PL214557B1 - Sposób wytwarzania heparyny drobnocząsteczkowej - Google Patents
Sposób wytwarzania heparyny drobnocząsteczkowejInfo
- Publication number
- PL214557B1 PL214557B1 PL393094A PL39309410A PL214557B1 PL 214557 B1 PL214557 B1 PL 214557B1 PL 393094 A PL393094 A PL 393094A PL 39309410 A PL39309410 A PL 39309410A PL 214557 B1 PL214557 B1 PL 214557B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- molecular weight
- solution
- high molecular
- salt
- heparin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 40
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 title claims description 12
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 title claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical class OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 64
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 50
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 43
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 33
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 20
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 20
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 18
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 18
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 7
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- -1 aliphatic alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000002565 heparin fraction Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000001448 refractive index detection Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 125000000565 sulfonamide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania heparyny drobnocząsteczkowej z heparyny wysokocząsteczkowej o ciężarze cząsteczkowym około 30 000.
Heparyna jest produktem naturalnym uzyskiwanym z organów zwierzęcych, najczęściej z płuc oraz śluzu jelitowego, metodą ekstrakcji i następnie wydzielaniu z ekstraktu. Istnieje szereg metod uzyskiwania heparyny na przykład polskie opisy patentowe, nr 95201 nr 162607.
Heparyna jest sulfonowanym mukopolisacharydem zbudowanym z około 80 reszt monosacharydowych, pochodnych glukozy i kwasu glukoronowego. Cechą charakterystyczną heparyny jest obecność siarki, która występuje jako ugrupowanie sulfonamidowe lub jako ester kwasu siarkowego. Posiada ona silnie ujemny ładunek dzięki czemu jest zdolna do tworzenia kompleksu z niektórymi białkami. Głównym jej zastosowaniem jest Iecznictwo, gdzie stosowana jest do zmniejszania krzepliwości krwi poprzez hamowanie przekształcenia protrombiny (białko znajdujące się w osoczu krwi) w trombinę (enzym osocza, białko o właściwościach enzymatycznych) oraz jako lek rozpuszczający powstałe zakrzepy. Stosowana jest głównie w stanach przedzawałowych i zawałach, jako lek przeciwzakrzepowy. Uzyskiwana i dostępna na rynku heparyna wysokocząsteczkowa jest produktem o bardzo zróżnicowanym ciężarze cząsteczkowym. Jest to przeważnie mieszanina o ciężarze cząsteczkowym od 4000 do 30 000. Do niedawna w medycynie stosowana była wyłącznie heparyna wysokocząsteczkowa. Heparyna taka wykazuje właściwości przeciwkrzepliwe, jednakże może być stosowana wyłącznie w postaci kroplówek dożylnych. Od pewnego czasu stosuje się coraz częściej heparynę drobnocząsteczkową. Wykazuje ona właściwości podobne do heparyny wysokocząsteczkowej ma jednak tą przewagę, że może być aplikowana podskórnie i domięśniowo. W związku z niskim ciężarem cząsteczkowym, a więc dużo mniejszą wielkością cząsteczek jest łatwo wchłaniana i wykazuje szerokie działanie.
Heparynę drobnocząsteczkową uzyskuje się z heparyny wielkocząsteczkowej na drodze hydrolizy. Następuje wówczas pękanie długich łańcuchów z wytworzeniem cząsteczek mniejszych. Część poddawanej hydrolizie heparyny ulega rozkładowi aż do monosacharydów, tracąc swoje właściwości. Stopień degradacji zależy od stosowanej metody hydrolizy. Znanych jest kilka metod prowadzenia hydrolizy. Najczęściej stosowaną jest dezaminowanie przy użyciu kwasu azotowego (III). Roztwory wodne heparyny ogrzewa się z różnymi ilościami kwasu w różnym czasie i temperaturze. Inna metoda polega na prowadzeniu hydrolizy enzymatycznej lub depolimeryzacji przez utlenienie. Metody te znacznie różnią się od siebie, w związku z tym uzyskiwane heparyny drobnocząsteczkowe różnią się między sobą budową cząsteczki, średnią masą cząsteczkową oraz aktywnością antykoagulacyjną. Sposobami tymi uzyskuje się heparynę drobnocząsteczkową, ale wydajności tych procesów są niskie i to sprawia, że produkt jest drogi. Problemem w stosowanych obecnie metodach jest usuwanie po procesie hydrolizy substancji użytych do tego procesu. Sposób według wynalazku usuwa te trudności.
Sposób wytwarzania soli heparyny drobnocząsteczkowej z soli heparyny wysokocząsteczkowej lub z wysokocząsteczkowego kwasu heparynowego polega na tym, że wodny roztwór soli heparyny wysokocząsteczkowej lub wodny roztwór wysokocząsteczkowego kwasu heparynowego kontaktuje się z silnie kwaśną żywicą jonową w formie wodorowej, w temperaturze poniżej 95°C, prowadząc hydrolizę do uzyskania roztworu wykazującego spadek lepkości powyżej 30% w stosunku do lepkości roztworu wyjściowego, i po oddzieleniu żywicy jonowej i zobojętnieniu, wytrąca się frakcje soli heparyny drobnocząsteczkowej, o zróżnicowanej masie cząsteczkowej, przez dodawanie do roztworu kolejnych porcji rozpuszczalnika organicznego z grupy alkoholi alifatycznych C1 - C3 lub acetonu.
Korzystnie stosuje się sól sodową, potasową lub wapniową wysokocząsteczkowej heparyny.
Korzystnie jako silnie kwaśną żywicę jonową w formie wodorowej stosuje się polistyren makroporowaty sieciowany dwuwinylobenzenem, zawierający grupy funkcyjne R-SO3-.
Korzystnie jako silnie kwaśną żywicę jonową w formie wodorowej stosuje się także polistyren żelowy sieciowany dwuwinylobenzenem, zawierający grupy funkcyjne R-SO3-.
Korzystnie roztwór wodny soli heparyny wysokocząsteczkowej lub wysokocząsteczkowego kwasu heparynowego kontaktuje się z żywicą jonową, w temperaturze 70 - 90°C.
Korzystnie roztwór wodny soli heparyny wysokocząsteczkowej lub wysokocząsteczkowego kwasu heparynowego kontaktuje się z żywicą jonową przy mieszaniu ciągłym lub periodycznym.
Korzystnie hydrolizę soli lub kwasu heparynowego prowadzi się do uzyskania roztworu wykazującego spadek lepkości powyżej 40% w stosunku do lepkości roztworu wyjściowego.
Korzystnie stosuje się żywicę jonową w postaci łatwej do oddzielenia z roztworu.
PL 214 557 B1
Korzystnie żywicę jonową, oddziela się od roztworu przez sączenie, najkorzystniej na sitach.
Korzystnie roztwór drobnocząsteczkowego kwasu heparynowego alkalizuje się do pH = 8 - 9.
Wynalazek polega na nieoczekiwanym stwierdzeniu, że zarówno wysokocząsteczkowa sól heparyny jak i wysokocząsteczkowy kwas heparynowy ulegają hydrolizie pod wpływem silnie kwaśnych żywic jonowych w formie wodorowej. W przypadku użycia jako surowca soli wysokocząsteczkowej heparyny, w pierwszym etapie kontaktowania jej z żywicą następuje przejście soli heparyny w wysokocząsteczkowy kwas heparynowy. W przypadku soli należy więc dodać do procesu hydrolizy większą ilość silnie kwaśnej żywicy jonowej. Lepkość hydrolizowanego roztworu jest w dużej mierze wykładnikiem średniego ciężaru cząsteczkowego substancji rozpuszczonej. Po zakończeniu procesu hydrolizy ciecz z rozpuszczonym zhydrolizowanym kwasem heparynowym odsącza się od użytej żywicy jonowej, przeprowadza się w sól heparyny drobnocząsteczkowej a następnie, po ewentualnym dodatkowym oczyszczeniu znanym sposobem, wytrąca się drobnocząsteczkową sól heparyny. Wytrącanie przeprowadza się, dozując porcjami rozpuszczalnik organiczny rozpuszczalny w wodzie, w którym heparyna rozpuszcza się słabo bądź wcale, najkorzystniej jest użyć do tego celu alkohol metylowy lub etylowy. Stosując wytracanie selektywne uzyskuje się partie heparyny o kolejno różnych ciężarach cząsteczkowych. Wybiera się wówczas te, które są przewidziane do zastosowania, a pozostałe można zawracać do przygotowywania roztworów w następnych cyklach.
Poniżej podano przykłady konkretnych procesów oraz uzyskane warunki, jednakże nie ograniczają one możliwości dokonywania dowolnych zmian. Podczas ustalania parametrów hydrolizy należy liczyć się z tym, że heparyna, będąc polisacharydem, ulega karmelizacji podobnie jak cukry. Karmelizacja powoduje całkowity rozkład cząsteczek z utratą jej właściwości opisanych wyżej. Proces karmelizacji zależy głównie od temperatury. W niskiej temperaturze karmelizacja przebiega w stopniu minimalnym. Jednakże w niskiej temperaturze również proces hydrolizy przebiega bardzo wolno, co jest nieekonomiczne w produkcji przemysłowej.
Sposób realizacji wynalazku zilustrowano w przykładach.
P r z y k ł a d 1
W przykładzie użyto sól sodową heparyny uzyskaną z wieprzowego śluzu jelitowego. Był to bia3 ły proszek o aktywności 180 j/cm3, o średnim ciężarze cząsteczkowym 18000 - 20000. 30 g tego produktu rozpuszczono w 150 cm wody destylowanej. Roztwór ten wykazywał barwę 82% transmitancji, mierzonej przy długości fali λ-600 w porównaniu do wody. Zawartość suchej masy w tym roztworze oznaczone w temperaturze 105°C wynosiła 17,68%, a lepkość w temperaturze 20°C - 17,4 cP (1 cP = -3 3
10- Pa-s). Do uzyskanego roztworu wsypano 25 cm suchego, silnie kwaśnego kationitu w formie wodorowej, który stanowił makroporowaty polistyren sieciowany dwuwinylobenzenem. z grupami funkcyjnymi R-SO3- (nazwa handlowa CT-275 produkcji firmy Purolite) Roztwór ten wraz z jonitem wlano do szczelnie zamkniętego naczynia szklanego i wstawiono do termostatu. Temperaturę w termostacie ustawiono na 70°C. W odstępach co 30 minut roztwór w naczyniu był mieszany. Postęp procesu hydrolizy kontrolowano mierząc lepkość roztworu w temperaturze 20°C. Po 4 godzinach ogrzewania lepkość spadła do wielkości 16,4 cP. Mierzono również transmitancję, która informowała o postępie karmelizacji. Transmitancja w tym czasie wynosiła 73,5%. Roztwór ogrzewano dalej w tej samej temperaturze. Następne pomiary lepkości i transmitancji dokonywano co 4 godziny.
Wyniki pomiarów zestawiono w tabeli 1.
T a b e l a 1
| Nr próby | Czas grzania (godz). | Lepkość w 20°C (cP)* | Spadek lepkości (%) | Transmitancja λ=600 | Spadek barwy (%) |
| 1 | 4 | 16,40 | 5,75 | 73,5 | 10,37 |
| 2 | 4 | 10,30 | 40,80 | 60,0 | 26,83 |
| 3 | 4 | 8,3 | 52,29 | 57,0 | 30,49 |
| 4 | 4 | 6,65 | 61,78 | 54,8 | 33,18 |
| 5 | 4 | 5,40 | 68.96 | 53,7 | 34,52 |
| 6 | 4 | 3,88 | 77,70 | 53,4 | 34,88 |
| 7 | 4 | 3,28 | 81,15 | 53,0 | 35,36 |
* 1 cP = 10-3 Pa-s
PL 214 557 B1
Po 28 godzinach spadek lepkości wynosił około 81%. Ogrzewanie przerwano i ciecz zalkalizo3 wano 50%-owym roztworem wodorotlenku sodu do pH około 7. Po zalkalizowaniu uzyskano 160 cm3 cieczy. Z roztworu tego alkoholem metylowym wytrącano selektywnie heparynę o wąskim rozrzucie ciężarów cząsteczkowych. Selektywne wytrącanie uzyskano kolejnym dozowaniem do roztworu coraz większych ilości metanolu.
W tabeli 2 podano wyniki wytrącania drobnocząsteczkowej soli heparyny. Frakcję oznaczoną 33 jako I uzyskano w sposób następujący: do 160 cm3 roztworu po hydrolizie wlano 160 cm3 metanolu.
Wytrąconą heparynę po oddzieleniu od roztworu przemyto dwukrotnie niewielkimi ilościami czystego 3 metanolu. W podobny sposób uzyskano frakcję II i III: do uzyskanych 320 cm3 roztworu po pierwszym 3 wytrąceniu dodano 160 cm3 metanolu. Wytrąconą heparynę po oddzieleniu od roztworu przemyto dwukrotnie niewielkimi ilościami czystego metanolu (Frakcja II). Frakcję oznaczoną jako III uzyskano 3 poprzez rozcieńczenie roztworu heparyny metanolem w ilości 160 cm3. Uzyskane produkty po wysuszeniu ważono i oznaczano lepkość 3%-owego roztworu w wodzie destylowanej w temperaturze 20°C (tabela 2). Heparyna wyjściowa, wysokocząsteczkowa wykazywała w podobnym badaniu lepkość 17,3 cP. W każdej próbce oznaczano również średni ciężar cząsteczkowy. Analizy wykonano z zastosowaniem techniki SEC-HPLC-RI (size exclusion high performance liquid chromatography with refractive index detection).
Wyniki przedstawiono tabeli 2.
T a b e l a 2
| Nr frakcji | Ilość dodawanego metanolu, (cm3) | Masa wytrąconej heparyny po wysuszeniu, (g) | Lepkość roztworu 20°C (cP)* | Ciężar cząsteczkowy frakcji |
| I | 160 | 11,3226 | 2,1 | 6 500 |
| II | 160 | 8,0336 | 1,52 | 4 300 |
| III | 160 | 3,0565 | 1,32 | 2 300 |
| IV | Oddestylowano do sucha | 2,5600 | 1,30 | Nie oznaczono |
* 1 cP = 10-3 Pa-s
Po dodaniu trzeciej porcji metanolu zawartość suchej masy w przesączu wynosiła 0,4%. Dalsze wytrącanie heparyny metanolem wymagałoby użycia znacznej jego ilości, ponieważ rozpuszczalność heparyny o bardzo małym ciężarze cząsteczkowym w roztworze wodno-metanolowym jest duża. Cały powstały przesącz oddestylowano do sucha, uzyskując 2,5 g heparyny stanowiącą frakcję IV. W wyniku próby opisanej w przykładzie uzyskano frakcje heparyny o kilku różnych ciężarach cząsteczkowych, co daje możliwość ich wyboru, stosownie do celu w jakim mają być zastosowane.
P r z y k ł a d 2
Przykład wykonano identycznie jak przykład 1, z tą różnicą, że do hydrolizy zastosowano 3
15%-owy roztwór soli heparyny (22,5 g soli heparyny/150 cm3 wody) oraz silnie kwaśną żywicę jonową w postaci makroporowatego polistyrenu sieciowanego dwuwinylobenzenem, z grupami funkcyjny-3 mi R-SO3- (firmy Rohm and Haas o nazwie handlowej A 36) w ilości 30 cm3 oraz, że temperatura procesu wynosiła 80°C. Roztwór użyty do hydrolizy miał zawartość suchej masy 13,60%, T wynosiła 85%, a lepkość 16,1 cP. Po 4 godzinach ogrzewania lepkość spadła do wielkości 14,4 cP, transmitancja w tym czasie wynosiła 82,9%). Roztwór ogrzewano dalej w tej samej temperaturze, jak w przykładzie I.
Wyniki przedstawiono w tabeli 3.
T a b e l a 3
| Nr próby | Czas grzania, (godz.) | Lepkość w 20°C, (cP)* | Spadek lepkości, (%) | Transmitancja λ=600 | Spadek barwy, (%) |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 1 | 4 | 14,4 | 24,61 | 72,9 | 8,88 |
| 2 | 4 | 10,2 | 46,60 | 59,0 | 26,25 |
| 3 | 4 | 9,8 | 48,70 | 58,0 | 27,50 |
PL 214 557 B1 ciąg dalszy tabeli 3
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 4 | 4 | 6,4 | 66,50 | 56,4 | 29,50 |
| 5 | 4 | 4,9 | 74,35 | 51,7 | 35,38 |
| 6 | 4 | 3,25 | 82,99 | 50,4 | 37,0 |
| 7 | 4 | 3,08 | 83,88 | 43,0 | 46,25 |
* 1 cP = 10-3 Pa-s
W przykładzie tym uzyskano nieco niższą lepkość, jednakże nastąpiło pogorszenie barwy, co świadczy o karmelizacji, w krótszym czasie.
Wyniki przedstawiono w tabeli 4.
T a b e l a 4
| Nr frakcji | Ilość dodawanego metanolu, (cm3) | Masa wytrąconej heparyny po wysuszeniu, (g) | Lepkość roztworu, (cP)* | Ciężar cząsteczkowy frakcji |
| I | 160 | 7,3642 | 2,0 | 6 000 |
| II | 160 | 7,2589 | 1,44 | 3 500 |
| III | 160 | 5,3821 | 1,32 | 2 300 |
| IV | Oddestylowano do sucha | 2,0100 | 1,30 | Nie oznaczono |
* 1 cP = 10-3 Pa-s
W wyniku próby opisanej w przykładzie uzyskano frakcje heparyny o kilku różnych ciężarach cząsteczkowych.
P r z y k ł a d 3
Przykład wykonywano identycznie jak przykład 1, z tą różnicą, że użyto 20% kwas heparynowy 3 (30 g kwasu heparynowego/150 cm3 wody destylowanej) uzyskany z soli sodowej znaną metodą.
Roztwór ten wykazywał lepkość mierzoną w 20°C 16,8 cP oraz barwę mierzoną w % transmitancji 3
85% T. Do roztworu tego wsypano 15 cm3 silnie kwaśnego kationitu w formie wodorowej, którą stanowił polistyren żelowy sieciowany dwuwinylobenzenem, z grupami funkcyjnymi R-SO3- (nazwa handlowa C-100 produkcji Purolite). Roztwór ten podobnie jak w przykładzie 1 i 2 wlano wraz z kationitem do szczelnie zamkniętego naczynia szklanego. Dalej postępowano identycznie jak w przykładzie 1, z tą różnicą, że roztwór ogrzewano w temperaturze 60°C.
Wyniki przedstawiono w tabeli 5.
T a b e l a 5
| Czas grzania (godz.) | Lepkość w 20° (cP)* | Spadek lepkości (%) | Transmitancja λ=600 | Spadek barwy (%) | |
| 1 | 4 | 13,2 | 21,43 | 79,4 | 6,59 |
| 2 | 4 | 10,0 | 40,48 | 72,6 | 14,59 |
| 3 | 4 | 8,6 | 48,81 | 69,2 | 15,59 |
| 4 | 4 | 6,3 | 62,5 | 67,4 | 20,71 |
| 5 | 4 | 4,8 | 71,42 | 64,9 | 23,65 |
| 6 | 4 | 3,13 | 81,37 | 63,0 | 25,89 |
| 7 | 4 | 2,65 | 84,25 | 62,1 | 26,94 |
* 1 cP = 10-3 Pa-s
W przykładzie tym uzyskano niższą lepkość, a także barwa mierzona w % Transmitancji była wyższa.
PL 214 557 B1
Wyniki przedstawiono w tabeli 6.
T a b e l a 6
| Nr frakcji | Ilość dodawanego metanolu (cm3) | Masa wytrąconej heparyny po wysuszeniu w (g) | Lepkość roztworu (cP)* | Ciężar cząsteczkowy frakcji |
| I | 160 | 8,3482 | 2,0 | 6 000 |
| II | 160 | 9,7520 | 1,40 | 3 200 |
| III | 160 | 4,1151 | 1,32 | 2 300 |
| IV | Oddestylowano do sucha | 2,3160 | 1,30 | Nie oznaczono |
* 1 cP = 10-3 Pa-s
W wyniku próby opisanej w przykładzie uzyskano frakcje heparyny o kilku różnych ciężarach cząsteczkowych.
Claims (9)
1. Sposób wytwarzania soli heparyny drobnocząsteczkowej z soli heparyny wysokocząsteczkowej lub z wysokocząsteczkowego kwasu heparynowego, znamienny tym, że wodny roztwór soli heparyny wysokocząsteczkowej lub wodny roztwór wysokocząsteczkowego kwasu heparynowego kontaktuje się z silnie kwaśną żywicą jonową w formie wodorowej, w temperaturze poniżej 95°C, prowadząc hydrolizę do uzyskania roztworu wykazującego spadek lepkości powyżej 30% w stosunku do lepkości roztworu wyjściowego, i po oddzieleniu żywicy jonowej i zobojętnieniu, wytrąca się frakcje soli heparyny drobnocząsteczkowej, o zróżnicowanej masie cząsteczkowej, przez dodawanie do roztworu kolejnych porcji rozpuszczalnika organicznego z grupy alkoholi alifatycznych C1 - C3 lub acetonu.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się sól sodową, potasową lub wapniową wysokocząsteczkowej heparyny.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako silnie kwaśną żywicę jonową w formie wodorowej stosuje się polistyren makroporowaty sieciowany dwuwinylobenzenem, zawierający grupy funkcyjne R-SO3-.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako silnie kwaśną żywicę jonową w formie wodorowej stosuje się polistyren żelowy sieciowany dwuwinylobenzenem, zawierający grupy funkcyjne R-SO3-.
5. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, znamienny tym, że roztwór wodny soli heparyny wysokocząsteczkowej lub wysokocząsteczkowego kwasu heparynowego kontaktuje się z żywicą jonową, w temperaturze 70 - 90°C.
6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że roztwór wodny soli heparyny wysokocząsteczkowej lub wysokocząsteczkowego kwasu heparynowego kontaktuje się z żywicą jonową przy mieszaniu ciągłym lub periodycznym.
7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hydrolizę soli lub kwasu heparynowego prowadzi się do uzyskania roztworu wykazującego spadek lepkości powyżej 40% w stosunku do lepkości roztworu wyjściowego.
8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że żywicę jonową, oddziela się od roztworu przez sączenie, najkorzystniej na sitach.
9. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że roztwór drobnocząsteczkowego kwasu heparynowego po hydrolizie alkalizuje się do pH =8 - 9.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL393094A PL214557B1 (pl) | 2010-11-30 | 2010-11-30 | Sposób wytwarzania heparyny drobnocząsteczkowej |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL393094A PL214557B1 (pl) | 2010-11-30 | 2010-11-30 | Sposób wytwarzania heparyny drobnocząsteczkowej |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL393094A1 PL393094A1 (pl) | 2012-06-04 |
| PL214557B1 true PL214557B1 (pl) | 2013-08-30 |
Family
ID=46210655
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL393094A PL214557B1 (pl) | 2010-11-30 | 2010-11-30 | Sposób wytwarzania heparyny drobnocząsteczkowej |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL214557B1 (pl) |
-
2010
- 2010-11-30 PL PL393094A patent/PL214557B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL393094A1 (pl) | 2012-06-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nie et al. | Structural characteristics, rheological properties, and biological activities of polysaccharides from different cultivars of okra (Abelmoschus esculentus) collected in China | |
| CN105837708B (zh) | 以虾蟹壳为原料制备壳聚糖的方法 | |
| KR101411273B1 (ko) | 펙틴의 추출을 위한 방법 | |
| WO2017032277A1 (zh) | 一种牛肺依诺肝素钠及其制备方法与应用 | |
| RU2670767C9 (ru) | Способ получения низкомолекулярного гепарина | |
| KR20190120216A (ko) | 폴리황산펜토산, 의약 조성물 및 항응고제 | |
| CN109554120B (zh) | 一种碱法生产牛皮明胶的方法 | |
| CN107636021A (zh) | 用于制备多糖的工艺 | |
| Tang et al. | A regular Chlorella mannogalactan and its sulfated derivative as a promising anticoagulant: structural characterization and anticoagulant activity | |
| Jacquemin et al. | Comparison of different twin-screw extraction conditions for the production of arabinoxylans | |
| CN104193849B (zh) | 一种依诺肝素钠的生产方法 | |
| McCready et al. | Plant pectin analysis, determination of pectic substances by paper chromatography | |
| RU2512768C1 (ru) | Способ получения низкомолекулярного гепарина | |
| Felicetta et al. | Lignin. IX. Molecular weights of lignin sulfonates as influenced by certain acidic conditions | |
| CN109575156B (zh) | 一种低分子肝素的纯化方法 | |
| PL214557B1 (pl) | Sposób wytwarzania heparyny drobnocząsteczkowej | |
| CN109721740A (zh) | 一种连续制备不同脱乙酰度的甲壳素/壳聚糖溶液的方法 | |
| RU2441025C1 (ru) | Способ получения низкомолекулярного пектина | |
| White | The constitution of mesquite gum. II. Partial hydrolysis of mesquite gum | |
| KR100679365B1 (ko) | 알긴산의 제조방법 | |
| CN101851285B (zh) | 硫酸糖肽的制备方法 | |
| US2638470A (en) | Process for the production of alginic acid sulfate | |
| RU2725545C1 (ru) | Способ получения низкомолекулярного гепарина | |
| PL214477B1 (pl) | Sposób wytwarzania soli heparyny drobnocząsteczkowej z soli heparyny wysokocząsteczkowej | |
| CN107011456A (zh) | 一种绿藻多糖及其制备方法 |