PL171864B1 - Sposób otrzymywania nowego typu roslin,zdolnych do wiazania azotu równiez w swoich lisciach PL PL PL PL - Google Patents
Sposób otrzymywania nowego typu roslin,zdolnych do wiazania azotu równiez w swoich lisciach PL PL PL PLInfo
- Publication number
- PL171864B1 PL171864B1 PL93309470A PL30947093A PL171864B1 PL 171864 B1 PL171864 B1 PL 171864B1 PL 93309470 A PL93309470 A PL 93309470A PL 30947093 A PL30947093 A PL 30947093A PL 171864 B1 PL171864 B1 PL 171864B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- bacteria
- plant
- cells
- nitrogen
- carbon source
- Prior art date
Links
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 69
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 18
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241000589154 Azotobacter group Species 0.000 claims abstract description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 241000589151 Azotobacter Species 0.000 claims description 10
- 241000973034 Azomonas Species 0.000 claims description 8
- 241001180360 Derxia Species 0.000 claims description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N lactose group Chemical group OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 6
- 241000588882 Beijerinckia Species 0.000 claims description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 5
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 claims description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 3
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 claims description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 2
- 239000002019 doping agent Substances 0.000 claims 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 49
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 8
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 5
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 241000589149 Azotobacter vinelandii Species 0.000 description 3
- 230000001651 autotrophic effect Effects 0.000 description 3
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000217480 Azomonas agilis Species 0.000 description 2
- 241000408718 Azomonas insignis Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 2
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000599985 Beijerinckia mobilis Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 108010020943 Nitrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 1
- 238000004178 biological nitrogen fixation Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H17/00—Symbiotic or parasitic combinations including one or more new plants, e.g. mycorrhiza
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H3/00—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S47/00—Plant husbandry
- Y10S47/01—Methods of plant-breeding and including chromosome multiplication
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
1. Sposób otrzymywania nowego typu roslin, zdolnych do wiazania azotu równiez w swoich lisciach, przez szczepienie bakteriami i nastepnie kultywowanie otrzymanej kultury w temperaturze 15-35°C, znamienny tym, ze rosline protoplasty, komórki, tkanki, zarodki lub organy, hodowane lub poddane obróbce in vitro szczepi sie bakteriami z rodziny Azotobacteraceae, i tak otrzymana kulture nastepnie kokultywuje sie, w razie potrzeby rozmnaza sie i/lub regeneruje sie cala rosline w warunkach in vitro na pozywce zawierajacej azot i glówne zródlo/a wegla, wykorzystywanego tylko przez komórki roslinne oraz ewentu- alnie inne substancje uzupelniajace. (1 3 ) B1 ( 1 2 ) OPIS PATENTOWY PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nowego typu roślin, zdolnych do wiązania azotu również w swoich liściach.
Znane jest, że azot jest czynnikiem ograniczonym w uprawie roślin, ponieważ dostarczanie azotu poprzez sztuczne nawożenie, pomimo że jest ono efektywne, jest bardzo kosztowne i nadzwyczaj szkodliwe dla środowiska naturalnego. Nowa koncepcja uprawy, zyskująca coraz szersze rozpowszechnienie na świecie, koncepcja rozwoju możliwego do zachowania zamiast stosowania zewnętrznych źródeł, preferuje wykorzystanie zasobów wewnętrznych. Zgodnie z tym, zamiast stosowania nawozów sztucznych, celowe jest wykorzystać możliwości kryjące się w biologicznym wiązaniu azotu do zabezpieczenia roślinom potrzebnej jego ilości [Plant and Soil, 141, 1-12 (1992)]. Do wiązania azotu z atmosfery zdolne sąjednak tylko pewne prokarioty (diazotrofy). Tak zwane aerobowe bakterie, które są zdolne do efektywnego wiązania azotu także przy atmosferycznych koncentracjach tlenu, należące do szczepów Azomonas, Azotobacter, Bijerinekia i Derxia z rodziny Azotobacteracea [Bergey’s Manual of Determinative Bacterology, 8th ed., 1974, p.253, Baltimore: Williams and Wilkinsjnie potrafią jednak w sposób naturalny
171 864 wcielać się w wewnętrzne przestrzenie tkanek roślinnych [Azotobacteraceae: the Taxonomy and Ecology of the Aerobic Nitrogen-fixing Bacteria. Academic Press, New York(1979)] i tam rozmnożyć się, chociaż udowodniono, że są one zdolne do pokrycia zapotrzebowania pewnych roślin w azot poprzez osadzanie się na korzeniach lub zewnętrznych powierzchniach liści [J.Gen. Microbiol. 71, 103-116 (1972); J.Gen. Appl. Microbiol. 25, 261-271 (1979); Can. J. Bot.69, 2296-2298 (1991)] Tak zwane diazotrofy mikroaerofilowe, wiążące azot przy niskim poziomie tlenu, są tylko zdolne do tworzenia endosymbiozy w przestrzeniach międzykomórkowych [Nitrogen-fixing Bacteria in Nonleguminous Crop Plants, 84-88, (1987) Sci.Tech. Publishers/Spring-Verlag, Madison, WI) i do wiązania gazu N2 w korzeniach, daleko od miejsc w których zachodzi proces fotosyntezy.
Dotychczas zostały przeprowadzone dwa doświadczenia na kokultywację Azotobactera i komórek roślinnych w warunkach in vitro:
W pierwszym doświadczeniu [Nature 252, 393-395 (1974)] kokultywowano adenin-autotrofowy zmutowany szczep Azotobacter vinelandii z komórkami marchwi, na pożywce zawierającej sacharozę a pozbawionej azotu, albo zawierającą azot w niewystarczającej ilości do wzrostu komórek. Tak powstałe kultury kallusa mieszanego rosły przez 18 miesięcy i wykazały zdolność wiązania azotu jak również można było zaobserwować bakterie między żyjącymi komórkami rośliny.
Jednak sposób ten miał wiele wad i niedogodności ponieważ użyto w doświadczeniu autotrofowego mutanta, z gatunku Azotobacter, trudnego do izolacji z powodu dużej liczby chromosomów [J.Bacteriol., 138, 871-877 (1979)]; kultury rosły bardzo wolno; system jest niestabilny w obecności azotu; nie udało się regenerować roślin; możność zastosowania sposobu jest ograniczona do paru, intensywnie badanych gatunków, z powodu malej ilości szczepów autotrofowych.
W drugim przypadku [Z. Pflanzenphysiol.,95, 141-147 (1979)] bakterie przerosły tkankę roślinną, niszcząc ją, dlatego to nie było możliwości wyhodowania rośliny zdolnej do wiązania azotu 1 do dłuzszej hodowli.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest opracowanie takiego sposobu, który wyeliminuje znane i powyżej opisane wady i niedogodności i który w prosty sposób stworzy możliwość do wyhodowania w warunkach in vitro takiej rośliny, która zawierałaby w swoich przestrzeniach wewnętrznych bakterie z rodziny Azotobacteraceae, i która zdolna by była do wiązania azotu również w swoich liściach.
Przedmiotem wynalazku jest stwierdzenie, że wprowadzenie do wewnętrznych przestrzeni roślin drogą in vitro i osiedlenie się tam, szybko rosnących i zdolnych do wiązania azotu przy poziomie tlenu atmosferycznego, heterotrofów i prototrofów należących do rodziny Azotobacteraceae, jest możliwe przy takim poziomie składników odżywczych , który jest optymalny do hodowli tkanek w warunkach in vitro, ale nie jest najkorzystniejszą koncentracją dla roślinypartnera.
Stwierdziliśmy mianowicie, że stosując takie składniki odżywcze, komórki roślinne i bakteryjne mogą rozwijać się równomiernie i harmonijnie, podczas gdy na pożywkach tradycyjnych używanych w hodowli kultury tkanek roślinnych w warunkach in vitro, bakterie rozwijają się bardzo szybko i przerastają tkanki rośliny-gospodarza i niszczą ją.
Następnie, przedmiotem wynalazku jest stwierdzenie, że równomierny wzrost dwóch partnerów w warunkach in vitro zapewnia źródło/a węgla, które ulega przemianie materii tylko w roślinach to znaczy jest metabolizowany tylko przez komórki roślinne, i jako produkt przemiany materii zużytkowany jest do wzrostu bakterii w stopniu potrzebnym do ich równoległego rozwoju.
Stwierdzenie to jest dlatego zaskakujące, ponieważ w kokultywacji wzrost kultur roślinnych odbywa się kosztem takich źródeł węgla, które są słabo wykorzystywane przez roślinne komórki, i które są używane w większości przypadków w badaniach przemiany materii, a bardzo rzadko w kulturach in vitro.
Następną podstawą wynalazku jest stwierdzenie, że dla obiektów roślinnych, kokultywowanych z bakteriami wiążącymi azot, jest również niezbędne zapewnienie optymalnego źródła azotu w pożywce, po to, aby z kultur z dużym prawdopodobieństwem rozwijało się jak najwięcej całych roślin, co oznacza, że dla uformowania symbiozy in vivo nie jest potrzebna symbioza in vitro, a cel ten może zostać osiągnięty drogą mesymbiotycznej kokultywacji. Powyższe stwierdzenie jest dlatego zaskakujące, ponieważ do tej pory panował pogląd, według którego, w podobnych kokultywacjach kulturom roślinnym powinno się zapewnić pożywki bez azotu lub z niską jego zawartością, po to, aby wzrost tkanek roślinnych był uzależniony od wiązania azotu przez bakterie.
Na końcu, podstawą wynalazku jest stwierdzenie, że bakterie ze szczepu Azotobacter, Azomonas, Beijerinckia i Derxia mogą być użyte do wyhodowania nowej rośliny wiążącej azot. Jest to dlatego zaskakujące, ponieważ zgodne z naszą dotychczasową wiedzą, te tzw. wolnożyjące bakterie nie osiedlają się w wewnętrznych przestrzeniach roślin w warunkach in vivo i nie są skłonne do tak ścisłej asocjacji w warunkach naturalnych [Azotobacteraceae: the Taxonomy and Ecology of the Aerobic Nitrogen-fixing Bacteria, Academic Press, New York (1979)].
Rozszerzenie symbioz wiążących azot na nowe gatunki roślin może być dokonane nie tylko poprzez dalszy rozwój dotychczas znanych naturalnych symbioz lub ścisłych asocjacji endofitów [Plant Soil, 141, 13-39, (1992)].
Na podstawie powyższych stwierdzeń przedmiotem wynalazku jest sposób wyhodowania rośliny zdolnej do wiązania azotu również w swoich liściach. Zgodnie z wynalazkiem, roślinne protoplasty, komórki, tkanki, zarodki lub organy hodowane i/lub traktowane w warunkach in vitro inokulujemy z bakteriami z rodziny Azotobacteraceae i tak otrzymane kultury kokultywujemy w warunkach in vitro w temperaturze od 15 do 30°C, w przypadkach pożądanych rozmnażamy je i/lub regenerujemy całą roślinę na pożywce zawierającej azot i główne źródła węgla, zużywane tylko przez rośliny, jak również, jeśli zajdzie potrzeba, i inne składniki, przy tej samej temperaturze.
Gatunki z rodzaju Azotobacter, Azomonas, Beijerinckia i Derxia należące do rodziny Azotobacteraceae są raczej użyte jako bakterie heterotroficzne, zdolne do wiązania azotu przy atmosferycznym poziomie tlenu.
Do szczepienia korzystnie używamy komórek wegetatywnych i cyst bakterii pozbawionych częściowo lub całkowicie ścian komórkowych
Jako główne źródło/a węgla stosujemy głównie laktozę, maltozę, galaktozę, cellobiozę, skrobię, rafinozę i/lub sorbit, które jest/są wykorzystywane tylko przez komórki roślinne. Te główne źródło/a węgla celowo jest dodawać do pożywki w koncentracji przynajmniej 10 g/l, korzystniej w koncentracji 20-40 g/l. W przypadku bakterii pozbawionych częściowo lub całkowicie ścian komórkowych główne źródło/a węgla celowo jest używać w koncentracji 0,35-0,75 M.
W sposobie według wynalazku wartość odczynu kwasowego (pH) pożywki korzystnie jest przybliżyć do wartości pH optymalnej do wzrostu bakterii. W przypadku bakterii należących do szczepu Azotobacter, Azomonas i Derxia wartość ta równa się 5,5-9,5, natomiast dla bakterii ze szczepu Beijerinckia 3,0-9,3.
W sposobie według wynalazku, w danym przypadku, w okresie kokultywacji, dodatkowe zapotrzebowanie na Ca, niezbędne do wzrostu niektórych gatunków ze szczepu Azotobacter i Azomonas, korzystnie jest pokrywać przez dodanie do pożywki CaCCb w koncentracji 0,1-0,5 g/l i/lub CaCl2 w koncentracji 0,05-0,2 g/l.
Do wyhodowania rośliny wiążącej azot i do jej rozmnażania korzystne jest używać metod in vitro stosowanych w hodowli protoplastów, komórek, kallusa, tkanek, zarodków i liściem jak i w mikrorozmnażaniu.
W sposobie według wynalazku korzystne jest stosowanie składników takich jak sacharoza i glukoza, które są wykorzystywane przez bakterie również jako dodatkowe źródła węgla jak i witaminy, aminokwasy i substancje wzrostowe przyspieszające wzrost.
Rysunek pierwszy przedstawia zdjęcie spod mikroskopu elektronowego pokazujące powiększone 16000 razy komórki Azomonas agilis osiadłe w przestrzeniach międzykomórkowych w szypułkach marchwi.
Rysunek drugi przedstawia zdjęcie spod mikroskopu elektronowego, które przedstawia komórki bakterii Azomonas insignis osiadłe w przestrzeniach międzykomórkowych liści marchwi powiększone 18000 razy.
171 864
Główne zalety sposoby wynalazku.
a) Roślina wyhodowana tym sposobem jest zdolna do wiązania azotu również w liściach i dlatego nie wymaga ona, albo w bardzo małym stopniu, nawożenia azotem.
b) Mogą być użyte w jednakowym stopniu bakterie autotroficzne i prototroficzne.
c) Można stosować tradycyjne metody in vitro.
d) Zapewnia jednocześnie zrównoważony wzrost rośliny i bakterii.
e) Endosymbioza roślina-bakteria może być stosunkowo szybko osiągnięta.
f) W sposobie można użyć jakąkolwiek roślinę i każdą część rośliny.
g) Powołana do życia symbioza może być szybko rozmnożona przy pomocy metody in vitro, szczególnie przy pomocy mikrorozmnażania.
h) Efektywność nowej, wiążącej azot rośliny, można zwiększyć poprzez zastosowanie bakterii-mutanta produkującego w nadmiarze nitrogenazę i/lub wydzielającą w dużej ilości przyswojony azot.
Wynalazek ilustrują, nieograniczając jego zakresu, następujące przykłady:
Przykład I. Po wymyciu resztek sacharozy zawiesinę komórek marchwi szczepiliśmy zawiesiną komórek (106-108 komórek/ml; komórki wegetatywne i cysty) bakterii Azotobacter vinelandii (DSM 87), następnie tak otrzymaną mieszaninę komórek umieściliśmy na pożywce agarowej MS [(Physiol.Plant. 15, 473-494, (1962)] zawierającą 2,4-dichlorfenoksy-kwas octowy (2,4D), hormon roślinny sprzyjający powstawaniu kallusa, w koncentracji 0,5 mg/l oraz laktozę w ilości 30 g/l jako jedynie źródło węgla i sole mineralne (pH=6,2). Kultury hodowano w temperaturze od 17 do 22°C. Tak powstałe kallusy przesadziliśmy na podobną pożywkę MS tylko pozbawioną 2,4 D i dalej hodowaliśmy w podobnych warunkach.
W ten sposób otrzymane całe rośliny wysadziliśmy do ziemi i po 2 miesiącach, po uprzednim wysterylizowamu powierzchni liści (0,2% HgCl2, 1,5 minut) i homogenizowaniu, oznaczyliśmy zawartość bakterii w liściach. Jeden gram świeżych liści zawierał 10-105 bakterii. Doświadczenie powtórzyliśmy na tej samej MS pożywce z tą różnicą, ze pożywka nie zawierała 2,4 D. Zawiesinę komórek roślinnych szczepiliśmy bakteriami Azotobacter vinelandii (DSM 87) i umieściliśmy na pożywce agarowej MS nie zawierającej 2,4 D i hodowaliśmy je w temperaturze 17-22°C. Tak otrzymane rośliny były analizowane tak samo jak rośliny otrzymane z kallusa wyrastającego na pożywce zawierającej hormon 2,4 D.
Zawartość bakterii w liściach zasadniczo była taka sama (104-105 bakterii/g świeżej masy liści). Wiązanie azotu w liściach badano metodą redukcji acetylenu w atmosferze zawierającej objętościowo 10%c acetylenu bez sterylizacji powierzchni (755 mmoli CaLE/g świeżej masy liści/24 godziny) lub po wysterylizowaniu powierzchni liści (530 mmoli C2H4/g świeżej masy liści/24 godziny). Liście były inkubowane przez 14 godzin na świetle (1200 lux) i przez 10 godzin w ciemności przy temperaturze 25°C. Pożywka zawierała 0,1 g/l CaCO; jako dodatkowe źródło Ca2+.
Przykład E. Kallus marchwi uzyskiwano w podobny sposób jak zostało to opisane w przykładzie nr I, stosując w tym przypadku komórki Azomonas agilis (DSM 375), następnie był on kokultywowany i regenerowano z niego roślinę na pożywce zawierającą jako główne źródło węgla laktozę w ilości 30 g/l i sacharozę w ilości 0,1 g/i jako dodatkowe źródło węgla (pH=7,3) w temperaturze 27-32°C.
Ilość osiadłych bakterii w zregenerowanych roślinach wykazaliśmy przy pomocy mikroskopu elektronowego licząc bakterie po uprzedniej sterylizacji powierzchni rośliny (105-106 bakterii/g świeżej masy korzeni; 106-107 komórek bakterii/g świeżej masy liści).
Rysunek 1 przedstawia zdjęcia spod mikroskopu elektronowego gdzie jedynką oznaczono przestrzeń międzykomórkową, dwójką osiadły w niej mikroorganizm, trójką natomiast chloroplasty komórek. Po uprzedniej sterylizacji powierzchniowej 1 gram liści redukował 278 nmoli acetylenu do etylenu, natomiast 1 gram korzeni 266 nmoli w ciągu jednego dnia.
Przykład III. Zawiesinę komórek marchwi szczepiliśmy komórkami bakterii Azomonas insignis (ATCC-12523) w podobny sposób jak w przykładzie nr I. Pożywka zawierała jako główne źródło węgla galaktozę w ilości 30 g/l i glukozę w ilości 2,5 g/l jako dodatkowe źródło węgla (pH=8,3; 27-33°C; CaCl2 0,1 g).
Zawartość bakterii w zregenerowanej roślinie była wykazana przy pomocy mikroskopu elektronowego (105 bakterii/g świeżej masy liści) i była mierzona również aktywność wiązania
171 864 azotu (430 nmoli C2HVg świeżej masy liści po jednym dniu inkubacji). Rysunek nr 2 przedstawia zdjęcie wykonane mikroskopem elektronowym gdzie jedynką oznaczono przestrzeń międzykomórkową, dwójką osiadły w niej mikroorganizm, trójką natomiast chloroplasty komórek roślinnych.
Przykład IV. Kultury pędów tytoniu, w miejscu nacięć, szczepiliśmy komórkami Azolobacter paspali (ATCC 23833) pozbawionych ścian komórkowych (forma L) i inkubowano na pożywce zawierającej penicilinę G w koncentracji 100 ppm i stabilizującą pożywkę glukozę w koncentracji 0,5 M. Tak otrzymane kultury hodowano przez 2 miesiące na pożywce zawierającej maltozę w koncentracji 0,5 M i penicilinę (pH=7,3; CaCO3 0,25 g).
Następnie kultury były hodowane na pożywce pozbawionej peniciliny G i z obniżoną koncentracją maltozy do 10 g/l. Po wysadzeniu roślin,po uprzedniej powierzchniowej sterylizacji, oznaczyliśmy aktywność wiązania azotu w liściach (800 nmoli C2H2/g świeżej masy liści/24 godziny).
Przykład V. Zawiesinę komórek marchwi szczepiliśmy zawiesiną komórek bakterii Beijerinckia mobilis (DSM 2326) tak jak w przykładzie nr I i kultury te kokultywowano na pożywce zawierającą laktozę w ilości 40 g/l (pH=5,4, bez dodatku Ca?+). Aktywność wiązania azotu w liściach zregenerowanej rośliny wykazano testem redukcji acetylenu (180 nmoli C2H2/g świeżej masy liści/24 godzin).
Przykład VI. Po szczepieniu komórek marchwi zawiesiną komórek Derxia gumnosa (ATCC 15994) w sposób opisany w przykładzie nr III (pH=7,2) aktywność wiązania azotu w liściach zregenerowanej rośliny była wykazana testem redukcji acetylenu.
Fig. 2
171 864
Fig. 1
Departament Wydawnictw UP RP Nakład 90 egz. Cena 2,00 zł
Claims (9)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób otrzymywania nowego typu roślin, zdolnych do wiązania azotu również w swoich liściach, przez szczepienie bakteriami i następnie kultywowanie otrzymanej kultury w temperaturze 15-35°C, znamienny tym, że roślinę protoplasty, komórki, tkanki, zarodki lub organy, hodowane łub poddane obróbce in vitro szczepi się bakteriami z rodziny Azotobacteraceae, i tak otrzymaną kulturę następnie kokultywuje się, w razie potrzeby rozmnaza się i/lub regeneruje się całą roślinę w warunkach in vitro na pożywce zawierającej azot i główne źródło/a węgla, wykorzystywanego tylko przez komórki roślinne oraz ewentualnie inne substancje uzupełniające.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się bakterie ze szczepu Azotobacter, Azomonas, Beijerinckia i Derxia należące do rodziny Azotobacteraceae.
- 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że do inokulacji wykorzystuje się komórki, cysty lub inne formy bakterii, częściowo lub całkowicie pozbawione ścian komórkowych.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako źródło węgla stosuje się laktozę, maltozę, galaktozę, cellobiozę, skrobię, rafinozę i/lub sorbit, które są przyswajalne tylko przez komórki roślinne.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że główne źródło/a węgla dostarcza się do pożywki w koncentracjach co najmniej 10 g/l, korzystnie w koncentracjach 20-40 g/l.
- 6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w przypadku bakterii pozbawionych ścian komórkowych główne źródło/a węgla dostarcza się do pożywki w koncentracjach 0,35-0,75 M.
- 7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że wartość pH pożywki utrzymuje się, w przypadku szczepów Azotobacter, Azomonas lub Derxia, w granicach 5,5-9,5, a w przypadku bakterii ze szczepu Beijerinckia w granicach 3,0-9,5.
- 8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, ze w przypadku użycia szczepów Azotobacter i Azomonas używa się, jako inne domieszki, CaCCO w koncentracji do 0,5 g/l i/lub CaCb w koncentracji do 0,2 g/l.
- 9. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako inne domieszki stosuje się dodatkowe źródło/a węgla, korzystnie sacharozę lub glukozę poza tym witaminy, aminokwasy i substancje wzrostowe (regulatory) roślin.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9201218A HU9201218D0 (en) | 1992-04-10 | 1992-04-10 | Process for the entering of non-auxotrophic bacteries -belonging to the azotobacteraceae family - into the intercellular spaces of plant tissues, for their cultivation in vitro, with the aim to create new nitrogenfixing plant-bacterium symbiosis |
| PCT/HU1993/000020 WO1993020685A1 (en) | 1992-04-10 | 1993-04-09 | Process for the development of novel type of plants with nitrogen-fixing capacity also in their leaves |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL171864B1 true PL171864B1 (pl) | 1997-06-30 |
Family
ID=10981718
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL93309470A PL171864B1 (pl) | 1992-04-10 | 1993-04-09 | Sposób otrzymywania nowego typu roslin,zdolnych do wiazania azotu równiez w swoich lisciach PL PL PL PL |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5664368A (pl) |
| EP (1) | EP0634893B1 (pl) |
| JP (1) | JPH07508642A (pl) |
| KR (1) | KR950700683A (pl) |
| AT (1) | ATE181479T1 (pl) |
| AU (1) | AU666008B2 (pl) |
| CA (1) | CA2132967A1 (pl) |
| DE (1) | DE69325449T2 (pl) |
| DK (1) | DK0634893T3 (pl) |
| ES (1) | ES2135473T3 (pl) |
| HU (2) | HU9201218D0 (pl) |
| NZ (1) | NZ251765A (pl) |
| PL (1) | PL171864B1 (pl) |
| RU (1) | RU2126202C1 (pl) |
| WO (1) | WO1993020685A1 (pl) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2193837C2 (ru) * | 2001-01-31 | 2002-12-10 | Институт химической кинетики и горения СО РАН | Способ внесения в почву азотфиксирующих бактерий |
| GB0121126D0 (en) * | 2001-08-31 | 2001-10-24 | Univ Nottingham | Systemic non-nodular endosymbiotic nitrogen fixation in plants |
| NZ599631A (en) * | 2006-01-30 | 2013-08-30 | Univ Georgia State Res Found | Induction and stabilization of enzymatic activity in microorganisms |
| US7943549B2 (en) * | 2007-04-02 | 2011-05-17 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Biological-based catalyst to delay plant development processes |
| US9993005B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-06-12 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Preventing or delaying chill injury response in plants |
| WO2014160354A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Inhibiting or reducing fungal growth |
| GB201413333D0 (en) | 2014-07-28 | 2014-09-10 | Azotic Technologies Ltd | Plant inoculation |
| KR101633457B1 (ko) | 2014-11-27 | 2016-07-08 | 갈민규 | 식물생장 촉진방법 |
| CN108602729B (zh) | 2015-07-13 | 2022-07-05 | 皮沃特生物公司 | 改良植物性状的方法及组合物 |
| AU2018354221B2 (en) | 2017-10-25 | 2025-04-17 | Pivot Bio, Inc. | Methods and compositions for improving engineered microbes that fix nitrogen |
| KR20210060434A (ko) | 2018-07-11 | 2021-05-26 | 피벗 바이오, 인크. | 리모델링된 미생물에 의한 시간적 및 공간적 표적화 동적 질소 전달 |
| CN112544444B (zh) * | 2020-12-03 | 2022-03-22 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种用于红花木莲的组培培养基、红花木莲胚性愈伤组织培养的方法及红花木莲快繁的方法 |
| CN114431056B (zh) * | 2021-12-14 | 2022-12-13 | 四川大学 | 一种石质坡面的修复方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3704546A (en) * | 1971-06-04 | 1972-12-05 | Du Pont | Symbiotic fixation of atmospheric nitrogen |
| FR2386504A1 (fr) * | 1977-04-05 | 1978-11-03 | Anvar | Procede microbiologique destine a maitriser la productivite des plantes cultivees |
| GB8611818D0 (en) * | 1986-05-15 | 1986-06-25 | Shell Int Research | Plant generation method |
| DD287185A5 (de) * | 1989-08-21 | 1991-02-21 | Adl Der Ddr Fz Fuer Bodenfruchtbarkeit Muencheberg,De | Verfahren zur verbesserung der pflanzenentwicklung durch kombinierte inokulation von selektierten rhizosphaeren-mikroorganismen |
-
1992
- 1992-04-10 HU HU9201218A patent/HU9201218D0/hu unknown
-
1993
- 1993-04-09 EP EP93909077A patent/EP0634893B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-09 WO PCT/HU1993/000020 patent/WO1993020685A1/en not_active Ceased
- 1993-04-09 DE DE69325449T patent/DE69325449T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-09 AU AU39618/93A patent/AU666008B2/en not_active Ceased
- 1993-04-09 US US08/313,161 patent/US5664368A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-09 CA CA002132967A patent/CA2132967A1/en not_active Abandoned
- 1993-04-09 ES ES93909077T patent/ES2135473T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-09 DK DK93909077T patent/DK0634893T3/da active
- 1993-04-09 NZ NZ251765A patent/NZ251765A/xx unknown
- 1993-04-09 HU HU9402918A patent/HU219136B/hu unknown
- 1993-04-09 RU RU94045882A patent/RU2126202C1/ru active
- 1993-04-09 AT AT93909077T patent/ATE181479T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-04-09 JP JP5518160A patent/JPH07508642A/ja active Pending
- 1993-04-09 PL PL93309470A patent/PL171864B1/pl unknown
-
1994
- 1994-10-10 KR KR1019940703589A patent/KR950700683A/ko not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE181479T1 (de) | 1999-07-15 |
| JPH07508642A (ja) | 1995-09-28 |
| US5664368A (en) | 1997-09-09 |
| DK0634893T3 (da) | 2000-01-17 |
| HU9402918D0 (en) | 1995-01-30 |
| RU94045882A (ru) | 1996-09-10 |
| NZ251765A (en) | 1995-09-26 |
| RU2126202C1 (ru) | 1999-02-20 |
| HU9201218D0 (en) | 1992-06-29 |
| HU219136B (hu) | 2001-02-28 |
| AU666008B2 (en) | 1996-01-25 |
| HUT69983A (en) | 1995-09-28 |
| EP0634893B1 (en) | 1999-06-23 |
| KR950700683A (ko) | 1995-02-20 |
| WO1993020685A1 (en) | 1993-10-28 |
| ES2135473T3 (es) | 1999-11-01 |
| AU3961893A (en) | 1993-11-18 |
| DE69325449T2 (de) | 1999-11-18 |
| DE69325449D1 (de) | 1999-07-29 |
| CA2132967A1 (en) | 1993-10-28 |
| EP0634893A1 (en) | 1995-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1248754B1 (en) | Biological addition to organic-mineral fertilizers | |
| US5697186A (en) | Flocculated microbial inoculants for delivery of agriculturally beneficial microorganisms | |
| Kobayashi et al. | Contribution to nitrogen fixation and soil fertility by photosynthetic bacteria | |
| PL171864B1 (pl) | Sposób otrzymywania nowego typu roslin,zdolnych do wiazania azotu równiez w swoich lisciach PL PL PL PL | |
| WO1995017806A1 (en) | Methods and compositions for increasing the benefits of rhizobium inoculation to legume crop productivity | |
| CN113072402B (zh) | 用于水耕栽培的微生物增强的有机液体肥料的生产方法 | |
| Ousley et al. | The effects of addition of Trichoderma inocula on flowering and shoot growth of bedding plants | |
| JPH09154401A (ja) | アガリクス・ブラゼイ茸の栽培方法 | |
| Barber et al. | Inoculation of millet with Azospirillum | |
| CA1127102A (en) | Fermentation process | |
| WO1987002659A1 (en) | Microbial plant growth promoter and yield enhancer | |
| KR101673582B1 (ko) | 인광석과 미생물을 이용한 천연비료의 제조방법 | |
| Odee et al. | Evaluation of inoculation procedures for Calliandra calothyrsus Meisn. grown in tree nurseries | |
| RU2638326C1 (ru) | Бионический способ выращивания растений | |
| Ahlawat et al. | Bacterial inoculants and their effect on the pinning, yield and false truffle disease incidence in Agaricus bitorquis | |
| CN117820040A (zh) | 一种水稻全元生物有机肥料及其制备方法和应用 | |
| JP2001040352A (ja) | 土壌改良材及び土壌改良材の製造方法 | |
| Steinberg et al. | Survival and potential denitrifying activity of Azospirillum lipoferum and Bradyrhizobium japonicum inoculated into sterilized soil | |
| US20020151037A1 (en) | Microbiological controlled mycoculture nutrient substrates | |
| Mustikawati¹ | Azospirillum Bacteria and Cultivation of Food Crops | |
| JPH05252842A (ja) | 新規キノコ | |
| JP2003250521A (ja) | 米糠を培養基材とする植物生育促進微生物資材の製造法 | |
| EP0454291A1 (en) | Process for producing enhanced rhizobium inoculants | |
| KR910006913B1 (ko) | 질석을 이용한 수도용 상자육묘 상토 | |
| KR890004023B1 (ko) | 퍼라이트(perlite)를 이용한 근류균접종제 제조방법 |