PL204072B1

PL204072B1 - Sposób otrzymywania prolaktyny

Info

Publication number: PL204072B1
Application number: PL376248A
Authority: PL
Inventors: Florian Ryszka; Barbara Dolińska
Original assignee: Ryszka Florian Biochefa Farmac
Priority date: 2005-07-19
Filing date: 2005-07-19
Publication date: 2009-12-31
Also published as: PL376248A1

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania prolaktyny ze zwierzęcych przysadek mózgowych liofilizowanych lub świeżych, znajdującej zastosowanie w przemyśle farmaceutycznym oraz jako substancja lecznicza dla potrzeb medycyny i weterynarii, jako wzorzec do badań biologicznych i radioimmunologicznych oraz jako antygen do otrzymywania przeciwciał.

Znany jest sposób otrzymywania prolaktyny z przysadek mózgowych mrożonych lub acetonowanych polegający na ekstrahowaniu przysadki zakwaszonym acetonem i strącaniu białka poprzez zwiększenie w roztworze stężenia rozpuszczalnika. Tak otrzymany półprodukt rozpuszcza się w zakwaszonej wodzie przy odpowiedniej sile jonowej, a właściwy hormon strąca się przy pH 5,0 lub 5,5. Uzyskany osad oddziela się wirowaniem, rozpuszcza się w wodzie i dializuje przeciw buforowi fosforanowemu, po czym powstały osad oddziela się od nadsączu i odrzuca, a nadsącz dializuje się przeciw buforowi octanowemu. Strącony osad powstały w wyniku dializy oddziela się od nadsączu sączeniem poprzez ziemię okrzemkową.

Istota według wynalazku polega na tym, że rozdrobnione zwierzęce przysadki mózgowe liofilizowane lub świeże zalewa się zalkalizowanym wodnym alkoholem etylowym o stężeniu od 70% do 80%, przy czym stosunek surowca do ekstrahenta wynosi od 1:4 do 1:20 przy wartości pH od 9,0 do 10,5. Całość poddaje się ekstrakcji w czasie od 0,5 do 24 godzin, a następnie wirując oddziela się wytłoki od wyciągu. Uzyskany wyciąg doprowadza się do wartości pH 5,5 i pozostawia w temperaturze 8°C na okres 24 godzin w celu sformułowania osadu, po czym uzyskany osad podczas wirowania oddziela się od nadsączu, a do nadsączu dodaje się alkohol etylowy w stosunku 1:2 lub 1:3. Mieszaninę pozostawia się w temperaturze 8°C na okres 24 godzin, do sformułowania osadu, po czym wirowaniem oddziela się nadsącz od osadu, a osad zawierający prolaktynę zawiesza się w wodzie destylowanej doprowadzając do uzyskania roztworu o wartości pH 8,5 za pomocą roztworu wodorotlenku sodu. Część nierozpuszczalną oddziela się wirowaniem a nadsącz doprowadza się do uzyskania wartości pH od 5,0 do 5,7 za pomocą roztworu kwasu octowego. Całość pozostawia w temperaturze 8°C na okres 24 godzin, a następnie po odwirowaniu uzyskuje się osad zawierający prolaktynę, który poddaje się oczyszczaniu znanymi metodami.

Otrzymana w ten sposób prolaktyna może być użyta jako wyjściowa substancja do uzyskania preparatu leczniczego dla medycyny lub weterynarii do badań biologicznych. Natomiast dla uzyskania substancji do badań biochemicznych i immunologicznych substancję poddaje się dodatkowemu oczyszczaniu metodą chromatografii jonowymiennej i sączeniu żelowemu według znanych procedur.

P r z y k ł a d I

200 g rozdrobnionych przysadek mózgowych liofilizowanych zalewa się zalkalizowanym wodnym alkoholem etylowym o stężeniu 75%. Całość poddaje się ekstrakcji w ciągu 3 godzin mieszając przy użyciu mieszadła, a następnie wirując w ciągu 15 minut/3000 obrotów oddziela się wytłoki od wyciągu. Uzyskany wyciąg doprowadza się do wartości pH 5,5 i pozostawia w temperaturze 8°C na okres 24 godzin w celu sformowania osadu. Uzyskany osad oddziela się od nadsączu podczas wirowania w ciągu 15 minut/3000 obrotów, po czym do nadsączu dodaje się 7,4 l schłodzonego alkoholu etylowego. Uzyskaną mieszaninę pozostawia się w temperaturze 8°C na okres 24 godzin. Następnie oddziela się osad od nadsączu wirowaniem w ciągu 15 minut/3000 obrotów. Nadsącz odrzuca się, a osad zawierają cy prolaktynę zawiesza się w wodzie destylowanej i doprowadza do uzyskania wartości pH 8,5 za pomocą roztworu wodorotlenku sodu i intensywnie miesza się w ciągu 30 minut. Część nierozpuszczalną wiruje się w ciągu 15 minut/3000 obrotów i odrzuca się, a nadsącz doprowadza się do wartości pH 5,7 za pomocą roztworu kwasu octowego. Całość pozostawia się w temperaturze 8°C na okres 24 godzin, a następnie poddaje się wirowaniu w ciągu 15 minut/3000 obrotów i uzyskuje osad zawierający prolaktynę, który poddaje się oczyszczeniu metodą chromatografii jonowowymiennej i są czenia ż elowego.

P r z y k ł a d II

200 g rozdrobnionych przysadek mózgowych świeżych zalewa się 600 ml zalkalizowanego wodnego alkoholu etylowego o stężeniu 90%. Całość poddaje się ekstrakcji w ciągu 3 godzin mieszając przy użyciu mieszadła, a następnie wirując w ciągu 15 minut/3000 obrotów oddziela się wytłoki od wyciągu. Uzyskany wyciąg doprowadza się do wartości pH 5,5 i pozostawia w temperaturze 8°C na okres 24 godzin w celu sformułowania osadu. Uzyskany osad oddziela się od nadsączu podczas wirowania w ciągu 15 minut/3000 obrotów, po czym do nadsączu dodaje się 5,4 l schłodzonego alkoholu etylowego. Uzyskaną mieszaninę pozostawia w temperaturze 8°C na okres 24 godzin. Następnie

PL 204 072 B1 oddziela się osad od nadsączu wirowaniem w ciągu 15 minut/3000 obrotów. Nadsącz odrzuca się, a osad zawierają cy prolaktynę zawiesza się w wodzie destylowanej i doprowadza do uzyskania wartości pH 8,5 za pomocą roztworu wodorotlenku sodu i intensywnie miesza w ciągu 30 minut. Część nierozpuszczalną wiruje się w ciągu 15 minut/3000 obrotów i odrzuca, a nadsącz doprowadza się do wartości pH 5,0 za pomocą roztworu kwasu octowego. Całość pozostawia się w temperaturze 8°C na okres 24 godzin, a następnie poddaje się wirowaniu w ciągu 15 minut/3000 obrotów i uzyskuje osad zawierający prolaktynę, który poddaje się oczyszczeniu metodą chromatografii jonowymiennej i sączenia żelowego.

Claims

Sposób otrzymywania prolaktyny polegający na ekstrakcji rozdrobnionych przysadek mózgowych, znamienny tym, że rozdrobnione zwierzęce przysadki mózgowe liofilizowane lub świeże zalewa się zalkalizowanym wodnym alkoholem etylowym o stężeniu od 70% do 90%, przy czym stosunek surowca do ekstrahenta wynosi od 1:4 do 1:20, przy wartości pH od 9,0 do 10,5 po czym całość poddaje się ekstrakcji w czasie od 0,5 do 24 godzin, a następnie wirując oddziela się wytłoki od wyciągu, a uzyskany wycią g doprowadza do wartoś ci pH 5,5 i pozostawia w temperaturze 8°C na okres 24 godzin w celu sformułowania osadu, po czym uzyskany osad podczas wirowania oddziela się od nadsączu, a do nadsączu dodaje się alkohol etylowy w stosunku 1:2 lub 1:3 uzyskując mieszaninę, którą pozostawia się w temperaturze 8°C na okres 24 godzin, do sformułowania osadu, po czym wirowaniem oddziela się nadsącz, a osad zawierający prolaktynę zawiesza się w wodzie destylowanej doprowadzając do uzyskania roztworu o wartości pH 8,5 za pomocą roztworu wodorotlenku sodu, część nierozpuszczalną oddziela się wirowaniem, a nadsącz doprowadza do uzyskania wartości pH od 5,0 do 5,7 za pomocą roztworu kwasu octowego i całość pozostawia w temperaturze 8°C na okres 24 godzin, a następnie po odwirowaniu uzyskuje się osad zawierający prolaktynę, który poddaje się oczyszczaniu znanymi metodami.