PL201750B1

PL201750B1 - Sposób przygotowania poliwalentnych preparatów fagowych do leczenia zakażeń bakteryjnych

Info

Publication number: PL201750B1
Application number: PL370662A
Authority: PL
Inventors: Beata Weber-Dąbrowska; Marian Mulczyk; Janusz Boratyński; Andrzej Górski; Marzanna Łusiak-Szelachowska; Danuta Syper
Original assignee: Inst Immunologii I Terapii Do
Priority date: 2001-07-18
Filing date: 2002-07-18
Publication date: 2009-05-29
Also published as: PL370662A1

Abstract

1. Sposób otrzymywania multiwalentnego szczepu bakteriofaga, znamienny tym, że: a) gromadzi się zbiór o dostatecznej liczności n różnych szczepów patogenów bakteryjnych określonego rodzaju występujących losowo na danym obszarze, przy czym korzystnie izolowane szczepy bakteryjne są szczepami lekoopornymi, b) gromadzi się dostateczną ilość różnych szczepów bakteriofagów specyficznych wobec przynajmniej jednego szczepu bakterii należącego do danego rodzaju, c) określa się aktywność lityczną zgromadzonego szczepu bakteriofaga wobec każdego zgromadzonego szczepu bakteryjnego, a następnie dla szczepu bakteriofaga oblicza się wartość p, jako stosunek liczby szczepów lizowanych przez dany fag do liczby wszystkich zgromadzonych szczepów bakteryjnych, d) dla uzyskanej wartości p sprawdza się czy liczność n spełnia warunek: PL 201750 B1 pq n a 2 1-α gdzie: q = 1-p d jest stałą nie większą od 0,1, korzystnie nie większą od 10%p, Ziajest zmienną losową o rozkładzie normalnym zależną od pizedziału ufności 1-a, który jest nie mniejszy niż 0.95, e) wybiera się szczep bakteriofaga spełniający kryterium określone w d) i charakteryzujący się wartością p nie mniejszą niż 2/n, korzystnie nie mniejszą niż 0,5. 5. Sposób według zastrz. 1 albo 4, znamienny tym, że multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus występujących w Polsce wyizolowany w etapie e) jest szczep bakteriofaga wybrany spośród S1 (PCM F/00001), S2 (PCM F/00002), S3 (PCM F/00003), S4 (PCM F/00004), S5 (PCM F/00005), S6 (PCM F/00006) oraz S7 (PCM F/00007). 7. Sposób według zastrz. 1 albo 4, znamienny tym, że multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas występujących w Polsce wyizolowany w etapie e) jest szczep bakteriofaga wybrany spośród P1 (PCM F/00008), P2 (PCM F/00009), P3 (PCM F/00010), P4 (PCM F/00011), P5 (PCM F/00012), P6 (PCM F/00013), P7 (PCM F/00014), P8 (PCM F/00015), P9 (PCM F/00016), P10 (PCM F/00017), P11 (PCM F/00018), P12 (PCM F/00019), P13 (PCM F/00020), P14 (PCM F/00021), P15 (PCM F/00022), P16 (PCM F/00023), P17 (PCM F/00024), P18 (PCM F/00025), P19 (PCM F/00026), oraz P20 (PCM F/00027).

Description

Opis wynalazku

Dziedzina wynalazku

Wynalazek dotyczy multiwalentnych szczepów bakteriofagowych, sposobów ich otrzymywania i wykorzystania w leczeniu zakażeń bakteryjnych, zwłaszcza szczepami bakterii lekoopornych.

Stan techniki

Bakteriofagi (fagi) stanowią różnorodną grupę wirusów, których cykl życiowy związany jest wyłącznie z komórką bakteryjną. Bakteriofagi charakteryzują się litycznym lub lizogennym cyklem życiowym. Jako czynniki antybakteryjne przydatne są przede wszystkim bakteriofagi lityczne, które po zakażeniu wrażliwych nań komórek bakteryjnych namnażają się w nich, powodując ich całkowite zniszczenie (lizę), a uwalniające się nowe cząsteczki fagowe atakują i niszczą następne komórki bakteryjne. Proces ten może zachodzić zarówno in vitro jak i in vivo.

Jedną z istotnych cech bakteriofagów jest powszechnie znana wysoka swoistość ich litycznego działania. Cecha ta jest wykorzystywana m.in. w typowaniu różnych gatunków bakterii (patrz przykładowo opisy patentowe GB 2285684, US 5824468, SU 543260, oraz międzynarodowe zgłoszenia patentowe WO 0100786, WO 0109370). Inne znane zastosowania bakteriofagów obejmują: wykorzystywanie bakteriofagów jako narzędzi w biologii molekularnej przydatnych przykładowo do ekspresji i selekcji pożądanych białek (np. opis patentowy US 6027930), stosowanie fagów w ś rodkach sterylizacyjnych i czyszczących (np. opis patentowy EP 0414304, EP 0290295, GB 2253859 oraz międzynarodowe zgłoszenia patentowe WO 9808944, WO 9003122). Zmodyfikowane fagi wykorzystano do produkcji szczepionek (np. WO 9505454). Wykorzystuje się także pewne białka pochodzenia bakteriofagowego (np. EP 0510907, US 5470573, WO 9607329). Metody izolacji bakteriofagów i otrzymywania preparatów fagowych są dobrze znane i ciągle udoskonalane (np. GB 829266, CS 192212, RU 2109055).

Na szeroką skalę fagoterapia wykorzystywana jest już od czasu II wojny światowej w Instytucie Mikrobiologii i Wirusologii Tbilisi (Gruzja). Stosowane są tam pule różnych preparatów fagowych w leczeniu zakaże ń bakteryjnych i w profilaktyce. Dostępne dane wskazują na dużą efektywność fagoterapii. Podobne badania prowadzone są od lat w Polsce, w Laboratorium Bakteriofagowym Instytutu Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk we Wrocławiu, gdzie fagoterapię zakażeń wywołanych lekoopornymi formami bakterii i nie poddających się antybiotykoterapii prowadzi się od ponad 25 lat (patrz: Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1981, 31, 293; Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1983, 31, 267; Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1984, 32, 317; Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1985, 33, 219; Stefan Ślopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1985, 33, 241; Stefan Ś lopek i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 1987, 35, 569; Beata Weber-Dąbrowska i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 2000, 48, 31-37; Beata Weber-Dąbrowska i wsp., Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 2000, 48, 547-551). W ostatnich 14 latach fagoterapią objęto 1473 pacjentów z ropnymi zakażeniami różnych tkanek i narządów wykazując wysoką skuteczność terapii fagowej.

Całkowite ustąpienie objawów chorobowych i powrót do zdrowia zanotowano w 1289 przypadków. Należy podkreślić, że w co najmniej kilkunastu przypadkach swoista fagoterapia stanowiła jedyną możliwość likwidacji zagrażającego życiu zakażenia. Prowadzona terapia dotyczyła indywidualnych pacjentów. Polegała ona na:

a) wyhodowaniu i identyfikacji szczepu bakteryjnego uzyskanego z materiału uzyskanego od pacjenta

b) określeniu wrażliwości szczepu na specyficzne fagi i doborze faga wykazującego najwyższą aktywność lityczną wobec wyhodowanego szczepu.

c) przygotowaniu lizatu faga o wysokiej liczbie cząsteczek fagowych

d) przygotowaniu sterylnego preparatu fagowego do leczenia

Ten sposób postępowania jest dość kosztowny, praco- i czasochłonny. Niekiedy od momentu otrzymania materiału do badań, do wydania gotowych jałowych preparatów fagowych do leczenia upływa 7-10 dni. W pewnych stanach chorobowych taki okres oczekiwania jest zbyt długi. Leczenie fagami według dotychczas stosowanej procedury jest na szerszą skalę niewykonalne. Szczególne problemy stwarzają zakażenia w mukowiscydozie. Jest to genetycznie uwarunkowana choroba układowa polegająca na nieprawidłowej czynności gruczołów śluzowych, usposabiająca do przewlekłych

PL 201 750 B1 chorób oskrzeli i płuc. Wydzielany śluz jest gęsty i lepki co utrudnia usuwanie go drogami naturalnymi (odkrztuszanie). Gromadzenie się i zaleganie śluzu w oskrzelach oraz upośledzenie ich oczyszczania stwarza podatne warunki do zakażeń bakteryjnych prowadzących do przewlekłego zapalenia oskrzeli i zapalenia płuc. Najgroźniejszymi patogenami wywołującymi zakażenia w mukowiscydozie są pałeczki z rodzaju Pseudomonas oraz Staphylococcus aureus. Permanentnie nawracające zakażenia tymi drobnoustrojami prowadzą do poważnych zmian patologicznych w układzie oddechowym i przedwczesnej śmierci. Jedynie nieliczni chorzy przeżywają powyżej 25 lat. Leczenie dostępnymi antybiotykami takich zakażeń zwłaszcza w ostatnich latach stwarza poważne problemy terapeutyczne o zasięgu światowym. Prowadzona bowiem antybiotykoterapia tych zakażeń staje się coraz mniej skuteczna gdyż olbrzymia większość szczepów bakteryjnych wykazuje oporność na wszystkie antybiotyki w tym na antybiotyk ostatniej szansy - wankomycynę. Istnieje zatem pilna potrzeba wprowadzenia do praktyki medycznej alternatywnej metody leczenia uporczywych i bardzo niebezpiecznych zakażeń bakteryjnych.

Cel wynalazku

W ostatnich latach wystę puje masowe szerzenie się szczepów bakteryjnych opornych na wszystkie antybiotyki w tym również na antybiotyk ostatniej szansy wankomycynę. W rezultacie leczenie zakażeń bakteryjnych wywołanych formami lekoopornymi za pomocą antybiotyków jest bezskuteczne. Ten stan stwarza drastyczne problemy terapeutyczne. Istnieje zatem pilna potrzeba wprowadzenia do praktyki medycznej alternatywnej metody leczenia uporczywych zakażeń bakteryjnych.

W związku z powyż szym celem wynalazku jest opracowanie sposobu uzyskiwania multiwalentnego szczepu fagowego, który mógłby być wykorzystany do przygotowywania preparatów o gwarantowanej skuteczności do leczenia zakażeń bakteryjnych, bez konieczności każdorazowego indywidualnego doboru faga leczniczego. W szczególnej realizacji celem wynalazku jest zaprezentowanie sposobu pozwalającego na uzyskiwanie wysoce oczyszczonych preparatów fagowych, zwłaszcza pozbawionym endotoksyn.

Szczególnym celem wynalazku jest uzyskanie wieloważnych preparatów fagowych, które mogłyby być skutecznie wykorzystane do leczenia zakażeń bakteryjnych w mukowiscydozie, bez konieczności każdorazowego indywidualnego doboru fagów do leczenia.

Istota wynalazku

Przedmiotem niniejszego wynalazku jest sposób otrzymywania multiwalentnego szczepu bakteriofaga charakteryzujący się tym, że: a) gromadzi się zbiór o dostatecznej liczności n różnych szczepów patogenów bakteryjnych określonego rodzaju występujących losowo na danym obszarze, przy czym korzystnie izolowane szczepy bakteryjne są szczepami lekoopornymi, b) gromadzi się dostateczną ilość różnych szczepów bakteriofagów specyficznych wobec przynajmniej jednego szczepu bakterii należącego do danego rodzaju, c) określa się aktywność lityczną zgromadzonego szczepu bakteriofaga wobec każdego zgromadzonego szczepu bakteryjnego, a następnie dla szczepu bakteriofaga oblicza się wartość p, jako stosunek liczby szczepów lizowanych przez dany fag do liczby wszystkich zgromadzonych szczepów bakteryjnych, d) dla uzyskanej wartości p sprawdza się czy liczność n spełnia warunek:

pq ^{n a}

1-α gdzie: q = 1-p d jest stałą nie większą od 0,1, korzystnie nie większą od 10%p, z_1-a jest zmienną losową o rozkładzie normalnym zależną od przedziału ufności 1-α, który jest nie mniejszy niż 0.95,

e) wybiera się szczep bakteriofaga spełniający kryterium określone w d) i charakteryzujący się wartością p nie mniejszą niż 2/n, korzystnie nie mniejszą niż 0,5.

Dla każdego z wyizolowanych fagów określa się zakres jego aktywności litycznej wobec populacji szczepów bakterii chorobotwórczych występujących na danym obszarze. W tym celu należy zgromadzić dostatecznie liczny zbiór losowo wybranych szczepów lekoopornych bakterii. W odniesieniu do ustalonej dużej próbki bakterii o liczności n (w opisywanym przykładzie n wynosiło 845 i 880, odpowiednio dla lekoopornych szczepów Pseudomonas i Staphylococcus izolowanych z terenu Polski) obliczamy częstość występowania sukcesu, czyli stosunek liczby szczepów lizowanych przez

PL 201 750 B1 danego faga do liczby wszystkich szczepów przebadanych. Tą częstość traktujemy jak prawdopodobieństwo sukcesu p. Prawdopodobieństwo porażki q wynosi q =1 - p.

Kluczowe jest ustalenie liczności n jaką powinna mieć próbka, którą należy pobrać, aby można było ją uznać za reprezentatywną dla populacji generalnej szczepów danego rodzaju (np. Staphylococcus, Pseudomonas).

W tym celu ustala się kryterium reprezentatywności:

P(\ν - p\(d) = P(- d(v - pd) = 1 - α

Prawdopodobieństwo tego, że moduł różnicy między częstością z próbki ν a prawdopodobieństwem sukcesu p jest mniejszy od z góry zadanej wartości d wynosi 1-α, co odpowiada poziomowi ufności 1-α. Wartość 1-α ustala się zazwyczaj na 0,95 lub 0,98.

Natomiast liczność próbki n powinna spełniać warunek:

pq n >!-2z d²

1-α gdzie z_1-a jest zmienną losową o rozkładzie normalnym. Dla 1-a = 0.95, z_1-a =1.96, a dla 1-a = 0.98, zi_-a = 2.33

W oparciu o tak ustalone kryterium oraz wartość częstości p uzyskaną dla charakteryzowanego faga, przy założeniu rozsądnych wartości d i przedziału ufności 1-a, możliwe jest zweryfikowanie liczności n użytej do określania zakresu aktywności litycznej danego faga i stwierdzenie, czy uzyskany dla tego n zakres aktywności litycznej, przy założonych wartościach d i 1-a, może być uznany za prawdziwy wobec populacji generalnej szczepów bakterii danego rodzaju. Korzystnie w etapie b) szczep bakteriofaga izoluje się z próby pochodzącej ze środowiska, poprzez sączenie przez filtry membranowe o wielkości por 0,2-0,4 μm, do uzyskanego przesączu dodaje się podłoże odżywcze i miesza się z hodowlą bulionową bakterii określonego rodzaju, inkubuje się w temp. około 37°C przez około 1 godzinę, pobiera się porcję zawiesiny i rozciera na płytkach z podłożem stałym, prowadzi się inkubację w około 37°C przez około od 2 do 24 godzin, izoluje się próbkę podłoża obejmującą pojedynczą łysinkę, przenosi się ją do hodowli bulionowej bakterii określonego rodzaju i inkubuje się do czasu rozjaśnienia się hodowli, a uzyskany lizat przesącza się przez filtry membranowe o wielkości por 0,2-0,4 μm otrzymując preparat bakteriofagowy, przy czym korzystnie wysiew na podłoże stałe i reizolację łysinki powtarza się 5-krotnie. Również korzystnie w etapie c) wysiewa się na odpowiednie podłoże stałe badany szczep bakteryjny, na które nanosi się porcję preparatu bakteriofagowego uzyskanego w etapie b), inkubuje się w temp. około 37°C przez ok. 4 godziny po czym pozostawia w temp. około 4°C przez około od 2 do 24 godzin, przy czym o aktywności litycznej szczepu bakteriofagowego świadczy pojawienie się przynajmniej pojedynczych łysinek.

Korzystnie prowadzi się dalsze oczyszczanie lizatu, zwłaszcza z endotoksyn, przy czym mieszaninę zawierającą bakteriofagi kontaktuje się ze złożem zawierającym celulozę lub jej częściowo estryfikowaną pochodną następnie przemywa się roztworem usuwającym zanieczyszczenia, zwłaszcza endotoksyny, po czym wypłukuje się oczyszczone bakteriofagi. Korzystnie, elucję endotoksyn prowadzi się wodą, roztworem substancji niedysocjującej lub roztworem soli o stężeniu nie większym niż 0,1 M, korzystnie buforowanym. Równie korzystnie elucję frakcji bakteriofagowej prowadzi się roztworem substancji niedysocjującej lub dowolnym buforem lub roztworem soli o stężeniu wyższym od 0,05 M, korzystnie buforowanym. Równie korzystnie elucję endotoksyn i bakteriofagów prowadzi się w temperaturze od -25°C do 100°C. Równie korzystnie elucję endotoksyn i bakteriofagów prowadzi się wykorzystując wodny roztwór soli zawierający rozpuszczalnik organiczny. Równie korzystnie rozpuszczalnik organiczny został wybrany z grupy zawierającej dimetylosulfotlenek, dwumetyloformamid, izopropanol i aceton, a jako złoże stosuje się celulozę częściowo estryfikowaną kwasem organicznym lub nieorganicznym. Korzystnie, jako złoże stosuje się celulozę częściowo estryfikowaną kwasem octowym, azotowym, siarkowym lub fosforowym, w szczególności jako złoże stosuje się celulozę w której estryfikowane jest od 0,01% do 5% cząsteczek glukozy, korzystnie od 0,25% do 1% cząsteczek glukozy, najkorzystniej od 0,5% do 1% cząsteczek glukozy.

Korzystnie bakteryjne szczepy patogenne należą do rodzaju Staphylococcus albo Pseudomonas.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest środek do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym przez patogeny bakteryjne zawierający czynnik aktywny i ewentualnie farmaceutycznie doPL 201 750 B1 puszczalny nośnik charakteryzujący się tym, że jako czynnik aktywny zawiera multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii tego rodzaju otrzymany sposobem według wynalazku.

Korzystnie środek według wynalazku charakteryzuje się tym, że jako multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus zawiera przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród S1 (PCM F/00001), S2 (PCM F/00002), S3 (PCM F/00003), S4 (PCM F/00004), S5 (PCM F/00006), S6 (PCM F/00006) oraz S7 (PCM F/00007), korzystnie fagi S1, S2, oraz S4 albo S5. Korzystnie, środek według wynalazku służy do leczenia lub zapobiegania infekcjom występującym u chorych na mukowiscydozę i jako multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus zawiera przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród F/00002, F/00004, F/00007.

Korzystnie środek według wynalazku charakteryzuje się tym, że jako multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas zawiera przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród P1 (PCM F/00008), P2 (PCM F/00009), P3 (PCM F/00010), P4 (PCM F/00011), P5 (PCM F/00012), P6 (PCM F/00013), P7 (PCM F/00014), P8 (PCM F/00015), P9 (PCM F/00016), P10 (PCM F/00017), P11 (PCM F/00018), P12 (PCM F/00019), P13 (PCM F/00020), P14 (PCM F/00021), P15 (PCM F/00022), P16 (PCM F/00023), P17 (PCM F/00024), P18 (PCM F/00025), P19 (PCM F/00026), oraz P20 (PCM F/00027), korzystnie fagi P7, P20 i P6. Korzystnie środek według wynalazku służy do leczenia lub zapobiegania infekcjom występującym u chorych na mukowiscydozę i jako multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas zawiera przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród F/00010, F/00013, F/00018.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie multiwalentnego szczepu bakteriofaga otrzymanego sposobem według wynalazku do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym przez patogeny bakteryjne.

Korzystnie do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym przez bakterie należące do rodzaju Staphylococcus stosuje się przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród S1 (PCM F/00001), S2 (PCM F/00002), S3 (PCM F/00003), S3 (PCM F/00003), S4 (PCM F/00004), S5 (PCM F/00006), S6 (PCM F/00006) oraz S7 (PCM F/00007), korzystnie fagi S1, S2, oraz S4 albo S5. Korzystnie do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym u chorych na mukowiscydozę przez bakterie należące do rodzaju Staphylococcus stosuje się przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród F/00002, F/00004, F/00007.

Równie korzystnie do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym przez bakterie należące do rodzaju Pseudomonas stosuje się przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród P1 (PCM F/00008), P2 (PCM F/00009), P3 (PCM F/00010), P4 (PCM F/00011), P5 (PCM F/00012), P6 (PCM F/00013), P7 (PCM F/00014), P8 (PCM F/00015), P9 (PCM F/00016), P10 (PCM F/00017), P11 (PCM F/00018), P12 (PCM F/00019), P13 (PCM F/00020), P14 (PCM F/00021), P15 (PCM F/00022), P16 (PCM F/00023), P17 (PCM F/00024), P18 (PCM F/00025), P19 (PCM F/00026), oraz P20 (PCM F/00027), korzystnie fagi P7, P20 i P6. Korzystnie do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym u chorych na mukowiscydozę przez bakterie należące do rodzaju Pseudomonas stosuje się przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród F/00010, F/00013, F/00018.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus wybrany spośród S1 (PCM F/00001), S2 (PCM F/00002), S3 (PCM F/00003), S3 (PCM F/00003), S4 (PCM F/00004), S5 (PCM F/00006), S6 (PCM F/00006) oraz S7 (PCM F/00007), korzystnie spośród S1, S2, S4 oraz S5.

Przedmiotem wynalazku jest także multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas wybrany spośród P1 (PCM F/00008), P2 (PCM F/00009), P3 (PCM F/00010), P4 (PCM F/00011), P5 (PCM F/00012), P6 (PCM F/00013), P7 (PCM F/00014), P8 (PCM F/00015), P9 (PCM F/00016), P10 (PCM F/00017), P11 (PCM F/00018), P12 (PCM F/00019), P13 (PCM F/00020), P14 (PCM F/00021), P15 (PCM F/00022), P16 (PCM F/00023), P17 (PCM F/00024), P18 (PCM F/00025), P19 (PCM F/00026), oraz P20 (PCM F/00027), korzystnie spośród P7, P20 oraz P6. W badaniach wykorzystano własną kolekcję fagów aktywnych wobec gatunków bakterii będących najczęstszymi czynnikami etiologicznymi zakażeń bakteryjnych u ludzi. Opisywane przykłady wykonania obejmują multiwalentne bakteriofagi działające litycznie na metycylinooporne szczepy gronkowca złocistego (Staphylococcus aureus) i pałeczki ropy błękitnej (Pseudomonas aeru6

PL 201 750 B1 ginosa), w szczególności występujące u chorych na mukowiscydozę. Gatunki te są obecnie przyczyną ciężkich zakażeń powodujących wysoką śmiertelność.

Zalety wynalazku

Wprowadzenie do lecznictwa poliwalentnych preparatów fagowych zawierających fagi multiwalentne uzyskane sposobem według wynalazku to duży postęp w zwalczaniu zakażeń bakteryjnych nie poddających się leczeniu antybiotykami. Z nową technologią wiążą się również pewne korzyści ekonomiczne. Pozwala ona znaczne zmniejszyć koszta materiałowe i skrócić czas od pobrania materiału do badań, do chwili uzyskania preparatu fagowego do leczenia. Dzięki temu, preparat fagowy będzie oczekiwał na pacjenta a nie pacjent na przygotowanie indywidualnego preparatu fagowego.

Szeroki zakres litycznego działania preparatów fagowych złożonych z kilku fagów multiwalentnych uzyskanych sposobem według wynalazku jest bardzo ważną cechą z punktu widzenia zastosowania ich w leczeniu zakażeń bakteryjnych. Wiadomo bowiem, że w populacji bakterii mogą pojawiać się formy oporne na bakteriofagi z częstością około 1x10^-7. W obecności dwóch fagów częstość powstawania takich mutantów wynosi 1x10^-14 a przy trzech fagach tylko 1x10^-21. W takim układzie problem oporności szczepów bakteryjnych na fagi prawie nie istnieje.

Na szczególne podkreślenie zasługuje duża aplikacyjność przykładowych preparatów złożonych z fagów multiwalentnych. Będą one mogły być powszechnie wykorzystane w praktyce medycznej i pozwolą na skuteczne zwalczanie groźnych zakażeń bakteryjnych. Moż liwe jest takż e wykorzystywanie fagów według wynalazku w przygotowywaniu preparatów do stosowania zewnętrznego, wykorzystywanych przykładowo do leczenia i zapobiegania zakażeniom dermatologicznym. Stwierdzono także, że doustne podawanie lizatów fagowych według wynalazku zwiększa odporność na przyszłe zakażenia bakteryjne. W pewnych przypadkach fagoterapia będzie mogła być stosowana łącznie z antybiotykoterapią .

Poliwalentne preparaty fagowe zastosowane w leczeniu zakażeń bakteryjnych okazały się wysoce efektywne. Szczególną skuteczność obserwowano w leczeniu groźnej posocznicy (88% wyleczeń) oraz w leczeniu zakażeń u chorych na mukowiscydozę.

Spis figur

Figura 1 przedstawia wyniki analizy statystycznej uzyskane dla fagów S1-S7.

Figura 2 przedstawia wyniki analizy statystycznej uzyskane dla fagów P1-P20.

Figura 3 przedstawia wyniki analizy statystycznej skuteczności wobec szczepów należących do rodzaju Staphylococcus izolowanych od chorych na mukowiscydozę uzyskane dla wybranych szczepów fagowych.

Figura 4 przedstawia wyniki analizy statystycznej skuteczności wobec szczepów należących do rodzaju Pseudomonas izolowanych od chorych na mukowiscydozę uzyskane dla wybranych szczepów fagowych.

Dla lepszego zrozumienia istoty wynalazku została ona zilustrowana poniższymi przykładami.

P r z y k ł a d 1. Izolacja bakteriofagów

Bakteriofagi Staphylococcus i Pseudomonas zostały wyizolowane ze ścieków miejskich. Ścieki poddawano sączeniu przez filtry membranowe o wielkości por 0,2-0,4 μm zatrzymujące bakterie a przepuszczające bakteriofagi. Do uzyskanego przesączu dodawano skoncentrowanego płynnego podłoża odżywczego i mieszano różne rozcieńczenia przesączu z młodą hodowlą bulionową bakterii (Staphylococcus aureus lub Pseudomonas aeruginosa). Próbki inkubowano w temp. 37°C przez 1 godzinę. Po tym czasie z każdej próbki pobierano pipetą 0,2 ml zawiesiny i rozcierano na płytkach z agarem odżywczym za pomocą bagietki szklanej. Po całonocnej inkubacji w 37°C, w przypadku obecności poszukiwanego faga na płytkach posianych odpowiednim rozcieńczeniem przesączu zawierającego młodą hodowlę bakteryjną obserwowano jednolity (mgławicowy) wzrost bakterii i oddzielnie leżące przezroczyste małe pola tzw. łysinki, które zawierały zwykle kilka milionów cząstek fagowych. Pojedynczą łysinkę wraz z agarem wycinano za pomocą ezy izolacyjnej, przenoszono do świeżej hodowli bulionowej bakterii a następnie inkubowano do czasu rozjaśnienia się hodowli. Po przesączeniu przez filtry membranowe o wielkości por 0,2-0,4 μm zatrzymujące pozostałe jeszcze w lizacie bakterie w przesączu znajdował się tylko bakteriofag. Wysiewy na podłoża agarowe różnych rozcieńczeń uzyskanego faga z odpowiednimi bakteriami i reizolację łysinek prowadzono 5-krotnie co pozwoliło na uzyskanie czystej linii fagowej.

P r z y k ł a d 2. Oznaczanie wrażliwości szczepów Staphylococcus aureus na specyficzne dla tych drobnoustrojów bakteriofagi.

PL 201 750 B1

Wrażliwość określano na podłożu opisanym przez Wahla. Płytki z tym podłożem wysuszone w temp. 37°C przez 30 min. pokrywano młodą 4-godziną wstrząsaną hodowlą bulionową Staphylococcus aureus, nadmiar zawiesiny odpipetywowano i ponownie suszono przez 30 min. w temp. 37°C. Na jednej płytce podzielonej na 6 segmentów określano wrażliwość badanego szczepu na 6 różnych ale specyficznych bakteriofagów. Na powierzchnię każdego segmentu nanoszono 1 kroplę bakteriofaga rozcieńczonego 1/10. Płytki inkubowano w cieplarce w temp. 37°C przez ok. 4 godziny po czym pozostawiano je w lodówce do następnego dnia. W przypadku wysokiej wrażliwości szczepu na określonego faga na podłożu pokrytym jednolitym wzrostem bakterii w miejscu naniesienia faga obserwowano łyse przezroczyste pola będące wynikiem całkowitego zniszczenia komórek bakteryjnych (lizy). Mniejsza wrażliwość szczepu manifestowała się pojawianiem się pojedynczych łysinek.

P r z y k ł a d 3. Oznaczanie wrażliwości szczepów Pseudomonas aeruginosa na specyficzne dla tych drobnoustrojów bakteriofagi.

Sposób określania wrażliwości był podobny do opisanego w przykładzie 2. W tym przypadku jednak podłożem stałym był agar odżywczy z dodatkiem buforu fosforanowego a okres inkubacji płytek z naniesionym fagem wynosił 5 godzin.

P r z y k ł a d 4. Wybór fagów o najszerszym spektrum działania wobec szczepów Staphylococcus i Pseudomonas - uzyskiwanie multiwalentnych szczepów fagowych.

Bakteriofagi wyizolowano metodą opisaną w przykładzie 1. Określono wrażliwość 845 lekoopornych szczepów klinicznych różnych gatunków Staphylococcus izolowanych z terenu całej Polski na fagi z kolekcji bakteriofagów specyficznych wobec Staphylococcus oraz wrażliwość 880 lekoopornych szczepów klinicznych różnych gatunków Pseudomonas na fagi z kolekcji bakteriofagów specyficznych wobec Pseudomonas.

Analiza wrażliwości obu grup szczepów na swoiste bakteriofagi pozwoliła na wyselekcjonowanie fagów o nieoczekiwanie wysokiej aktywności i szerokim spektrum działania litycznego. Fagi te przedstawiono w tabeli 1 i 2.

T a b e l a 1. Fagi Staphylococcus o wysokiej aktywności litycznej zdeponowane w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów (PCM), Wrocław, Polska.

OZNACZENIE FAGA	POLSKA KOLEKCJA MIKROORGANIZMÓW (PCM) NUMER DOSTĘPU DEPOZYTU
S1	F/00001
S2	F/00002
S3	F/00003
S4	F/00004
S5	F/00005
S6	F/00006
S7	F/00007

T a b e l a 2. Fagi Pseudomonas o wysokiej aktywności litycznej zdeponowane w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów (PCM), Wrocław, Polska.

OZNACZENIE FAGA	POLSKA KOLEKCJA MIKROORGANIZMÓW (PCM) NUMER DOSTĘPU DEPOZYTU
1	2
P1	F/00008
P2	F/00009
P3	F/00010
P4	F/00011
P5	F/00012
P6	F/00013

PL 201 750 B1 cd. tabeli 2

1	2
P7	F/00014
P8	F/00015
P9	F/00016
P10	F/00017
P11	F/00018
P12	F/00019
P13	F/00020
P14	F/00021
P15	F/00022
P16	F/00023
P17	F/00024
P18	F/00025
P19	F/00026
P20	F/00027

Wyniki uzyskane dla fagów S1-S7 oraz P1-P20 poddano analizie statystycznej w celu określenia, czy uzyskane dla poszczególnych fagów wartości p mogą być uznane za prawdziwe dla populacji generalnej odpowiednich rodzajów bakterii. Rezultaty tych badań przedstawiono na figurach 1 i 2. Wyliczone wartości n były w przypadku większości bakteriofagów niższe niż liczności badanych próbek szczepów bakteryjnych, co sugeruje, że uzyskane zakresy spektrum litycznego są prawdziwe przynajmniej wobec szczepów klinicznych występujących na terenie Polski. W związku z tymi wynikami fagi zgromadzone w Tabeli 1 i 2 można uznać za fagi multiwalentne według wynalazku.

Nieoczekiwanie, w przypadku fagów Staphylococcus, 3 spośród 7 najbardziej aktywnych, tj. fagi S1, S2, oraz S4 albo S5, działa litycznie na 95% badanych szczepów Staphylococcus. Również 3 spośród wybranych 21 fagów Pseudomonas tj. fagi P7, P20 i P6, działają litycznie na 87% badanych szczepów Pseudomonas.

Jako „określony obszar występowania patogenów bakteryjnych”, jak to zdefiniowano w istocie wynalazku, można też uznać chorych na mukowiscydozę. Badając patogeny występujące w tej niszy ekologicznej wykorzystano 137 szczepów bakteryjnych w tym 84 zostało zidentyfikowanych jako Pseudomonas i 53 jako S. aureus. Wszystkie szczepy izolowano z materiałów pochodzących od chorych na mukowiscydozę z terenu całej Polski. Analiza wrażliwości badanych szczepów na fagi Pseudomonas i S. aureus pozwoliła na wyselekcjonowanie fagów o najwyższej aktywności litycznej i najszerszym spektrum działania. Nieoczekiwanie, w przypadku fagów Pseudomonas, 3 spośród 21 aktywnych fagów tj, F/00010, F/00013, F/00018 działają litycznie na 75% badanych szczepów Pseudomonas. (prawdopodobieństwo sukcesu patrz figura 3, przy czym fag 3 = F/00010, fag 6 = F/00013, fag 11 = F/00018). Spośród wybranych fagów Staphylococcus 3 fagi: F/00002, F/00004, F/00007 działają litycznie na 98% szczepów Staphylococcus. (prawdopodobieństwo sukcesu patrz figura 4, przy czym fag 1 = F/00002, fag 3 = F/00004, fag 4 = F/00007).

P r z y k ł a d 5. Namnażanie fagów Staphylococcus i fagów pałeczek Gram ujemnych, otrzymywanie lizatów fagowych.

Do młodej 4 godzinnej hodowli na bulionie z dodatkiem glukozy zawierającej bakterie Staphylococcus aureus (faza logarytmiczna) dodawano ok. 5% lizatu fagowego, probówki lub butle umieszczano na wytrząsarce i inkubowano przez 3 godziny w 37°C. Po wystąpieniu przejaśnienia hodowli (liza) próbki były pozostawiane w chłodni do następnego dnia. Celem usunięcia pozostałych niezlizowanych komórek bakteryjnych otrzymane lizaty sączono przez filtry membranowe o wielkości 0,2-0,4 μm. Koncentrację żywych cząstek fagowych określano metodą dwuwarstwową Gratii. Kontrolę stanowiła hodowla inkubowana bez dodatku lizatu fagowego.

PL 201 750 B1

Namnażanie fagów pałeczek Gram ujemnych (Pseudomonas). Do namnażania fagów Pseudomonas stosowano wodę peptonową. Do młodej 4 godzinnej hodowli Pseudomonas aeurginosa dodawno 5% lizatu fagowego i po umieszczeniu probówek lub butli na wytrząsarce próbki inkubowno przez 5 godzin w 37°C. Po rozjaśnieniu się hodowli próbki pozostawiano do następnego dnia w lodówce, po czym sączono przez filtry membranowe o wielkości por jak wyżej. Liczbę żywych cząstek fagowych w lizacie określano metodą Gratii. Bulionowe jałowe lizaty fagowe wykazują długotrwałą aktywność lityczną. Przechowywane w chłodni zachowują żywotność przez kilka a w niektórych przypadkach nawet kilkanaście lat.

P r z y k ł a d 6. Przygotowywanie i stosowanie poliwalentnych preparatów fagowych

Bulionowe jałowe lizaty uzyskane sposobem opisanym w przykładzie 5 pochodzące z wybranych fagów o szerokim spektrum działania litycznego z przykładu 4, lub ich zagęszczone lub poddane dalszemu oczyszczeniu (patrz kolejny przykład) formy, posłużyły do przygotowywania poliwalentnych preparatów fagowych.

Przykładowy poliwalentny preparat fagów Staphylococcus stanowi mieszaninę zawierającą równe objętości lizatów fagów S1, S2, oraz S4 albo S5, lub pochodnych tych lizatów. W przypadku zakażeń wywołanych przez Staphylococcus u chorych na mukowiscydozę należy stosować preparaty z fagów F/00002, F/00004, F/00007.

Przykładowy poliwalentny preparat fagów Pseudomonas stanowi mieszaninę zawierającą równe objętości lizatów fagów P7, P20 i P6, lub pochodnych tych lizatów. W przypadku zakażeń wywołanych przez Pseudomonas u chorych na mukowiscydozę należy stosować preparaty z fagów F/00010, F/00013, F/00018. Preparaty podawano doustnie 3 razy dziennie, w ilości odpowiadającej 10 ml lizatu, 30 minut przed posiłkiem, po uprzednim zneutralizowaniu soków żołądkowych (np. przez preparatem Gell Alumini phosphorici, sodę lub wodę Vichy). W przypadku podawania bezpośrednio do rany preparaty aplikowano 3 razy na dobę. W przypadku podawania miejscowego nie należy przemywać rany środkami odkażającymi, które mogłyby doprowadzić do inaktywacji fagów. W razie potrzeby, rany przemywano sterylną pożywką lub roztworem fizjologicznym. W pewnych przypadkach fagoterapia może być stosowana łącznie z antybiotykoterapią. Poliwalentne preparaty fagowe zastosowane w leczeniu zakażeń bakteryjnych okazały się wysoce efektywne. Szczególną skuteczność obserwowano w leczeniu groźnej posocznicy (88% wyleczeń) oraz zakażeń występujących u chorych na mukowiscydozę.

P r z y k ł a d 7. Dalsze oczyszczanie preparatów bakteriofagowych; usuwanie endotoksyn z mieszaniny zawierającej bakteriofagi.

W niektórych zastosowaniach medycznych czy też drogach podawania (np. podawanie dożylne) pożądane jest posiadanie wysoce oczyszczonych preparatów bakteriofagowych, w szczególności pozbawionych endotoksyn bakteryjnych. W sposobie według wynalazku wykorzystano powinowactwo bakteriofagów do złoża zawierającego celulozę lub korzystnie jej estryfikowane pochodne. W przykładowej realizacji wykorzystano komercyjnie dostępną siarczanową pochodną celulozy cechująca się niskim stopniem estryfikacji (8 mikromoli/ml żelu). Złoże to zastosowano do usuwania endotoksyn z mieszaniny zawierającej bakteriofagi. Po dopłukaniu złoża i usunięciu endotoksyn, następnym etapem oczyszczania jest elucja zaadsorbowanych bakteriofagów.

ml złoża zawierającego siarczanową pochodną celulozy wypełniono sterylną kolumnę chromatograficzną. Wypływ złoża z kolumny uniemożliwiono wyściełając dolną część kolumny watą szklaną moczoną w 70% etanolu.

Przygotowano następujące bufory eluujące:

Bufor l: 0,01 M bufor fosforanowy pH 7,6;

Bufor II: 0,01 M bufor fosforanowy pH 7,6 zawierający 1 M chlorek sodowy.

Sole wchodzące w skład eluentu wyprażono przez 1 godzinę w temperaturze 145°C.

Roztwory sporządzono wykorzystując apyrogenną wodę destylowaną. Przed chromatografią 1 ml złoża wypełniającego kolumnę chromatograficzną przemyto 5 ml 0,01 M buforu fosforanowego o pH 7,6, a następnie 5 ml 0,01 M buforu fosforanowego o pH 7,6 zawierającego 1 M chlorek sodu.

Kolumnę przygotowano do właściwej chromatografii przemywając ją 10 ml 0,01 M buforu fosforanowego pH 7,6.

Usuwanie endotoksyn przeprowadzono wykorzystując wysokocząsteczkową frakcję otrzymaną w procedurze sączenia molekularnego na Sepharozie 4B zagęszczonego lizatu bakteriofagowego Ps F-8. 0,2 ml mieszaniny bakteriofagów i endotoksyn naniesiono na kolumnę chromatograficzną zawierającą 1 ml złoża zawierającego siarczanową pochodną celulozy. Zbierano frakcje o objętości 0,2 ml.

PL 201 750 B1

Frakcję 1 eluowano 3 ml buforu l. W tych warunkach wypływały z kolumny niezwiązane endotoksyny. Frakcję drugą eluowano buforem II. Frakcja II zawierała oczyszczone bakteriofagi.

Bilans jednostek endotoksyny w frakcjach:

Materiał poddawany chromatografii na złożu zawierającym siarczanową pochodną celulozy zawierał 2500 jednostek endotoksyny/ml. Frakcja eluowana buforem l zawierała 600-1000 jednostek endotoksyny/ml a frakcja eluowana buforem II zawierała bakteriofagi pozbawione endotoksyn (około 1 jednostka/ml). Zawartość endotoksyny w preparatach bakteriofagowych oznaczano wykorzystując metodę żelową firmy Charles River Endosafe, Charleston, USA.

ΒΡ/Α/Π/Ϊ2 strona 14

TRAKTAT BUDAPESZT AŃSKIO MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAh ul,R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POŚWIADCZENIE W PRZYPADKU DEPOZYTU POCZĄTKOWEGO ·»πη4τΐΜ 1

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: SI	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00001
II. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mdcroorganizniu określonego w pkt.1 dołączony jest: U opis naukowy ΓχΙ - proponowane oznaczenie taksonomiczne Siphoviridae SI19 . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
ΙΠ. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I, (Data depozytu początkowego)¹ 18.07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY '
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): ^Data>?/.

Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, Laka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz EP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

BP/A/H/12 strona 24

TRAKTAT Hf mAPFSTTAKTSKT Π XjTTHnTVTJA>OnOWVM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN . n ui_ · ui.n.neigia 53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie 2 art 10.2 przez

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA 1 ADRES STRONY. DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOI^g^MKROORGANIZMÓW: Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 10.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt II, była sprawdzona w 1.09.2001 ². W tym dniu badany mikroorganizm był El· żywy Π’ · 1—1 me żywy

¹ Wskaż datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią datę.

W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krżyżykbm odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/ΑΉ/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrodaw	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data:

⁴ Wypełnij^w przypadku gdy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu byty ujemne.

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKIO MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO ILARZ MIĘDZYNARODOWY

POŚWIADCZENIE W PRZYPADKU DEPOZYTU POCZĄTKOWEGO wydawane zgodnie z art 7.1 przez

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: S2	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/OODG2
U. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: □ opis naukowy ί^ν 1 proponowane oznaczenie taksonomiczne uśpi lumiuac ou . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
4ΠΙ. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie L (Datadepozytu początkowego)¹ 19.07,2001 ·
IV, MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrociaw	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y):

¹ Tam gdzie ma zastosowanie .artykuł €.4 (d) traktatu, laka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztndskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy,

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/ΑΖΠ/12 strona 24

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKIO MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul,R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10.2 przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I, DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ^Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00002 Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 18.07.2001
ΠΙ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. II, była sprawdzona w 1.09.2001 ²·^w dni^u badany mikroorganizm był OD³ żywy Cl· nie iywy

W przypadkach określonych w an. 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

BP/AOT12 Strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
N azwa: P olska Kolekcja Mikroo rganizmów (PCM) A Tmiwiimnlrtrii ł TP^rannT^rtiwiJlHcTJllnfll a~aaaa*>i»< UteMJ SUS · ·-»·»!« >· «r »»’ łw>»T——’J Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (vY 2cx?/

* Wypełnij w przypadku gdy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu były ujemne.

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

BP/A/H/12 strona 14

TRAKTAT BUD ARESZTAŃSKIO MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunolonii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weipla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO; S3	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/OOD03
11. OPIS NAUKOWY ULUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.l dołączony jest: □ opis naukowy - \|_x i 1_1 proponowane oznaczenie taksonomiczne Siphoviridae SI19 . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie L Pata depozytu początkowego)¹ 18.07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa; Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y) i Data: /{a, f 7^ '

¹ Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest data otrzymania mikroorganizmu Drzez międzynarodowy orean depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1 aP/A/n/12 strona 24

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKJ O MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10U przez

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA 1 ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

i. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: i_nstytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ^Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00003 Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 1S.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. 11, była sprawdzona w 1.09.2001 . w tym dniu badany mikroorganizm był Ξ³ żywy EU³ nieżywy

wanitz oaię nepozyiu puwąLKowego iuo, gay ooKonano nowego depozytu, oąaz przeniesienia najświeższą odpowiednią datę.

W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (u) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. RudoUh Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM łub autotyzowaną (e) osobę (y): Data: ot)

⁴ Wypełnij w przypadku gdy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu były ujemne.

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

ΒΡ,Ά/Π/12 strona Η

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY instytut Immunologii i 'erapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: 54	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/0D004
U. OPIS NAUKOWY PLUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
□o mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: □ opis naukowy I χ I 1 1 proponowane oznaczenie taksonomiczne Siphoyiridae SI10 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
Ul. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie!. (Data depozytu początkowego)¹ 19.D7.2QO1
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk uL Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data:

¹ Tam gdzie ma zastosowanie .artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztaóskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka dala jest dalą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKIO MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazara: instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej FAN ^Atłręs: ul. R. Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez; ΒΛΤ Cl/ λ ΤΓΛΥΤ > ηντίΛΛηρ* αλ.ττ»τύ r. Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹; 10.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt IL była sprawdzona ^w 1.05.2001 . w tym dniu badany mikroorganizm był 0’ im 1_1’ nietywy

Wskaż datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią datę.

’ W przypadkach określonych w arL 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności, ' Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat.

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/ΑΛΙ/12 strona 15

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ui. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): ^Data:

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKIO MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

BP/A/H/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PA1 ul.R.Weigla 12 53—114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
udnośtuk identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO; S5	Numer akcesyjny nadany przez; POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00005
U. OPIS NAUKOWY MLUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest L 1 opis naukowy Γχΐ . . 1—1 proponowane oznaczenie taksonomiczne 5iphoviridae 5119 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie L (Data depozytu początkowego)¹ IB. 07.21X11
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY ......... . —
Nazwo: Polaka Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpo OSóby reprezentującej PCM lub (·) osobę <y):

Tam gdzie ma zastosowanie .artykuł 6.4 (d) traktatu, taka dala jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPES2TAŃSKI0 MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10Λ przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numerakcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJE MIKROORGANIZMÓW: F/DD005 Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 18.07.2001
ΙΠ, ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. Π, była sprawdzona w 1.09.2001 L W tym dniu badany mikroorganizm byl ί x\|^ł żywy 1 I³ nieżywy

¹ Wskaż datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią _adatę.

Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

BP/A/W12 strona 25

rv. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI*

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrodaw	POdplS USftłtJj/ ΓΟΜ lut Matof^ttUk-nraAĄ osobę (y): Data:

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

BP/A/H/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i

Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

Γ DEPONUJĄCY-	Ii. IDENIYFJKACJAMIKROORUANIZMU-
Nazwa: instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: _ui.r.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/OOOOS Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 18.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. Π, była sprawdzona w 1.09.2001 ²·^w Ty™ dniu badany mikroorganizm byl U³ żywy . 1— l³ nie żywy

² W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/Ι2 strona 25

rv. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej O/b1cVi>t Alrarfaimti A waeswnrj a λλλλλ^^τ··~^ » — - ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): A , fZ-l, Data; iw/

⁴ Wypełnij w przypadku gdy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu były rijemne

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Innunoloaii i Terapii Doświadczalnej PAH ul.R.Weigla 12

55-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10,2 przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii ΠαΧι.μ 1 na A PAKI υυθ)Ί1θυ^ώβ1Ι ISJ » ni i Adres: ul.R.Weigla 12 55-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: dat cva νιΊτϊνητρ xfTVDnnbr.ńMT7MnW· F/00007 _s Data złażenia^ graguesienia depozytu :
III. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. Π» była sprawdzona w 2001 ³- W tym dniu badany mikroorganizm był DD³ żywy . 1 I³ nieżywy

¹ Wskaż datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią datę. .

² W przypadkach określonych w ort 10.2 (a) (u) orna (lii), okroił najśw«ż«y teet żywotności, ³ Zaznacz krytykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): ΰί.^ Data:C*?, Lew·/

⁴ Wypełnij w przypadku gdiy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu były ujemne.

Formularz ΒΡΛ (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PA J ul.R.Weipla 12

53—114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POŚWIADCZENIE W PRZYPADKU DEPOZYTU POCZĄTKOWEGO » «awt njuawtuw i>guuxuv<> ui·

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO PI	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW; F/00008
U. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: 1 1 opis naukowy 1 χ \| 1_1 proponowane oznaczenie taksonomiczne Myoviridae MII . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
ΙΠ. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Dala depozytu początkowego)’ 18.07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk uL Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM łub autoryzowaną (e) osobę (y): Data- „ ->

¹ Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tara gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańsktm zamieniony jest na depozyt zgodny z tyra traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

ΤΙΙΑΚΤΑΤ STJDAJPSC2*rJO’TGKX Ο

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul-R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10 J przez

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY ,	U. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: instytut Immunologii i Terapii Π-Χ, .4 DALI UJOHJ.aUVABil ICJ 1 ΓΜΊ Adres: ul. r. Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKA KOLEKCJE MIKROORGANIZMÓW: F/GOOOB _Ł Data złożenia lab przeniesienia depozytu : 18.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. U, była sprawdzona w 1,09.2001 - W tym dniu badany mikroorganizm był Q^a żywy Q nieżywy

² W przypadkach określonych w art. 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/Π strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY '
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej AV«rf4mii WanV f UlOlUtij '«ł**» ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data: /?/,£*?, ^c

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii 1 Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10.2 przez

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa:instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ^Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00009 , Data złożenia lub przeniesienia depozytu : 18.07.2001
m. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. U, była sprawdzona w i Q9 2DD1 ²- W tym dniu badany mikroorganizm byl Θ³ tZl· nie iywy

¹ Wskaź datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią datę.

² W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (ii) oraz ¢11), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immuologli i

Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weiola 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POŚWIADCZENIE W PRZYPADKU DEPOZYTU POCZĄTKOWEGO wvAmna 7 srt 7*1 rti-gąą

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P3	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/0001C
II. OPIS NAUKOWY ULUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: i- 1 opis naukowy LjJ proponowane oznaczenie taksonomiczne Mvoviridas MI9 . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)¹ 10.07.2001
IV. MIĘDZYNARODGwΐ ORGAN DEPOZYTU WY
Nazwa: Polska Kolekcj a Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę <y): Data: z7<f. i??, l

Tam gdzie ma zastosowanie.artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

BP/A/D712 strona 24

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Teraoii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI ^{1 * 3}

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: i_nst_yt_ut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00010 Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 18.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. Π, była sprawdzona w 1.09.2001 *. W tym dniu badany mikroorganizm byl Β» ' L l· nieżywy

W przypadkach określonych w art JO.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data: im > ‘

Formularz BP/9 (strona draga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAII ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P4	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/oooir
II. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: 1_! opis naukowy 1 Y ί prop.nov.nne ο=λ^οκολΪο ttltoęnenuOTip MvnVT Γ1 riaP MT3 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III, POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)¹ 16.07.2001
IV, MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): ^Data: 7,

¹ Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapeszteńskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/Π strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

1 DEPONUJĄCY	U. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU '
Nazwa: instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej FAN ^Adres: ul.R.Weiola 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany pracz: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00011 Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 18.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt R była sprawdzona w 1.09.2001 . W tym dniu badany mikroorganizm był θ’ ±>ΛΥ_Ύ □³ nieżywy

W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (ii) ora2 (iii). określ najświeższy test żywotności

Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI*

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM} Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskięj Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): ^Da,a: /[ r

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZT AŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

ΒΡ/Α/Β/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAh ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P5	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00012
II. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: 1 „J opis naukowy C3 proponowane oznaczenie taksonomiczne Myoviridae MI9 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
IU. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)¹ 1B. 07.2001
Tir W /ΓΡΤ\ΤΙΛ.Τ ΑΛΛΓιΛ,ΙΓΙ? Ζ\Τ» isilt xv, i ri/usAJL/vvr i UEruii 1UVY ϊ
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrodaw	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y):

¹ Tam gdzie ma zastosowanie .artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą ki edy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem BudapesztaAskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

AwLADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10.2 przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00012 , Data złożenia lub przeniesienia depozytu : 18.07.2001
IH. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

w	1.09
H³	żywy
□’	nie żywy

^!. W tym dniu badany mikroorganizm był ¹ ΐιΛτ, &Jj dwKwiuuiw m, przeniesienia najświeższą oapowieonią datę.

² W przypadkach określonych w ait 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat.

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

rv. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): ^Data; /t&iCfy.

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

BP/A.W12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i

Terapii Doświadczalnej ΡΑΓν ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POŚWIADCZENIE W PRZYPADKU DEPOZYTU POCZĄTKOWEGO wydawane zgodnie z art, 7.1 przez

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: Pć	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00013
U, UPJS NAUWWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: 1—J opis naukowy pq 1—I proponowane oznaczenie taksonomiczne Myaviridae MI3 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA ' -
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)⁵ 18.07,2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY ' ..... ~........
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y):

Tam gdzie ma zastosowanie .artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalne/! PAN ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚĆ! wydawane zgodnie z art 10.2 przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI ^{1 * 3}

I. DEPONUJĄCY	H. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa; instytut Immunologii i	Numer akcesyjny nadany przez;
Terapii Doświadczalnei rAN	POLSKĄ KOLEKCJA MIKROORGANIZMÓW· ‘ “7/00013
^Adres: ul.R.Weiola 12	Data złożenia lub przeniesienia depo^tu¹:
53-114 Wrocław	1Θ.07.2001
ΠΙ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. Π, była sprawdzona w 1.09.2001 . W tym dniu badany mikroorganizm byl 0’ tw Q 1 1 nie żywy

¹ Wskaż dalę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią datę.

W przypadkach określonych w art 10,2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data: i ^rx-\

Wypełnij w przypadku gdy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu były ujemne.

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/Π strona 14

Instytut Immunologii i

Terapii Doświadczalnej PAb ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P7	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00014
Π. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w piet J dołączony jest □ opis naukowy \|χ i 1—1 proponowane oznaczenie taksonomiczne Myoviridae MI 9 . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE 1 AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrwmany mikroorganizm, określony w punkcie I, (Data depozytu początkowego)¹ · ^' · 2001
IV. MięłizyNAkOuOwY OroaN depozytowy
t-?cM.rra. PuliKa KuletaJafrlllUUUrgillllZinOW IPUMJ Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	FCKlpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y):

Tam gdzie nut zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii ΐ Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	U. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00014 Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 18.07.2001
III. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. Π. była sprawdzona w 1.09.2001 .W tym dniu badany mikroorganizm byl Γχ[3 żywy □^{1 * 3} nie żywy .

¹ Wskaż datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią

W przypadkach określonych w art 10,2 (a) (ii) oraz (iii), okreśi najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut ImunoloBii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

1, IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P8	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00015
Π. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: CD opis naukowy K 1 proponowane oznaczenie taksonomiczne Podoviridae PI3 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
•UL POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie L (Data depozytu początkowego)¹ 18.07.2001
IV. MjĘDZYNARODÓwY ORGAN DEPOZYTÓWf
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data: , Ć?ć

¹ Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu. taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

TRAKTAT BUDAPESZT AŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	U. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
ΪΙοχμιι. ZnoLyLuL IlJhllUl IUluy±± X Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R,Weigla 12 53-114 Wrocław	manier aucesyjny naaany przez: POLSKĄ KOL^^MIKROORG ANIZMÓW; Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹; IB.07.2001
1Π. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt II, była sprawdzona w 1-09.2001 a tym jadany mikroorganizm był Q³ żywy Π 1 I nie żywy

¹ W skaź datę depozyty początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia nąjświeższą odpowiednią datę.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat.

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

iv. warunki, w których wykonano test żywotności⁴

V. międzynarodowy organ depozytowy
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Μϊ „<!,

⁴ Wypełnij w przypadku gdy wymagana jest informaęja i jeśli wyniki testu były ujemne

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ^Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ^gLgKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 10.07.2001
m. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt Π, była sprawdzona ^w 1.09.2001 . W tym dniu badany mikroorganizm byl B³ żywy n, · l—J nieżywy

Wskaż datę depozytu początkowego lub, giły dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią datę.

Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

BP/A/H/ΙΪ strona 25

⁴ Wypełnij w przypadku gdy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu byty ujemne.

Formularz BP/9 (strona draga i ostatnia)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PA I ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P1D	Numer akcesyjny nadany przez; POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00017

u. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSON<Wię7NP .....
jud mikroorganizmu określonego w pkt_I dołączony jest: C-J opis naukowy [-3 proponowane oznaczenie taksonomiczne Myoviridae M13 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA .................... ......
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)¹ 18.07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska KoiekĘja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): ^Da“>.r.

¹ Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tara gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Eudapesztańskiiu zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM

UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW

DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa; Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres; m,R. Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez; POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00017 Data złożenia lub przeniesienia depozytu : 18.07.2001
IH. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt Π, była sprawdzona w 1,09.2001 ^w ty™ badany mikroorganizm byl U³ żywy Q nieżywy

³ Wskaż diiLę dcpuiylu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia nąjświeższą. odpowiednią datę.

³ W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAl· ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU ”
Odnośnik identyfikacji podany pizez DEPONUJĄCEGO; Pil	Numer akcesyj ny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00018
II. OPIS NAUKOWY ULUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pktl dołączany jest: ' EU opis naukowy 01 proponowane oznaczenie taksonomiczne Myaviridiae MI3 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA “ '
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie! (Data depozytu początkowego)¹ 19.07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY -~-
Nazwa? Pnfolrn KoTelceyn MilrmcrgnTUDniw (PCM) Adres; Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul Rudolfa Weigla 12 53-U4 Wrocław	Pędpb ojoby reprezentuji^tej PCM lub autoryzowaną {ej osobę (y): CX* Lc-J’/ /£

Tam gdzie ina zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY .

Instytut Immunologii i Ter-anii Dodwiąricząlnei PAN ul.R,Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWLADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z arL 10.2 przez POLSKĄ KOLEKCJE MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

L DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii I Terapii Doświadczalnej PAN Adres: _U1.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: οητ cva rnizrrrp κπνρπηόΠΑνττΜΛνσ· F/00018 Data złożenia lub przeniesienia depozytu : 18.07.2001
III. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. Π, była sprawdzona w 1 09 2001 . W tym dniu badany mikroorganizm byl S żywy Q nie żywy

¹ Wskaż datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź pizeniesicnia nąjświeźszą odpowiednią datę.

² W przypadkach określonych w art. 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test ^wolności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY insxyxux Immunologu i Terapii Doświadczalnej PAi ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P12	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00D19
Π, OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE.OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt J dołączony jest: □ opis naukowy ΓχΊ L_J proponowane oznaczenie taksonomiczne SiDhoviricJae SI7 . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
ΙΠ, POŚWIADCZENIE 1 AKCEPTACJA
Polska Kolekcia Mikrooreanizmów akcenłnie otrzymany mikmersnniTm nlrwilnny w pnnlrn» 1 (Datadepozytu początkowego) ια.υ/.zuui
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrodaw	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autotyzowaną (e) osobę (y): /!<$. T^a t Z

¹ Tam gdzie ma zastosowanie .artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem BudapesztaAskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest dalą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

TRAKTAT BUD AFES2TAŃSKIO MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: i_nstytut immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00019 Data złożenia lub przeniesienia depozytu : 1Θ.07.2001
IU. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt Π, była sprawdzona w 1.09.2DD1 ^{1 2}. W tym dniu badany mikroorganizm byt KI³ żywy Q nietywy

² W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (u) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN jl.'R. Weigla 12 53-112 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POŚWIADCZENIE W PRZYPADKU DEPOZYTU POCZĄTKOWEGO łł n η Λ łrtn/^nie ·» *ιι4 1 fijuatrous· &gvurub s,tuk ι·λ

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P13	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/D0O2D .
U. OPIS NAUKOWY ULUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: Π opis naukowy H proponowane oznaczenie taksonomiczne Podoviridae Pil . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie L (Data depozytu początkowego)¹ 18.07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data: /1$, O<?. Lóż»/ / ^c

¹ Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y):

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWE GO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO; P14	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00021
11. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest □ opis naukowy t3 proponowane oznaczenie taksonomiczne Myoviridae MI3 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data pQcoqd<9Yvoge)l 18.0*7.3001
TV MIFn7VWADAnAU/VflDr,AXTTYCDriTVTiuiJV ............ ....... ............... - · rr Wliiwru. WW JU Π 1
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologu i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53Ί14 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data: z/dT, ''Loot '

Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6,4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10.2 przez

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	U. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres- ul.R.Weigla 12 ‘ 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄKOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/D0021 Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: IB.07.2001
m. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt U, była sprawdzona w 1.09.2001 . W tym dniu badany mikroorganizm byl 0’ _w □³ nie żywy

² W przepadkach określonych w art 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ nąjświeźszy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) a a w Tnrtvtiif imtmmnloeii i Terami Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autotyzowaną (e) osobę (y): Data: £>rf₍ ™ <-

⁴ Wypełnij w przypadku gdy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu byty ujemne,

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalne i PAN H.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P15	Numer akcesyjny nadany pizez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00022
Π. OPIS NAUKOWY ULUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pkt.I dołączony jest: 1 1 opis naukowy □ proponowane oznaczenie taksonomiczne Wyovirldae MI3 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
III. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA “
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)¹ 1B. 07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): “zM, C7,

¹ Tam gdzie ma zastosowanie,artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyły status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona poj edyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul R.WRłola i?

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

KArt. 10.2

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

L DEPONUJĄCY	U. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: j_ns\|y\|._u-t immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul. R. Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00022 Data złożenia lub przeniesienia depozytu : 10.D7.2001
III. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt. Π, była sprawdzona w 1 09 2001 . W tym dniu badany mikroorganizm byl Γχ1₃ L_J żywy Q nieżywy

¹ W skaź datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia najświeższą odpowiednią datę.

³ W przypadkach określonych w art, 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI, W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data: (?·?, LO^t

Fonnularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Imnunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul *R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10.2 precz POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa:Instytut Immunologii i Terapii DAM uuswiaubćo mej i mii Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: pn^gy a KOLEKCJA MIKROORGANIZMÓW: * ~V/00Q23 ** Data złożenia Kub przeniesienia depozytu¹: 13.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt E, była sprawdzona w i 2001 . W tym dniu badany mikroorganizm byt 1_I³ żywy Q nieżywy

¹ Wskaź datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia nąjswieższąodpowiednią datę.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat.

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV. WARUNKI. W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data.^^,^ ioo l

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO JLARZ MIĘDZYNARODOWY

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

L IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P17	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00024
Π, OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pktl dołączony jest: L-J opis naukowy LxJ proponowane oznaczenie taksonomiczne Siphoyiridae 5112 . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
ΙΠ. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)¹ 10.07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk uL Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data:

Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI 0 MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNOUSTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art. 10.2 przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

L DEPONUJĄCY	U. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R. Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄKOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/OOD24 _χ Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 18.07.2001
IU. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt Π, była sprawdzona w 1.09.2001 .W tym dniu badany mikroorganizm był LI³ żywy □³ nieżywy

² W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (u) oraz (iii), określ najświeższy test fywotności.

Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 25

IV, WARUNKI. W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowana (e) osobę (y): Λ Data: ^Data-Λ <i?, ¢9^7. 'T-**⁷¹

^Α Wypełnij w przypadku gdy wymagana jest informacja i jeśli wyniki testu były ujemne.

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAEI ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POŚWIADCZENIE W PRZYPADKU DEPOZYTU POCZĄTKOWEGO •'r Π 1 I\rłP7 tołSEą^lekc^mkkiorganizmów

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P18	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00025
Π. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Domikroorgnnizmu określonego w pktl dołączony jest: CD opis naukowy jx 1 proponowane oznaczenie taksonomiczne Myoyiridae MI3 . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
IU. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)¹ IB. 07.2001
M r % SM >1 Λ ΛΓΐ/ ikT ι·/ kitnp IV. I υΐνυΛΙ¹* UCWil 1UYY I
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk uL Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (c) osobę (y): ^Da£Ł' λ

¹ Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka data jest datą, Kędy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; taro gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R-Weigla 12

53-114 Wrocław

NAZWA I ADRES STRONY.

DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 10Z przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. DEPONUJĄCY	IL IDENTYnKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa: instytut Immunologii i Terapii * Doświadczalnej PAN Adres; _ul,r.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany pizez: _ cva νητίΠίΓΓΕ MIKROORGANIZMÓW: * -- -------- F/00025 _t Data złożenia lub pnetuesienia depozytu ; 18>07,2001
HI, ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt Π. była sprawdzona _w 1.09.2001 \ W tym dniu badany mikroorganizm byl 0³ tywy Q nieżywy _ ——

² W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (ii) oraz fiu), określ najświeższy test żywotności.

$ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

FormularzBP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΪ/ΑΛ3/12 strona 14

TRAKTAT BUDAPESZTAŃSKI O MIĘDZYNARODOWYM UZNAWANIU DEPOZYTU DROBNO USTROJÓW DLA CELÓW POSTĘPOWANIA PATENTOWEGO

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytui Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAb ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław

NAZWA 1 ADRES DEPONUJĄCEGO

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnośnik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO: P15	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/aOOZ6
U. OPIS NAUKOWY I/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w plct.I dołączony jest: □ opis naukowy Γχ\| L_J proponowane oznaczenie taksonomiczne Mvoviridae MI3 (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
ΙΠ. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje otrzymany mikroorganizm, określony w punkcie I (Data depozytu początkowego)¹ 18.07.2001
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskity Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): Data: _Λ

¹ Tam gdzie ma zastosowanie artykuł 6.4 (d) traktatu, taka dala jest datą kiedy został nabyty status międzynarodowego organu depozytowego; tam gdzie po nabyciu tego statusu depozyt niezgodny z Traktatem Budapesztańskim zamieniony jest na depozyt zgodny z tym traktatem, taka data jest datą otrzymania mikroorganizmu przez międzynarodowy organ depozytowy.

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii I Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie żart 10.2 przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. tDENTYFIKACIA MIKROORGANIZMU
Nazwa: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres: ul.R.Weigla 12 53-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ MIKROORGANIZMÓW: Data złożenia lub przeniesienia depozytu¹: 18.07.2001
ΙΠ. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność określonego w pkt Π, była sprawdzona . w ‘ . W tym dniu badany mikroorganizm był El³ żywy n> 1—ł nieżywy

W przypadkach określonych w art 10.2 (a) (Π) oraz (iii), określ najświeższy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 Strona 25

IV. WARUNKI. W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI⁴

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY

Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM)

Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrodaw

Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y):

Data: y, τχχ? /

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 14

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

NAZWA I ADRES DEPONUJĄCEGO

POŚWIADCZENIE W PRZYPADKU DEPOZYTU POCZĄTKOWEGO wydawane zgodnie z art. 7.1 przez

POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

I. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Odnoinik identyfikacji podany przez DEPONUJĄCEGO. P20 '	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW: F/00027
Π. OPIS NAUKOWY 1/LUB PROPONOWANE OZNACZENIE TAKSONOMICZNE
Do mikroorganizmu określonego w pktl dołączony jest; I I opis naukowy (x 1 , t__1 proponowane oznaczenie taksonomiczne Myoviridae MI? . (Zaznacz krzyżykiem właściwy kwadrat)
ΙΠ. POŚWIADCZENIE I AKCEPTACJA
Polska Kolekcja Mikroorganizmów akceptuje crtręYrriany mikroorganizm, określony w punkcie I. (Data depozytu początkowego)¹ ' '
IV. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrocław	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y):

Formularz BP/4 (strona pojedyncza)

PL 201 750 B1

ΒΡ/Α/Π/12 strona 24

FORMULARZ MIĘDZYNARODOWY

Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN ul.R.Weigla 12

53-114 Wrocław

ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI wydawane zgodnie z art 102 przez POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANIZMÓW

NAZWA I ADRES STRONY, DLA KTÓREJ WYDANO ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI

I. DEPONUJĄCY	Π. IDENTYFIKACJA MIKROORGANIZMU
Nazwa, j_ns^y^ immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN Adres* ’ ul.R.Weigla 12 ^ς3-114 Wrocław	Numer akcesyjny nadany przez: POLSKĄ KOLEKCJĘ MIKROORGANTZMÓW: ' F/00027 Data złożenia lub przeniesienia depozytu: 10.07.2001
HI. ŚWIADECTWO ŻYWOTNOŚCI
Żywotność mikroorganizmu określonego w pkt Π, była sprawdzana w 1.09.2001 -^w tym dniu badany mikroorganizm byl S żywy EJ³ nieżywy

¹ Wskaż datę depozytu początkowego lub, gdy dokonano nowego depozytu, bądź przeniesienia nąjświeższą odpowiednią datę.

² W przepadkach określonych w art 10.2 (a) (ii) oraz (iii), określ nąjświeiszy test żywotności.

³ Zaznacz krzyżykiem odpowiedni kwadrat

Formularz BP/9 (strona pierwsza)

PL 201 750 B1

BF/AZH/12 strona 25

IV. WARUNKI. W KTÓRYCH WYKONANO TEST ŻYWOTNOŚCI*

V. MIĘDZYNARODOWY ORGAN DEPOZYTOWY
Nazwa: Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) Adres: instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskięj Akademii Nauk ul. Rudolfa Weigla 12 53-114 Wrodaw	Podpis osoby reprezentującej PCM lub autoryzowaną (e) osobę (y): ^Data: /t&,CQ,

Formularz BP/9 (strona druga i ostatnia)

Claims

1. Sposób otrzymywania multiwalentnego szczepu bakteriofaga, znamienny tym, że:

a) gromadzi się zbiór o dostatecznej liczności n różnych szczepów patogenów bakteryjnych określonego rodzaju występujących losowo na danym obszarze, przy czym korzystnie izolowane szczepy bakteryjne są szczepami lekoopornymi,

b) gromadzi się dostateczną ilość różnych szczepów bakteriofagów specyficznych wobec przynajmniej jednego szczepu bakterii należącego do danego rodzaju,

c) określa się aktywność lityczną zgromadzonego szczepu bakteriofaga wobec każdego zgromadzonego szczepu bakteryjnego, a następnie dla szczepu bakteriofaga oblicza się wartość p, jako stosunek liczby szczepów lizowanych przez dany fag do liczby wszystkich zgromadzonych szczepów bakteryjnych,

d) dla uzyskanej wartości p sprawdza się czy liczność n spełnia warunek:

pq_z2 d^{2 ι-α} gdzie: q = 1-p d jest stałą nie większą od 0,1, korzystnie nie większą od 10%p, z_1-a jest zmienną losową o rozkładzie normalnym zależną od przedziału ufności 1-α, który jest nie mniejszy niż 0.95,

2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w etapie b) szczep bakteriofaga izoluje się z próby pochodzącej ze środowiska, poprzez sączenie przez filtry membranowe o wielkości por 0,20,4 urn, do uzyskanego przesączu dodaje się podłoże odżywcze i miesza się z hodowlą bulionową bakterii określonego rodzaju, inkubuje się w temp. około 37°C przez około 1 godzinę, pobiera się porcję zawiesiny i rozciera na płytkach z podłożem stałym, prowadzi się inkubację w około 37°C przez około od 2 do 24 godzin, izoluje się próbkę podłoża obejmującą pojedynczą łysinkę, przenosi się ją do hodowli bulionowej bakterii określonego rodzaju i inkubuje się do czasu rozjaśnienia się hodowli, a uzyskany lizat przesącza się przez filtry membranowe o wielkości por 0,2-0,4 um otrzymując preparat bakteriofagowy, przy czym korzystnie wysiew na podłoże stałe i reizolację łysinki powtarza się 5-krotnie.

3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że w etapie c) wysiewa się na odpowiednie podłoże stałe badany szczep bakteryjny, na które nanosi się porcję preparatu bakteriofagowego uzyskanego w etapie b), inkubuje się w temp. około 37°C przez ok. 4 godziny po czym pozostawia w temp. około 4°C przez około od 2 do 24 godzin, przy czym o aktywności litycznej szczepu bakteriofagowego świadczy pojawienie się przynajmniej pojedynczych łysinek.

4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że bakteryjne szczepy patogenne należą do rodzaju Staphylococcus albo Pseudomonas.

5. Sposób według zastrz. 1 albo 4, znamienny tym, że multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus występujących w Polsce wyizolowany w etapie e) jest szczep bakteriofaga wybrany spośród S1 (PCM F/00001), S2 (PCM F/00002), S3 (PCM F/00003), S4 (PCM F/00004), S5 (PCM F/00005), S6 (PCM F/00006) oraz S7 (PCM F/00007).

6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus występujących u chorych na mukowiscydozę wyizolowany w etapie e) jest szczep bakteriofaga wybrany spośród S2 (PCM F/00002), S4 (PCM F/00004) oraz S7 (PCM F/00007).

7. Sposób według zastrz. 1 albo 4, znamienny tym, że multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas występujących w Polsce wyizolowany w etapie e) jest szczep bakteriofaga wybrany spośród P1 (PCM F/00008), P2 (PCM F/00009), P3 (PCM F/00010), P4 (PCM F/00011), P5 (PCM F/00012), P6 (PCM F/00013), P7 (PCM F/00014), P8 (PCM F/00015), P9 (PCM F/00016), P10 (PCM F/00017), P11 (PCM F/00018), P12 (PCM F/00019), P13 (PCM F/00020), P14 (PCM F/00021), P15 (PCM F/00022), P16 (PCM F/00023), P17 (PCM F/00024), P18 (PCM F/00025), P19 (PCM F/00026), oraz P20 (PCM F/00027).

PL 201 750 B1

8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas występujących u chorych na mukowiscydozę wyizolowany w etapie e) jest szczep bakteriofaga wybrany spośród P3 (PCM F/00010), P6 (PCM F/00013) oraz P11 (PCM F/00018).

9. Sposób wedł ug zastrz. 1 albo zastrz. 2, znamienny tym, ż e prowadzi się dalsze oczyszczanie lizatu, zwłaszcza z endotoksyn, przy czym mieszaninę zawierającą bakteriofagi kontaktuje się ze złożem zawierającym celulozę lub jej częściowo estryfikowaną pochodną następnie przemywa się roztworem usuwającym zanieczyszczenia, zwłaszcza endotoksyny, po czym wypłukuje się oczyszczone bakteriofagi.

10. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że elucję endotoksyn prowadzi się wodą, roztworem substancji niedysocjującej lub roztworem soli o stężeniu nie większym niż 0,1 M, korzystnie buforowanym.

11. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że elucję frakcji bakteriofagowej prowadzi się roztworem substancji niedysocjującej lub dowolnym buforem lub roztworem soli o stężeniu wyższym od 0,05 M, korzystnie buforowanym.

12. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że elucję endotoksyn i bakteriofagów prowadzi się w temperaturze od -25°C do 100°C.

13. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że elucję endotoksyn i bakteriofagów prowadzi się wykorzystując wodny roztwór soli zawierający rozpuszczalnik organiczny.

14. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że rozpuszczalnik organiczny został wybrany z grupy zawierającej dimetylosulfotlenek, dwumetyloformamid, izopropanol i aceton.

15. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że jako złoże stosuje się celulozę częściowo estryfikowaną kwasem organicznym lub nieorganicznym.

16. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że jako złoże stosuje się celulozę częściowo estryfikowaną kwasem octowym, azotowym, siarkowym lub fosforowym.

17. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że jako złoże stosuje się celulozę w której estryfikowane jest od 0,01% do 5% cząsteczek glukozy, korzystnie od 0,25% do 1% cząsteczek glukozy, najkorzystniej od 0,5% do 1% cząsteczek glukozy.

18. Środek do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym przez patogeny bakteryjne zawierający czynnik aktywny i ewentualnie farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienny tym, że jako czynnik aktywny zawiera multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii tego rodzaju otrzymany sposobem według zastrz. 1-17.

19. Środek według zastrz. 18, znamienny tym, że jako multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus zawiera przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród S1 (PCM F/00001), S2 (PCM F/00002), S3 (PCM F/00003), S3 (PCM F/00003), S4 (PCM F/00004), S5 (PCM F/00005), S6 (PCM F/00006) oraz S7 (PCM F/00007), korzystnie fagi S1, S2, oraz S4 albo S5.

20. Środek według zastrz. 18, znamienny tym, że służy do leczenia lub zapobiegania infekcjom występującym u chorych na mukowiscydozę i jako multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus zawiera przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród S2 (PCM F/00002), S4 (PCM F/00004) oraz S7 (PCM F/00007).

21. Środek według zastrz. 18, znamienny tym, że jako multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas zawiera przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród P1 (PCM F/00008), P2 (PCM F/00009), P3 (PCM F/00010), P4 (PCM F/00011), P5 (PCM F/00012), P6 (PCM F/00013), P7 (PCM F/00014), P8 (PCM F/00015), P9 (PCM F/00016), P10 (PCM F/00017), P11 (PCM F/00018), P12 (PCM F/00019), P13 (PCM F/00020), P14 (PCM F/00021), P15 (PCM F/00022), P16 (PCM F/00023), P17 (PCM F/00024), P18 (PCM F/00025), P19 (PCM F/00026), oraz P20 (PCM F/00027), korzystnie fagi P7, P20 i P6.

22. Środek według zastrz. 18, znamienny tym, że służy do leczenia lub zapobiegania infekcjom występującym u chorych na mukowiscydozę i jako multiwalentny szczep bakteriofaga specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas zawiera przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród P3 (PCM F/00010), P6 (PCM F/00013) oraz P11 (PCM F/00018).

23. Zastosowanie multiwalentnego szczepu bakteriofaga otrzymanego sposobem według zastrz. 1-17 do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym przez patogeny bakteryjne.

PL 201 750 B1

24. Zastosowanie według zastrz. 23, znamienne tym, że do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym przez bakterie należące do rodzaju Staphylococcus stosuje się przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród S1 (PCM F/00001), S2 (PCM F/00002), S3 (PCM F/00003), S4 (PCM F/00004), S5 (PCM F/00005), S6 (PCM F/00006) oraz S7 (PCM F/00007), korzystnie fagi S1, S2, oraz S4 albo S5.

25. Zastosowanie według zastrz. 23, znamienne tym, że do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym u chorych na mukowiscydozę przez bakterie należące do rodzaju Staphylococcus stosuje się przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród S2 (PCM F/00002), S4 (PCM F/00004) oraz S7 (PCM F/00007).

26. Zastosowanie według zastrz. 23, znamienne tym, że do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym przez bakterie należące do rodzaju Pseudomonas stosuje się przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród P1(PCM F/00008), P2 (PCM F/00009), P3 (PCM F/00010), P4 (PCM F/00011), P5 (PCM F/00012), P6 (PCM F/00013), P7 (PCM F/00014), P8 (PCM F/00015), P9 (PCM F/00016), P10 (PCM F/00017), P11 (PCM F/00018), P12 (PCM F/00019), P13 (PCM F/00020), P14 (PCM F/00021), P15 (PCM F/00022), P16 (PCM F/00023), P17 (PCM F/00024), P18 (PCM F/00025), P19 (PCM F/00026), oraz P20 (PCM F/00027), korzystnie fagi P7, P20 i P6.

27. Zastosowanie według zastrz. 23, znamienne tym, że do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania infekcjom wywoływanym u chorych na mukowiscydozę przez bakterie należące do rodzaju Pseudomonas stosuje się przynajmniej jeden szczep bakteriofaga wybrany spośród P3 (PCM F/00010), P6 (PCM F/00013) oraz P11 (PCM F/00018).

28. Multiwalentny szczep bakteriofaga posiadający cechy szczepu wybranego spośród S1 (PCM F/00001), S2 (PCM F/00002), S3 (PCM F/00003), S4 (PCM F/00004), S5 (PCM F/00005), S6 (PCM F/00006) oraz S7 (PCM F/00007), przy czym szczep ten jest specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Staphylococcus.

29. Multiwalentny szczep bakteriofaga posiadający cechy szczepu wybranego spośród P1 (PCM F/00008), P2 (PCM F/00009), P3 (PCM F/00010), P4 (PCM F/00011), P5 (PCM F/00012), P6 (PCM F/00013), P7 (PCM F/00014), P8 (PCM F/00015), P9 (PCM F/00016), P10 (PCM F/00017), P11 (PCM F/00018), P12 (PCM F/00019), P13 (PCM F/00020), P14 (PCM F/00021), P15 (PCM F/00022), P16 (PCM F/00023), P17 (PCM F/00024), P18 (PCM F/00025), P19 (PCM F/00026), oraz P20 (PCM F/00027), przy czym szczep ten jest specyficzny wobec bakterii należących do rodzaju Pseudomonas.