PL209163B1 - Sposób otrzymywania preparatu enzymów - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu enzymówInfo
- Publication number
- PL209163B1 PL209163B1 PL379557A PL37955706A PL209163B1 PL 209163 B1 PL209163 B1 PL 209163B1 PL 379557 A PL379557 A PL 379557A PL 37955706 A PL37955706 A PL 37955706A PL 209163 B1 PL209163 B1 PL 209163B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- sulphate
- medium
- weight
- production
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 29
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 32
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 14
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 14
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 13
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 claims description 7
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 7
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 7
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 6
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 6
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims description 6
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims description 6
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 6
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 6
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims description 6
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 5
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 5
- KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) sulfate Chemical compound [Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 241000207199 Citrus Species 0.000 claims description 3
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 claims description 3
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 claims description 3
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 3
- -1 cobalt (VI) sulphate Chemical compound 0.000 claims description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- JFVQGWOLWFNBHB-UHFFFAOYSA-H S(=O)(=O)([O-])[O-].S(=O)(=O)([O-])[O-].S(=O)(=O)([O-])[O-].[Mn+6] Chemical compound S(=O)(=O)([O-])[O-].S(=O)(=O)([O-])[O-].S(=O)(=O)([O-])[O-].[Mn+6] JFVQGWOLWFNBHB-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 25
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 230000002351 pectolytic effect Effects 0.000 description 6
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 5
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 108020004410 pectinesterase Proteins 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 3
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 3
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 3
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 2
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 2
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 235000004936 Bromus mango Nutrition 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- 240000007228 Mangifera indica Species 0.000 description 1
- 235000014826 Mangifera indica Nutrition 0.000 description 1
- 240000008790 Musa x paradisiaca Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- 244000187664 Nerium oleander Species 0.000 description 1
- 108010029182 Pectin lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 235000009184 Spondias indica Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 108010039928 polymethylgalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu enzymów zawierającego kompleks enzymów pektynolitycznych, celulolitycznych oraz ksylanazy, o aktywności poszczególnych enzymów niezbędnej do efektywnej, kompleksowej obróbki wstępnej włókien lnu i bawełny lub gotowych wyrobów z lnu lub bawełny.
Preparaty enzymów otrzymywane znanymi sposobami w drodze hodowli grzyba nitkowatego Aspergillus niger w podłożu płynnym lub w podłożu stałym, nie zawierają kompleksu enzymów niezbędnego do efektywnej obróbki włókien lnianych i bawełnianych.
I tak, z czasopisma Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 1998, t. 20, s. 34-38 jest znany sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego zawierającego pektynoesterazę i poligalakturonazę, polegający na hodowli szczepu grzyba Aspergillus niger w podłożu stałym zawierającym pektynę.
Sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego zawierającego egzopektynazę w drodze hodowli szczepu grzyba Aspergillus niger w podłożu stałym jest znany z czasopisma Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 2001, t. 26, s. 271-274.
Z czasopisma Process Biochemistry 2000, t. 36, s. 255-261 jest znane otrzymywanie preparatu enzymatycznego, zawierającego poligalakturonazę, celulazę, ksylanazę i proteinazę, w drodze hodowli szczepu grzyba Aspergillus niger 3T5B8 w podłożu stałym zawierającym skórki bananów, skórki mango i otręby pszenne. Preparat ten ułatwia ekstrakcję olejów z pulpy oleandra.
W czasopiś mie Bioresource Technology 2004, t. 91, s. 153-156 opisano otrzymywanie preparatu celulazy i hemicelulozy w drodze hodowli szczepu grzyba Aspergillus niger KK2 na podłożu stałym.
Natomiast z opisu patentowego PL nr 166 006 jest znany sposób otrzymywania kompleksu enzymów celulolitycznych w hodowli wgłębnej w podłożu ciekłym szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-90.
Sposób otrzymywania kompleksu enzymów w hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-90, wykazującego zdolność wzrostu na agarze słodowym lub brzeczkowym w temperaturze 10-40°C w środowisku o pH = 3-8, polegający na przygotowaniu z niego materiału posiewowego, zaszczepieniu tym materiałem wysterylizowanego stałego podłoża produkcyjnego, prowadzeniu hodowli produkcyjnej w warunkach sterylnych, a po jej zakończeniu ekstrahowaniu enzymów z podłoża, według wynalazku polega na tym, że szczep Aspergillus niger IBT-90 uaktywnia się na wysterylizowanym podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej lub ekstraktu słodowego, o stężeniu 6-12° Bx, oraz 15-30 części wagowych agaru, w temperaturze 10-40°C w czasie 3-8 dni, następnie zmywa się skos agarowy 0,5-1,5% roztworem chlorku sodowego i tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się wysterylizowane stałe podłoże produkcyjne, o wilgotności 50-90%, stosując 0,5-3 ml materiału posiewowego na 100 g s. m. podłoża. Hodowlę produkcyjną prowadzi się w warunkach sterylnych, w temperaturze pokojowej w czasie 1-8 dni mieszają c podł oż e co 12 godzin. Po zakończeniu hodowli do podłoża wprowadza się wodę destylowaną w ilości 10-100 g na 1 g stałych składników podłoża oraz detergent w ilości 0,01-1% wagowych w stosunku do masy wprowadzonej wody i prowadzi ekstrakcję enzymów w temperaturze 18-26°C w czasie 15-60 minut mieszając całość z szybkością 50-300 minut-1. Otrzymany roztwór enzymów odsącza się i zagęszcza w temperaturze 20-60°C. Stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-100 części wysłodków buraczanych, 10-100 części otrąb pszennych, 10-100 części kiełków słodowych, 1-25 części pektyny jabłkowej, ewentualnie 1-20 części skórek z pomidorów oraz 500-900 części wody wodociągowej zawierającej w 1 litrze 3-6 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,2-2 g siarczanu (VI) magnezu, 0,01-1 g chlorku wapnia, 0,2-3 g mocznika, 1-10 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1-10 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,2-10 mg siarczanu (VI) manganu, 0,01-2 mg siarczanu (VI) cynku, 1-10 mg siarczanu (VI) miedzi lub podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-100 części wysłodków buraczanych, 10-100 części otrąb pszennych, 10-70 części kiełków słodowych, 10-50 części odpadów cytrusowych oraz 500-900 części wody wodociągowej zawierającej w 1 litrze 3-6 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,2-2 g siarczanu (VI) magnezu, 0,01-1 g chlorku wapnia, 0,2-3 g mocznika, 1-10 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1-10 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,2-10 mg siarczanu (VI) manganu, 0,01-2 mg siarczanu (VI) cynku, 1-10 mg siarczanu (VI) miedzi.
Szczep grzyba uaktywnia się na podłożu stałym wysterylizowanym w temperaturze 117-121°C w czasie 10-40 minut. Hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu produkcyjnym wysterylizowanym
PL 209 163 B1 w temperaturze 117-121°C w czasie 15-45 minut. W procesie ekstrakcji enzymów stosuje się korzystnie detergenty o nazwie handlowej Tween 20, Sulforokanol, Pluronic.
Sposób według wynalazku umożliwia otrzymanie w jednym cyklu produkcyjnym wieloenzymowego wysokoaktywnego preparatu zawierającego enzymy pektynolityczne, takie jak polimetylogalakturonaza, pektynoesteraza i liaza pektynowa, enzymy celulolityczne, takie jak endo-1,4-e-glukanaza, egzocelobiohydrolaza i β-glukozydaza, a także endo-1,4-e-ksylanazę, który bez potrzeby jego wzbogacania w inne enzymy, może być wykorzystany do efektywnej, kompleksowej obróbki wstępnej włókien lub wyrobów z lnu i bawełny.
Enzymy celulolityczne w sposób kontrolowany hydrolizują włókna celulozowe, w wyniku czego następuje usunięcie powierzchniowo występujących włókien materiału. Po działaniu mechanicznym na tak przygotowane włókno można uzyskać tzw. efekt biopolerowania, którego wynikiem jest atrakcyjny wygląd tkanin - efekt skórki brzoskwini, zmniejszona skłonność do pilingu i delikatny chwyt. Kompleks enzymów pektynolitycznych usuwa pektyny zawarte we włóknach lnu lub bawełny, co powoduje poprawę sorpcji wody, a także wodnego roztworu nadtlenku wodoru stosowanego do wybielania tkanin, a przez to pozwala na obniżenie ilości tego środka koniecznej do wybielenia tkaniny.
Sposób według wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d I
Szczep grzyba nitkowego Aspergillus niger IBT-90 uaktywniano w podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8° Bx i 20 części wagowych agaru, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut. Uaktywnienie prowadzono w czasie 5 dni w temperaturze 30°C, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 100 ml 0,85% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono stałe podłoże produkcyjne o składzie: 61,1 g suchej substancji wysłodków buraczanych, 53,3 g suchej substancji otrąb pszennych, 78,1 g suchej substancji kiełków słodowych, 7,5 g suchej substancji pektyny jabłkowej, 800 ml wody wodociągowej zawierającej 3,584 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,688 g siarczanu (VI) magnezu, 0,08 g chlorku wapnia, 4,616 mg 5 siarczanu (VI) żelaza (II), 0,184 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,816 mg siarczanu (VI) manganu, 0,224 mg siarczanu (VI) cynku, 2,904 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 0,6072 g mocznika, wysterylizowane w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut, stosując 1,5 ml materiału posiewowego na 100 g podłoża stałego. Hodowlę produkcyjną prowadzono w kolbach Erlenmayera o pojemności 1 litr zawierających 20 g stałych składników podłoża o wilgotności 80%, w czasie 5 dni mieszając podłoże stałe co 12 godzin. Po zakończeniu hodowli masę podłoża uzupełniono wodą do masy 300 g, wprowadzono detergent o nazwie firmowej Tween 20 w ilości 0,5% w stosunku do masy wprowadzonej wody i prowadzono ekstrakcję enzymów w czasie 30 minut, mieszając całość na mieszadle z szybkością 200 minut-1. Następnie, mieszaninę sączono na przegrodzie filtracyjnej i zagęszczano w temperaturze 40°C w wyparce próżniowej, w wyniku czego otrzymano ciekły preparat enzymów o aktywności [J/ml]: endo-1,4-e-glukanaza -161,04; β-glukozydaza - 134,97; egzocelobiohydrolaza - 10,33; FPA - 4,37; endo-1,4-e-ksylanaza - 548,86; poligalakturonaza - 98,28; pektynoesteraza -14,89, zaś ogólna aktywność pektynolityczna preparatu wynosiła 13192,6 [°PM].
P r z y k ł a d II
Szczep Aspergillus niger IBT-90 uaktywniano w podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych ekstraktu słodowego o stężeniu 8° Bx i 20 części wagowych agaru, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut. Uaktywnianie prowadzono w czasie 5 dni w temperaturze 30°C, po czym sporządzono zawiesinę komórek tego szczepu zmywając skos agarowy 100 ml 0,85% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono stałe podłoże produkcyjne o składzie: 47,2 g suchej substancji wysłodków buraczanych, 49,9 g suchej substancji otrąb pszennych, 79,2 g suchej substancji kiełków słodowych, 9,20 g suchej substancji skórek z pomidorów, 14,5 g suchej substancji pektyny jabłkowej oraz 800 ml wody wodociągowej zawierającej 3,584 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,688 g siarczanu (VI) magnezu, 0,08 g chlorku wapnia, 4,616 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,184 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,816 mg siarczanu (VI) manganu, 0,224 mg siarczanu (VI) cynku, 2,904 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 0,6072 g mocznika, wysterylizowane w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut, stosując 1,5 ml materiału posiewowego na 100 g podłoża. Hodowlę produkcyjną prowadzono w kolbach Erlenmayera o pojemności 1 l zawierających 20 g stałych składników podłoża o wilgotności 80%, w czasie 5 dni mieszając podłoże stałe co 12 godzin. Po zakończonej hodowli masę podłoża uzupełniono wodą do 300 g, wprowadzono detergent o nazwie firmowej Sulforokanol w ilości 0,1% w stosunku do masy wprowadzonej wody i prowadzono ekstrakcję enzymów w czasie 30 minut mieszając całość na mieszadle z szybkością 200 minut-1. Następnie, mieszaninę
PL 209 163 B1 sączono na przegrodzie filtracyjnej, po czym zagęszczono w temperaturze 40°C w wyparce próżniowej, uzyskując ciekły preparat enzymów o aktywności [J/ml]: endo-1,4-e-glukanaza - 124,87; β-glukozydaza - 122,89; egzocelobiohydrolaza - 11,44; FPA - 6,65; endo-1,4-e-ksylanaza - 445,77; poligalakturonaza - 160,85; pektynoesteraza - 16,00; zaś ogólna aktywność pektynolityczna preparatu wynosiła 7679,2 [°PM].
P r z y k ł a d III
Szczep Aspergillus niger IBT-90 uaktywniano w podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8° Bx oraz 20 części wagowych agaru, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut. Uaktywnianie prowadzono w czasie 5 dni w temperaturze 29°C, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy za pomocą 100 ml 0,85% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono stałe podłoże produkcyjne o składzie: 52,2 g suchej substancji wysłodków buraczanych, 51,0 g suchej substancji otrąb pszennych, 67,5 g suchej substancji kiełków słodowych, 29,3 g suchej substancji odpadów cytrusowych, 800 ml wody wodociągowej zawierającej: 6,358 g diwodorofosforanu (V) potasu, 1,215 g siarczanu (VI) magnezu, 0,239 g chlorku wapnia, 5,886 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,616 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,454 mg siarczanu (VI) manganu, 0,699 mg siarczanu (VI) miedzi oraz 1,669 g mocznika, wysterylizowane w temperaturze 121°C w ciągu 20 minut, stosując 1,5 ml materiału posiewowego na 100 g podłoża. Hodowlę produkcyjną prowadzono w kolbach Erlenmayera o objętości 1 litr, zawierających 20 g stałych składników podłoża o wilgotności 80%, w czasie 5 dni, mieszając podłoże stałe co 12 godzin. Po zakończeniu hodowli masę podłoża uzupełniono wodą do 300 g, wprowadzono detergent o nazwie firmowej Tween 20 w ilości 0,5% w stosunku do masy wprowadzonej wody i prowadzono ekstrakcję enzymów w czasie 30 minut, mieszając całość na mieszadle z szybkością 200 minut-1. Następnie, mieszaninę sączono na przegrodzie filtracyjnej i zagęszczono w temperaturze 40°C w wyparce próżniowej, uzyskując ciekły preparat enzymów o aktywności [J/ml]: endo-1,4-e-glukanaza -208,57; β-glukozydaza - 162,12; egzocelobiohydrolaza - 10,06; FPA - 11,06; endo-1,4-e-ksylanaza - 243,29; poligalakturonaza - 140,55; pektynoesteraza -19,18; zaś ogólna aktywność pektynolityczna preparatu była równa 9183,18 [°PM].
Claims (5)
1. Sposób otrzymywania kompleksu enzymów w hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-90, wykazującego zdolność wzrostu na agarze słodowym lub brzeczkowym w temperaturze 10-40°C w środowisku o pH = 3-8, polegający na przygotowaniu z niego materiału posiewowego, zaszczepieniu tym materiałem sterylnego stałego podłoża produkcyjnego, prowadzeniu hodowli produkcyjnej w warunkach sterylnych, a po jej zakończeniu ekstrahowaniu enzymów z podłoża, znamienny tym, że szczep grzyba Aspergillus niger IBT-90 uaktywnia się wpierw na wysterylizowanym podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej lub ekstraktu słodowego, o stężeniu 6-12° Bx oraz 15-30 części wagowych agaru, w temperaturze 10-40°C w czasie 3-8 dni, następnie zmywa się skos agarowy 0,5-1,5% roztworem chlorku sodowego, tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się wysterylizowane stałe podłoże produkcyjne o wilgotności 50-90%, stosując 0,5-3 ml materiału posiewowego na 100 g s. m. podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną w warunkach sterylnych w temperaturze pokojowej w czasie 1-8 dni mieszając podłoże co 12 godzin, a po zakończeniu hodowli do podłoża wprowadza się wodę destylowaną w ilości 10-100 g na 1 g stałych składników podłoża oraz detergent w ilości 0,01-1% wagowych w stosunku do masy wprowadzonej wody i prowadzi ekstrakcję enzymów w temperaturze 18-26°C w czasie 15-60 minut mieszając całość z szybkością 50-300 minut-1, po czym otrzymany roztwór enzymów odsącza się i zagęszcza w temperaturze 20-60°C.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-100 części wysłodków buraczanych, 10-100 części otrąb pszennych, 10-100 części kiełków słodowych, 1-25 części pektyny jabłkowej, ewentualnie 1-20 części skórek z pomidorów oraz 500-900 części wody wodociągowej zawierającej w 1 litrze 3-6 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,2-2 g siarczanu (VI) magnezu, 0,01-1 g chlorku wapnia, 0,2-3 g mocznika, 1-10 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1-10 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,2-10 mg siarczanu (VI) manganu, 0,01-2 mg siarczanu (VI) cynku, 1-10 mg siarczanu (VI) miedzi.
PL 209 163 B1
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-100 części wysłodków buraczanych, 10-100 części otrąb pszennych, 10-70 części kiełków słodowych, 10-50 części odpadów cytrusowych oraz 500-900 części wody wodociągowej zawierającej w 1 litrze 3-6 g diwodorofosforanu (V) potasu, 0,2-2 g siarczanu (VI) magnezu, 0,01-1 g chlorku wapnia, 0,2-3 g mocznika, 1-10 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1-10 mg siarczanu (VI) kobaltu, 0,2-10 mg siarczanu (VI) manganu, 0,01-2 mg siarczanu (VI) cynku, 1-10 mg siarczanu (VI) miedzi.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szczep Aspergillus niger IBT-90 uaktywnia się na podłożu stałym wysterylizowanym w temperaturze 117-121°C w czasie 10-40 minut.
5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu produkcyjnym wysterylizowanym w temperaturze 117-121°C w czasie 15-45 minut.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL379557A PL209163B1 (pl) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL379557A PL209163B1 (pl) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL379557A1 PL379557A1 (pl) | 2007-10-29 |
| PL209163B1 true PL209163B1 (pl) | 2011-07-29 |
Family
ID=43016806
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL379557A PL209163B1 (pl) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL209163B1 (pl) |
-
2006
- 2006-04-27 PL PL379557A patent/PL209163B1/pl not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL379557A1 (pl) | 2007-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hoondal et al. | Microbial alkaline pectinases and their industrial applications: a review | |
| Chang et al. | Antifungal activity and enhancement of plant growth by Bacillus cereus grown on shellfish chitin wastes | |
| Zheng et al. | Degumming of ramie fibers by alkalophilic bacteria and their polysaccharide-degrading enzymes | |
| Brühlmann et al. | Enzymatic degumming of ramie bast fibers | |
| Evans et al. | Flax-retting by polygalacturonase-containing enzyme mixtures and effects on fiber properties | |
| Fan et al. | In-situ microbial degumming technology with Bacillus sp. HG-28 for industrial production of ramie fibers | |
| Dhiman et al. | Pretreatment processing of fabrics by alkalothermophilic xylanase from Bacillus stearothermophilus SDX | |
| CN102325930A (zh) | 植物纤维的酶法制备 | |
| CN103710327B (zh) | 用于橄榄精深加工的复合酶制剂及其制备方法和应用 | |
| CN102329738B (zh) | 一种黑附球菌db3菌株及其制备和应用 | |
| CN102409411A (zh) | 一种利用黑附球菌db3菌株制备麻纤维的方法 | |
| JP3917258B2 (ja) | 新規アルカリペクチン酸リアーゼ及びその製造法 | |
| CN106701350B (zh) | 一种多功能蓝莓酵素洗衣露 | |
| CN1135263C (zh) | 苎麻脱胶果胶酶的生产及其在苎麻脱胶工艺中的应用 | |
| WO2007037711A1 (en) | The method of fibrous plant degumming | |
| CN103174045B (zh) | 一种构皮纤维手工纸漂白浆的生产方法 | |
| Afifi et al. | Purification and characterization of a pectin lyase produced by Curvularia inaequalis NRRL 13884 on orange peels waste, solid state culture | |
| CN109989114A (zh) | 一种亚麻脱胶的方法 | |
| PL209163B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów | |
| CN102337220B (zh) | 一种产紫青霉菌db1菌株及其制备和应用 | |
| CN102409413B (zh) | 一种利用产紫青霉菌db1菌株制备麻纤维的方法 | |
| CN107828757B (zh) | 可用于麻类脱胶的酶制剂及其麻类韧皮脱胶工艺 | |
| JP5779368B2 (ja) | ポリガラクツロナーゼ | |
| Atiya et al. | Effect of ultrasonic technology on cellulase enzyme activity produced by local bacterial isolate | |
| JP5685398B2 (ja) | ポリガラクツロナーゼ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20090427 |