PL202224B1 - Stała kompozycja farmaceutyczna zawierająca związek HSA - Google Patents
Stała kompozycja farmaceutyczna zawierająca związek HSAInfo
- Publication number
- PL202224B1 PL202224B1 PL353968A PL35396800A PL202224B1 PL 202224 B1 PL202224 B1 PL 202224B1 PL 353968 A PL353968 A PL 353968A PL 35396800 A PL35396800 A PL 35396800A PL 202224 B1 PL202224 B1 PL 202224B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- mas
- less
- composition
- preferably less
- solution
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 48
- LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 4,4-dimethyl-5alpha-cholesta-8,14,24-trien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC=C21 LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 0.000 claims abstract description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 26
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 26
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 3
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 39
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- RCFJIAQLIRLKEN-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-hydrazinyl-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](NN)C(O)=O RCFJIAQLIRLKEN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 108010006578 follitropin alfa Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940057854 gonal f Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Ujawniono sta la kompozycj e farmaceutyczn a do zap ladniania in vitro zawieraj ac a zwi azek HSA, która zawiera FF-MAS, czyli 4,4-dimetylo-5 a-cholesta-8,14,24-trien-3 ß-ol w ilo sci poni zej 50% wago- wych kompozycji i albumin e surowicy krwi cz lowieka, ewentualnie w postaci zrekombinowanej; oraz zawiera wod e w ilo sci ponizej 10%, korzystnie poni zej 5%, korzystniej poni zej 1% wagowych kompo- zycji; oraz zawiera rozpuszczalnik organiczny w ilo sci poni zej 10%, korzystnie poni zej 5%, korzystniej poni zej 1% wagowych kompozycji. PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy stałego produktu, który można stosować w związku z zapładnianiem in vitro. Wynaleziono kilka substancji aktywujących mejozę, zwanych w dalszym ciągu niniejszego tekstu MAS. Gdy MAS pozostaje w środowisku zawierającym oocyty, oocyty mają większą skłonność do zapłodnienia. Jednakże głównym problemem związanym ze stosowaniem MAS jest to, że zwykle mają one bardzo małą rozpuszczalność.
Celem niniejszego wynalazku jest opracowanie kompozycji zawierającej MAS lub jego pochodną, które można rozpuścić w środowisku wodnym.
Innym celem wynalazku jest opracowanie kompozycji zawierającej MAS lub jego pochodną, które można rozpuścić w środowisku wodnym, bez działania fizycznego, takiego jak ogrzewanie, mieszanie lub obróbka ultradźwiękami.
Rozpuszczalność korzystnego MAS, tj. FF-MAS, w wodzie jest bardzo mała, tj. w przybliżeniu pikogram/ml, co odpowiada 2 x 10-5 μg/ml, a w etanolu rozpuszczalność jest znacznie większa, tj. w przybliżeniu 4 mg/ml. Według naszych wstępnych badań największa rozpuszczalność FF-MAS w mieszaninie etanolu i wody (1:2,5) wynosi w przybliżeniu 0,4 mg/ml. Kilka innych MAS ma podobną małą rozpuszczalność w wodzie.
Nieoczekiwanie stwierdzono obecnie, że stała substancja zawierająca MAS i dodatek ma dobrą rozpuszczalność w wodzie. Dodatki są składnikami, które po dodaniu do MAS dają kompozycję, którą można stosować w celu wytwarzania wodnego roztworu zawierającego MAS.
Przykładami dodatków są proteiny rozpuszczalne w wodzie, takie jak albumina surowicy krwi, np. albumina surowicy krwi człowieka, zwana w dalszym ciągu niniejszego tekstu HSA, ewentualnie w postaci zrekombinowanej, enzymy i fosfogliceryd, taki jak fosfatydyloetanoloamina, fosfatydylocholina, fosfatydyloseryna, fosfatydyloinozytol.
Przedmiotem wynalazku jest stała kompozycja farmaceutyczna zawierająca związek HSA, która zawiera FF-MAS, czyli 4,4-dimetylo-5a-cholesta-8,14,24-trien-3e-ol w ilości poniżej 50% wagowych kompozycji i surowicy krwi człowieka, ewentualnie w postaci zrekombinowanej; oraz zawiera wodę w ilości poniżej 10%, korzystnie poniżej 5%, korzystniej poniżej 1% wagowych kompozycji; oraz zawiera rozpuszczalnik organiczny w ilości poniżej 10%, korzystnie poniżej 5%, korzystniej poniżej 1% wagowych kompozycji.
Zawartość w kompozycji FF-MAS wynosi poniżej 50%, korzystnie poniżej 20%, korzystniej poniżej 10%, najkorzystniej poniżej 5% wagowych kompozycji.
Kompozycję według wynalazku stosuje się do wytwarzania wodnego roztworu, który po zastosowaniu do obróbki oocytów daje w rezultacie rozkład pęcherzyków zarodkowych (GVB), wyrażony procentowo przynajmniej 50%, korzystnie przynajmniej 80%, oraz w którym zawartość FF-MAS wynosi przynajmniej 0,001 μg/ml, korzystnie przynajmniej 0,01 μg/ml, korzystniej przynajmniej 0,1 μg/ml, a nawet korzystniej przynajmniej 0,5 μg/ml, poniżej 0,1 g/ml, korzystnie poniżej 0,01 g/ml oraz w którym zawartość rozpuszczalnika organicznego jest mniejsza niż 0,1%, korzystnie mniejsza niż 0,05%, najkorzystniej mniejsza niż 0,01%.
Korzystnie kompozycje według wynalazku mają zawartość wody poniżej 10%, korzystnie poniżej 5%, korzystniej poniżej 1% wagowy. Korzystnie kompozycje według wynalazku mają zawartość rozpuszczalnika organicznego poniżej 10%, korzystnie poniżej 5%, korzystniej poniżej 1% wagowy. Korzystnie kompozycje według wynalazku mają zawartość MAS poniżej 1%, korzystnie poniżej 0,1%, korzystniej poniżej 0,05% wagowego.
Korzystnymi kompozycjami według wynalazku są takie, które można poddać działaniu środowiska wodnego nie zawierającego lub zawierającego jedynie małe stężenia rozpuszczalnika organicznego, i dają w rezultacie roztwór zawierający MAS. Korzystnie te wodne środowiska zawierają mniej niż 1%, korzystnie mniej niż 0,5%, korzystniej mniej niż 0,1% wagowego rozpuszczalnika organicznego.
Wcześniej nie powiodło się kilka prób wytwarzania kompozycji spełniających to wymaganie.
W niniejszym tekście termin MAS oznacza związki, które pośredniczą w mejozie oocytów. Szczególniej MAS są związkami, które w badaniu opisanym w poniższym Przykładzie 1 mają rozkład pęcherzyków zarodkowych (zwany w dalszym ciągu tekstu GVB), wyrażony procentowo, znacznie większy niż w badaniu kontrolnym. Korzystnymi MAS są takie, które mają procentowy GVB przynajmniej 50%, korzystnie przynajmniej 80%. Przykładami korzystnych MAS są 4,4-dimetylo-5a-cholesta-8,14,24-trien-3e-ol, czyli FF-MAS; hemibursztynian 4,4-dimetylo-5a-cholesta-8,14,24-trien-3e-olu; 5a-cholesta-8,14-dien-3e-ol; hemibursztynian 5a-cholesta-8,14-dien-3e-olu; (20S)-cholest-5-en-3ePL 202 224 B1
-20-diol; N-(metionino)amid kwasu 3e-hydroksy-4,4-dimetylo-5a-chola-8,14-dien-24-owego i cholest-5-en-16e-ol. Dalsze przykłady MAS wymienia się w WO 96/00235, 96/27658, 97/00884, 98/28323, 98/54965 i 98/55498.
Sposobem wytwarzania kompozycji według wynalazku jest zmieszanie roztworu MAS w rozpuszczalniku organicznym, takim jak etanol, z roztworem wodnym dodatku, a następnie oczekiwanie, aż rozpuszczalnik odparuje. Odparowanie można przyspieszyć stosując ciągły przepływ powietrza nad produktem, próżnię lub inne sposoby możliwe do wykonania w celu usunięcia rozpuszczalnika. Produktem dostępnym w sprzedaży mógłby być układ doprowadzający mający jedno lub więcej niż jedno wgłębienie lub wydrążenie. W dalszym ciągu niniejszego tekstu te wgłębienia i wydrążenia są wspólnie określane wydrążeniami. Przynajmniej jedno z tych wydrążeń zawiera kompozycję według wynalazku. Dogodnym sposobem umieszczenia w nim stałego MAS jest umieszczenie najpierw w wydrążeniu roztworu zawierającego MAS i dodatek, a następnie odparowanie roztworu. Tym sposobem pozostałość odparowania, tj. kompozycję według wynalazku, umieszcza się bezpośrednio w wydrążeniu wyżej wymienionego urządzenia (układu doprowadzającego).
Ponieważ kompozycja według wynalazku ma być stosowana do obróbki oocytów, ważne jest, by nie zawierała ona składników, które negatywnie oddziałują na oocyty.
Jednym sposobem stosowania kompozycji według wynalazku jest rozpuszczenie kompozycji w środowisku wodnym, takim jak woda, a następnie, w razie potrzeby, dodanie innych składników, które mogą mieć korzystny wpływ na dojrzewanie oocytów.
Innym sposobem stosowania kompozycji jest rozpuszczenie jej w środowisku zwykle stosowanym w dojrzewaniu in vitro.
Niniejszy wynalazek ilustrują przykłady. Charakterystyczne aspekty ujawnione w powyższym opisie i w następujących przykładach mogą, w jakiejkolwiek kombinacji, stanowić materiał do wykonania wynalazku w różnych jego postaciach.
P r z y k ł a d 1
Sposób stosowany w celu określenia tego czy związek jest czy nie jest MSA.
Oocyty otrzymano z niedojrzałych samic myszy (C57BL/6J x DBA/2J F1, Bomholtgaard, Dania) ważących 13-16 gram, które trzymano w kontrolowanej temperaturze (20-22°C), świetle (światła w 06.00-18.00), przy wilgotności względnej (50-70%). Myszy otrzymały zastrzyk wewnątrzotrzewny z 0,2 ml gonadotropiny (Gonal-F, Serono) zawierającej 20 IU FSH. 48 godzin później zwierzęta zabito przez zwichnięcie szyjne. Wycięto jajniki i wyizolowano oocyty w środowisku Hx (patrz poniżej) pod mikroskopem przestrzennym przez ręczne przerwanie pęcherzyków jajnika, stosując parę 27 igieł pomiarowych. Sferyczne oocyty wykazujące nienaruszony zarodek pęcherzykowy (zwany w dalszym ciągu niniejszego tekstu GV) podzielono na chmury zawierające oocyty (zwane w dalszym ciągu niniejszego tekstu CEO) i nagie oocyty (zwane w dalszym ciągu niniejszego tekstu NO) oraz umieszczono w podstawowym środowisku α-minimum (α-MEM bez rybonukleozydów, Gibco BRL, Nr kat. 22561) uzupełnionym 3 mg/ml albuminy surowicy krwi wołowej (BSA, Sigma Nr kat. A-7030) , 5 mg/ml albuminy surowicy krwi człowieka (HSA, Państwowy Instytut Surowicy Krwi, Dania), 0,23 mM pirogronianu (Sigma, Nr kat. S-8636), 2 mM glutaminy (Flow Nr kat. 16-801), 100 IU/ml pencyliny i 100 μg/ml streptomycyny (Flow, Nr kat. 16-700). To środowisko uzupełniono 3 mM hipoksantyny (Sigma Nr kat. H-9377) i określonym środowiskiem Hx.
Oocyty przemyto trzykrotnie w środowisku Hx i podzielono oocyty jednakowej wielkości na grupy CEO i NO. CEO i NO hodowano w 4-zagłębieniowych naczyniach grupowych (Nunclon, Dania), w których każde zagłębienie zawierało 0,4 ml środowiska Hx i badany związek w stężeniu 10 μM. Zawsze hodowlę prowadzono jednocześnie w jednym kontrolnym zagłębieniu (i.e. 35-45 oocytów hodowanych w identycznym środowisku bez dodatku badanego związku) i 3 zagłębieniach pomiarowych (35-45 oocytów na zagłębienie uzupełnione badanym związkiem).
Oocyty hodowano w nawilżonej atmosferze 5% CO2 w powietrzu w ciągu 24 godzin w 37°C. Pod koniec okresu hodowli policzono kolejno liczbę oocytów z GV, GVB i ciał polarnych (zwanych w dalszym ciągu niniejszego tekstu PB) stosując mikroskop przestrzenny (Wildt, Leica MZ 12). Procent GVB określony jako procent oocytów ulegających GVB na całkowitą liczbę oocytów w tym zagłębieniu obliczono następująco:
% GVB = ((liczba GVB + liczba PB)/całkowita liczba oocytów) X 100.
P r z y k ł a d 2
Sposób stosowany w celu określenia tego czy związek można stosować czy nie można go stosować jako dodatek w kompozycjach niniejszego wynalazku.
PL 202 224 B1
Dodatek do kompozycji FF-MAS charakteryzują:
Poprawa rozpuszczalności FF-MAS w etanolu/wodzie (1:2,5 udział objętościowy).
Zapewnienie klarownego roztworu FF-MAS po odtwarzaniu kompozycji w MEM Alpha Medium.
Uzyskany procentowy GVB wynosi przynajmniej 50%, korzystnie 80%, po badaniu na oocytach otrzymanych z niedojrzałych samic myszy.
Wytworzyć nasycony roztwór etanolowy FF-MAS. Zmieszać z wodnym roztworem dodatku w stosunku 1:2,5. Wizualne badanie kontrolne wykazuje dostępność tego nadmiaru FF-MAS w roztworze. Wirować roztwór w ciągu 24 godzin w temperaturze pokojowej. Przefiltrować roztwór przez filtr
0,22 μm, określić zawartość FF-MAS za pomocą chromatografii cieczowej wysokosprawnej i obliczyć rozpuszczalność. Przenieść 350 μl do 4-zagłębieniowego naczynia i odparować do stanu suchego w temperaturze pokojowej. Dodać 500 μl MEM ALPHA Medium (Gibcobal). Jeśli otrzyma się klarowny roztwór w ciągu pół godziny, kompozycję bada się na oocytach otrzymanych z niedojrzałych samic myszy. % otrzymanego GVB wynosi przynajmniej 50%, korzystnie 80%, vide przykład 1.
P r z y k ł a d 3
Kompozycja zawierająca Albuminę Surowicy Krwi Człowieka (HSA)
W niniejszym przykładzie wytworzono 3 produkty. Jak wynika z poniższej tabeli roztwory podstawowe FF-MAS stosowane do produktów 1, 2 i 3 zawierały odpowiednio 50, 500 i 3330 μg/ml. Dla każdego z produktów roztwór podstawowy HSA zawierał 20% HSA. Ilości wyżej wspomnianych stosowanych roztworów podstawowych podaje się w tabeli. Na przykład, dla produktu 1,400 μl roztworu podstawowego FF-MAS zmieszano z 1000 μl roztworu podstawowego HSA. Po zmieszaniu tych roztworów podstawowych roztwory były klarowne i nie obserwowano w nich strącania. Po zmieszaniu ich ilości stwierdzone na płycie przeniesiono do 4-zagłębieniowych naczyń grupowych (Nuclon, Dania). Na przykład, dla produktu 1 350 μl mieszaniny przeniesiono do naczynia grupowego. W końcu roztwory odparowano do stanu suchego w temperaturze pokojowej. Po odparowaniu niektóre produkty okazują się opalizującym, klarownym filmem w naczyniach, inne są niewidoczne dla ludzkiego oka. Najwyższe stężenie FF-MAS rozpuszczonego w niniejszym przykładzie wynosi 0,95 mg/ml.
Przed stosowaniem dodaje się 500 μl MEM ALPHA Medium (Gibcobal) i w ciągu pół godziny w temperaturze pokojowej otrzymuje się klarowny roztwór FF-MAS i HSA.
| 4-zagłębieniowe naczynie grupowe nr 1 | 4-zagłębieniowe naczynie grupowe nr 2 | 4-zagłębieniowe naczynie grupowe nr 3 | |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 50 pg/ml | 400 pl | - | - |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 500 pg/ml | - | 400 pl | - |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 3,33 mg/ml | - | - | 450 pl |
| Roztwór HSA w wodzie 20% | 1000 pl | 1000 pl | 1125 pl |
| Ilość przeniesiona do naczynia grupowego | 350 pl | 350 pl | 525 pl |
| Stosunek FF-MAS do HSA | 1:10.000 | 1:1.000 | 1:150 |
| Wygląd roztworów przed odparowaniem | Klarowne, bezbarwne roztwory, bez strącania |
P r z y k ł a d 4
Kompozycja zawierająca Albuminę Surowicy Krwi Człowieka (HSA)
Analogicznie do tego co przedstawiono w poprzednim przykładzie wytwarza się roztwory FF-MAS w wodzie/etanolu zawierające HSA w stężeniach podanych poniżej przez zmieszanie próbki w temperaturze pokojowej. Po wytworzeniu roztwory były klarowne i nie obserwowano strącania. Roztwory przeniesiono do 4-zagłębieniowych naczyń grupowych (Nuclon, Dania). W końcu roztwory odparowano do stanu suchego w temperaturze pokojowej.
PL 202 224 B1
Przed stosowaniem, dodaje się 500 μΐ MEM ALPHA Medium (Gibcobal) i otrzymuje się klarowny roztwór FF-MAS i HSA w ciągu pół godziny w temperaturze pokojowej.
Preparaty badano na oocytach otrzymanych z niedojrzałych samic myszy. % GVB dla kolejnych preparatów podaje się w poniższej tabeli.
| 4-zagłębieniowe naczynie grupowe nr 1 | 4-zagłębieniowe naczynie grupowe nr 2 | 4-zagłębieniowe naczynie grupowe nr 3 | |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 5,22 pg/ml | 100 pl | - | - |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 26,1 pg/ml | - | 100 pl | - |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 261 mg/ml | - | - | 100 pl |
| Roztwór HSA w wodzie 20% | 250 pl | 250 pl | 250 pl |
| Stosunek FF-MAS do HSA | 1:10.000 | 1:2.000 | 1:200 |
| Teoretyczna ilość FF-MAS na zagłębienie | 0,5 pg | 2,5 pg | 25 pg |
| % GVB | 72 | 93 | 91 |
P r z y k ł a d 5
Kompozycja zawierająca Albuminę Surowicy Krwi Człowieka (HSA)
Analogicznie do tego co przedstawiono w poprzednim przykładzie wytwarza się roztwory FF-MAS w wodzie/etanolu zawierające HSA w stężeniach podanych poniżej przez zmieszanie próbki w temperaturze pokojowej. Po wytworzeniu roztwory były klarowne i nie obserwowano strącania. Roztwory przeniesiono do 4-zagłębieniowych naczyń grupowych (Nuclon, Dania). W końcu roztwory odparowano do stanu suchego w temperaturze pokojowej.
Przed stosowaniem, dodaje się 500 μl MEM ALPHA Medium (Gibcobal) i w ciągu pół godziny w temperaturze pokojowej otrzymuje się klarowny roztwór FF-MAS i HSA.
Stężenie FF-MAS po odtwarzaniu określono za pomocą chromatografii cieczowej wysokosprawnej. Wyniki podaje się poniżej. Preparaty badano na oocytach otrzymanych z niedojrzałych samic myszy. % GVB dla kolejnych preparatów podaje się poniżej.
| nr 1 | 4-zagłębieniowe naczynie grupowe | nr 5 | |||
| nr 2 | nr 3 | nr 4 | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 26,1 pg/ml | 100 pl | - | - | - | - |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 7,83 pg/ml | - | 100 pl | - | - | - |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 5,22 mg/ml | - | - | 100 pl | - | - |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 2,5 pg/ml | - | - | - | 100 pl | - |
PL 202 224 B1 cd. tabeli
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Roztwór FF-MAS w etanolu 0,5 pg/ml | - | - | - | - | 100 pl |
| Roztwór HSA w wodzie 20% | 250 pl | 250 pl | 250 pl | 250 pl | 250 pl |
| Stosunek FF- -MAS do HSA | 1:100.000 | 1:20.000 | 1:10.000 | 1:6667 | 1:2000 |
| Teoretyczna ilość FF-MAS na zagłębienie | 0,05 pg | 0,25 pg | 0,5 pg | 0,75 pg | 2,5 pg |
| % GVB | 13 | 52 | 78 | 82 | 90 |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (7)
- Zastrzeżenia patentowe1. Stała kompozycja farmaceutyczna zawierająca związek HSA, znamienna tym, że zawieraFF-MAS, czyli 4,4-dimetylo-5a-cholesta-8,14,24-trien-3e-ol w ilości poniżej 50% wagowych kompozycji i albuminę surowicy krwi człowieka, ewentualnie w postaci zrekombinowanej; oraz zawiera wodę w ilości poniżej 10%, korzystnie poniżej 5%, korzystniej poniżej 1% wagowych kompozycji; oraz zawiera rozpuszczalnik organiczny w ilości poniżej 10%, korzystnie poniżej 5%, korzystniej poniżej 1% wagowych kompozycji.
- 2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawartość w niej FF-MAS wynosi poniżej 50%, korzystnie poniżej 20%, korzystniej poniżej 10%, najkorzystniej poniżej 5% wagowych kompozycji.
- 3. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że stosuje się do wytwarzania wodnego roztworu.
- 4. Kompozycja według zastrz. 3, znamienna tym, że stosuje się do wytwarzania wodnego roztworu, który po zastosowaniu do obróbki oocytów daje w rezultacie rozkład pęcherzyków zarodkowych (GVB), wyrażony procentowo przynajmniej 50%, korzystnie przynajmniej 80%.
- 5. Kompozycja według zastrz. 3, znamienna tym, że stosuje się do wytwarzania wodnego roztworu, w którym zawartość FF-MAS wynosi przynajmniej 0,001 μg/ml, korzystnie przynajmniej 0,01 μg/ml, korzystniej przynajmniej 0,1 μg/ml, a nawet korzystniej przynajmniej 0,5 μg/ml.
- 6. Kompozycja według zastrz. 3, znamienna tym, że stosuje się do wytwarzania wodnego roztworu, w którym zawartość FF-MAS wynosi poniżej 0,1 g/ml, korzystnie poniżej 0,01 g/ml.
- 7. Kompozycja według zastrz. 3, znamienna tym, że stosuje się do wytwarzania wodnego roztworu, w którym zawartość rozpuszczalnika organicznego jest mniejsza niż 0,1%, korzystnie mniejsza niż 0,05%, najkorzystniej mniejsza niż 0,01%.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA199901308 | 1999-09-16 | ||
| PCT/DK2000/000500 WO2001019354A2 (en) | 1999-09-16 | 2000-09-11 | Composition for ivf |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL353968A1 PL353968A1 (pl) | 2003-12-15 |
| PL202224B1 true PL202224B1 (pl) | 2009-06-30 |
Family
ID=8103409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL353968A PL202224B1 (pl) | 1999-09-16 | 2000-09-11 | Stała kompozycja farmaceutyczna zawierająca związek HSA |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6844313B1 (pl) |
| EP (1) | EP1216059B1 (pl) |
| JP (1) | JP2003509365A (pl) |
| KR (1) | KR100757909B1 (pl) |
| CN (1) | CN1222319C (pl) |
| AT (1) | ATE306942T1 (pl) |
| AU (1) | AU781994B2 (pl) |
| BR (1) | BR0014058A (pl) |
| CA (1) | CA2382908A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ2002591A3 (pl) |
| DE (1) | DE60023324T2 (pl) |
| ES (1) | ES2252048T3 (pl) |
| HU (1) | HUP0202630A3 (pl) |
| IL (1) | IL148234A0 (pl) |
| MX (1) | MXPA02002439A (pl) |
| NO (1) | NO323694B1 (pl) |
| PL (1) | PL202224B1 (pl) |
| RU (1) | RU2263516C2 (pl) |
| UA (1) | UA78183C2 (pl) |
| WO (1) | WO2001019354A2 (pl) |
| ZA (1) | ZA200201383B (pl) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ20012671A3 (cs) * | 1999-02-26 | 2002-01-16 | Novo Nordisk A/S | Způsob in vitro oplodnění s pouľitím kultivačního média obsahujícího sterol aktivující meiosu |
| CA2382908A1 (en) | 1999-09-16 | 2001-03-22 | Novo Nordisk A/S | Composition for ivf |
| MXPA02007818A (es) * | 2000-02-25 | 2002-10-23 | Schering Ag | Tasa de implantacion mejorada utilizando ff-mas. |
| US6988613B2 (en) | 2001-02-06 | 2006-01-24 | Novo Nordisk A/S | Composition for IVF |
| EP1245572A1 (en) | 2001-03-26 | 2002-10-02 | Schering Aktiengesellschaft | Aminosterol compounds, their use in the preparation of meiosis-regulating medicaments and method for their preparation |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4175074A (en) | 1976-08-23 | 1979-11-20 | Deshmukh Arvind D | Serum-soluble cholesterol compounds and method for their preparation |
| US4751219A (en) | 1985-02-05 | 1988-06-14 | Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek | Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides |
| WO1990003429A1 (en) * | 1988-09-23 | 1990-04-05 | Cetus Corporation | Lipid microemulsions for culture media |
| DE4221880A1 (de) | 1992-07-03 | 1994-01-05 | Alfatec Pharma Gmbh | Feste und flüssige Lösungen von schwer wasserlöslichen Arzneistoffen |
| CA2150803C (en) * | 1992-12-02 | 2006-01-31 | Henry Auer | Controlled release growth hormone containing microspheres |
| US5716777A (en) * | 1994-06-23 | 1998-02-10 | Novo Nordisk A/S | Regulation of meiosis using sterols |
| US6281015B1 (en) * | 1994-12-16 | 2001-08-28 | Children's Medical Center Corp. | Localized delivery of factors enhancing survival of transplanted cells |
| HUP9800731A3 (en) * | 1995-03-06 | 2000-03-28 | Novo Nordisk As | Stimulation of meiosis |
| CA2224866A1 (en) | 1995-06-23 | 1997-01-09 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
| GB9625175D0 (en) * | 1996-12-04 | 1997-01-22 | Medi Cult As | Serum-free cell culture media |
| JP2001506656A (ja) * | 1996-12-20 | 2001-05-22 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 減数分裂調節化合物 |
| TR199902873T2 (xx) | 1997-06-04 | 2000-04-21 | Akzo Nobel N.V. | Miyozun mod�lasyonu i�in 17�-aliloksi(tiyo)alkil-androstan t�revleri. |
| HUP9701554D0 (en) | 1997-09-18 | 1997-11-28 | Human Oltoanyagtermeloe Gyogys | Pharmaceutical composition containing plazma proteins |
| EP1098652A2 (en) | 1998-05-26 | 2001-05-16 | Schering Aktiengesellschaft | Treatment of infertility with camp-increasing compounds alone or in combination with at least one meiosis-stimulating compound |
| CZ20012671A3 (cs) * | 1999-02-26 | 2002-01-16 | Novo Nordisk A/S | Způsob in vitro oplodnění s pouľitím kultivačního média obsahujícího sterol aktivující meiosu |
| CA2382908A1 (en) | 1999-09-16 | 2001-03-22 | Novo Nordisk A/S | Composition for ivf |
-
2000
- 2000-09-11 CA CA002382908A patent/CA2382908A1/en not_active Abandoned
- 2000-09-11 AT AT00958274T patent/ATE306942T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 BR BR0014058-9A patent/BR0014058A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-09-11 CZ CZ2002591A patent/CZ2002591A3/cs unknown
- 2000-09-11 DE DE60023324T patent/DE60023324T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-11 PL PL353968A patent/PL202224B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 ES ES00958274T patent/ES2252048T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-11 AU AU69850/00A patent/AU781994B2/en not_active Ceased
- 2000-09-11 HU HU0202630A patent/HUP0202630A3/hu unknown
- 2000-09-11 IL IL14823400A patent/IL148234A0/xx unknown
- 2000-09-11 WO PCT/DK2000/000500 patent/WO2001019354A2/en not_active Ceased
- 2000-09-11 KR KR1020027003526A patent/KR100757909B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-11 EP EP00958274A patent/EP1216059B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-11 MX MXPA02002439A patent/MXPA02002439A/es active IP Right Grant
- 2000-09-11 JP JP2001522989A patent/JP2003509365A/ja active Pending
- 2000-09-11 CN CNB008128820A patent/CN1222319C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-11 RU RU2002109794/15A patent/RU2263516C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-09-14 US US09/661,696 patent/US6844313B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-09 UA UA2002032077A patent/UA78183C2/uk unknown
-
2002
- 2002-02-19 ZA ZA200201383A patent/ZA200201383B/en unknown
- 2002-03-15 NO NO20021309A patent/NO323694B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2382908A1 (en) | 2001-03-22 |
| HUP0202630A2 (hu) | 2002-12-28 |
| IL148234A0 (en) | 2002-09-12 |
| BR0014058A (pt) | 2004-03-30 |
| ATE306942T1 (de) | 2005-11-15 |
| NO323694B1 (no) | 2007-06-25 |
| KR20020032593A (ko) | 2002-05-03 |
| DE60023324T2 (de) | 2006-07-20 |
| UA78183C2 (en) | 2007-03-15 |
| EP1216059B1 (en) | 2005-10-19 |
| CZ2002591A3 (cs) | 2002-08-14 |
| WO2001019354A2 (en) | 2001-03-22 |
| DE60023324D1 (de) | 2005-11-24 |
| AU781994B2 (en) | 2005-06-23 |
| NO20021309L (no) | 2002-03-15 |
| US6844313B1 (en) | 2005-01-18 |
| ZA200201383B (en) | 2002-11-27 |
| MXPA02002439A (es) | 2002-07-30 |
| PL353968A1 (pl) | 2003-12-15 |
| KR100757909B1 (ko) | 2007-09-11 |
| HUP0202630A3 (en) | 2004-06-28 |
| EP1216059A2 (en) | 2002-06-26 |
| JP2003509365A (ja) | 2003-03-11 |
| ES2252048T3 (es) | 2006-05-16 |
| CN1222319C (zh) | 2005-10-12 |
| AU6985000A (en) | 2001-04-17 |
| WO2001019354A3 (en) | 2001-06-14 |
| RU2263516C2 (ru) | 2005-11-10 |
| NO20021309D0 (no) | 2002-03-15 |
| CN1373675A (zh) | 2002-10-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu | The biology and dynamics of mammalian cortical granules | |
| Kochhar | The use of in vitro procedures in teratology | |
| Romero-Arredondo et al. | Effects of bovine follicular fluid on maturation of bovine oocytes | |
| Kane | Minimal nutrient requirements for culture of one-cell rabbit embryos | |
| Koehler et al. | Interaction of human sperm with zona‐free hamster eggs: A freeze‐fracture study | |
| Niwa et al. | Penetration in vitro of bovine oocytes during maturation by frozen–thawed spermatozoa | |
| O'Neill | Embryo-derived platelet activating factor: a preimplantation embryo mediator of maternal recognition of pregnancy | |
| Huneau et al. | Estrous sheep serum as a potent agent for ovine IVF: effect on cholesterol efflux from spermatozoa and the acrosome reaction | |
| Hillensjö et al. | Effect of luteinizing hormone and follicle-stimulating hormone on progesterone synthesis by cultured rat cumulus cells | |
| PL202224B1 (pl) | Stała kompozycja farmaceutyczna zawierająca związek HSA | |
| Fujikura et al. | Progesterone and estradiol regulate sperm hyperactivation and in vitro fertilization success in mice | |
| Cui et al. | Porcine cumulus cell influences ooplasmic mitochondria–lipid distributions, GSH–ATP contents and calcium release pattern after electro-activation | |
| Fahy et al. | Inositol stimulates DNA and protein synthesis, and expansion by rabbit blastocysts in vitro | |
| Sananmuang et al. | The effects of roscovitine on cumulus cell apoptosis and the developmental competence of domestic cat oocytes | |
| Yoshimura et al. | Direct effect of gonadotropin-releasing hormone agonists on the rabbit ovarian follicle | |
| Hughes et al. | Use of human cumulus granulosa cells for in vitro screening of reproductive toxicants | |
| Suzuki et al. | In vitro fertilization of porcine oocytes in chemically defined medium | |
| Monroy | Processes controlling sperm—egg fusion | |
| Roy et al. | In vitro inhibition of trophoblast maturation and expansion of early rat blastocysts by an oestrogen antagonist | |
| US6988613B2 (en) | Composition for IVF | |
| TWI281404B (en) | Composition for IVF | |
| Graham et al. | Effect of dilauroylphosphatidylcholine liposomes on motility, induction of the acrosome reaction, and subsequent egg penetration of ram epididymal sperm | |
| Petr et al. | Cyclopiazonic acid, an inhibitor of calcium-dependent ATPases, induces exit from metaphase I arrest in growing pig oocytes | |
| JP2004525676A (ja) | Ｉｖｆ組成物 | |
| Gadella et al. | Bicarbonate dependent capacitation of mammalian sperm cells: a comparative overview |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20090911 |