PL209161B1 - Sposób otrzymywania preparatu enzymów - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu enzymówInfo
- Publication number
- PL209161B1 PL209161B1 PL379558A PL37955806A PL209161B1 PL 209161 B1 PL209161 B1 PL 209161B1 PL 379558 A PL379558 A PL 379558A PL 37955806 A PL37955806 A PL 37955806A PL 209161 B1 PL209161 B1 PL 209161B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- sulphate
- medium
- volume
- minutes
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 26
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 21
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims description 13
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims description 13
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims description 13
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 10
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 9
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 8
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 8
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 8
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 8
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 8
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 8
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 8
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 8
- KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) sulfate Chemical compound [Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 claims description 6
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 6
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000428 dust Substances 0.000 claims description 4
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 4
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims description 4
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 19
- 230000002351 pectolytic effect Effects 0.000 description 8
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 5
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 5
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 3
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 3
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 3
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 3
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 3
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 108020004410 pectinesterase Proteins 0.000 description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 235000004936 Bromus mango Nutrition 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- 240000007228 Mangifera indica Species 0.000 description 1
- 235000014826 Mangifera indica Nutrition 0.000 description 1
- 240000008790 Musa x paradisiaca Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- 244000187664 Nerium oleander Species 0.000 description 1
- 108010029182 Pectin lyase Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 235000009184 Spondias indica Nutrition 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- -1 cobalt (VI) sulphate Chemical compound 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 108010039928 polymethylgalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu enzymów zawierającego kompleks enzymów pektynolitycznych, celulolitycznych oraz ksylanazy, o aktywności poszczególnych enzymów niezbędnej do efektywnej, kompleksowej obróbki wstępnej włókien lnu i bawełny lub gotowych wyrobów z lnu lub bawełny.
Preparaty enzymów otrzymywane znanymi sposobami w drodze hodowli grzyba nitkowatego Aspergillus niger w podłożu płynnym lub w podłożu stałym, nie zawierają kompleksu enzymów niezbędnego do efektywnej obróbki włókien lnianych i bawełnianych.
Z opisu patentowego PL nr 166 006 jest znany sposób otrzymywania kompleksu enzymów celulolitycznych w hodowli wgłębnej w podłożu ciekłym szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-90.
Z czasopisma Process Biochemistry 2000, t. 36, s. 255-261 jest znane otrzymywanie preparatu enzymatycznego, zawierającego poligalakturonazę, celulazę, ksylanazę i proteinazę, w drodze hodowli szczepu grzyba Aspergillus niger 3T5B8 w podłożu stałym zawierającym skórki bananów, skórki mango i otręby pszenne. Preparat ten ułatwia ekstrakcję olejów z pulpy oleandra.
W czasopiś mie Process Biochemistry 1996, t. 31, s. 645-650 opisano sposób otrzymywania kompleksu enzymów zawierającego pektynazę, celulazę i ksylanazę w drodze hodowli szczepu grzyba Aspergillus niger A-20 w podłożu ciekłym zawierającym rozdrobnione skórki owoców cytrusowych i składniki mineralne.
Znany jest także, z czasopisma Bioresource Technology 2004, t. 91, s. 153-156, sposób otrzymywania celulazy i hemicelulazy w drodze hodowli szczepu grzyba Aspergillus niger KK2 na podłożu stałym.
Sposób otrzymywania kompleksu enzymów w hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-90, wykazującego zdolność wzrostu na agarze słodowym lub brzeczkowym w temperaturze 10-40°C w środowisku o pH = 3-8, polegający na przygotowaniu z niego materiału posiewowego, zaszczepieniu tym materiałem sterylnego ciekłego podłoża produkcyjnego, prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych i po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęszczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, według wynalazku polega na tym, że materiałem posiewowym przygotowanym ze szczepu grzyba Aspergillus niger IBT-90 na podłożu stałym lub ciekłym szczepi się ciekłe podłoże produkcyjne wysterylizowane w temperaturze 118-121°C w czasie 15-60 minut, o składzie w częściach wagowych: 50-120 części kiełków słodowych, 20-80 części pektyny jabłkowej i ewentualnie wytłoków jabłkowych, ewentualnie 10-40 g pyłu bawełnianego, ewentualnie 10-50 części wysłodków buraczanych, 5-50 części celulozy mikrokrystalicznej lub otrąb pszennych i/lub odpadów przemysłu owocowo-warzywnego zawierających celulozę i pektynę oraz 1000 części wody wodociągowej zawierającej w 1 litrze: 1-12 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,1-1 g chlorku wapnia, 0,2-1 g siarczanu (VI) magnezu, 5-15 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,2-1 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,2-2 mg siarczanu (VI) manganu, 0,1-1 mg siarczanu (VI) cynku, 0,5-2,5 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1-2 g mocznika, o wyjściowym pH 4-6 i prowadzi hodowlę produkcyjną wgłębną w warunkach sterylnych, w temperaturze 25-30°C w czasie 80-150 godzin w obecności emulsji silikonowej dodanej w ilości 0,001-0,5% v/v w stosunku do objętości podłoża, mieszając zawartość fermentora z szybkością 100-600 minut-1 i doprowadzając do fermentora sterylne powietrze w ilości 0,5-3 części objętościowe na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, a otrzymaną w wyniku hodowli ciecz, po oddzieleniu od biomasy, zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 10-50°C.
Materiał posiewowy szczepu Aspergillus niger IBT-90 przygotowuje się w drodze uaktywnienia szczepu na podłożu stałym wysterylizowanym w temperaturze 18-121°C w czasie 10-40 minut, zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej lub ekstraktu słodowego o stężeniu 6-12° Bx oraz 1,5-3 % agaru, w temperaturze 10-40°C w czasie 3-8 dni i następnie zmycia skosu agarowego 0,5-1,5% roztworem chlorku sodowego, przy czym tak przygotowany materiał posiewowy stosuje się w ilości 0,5-5 ml na 100 ml podłoża produkcyjnego i hodowlę produkcyjną tak przygotowanego materiału posiewowego prowadzi się na wstrząsarce obracającej się z szybkością 150-300 minut-1.
Materiał posiewowy szczepu Aspergillus niger IBT-90 przygotowuje się także szczepiąc szczep grzyba Aspergillus niger IBT-90 na podłożu ciekłym wysterylizowanym w temperaturze 118-121°C w czasie 15-60 minut, o skł adzie w częściach wagowych: 50-120 części kieł ków sł odowych, 20-80 części pektyny jabłkowej i ewentualnie wytłoków jabłkowych, ewentualnie 10-40 g pyłu bawełnianego, ewentualnie 10-50 części wysłodków buraczanych, 5-50 części celulozy mikrokrystalicznej lub otrąb
PL 209 161 B1 pszennych i/lub odpadów przemysłu owocowo-warzywnego zawierających celulozę i pektynę oraz 1000 części wody wodociągowej zawierającej w 1 litrze: 1-12 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,1-1 g chlorku wapnia, 0,2-1 g siarczanu (VI) magnezu, 5-15 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,2-1 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,2-2 mg siarczanu (VI) manganu, 0,1-1 mg siarczanu (VI) cynku, 0,5-2,5 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1-2 g mocznika, o wyjściowym pH 4-6 stosując 0,5-5 ml szczepu grzyba na 100 ml podłoża i prowadząc hodowlę wgłębną w warunkach sterylnych w fermentorze w obecności emulsji silikonowej dodanej w ilości 0,001-0,5% v/v w stosunku do objętości podłoża, w temperaturze 25-30°C w czasie 24 godzin mieszają c zawartość fermentora z szybkoś cią 100-600 minut-1 i doprowadzają c do fermentora sterylne powietrze w ilości 0,5-3 części objętościowe na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, przy czym tak przygotowany materiał posiewowy stosuje się w ilości 2-10% objętościowych w stosunku do objętości podłoża.
Sposób według wynalazku umożliwia otrzymanie w jednym cyklu produkcyjnym wieloenzymowego wysokoaktywnego preparatu zawierającego enzymy pektynolityczne, takie jak polimetylogalakturonaza, pektynoesteraza i liaza pektynowa, enzymy celulolityczne, takie jak endo-1,4-e-glukanaza, egzocelobiohydrolaza i β-glukozydaza, a także endo-1,4-e-ksylanazę, który bez potrzeby jego wzbogacania w inne enzymy, może być wykorzystany do efektywnej, kompleksowej obróbki wstępnej włókien lub wyrobów z lnu i bawełny. Enzymy celulolityczne w sposób kontrolowany hydrolizują włókna celulozowe, w wyniku czego następuje usunięcie powierzchniowo występujących włókien materiału. Po działaniu mechanicznym na tak przygotowane włókno można uzyskać tzw. efekt biopolerowania, którego wynikiem jest atrakcyjny wygląd tkanin - efekt skórki brzoskwini, zmniejszona skłonność do pilingu i delikatny chwyt. Kompleks enzymów pektynolitycznych usuwa pektyny zawarte we włóknach lnu lub bawełny, co powoduje poprawę sorpcji wody, a także wodnego roztworu nadtlenku wodoru stosowanego do wybielania tkanin, a przez to pozwala na obniżenie ilości tego środka koniecznej do wybielenia tkaniny.
Sposób według wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d I
Szczep Aspergillus niger IBT-90 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 30°C, w podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8° Bx i 20 części wagowych agaru, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy za pomocą 100 ml 0,85% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym, stosowanym w ilości 3 ml na 100 ml podłoża, zaszczepiono uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut podłoże hodowlane o składzie: 22,9 g otrąb pszennych, 22,65 g wysłodków buraczanych, 19,25 g kiełków słodowych, 6,39 g pektyny jabłkowej, 1000 ml wody wodociągowej zawierającej: 9,52 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,52 g siarczanu (VI) magnezu, 0,275 g chlorku wapnia, 9,505 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,44 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,48 mg siarczanu (VI) manganu, 0,77 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1,605 g mocznika i wyjściowym pH = 4,4 i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej wstrząsarki 220 minut-1, stopniu wypełnienia kolb 10% objętościowych, w zakresie temperatur 28-30°C w czasie 120 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przefiltrowano przy użyciu przegrody filtracyjnej i zagęszczono dziesięciokrotnie w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 40°C. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywności [J/ml]: endo-1,4-e-glukanaza - 211,91; β-glukozydaza - 296,15; egzocelobiohydrolaza - 9,75; FPA - 9,11; endo-1,4-e-ksylanaza - 379,12; poligalakturonaza - 121,57; pektynoesteraza - 21,56; ogólna aktywność pektynolityczna otrzymanego preparatu była równa 8445,95 [°PM].
P r z y k ł a d II
Przygotowywano zawiesinę zarodników szczepu Aspergillus niger IBT-90 jak w przykładzie 1. Tak przygotowanym materiałem posiewowym, użytym w ilości 3 ml na 100 ml podłoża, zaszczepiono uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut podłoże hodowlane o składzie: 5,0 g celulozy mikrokrystalicznej, 60,0 g kiełków słodowych 60,0 g pektyny jabłkowej, 1000 ml wody wodociągowej zawierającej: 3,24 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,56 g siarczanu (VI) magnezu, 0,3 g chlorku wapnia, 9,77 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,53 mg siarczanu (VI) kobaltu, 1,52 mg siarczanu (VI) manganu, 0,18 g siarczanu (Vl) cynku, 2,45 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1,459 g mocznika i wyjściowym pH = 4,0 i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej wstrząsarki 220 minut-1, stopniu wypełnienia kolb 10% objętościowych, w zakresie temperatur 27-30°C w czasie 120 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przefiltrowano przy użyciu przegrody filtracyjnej i zagęszczono dziesięciokrotnie w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 40°C. Uzyskano prepa4
PL 209 161 B1 rat enzymatyczny o aktywności [J/ml]: endo-1,4-e-glukanaza - 106,67; β-glukozydaza - 122,75; egzocelobiohydrolaza - 12,26; FPA - 11,49; endo-1,4-e-ksylanaza - 469,91; poligalakturonaza - 342,90, ogólna aktywność pektynolityczna preparatu była równa 26929,98 [°PM].
P r z y k ł a d III
Zawiesinę zarodników szczepu Aspergillus niger lBT-90 przygotowano jak w przykładzie I. Tak przygotowanym materiałem posiewowym, stosowanym w ilości 3 ml na 100 ml podłoża, szczepiono uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut podłoże hodowlane o składzie: 21,6 g wysłodków buraczanych, 95,8 g kiełków słodowych, 49,0 g pektyny jabłkowej, 1000 ml wody wodociągowej zawierającej: 3,24 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,56 g siarczanu (VI) magnezu, 0,3 g chlorku wapnia, 9,77 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,53 mg siarczanu (VI) kobaltu, 1,52 mg siarczanu (VI) manganu, 0,18 mg siarczanu (VI) cynku, 2,45 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1,459 g mocznika i wyjściowym pH = 4,0 i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej wstrząsarki 220 minut-1, stopniu wypełnienia kolb 10% objętościowych, w zakresie temperatur 27-30°C w czasie 120 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przefiltrowano przy użyciu przegrody filtracyjnej i zagęszczono dziesięciokrotnie w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 40°C. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywności [J/ml]: endo-1,4-e-glukanaza - 93,38; β-glukozydaza - 85,31; egzocelobiohydrolaza - 7,73; FPA - 5,41; endo-1,4-e-ksylanaza - 449,86; poligalakturonaza - 560,0, zaś ogólna aktywność pektynolityczna preparatu wynosiła 9014,42 [°PM].
P r z y k ł a d IV
Zawiesinę zarodników szczepu Aspergillus niger IBT-90 przygotowywano jak w przykładzie I. Tak przygotowanym materiałem posiewowym, użytym w ilości 3 ml na 100 ml podłoża, zaszczepiono w fermentorze o pojemności całkowitej 14 litrów 10 l uprzednio wysterylizowanego w temperaturze 121°C w ciągu 30 minut i wstępnie napowietrzonego podłoża hodowlanego o składzie: 5,0 g celulozy mikrokrystalicznej, 60,0 g kiełków słodowych 60,0 g pektyny jabłkowej, 1000 ml wody wodociągowej zawierającej: 3,24 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,56 g siarczanu (VI) magnezu, 0,3 g chlorku wapnia, 9,77 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,53 mg siarczanu (VI) kobaltu, 1,52 mg siarczanu (VI) manganu, 0,18 g siarczanu (VI) cynku, 2,45 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1,459 g mocznika, po czym prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 28°C, w czasie 120 godzin, w obecności emulsji silikonowej dodanej w ilości 0,02% v/v objętości podłoża. W czasie hodowli produkcyjnej doprowadzano do fermentora sterylne powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, przy czym podłoże hodowlane mieszano przy pomocy mieszadła turbinowego obracającego się z szybkością obrotową 400 minut-1. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej przefiltrowano przy użyciu przegrody filtracyjnej i zagęszczono dziesięciokrotnie w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 40°C. Uzyskano 0,8 l preparatu enzymatycznego o aktywności [J/ml]: endo-1,4-e-glukanaza - 75,91; β-glukozydaza - 132,98; egzocelobiohydrolaza - 4,22; FPA - 5,04; endo-1,4-e-ksylanaza - 439,67; poligalakturonaza - 81,77, pektynoesteraza - 14,64, zaś ogólna aktywność pektynolityczna preparatu wynosiła 6752,7 [°PM].
P r z y k ł a d V
Inokulum hodowlanym otrzymanym po 24 godzinnej hodowli szczepu Aspergillus niger IBT-90 w fermentorze o pojemności całkowitej 14 litrów w warunkach jak w przykładzie II, użytym w ilości 10% v/v, zaszczepiono w fermentorze o pojemności całkowitej 130 litrów, 80 l uprzednio wysterylizowanego w temperaturze 121°C w ciągu 40 minut i wstępnie napowietrzonego podłoża hodowlanego o składzie analogicznym jak podłoże inokularne i wyjściowym pH = 4,4, po czym prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych w temperaturze 28°C w czasie 120 godzin, w obecności emulsji silikonowej dodanej w ilości 0,02% v/v w stosunku do objętości podłoża. W czasie hodowli produkcyjnej doprowadzano do fermentora sterylne powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, przy czym podłoże hodowlane mieszano przy pomocy mieszadła turbinowego obracającego się z szybkością 220 minut-1. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej przefiltrowano przy użyciu prasy filtracyjnej marki Sartorius i zagęszczono dziesięciokrotnie w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 40°C. Uzyskano 8 I preparatu enzymatycznego o aktywności [J/ml]: endo-1,4-e-glukanaza - 53,80; β-glukozydaza - 127,08; egzocelobiohydrolaza - 13,78; FPA - 15,97; endo-1,4-e-ksylanaza - 421,15; poligalakturonaza - 393,31, zaś ogólna aktywność pektynolityczna preparatu wynosiła 6736,6 [°PM].
Claims (3)
1. Sposób otrzymywania kompleksu enzymów w hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-90, wykazującego zdolność wzrostu na agarze słodowym lub brzeczkowym w temperaturze 10-40°C w środowisku o pH = 3-8, polegający na przygotowaniu z niego materiału posiewowego, zaszczepieniu tym materiałem sterylnego ciekłego podłoża produkcyjnego, prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych i po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęszczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, znamienny tym, że materiałem posiewowym przygotowanym ze szczepu grzyba Aspergillus niger IBT-90 na podłożu stałym lub ciekłym szczepi się ciekłe podłoże produkcyjne wysterylizowane w temperaturze 118-121°C w czasie 15-60 minut, o składzie w częściach wagowych: 50-120 części kiełków słodowych, 20-80 części pektyny jabłkowej i ewentualnie wytłoków jabłkowych, ewentualnie 10-40 g pyłu bawełnianego, ewentualnie 10-50 części wysłodków buraczanych, 5-50 części celulozy mikrokrystalicznej lub otrąb pszennych i/lub odpadów przemysłu owocowo-warzywnego zawierających celulozę i pektynę oraz 1000 części wody wodociągowej zawierającej w 1 litrze: 1-12 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,1-1 g chlorku wapnia, 0,2-1 g siarczanu (VI) magnezu, 5-15 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,2-1 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,2-2 mg siarczanu (VI) manganu, 0,1-1 mg siarczanu (VI) cynku, 0,5-2,5 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1-2 g mocznika, o wyjściowym pH 4-6 i prowadzi hodowlę produkcyjną wgłębną w warunkach sterylnych, w temperaturze 25-30°C w czasie 80-150 godzin w obecności emulsji silikonowej dodanej w ilości 0,001-0,5% v/v w stosunku do objętości podłoża, mieszając zawartość fermentora z szybkością 100-600 minut-1 i doprowadzając do fermentora sterylne powietrze w ilości 0,5-3 części objętościowe na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, a otrzymaną w wyniku hodowli ciecz, po oddzieleniu od biomasy, zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 10-50°C.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że materiał posiewowy szczepu Aspergillus niger IBT-90 przygotowuje się w drodze uaktywnienia szczepu na podłożu stałym wysterylizowanym w temperaturze 118-121°C w czasie 10-40 minut, zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej lub ekstraktu słodowego o stężeniu 6-12° Bx oraz 1,5-3% agaru, w temperaturze 10-40°C w czasie 3-8 dni i następnie zmycia skosu agarowego 0,5-1,5% roztworem chlorku sodowego, przy czym tak przygotowany materiał posiewowy stosuje się w ilości 0,5-5 ml na 100 ml podłoża produkcyjnego i hodowlę produkcyjną tak przygotowanego materiału posiewowego prowadzi się na wstrząsarce obracającej się z szybkością 150-300 minut-1.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że materiał posiewowy szczepu Aspergillus niger IBT-90 przygotowuje się szczepiąc szczep grzyba Aspergillus Niger IBT-90 na podłożu ciekłym wysterylizowanym w temperaturze 118-121°C w czasie 15-60 minut, o składzie w częściach wagowych: 50-120 części kiełków słodowych, 20-80 części pektyny jabłkowej i ewentualnie wytłoków jabłkowych, ewentualnie 10-40 g pyłu bawełnianego, ewentualnie 10-50 części wysłodków buraczanych, 5-50 części celulozy mikrokrystalicznej lub otrąb pszennych i/lub odpadów przemysłu owocowo-warzywnego zawierających celulozę i pektynę oraz 1000 części wody wodociągowej zawierającej w 1 litrze: 1-12 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,1-1 g chlorku wapnia, 0,2-1 g siarczanu (VI) magnezu, 5-15 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,2-1 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,2-2 mg siarczanu (VI) manganu, 0,1-1 mg siarczanu (VI) cynku, 0,5-2,5 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1-2 g mocznika, o wyjściowym pH 4-6 stosując 0,5-5 ml szczepu grzyba na 100 ml podłoża i prowadząc hodowlę wgłębną w warunkach sterylnych w fermentorze w obecności emulsji silikonowej dodanej w ilości 0,001-0,5% v/v w stosunku do objętości podłoża, w temperaturze 25-30°C w czasie 24 godzin mieszając zawartość fermentora z szybkością 100-600 minut-1 i doprowadzając do fermentora sterylne powietrze w ilości 0,5-3 części objętościowe na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, przy czym tak przygotowany materiał posiewowy stosuje się w ilości 2-10% objętościowych w stosunku do objętości podłoża.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL379558A PL209161B1 (pl) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL379558A PL209161B1 (pl) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL379558A1 PL379558A1 (pl) | 2007-10-29 |
| PL209161B1 true PL209161B1 (pl) | 2011-07-29 |
Family
ID=43016807
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL379558A PL209161B1 (pl) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL209161B1 (pl) |
-
2006
- 2006-04-27 PL PL379558A patent/PL209161B1/pl not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL379558A1 (pl) | 2007-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chang et al. | Antifungal activity and enhancement of plant growth by Bacillus cereus grown on shellfish chitin wastes | |
| CN102168056B (zh) | 以柑橘果渣为原料生产细菌纤维素的方法 | |
| CN103039883A (zh) | 猕猴桃灵芝复合酵素及其制备方法 | |
| CN104498407B (zh) | 一株产耐高温角蛋白酶的地衣芽孢杆菌utm107 及其应用 | |
| CN102217786A (zh) | 一种微生物固态发酵法制备烟梗纤维素的方法 | |
| CN103343104B (zh) | 一种植源益生菌液的制备工艺 | |
| Geetha et al. | Screening of pectinase producing bacteria and fungi for its pectinolytic activity using fruit wastes | |
| CN108486178A (zh) | 一种藻油dha的制备方法 | |
| CN102146354B (zh) | 一种生产β-甘露聚糖酶的菌株及生产工艺 | |
| CN103865903B (zh) | 一种耐高温碱性木聚糖酶 | |
| CN106701350B (zh) | 一种多功能蓝莓酵素洗衣露 | |
| CN108203729A (zh) | 一种巨藻抗氧化肽的制备方法 | |
| CN110734322A (zh) | 一种海藻酸盐辅助农作物秸秆发酵的方法 | |
| CN100558887C (zh) | 一种利用宇佐美曲霉产业化生产木聚糖酶的方法 | |
| CN101845469A (zh) | 连续补料发酵生产槐糖脂的方法 | |
| CN106987534B (zh) | 一种胡椒鲜果生物脱皮制备白胡椒的方法 | |
| CN101671661A (zh) | 固体发酵生产纤维素酶、木聚糖酶和纤维二糖酶的方法 | |
| CN107746810A (zh) | 一种有效提高桑黄液态培养菌丝体产量的方法 | |
| CN108203693A (zh) | 利用烟草废弃物生产高浓度l-型乳酸的方法 | |
| CN102329833A (zh) | 用废糖蜜和废甘油发酵生产槐糖酯的方法 | |
| Ubalua | Sweet potato starch as a carbon source for growth and glucoamylase production from Aspergillus niger | |
| CN110122851A (zh) | 一种牡丹酵素的制备方法 | |
| CN105441412A (zh) | 一种纸浆漂白复合酶及其制备方法 | |
| CN102604918A (zh) | 一种复合酶制剂的制备方法及其在饲料中的应用 | |
| CN101948888B (zh) | 利用微生物脱支制备香蕉抗性淀粉的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20090427 |