annen side opplbses 45,9 mg (0,155 mmol) trifluoracetat (- )-cis-7-amino-2-karboksy-l-azabicyklo/4", 2,07-okt-2-en-8-on, fremstilt i referanseeksempel 8, i 2 ml 50% . tetrahydrofuran/vann, og 47,4 mg (0,469 mmol) trietylamin tilsettes. Til denne opplosning tilsettes den ovennevnte syreklorid-opplbsning under isavkjoling og blandingen omrbres i 2 timer. Blandingen innstilles til pH 2,0 med 10% saltsyre og ekstraheres 3 ganger med etylacetat. Ekstraktene vaskes med mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres for oppnåelse av 80 mg av den bnskede forbindelse som et blekgult pulver.

orr,"1

IR(KBr)Y£mks: 1760, 1710, 1660

PMR(DMS0-d6) & (ppm): 16,64 (1H, br), 9,39 (1H, d, J=8,8Hz), 7,47 (1H, s), 6,31 (1H, t), 5,51 (1H, d-d, J=5,5, 8,8Hz), 4,38 (2H, s), 3,89 (3H, s), 2,54-0,8 (4H, m)

Eksempel 20

Fremstilling av (-)-cis-7-/2-(2-amino-4-tiazolyl)-2-syn-metoksyacetamido7-l-azabicyklo/4", 2,07<->kt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

80 mg av den i eksempel 19 fremstilte forbindelse opplbses i 0,96 ml dimetylacetamid. Til oppløsningen tilsettes 27,5 mg tiourea ved romtemperatur under omrbring, og bland-N

ingen omrbres i 14 timer.. Etter tilsetning av eter fjernes overvæsken ved dekantering for oppnåelse av en rod oljeaktig rest. Resten renses ved kromatografi under anvendelse av "Diaion HP-10" for oppnåelse av 19,2 mg av den bnskede forbindelse

om"1

IR(KBr)v^ks: 1760'1670'l6''30

PMR(DMSO-dg) é (ppm): 9,26 (1H, d, J=8,6Hz), 7,11 (2H, br), 6,75 (1H, s), 6,30 (1H, t), 5,47 (1H, d-d, J=5!,4 8,8 Hz), 3, 8. 9 (3H, s), 2,5-1,0 (4H, m)

Eksempel 21

Fremstilling av (-)-cis-7(3-(2-tienylacetamido)-4oc-acetoksy-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-2-karboksylsyre:

126 mg (i )-cis-7(3-amino-4oc-acetoksy-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre, fremstilt i referanseeksempel 14, opplbses i 3,0 ml dioksan og 4,0 ml vann. Opp-løsningen avkjbles på et is/natriumklorid-bad. Til oppløs-ningen tilsettes 105 mg natriumhydrogenkarbonat og dessuten 84 mg 2-tienylacetylklorid opplost i 1 ml dioksan. Blandingen

omrbres i 1 time. Deretter innstilles reaksjonsblandingen til pH 2,0 med IN saltsyre og ekstraheres 3 ganger med etylacetat. Ekstraktene kombineres og vaskes med mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og filtreres. Filtratet konsentreres og konsentratet fores på en sbyle mettet med 20 g silisiumdioksydgel. Elueringen utfores med en blanding av kloroform og etanol i volumforholdet 20:1. Fraksjonene inneholdende den bnskede forbindelse kombineres og konsentreres til tbrrhet, hvorved det oppnås 89,1 mg av den bnskede forbindelse som et blekgult pulver. Utbytte 47%. Forbindelsens egenskaper er anfbrt nedenfor.

orr,"1

IR(KBr)V™ks: 1-780, 1745, 1660

NMR(CDC13+ GD30D) i (ppm): 7,27-6,93 (3H, m), 6,39 (1H, d, J=5,4Hz), 5,43 (1H, d, J=4,9Hz), 5,40 (1H, m), 3,79 (2H, s), 2,10-1,26 (2H, m), 2,06 (3H, s)

Antibakterielle aktiviteter av de i eksemplene 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 og 21 fremstilte forbindelser bestemmes ved hjerteinfusjonsagar-fortynningsmetoden (pH 2,7). Resultatene er anfbrt i fblgende tabell. Cefazolin anvendes som referanse. Eksempel 22 Fremstilling av (-)-cis-7-fenylacetamido-l-azabicyklo/^, 2, 0j-okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre

50,1 mg (0,28 mmol) (-)-cis-7-amino-l-azabicyklo-/Zt, 2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre, fremstilt som i referanseeksempel 16 (eller 8), opplbses i 1 ml vann og 2 ml aceton, og 55,5 mg natriumhydrogenkarbonat tilsettes. Til blandingen tilsettes 0,3 ml IN fenylacetylklorid/metylenklorid-opplosning ved en temperatur på -20°C og blandingen omrbres ved den samme temperatur i 20 minutter. Etter at temperaturen er hevet til romtemperatur omrbres reaksjonsblandingen i 2 timer. Deretter innstilles blandingen til pH 1,5 med 10% saltsyre under isavkjoling og ekstraheres 3 ganger med 5 ml etylacetat. Ekstrakten vaskes med mettet natriumkloridopplbsning, torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk. De resulterende krystaller utvinnes ved filtrering og vaskes med en liten mengde etylacetat, hvorved det oppnås 39,7 mg (67,8%) av den bnskede forbindelse. Forbindelsens egenskaper er anfbrt nedenfor. Smeltepunkt: 192,0 - 193,0°C.

-1

IR(KBr)V^ks: 1770'l690'l650'1615

NMR(CD30D) /(ppm): 7,22 (5H, s), 6,40 (1H, 5, J=4,0), 5,33 (1H, d, J=5i0), 3,57 (2H, s), 2,5-1,5 (9H, m)

Eksempel 25

Fremstilling av (-)-cis-7(3-fenylacetamid-4oc-metyl-l-azabicyklo/5-, 2,Q7okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre

399 mg (1,28 mmol) trifluoracetat av (-)-7|3-amino-4a-metyl-l-azabicyklo/5,2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre, fremstilt som i referanseeksempel 18 (eller 13), opplbses i 6,4 ml vann og 12,8 ml aceton, og 432 mg (5,14 mmol) natriumhydrogenkarbonat tilsettes. Blariclingen omrbres under isavkjoling. Etter tilsetning Tav' 258,5 mg (5,14 mmol) fenylacetyl-

klorid får blandingen reagere under isavkjoling i 3 timer. Reaksjonsblandingen innstilles til pH 3 med 0,1N saltsyre og ekstraheres 5 ganger med 10 ml etylacetat. Ekstrakten vaskes med mettet natriumkloridopplbsning, torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk. Eter tilsettes til konsentratet og de dannede krystaller utvinnes ved filtrering. Således oppnås 242,7 mg av den bnskede forbindelse.

Det vandige lag oppnådd ved den ovennevnte etylacetat-ekstraksjon ekstraheres igjen 5 ganger med 10 ml etylacetat. Den ovenfor beskrevne krystalliseringsprosess gjentas, hvorved det oppnås 27,6 mg av den bnskede forbindelse. Til de resterende vannlag tilsettes mettet natriumkloridopplbsning og blandingen ekstraheres 5 ganger med 10 ml etylacetat. Den ovenfor angitte krystallisasjonsprosess gjentas, hvorved det oppnås 21,3 mg av den bnskede forbindelse. Totalmengden av den bnskede forbindelse er 293,6 mg. Utbytte 72,6%. Forbindelsens egenskaper er anfbrt nedenfor.

orr,"1

IR(KBr)Ymaks: 1775'1698'1655

NMR(CD30D) £ (ppm): 7,31 (5H, s), 6,48 (1H, d, J=5,0), 5,42 (1H, d, J=5,2), 3,85 (1H, m), 3,60 (2H, s), 2,62 (1H, m), 1,60 (2H, m), 1,10 ^3H, d, J=7,5)

Eksempel 24

Fremstilling av (-)-cis-7-cyanoacetamido-2-t-butyloksykarbonyl-r-azabicyklo/2+, 2,07okt-2-en-8-on

42,5 mg (0,5 mmol) cyanéddiksyre og 57,5 mg (0,5 mmol) N-hydroksysuccinimid opplbses i 2,5 ml tbrket dioksan, og 103,3 mg (0,5 mmol) N,N-dicykloheksylkarbodiimid tilsettes. Blandingen omrbres ved romtemperatur i 1 time. De resulterende krystaller.fjernes ved filtrering og filtratet konsentreres

under forminsket trykk. Til den oppnådde rest tilsettes 5 ml torket diklormetan og uoppløselig materiale fjernes ved fil- . trering for oppnåelse av en opplosning av succinimidesteren av cyaneddiksyre.

På den annen side opplbses 123 mg (0,45 mmol) hydroklorid av (-)-cis-7-amino-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo-2,Q7okt-2-en-8-on (i det etterfølgende beregnet som amino-forbindelsen) og 0,077 ml trietylamin i 5 ml torket diklormetan. Til denne opplosning tilsettes den ovennevnte opplosning av succinimidesteren av cyaneddiksyre. Blandingen omrbres ved romtemperatur i 4 timer og konsentreres deretter under forminsket trykk. Det således oppnådde ol jeaktiige produkt underkastes silisiumdioksydgel-sbylekromatografi under anvendelse av en blanding av kloroform og metanol i volumforholdet 15:1. Fraksjonene inneholdende den bnskede forbindelse kombineres og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 112 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte 73,4%.

IRCNaCiyQ^: 3310, 2265, 1765, 1720, 1680

NMR(CDCl3)<f (ppm): 7,90 (1H), 6,32 (1H, m), 5,35 (1H, m),

3,75 (1H, m), 2,03 (6H, m), 1,52 (9H, s)

Eksempel 25

Fremstilling av (<i>)-cis-7-/2-(2-furyl)-2-syn-metoksyimino-acetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo(/5-, 2,07okt-2-en-8-on

Den samme metode som i eksempel 24 gjentas med den , unntagelse av at det istedenfor cyaneddiksyre anvendes 158 mg (0,934 mmol) 2-(2-furyl)-2-metoksyiminoeddiksyre, og at det anvendes 247 mg (0,9 mmol) av aminoforbindelsen. Som resultat

oppnås 1313 mg av den onskede forbindelse.

Utbytte: 89,3%

-1

IR(NaCl)V°<m>ks: 3310, 1765, 1725, 1715, 1685, 1655

NMR(CDC13) «f (ppm): 7,65 (1H, m), 7,52 (1H, m), 6,73 (1H, m), 6,46 (1H, m), 6,29 (1H, m), 5,40 (1H, m), 4,02 (3H, s), 3,78 (1H, m), 2,19 (4H, m), 1,50 (9H, s)

Eksempel 26

Fremstilling av (-)-cis-7-cyanmetyltioacetamido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabieyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 24 gjentas, med unntagelse av det istedenfor cyaneddiksyre anvendes 65,6 mg (0,5 mmol) cyanmetyltioeddiksyre. Som resultat oppnås 136,5 mg av den onskede forbindelse. Utbytte 86,3%.

IR(NaCl)V£mks: 3315, 2250, 1760, 1725, 1715., 1675, 1655, 1650

NMR(CDC13) £(ppm): 7,90 (1H, m), 6,32 (1H, m), 5,38 (1H, m), 3,72 (5H, m), 2,18 (4H, m), 1,52 (9H, s)

Eksempel 27

Fremstilling av (-)-cis-7-/2-(2-furyl)-2-hydroksy-iminoacet-amido72-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4", 2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 24 gjentas med unntagelse av det i stedet for cyaneddiksyre anvendes 156 mg (1 mmol) 2-(2-furyl)-2-hydroksyiminoeddiksyre, og at det anvendes 137 mg (0,5 mmol) av aminoforbindelsen. Som resultat oppnås 115 mg av den onskede forbindelse. Utbytte: 61,3%.

IR(NaCl)V^ksr7 3290, 1770, 1720, 1690, 1680, 1655

NMR(CDC13) ^(ppm): 7,51 (4H, m), 6,49 (1H, m), 6,28 (1H, m), 5,46 (1H, m), 3,88 (1H, m), 2,18 (4H, m), 1,49 (9H, s) Eksempel 28

Fremstilling av (-)-cis-7-/2-(2-tienyl)-2-hydroksyiminoacet-amido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-a^abicyklo/Zr, 2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 24 gjentas med unntagelse ^åv at det istedenfor cyaneddiksyre anvendes 85,6 mg (0,5 mmol) 2-(2-tienyl)-2-hydroksyiminoeddiksyre, og at det anvendes 137 mg (0,5 mmol) av aminoforbindelsen. Som resultat oppnås 103 mg av den onskede forbindelse. Utbytte: 52,6%.

, -1

IR(KBr)V^ks: 1760, 1720, 1675, 1655, 1650

NMR(CDC13) å (ppm): 8,02 (1H, m), 7,22 (4H, m), 6,18 (1H, m), 5,37 (1H, m), 3,78 (1H, m), 2,09 (4H, m), 1,46 (9H,'s) Eksempel 29

Fremstilling av (<i>)-cis-7-(l-tetrazolyl)acetamido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on:

79 mg (0,55 mmol) (1-terazolyl)eddiksyre og 137 mg (0,5 mmol) av aminoforbindelsen opplbses i 5 ml N,N-dimetylformamid og 113 mg (0,55 mmol) N,N-dicykloheksylkarbodiimid tilsettes. Blandingen omrbres ved romtemperatur i 2 timer og deretter tilsettes 50 ml IN natriumhydrogenkarbonatopplbsning. De resulterende krystaller fjernes ved filtrering og filtratet ekstraheres med 50 ml etylacetat 2 ganger. Etylacetatlagene kombineres, torkes med magnesiumsulfat og konsentreres under forminsket trykk. Det således oppnådde oljeaktige produkt renses ved silisiumdioksygel-kromatografi for oppnåelse av 157 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 90,1% -1

IR(NaCl)V^ks: 3290, 1765, 1725, 1715, 1685, 1680, 1670, 1635

NMR(CDC13) S (ppm): 8,94 (1H, s), 8,24 (1H, m), 6,29 (1H, m), 5,61 (3H, m), 3,77 (1H, m), 2,16 (4H, m), 1,49 (1H, s) Eksempel 30

Fremstilling av (-)-cis-7-(1-tetrazolyl)acetamido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4", 2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 29 gjentas med unntagelse av at det istedenfor (1-tetrazolyl)eddiksyre anvendes 79 mg (0,55 mmol) (2-tetrazolyl)eddiksyre. Som resultat oppnås

142 mg" av den onskede forbindelse. Utbytte 8;1,4%.

om"1

IR(rNaCl)v£aks: 3300'1760'1725'1705'1690

NMR(CDC13) Å (ppm): 8,60 (1H, m), 8,52 (1H, s), 6,29 (1H, m), 5,47 (2H, s), 5,35 (1H, m), 3,72 (1H, m), 2,15 (4H, m), 1750 (9H, s)

Eksempel 31

Fremstilling av (-)-cis-7-(4-pyridyl)tioacetamido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/5-, 2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 29 gjentas med unntagelse av at det i stedet for (1-tetrazolyl)eddiksyre anvendes 181 mg (0,725 mmol) hydrogenbromid av 4-pyridyltio-eddiksyre. Som resultat oppnås 148,6 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 76,3%.

IR(NaCl)V£mk^: 3290, 1775, 1725, 1715, 1690

NMR(CDC13)£(ppm): 8,38 (2H, m), 8,24 (1H, m), 7,25 (2H, m), 6,25 (1H, m), 5,35 (1H, m), 3,78 (2H, s), 3,78 (1H, m), 2,13 (4H, m), 1,52 (9H, s)

Eksempel 32

Fremstilling av (-)-cis-7-(2-tetrazolyl)acetamido-2-karboksyl-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on: 3 ml avkjblt trifluoreddiksyre tilsettes til 150 mg (0,431 mmol) (- )-cis-7-v(,2'-tetra2olyl)acetamido=2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo^4\ 2,07okt-2-en-8-on (i det fblgende betegnet som esterforbindelsen), fremstilt i eksempel 30. Opp-løsningen omrbres i 10 minutter og konsentreres deretter ved forminsket trykk ved romtemperatur. Til det resulterende hbyviskbse stoff tilsettes 10 ml eter. Blandingen omrbres i 20 minutter og filtreres deretter for oppnåelse av et fast produkt. Produktet opplbses i 2 ml metanol og blandingen hensettes i et isbad i 1 time. De resulterende krystaller fra-fUtreres og torkes, hvorved det oppnås 11,5 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 87,3%.

-1

IR(KBr)Y£<m>ks: 3340, 1765, 1720, 1685, 1635, 1555

Eksempel 53

Fremstilling av (-)-cis-7-(l-tetrazolyl)-acetamido-2-karboksyl-azabicyklo/5-, 2, Q7okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 32 gjentas, med unntagelse av det istedenfor esterforbindelsen anvendes 70 mg .(0,201 mmol) (-)-cis-7-(1-tetrazolyl)acetamido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 29. Som resultat oppnås 53,6 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 91,2%.

IR(KBr)V^kg: 3280, 1770, 1725, 1675, 1635, 1565

Eksempel 54

Fremstilling av (-)-cis-7-(4-pyridyl)tioacetamido-2-karboksy-l-azabicyklo/5., 2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 32 gjentas, med unntagelse av at det istedenfor esterforbindelsen anvendes 105 mg (0,27 mmol) (-)-cis-7-(4-pyridyl)tioacetamido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/^., 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 31. Som resultat oppnås 70 mg av den onskede forbindelse. Utbytte: 78,0%.

,-1

IR(KBr)V^ks: 1760, 1708, 1680, 1630

Eksempel 35

Fremstilling av (-)-cis-7-cyanacetamido-2-karboksy-l-azabi-cylo/4,2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 32 gjentas med unntagelse avl at det istedenfor esterforbindelsen anvendes 112 mg (0,367 mmol) (<i>)-cis-7-cyanacetamido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/^., 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 24.

Som resultat oppnås 81 mg av den onskede forbindelse. Utbytte: 88,6%.

orrT1

IR(KBrW™ks: 2270, 1755, 1708, 1690, 1655, I63O

Eksempel 56

Fremstilling av (-)-cis-7-/2-(2-furyl)-2-syn-metoksyimino-acetamido7-2-karboksy-l-azabicyklo/4', 2,Q7okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 32 gjentas med unntagelse av at det istedenfor esterforbindelsen anvendes 131 mg (0,336 mmol) (-)-cis-7-/2-(2-furyl)-2-metoksyiminoacet-amido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/5-, 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 25. Som resultat oppnås 78 mg av deri onskede forbindelse. Utbytte: 69,6%.

IR(KBr)Y^k<s:>1760, 1690, 1660, 1640, 1620

Eksempel 37

Fremstilling av (-)-cis-7-cyanmetyltioacetamido-2-karboksyl-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 32 gjentas med unntagelse av at det istedenfor esterforbindelsen anvendes 136 mg (0,387 mmol) (-)-cis-7-cyametyl-tioacetamido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/5-, 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 26. Som resultat oppnås 100 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte.78,0%.

IR(KBrW£mks: 2250, 1755, 1730, 1665, 1635

Eksempel 58

Fremstilling av (-)-cis-7-/2-(2-furyl)-2-hydroksyiminoacet-amido7-2-karboksy-l-azabicyklo/5., 2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 32 gjentas, med unntagelse av at istedenfor esterforbindelsen anvendes 115 mg (0,3 mmol) (-)-cis-7-/2-(2-furyl)-2-hydroksyiminoacetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4\ 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 27. Som resultat oppnås 92 mg av den onskede forbindelse. Utbytte 69%.

orr,"1

,- IR(KBr)Vmaks: 1760'1720'1680'1650'1535

Eksempel 59

Fremstilling av (<i>)-cis-7-/2-(2-tienyl)-2-hydroksyimino-acetamido7-2-karboksy-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on:

Den samme metode som i eksempel 32 gjentas, med unntagelse av at istedenfor esterforbindelsen anvendes 103 mg (0,263 mmol) (<i>)-cis-7-/2-(2-tienyl)-2-hydroksyiminoacet-amido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/5,2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i eksempel 28. Som resultat oppnås 71,6 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 81,2%.

-1

IR(KBr)Y^ks<:>1760, 1690, 1665, I63O

Eksempel 40

Fremstilling av (-)-cis-7-/2-(5,6-dihydro-l,4-ditiinyl)-acetamido7-2-karboksy-l-a:zabicyklo-/4', 2,Q7okt-2-en-8-on:

176 mg (1 mmol) 2-(5,6-dihyroksy-l,4-ditianyl)-eddiksyre og 115 mg (1 mmol) N-hydroksysu'ccinimid opplbses i 6 ml torket dioksan, og 206 mg (1 mmol) N,N-dicykloheksylkarbodiimid tilsettes. Bian.cL:i.ngen omrbres ved romtemperatur i 2 timer. De resulterende krystaller fjernes ved filtrering og filtratet konsentreres. Resten opplbses i 6 ml torket diklormetan.

På den annen side opplbses 109 mg hydroklorid av (i)-cis-7-amino-2-karboksy-l-azabicyklo/5, 2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt ved samme metode som i referanseeksempel 16, og 21 ml trietylamin i 6 ml torket diklormetan. Til denne opplosning tilsettes ovennevnte opplosning og blandingen omrbres ved romtemperatur i 10 timer, hvoretter den konsentreres under forminsket trykk. Til resten tilsettes 10 ml vann og uopplbselig materiale fjernes ved filtrering. Filtratet innstilles til pH 2,5 med 2N saltsyre. Etter avkjbling filtreres oppløsningen og det frafiltrerte stoff torkes for oppnåelse av 120 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 70,5%.

-1

IR(KBr<K>/£<m>ks: 3275, 1765, 1690, 1648, 1630

Eksempel 41

Fremstilling av (-)-cis-7-^XR)-2-fenyl-2-hydroksyacetamido7-2-karboksy-l-azabicyklo-/4", 2,07okt-2-en-8-on:

Samme metode som i eksempel 40 gjentas med unntagelse av at istedenfor 2-(5,6-dihydroksy-l,4-ditianyl)eddiksyre anvendes 152 mg D-mandelsyre. Som resultat oppnås 142,5 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 90,1%.

om"1 IR(KBr)Vmaks: 3325' 1770' 1715' l690' l655' 1635

Eksempel 42

Fremstilling av (-)-cis-7-(2-fenyl-2-karboksy-acetamido)-2-karboksy-l-azabicyklo/4", 2,07okt-2-en-8-on

90 mg (0,5 mmol) fenylmalonsyre opplbses i en blanding av 5 ml torket eter >@g 61 mg (0,51 mmol) tionylklorid. Til opplbsnirigen tilsettes en dråpe N,N-dimetylformamid og blandingen oppvarmes under tilbakelbp i 2 timer. Deretter konsentreres blandingen under forminsket trykk. Til resten tilsettes 5 ml torket benzen og blandingen konsentreres igjen. Resten opplbses i torket eter og til oppløsningen tilsettes en opplosning, hvori 103 mg (0,47 mmol) hydroklorid av (-)-cis-7-amino-2-karboksy-l-azabicyklo/Z)., 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt ved samme metode som i referanseeksempel 16,

er opplost i 2 ml 0,5N natriumhydrogenkarbonatopplbsning og 1 ml eter under isavkjoling. Blandingen omrbres ved romtemperatur 1 time og innstilles deretter til pH 2 med IN saltsyre. Blandingen ekstraheres med 20 ml etylacetat 5 ganger. Ekstrakten inndampes til tbrrhet og det oppnådde faste stoff suspenderes fullstendig i 5 ml eter. Suspensjonen filtreres og torkes for oppnåelse av 100 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 60,1%.

IR(KBr)V™ks: 1755, 1720, 1700, 1660, 1630

Eksempel 43

Fremstilling av trietylaminsalt av (-)-cis-7-(2-fenyl-2-sulfo-acetamido)-2-karboksy-l-azabicyklo/4", 2,Q7okt-2-en-8-on:

109 mg (0,5 mmol) hydroklorid av (-)-cis-7-amino-2-karboksy-l-azabicyklo/£,2,Q7okt-2-en-8-on og 101 mg trietylamin opplbses i 6 ml torket diklormetan. Til opplbsningen tilsettes 105 mg (0,5 mmol) oc-trietylammoniumsulf of enyleddiksyre-etylkarbonsyre-anhydrid under isavkjoling. Blandingen omrbres i 1,5 timer hvoretter opplbsningsmidlet fjernes ved destillasjon. Resten opplbses. i 5 ml vann og opplbsningen innstilles til pH 1,5 med IN saltsyre. Deretter ekstraheres opplbsningen med 10 ml n-butanol 2 ganger, n-butanol-lagene kombineres og konsentreres under forminsket trykk. Det oppnådde faste stoff vaskes med 2 ml diklormetan og torkes for oppnåelse av 196 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte: 81,3%.

IR(KB) £mks: 3275, 1770, 1725, 1682, 1628

Antibakterielle aktiviteter av de i eksemplene 32, 33, 34, 36, 38, 41 og 42 fremstilte forbindelser bestemmes ved hjerteinfjsonsagar/fortynningsmetoden (pH 7,2). Resultatene er angitt i nedenstående tabell.

1: Staphylococcus aureus 209-p 2: Staphylococcus aureus Smith 3: Staphylococcus epidermidis 4: Escherichia coli NIHJC-2

5: Escherichia coli Juhl 6: Klebsiella pneumoniae 8045

7: Klebsiella pneumoniae 8045

8: Serratia marcescens T-26

9: Serratia marcescens T-55

10: Proteus mirabilis 1287

11: Proteus vulgaris 6897

12: Proteus morganii KY4298

13: Proteus rettgeri KY4289

14: Pseudomonas aeruginosa 145 15: Pseudomonas putida F264

m: Forbindelsen fremstilt i eksempel 32 n: " 33 o: " "<»>34 p:""ii36q: »»<»>38 r: " " " 41 s: " " " 42 t: Cefazolin

Eksempel 44

Fremstilling av 7|3-/TR)-2-p-hydroksyfenyl-2-aminoacetamido7-4a-metyl-l-azabicyklo/4\ 2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

Det anvendes samme metode som i eksempel 12, med unntagelse av at det som utgangsforbindelse benyttes 40 mg (i)-cis-7(3-/TR)-2-p-hydroksyf enyl-2-t-butyloksykarbonyl-aminoacetamido7-4a-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo-2,07okt-2-en-8-on, fremstilt ved samme metode som i eksempel 9. Som resultat oppnås 29,3 mg (85%) av den minst polare isomer av den onskede forbindelse.

laj<-,1-0>:+12,8° IM fosfatbuffer (pH 7,0), c=0,51

-1

IR(KBr)Y^mks: 3420, 3260, 1760, 1685

PMR(D20)cf(ppm): 7,35 (2H, d, J=8,0), 6,96 (2H, d, J=8,0), 6,10 (1H, d, J=5,l), 5,45 (1H, d,; J=4,9), 5,11 (1H, s),

3,92 (1H, m), 2,45 (1H, m), 1,50-1,08 (2H, m), 1,01 (3H, d, J=7,D

Ut fra den sterke antimikrobielle aktivitet som vist i nedenstående tabell tildeles denne forbindelsen absolutt 6(R)7(S) konfigurasjon.

Eksempel 45

Fremstilling av 7p-/lR)-2-fenyl-2-(4-etyl-2,3-diokso-l-piperiazinylkarbonylamino)acetamido7-4oc-metyl-azabicyklo/4", 2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

/

Det anvendes samme metode som i eksempel 8 med unntagelse av at det som utgangsmateriale anvendes 55 mg (<i>)-cis-7(3-/lR) -2-f enyl-2- (4-etyl-2,3-diokso-l-piperazinylkarbonyl-amino)acetamido7-4oc-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo-IJ\, 2,07okt-2-en-8-on (den minst polare isomer), fremstilt

ved samme metode som i eksempel 7. Som resultat oppnås 25,7 mg (72%) av den bnskede forbindelse som et hvitt pulver.

/a7o5: -36,3° (MeOH, c = 1,0)

IR(KBr)V^k\ 3450, 3300, 1775, 1720, 1683, I63O

PMR(CD30D) <$(ppm): 9,90 (1H, d, J=6,4), 7,80 (5H, br), 6,39 (1H, d, J=4,9), 5,46 (2H, d, J=4,9), 4,00 (2H, m), 3,85-

3,40 (6H, m), 2,48 (1H, br), 1,20 (5H, m), 1,04 (3H, d, J=7,4) Ut fra den sterke antimikrobielle aktivitet som vist i nedenstående tabell tildeles denne forbindelse absolutt 6(R)7(S) konfigurasjon.

Eksempel 46

Fremstilling av 7(3-/TR)-2-p-hydroksyfenyl-2-(4-etyl-2,3-diokso-l-piperazinylkarbonylamino) acetamido7-4oc-metyl-l-azabicyklo/2+, 2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

Det benyttes samme metode som i eksempel 8 med unntagelse av at det som utgangsmateriale anvende 57 mg (<i>)-cis-7|3-/TR)-2-p-hydroksyfenyl-2-(4-etyl-2,3-diokso-l-piperazinyl-karbonylamino)acetamido'7-4a-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/z;., 2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt ved samme metode som i eksempel 7. Som resultat oppnås 40 mg (78%) av den onskede forbindelse som et hvitt pulver.

/«7^<5>: -7,1° (MeOH, c = 1,0)

IR(KBrW£mk : 5430, 330, 1773, 1721, 1685, 1620 PRM(CD3QlXPPm): 7,28 (2H, d, J=8,5), 6,78 (2H, d, J=8,5), 6,00 (1H, d, J=5,D, 5,37 (1H, s), 5,36 (1H, d, 'J=4,4),

4,00 (2H, m), 3,85-3,35 (6H, m), 2,40 (1H,. br), 1,37-1,05 (5H, m), 1,01 (3H, d, J=6,8)

Ut fra den sterke antimikrobielle aktivitet som vist i nedenstående tabell tildeles denne forbindelsen absolutt 6(R)7(S) konfigurasjon.

Eksempel 47

Fremstilling av 7(3-/TR)-2-p-hydroksyfenyl-2-aminoacetamido7-l-azabicyklo/4^, 2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

Det benyttes samme metode som i eksempel 6, med unntagelse av at det som utgangsmateriale anvendes 78 mg (<i>)-cis-7-/TR)-2-p-hydroksyfenyl-2-t-butyloksykarbonyl-amino-acetamido7-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4\ 2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt ved samme metode som i eksempel 5. Som resultat oppnås 29,5 mg (80%) av en isomer av den bnskede forbindelse.

/a7^<5>°: +107,5°

IR(KBr)V^ks: 3450'3290'3090'1700 (sh)'l685'1640

PMR(D20)cf (ppm): 7,36 (2H, d, J=8,8), 6,95 (2H, d, J=8,8), 6,06 (1H, t, J=3,9), 5,40 (1H, d, J=4,6), 5,12 (1H, s),

3,84 (1H, m), 2,22 (2H, m), 1,62 (1H, m), 1,12 (1H, m)

Ut fra den sterke antimikrobielle aktivitet som vist i nedenstående tabell tildeles denne forbindelse absolutt 6(R)7(S) konfigurasjon.

Antibakterielle aktiviteter av de i eksemplene 44, 45, 46 og 47 fremstilte forbindelser bestemmes ved hjerteinfusjonsagar-fortynningsmetoden (pH 7,2). Resultatene er anfbrt i den fblgende tabell.

Fblgende referanseeksempler belys er fremstillingen av de utgangsforbindelser som benyttes i eksemplene.

Referanseeksempel 1

Fremstilling av (-)-cis-2-t-butyloksykarbonyl-7-azido-l-azabicyklo/5-, 2,Q7okt-2-en-8-on med formelen:

Ovenstående forbindelse fremstilles ved de etterføl-gende fremgangsmåter 1 og 2. I det fblgende henfbrer cis og trans til stereokjemien ved 3- eller 4-stillingen i 2-azatidinon-ringen eller ved 6- eller 7-stillingen i l-azabicyklo/4,2,07-oktanringen.

1) Fremstilling av 2-/4-(3-butenyl)-3-azido-2-oksoazetidin-l-yl7-2-dietylfosfonoacetat-5-butylester

447 mg (1,78 mmol) t-butyl-a-aminodietylfosfonoacetat (forbindelsen har fblgende egenskaper: et oljeaktig produkt;

-1

IR(rent)V™kg: 3400, 1735-1745, 1020-1060; NMR(CDC13) S (ppm):

4,20 (d-q, 4H), 3,83 (d, 1H, J=20Hz), 1,76 (br, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,35 (t, 6H); massespektrum (m/e): 268 (M<+>)) opplbses i' 25 ml vannfri eter, og 164 mg (1,96 mmol) 4-penten-l-al tilsettes. Opplbsningen omrbres ved romtemperatur i 1 time og deretter tilsettes 200 mg molekylsil ("4A,r den samme molekylsil anvendes i det fblgende) og 150 mg vannfritt magnesiumsulfat til opplbsningen. Blandingen omrbres i 1 time.

Reaksjonsblandingen underkastes sugefiltrering og filtratet konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av et blekgult oljeaktig produkt. Vannfri benzen tilsettes til produktet og blandingen konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av et blekgult oljeaktig produkt. Tilstedeværelsen av en Shiff-base i produktet bekreftes ved mag-netisk kjerneresonansspektrum. Produktet opplbses i 12,5 ml cykloheksan og 12,5 ml vannfri benzen og 0,369 (2,66 mmol) trietylamin og 200 molekylsil "4A" tilsettes. Til blandingen tilsettes dråpevis 319 mg (2,66 mmol) azidoacetylklorid opplost i 12,5 ml cykloheksan under omrbring ved romtemperatur i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen omrbres ytterligere i 30 minutter og fortynnes med 10 ml benzen. Reaksjonsopplbsning-

en vaskes med 5% fortynnet saltsyre, mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning, avionisert vann og mettet natriumkloridopplbsning, torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av et brunt oljeaktig produkt som identifiseres som et råprodukt av den bnskede forbindelse. Det oljeaktige produkt fores på en sbyle pakket

med 45 g silisiumdioksydgel. Elueringen utfores med en "blanding av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 1:2 for oppnåelse av to typer isomere. Isomerenes egenskaper er anfbrt nedenfor og de identifiseres som isomerene ved 3- og 4-stillingen, dvs. 345 mg cis-isomer og 58 mg trans-isomer. Totalutbyttet er 54,2%.

Cis-isomer:

om"1 IR(CHCl3)>/^ks: 2120, 1775, 1770 (sh), 1750, 1740 (sh),

1645,

NMR(CDC13) S(ppm): 6,13-6,33 (1H, m), 4,93-5,17 (2H, m), 4,50-4,93 (2H, m), 3,80-4,40 (5H, m), 1,93-2,17 (4H, m), 1,50 (9H, s), 1,33 (6H, t)

Trans-isomer:

-1

IR(CHC13)V °<m>ks: 2120, 1780, 1755, 1750 (sh), 1650

NMR'(CDC13) £ (ppm): 5,43-6,20 (1H, m), 4,80-5,30 (2H, ,,m) , 3,75-4,75 (7H, m), 2,0-2,50 (4H, m), 1,50 (9H, d), 1,17

(6H, m)

2) Fremstilling av (-)-cis-2-t-butyloksykarbonyl-7-azido-l-azabicyklo/4v2,07okt-2-en-8-on: — — ~v— — ————————— 298 mg (0,716 mmol) cis-2-^4-(3-butenyl)-3-azido-2-oksoazetidin-l-yl7-2-dietylfosfonoacetat-t-butylester, fremstilt ovenfor, opplbses i 8,5 ml dioksan og 2,5 ml avionisert vann og 30 mg osmiumtetroksyd tilsettes. Opplbsningen omrbres i 30 minutter. Til den sorte reaksjonsopplbsning tilsettes 496 mg (2,32 mmol) pulverisert natriumperjodid i lbpet av 20 minutter. Etter omrbring i 1,5 timer ekstraheres reaksjonsopplbsningen med 50 ml eter tre ganger. Eterekstrak-terie kombineres og vaskes med mettet natriumkloridopplbsning. Den resulterende opplosning torkes<*>med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av ... et mbrkebrunt oljeaktig produkt. Produktet fores på en sbyle pakket med 5 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av benzen og etylacetat i volumforholdet 1:2.

xDe fraksjoner som er positive for 2,4-dinitrofenylhydrazin-reaksjonen oppsamles og konsentreres for oppnåelse av 235. mg av et

oljeaktig produkt, som er cis-isomeren av aldehydforbindelsen. Det oljeaktige produkt opplbses i 15 ml vannfritt acetonitril. Til opplbsningen tilsettes 27,1 mg (0,563 mmol) 50% natriumhydrid i en strbm av nitrogen under omrbring ved romtemperatur. Etter omrbring i 20 minutter helles reaksjonsblandingen ut i 20 ml 2% vandig eddiksyre, og opplbsningen ekstraheres med 50 ml eter fire ganger. Eterekstraktene kombineres og vaskes med mettet natriumkloridopplbsning. Den resulterende opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk for oppnåelse av 180 mg av et oljeaktig produkt som identifiseres som et råprodukt av den bnskede cis-forbindelse.

Det oljeaktige produkt fores på en sbyle pakket med 5 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 3,5:1. Dette gir 91 mg hvite krystaller av den bnskede forbindelse. Utbytte 51%. Forbindelsens egenskaper er som folger: Smeltepunkt: 64,5 - 65,5°C

-1

IR(CHCl3)V™ks: 2130, 1790, 1730, 1640

NMR(GiDCl3)J (ppm)': 6,30 (1H, t, J=4Hz), 4,93 (1H, d, J=5Hz), 3,80 (1H, q), 1,6-2,6 (4H, m), 1,52 (9H, s)

Referanseeksempel 2

Fremstilling av (-)-trans-2-t-butyloksykarbonyl-7-azido-l-azebicyklo/^,2,Q7okt-2-en-8-on med formelen:

767 mg (1,84 mmol) trans-2-/4-(3-butenyl)-3-azido-2-oksoazetidin-l-yl7-2-dietylfosfonoacetat-t-butylester, fremstilt som i referanseeksempel 1 - 1),opplbses i 22 ml dioksan og 6,5 ml avionisert vann, og 100 mg osmiumtetroksyd tilsettes.

Blandingen.omrbres i 30 minutter. Til den sorte reaksjons-"blanding tilsettes 1,5 g (7,04 mmol) pulverisert natriumperjodat i lbpet av 30 minutter. Etter omrbring i 1 time ekstraheres reaksjonsblandingen tre ganger med 150 ml eter. Eterekstraktene kombineres og torkes med vannfritt natriumsulfat. Den resulterende opplosning konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av et oljeaktig produkt. Det oljeaktige produkt fores på en sbyle pakket med 20 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av benzen og etylacetat i volumforholdet 1:2. Dette gir 561 mg oljeaktig produkt fra de fraksjoner som er positive for 2,4-dinitrofenylhydrazin-reaksjonen. Produktet er trans-forbindelsen av :aldehydforbindelsen. Produktet opplbses i 6 ml vannfritt acetonitril og 61,4 mg (2,56 mmol) 50% natriumhydrid tilsettes. Blandingen oppvarmes til en temperatur på 50°C og får 'reagere i 10 minutter. Reaksjonsblandingen helles ut i 6 ml 2% vandig eddiksyre og ekstraheres fire ganger med 50 ml eter. Eterekstraktene kombineres og torkes med vannfritt natrium-sulf at .

Den resulterende opplosning konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av et oljeaktig produkt. Det oljeaktige produkt fores på en sbyle pakket med 20 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 3,5:1. Dette gir 218 mg hvite krystaller av den bnskede forbindelse. Forbindelsen identifiseres som trans-forbindelsen ar den bnskede forbindelse. Forbindelsens egenskaper er som folger: Smeltepunkt: 80,5 - 81,5°C

om"1

IR(CHCl3)Y^<m>ks: 2110, 1780, 1720, 1635

NMR(CDC13) / (ppm):- 6,27 (1H, t),~4,28 (1H, d, J=2Hz), 3,53 (1H, q), 2,0-2,6 (4H,m), 1,63 (9H, s)

Referanseeksempel 5

Fremstilling av (-)-cis-2-karboksy-7-azido-l-azabicyklo-2,Q7okt-2-en-8-on med formelen:.

55 mg (0,224 mmol) (-)-cis-2-t-butyloksykarbonyl-7- azido-l-azabicyklo/5-, 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i ref eranseeksempel 1, opplbses i 2 ml trifluoreddiksyre og opplbs ningen hensettes ved romtemperatur i 10 minutter. Opplbsningen konsentreres under forminsket trykk. Benzen tilsettes til konsentratet og den resulterende opplosning konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av 51 mg av et gult, ..halvfast stoff. Stoffets egenskaper er som folger, og det identifiseres som den bnskede karboksylsyre. Utbytte: 100%.

om"1'<

IR(CHC13)V maks: 2120'1770 (sh)'1760'1715»1635

NMR(CD30D) £ (ppm): 6,48 (1H, 5, J=4Hz), 5,10 (1H, d, J=5Hz),

.3,83 (1H, q), l.,l-2,5 (4H, m)

Referanseeksempel 4

Fremstilling av (<*>)-cis-2-t-butyloksykarbonyl-4-brom-7-azido-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on med formelen:

i

50 mg (0,203 mmol) (<±>)-cis-2-t-butyloksykarbonyl-7-azido-l-azabicyklo/5-, 2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i ref eranseeksempel 1, opplbses i 2 ml vannfri kloroform og 36,0 mg (0,202 mmol) N-bromsuccinimid og en katalytisk mengde azobis-isobutyronitril tilsettes. Blandingen oppvarmes under tilbakelbp og omrbring i 30 minutter og fortynnes deretter med 5 ml kloroform. Den fortynnede opplosning vaskes med 3 ml vann og 3 ml mettet natriumkloridopplbsning og torkes med vannfritt

natriumsulfat. Den resulterende opplosning konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av 53 mg oljeaktig produkt.

Produktet fores på en sbyle pakket med 4,0 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 3,5:1. Dette gir 23 mg oljeaktig produkt. Produktet identifiseres som den bnskede cis-forbindelse ut fra de fblgende egenskaper. Utbytte: 33%.

-1

IR(CHC13W ™k£J: 2120, 1790, 1730, 1620

NMR(CDCl3),V(ppm): 6,33 (1H, d, J=6Hz), 5,07 (1H, d, J=5Hz),

4,93 (1H, m), 4,50-3,90 (1H, m), 2,50-1,72 (2H, m), 1,52

(9H, s)

Referanseeksempel 5 Fremstilling av (-)-trans^-t-butyloksykarbonyl-^-brom^-azido-l-azabicyklo/^ ,2,07okt-2-en-8-on med formelen

100 mg (0,407 mmol) (<i>)-trans-2-t-butyloksykarbonyl-7-azido-l-azabicyklo/Zi<->,2,07okt-2-en-é-on, fremstilt i referanseeksempel 2, opplbses i 5 ml vannfritt karbontetraklorid og 72,4 mg N-bromsuccinimid tilsettes. Blandingen oppvarmes under tilbakelbp og. omrbring i 30 minutter. Deretter tilsettes 10 ml metylenklorid til reaksjonsblandingen og den resulterende

blanding vaskes med 5 ml avionisert vann og 5 ml mettet natriumkloridopplbsning. Den resulterende opplosning torkes med vann-

fritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av 102 mg oljeaktig produkt. Det oljeaktige produkt fores på en sbyle pakket med 5 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og etylacetat i volumforholdet (3,5:1).

Det oppnås 24 mg oljeaktig produkt. Produktet identifiseres som den forbnskede trans- forbindelse ut fra fblgende egenskaper. Utbytte 18,1%.

IR(CHCl3)V^ks: 2130, 1790, 1730, 1620

NMR(CDC13) cT(ppin): 6,23 (1H, d, J=6Hz), 5,93 (1H, m), 4,37 (1H, d), 4,00 (1H, m), 2,93-1,93 (2H, m), 1,50 (9H, s).

Referanseeksempel . 6

Fremstilling av (<i>)-cis-2-t-butyloksykarbonyl-4a-acetoksy-7(3-azido-l-azabicyklo/4\ 2,07okt-2-en-8-on med formelen:

75. mg (0,219 mmol) (<±>)-cis-2-t-butyloksykarbonyl-4-•brom-7-azido-l-azabicyklo/4:, 2, 07okt-2-en-8-on, fremstilt som i referanseeksempel 4, opplbses i 2 ml eddiksyre. Under be-skyttelse av reaksjonssystemet mot lys tilsettes 39,4 mg

(0,241 mmol) sblvacetat til opplbsningen og blandingen.omrbres i 2 timer og 20 minutter. Reaksjonsblandingen filtreres og konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av et acet-oksy-råprodukt av den bnskede forbindelse. Produktet fores på en sbyle pakket med 3,5 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 3,5:1 til oppnåelse av 51 mg oljeaktig produkt. Produktet identifiseres som den bnskede cisr-forbindelse ut fra fblgende egenskaper. Utbytte: 72,1%.

- 1

■IR('CHC13)V maks: 2130'1790'1750'1730 (sh)'1635

NMR(CDC13) <S'(ppm): 6,21 (1H, d, J=5Hz), 5,42 (1H, m), 5,01 (1H, d, J=5Hz), 3,95 (1H, m), 2,02 (3H, s), 2,6-1,7 (2H, m), 1,53 (9H, s)

Referanseeksempel 7

Fremstilling av (<i>)-cis-2-t-butyloksykarbonyl-4-metyl-7-azido-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on med formelen:

Ovennevnte forbindelse fremstilles ved de fblgende fremgangsmåter 1 og 2.

1) Fremstilling av 2-/4-(2-metyl-3-butenyl)-3-azido-2-okso-azetidin-l-yl7-2-dietylfosfonacetat-tert-butylester

2,13 g"(8 mmol) t-butyl-a-aminodietylfosfonoacetat opplbses i 80 ml vannfri eter og 902 mg (9,2 mmol) 3-metyl-4-pentenal tilsettes under omrbring. Blandingen omrbres ved

romtemperatur i 1 time og 900 ml molekylsil ,("4A") og 700 mg

■■_ ma-gnesiumsulfat tilsettes. Etter omrbring i 1,5 timer underkastes reaksjonsblandingen sugefiltrering. Filtratet konsentreres til oppnåelse av et blekgult oljekktig produkt. 30 ml vannfri benzen tilsettes til produktet og den resulterende opplosning konsentreres igjen til oppnåelse av 2,82 g oljeaktig produkt. Tilstedeværelsen avi en Schiff-base i produk-

tet bekreftes ved NMR-spektrum. Det oljeaktige produkt opplbses i 56 ml torket cykloheksan og 56 ml vannfri benzen og 900.

mg molekylsil ("4A") og 1,67 ml (12 mmol) trietylamin tilsettes. Til blandingen tilsettes dråpevis 1,43 g (12 mmol) azidoacetylklorid opplost i 56 ml torket cykloheksan i lbpet av

1,5 timer ved romtemperatur under omrbring. Blandingen omrbres ytterligere i 30 minutter hvoretter 30 ml benzen tilsettes.

Blandingen overfores til en skilletrakt >og vaskes med 30 ml

hver av 10% sitronsyre, mettet natriumkloridopplbsning, mettet

natriumhydrogenkarbonatopplbsning og mettet natriumkloridopplbsning i denne rekkefolge. Den resulterende opplosning torkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av 2,8 g oljeaktig produkt. Tilstedeværelsen av' en blanding av to hovedisomere i produktet bekreftes ved tynnsjiktkromatografi (silisiumdioksydgel, n-heksan/etylacetat (1:1)). Produktet fores på en sbyle pakket med 300 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsj-'

ningsmiddel bestående av en blanding av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 1:1 til oppnåelse av 380 g (utbytte 11,0%) av den minst polare isomer av den bnskede forbindelse, 570 mg (utbytte 16,7%) av den mest polare isomer av den

bnskede forbindelse og 201 mg (utbytte 5,8%) av en blanding av de to isomere.

Egenskapene av hver isomer er beskrevet nedenfor.

Ut fra disse data identifiseres den mest polare isomer som cis-isomeren av den bnskede forbindelse.

Den minst polare isomer:

IR(CHCl3)V<£>£<k>s": 2110, 1770, 1745

NMR(CT>ei3) é (ppm): 5,40-6,10 (1H, m), 5,27-4,90 (2,5H, m), 4,68 (0,5H, d), 4,23 (6H, m), 2,60-1,77 (3H, m), 1,53 (9H, s), 1,37 (6H, t, J=7,0Hz), 1,10 (3H, d, J=6,0Hz)

Den mest polare isomer (cis-forbindelse):

-1

IR(CHCl3)V£<m>ks: 2110, 1765, 1745

NMR(CDC13)& (ppm): 5,45-6,13 (1H, m), 4,83-5,20 (2,5H, m), 4,67 (0,5H, d), 3,97-4,45 (6H, m), 1,77-2,55 (3H, m), 1,50

(9H, s), 1,33 (6H, t), 1,08 (3H, d)

2) Fremstilling av (^~]j — cis—2—t—butyloksykarbonyl— 4—metyl—7— azido-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on med formelen:

240 mg (0,56 mmol) tert-butylester av (-)-cis-2-/4-(2-metyl-3-butenyl)-3-azido-2-oksoazetidin-l-yl7-2-dietyl-fosfonoacetat, fremstilt i referanseeksempel 7-1), opplbses i 6,6 ml dioksan og 2 ml avionisert vann. 20 mg osmiumtetroksyd tilsettes og blandingen omrbres i 10 minutter. Til den sorte reaksjonsopplbsning tilsettes 390 mg (1,82 mmol) pulverisert natriumperjodat i små prosjoner i lbpet av 30 minutter.

Etter omrbring i 40 minutter ekstraheres reaksjons-opplosningen 3 ganger med 30 ml eter og ekstraktene kombineres . De kombinerte ekstrakter vaskes med mettet natriumkloridopplbsning, tbrkes med vannfritt natriumklorid og konsentreres til oppnåelse av 230 mg oljeaktig produkt. Det oljeaktige produktet fores på en sbyle pakket med 6 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av benzen og etylacetat i volumforholdet 1:2. De fraksjoner som er positive for 2,4-dinitrofenylhydrazin-reaksjonen kombineres og konsentreres til oppnåelse av 185 mg oljeaktig produkt, som er cis-forbindelsen av aldehydforbindelsen. Produktet opplbses umiddelbart i 8 ml vannfritt acetonitril og 21,6 mg (0,45 mmol) 50% natriumhydrid tilsettes til opplbsningen i en strbm av nitrogen under omrbring ved romtemperatur. Etter omrbring i 30 minutter helles reaksjonsopplbsningen ut i 15 ml 2% vandig eddiksyre og den blandede opplosning ekstraheres to ganger med 20 ml eter. Eterlagene vaskes med mettet natriumkloridopplbsning, tbrkes med vannfritt natriumklorid og konsentreres under forminsket trykk til' oppnåelse av et oljeaktig produkt. Produktet identifiseres som et råprodukt av den bnskede cis-forbindelse. Det oljeaktige produkt fores på en sbyle pakket med 20 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av

n-heksan og etylacetat i volumforholdet 3,'5:1. Dette gir 70 mg av den bnskede forbindelse som et fargelbst, oljeaktig

produkt som krystalliserer ved henstand. Produktets egenskaper, er beskrevet nedenfor. Utbytte: 48,1%.

, -1

IR(KBr)\;°mks: 2110, 1784, 1715, 1623

NMR(CDC13) å(ppm): 6,30 (4/5H, d, J=5,lHz), 6,10 (1/5H, d,

J=2,7Hz), 4,98 (4/5H, d, J=5,0Hz), 4,89 (1/5H, d, J=5,0Hz), 3,60-3,90 (1H, m), 2,65 (1H, m), 1,70-1,80 (2H, m), 1,51 (9H, s), 1,20 (3/5H, d, J=8,0Hz), 1,13 (12/5H, d, J=8,0Hz)

De oppnådde krystaller identifiseres som en blanding av 4a-metyl-isomeren og 4(3-metyl-isomeren i et forhold på omkring 4:1 ut fra ovennevnte NMR-data.

Referanseeksempel 8

Fremstilling av (-)-cis-2-karboksy-7-amino-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on: 91 mg (i)-cis-2=karboksy-7-az'ido-l-azabicyklo/4, 2,07okt-r2-en-8-on, fremstilt som i ref eranseeksempel 3, opplbses i 6,5 ml etanol og 26 mg 10%-palladium-karbon tilsettes. Blandingen omrbres ved romtemperatur og atmosfæretrykk i en strbm av hydrogen i 2 timer. Deretter filtreres blandingen for å fjerne katalysatoren og [filtratet"konsentreres under forminsket trykk. Konsentratet opplbses igjen i 10 ml metanol og 26 mg 10% palladium-karbon tilsettes. Blandingen underkastes katalytisk reduksjon ved romtemperatur og atmosfæretrykk i 3 timer og 50 minutter og filtreres deretter under anvendelse av et filterhjelpemiddel, "Hyflo Super Cel". Filtratet konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av 88 mg (100%) av et halvfast produkt. Produktet identifiseres som den bnskede aminoforbindelse på basis av fblgende data.

-1

IR(KBr)V™ks: 3450, 2950, 1770, 1650

Referanseeksempel 9

Fremstilling av (-)-cis-7-amino-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on:

178 mg (0,67 mmol) (-)-cis-7-azido-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt i refe-ranseeksempel 1, opplbses i 10 ml etanol og 25 mg 10% paiiadium-karbon (katalysator) tilsettes-. '.Blandingen omrbres ved romtemperatur i en strbm av hydrogen i 50 minutter. Reaksjonsopplbsningen underkastes filtrering for å fjerne katalysatoren og' filtratet konsentreres'under forminsket trykk til oppnåelse av den bnskede forbindelse som et gult oljeaktig produkt.

Mengde produkt: 159, mg

Utbytte:'100%

'■-rom'-1

IR(CHCl3)V™ks: 1775, 1725, 1640

NMR(CDC13) cC (ppm): 6,27 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,2-3,1

(m, 3H), 2,6-1,7 (m, 4H), 1,5 (s, 9H)

I tilfelle av at den katalytiske reduksjon utfores i etanol inneholdende 1 ekvivalent saltsyre, oppnås hydrokloridet av den bnskede forbindelse.

Referanseeksempel 10

Fremstilling av (-)-cis^-t-butyloksykarbonyl^-metyl^-azido-l-azabicyklo/^-, 2,07okt-2-en-8-on med formelen

Ovennevnte forbindelse fremstilles ved fblgende

fremgangsmåter l) og 2).

1) Fremstilling av t-butylesteren av 2-/£-(2-metyl-3-butenyl)-3-azido-2-oksoazetidin-l-yl7-2-dietylfosfonoacetat:

2,13 g (8 mmol) t-butyl-oc-aminodietylfosfonoacetat opplbses i 80 ml absolutt eter og 902 mg (9,2 mmol) 3-metyl-4-pentenal tilsettes under omrbring. Blandingen omrbres ved romtemperatur i 1 time og deretter tilsettes 900 mg molekylsil ("4A") og 700 mg magnesiumsulfat. Blandingen omrbres i 1,5 timer og underkastes deretter sugefiltrering. Filtratet konsentreres til oppnåelse av et blekgult oljeaktig produkt. Til produktet tilsettes 30 ml vannfri benzen og blandingen

~ ' konsentreres igjen til oppnåelse av 2,82 g oljeaktig produkt.

Tilstedeværelsen av en Schiff-base bekreftes ved NMR-spektrum. Det oljeaktige produkt opplbses i 56 ml torket. cykloheksan og 56 ml vannfri benzen og 900 mg molekylsil ("4A") og 1,67 ml (12 mmol) trietylamin tilsettes. Deretter tilsettes dråpevis 1,43 g (12 mmol) azidoacetylklorid opplb'st i 56 ml torket cykloheksan til blandingen under omrbring ved romtemperatur i lbpet av 1,5 timer, og blandingen omrbres i 30 minutter. Reaksjonsblandingen overfores til en skilletrakt sammen med 30 ml benzen. Benzenlaget vaskes med 30 ml hver av 10% sitronsyre, mettet natriumkloridopplbsning, mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning og mettet natriumkloridopplbsning. Den resulterende opplosning tbrkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av 2,8 g oljeaktig produkt. Tilstedeværelsen av to isomerer i produktet spores ved tynns jiktskromatografi (silisiumdioksydgel, n-hekai/etylacetat (1:1)). Produktet fores på en sbyle pakket med 300 g silisiumdioksydgel og elueres med en blanding av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 1:1. 'Dette gir 380 mg (utbytte 11,0%) av den minst polare isomer av den bnskede forbindelse, 570 mg (utbytte 16,7%) av den mest polare isomer og 201 mg (utbytte 5,8%) av en blanding av de to isomerer.

Egenskapene av hver isomer er anfbrt nedenfor. Den mest polare isomer identifiseres som cis-isomeren av den bnskede forbindelse.

Den minst polare isomer (trans-isomer):

!R(CHCl3)\/™kg: 2110, 1770, 1745

NMR(CDC130 ^ (ppm): 5,40-6,10 (1H, m),;5, 27-4,90 (2,5H, m), 4,68 (0,5.H, d)r, 4,23 (6H, m), 2,60-1,77 (3H, m),, 1,53

(9H, s), 1,37 (6H, t, J=7,0Hz), 1,10 (3H, d, J=6,0Hz)

Den mest polare isomer (cis-isomer):

IR(CHCl3)V™kJ: 2110, 1765, 1745 NMR(CDC13) J (ppm): 5,45-6^.3 (1H, m), 4,83-5,20 (2,5H, m), 4,67 (0,5H, d), 3,97-4,45 (6H, m), 1,77-2,55 (3H, m), 1,50 (9H, s), 1,33 (6H, t), 1,08 (3H, d) 2) Fremstilling av; (-)-cis-7-azido-2-t-butylbksykarbonyl-4-metyl-7jazido-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on: 240 mg (0,56 mmol) t-butylester av (-)-cis-2-/4-(2-metyl-3-butenyl)-3-azido-2-oksoazetidin-l-yl7-2-dietylfosfono-eddiksyre, fremstilt i referanseeksempel 10-1), opplbses i 6,6 ml dioksan og 2^11 avionisert vann og 20 mg osmiumtetroksyd tilsettes. Blandingen omrbres i 10 minutter og til den sorte reaksjonsblanding tilsettes 390 mg (1,82 mmol) pulverisert natriumperjodat i små porsjoner i lbpet av 30 minutter. Etter omrbring i 40 minutter ekstraheres reaksjonsopplbsningen 3 ganger med 30 ml eter. Eterlagene kombineres, vaskes med mettet natriumkloridopplbsning, tbrkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres til oppnåelse av 230 mg oljeaktig produkt. Det oljeaktige produkt fores på en sbyle pakket med 6 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående av benzen og etylacetat i volumforholdet 1:2. De fraksjoner som er positive for 2,4-dinitrofenylhydrazin-reaksjonen kombineres og konsentreres til oppnåelse av 185 mg oljeaktig produkt, aldehydforbindelsen av den onskede forbindelse. Produktet opplbses umiddelbart i 8 ml vannfritt aceto-nitril og 21,6 mg (0,45 mmol) 50% natriumhydrid tilsettes ved romtemperatur under omrbring i en strbm av nitrogen. Etter omrbring i 50 minutter helles reaksjonsblandingen ut i 15 ml 2% vandig eddiksyre, og blandingen ekstraheres 2 ganger med 20 ml eter. Eterlagene vaskes med mettet natriumkloridopplbsning, tbrkes med vannfritt natriumsulfat og konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av et oljeaktig produkt. Produktet fores på en sbyle pakket med 20 g silisiumdioksydgel og elueres med et opplbsningsmiddel bestående n-heksan og etylacetat i volumforholdet 3,5:1. Det oppnås 70 mg av det bnskede produkt som et fargelbst oljeaktig produkt som kry-stalliséréVved henstand. Utbytte 48,1%. Produktets egenskaper er..som folger: IR(KB;r)N/°mks: 2110, 1784, 1715, 1623 NMR(CDC13) / (ppm): 6,30 (4/5H, d, J=5,lHz), 6,10 (1/5H, d, J=2,7Hz), 4,98 (4/5H, d, J=5,0Hz), 4,89 (1/5H, d, J=5,0Hz), 3,60-3,90 (1H, m), 2,65 (1H, m), 1,70-1,80 (2H, m), 1,51 '(9H, s), 1,20~(3/5H, d, J=8,0Hz), 1,13 (12/5H, d, J=8,0Hz) På basis av disse NMR-data identifiseres de oppnådde krystaller som en blanding av 4a-metyl-isomeren og 48-.i metyl-lsomeren i et forhold på omkring 4:1. Forbindelsene kan atskilles ved silisiumdioksydgel-kromatografi under anvendelse av et opplbsningsmiddel bestående av n-heksan og etylacetat i volumforholdet 3:1. Den mest polare isomer til-svar 46-CH^-isomeren, dvs. (-)-cis-76-azido-46-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on, og den :minst polare isomer tilsvarer 4a-CH3-isomeren. De har fblgende. respektive egenskaper:

I

4 B-CH^-isomer:

Smeltepunkt: 84,0 - 86,5°C

IR(KBr)V™k<s>"<:>2135, 1783, 1715, 1622

NMR(CDC15) $ (ppm): 6,13 (1H, d, J=2,7Hz), 4,90 (1H, d, J=5,0-Hz), 3,93-3,73 (1H, m), 2,53 (1H, m), 2,16-1,75 (2H, m), 1,53 (9H, s), 1,20 (3H, d, J=6,0Hz)

4 a-CH-j-isomer:

3

Smeltepunkt 82,0 - 84,0°C

-1

IR(KBr)V °mks: 2120, 1790, 1721, 1630

NMR(CDC13) Å(ppm): 6,33 (1H, d, J=5,0Hz), 5,00 (1H, d, J=5,5Hz), 3,89-3,68 (1H, m), 2,66 (1H, m), 1,82-1,57 (2H,

m), 1,53 (9H, s), 1,12 (3H, d, J=7,0Hz)

Referanseeksempel 11 1

Fremstilling av (<i>)-cis-78-amino-4oc-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on:

255 mg (0,67 mmol) (-)-cis-76-azido-4a-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on, fremstilt i referanseeksempel 10-2) som en minst polar isomer, opplbses i 10 ml etanol, og 100 mg 10% pallaclium-karbon tilsettes. Blandingen underkastes katalytisk hydrogenering i 1,5 timer hvoretter den filtreres for å fjerne katalysatoren. Katalysatoren vaskes med metanol. Filtratet og vaskeopplbsningene kombineres og konsentreres under forminsket trykk til oppnåelse av et blekgult oljeaktig produkt. Produktet opplbses i 8 ml etylacetat og opplbsningen ekstraheres fem ganger med 3 ml 10% sitronsyre. Det vandige lag innstilles

til pH 6 - 7 med kaliumkarbonat til oppnåelse av en hvit suspensjon. Suspensjonen ekstraheres to ganger med 5 ml etylacetat og vaskes med mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede ekstrakt torkes med vannfritt natriumsulfat og inndampes til oppnåelse av 177 mg (76,6%) oljeaktig produkt.

IR(CHCl3)v/^<kg>: 3400, 1770, 1720, 1630

NMR(CDC13) ^(ppm): 6,23 (1H, d, J=5,0Hz), 4,53 (1H, d, J=5,8Hz), 3,93-3,47 (1H, m), 2,56 (1H, m), 1,92 (2H, br), 1,80-1,60 (2H, m), 1,50 (9H, s~), 1,31 (sH, d, J=7,0Hz)

I tilfelle av at den katalytiske hydrogenering utfores i nærvær av en ekvivalent saltsyre, oppnås hydrokloridet av den onskede forbindelse.

Referanseeksempel 12

Fremstilling av (-)-cis-7B-amino-4B-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on:

655 mg (2,35 •mmol)^(i)-cis-7B-azido-4B-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt i referanseeksempel 10-2) som en mest polar isomer, opplbses i 6 ml etanol og 0,79 ml (2,37 mmol) 3N saltsyre tilsettes. Blandingen underkastes hydrogenering med 200 mg 10% palladium-karbon i 70 minutter. Metanol tilsettes til den resulterende blanding for å opplbse det utfelte salt av den bnskede forbindelse. Katalysatoren fjernes ved filtrering og filtratet konsentreres til oppnåelse av et råprodukt. Produktet tritureres grundig med eter og filtreres. Det frafiltrerte stoff tbrkes til oppnåelse av 512 mg (75,4%)

av hydrokloridet av den bnskede forbindelse.

Smeltepunkt: 216 - 221°C (dekomp.)

-1

IR(KBr)^^ks<:>3430,2590, 1780, 1762, 1712, 1630

Referanseeksempel 15

Fremstilling av trifluoracetatet av (-)-cis-7B-amino-4oc-metyl-2-karboksy-l-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on:

196 mg (0,78 mmol) (-)-cis-7B-amino-4a-metyl-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt i referanseeksempel 11, opplbses i 4,2 ml vannfri diklormetan og 1,8 ml trifluoreddiksyre tilsettes ved romtemperatur under omrbring. Etter 1,5 timer konsentreres blandingen under forminsket trykk. Konsentratet underkastes azeotrop destillasjon med vannfri benzen for oppnåelse av et oljeaktig produkt. Produktet tritureres med eter og filtreres til oppnåelse av 167 mg (69,3%) pulver av denbnskede forbindelse.

-1

IR(KBr)y ^ks:

PMR(D20, med DSS som intern standard)^ (ppm): 6,77 (1H, d, J=5,8Hz), 5,00 (1H, d, J=5,6Hz), 4,10 (1H, m), 2,83 (1H, m), 1,86 (2H, m), 1,15 (3H, d, J=8,0Hz)

Referanseeksempel 14

Fremstilling av (-)-cis-7B-amino-4a-acetoksy-l-azabicyklo/5,2,Q7okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre: l) Fremstilling av (-)-cis-7B-azido-4a-acetoksy-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre: 179 mg (-)-cis-7(3-azido-4a-acetoksy-2-t-butyloksykarbonyl-lazabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on, fremstilt som i referanseeksempel 6, opplbses i 3 ml metylenklorid og 3 ml trifluoreddiksyre. Opplbsningen hensettes ved romtemperatur i 2 timer hvoretter den konsentreres til oppnåelse av 145 mg av den bnskede forbindelse som et gult pulver. Utbytte: 100%. Forbindelsens egenskaper er anfbrt nedenfor. -1 IRtCHCl^Vmåks12130,1790, 1715, 1445 2) Fremst illing av (-)-cis-7|3-amino-4a-acetoksy-l-azabi cyklo/4,2,07okt-2-en-8-on-karboksylsyre;f

145 mg (<i>)-cis-7|3-azido-4a-acetoksy-l-azabicyklo-2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre, fremstilt som i referanseeksempel 14-1), opplbses i 14 ml etanol og 40 mg 10% palladium-karbon tilsettes. Blandingen underkastes katalytisk hydrogenering ved atmosfæretrykk under omrbring i 1 time. Reaksjonsblandingen filtreres og filtratet konsentreres til oppnåelse av 126 mg av den bnskede forbindelse.

Referanseeksempel 15

Fremstilling av (-)-cis-76-azido-2-t-butoksykarbonyl-4a-hydroksy-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on med formelen:

200 mg (-)-cis-2-t-butoksykarbonyl-7-azido-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on, fremstilt som i ref eranseeksempel 1, opplbses i 8,8 ml karbontetraklorid, og 134,9 mg N-bromsuccinimid og en katalytisk mengde a, oe'-azobisisobutyro-nitril tilsettes. Blandingen oppvarmes under tilbakelbp i 30 minutter. Etter avkjbling fortynnes reaksjonsblandingen med 5 ml kloroform og vaskes med 3 ml vann og 3 ml mettet natriumkloridopplbsning. Den vaskede opplosning tbrkes med vannfritt natriumsulfat og filtreres. Filtratet konsentreres til oppnåelse av en oljeaktig bromforbindelse som er det samme oljeaktige produkt som i eksempel 4. Produktet opplbses umiddelbart i 10 ml aceton, og 50 mg sblvkarbonat og 50 ^/ul vann tilsettes. Blandingen omrbres ved romtemperatur i 10 minutter. Reaksjonsblandingen filtreres og konsentreres til oppnåelse av et råprodukt. Produktet fores på en sbyle pakket med 20 g silisiumdioksydgel og elueres med en blanding av 1-heksan og etylacetat i volumforholdet 2:1. Eluatene konsentreres til oppnåelse av 86,4 mg av den bnskede forbindelse som blekgule krystaller. Utbytte 40,7%. Krystallene egenskaper er anfbrt nedenfor.

Smeltepunkt: 100,0 - 101,0°C

orrT1

IR(CHCl3)y ™ks: 2130, 1790, 1635, 1630

NMR(CDC13) £ (ppm): 6,30 (1H, d, J=5Hz), 5,03 (1H, d, J=5,2), 4,47 (1H, m), 3,93 (1H, m), 3,20 (1H, br), 2,1-1,8 (2H, m), 1,55 (9H, s)

Referanseeksempel 16

Fremstilling av (-)-cis-7-amino-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

300 mg (<i>)-cis-7-amino-2-t-butyloksykarbonyl-l-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt som i referanseeksempel 9, opplbses i 3 ml metylenklorid og 3,0 ml trifluoreddiksyre tilsettes. Blandingen" "hensettes ved romtemperatur i 1 time og 20 minutter. Reaksjonsblandingen konsentreres og benzen tilsettes til" resten".~-0pplbsningen konsentreres igjen til oppnåelse av 250 mg av trifluoracetat av den bnskede forbindelse som et gult pulver. Produktets egenskaper er anfbrt nedenfor.

IR(KBr)V™ks: 1780, 1680, 1630

Det ovenstående trifluoracetat opplbses i 2 ml vann og opplbsningen innstilles til pH 7,0 irféd mettet natriumhydrogenkarbonatopplbsning til dannelse av krystaller. Således utvinnes 129 mg av den bnskede forbindelse ved filtrering. Produktets egenskaper stemmer overens med produktet

i referanseeksempel 8.

Referanseeksempel 17

Fremstilling av (T)-cis-7B-azido-2-karboksy-4a-metyl-l-azabicyklo/Zr, 2,Q7okt-2-en-8-on:

Til 238 mg (0,703 mmol) (<±>)-cis-7P-azido-2-t-butyl-oksykarbonat-4ct-metyl-l-azabicyklo/4,2,Q7okt-2-en-8-on, fremstilt som i referanseeksempel 10, tilsettes 4 ml trifluoreddiksyre, og blandingen hensettes ved romtemperatur i 10 minutter. Reaksjonsblandingen konsentreres ved 25°C under forminsket trykk. Konsentratet ekstraheres to ganger med 5 ml torket benzen. Deretter opplbses 255 mg av det oppnådde oljeaktige produkt i 5 ml etylacetat. Opplbsningen ekstraheres med 2 ml 10% kaliumkarbonatopplbsning to ganger, og det vandige lag innstilles til pH ca. 3 med 0,5N HC1. Opplbsningen ekstraheres med 5 ml etylacetat to ganger, og den kombinerte ekstrakt tbrkes over vannfritt natriumsulfat. Opplbsningsmidlet avdestilleres under forminsket trykk til. oppnåelse av 166 mg av den bnskede forbindelse som et oljeaktig produkt, som krystalliserer ved henstand. Utbytte 83,8%. Produktets egenskaper er anfbrt nedenfor.

Smeltepunkt: 121,5 - 123,0°C.

IR(CHCl3)Y£™ks~: 2110, 1769, 1750, 1716, 1630

NMR(CD30D) £(ppm): 6,47 (1H, d, J=5,6Hz), 5,22 (1H, d, J=5,0), 4,2-3,7 (1H, m), 2,3-2,9 (1H, br), 1,11 (3H, d, J=7,2)

Referanseeksempel 18

Fremstilling av trifluoracetatet av (<i>)-cis-76-amino-4a-metyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on-2-karboksylsyre:

200 mg (-)-cis-76-azido-2-t-butyloksykarbonyl-4a-metyl-l-azabicyklo/4,2,07okt-2-en-8-on opplbses i 2ml vann og 2 ml etanol, og 75 mg 10% palladium-karbon tilsettes.

Blandingen omrbres i en strbm av hydrogengass ved atmosfære-, trykk. Etter 20 timer sugefUtreres reaksjonsblandingen. Til filterkaken tilsettes 2 ml trifluoreddiksyre.

Etter fjerning av katalysatoren ved filtrering konsentreres filtratet under forminsket trykk etterfulgt av tilsetning av 10 ml torket eter. De dannede krystaller utvinnes ved filtrering hvorved det oppnås 120 mg av den bnskede forbindelse. Utbytte 43%. Forbindelsens egenskaper stemmer overens med produktet i referanseeksempel 13.

Claims (1)

1. Analogifremgangsmåte til fremstilling av cefalosporinanaloge med den generelle formel:

   hvor X betyr en acylgruppe med den generelle formel X"*"C0, hvor X"^ betyr én av fblgende frem grupper:(1) en cyanmetylgruppe eller en gruppe med den generelle formel

   hvor B betyr en umettet, seksleddet, karbocyklisk gruppe valgt blant cykloheksenyl, cykloheksadienyl og fenyl eller en fem- eller seksleddet, heterocyklisk gruppe, A"*" betyr hydrogen, hydroksy, alkoksy med 1-4 karbonatomer, halogen, nitro, amino, aminometyl, metylsulfonamido eller acyloksy med 1-4 karbonatomer, n er et helt .tall fra 0 - 5, A 2betyr hydrogen, amino, hydroksy, karboksyl eller sulfoksyl, (2) en gruppe med den generelle formel:

   1 3 hvor B, A og n har den ovenfor angitte betydning, og A og/ , A er like eller forskjellige og hver'for seg betyr hydrogen, alkyl med 1-4 karbonatomer, en gruppe med den generelle formel -CO-A <3> , hvor A <3> betyr alkyl med 1-4 karbonatomer, eller en gruppe med den generelle formel:

   6 7 hvor A og A er like eller forskjellige og hver for seg betyr hydrogen, alkyl med 1-4 karbonatomer eller alkalimetall, 3 4 eller A. og A sammen med nitrogenatomet, hvortil de er knyttet, utgjor en gruppe med den generelle formel:

   8 8' hvor A og A er like eller forskjellige og hver for seg betyr hydrogen eller alkyl med 1-4 karbonatomer, eller en gruppe med den generelle formel: 0 A9' -N^ Ay hvor A 9 betyr hydrogen, alkyl med 1-4 karbonatomer, metyl- sulfonyl eller furfurylldenimino, og A 9' betyr hydrogen eller alkyl med 1-4 karbonatomer,(3) en gruppe med den generelle formel

   hvor B, A og n har den ovenfor angitte betydning, og A"^ betyr en substituert arylgruppe eller en mono-, bis- eller tricyklisk heterocyklisk gruppe,(4) en gruppe med den generelle formel:

   hvor B, A <1> og n har den ovenfor angitte betydning, og A^ betyr hydrogen, alkyl med 1-6 karbonatomer, alkenyl med 2-6 karbonatomer, alkynyl med 2-6 karbonatomer, cyklo-,alkyl med 3-6 karbonatomer eller aryl, hvor gruppene eventuelt er substituert med egnede substituenter valgt blant karboksyl, cyan, halogen, karbamoyl og alkoksykarbonyl med 1-4 karbonatomer, eller(5) en gruppe med den generelle formel:

   hvor B"*" betyr trifluormetyl, cyanmetyl eller en gruppe med formelen (A^-^j—B-, hvor B, A"<*>" og n har den ovenfor angitte betydning, og Z betyr oksygen eller svovel, R"*" betyr hydrogen eller en karboksylsyrebeskyttende gruppe valgt blant alkyl med 1-5 karbonatomer, halogenert alkyl med 1-5 karbonatomer, arylmetyl med 7-20 karbonatomer, som kan være substituert på fenylringen, substituert silyl og en gruppe som lett fjernes enzymatisk eller ikke-enzymatisk in vivo, og R 2betyr hydrogen, alkyl med 1-5 karbonatomer eller acyloksy med 1-5 karbonatomer, eller farmasbytisk akseptable salter derav, karakterisert ved at en cefalosporin-analog med den generelle formel:

   1 2 hvor R og R har den ovenfor angitte betydning, eller en funksjonelt ekvivalent forbindelse (i det fblgende betegnet som 7-amino-forbindelsen) acyleres med en karboksylsyre med den generelle formel:

   eller et reaktivt derivat derav, hvor X 2 betyr én av fblgende fem grupper:1 <1> ) cyanmetyl eller en gruppe med den generelle formel:

   hvor B og n har den ovenfor angitte betydning, A 1 » betyr hydrogen, hydroksy, "beskyttet hydroksy, alkoksy med 1-4 karbonatomer, halogen, nitro, beskyttet amino, beskyttet aminometyl, metylsulfonamido eller acyloksy med 1-4 karbonatomer, og A 2'betyr hydrogen, beskyttet amino, hydroksy, karbonyl eller beskyttet sulfoksyl,(2') en gruppe med den generelle formel:

   1' 3 4 hvor B, A , n, A v 3 og A har den ovenfor angitte betydning,(3') en gruppe med den generelle formel:

   hvor B, A <11> , n og A <10> har den ovenfor angitte betydning,(4') en gruppe med den generelle formel:

   11 12 hvor B, A og n har den ovenfor angitte betydning, og A betyr hydrogen, alkyl med 1-6 karbonatomer, alkenyl med 2-6 karbonatomer, alkynyl med 2-6 karbonatomer, cykloalkyl med 3-6 karbonatomer eller aryl, hvor gruppene eventuelt er substituert med egnede substituenter valgt blant beskyttet karboksyl, cyan, halogen, karbamoyl og alkoksykarbonyl med 1-4 karbonatomer, eller (5 <1> ) en gruppe med den generelle formel:

   hvor B" ^ betyr trifluormetyl, cyanmetyl eller en gruppe med formelen (A"*""1"-}^—B-, hvor B, A"^ og n har den ovenfor angitte betydning, og Z betyr oksygen eller svovel, hvoretter, om nbdvendig, den beskyttende gruppe i X CO- og/ eller -COOR"'"-gruppen fjernes på konvensjonell måte, og, om bnsket, den dannede forbindelse overfores til et farmasbytisk akseptabelt salt derav.