PL206589B1 - Bakteria powodująca chorobę górnych dróg oddechowych i dróg rozrodczych u drobiu, jej zastosowanie oraz kompozycja szczepionki i sposób wykrywania bakterii wywołujących chorobę - Google Patents

Bakteria powodująca chorobę górnych dróg oddechowych i dróg rozrodczych u drobiu, jej zastosowanie oraz kompozycja szczepionki i sposób wykrywania bakterii wywołujących chorobę

Info

Publication number
PL206589B1
PL206589B1 PL369963A PL36996302A PL206589B1 PL 206589 B1 PL206589 B1 PL 206589B1 PL 369963 A PL369963 A PL 369963A PL 36996302 A PL36996302 A PL 36996302A PL 206589 B1 PL206589 B1 PL 206589B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
bacteria
bacterium
pta
atcc
positive
Prior art date
Application number
PL369963A
Other languages
English (en)
Other versions
PL369963A1 (pl
Inventor
Maria Elena Vazquez
Raul Campogarrido
Carlos Gonzales-Hernandez
Vaithianathan Sivanandan
Original Assignee
Boehringer Ingelheim Vetmed
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim Vetmed filed Critical Boehringer Ingelheim Vetmed
Publication of PL369963A1 publication Critical patent/PL369963A1/pl
Publication of PL206589B1 publication Critical patent/PL206589B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)

Description

Rzeczypospolitej Polskiej (21) Numer zgłoszenia: 369963 (22) Data zgłoszenia: 24.10.2002 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
24.10.2002, PCT/EP02/011899 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
08.05.2003, WO03/037367 (11) 206589 (13) B1 (51) Int.Cl.
C12N 1/20 (2006.01)
A61K 39/102 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) A61P 11/00 (2006.01)
Bakteria powodująca chorobę górnych dróg oddechowych i dróg rozrodczych u drobiu, (54) jej zastosowanie oraz kompozycja szczepionki i sposób wykrywania bakterii wywołujących chorobę
(73) Uprawniony z patentu:
BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA S.A.
(30) Pierwszeństwo: DE C.V., Guadalajara, MX
26.10.2001, DE, 10152307.6 (72) Twórca(y) wynalazku:
(43) Zgłoszenie ogłoszono: 02.05.2005 BUP 09/05 MARIA ELENA VAZQUEZ, Guadalajara, MX RAUL CAMPOGARRIDO, Zapopan, MX CARLOS GONZALES-HERNANDEZ, Had. Del Sur, MX VAITHIANATHAN SIVANANDAN, Austin, US
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono:
31.08.2010 WUP 08/10 (74) Pełnomocnik:
rzecz. pat. Mirosława Ważyńska
PL 206 589 B1
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy zdrowia zwierząt, a w szczególności, dotyczy nowej bakteryjnej choroby drobiu i jej przyczyn. Wynalazek dotyczy bakterii Pasteurella trehalosi i/lub Mannheimia haemolytica, ich zastosowania w profilaktyce, szczepionki zawierającej zinaktywowane bakterie Pasteurella trehalosi i/lub Mannheimia haemolytica oraz sposobu wykrywania tych bakterii u drobiu dla zapobiegania chorobom drobiu.
W trakcie trwania ostatniej dekady metody intensywnej hodowli drobiu, maj ą ce na celu podwyż szenie produkcji drobiu, spowodowały jednak znaczny wzrost chorób drobiu, pojawiających się w krajach głównych producentów drobiu. Zjawisko to stało się przyczyną wzrostu zapotrzebowania na nowe i lepsze szczepionki oraz programy szczepie ń do kontrolowania tych chorób. Obecnie, wię kszość zwierząt immunizuje się przeciw licznym chorobom pochodzenia wirusowego i bakteryjnego.
Przykładami chorób wirusowych drobiu są choroba Newcastle, zakaźne zapalenie oskrzeli, choroba wywoływana przez ptasiego wirusa płuc, ospa drobiu, zakaźna choroba torebki Fabrycjusza itd.
Przykładami chorób bakteryjnych są ptasi nieżyt nosa powodowany przez Haemophilus paragallinarum (górne drogi oddechowe), choroby wywoływane przez Bordetella avium (górne drogi oddechowe), Ornithobacterium rhinotracheale (dolne drogi oddechowe), infekcje Salmonella (przewód pokarmowy), Pasteurella multocida, która jest czynnikiem przyczynowym cholery drobiu (posocznicy) i infekcje E. coli.
Dlatego też, problemem technicznym stanowiącym podstawę wynalazku było zidentyfikowanie nowej bakteryjnej choroby drobiu, zabezpieczenie czynnika przyczynowego choroby i zapewnienie szczepionki do zapobiegania chorobie.
Przedmiotem wynalazku jest Gram-ujemna, względnie beztlenowa, pleomorficzna pałeczkowata bakteria powodująca chorobę górnych dróg oddechowych i dróg rozrodczych u drobiu. Bakteria jest wybrana z Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica i bakteria jest dodatnia pod względem hemolizy beta, oksydazo-dodatnia, katalazo-dodatnia, ureazo-ujemna, azotano-dodatnia i indolo-ujemna, jest dodatnia pod względem wzrostu na podłożu MacConkeya, glukozo-dodatnia, sacharozo-dodatnia, mannitolo-dodatnia, arabinozo-ujemna, celobiozo-ujemna, ksylozo-dodatnia, salicyno-ujemna, ornityno-ujemna, eskulino-ujemna, alfa-fukozydazo-ujemna, beta-galaktozydazo-dodatnia.
Bakteria korzystnie jest trehalozo-dodatnia lub trehalozo-ujemna. Bakteria została zdeponowana pod numerem ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 i ATCC PTA-3669.
Bakteria korzystnie jest inaktywowana i jest wybrana spośród bakterii zdeponowanych pod numerem ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 lub ATCC PTA-3669.
Bakteria jest korzystnie żywa atenuowana a taka żywa atenuowana bakteria pochodzi z bakterii zdeponowanych pod numerem ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 lub ATCC PTA-3669. Fragmenty lub frakcje tych bakterii zawierają co najmniej jeden antygen.
Kompozycja szczepionki według wynalazku zawiera inaktywowaną bakterię lub żywą atenuowana bakterię.
Kompozycja szczepionki zawierająca fragmenty lub frakcje bakterii według wynalazku charakteryzuje się tym, że fragment lub frakcja zawiera co najmniej jeden antygen do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica. Kompozycja szczepionki korzystnie zawiera też jeden lub więcej dostępnych adiuwantów lub nośników.
Kompozycja szczepionki zawiera dwa lub więcej szczepów inaktywowanych bakterii lub dwa lub więcej szczepów żywych atenuowanych określonych bakterii lub fragmenty lub frakcje zawierające co najmniej jeden antygen do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica z dwóch lub więcej szczepów określonych bakterii. Bakteria/ inaktywowana bakteria/ bakterie wybrane są do kompozycji szczepionki spośród bakterii zdeponowanych pod numerami ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 lub ATCC PTA-3669.
Bakteria/ żywa lub żywa atenuowana bakteria/bakteria wybrane są spośród bakterii zdeponowanych pod numerami:
ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 lub ATCC PTA-3669.
Kompozycja szczepionki według wynalazku zawiera ponadto co najmniej jeden inny antygen z wirusa lub patogenu dla drobiu.
Wirus lub mikroorganizm w szczepionce jest wybrany z grupy składającej się z wirusa zakaźnego zapalenia oskrzeli, wirusa choroby Newcastle, wirusa zakaźnej choroby torebki Fabrycjusza, czynnika anemii kurcząt, ptasiego reowirusa, Mycoplasma gallisepticum, ptasiego wirusa płuc, HaemophiPL 206 589 B1 lus paragallinarum, wirusa ospy kurcząt, ptasiego wirusa zapalenia mózgu i rdzenia, Pasteurella multocida i E.coli.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie określonych bakterii lub fragmentów lub frakcji zawierających co najmniej jeden antygen do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica do wytwarzania szczepionki do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wykrywania określonych bakterii wywołujących chorobę układu oddechowego i rozrodczego in vitro w próbkach, który obejmuje etap analizowania próbek na obecność bakterii.
Obecność bakterii wykrywa się testem immunologicznym lub metodami biologii molekularnej.
Definicje terminów zastosowanych w opisie:
Przed zapoznaniem się z rozwiązaniami wynalazku, należy zauważyć, że formy w liczbie pojedynczej obejmują też liczbę mnogą, o ile z kontekstu nie wynika inaczej. Na przykład, odniesienie do „Pasteurella trehalosi obejmuje wiele takich bakterii Pasteurella trehalosi; odniesienie do „komórki jest odniesieniem do jednej lub więcej komórek oraz ich równoważników znanych specjalistom w tej dziedzinie. Jest nieistotne czy słowo jest pisane z wielkiej litery czy nie, dlatego też „Arabinoza i „arabinoza mają takie samo znaczenie, o ile nie wskazano inaczej. 0 ile nie zdefiniowano inaczej, wszystkie techniczne i naukowe terminy stosowane w opisie znaczenie powszechnie rozumiane przez specjalistę w dziedzinie, do której należy wynalazek. Chociaż w praktyce można stosować wszelkie metody i materiał y podobne lub równoważ ne tym opisywanym w opisie, zostaną opisane korzystne metody, urządzenia i materiały według wynalazku. Wszystkie publikacje wymienione w opisie włączono jako odnośniki literaturowe w celu opisania i ujawnienia linii komórkowych, wektorów i metodologii, do których znajdują się doniesienia w publikacjach, a które mogłyby być zastosowane w związku z wynalazkiem. Twórcy wynalazku obserwowali nową bakteryjną chorobę drobiu, która występuje głównie u niosek a rzadziej u brojlerów. Chorobę obserwowano u kurcząt, które szczepiono przeciwko bakterii Haemophilus paragallinarum (jako przyczynie ptasiego nieżytu nosa) oraz Pasteurella multocida (przyczynie cholery drobiu). Objawy tej nowej choroby różnią się od specyficznych objawów nieżytu nosa. Biorąc pod uwagę fakt, że nowo zaobserwowana choroba wykazuje wyraźne objawy kliniczne infekcji górnych dróg oddechowych, jak opisano poniżej, można wykluczyć jako czynnik przyczynowy H. paragallinarum.
Wynalazek dotyczy Gram-ujemnej, względnie beztlenowej, pleomorficznej pałeczkowatej bakterii powodującej nową chorobę górnych dróg oddechowych i dróg rozrodczych drobiu, przy czym bakterię wybiera się z Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
Bakterie według wynalazku można wyizolować z zainfekowanej tchawicy, szczeliny podniebiennej, jajnika, wątroby, serca, nerki i z gonad (brojlery). Można je zidentyfikować jako Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, opierając się na wymienionych testach:
hemoliza beta + barwienie Grama oksydaza + katalaza + ureaza azotany + indol Izolaty bakteryjne można oczyszczać i poddawać biotypowaniu zgodnie z metodą początkowo opisaną przez Christensena i wsp. (Christensen, H., Bisgaard, M., Bojesen, A.M., Mutters, R., i Olsen, J.E., Genetic relationships among avian isolates classified as Pasteurella haemolytica, Acinobacillus salpingitidis or Pasteurella anatis with proposal of Gallicaterium anatis gen. nov., comb. nov. and description of additional genomospieces within Gallibacterium gen. nov., Int J. Syst. Evol Microbiol., 2003, 53, 275-287). Metody te mogą być stosowane przez specjalistę w dziedzinie w celu określenia, czy bakterie mieszczą się w zakresie przedmiotowego wynalazku.
Poprzednio, izolaty bakteryjne oczyszczano i poddawano biotypowaniu zgodnie z metodą opisaną przez Jaworskiego i in. (1). Metodę tę podano również w przykładach. Ważnymi metodami klasyfikacji bakterii są hybrydyzacja DNA-DNA, REA (analiza za pomocą enzymów restrykcyjnych, np. J.Clinical Microbiol., 1993, 31: 831-835) oraz rybotypowanie. Model prowokacji do zweryfikowania postulatów Kocha również przedstawiono w przykładach.
PL 206 589 B1
A zatem, waż nym rozwią zaniem wynalazku s ą Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, przy czym bakterie Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica są dodatnie pod względem hemolizy beta (β), Gram-ujemne, oksydazo-dodatnie, katalazo-dodatnie, ureazo-ujemne, azotano-dodatnie i indolo-ujemne, dodatnie pod względem wzrostu na podłożu MacConkeya, glukozo-dodatnie, sacharozo-dodatnie, mannitolo-dodatnie, arabinozo-ujemne, celobiozo-ujemne, ksylozo-dodatnie, salicyno-ujemne, ornityno-ujemne, eskulino-ujemne, alfa-fukozydazo-ujemne, beta-galaktozydazo-dodatnie. Najkorzystniejsze są Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku, przy czym są one również arabinozo-ujemne i trehalozo-dodatnie.
Korzystnie również, Pasteurella trehalosi beta (e)-glukozydazo-ujemne lub -dodatnie, w zależności od biotypu lub arabinozo-ujemne i trehalozo-ujemne czy beta-glukozydazo-ujemne.
Te cechy charakterystyczne bakterii według wynalazku czynią je nowymi w stosunku do innych znanych bakteryjnych patogenów drobiu (Diseases of Poultry, wyd. dziesiąte, red. B.W. Calnek, Iowa State University Press, Iowa, U.S.A. 1997).
Drób wybiera się spośród kurczaków, indyków, kaczek, gęsi, gołębi i przepiórek.
Wynalazek ujawnia nowy rodzaj Gram-ujemnych, względnie beztlenowych, pleomorficznych pałeczkowatych bakterii, a ten nowy rodzaj bakterii odpowiada charakterystyce bakterii zdeponowanych w American Type Culture Collection (ATCC), 1081, University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA, pod następującymi numerami depozytowymi:
- Pasteurella trehalosi ATCC nr PTA-3667 (oznaczenie wewnętrzne BIV-4985);
- Pasteurella trehalosi ATCC nr PTA-3668 (oznaczenie wewnętrzne BIV-AVICOR);
- Mannheimia haemolytica ATCC nr PTA-3669 (oznaczenie wewnętrzne BIV-07990).
Data depozytu: 22 sierpnia 2001 roku.
A zatem, najkorzystniejszym rozwiązaniem wynalazku są Pasteurella trehalosi zdeponowane pod numerem dostępu ATCC nr PTA-3667. Bakterie te przedstawiono dalej przykładowo w tablicy 3 przykładu 1.
Innym najkorzystniejszym rozwiązaniem wynalazku są Pasteurella trehalosi zdeponowane pod numerem dostępu ATCC nr PTA-3668. Bakterie te przedstawiono dalej przykładowo w tablicy 2 przykładu 1.
Innym najkorzystniejszym rozwiązaniem wynalazku są Mannheimia haemolytica zdeponowane pod numerem dostępu ATCC nr PTA-3669. Bakterie te przedstawiono dalej przykładowo w tablicy 1 przykładu 1.
W świetle przeprowadzonych zmian w terminologii, szczepy według wynalazku poddano określeniu charakterystyki fenotypowej zgodnie z metodą Christensena i wsp. (2003) włączając barwienie metodą Grama, aktywność enzymatyczną ureazy, ruchliwość, aktywność oksydazy cytochromowej i hemolizę. Ponadto, wszystkie szczepy hybrydyzowano zarówno do sondy GAN850 specyficznej dla Gallibacterium, i jej sondy inwersyjnej i komplementarnej, jak i sondy EUB338 specyficznej dla Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, zgodnie z metodą opisaną przez Bojesen'a i wsp. Detection of Gallibacterium spp In Chickens by Fluorescent 16S rRNA In Situ Hybridization, J. Clin. Microbiol., tom 41, nr. 11, Listopad 2003, str. 5167-5172. Wyniki przeprowadzonej charakterystyki, zarówno fenotypowej, jak i genotypowej wykazały, że szczepy należą do rodzaju Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica [Gallibacterium].
Poprzednie wyniki testów prowadzonych metodą Jaworskiego i wsp. z części A i B w przykładach (Tablice 1, 2 i 3) początkowo wskazały, że bakterie BIV-4895, ATCC nr PTA-3667 i BIV-AVICOR, ATCC nr 3668 należały do rodziny Pasteurellaceae, rodzaj Pasteurella (Pasteurella trehalosi, które są trehalozo-dodatnie i arabinozo-ujemne), podczas gdy bakterie BIV-07990, ATCC nr PTA-3669 należały do rodziny Pasteurellaceae, rodzaj Mannheimia (Mannheimia haemolytica, które są trehalozo-ujemne i arabinozo-ujemne).
Wynalazek dotyczy również hodowli mikrobiologicznej bakterii. Hodowlę można przygotować przez namnażanie bakterii w temperaturze od 35° do 37°C, w warunkach normalnego ciśnienia atmosferycznego tlenu w szeregu różnych znanych specjalistom podłożach przeznaczonych ogólnie do wzrostu bakterii, np. bulionie tryptozowym (TB), bulionie tryptozowo-kazeinowym z soją lub bulionie z wyciągiem mózgowo-sercowym, bądź w innych wzbogaconych podłożach. Bakterie można również namnażać na podłożu agarowym z krwią baranią w temperaturze 37°C w ciągu 24 godzin.
W nauce znane są różne fizyczne i chemiczne metody inaktywacji bakterii. Przykładami fizycznej inaktywacji są promieniowanie UV, promieniowanie X, promieniowanie gamma i ogrzewanie. PrzyPL 206 589 B1 kładami inaktywujących środków chemicznych są beta-propionolakton, aldehyd glutarowy, beta-etylenoimina i formaldehyd.
Korzystnie według wynalazku, bakterie inaktywuje się formaldehydem. Niespodziewanie, okazało się, że zastosowanie formaldehydu w stężeniu końcowym wynoszącym 0,2% jest doskonałą metodą inaktywacji bakterii według wynalazku.
W innym waż nym aspekcie wynalazek dotyczy metody inaktywacji Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, które można uzyskiwać metodą według wynalazku lub inną metodą znaną w nauce. Korzystnie, zinaktywowane bakterie Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku wybiera się z grupy ATCC nr PTA-3667, ATCC nr PTA-3668 i/lub ATCC nr PTA-3669.
Dlatego też, innym ważnym aspektem są żywe atenuowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, które można uzyskiwać metodą znaną w nauce. Korzystnie, żywe atenuowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku wybiera się z grupy ATCC nr PTA-3667, ATCC nr PTA-3668 i/lub ATCC nr PTA-3669. Bakterie Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica wedlug wynalazku atenuuje się poprzez wielokrotne pasaże w odpowiednich podłożach hodowlanych lub inną metodą znaną w nauce.
Inaktywowanie bakterii, oznacza, że Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica są zabite bez możliwości replikacji do wywołania klinicznej choroby.
Atenuowanie, w tym rozumieniu oznacza, że Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku są żywymi bakteriami z możliwością replikacji ale bez możliwości wywoływania klinicznej choroby.
Jeszcze innym ważnym aspektem są frakcje lub fragmenty Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, które można otrzymać metodą znaną w nauce. Fragmenty można przygotowywać przez solubilizację detergentem Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica metodą według wynalazku lub inną metodą znaną w nauce.
Korzystnie, frakcje lub fragmenty są oczyszczonymi antygenami Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku. Korzystnie, frakcje/fragmenty są białkami błony zewnętrznej Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku.
„Fragmentem według wynalazku jest dowolna podjednostka immunogenna Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku, tj. dowolny podzestaw polipeptydowy.
A zatem, wynalazek dotyczy fragmentów zawierają cych co najmniej jeden antygen Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku. Najkorzystniej, fragmenty zawierają co najmniej jeden antygen bakterii wybranych z grupy ATCC nr PTA-3667, ATCC nr PTA-3668 i/lub ATCC nr PTA-3669. Fragment ten może zawierać całe komórki bakteryjne go(nych) szczepu(pów), ekstrakty bakteryjne, frakcje błony zewnętrznej, bakteryjne egzo- i/lub endotoksyny i oczyszczone białka. Polipeptydy antygenowe lub ich fragmenty można na przykład otrzymywać z oczyszczonych białek bakteryjnych lub przez ekspresję odpowiadającego materiału genetycznego w niektórych prokariotycznych lub eukariotycznych układach ekspresyjnych lub przez syntezę organo-chemiczną. Metody te są znane specjalistom.
Wynalazek dotyczy ponadto żywych i/lub żywych atenuowanych i/lub inaktywowanych Pasteurella trehalosi i/lub Mannheimia haemolytica według wynalazku i/lub frakcji Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica do stosowania w szczepionkach.
Wynalazek ujawnia ponadto szczepionkę pochodzącą z nowo zidentyfikowanych bakterii. Wynalazek dotyczy także kompozycji szczepionki zawierającej żywe i/lub żywe atenuowane i/lub inaktywowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku i/lub frakcje Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
Termin „szczepionka w rozumieniu opisu oznacza szczepionkę do stosowania weterynaryjnego zawierającą substancje antygenowe, którą podaje się w celu indukowania specyficznej i czynnej lub biernej odporności przeciw chorobie wywoływanej przez Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica. Żywe lub żywe atenuowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku nadają odporność czynną, która może być przenoszona biernie przez matczyne przeciwciała skierowane przeciw immunogenom, które zawierają a czasami również przeciw organizmom zbliżonym antygenowe Inaktywowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku i/lub ich frakcje nadają odporność bierną.
Dodatkowe składniki do wzmacniania odporności immunologicznej są składnikami powszechnie określanymi jako adiuwanty, tak jak np. wodorotlenek glinu, oleje mineralne lub inne bądź cząsteczki pomocnicze dodawane do szczepionki lub tworzone przez organizm po odpowiedniej indukcji przez
PL 206 589 B1 takie dodatkowe składniki, takie jak, ale nie ograniczające się do interferonów, interleukin lub czynników wzrostowych.
W korzystnym rozwią zaniu szczepionka zawiera inaktywowane bakterie.
Korzystnie, szczepionka według wynalazku, w której jednym immunologicznie aktywnym składnikiem jest żywa Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica. Termin „żywa szczepionka odnosi się do szczepionki zawierającej cząstki zdolne do podziału/namnażania.
Również korzystnie, szczepionka według wynalazku zawiera atenuowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub zaróbkę. Szczepionkę można również podawać jako szczepionkę kombinowaną, zawierającą dwa lub więcej szczepów żywych i/lub żywych atenuowanych i/lub inaktywowanych Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica i/lub frakcji dwóch lub więcej szczepów Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica. Najkorzystniej, żywe i/lub żywe atenuowane i/lub inaktywowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku i/lub frakcje Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica w szczepionce wybiera się z grupy ATCC nr PTA-3667, ATCC nr PTA-3668 i/lub ATCC nr PTA-3669.
Również korzystnie, szczepionka według wynalazku zawiera inaktywowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub zaróbkę. Szczepionkę można również podawać jako szczepionkę kombinowaną, zawierającą dwa lub więcej szczepy inaktywowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
Ponadto, jako odpowiedni immunogen w szczepionce według wynalazku można również stosować frakcje całych komórek. Dlatego też, korzystnie szczepionka według wynalazku zawiera frakcje Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub zaróbkę. Szczepionkę można również podawać jako szczepionkę kombinowaną, zawierającą dwa lub więcej szczepów inaktywowanych Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica llibacterium. W szczególności, wynalazek dotyczy szczepionek zawierających fragmenty, które zawierają co najmniej jeden antygen Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica. Najkorzystniej, wynalazek dotyczy szczepionek zawierających fragmenty, które zawierają co najmniej jeden antygen bakterii wybranych z grupy ATCC nr PTA-3667, ATCC nr PTA-3668 i/lub ATCC nr PTA-3669. Fragment może zawierać całe komórki bakteryjne, ekstrakty bakteryjne, frakcje błony zewnętrznej, bakteryjne egzoi/lub endotoksyny i oczyszczone białka. Polipeptydy antygenowe lub ich fragmenty można na przykład otrzymywać z oczyszczonych białek bakteryjnych lub przez ekspresję odpowiadającego materiału genetycznego w niektórych prokariotycznych lub eukariotycznych układach ekspresyjnych, bądź przez syntezę organo-chemiczną. Metody te są znane specjalistom.
Korzystnie, szczepionka według wynalazku może również zawierać adiuwant. Dlatego też, wynalazek dotyczy ponadto kompozycji szczepionki według wynalazku, zawierającej ponadto jeden lub więcej odpowiednich adiuwantu(tów) i/lub zaróbkę(ki) i/lub nośnik(ki).
Adiuwanty stosowane w opisie, obejmują substancje, które zwiększają odpowiedź immunologiczną iniekowanych zwierząt. W nauce znane są liczne różne adiuwanty. Adiuwanty, które stosuje się w opisie, obejmują kompletny i niekompletny adiuwant Freunda, witaminę E, niejonowe polimery blokowe, muramylodipeptydy, Quil A, olej mineralny i niemineralny, olej roślinny i Carbopol (homopolimer). W korzystnym rozwiązaniu, szczepionka według wynalazku „bacterin zawiera jako adiuwant emulsję typu woda w oleju. Szczepionka ta, zwana również „bacterin, zawiera inaktywowane (zabite) bakterie według wynalazku i emulsję typu woda w oleju jako adiuwant. Inne sposoby wspomagania bakterii znane specjalistom stanowią również rozwiązania wynalazku.
Korzystnie, szczepionka według wynalazku może zawierać również jeden lub więcej odpowiednich emulgatorów, np. Span lub Tween.
Korzystnie również, żywe i/lub żywe atenuowane i/lub inaktywowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku i/lub frakcje Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica w szczepionce wybiera się z grupy ATCC nr PTA-3667, ATCC nr PTA-3668 i/lub ATCC nr PTA-3669.
Korzystnie, szczepionka zawiera co najmniej jeden antygen bakterii wybranych z grupy ATCC nr PTA-3667, ATCC nr PTA-3668 i/lub ATCC nr PTA-3669. Szczepionka może zawierać całe komórki bakteryjne szczepu(pów), ekstrakty bakteryjne, frakcje błony zewnętrznej, bakteryjne egzo- i/lub endotoksyny i oczyszczone białka. Polipeptydy antygenowe lub ich fragmenty można na przykład otrzymywać z oczyszczonych białek bakteryjnych lub przez ekspresję odpowiadającego materiału genetycznego w niektórych prokariotycznych lub eukariotycznych układach ekspresyjnych, bądź przez syntezę organo-chemiczną. Metody są znane specjalistom.
PL 206 589 B1
Najkorzystniej, wynalazek dotyczy ponadto kompozycji szczepionki według wynalazku, zawierającej co najmniej jeden inny antygen z wirusa lub mikroorganizmu patogennego dla drobiu. Korzystnie, antygen jest w postaci żywych, atenuowanych lub inaktywowanych wirusów bądź mikroorganizmów lub ich fragmentów. Fragment może zawierać całe komórki bakteryjne lub cząstki wirusowe, ekstrakty bakteryjne, antygeny wirusowe, podjednostki wirusowe, frakcje błony zewnętrznej, bakteryjne egzoi/lub endotoksyny i oczyszczone białka. Polipeptydy antygenowe lub ich fragmenty można na przykład otrzymywać z oczyszczonych białek bakteryjnych lub przez ekspresję odpowiadającego materiału genetycznego w niektórych prokariotycznych lub eukariotycznych układach ekspresyjnych, bądź przez syntezę organochemiczną. Metody te są znane specjalistom.
Najkorzystniej, wynalazek dotyczy ponadto kompozycji szczepionki zawierającej ponadto co najmniej jeden inny antygen z wirusa lub mikroorganizmu patogennego dla drobiu, przy czym wirus lub mikroorganizm wybiera się, bez ograniczania się, z grupy składającej się z wirusa zakaźnego zapalenia oskrzeli, wirusa choroby Newcastle, wirusa zakaźnej choroby torebki Fabrycjusza (choroba: Gumboro), czynnika anemii kurcząt, ptasiego reowirusa, Mycoplasma gallisepticum, ptasiego wirusa płuc, Haemophilus paragallinarum (choroba: nieżyt nosa), wirusa ospy kurcząt, ptasiego wirusa zapalenia mózgu i rdzenia, Pasteurella multocida i E.coli.
„Kompozycja farmaceutyczna składa się zasadniczo z jednego lub więcej składników zdolnych do modyfikowania czynności fizjologicznych np. funkcji immunologicznych organizmu, któremu się ją podaje lub organizmu żyjącemu w/na organizmie. Termin ten, nie ograniczająco, obejmuje antybiotyki lub środki przeciwpasożytnicze jak również inne składniki powszechnie stosowane do osiągnięcia innych celów, takich jak, ale bez ograniczeń, cech przetwórczych, jałowości, stabilności, łatwości podawania kompozycji drogami jelitową lub pozajelitową, takimi jak doustna, donosowa, dożylna, domięśniowa, podskórna, śródskórna lub inną odpowiednią drogą, tolerancji po podaniu, kontrolowanych właściwości uwalniania.
A zatem, w innym wa ż nych aspekcie wynalazek dotyczy kompozycji farmaceutycznej zawierającej żywe i/lub żywe atenuowane i/lub inaktywowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica i/lub ich frakcje.
Opisano traktowanie zwierząt należących do drobiu, zainfekowanych Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica (np. żywymi bakteriami jak opisano powyżej), przy czym żywe, atenuowane, inaktywowane Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica i/lub ich frakcje i/lub ich fragmenty supra, podaje się potrzebującym je zwierzętom (drobiowi) w odpowiednich dawkach, co wiadomo specjalistom, i monitoruje się redukcję objawów powodowanych przez infekcję Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica i można powtarzać traktowanie.
Ujawniono także sposób immunizacji drobiu przeciw chorobom układu oddechowego i rozrodczego powodowanym przez Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, obejmujący podawanie immunologicznie skutecznej ilości szczepionki i monitorowanie redukcji objawów choroby powodowanej przez infekcję Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
Ważnym rozwiązaniem według wynalazku jest stosowanie inaktywowanych bakterii Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica i/lub żywych i/lub żywych atenuowanych i/lub fragmentów lub frakcji Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica do wytwarzania szczepionki do profilaktyki infekcji Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
Wynalazek dotyczy również sposobu diagnozowania choroby, obejmującego etapy: otrzymywania próbki uzyskiwanej od drobiu, przy czym próbkę wybiera się z grupy: krew, surowica, osocze, zeskrobiny tkankowe, popłuczyny, wymazy, tkanka, etap analizowania próbki pod kątem obecności Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica według wynalazku.
W korzystnym rozwią zaniu obecność Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica okreś la się testem immunologicznym. Test immunologiczny wykorzystuje przeciwciała monoklonalne lub antysurowice poliklonalne specyficzne wobec Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica. Otrzymywanie przeciwciał monoklonalnych jest znane w nauce (3, 4).
Testy immunologiczne obejmują metody wykrywania znane w nauce, takie jak test ELISA (immunosorbcyjne oznaczenie enzymatyczne) lub tak zwany test ELISA typu „sandwich, hybrydyzacja plamowa, immunoblotting, testy radioimmunologiczne (oznaczenie radioimmunologiczne RIA), test Quchterlony opierający się na dyfuzji lub rakietowe oznaczenie immunofluorescencyjne lub testy aglutynacyjne (szybkie testy płytkowe lub testy aglutynacyjne na mikropłytkach). Innym testem immunologicznym jest tak zwany Western blot (znany również jako procedura przenoszenia typu Western lub blotting typu Western). Celem Western blot jest przeniesienie białek lub polipeptydów rozdzielonych
PL 206 589 B1 przez elektroforezę w żelu poliakryloamidowym na filtr nitrocelulozowy lub inny odpowiedni nośnik i jednocześ nie zachowanie wzglę dnych pozycji biał ek lub polipeptydów otrzymanych w wyniku elektroforezy żelowej. Następnie Western biot inkubuje się z przeciwciałem, które wiąże się specyficznie z białkiem lub polipeptydem będącym przedmiotem naszego zainteresowania. Te metody wykrywania mogą być stosowane przez przeciętnego specjalistę dla przeprowadzenia opisywanego tu wynalazku. Literatura, w której specjalista może znaleźć wymienione metody oraz inne metody wykrywania: An Introduction to Radioimmunoassay and Related Techniques, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, Holandia (1986); Bullock i in., Techniques in Immunocytochemistry, Academic Press Orlando, FL tom 1 (1982), tom 2 (1983), tom 3 (1985); Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, Holandia (1985).
W innym najkorzystniejszym rozwiązaniu, próbkę supra inkubuje się z przeciwciałami, które są specyficzne wobec Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica i wykrywa się utworzony kompleks antygen/przeciwciało.
W szczególnie korzystnym rozwiązaniu sposobu według wynalazku, obecność Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica w próbce supra wykrywa się metodami biologii molekularnej. Metody biologii molekularnej, oznaczają metody wykrywania obejmujące, na przykład, reakcję łańcuchową polimerazy (PCR), reakcję łańcuchową polimerazy z zastosowaniem odwrotnej transkryptazy (RT-PCR) lub może to być blotting typu Northern lub Southern, specjalista może znaleźć ich opis w standardowych książkach (np. Sambrook i in. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wyd. II, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York i Bertram, S. i Gassen, H.G. Gentechnische Methoden, G. Fisher Verlag, Stuttgart, New York, 1991).
Opisano również diagnostyczny zestaw testowy, który zawiera elementy konieczne do wykrywania Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica. Zestaw diagnostyczny jest zbiorem wszystkich składników do przeprowadzenia sposobu diagnostycznego. Pewne przykłady (niewyczerpująca lista) innych elementów do przeprowadzania sposobu obejmują pojemniki, powierzchnie i substraty, membrany, takie jak filtr nitrocelulozowy, odczynniki do przemywania i bufory. Zestaw diagnostyczny może również zawierać odczynniki, które mogą wykrywać związane przeciwciała takie jak, na przykład, wyznakowane drugie przeciwciała, chromofory, enzymy (np. skoniugowane z przeciwciałami) i ich substraty lub inne substancje, które mogą wykrywać przeciwciała.
Diagnostyczny zestaw testowy zawiera wszystkie konieczne elementy do przeprowadzania PCR lub RT-PCR do wykrywania DNA lub RNA specyficznego dla Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica. Zestaw może zawierać probówki lub 96-studzienkowe płytki bądź płytki do mikromiareczkowania, inne odpowiednie pojemniki, powierzchnie i substraty, membrany, takie jak filtry nitrocelulozowe, odczynniki do przemywania i bufory reakcyjne (które mogą się różnić pod względem pH i stężeń magnezu), jałową wodę, olej mineralny, BSA (albuminę surowicy bydlęcej), MgCl2, (NH4)2SO4, DMSO (dimetylosulfotlenek), merkaproetanol, nukleotydy (dNTP), enzymy, takie jak polimeraza Taq i odwrotna transkryptaza oraz jako matrycę DNA, DNA lub cDNA specyficzne dla Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, oligonukleotydy specyficzne dla DNA lub RNA Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica, matrycę kontrolną, wodę DEPC, DNAzę, RNAzę i kolejne związki znane specjaliście. Oligonukleotydy są krótkimi cząsteczkami kwasu nukleinowego o długości od około 15 do około 100 nukleotydów, które wiążą się w surowych warunkach z sekwencją kwasu nukleinowego, która jest komplementarna do białka Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
Poprzez „surowe warunki specjalista rozumie warunki, które są selektywne dla homologii wyższej niż 85%, korzystnie wyższej niż 90% (patrz, Sambrook i in. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wyd. II, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York i Bertram, S. i Gassen, H.G. Gentechnische Methoden, G. Fisher Verlag, Stuttgart, New York, 1991).
Poniższe przykłady służą zilustrowaniu wynalazku, ale nie należy ich interpretować jako ograniczające zakres ujawnianego tu wynalazku.
P r z y k ł a d 1
Wybuch choroby w warunkach naturalnych związany z Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica
Objawy kliniczne
Z obserwacji w warunkach naturalnych
PL 206 589 B1
Nioski Brojlery
Łagodne ze strony górnych dróg oddechowych/układu rozrodczego Ciężkie ze strony górnych dróg oddechowych/układu rozrodczego
Wiek: 22 tygodnie Wiek: 7 tygodni
Wydzielina z nosa Kichanie z rzężeniem
Opuchnięte obszary wokół oczu Opuchnięta głowa
Zmniejszone łaknienie Zmniejszone łaknienie
Biaława biegunka Depresja
Obniżona produkcja jaj Brak jednostajnego wzrostu
Niska śmiertelność Nastroszone pióra
Przemieszczony grzebień Prostracja
Sinica grzebienia Śmiertelność 8%
Poważne uszkodzenia
Atrofia jajników z krwotokami i regresją Krwotoki w gonadach
Zdeformowane pęcherzyki jajnika Górna część tchawicy z krwotokami
Powiększona wątroba Powiększona wątroba z krwotokami
Zapalenie nerek Zapalenie worka powietrznego
Krwotoki w tkance tłuszczowej brzucha Powiększona śledziona z krwotokami
Krwotoki w jamie piersiowej Krwotoki w mięśniach
Krwotoki w jajowodzie Krwotoki w sercu i puchlina osierdzia
Krwotoki w wieńcowej tkance tłuszczowej Krwotoki w jamie piersiowej
Trzy szczepy nowego rodzaju Gram-ujemnych, względnie beztlenowych, pleomorficznych pałeczkowatych bakterii, zdeponowano w American Type Culture Collection (ATCC), 1081, University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA, pod numerem depozytowym: ATCC nr PTA-3667 dla BIV-4985 Pasteurella trehalosi, ATCC nr PTA-3668 dla BIV-AVICOR Pasteurella trehalosi i ATCC nr PTA-3669 dla BIV-07990 Mannheimia haemolytica. Data depozytu, 22 sierpnia 2001 roku.
Zdeponowane bakterie oznaczano zgodnie ze standardowymi metodami oznaczania, stosując Bergey's Manual of Systematic Bacteriology tom I (1984, Williams i Wilkins, 428 East Preston Street, Baltimore, USA).
TABLICA 1
Mannheimia haemolytica BIV-07990 (biotyp 1), ATCC nr PTA-3669 Morfologia makroskopowa
Kolonie rosną na podłożu agarowym z krwią baranią w ciągu 24 godzin, średnica z zakresie od 1,0 do 1,5 mm, jasne półprzeźroczyste, gładkie i kremowe, lekko wypukłe, hemoliza β.
Morfologia mikroskopowa
Gram-ujemne, nieruchliwe, pleomorficzne pałeczki, często wybarwiające się bipolarnie.
Testy biochemiczne i inne
Część A
TEST REAKCJA
1 2
Oksydaza +
Katalaza +
Indol -
PL 206 589 B1 cd. tabeli 1
1 2
Glukoza +
Sacharoza +
MacConkey +
Ureaza -
Azotany +
Część B
Maltoza +
Mannitol +
Arabinoza -
Celobioza -
Sorbitol +
Ksyloza +
Trehaloza
Salicyna -
Ornityna -
Eskulina -
(5-Glukozydaza -
α-Fukozydaza -
β-Galaktozydaza +
TABLICA 2
Pasteurella trehalosi BIV-AVICOR (biotyp 2), ATCC nr PTA-3668 Morfologia makroskopowa Kolonie rosną na podłożu agarowym z krwią baranią w ciągu 24 godzin, średnica z zakresie od
1,0 do 1,5 mm, jasne półprzeźroczyste, gładkie i kremowe, lekko wypukłe, hemoliza β.
Morfologia mikroskopowa
Gram-ujemne, nieruchliwe, pleomorficzne pałeczki, często wybarwiające się bipolarnie.
Testy biochemiczne i inne
Część A
TEST REAKCJA
Oksydaza +
Katalaza +
Indol -
Glukoza +
Sacharoza +
MacConkey +
Ureaza -
Azotany +
PL 206 589 B1
Część B
Maltoza +
Mannitol +
Arabinoza -
Celobioza -
Sorbitol +
Ksyloza +
Trehaloza +
Salicyna -
Ornityna -
Eskulina -
β-Glukozydaza -
α-Fukozydaza -
β-Galaktozydaza +
α - 80% jest dodatnich TABLICA 3
Pasteurella trehalosi BIV-4895 (biotyp 4), ATCC nr PTA-3667 Morfologia makroskopowa
Kolonie rosną na podłożu agarowym z krwią baranią w ciągu 24 godzin, średnica z zakresie od 1,0 do 1,5 mm, jasne półprzeźroczyste, lekko wypukłe, szorstkie i suche, hemoliza β.
Morfologia mikroskopowa
Gram-ujemne, nieruchliwe, pleomorficzne pałeczki, często wybarwiające się bipolarnie.
Testy biochemiczne i inne
Część A
TEST REAKCJA
Oksydaza +
Katalaza +
Indol -
Glukoza +
Sacharoza +
MacConkey +
Ureaza -
Azotany +
Część B
Maltoza -
Mannitol +
Arabinoza -
Celobioza -
Sorbitol +
Ksyloza +
PL 206 589 B1 cd. tabeli
Trehaloza +
Salicyna -
Ornityna -
Eskulina -
β-Glukozydaza -
α-Fukozydaza -
β-Galaktozydaza +
Wyniki z testów z części A i B (tablice 1, 2, i 3) potwierdzają, że bakterie BIV-4895, ATCC nr PTA-3667 i BIV-AVICOR, ATCC nr PTA-3668 z rodziny Pasteurellaceae (Pasteurella trehalosi, które są trehalozo-dodatnie i arabinozo-ujemne), podczas gdy bakterie BIV-07990, ATCC nr PTA-3669 należą do rodziny Mannheimia (Mannheimia haemolytica, które są trehalozo-ujemne i arabinozo-ujemne).
Identyfikacja czynnika przyczynowego
Bakterie wyizolowano z zainfekowanej tchawicy, szczeliny podniebiennej, jajnika, wątroby, serca, nerki i gonad (brojlery).
Zidentyfikowano je jako Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica:
hemoliza beta + barwienie Grama oksydaza + katalaza + ureaza azotany + indol Nie izolowano żadnych innych wirusów ani bakterii.
Wstępne biotypowanie:
Izolaty bakteryjne wstępnie oczyszczano i biotypowano zgodnie z metodą opisaną przez Jaworskiego i in. (1). Zidentyfikowano trzy różne biotypy (4, 2, 1).
W skrócie, z oczyszczonych izolatów, pojedynczą kolonią zaszczepiano probówki zawierające 3 ml bulionu tryptozowego i inkubowano w temperaturze 37°C w ciągu 8 godzin. Następnie oczko ezy inokulum (20 μΐ) z probówki przenoszono do innej probówki zawierającej 3 ml 1% testowanego cukru i inkubowano w ciągu 7 dni w temperaturze 37°C przed odczytywaniem wyników.
Wstępny model prowokacji:
Po oczyszczeniu bakterii, izolaty namnażano w podłożu tryptozowym w celu uzyskania dużej ilości czystych patogenów. W celu zweryfikowania postulatów Kocha, trzy różne grupy (20 ptaków na grupę) kurcząt wolnych od specyficznego patogenu (SPF) w wieku 13 tygodni infekowano dożylnie każdym biotypem (0,2 ml/ptak, 3 x 108 CFU/ml). Ptaki obserwowano codziennie przez 3 dni pod względem zachorowalności i umieralności. Pod koniec trzeciego dnia, wszystkie ptaki zabijano, rejestrowano uszkodzenia pośmiertne i pobierano próbki narządów (wątroby i gonad) do ponownej izolacji. Rejestrowano również uszkodzenia pośmiertne u ptaków, które padły.
Biotypowanie zgodnie z metodą Christensena i wsp.
W świetle przeprowadzonych zmian terminologicznych w dziedzinie, szczepy według wynalazku poddano też określeniu charakterystyki fenotypowej zgodnie z metodą Christensena i wsp. (2003) włączając barwienie metodą Grama, aktywność enzymatyczną ureazy, ruchliwość, aktywność oksydazy cytochromowej i hemolizę. Ponadto, wszystkie szczepy hybrydyzowano zarówno do sondy GAN850 specyficznej dla Gallibacterium i ich sondy inwersyjnej i komplementarnej, jak i sondy EUB338 specyficznej dla Gallibacterium, zgodnie z metodą opisaną przez Bojesen'a i wsp. Detection of Gallibacterium spp In Chickens by Fluorescent 16S rRNA In Situ Hybridization, J. Clin. Microbiol., tom 41, nr. 11, Listopad 2003, str. 5167-5172. Wyniki przeprowadzonej charakterystyki, zarówno fenotypowej, jak i genotypowej wykazały, że szczepy należały do Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica [Gallibacterium].
PL 206 589 B1
Wyniki
Objawy kliniczne: prostracja, kulawość, przemieszczony grzebień, nastroszone pióra, sinica na końcach grzebienia.
Uszkodzenia:
Uszkodzenie BIV-4895 (biotyp 4) BIV-Avicor (biotyp 2) BIV-07990 (biotyp 1)
Obrzęk serca 73% 37% 90%
Krwotoki serca 90% - 70%
Krwotoki w tkance tłuszczowej naczyń wieńcowych 90% 37% 50%
Zapalenie osierdzia 73% 46% 30%
Krwotoki w jamie piersiowej 19% 40%
Krwotoki w jajniku 64% 9% 20%
Zapalenie nerek 64% 46% 60%
Krwotoki w nerkach 55% 46% 20%
Powiększona wątroba z krwotokami - 73% -
Zapalenie worka powietrznego 64% -
Krwotoki w mięśniach - 37% -
Śmiertelność 46% 19% -
P r z y k ł a d 2
Namnażanie bakterii według wynalazku, przygotowywanie szczepionki i szczepienie ptaków SPF.
Szczepy namnażano w bulionie tryptozowym (TB). Zbieranie hodowli przeprowadzano w logarytmicznej fazie wzrostu około 6-8 godzin po inokulacji, w zależności od szczepu. Liczenie kolonii na płytkach przeprowadzano stosując podłoże agarowe z krwią baranią. Ilość jednostek koloniotwórczych na mililitr (CFU/ml) określano stosując rozcieńczenia 1:10 zebranej hodowli. Komórki zabijano przez dodanie formaldehydu do stężenia końcowego wynoszącego 0,2%. Po sprawdzeniu jałowości tej zawiesiny, do ostatecznej szczepionki dodawano minimalne miano wynoszące 108 CFU/ml.
Szczepionkę przygotowywano mieszając dwa szczepy (BIV-4895, ATCC nr PTA-3667 i BIVAVICOR, ATCC nr PTA-3668) w olejowym adiuwancie (emulsja typu woda w oleju, na bazie oleju mineralnego, w stosunku 60% oleju/40% wody) do stężenia minimalnego wynoszącego 107'0 CFU/szczep/ml.
Kurczęta wolne od specyficznego patogenu (SPF) szczepiono w wieku 2,5 i 9 tygodni przez iniekcję 0,5 ml szczepionki podskórnie w połowie szyi.
P r z y k ł a d 3
Przygotowywanie szczepów do prowokacji i prowokacja grup szczepionych i kontrolnych
Bakteryjne szczepy BIV-4895, ATCC nr PTA-3667 i BIV-AVICOR, ATCC nr PTA-3668 namnażano na podłożu agarowym z krwią baranią w ciągu 24 godzin w temperaturze 37°C. Komórki zbierano w bulionie tryptozowym (TB) do uzyskania zawiesiny o gęstości optycznej wynoszącej 2,0, stosując spektrofotometr przy fali o długości 540 nm. Do prowokacji, przygotowywano preparaty, które zawierały następującą liczbę komórek w końcowej objętości stosowanej do prowokacji: 3 x 109 CFU/ml BIV-AVICOR; ATCC nr PTA-3668 1,45 x 1010 CFU/ml BIV-4895; ATCC nr PTA-3667
W wieku 13 tygodni, 20 szczepionych i 20 nie szczepionych ptaków poddawano prowokacji przez dożylne podanie 0,2 ml inokulum (co najmniej 108,0 CFU/ptaka). Ptaki obserwowano przez 3 dni pod względem zachorowalności i umieralności. Po trzech dniach obserwacji, wszystkie pozostałe ptaki zabijano i ponownie izolowano bakterie z wątroby i gonad z każdego ptaka.
Rejestrowano również uszkodzenia pośmiertne u ptaków, które padły.
PL 206 589 B1
WYNIKI
Grupa ptaków Inokulum prowokacyjne Śmiertelność + ponowna izolacja Ochrona %
Kontrola negatywna N/A 0 N/A
Kontrola pozytywna ATCC nr PTA-3667 77 23
Kontrola pozytywna ATCC nr PTA-3668 54 46
Szczepione ATCC nr PTA-3667 0 100
Szczepione ATCC nr PTA-3668 5 95
P r z y k ł a d 4
Namnażanie bakterii według wynalazku, przygotowywanie szczepionki i szczepienie ptaków SPF.
Szczepy namnażano w bulionie tryptozowym (TB). Zbieranie hodowli przeprowadzano w logarytmicznej fazie wzrostu około 6 - 8 godzin po inokulacji, w zależności od szczepu. Liczenie kolonii na płytkach przeprowadzano stosując podłoże agarowe z krwią baranią. Ilość jednostek koloniotwórczych na mililitr (CFU/ml) określano stosując rozcieńczenia 1:10 zebranej hodowli. Komórki zabijano dodając formaldehyd do stężenia końcowego wynoszącego 0,2%. Po sprawdzeniu jałowości tej zawiesiny, do ostatecznej szczepionki dodawano minimalne miano wynoszące 108 CFU/ml.
Szczepionkę przygotowywano mieszając trzy szczepy (BIV-4895, ATCC nr PTA-3667; BIV-AVICOR, ATCC nr PTA-3668 i BIV-07990, ATCC nr PTA-3669) w olejowym adiuwancie (emulsja typu woda w oleju, na bazie oleju mineralnego, w stosunku 60% oleju/40% wody) do stężenia minimalnego wynoszącego 107,0 CFU/szczep/ml.
Kurczęta wolne od specyficznego patogenu (SPF) szczepiono w wieku 2,5 i 9 tygodni przez iniekcję 0,5 ml szczepionki podskórnie w połowie szyi.
P r z y k ł a d 5
Przygotowywanie szczepów do prowokacji i prowokacja grup szczepionych i kontrolnych
Bakteryjne szczepy BIV-4895, ATCC nr PTA-3667; BIV-AVICOR, ATCC nr PTA-3668 i BIV-07990, ATCC nr PTA-3669 namnaż ano na podł o ż u agarowym z krwią baranią w cią gu 24 godzin w temperaturze 37°C. Komórki zbierano w bulionie tryptozowym (TB) do uzyskania zawiesiny o gę stości optycznej wynoszącej 2,0, stosując spektrofotometr przy fali o długości 540 nm. Do prowokacji, przygotowywano preparaty, które zawierały następującą liczbę komórek w końcowej objętości stosowanej do prowokacji:
8,3 x 109 CFU/ml BIV-AVICOR; ATCC nr PTA-3668
2,2 x 109 CFU/ml BIV-4895; ATCC nr PTA-3667
1,0 x 1010 CFU/ml BIV-07990; ATCC nr PTA-3669
W wieku 13 tygodni, 20 szczepionych i 20 nie szczepionych ptaków poddawano prowokacji przez dożylne podanie 0,2 ml inokulum (co najmniej 108,0 CFU/ptaka) . Ptaki obserwowano w ciągu 3 dni pod względem zachorowalnoś ci i umieralności. Po trzech dniach obserwacji, wszystkie pozostałe ptaki zabijano i ponownie izolowano bakterie z wątroby i gonad z każdego ptaka. Rejestrowano również uszkodzenia pośmiertne ptaków, które padły.
WYNIKI
Grupa ptaków Inokulum prowokacyjne Śmiertelność + ponowna izolacja Ochrona %
Kontrola negatywna, szczepione N/A 0 N/A
Kontrola negatywna, nieszczepione N/A 0 N/A
Szczepione ATCC nr PTA-3669 27,3 72,7
Szczepione ATCC nr PTA-3668 20,9 79,1
Szczepione ATCC nr PTA-3667 16,7 83,7
Kontrola pozytywna ATCC nr PTA-3669 53,3 46,7
Kontrola pozytywna ATCC nr PTA-3668 53,3 46,7
Kontrola pozytywna ATCC nr PTA-3667 64,3 35,7
PL 206 589 B1
Test serologiczny
Hiperodpornościowe surowice wytwarzano w królikach wykorzystując izolat odpowiadający każdemu biotypowi, zgodnie z metodą Bibersteina i in. (2).
Izolaty namnażano na podłożu agarowym z krwią przez noc, następnie zbierano w soli fizjologicznej zawierającej 0,3% formalinę. Komórki przemywano raz i doprowadzano do 10% transmisji przy fali o długości 575 nm do iniekcji. Iniekcje przeprowadzano dożylnie według następującego schematu: 0,5 ml; 1,0; 2,0; 3,0; 3,0; 3,0 w odstępach 4-dniowych i wszystkie króliki skrwawiano 4 dni po ostatniej iniekcji.
Hiperodpornościową surowicę testowano pod względem jej specyficzności stosując 3 biotypy szczepów i poddawano reakcji z homologiczną i heterologiczną króliczą surowicą odpornościową (2-krotne rozcieńczenia) w szybkim teście aglutynacji płytkowej.
Surowicę odpornościową każdego biotypu rozcieńczano do osiągnięcia celu dla określenia najwyższego rozcieńczenia, które było pozytywne.
Rozcieńczenie (log2) Antygen biotypu 1
Surowica odpornościowa 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1 + + + + + + + + + + +
2 - - - - - - - - - - -
4 - - - - - - - - - - -
Rozcieńczenie (log2) Antygen biotypu 4
Surowica odpornościowa 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1 - - - - - - - - - - -
2 - - - - - - - - - - -
4 + + + + + + + + + + +
Rozcieńczenie (log2) Antygen biotypu 2
Surowica odpornościowa 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1 - - - - - - - - - - -
2 + + + + + + + + + + +
4 - - - - - - - - - - -
Hiperodpornościowe surowice specyficzne dla danego biotypu stosowano następnie jako kontrolę pozytywną w mikropłytkowym teście aglutynacyjnym surowicy.
P r z y k ł a d 6
Przygotowywanie szczepów do prowokacji i prowokacja grup szczepionych i kontrolnych Bakteryjne szczepy BIV-4895, ATCC nr PTA-3667; BIV-AVICOR, ATCC nr PTA-3668 i BIV-07990, ATCC nr PTA-3669 namnaż ano na podł o ż u agarowym z krwią baranią w cią gu 24 godzin w temperaturze 37°C. Komórki zbierano w bulionie tryptozowym (TB) do uzyskania zawiesiny o gę stości optycznej wynoszącej 2,0, stosując spektrofotometr przy fali o długości 540 nm. Do prowokacji, przygotowywano preparaty, które zawierały następującą liczbę komórek w końcowej objętości stosowanej do prowokacji:
1.5 x 1010 CFU/ml BIV-AVICOR; ATCC nr PTA-3668
1,7 x 1010 CFU/ml BIV-4895; ATCC nr PTA-3667
1.6 x 1010 CFU/ml BIV-07990; ATCC nr PTA-3669
W wieku 13 tygodni, 20 szczepionych i 20 nie szczepionych ptaków poddawano prowokacji przez dożylne podanie 0,2 ml inokulum (co najmniej 108,0 CFU/ptaka) . Ptaki obserwowano w ciągu 3 dni pod wzglę dem zachorowalności i umieralności. Po trzech dniach obserwacji, wszystkie pozostałe ptaki zabijano, rejestrowano uszkodzenia pośmiertne i ponownie izolowano bakterie z wątroby, serca i gonad z każ dego ptaka.
PL 206 589 B1
WYNIKI
T a b l i c a 1
Ocena wpływu szczepionki w oparciu o śmiertelność i ponowną izolację
Grupa ptaków Inokulum prowokacyjne Śmiertelność + ponowna izolacja Ochrona %
Kontrola negatywna, nie szczepione N/A N/A N/A
Kontrola pozytywna BIV-4895 70 30
Kontrola pozytywna BIV-AVICOR 80 20
Kontrola pozytywna BIV-07990 88,8 11,2
Szczepione BIV-4895 10 90
Szczepione BIV-AVICOR 10 90
Szczepione BIY-07990 15 85
T a b l i c a 2
Ocena wpływu szczepionki w oparciu o poważne uszkodzenia po prowokacji
Grupa ptaków Inokulum prowokacyjne % uszkodzeń Ochrona %
Kontrola negatywna, nie szczepione N/A N/A N/A
Kontrola pozytywna BIV-4895 74,4 25,6
Kontrola pozytywna BIV-AVICOR 27, 0 73,0
Kontrola pozytywna BIV-07990 7,0 93,0
Szczepione BIV-4895 4,0 96,0
Szczepione BIV-AVICOR 1,1 99,0
Szczepione BIV-07990 2,4 98,0a
Legenda do figur
A) Z wybuchu choroby w warunkach naturalnych
Fig. 1) Brojlery: Wydzielina z nosa i opuchnięte obszary wokół oka.
Fig. 2) Brojlery: Krwotok w sercu i tkance tłuszczowej naczyń wieńcowych.
Fig. 3) Brojlery: Zapalenie spojówek i zapalenie wokół oka.
Fig. 4) Nioski: Wydzielina z nosa i przemieszczony grzebień z sinicą.
Fig. 5) Nioski: Zapalenie i krwotok wokół oka.
Fig. 6) Nioski: Krwotok w tkance skórnej za wejściem do otworu słuchowego.
Fig. 7) Nioski: Zapalenie nerek.
Fig. 8) Nioski: Krwotok w jajowodzie.
Fig. 9) Nioski: Zdeformowane pęcherzyki jajnikowe.
Fig. 10) Nioski: Krwotok w połączeniu między żołądkiem gruczołowym a mięśniowym.
Fig. 11) Nioski: Przekrwienie i krwotok w jajowodzie.
B) Infekcja doświadczalna
Fig. 12) Nioski: Zapalenie i krwotok w nerce
Fig. 13) SPF: Prostracja.
Fig. 14) Nioski: Krwotok w stawie i mięśniu.
Fig. 15) Nioski: Wydzielina z nosa i blady grzebień.
Fig. 16) Nioski: Krwotok w mięśniu.
Fig. 17) SPF: Krwotok w sercu i tkance tłuszczowej naczyń wieńcowych.
Fig. 18) Nioski: Zdrowy ptak po lewej stronie i chory ptak po prawej stronie z nastroszonymi piórami. Fig. 19) Nioski: Zielonkawa biegunka.
Fig. 20) SPF: Krwotok w mięśniu.
Fig. 21) SPF: Prostracja (problemy z poruszaniem się) zielonkawa biegunka.
Fig. 22) Nioski: Powiększona wątroba z krwotokiem.
PL 206 589 B1

Claims (29)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Gram-ujemna, wzglę dnie beztlenowa, pleomorficzna pa ł eczkowata bakteria powodują ca chorobę górnych dróg oddechowych i dróg rozrodczych u drobiu, znamienna tym, że bakteria jest wybrana z Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica i bakteria jest dodatnia pod względem hemolizy beta, oksydazo-dodatnia, katalazo-dodatnia, ureazo-ujemna, azotano-dodatnia i indolo-ujemna, jest dodatnia pod względem wzrostu na podłożu MacConkeya, glukozo-dodatnia, sacharozo-dodatnia, mannitolo-dodatnia, arabinozo-ujemna, celobiozo-ujemna, ksylozo-dodatnia, salicyno-ujemna, ornityno-ujemna, eskulino-ujemna, alfa-fukozydazo-ujemna, beta-galaktozydazo-dodatnia.
  2. 2. Bakteria według zastrz. 1, znamienna tym, że jest trehalozo-dodatnia.
  3. 3. Bakteria według zastrz. 1, znamienna tym, że jest trehalozo-ujemna.
  4. 4. Bakteria wedł ug zastrz. 2, znamienna tym, ż e jest zdeponowana pod numerem ATCC PTA-3667.
  5. 5. Bakteria wedł ug zastrz. 2, znamienna tym, ż e jest zdeponowana pod numerem ATCC PTA-3668.
  6. 6. Bakteria wedł ug zastrz. 3, znamienna tym, ż e jest zdeponowana pod numerem ATCC PTA-3669.
  7. 7. Bakteria według zastrz. 1, znamienna tym, że jest inaktywowana.
  8. 8. Inaktywowana bakteria według zastrz. 7, znamienna tym, ż e jest wybrana spośród bakterii zdeponowanych pod numerem ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 lub ATCC PTA-3669.
  9. 9. Bakteria według zastrz. 1, znamienna tym, że jest ż ywa atenuowana.
  10. 10. Bakteria według zastrz. 9, znamienna tym, że żywa atenuowana bakteria pochodzi z bakterii zdeponowanej pod numerem ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 lub ATCC PTA-3669.
  11. 11. Fragmenty lub frakcje bakterii według dowolnego z zastrz. 1-10, znamienne tym, że zawierają co najmniej jeden antygen.
  12. 12. Kompozycja szczepionki zawierająca inaktywowana bakterię z zastrz. 7.
  13. 13. Kompozycja szczepionki zawierająca żywą atenuowaną bakterię z zastrz. 9.
  14. 14. Kompozycja szczepionki zawierająca fragmenty lub frakcje bakterii z zastrz. 1, znamienna tym, że fragment lub frakcja zawiera co najmniej jeden antygen do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
  15. 15. Kompozycja szczepionki według zastrz. 12, znamienna tym, że zawiera ponadto jeden lub więcej dostępnych adiuwantów lub nośników.
  16. 16. Kompozycja szczepionki według zastrz. 13, znamienna tym, że zawiera ponadto jeden lub więcej dostępnych adiuwantów lub nośników.
  17. 17. Kompozycja szczepionki według zastrz. 12, znamienna tym, że zawiera dwa lub więcej szczepów inaktywowanych bakterii z zastrz. 7, do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica z dwóch lub więcej szczepów bakterii określonych w zastrz.1-6.
  18. 18. Kompozycja szczepionki według zastrz. 13, znamienna tym, że zawiera dwa lub więcej szczepów żywych atenuowanych bakterii określonych w zastrz. 9 do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica z dwóch lub więcej szczepów bakterii określonych w zastrz.1-6.
  19. 19. Kompozycja szczepionki według zastrz. 14, znamienna tym, że zawiera fragmenty lub frakcje zawierające co najmniej jeden antygen do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica z dwóch lub więcej szczepów bakterii określonych w zastrz.1-6.
  20. 20. Kompozycja szczepionki według zastrz. 12, znamienna tym, że bakteria/inaktywowana bakteria/ bakteria wybrane są spośród bakterii zdeponowanych pod numerem ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 lub ATCC PTA-3669.
  21. 21. Kompozycja szczepionki według zastrz. 13, znamienna tym, że bakteria/żywa lub żywa atenuowana bakteria/ bakteria wybrane są spośród bakterii zdeponowanych pod numerem ATCC PTA-3667, ATCC PTA-3668 lub ATCC PTA-3669.
  22. 22. Kompozycja szczepionki według zastrz. 12, znamienna tym, że ponadto zawiera co najmniej jeden inny antygen z wirusa lub patogenu dla drobiu.
  23. 23. Kompozycja szczepionki według zastrz. 13, znamienna tym, że ponadto zawiera co najmniej jeden inny antygen z wirusa lub patogenu dla drobiu.
  24. 24. Kompozycja szczepionki według zastrz. 14, znamienna tym, że ponadto zawiera co najmniej jeden inny antygen z wirusa lub patogenu dla drobiu.
    PL 206 589 B1
  25. 25. Kompozycja szczepionki według zastrz. 22 albo 23 albo 24, znamienna tym, że wirus lub mikroorganizm jest wybrany z grupy składającej się z wirusa zakaźnego zapalenia oskrzeli, wirusa choroby Newcastle, wirusa zakaźnej choroby torebki Fabrycjusza, czynnika anemii kurcząt, ptasiego reowirusa, Mycoplasma gallisepticum, ptasiego wirusa płuc, Haemophilus paragallinarum, wirusa ospy kurcząt, ptasiego wirusa zapalenia mózgu i rdzenia, Pasteurella multocida i E. coli.
  26. 26. Zastosowanie bakterii określonych według zastrz.1-10 lub fragmentów lub frakcji zawierających co najmniej jeden antygen do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica do wytwarzania szczepionki do profilaktyki przed infekcją Pasteurella trehalosi lub Mannheimia haemolytica.
  27. 27. Sposób wykrywania bakterii określonych w zastrz. 1, wywołujących chorobę układu oddechowego i rozrodczego in vitro w próbkach, znamienny tym, że obejmuje etap analizowania próbek na obecność bakterii.
  28. 28. Sposób według zastrz. 27, znamienny tym, że obecność bakterii określonych zastrz.1 wykrywa się testem immunologicznym.
  29. 29. Sposób według zastrz. 28, znamienny tym, że obecność bakterii określonych zastrz.1 wykrywa się metodami biologii molekularnej.
PL369963A 2001-10-26 2002-10-24 Bakteria powodująca chorobę górnych dróg oddechowych i dróg rozrodczych u drobiu, jej zastosowanie oraz kompozycja szczepionki i sposób wykrywania bakterii wywołujących chorobę PL206589B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10152307A DE10152307A1 (de) 2001-10-26 2001-10-26 Neue bakterielle Geflügelkrankheit

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL369963A1 PL369963A1 (pl) 2005-05-02
PL206589B1 true PL206589B1 (pl) 2010-08-31

Family

ID=7703460

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL369963A PL206589B1 (pl) 2001-10-26 2002-10-24 Bakteria powodująca chorobę górnych dróg oddechowych i dróg rozrodczych u drobiu, jej zastosowanie oraz kompozycja szczepionki i sposób wykrywania bakterii wywołujących chorobę

Country Status (31)

Country Link
US (3) US7794735B2 (pl)
EP (2) EP1442114B1 (pl)
JP (2) JP4447319B2 (pl)
KR (2) KR100954175B1 (pl)
CN (1) CN100471945C (pl)
AR (3) AR037020A1 (pl)
AT (1) ATE391767T1 (pl)
AU (1) AU2002363173B2 (pl)
BR (1) BR0213538A (pl)
CA (1) CA2462652A1 (pl)
CO (1) CO5580796A2 (pl)
CY (1) CY1108178T1 (pl)
DE (2) DE10152307A1 (pl)
DK (1) DK1442114T3 (pl)
EC (1) ECSP045083A (pl)
ES (1) ES2304466T3 (pl)
HR (1) HRP20040366B1 (pl)
HU (1) HU228692B1 (pl)
IL (1) IL161223A0 (pl)
MA (1) MA26293A1 (pl)
MX (1) MXPA04003941A (pl)
MY (1) MY138203A (pl)
NO (1) NO333635B1 (pl)
NZ (1) NZ532805A (pl)
PL (1) PL206589B1 (pl)
PT (1) PT1442114E (pl)
RU (4) RU2430967C2 (pl)
SI (1) SI1442114T1 (pl)
UA (2) UA89607C2 (pl)
WO (1) WO2003037367A2 (pl)
ZA (1) ZA200402499B (pl)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10152307A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-08 Boehringer Ingelheim Vetmed Neue bakterielle Geflügelkrankheit
CN102781954A (zh) * 2009-10-09 2012-11-14 哥本哈根大学 来自鸡卡氏杆菌的细胞溶解性rtx-毒素
CN102380092A (zh) * 2011-11-22 2012-03-21 青岛易邦生物工程有限公司 一种鸡传染性鼻炎灭活疫苗
CN102406936A (zh) * 2011-11-22 2012-04-11 青岛易邦生物工程有限公司 一种鸡传染性鼻炎灭活疫苗佐剂
HUE048344T2 (hu) 2013-03-18 2020-08-28 Intervet Int Bv Vakcina kérõdzõ védelmére Mannheimia haemolytica okozta tüdõgyulladás ellen
RU2563885C1 (ru) * 2014-06-03 2015-09-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) Способ определения антител к бактериальным антигенам
CN104491856A (zh) * 2014-12-07 2015-04-08 青岛易邦生物工程有限公司 一种禽肺病毒病灭活疫苗的生产方法
CN108728558A (zh) * 2018-05-31 2018-11-02 广西壮族自治区兽医研究所 一种快速检测溶血性曼氏杆菌的pcr扩增引物及其应用
CN111621450B (zh) * 2020-07-10 2022-07-05 青岛易邦生物工程有限公司 一种鸭源鸡杆菌及其应用
CN120060520B (zh) * 2025-04-03 2026-02-03 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 一种检测海藻糖比伯斯坦杆菌的引物对和试剂盒

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5855894A (en) * 1992-03-30 1999-01-05 Pfizer Inc. Pasteurella haemolytica type A-1 bacterin-toxoid vaccine
RU2051970C1 (ru) * 1992-06-24 1996-01-10 Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Способ выявления бактерий pasteurella multocida при пастереллезном процессе у птиц
US5576003A (en) * 1992-10-14 1996-11-19 Akzo Nobel N.V. Ornithobacterium rhinotracheale vaccine and method of immunization
US5587305A (en) * 1993-12-06 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Agriculture Pasteurella haemolytica transformants
RU2103355C1 (ru) * 1995-11-23 1998-01-27 Государственное Федеральное предприятие Государственный научный центр прикладной микробиологии Способ получения аттенуированных иммуногенных штаммов pasteurella multocida
FR2760640B1 (fr) 1997-03-17 1999-05-28 Vetoquinol Sa Utilisation d'une souche de pasteurella haemolytica serotype a6 pour la preparation d'un vaccin contre la pasteurellose bovine due a pasteurella haemolytica
CN1245058A (zh) * 1998-08-18 2000-02-23 曾泳铭 一种兽用抗病毒组合物
CA2394357C (en) * 1999-12-17 2014-04-22 University Of Guelph Modified leukotoxin gene and protein
US7521060B2 (en) * 2001-10-26 2009-04-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica S.A. De C.V. Pathogen for bacterial poultry disease
DE10152307A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-08 Boehringer Ingelheim Vetmed Neue bakterielle Geflügelkrankheit

Also Published As

Publication number Publication date
BR0213538A (pt) 2004-10-19
UA96948C2 (ru) 2011-12-26
PL369963A1 (pl) 2005-05-02
SI1442114T1 (sl) 2008-08-31
DE60226057T2 (de) 2009-05-14
NO20041675L (no) 2004-04-23
HK1073862A1 (zh) 2005-10-21
NO333635B1 (no) 2013-07-29
WO2003037367A2 (en) 2003-05-08
ES2304466T3 (es) 2008-10-16
ATE391767T1 (de) 2008-04-15
EP1942181A1 (en) 2008-07-09
HRP20040366A2 (en) 2005-04-30
DE60226057D1 (de) 2008-05-21
EP1442114B1 (en) 2008-04-09
HU228692B1 (en) 2013-05-28
KR20090083941A (ko) 2009-08-04
AU2002363173B2 (en) 2007-09-20
JP2010051324A (ja) 2010-03-11
UA89607C2 (ru) 2010-02-25
AR037020A1 (es) 2004-10-20
US20100104594A1 (en) 2010-04-29
RU2007129099A (ru) 2009-02-10
ZA200402499B (en) 2005-06-08
CO5580796A2 (es) 2005-11-30
IL161223A0 (en) 2004-09-27
JP5087604B2 (ja) 2012-12-05
CA2462652A1 (en) 2003-05-08
KR101024887B1 (ko) 2011-03-31
RU2334792C2 (ru) 2008-09-27
KR20050039688A (ko) 2005-04-29
NZ532805A (en) 2008-04-30
HUP0402098A3 (en) 2005-07-28
US20110212132A1 (en) 2011-09-01
WO2003037367A3 (en) 2003-10-09
CY1108178T1 (el) 2014-02-12
MXPA04003941A (es) 2004-11-29
AR067732A2 (es) 2009-10-21
ECSP045083A (es) 2004-08-27
HUP0402098A2 (hu) 2005-02-28
US7794735B2 (en) 2010-09-14
MA26293A1 (fr) 2004-09-01
JP2005511032A (ja) 2005-04-28
AR073482A2 (es) 2010-11-10
PT1442114E (pt) 2008-05-20
HRP20040366B1 (hr) 2012-05-31
US7964197B2 (en) 2011-06-21
MY138203A (en) 2009-05-29
RU2004116134A (ru) 2005-05-10
RU2008136404A (ru) 2010-03-20
KR100954175B1 (ko) 2010-04-20
JP4447319B2 (ja) 2010-04-07
EP1442114A2 (en) 2004-08-04
RU2430967C2 (ru) 2011-10-10
US20090181055A1 (en) 2009-07-16
RU2456343C2 (ru) 2012-07-20
CN100471945C (zh) 2009-03-25
RU2481393C2 (ru) 2013-05-10
DE10152307A1 (de) 2003-05-08
DK1442114T3 (da) 2008-06-09
RU2007148219A (ru) 2009-07-10
CN1575334A (zh) 2005-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5087604B2 (ja) 家禽類の疾病の原因である新規バクテリアおよびそれに由来するワクチン
Hagan et al. Hagan and Bruner's microbiology and infectious diseases of domestic animals: with reference to etiology, epizootiology, pathogenesis, immunity, diagnosis, and antimicrobial susceptibility
Chaffer et al. Vaccination of turkey poults against pathogenic Escherichia coli
AU2002363173A1 (en) New bacterium causing poultry disease and vaccine derived thereof
JP2005511032A5 (pl)
Ryu et al. Immunologic reactivity of a lipopolysaccharide-protein complex of type A Pasteurella multocida in mice
US7521060B2 (en) Pathogen for bacterial poultry disease
Jogi et al. Immunoprotection in mice immunized with native OmpH, recombinant OmpH and HS alum precipitated vaccine of Pasteurella multocida P52 against P. multocida challenge
Abd El-Ghany et al. THE EFFICACY OF VACCINATION OF LAYER CHICKENS WITH INACTIVATED FOWL CHOLERA BACTERIN PREPARED FROM LOCAL EGYPTIAN STRAINS OF Pasteurella multocida
Herzog et al. The efficacy of a temperature-sensitive mutant vaccine against Northwest Arkansas isolates of Alcaligenes faecalis
US20030149255A1 (en) Bird diagnostics and treatments
WO2014037103A1 (en) Live attenuated metabolic drift vaccine against fowl typhoid
Malik Evaluation of Immunogenic Potential of Salmonella Gallinarum Phage Lysate as Vaccine Candidate
Nagdive Standardization of Large Scale Production of A: 1 Phage Lysate and It s Evaluation of across Serogroup and Serotype Protective Immune Response
Ahmed Molecular Characterization of Pasteurella multocida Vaccine Strains
WO2002030321A2 (en) Bird diagnostics and treatments
Beck In ovo injection of probiotic combinations and their impact on broiler chick performance, immune response, and gastrointestinal development

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20131024