NO803567L - Proeveblanding for peroksydaktive stoffer, proeveinnretning inneholdende blandingen, fremgangsmaate for fremstilling av denne og fremgangsmaate for bestemmelse av peroksydaktive stoffer - Google Patents

Description

Oppfinnelsen vedrører generelt område for diagnos-tiske prøver og mere spesielt de prøver som er anvendelig 1 kvalitativ og kvantitativ bestemmelse av peroksydaktive stoffer.

Bestemmelsen av små mengder peroksydaktive stoffer som skjulte blødninger, hemoglobin, myoglobin, leukocyter, bakterier og andre peroksydaktive analyter, kroppsvæsker, og i kroppsekskreter har lenge blitt ansett som en uvurder-lig hjelp for praktiserende lege i diagnosen av mange unormale forhold.

Forskjellige fremgangsmåter, blandinger og innretninger er omtalt i litteraturen for påvisning av skjulte peroksydaktive stoffer. Eksempelvis angir>US påtent nr. 2 290 436, 2 799 660, 2 838 377, 3 012 976, 3 092 463 og 3 092 464 forskjellige prøveblandinger som har blitt fore-slått for å møte behovet for en enkel pålitelig -prøve for skjulte blødninger. Disse prøveblandinger er basert på den peroksydiske eller katalytiske aktivitet av prostetiske grupper tilstede i blodet. Se også Schwartz, Zeitschrift fiir gerichtlich Medizin (Journal of Forensic Medicine) 12; 1928.

Det er funnet av Adams et al., ifølge US påtent nr. 3 290 117 at følsomheten av disse skjulte blødningsprøve-blandinger kan markert forbedres og potensieres ved til-setning åv kinolin eller visse kinolinderivater som kinin. Med tilsetninger av disse kinolinderivater til blandingene som tidligere ble benyttet til påvisning av skjulte blød-ninger er det mulig å bestemme 5 til 50 røde blodceller (RBC)/mikroliter (yl) av prøven som tilsvarer en blodfor-tynning så lavt som 1:1 000 000. Bruk av de sure addisjons-salter eller addukter av kinolin og dets derivater som potensierende midler er omtalt av Mast et al., i US patent nr. 3 986 833. Et annet forsøk, omtalt i US patent nr. 3 853 472 omtaler bruk av glødet polycykliske derivater av kinolin som benzokinoliner og pyridokinoliner som potensierende eller aktiverende midler med tilsvarende følsomhet.

I US patent nr. 3 975 161 omtales bruk av isokinoliner som

potensiatorer.

Forbindelser utenom disse i kinolinfamilien har også blitt funnet effektive. I US patent nr. 3 917 452 omtales bruk av vinylpyridinforbindelser for bruk som følsomhetsgjørere. I US patent nr. 4 063 894 omtales bruk av substituerte tiazolforbindelser for dette formål.

Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes forbedrede prøveblandinger, innretninger og fremgangsmåter for påvisning av peroksydaktive stoffer. Prøveblandingene omfatter en indikator som kan oksyderes i nærvær av peroksydaktive stoffer for å danne en farveforandring, et oksyderende stoff i stand til å oksydere indikatoren og et føl-somhetsøkende stoff. Det følsomhetsøkende stoff omfatter 1 0H-pyrido{ 3 , 2-^6 } - { 1 , 4 }benzotiazin.

Ennskjønt spesifikke uttrykk benyttes av klarhets-grunner refererer disse uttrykk bare til eksempelvise ut-førelsesformer og skal ikke begrense oppfinnelsens omfang.

Prøveblandingene som er forbedret ved å inkorporere følsomhetsøkende stoffer nevnt ovenfor inneholder videre minst en indikator og et oksyderingsmiddel og kan fremstilles i tablettform eller inkorporeres med en bærer som en absorberende matriks. Egnede indikatorer er i stand til å oksyderes i nærvær av et peroksydaktivt stoff for å danne en farveforandring og omfatter velkjente materialer som 3,3', 5,5'-tetrametylbenzidin, o-tolidin, o-toluidin, p-toluidin, o-fenylendiamin, N,N<1->dimetyl-p-fenylendiamin, N,N'-dietyl-p-fenylendiamin, benzidin, p-anisidin, dianisL-din, o-kresol, m-kresol, p-kresol, alfa-naftol, beta-naftol, katekol, guaiakol, pyrogallol eller de fra hetero-cykliske azinserier,eksempelvis bis-(N-etyl-kinol-2-on)-azin eller (N-metylbenzotiazol-2-on)-(1-etyl-3-fenyl-5-mettriazol-2-on)-azin. Som oksyderende stoffer kan det benyttes eksempelvis kumen-hydroperoksyd, diisopropylbenzen-hydroperoksyd, paramentanhydroperoksyd, 2,5-dimetylheksan-2,5-dihydroperoksyd og andre velkjente oksyderende stoffer som er i stand til å oksydere indikatoren.

I en foretrukket utførelsesform er de forbedrede prøveblandinger ifølge oppfinnelsen inkorporert på eller med en bærer og utnyttes som dypp og avlesnirigsprøveinn-retning. Prøveinnretningen kan fremstilles etter flere velkjente metoder som innbefatter impregnering av et absorberende bærermateriale med en oppløsning eller opp-løsninger av prøveblandingen og deretter tørke den impreg-nerte matriks for således adhesivt å inkorporere innen matriksen en finfordelt god blanding av ingrediensene. Konsentrasjonsområdet av de følsomhetsøkende stoffer som kan benyttes for impregneringsoppløsningen er vanligvis fra ca. 0,05 g/100 ml til ca. 1,0 g/100 ml og fortrinnsvis fra ca. 0,1 g/100 ml til ca. 0,5 g/100 ml. Uttrykket bærer refererer til matriksersom er uoppløselige i og bi-beholder deres strukturelle integritet når de utsettes for fysiologiske eller andre væsker som skal undersøkes. Egnede matriksersom kan benyttes innbefatter papir, cellulose, tre, syntetisk harpiksark, glassfiber, ikke-vevet og vevet tekstil, forskjellige organiske polymerer som polypropylen og andre organiske materialer som er velkjent som film-dannere for fagfolk. Alternativt kan bæreren ha form av en presset eller støpt tablett inneholdende vanlig bærermateri-ål".. For bekvemmelighetsgrunner kan bæreren bli hensikts-messig festet til en uoppløselig bærer eller håndtakdel som kan fremstilles av polystyren.

Prøveinnretningen benyttes fortrinnsvis ved momentan dypping i en prøve eller på annen måte å innføre en prøve i bærermatriksen hvorved det fremkommer en synlig farveforandring når den peroksydaktive analyt er til stede. Bærerens volumetriske kapasitet tjener til å begrense den mengde av prøven som absorberes deri og hvortil prøveblandingen inkorporert derved utsettes for. Et hvilket som helst over-skudd av prøve kan fjernes ved å vaske eller riste bæreren for derved å begrense prøvemengden som skal undersøkes til volumet derav som akkurat har gått inn i bærermatriksen. Prøveinnretningen kan benyttes på samme måte når det under-søkes prøver av plasma, serum eller andre kroppsvæsker.

Prøveinnretninger i form av behandlet bærermatrikser .

er ofte lagret i betraktelige tidsperioder før bruk, og det er derfor ønskelig at reagensene som velges ikke lett auto-oksyderes i luft. Fordelaktig bør prøveinnretningene beskyttes for lysinnvirkning og i noen tilfeller er det ønskelig å holde dem forseglet i en fuktighetsavstøtende pakning som åpnes bare for å fjerne en eller flere prøve-innretninger kort før bruk.

Reflektavlesninger av farve dannet ved reaksjonen med den peroksydaktive analyt til stede i prøven kan opp-nås fra kommersielt tilgjengelig spektrofotometere som Beckman DK-2 spektrometer, Beckman Instruments, Inc., Fullerton, California eller spektrokolorimeter SCF-1, Israel Electrooptical Industry Ltd. (distribuert i USA av Broomer Research Corporation, Plainwell, Long Island, N.Y.).

Oppfinnelsen skal forklares ved hjelp av et eksempel.

Eksemp_el_I

Dette eksempel omfatter prøver utført for å sammen-ligne de følsomhetsøkende stoffer ifølge oppfinnelsen med et kjent følsomhetsøkende stoff, 6-metoksykinolin.

Tre impregneringsoppløsninger ble fremstilt som følger:

1. Følgende forbindelser ble satt til 41,67 ml destil-lert vann i følgende rekkefølge. Hvert stoff ble oppløst før neste ble tilsatt.

Deretter ble det til denne oppløsning tilsatt 41,67 ml N,N-dimetylformamid og deretter følgende forbindelser:

2. Samme, unntatt 6-metoksykinolin.

3. 0,210 g 10H-pyrido{3,2-6}-{1,4}benzotiazin isteden-for 6-metoksykinolin.

Et 2 5 cm x 10 cm stykke.av Eaton&Dikeman rir. 237 papir ble impregnert til metning med den første oppløsning og tørket i. 11 minutter ved 95-97°C. Identiske papirstykker ble deretter hver impregnert med en av de gjenværende opp-løsninger. De ble deretter kuttet i stykker på 0,5 x 0,5 cm og festet til plastikhåndtak.

Oppløsninger av hemoglobin ble fremstilt og inn-retningene preparert som ovenfor ble undersøkt både nye og etter lagring en uke ved 6 0°C. Det lavest bestembare nivå av hemoglobin i urin angis som mg/dl i tabell I.

Disse resultater viser at forbindelsene benyttet ifølge oppfinnelsen er effektive som følsomhetsøkere i påvisning av peroksydaktive stoffer som skjulte blødninger.

Det kan foretas modifikasjoner uten å overskride oppfinnelsens ramme slik den fremgår av kravene.

Claims (4)

1. Prøveblanding for påvisning av peroksydaktive stoffer omfattende en indikator i stand til å oksyderes i nærvær av peroksydaktive stoffer for å danne farveforandring og et oksyderende middel i stand til å oksydere indikatoren, karakterisert ved at den inneholder 10H-pyrido{3,2-6}-{1,4}benzotiazin som et føl-somhetsøkende stoff.

2. Prøveinnretning for påvisning av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at den omfatter en bærer inkorporert med blandingen ifølge krav 1.

3. Fremgangsmåte for fremstilling av en innretning for påvisning av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at en bærer inkorporeres med blandingen ifølge krav 1.

4. Fremgangsmåte for bestemmelse av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at prøven bringes i berøring med blandingen ifølge krav 1 og en resulterende farveforandring iakttas.