PL187451B1 - Białka, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie białek i izolowany DNA - Google Patents
Białka, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie białek i izolowany DNAInfo
- Publication number
- PL187451B1 PL187451B1 PL97329350A PL32935097A PL187451B1 PL 187451 B1 PL187451 B1 PL 187451B1 PL 97329350 A PL97329350 A PL 97329350A PL 32935097 A PL32935097 A PL 32935097A PL 187451 B1 PL187451 B1 PL 187451B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- protein
- arthritis
- proteins
- Prior art date
Links
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 18
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 title 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 114
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 83
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 82
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 46
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 13
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 80
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 29
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 23
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 23
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 19
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 claims description 18
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 7
- 101000883325 Homo sapiens Chitinase-3-like protein 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 102000045771 human CHI3L2 Human genes 0.000 claims description 7
- 101000883510 Bos taurus Chitinase-3-like protein 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 47
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 37
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 36
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 36
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 16
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 8
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 5
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 abstract description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003286 arthritogenic effect Effects 0.000 abstract 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 83
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 24
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 21
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 19
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 18
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 17
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 17
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 16
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 16
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 16
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 16
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 14
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 12
- 238000011161 development Methods 0.000 description 11
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 11
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 7
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 210000004744 fore-foot Anatomy 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 108010066813 Chitinase-3-Like Protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 4
- 101710172804 K protein Proteins 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000544 articulatio talocruralis Anatomy 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 4
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 102000018704 Chitinase-3-Like Protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 102100037328 Chitotriosidase-1 Human genes 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 3
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 108010057052 chitotriosidase Proteins 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NVCIXQYNWYTLDO-IHRRRGAJSA-N Arg-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NVCIXQYNWYTLDO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- MRQQMVZUHXUPEV-IHRRRGAJSA-N Asp-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MRQQMVZUHXUPEV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- GFMJUESGWILPEN-MELADBBJSA-N Cys-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O GFMJUESGWILPEN-MELADBBJSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 108010003718 LDL-Receptor Related Protein-Associated Protein Proteins 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 230000024121 nodulation Effects 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 230000000803 paradoxical effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229940045627 porcine heparin Drugs 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- BUANFPRKJKJSRR-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Gln Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC(N)=O BUANFPRKJKJSRR-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- WYPUMLRSQMKIJU-BPNCWPANSA-N Ala-Arg-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O WYPUMLRSQMKIJU-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- LGFCAXJBAZESCF-ACZMJKKPSA-N Ala-Gln-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LGFCAXJBAZESCF-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- BLIMFWGRQKRCGT-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN BLIMFWGRQKRCGT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WQLDNOCHHRISMS-NAKRPEOUSA-N Ala-Pro-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WQLDNOCHHRISMS-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- YCTIYBUTCKNOTI-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Asp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N YCTIYBUTCKNOTI-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- XAXMJQUMRJAFCH-CQDKDKBSSA-N Ala-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 XAXMJQUMRJAFCH-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- MUGAESARFRGOTQ-IGNZVWTISA-N Ala-Tyr-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N MUGAESARFRGOTQ-IGNZVWTISA-N 0.000 description 1
- NLYYHIKRBRMAJV-AEJSXWLSSA-N Ala-Val-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N NLYYHIKRBRMAJV-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N Arg-Arg-Thr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- SQKPKIJVWHAWNF-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SQKPKIJVWHAWNF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N Arg-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- RZVVKNIACROXRM-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Asp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N RZVVKNIACROXRM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N Asn-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 1
- PNHQRQTVBRDIEF-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N PNHQRQTVBRDIEF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ORJQQZIXTOYGGH-SRVKXCTJSA-N Asn-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ORJQQZIXTOYGGH-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JBDLMLZNDRLDIX-HJGDQZAQSA-N Asn-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JBDLMLZNDRLDIX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N Asp-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RYKWOUUZJFSJOH-FXQIFTODSA-N Asp-Gln-Glu Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RYKWOUUZJFSJOH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QCVXMEHGFUMKCO-YUMQZZPRSA-N Asp-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O QCVXMEHGFUMKCO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N Asp-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 102100030009 Azurocidin Human genes 0.000 description 1
- 101710154607 Azurocidin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 101100028791 Caenorhabditis elegans pbs-5 gene Proteins 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HAYVTMHUNMMXCV-IMJSIDKUSA-N Cys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CS HAYVTMHUNMMXCV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- IIGHQOPGMGKDMT-SRVKXCTJSA-N Cys-Asp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N IIGHQOPGMGKDMT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UKHNKRGNFKSHCG-CUJWVEQBSA-N Cys-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O UKHNKRGNFKSHCG-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N Cys-Tyr Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000759376 Escherichia phage Mu Tail sheath protein Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- UKKNTTCNGZLJEX-WHFBIAKZSA-N Gln-Ser Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NVHJGTGTUGEWCG-ZVZYQTTQSA-N Gln-Trp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NVHJGTGTUGEWCG-ZVZYQTTQSA-N 0.000 description 1
- GTBXHETZPUURJE-KKUMJFAQSA-N Gln-Tyr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GTBXHETZPUURJE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- RDPOETHPAQEGDP-ACZMJKKPSA-N Glu-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RDPOETHPAQEGDP-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- QSDKBRMVXSWAQE-BFHQHQDPSA-N Gly-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN QSDKBRMVXSWAQE-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- UPADCCSMVOQAGF-LBPRGKRZSA-N Gly-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CNC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 UPADCCSMVOQAGF-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Leu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- VDCRBJACQKOSMS-JSGCOSHPSA-N Gly-Phe-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VDCRBJACQKOSMS-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- DBUNZBWUWCIELX-JHEQGTHGSA-N Gly-Thr-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DBUNZBWUWCIELX-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N Gly-Thr-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LLWQVJNHMYBLLK-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- 102100029966 HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YADRBUZBKHHDAO-XPUUQOCRSA-N His-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YADRBUZBKHHDAO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- RAVLQPXCMRCLKT-KBPBESRZSA-N His-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O RAVLQPXCMRCLKT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 101000868215 Homo sapiens CD40 ligand Proteins 0.000 description 1
- 101000883515 Homo sapiens Chitinase-3-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000864089 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000930802 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000968032 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 3 chain Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SUPVSFFZWVOEOI-UHFFFAOYSA-N Leu-Ala-Tyr Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SUPVSFFZWVOEOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STAVRDQLZOTNKJ-RHYQMDGZSA-N Leu-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O STAVRDQLZOTNKJ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- WXUOJXIGOPMDJM-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WXUOJXIGOPMDJM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- GCXGCIYIHXSKAY-ULQDDVLXSA-N Leu-Phe-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GCXGCIYIHXSKAY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N Lys-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- QZONCCHVHCOBSK-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QZONCCHVHCOBSK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- QXOHLNCNYLGICT-YFKPBYRVSA-N Met-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O QXOHLNCNYLGICT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- WSXKXSBOJXEZDV-DLOVCJGASA-N Phe-Ala-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=CC=C1 WSXKXSBOJXEZDV-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- VHWOBXIWBDWZHK-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 VHWOBXIWBDWZHK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- FFSLAIOXRMOFIZ-GJZGRUSLSA-N Pro-Gly-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 FFSLAIOXRMOFIZ-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 1
- VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N Pro-Leu-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- JDJMFMVVJHLWDP-UNQGMJICSA-N Pro-Thr-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JDJMFMVVJHLWDP-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- LGIMRDKGABDMBN-DCAQKATOSA-N Ser-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N LGIMRDKGABDMBN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N Thr-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N 0.000 description 1
- NQVDGKYAUHTCME-QTKMDUPCSA-N Thr-His-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N)O NQVDGKYAUHTCME-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- BBPCSGKKPJUYRB-UVOCVTCTSA-N Thr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BBPCSGKKPJUYRB-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- AKHDFZHUPGVFEJ-YEPSODPASA-N Thr-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O AKHDFZHUPGVFEJ-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- RSUXQZNWAOTBQF-XIRDDKMYSA-N Trp-Arg-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N RSUXQZNWAOTBQF-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- MEZCXKYMMQJRDE-PMVMPFDFSA-N Trp-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 MEZCXKYMMQJRDE-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N Tyr-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- WPVGRKLNHJJCEN-BZSNNMDCSA-N Tyr-Asp-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WPVGRKLNHJJCEN-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- OFHKXNKJXURPSY-ULQDDVLXSA-N Tyr-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OFHKXNKJXURPSY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- 108010064997 VPY tripeptide Proteins 0.000 description 1
- LABUITCFCAABSV-UHFFFAOYSA-N Val-Ala-Tyr Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LABUITCFCAABSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N Val-Arg-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- CJDZKZFMAXGUOJ-IHRRRGAJSA-N Val-Cys-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N CJDZKZFMAXGUOJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- IJGPOONOTBNTFS-GVXVVHGQSA-N Val-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IJGPOONOTBNTFS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QWCZXKIFPWPQHR-JYJNAYRXSA-N Val-Pro-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QWCZXKIFPWPQHR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- -1 albumin or casein Chemical compound 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000000599 auto-anti-genic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008355 cartilage degradation Effects 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 229920006026 co-polymeric resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108010080575 glutamyl-aspartyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000004124 hock Anatomy 0.000 description 1
- 102000054350 human CHI3L1 Human genes 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 108040006849 interleukin-2 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
1. Bialko, zawierajace sekwencje aminokwasów, która wykazuje homologie przynajmniej 50% z se- kwencja aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR: 1) do zastosowania jako substancja terapeutyczna. 2. Bialko wedlug zastrz. 1, znam ienne tym , ze jest krowim bialkiem serwatkowym 39 kDa albo ludzkim bialkiem YKL-39. 3. Kompozycja farmaceutyczna, znam ienna tym, ze zawiera jedno lub wiecej bialek, zawierajacych sekwencje aminokwasów, która wykazuje homologie przynajmniej 50% z sekwencja aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFAN1SND (SEKW. ID NR:1) oraz farmaceutycz- nie dopuszczalny nosnik. 4. Kompozycja farmaceutyczna wedlug zastrz. 3, znam ienna tym, ze wspomniane bialko jest kro- wim bialkiem serwatkowym 39 kDa albo ludzkim bialkiem YKL-39. 5. Zastosowanie bialka, zawierajacego sekwencje aminokwasów, która wykazuje homologie przynajmniej 50% z sekwencja aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej, sluzacej do wywolywania swoistej tolerancji limfocytów T na homologiczny autoantygen u ssaków cierpiacych na niszczenie chrzastki stawowej za posrednictwem limfocyt- tów T. PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są białka, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie białek i izolowany DNA.
Układ odpornościowy opiera się zasadniczo na rozróżnieniu pomiędzy obcymi antygenami (nie-własnymi antygenami) a autoantygenami (antygenami własnymi, pochodzącymi z własnego organizmu jednostki), uzyskiwanemu poprzez zbudowanie tolerancji wobec autoantygenów.
Układ odpornościowy chroni jednostki przed antygenami obcymi i odpowiada na pojawienie się obcego antygenu przez aktywację swoistych komórek, takich jak limfocyty T i B oraz wytwarzanie rozpuszczalnych czynników, jak interleukiny, przeciwciała i czynniki dopełniacza. Antygen, na który odpowiada układ odpornościowy rozkładany jest przez komórki prezentujące antygen (ang., antigen presenting cells, APC), a fragment antygenu odsłaniany jest na powierzchni komórki w skojarzeniu z glikoproteiną głównego kompleksu zgodności tkankowej (MHC) klasy II. Kompleks MHC-glikoproteina-fragment antygenu prezentowany jest limfocytowi T, który dzięki swemu receptorowi limfocytu T rozpoznaje fragment antyge187 451 nu w połączeniu z białkiem MHC klasy II, z którym jest on związany. Limfocyt T ulega aktywacji, tj. proliferuje i/lub wytwarza interleukiny, co powoduje ekspansję aktywowanych limfocytów skierowanych na antygen będący przedmiotem ataku (Grey i wsp., Sei. Am., 261:38-46,1989).
Antygeny własne są również ciągle poddawane obróbce i prezentowane jako fragmenty antygenowe przez glikoproteiny MHC limfocytom T (Jardetsky i wsp., Nature 353:326-329, 1991). Samorozpoznawanie jest zatem nieodłączną cechą układu odpornościowego. W normalnych warunkach układ odpornościowy toleruje własne antygeny i unika się aktywacji odpowiedzi odpornościowej przeciwko tym własnym antygenom.
Gdy utraci się tolerancję na własne antygeny, układ odpornościowy ulega aktywacji przeciwko jednemu bądź więcej własnym antygenom, co powoduje aktywację autoreaktywnych limfocytów T i wytwarzanie przeciwciał. Zjawisko to określa się jako autoimmunizację. Jako iż odpowiedź odpornościowa jest ogólnie rzecz biorąc niszczycielka, tj. ma na celu zniszczę nie inwazyjnego obcego antygenu, odpowiedzi autoimmunologiczne mogą spowodować zniszczenie własnej tkanki organizmu. Udział limfocytów T w chorobach autoimmunologicznych ustalono w kilku badaniach. U myszy, doświadczalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia kręgowego (ang. experimantal autoimmune encephalomyelitis, EAE) wywoływane jest przez wysoce ograniczoną grupę limfocytów T, charakteryzujących się ich swoistością wobec pojedynczego epitopu zasadowego białka mieliny (MBP) skompleksowanego z cząsteczką MHC klasy II. U szczurów Lewisa, gatunku o wysokiej podatności na różne choroby autoimmunologiczne, wykazano, iż w chorobie uczestniczą limfocyty T. U ludzi, uważa się, iż choroby autoimmunizacyjne są również związane z rozwojem autoagresywnych limfocytów T. Postulowano niszczycielską odpowiedź immunologiczną w różnych chorobach, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów (ang. rheumatoid arthritis, RA), w których integralność chrząstki stawowej ulega zniszczeniu przez przewlekły proces zapalny wynikający z obecności dużych ilości aktywowanych limfocytów i komórek posiadających MHC klasy II. Sama obecność chrząstki wydaje się konieczna dla podtrzymania miejscowej odpowiedzi zapalnej: wykazano, iż degradacja chrząstki w RA związana jest z aktywnością odpowiadających na chrząstkę autoreaktywnych limfocytów T (Sigall i wsp., Glin. Exp. Rheumat. 6:59, 1988; Glant i wsp., Biochem. Soc. Trans. 18:796, 1990; Burmester i wsp., Rheumatoid arthritis Smolen, Kalden, Maini (Eds) Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 1992). Ponadto, wykazano, iż chirurgiczne usunięcie chrząstki u chorych z RA zmniejszało proces zapalny (G.S. Panayi i wsp., Glin. Exp. Rheumatol. 11 (suppl. 8 ): S1-S8, 1993). Białka chrząstki uważa się zatem za docelowe autoantygeny, które są zdolne do stymulacji limfocytów T. Aktywacja tych autoreaktywnych limfocytów T prowadzi do rozwoju choroby autoimmunologicznej. Jednakże, identyfikacja składników autoantygenowych, które odgrywają rolę w wywołaniu reumatoidalnego zapalenia stawów pozostawała do tej pory niemożliwa.
Odpowiedź zapalną, powodującą zniszczenie tkanki można leczyć kilkoma lekami, takimi jak na przykład leki steroidowe. Jednakże, leki te są często lekami immunosupresyjnymi, które są nieswoiste i mają toksyczne efekty uboczne. Wady nieswoistej immunosupresji czynią ją wysoce niekorzystną terapią.
Swoista antygenowo, nietoksyczna terapia immunosupresyjna stanowi bardzo atrakcyjną alternatywę dla nieswoistej immunosupresji. Ta swoista antygenowe terapia polega na leczeniu chorych docelowym autoantygenem albo antygenami, mającymi sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię z sekwencją aminokwasów docelowego autoantygenu, albo syntetycznymi peptydami reagującymi z limfocytami T, pochodzącymi ze wspomnianego autoantygenu albo wspomnianego antygenu. Te syntetyczne peptydy odpowiadają epitopom autoantygenu na limfocytach T i mogą być stosowane do wywoływania specyficznej tolerancji limfocytów T zarówno na nie same jak i na autoantygen. Choć wydaje się paradoksalne odczulanie układu odpornościowego tym samym antygenem, który jest odpowiedzialny za aktywowanie układu odpornościowego, kontrolowane podawanie docelowego (auto)antygenu może być bardzo skuteczne w odczulaniu układu odpornościowego. Odczulanie albo tolerancja immunologiczna układu odpornościowego oparta jest na od dawna obserwowanym zjawisku, iż zwierzęta, które karmiono albo które wdychały antygen albo epitop są mniej zdolne do
187 451 rozwinięcia układowej odpowiedzi odpornościowej przeciwko wspomnianemu antygenowi albo epitopowi, gdy wspomniany antygen albo epitop zostanie wprowadzony drogą układową.
W celu skutecznego zastosowania terapii tolerancyjnej w celu leczenia zniszczenia chrząstki, w którym pośredniczą limfocyty T, istnieje wielka potrzeba zidentyfikowania odpowiedzialnego autoantygenu albo antygenów mających sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię sekwencji z sekwencją aminokwasów docelowego autoantygenu, w celu odczulenia pacjentów przeciwko autoantygenowi, który aktywuje limfocyty T odpowiedzialne za proces zapalny.
Celem wynalazku jest dostarczenie autoantygenu oraz białek mających sekwencję aminokwasów, która wykazuje wystarczającą homologię z sekwencją aminokwasów autoantygenu, przy czym wspomniany autoantygen i/łub białko nadaje się do wywołania swoistej tolerancji limfocytów T na odpowiedzialny antygen chrząstki u chorych cierpiących na niszczenie chrząstki za pośrednictwem limfocytów T. Dalszym celem wynalazku jest opracowanie zwierzęcych modeli zapalenia stawów, które nadają się do zastosowania w przesiewowych badaniach nowych leków służących do zniesienia objawów zapalenia stawów. Innym celem wynalazku jest sposób wykrywania autoreaktywnych limfocytów T, zaangażowanych w niszczenie chrząstki stawowej oraz zestawy testowe do zastosowania we wspomnianym sposobie.
Nieoczekiwanie odkryto, iż ludzka glikoproteina chrząstkowa 39 (określana tu dalej jako HC gp-39) jest docelowym autoantygenem u chorych z RA, który aktywuje swoiste limfocyty T, tym samym powodując albo pośrednicząc w procesie zapalnym. Zdolność HC gp-39 do wywoływania zapalenia stawów została oceniona u myszy Balb/c. Pojedyncze, podskórne wstrzyknięcie wspomnianego białka myszom Balb/c było zdolne do wywołania oznak zapalenia stawów u tych zwierząt. Przebieg choroby wywołanej HC gp-39 charakteryzował się nawrotami, następującymi okresowo w przednich łapkach i/lub tylnych łapkach i stopniowo postępował od łagodnego zapalenia stawów do postaci cięższej. Ponadto obserwowano symetryczny rozkład zajętych stawów, co wraz z obserwacją nawracających nawrotów i tworzenia się guzków, przypomina przebieg choroby w zapaleniu stawów, zwłaszcza w RA.
Jeszcze bardziej nieoczekiwanie stwierdzono, iż podanie HC gp-39 powodowało tolerancję immunologiczną i, co ważniejsze, opóźniony i/lub zniesiony rozwój zapalenia stawów. Ponadto nieoczekiwanie stwierdzono, iż białka zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39 zdolne są do wywołania zapalenia stawów po wstrzyknięciu zwierzętom. W szczególności, białka zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50 % z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCIHHYSFANISND (SEK W. ID NR:1) były zdolne do wzbudzenia zapalenia stawów u zwierząt, w ten sam sposób jak opisano dla HC gp-39.
Korzystnie, te białka wywołujące zapalenie stawów zawierają sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 70%, korzystniej 80%, najkorzystniej 90% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYY-TSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1).
Procent homologii sekwencji białek wywołujących zapalenie stawów według wynalazku z sekwencją aminokwasów SEKW. ID NR:1 rozumie się jako mierzony przy użyciu ogólnie używanych programów porównywania sekwencji, takich jak FASTA (W.R. Pearson i D.J. Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 2444-2448, 1988).
Odpowiednie białka wywołujące zapalenie stawów według wynalazku to na przykład świńskie białko wiążące heparynę 38 kDa, krowie białko serwatkowe 39 kDa, ludzkie białko YKL-39, mysie białko zanikającego gruczołu piersiowego 39 kDa (brp39), ludzka glikoproteina swoista dla jajowodu, mysia glikoproteina swoista dla jajowodu, chomicza glikoproteina swoista dla jajowodu, krowia glikoproteina swoista dla jajowodu, ludzkie białko prekursorowe chitotriozydazy oraz prekursor mysiego białka wydzielniczego YM-1. Białka wywołujące zapalenie stawów według wynalazku są bardzo dogodne do wywoływania układowej tolerancji układu odpornościowego na homologiczne autoantygeny i mogą być stosowane do opóźnienia i/lub zniesienia rozwoju zapalenia stawów u ssaków.
187 451
HC gp-39 jest obecne w surowicy zarówno chorych jak i zdrowych dorosłych, choć stężenie białka wynosi dwukrotnie więcej u chorych w porównaniu ze zdrowymi dorosłymi. Ponadto, mRNA kodujący HC gp-39 można znaleźć w próbkach maziówki albo chrząstki uzyskanych od chorych z RA, natomiast chrząstka u zdrowych dorosłych, uzyskana w czasie zabiegów chirurgicznych, nie zawiera znaczącej ilości wspomnianego mRNA. Gdy hoduje się chondrocyty stawowe i komórki maziówki, ich głównym produktem wydzielniczym staje się HC gp-39 (Hakala i wsp., J. Biol. Chem., Vol. 168, 34:25803, 1993). Właściwość wywoływania zapalenia stawów HC gp-39 nie była opisana ani sugerowana w publikacji Hakala i wsp., ani w żadnej innej publikacji.
Białka, których sekwencja aminokwasów wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, bardziej szczegółowo z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) zostały opisane. Identyfikacja świńskiego białka wiążącego heparynę 38 kDa opisana została w Shackelton i wsp., (1995), J. Biol. Chem. Vol. 270, Nr 22, 13076-13083, jednakże nie zidentyfikowano żadnej funkcji tego białka. Izolacja i charakteryzacja krowiego białka serwatkowego 39 kDa opisana jest w J.J. Rejman i wsp. (1988), Biochem. Biophys. Res. Comm. Vo. 150, Nr 1, 329-334. Mysie białko zanikającego gruczołu sutkowego 39 kDa (brp39) opisane jest w Morrison i Leder, 1994, Oncogene 9, 3417. Sklonowanie cDNA kodującego ludzką glikoproteinę swoistą dla jajowodu i odpowiednia sekwencja aminokwasów opisana jest w Arias i wsp. (1994), Biology of Reproduction 51, 685-694. Inne ssacze glikoproteiny swoiste dla jajowodu, takie jak mysia i chomicza glikoproteina swoista dla jajowodu opisane są w japońskim opisie patentowym JP-A-07107979, Kinosei Peptide Kenkyusho Kk. Oczyszczenie i sklonowanie molekularne krowiej glikoproteiny swoistej dla jajowodu opisano w Y. Sendai i wsp., 1994, Biol. Of Reprod. 50, 927-934. Ludzkie białko prekursorowe chitotriozydazy wydzielane jest przez aktywowane ludzkie makrofagi a sklonowanie odpowiedniego cDNA i sekwencja aminokwasów opisana jest w Boot i wsp., (1995), J. Biol. Chem. Vol. 270, nr 44, 26252-26256. Sekwencja aminokwasów prekursora mysiego białka wydzielniczego YM-1 podana została do Biblioteki Danych EMBL, Czerwiec 1992, nr dostępowy M94584 przez Chang i wsp., dane nieopublikowane. Sekwencja aminokwasów ludzkiego białka chondrocytów YKL-39 opisana jest w Hu i wsp., (1996), J. Biol. Chem. Vol. 271, nr 32, 19415-19420. Żadna z wspomnianych wyżej publikacji nie wspomina jednak ani nie sugeruje zdolności wywoływania zapalenia stawów białek według wynalazku ani też faktu, iż białka te można zastosować jako substancję medyczną w leczeniu w celu wywołania swoistej tolerancji na HC gp-39 u ssaków, bardziej szczegółowo u człowieka, cierpiącego na zniszczenie chrząstki za pośrednictwem limfocytów T, takie jak na przykład zapalenie stawów, w szczególności reumatoidalne zapalenie stawów.
A zatem, według wynalazku HC gp-39 i białka zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHII-YSFANISND (SEKW. ID NR:1) bardzo nadają się do zastosowania w leczeniu w celu wzbudzenia swoistej tolerancji limfocytów T na HC gp-39 u chorych cierpiących na zniszczenie chrząstki za pośrednictwem limfocytów T, takie jak na przykład zapalenie stawów, w szczególności reumatoidalne zapalenie stawów. Również w zakresie wynalazku są fragmenty HC gp-39 i białek wywołujących zapalenie stawów według wynalazku, które zdolne są do wzbudzenia swoistej tolerancji limfocytów T na autoantygen HC gp-39 w chrząstce podlegającej atakowi.
Opisy patentowe WO 95/01995 i WO 95/02188 przedstawiają zastosowanie diagnostyczne HC gp-39 jako markera RA, jednak zdolność do wywoływania zapalenia stawów HC gp-39 nie jest opisana ani zasugerowana. Autorzy nigdzie nie wzmiankują ani nie sugerują zastosowania HC gp-39, albo jego fragmentów albo peptydów reagujących z limfocytami T według niniejszego wynalazku w swoistej antygenowe terapii w celu wywołania swoistej względem antygenu tolerancji na HC gp-39 w chrząstce ulegającej atakowi.
HC gp-39, białka wywołujące zapalenie stawów zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39,
187 451 w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRF-LCTHIIYSFANISND (SEkW. ID NR:1) oraz fragmenty pochodzące ze wspomnianych białek wywołujących zapalenie stawów według wynalazku można przygotować z pomocą technik rekombinacji DNA. Dla tego celu, sekwencję kwasu nukleinowego, która koduje HC gp-39 albo białko, zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHHYSFANISND (SEKW. ID NR-1) albo fragment pochodzący z białek według wynalazku albo multimer wspomnianego fragmentu umieszcza się w wektorze ekspresyjnym. Nadającymi się wektorami ekspresyjnymi są, między innymi, plazmidy, kosmidy, wirusy i YAC (ang. Yeast Artificial Chromosome, Sztuczny chromosom drożdżowy), które zawierają konieczne regiony kontrolne dla replikacji i ekspresji. Wektor ekspresyjny może być wprowadzony dla ekspresji do komórki gospodarza. Odpowiednimi komórkami gospodarza są, na przykład bakterie, komórki drożdży i komórki ssaków. Techniki takie są dobrze znane w stanie techniki (Sambrook i wsp., Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1989).
Przy zastosowaniu tych technik rekombinacji DNA w komórce gospodarza można wytworzyć krowie białko serwatkowe, którego sekwencję przedstawiono tutaj.
A zatem, niniejszy wynalazek dostarcza również izolowanego cDNA, kodującego krowie białko serwatkowe, jak wskazano w SEKW. ID NR:3 jak również krowie białko serwatkowe według SEKW. ID NR:2. Będzie jasne, iż można również wytworzyć fragmenty na podstawie opisu niniejszego wynalazku. Termin „fragment” odnosi się do dowolnej sekwencji aminokwasów, która jest częścią białka, mającą, wspólne elementy pochodzenia, struktury i mechanizmu działania, które są w zakresie niniejszego wynalazku.
Odpowiednie fragmenty, pochodzące z białek wywołujących zapalenie stawów według wynalazku można również wytworzyć jednym ze znanych sposobów chemii organicznej dla syntezy peptydów. Uważa się, iż metody chemii organicznej dla syntezy peptydów obejmują sprzęganie wymaganych aminokwasów przy pomocy reakcji kondensacji, czy to w fazie homogennej czy też z pomocą tak zwanej fazy stałej. Najpopularniejsze metody dla powyższych reakcji kondensacji to: metoda karbodiimidowa, metoda azydkowa, metoda mieszanych bezwodników oraz metoda wykorzystująca aktywowane estry, jak opisano w The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology Vol. 1-3 (pod red. Gross, E. i Meienhofer, J.) 1979, 1980, 1981 (Academic Press, Inc.).
Wytworzenie odpowiednich fragmentów wyżej wspomnianych HC gp-39 i białek wywołujących zapalenia stawów według wynalazku przy zastosowaniu „fazy stałej” opisano na przykład w J. Amer. Chem. Soc. 85:2149 (1963) i Int. J. Peptide Res. 35:161-214 (1990).
Szczególnie dogodną fazą stałą jest na przykład żywica z alkoholem p-alkoksybenzylowym (żywica 4-hydroksy-metylo-fenoksy-metylo-kopolimer styren-1%-diwinylobenzen) opisana przez Wanga (1974) J. Am. Chem Soc. 95:1328. Po syntezie, peptydy można odszczepić od fazy stałej w łagodnych warunkach.
Po syntezie żądanej sekwencji aminokwasów, następuje odłączenie peptydu od żywicy, na przykład przy pomocy kwasu trifluorooctowego, zawierającego wymiatacze wolnych rodników, na przykład triizopropylosilan, anizol albo etanoditiol, tioanizol.
Grupy reaktywne, które mogą nie uczestniczyć w reakcji kondensacji są, jak stwierdzono, skutecznie chronione przez grupy, które można usunąć znów bardzo łatwo poprzez hydrolizę przy pomocy kwasu, zasady albo przez redukcję. Szersze omówienie możliwych grup ochronnych można znaleźć w The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 1-9 (pod red. Gross, Udenfriend i Meienhofer) 1979 - 1987 (Academic Press, Inc.). Grupy ochronne można odszczepić przy użyciu różnych konwencjonalnych metod, zależnie od natury poszczególnej grupy, na przykład za pomocą kwasu trifluorooctowego albo przez łagodną redukcję, na przykład za pomocą wodoru i katalizatora, takiego jak pallad, albo HBr w lodowatym kwasie octowym.
Choć wydaje się paradoksalne odczulanie układu odpornościowego tym samym antygenem odpowiedzialnym za aktywowanie układu odpornościowego, odczulanie to oparte jest na obserwowanym od dawna zjawisku, iż zwierzęta, które żywiono albo które wdychały antygen
187 451 albo epitop są mniej zdolne do rozwinięcia układowej odpowiedzi immunologicznej przeciwko wspomnianemu antygenowi albo epitopowi, gdy wspomniany antygen albo epitop wprowadzi się drogą układową. Stąd, kontrolowane podawanie HC gp-39, i/lub białek zawierających sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQ-YREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) mogą być skuteczne w odczulaniu układu immunologicznego. Fragmenty białek według wynalazku, które zdolne są do odczulenia pacjentów na HC gp-39 są również w zakresie wynalazku.
Według wynalazku, pacjenci, u których dochodzi do ataku na chrząstkę ze strony autoodpowiadających limfocytów T mogą być leczeni środkiem farmaceutycznym, zawierającą HC gp-39, jedno bądź więcej białek zawierających sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją amino kwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTS WS QYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) albo jeden bądź więcej fragmentów pochodzących z białka według wynalazku oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, w celu wywołania tolerancji swoistych autoreaktywnych limfocytów T tych pacjentów na HC gp-39 w chrząstce stanowiącej przedmiot ataku i w celu zmniejszenia odpowiedzi zapalnej.
Odpowiednimi białkami stosowanymi w kompozycji farmaceutycznej według wynalazku są białka zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 70%, korzystnie 80%, korzystniej 90% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFA-NISND (SEKW. ID NR:1).
Szczególnie odpowiednimi białkami do zastosowania w kompozycji farmaceutycznej według wynalazku są na przykład świńskie białko wiążące heparynę 38 kDa, krowie białko serwatkowe 39 kDa, mysie białko zanikającego gruczołu piersiowego 39 kDa (brp39), mysia glikoproteina swoista dla jajowodu, chomicza glikoproteina swoista dla jajowodu, krowia glikoproteina swoista dla jajowodu, ludzkie YKL-39, ludzka glikoproteina swoista dla jajowodu, ludzkie białko prekursorowe chitotriozydazy oraz prekursor mysiego białka wydzielniczego YM-1.
Również bardzo dogodne do zastosowania w kompozycji farmaceutycznej według wynalazku są wektory (ekspresyjne) DNA, zawierające DNA, który koduje HC gp-39 albo białko zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYY-TSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) albo jeden bądź więcej fragmentów, pochodzących z białek według wynalazku. Po dostarczeniu, wektor (ekspresyjny) DNA może zapewnić dzięki ekspresji poziom rekombinowanego HC gp-39 albo białka zawierającego sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLV-CYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) albo fragmentów według wynalazku, który jest podobny do poziomu, który byłby uzyskany przez bezpośrednie podanie kompozycji farmaceutycznej, zawierającej białko HC gp-39 albo peptydy.
Autoantygen HC gp-39, białka wywołujące zapalenie stawów, zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGS-CFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) oraz fragmenty pochodzące ze wspomnianych białek wywołujących zapalenie stawów według wynalazku mają tę zaletę, iż mają swoisty wpływ wywołujący tolerancję na autoreaktywne limfocyty T, tym samym po zostawiając inne składniki układu odpornościowego nietknięte w porównaniu z niespecyficznym efektem supresyjnym immunosupresyjnych leków steroidowych. Leczenie autoantygenem albo białkami zawierającymi sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) albo fragmentami według wynalazku będzie bezpieczne i nie wystąpią żadne toksyczne efekty uboczne.
187 451
Tolerancja może być osiągnięta przez podanie wysokich albo niskich dawek autoantygenu albo białek według wynalazku. Ilość autoantygenu albo białka będzie zależeć od drogi podania, czasu podania, wieku pacjenta jak również od ogólnego stanu zdrowia i diety.
Ogólnie, można zastosować dawkę 0,01 do 1000 pg białka na kg masy ciała, korzystnie 0,5 do 500 pg, korzystniej 0, 1 oo 10 0 g g białka.
Dopuszczalne farmaceutycznie nośniki są dobrze znane specjalistom z tej dziedziny i obejmują na przykład jałową sól fizjologiczną, laktozę, sacharozę, fosforan wapnia, żelatynę, dekstrynę, agar, pektynę, olej arachidowy, olej z oliwek, olej sezamowy i wodę. Innymi nośnikami mogą być na przykład cząsteczki MHC klasy II, jeżeli jest to pożądane umieszczone w liposomach.
Dodatkowo, kompozycja farmaceutyczna według wynalazku może zawierać jeden bądź więcej adiuwantów. Do dogodnych adiuwantów należą, między innymi, wodorotlenek glinu, fosforan glinu, amfigen, tokofenole, monofosfenylolipid A, dipeptyd muramylowy i saponiny, takie jak Quill A. Ilość adiuwantu zależy od natury samego adiuwantu.
Ponadto, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą zawierać jeden bądź więcej stabilizatorów, takich jak na przykład węglowodany, w tym sorbitol, mannitol, skrobię, sacharozodekstrynę i glukozę, białka takie jak albuminy albo kazeina oraz bufory takie jak fosforany zasadowe.
Dogodnymi drogami podania są wstrzyknięcia domięśniowe, wstrzyknięcia podskórne, wstrzyknięcia dożylne albo wstrzyknięcia dootrzewnowe, droga doustna i donosowa. Drogi doustna i donosowa są zalecanymi drogami podawania.
Z uwagi na swą naturę wywoływania zapalenia stawów, HC gp-39 jak również białka zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją amino kwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYY-TSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) można stosować w celu wywołania klinicznego zapalenia stawów u zwierząt. Po podaniu niewielkich ilości HC gp-39 albo jednego bądź wielu białek, zawierających sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją amino kwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANI-SND (SEKW. ID NR.:1) albo jednego bądź wielu fragmentów białek według wynalazku, oznaki zapalenia stawów rozwiną się u wspomnianych zwierząt, dając przebieg choroby przypominający postęp choroby w zapaleniu stawów, szczególnie w reumatoidalnym zapaleniu stawów. Gdy myszom Balb/c wstrzyknięto podskórnie białko HC gp-39 albo białko zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQ-REGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1), zwierzęta rozwijały objawy zapalenia stawów. Przebieg choroby wywołanej HC gp-39 jak również choroby wywołanej przez białko, zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHnYSFANISND (SEKW. ID NR:1) charakteryzował się nawrotami, występującymi okresowo w przednich łapkach i/lub w tylnych łapkach i stopniowym rozwojem od łagodnego zapalenia stawów do postaci cięższej. Ponadto obserwowano symetryczny rozkład zajętych stawów, co wraz z obserwacją nawracających nawrotów i tworzenia się guzków, przypomina przebieg choroby w zapaleniu stawów, zwłaszcza w RA.
A zatem, te chore zwierzęta stanowią odpowiedni model zwierzęcy do badania mechanizmów leżących u podłoża początku i postępu rozwoju zapalenia stawów. Dodatkowo, te chore zwierzęta można zastosować do poszukiwań nowych leków do leczenia zapalenia stawów i do badania wpływu tych leków na rozwój za palenia stawów. Zaleca się, by stosować myszy jako model zapalenia stawów, zwłaszcza reumatoidalnego zapalenia stawów. W celu wywołania zapalenia stawów u wspomnianych zwierząt, trzeba podać odpowiednie ilości HC gp-39 albo jednego bądź wielu białek według wynalazku. Odpowiednie ilości wynoszą 0,1-100 pg, korzystnie 1-100 pg, korzystniej 10-50 pg na kg masy ciała. Ilość HC gp-39 albo białek zawierających sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50%
187 451 z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVC-YYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) albo ich fragmentów będzie zależeć od drogi podania, czasu podania i typu stosowanego zwierzęcia. Dogodne drogi podania są takie same jak opisano poprzednio. W celu wywołania efektu wzbudzenia zapalenia stawów, białko HC gp-39 albo białka zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDAlDrF-LCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) albo peptydy według wynalazku mogą zawierać jeden bądź więcej stabilizatorów albo adiuwantów jak opisano poprzednio.
HC gp-39, białka zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHUYSFANISND (SEKW. ID NR:1) albo ich fragmenty według wynalazku są również bardzo dogodne do zastosowania w metodzie diagnostycznej w celu wykrycia obecności aktywowanych autoreaktywnych limfocytów T, zaangażowanych w przewlekłe zapalenie chrząstki stawowej. Sposób diagnostyczny według wynalazku obejmuje następujące etapy:
a) izolację jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC) z próbki krwi osobnika,
b) hodowlę wspomnianych PBMC w odpowiednich warunkach,
c) inkubację wspomnianej hodowli PBMC w obecności autoantygenu albo białek według wynalazku i ich fragmentów, oraz
d) wykrywanie odpowiedzi limfocytów T, na przykład odpowiedzi proliferacyjnej, wskazującej na obecność aktywowanych autoreaktywnych limfocytów T u osobnika.
W wypadku wykrywania odpowiedzi przez zmierzenie odpowiedzi proliferacyjnej autoreaktywnych limfocytów T, miarą proliferacji jest wbudowanie radioizotopu, takiego jak na przykład 3H-tymidyna. Odpowiedź autoreaktywnych limfocytów T obecnych w PBMC można również wykryć poprzez zmierzenie uwalniania cytokiny przy użyciu swoistego dla cytokiny testu ELISA, albo cytotoksyczności z uwalnianiem 51chromu. Inną metodą wykrywania jest pomiar ekspresji markerów aktywacji przy po mocy analizy FACS, na przykład IL-2R. Kompozycja diagnostyczna, zawierająca jeden bądź więcej peptydów według wynalazku oraz odpowiedni środek wykrywający stanowi zatem część wynalazku. Zależnie od typu detekcji, środkiem wykrywającym może być radioizotop, enzym, albo przeciwciało swoiste dla po wierzchni komórki albo markerów aktywacji.
Również w zakresie wynalazku są zestawy testowe, które zawierają jeden albo więcej peptydów według wynalazku. Te zestawy testowe nadają się do zastosowania w sposobie diagnostycznym według wynalazku.
A zatem, niniejszy wynalazek dostarcza sposobu wykrywania, czy autoagresywne limfocyty T, reagujące z HC gp-39 obecne są u pacjenta, cierpiącego na zniszczenie chrząstki za pośrednictwem limfocytów T, takie na przykład jak zapalenie stawów, w szczególności reumatoidalne zapalenie stawów. Jeżeli swoiste dla HC gp-39 limfocyty T są obecne, wywołanie tolerancji tych limfocytów T przy pomocy kompozycji farmaceutycznej, zawierającej HC gp-39 albo jedno bądź wiele białek wywołujących zapalenie stawów, zawierających sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów HC gp-39, w szczególności z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRF-LCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) albo peptydy według niniejszego wynalazku albo ich połączenia może opóźnić albo znieść rozwój zapalenia stawów. Następujące przykłady stanowią ilustrację wynalazku i niepowinny w żadnym razie być interpretowane jako ograniczające zakres wynalazku.
OPISY RYSUNKÓW
Figura 1: Początek i postęp zapalenia stawów u myszy Balb/c z tolerancją i bez tolerancji na HC gp-39. AS = całkowita ocena zapalenia stawów chorych zwierząt na dzień po uczuleniu. N = liczba chorych zwierząt na dzień po uczuleniu.
Figura 2: Początek i postęp zapalenia stawów u myszy Balb/c po podaniu odpowiednio 0,2 pq, 1 pg, 5 pg i 25 fig krowiego białka serwatkowego 39 kDa. Początek/postęp przedsta10
187 451 wiono jako wynik sumaryczny (całkowita ocena zapalenia stawów u chorych zwierząt) na dzień po uczuleniu.
Przykład 1 METODY
Oczyszczanie HC gp-39 z linii komórkowej osteosarcoma MG63
Komórki MG63 (ludzkie osteosarcoma ATCC CRL 1427) hodowano w inkubatorach komórkowych w wolnym od surowicy medium DMEM/HAM F12. HC gp-39 oczyszczono z supematantu hodowli przez chromatografię powinowactwa do heparyny, a następnie chromatografię super dex 75. Czystość sprawdzono przy pomocy SDS-PAgE. Dodatkowo, sekwencjonowanie N-terminalnych amino kwasów potwierdziło, iż oczyszczone białko było identyczne z białkiem opisanym przez Hakala i wsp.
Zdolność wywoływania zapalenia stawów przez HC gp-39 u myszy Balb/c albo 50 pg oczyszczonego HC gp-39 w 100 pl objętości PBS (0,5 M NaCl, 0,01 M fosforanu sodu jako buforu, pH 7.5) zmieszano w stosunku 1:1 z niepełnym adiuwantem Freundsa (IFA) i wstrzyknięto podskórnie w rejonie klatki piersiowej u 2x4 samic myszy Balb/c (Harlan CPB, Zeist, Holandia), natomiast 4 myszom kontrolnym wstrzyknięto PBS (1:1 w IFA). Myszy badano codziennie pod względem objawów klinicznych zapalenia stawów. Zaawansowanie zapalenia stawów oceniano przez oszacowanie każdej łapki w skali od 0-3 (według artykułu Glanta i wsp.). W skrócie, 0 = bez zmian, wynik 1 = rumień i obrzęk, wynik 2 = obrzęk i pojawienie się zniekształceń, wynik 3 = unieruchomienie z uwagi na utratę zgięcia i prostowania.
Wzbudzanie tolerancji przez donosowe podanie HC gp-39
Dwadzieścia osiem pg białka podawano donosowo (2 x 10 pi) 10 samicom myszy Balb/c (nieco znieczulonych przy pomocy Enflurance) przy użyciu mikroprzewodu PT45 i strzykawki Hamiltona. Antygen podawano w dzień -15, -10 i -5 przed wywołaniem zapalenia stawów. Grupę kontrolną (n=10) poddano tej samej procedurze ale przyjmowała ona jedynie nośnik (PBS) (tabela 1).
Tolerancję immunologiczną oceniano mierząc odpowiedzi nadwrażliwości typu późnego (ang. delayed-type hypersensitivity, DTH) po uczuleniu jak opisano powyżej w dniu 0, przy zastosowaniu 10 pg białka. Po uczuleniu w dniu 0 następowało wstrzyknięcie 10 pg HC gp-39 w objętości 50 fig do lewej tylnej stopy w dniu 8 (prowokacja). Reakcje DTH mierzono jako wzrost stopy ( [obrzęk lewej (mm x 10- ) - obrzęk prawej (mm x 10j ]/obrzęk prawej (mm x 10’3)) x 100%. Obrzęk stopy mierzono przy zastosowaniu zaprojektowanego specjalnie pmetra po 0, 24 i 48 godz. po prowokacji.
Tolerancję na wzbudzanie zapalenia stawów u tych samych myszy monitorowano następnie aż do dnia 31 po uczuleniu a myszy badano codziennie pod kątem objawów klinicznych. Ciężkość zapalenia stawów oceniano jak wspomniano powyżej.
Tabela 1.
Schemat wzbudzania tolerancji
| Dzień | Tolerancja HC-gp-39 | Brak tolerancji |
| -15 | 28 pg HC gp-39 donosowo | PBS |
| -10 | 28 pg HC gp-39 donosowo | PBS |
| -5 | 28 pg HC gp-39 donosowo | PBS |
| 0 | 10 pg HC gp-39 podskórnie | 10 pg HC gp-39 podskórnie |
| 8 | 10 ng HC gp-39 w stopę | 10 pg HC gp-39 w stopę |
| 9 | 24-godzinne DTH | 24-godzinne DTH |
| 10 | 48-godzinne DTH | 48-godzinne DTH |
| 0-31 | ocena objawów zapalenia stawów | ocena objawów zapalenia stawów |
DTH = nadwrazliwość typu późnego. PBS = 0,5 M NaCl, 0,01 M. fosforanu sodu jako bufor, pH 7.5
187 451
WYNIKI
Zdolność HC gp-39 do wywoływania zapalenia stawów
Po pojedynczym wstrzyknięciu 50 pg HC gp-39 zmieszanego z IFA, u wszystkich myszy stopniowo rozwinęło się ciężkie zapalenie stawów (tabela 2). Objawy zapalenia stawów obserwowano najpierw w dniu 15-20 po uczuleniu, w przednich łapkach 3 spośród 4 zwierząt. U myszy, która nie wykazała żadnych objawów w przednich łapkach rozwinęło się zapalenie stawów w tylnych łapkach w dniu 34 po uczuleniu. Przebieg choroby wywołanej HC gp-39 charakteryzował się nawrotami występującymi okresowo w przednich łapkach albo tylnych łapkach i stopniowo rozwijał się od łagodnego zapalenia stawów do cięższego zapalenia stawów (postęp choroby obserwowano przez 62 dni). Bardzo często (>50%) obserwowano symetryczny rozkład zajętych stawów, co oznacza, iż obydwie łapki przednie albo obydwie łapki tylne wykazywały objawy zapalenia stawów w tym samym czasie.
Wzbudzanie zapalenia stawów podobnie uzyskano przy zastosowaniu 10 pg zamiast 50 pg HC gp-39, zmieszanego z IFA. Wyniki zapalenia stawów były jednak nieco niższe (dane nie przedstawione). U trzech z 4 myszy rozwinęło się ciężkie za palenie stawów. Jedna z myszy wykazywała jedynie łagodne objawy w czasie trwanie doświadczenia. Przez całą długość trwania doświadczenia, myszy kontrolne nie wykazywały żadnych objawów zapalenia stawów.
Podsumowując, zarówno 10 jak i 50 pg białka było wystarczające dla wywołania postępującego zapalenia stawów u myszy Balb/c. przewlekła natura zapalenia stawów wywoływanego przez HC gp-39, charakteryzująca się powtarzającymi się nawrotami w połączeniu z symetrycznym rozkładem zajętych stawów przypomina przebieg choroby w reumatoidalnym zapaleniu stawów (RA).
Tabela 2
Początek i przebieg zapalenia stawów u myszy Balb/c uczulonych HC gp-39.
| Uczulenie (n=4) | Początek zapalenia stawów (dzień) | Objawy zapalenia stawów | |||
| FP | HP | brak | łagodne | ciężkie | |
| PBS kontr. | - | - | 4 | 0 | 0 |
| 10 pg HC gp-39 | -, 13, 15,57 | 32, 34, 36, 43 | 0 | 1 | 3 |
| 10 pgHC gp-39 | 13, 15, 15,48 | 29,34,34, 53 | 0 | 0 | 4 |
FP=łapka przednia. HP = Łapka tylna, kontr·. = kontrola. Objawy zapalenia stawów: brak: wynik = 0, łagodne: wynik na zwierzą nie przekracza 2, ciężkie: wynik na zwierzę jest > 3.
Immunologiczna tolerancja mierzona testem DTH
Myszy kontrolne, którym wstrzyknięto HC gp-39 w dniu 0 wykazywały silną, swoistą dla antygenu odpowiedź DTH, co sugeruje, iż komórkowa odpowiedź immunologiczna na HC gp-39 została wywołana w czasie uczulenia (tabela 3). Donosowe podanie HC gp-39 całkowicie zniosło jednak odpowiedzi DTH po prowokacji autoantygenem, tym samym wskazując, iż limfocyty T swoiste wobec HC gp-39 rzeczywiście uległy tolerancji.
Zwraca uwagę fakt, iż u 4 spośród 10 zwierząt w grupie o nie wzbudzonej tolerancji rozwinęło się zapalenie stawów w stawie skokowym sąsiadującym z miejscem prowokacji. W przeciwieństwie do tego, w grupie, w której wzbudzono tolerancję nie rozwinęło się zapalenie w stawach sąsiadujących z miejscem prowokacji, co tym samym sugeruje, iż tolerancja immunologiczna na HC gp-39 powoduje ochronę przed rozwojem zapalenia stawów.
187 451
Tabela 3.
Odpowiedzi DTH na HC gp-39 po wywołaniu tolerancji przez podanie donosowe.
| Leczenie | Średni obrzęk % | Zapalenie stawu skokowego | ||
| 0 godz. | 24 godz. | 48 godz. | ||
| kontrola (n=10) | -1,3 | 31,4 | 38,6 | 4/10 |
| tolerancja (n=9) | -0,05 | 3,7 | 1,5 | 0/9 |
Tolerancja na wywołanie albo postęp zapalenia stawów
Myszy Balb/c z wzbudzoną łub nie wzbudzoną tolerancją na HC gp-39 monitorowano następnie pod kątem wywołania i postępu zapalenia stawów.
U wszystkich myszy w grupie kontrolnej (bez tolerancji), choroba zaczynała się po uczuleniu HC gp-39 (tabela 4). U siedmiu myszy stopniowo rozwinęło się ciężkie zapalenie stawów, natomiast trzy myszy wykazywały jedynie łagodne objawy (najwyższy wynik 2). W przeciwieństwie do tego, pięć myszy z grupy z tolerancją na HC gp-39 były chronione przed rozwinięciem się choroby w czasie trwania doświadczenia. Ponadto, dwoje zwierząt z grupy z wywołaną tolerancją wykazywało jedynie łagodne objawy przez krótkie okresy. U trojga zwierząt rozwinęło się cięższe zapalenie stawów z wynikiem 4.
Co ciekawe, u zwierząt z wywołaną tolerancją, początek zapalenia stawów był opóźniony zarówno w tylnych jak i w przednich łapkach o co najmniej odpowiednio 7-9 dni (fig. 1). Choć mniej zwierząt było dotkniętych w grupie z wywołaną tolerancją, wynik zapalenia stawów przypadający na zwierzę w łapach przednich był porównywalny z wynikiem zapalenia stawów u zwierząt bez wywołanej tolerancji. Wynik zapalenia stawów przypadający na zwierzę w tylnych łapach był jednak nieco niższy i zwierząt z wywołaną tolerancją (fig. 1).
Tabela 4.
Początek i przebieg zapalenia stawów u myszy Balb/c .z i bez wywołanej tolerancji na HC gp-39.
| zwierzęta | początek zapalenia stawów (dzień) | objawy zapalenia stawów | ||
| brak | łagodne | ciężkie | ||
| kontrola (n=10) | 13-16 | 0 | 3 | 7 |
| tolerancja (n=10) | 23-24 | 5 | 2 | 3 |
Początek zapalenia stawów: pierwsze objawy pojawiają się -najwyższa liczba chorych zwierząt. Objawy zapalenia stawów: brak: wynik = 0, łagodne: wynik na zwierzą nie przekracza 2, ciężkie: wynik na zwierzą jest > 4.
Powyższe doświadczenia wykazują zdolność wywoływania zapalenia stawów przez HC gp-39 u myszy Balb/c. Przebieg choroby wywołanej przez HC gp-39 charakteryzował się nawrotami, występującymi okresowo w przednich łapach i/lub tylnych łapach i stopniowo rozwijał się od łagodnego zapalenia stawów do cięższej postaci. Ponadto obserwowano symetryczny rozkład dotkniętych stawów, co wraz z obserwacją powracających nawrotów, przypomina przebieg choroby w reumatoidalnym zapaleniu stawów. Zdolność silnego wywoływania zapalenia stawów przez HC gp-39 zobrazowana została pojedynczym, podskórnym wstrzyknięciem 10 albo 50 pg białka, które wyzwalało objawy zapalenia stawów u wszystkich zwierząt. To, że swoiste względem HC gp-39 limfocyty T rzeczywiście wywoływały odpowiedź na uczulenie HC gp-39 wykazano przez wzbudzenie swoistych względem HC gp-39 odpowiedzi DTH. Dane te potwierdzono następnie przez wykazanie in vitro swoistych względem HC gp-39 odpowiedzi proliferacyjnych u zwierząt zaszczepionych w stopę HC gp-39 (dane nie przedstawione). Co ważne, zwierzęta bez wywołanej tolerancji rozwijały zapalenie stawu skokowego w pobliżu miejsca wstrzyknięcia, tym samym rzeczywiście sugerując zaangażowanie swoistych względem HC gp-39 limfocytów T w wywoływaniu zapalenia stawów.
Donosowe podanie antygenowego peptydu wykorzystano do wywołania swoistej antygenowo tolerancji immunologicznej. Doświadczenia wykazały, iż donosowe podanie HC gp-39
187 451 prowadzi do braku odpowiedzi immunologicznej. Odpowiedzi DTH po uczuleniu były całkowicie zniesione u myszy z wywołaną tolerancja na HC gp-39, natomiast myszy kontrolne wykazywały obrzęk swoisty antygenowo. Obserwacje te wskazują na to, że podanie HC gp-39 prowadzi do tolerancji immunologicznej na obwodzie.
U zwierząt bez wywołanej tolerancji, odpowiedziom DTH towarzyszyło zapalenie stawu skokowego (w sąsiedztwie miejsca prowokacji) u czterech z dziesięciu myszy. W przeciwieństwie do tego, stawy skokowe zwierząt, u których wywołano tolerancję na HC gp-39 były rzeczywiści całkowicie chronione, tym samym sugerując, iż autoreaktywne limfocyty T zostały skutecznie wyciszone. Przekonanie, iż tolerancja względem HC gp-39 chroni przed rozwojem choroby, potwierdziło się poprzez obserwację, iż 5 spośród 10 zwierząt w grupie z wywołaną tolerancją było całkowicie chronionych przez cały czas trwania doświadczenia. Choć u pozostałych pięciu zwierząt w tej grupie rzeczywiście rozwinęły się w końcu objawy kliniczne, początek zapalenia stawów był znacznie opóźniony. Stąd można wnioskować, iż swoiste względem HC gp-39 limfocyty T zaangażowane są w proces zapalny w stawach i, co ważniejsze, że po przez wywołanie tolerancji tych limfocytów T przy pomocy kompozycji farmaceutycznej według niniejszego wynalazku można opóźnić albo zapobiec rozwinięciu się zapalenia stawów.
Przykład 2
METODY
Zdolność wywoływania zapalenia stawów przez krowie białko serwatkowe 39 kDa u myszy Balb/c
0,2,1, 5 albo 25 pg oczyszczonego krowiego białka serwatkowego 39 kDa w 100 pl objętości (0,5 M NaCl, 0,01 M buforu fosforanu sodu, pH 7.5) zmieszano w stosunku 1:1 z niepełnym adiuwantem Freundsa (IFA) i wstrzyknięto podskórnie w rejonie klatki piersiowej 4 x 10 samic myszy Balb/c (Charles River, Sulzfeld, Niemcy), natomiast 10 myszom kontrolnym wstrzyknięto PBS (1:1 w IFA). Myszy badano codziennie pod kątem objawów klinicznych zapalenia stawów. Zaawansowanie zapalenia stawów oceniano przez oszacowanie każdej łapki w skali od 0-3 (według artykułu Glanta i wsp.). W skrócie, 0 = bez zmian, wynik 1 = rumień i obrzęk, wynik 2 = obrzęk i pojawienie się zniekształceń, wynik 3 = unieruchomienie z uwagi na utratę zgięcia i prostowania.
Sklonowanie krowiego serwatkowego gp39 cDNA
Bibliotekę cDNA krowiego gruczołu sutkowego Lambda Bluemid(-) (przygotowana z użyciem starterów losowych i oligo dT, wykonanych na zamówienie przez Clontech Laboratories Inc.) poddano amplifikacji przy zastosowaniu linii XL1 Blue MRF jako gospodarza zaś rozdział biblioteki i przygotowanie replik na filtrze przeprowadzono według instrukcji producentów. Filtry hybrydyzowano z fragmentem PvuII z cDNA HC gp-39 po wyznakowaniu 32P przy zastosowaniu zestawu do znakowania oligo (Pharmacia). Łysinki dodatnie poddano amplifikacji, ponownemu badaniu przesiewowemu a wstawiony DNA odpowiednich fagów pod dano sekwencjonowaniu przy zastosowaniu zestawu Thermosequenase (Amersham). Sekwencja oznaczona jest jako SeKw.ID NR:3. W pozycji nukleotydowej 954 jeden klon zawierał C, natomiast inny zawierał T.
WYNIKI
Zdolność krowiego białka serwatkowego 39 kDa do wywoływania zapalenia stawów
Po pojedynczym wstrzyknięciu 25 pg krowiego białka serwatkowego 39 kDa zmieszanego z IFA, u wszystkich myszy stopniowo rozwinęło się ciężkie zapalenie stawów (tabela 5). Objawy zapalenia stawów obserwowano najpierw w dniu 8-20 po uczuleniu w przednich albo w tylnych łapkach. Przebieg choroby wywołanej krowim białkiem serwatkowym 39 kDa charakteryzował się nawrotami występującymi okresowo w tylnych łapkach i stopniowo rozwijał się od łagodnego zapalenia stawów do cięższego zapalenia stawów (postęp choroby obserwowano przez 70 dni). Bardzo często obserwowano symetryczny rozkład zajętych stawów, co oznacza, iż obydwie łapki przednie albo obydwie łapki tylne wykazywały objawy zapalenia stawów w tym samym czasie.
Wzbudzanie zapalenia stawów podobnie uzyskano przy zastosowaniu 5, 1 albo 0,2 zamiast 25 pg krowiego białka serwatkowego 39 kDa, zmieszanego z IFA.
187 451
U myszy pobudzanych przy pomocy 1 albo 0,2 pg krowiego białka serwatkowego 39 kDa rozwijała się łagodniejsza postać zapalenia stawów: odpowiednio u 7 i 6 myszy rozwinęło się łagodne zapalenie stawów, natomiast tylko u 3 i 4 myszy rozwinęło się ciężkie zapalenie stawów'.
Przy końcu doświadczenia, obliczono kumulacyjne wyniki przypadające na dzień oceny dla każdej grupy myszy (fig. 2). Po zaszczepieniu 25 pg krowiego białka serwatkowego 39 kDa, maksymalny wynik 27 (25 pg) osiągnięto po 30 dniach, po czym nastąpiły wyraźne nawroty. Gdy niższe dawki krowiego białka serwatkowego 39 kDa stosowano do zaszczepienia, zwierzęta wykazywały nieco niższy wynik zapalenia stawów w porównaniu z myszami, które pobudzono dawką 25 fig. Choć osiągnięto niższe wyniki, wzorzec nawrotów stwierdzono we wszystkich grupach.
W grupie kontrolnej, u myszy, którym podano PBS obserwowano czasami niewielki i przelotny obrzęk tylnych łap. Zjawisko to obserwowano również u zwierząt nie biorących udziału w doświadczeniu, którym nie wykonywano zastrzyku. Ta średnia wartość kumulatywna obrzęku przypadająca na dzień oceny dla tych grup myszy miała średnią wartość 3,4 i uważana była za zmienność tła biologicznego.
Podsumowując, krowie białko serwatkowe 39 kDa (zarówno 25, 5, 1 jak i 0,2 pg) zdolne jest do wywołania postępującego zapalenia stawów u samic myszy Balb/c. przewlekła natura zapalenia stawów wywoływanego przez krowie białko serwatkowe 39 kDa, charakteryzująca się powtarzającymi się nawrotami w dodatku do symetrycznego zajęcia stawów, przypomina postęp choroby w reumatoidalnym zapaleniu stawów (RA).
Tabela 5.
Początek i przebieg zapalenia stawów u myszy Balb/c uczulonych krowim białkiem serwatkowym 39 kDa
| Uczulenie (n=10) | Początek zapalenia stawów (dzień) | Objawy zapalenia stawów | |||
| FP | HP | brak | łagodne | Ciężkie | |
| 0,2 pg K białka | ł ł i Ϊ ? | 8, 14, 14, 14, | 0 | 6 | 4 |
| serwatkowego | -,-,-,14,18 | 18, 18, 18, 18, | |||
| 39 kDa | 30, 54 | ||||
| 1 pg K białka | ł J 5 J , | 8, 8, 8, 8, 8, 8, | 0 | 7 | 3 |
| serwatkowego | 8, 12, 12, 16, 18 | 14, 15, 18, 18 | |||
| 39 kDa | |||||
| 5 pg K białka | 5 > 5 > > | 6, 6,8, 10, 10, | 0 | 0 | 10 |
| serwatkowego | 8, 10, 10, 12, 14 | 16, 16, 18, 20, | |||
| 39 kDa | 30 | ||||
| 25 pg K białka | > » J > | 8, 8, 10, 12, 12 | 0 | 1 | 9 |
| serwatkowego | 12 | 14, 14, 18, 18, | |||
| 39 kDa | 20 |
FP=iapka przednia. HP = Łapka tylna. Objawy zapalenia stawów: brak: wynik = 0, łagodne: wynik na zwierzą nie przekracza 2, ciężkie: wynik na zwierzą jest > 3.
187 451
LISTA SEKWENCJI (1) INFORMACJA OGÓLNA:
(i) ZGŁASZAJĄCY:
(A) IMIĘ: AKZO NOBEL N.V.
(B) ULICA: Velperweg 76 (C) MIASTO: Arnhem (E) PAŃSTWO: Holandia (F) KOD POCZTOWY (ZIP): 6824 BM (G) TELEFON: 0412 666376 (H) TELEFAX: 0412 650592 (I) TELEX: 37503 akpha nl (ii) TYTUŁ WYNALAZKU: Nowe peptydy pochodzące z autoantygenu do zastosowania w immunoterapii chorób autoimmunizacyjnych (iii) LICZBA SEKWENCJI: 30 (iv) POSTAĆ OO ODCDOTU COMTUTEROWUGO:
(A) TYP MEDIUM: Dyskietka (B) KOMPUTER: kompatybilny z IBM (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DUS/OO-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: Patentln Release #1.0, Wersja #1.30 (EPO) (2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR 1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 42 aminokwasów (B) TYP: Aminokwasy (C) LICZBA NICI: jedna (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: peptyd
187 451
| (xi) OPIS SEKWENCJI: SEKW.ID NR: 1: | |||||||||||||
| Tyr | Lys | Leu | Val Cys | Tyr | Tyr | Thr | Ser | Trp | Ser | Gin | Tyr | Arg | G lu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
| Gly | Asp | Gly | Seer Cys | Phe | Pro | Asp | Ala | Leu | Asp | Arg | Phe | Leu | C^^ |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||
| Thr | His | Ile | Ile Tyr | Ser | Phe | Ala | Asn | Ile | Ser | Asn | Asp | ||
| 35 | 40 |
(2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NR 2:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 383 aminokwasów (B) TYP: Aminokwasy (C) LICZBA NICI: dwie (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: cDNA
| (xi) | OPIS SEKWENCJI: | SEKW.ID NR: | 2: | |
| Met Gly 1 | Leu Arg | Ala Ala Gln Thr 5 | Gly Phe Val 11 | Val Leu Val Leu Leu 55 |
| Gln Ser | (Cys Ala 20 | Ala Tyr Lys Leu | Ile Cys Tyr 25 | T/r Thr Ser Tp> Ser 30 |
| Gln Tyr | Arg Glu 35 | Gly Asp 5ly Par 40 | Cys Phe Pro | s5p Al a ire Asp P ro 45 |
| Phe Leu 50 | Cys Thr | His Va5 Ile Tyr 55 | Ser Phe Ala | Asn Ile Ser Asn Asn 60 |
| Glu Ile 65 | Asp TTh | 5rp Glu TrG U5n 75 | Apy Va1 Thy 775 | Pau TpT Ual Uhr Leu 80 |
| Asn Thr | Leu Lls | Asn Ayg Asy P50 85 | Asn Lau Lys 90 | nAr Iul Sau Ser Val 55 |
| Gly Gly | Trp Asn 100 | Phe Gly Ser Gln | yrg Phe Ser 105 | Lys Ile A1t Ser Lys 110 |
187 451
| Thr | Arg | Ser 115 | Arg Arg Thr | Phe | Ile 120 | Lys | Ser | Val | Pro | Pro 125 | Phe | Leu | Arg |
| Thr | His | Gly | Phe Asp Gly | Leu | Asp | Leu | Ala | Trp | Leu | Tyr | Pro | Gly | Trp |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||
| Arg | Asp | Lys | Arg His Leu | Thr | Thr | Leu | Val | Lys | Glu | Met | Lys | Ala | Glu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
| Phe | Val | Arg | Glu Ala Gln | Ala | Gly | Thr | Glu | Gln | Leu | Leu | Leu | Ser | Ala |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||
| Ala | Val | Pro | Ala Gly Lys | Ile | Ala | Ile | Asp | Arg | Gly | Tyr | Asp | Ile | Ala |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||
| Gln | Ile | Ser | Arg His Leu | Asp | Phe | Ile | Ser | Leu | Leu | Thr | Tyr | Asp | Phe |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||
| His | Gly | Ala | Trp Arg Gln | Thr | Val | Gly | His | His | Ser | Pro | Leu | Phe | Arg |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||
| Gly | Gln | Glu | Asp Ala Ser | Ser | Asp | Arg | Phe | Ser | Asn | Ala | Asp | Tyr | Ala |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||
| Val | Ser | Tyr | Met Leu Arg | Leu | Gly | Ala | Pro | Ala | Asn | Lys | Leu | Val | Met |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||
| Gly | Ile | Pro | Thr Phe Gly | Arg | Ser | Tyr | Thr | Leu | Ala | Ser | Ser | Lys | Thr |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||
| Asp | Val | Gly | Ala Pro Ile | Ser | Gly | Pro | Gly | Ile | Pro | Gly | Gln | Phe | Thr |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||
| Lys | Glu | Lys | Gly Ile Leu | Ala | Tyr | Tyr | Glu | Ile | Cys | Asp | Phe | Leu | His |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||
| Gly | Ala | Thr | Thr His Arg | Phe | Arg | Asp | Gln | Gln | Val | Pro | Tyr | Ala | Thr |
305
310
315
320
Lys Gly Asn Gln Trp Val Ala Tyr Asp Asp Gln Glu Ser Val Lys Asn 325 330 335
187 451
| Lya | Ala | Arg | Tyr 340 | Leu | Lys | Asn | Arg | Gln 345 | Leu | Ala | Gly | Ala | Met 355 | Val | Trp |
| Ala | Leu | Asp 355 | Leu | Asp | Asp | Phe | Arg 3 60 | Gly | Thr | Phe | Cys | Gly 365 | Gln | Asn | Leu |
| Ala | Phe 370 | Pro | Leu | Thr | Ser | Ala 375 | Ile | Lys | Aśp | Val | Leu 380 | Ala | Glu | VvS |
(2) INFORMACJA O SEKWENCJI ID NO 3: (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
| (A) | DŁUGOŚĆ: 1152 pary | zasad | |
| (B) | TYP: Kwas nukleinowy | ||
| (C) | LICZBA NICI: jedna | ||
| (D) | TOPOLOGIA: Liniowa | ||
| (ii) | TYP | CZĄSTECZKI: CDNA | |
| (xi) | OPIS SEKWENCJI: SEQ ID | NO: 3 |
| ATGGGGCTGA | GGGCGGCTCA | GA GAC Cd ^GT CCC | GTCdTCCTCd | TGCTCCTCCA | VGTCCTCTCC |
| GCATACAAGC | TGATCTGCTA | CTACACCC\GC | TCGTCCCCGT | AC^CC^^^^ | VTCTTCCCTC |
| tgcttcccag | ACGCCATCGA | CCCCTTCCTG | TGCC.CCCATG | TTATCTACAG | onTTTGCcrc |
| ATAAGCAACA | ATGAGATCGA | CACCCΓCTCCCG | TCdA-TCACC | TGGCGCTCTA | VGATACACTG |
| AACACACTCA | AGAACAGGAA | CCCCCCACCCC3 | TATCTGCTCG | ACCATCGCAC | |
| TTCGGTTCTC | AAAGATTTTC | CJCAGATAGCT | TCCCAGACCC | ohgtccgcg | GACCTrCC.TC |
| AAGTCGGTGC | CACCATTTCT | gcccgacccat | CUCCTrrGATG | GACCCGC^CCC' | AGCATCdcrc |
| TACCCCGGGT | GGAGAGACAA | GCGGCATCTC | ACCCACrCTCG; | TCCTTC^CA.T | 0CCGClCTCCG |
| TTTGTAAGGG | AAGCCCAAGC | ACCCACACAC | CACCTTCTCC | TCTGTCCTCC | TCTCCCTGCT |
120
1130
240
300
360
420
480
540
187 451
| GGGAAGATTG | CTATTGACAG | AGGCGATGAC | TATCCCGACA | CCTGGACTTC | 600 | |
| ATCAGCCTTT | TGACCTATGA | CITTCACCCA | AGACAGTCGG | ACACCACAGC | 660 | |
| CCCCTGTTTC | GAGGCCAGGA | AGATGCGCGT | ΓCGΓCGC<GCGAC| | Ί^CGCGTAACGC | Τ^ΟΤΑΟσΩΤ | 720 |
| GTGAGCTACA | TGCTGAGGCT | G<XGGCGCCC. | GCCGACTCCA3C | TCGGTGATCGGG | TATACC^ | 780 |
| TTTGGGAGGA | GCTACACTCT | GGCCG’CTGCC | CAGACZAGATG | GAT<GΓ(GC(GcG | 840 | |
| CCAGGAATTC | CAGGCCAGTT | CACCCG.GGAG | GCA\CK:K!ATTC | TTGCCTATTA | TGAGATCTGT | 900 |
| GACTTCCTCC | ACGGAGCCAC | CACGCACAGA | TTCCGTTACC | AGGACGGrCCC | CCTATGCCACC | 960 |
| AAGGGCAACC | AGTGGGTGGC | GΊAAGAGGGC | CAAGAGAGTG | TCGACAAC(GCC | (GGZACCGGrAC | 1120 |
| CTGAAGAACA | GGCAGCTGGC | TGACGGGGGG | GGCΠ’GCCCCCC | TCCGC<GAACGC | TGAGTTCCCGG | 1080 |
| GGCACCTTCT | GTGGGCAGAA | CCGCACCGCT | ACG['CCCCAGAc | GTGCCGCTCCVC | A<CCT<JΓG<GΓT | 1140 |
GCTGAGGTGT AG
1152
187 451
Dni po uczuleniu
187 451
Dni po uczuleniu
187 451
FIG. 1C: Ocena zapalenia stawów w tylnych łapach u zwierząt bez wywołanej tolerancji
CO CN CN ΤΟ
CO io
CN
O
CN
Dni po uczuleniu
187 451
Ocena zapalenia stawów w tylnych łapach
CO CN CN m
CN o
CN o
co
Dni po uczuleniu
187 451
FIG. 2. Ocena zapalenia stawów w tylnych łapach
euMAąeyninn^ eueoo o
r— o
co o
in o
co o
CM
Dni po uczuleniu
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (11)
- Zastrzeżenia patentowe1. Białko, zawierające sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHII-YSFANISND (SEK.W. ID NR:1) do zastosowania jako substancja terapeutyczna.
- 2. Białko według zastrz. 1, znamienne tym, że jest krowim białkiem serwatkowym 39 kDa albo ludzkim białkiem YKL-39.
- 3. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera jedno lub więcej białek, zawierających sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik.
- 4. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 3, znamienna tym, że wspomniane białko jest krowim białkiem serwatkowym 39 kDa albo ludzkim białkiem YKL-39.
- 5. Zastosowanie białka, zawierającego sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQyReGDGSCFDALDRFL-CTHIIYSFANISND (SEKW. ID NR:1) do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej, służącej do wywoływania swoistej tolerancji limfocytów T na homologiczny autoantygen u ssaków cierpiących na niszczenie chrząstki stawowej za pośrednictwem limfocyttów T.
- 6. Zastosowanie według zastrz. 5, znamienne tym, że wspomnianym białkiem jest krowie białko serwatkowe 39 kDa albo ludzkie białko YKL-39.
- 7. Jedno lub więcej białek, zawierających sekwencję aminokwasów, która wykazuje homologię przynajmniej 50% z sekwencją aminokwasów YKLVCYYTSWSQYREGDGSC-FPDALdRfLCTHIIySfANISND (SEKW. ID NR:1) do zastosowania w sposobie wywoływania zapalenia stawów u zwierząt, korzystnie myszy.
- 8. Białka według zastrz. 7, znamienne tym, że są krowimi białkami serwatkowymi 39 kDa albo ludzkimi białkami YKL-39 do zastosowania, jak określono w zastrz. 7.
- 9. Białko, zawierające sekwencję aminokwasów SEKW. ID NR:2, które jest krowim białkiem serwatkowym gp-39 do zastosowania jako substancja terapeutyczna.
- 10. Izolowany DNA kodujący sekwencję aminokwasów SEKW. ID. NR:2.
- 11. Izolowany DNA według zastrz. 10, obejmujący sekwencję DNA według SEKW. ID NR:3.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/634,493 US5843449A (en) | 1996-03-25 | 1996-04-18 | Proteins and novel peptides derived from autoantigen for use in immunotherapy of autoimmune diseases |
| PCT/EP1997/001903 WO1997040149A1 (en) | 1996-04-18 | 1997-04-15 | Autoantigen and proteins structurally related thereto for use in immunotherapy of autoimmune diseases |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL329350A1 PL329350A1 (en) | 1999-03-29 |
| PL187451B1 true PL187451B1 (pl) | 2004-07-30 |
Family
ID=24544023
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97329350A PL187451B1 (pl) | 1996-04-18 | 1997-04-15 | Białka, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie białek i izolowany DNA |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5843449A (pl) |
| EP (1) | EP0904369A1 (pl) |
| JP (1) | JP2000509265A (pl) |
| KR (1) | KR20000005476A (pl) |
| CN (1) | CN1216582A (pl) |
| AU (1) | AU724547B2 (pl) |
| BR (1) | BR9708714A (pl) |
| CA (1) | CA2251584A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ333398A3 (pl) |
| HU (1) | HU221348B1 (pl) |
| NO (1) | NO984835L (pl) |
| NZ (1) | NZ332311A (pl) |
| PL (1) | PL187451B1 (pl) |
| RU (1) | RU2189248C2 (pl) |
| TR (1) | TR199802082T2 (pl) |
| WO (1) | WO1997040149A1 (pl) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5928928A (en) * | 1995-06-07 | 1999-07-27 | Universiteit Van Amsterdam | Human chitinase, its recombinant production, its use for decomposing chitin, its use in therapy or prophylaxis against infection diseases |
| WO2000004917A2 (en) * | 1998-07-23 | 2000-02-03 | Akzo Nobel N.V. | USE OF HC gp-39 IN IMMUNE DISEASES |
| US20050197283A1 (en) * | 1998-10-04 | 2005-09-08 | Vascular Biogenics Ltd. | Compositions containing beta 2-glycoprotein I for the prevention and/or treatment of vascular disease |
| IL126447A (en) * | 1998-10-04 | 2004-09-27 | Vascular Biogenics Ltd | An immune preparation that confers tolerance in oral administration and its use in the prevention and / or treatment of atherosclerosis |
| US20020102581A1 (en) * | 1999-02-19 | 2002-08-01 | Hageman Gregory S. | Diagnostics and therapeutics for ocular disorders |
| US7534605B2 (en) | 1999-06-08 | 2009-05-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | CD44 polypeptides, polynucleotides encoding same, antibodies directed thereagainst and method of using same for diagnosing and treating inflammatory diseases |
| US7011952B2 (en) * | 2000-02-22 | 2006-03-14 | University Of Iowa Research Foundation | Diagnostics and therapeutics for macular degeneration-related disorders |
| JP4764590B2 (ja) * | 2000-04-29 | 2011-09-07 | ユニバーシティー オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション | 黄班変性関連疾患の診断および治療 |
| CN1352087A (zh) * | 2000-11-02 | 2002-06-05 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——人糖蛋白42和编码这种多肽的多核苷酸 |
| GB0105360D0 (en) * | 2001-03-03 | 2001-04-18 | Glaxo Group Ltd | Chimaeric immunogens |
| US7265208B2 (en) * | 2001-05-01 | 2007-09-04 | The Regents Of The University Of California | Fusion molecules and treatment of IgE-mediated allergic diseases |
| US8160020B2 (en) | 2001-06-25 | 2012-04-17 | Airvana Network Solutions, Inc. | Radio network control |
| US8195187B2 (en) | 2001-06-25 | 2012-06-05 | Airvana Network Solutions, Inc. | Radio network control |
| JP2006508014A (ja) * | 2001-07-24 | 2006-03-09 | イエール・ユニバーシテイ | キチナーゼおよびキチナーゼ様分子、ならびに炎症性疾患に関する方法、組成物およびキット |
| RU2220739C1 (ru) * | 2002-08-30 | 2004-01-10 | Гапонюк Петр Яковлевич | Интраназальное средство |
| EP1729805A4 (en) * | 2004-02-25 | 2008-11-26 | Medimmune Inc | METHODS AND COMPOSITIONS RELATED TO CHITINASES AND CHITINASE-MOLECULARS AND MODULATION OF OSTEOCLASTS |
| US8099504B2 (en) | 2005-06-24 | 2012-01-17 | Airvana Network Solutions, Inc. | Preserving sessions in a wireless network |
| WO2007027748A2 (en) * | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Medimmune, Inc. | C/clp antagonists and methods of use thereof |
| US7751835B2 (en) | 2005-10-04 | 2010-07-06 | Airvana, Inc. | Non-circular paging areas |
| US8094630B2 (en) | 2005-12-16 | 2012-01-10 | Airvana Network Solutions, Inc. | Radio frequency dragging prevention |
| US8145221B2 (en) | 2005-12-16 | 2012-03-27 | Airvana Network Solutions, Inc. | Radio network communication |
| US8619702B2 (en) | 2005-12-16 | 2013-12-31 | Ericsson Evdo Inc. | Radio network control |
| US8085696B2 (en) | 2006-07-14 | 2011-12-27 | Airvana Networks Solutions, Inc. | Dynamic modification of route update protocols |
| US8843638B2 (en) | 2007-12-13 | 2014-09-23 | Ericsson Evdo Inc. | Handing off active connections |
| PY09026846A (es) | 2008-08-05 | 2015-09-01 | Novartis Ag | Composiciones y métodos para anticuerpos que se dirigen a la proteína de complemento c5 |
| EP3102701A1 (en) | 2014-02-07 | 2016-12-14 | Novartis AG | Impact of genetic factors on disease progression and response to anti-c5 antibody in geographic atrophy |
| EP3169343B1 (en) | 2014-07-15 | 2020-03-25 | Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Isolated polypeptides of cd44 and uses thereof |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4284623A (en) * | 1979-11-09 | 1981-08-18 | Beck Lee R | Method of treating inflammation using bovine milk |
| JPS56501525A (pl) * | 1979-11-22 | 1981-10-22 | ||
| JPS6323898A (ja) * | 1986-07-16 | 1988-02-01 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | 新規ポリペプチド及びそれをコ−ドするｄｎａ並びにそれらの製法 |
| DE4132005A1 (de) * | 1991-09-26 | 1993-04-01 | Merck Patent Gmbh | Kombination enthaltend wachstumsfaktoren und polyelektrolyte |
| CA2164498C (en) * | 1993-07-09 | 2007-09-11 | Paul A. Price | Assay for ykl-40 as a marker for degradation of mammalian connective tissue matrices |
| AU695883B2 (en) * | 1994-04-08 | 1998-08-27 | Brigham And Women's Hospital | Treatment of autoimmune disease using oral tolerization and/or Th2-enhancing cytokines |
| IL115744A (en) * | 1994-10-27 | 2000-07-16 | Akzo Nobel Nv | Peptides comprising a subsequence of human cartilage glycoprotein - 39 |
-
1996
- 1996-04-18 US US08/634,493 patent/US5843449A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-04-15 RU RU98120519/14A patent/RU2189248C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-04-15 BR BR9708714A patent/BR9708714A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-04-15 TR TR1998/02082T patent/TR199802082T2/xx unknown
- 1997-04-15 PL PL97329350A patent/PL187451B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-04-15 NZ NZ332311A patent/NZ332311A/xx unknown
- 1997-04-15 KR KR1019980708253A patent/KR20000005476A/ko not_active Ceased
- 1997-04-15 CA CA002251584A patent/CA2251584A1/en not_active Abandoned
- 1997-04-15 EP EP97919370A patent/EP0904369A1/en not_active Withdrawn
- 1997-04-15 HU HU9903378A patent/HU221348B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-04-15 AU AU23869/97A patent/AU724547B2/en not_active Ceased
- 1997-04-15 JP JP9537477A patent/JP2000509265A/ja not_active Ceased
- 1997-04-15 CZ CZ983333A patent/CZ333398A3/cs unknown
- 1997-04-15 WO PCT/EP1997/001903 patent/WO1997040149A1/en not_active Ceased
- 1997-04-15 CN CN97193881A patent/CN1216582A/zh active Pending
-
1998
- 1998-10-16 NO NO984835A patent/NO984835L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ332311A (en) | 2000-05-26 |
| CZ333398A3 (cs) | 1999-03-17 |
| HUP9903378A2 (hu) | 2000-02-28 |
| BR9708714A (pt) | 1999-08-03 |
| HUP9903378A3 (en) | 2001-01-29 |
| CA2251584A1 (en) | 1997-10-30 |
| JP2000509265A (ja) | 2000-07-25 |
| RU2189248C2 (ru) | 2002-09-20 |
| KR20000005476A (ko) | 2000-01-25 |
| TR199802082T2 (xx) | 2000-09-21 |
| NO984835D0 (no) | 1998-10-16 |
| US5843449A (en) | 1998-12-01 |
| AU724547B2 (en) | 2000-09-28 |
| CN1216582A (zh) | 1999-05-12 |
| HU221348B1 (en) | 2002-09-28 |
| WO1997040149A1 (en) | 1997-10-30 |
| PL329350A1 (en) | 1999-03-29 |
| EP0904369A1 (en) | 1999-03-31 |
| NO984835L (no) | 1998-12-16 |
| AU2386997A (en) | 1997-11-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL187451B1 (pl) | Białka, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie białek i izolowany DNA | |
| AU743400B2 (en) | Modified TNFalpha molecules, DNA encoding such modified TNFalpha molecules and vaccines comprising such modified TNFalpha molecules and DNA | |
| EP0733065B1 (en) | Novel peptides derived from autoantigen for use in immunotherapy of autoimmune diseases | |
| JPH10327880A (ja) | ヒト・ナトリウム依存性リン酸輸送体（ｉｐｔ−１） | |
| JP2003504026A (ja) | 新規のインターロイキン−１レセプターアンタゴニストおよびその使用 | |
| WO1997040068A1 (en) | Novel peptides suitable for use in antigen specific immunosuppressive therapy | |
| CA2585364A1 (en) | A thymus-specific protein | |
| JP4422330B2 (ja) | 新規な免疫異常性疾患予防・治療用剤 | |
| AU758310B2 (en) | Novel peptides for use in immunotherapy of autoimmune diseases | |
| JP2003521439A (ja) | 末梢単球の増殖を促進するためのｃｄ１３７の使用 | |
| CA2278463A1 (en) | Two human homologues of galectin-5 | |
| WO1998056819A1 (en) | Methods of regulating t cell and macrophage cytokine production, function and pathogenicity | |
| US20040072286A1 (en) | Extracellular matrix protein | |
| HK1002012B (en) | Novel peptides derived from autoantigen for use in immunotherapy of autoimmune diseases | |
| MXPA00008633A (en) | Utilization of cd137 in order to promote the proliferation of peripheral monocytes | |
| MXPA01000789A (en) | Novel peptides for use in immunotherapy of autoimmune diseases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20050415 |