PL204419B1 - Kompozycja farmaceutyczna, oligosacharyd, sposób wytwarzania oligosacharydu i zastosowanie oligosacharydu - Google Patents
Kompozycja farmaceutyczna, oligosacharyd, sposób wytwarzania oligosacharydu i zastosowanie oligosacharyduInfo
- Publication number
- PL204419B1 PL204419B1 PL357301A PL35730101A PL204419B1 PL 204419 B1 PL204419 B1 PL 204419B1 PL 357301 A PL357301 A PL 357301A PL 35730101 A PL35730101 A PL 35730101A PL 204419 B1 PL204419 B1 PL 204419B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- sodium
- so3m
- hydrogen
- integer
- oligosaccharide
- Prior art date
Links
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 74
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 title claims abstract description 74
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 42
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical group C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 40
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 39
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 27
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 27
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 claims description 20
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 12
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 206010034576 Peripheral ischaemia Diseases 0.000 claims description 6
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 5
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 5
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 claims description 5
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 claims description 5
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 claims description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 5
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 claims description 5
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 claims description 4
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 4
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 claims description 4
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000027232 peripheral nervous system disease Diseases 0.000 claims description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 3
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical compound CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000001738 Nervous System Trauma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 52
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 38
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- -1 for example Substances 0.000 description 15
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 14
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 9
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 8
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 7
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 6
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 5
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 5
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 4
- 108010022901 Heparin Lyase Proteins 0.000 description 4
- 208000032319 Primary lateral sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 208000003954 Spinal Muscular Atrophies of Childhood Diseases 0.000 description 4
- 206010046298 Upper motor neurone lesion Diseases 0.000 description 4
- 208000026481 Werdnig-Hoffmann disease Diseases 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 201000010901 lateral sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 4
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 3
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 3
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 3
- 238000002305 strong-anion-exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- 208000026072 Motor neurone disease Diseases 0.000 description 2
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 108090000913 Nitrate Reductases Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012691 depolymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 2
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical group 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium hydroxide Chemical compound [OH-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC VDZOOKBUILJEDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- ZCUQOPGIJRGJDA-UHFFFAOYSA-N 1-naphthalen-1-ylethane-1,2-diamine Chemical compound C1=CC=C2C(C(N)CN)=CC=CC2=C1 ZCUQOPGIJRGJDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFGOFGRYDNHJTA-UHFFFAOYSA-N 2-amino-1-(2-fluorophenyl)ethanol Chemical compound NCC(O)C1=CC=CC=C1F MFGOFGRYDNHJTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical group [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- HUCVOHYBFXVBRW-UHFFFAOYSA-M caesium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Cs+] HUCVOHYBFXVBRW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Chemical group 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000001616 ion spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide Inorganic materials [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Chemical group 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Inorganic materials [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000002966 varnish Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
- C08B37/0078—Degradation products
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Psychology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, oligosacharyd, sposób wytwarzania oligosacharydu i zastosowanie oligosacharydu.
Oligosacharydy o wzorze (I),
w którym wartość n wynosi 0, oraz albo R1, R6 i R8 stanowią atom wodoru, R7 stanowi rodnik SO3M lub COCH3, a M stanowi atom sodu, albo R1 i R6 stanowią atom wodoru, R7 stanowi rodnik COCH3, R8 stanowi rodnik SO3M, a M stanowi atom sodu, albo R6 stanowi atom wodoru, R1, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, a M stanowi atom sodu, zostały już opisane przez G.H. Lee i wsp., J. Chromat. 212, 65-73 (1981), nie opisywano jednak żadnych właściwości farmakologicznych tych produktów.
Oligosacharydy o wzorze (I), w których wartość n wynosi 0 i albo R6 i R7 stanowią atomy wodoru, R1 i R8 stanowi rodnik SO3M, a M stanowi atom sodu, albo R1, R6 i R7 stanowi atom wodoru, R8 stanowi rodnik SO3M, a M stanowi atom sodu, zostały opisane przez MW McLean i wsp., Eur. J. Biochem., 1984, 145, 607, bez żadnych wzmianek na temat ich ewentualnej aktywności farmakologicznej.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, która jako składnik czynny zawiera oligosacharyd o wzorze:
w którym n oznacza liczbę całkowitą 1; R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 2, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 3, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 4, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu.
Przedmiotem wynalazku jest oligosacharyd o wzorze (I) w którym n oznacza liczbę całkowitą 1; R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 2, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 3, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu,
PL 204 419 B1 w którym n oznacza liczbę całkowitą 4, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu.
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania oligosacharydu o wzorze (I), w którym poddaje się reakcji borowodorek metalu alkalicznego lub borowodorek czwartorzędowego związku amonowego z oligosacharydami o wzorze:
w którym n oznacza liczbę całkowitą od 1 do 4, R1, R3, R4, R5, są takie same lub różne, oznaczają atom wodoru lub rodnik SO3M, R2 i R6, takie same lub różne, oznaczają atom wodoru lub rodnik SO3M, a M oznacza atom sodu, i izoluje się oligosacharyd.
Korzystnie reakcję prowadzi się w środowisku wodnym w temperaturze zbliżonej do 25°C i w pH 7-10, korzystniej pH reakcji wynosi 9-10.
Jako borowodorek metalu alkalicznego lub borowodorek czwartorzędowego związku amonowego stosuje się borowodorek litu, sodu, potasu lub tetrabutyloamoniowy.
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie oligosacharydu o wzorze (I) do wytwarzania leków do zapobiegania i leczenia chorób zapalnych wywołujących wytwarzanie tlenku azotu, korzystnie do wytwarzania leków do zapobiegania i leczenia niedokrwienia mózgu, serca lub naczyń obwodowych, zapalenia stawów i kości, urazów ośrodkowego układu nerwowego, urazów czaszki i/lub rdzenia kręgowego, stwardnienia rozsianego, bólów neuropatycznych i neuropatii obwodowych, chorób neuronu ruchowego, stwardnienia zanikowego bocznego, AIDS układu nerwowego, choroby Alzheimera, choroby Parkinsona i pląsawicy Huntingtona, do wytwarzania leków do zapobiegania i leczenia chorób związanych z przeżyciem i wzrostem neuronów ruchowych.
Kompozycję według wynalazku można podawać dożylnie, podskórnie, doustnie, doodbytniczo, miejscowo lub drogą wziewną (do oskrzeli).
Jałowe kompozycje do podawania dożylnego lub podskórnego wytwarza się zwykle w postaci wodnych roztworów. Kompozycje te mogą również zawierać adiuwanty, zwłaszcza środki zmiękczające, nadające izotoniczność, emulgujące, dyspergujące i stabilizujące. Lek można wyjaławiać na wiele sposobów, na przykład poprzez filtrację wyjaławiającą, włączając do kompozycji środki wyjaławiające, poprzez napromieniowanie. Leki te można również wytwarzać w postaci jałowych kompozycji stałych do rozcieńczenia bezpośrednio przed użyciem w wodzie jałowej lub innym jałowym płynie do wstrzyknięć.
Jako kompozycje stałe do podawania doustnego można stosować tabletki, pigułki, proszki (kapsułki żelatynowe, saszetki) lub granulaty. W kompozycjach tych składnik czynny miesza się z jednym lub więcej obojętnych rozcieńczalników, takich jak skrobia, celuloza, sacharoza, laktoza lub krzemionka, w strumieniu argonu. Kompozycje te mogą również zawierać substancje inne niż rozcieńczalniki, na przykład jeden lub kilka środków poślizgowych, takich jak stearynian magnezowy lub talk, środek zwiększający wchłanianie po podaniu doustnym, barwnik, powłokę (drażetki) lub lakier.
Jako kompozycje płynne do podawania doustnego można stosować farmaceutycznie dopuszczalne roztwory, zawiesiny, emulsje, syropy i eliksiry, zawierające obojętne rozcieńczalniki, takie jak woda, etanol, glicerol, oleje roślinne lub olej parafinowy. Kompozycje te mogą zawierać środki inne niż rozcieńczalniki, na przykład środki zmiękczające, słodzące, zwiększające objętość, zapachowe lub stabilizujące.
Kompozycjami do podawania doodbytniczego są czopki lub kapsułki doodbytnicze, zawierające, poza produktem czynnym, zaróbki, takie jak masło kakaowe, glicerydy półsyntetyczne lub polietylenoglikole.
Kompozycjami do podawania miejscowego są na przykład kremy, płyny, krople do oczu lub nosa, płyny do płukania ust i aerozole.
PL 204 419 B1
Dawki zależeć będą od pożądanego efektu, czasu trwania leczenia i drogi podawania; zawierać się będą ogólnie między 0,5 mg i 10 mg na kg dziennie drogą podskórną, co odpowiada 3-60 mg dziennie u osoby dorosłej o masie ciała 60 kg.
Ogólnie, lekarz określi dawkowanie w zależności od wieku, masy ciała i wszystkich innych czynników indywidualnych dla danego pacjenta.
Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie oligosacharydów według wynalazku do wytwarzania leku korzystnego do zapobiegania lub leczenia chorób związanych z procesem zapalnym, powodującym wytwarzanie tlenku azotu (NO) lub korzystnego dla przeżycia i wzrostu neuronów ruchowych.
Korzystne jest zastosowanie oligosacharydów o wzorze (I) do wytwarzania leków korzystnych w zapobieganiu i leczeniu niedokrwienia mózgu, serca lub naczyń obwodowych, zapalenia stawów i kości, urazów ośrodkowego układu nerwowego, urazów czaszki i/lub rdzenia kręgowego, stwardnienia rozsianego, bólów neuropatycznych i neuropatii obwodowych, chorób neuronu ruchowego, stwardnienia zanikowego bocznego, AIDS układu nerwowego, choroby Alzheimera, choroby Parkinsona i pląsawicy Huntingtona.
Oligosacharydy o wzorze (I) można wykorzystywać do zapobiegania i/lub leczenia chorób związanych z procesem zapalnym, powodującym wytwarzanie substancji cytotoksycznych, takich jak tlenek azotu (NO) i chorób związanych z przeżyciem i wzrostem neuronów ruchowych, zapobiegania i/lub leczenia chorób zwyrodnieniowych układu nerwowego, w których zapalenie mózgu odgrywa niekorzystną rolę, prowadzących do zgonu; do takich chorób należą: niedokrwienie mózgu, serca (zawał mięśnia serca), niedokrwienie obwodowe, uraz ośrodkowego układu nerwowego, zwłaszcza uraz czaszki i/lub rdzenia kręgowego, stwardnienie rozsiane, bóle neuropatyczne i neuropatie obwodowe, choroby neuronu ruchowego, takie jak stwardnienie zanikowe boczne, postępujący zanik rdzeniowy, niemowlęcy zanik mięśniowy i pierwotne stwardnienie boczne, AIDS układu nerwowego, choroba Alzheimera, choroba Parkinsona i pląsawica Huntingtona oraz niektóre postacie zapalenia stawów i kości, zwłaszcza o lokalizacji stawowej, zapobiegania i/lub leczenia chorób neuronu ruchowego, takich jak stwardnienie zanikowe boczne, postępujący zanik rdzeniowy, niemowlęcy zanik mięśniowy i pierwotne stwardnienie boczne.
Oligosacharydy o wzorze (I) można wytwarzać przez działanie borowodorku metalu alkalicznego lub borowodorku czwartorzędowego związku amonowego na oligosacharydy o wzorze:
w którym n stanowi liczbę całkowitą od 0 do 25, R1, R3, R4, R5, R6 i R8, takie same lub różne, stanowią atom wodoru lub rodnik SO3M, R2 i R7, takie same lub różne, stanowią atom wodoru lub rodnik SO3M lub COCH3, a M stanowi atom sodu, wapnia, magnezu lub potasu.
Reakcja ta zachodzi w środowisku wodnym, w temperaturze zbliżonej do 25°C, w pH wynoszącym od 7 do 10, korzystnie, od 9 do 10, przez cały czas trwania reakcji. Utrzymanie pH osiąga się przez dodawanie roztworu wodorotlenku sodowego w stężeniu 0,5 mol/l. Reakcję przerywa się przez zakwaszenie środowiska reakcji, na przykład poprzez dodanie kwasu octowego do uzyskania pH zawartego między 4 a 5.
Borowodorkiem metalu alkalicznego jest na przykład borowodorek litu, sodu i potasu.
Borowodorkiem czwartorzędowego związku amonowego jest na przykład borowodorek tetrabutyloamoniowy.
Oligosacharydy o wzorze (II) można wytwarzać poprzez chromatograficzne rozdzielanie na żelu mieszaniny oligosacharydów (III), wytworzonej poprzez enzymatyczną depolimeryzację heparyny lub
PL 204 419 B1 depolimeryzacją zasadową estru benzylowego heparyny lub półsyntetycznego estru benzylowego heparyny.
Chromatografię prowadzi się na kolumnach napełnionych żelem typu poliakrylamid-agaroza, takim jak na przykład żel dostępny na rynku pod nazwą Ultrogel ACA202R (Biosepra). Korzystnie, stosuje się baterię kolumn z żelem poliakrylamidowo-agarozowym. Liczbę kolumn dostosowuje się do objętości, żelu i rozdzielanych oligosacharydów. Mieszaninę eluuje się roztworem zawierającym bufor fosforanowy i chlorek sodowy. Korzystnie, roztwór buforu fosforanowego jest roztworem w stężeniu 0,02 mol/l NaH2PO4/Na2HPO4 (pH 7), zawierającym 0,1 mol/l chlorku sodowego. Wykrywanie poszczególnych frakcji odbywa się poprzez spektrometrię UV (254 nm) i jonową (IBF). Tak wytworzone frakcje można ewentualnie na koniec oczyszczać, na przykład poprzez chromatografię SAK (wymiana silnych anionów), sposobami znanymi specjalistom, zwłaszcza sposobami opisanymi przez K.G. Rice i R.J Linhardt, Carbohydrate Research 190, 219-233 (1989), A. Larnkjaer, S.H. Hansen i P.B. Ostergaard, Carbohydrate Research, 266, 37-52 (1995) i w patencie WO90/01501 (przykład 2). Frakcje są następnie liofilizowane i odsalane na kolumnie wypełnionej żelem, takiej jak kolumna żelowa Sephadex GIOR (Pharmacia Biochemicals).
Kiedy oczyszczanie prowadzi się inną metodą, niż chromatografia SAX, liofilizaty można ewentualnie oczyszczać poprzez strącanie proste lub frakcjonowane, sposobami znanymi specjalistom, szczególnie sposobem opisanym w patencie FR2548672. Ogólnie, prowadzi się je następująco:
Liofilizowaną frakcję, poddawaną oczyszczeniu, rozpuszcza się w temperaturze 25°C w około dziesięciu objętościach wody destylowanej. Dodając metanol lub etanol strąca się pożądany oligosacharyd, regulując jego wzbogacanie poprzez HPLC (chromatografię cieczową wysokosprawną). Ilość dodawanego metanolu lub etanolu określa się w zależności od oczekiwanej czystości i wydajności danego oligosacharydu. Reakcję tę można prowadzić w kilku kolejnych etapach, poczynając od pierwotnego roztworu liofilizatu. W tym celu dodaje się małymi porcjami środek nadający nierozpuszczalność (metanol lub etanol) i po każdorazowym dodaniu izoluje się wytworzony osad. Tak wytworzone osady analizuje się w HPLC. W zależności od pożądanej czystości i wydajności, zbiera się odpowiednie frakcje osadu.
Według jednej z odmian niniejszego wynalazku, oczyszczaną frakcję liofilizowaną można rozpuścić w 10-200 objętościach wody, zawierającej od 0 do 30% octanu sodowego. Odsetek octanu sodowego będzie się uprzednio dostosowywać w zależności od rodzaju poddawanego obróbce oligosacharydu (w zależności od jego rozmiaru). Dodając metanol powoduje się strącenie pożądanego oligosacharydu, regulując jego wzbogacanie przez chromatografię HPLC (chromatografia cieczowa wysokosprawna). Ilość dodawanego metanolu określa się w zależności od oczekiwanej czystości i wydajno ś ci danego oligosacharydu. Proces ten moż na również przeprowadzić w kilku kolejnych etapach, poczynając od pierwotnego roztworu liofilizatu. W tym celu dodaje się małymi porcjami środek nadający nierozpuszczalność (metanol) i po każdorazowym dodaniu izoluje się wytworzony osad. Tak wytworzone osady analizuje się w HPLC. W zależności od pożądanej czystości i wydajności, zbiera się odpowiednie frakcje osadu.
W przypadku związków poś rednich o wzorze (II), w którym wartość n wynosi 0, 1 lub 2, korzystne jest wychodzenie od mieszaniny (III), wytworzonej przez depolimeryzację enzymatyczną.
Depolimeryzację tę przeprowadza się z użyciem heparynazy I (EC 4.2.2.7) w roztworze buforu fosforanowego o pH 7, w obecności chlorku sodowego i BSA (bydlęcej albuminy surowicy) w temperaturze od 10 do 18°C, korzystnie, w temperaturze 15°C, przez 8-10 dni, korzystnie, 9 dni. Depolimeryzację przerywa się na przykład poprzez ogrzewanie środowiska reakcji do temperatury 100°C przez 2 minuty, po czym mieszaninę odtwarza się przez liofilizację. Korzystnie, stosuje się 7 j.m. heparynazy I na 25 g heparyny. Roztwór buforu fosforanowego zawiera zwykle 0,05 mol/l NaH2PO4/Na2HPO4 (pH 7) w obecności 0,1 mol/l chlorku sodowego. Stężenie BSA wynosi zwykle 2%.
W przypadku związków pośrednich o wzorze (II), w którym wartość n wynosi 0, 1, 2, 3 lub 4, korzystne jest wychodzenie od mieszaniny (III), wytworzonej przez depolimeryzację estru benzylowego heparyny.
Ester benzylowy heparyny można wytwarzać sposobami opisanymi w patentach US5389618, EP40144, FR2548672. Stopień estryfikacji będzie wynosił korzystnie od 50 do 100%, korzystniej, od 70 do 90%.
Depolimeryzacja zachodzi w środowisku wodnym, pod wpływem wodorotlenku metalu alkalicznego (na przykład wodorotlenku litu, sodu, potasu lub cezu) lub wodorotlenku czwartorzędowego związku amonowego (na przykład wodorotlenku tetrabutyloamoniowego), korzystnie, o molarności od
PL 204 419 B1
0,1 do 0,2 mol/l, w temperaturze 40-80°C, przez 5-120 minut. W korzystnym wykonaniu proces prowadzi się przez 5-15 minut, w temperaturze 60-70°C, z 0,15 mol/l roztworem wodorotlenku sodowego. Reakcję depolimeryzacji zatrzymuje się poprzez zobojętnienie dodaniem kwasu, takiego jak kwas octowy. Po dodaniu 10% (masa/objętość) octanu sodowego, mieszaninę oligosacharydów strąca się przez dodanie metanolu, korzystnie, w stosunku 2 objętości na 1 objętość środowiska reakcyjnego i filtruje si ę .
Według korzystnego aspektu wynalazku, mieszaninę oligosacharydów, wytworzoną przez depolimeryzację chemiczną, w postaci roztworu wodnego, wzbogaca się poprzez ultrafiltrację na błonach z odpowiednim nominalnym progiem przepuszczania (typu Pellicon z regenerowanej celulozy, produkcji firmy Millipore), przy czym typ błony dobiera się w zależności od typu odzyskiwanych wzbogaconych oligosacharydów. W przypadku oligosacharydów (II), dla których wartość n = 0, stosuje się błonę o nominalnym progu przepuszczalności 1 kDa, w przypadku oligosacharydów (II), dla których wartość n = 1, stosuje się błonę 1 kDa lub 3 kDa, w przypadku oligosacharydów (II), dla których wartość n = 2, stosuje się błonę 3 kDa, w przypadku oligosacharydów (II), dla których wartość n = 3 lub 4, stosuje się błonę 5 kDa. W procesie tym zbiera się przesącz, a odrzuca osad. Frakcja produktu wzbogaconego stanowi od 50 do 10% początkowej mieszaniny oligosacharydów, przy zachowaniu co najmniej 80% pożądanego oligosacharydu.
W przypadku związków poś rednich o wzorze (II), w którym wartość n wynosi 0-25, korzystne jest wychodzenie od mieszaniny (III), wytworzonej przez depolimeryzację półsyntetycznego estru benzylowego polisacharydu siarczanowego. Półsyntetyczny ester benzylowy polisacharydu siarczanowego wytwarza się z półsyntetycznych polisacharydów siarczanowych, wytwarzanych z polisacharydu K5 i sposobami opisanymi w patentach WO94/29352 i WO96/14425. Warunki estryfikacji, depolimeryzacji i odzyskiwania są takie same, jak opisane uprzednio dla estru benzylowego heparyny.
We wszystkich omówionych powyżej sposobach heparyna może być pochodzenia świńskiego, owczego, koziego lub bydlęcego i może pochodzić ze śluzu, płuc lub skóry zwierząt. Korzystnie, stosuje się heparynę pochodzącą ze śluzu świń lub owiec lub z płuc bydła, korzystniej, ze śluzu świń lub z płuc bydła.
Oligosacharydy o wzorze (I) wykazują właściwości przeciwzapalne i można je również wykorzystywać do zapobiegania lub leczenia chorób związanych z procesem zapalnym, powodującym wytwarzanie substancji cytotoksycznych, takich jak tlenek azotu (NO), którego postać indukowalna uwalniana jest zwłaszcza przez neutrofile lub makrofagi w czasie ich migracji i aktywacji na poziomie tkankowym. Do migracji, aktywacji i adhezji neutrofili dochodzi na poziomie tkanek niedokrwionych w wyniku zamknięcia lub skurczu tętnicy unaczyniającej tę tkankę. Do takiego niedokrwienia może dochodzić w mózgu (naczyniowe incydenty mózgowe), mięśnia serca (zawał mięśnia serca) lub kończyn dolnych (tak zwane niedokrwienie obwodowe). Oligosacharydy o wzorze (I) można również stosować do zapobiegania i/lub leczenia chorób zwyrodnieniowych układu nerwowego, w których zapalenie w obrębie mózgu odgrywa niekorzystną rolę i które mogą prowadzić do zgonu, takich jak niedokrwienie mózgu, niedokrwienie serca (zawał mięśnia serca), niedokrwienie obwodowe, urazy ośrodkowego układu nerwowego, zwłaszcza urazy czaszki i/lub rdzenia kręgowego, stwardnienie rozsiane, bóle neuropatyczne i neuropatie obwodowe, choroby neuronu ruchowego, takie jak stwardnienie zanikowe boczne, postępujący zanik rdzeniowy, niemowlęcy zanik mięśniowy i pierwotne stwardnienie boczne, AIDS układu nerwowego, choroba Alzheimera, choroba Parkinsona i pląsawica Huntingtona oraz niektóre postacie zapalenia stawów i kości, zwłaszcza o lokalizacji stawowej.
Aktywności przeciwzapalnej tych produktów dowiedziono in vivo w teście NOx (azotynu i azotanu), wywołanym przez lipopolisacharyd (LPS) pochodzący z E. coli, sposobem opisanym przez M. Yamashita i wsp., Eur. J. Pharmacol, 338, 2, 151-158 (1997) lub J.E. Shellito i wsp. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 13, 1, 45-53 (1995).
Samcom myszy CD1 (Charles River, 25-35 g) wstrzykiwano w T0 dożylnie bolus 0,5 mg/kg oligosacharydu, i w T+15 minut podskórnie 1 lub 2 mg/kg oligosacharydu. W T+30 minut, podawano 100 mg/kg lipopolisacharydu (LPS) pochodzącego z E. coli (Sigma L3129, serotyp 0127:B8). W T+3 godziny ponownie wstrzykiwano podskórnie 1 lub 2 mg/kg oligosacharydu. W T+5 godzin 30 minut, pobierano próbkę krwi przez nakłucie oka i oznaczano stężenie NOx (azotynu i azotanu) w osoczu metodą kolorymetryczną Griessa po redukcji azotanu do azotynu reduktazą azotanową w następujący sposób: 12 ml próbki osocza mieszano z 88 ml dejonizowanej wody i inkubowano w ciemności 1 godzinę w temperaturze otoczenia z 40 ml buforu fosforanowego (0,31M, pH 7,5), 20 ml (3NADPH (zredukowany fosforan dwunukleotydu nikotynamidoadeninowego)(0,86 mm), 20 ml FDA (dwunukleotyd
PL 204 419 B1 flawinoadeninowy) (0,11 mm) i 20 ml reduktazy azotanu (2j/ml) (Boehringer Mannheim). Dodawano 10 ml ZnSO4 (1M) w celu strącenia białek i po zmieszaniu próbki odwirowuje się przy 20000 g przez 5 minut. Na koniec inkubowano 50 ml supernatantu przez 10 minut w temperaturze otoczenia z 100 ml odczynnika Griessa (sulfanilamid w 1% stężeniu w 0,1% mieszaninie kwasu fosforowego/naftyloetylenodiaminy w wodzie dejonizowanej (obj.). Mierzono gęstość optyczną przy długości fali 540 nm za pomocą spektrofotometru mikropłytkowego; każdy punkt oznaczano dwukrotnie. Jako normę metody kolorymetrycznej stosowano KNO3 i NaNO2.
W teście tym oligosacharydy według wynalazku hamują o ponad 50% tworzenie się NOx.
Ponadto oligosacharydy o wzorze (I) zwiększają czas przeżycia i nasilają wzrost neuronów ruchowych, są zatem szczególnie korzystne w zapobieganiu i leczeniu chorób neuronu ruchowego, takich jak stwardnienie zanikowe boczne, postępujący zanik rdzeniowy, niemowlęcy zanik mięśniowy, pierwotne stwardnienie boczne.
Wiadomo, że hodowle neuronów ruchowych obumierają na drodze apoptozy, jeżeli prowadzi się je bez dodatku substancji troficznych (na przykład BDNF, NT5). Obecnie stwierdzono, że oligosacharydy według wynalazku umożliwiają przeżycie i wzrost neuronów ruchowych. Aktywność tę badano na wspólnych hodowlach astrocytów i neuronów ruchowych, pozbawionych czynników neurotroficznych, w następujący sposób:
Hodowle wzbogacone w neurony ruchowe:
Hodowle wzbogacone w neurony ruchowe wytwarzano sposobem odwirowania, opisanym przez R.L. Schnaar i A.E. Schaffner, J. Neurosci., 1, 204-217 (1981) i zmodyfikowanym przez W. Camu i CE. Henderson, J. Neurosci. Methods, 44, 59-70 (1992). W warunkach jałowych przecinano rdzeń kręgowy zarodków szczurzych E15 i wydostawano go z odcinka grzbietowego kręgosłupa. Następnie cięto te rdzenie i inkubowano przez 15 minut w temperaturze 37°C w PBS (sól fizjologiczna zbuforowana fosforanem: NaCl 137 mm, KCl 2,68 mm, Na2HPO4 6,45 mm, KH2PO4 1,47 mm) z dodatkiem 0,05% trypsyny. Rozdzielenie komórek uzupełniano roztarciem końcem 1 ml pipety w pożywce hodowli z dodatkiem 0,1% bydlęcej albuminy surowicy (BSA) i 0,1 mg/ml DNAzy. Zawiesinę komórek rozmieszczano na prążku metrizamidu 6,5% masa/objętość w pożywce L15 (produkcji firmy Gibco BRL) i odwirowuje przy 500 g przez 15 minut. Prążek powierzchni granicznej, zawierający neurony ruchowe, zbierano, rozcieńczano w pożywce L15 i inkubowano przez 45 minut w temperaturze otoczenia w pojemnikach do hodowli, uprzednio powleczonych mysim anty-IgG i hybrydowym supernatantem MC 192 (Chandler CE i wsp., J. Biol. Chem., 259, 6882 (1984). Zawieszone komórki przepłukiwano pożywką L15 i neurony ruchowe eluowano, słabo wstrząsając, hybrydowym supernatantem MC 192. Neurony ruchowe rozmieszczano z gęstością 650 komórek na 24 mm w pojemnikach do hodowli na pojedynczych warstwach astrocytów w pożywce L15 z dodatkiem dwuwęglanu sodowego (22 mm), koalbuminy (0,1 mg/ml), putrescyny (0,1 mm), insuliny (5 μg/ml), seleninu sodowego (31 nm), glukozy (20 mm), progesteronu (21 nm), penicyliny (100 j.m./ml) i streptomycyny (100 ug/ml). Hodowle prowadzono w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2.
Hodowla astrocytów rdzenia kręgowego
Astrocyty wytwarzano z zarodków szczurzych sposobem R.P. Saneto i J. De Vellis, opisanym w: Neurochemistry, a practical approach (A.J. Turner i H.S. St John) IRL Press, Oxford-Washington DC, str. 27-63 (1987), z niewielkimi zmianami. Rdzenie kręgowe wycinano w jałowych warunkach, pozbawiano opon i zwojów grzbietowych. 5-10 rdzeni kręgowych przenoszono do PBS (sól fizjologiczna zbuforowana fosforanem: NaCl 137 mm, KCl 2,68 mm, Na2HPO4 6,45 mm, KH2PO4 1,47 mm) i cięto przed inkubacją w temperaturze 37°C przez 25 minut w PBS z dodatkiem 0,25% trypsyny. Obróbkę enzymatyczną hamowano dodaniem 10 ml zmodyfikowanej pożywki Dubelcco-Eagle (DMEM) z dodatkiem 10% płodowej surowicy cielęcej (FCS) i komórki zbierano przez odwirowanie. Kolejny etap rozdzielania mechanicznego wykonywano za pomocą zakończenia 1 ml pipety. Komórki rozmieszczano z gęstością 1,5 x 106 na 25 cm2 pożywki hodowlanej w DMEM z 10% FCS. Po 2 dniach in vitro do hodowli dodawano substancje odżywcze codziennie przez cały czas trwania badania. Po uzyskaniu widocznej pojedynczej warstwy komórek, hodowle mieszano przez 48 godzin przy 250 obr./min. i następnego dnia pojedyncze warstwy poddawano działaniu arabinozydu cytozyny (10-20 M) przez 48 godzin. Pojedyncze warstwy astrocytów następnie namnażano do gęstości 5/35 mm na płytkach do hodowli w przypadku 25 cm2 butelek do hodowli na początku badania.
Hodowle astrocytów rdzeniowych utworzone są z ponad 98% komórek immunoreaktywnych na kwaśne włókienkowe białko glejowe (GFAP).
PL 204 419 B1
Pojedyncze warstwy astrocytów eksponuje się na działanie samego PBS (kontrola) lub badanego produktu w roztworze PBS, przez 24 godziny, w stężeniu od 0,1 ng/ml do 10 ng/ml. Pojedyncze warstwy astrocytów płucze się następnie DMEM i utrzymuje przez 2 godziny w pożywce hodowlanej, do której dodano neurony ruchowe.
W dwie godziny po dodaniu substancji odżywczych i przez 2 lub 3 dni do pożywki hodowlanej dodaje się jeszcze zaróbkę lub produkt badany.
Immunochemiczna identyfikacja neuronów ruchowych
Komórki utrwala się w 4% paraformaldehydzie i 0,1% aldehydu glutarowego w PBS (pH 7,4-4°C przez 15 minut). Hodowle następnie poddaje się płukaniu, a miejsca nieswoiste blokuje 2% bydlęcą albuminą surowicy (BSA) w PBS i 0,1% Triton X100R. Hodowle te następnie kolejno inkubuje się z przeciwciałami p75lngrf (uprzednio cytowana praca Chandlera) przez noc w temperaturze 4°C i z biotynylowaną surowicą kozią (1/125 Gibco) i streptawidynoperoksydazą (1/200, Gibco) przez 60 minut. Przeciwciała uwidacznia się za pomocą reakcji DAB/nadtlenek wodoru.
Liczenie komórek i analiza statystyczna
Komórki immunoreaktywne wobec receptora neutrofinowego o słabej aktywności p75lngrf, o neurytach dłuższych, niż średnica 4 komórek, uważa się za żywe neurony ruchowe. Liczbę neuronów ruchowych ocenia się, zliczając komórki zaznaczone na powierzchni 0,825 cm2 pod mikroskopem o powię kszeniu 200 x. Warto ś ci wyraża się jako liczbę neuronów ruchowych na cm2 lub odsetek liczby neuronów ruchowych obecnych w hodowlach prowadzonych w nieobecności czynnika troficznego w porównaniu z kontrolą . Doś wiadczenia prowadzono co najmniej 3-krotnie.
Analizę statystyczną przeprowadzono z użyciem testu t-Studenta.
Wstępna obróbka oligosacharydami spowodowała wzrost liczby neuronów ruchowych, rosnących na pojedynczej warstwie astrocytów, z 20 do 50%.
Poniższe przykłady są ilustracją wytwarzania oligosacharydów o wzorze (I) i związków pośrednich.
W przykł adach uż yto nastę pują cych skrótów:
Δ^: (kwas 4-dezoksy-2-O-sulfo-a-L-treo-heksa-enopiranozylourono)-(1 >4)-2-dezoksy-2-sulfoamino-6-O-sulfo-a-D-glukopiranoza, sól czterosodowa lub AUAp2S-(1 >4)-a-D-GlcNp2S6S
Is: (kwas 2-sulfo-a-L-idopiranozylourono)-(1 >4}-2-dezoksy-2-sulfoamino-6-O-sulfo-a-D-glukopiranoza, sól czterosodowa (kwas 2-sulfo-a-1-Lidopiranozylourono)-(1 >4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranoza, sól czterosodowa lub a-L-idoAp2S-(1 >4)-a-D-GlcNp2S6S
IIs: (kwas a-L-idopiranozylourono)-(1 >4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranoza, sól trójsodowa lub a-L-idoAp-(1 >4)-a-D-GlcNp2S6S
I IIs: (kwas 2-sulfo-a-L-idopiranozylourono)-(1 >4)-2-dezoksy-2-sulfoamino-a-D-glukopiranoza, sól trójsodowa lub a-L-idoAp2S-(1 >4)-a-D-GlcNp2S6S
IdoAp : kwas idopiranozylouronowy
GlcNp: 2-amino-2-dezoksy-glukopiranoza
ΔUap : kwas 4-dezoksy-a-L-treo-heksaenopiranozylouronowy
S: siarczan.
Przykłady wytwarzania mieszanin związków pośrednich o wzorze (II)
P r z y k ł a d A - wytwarzanie oligosacharydów o wzorze (II), w którym wartość n = 0, 1 i 2 przez depolimeryzację enzymatyczną i rozdzielanie
Rozpuszczono 25 g heparyny w 250 ml roztworu buforu fosforanowego, zawierającego 0,05 mol/l NaH2PO4/Na2HPO4 (pH = 7), 0,2 mol/l chlorku sodowego i 2% BSA (bydlęcej albuminy surowicy). Do mieszaniny dodano 7 j.m. heparynazy I: (EC 4.2.2.2.7) i uzyskany roztwór schłodzono do temperatury 15°C, po czym utrzymywano w tej temperaturze przez cały czas trwania reakcji depolimeryzacji. Postęp reakcji śledzono, pobierając cyklicznie próbki i analizując je w chromatografii permeacyjnej żelowej. Po 9 dniach reakcję enzymatyczną przerwano, ogrzewając środowisko reakcji do temperatury 100°C przez dwie minuty. Schłodzoną mieszaninę poddano następnie liofilizacji. Uzyskano w ten sposób mieszaninę oligosacharydów (III)
Wytworzoną mieszaninę oligosacharydów (III) poddano następnie chromatografii następującym sposobem: chromatografię wykonano na kolumnach napełnionych żelem poliakrylamidowo-agarozowym, znanym pod nazwą Ultrogel ACA 202 i mieszaninę eluowano roztworem zawierającym bufor fosforanowy (0,02 mol/l NaH2PO4/Na2HPO4) pH=7 i 0,1 mol/l chlorku sodowego. Detekcję prowadzono metodą spektrometrii UV (254 nm) i jonowej (IBF). Produkty można ostatecznie oczyszczać metodą chromatografii SAX (wymiana silnych anionów) lub przez strącanie frakcjonowane, sposobem opisaPL 204 419 B1 nym w patencie FR 2548672. Odzyskane frakcje produktu liofilizuje się i następnie odsala na kolumnie żelowej Sephadex G10R (Pharmacia Biochemicals).
Tym sposobem wytwarza się 3 g disacharydu Δ^, 1100 mg mieszaniny heksasacharydu, zawierającej typowo 55% pochodnej Δ^-^-^, 35% Δ^-^-^ i 10% Δ^-^-Η^. Tę ostatnią mieszaninę można oczyszczać sposobami znanym specjalistom, aby oddzielić z niej poszczególne składniki, lub stosować w stanie niezmienionym do transformacji do zredukowanych pochodnych o wzorze (I).
P r z y k ł a d B - wytwarzanie oligosacharydów o wzorze (II), w którym wartość n = 0, 1, 2, 3 lub 4, przez depolimeryzację estru benzylowego heparyny i rozdzielanie
A - Wytwarzanie estru benzylowego heparyny
Ester benzylowy heparyny wytwarza się sposobem opisanym w przykładzie 3 patentu US 5,389,618.
B - Depolimeryzacja
100 g estru benzylowego heparyny rozpuszczono w 1,9 l wody zdemineralizowanej. Mieszaninę ogrzano do temperatury 60°C, wstrząsając. Po wytworzeniu jednolitego roztworu wprowadzono jednorazowo około 35 ml 23% roztworu wodorotlenku sodowego. Po 10 minutach reakcji mieszaninę schłodzono i zobojętniono, dodając 80 ml roztworu kwasu octowego około 2 N. Do tego roztworu dodano 10% masa/obj. octanu sodowego. Mieszaninę oligosacharydów strącono, dodając około 2 objętości metanolu. Osad izolowano przez filtrację, przepłukano dwukrotnie metanolem i suszono pod zmniejszonym ciśnieniem w temperaturze 50°C. Po wysuszeniu uzyskano 73,8 g mieszaniny oligosacharydów (II).
C - Wzbogacanie w oligosacharyd o n = 1 g mieszaniny oligosacharydów wytworzonych uprzednio rozpuszczono w około 35 objętościach wody. Roztwór ten poddano ultrafiltracji przez błonę 3 kDa (Pellicon). Po uzyskaniu 600 ml przesączu, osad rozcieńcza się 500 ml wody. Proces prowadzono do uzyskania dodatkowych 450 ml przesączu. Obie frakcje przesączu połączono, po czym zatężono na sucho pod zmniejszonym ciśnieniem. Uzyskano 6,1 g białożółtawej substancji stałej. Analiza substancji stałej przez chromatografię permeacyjną na żelu wykazała zawartość około 30% oligosacharydu o wzorze(II), w którym n = 1.
D - Frakcjonowanie mieszanin oligosacharydów po ultrafiltracji
Wzbogaconą mieszaninę frakcjonowano na kolumnach napełnionych żelem poliakrylamidowo-agarozowym, znanym pod nazwą Ultrogel ACA 202 (stosuje się serię 4 kolumn o średnicy 10 cm i wysokości 50 cm). 5 g mieszaniny, wzbogaconej przez ultrafiltrację, rozpuszczono w 25 ml wody, po czym eluowano roztworem 0,2 mol/l chlorku sodowego z prędkością 5 ml/min. Na dole kolumny uzyskuje się frakcje po 25 ml. Detekcję produktów prowadzi się przez spektrofotometrię UV (254 nm) i jonową (IBF). Frakcje produktu o n = 1 są odzyskiwane, liofilizowane i odsalane na kolumnie wypełnionej żelem Sephadex G10. W wyniku liofilizacji uzyskuje się 1 g tetrasacharydu, zawierającego typowo 70% pochodnej Ais-is o wzorze II (R1, R2, R3, R5, R7, R8 = SO3Na; R4, R6 = H i M = Na). Pochodną Δ^-Is można na koniec oczyszczać chromatografię SAX (wymiana silnych anionów) lub, korzystnie, poprzez strącanie frakcjonowane, sposobem opisanym w patencie FR 2548672 i według odmiany niniejszego wynalazku.
Przykłady wytwarzania oligosacharydów o wzorze (I)
P r z y k ł a d 1
Do reaktora wprowadzono roztwór o temperaturze 25°C 300 mg oligosacharydu o wzorze (II), w którym wartość n wynosi 0, R1, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R6 stanowi atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w 2 ml wody. Dodano jednorazowo, wstrząsając, 212 mg borowodorku sodowego. pH doprowadzono do wartości od 9 do 10 poprzez dodanie roztworu wodorotlenku sodowego w stężeniu 0,5 mol/l. Po 12 godzinach dodano stopniowo kwas octowy do uzyskania pH 4-5. Mieszaninę wstrząsano przez 1 godzinę, po czym pH zmieniono na 6,7, dodając 0,5 mol/l wodorotlenku sodowego. Mieszaninę zatężono następnie na sucho w temperaturze 50°C pod zmniejszonym ciśnieniem. Koncentrat rozproszono przez wstrząsanie magnetyczne w 10 ml metanolu. Po sedymentacji przez noc zawiesinę przefiltrowano przez błonę Whatman GFB. Substancję stałą na filtrze rozpuszczono przez przepuszczenie 2 porcji po 10 ml wody destylowanej. Roztwór ten zatężono następnie na sucho w temperaturze 50°C pod zmniejszonym ciśnieniem. Uzyskano 580 mg białej substancji stałej. Substancję stałą rozproszono następnie przez wstrząsanie magnetyczne w 15 ml metanolu. Po 30 minutach wstrząsania zawiesinę przefiltrowano na błonie Whatman GFB. Placek rozpuszczono poprzez przepuszczenie 2 porcji po 10 ml wody destylowanej. Wytworzono roztwór zatężano na sucho w temperaturze 50°C pod zmniejszonym ciśnieniem. Uzyskano w ten sposób 250 mg oligosacharydu o wzorze (I), w którym n wynosi 0, R1, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R6 stanowi atom wodoru, a M stanowi atom sodu, pod postacią mieszaniny diastereoisomerów. Cukry składnikowe disacharydów oznaczono
PL 204 419 B1 numerami I i II, przy czym I stanowi zredukowaną resztę, a II resztę nienasyconego kwasu uronowego
[(kwas 4-dezoksy-2-0-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono(1 >4)-2-dezoksy-6-0-sulfo-2-sulfoamino-D-glucitol, sól czterosodowa); (kwas 4-dezoksy-2-0-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-6-0-sulfo-2-sulfoamino-D-mannit sól czterosodowa): Widmo protonowe w D2O 600 MHz, T=305K, δ w ppm: 3,38 (1H, m, H-2(I)), 3,70 i 3,75 (po 1H, odpowiednio dd, J=6 i 12Hz i dd, J=5 i 12Hz, 2H-1(I), 3,86 (1H, t, J=5Hz, H-3(I)), 4,13 (1H, dd, J=8 i 11Hz, H-6(I)), 4,18 (1H, m, H-4(I)), 4,25 (2H, m, H-6(I) i H-3(II)), 4,35 (1H, m, H-5(I)), 4,65 (1H, m, H-2(II)), 5,67 (1H, s, H-1(II)), 6,00 (1H, d, J=5Hz, H-4(II))].
P r z y k ł a d 2
Do reaktora wprowadzono roztwór, w temperaturze 25°C, 60 mg oligosacharydu o wzorze (II), w którym wartość n wynosi 0, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 stanowi rodnik SO3M, R4 i R6 stanowią atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w 1,2 ml wody. Dodano jednorazowo, wstrząsając, 18 mg borowodorku sodu. pH doprowadzono do wartości 9-10, dodając roztwór wodorotlenku sodowego w stężeniu 0,5 mol/l. Po 12 godzinach dodano stopniowo kwas octowy aż do uzyskania pH 4-5. Mieszaninę wstrząsano przez 1 godzinę, po czym dodano 5 ml metanolu. Zawiesinę filtrowano przez błonę Whatman GFB, a odzyskaną substancję stałą przepłukano dwukrotnie 0,5 ml metanolu. Po wysuszeniu uzyskano 42 mg oligosacharydu o wzorze (I), w którym wartość n wynosi 1, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R4 i R6 stanowią atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w postaci mieszaniny diastereoisomerów. Cukry składające się na ten tetrasacharyd oznacza się numerami od I do IV, przy czym I stanowi resztę zredukowaną, a IV resztę nienasyconego kwasu uronowego [(kwas 4-dezoksy-2-O-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono(1 >4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 >4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-2-sulfoamino-6-O-sulfo-D-glucytol, sól ośmiosodowa); (kwas 4-dezoksy-2-0-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 >4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1>4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-D-mannit, sól ośmiosodowa): Widmo protonowe w D2O, 400MHz, T=298K, δ w ppm: 3,25 (1H, dd, J=10 i 3Hz, H-2(III)), 3,37 (1H, m, H-2(I)), 3,59 (1H, m, H-3(III)), 3,75 (2H, m, 2H-1(I)), 3,79 (1H, t, J=9Hz, H-4(III)), 3,86 (1H, m, H3(I)), od 4,05 do 4,40 (10H, masowe, H-4(I)/H-5(I)/2H-6(I), H-2(II)/H-3(II)/H-4(II)), 2H-6(III)), H-3(IV), 4,58 (1H, m, H-2(IV)), 4,60 (1H, m, H-5(II)), 5,27 (1H, d, J=4Hz, H-1(II)), 5,42 (1H, d, J=4Hz, H-1(III)), 5,47 (1H, d, J=2Hz, H-1(IV)), 5,95 (1H, d, J=5Hz, H-4(IV)}].
P r z y k ł a d 3
Do reaktora wprowadzono roztwór, w temperaturze 25°C, 100 mg oligosacharydu o wzorze (II), w którym wartość n wynosi 2, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R4 i R6 stanowią atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w 2 ml wody. Dodano jednokrotnie, wstrząsając, 2 0 mg borowodorku sodu. pH doprowadzono do wartości od 9 do 10, dodając roztwór wodorotlenku sodowego w stężeniu 0,5 mol/l. Po 12 godzinach dodano stopniowo kwas octowy aż do uzyskania pH wynoszącego 4-5. Mieszaninę wstrząsano przez 1 godzinę, następnie pH doprowadzono do wartości 6,7, dodając 0,5 mol/l wodorotlenek sodowy. Mieszaninę następnie rozcieńczono wodą destylowaną w ilości wystarczającej do uzyskania 20 ml. Dodano 2,5 g octanu sodowego i wlano 3 objętości metanolu. Zawiesinę przefiltrowano na błonie Whatman GFB i uzyskaną substancję stałą przepłukano dwukrotnie 2 ml metanolu. Po wysuszeniu uzyskano 61 mg oligosacharydu o wzorze (I), w którym n wynosi 2, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R4 i R6 stanowią atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w postaci mieszaniny diastereoisomerów. Kolejne cukry heksasacharydów oznacza się liczbami od I do VI, przy czym I oznacza resztę zredukowaną, a VI - nienasyconą resztę kwasu uronowego [(kwas 4-dezoksy-2-O-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-2-sulfoamino-6-O-sulfo-a-D-glukopiranozylo-(1 >4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-2-sulfoamino-6-O-sulfo-a-D-glukopiranozylo-(1 >4) -kwas 2-0-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-2-sulfoamino-6-O-sulfo-D-glucitol, sól dwunastosodowa); (kwas 4-dezoksy-2-O-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 >4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 >4)kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 >4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-D-mannit sól dwunastosodowa): Widmo protonowe w D2O, 600 MHz, T=305K, δ w ppm: 3,25 (2H, m, H-2(III) i (v)), 3,38 (1H, m, H-2(I)), 3,61 (2H, t, J=10Hz, H-3(III) i (V)), od 3,70 do 3,83 (4H, masowe, 2H-1(I)) i H-4(III)), 3,86 (1H, t, J=5Hz, H-3(I))), 4,00 (2H, m, H-5(III) i (v)), 4,07 (1H, m, H-4(IV)), 4,08 (1H, m, H-4(I)), od 4,10 do 4,45 (13H, masowe, H-5(I)/2H-6(I), H-2(II)/H-3(II)/H-4(II), 2H-6(III), H-2(IV))/H-3(IV), 2H-6(v), H-3(VI), 4,60 (1H, s, H-2(VI)), 4,62 (1H, s, H-5(II)))), 4,78 (1H, s, H-5(IV)), 5,17 (1H, s, H-1(IV)), 5,28 (1H, d, J=4Hz, H-1(II)),
PL 204 419 B1
5,38 (1H, d, J=3Hz, H-1(v)), 5,44 (1 H, d, J=3Hz, H-1(III)), 5,47 (1H, d, J=2Hz, H-1(VI)), 5,96 (1H, d, J=5Hz, H-4(VI)]
P r z y k ł a d 4
Do reaktora wprowadzono roztwór, w temperaturze 25°C, 100 mg oligosacharydu o wzorze (II), w którym wartość n wynosi 3, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R4 i R6 stanowią atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w 2 ml wody. Dodano w dwóch porcjach, wstrząsając, 30 mg borowodorku sodu. pH doprowadzono do wartości 9-10 poprzez dodanie 0,5 mol/l roztworu wodorotlenku sodowego. Po 12 godzinach dodano stopniowo kwas octowy do uzyskania pH 4-5. Mieszaninę wstrząsano przez 1 godzinę, po czym pH doprowadzono do 6,7 poprzez dodanie 0,5 mol/l wodorotlenku sodowego. Mieszaninę rozcieńczono wodą destylowaną w ilości wystarczającej do uzyskania 20 ml. Dodano 2 g octanu sodowego i wlano 3 objętości metanolu. Zawiesinę filtrowano na błonie Whatmana GF/B i uzyskaną substancję stała dwukrotnie płukano 1 ml metanolu. Po wysuszeniu uzyskano 68 mg białej substancji stałej. Po kontroli metodą HPLC, w której stwierdzono, że produkt nie w pełni uległ redukcji, powtórzono w całości wszystkie uprzednie działania. Po wysuszeniu uzyskano 45 mg oligosacharydu o wzorze (I), w którym n wynosi 3, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R4 i R6 stanowią atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w postaci mieszaniny diastereoisomerów. Kolejne cukry oktasacharydów oznaczono jako I-VIII, przy czym I stanowi resztę zredukowaną, a VIII resztę nienasyconego kwasu uronowego [(kwas 4-dezoksy-2-O-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono-(1 »4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 »4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 »4)-2-dezoksy-2-sulfoamino-6-O-sulfo-a-D-glukopiranozylo-(1 »4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 »A)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 »4)-kwas 2-O-sulfo-a-1-idopiranozylourono-(1 —4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-D-glucytol, sól szesnastosodowa); (kwas 4-dezoksy-2-O-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono-(1 —4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 —4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1- —4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo- (1 —4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 —4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo- (1—4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1—4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-D-mannit, sól szesnastosodowa): Widmo protonowe w D2O, 600MHz, T=305K, δ w ppm: 3,25 (3H, m, H-2(III), H-2(v), H-2(VII), 3,38 (1H, m, H-2(I)), 3,61 (3H, m, H-3(III), H-3(v), H-3(VII)), od 3,70 do 3,83 (5H, masowe, 2H-1(I) i H-4(III), H-4(v), H-4(VII)), 3,86 (1H, t, J=5Hz, H-3(I)), 4,00 (3H, m, H-5(III), H-5(v), H-5(VII)), 4,08 (3H, m, H-4(I), H-4(IV), H-4(VI), od 4,10 do 4,45 (17H, masowe, H-5(I)/2H-6(I), H-2(II)/H-3(II)/H-4(II), 2H-6(III), H-2(IV)/H-3(IV), 2H-6(V), H-2(VI)/H-3(VI), 2H-6(VII), H-3(VIII)), 4,59 (1H, s, H-2(VIII)), 4,62 (1H, s, H-5(II)), 4,78 (2H, s, H-5(IV), H-5(VI)), 5,17 (2H, s, H-1(IV), H-1(VI)), 5,28 (1H, d, J=4Hz, H-1(II)), 5,38 (2H, m, H-1(v)), H-1(VII)), 5,44 (1H, d, J=3Hz, H-1(III)), 5,47 (1H, s, H-1(VIII)), 5,96 (1H, d, J=5Hz, H-4(VIII))].
P r z y k ł a d 5
Do reaktora wprowadzono roztwór, w temperaturze 25°C, 65 mg oligosacharydu o wzorze (II), w którym wartość n wynosi 4, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R4 i R6 stanowią atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w 1,2 ml wody. Dodano jednokrotnie, wstrząsając, 18 mg borowodorku sodu. pH doprowadzono do wartości 9-10 poprzez dodanie 0,5 mol/l roztworu wodorotlenku sodowego. Po 12 godzinach dodano stopniowo kwas octowy do uzyskania pH 4-5. Mieszaninę wstrząsano przez 1 godzinę, po czym pH doprowadzono do 6,7 poprzez dodanie 0,5 mol/l wodorotlenku sodowego. Mieszaninę rozcieńczono 3 ml wodnego roztworu octanu sodowego i wlano 3 objętości metanolu (12 ml). Zawiesinę filtrowano i uzyskaną substancję stałą przepłukano 3 ml metanolu. Po wysuszeniu uzyskano 54 mg oligosacharydu o wzorze (I), w którym n wynosi 4, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 stanowią rodnik SO3M, R4 i R6 stanowią atom wodoru, a M stanowi atom sodu, w postaci mieszaniny diastereoizomerów. Kolejne cukry dekasacharydów oznaczono jako I-X, przy czym I stanowi resztę zredukowaną, a X resztę nienasyconego kwasu uronowego. [(kwas 4-dezoksy-2-O-sulfo-a L-treo-heksa-4-eno-piranozylourono-(1—4)-2-dezoksy-2-sulfoamino-6-O-sulfo-a-D-glukopiranozylo-(1—4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1—4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 —4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1—4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1—4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1—4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1 —4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1 —4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-D-glucytol, sól eikosodowa); (kwas 4-dezoksy-2-O-sulfo-a-L-treo-heksa-4-enopiranozylourono(1—4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1—4)-kwas 2-Osulfo-a-L-idopiranozylourono-(1—4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1—4)kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1—4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozy12
PL 204 419 B1 lo-(1 ^4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1^4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-a-D-glukopiranozylo-(1^4)-kwas 2-O-sulfo-a-L-idopiranozylourono-(1^4)-2-dezoksy-6-O-sulfo-2-sulfoamino-D-mannit, sól eikosodowa): Widmo protonowe w D2O, 600MHz, T=303K, δ w ppm: 3,23 (4H, m, H-2(III), H-2(v), H-2(VII), H-2(IX)), 3,35 (1H, m, H-2(I)), 3,59 (4H, m, H-3(III), H-3(v), H-3(VII), H-3(IX)), od 3,65 do 3,80 (x) (II) (6H, m), 3,85 (1H, m, H-3(I)), od 3,90 do 4,40 (29H, m), 4,57 (1H, m, H-2(x)), 4,59 (1H, m, H-5(II)), 4,75 (3H, m, H-5(IV), H-5(VI), H-5(VIII), 5,15 (3H, m, H-1(IV) ,H-1(VI), H-1(VIII)), 5,25 (1H, m, H-1(II)), 5,37 (3H, m, 5,42 (1H, m, H-1(III)), 5,45 (1H, m, H-1(x)), 5,93 (1 H, d, J=5Hz, H-4(x)).
H-1(v), H-1
Claims (9)
1. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że jako składnik czynny zawiera oligosacharyd o wzorze:
w którym n oznacza liczbę całkowitą 1; R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 2, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 3, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 4, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu.
2. Oligosacharyd o wzorze:
w którym n oznacza liczbę całkowitą 1; R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 2, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 3, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu, w którym n oznacza liczbę całkowitą 4, R1, R2, R3, R5, R7 i R8 oznaczają rodnik SO3M, R4 i R6 oznaczają atom wodoru i M oznacza atom sodu.
3. Sposób wytwarzania oligosacharydu o wzorze (I) określonego w zastrz. 2, znamienny tym, że poddaje się reakcji borowodorek metalu alkalicznego lub borowodorek czwartorzędowego związku amonowego z oligosacharydami o wzorze:
PL 204 419 B1 w którym n oznacza liczbę całkowitą od 1 do 4, R1, R3, R4, R5, są takie same lub różne, oznaczają atom wodoru lub rodnik SO3M, R2 i R6, takie same lub różne, oznaczają atom wodoru lub rodnik SO3M, a M oznacza atom sodu, i izoluje się oligosacharyd.
4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że reakcję prowadzi się w środowisku wodnym w temperaturze zbliż onej do 25°C i w pH 7-10.
5. Sposób według zastrz. 3 albo 4, znamienny tym, że pH reakcji wynosi 9-10.
6. Sposób według zastrz. 3 albo 4, znamienny tym, że jako borowodorek metalu alkalicznego lub borowodorek czwartorzędowego związku amonowego stosuje się borowodorek litu, sodu, potasu lub tetrabutyloamoniowy.
7. Zastosowanie oligosacharydu o wzorze (I) określonego w zastrz. 2, do wytwarzania leków do zapobiegania i leczenia chorób zapalnych wywołujących wytwarzanie tlenku azotu.
8. Zastosowanie według zastrz. 7, do wytwarzania leków do zapobiegania i leczenia niedokrwienia mózgu, serca lub naczyń obwodowych, zapalenia stawów i kości, urazów ośrodkowego układu nerwowego, urazów czaszki i/lub rdzenia kręgowego, stwardnienia rozsianego, bólów neuropatycznych i neuropatii obwodowych, chorób neuronu ruchowego, stwardnienia zanikowego bocznego, AIDS układu nerwowego, choroby Alzheimera, choroby Parkinsona i pląsawicy Huntingtona.
9. Zastosowanie według zastrz. 7, do wytwarzania leków do zapobiegania i leczenia chorób związanych z przeżyciem i wzrostem neuronów ruchowych
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0003910A FR2807043B1 (fr) | 2000-03-28 | 2000-03-28 | Composition pharmaceutique contenant des oligosaccharides, les nouveaux oligosaccharides et leur preparation |
| PCT/FR2001/000903 WO2001072762A1 (fr) | 2000-03-28 | 2001-03-26 | Compositions pharmaceutiques contenant des oligosaccharides et leur preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL357301A1 PL357301A1 (pl) | 2004-07-26 |
| PL204419B1 true PL204419B1 (pl) | 2010-01-29 |
Family
ID=8848572
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL357301A PL204419B1 (pl) | 2000-03-28 | 2001-03-26 | Kompozycja farmaceutyczna, oligosacharyd, sposób wytwarzania oligosacharydu i zastosowanie oligosacharydu |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1272499B1 (pl) |
| JP (1) | JP2003529570A (pl) |
| KR (1) | KR20030001394A (pl) |
| CN (1) | CN1183149C (pl) |
| AR (1) | AR034251A1 (pl) |
| AT (1) | ATE290543T1 (pl) |
| AU (1) | AU782713B2 (pl) |
| BR (1) | BR0109617A (pl) |
| CA (1) | CA2403906A1 (pl) |
| DE (1) | DE60109279T2 (pl) |
| EA (1) | EA004768B1 (pl) |
| EE (1) | EE200200551A (pl) |
| ES (1) | ES2236206T3 (pl) |
| FR (1) | FR2807043B1 (pl) |
| HU (1) | HUP0300330A3 (pl) |
| IL (1) | IL151832A0 (pl) |
| ME (1) | MEP88408A (pl) |
| MX (1) | MXPA02009455A (pl) |
| NO (1) | NO20024590L (pl) |
| NZ (1) | NZ521558A (pl) |
| PL (1) | PL204419B1 (pl) |
| PT (1) | PT1272499E (pl) |
| SK (1) | SK286745B6 (pl) |
| WO (1) | WO2001072762A1 (pl) |
| YU (1) | YU72802A (pl) |
| ZA (1) | ZA200207707B (pl) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6750207B1 (en) * | 1992-05-01 | 2004-06-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Compositions for the regulation of cytokine activity |
| FR2845686B1 (fr) * | 2002-10-10 | 2013-08-30 | Aventis Pharma Sa | Melanges de polysaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| US7511026B2 (en) * | 2003-03-25 | 2009-03-31 | Seikagaku Corporation | Therapeutic agent for nerve damage |
| FR2857971B1 (fr) * | 2003-07-24 | 2005-08-26 | Aventis Pharma Sa | Melanges d'oligosaccharides derives d'heparine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant |
| US20050186679A1 (en) * | 2004-02-24 | 2005-08-25 | Christian Viskov | Method for determining specific groups constituting heparins or low molecular weight heparins |
| JP5116071B2 (ja) | 2005-07-20 | 2013-01-09 | 帝國製薬株式会社 | Ｄ−アロースおよびｄ−プシコースの抗神経因性疼痛効果の利用 |
| JP5137118B2 (ja) | 2005-08-30 | 2013-02-06 | 国立大学法人高知大学 | ユニバーサル塩基 |
| EP3418287A1 (en) * | 2017-06-21 | 2018-12-26 | Universität für Bodenkultur Wien | Chemical release of asparaginelinked glycans |
| CN115317507A (zh) * | 2022-09-19 | 2022-11-11 | 中国科学院海洋研究所 | 低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备抗多动症药物中的应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5449688A (en) * | 1993-03-30 | 1995-09-12 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of treating chronic inflammatory diseases |
-
2000
- 2000-03-28 FR FR0003910A patent/FR2807043B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-03-26 BR BR0109617-6A patent/BR0109617A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-03-26 PL PL357301A patent/PL204419B1/pl unknown
- 2001-03-26 WO PCT/FR2001/000903 patent/WO2001072762A1/fr not_active Ceased
- 2001-03-26 EE EEP200200551A patent/EE200200551A/xx unknown
- 2001-03-26 ES ES01919561T patent/ES2236206T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-26 IL IL15183201A patent/IL151832A0/xx unknown
- 2001-03-26 CA CA002403906A patent/CA2403906A1/fr not_active Abandoned
- 2001-03-26 EP EP01919561A patent/EP1272499B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-26 NZ NZ521558A patent/NZ521558A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-03-26 CN CNB018084087A patent/CN1183149C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-26 MX MXPA02009455A patent/MXPA02009455A/es active IP Right Grant
- 2001-03-26 DE DE60109279T patent/DE60109279T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-26 EA EA200201024A patent/EA004768B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-03-26 AT AT01919561T patent/ATE290543T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-03-26 JP JP2001570671A patent/JP2003529570A/ja active Pending
- 2001-03-26 YU YU72802A patent/YU72802A/sh unknown
- 2001-03-26 SK SK1393-2002A patent/SK286745B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-03-26 HU HU0300330A patent/HUP0300330A3/hu unknown
- 2001-03-26 ME MEP-884/08A patent/MEP88408A/xx unknown
- 2001-03-26 KR KR1020027012867A patent/KR20030001394A/ko not_active Ceased
- 2001-03-26 PT PT01919561T patent/PT1272499E/pt unknown
- 2001-03-26 AU AU46639/01A patent/AU782713B2/en not_active Ceased
- 2001-03-27 AR ARP010101456A patent/AR034251A1/es unknown
-
2002
- 2002-09-25 NO NO20024590A patent/NO20024590L/no unknown
- 2002-09-25 ZA ZA200207707A patent/ZA200207707B/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4733329B2 (ja) | 新規オリゴ糖、製造法およびそれらを含有する製薬学的組成物 | |
| HUP0203021A2 (hu) | Eljárás reakciókésleltetett poliuretán-keményhabanyagok előállítására | |
| US6617316B1 (en) | Oligosaccharides, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| DE69900718T2 (de) | Synthetische polysaccharide, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen | |
| PL204419B1 (pl) | Kompozycja farmaceutyczna, oligosacharyd, sposób wytwarzania oligosacharydu i zastosowanie oligosacharydu | |
| EP2464667A2 (fr) | OCTASACCHARIDES N-ACYLES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION EN THÉRAPEUTIQUE | |
| US6608042B2 (en) | Pharmaceutical compositions containing oligosaccharides, the novel oligosaccharides and preparation thereof | |
| EP2464359A2 (fr) | OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION EN THÉRAPEUTIQUE | |
| HK1056564B (en) | Pharmaceutical compositions containing oligosaccharides and preparation thereof |