PL204385B1 - Izolowane probiotyczne szczepy Lactobacillus paracasei i mleczarski produkt spożywczy - Google Patents

Izolowane probiotyczne szczepy Lactobacillus paracasei i mleczarski produkt spożywczy

Info

Publication number
PL204385B1
PL204385B1 PL362374A PL36237401A PL204385B1 PL 204385 B1 PL204385 B1 PL 204385B1 PL 362374 A PL362374 A PL 362374A PL 36237401 A PL36237401 A PL 36237401A PL 204385 B1 PL204385 B1 PL 204385B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
cheese
strain
lactobacillus paracasei
cheeses
dsm
Prior art date
Application number
PL362374A
Other languages
English (en)
Other versions
PL362374A1 (pl
Inventor
Martin Antonsson
Göran Molin
Original Assignee
Probi Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Probi Ab filed Critical Probi Ab
Publication of PL362374A1 publication Critical patent/PL362374A1/pl
Publication of PL204385B1 publication Critical patent/PL204385B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/02—Making cheese curd
    • A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
    • A23C19/0323—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin using only lactic acid bacteria, e.g. Pediococcus and Leuconostoc species; Bifidobacteria; Microbial starters in general
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/165—Paracasei
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są izolowane szczepy Lactobacillus paracasei i mleczarski produkt spożywczy, a zwłaszcza ser probiotyczny, który można wytwarzać z użyciem tych szczepów.
Ser szwedzki wytwarza się z pasteryzowanego mleka krowiego, które poddaje się fermentacji za pomocą startowej hodowli bakterii kwasu mlekowego. Zakwaszone mleko zsiada się pod działaniem podpuszczki (chymozyna), a następnie skoagulowane mleko rozbija się i miesza. Mieszaninę serwatki i ziarenek sera łagodnie podgrzewa się. Serwatkę oddziela się, a ziarenka sera sprasowuje do postaci sera, który soli się i poddaje dojrzewaniu; kolejność oddzielenia serwatki i sprasowania zależy od rodzaju sera. Podczas dojrzewania spontanicznie rośnie wtórna flora, głównie bakterii kwasu mlekowego.
Szwedzki ser twardy i półtwardy podczas dojrzewania jest zdominowany przez spontanicznie rosnącą wtórną mikroflorę, często nazywaną niestarterowymi bakteriami kwasu mlekowego, NSLAB. Ta spontaniczna flora zastępuje dodaną hodowlę startową i rośnie w wybranych warunkach dojrzewającego sera. Uważa się, że NSLAB przedostają się do mleczarni z surowym mlekiem po przeżyciu pasteryzacji, albo z innymi składnikami stosowanymi w produkcji sera. NSLAB najczęściej znajdywane w szwedzkim i norweskim serze należą do rodzaju Lactobacillus, a zwł aszcza gatunku Lactobacillus paracasei, patrz Lindberg, A.-M., i in., Bacterial flora of Norwegian and Swedish semihard cheese after ripening, with special reference to Lactobacillus, Netherlands Milk & Dairy Journal 50 (1996) 563-572. NSLAB zaczynają rosnąć po kilku dniach dojrzewania i osiągają poziom około 106-107 cfu (jednostek tworzących kolonie)/g po miesiącu dojrzewania i ten poziom utrzymuje się przez co najmniej pięć miesięcy. W serze cheddar zachodzi taki sam rozwój NSLAB zdominowanych przez pałeczki kwasu mlekowego. Przykładami gatunków opisanych w przypadku sera cheddar są Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum i Lactobacillus brevis, ale zazwyczaj dominującymi gatunkami są Lactobacillus casei lub Lactobacillus paracasei. Ze względu na to, że NSLAB nie są kontrolowane, prawdopodobne jest, że niektóre wahania w jakości sera wynikają ze zmian składu NSLAB. Aby kontrolować proces dojrzewania i wzrostu spontanicznej flory NSLAB, jako dodatki w wytwarzaniu sera zastosowano czyste kultury szczepów, np. Lactobacillus. Wspomniane dodatki ogólnie mogą wpływać na zapach i smak produktu w postaci sera; wpływ ten nie jest przewidywalny i należy go badać metodą prób i błędów.
Mikroorganizmy probiotyczne w produktach mleczarskich były intensywnie badane w ostatnim dziesięcioleciu. Potencjalne sprzyjające zdrowiu działanie produktów mleczarskich zawierających organizmy probiotyczne, takie jak Lactobacillus i Bifidobacterium spp., stymulowało te badania. Probiotyczne bakterie opisuje się jako „żywe drobnoustroje stanowiące dodatek do pożywienia, który korzystnie wpływa na istotę żywą, gospodarza przez poprawę jego równowagi mikrobiologicznej”, które po spożyciu w pewnej ilości wywierają korzyści zdrowotne, Fuller, R., Probiotics in man and animal, Journal of applied Bacteriology, 66 (1989) 365-378. Pożądane cechy wyboru funkcjonalnych probiotyków podsumowano i opisano w Klaenhammer, T. R. i in., Selection and design of probiotics, International Journal of Food Microbiology 50 (1999) 45-47. Stwierdzono, że kryteria wyboru dzielą się na cztery podstawowe kategorie, takie jak odpowiedniość, przykładowo nietoksyczność; przydatność technologiczna, przykładowo żywotność; konkurencyjność, która oznacza zdolność do przeżycia w jelicie; oraz właściwości użytkowe i funkcjonalność. Zrozumienie mechanizmów, według których kryteria te wpływają na funkcjonalność in vivo, będą stanowiły główne wyzwanie na przyszłość.
Wcześniejsze badania wykazały, że Bifidobacteria, a także wiele probiotycznych szczepów Lactobacillus może dobrze przeżyć w twardych serach, takich jak ser cheddar i ser gouda.
Gomes, A. M., i in., Incorporation and survival of Bifidobacterium sp. strain Bo and Lactobacillus acidophilus strain Ki in a cheese product, Netherlands Milk & Dairy Journal 49 (1995) 71-95, ujawnili wytwarzanie probiotycznego sera gouda z zastosowaniem połączenia szczepu Bifidobacterium i szczepu L. acidophilus jako hodowli startowej. Stwierdzono, że obydwa gatunki przeżyły stosunkowo dobrze, ale właściwości sensoryczne uległy niekorzystnej zmianie.
Dinkar i in., Growth and viability of Bifidobacterium bifidum in Cheddar cheese, J Dairy Sci 77: 2854-2864, 1994, ujawnili wprowadzenie Bifidobacterium bifidum do sera cheddar. Osiągnięto dobrą żywotność (107 cfu/g) bez ujemnego wpływu na jakość sera po sześciu miesiącach dojrzewania, gdy bakterie wprowadzano jako dodatek w późniejszym etapie wytwarzania sera, takim jak mielenie lub solenie. Po tym badaniu wykonano próbę, w której skuteczność kilku probiotycznych szczepów Lactobacillus, L. salivarius i L. paracasei, badano w serze cheddar w okresie ośmiu miesięcy dojrzewania; Gardiner i in., Development of a probiotic Cheddar cheese containing human-derived Lactobacillus paracasei strains, Applied and Environmental Microbiology, 292-2199, czerwiec 1998. WywnioskowaPL 204 385 B1 no, że probiotyczne szczepy L. paracasei były szczególnie odpowiednie jako dodatki, gdyż rosły w dużej liczbie w serze i wpływały na proteolizę, ale nie na właściwości sensoryczne.
Wynalazek dotyczy izolowanego probiotycznego szczepu Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, lub jego odmiany o zasadniczo odpowiadającym profilu REA.
Wynalazek dotyczy również izolowanego probiotycznego szczepu Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432, lub jego odmiany o zasadniczo odpowiadającym profilu REA.
Szczepy według wynalazku są przeznaczone do stosowania jako dodatek w produkcji sera.
Wynalazek dotyczy ponadto mleczarskiego produktu spożywczego, charakteryzującego się tym, że zawiera szczep określony powyżej w ilości 106-109 cfu/g, a korzystnie >107 cfu/g.
Produkt według wynalazku korzystnie stanowi twardy lub półtwardy ser o polepszonym smaku i zawiera szczep Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434.
Produkt według wynalazku korzystnie stanowi twardy lub półtwardy ser o polepszonym smaku i zawiera szczep Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432.
Produkt według wynalazku korzystnie stanowi jogurt i zawiera szczep Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, w mieszaninie ze zwykłymi kulturami jogurtowymi.
Produkt według wynalazku korzystnie stanowi jogurt i zawiera szczep Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432, w mieszaninie ze zwykłymi kulturami jogurtowymi.
Nowe probiotyczne szczepy Lactobacillus paracasei można stosować jako dodatki w produkcji sera, przy czym szczepy te wykazują korzystną zdolność przeżywalności w serze, a także zdolność nadawania serowi dobrego smaku/zapachu.
Szczep Lactobacillus paracasei, który może być stosowany jako probiotyk w produktach mleczarskich, cechuje się tym, że przeżywa przejście przez żołądek i jelita oraz umożliwia otrzymanie produktu serowego o przyjemnym smaku przy jego stosowaniu jako dodatku w produkcji sera.
Szczep Lactobacillus paracasei 8700:2 zdeponowano w DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 1b, 38124 Brunszwik, Niemcy, 10 kwietnia 2000 i nadano mu numer dostępu DSM 13434. Fig. 1 przedstawia profil REA tego szczepu, przy czym jest to profil uzyskany drogą analizy z użyciem endonukleaz restrykcyjnych, dla całkowitego DNA chromosomalnego po przecięciu enzymami restrykcyjnymi HindlII (ścieżka C), ClaI (ścieżka B) oraz EcoRI (ścieżka A). STD odnosi się do wzorca wielkości, który stanowi połączenie High Molecular Marker (Life Technologies) oraz DNA Molecular Weight Marker VI (Rouche Molecular Biochemicals, Boehringer Mannheim).
Szczep Lactobacillus paracasei 02A zdeponowano w DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 1b, 38124 Brunszwik, Niemcy, 10 kwietnia 2000 i nadano mu numer dostę pu DSM 13432. Fig. 2 przedstawia profil REA tego szczepu, przy czym jest to profil uzyskany drogą analizy z użyciem endonukleaz restrykcyjnych, dla całkowitego DNA chromosomalnego po przecięciu enzymami restrykcyjnymi Hindlll (ścieżka C), ClaI (ścieżka B) oraz EcoRI (ścieżka A). STD odnosi się do wzorca wielkości, który stanowi połączenie High Molecular Marker (Life Technologies) oraz DNA Molecular Weight Marker VI (Rouche Molecular Biochemicals, Boehringer Mannheim).
Analizę REA przeprowadzono według Johansson i in., International Journal of Systematic Bacteriology (1995) 10, 670-675.
Figura 3 przedstawia profil RAPD szczepu 02A (ścieżka 2) i szczepu 8700:2 (ścieżka 3). Ścieżki 1 i 4 przedstawiają DNA Molecular Weight Marker VI (Rouche Molecular Biochemicals, Boehringer Mannheim). Analizę RAPD prowadzono w sposób opisany poniżej w części dotyczącej materiałów i metod.
Wspomniane już figury rysunku wymieniono poniżej.
Figura 1 przedstawia obraz profilu REA szczepu Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434.
Figura 2 przedstawia obraz profilu REA szczepu Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432.
Figura 3 przedstawia zdjęcie profili RAPD dwóch szczepów L. paracasei 8700:2 i 02A.
Nowe szczepy według wynalazku można stosować jako probiotyki w dowolnym produkcie mleczarskim, takim jak fermentowane produkty mleczarskie, jogurt, lody, pasta do smarowania, świeży ser, twarde i półtwarde sery wytwarzane z cielęcą podpuszczką oraz z zawartością tłuszczu 5-50%, miękki ser oraz twaróg i produkty oparte na twarogu, z zawartością tłuszczu 0,1-40%, a także ser biały, ewentualnie z fermentowaną polewą lub żywymi bakteriami w masie twarogowej.
Korzystne jest zastosowanie szczepu według wynalazku jako dodatku w produkcji sera.
PL 204 385 B1
Mleczarski produkt spożywczy według wynalazku zawiera jeden lub oba nowe szczepy według wynalazku. Zawartość probiotycznego szczepu w produkcie spożywczym powinna wynosić 106-109 cfu/g, korzystnie powyżej 107 cfu/g.
W korzystnej postaci produkt według wynalazku stanowi twardy lub półtwardy ser o polepszonym smaku/zapachu, zawierający szczep Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, albo twardy lub półtwardy ser o polepszonym smaku/zapachu, zawierający szczep Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432.
W innej postaci produkt według wynalazku stanowi jogurt zawierający szczep Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, lub Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432, w mieszaninie ze zwykłymi kulturami jogurtowymi.
P r z y k ł a d y
Testy przesiewowe probiotycznych szczepów w modelu serowym różnych szczepów Lactobacillus pochodzenia jelitowego (11 szczepów Lactobacillus rhamnosus, 3 szczepy Lactobacillus paracasei i 1 szczep Lactobacillus plantarum), zbadano w próbie przesiewowej w modelu serowym monitorując zdolność do rośnięcia i przeżycia w serze oraz wpływ na smak sera. Różne szczepy uzyskano z jelit ludzkich z zastosowaniem metody opisanej w Molin, G. i in., Numerical taxonomy of Lactobacillus spp. associated with healthy and diseased mucosa of the human intestines, Journal of Applied Bacteriology 74 (1993) 314-323.
W wyniku tego testu do dalszych badań wybrano 4 szczepy; szczepy przedstawiono w tabeli 1 poniżej.
T a b e l a 1
Szczep Organizm
02A L. paracasei
04C L. plantarum
8700:2 L. paracasei
8589:2 L. paracasei
Test przesiewowy probiotycznych szczepów w serze 30+ z okrągłymi dziurami
W teś cie tym zbadano wł a ś ciwoś ci uż ytkowe trzech szczepów Lactobacillus paracasei i jednego szczepu Lactobacillus plantarum, wszystkich izolowanych z ludzkiej śluzówki jelita, jako dodatków do sera z okrągłymi dziurami z co najmniej 30% tłuszczu w suchej masie.
Badane szczepy przedstawiono w tabeli 1 powyżej.
Materiały i metody
Wytwarzanie sera
Sery wytwarzano w 400 litrowej kadzi, zgodnie ze zwykłą procedurą, z pasteryzowanego (73°C,
s) mleka krowiego (Skanemejerier, Horby, Szwecja). Wytwarzane sery były półtwarde, z okrągłymi dziurami oraz zawartością tłuszczu 30% w suchej masie. Mleko do produkcji sera zaszczepiono 106 cfu/ml badanych szczepów. Badane szczepy dodawano do mleka po (30 minut) od zaszczepienia mlekową hodowlą startową, z rozmrożonego zamrożonego buforu. Z każdej partii wyprodukowano cztery sery o masie około 10 kg, z których trzy dojrzewały w 12°C, a jeden początkowo dojrzewał w 16°C przez 14 dni, a następnie w 12°C. Sery dojrzewały w folii z tworzywa sztucznego. Wytwarzanie sera przeprowadzono w czterech powtórzeniach. Co tydzień wytwarzano cztery partie, trzy partie z różnymi dodatkami i jedną kontrolną partię, bez dodatków. Porządek wytwarzania losowo dobierano w każdym tygodniu. Łącznie wytworzono 22 partie, 6 porcji kontrolnych i 4 porcje z każdą z 4 dodawanych kultur.
Analiza sera
Z dwóch odrębnych partii wyprodukowanych z różnymi dodatkami i dwóch kontrolnych partii pobrano próbki po 5 miesiącach dojrzewania, po jednym serze z każdej partii. Z pozostałych 4 partii kontrolnych i podwójnych partii z różnymi dodatkami pobrano próbki po 6 miesiącach dojrzewania (2 sery z każdej partii, które dojrzewały w różnej temperaturze początkowej). Sery zbadano pod względem ich właściwości sensorycznych, właściwości mikrobiologicznych oraz właściwości fizyko-chemicznych.
Mikrobiologiczna analiza sera
Próbkę 10 g aseptycznie pobrano ze środka sera i homogenizowano z 90 ml 2% roztworu cytrynianu sodu w aparacie Stomacher (Seward Medical Limited, London SE1 1PP, UK) przez 2,5 minuty. Po zwykłym rozcieńczeniu i wysianiu zliczono całkowitą liczbę żywych bakterii tlenowych i beztlePL 204 385 B1 nowych po inkubacji na agarze Brain Heart Infusion (BHI; Difco, Sparks, USA) w 28°C po 4 dniach. Żywe pałeczki kwasu mlekowego policzono po inkubacji na agarze Rogosa (Merck, Darmstadt, Niemcy) w warunkach beztlenowych w 28°C po 4 dniach.
Izolowanie mikroorganizmów z sera
Z każ dej próbki losowo pobrano po siedem kolonii. Dwie pobrano z posiewu na cał kowite zliczenie żywych bakterii (agar BHI), a trzy z selekcyjnego posiewu na zliczenie żywych pałeczek kwasu mlekowego (agar Rogosa). Zastosowano płytki, na których można było policzyć kolonie, z liczbą kolonii na płytkę nie mniejszą niż 20.
Analiza mikrobiologiczna
Analiza REA
DNA chromosomalny przygotowano do analizy z użyciem endonukleaz restrykcyjnych (REA) zgodnie z procedurą Johansson i in., 1995, patrz powyżej. Chromosomalny DNA oddzielono od kowalencyjnie zamkniętego kolistego plazmidowego DNA (większość plazmidowego DNA) na podstawie gęstości pławnej barwnika przy wirowaniu w gradiencie CsCl z bromkiem etydyny. Niewielkie ilości DNA plazmidowego w postaci liniowej i otwartej kolistej nadal mogły być obecne w preparatach, ale w nieznacznym stopniu wpł ywał y na ostateczny wynik. Stężenie chromosomalnego DNA zmierzono we fluorymetrze (Model TKO 100, Hoefer Scientific Instruments, San Fransisco, USA). DNA (0,75 mg) osobno strawiono w 37°C przez 4 godziny z 10 jednostkami Hindlll, CLAI lub ECORI (Boehringer). Elektroforezę i skanowanie żeli wykonano w sposób opisany w Johansson i in. Zastosowano poziome zanurzone bloki żelu z 0,9% agarozy o wymiarach 150-235 mm. Jako wzorce wielkości zastosowano 0,2 mg markera DNA o wysokiej masie cząsteczkowej (zawierającego fragmenty DNA o masie cząsteczkowej 8,5 - 48,5 kb (Bethesda Research Laboratories, BRL) razem z 0,5 mg markera VI masy cząsteczkowej DNA, zawierającego fragmenty DNA o masie cząsteczkowej 0,2 - 2,2 kb (Boehringer Mannheim) . Elektroforezę prowadzono przy stałym napięciu 40 V przez 18 godzin w 8,5°C. Podczas trwania elektroforezy zastosowano obieg buforu. Następnie żele wybarwiono przez 20 minut w bromku etydyny (2 mg/ml), odbarwiono w destylowanej wodzie, wizualizowano przy 302 nm za pomocą transluminatora UV (UVP Inc., SanGabriel, USA) i wykonano zdjęcie. Przy takim sposobie prowadzenia elektroforezy otrzymuje się dobrze rozmieszczone i względnie dobrze rozdzielone prążki aż do masy cząsteczkowej 1,8 kb. Wzory REA na negatywach zdjęć zeskanowano do komputera za pomocą poziomego skanera przy rozdzielczości 200 dpi. Następnie obrazy żeli konwertowano do formatu BioNumerics (Applied Maths, Kortrijk, Belgia). Normalizację i całą dalszą analizę żeli przeprowadzono w programie BioNumerics 1.0. Ścieżki na żelach analizowano za pomocą współczynnika Pearsona korelacji według momentu mieszanego oraz metody nieważonego kojarzenia grup przez średnie arytmetyczne (UPGMA). Dane dla trzech trawień, czyli HIND III, CLA I oraz Eco RI połączono dla każdego szczepu za pomocą BioNumerics 1.0.
Analiza RAPD
Wszystkie izolaty typowano metodą losowo amplifowanego polimorficznego DNA, czyli RAPD (Quednau i in., 1998, Current Microbiology, 36, 332-336). Surowe ekstrakty komórkowe przygotowano z nocnych hodowli inkubowanych w 28°C w 1 ml BHI dla izolatów z pł ytek agarowych BHI oraz 1 ml podłoża dla Lactobacillus, LCM, dla izolatów z płytek agarowych Rogosa. Komórki z czystych hodowli przemyto dwukrotnie w 1 ml jałowej wody Milli-Q® (Millipore S.A., Molsheim, Francja) i rozbito w probówkach typu Eppendorfa za pomocą szklanych kulek, 2 mm średnicy, stosując mikser Eppendorfa (5432; Eppendorf, Hamburg, Niemcy). Zastosowany starter miał sekwencję 5'-ACGCGCCCT-3' i stężenie 15 mM w mieszaninie reakcyjnej. W wyniku procedury RAPD na żelu otrzymano osobne prążki w ilości odpowiedniej dla aktualnie typowanych pałeczek kwasu mlekowego, jak to poprzednio potwierdzono dla Lactobacillus plantarum (Johansson, M. L. i in., Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) for typing of Lactobacillus plantarum strains, Letters in Applied Microbiology, 21 (1995) 155-159).
Wzory prążków na żelach analizowano za pomocą „współczynnika Pearsona korelacji według momentu mieszanego®” oraz metody nieważonego kojarzenia grup przez średnie arytmetyczne (UPGMA; Romesburg, 1984) z użyciem programu Gel Compar™ 4.2 (Applied Maths, Kortrijk, Belgia). Komputerową analizę klasterową profili RAPD połączono z porównaniem wizualnym.
Ocena sensoryczna
Sery po 5 miesiącach oceniało 7 osób (6 fachowców i 1 członek personelu Wydziału Technologii Żywności na Uniwersytecie w Lund), w skali odczuć zmysłowych (przetransponowanej na skalę 0 - 10 po analizie) obejmującej wiele cech (jakość: powierzchnia, zapach, początkowa tekstura, wtórna tekstura, smak oraz intensywność: zapachu, smaku, posmaku) oraz ogólna jakość. Po 6 miesiącach sery
PL 204 385 B1 zostały ocenione przez 4 fachowców, w skali odczuć zmysłowych odnośnie powierzchni, tekstury, zapachu, smaku i ogólnej jakości oraz intensywności 11 powiązanych cech. Sery miały temperaturę 16°C, oznakowane były losowym numerem trzycyfrowym i podawano je w losowej kolejności.
Wyniki
Wytwarzanie sera
Wartości pH serów podczas wytwarzania były podobne we wszystkich badanych grupach. Zgodnie z oczekiwaniem skład serów różnił się pomiędzy grupami, ze względu na trudność wytwarzania sera w tej skali.
Analiza mikrobiologiczna sera
W przypadku serów zbadanych po pięciu miesiącach dojrzewania, sery wytwarzane z dodatkiem zawierały o około 1 logarytm cfu/g więcej żywych bakterii w porównaniu z serami kontrolnymi. Wartości podano w poniższej tabeli 2.
T a b e l a 2
Liczba żywych bakterii w serze po pięciu miesiącach dojrzewania
Ser Liczba żywych bakterii, logarytm (cfu/g sera)
Wszystkie tlenowe Wszystkie beztlenowe Lactobacillus
Kontrola 6,85 ± 0,33 7,27 ± 0,02 6,81 ± 0,00
+ 04C 7,50 ± 0,25 7,74 ± 0,27 7,42 ± 0,02
+ 8589:2 8,20 ± 0,01 8,20 ± 0,02 7,62 ± 0,00
+ 8700:2 7,98 ± 0,04 7,56 ± 0,50 7,49 ± 0,05
+ 02A 7,72 ± 0,04 7,65 ± 0,43 7,58 ± 0,00
Izolaty ze wszystkich badanych serów po 5 miesiącach dojrzewania (10 serów, 70 izolatów) podzielono na 12 różnych typów RAPD. Izolaty z kontrolnego sera podzielono na 7 różnych typów RAPD, a izolaty z serów wytwarzanych z dodatkiem 04C były pięciu różnych typów RAPD, a izolaty z serów wytwarzanych z dodatkiem 02A były czterech różnych typów RAPD. Izolaty z serów wytwarzanych z dodatkami 8700:2 i 8589:2 odpowiednio był y trzech typów RAPD. Wszystkie sery zawierał y izolaty jednego wspólnego typu RAPD.
Wszystkie zastosowane dodawane kultury znaleziono w odpowiednich powtórzeniach porcji serów, po pięciu miesiącach dojrzewania. Dodawane kultury 04C, 8589:2 i 02A wyizolowano z agaru selektywnego tylko dla Lactobacillus (04C: dwa z sześciu izolatów; 8589:2: trzy z sześciu izolatów; 02A cztery z sześciu izolatów). W serze kontrolnym, znaleziono jeden izolat tego samego typu RAPD co w 04C, a w innym kontrolnym serze znaleziono jeden izolat tego samego typu RAPD co w 02A. Dodatek 8700:2 ponownie wyizolowano z kolonii na płytce agarowej do całkowitego zliczenia (dwa z ośmiu izolatów) oraz z agaru selektywnego dla Lactobacillus (sześć z sześciu izolatów).
W serach badanych po sześciu miesią cach dojrzewania całkowita liczba żywych bakterii dla wszystkich badanych grup była podobna (log (cfu/g sera) 8,0-8,4) w serach dojrzewanych w 12°C. W serach początkowo dojrzewanych w 16°C całkowita liczba żywych bakterii była ogólnie niż sza niż w serach dojrzewanych w 12°C, szczególnie w serze kontrolnym (log (cfu/g sera) 7,4-7,5). Liczba bakterii na płytkach selektywnych względem pałeczek kwasu mlekowego w serach dojrzewanych w 12°C była ogólnie wyższa w serach wytwarzanych z dodatkami (log (cfu/g sera) 7,6-7,8) niż w kontrolnych (log (cfu/g sera) 7,3 Lg). Na liczbę bakterii na płytkach selektywnych względem pałeczek kwasu mlekowego po sześciu miesiącach dojrzewania nie wpłynęła podwyższona początkowa temperatura dojrzewania.
Ocena sensoryczna
Po pięciu miesiącach dojrzewania sery kontrolne miały znacząco niższą ocenę pod względem tekstury (początkowej i wtórnej) w porównaniu z serami wytwarzanymi z dodatkami. Powierzchnia miała znacząco niższą ocenę w kontroli oraz w serze wytwarzanym z dodatkiem 8700:2, w porównaniu z serami wytwarzanymi z dodatkami 8589:2 oraz 02A. Sery wytwarzane z dodatkami 8700:2 i 02A miały znacząco wyższą ocenę pod względem jakości smaku oraz ogólnej jakości w porównaniu z serami kontrolnymi. Pośród serów wytwarzanych z dodatkiem hodowli, sery wytwarzane z 8700:2 miały
PL 204 385 B1 najwyższą ocenę ogólnej jakości oraz najniższą ocenę intensywności posmaku. Sery wytwarzane z 02A miały najwyższą ocenę jakości i intensywności smaku. Wszystkie analizowane sery otrzymały bardzo podobną ocenę jakości i intensywności zapachu (danych nie przedstawiono).
W tabeli 3 poniż ej przedstawiono wartość pH podczas wytwarzania, zawartość tłuszczu w suchej masie oraz wilgotności w nietłuszczowej masie stałej z jednego sera z dwóch partii dla każdej badanej grupy (średnia ± odchylenie standardowe). Skala oceny sensorycznej była następująca: 1 = zła jakość, niska intensywność; 10 = dobra jakość, wysoka intensywność; średnia ± odchylenie standardowe.
Po sześciu miesiącach dojrzewania nie znaleziono istotnych różnic pomiędzy serami z różnych grup testowych. Jednakże zaobserwowano główne tendencje, takie, że podwyższona początkowa temperatura dojrzewania obniżyła jakość tekstury i poprawiła smak, w szczególności dla serów wytwarzanych z dodatkami.
T a b e l a 3
Kontrola1 04C 8589:2 02A 8700:1
pH po sprasowaniu 6,01 ± 0,05 6,04 ± 0,04 5,91 ± 0,02 5,93 ± 0,06 6,01 ± 0,05
pH po soleniu 5,39 ± 0,00 5,40 ± 0,00 5,36 ± 0,03 5,36 ± 0,02 5,36 ± 0,03
Tłuszcz w suchej masie (%) 34,25 ± 0,60 33,65 ± 0,60 32,30 ± 0,70 31,95 ± 0,17 33,20 ± 0,63
Wilgoć w nietłuszczowej masie stałej (%) 63,40 ± 0,07 60,15 ± 0,11 58,65 ± 0,74 60,05 ± 0,32 59,80 ± 0,70
Powierzchnia2 3,42 ± 0,50*a 5,69 ± 1,76 6,72 ± 0,83*b 7,20 ± 0,94*b 4,09 ± 0,60*a
Początkowa tekstura2 3,98 ± 0,43*c 7,04 ± 0,98*d 6,66 ± 0,88*d 7,16 ± 0,81*d 6,86 ± 0,89*d
Wtórna tekstura2 3,91 ± 0,81*e 6,15 ± 0,85*f 5,80 ± 0,74*f 6,72 ± 0,79*f 6,47 ± 0,81*f
Jakość smaku2 4,25 ± 0,86*g 5,39 ± 0,71 5,45 ± 0,67 6,19 ± 0,61*h 6,44 ± 0,63*h
Intensywność smaku 4,98 ± 0,83 5,84 ± 0,84 5,77 ± 0,62 5,96 ± 0,52 6,08 ± 0,69
Intensywność posmaku 3,52 ± 1,383 2,16 ± 0,924 2,70 ± 0,914 2,08 ± 0,654 1,58 ± 0,814
Ogólna jakość 3,78 ± 0,86* 5,34 ± 0,65 5,06 ± 0,74 6,03 ± 0,49*j 6,49 ± 0,60*j
1) Nie zastosowano dodatku
2) Znaczące różnice (p=0,05) pomiędzy grupami wskazano różnymi literami
3) kwaśny i gorzki
4) gorzki
Test właściwości probiotycznych
Kontrolowano także zdolność szczepów do przeżycia przejścia przez jelita gdy dostarczane były w serze i porównano ze spontanicznie rosnącą wtórną mikroflorą.
Badanie podawania
Podawanie doustne
Sery zaszczepione szczepami 02A i 8700:2 wybrano do badania podawania. Tego wyboru dokonano w oparciu o lepszy smak szczepionych serów oraz zdolność badanych szczepów do wzrostu i przeż ycia w serze podczas dojrzewania. Kultury był y obecne w serze w iloś ci powyż ej 107 cfu/g sera. Ochotników do podawania doustnego podzielono na 3 grupy: 1) konsumentów kontrolnego sera bez wprowadzanych dodatków; 2) konsumentów sera szczepionego 8700:2 oraz 3) konsumentów sera szczepionego 02A. Grupa 1 składała się z ośmiu ochotników (czterech mężczyzn i cztery kobiety, wiek 43-51 lat), grupa 2 składała się z dziesięciu ochotników (pięciu mężczyzn i pięć kobiet, wiek 25-55 lat), a grupa 3 składała się z jedenastu ochotników (sześciu mężczyzn i pięć kobiet, wiek 26-60 lat). Badanie realizowano przez pięć tygodni. Podczas tygodnia 3 i 4 podawano codziennie 150 g sera, co odpowiada dziennej dawce badanego szczepu wynoszącej >0,5·109 cfu. Podczas badania osobom zabro8
PL 204 385 B1 niono spożywać produkty zawierające bakterie probiotyczne i antybiotyki. Próbki odchodów zebrano na początku podawania (tydzień 2), po dwóch tygodniach podawania (tydzień 4) oraz tydzień po końcowym podaniu (tydzień 5).
Izolacja mikroorganizmów z odchodów
Po standardowym rozcieńczeniu i wysianiu odchodów, liczbę żywych pałeczek kwasu mlekowego analizowano na agarze Rogosa inkubowanym w warunkach beztlenowych w 37°C przez 3 dni. Trzy kolonie losowo pobrano z każdej próbki i typowano. Zastosowano płytki, na których można było policzyć kolonie, z liczbą kolonii na płytkę nie mniejszą niż 20.
Typowanie izolatów
Wszystkie izolaty typowano metodą losowo amplifowanego polimorficznego DNA (RAPD; Quednau i in., 1998, supra)
Ponowna izolacja
Profile RAPD izolatów z serów wytwarzanych z dodatkami porównano z profilami RAPD dodatku i izolatów z serów odniesienia. Gdy izolaty z sera z dodatkiem były tego samego typu jak dodatek, dodatek uznawano za ponownie wyizolowany.
Profile RAPD z izolatów z odchodów od każdej osoby porównano z profilem RAPD dodatku, z izolatów z serów wytwarzanych z tym dodatkiem oraz z izolatów z serów odniesienia. Gdy izolaty tego samego typu RAPD co dodatek znaleziono w odchodach po podaniu sera, a nie znaleziono przed podaniem, wnioskowano, ze dodatek przeżył przejście przez jelita. Także gdy izolaty tego samego typu RAPD co dodatek znaleziono w odchodach po tygodniu od podania sera, ale nie znaleziono przed podaniem, wnioskowano, ze dodatek kolonizował ludzkie jelito.
Analiza statystyczna
Analizę zmian i znaczących różnic w liczbie żywych bakterii oraz punktów sensorycznych przeprowadzono obliczając przedziały ufności z zastosowaniem rozkładu t. Ocenę statystyczną istotności różnic liczby żywych bakterii w odchodach w trzech badanych punktach czasowych wykonano za pomocą testu sumy rang Wilcoxona stosując SPSS 6.0 (SPSS Inc, Chicago, USA).
Wyniki podawania doustnego
Szczep 02A znaleziono w odchodach sześciu spośród jedenastu ochotników, bezpośrednio po zakończeniu podawania. Odpowiednia wartość dla szczepu 8700:2 wynosiła 10 na dziesięciu ochotników. Ani 02A ani 8700:2 nie znaleziono w odchodach któregokolwiek z ochotników w tych dwóch grupach w tydzień po zakończeniu podawania. Żaden ze spontanicznie pojawiających się typów RAPD w serach kontrolnych lub w serach wytwarzanych z dodatkiem nie został znaleziony w odchodach ochotników. Jednakże izolaty takiego samego typu RAPD co w 02A znaleziono w odchodach dwóch ochotników, którym podawano ser kontrolny, bezpośrednio po zakończeniu podawania. Także izolaty takiego samego typu RAPD co w 04C znaleziono po tygodniu od zakończenia podawania w odchodach dwóch ochotników. Tym dwóm ochotnikom podawano kontrolny ser lub ser wytwarzany z dodatkiem 02A. Liczba żywych pałeczek kwasu mlekowego w odchodach wzrosła we wszystkich grupach po spożyciu sera. Wzrost ten był statystycznie istotny dla grup spożywających ser zawierający dodaną hodowlę. Po zakończeniu podawania liczba żywych pałeczek kwasu mlekowego spadła dla grup spożywających sery zawierające dodaną hodowlę, znacząco dla grupy 3, podczas gdy wzrosła dla grupy spożywającej ser kontrolny.
Poniższa tabela 4 przedstawia zliczenie w warunkach selektywnych pałeczek kwasu mlekowego dla trzech grup w tym badaniu.
T a b e l a 4
Grupa po 1 Ser kontrolny 2 Ser + 8700:2 3 Ser + 02A
2 tygodniach 5,81 ± 0,74 4,87 ± 0,38 5,94 ± 0,48
4 tygodniach 6,08 ± 0,60 6,72 ± 0,80 6,64 ± 0,46
5 tygodniach 6,97 ± 0,74 5,59 ± 0,92 5,74 ± 0,54
Wniosek
Powyższe doświadczenia wykazały, że dwa szczepy Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 oraz Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432, dobrze zachowują się jako dodawane hodowle do
PL 204 385 B1 wytwarzania sera i mogą być ponownie izolowane z sera po pięciu miesiącach dojrzewania. Szczepy także wywierają pozytywny efekt na właściwości sensoryczne, co oznacza, że potrafiły one zdominować spontanicznie rosnącą wtórną mikroflorę.
Badanie podawania pokazało, że dwa szczepy wydają się spełniać wymaganie konkurencyjności, jako przeżycia przejścia przez żołądek i jelita, a zatem spełniają kryteria wyboru jako potencjalnego szczepu probiotycznego.

Claims (8)

1. Izolowany probiotyczny szczep Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, lub jego odmiana o zasadniczo odpowiadającym profilu REA.
2. Izolowany probiotyczny szczep Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432, lub jego odmiana o zasadniczo odpowiadają cym profilu REA.
3. Szczep według zastrz. 1 albo 2, do stosowania jako dodatek w produkcji sera.
4. Mleczarski produkt spożywczy, znamienny tym, że zawiera szczep określony w zastrz. 1 albo 2, w iloś ci 106-109 cfu/g, a korzystnie >107 cfu/g.
5. Produkt według zastrz. 4, znamienny tym, że stanowi twardy lub półtwardy ser o polepszonym smaku i zawiera szczep Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434.
6. Produkt według zastrz. 4, znamienny tym, że stanowi twardy lub półtwardy ser o polepszonym smaku i zawiera szczep Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432.
7. Produkt według zastrz. 4, znamienny tym, że stanowi jogurt i zawiera szczep Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, w mieszaninie ze zwykłymi kulturami jogurtowymi.
8. Produkt według zastrz. 4, znamienny tym, że stanowi jogurt i zawiera szczep Lactobacillus paracasei 02A, DSM 13432, w mieszaninie ze zwykłymi kulturami jogurtowymi.
PL362374A 2000-09-01 2001-08-28 Izolowane probiotyczne szczepy Lactobacillus paracasei i mleczarski produkt spożywczy PL204385B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE0003100A SE0003100D0 (sv) 2000-09-01 2000-09-01 New strains
PCT/SE2001/001823 WO2002018542A1 (en) 2000-09-01 2001-08-28 New strains of lactobacillus paracasei

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL362374A1 PL362374A1 (pl) 2004-10-18
PL204385B1 true PL204385B1 (pl) 2010-01-29

Family

ID=20280867

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL362374A PL204385B1 (pl) 2000-09-01 2001-08-28 Izolowane probiotyczne szczepy Lactobacillus paracasei i mleczarski produkt spożywczy

Country Status (17)

Country Link
US (2) US20040052903A1 (pl)
EP (1) EP1313837B1 (pl)
JP (1) JP4789396B2 (pl)
KR (1) KR100826144B1 (pl)
CN (1) CN100467585C (pl)
AT (1) ATE312907T1 (pl)
AU (2) AU8280001A (pl)
CA (1) CA2420977C (pl)
DE (1) DE60115919T2 (pl)
DK (1) DK1313837T3 (pl)
ES (1) ES2250457T3 (pl)
NO (1) NO328344B1 (pl)
NZ (1) NZ524446A (pl)
PL (1) PL204385B1 (pl)
PT (1) PT1313837E (pl)
SE (1) SE0003100D0 (pl)
WO (1) WO2002018542A1 (pl)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1759597B1 (en) * 2003-03-13 2009-01-21 Kirin Holdings Kabushiki Kaisha Probiotic composition
CN1317385C (zh) * 2003-05-30 2007-05-23 上海光明乳业股份有限公司 干酪乳杆菌Bd－II菌株及其在降低血脂方面的应用
KR100517065B1 (ko) * 2003-12-11 2005-09-26 씨제이 주식회사 고농도 고수율의 젖산을 생산하는 젖산균과 이를 이용한 젖산 생산방법
WO2007040446A1 (en) * 2005-10-06 2007-04-12 Probi Ab Use of lactobacillus for treatment of autoimmune diseases
CN101325960B (zh) * 2005-10-06 2012-05-30 普罗比公司 乳酸杆菌用于治疗自身免疫性疾病的用途
NL1032678C2 (nl) * 2006-10-13 2008-04-15 Friesland Brands Bv Werkwijze voor het bereiden van een half-harde of harde kaas en aldus verkregen kaas.
EP2420580A1 (en) 2010-08-18 2012-02-22 AB-Biotics, S.A. Probiotic composition for oral health
DK2734049T3 (en) 2011-06-20 2018-07-30 Heinz Co Brands H J Llc PROBIOTIC COMPOSITIONS AND PROCEDURES
EP3351554B1 (en) 2012-06-18 2021-06-09 H.J. Heinz Company Brands LLC Gluten-related disorders
JP6103675B2 (ja) * 2013-04-03 2017-03-29 プロビ アーベ 骨粗鬆症の治療または予防に使用するプロバイオティクス菌株
PL2994150T3 (pl) 2013-05-10 2019-09-30 H.J. Heinz Company Brands Llc Probiotyki i sposoby zastosowania

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU7889791A (en) * 1990-05-11 1991-12-10 First World Cheese Low fat, low cholesterol process cheese
CA2072159A1 (en) * 1992-05-19 1993-11-20 Byong H. Lee Accelerated maturation of cheddar cheese by the addition of live and heat-shocked lactobacilliand neutrase
FI102298B (fi) * 1995-09-07 1998-11-13 Oulutech Oy Menetelmä maitohappobakteerilajien määrittämiseksi ja menetelmään sove ltuvia oligonukleotideja
IT1289984B1 (it) 1997-02-27 1998-10-19 Proge Farm Srl Ceppi di lattobacilli utili nel trattamento di disfunzioni del sistema gastrointestinale
SE510813C2 (sv) * 1997-12-08 1999-06-28 Arla Ekonomisk Foerening Bakteriestam av arten Lactobacillus Paracasei subsp. paracasei, sammansättning därav för användning i livsmedel, samt produkt innehållande stammen
EP1082021B1 (en) * 1998-05-29 2002-07-24 Enterprise Ireland (trading as Bioresearch Ireland) Process for the manufacture of probiotic cheese
DE69903156T2 (de) 1998-06-05 2003-06-05 Biotechnology Research And Development Corp., Peoria Biologische beschichtung mit präventiver und heilender wirkung auf nachernte-erkrankungen
EP1034787A1 (en) * 1999-03-11 2000-09-13 Société des Produits Nestlé S.A. Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria
SE0003576D0 (sv) 2000-10-04 2000-10-04 Probi Ab New strain
KR20040018319A (ko) * 2000-12-18 2004-03-03 프로비오헬쓰 엘엘씨 락토바실러스 카제이 균주 κε01에서 유래된 정장제 화합물

Also Published As

Publication number Publication date
PT1313837E (pt) 2006-05-31
CA2420977A1 (en) 2002-03-07
CN100467585C (zh) 2009-03-11
WO2002018542A1 (en) 2002-03-07
NZ524446A (en) 2003-09-26
EP1313837A1 (en) 2003-05-28
CN1556851A (zh) 2004-12-22
CA2420977C (en) 2010-12-07
DE60115919D1 (de) 2006-01-19
NO20030971D0 (no) 2003-02-28
PL362374A1 (pl) 2004-10-18
EP1313837B1 (en) 2005-12-14
KR20030057531A (ko) 2003-07-04
US20090148561A1 (en) 2009-06-11
AU8280001A (en) 2002-03-13
US20040052903A1 (en) 2004-03-18
ATE312907T1 (de) 2005-12-15
NO20030971L (no) 2003-03-13
JP4789396B2 (ja) 2011-10-12
ES2250457T3 (es) 2006-04-16
SE0003100D0 (sv) 2000-09-01
DK1313837T3 (da) 2006-02-06
JP2004507265A (ja) 2004-03-11
NO328344B1 (no) 2010-02-01
AU2001282800B2 (en) 2006-06-22
DE60115919T2 (de) 2006-06-14
US8703472B2 (en) 2014-04-22
KR100826144B1 (ko) 2008-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8703472B2 (en) Strains of Lactobacillus paracasei
Stanton et al. Probiotic cheese
Vinderola et al. Viability of probiotic (Bifidobacterium, Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus casei) and nonprobiotic microflora in Argentinian Fresco cheese
US8628763B2 (en) Of growth of Bifidobacteria in fermented milk products
KR101873483B1 (ko) 조직감이 개선된 유산균 균주
CA3163217C (en) SUCROSE-NEGATIVE STREPTOCOCCUS THERMOPHILUS INTENDED FOR USE IN THE PREPARATION OF FERMENTED PRODUCTS
US4870020A (en) Preparation of compositions including acid-resistant bifidobacteria
KR20190006999A (ko) 주위 온도에서 저장하기 위한 열처리 식품용 유산균
Marroki et al. Lactobacilli isolated from Algerian goat's milk as adjunct culture in dairy products
Xanthopoulos et al. Use of a selected multi-strain potential probiotic culture for the manufacture of set-type yogurt from caprine milk
AU2001282800A1 (en) New strains of lactobacillus paracasei
EP1593309B1 (en) Dairy product with at least one characteristic of a dairy product mixture
Mattar et al. Physicochemical, microbiological and Sensory Characteristics of White Soft Cheese Made with Different Strains
Saliu et al. Production of Sour-milk Using Mono-and Multi-cultures of Lactic Acid Bacteria Isolated from Nunu
Mokua Effect of Kenyan fermented milk on Escherichia coli
WO2023038072A1 (ja) 乳酸菌、乳酸菌スターター、発酵乳、発酵乳の製造方法、及び乳酸菌のスクリーニング方法
Reeta et al. Development and characterization of indigenous value added Greek strained dahi.
Silva ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF MICROORGANISMS FROM DEEKIRI STARTER CULTURES NATIVE TO SRI LANKA.
HANI STUDIES ON IMPROVEMENT OF PHYSICAL, CHEMICAL AND BACTERIOLOGICAL QUALITY OF Dahi USING WASHED STARTER CULTURES
HU224134B1 (hu) Probiotikus hatású, a vér koleszterinszintjét csökkentő kefir és eljárás előállítására
Ayad Folate producing lactococci for dairy product innovation.
HK1071676A1 (en) Cheese capable of disinfecting helicobacter pylori
HK1071676B (en) Cheese capable of disinfecting helicobacter pylori

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification