PL180162B1 - Sposób wytwarzania zawierajacych kwas mlekowy cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierscieniu PL PL PL PL - Google Patents

Sposób wytwarzania zawierajacych kwas mlekowy cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierscieniu PL PL PL PL

Info

Publication number
PL180162B1
PL180162B1 PL95307415A PL30741595A PL180162B1 PL 180162 B1 PL180162 B1 PL 180162B1 PL 95307415 A PL95307415 A PL 95307415A PL 30741595 A PL30741595 A PL 30741595A PL 180162 B1 PL180162 B1 PL 180162B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
lactic acid
optically active
fusarium
methyl
lactyl
Prior art date
Application number
PL95307415A
Other languages
English (en)
Other versions
PL307415A1 (en
Inventor
Peter Jeschke
Achim Harder
Norbert Mencke
Horst Kleinkauf
Rainer Zocher
Original Assignee
Bayer Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Ag filed Critical Bayer Ag
Publication of PL307415A1 publication Critical patent/PL307415A1/xx
Publication of PL180162B1 publication Critical patent/PL180162B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D273/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D261/00 - C07D271/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/14—Nitrogen or oxygen as hetero atom and at least one other diverse hetero ring atom in the same ring

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Sposób wytwarzania zawierajacych kwas mlekowy optycznie czynnych, cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierscieniu (enniatyn) o ogólnym wzorze 1, w którym R 1 , R2 i R4 niezaleznie od siebie oznaczaja atomy wodoru, proste lub rozgalezione grupy alkilowe zawierajace do 8 atomów wegla, z optycznie czynnych lub racemicznych aminokwasów o wzo- rach 2,3 i 4, w którym R 1 , R2 i R4 m aja znaczenie wyzej podane i optycznie czynnych lub race- micznych kwasów 2-hydroksy-karboksylowych o wzorze 5 i 6, w których R3 i R5 maja znaczenie wyzej podane i optycznie czynnego lub racemicznego kwasu mlekowego, znamienny tym, ze reak- cje prowadzi sie w obecnosci szczepów grzyba rodzaju Fusarium w odpowiednich pozywkach plyn- nych albo w obecnosci izolowanych z mikroorganizmów syntetaz w ukladzie buforowym. PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest nowy sposób wytwarzania częściowo znanych zawierających kwas mlekowy cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierścieniu.
Określone, zawierające kwas mlekowy cykliczne depsypeptydy o 18 atomach w pierścieniu (enniatyny) oraz ich zastosowanie jako środków przeciwko pasożytom wewnętrznym, są już przedmiotem wcześniejszego niemieckiego zgłoszenia patentowego (DE-OS nr 4317458).
Istnieje szereg chemicznych i mikrobowych sposobów wytwarzania cyklicznych, zawiających kwas D-2-hydroksy-izowalerianowy depsypeptydów o 18 atomach w pierścieniu, np. drogą syntezy: R Quitt i inni, Helv. Chimica Acta 46 (1963), str. 1715-1720; R Quitt i inni, Helv. Chimica Acta 47 (1964), str. 166-173 (enniatyna A); PI. A. Plattner i inni, Helv. Chimica Acta 46 (1963) str. 927-935 (enniatyna B); Yu. A. Ovchinnikov i inni, Tetrahedron Lett. 2 (1971) str. 159-162; R.W. Roeske i inni, Biochem. Biophys. Res. Commun. 57 (1974) str. 554-561 (Beauvericin); np. drogą fermentacji: R. Zocher i inni, J. Antibiotics 45 (1992) str. 1273-1277 (enniatyna A, B i C); A. Visconti i inni, J. Agric. Food Chem. 49 (1992) str. 1076-1082 (enniatyna B4); Hiroshi Tomoda i inni, J. Antibiotics 45 (1992) str. 1207-1215 (enniatyna A, A„ B, B,, D, E i F).
Fermentacja zawierającego kwas D-2-hydroksy-II-rz.kapronowy cykloheksadepsypeptydu opisana jest w japońskim opisie patentowym (np. synteza MK 1688: japoński opis patentowy 02 229 177 A2: ref, C.A. 114 (23): 227 487k).
Dotychczas jednak nic nie wiadomo o fermentacyjnym wytwarzaniu zawierających kwas mlekowy cykloheksadepsypeptydów (enniatyn).
Ogólnie mówiąc, wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania zawierających kwas mlekowy optycznie czynnych, cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierścieniu za pomocą szczepów grzyba rodzaju Fusarium albo wyodrębnionych z tego enzymatycznych preparatów·.
Sposób według wynalazku wytwarzania zawierających kwas mlekowy optycznie czynnych, cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierścieniu (enniatyn) o ogólnym wzorze 1, w którym R1, R2 i R4 niezależnie od siebie oznaczają atomy wodoru, proste lub rozgałęzione grupy alkilowe zawierające do 8 atomów węgla, polega na tym, że optycznie czynne albo racemiczne aminokwasy o wzorze 2,3 i 4, w których R1, R2 i R4 mająznaczenie wyżej podane, poddaje się reakcji z optycznie czynnymi lub racemicznymi kwasami 2-hydroksy-karboksylowymi o wzorze 5 i 6, w których R3 i R5 mająznaczenie wyżej podane, i optycznie czynnym lub racemicznym kwasem mlekowym, w obecności szczepów grzyba rodzaju Fusarium w odpowiednich pożywkach albo w obecności izolowanych z mikroorganizmów syntetaz w układzie buforowym i następnie wyodrębnia żądane, zawierające kwas mlekowy cykliczne depsypeptydy o 18 atomach w pierścieniu (enniatyny).
180 162
Zawierające kwas mlekowy cykliczne depsypeptydy o 18 atomach w pierścieniu (enniatyny) o ogólnym wzorze 1 nadają się doskonale do zwalczania pasożytów wewnętrznych, zwłaszcza w dziedzinie medycyny i weterynarii.
Zawierające kwas mlekowy cykliczne depsypeptydy o 18 atomach w pierścieniu (enniatyny) według wynalazku są ogólnie określone wzorem 1.
Korzystne są związki o ogólnym wzorze 1, w którym R1, R2 i R4 niezależnie od siebie oznaczają atomy wodoru, proste lub rozgałęzione grupy C,-C8-alkilowe, takie jak grupy metylowe, etylowe, propylowe, izopropylowe, butylowe, izobutylowe, II-rz.butylowe, III-rz. butylowe, pentylowe, II-rz.pentylowe, 1,2-dimetylopropylowe, neo-pentylowe, 1-etylo-propylowe, 1,1-dimetylo-propylowe, heksylowe, izoheksylowe, II-rz.heksylowe, heptylowe, izoheptylowe, II-rz.heptylowe, III-rz.heptylowe, oktylowe, izooktylowe, II-rz.oktylowe.
Przykładowo wymienia się następujące optycznie czynne związki o ogólnym wzorze 1: cyklo-(-N-metylo-L-alanylo-D-lakiylo-N-metylo-L-izoleucylo-D-laktylo-N-metylo-L-waliloD-laktyl-), cyklo-fN-metylo-L-alanylo-D-laktylo-N-metylo-L-izoleucylo-D-laktylo-N-metylo-L-noiwalilo-D-laktyl-), cyklo-(-N-metylo-L-alanylo-D-laktylo-N-metylo-L-izoleucylo-D-laktylo-N-metylo-L-leucyloD-laktyl-), cyklo-(-N-metylo-L-alanylo-D-laktylo-N-metylo-L-izoleucylo-D-laktylo-N-metylo-L-norleucylo-D-laktyl-), cyklo-(-N-metylo-L-walilo-D-laktylo-N-metylo-L-walilolo-D-2-hydroksy-izowalerylo-N-metylo-L-walilo-D-laktyl-), cyklo-(-N-metylo~L-walilo-D-2-hydroksy-izowalarylo-N-metylo-L-walilo-D-2-hydroksyizowalerylo-N-metylo-L-walilo-D-laktyl-), cyklo-(-N-metyło-L-alanylo-D-laktylo-N-metylo-L-alloizoleucylo-D-laktylo-N-metylo-L-allaizoleucylo-D -laktyl-), cyklo-(-N-metylo-L-alanylo-D-laktylo-N-metylo-L-alloizoleucylo-D-laktylo-N-metylo-L-alanylo-D-laktyl-), cyklo-(-N-metylo-L-alanylo-D-laktylo-N-metylo-L-izoleucylo-D-laktylo-N-metylo-L-2-amino-butyrylo-D-łaktyl-), cyklo-(-N-metylo-L-alanylo-D-laktylo-N-metylo-L-alloizoleucylo-D-laktylo-N-metylo-L-2amino-butyrylo-D-laktyl-).
Związki o ogólnym wzorze 1 sąpo części znane (np. V.Z. Pletnev i inni, Bioorg, Khim. 1 (2) (1975), str. 160-165, ref. C.A. 83 (13): 114-872e; niemiecki opis patentowy DE-OS nr 4317458 i można je też wytwarzać za pomocą tam podanych chemicznych sposobów syntezy.
W przypadku, gdy w sposobie według wynalazku wytwarzania zawierających kwas mlekowy cyklicznych depsypeptydów (enniatyn) o wzorze 1 jako związki o wzorze 2-4 stosuje się L-walinę (R1, R2 i R- oznaczają izopropyl), a jako związki o wzorze 5-6 stosuje się kwas Dmlekowy (R3 i R5 oznaczają metyl), to reakcję tę przedstawia na przykład podany na rysunku schemat, w którym SAM oznacza S-adenozylo-L-metioninę, ATP oznacza trifosforan adenozyny, a sól metalu stanowi np. sól metalu ziem alkalicznych (sól Mg+2) albo sól Mn+2.
Stosowane w sposobie według wynalazku jako substancje wyjściowe aminokwasy są ogólnie określone wzorami 2 do 4. We wzorach tych R1, R2 i R- korzystnie oznaczająreszty, które wymienione są już jako korzystne przy omawianiu substancji według wynalazku o wzorze 1.
Stosowane jako substancje wyjściowe naturalne lub syntetyczne aminokwasy mogą, jeśli są chiralne, występować w postaci D albo L. Korzystne sąjednak alfa-aminokwasy o konfiguracji L.
Jako przykłady wymienia się Aad, Abu, jAbu, ABz, 2ABz, e Aca, Ach, Acp, Adpd, Ahb, Aib, β Aib, Ala, β Ala, A Ala, Alg, All, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr, Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, Bai, Bph, Can, Cit, Cys, (Cys)2, Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, Dapm, Dasu, Djen, Dpa, Dtc, Fel, Gin, Glu, Gly, Guv, HAla, hArg, hCys, hGln, hGlu, His, hlle, hLeu, hLys, hMet, hPhe, hPro, hSer, hThr, hTrp, hTyr, Hyl, Hyp, 3Hyp, Ile, Ise, Iva, Kyn, Lant, Len, Leu, Lsg, Lys, β Lys, AŁys, Met, Mim, Min, nArg, Nle, Nva, Oly, Om, Pan, Pec, Pen, Phe, Phg, Pic, Pro, A Pro, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qin, Ros, Sar, Sec,
180 162
Sem, Ser, Thi, β Thi, Thr, Thy, Thx, Tia, Tle, Tly, Trp, Trta, Tyr, Val, Nal, Tbg, Npg, Chg, Thia (np. Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, tom XV/1 i 2, Stuttgart, 1974).
Stosowane w sposobie według wynalazku jako substancje wyjściowe kwasy 2-hydroksykarboksylowe są ogólnie określone wzorami 5-6. We wzorach tych R3 i R5 oznaczają korzystnie grupy wymienione już jako korzystne przy omawianiu związków według wynalazku o wzorze 1.
Stosowane jako substancje wyjściowe kwasy 2-hydroksy-karboksylowe mogą, jeśli są chiralne, występować w postaci D albo L. Korzystne są jednak kwasy 2-hydroksykarboksylowe o konfiguracji D. Jako przykłady wymienia się Hyac, Hyba, Hydd, Hyde, Hyic, Hyiv, Hymb, Hypp, Hypr (Lac), Hytd, Hyud, Hyva (np. Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, tom XV/1 i 2, Stuttgart, 1974).
Jako szczepy Fusarium odpowiednie do prowadzenia sposobu według wynalazku wymienia się następujące szczepy Fusarium.
Szczep Fusarium Wyodrębniony z Szczep Fusarium Wyodrębniony z
1 2 1 2
Fusarium acuminatum BBA 62 148 łubin wąskolistny BBA f. batatas patat
Fusarium arthrosporoides BBA 64 143 mietlica (nasiona) Fusarium proliferatum BBA 63 625 dracena
Fusarium avenaceum BBA 64 338 BBA 62 163 jęczmień ozimy (nasiona) kapusta warzywna Fusarium redolens BBA 62 390 goździk ogrodowy
Fusarium compactum BBA 65 671 bawełna Fusarium sambucinum BBA 63 933 BBA 62 397 NRRL-13 500 NRRL-13 503 R-583 R-5390 R-7570 R-5455 R-6380 R-7843 R-5690 R-2633 R-6354 pszenica ziemniak ziemniak ziemniak rdest ziemniak gleba zboże ziemniak goździk gleba ziemniak zboże
Fusarium crookwellense BBA 64 297 pszenica (podstawa łodygi)
Fusarium ensiforme BBA 64 683 patat
Fusarium equiseti BBA 64 814 żyto
Fusarium inflexum BBA 63 203 bób
Fusarium gibbosum
Fusarium lateritium BBA 65 090 pszenica (podstawa łodygi)
Fusarium meresmoides BBA 64 329 żyto (podstawa łodygi)
Fusarium moniliforme Fusarium scirpi ETH gleba z pastwiska
Fusarium oxysporum BBA 62 057 f. pisi 62 060 f. lycopersici BBA 62 334 f. lupini groch pomidor biały łubin Fusarium semitectum
180 162 cd tablicy
1 2 1 2
Fusarium solani BBA 64 953 BBA 62 420 f. pisi patat groch Fusarium tricinctum BBA 62 446 koniczyna łąkowa
Fusarium subglutinans Fusarium udum BBA 62 451 Cajanus inidians (nikła indyjska)
W szczególności wymienia się zdeponowane w dn. 31.01.1994 w Niemieckiej Kolekcji Mikroorganizmów (DSM) w Braunschweig zgodnie z budapeszteńskim układem Mintolyte szczepy Fusarium DSM 8938 i DSM 8939.
Proces można też prowadzić za pomocą syntetaz wyodrębnionych z mikroorganizmów. Stosowane syntetazy enniatyny można wyodrębniać z wyżej wymienionych szczepów Fusarium sposobami znanymi z literatury (np. R. Pieper, H. Kleinkauf, R. Zocher, J. Antibiot. 45 (1993) str. 1273-1277).
Fermentacja szczepów grzyba rodzaju Fusarium zachodzi według znanych metod w obecności odpowiednich pożywek. Pożywki te zawierają niezbędne dla wzrostu grzybów sole oraz źródło węgla i azotu.
Jako odpowiednie sole nieorganiczne stosowane w sposobie według wynalazku bierze się pod uwagę wszystkie sole metali alkalicznych, metali ziem alkalicznych i sole metali z pierwiastkami H-Vin podgrupy układu okresowego.
Przykładowo wymienia się octany, chlorki, bromki, jodki, fluorki, azotany, azotyny, fosforany, wodorofosforany, diwodorolosforany, fosforyny, wodorofosforyny, siarczany, wodorosiarczany, siarczyny, wodorosiarczyny, węglany, wodorowęglany litu, sodu, potasu, cezu, magnezu, wapnia, baru, cynku, kadmu, skandu, tytanu, cyrkonu, wanadu, niobu, chromu, molibdenu, manganu, żelaza, kobaltu lub niklu.
Korzystnie stosuje się octany, halogenki, fosforany, wodorofosforany, diwodorofosforany i azotany metali alkalicznych, zwłaszcza sodu i potasu, siarczany metali ziem alkalicznych, zwłaszcza magnezu, i metali II, VII i VIII podgrupy układu okresowego, na przykład cynku, manganu i żelaza.
Jako źródło węgla do prowadzenia sposobu według wynalazku bierze się pod uwagę węglowodany i produkty zawierające węglowodany.
Przykładowo wymienia się tu monosacharydy, takie jak pentozy, zwłaszcza rybozę, heksozy, zwłaszcza glukozę i fruktozę, oligosacharydy, takie jak disacharydy, zwłaszcza sacharozę, maltozę i laktozę, trisacharydy, zwłaszcza rafmozę, oraz tetra-, penta- i heksasacharydy.
Korzystnie stosuje się monosacharydy, takie jak na przykład heksozy, zwłaszcza glukozę, i oligosacharydy, jak na przykład disacharydy, zwłaszcza sacharozę.
Jako źródło azotu do prowadzenia sposobu według wynalazku bierze się pod uwagę aminokwasy i sole zawierające azot.
Przykładowo wymienia się tu podane wyżej naturalne i syntetyczne aminokwasy albo sole zawierające azot, takie jak azotan amonu, azotyn amonu albo azotany i azotyny wyżej wymienionych metali.
Korzystnie stosuje się wyżej wymienione naturalne aminokwasy oraz sole zawierające azot, takie jak azotan amonu.
Stosowane w metodzie fermentacyjnej szczepy Fusarium poddaje się najpierw wstępnej hodowli znanymi metodami w pożywce składającej się np. z wyciągu namokowego melasy/kukurydzy. Po zakończeniu hodowania powstałe zarodniki wyodrębnia się za pomocą filtru do zarodników Dla uzyskania hodowli wstępnej określoną pożywkę Fusarium (FDM) składającą się ze źródła węgla i soli nieorganicznych zaszczepia się za pomocą około 109 zarodników i ponownie
180 162 poddaje fermentacji. Po kilku dniach można otrzymywać hodowlę głównąFDM drogą przeszczepiania po 1 ml hodowli wstępnej i analogicznej fermentacji.
Zasadniczą fermentację prowadzi się wtedy w obecności związków o wzorach 2 do 4 albo 5 i 6 i w obecności optycznie czynnego albo racemicznego kwasu mlekowego.
Czas trwania fermentacji wynosi 1 do 30 dni. Fermentacja zachodzi w temperaturze od +5°C do +40°C, korzystnie od+15°C do +35°C, zwłaszcza od +25°C do +30°C. Proces prowadzi się w warunkach sterylnych i pod ciśnieniem normalnym.
Do reakcji związki o wzorach 5 i 6 wprowadza się na ogół w stężeniu od 5 mM do 50 mM, korzystnie od 5 mM do 15 mM.
Po zakończeniu fermentacji grzybnię hodowli Fusarium odsysa się, homogenizuje, kilkakrotnie ekstrahuje za pomocą rozpuszczalnika organicznego i następnie sączy. Otrzymany przesącz kultury ekstrahuje się w znany sposób, suszy i zatęża w próżni.
Otrzymane surowe enniatyny można w znany sposób oczyszczać drogą chromatografii kolumnowej albo za pomocą rozdzielania Craiga. O tym, który sposób jest najlepszy, należy rozstrzygać od przypadku do przypadku (patrz też przykłady).
Jeżeli sposób według wynalazku prowadzi się w obecności wyodrębnionych syntetaz, to proces prowadzi się w wodnym układzie buforowym w obecności soli metali, S-adenozylo-Lmetioniny (SAM) i trifosforanu adenozyny (ATP).
Jako sole metali wymienia się octany, chlorki, bromki, jodki, fluorki, azotany, fosforany, wodorofosforany, fosforyny, wodorofosforyny, siarczany, wodorosiarczany, siarczyny, wodorosiarczyny, węglany i wodorowęglany litu, sodu, potasu, cezu, magnezu, wapnia albo baru.
Korzystnie stosuje się sole metali ziem alkalicznych, takie jak na przykład chlorek, siarczan lub octan magnezu.
Sposób według wynalazku prowadzi się w wodnym roztworze buforowym.
Przykładowo stosuje się dostępne w handlu roztwory buforowe, np. dla wartości pH 1,0 zwłaszcza układ glicyna-kwas solny, dla wartości pH 2,0 do 4,0 zwłaszcza układ cytrynian-kwas solny, dla wartości pH 5,0 do 6,0 zwłaszcza układ cytrynian-ług sodowy, dla wartości pH 7,0 zwłaszcza fosforan, dla wartości pH 8,0 zwłaszcza boran-kwas solny, a dla wartości pH 9,0 -10,0 zwłaszcza układ kwas borowy/chlorek potasu-ług sodowy.
Korzystnie proces prowadzi się w „zakresie fizjologicznym”, to jest przy wartości pH 6,0 - 9,0 i stosuje się w tym celu korzystnie fosforanowy roztwór buforowy, zwłaszcza wodorofosforan potasu/wodorofosforan disodowy albo wodorofosforan potasowy/wodorofosforan dipotasowy.
Do reakcji wprowadza się na ogół 2 mM do 8 mM, korzystnie 3 mM do 5 mM związków o wzorze 2 do 6, optycznie czynnego lub racemicznego kwasu mlekowego i S-adenozylo-L-metioniny (SAM), 3 mM do 9 mM, korzystnie 4 mM do 6 mM trifosforanu adenozyny (ATP) i 2 mM do 25 mM, korzystnie 5 mM do 15 mM soli metalu ziem alkalicznych, 10 mM do 100 mM, korzystnie 40 mM do 60 imM buforu z 100 pg do 1000 pg, korzystnie 200 pg do 600 pg izolowanej syntetazy enniatyny in vitro.
Czas trwania reakcji enzymatycznej syntezy in vitro wynosi od 2 minut do 24 godzin. En zymatyczna synteza in vitro zachodzi w zakresie temperatury od 0°C do +50°C, korzystnie od +10°C do +35°C, zwłaszcza od +20°C do +30°C.
Proces prowadzi się w zakresie pH od 6,5 do 8,5, korzystnie od 7,0 do 8,0, przy czym wartość pH utrzymuje się przez dodawanie buforu w czasie całej reakcji na stałym poziomie 7,3.
Proces prowadzi się korzystnie w sterylnych warunkach reakcji i pod ciśnieniem normalnym.
Enzymatyczną syntezę in vitro można zatrzymać przez rozcieńczenie wodą.
Obróbkę prowadzi się w ten sposób, że fazę wodnąkilkakrotnie ekstrahuje się rozpuszczal nikiem organicznym, suszy i zatęża w próżni.
Otrzymane surowe enniatyny można oczyszczać w znany sposób drogą chromatografii kolumnowej albo za pomoc rozdzielania Craiga. O tym, który sposób jest najlepszy, należy rozstrzygać od przypadku do przypadku (patrz też przykłady).
180 162
Przykład I.
Wytwarzanie związku cyklo-(-N-metylo-L -walilo-D-laktylo-N-metylo- L-walilo -D-laktylo-N-metylo-L-walilo-D-Iaktylowego) o wzorze 7
Inkorporacja in vivo kwasu D-mlekowego
Do 2-dniowej hodowli głównej Fusarium scirpi dodaje się sterylnie kwas D-mlekowy w stężeniu 10 mM i prowadzi dalej fermentację jeszcze w ciągu 3 dni. Następnie grzybnię kultury Fusarium odsysa się na nuczy i przesącz trzykrotnie ekstrahuje octanem etylu. Grzybnię homogenizuje się dwukrotnie z acetonem w moździerzu i następnie odsysa. Przesącz hodowlany wytrząsa się trzykrotnie z porcjami po 100 ml octanu etylu i połączone fazy organiczne wraz z wyciągiem acetonowym odparowuje się do sucha.
Można też postępować tak, że całą hodowlę Fusarium ekstrahuje się przez noc za pomocą około 2-krotnej objętości octanu etylu.
W celu wzbogacenia enniatyny za pomocą chromatografii kolumnowej surową enniatynę rozpuszczonąw niewielkiej ilości chloroformu podaje się na kolumnę z AI2O3 (30x2 cm) i eluuje stopniowo.
Enzymatyczna synteza in vitro
300-500 gg oczyszczonej syntetazy enniatyny w 50 mM buforu fosforanowego (pH 7,3) w łącznej objętości 1,5 ml w obecności 4 mM L-waliny, 4 mM kwasu D-mlekowego, 4 mM Sadenozylo-L-metioniny (SAM), 5 mM trifosforanu adenozyny (ATP) i 10 mM MgCf poddaje się inkubacji w ciągu 10 minut w temperaturze 28°C.
Po dodaniu 2 ml wody ekstrahuje się kilkakrotnie porcjami po 2 ml octanu etylu. Fazę organiczną po wysuszeniu nad siarczanem sodu zatęża się w próżni.
Oczyszczanie produktu otrzymanego według a) lub b) prowadzi się za pomocą preparatywnej cieczowej chromatografii ciśnieniowej (HPLC) (RP 18/75-80% metanol).
’H-NMR (400 MHz, CDC13, δ): 0,83; 1,03 (d, 18H, 3 x -CH(CH3)2); 1,45 (d, 9H, 3 x O-CH-CH3); 2,27 (m, 3H, 3 x -CH(CH3)2); 3,06 (s, 9H, 3 x -N-CH3); 4,43 (d, 3H, 3 x -N-CH-CO-); 5,62 (q, 3H, 3 x -O-CH-CO-) ppm |3C-NMR(100 MHz, CDC13, δ): 16,5(3x-CH3,D-Lac); 18,5;20,1 (6x-CH3,MeVal);27,8 (3 x -CH(CH3)r, L-M eVal); 32,9 (3 x -N-CH3, L-MeVal); 63,1 (3 x -N-CH-CO-, L,-MeVal); 66,3 (3 x -O-CC-CO-, D-Lac); 162,2 (3 x N>O, ami3); 16S»,8 (3 x -C=O, ester) ppm
EI-eHS m/z (%oL: 555 (M+, 32); 482 (2>0); 3353 (1); 268 (34); 168 (100) ; 86 (53).
PreyGcła d Ii.
Wytwarzanie związku cyklo-(-N-metylo-L-iaoleucylo-Dolaktylo-Nometylo i-izole^ylo - Dolaktylo-Nometylo-L-izoleucylooD-2-hydroksyoiaowalerylowegOo) o wzorze 8
Inkorporacja kwasu D-mlekowego in vivo
Do 2-dniowej hodowli głównej Fusarium sambucinum dodaje się sterylnie kwas D mlekowy w stężeniu 10 mM i fermentację prowadzi dalej jeszcze w ciągu 3 dni. Następnie grzybnię kultury Fusarium odsysa się na nuczy, a przesącz trzykrotnie ekstrahuje octanem etylu. Grzybnię homogenizuje się dwukrotnie z acetonem w moździerzu i następnie odsysa. Preesącz hodowlany wytrząsa się trzykrotnie z porcjami po 100 ml octanu etylu i połączone fazy organiczne wraz z wyciągiem acetonowym odparowuje się do sucha.
Wzbogacanie i oczyszczanie enniatyny prowadzi się w sposób opisany w preyktedae I.
“C-NMR (10 0 eeHz, CDC13, ex): 18,4; 18,0 (2 x -CH3, D^tyk); p6,8; 15,8 (2 x -CC3, DLac); 1 e,3; Π,0 W,6; 10,3; 10,0(6X-CH3,LoMeΠ3);25a);24,9;24,4(3 x-CH2-,LCefellD);
34,7; 34,1; 32,3 (3 x -CHCCH^-, 0-MeUeC 3L,6; 31,6; 31,2 (3 x -N-(2H3, L^lle»; 29,9 (-CHCCH^, D3Hylv); 74,0; 673,5; 66,1 (3 x -O-CH1CO-, D-Hylv); 65,1; 60,5; 59,5; (3 x -N-CH-Ok, L-Melle); 169,2; 179,1; 169,0 (3 x-CO, amid); 170,6; 17 0,1; 169,8; 170,6; 170,1; 169,8 (3 x -CO, ester) ppm
E3-MS ηΌ (%e: 625 (M+, 23); 552 (14); 409 (5); 296 (20); 182 (43); 100 (100).
Analogicznie można wytwarzać zebrane w następującej tabeli związki o ogólnym 1 jako LDLDLD-stereoizomery.
180 162
Tabela
Związki o ogólnym wzorze 1
Przykład nr Reszta R1 Reszta R2 Reszta R3 Reszta r4 Reszta R5 Dane fizyczne d
III II-rz.C4H9 II-rz.C4H9 -ch 3 II-rz.C4H9 -ch 3 33,9 (-N-CH3); 61,9 (-N-CH-); 66,4 (-O-CH-); 169,3 (-CO-N-); 169,9 (-CO-O-); 598 (M+ + H, 12); 597 (37); 541 (42); 524 (14); 182(100)
IV -1-C4H9 -i-CąHg -ch 3 -i-C 4H9 -CH3 32,0 (-N-CH3); 55,8 (-N-CH-); 67,0 (-O-CH-); 169,4 (-CO-N-); 170,5 (-CO-O-); 597 (M+, 22); 524 (7); 381 (1); 296 (15); 182(100); 100 (78)
V -ch3 -II-rz.C4C9 -CH3 -II-rz.C4C9 -CH3 32,8; 33,9; 34,2 (-N-CH3); 56,2; 59,9; 60,5 (-N-CH-); 66,0; 66,3; 67,7 (-O-CH-); 168,7; 169,7; 170,1 (-CO-N); 169,0; 170,0; 170,4 (-CO-O-); 555 (M+, 64); 499 (37); 428(12); 357 (19); 182(100); 100 (52)
VI -CH 3 -II-rz.C4C9 -ch 3 -CH3 -CH3 31,8; 33,8; 34,6 (-N-CH3); 168,1; 168,7; 169,9 (-CO-N-); 170,0; 170,4; 170,5 (-CO-O-); 513 (M*, 42); 440 (22); 255 (29); 213 (60); 182 (75); 58 (100)
VII -i-C3C7 -1-C3C7 -i-C 3C7 -i-C 3C7 -i-C 3C7 611 (M+, 29); 528 (15); 196 (100)
a/ 13C-NMR (100 MHz, CDCfo δ); FAB-MS względnie EI-MS m/z (%)
Hodowanie zarodników, hodowli wstępnych i hodowli głównych
Określony szczep Fusarium hoduje się wstępnie w pożywce składającej się z wyciągu namokowego melasy/kukurydzy (30 g względnie 1 Og/litr).
Hodowanie prowadzi się w 500 ml kolbach Erlenmeyera (100 ml pożywki) przy 100 rpm (temperatura 26-28°C). Po upływie 4-5 dni powstałe zarodniki izoluje się za pomocą filtru do zarodników. Zarodniki te można tygodniami przechowywać w temperaturze 4°C.
W celu otrzymania hodowli wstępnej kolbę z 200 ml FDM (75,0 g sacharozy, 12,75 g NaNO3,15,0 g NaCl, 7,5 g MgSO4 x 7 H2O,4,0 g KH2P04 x 7 H20,10 g ZnSO4 na litr) zaszczepia się 109 zarodników i poddaje fermentacji, jak wyżej opisano.
Po upływie 2-3 dni wytwarza się hodowle główne FDM drogą przeszczepiania po 1 ml hodowli wstępnej i prowadzi fermentację w sposób wyżej opisany.
Przygotowanie założonej syntezy enniatyny in vivo
2-3-dniowe hodowle główne bada się najpierw na ich miano enniatyny, aby stwierdzić, czy komórki są aktywne dla syntezy. W tym celu pobiera się sterylnie 3-5 ml hodowli i kilkakrotnie ekstrahuje porcjami po 2 ml octanu etylu. Po odparowaniu fazy organicznej enniatynę oznacza się bezpośrednio za pomocą HPLC (RP 18,80% metanol).
Do określonej hodowli głównej dodaje się sterylnie odpowiedni prekursorowy hydroksylub aminokwas do stężenia końcowego 10 mM i prowadzi dalej fermentację, jak opisano w przykładzie I (łączny czas trwania procesu około 1 tygodnia).
180 162 n Rn
.0
0;γ0 Me Óy'R3
ΛΛ,Υο
Kg O Wzór 1
Ri
H2N^Y°H
Wzór 2
R2 η2νΆ<0Η
O
Wzór 3
O
Wzór 4 R3 ho'Stoh o
Wzór 5
Rg hox^y°h o
Wzór 6
Mg Mg
Mg Mg-/Wt°
0γ0 ŃG OV'Me
Me Mg X T^N 'N O
Mg O Mg Wzór 7
180 162
L- wolina +
Kwas D-mlekowy^
Synteza enniatyny (SAM, ATP, so'l metalu)
Mg O Mg
SCH EM AT
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz. Cena 2,00 zł.

Claims (1)

  1. Zastrzeżenie patentowe
    Sposób wytwarzania zawierających kwas mlekowy optycznie czynnych, cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierścieniu (enniatyn) o ogólnym wzorze 1, w którym R1, R2 i R4 niezależnie od siebie oznaczają atomy wodoru, proste lub rozgałęzione grupy alkilowe zawierające do 8 atomów węgla, z optycznie czynnych lub racemicznych aminokwasów o wzorach 2, 3 i 4, w którym Rl, R2 i R4 mająznaczenie wyżej podane i optycznie czynnych lub racemicznych kwasów 2-hydroksy-karboksylowych o wzorze 5 i 6, w których R3 i R5 mająznaczenie wyżej podane i optycznie czynnego lub racemicznego kwasu mlekowego, znamienny tym, że reakcję prowadzi się w obecności szczepów grzyba rodzaju Fusarium w odpowiednich pożywkach płynnych albo w obecności izolowanych z mikroorganizmów syntetaz w układzie buforowym.
PL95307415A 1994-02-24 1995-02-22 Sposób wytwarzania zawierajacych kwas mlekowy cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierscieniu PL PL PL PL PL180162B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4406025A DE4406025A1 (de) 1994-02-24 1994-02-24 Milchsäure-haltige cyclische Depsipeptide mit 18 Ringatomen als endoparasitizide Mittel und Verfahren zu ihrer Herstellung

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL307415A1 PL307415A1 (en) 1995-09-04
PL180162B1 true PL180162B1 (pl) 2000-12-29

Family

ID=6511125

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL95307415A PL180162B1 (pl) 1994-02-24 1995-02-22 Sposób wytwarzania zawierajacych kwas mlekowy cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierscieniu PL PL PL PL

Country Status (22)

Country Link
US (2) US5656464A (pl)
EP (1) EP0669343B1 (pl)
JP (1) JP3600300B2 (pl)
KR (1) KR100355029B1 (pl)
CN (1) CN1112932A (pl)
AT (1) ATE231164T1 (pl)
AU (1) AU689179B2 (pl)
BR (1) BR9500757A (pl)
CA (1) CA2143045C (pl)
CZ (1) CZ287506B6 (pl)
DE (2) DE4406025A1 (pl)
DK (1) DK0669343T3 (pl)
ES (1) ES2185671T3 (pl)
FI (1) FI109544B (pl)
HU (1) HU219830B (pl)
IL (1) IL112715A0 (pl)
NO (1) NO318174B1 (pl)
NZ (1) NZ270534A (pl)
PH (1) PH31332A (pl)
PL (1) PL180162B1 (pl)
SK (1) SK283121B6 (pl)
ZA (1) ZA951524B (pl)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19726012C1 (de) * 1997-06-19 1998-10-22 Inst Bioanalytik Umwelt Toxiko Verfahren zur Herstellung von Cyclopeptiden und Cyclodepsipeptiden durch enzymatische Synthese
DE10031044A1 (de) * 2000-06-26 2002-01-03 Bayer Ag Endoparasitizide Mittel zur freiwilligen oralen Aufnahme durch Tiere
DE10359798A1 (de) * 2003-12-19 2005-07-21 Bayer Healthcare Ag Cyclohexadepsipeptide zur Bekämpfung von Endoparasiten und ein Verfahren zu ihrer Herstellung
DE102004055316A1 (de) * 2004-11-16 2006-05-18 Bayer Healthcare Ag Verhinderung vertikaler Endoparasiten-Infektionen
KR100767269B1 (ko) * 2006-05-04 2007-10-17 충남대학교산학협력단 울로크라디움 아트룸 균주로부터 유래되는 항진균뎁시펩티드 및 그를 이용한 식물진균병 방제방법
KR100786885B1 (ko) * 2006-05-30 2007-12-20 중앙대학교 산학협력단 엔니아틴 ｈ,ｉ, 및 ｍｋ１６８８을 생산하는 푸사리움 옥시스포럼 ｆｂ１５０１
DE102008022520A1 (de) * 2008-05-07 2009-11-12 Bayer Animal Health Gmbh Feste Arzneimittelformulierung mit verzögerter Freisetzung
DE102008030764A1 (de) 2008-06-28 2009-12-31 Bayer Animal Health Gmbh Kombination von Amidin-Derivaten mit cyclischen Depsipeptiden
DE102008031283A1 (de) * 2008-07-02 2010-01-07 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Neue Bekämpfungsmöglichkeit von durch Trichomonadida hervorgerufenen Krankheiten
DE102008031284A1 (de) 2008-07-02 2010-01-07 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Neue Bekämpfungsmöglichkeit der Giardiose
DE102009012423A1 (de) 2009-03-10 2010-09-16 Bayer Animal Health Gmbh Zubereitung auf Ölbasis
DE102010064245A1 (de) 2010-12-28 2012-06-28 Bayer Animal Health Gmbh Makrocylischen Lactone und deren Verwendung und deren Kombinationen mit anderen Wirkstoffen
WO2012028556A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Bayer Animal Health Gmbh Macrocyclic lactones and their use and their combinations with other active substances
CN119776466B (zh) * 2024-07-07 2025-12-19 蘑米(广州)生物科技有限公司 紧密镰孢菌及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4830601B1 (pl) * 1969-11-19 1973-09-21
FR2410658A1 (fr) * 1977-11-30 1979-06-29 Science Union & Cie Nouveau produit biologique d'origine fongique, son obtention et son application a la therapeutique
DE4317458A1 (de) * 1992-06-11 1993-12-16 Bayer Ag Verwendung von cyclischen Depsipeptiden mit 18 Ringatomen zur Bekämpfung von Endoparasiten, neue cyclische Depsipeptide mit 18 Ringatomen und Verfahren zu ihrer Herstellung

Also Published As

Publication number Publication date
SK23895A3 (en) 2002-10-08
FI950823A0 (fi) 1995-02-22
FI950823A7 (fi) 1995-08-25
HUT72399A (en) 1996-04-29
NO950669D0 (no) 1995-02-22
PL307415A1 (en) 1995-09-04
US5945316A (en) 1999-08-31
US5656464A (en) 1997-08-12
DK0669343T3 (da) 2003-05-12
AU689179B2 (en) 1998-03-26
KR950032276A (ko) 1995-12-20
BR9500757A (pt) 1995-10-24
IL112715A0 (en) 1995-05-26
CA2143045C (en) 2008-12-30
DE4406025A1 (de) 1995-08-31
AU1238795A (en) 1995-08-31
HU219830B (hu) 2001-08-28
EP0669343A1 (de) 1995-08-30
NO318174B1 (no) 2005-02-14
CA2143045A1 (en) 1995-08-25
HU9500555D0 (en) 1995-04-28
DE59510529D1 (de) 2003-02-20
CZ48295A3 (en) 1995-10-18
KR100355029B1 (ko) 2002-12-16
JP3600300B2 (ja) 2004-12-15
ES2185671T3 (es) 2003-05-01
CZ287506B6 (en) 2000-12-13
ATE231164T1 (de) 2003-02-15
ZA951524B (en) 1995-12-08
NO950669L (no) 1995-08-25
NZ270534A (en) 1995-09-26
FI109544B (fi) 2002-08-30
CN1112932A (zh) 1995-12-06
SK283121B6 (sk) 2003-02-04
EP0669343B1 (de) 2003-01-15
JPH07252297A (ja) 1995-10-03
PH31332A (en) 1998-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL180162B1 (pl) Sposób wytwarzania zawierajacych kwas mlekowy cyklicznych depsypeptydów o 18 atomach w pierscieniu PL PL PL PL
US6596518B2 (en) Percyquinnin, a process for its production and its use as a pharmaceutical
US5200505A (en) R106 compounds
JP2008092952A (ja) ２４個の環原子を有する置換アリール乳酸含有シクロデプシぺプチドの製造方法
PL177023B1 (pl) Sposób wytwarzania cyklosporyny A
IE870626L (en) Macrolide compounds
US5561060A (en) Penicillium cultures capable of producing 10-membered ring lactones
JPS62181281A (ja) 大環式抗生物質及びその製造方法
EP0162715B1 (en) Enzyme-inhibitory griseolic acid derivatives, and their use
NO853396L (no) Nye saframycin a derivater og fremgangsmaate til fremstilling derav.
EP1248763B1 (en) Aromatic di-keto derivatives as glucose-6-phosphate translocase inhibitors
US4202819A (en) 2-(3-Alanyl)clavam antibiotic
EP0466365A2 (en) Novel immunosuppressant fermentation products of a microorganism
US5100921A (en) Angucyclinones from streptomycetes, a process for the preparation thereof, and the use thereof
US5436231A (en) Adenophostins
JPS60142993A (ja) ペニシリンおよびセフオロスポリン類の製造方法
EP0487756A1 (en) Antibiotics napsamycins A-D, process for their production and their use as pharmaceuticals
JP2003503416A (ja) 新規化合物