PL215128B1 - Zastosowanie pochodnej pirymidynowej do zapobiegania przenoszeniu lub infekcji wirusa HIV i kompozycja farmaceutyczna - Google Patents

Zastosowanie pochodnej pirymidynowej do zapobiegania przenoszeniu lub infekcji wirusa HIV i kompozycja farmaceutyczna

Info

Publication number
PL215128B1
PL215128B1 PL373840A PL37384003A PL215128B1 PL 215128 B1 PL215128 B1 PL 215128B1 PL 373840 A PL373840 A PL 373840A PL 37384003 A PL37384003 A PL 37384003A PL 215128 B1 PL215128 B1 PL 215128B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
compound
amino
use according
gel
hiv
Prior art date
Application number
PL373840A
Other languages
English (en)
Other versions
PL373840A1 (pl
Inventor
Roey Jens Marcel Van
Bethune Marie-Pierre T.M.M.G. De
Paul Stoffels
Original Assignee
Tibotec Pharm Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tibotec Pharm Ltd filed Critical Tibotec Pharm Ltd
Publication of PL373840A1 publication Critical patent/PL373840A1/pl
Publication of PL215128B1 publication Critical patent/PL215128B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
    • A61K9/0036—Devices retained in the vagina or cervix for a prolonged period, e.g. intravaginal rings, medicated tampons, medicated diaphragms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/02—Local antiseptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Infusion, Injection, And Reservoir Apparatuses (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Description

Wynalazek dotyczy aktywności przeciwdrobnoustrojowej pewnych zawierających pirymidynę nienukleozydowych inhibitorów odwrotnej transkryptazy (NNRTI), w szczególności, wynalazek dotyczy zastosowania pochodnych pirymidyny w wytwarzaniu leku do zapobiegania przenoszeniu lub infekcji HIV (ludzki wirus niedoboru odporności) u ludzi, w szczególności przenoszeniu drogą płciową. Wynalazek dotyczy także kompozycji farmaceutycznych przystosowanych do zastosowania w miejscu stosunku seksualnego lub pokrewnego intymnego kontaktu.
Na całym świecie, heteroseksualny stosunek płciowy jest głównym sposobem przenoszenia AIDS. Z tego też względu, zwiększyło się zapotrzebowanie na środki blokujące przenoszenie infekcji HIV drogą płciową. Jako, że nie ma skutecznego sposobu leczenia ani szczepionki przeciwko AIDS, środki zapobiegawcze są jedynie narzędziami, dzięki którym w chwili obecnej można ograniczyć przenoszenie ludzkiego wirusa niedoboru odporności (HIV). Stałe i prawidłowe stosowanie prezerwatyw stanowi skuteczną barierę zapobiegającą przenoszeniu HIV. Jednakże, prawdopodobieństwo zakażenia można istotnie zmniejszyć jedynie wtedy, gdy prezerwatywy stosuje się w przypadku prawie wszystkich stosunków seksualnych; tego wyniku nie można jednak osiągnąć pomimo intensywnych programów prewencyjnych mających na celu zwiększenie użycia prezerwatyw.
Skuteczną alternatywą dla prezerwatyw mogą być środki przeciwdrobnoustrojowe do stosowania miejscowego. Środkiem przeciwdrobnoustrojowym jest dowolny środek zabijający lub deaktywujący drobnoustroje wywołujące chorobę. Według International Association of Physicians in AIDS CARE (IAPAC), definicja środków przeciwdrobnoustrojowych obejmuje także środki, które mogą blokować lub zapobiegać infekcji, jak również zwiększające naturalne siły obronne organizmu w celu zapobieżenia infekcji poprzez stosunek seksualny.
Idealnie, środki przeciwdrobnoustrojowe powinny wykazywać niewielkie lub żadne działania niepożądane przy skutecznym stężeniu przeciwdrobnoustrojowym. Zatem w jednym aspekcie lek stosowany jako środek przeciwdrobnoustrojowy powinien wykazywać niewielką lub żadną aktywność immunosupresyjną przy skutecznym stężeniu przeciwdrobnoustrojowym. Ponadto, idealny środek przeciwdrobnoustrojowy powinien być dostatecznie trwały w zmiennych temperaturach i w dopuszczalny sposób działać w różnych zakresach pH (zakresy wartości pH alkalicznego i kwasowego w pochwie). Dalej, środek ten nie powinien eliminować naturalnych korzystnych bakterii z rodzaju Lactobacillus występujących w pochwie i regulujących kondycję pochwy.
Badania wykazały, że przenoszenie HIV na drodze bezpośrednich mechanizmów biologicznych jest łatwiejsze u osób cierpiących już na chorobę przenoszoną drogą płciową (STD) (Fleming i in. Sexually Transmitted Infections (1999 Feb), 75(1), 3-17).
Owrzodzenia, uszkodzenia i stany zapalne spowodowane STD zmniejszają pewne fizyczne bariery dla choroby. Z tego względu, cenną strategią w zwalczaniu infekcji HIV jest zastosowanie środków zapobiegających przenoszeniu STD. Kilka środków przeciwdrobnoustrojowych stosowanych w próbach klinicznych u człowieka zawiera składniki typu detergentu, które mogą powodować uszkodzenia nabłonka pochwy i szyjki macicy. Produkty plemnikobójcze zawierające biodetergenty mogą inaktywować HIV in vitro. Jednakże, podczas badań in vivo wykazano, że takie biodetergenty mogą nasilić wrzody narządów płciowych i ułatwić przenoszenie HIV.
Oprócz surfaktantów, które bezpośrednio działają na cząstkę wirusową badaniom przedklinicznym poddawane są leki blokujące wczesne etapy namnażania HIV takie jak leki antyretrowirusowe. In vitro badano różne środki antyretrowirusowe w tym nienukleozydowe inhibitory odwrotnej transkryptazy (NNRTI) uzyskując różne wyniki. Do chwili obecnej nie opublikowano żadnego dowodu na skuteczność in vivo NNRTI jako środków przeciwdrobnoustrojowych.
Teraz stwierdzono, że związki pirymidynowe wykazują aktywność przeciwdrobnoustrojową zapobiegając infekcji HIV.
Ponadto, związki pirymidynowe wykazują także aktywność przeciwdrobnoustrojową przeciwko patogenom STD, takim jak Haemophilus ducreyi, przy zachowaniu kompatybilności z bakteriami z rodzaju Lactobacillus i normalną florą pochwy. Uzyskany wpływ leczniczy związków według wynalazku na wrzody weneryczne wywołane Haemophilus ducreyi, znacznie przyczynia się do zapobiegania systemowej infekcji HIV.
W europejskim opisie patentowym nr 1002795, międzynarodowym zgłoszeniu patentowym nr 99/50250, międzynarodowym zgłoszeniu patentowym nr 99/50256 i międzynarodowym zgłoszeniu
PL 215 128 B1 patentowym nr 00/27828 ujawniono związki hamujące replikację wirusa HIV w ludzkich komórkach T-4 na drodze oddziaływania z odwrotną transkryptazą HIV.
Opisy WO 99/50256 i WO 00/27828 dotyczą związków pochodnych triazynowych.
WO 99/50250 i WO 00/27825 ujawniają systematyczne leczenie lub profilaktykę przed infekcją HIV. Związki stosowane w tych opisach powodują blokowanie namnażania się wirusa HIV, a zwłaszcza blokują one enzym odwrotnej transkryptazy, który odgrywa kluczową rolę w procesie namnażania się wirusa.
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie związku wybranego z 4-[[4-amino-5-bromo-6-(4-cyjano-2,6-dimetylofenylooksy)-2-pirymidynylo]amino]benzonitrylu i 4-[[4-[(2,4,6-trimetyIofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitrylu, ich N-tlenku, farmaceutycznie dopuszczalnej soli addycyjnej lub czwartorzędowej aminy do wytwarzania leku przydatnego do zapobiegania przenoszeniu lub infekcji HIV, w którym przenoszenie lub infekcja zachodzi poprzez stosunek seksualny lub pokrewny kontakt intymny pomiędzy partnerami, przy czym związek jest podawany na miejsce, w którym zachodzi stosunek seksualny lub pokrewny kontakt intymny pomiędzy partnerami.
Korzystne jest zastosowanie związku wybranego z 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitrylu i 4-[[4-amino-5-bromo-6-(4-cyjano-2,6-dimetylofenylooksy)-2-pirymidynylo]amino]benzonitrylu.
Korzystne jest zastosowanie, w którym związek stanowi 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitryl, jego N-tlenek, jego farmaceutycznie dopuszczalną sól addycyjną lub czwartorzędową aminę.
Korzystne jest zastosowanie, w którym związek stanowi 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitryl.
Korzystne jest zastosowanie, w którym przenoszenie lub infekcja zachodzi poprzez pochwę.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek jest w postaci do podawania miejscowego.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek jest środkiem bioadhezyjnym przylegającym do miejsca podania.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek występuje w postaci żelu, galaretki, kremu, pasty, emulsji, dyspersji, maści, filmu, gąbki, pianki, aerozolu, proszku, pierścienia pochwowego, kapturka naszyjkowego, implantu, opatrunku, czopka, globulki dopochwowej, tabletki lub płynu do płukania ust.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek występuje w postaci pierścienia pochwowego.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek występuje w postaci systemu dostarczania leku o natychmiastowym uwalnianiu.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek występuje w postaci systemu dostarczania leku o przedłużonym uwalnianiu.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek jest w formie żelu, zawierającego w ilości skutecznej przeciwdrobnoustrojowo związek, związek żelotwórczy, bufor, farmaceutycznie dopuszczalny rozcieńczalnik, ewentualnie środek zwilżający i ewentualnie środek konserwujący.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek zawiera 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitryl, hydroksyetylocelulozę, glicerol, metyloparaben, propyloparaben, kwas mlekowy, wodorotlenek sodu i wodę.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek zawiera jeden lub więcej dodatkowych związków antyretrowirusowych.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek zawiera jeden lub więcej składników wybranych spośród takich jak przeciwciało, detergent lub surfaktant, powłokę na patogen, powłokę na miejsce przeniesienia, peptyd o działaniu antybiotykowym lub środek regulujący pH.
Korzystne jest zastosowanie, w którym lek zawiera związek plemnikobójczy.
Korzystne jest zastosowanie do wytwarzania leku przydatnego do zapobiegania przenoszeniu Haemophilus ducreyi.
Korzystne jest zastosowanie do wytwarzania leku przydatnego w leczeniu choroby wywołanej przez Haemophilus ducreyi.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, która zawiera farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i jako substancję czynną w ilości skutecznej przeciwdrobnoustrojowo związek, przy czym kompozycja farmaceutyczna występuje w postaci pierścienia pochwowego lub kapturka naszyjkowego.
Korzystnie kompozycja farmaceutyczna występuje w postaci pierścienia pochwowego.
PL 215 128 B1
Korzystnie kompozycja farmaceutyczna zawiera farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i jako substancję czynną w ilości skutecznej przeciwdrobnoustrojowo związek, przy czym kompozycja farmaceutyczna występuje w postaci żelu w skutecznej ilości zawiera przeciwdrobnoustrojowo działający związek, związek żelotwórczy, bufor utrzymujący pH poniżej 5, farmaceutycznie dopuszczalny rozcieńczalnik, ewentualnie środek zwilżający i ewentualnie środek konserwujący.
Korzystnie kompozycja farmaceutyczna zawiera bufor, który utrzymuje pH w zakresie od 3,2 do 4,5.
Korzystnie kompozycja farmaceutyczna zawiera 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitryl.
Farmaceutycznie dopuszczalne sole addycyjne obejmują aktywne przeciwdrobnoustrojowo nietoksyczne addycyjne formy soli, które mogą wytworzyć związki według wynalazku. Sole te można dogodnie otrzymać traktując formę zasady takimi odpowiednimi kwasami jak kwasy nieorganiczne, np. kwasy fluorowcowodorowe np. kwas chlorowodorowy lub bromowodorowy itp.; kwas siarkowy; kwas azotowy; kwas fosforowy itp.; lub kwasy organiczne, np. octowy, propanowy, hydroksyoctowy, mlekowy, pirogronowy, szczawiowy, malonowy, bursztynowy, maleinowy, fumarowy, jabłkowy, winowy, cytrynowy, metanosulfonowy, etanosulfonowy, benzenosulfonowy, p-toluenosulfonowy, cykloheksyloaminosulfonowy, salicylowy, p-aminosalicylowy, pamowy itp. odwrotnie, formy soli można przekształcić do formy wolnej zasady traktując je zasadami.
Farmaceutycznie dopuszczalne sole addycyjne wymienione powyżej obejmują także aktywne przeciwdrobnoustrojowo nietoksyczne formy zasad, w szczególności, addycyjne formy soli z atomem metalu lub aminą, które mogą utworzyć związki stosowane według wynalazku. Sole te można dogodnie otrzymać traktując związki stosowane według wynalazku zawierające kwasowe atomy wodoru odpowiednimi zasadami organicznymi i nieorganicznymi, takimi jak np. sole amoniowe, alkaliczne i sole metali ziem alkalicznych np. sole litu, sodu, potasu, magnezu, wapnia itp. sole z zasadami organicznymi np. sole z pierwszorzędowymi, drugorzędowymi i trzeciorzędowymi aminami alifatycznymi i aromatycznymi takimi jak metyloamina, etyloamina, propyloamina, izopropyloamina, cztery izomery butyloaminy, dimetyloamina, dietyloamina, dietanoloamina, dipropyloamina, diizopropyloamina, di-n-butyloamina, pirolidyna, piperydyna, morfolina, trimetyloamina, trietyloamina, tripropyloamina, chinuklidyna, pirydyna, chinolina i izochinolina, benzatyna, N-metylo-D-glukamina, 2-amino-2-(hydroksymetylo)-1,3-propanodiol, hydrabamina, oraz sole z aminokwasami takimi jak np. arginina, lizyna itp. odwrotnie te formy soli traktując kwasem można przekształcić do wolnej formy kwasu.
Termin sole addycyjne obejmuje także hydraty i oraz formy addycyjne z rozpuszczalnikiem, które mogą utworzyć związki stosowane według wynalazku. Przykładami takich form są np. hydraty, alkoholany itp.
Stosowany tu uprzednio termin „czwartorzędowa amina określa czwartorzędowe sole amoniowe, które związki mogą utworzyć na drodze reakcji pomiędzy zasadowym atomem azotu związku i odpowiednim środkiem czwartorzędującym, takim jak np. ewentualnie podstawiony halogenek alkilu, halogenek arylu lub halogenek aryloalkilu np. jodek metylu lub jodek benzylu. Można także stosować inne reagenty o dobrych grupach opuszczających, takie jak trifluorometanosulfoniany alkilu, metanosulfoniany alkilu i p-toluenosulfoniany alkilu. Amina czwartorzędowa posiada atom azotu o ładunku dodatnim. Farmaceutycznie dopuszczalne przeciwjony obejmują jon chloru, bromu, jodu, trifluorooctanowy i octanowy. Wybrany przeciwjon można wprowadzić stosując żywice jonowymienne.
N-tlenki związków stosowanych według wynalazku obejmują związki, w których jeden lub kilka trzeciorzędowych atomów azotu jest utlenionych do tak zwanego N-tlenku.
Stosowany tu uprzednio termin stereochemiczne formy izomeryczne związków stosowanych według wynalazku, ich N-tlenki, sole addycyjne, czwartorzędowe aminy, dotyczy wszystkich możliwych związków otrzymanych z takich samych atomów połączonych w takiej samej sekwencji wiązań lecz o różnej budowie przestrzennej, nie będących zamiennymi, które mogą tworzyć związki stosowane według wynalazku. Jeśli nie wymieniono lub wskazano inaczej, chemiczne oznaczenie związku obejmuje mieszaninę wszystkich możliwych stereochemicznych form izomerycznych, które ten związek może mieć. Mieszanina ta może składać się ze wszystkich diastereomerów i/lub enancjomerów o podstawowej strukturze cząsteczkowej wymienionego związku. W zamierzeniu wszystkie stereochemiczne formy izomeryczne związków, zarówno w czystej formie lub w mieszaninie z dowolnym innym izomerem, mieszczą się w zakresie wynalazku.
W szczególności, centra chiralności mogą mieć konfigurację R lub S; podstawniki na dwuwartościowych cyklicznych (częściowo) nasyconych rodnikach mogą mieć konfigurację cis lub trans. Związki zawierające wiązania podwójne mogą przy tym wiązaniu podwójnym wykazywać izomerię E (po
PL 215 128 B1 różnej stronie płaszczyzny odniesienia) lub Z (po tej samej stronie płaszczyzny odniesienia). Terminy cis, trans, R, S, E i Z są dobrze znane fachowcom w dziedzinie.
Tam gdzie poniżej zastosowano termin „związki, termin „związki stosowane według wynalazku rozumie się, że obejmuje ich dowolną podgrupę, także formy N-tlenków, farmaceutycznie dopuszczalne sole addycyjne, czwartorzędowe aminy i wszystkie stereochemiczne formy izomeryczne. Specjalnie interesujące są te związki, które są czyste stereochemicznie.
Związki stosowane według wynalazku można wytworzyć stosując metody znane w dziedzinie. W szczególności, wytwarza się je według metod ujawnionych w europejskim opisie patentowym nr 1002795, międzynarodowym zgłoszeniu patentowym nr 99/50250, międzynarodowym zgłoszeniu patentowym nr 99/50256 i międzynarodowym zgłoszeniu patentowym nr WO 00/27828.
Związki te wykazują aktywność przeciwdrobnoustrojową i zapobiegają przenoszeniu HIV. W szczególności, mogą zapobiegać przenoszeniu HIV drogą płciową lub przez pochwę zapobiegając wytwarzaniu zakaźnych cząstek wirusowych lub infekcji niezakażonych komórek. Jeśli zainfekowane komórki w spermie mogą dotrzeć do śluzówki, wówczas związki te mogą zapobiec zakażeniu wirusem HIV komórek gospodarza, takich jak makrofagi, limfocyty, komórki Langerhansa i M. Zatem, związki stosowane według wynalazku zapobiegają systemowej infekcji HIV u człowieka, wykazując działanie profilaktyczne przeciwko HIV. Dowód tej aktywności przeciwdrobnoustrojowej podano w części eksperymentalnej i opiera się na aktywności in vivo związku B w modelu zwierzęcym ludzkiego SCID (ciężki złożony niedobór odporności) (Di Fabio i in., AIDS 2001, 15, 2231-2238) i na aktywności in vitro związku B w modelu z wykorzystaniem niedojrzałych komórek dendrytycznych pochodzących od monocytów.
Ponadto, stwierdzono, że związki stosowane według wynalazku zabijają bakterie Haemophilus ducreyi. Jako takie, związki te można stosować w celu zapobiegania i leczenia wrzodów wenerycznych, choroby wenerycznej wywoływanej przez te bakterie. Te dodatkowe efekty będą zwiększać nawet skuteczność związków w zapobieganiu infekcji HIV.
Związki stosowane według wynalazku można komponować w kompozycje farmaceutyczne, które można stosować do podawania środków przeciwdrobnoustrojowych, aby skutecznie zapobiec przeniesieniu patogenów przez błony śluzowe i/lub skórę, dokładniej, aby zapobiec przeniesieniu HIV drogą płciową lub przez pochwę. Zatem, kompozycje występują w postaciach przystosowanych do zastosowania na obszarach, gdzie dochodzi do stosunku seksualnego lub pokrewnego intymnego kontaktu, takich jak genitalia, pochwa, srom, szyjka macicy, odbyt, jama ustna, ręce, podbrzusze, górne partie ud, szczególnie błony śluzowe pochwy, sromu, szyjki macicy i odbytu.
Związki te można komponować w kompozycje farmaceutyczne zaprojektowane do natychmiastowego, przedłużonego lub powolnego uwalniania.
Odpowiednimi kompozycjami do zastosowania miejscowego mogą być np. żele, galaretki, kremy, pasty, emulsje, dyspersje, maście, filmy, gąbki, pianki, aerozole, proszki, pierścienie pochwowe lub inne dopochwowe systemy dostarczania leku, kapturki naszyjkowe, implanty, opatrunki, czopki lub globulki dopochwowe do podawania doodbytniczego lub dopochwowego, tabletki dopochwowe lub doodbytnicze lub podpoliczkowe, płyny do płukania ust.
W celu przygotowania kompozycji farmaceutycznych według wynalazku, dany związek w skutecznej ilości, ewentualnie w formie soli addycyjnej, jako substancję czynną można połączyć w jednorodnej mieszaninie z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, który to nośnik może przyjąć szeroki zakres form zależnie od sposobu podawania. Przykładowo, w celu przygotowania kompozycji do miejscowego podawania doustnego, można stosować dowolne typowe media farmaceutyczne, takie jak np. woda, glikole, oleje, alkohole itp., które są odpowiednie dla płynnych preparatów do podawania doustnego, takich jak płyny do płukania ust w postaci zawiesin, emulsji i roztworów. W przypadku tabletek odpowiednie będą nośniki stałe, takie jak skrobie, cukry, kaolin, rozcieńczalniki, lubrikanty, spoiwa, środki rozdrabniające itp. Wynalazek dotyczy również preparatów stałych, które w zamierzeniu przekształca się, krótko przed użyciem, w postać płynną. W przypadku kompozycji odpowiednich do miejscowego podawania naskórnego, nośnik zawiera ewentualnie odpowiedni środek zwilżający, ewentualnie wraz z odpowiednimi dodatkami o dowolnych własnościach w mniejszych proporcjach, które to dodatki nie wykazują znaczącego działania niepożądanego na skórę. Dodatki te mogą ułatwić podawanie miejscowe i/lub mogą być przydatne w wytwarzaniu pożądanych kompozycji. Te kompozycje można podawać różnymi sposobami np. w postaci kremu lub żelu.
Substancja czynna może występować w preparatach farmaceutycznych w postaci wolnego środka lub alternatywnie, może być wprowadzona w nośniki leku takie jak liposomy, nanocząsteczki
PL 215 128 B1 lub cyklodekstryny, która to enkapsulacja prowadzi do zwiększenia stężenia związków w obszarze zajętym przez docelowe mikroorganizmy. Substancja czynna może występować także w postaci nanocząsteczek.
Liposomy mogą występować w preparacie, który zawiera, między innymi, distearoilofosfatydylocholinę (DSPC), distearoilofosfatydyloglicerol (DSPG), distearoilofosfatydyloetanoloaminę-glikol polietylenowy (DSPE-PEG), dipalmitoilofosfatydylocholinę (DPPC), dicetylofosforan (DP), cholesterol (CHOL), dipalmitoilofosfatydyloglicerol (DPPG) i ich kombinacje, takie jak distearoilofosfatydylocholina (DSPC): distearoilofosfatydyloglicerol (DSPG); w których umieszczona jest substancja czynna.
Odpowiednimi cyklodekstrynami są α-, β-, γ-cyklodekstryny lub etery i ich mieszane etery, w których jedna lub więcej grup hydroksylowych jednostek anhydroglukozowych cyklodekstryny jest podstawiona przez C1-6alkil, szczególnie metyl, etyl lub izopropyl np. losowo metylenowany β-CD; hydroksyC1-6alkil, szczególnie hydroksyetyl, hydroksypropyl lub hydroksybutyl; karboksyC1-6alkil, szczególnie karboksymetyl lub karboksyetyl; C1-6alkilokarbonyl, szczególnie acetyl. Szczególnie godnymi uwagi środkami kompleksującymi i/lub solubilizatorami są β-CD, losowo metylenowany β-CD, 2,6-dimetylo^-CD, 2-hydroksyetylo^-CD, 2-hydroksyetylo^-CD, 2-hydroksypropylo^-CD i (2-karboksymetoksy)propylo^-CD, a szczególnie 2-hydroksypropylo^-CD (2-HP^-CD). Cyklodekstryny są ponadto przydatne do zwiększania rozpuszczalności związków.
Termin mieszany eter oznacza pochodną cyklodekstryny, w której co najmniej dwie grupy hydroksylowe cyklodekstryny przeprowadzono w formę eteru z zastosowaniem różnych grup takich jak np. hydroksypropyl i hydroksyetyl.
Konkretnie, związki stosowane według wynalazku można komponować w postać preparatu żelowego zawierającego:
związek w skutecznej miejscowo ilości;
związek żelotwórczy;
bufor;
farmaceutycznie dopuszczalny rozcieńczalnik, korzystnie wodę, ewentualnie środek zwilżający; oraz ewentualnie środek konserwujący.
Typowe preparaty żelowe można wytworzyć stosując naturalne lub syntetyczne polimery jako środki żelujące oraz ciecze hydrofobowe lub hydrofilowe. Przykłady związków żelotwórczych stosowanych powszechnie w preparatach żelowych obejmują polisacharydy, które obejmują pochodne celulozy, glikozoaminoglikany, gumy, skrobię (a-amyloza lub amylopektyna) oraz chitosan; pochodne karboksywinylowe, polimery winylowe takie jak polietyleny, glikole polietylenowe np. glikol polietylenowy 4500, Plastibase® (Plasticized Hydrocarbon Gel), kwas poliakrylowy, (rodzina Carbopol® np.
®
Carbopol® 940), kwas polimetakrylowy, poliwinylopirolidon i alkohol poliwinylowy; polimery poliakrylamidowe lub polimetakrylamidowe, w tym glinki takie jak bentonit, Veegum® (R.T Vanderbilt) i Laponite® (Laporte Industries); kopolimery polioksyetylenpolioksypropylen lub tlenków polietylenu takie jak poloksamery np. poloksamer 407, poloksaminy; białka, koloidalna krzemionka, mydła, silikony takie jak dimetylopolisiloksany lub dimetykon, zasady wodorowęgowe (mieszaniny parafin i wazelin).
Przydatne pochodne celulozy obejmują metylocelulozę, hydroksyetylocelulozę, hydroksypropylocelulozę, hydroksypropylometylocelulozę, karboksymetylocelulozę. Przydatne glikozoaminoglikany obejmują kwas hialuronowy, chondroitynę, siarczan-4-chondroityny, siarczan heparanu i heparynę. Przydatne gumy obejmują naturalne i syntetyczne gumy, gumę tragankową, karagen, pektynę, agar, kwas alginowy, dekstrany. Glikozoaminoglikany można stosować w celu przyśpieszenia gojenia się ran w połączeniu z dowolnym innym polimerem żelotwórczym, takim jak np. kolagen, żelatyna, fibronektyna. Korzystnym środkiem żelującym jest hydroksyetyloceluloza, która wykazuje ponadto właściwości bioadhezyjne.
Stężenia związków żelotwórczych mogą się zmieniać w zależności od warunków takich jak temperatura przemiany ciecz/żel, właściwości fizyczne wymagane dla żelu i pH stosowane przy wytwarzaniu preparatów.
Związkami żelotwórczymi do zastosowania według wynalazku są zazwyczaj rozpuszczalne w wodzie polimery zdolne do utworzenia lepkiego roztworu wodnego lub nierozpuszczalnych w wodzie, pęczniejących w wodzie polimerów (np. kolagen), które mogą także tworzyć lepki roztwór i żel po kontakcie ze skórą. Środki żelujące odpowiednie do zastosowania według wynalazku powinny być trwałe w szerokim zakresie pH, szczególnie w zakresie normalnych kwasowych wartości pH występujących w pochwie.
PL 215 128 B1
Bufory, w preparacie żelowym według wynalazku, stosuje się aby utrzymać pH pochwy w prawidłowym dla niej kwasowym zakresie (tj., pH poniżej około 5 i korzystniej w zakresie około 3,2 do około 4,5) nawet w obecności normalnych ilości ejakulatu. Prawidłowy kwasowy zakres w środowisku i otoczeniu pochwy przyczynia się do obniżenia aktywności pewnych drobnoustrojów wywołujących STD, w tym wirusa HIV. Zachowanie prawidłowego środowiska pochwy przyczynia się również do zachowania naturalnych sił obronnych organizmu przeciwko pewnym drobnoustrojom wywołującym STD. Przykłady buforów obejmują, między innymi, kwas mlekowy, kwas fosforowy, cytrynian sodu, wodorotlenek sodu, fosforan sodu, dwuzasadowy bezwodny fosforan sodu, kwas winowy, trietanoloaminę, kwas cytrynowy, kwaśny winian potasu, kwas benzoesowy, kwas alginowy, kwas sorbinowy, kwas fumarowy, kwas askorbinowy, kwas stearynowy, kwas oleinowy, kwas edetowy, kwas etylenodiaminatetraoctowy, kwas octowy, kwas jabłkowy itp., korzystnie wodorotlenek sodu i kwas mlekowy, gdzie drugi jest ponadto środkiem konserwującym o pewnej aktywności przeciwdrobnoustrojowej.
Kwasy można dodawać w postaci wolnych kwasów, hydratów, lub farmaceutycznie dopuszczalnych soli. Wolne kwasy można przekształcić do odpowiednich soli in situ (tj. w pochwie). Korzystne jest na ogół, gdy żel według wynalazku zawiera kilka buforów co daje zwiększoną wydajność buforowania. Nawet korzystniej, bufory zawierają kombinację substancji akceptujących kwas i atom wodoru występujących naturalnie w organizmie kobiet, która po zastosowaniu na powierzchnię pochwy utrzymuje na niej poziom pH zgadzający się w przybliżeniu z poziomem pH zdrowej pochwy. Ten kwas(y) można wybierać spośród takich jak kwas octowy, kwas mlekowy, kwas fosforowy i kwas siarkowy i ich kombinacje. Jedną spośród właściwości wspólną dla każdego spośród członków tej grupy, jest to, że każdy kwas występuje naturalnie w organizmie kobiety. Inną wspólną cechą jest to, że każdy łatwo przyczynia się do powstania układu buforującego, oddając przejściowo jon wodoru i akceptując kation z wytworzeniem soli.
Tę akceptującą atom wodoru substancję można wybierać z grupy obejmującej wodorotlenek potasu, wodorotlenek sodu, wodorotlenek wapnia, węglan potasu, węglan sodu i węglan wapnia i ich kombinacje. Jedną spośród właściwości wspólną dla każdego spośród członków tej grupy jest to, że każda z tych substancji występuje naturalnie w organizmie kobiety. Inną wspólną cechą jest to, że każdy łatwo przyczynia się do powstania układu buforującego akceptując przejściowo jon wodoru i oddając kation z wytworzeniem soli. Takie sole można wybierać z grupy obejmującej octan, mleczan, fosforan i siarczan, w połączeniu ze wspomnianym kationem z tej substancji akceptującej atom wodoru.
Żele według wynalazku mogą zawierać także i korzystnie zawierają, środki utrzymujące wilgoć. Odpowiednimi środkami utrzymującymi wilgoć są np. glicerol, glikole polietylenowe, glikole propylenowe, sorbitol, trioctan glicerylu itp. Glicerol, który jest korzystnym środkiem zwilżającym, jest składnikiem aktywującym bufor z uwagi na swoją zdolność do absorpcji wody lub innego płynu, ze środowiska pochwy do żelu. Przyjmuje się, że takie pobieranie płynu zapobiega powstawaniu suchego filmu na żelu po umieszczeniu w pochwie, stanowiąc dodatkowy rozpuszczalnik ułatwiający zastosowanie preparatu żelowego lub w inny sposób nasilający jego działanie.
Żele według wynalazku mogą także zawierać i korzystnie zawierają, środek konserwujący, który oprócz innych właściwości, wydłuża dopuszczalny okres przechowywania preparatów żelowych. Odpowiednie środki konserwujące obejmują np. kwas benzoesowy, benzoesan sodu, metyloparaben, etyloparaben, butyloparaben, propyloparaben, chlorek benzalkoniowy, azotan rtęciowofenylowy, chlorheksydynę, alkohol benzylowy, alkohol fenetylowy, glikol propylenowy itp. Korzystnymi środkami konserwującymi są metyloparaben i propyloparaben, z których oba przyczyniają się także do przeciwdrobnoustrojowego działania żelu.
Żele według wynalazku wytwarza się stosując typowe techniki przygotowywania preparatów żelowych. Pożądane jest, jednakże, zapewnienie rozpuszczenia się buforów w końcowym produkcie i uniknięcie lub co najmniej ograniczenie do minimum uwięzienia powietrza w żelu. W celu ograniczenia uwięzienia powietrza w żelu, korzystne jest na ogół dodawanie środków hydrofilowych w mniejszych ilościach, w małych dodatkowych porcjach. Alternatywnie, żele według wynalazku można także wytworzyć w łatwo rozpraszających się postaciach stałych (np. proszki, tabletki itp.), które można przekształcić do pożądanej konsystencji żelu poddając działaniu płynów na bazie wody zewnętrznie lub w pochwie, gdy to pożądane. Fachowcy w dziedzinie będą zdawać sobie sprawę, że sposoby wytwarzania żeli według wynalazku można modyfikować dla uzyskania pracy w trybie seryjnym, półciągłym, lub ciągłym tak długo jak uzyskane opisane tu żele wykazują pożądane i korzystne właściwości.
Preparaty żelowe można połączyć z innymi aktywnymi składnikami, takimi jak środki przeciwdrobnoustrojowe, przeciwbakteryjne, środki chemioterapeutyczne, środki przeciwzapalne, środki
PL 215 128 B1 plemnikobójcze lub inne odpowiednie leki. Ponadto, środki przeciwdrobnoustrojowe lub środki plemnikobójcze lub oba, można połączyć z liposomami (lub innymi nośnikami leku), aby zapobiec dowolnej chorobie błon śluzowych i/lub skóry. Ponadto, preparaty żelowe lub liposomowe lub preparaty na bazie innych nośników leku można także stosować jako nośniki szczepionek przeciwko infekcjom powodowanym przez patogeny lub przeciwko dowolnej chorobie. Jeśli to pożądane, środki smakowo-zapachowe, aromaty, środki aromatyzujące oraz barwniki można wprowadzić do żelu o ile nie upośledzają one zabezpieczenia jakie daje żel. W rzeczywistości, wprowadzenie takich środków smakowo-zapachowych, aromatów, środków aromatyzujących i barwników do kompozycji według wynalazku może stanowić kolejne zabezpieczenie zwiększając prawdopodobieństwo, że żel będzie stosowany w trakcie aktywności seksualnej.
W jednym rozwiązaniu, preparat żelowy składa się ze związku B, hydroksyetylocelulozy (HEC), glicerolu, metyloparabenu, propyloparabenu, kwasu mlekowego, wodorotlenku sodu (dla osiągnięcie pH około 4,5) i wody.
W innym rozwiązaniu, preparat żelowy zawiera związek B, HEC o stężeniu od 0,5 do 5% (wagowo), glicerol o stężeniu od 1 do 15% (wagowo), metyloparaben o stężeniu od 0,02 do 0,5% (wagowo), propyloparaben o stężeniu od 0,005 do 0,2% (wagowo), kwas mlekowy o stężeniu od 0,005 do 0,5% (wagowo), wodorotlenek sodu w ilości wystarczającej do uzyskania pH o wartości 4,5 i wodę.
W innym rozwiązaniu, preparat żelowy zawiera związek B, HEC o stężeniu od 1 do 3% (wagowo), glicerol o stężeniu od 3 do 7% (wagowo), metyloparaben o stężeniu od 0,1 do 0,3% (wagowo), propyloparaben o stężeniu od 0,01 do 0,03% (wagowo), kwas mlekowy o stężeniu od 0,03 do 0,07% (wagowo), wodorotlenek sodu w ilości wystarczającej do uzyskania pH o wartości 4,5 i wodę.
W innym rozwiązaniu, każdy z powyższych preparatów żelowych zawiera związek A jako środek przeciwdrobnoustrojowy.
Preparaty według wynalazku do podawania miejscowego takie jak opisane tu preparaty żelowe nadają się do zastosowania do powlekania różnych typów błon śluzowych, takich jak błona śluzowa sromu, pochwy, szyjki macicy, odbytniczo-odbytowa, jamy ustnej lub skóry w celu zapobieżenia penetracji patogenów takich jak wirusy, bakterie, grzyby, pasożyty, pasożyty zewnętrzne i mykoplazmy.
Preparaty według wynalazku do podawania miejscowego takie jak opisane tu preparaty żelowe można zaaplikować do pochwy ręcznie, z zastosowaniem czopków lub typowego tamponu lub strzykawką. Sposób podawania lub dostarczania żelu do pochwy nie ma decydującego znaczenia o ile do pochwy wprowadzona zostanie skuteczna ilość żelu. Preparaty według wynalazku do podawania miejscowego takie jak opisane tu preparaty żelowe można stosować także w celu zabezpieczenia podczas stosunku analnego i można je stosować przy zastosowaniu podobnych technik.
W przypadku pochwowego stosunku heteroseksualnego, preparaty według wynalazku do miejscowego podawania takie jak opisane tu preparaty żelowe można wprowadzić do pochwy przed stosunkiem. W przypadku stosunku analnego (heteroseksualnego lub homoseksualnego), preparaty według wynalazku do miejscowego podawania takie jak opisane tu preparaty żelowe można wprowadzić do odbytu przed stosunkiem. W przypadku stosunku pochwowego lub analnego, preparaty według wynalazku do miejscowego podawania takie jak opisane tu preparaty żelowe mogą działać także jako środek poślizgowy. W celu dodatkowego zabezpieczenia korzystne jest na ogół, aby preparaty według wynalazku do miejscowego podawania takie jak opisane tu preparaty żelowe stosować przed stosunkiem lub inną aktywnością seksualną i aby, jeśli to odpowiednie, stosować prezerwatywę. W celu dalszego zabezpieczenia, preparaty według wynalazku do miejscowego podawania takie jak opisane tu preparaty żelowe można stosować jak najszybciej po zakończeniu aktywności seksualnej. Chociaż zastosowanie jedynie po aktywności seksualnej jest mniej zalecane, nadal jest pożądane, jeśli preparatu z jakiejkolwiek przyczyny nie zastosowano przed aktywnością seksualną (np. w przypadkach gwałtu).
Preparaty według wynalazku do miejscowego podawania, takie jak opisane tu preparaty żelowe nadają się bardzo do zabezpieczenia kobiet (jak również ich partnerów) domagających się lub nie domagających się informacji partnera o zastosowaniu tych żeli. Ponadto, nie byłoby konieczne poleganie na deklaracji partnera, że nie cierpi na STD, dokładniej nie jest zakażony HIV, ani nie potrzebna byłaby zgoda na zastosowanie prezerwatywy lub innych barierowych urządzeń zabezpieczających.
Preparaty żelowe według wynalazku są ponadto korzystne ponieważ nie wpływają w zasadzie lub nie hamują właściwości wzrostu prawidłowej flory pochwy lub w inny sposób nie podrażniają istotnie tkanki pochwy, gdy stosuje się je w stężeniach hamujących, niecytotoksycznych lub klinicznych.
Znaczące zahamowanie wzrostu lub modyfikacje flory pochwy lub inne podrażnienia mogą prowadzić
PL 215 128 B1 do zwiększonego ryzyka infekcji (zarówno typu STD jak i nie-STD), w których często pośredniczą owrzodzenia w pochwie, niezwykłych wydalin, ogólnego uczucia dyskomfortu itp.
Pierścienie pochwowe (IVR) są także odpowiednimi systemami dostarczania leku do dopochwowego podawania związków według wynalazku. Pierścienie IVR zawierają związek (związki) rozproszone w biokompatybilnym elastomerycznym systemie tworzącym urządzenie dostarczające, które korzystnie występuje w kształcie pierścienia. Te elastomery korzystnie obejmują substancję hydrofobową, taką jak silikony (organopolisiloksany w tym dimetylopolisiloksany), polietylen-co-poli(octan winylu), kopolimery blokowe styren-butadien-styren, polifosfazeny, poli(izopren), poli(izobutylen), polibutadieny, poliuretany, gumy nitrylowe, gumy neoprenowe lub ich mieszaniny. Wspomniane IVR można komponować jako środki przeciwdrobnoustrojowe o przedłużonym uwalnianiu, prowadzące w efekcie do uzyskania wydłużonego i trwałego czasu kontaktu pomiędzy związkiem a docelowymi patogenami i komórkami. Preparaty IVR opisano już w literaturze, WO 02076426 załączonej tu na zasadzie odsyłacza w całości.
W celu wydłużenia czasu przebywania działającej miejscowo kompozycji farmaceutycznej w miejscu podawania, korzystne może być wprowadzenie środka bioadhezyjnego do różnych systemów dostarczania leku, w szczególności bioadhezyjnego polimeru. Środek bioadhezyjny można określić jako substancję, która adheruje do żywej powierzchni biologicznej takiej jak np. błona śluzowa lub tkanka skóry. Termin środek bioadhezyjny jest dobrze znany fachowcowi w dziedzinie. Zatem, przedmiotem wynalazku jest także kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i substancję czynną w ilości skutecznej przeciwdrobnoustrojowo charakteryzująca się tym, że kompozycja farmaceutyczna adheruje do miejsca zastosowania. Korzystnie, miejscem zastosowania jest pochwa, srom, szyjka macicy, odbyt, jama ustna lub skóra, najkorzystniej pochwa i srom.
Przykłady środków bioadhezyjnych, które można stosować w kompozycjach farmaceutycznych według wynalazku obejmują pochodne kwasu poliakrylowego, takie jak np. karbopol lub polikarbofil np. karbopol 934P, karbopol 940, polikarbofil AA1; eterowe pochodne celulozy, takie jak np. hydroksypropylometyloceluloza, hydroksypropyloceluloza, hydroksyetyloceluloza, sól sodowa karboksymetylocelulozy, chitosan; naturalne polimery takie jak np. alginiany, guma tragankowa, inulina; wstępnie zżelowana skrobia; gumy polisacharydowe takie jak guma ksantanowa itp.
Alternatywnie, preparaty według wynalazku mogą występować w postaci implantów, opatrunków, wkładek, preparatów do iniekcji lub innych preparatów do przezskórnego i podskórnego dostarczania związków do tkanek szyjki macicy, pochwy i odbytu.
Jak już wskazano przy opisach żelu, związki stosowane według wynalazku można stosować we wszystkich odpowiednich preparatach, same lub w połączeniu z innymi substancjami czynnymi, takimi jak środki przeciwwirusowe, antybiotyki, immunomodulatory lub szczepionki. Można je także stosować same lub w połączeniu z innymi środkami profilaktycznymi do zapobiegania infekcjom wirusowym. Związki te można stosować w szczepionkach i sposobach do zabezpieczania ludzi przed infekcjami wirusowymi przez dłuższy okres czasu. Związki można stosować w takich szczepionkach same lub razem z innymi związkami stosowanymi według wynalazku lub razem z innymi środkami przeciwwirusowymi w sposób zgodny z typowym zastosowaniem inhibitorów odwrotnej transkryptazy w szczepionkach. Zatem, związki stosowane według wynalazku można łączyć z farmaceutycznie dopuszczalnymi środkami pomocniczymi stosowanymi typowo w szczepionkach i podawanymi w profilaktycznie skutecznych ilościach do zabezpieczania ludzi w dłuższym okresie czasu przed infekcją HIV.
Związkami przeciwwirusowymi, które można stosować w połączeniu ze związkami stosowanymi według wynalazku mogą być znane związki antyretrowirusowe, takie jak suramina, pentamidyna, tymopentyna, kastanospermina, dekstran (siarczan dekstranu), sól sodowa foskarnetu (fosfonomrówczan trisodu); nukleozydowe inhibitory odwrotnej transkryptazy np. zidowudyna (3'-azydo-3'-deoksytymidyna, AZT), didanozyna (2',3'-dideoksyinozyna; ddl), zalcytabina (dideoksycytydyna, ddC) lub lamiwudyna (2'-3'-dideoksy-3'-tiacytydyna, 3TC), stawudyna (2',3'-didehydro-3'-deoksytymidyna, d4T), abakawir itp.; nienukleozydowe inhibitory odwrotnej transkryptazy, takie jak newirapina (11-cyklopropylo-5,11-dihydro-4-metylo-6H-dipirydo-[3,2-b:2',3'-e][1,4]diazepin-6-on), efawirenz, delawirdyna itp.; fosfonianowe inhibitory odwrotnej transkryptazy np. tenofowir itp.; związki typu TIBO (tetrahydroimidazo[4,5,1-jk][1,4]benzodiazepino-2(1H)-on i tion) np. (S)-8-chloro-4,5,6,7-tetrahydro-5-metylo-6-(3-metylo-2-butenylo)imidazo-[4,5,1-jk][1,4]benzodiazepino-2(1H)-tion; związki typu α-ΑΡΑ (α-anilinofenyloacetamid) np. a-[(2-nitrofenylo)amino]-2,6-dichlorobenzenoacetamid itp.; inhibitory białek transaktywujących, takie jak inhibitory TAT np. RO-5-3335 lub inhibitory REV itp.; inhibitory proteaz np. indinawir, ritonawir, sakwinawir, lopinawir (ABT- 378) , nelfinawir, amprenawir, TMC-126,
PL 215 128 B1
BMS-232632, VX-175 itp.; inhibitory fuzji np. T-20, T-1249 itp.; antagoniści receptora CXCR4 np.
AMD-3100 itp.; inhibitory wirusowej integrazy; inhibitory reduktazy rybonukleotydowej np. hydroksymocznik itp.
Kombinacje mogą wywierać także efekt synergistyczny przy hamowaniu replikacji HIV, gdy składniki kombinacji działają na różne lub te same miejsca replikacji HIV, korzystnie na różne miejsca. Zastosowanie takich kombinacji może zmniejszyć dawkowanie danego typowego środka antyretrowirusowego, co byłoby wymagane w przypadku pożądanego działania profilaktycznego, w porównaniu z dawką stosowaną, gdy środek ten podaje się jako jedną substancję czynną. Te kombinacje zmniejszają potencjał do oporności na pojedynczy środek, minimalizując jednocześnie wszelką towarzyszącą toksyczność. Te kombinacje mogą zwiększać także efektywność typowego środka bez zwiększenia towarzyszącej toksyczności.
Zatem, związki stosowane według wynalazku można podawać także w połączeniu ze znanymi w dziedzinie środkami przeciwdrobnoustrojowymi, w konsekwencji zwiększając działanie profilaktyczne. Mogą one blokować infekcję tworząc barierę pomiędzy patogenem, w tym przypadku ludzkim wirusem niedoboru odporności i miejscem, w którym doszłoby do przeniesienia np. srom, pochwa; mogą one zabić lub unieruchomić patogen; mogą one zapobiec replikacji wirusa z chwilą, gdy zainfekował on komórki wyściełające miejsce przeniesienia np. komórki wyściełające ścianę pochwy. Przykładami środków przeciwdrobnoustrojowych są:
- peptydy o działaniu antybiotycznym: małe cząsteczki białkowe stanowiące część pierwszej linii obrony organizmu przed infekcją. Peptydy te wyściełają każdą powierzchnię ciała - oczy, skórę, płuca, język oraz przewód pokarmowy - i zabijają bakterie w ciągu minut od kontaktu. Zatem, przy zastosowaniu w miejscu potencjalnej infekcji HIV, peptydy mogą zabić patogeny przed wywołaniem zakażenia,
- przeciwciała: informacje o oczyszczonych przeciwciałach przeciwdziałających HIV są dostępne w literaturze. Przeciwciała te można odpowiednio łączyć ze związkami stosowanymi według wynalazku, aby zapobiec infekcji HIV,
- środki regulujące pH, szczególnie w przypadku pochwy. Naturalne środowisko pochwy jest zbyt kwasowe, aby przetrwał w nim wirus HIV, lecz nasienie zmniejsza jego kwasowość, umożliwiając przetrwanie HIV. Środki regulujące pH regulują naturalną kwasowość pochwy sprawiając, że nie sprzyja ona HIV. Te środki regulujące obejmują zastosowanie bakterii z rodzaju Lactobacillus produkujących nadtlenek wodoru i tym samym wspomagających zachowanie zdrowego i kwasowego środowiska pochwy. Kwasowy polimer BufferGel (ReProtect, LLC) stanowi inny przykład środka regulującego pH, wykazującego ponadto aktywność plemnikobójczą,
- detergenty i surfaktanty: te związki zdolne są do rozerwania zewnętrznej osłonki wirusów, a zatem są przydatne jako środek przeciwdrobnoustrojowy i można je połączyć ze związkami, aby zapobiec infekcji HIV. Przykładami takich detergentów i surfaktantów są nonoksynol-9 i octoksynol-9, lecz wszystkie detergenty i surfaktanty powszechnie stosowane w szamponach, pastach do zębów, płynach do mycia i płynach do soczewek kontaktowych mogą być równie odpowiednie,
- powłoki na patogen, takie jak Pro-2000 Gel, który zawiera syntetyczny polimer łączący się z HIV, zakłócając wiązanie wirusa z komórkami docelowymi,
- powłoki na miejsce przenoszenia, takie jak np. żele. Te produkty mogą zapobiegać wniknięciu HIV do komórek powlekając miejsce przenoszenia np. nabłonek pochwy i sromu. Przykłady, w tym preparaty żelowe opisane powyżej, obejmują siarczanowane i sulfonowane polimery, takie jak PC-515 (karagen), siarczan 2 dekstryny, inhibitor wydzielniczej proteazy leukocytarnej (SLPI), który łączy się komórkami docelowymi tak, że nie są one dostępne dla wirusa, cyjanowiryna-N, która także łączy się z komórką, zapobiegając fuzji komórki z HIV.
W kompozycjach według wynalazku, jeden lub więcej lub wszystkie spośród wyszczególnionych powyżej środków przeciwdrobnoustrojowych można łączyć ze związkiem stosowanym według wynalazku. Zatem, przedmiotem wynalazku jest także kompozycja farmaceutyczna zawierająca związek stosowany według wynalazku i zawierająca dodatkowo jeden lub więcej składników, przy czym składniki wybiera się spośród takich jak peptydy o działaniu antybiotycznym, przeciwciała, środki regulujące pH, detergenty lub surfaktanty, powłoki na patogen, powłoki na miejsce podawania.
Jednym szczególnym przykładem kombinacji środków przeciwdrobnoustrojowych jest kombinacja związków stosowanych według wynalazku z ftalanooctanem celulozy (CAP) i/lub ftalanem hydroksypropylometylocelulozy (HPMCP). CAP i jego pochodne są rozczynnikami, które wykazują dodatkowe działanie przeciwdrobnoustrojowe. Preparaty CAP opisano już w literaturze, EP 1030547, US
6165493, Neurath i in., przy czym wszystkie załącza się tu na zasadzie odsyłacza.
PL 215 128 B1
Wynalazek dotyczy także kompozycji farmaceutycznej przedstawionej powyżej zawierającej dodatkowo związek plemnikobójczy. Takie kompozycje mogą jednocześnie mieć działanie antykoncepcyjne i zapobiec infekcji HIV. Odpowiednimi środkami plemnikobójczymi są np. nonoksynol-9, octoksynol-9, menfegol, chlorek benzalkoniowy, N-docasanol.
Fachowcy w dziedzinie profilaktyki infekcji HIV mogą określić ilość skuteczną przeciwko drobnoustrojom na bazie przedstawionych tu wyników testów i może ona mieścić się w zakresie od 1 ng do 10 mg, w szczególności od 10 ng do 1 mg, dokładniej od 100 ng do 100 μg i korzystnie od 500 ng do 50 μg aktywnego składnika na podanie lub dawkę jednostkową, w szczególności na podanie lub dawkę jednostkową preparatu o natychmiastowym uwalnianiu.
Odpowiednie może być podanie wymaganej dawki w jednostkowej postaci dawkowania. Objętość dawki jednostkowej, w szczególności dawki jednostkowej preparatu o natychmiastowym uwalnianiu, niezależnie od tego czy w jednostkowej postaci dawkowania czy nie, może się wahać w przypadku preparatu do podawania miejscowego od 10 μΐ do 25 ml preparatu do podawania miejscowego i w szczególności od 1 ml do 10 ml preparatu do podawania miejscowego. Np. w przypadku żelu lub kremu dogodna dawka jednostkowa może mieścić się w zakresie od 1 ml do 5 ml.
Przykładowo, w przypadku preparatów do miejscowego podawania, w szczególności preparatów do miejscowego podawania o natychmiastowym uwalnianiu, takie jak tu wymieniono, np. żel, krem itp., substancja czynna może występować w stężeniu w zakresie od 1 nM do 10 mM, w szczególności od 10 nM do 1 mM, dokładniej od 100 nM do 100 μΜ i korzystnie od 1 μΜ do 100 μΜ.
Oczywiste jest, że tę skuteczną ilość można zmniejszyć lub zwiększyć zależnie od konkretnego zastosowanego związku, reakcji potraktowanego pacjenta i/lub zależnie od oceny lekarza przepisującego związki stosowane według wynalazku.
P r z y k ł a d y
P r z y k ł a d 1: Ocena in vitro nienukleozydowego inhibitora odwrotnej transkryptazy - związku B, jako środka przeciwko HIV
Szczepy HIV przyłączone i nie przyłączone do komórek
W celu przeprowadzenia doświadczeń z komórkami CEM T, zastosowano limfotropowy szczep HIV SI/X4 HTLV-IIIB, pierwotnie otrzymany od R.C. Gallo i M. Popovic'a (NIH, Bethesda, MD). W przypadku doświadczeń z komórkami dendrytycznymi pochodzącymi od monocytów (MO-DC), zastosowano monotropowy szczep HIV NSI/R5 Ba-L, udostępniony przez NIH AIDS Research and Reference Reagent Program (Rockville, MD). Hodowle wyjściowe Ba-L hodowano i dodawano do stymulowanych PHA/IL-2 jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC) w kompletnym podłożu zawierającym RPMI-1640 (Bio-Whittaker, Verviers, Belgium) i 10% surowicę cielęcą (Hyclone, Utah, US) (Peden K. Virological and Molecular Genetic Techniques for Studies of Established HIV Izolates. 1995, 21-45). Sklarowaną ciecz znad tych hodowli zastosowano bezpośrednio jako źródło wirusów nie połączonych z komórką do zakażenia MO-DC. W celu przygotowania źródła przyłączonego do komórek wirusa HIV Ba-L, nie stymulowane PBMC (2 x 106 komórek/ml) inkubowano przez noc przy 10-2 MOI (= krotność zakażenia) HIV Ba-L w podłożu kompletnym. Potem, komórki starannie przemyto, zamrożono w ciekłym azocie i rozmrożono w dniu infekcji.
Wykrywanie antygenu HIV w hodowli pierwotnej i obliczenie wartości EC50
Antygen HIV wykrywano stosując opracowany własny test ELISA, którego właściwości opisali (Beirnaert E, Willems B, Peeters M, Bouckaert A, Heyndrickx L, Zhong Pi in. Design and Evaluation of an in-House HIV-1 (Group M and O), SIVmnd and SIVcpz Antigen Capture Test. J Virol Methods 1998, 73: 65-70). Dolna granica wykrywania wynosi około 200 pg/ml a górna granica wynosi około 25000 pg/ml, co określono stosując krzywą standardową hodowli wyjściowych Ba-L o znanej zawartości p24. 50% stężenia skutecznego (EC50) obliczono wykreślając stężenie Ag HIV wobec stężenia leku, po czym przeprowadzono analizę regresji na liniowej części krzywej.
Pomiar 50% stężenia skutecznego i 50% stężenia cytotoksycznego w komórkach CEM T
Jako układ odniesienia zastosowano komórki CEM T (otrzymane z American Type Culture Collection w Rockville, MD) w uprzednio znormalizowanych warunkach (Balzarini J, i in. AIDS Res Hum Retroviruses 10-4-2000, 16: 517-528). W skrócie, komórki zawieszono w gęstości 250000 komórek/ml w RPMI-1640 uzupełnionym 10% płodową surowicą cielęcą, 2 mM L-glutaminą i 0,075% NaHO3 i zainfekowano HTLV-IIIB przy -20 TCID50. 100 μl z 5-krotnych szeregów rozcieńczeń leków dodano bezpośrednio do 100 μl zainfekowanych komórek w płytkach ze studzienkami na 200 pi. Po 4 do 5 dniach inkubacji w temperaturze 37°C, hodowle badano pod kątem powstawania syncytium. EC50 jest stężeniem wymaganym do zahamowania powstawania syncytium o 50%. Oszacowano cyto12
PL 215 128 B1 toksyczność i podano ją jako wartości CC50, co oznacza stężenie, przy którym żywotność komórek
CEM jest obniżona o 50%.
Otrzymywanie pochodzących od monocytów komórek dendrytycznych typu śródmiąższowego (MO-DC) i limfocytów T Monocyty i limfocyty oddzielono od PBMC z górnej jaśniejszej warstwy skrzepu metodą przeciwbieżnego wymywania, jak to opisali uprzednio (Van Herrewege i in. AIDS Res Hum Retroviruses 10-10-2002, 18: 1091-1102). Monocyty następnie różnicowano do MO-DC hodując w temperaturze 37°C i 5% CO2 przez 7 dni w podłożu kompletnym uzupełnionym 20 ng/ml GM-CSF i IL-4 (Immunosource, Zoersel, Belgium) (Sallusto i in. J Exp Med 1-4-1994,179: 1109-1118. Romani i in. J Exp Med 1-7-1994, 180: 83-93. Geissmann F i in. Exp Med 16-3-1998, 187: 961-966). Frakcję limfocytarną zamrożono w ciekłym azocie i rozmrożono w dniu infekcji. Limfocyty CD4(+) T oczyszczono metodą selekcji pozytywnej stosując zestaw do selekcji komórek CD4(+) (Dynal, Oslo, Norway), tak jak opisali (Vanham i in. AIDS 20-10-2000, 14:2299-2311. Vanham i in. AIDS 18-8-2000, 14: 1874-1876).
Wstępne potraktowanie HIV lekami, z kontynuacją lub bez traktowania hodowli łączonych komórek MO-DC/CD4(+) T po infekcji
Nie połączone z komórkami wirusy HIV Ba-L inkubowano wstępnie z lekiem w szeregu rozcieńczeń, w zakresie od 10000 do 0,1 nM (stężenie końcowe), przez 1 godzinę w temperaturze 37°C. MO-3
-DC zainfekowano wirusami HIV potraktowanymi lekiem przy krotności zakażenia (MOI) 10-3. Po 3 godzinach (w temperaturze 37°C), komórki MO-DC przemyto (6x) i zawieszono w gęstości 4 x 103 komórek/ml. 50 μΐ MO-DC rozdzielono do dołków 96-studzienkowej płytki razem z 50 μΐ autologicznych limfocytów CD4(+) T (2 x 106 komórek/ml) i 100 μΐ kompletnego podłoża lub 100 μΐ leku (w takim samym stężeniu jak w przypadku wstępnej inkubacji). Połowę podłoża hodowlanego wymieniano na świeże kompletne podłoże dwa razy w tygodniu, z dodatkiem lub bez dodatku leku. Po 2 tygodniach hodowli pierwotnej, supernatanty analizowano metodą ELISA i komórki zastosowano do hodowli wtórnych, aby sprawdzić ilość uwalnianego wirusa. W przypadku doświadczeń z wirusami HIV przyłączonymi do komórek zastosowano podobny układ z tym wyjątkiem, że inkubowane wstępnie źródło przyłączonych do komórek wirusów przemyto przed dodaniem komórek MO-DC/CD4(+) T i występowało ono w hodowli łączonej komórek MO-DC/CD4(+) T.
24-godzinne traktowanie lekiem hodowli łączonych komórek MO-DC/CD4(+) T podczas infekcji HIV
Aby ocenić wpływ 24-godzinnego traktowania, komórki MO-DC i autologiczne limfocyty CD4(+) T zawieszono w podłożu kompletnym w gęstości odpowiednio 4 x 105 i 2 x 106 komórek/ml. W dołku
96-studzienkowej płytki umieszczono pięćdziesiąt μl komórek MO-DC i 50 μl limfocytów CD4(+) T razem z 50 μl wirusów przyłączonych do komórek lub nie przyłączonych do komórek (10- MOI) i 50 μl podłoża kompletnego lub 50 μl leku z szeregu rozcieńczeń. Po 24 godzinach (37°C, 5% CO2), komórki przemyto (3x) i inkubowano przez 2 tygodnie. Połowę podłoża hodowlanego wymieniano na świeże kompletne podłoże (bez leku) dwa razy na tydzień. Po 2 tygodniach hodowli pierwotnej, supernatanty analizowano metodą ELISA i komórki zastosowano do hodowli wtórnych, aby sprawdzić ilość uwalnianego wirusa.
Wykrywanie uwolnionego wirusa: hodowla wtórna i analiza PCR
PBMC wydzielono z górnych jaśniejszych warstw skrzepu krwi dawcy i hodowano przez 2 dni w podłożu kompletnym uzupełnionym 5 ng/ml IL-2 (Immunosource, Zoersel, Belgium) i 0,5 μg/ml PHA (Murex, Dartford, England). Po 2 tygodniach hodowli pierwotnej, hodowle łączone komórek MO5
-DC/CD4(+) T przemyto (3x) i nastawiono hodowle wtórne dodając 1 x 105 aktywowanych PHA/IL-2 PBMC na dołek. Połowę podłoża hodowlanego zastępowano co 3-4 dni podłożem zawierającym IL-2 (bez leku), a supernatanty jak również komórki zebrano po dalszych 2 tygodniach. Supernatanty badano pod kątem HIV-Ag metodą ELISA. Komórki przygotowano do pomiaru DNA HIV, stosując zestaw do oznaczania ilościowego prowirusowego DNA HIV w oparciu o PCR, na bazie testu Amplicor HIV-1 Monitor™ Test, wersja 1,5 (Roche Molecular Systems, Branchburg, USA), modyfikacje którego opisali (Christopherson i in. J Clin Microbiol 2000, 38: 630-634). Dolną wartość progową 10 kopii HIV na 106 komórek potwierdzono stosując komórki 8E5/LAV, zawierające 1 kopię prowirusowego DNA na komórkę (życzliwie udostępnione przez Centralized Facility for AIDS Reagenty, Potters Bar, UK).
Ocena aktywności immunosupresyjnej i cytotoksyczności związku B w hodowlach łączonych komórek M0-DC/CD4(+) T
Aktywność immunosupresyjną związku B określono w mieszanych hodowlach leukocytów (MLC), z MO-DC jako stymulatorami i alogenicznymi limfocytami CD4(+) T jako komórkami respondePL 215 128 B1 rowymi. Hodowle 3 x 103 MO-DC i 100 x 103 limfocytów T nastawiono w 6 powtórzeniach w 96-studzienkowej płytce, ze związkiem B w szeregu rozcieńczeń lub bez niego. W pierwszej części doświadczeń związek B usunięto wymywając po upływie 24 godzin, a komórki hodowano jeszcze przez dni. W drugiej części doświadczeń związek B był obecny przez 5-dniowy okres hodowli. W obu 3 układach, do każdej studzienki piątego dnia hodowli dodano 1 μφ [metylo- H]tymidyny (TRA.120 firmy
Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, U.K.). Zawartość płytek zebrano 7 godzin później i określo3 no wbudowanie [metylo-3H]tymidyny w liczniku scyntylacyjnym (Top Count™, Canberra-Packard, Zellik, Belgium) i przedstawiono w postaci zliczeń na minutę (CPM). Stężenie immunosupresyjne (ISC50) oznacza stężenie leku hamujące 50% proliferacji limfocytów. Cytotoksyczność określono mikroskopowo metodą barwienia eozyną hodowli łączonych MO-DC i alogenicznych limfocytów CD4(+) T, hodowanych przez 5 dni z lekiem w szeregu rozcieńczeń. Część zebranych komórek zastosowano także do analizy powstawania limfocytów blastycznych i apopoptozy metodą cytometrii przepływowej, w oparciu o rozproszenie boczne i rozproszenie w przód.
Dane odniesienia dotyczące aktywności przeciwwirusowej i cytotoksyczności związku B W celu określenia przeciwwirusowej aktywności związku B jako odniesienia użyto linii komórek
CEM T. Jak przedstawiono w tablicy 1, związek B był aktywny w zakresie nanomolarnym i wykazał niewielką toksyczność. Obok aktywności przeciwwirusowej u komórek CEM T określono aktywność hamowania odwrotnej transkryptazy HIV-1 teście bez udziału komórek, w którym wskazano 50% stężenie hamujące (IC50) wymienionego związku (fig. 1). Układ z zastosowaniem laboratoryjnej linii komórek CEM T i laboratoryjnego szczepu S1/X4 HTLV-IIIb, nie odpowiadał bezpośrednio przenoszeniu drogą płciową, w którym zaangażowane są pierwotne limfocyty T, komórki dendrytyczne i wirusy NS1/R5. Z tego względu, skupiono się na zapobieganiu infekcji HIV NS1/R5 w hodowlach łączonych komórek MO-DC/CD4(+) T.
T a b l i c a 1. Aktywność przeciwwirusowa, cytotoksyczność i zdolność hamująca HIV-1 RT związku B
Lek Traktowanie HIV EC50 (nM)a CC50 (nM)b IC50 (nM)c
Związek B ciągłe HTLV-IIIb 1 1367 24
aEC50: 50% stężenia skutecznego, stężenie wymagane do hamowania powstawania syncytium komórek CEM T zainfekowanych HTLV-IIIb o 50% bCC50: 50% stężenia cytotoksycznego, stężenie, przy którym żywotność komórek CEM T jest obniżona o 50% cIC50: 50% stężenia hamującego, stężenie hamujące aktywność odwrotnej transkryptazy HIV-1 o 50%.
Traktowanie lekiem hodowli łączonych komórek MO-DC/CD4(+) T zapobiegało integracji HIV
We wstępnych doświadczeniach wirusy HIV Ba-L traktowano wstępnie przez 1 godzinę do 10000 nM związku B. Lek był obecny podczas 2-godzinnej inkubacji wirusów z MO-DC, lecz przed dodaniem autologicznych limfocytów CD4(+) T wymyto go starannie.
W celu zbadania maksymalnego efektu leku, wstępne potraktowanie wirusów oraz traktowanie komórek podczas infekcji połączono dalszym traktowaniem w trakcie całej hodowli pierwotnej trwającej 2 tygodnie. Przykład działania hamującego związku B na infekcję w przypadku wirusów przyłączonych do komórek pokazano w tablicy 2. Związek B hamował infekcję w pierwotnych hodowlach już przy 10 nM, lecz dodanie blastocytów stymulowanych PHA/IL-2 wykazało, że do całkowitego zablokowania infekcji i zapobiegnięcia integracji prowirusowego DNA potrzebne było 100 nM. W przypadku, gdy do infekcji użyto wirusa nie połączonego z komórką, ciągłe traktowanie związkiem B w ilości 10 nM było wystarczające do całkowitego zablokowania infekcji HIV, także w trakcie hodowli wtórnej (tablica 3).
Dalej, zbadano czy traktowanie lekiem przez pierwsze 24 godziny hodowli pierwotnej może być wystarczające do tego, aby zapobiec infekcji i integracji wirusa, jak określono z zastosowaniem odpowiednio metody ELISA i PCR. W porównaniu z ciągłym traktowaniem, związek B blokował infekcję przy stężeniach większych o 1 log niż stężenia stosowane dla ciągłego traktowania (tablica 3).
T a b l i c a 2. Hamowanie infekcji hodowli łączonych komórek MO-DC/CD4(+) T w przypadku wirusów HIV Ba-L przyłączonych do komórek
Lek Stężenie (nM) Antygen HIV (numer studzienek pozytywnych)c Prowirusowe DNA HIVd
Hodowla 1oa Hodowla 2ob (hodowla 2o)
10000 0 0 Neg
PL 215 128 B1 cd. tabeli 2
związek B 1000 0 0 Neg
100 0 0 Neg
10 0 3 4,74
bez leku 0 6 6 4,85
aPrzyłączone do komórek wirusy HIV Ba-L inkubowano wstępnie z lekiem, przemyto i dodano do hodowli łączonych MO-DC i autologicznych limfocytów CD4+ T. Komórki hodowano przez 2 tygodnie w ciągłej obecności leku (hodowla pierwotna (1°)) bPo hodowli pierwotnej, komórki przemyto, dodano aktywowane PHA/IL-2 komórki PBMC i utrzymywano w podłożu zawierającym IL-2 podczas trwającej 2 tygodnie hodowli wtórnej (2°) (bez leku).
cSupernatant znad hodowli badano pod kątem antygenu HIV metodą ELISA. Przedstawiono liczbę mikrokultur antygenopozytywnych (z 6).
dPo hodowli wtórnej, komórki analizowano metodą PCR pod kątem obecności prowirusowego DNA, wyniki przedstawiono jako Log (liczba kopii DNA/106 komórek)
T a b l i c a 3. Warunki zapobiegania infekcji HIV w hodowlach łączonych komórek MO-DC/CD4(+) T
Lek Traktowanie HIV Stężenie (nM)a
nie przyłączony do komórek 100
24 godziny przyłączony do komórek 1000
związek B nie przyłączony do komórek 10
ciągłe przyłączony do komórek 100
aHodowle łączone komórek MO-DC/CD4(+) T inkubowano z wirusami HIV nie przyłączonymi lub przyłączonymi do komórek i traktowano lekiem przez 24 godziny lub w sposób ciągły podczas hodowli 1°. Po zakończeniu hodowli 1°, komórki przemyto i użyto do hodowli 2° (bez leku). Przedstawiono stężenia leku zapobiegające replikacyjnej infekcji HIV, określone metodą ELISA dla supernatantów znad hodowli i PCR dla komórek po hodowli 2°.
bW tej części doświadczenia nie użyto stężenia 10000 nM
Związek B wykazał niewielką cytotoksyczność wobec komórek CEM T i korzystny wskaźnik terapeutyczny w hodowlach łączonych komórek MO-DC/CD4(+) T
Cytotoksyczność (wartość CC50) w komórkach odniesienia CEM T wynosiła 1367 nM dla związku B (tablica 1).
Aktywność immunosupresyjną związku B oszacowano w mieszanych hodowlach leukocytów z MO-DC jako stymulatorami i alogenicznymi limfocytami CD4(+) T jako komórkami responderowymi. Jeżeli w trakcie całego okresu trwania w hodowli obecny był lek wówczas 50% stężenia immunosupresyjnego (ISC50) wynosiło około 1500 nM. Jeżeli lek obecny był w hodowli tylko przez pierwsze 24 godziny, wówczas ISC50 wzrastało do prawie 25000 nM (tablica 4). Zatem, aktywność immunosupresyjna związku B była wyraźnie mniejsza w ciągu 24 godzin traktowania w porównaniu z traktowaniem ciągłym. Aby ocenić w pełni powiązanie pomiędzy aktywnością przeciwwirusową i aktywnością immunosupresyjną, obliczono wartości 50% aktywności przeciwwirusowej (lub EC50) dla potraktowanych lekiem pierwotnych hodowli łączonych autologicznych komórek MO-DC/CD4(+) T zainfekowanych HIV i określono wskaźniki terapeutyczne (TI). Dane w tablicy 4 wskazują, że związek B posiada korzystny TI określony w tym modelu przenoszenia drogą płciową na pierwotnych komórkach docelowych.
T a b l i c a 4. Przegląd przeciwwirusowej i immunosupresyjnej aktywności związku B w hodowlach łączonych komórek MO-DC/CD4(+) T
Lek Traktowanie HIV EC50 (nM)a ISC50 (nM)b TIc
24 godziny nie przyłączony do komórek 42 24886 592
związek B przyłączony do komórek 63 395
ciągłe nie przyłączony do komórek <0,1 1515 >15150
przyłączony do komórek <1d >1515
aEC50: 50% stężenia skutecznego: stężenie leku hamujące 50% replikacji HIV Ba-L bISC50: 50% stężenia immunosupresyjnego: stężenie leku hamujące 50% proliferacji limfocytów T. cTI: Wskaźnik terapeutyczny: ISC50/EC50
PL 215 128 B1
W celu oceny czy hamowaniu syntezy DNA odpowiadała zwiększona śmiertelność limfocytów T lub jedynie zmniejszenie powstawania blastocytów przeprowadzono dodatkowe doświadczenia. Pięćdziesiąt procent hamowania powstawania blastocytów obserwowano przy 3916 nM. Przy 54222 nM śmiertelność limfocytów T wynosiła 50%.
Na zakończenie, zapobieganie infekcji HIV było możliwe zarówno w przypadku wirusów NS1/R5 przyłączonych jak i nie przyłączonych do komórek i 24-godzinne traktowanie było wystarczające. Związek B wykazał wysoki wskaźnik terapeutyczny, u podstawy którego leżała jego względnie niewielka aktywność immunosupresyjna i silna aktywność przeciwwirusowa. Wyniki te potwierdziły zastosowanie związku B jako środka przeciwdrobnoustrojowego.
P r z y k ł a d 2: Model zwierzęcy ludzkiego SCID
W celu symulacji in vivo przenoszenia zachodzącego u ludzi, do oceny dopochwowych środków przeciwdrobnoustrojowych zastosowano model zwierzęcy pochwowego przenoszenia HIV hu-SCID (Di Fabio i in., AIDS 2001, 15, 2231-2238). Przygotowano żele na bazie karbopolu 940 lub hydroksyetylocelulozy (HEC), dwóch rozpuszczalnych w wodzie polimerów, zawierające związek B w różnych stężeniach (0,225 mM; 0,0225 mM lub 0, 00225 mM). Zwierzętom jednokrotnie podano dopochwowo 25 μΐ żelu zawierającego związek B, 15-20 minut przed nieinwazyjną prowokacją dopochwową z zastosowaniem 2x106 ludzkich limfocytów krwi obwodowej PBL (hu-PBL) uprzednio zainfekowanych in vitro szczepami HIV-1 (SF162 i 1/BX08) bez zdolności do tworzenia syncitium (NSI). Przenoszenie międzykomórkowe oszacowano metodą testu p24 oraz ilościowego PCR. Zastosowanie związku B w tym badaniu z powodzeniem hamowało infekcję systemową.
P r z y k ł a d 3: Model in vitro z zastosowaniem komórek Jurkat-tat (PM-1) pochodzących limfocytów T
Bezpośrednią aktywność przeciwwirusową wykazano w modelu z zastosowaniem komórek JurRF 3 kat-tat. Wirusy HIV-1RF (103TCID50) unieruchomione na 96-studzienkowych powleczonych płytkach traktowano testowym związkiem B przez 1 godzinę w temperaturze 37°C, dalej związek usunięto wymywając 4 objętościami PBS przed rozpoczęciem hodowli łączonej z komórkami wskaźnikowymi trwającej 8 dni. Infekcji uniknięto przy stężeniu 100 nM. Ponadto, w równoległym układzie, w którym wirusy potraktowano wstępnie związkiem przed dodaniem komórek i go nie usuwano, infekcji uniknięto przy stężeniu 10 nM.
P r z y k ł a d 4: Model przeszczepu szyjki macicy
Związek B, w stężeniu 10 nM blokował infekcję tkanki, a w stężeniu 100 nM związek może zapobiec przeniesieniu zakaźnego wirusa z migrujących komórek dendrytycznych do hodowanych razem z nimi limfocytów T.
Związek wykazał dobrą efektywność przeciwko pierwotnym szczepom HIV (X4, CCR5 i X4/R5) w stosownych liniach komórkowych do wskazania środka przeciwdrobnoustrojowego o zastosowaniu dopochwowym/doodbytniczym.
W przypadku komórek nabłonka szyjki macicy (ME180) traktowanych związkiem przez 1 godzinę, 24 godziny lub 5 dni po których lek usunięto przez wymywanie, żywotność komórek oszacowano stosując test MTT. Dane nie wykazały toksyczności przy stężeniu 50 μΜ i nieco zmniejszoną żywotność przy stężeniu 100 μΜ.
P r z y k ł a d 5: Charakterystyka biochemiczna oddziaływania pomiędzy związkiem B i odwrotną transkryptazą HIV-1
W celu prześledzenia natury oddziaływania pomiędzy związkiem B i odwrotną transkryptazą HIV-1 (HIV-1 RT), zbadano hamowanie zależnej od RNA reakcji polimeryzacji DNA w stałych warunkach. W pierwszym doświadczeniu, szybkość reakcji określono w obecności związku B w różnych stężeniach i dGTP w różnych stężeniach przy stałym stężeniu kompleksu p(rC)p(dG). Wynik świadczył o tym, że wiązanie związku B z HIV-1 RT nie jest konkurencyjne względem dGTP przy wartości Km 2,51 μΜ i Ki 0,033 μΜ.
W drugim doświadczeniu szybkość reakcji określono w obecności związku B w różnych stężeniach i p(rC)p(dG) w różnych stężeniach przy stałym stężeniu substratu. Wynik świadczył o tym, że wiązanie związku B z HIV-1 RT również nie jest konkurencyjne względem p(rC)p(dG) przy wartości Km 10,3 μΜ i Ki 0,028 μΜ. Podsumowując oznacza to, że wiązanie związku B z HIV-1 RT nie zależy od wiązania nukleotydu i nie zależy od wiązania starter/matryca.
P r z y k ł a d 6: Kompatybilność z bakteriami z rodzaju Lactobacillus i prawidłową florą pochwy
Kompatybilność z bakteriami z rodzaju Lactobacillus i prawidłową florą pochwy jest ważnym wymogiem dla środka przeciwdrobnoustrojowego do zastosowania dopochwowego. Dodatkową ko16
PL 215 128 B1 rzyścią jest aktywność przeciwko patogenom wywołującym choroby przenoszone drogą płciową. W testach in vitro na przeciwbakteryjną aktywność związku B, stwierdzono następującą wrażliwość:
Badano 33 różne gatunki Lactobacillus wyizolowane z hodowli odbytniczo-pochwowych kobiet ciężarnych. Wyniki świadczą o tym, że minimalne stężenie hamujące (MIC50) >32 mg/L
Związek hamował rozwój Hemophilus ducreyi z MIC50 1 mg/L i MIC90 2 mg/L
Rozwój pewnych szczepów Neisseria gonorrhoea hamowany był przy stężeniach istotnych klinicznie.
P r z y k ł a d 7: Test podrażnienia pochwy u królika
Aby wykluczyć jakiekolwiek podrażnienie w teście podrażnienia pochwy u królika zastosowano kilka preparatów związku. 24 godziny po podaniu 1 ml żelu/kremu ze związkiem w różnych stężeniach (0,1 M, 0,9 mM, 0,45 mM i 0,225 mM), nabłonek pochwy ostrożnie zbadano makro- i mikroskopowo. Preparaty mikroskopowe zatopionych w parafinie próbek różnych części obszaru szyjki macicy i pochwy barwiono i badano histologicznie. Otrzymane wyniki badań makro- i mikroskopowych świadczą o tym, że badane preparaty były dobrze tolerowane.
P r z y k ł a d 8: Badania podrażnienia pochwy i toksyczności u białych królików
Aby wykluczyć jakiekolwiek podrażnienie w teście podrażnienia pochwy u królika zastosowano kilka preparatów żelowych zawierających różne stężenia związku B. 10 dni po podaniu preparatów żelowych 6 różnym grupom królików, patolog starannie zbadał makroskopowo i histologicznie nabłonek pochwowy i szyjki macicy. Uzyskano następujące wyniki.
T a b l i c a 5: Badanie pochwy
Utratę i atrofię nabłonka wraz z towarzyszącym minimalnym lub nieznacznym naciekiem nabłonka komórkami zapalnymi obserwowano u wszystkich samic królika potraktowanych nonoksynolem-9,4%.
Grupa/Płeć 1F 2F 3F 4F 5F 6F
Traktowanie zabieg pozorny kontrola placebo (HEC-żel) żel 22,5 μM żel 225 μM żel 10 mM Nonoksynol 9,4%
Utrata i atrofia nabłonka wyraźna 0 0 0 0 0 2
poważna 0 0 0 0 0 3
ogółem 0 0 0 0 0 5b
Naciek zapalny nabłonka minimalny 0 0 0 0 0 3
nieznaczny 0 0 0 0 0 2
ogółem 0 0 0 0 0 5a
a - p <0,05 (dokładny dwustronny test prawdopodobieństwa Fisher'a) b - p <0,01 (dokładny dwustronny test prawdopodobieństwa Fisher'a)
T a b l i c a 6: Badanie szyjki macicy
Utratę i atrofię nabłonka, komórki zapalne w świetle przewodu oraz resztki komórkowe obserwowano jedynie u samic potraktowanych nonoksynolem-9,4%.
Grupa/Płeć 1F 2F 3F 4F 5F 6F
Traktowanie zabieg kontrolny kontrola placebo (HEC-żel) żel 22,5 μM żel 225 μM żel 10 mM Nonoksynol 9,4%
Utrata i atrofia nabłonka wyraźna 0 0 0 0 0 1
poważna 0 0 0 0 0 3
ogółem 0 0 0 0 0 4a
Komórki zapalne w świetle przewodu obecne 0 0 0 0 0
ogółem 0 0 0 0 0 4a
a - p <0,05 (dokładny dwustronny test prawdopodobieństwa Fisher'a)
PL 215 128 B1
P r z y k ł a d 9: Żele o działaniu przeciwdrobnoustrojowym W przykładzie tym przedstawiono różne żele zawierające substancję czynną w różnych dawkach, które można wytworzyć i stosować jako środki przeciwdrobnoustrojowe do zapobiegania infekcji HIV, do podawania miejscowego.
T a b l i c a 7: żel 22,5 μΜ
Związek B 0,74 mg
HEC 2 g
Glicerol 5 g
Metyloparaben 180 mg
Propyloparaben 20 mg
Kwas mlekowy 50 mg
Wodorotlenek sodu (tyle ile potrzeba) do pH 4,5
Woda (tyle ile potrzeba) do 100 g
T a b l i c a 8: żel 225 μΜ
Związek B 7,40 mg
HEC 2 g
Glicerol 5 g
Metyloparaben 180 mg
Propyloparaben 20 mg
Kwas mlekowy 50 mg
Wodorotlenek sodu (tyle ile potrzeba) do pH 4,5
Woda (tyle ile potrzeba) do 100 g
T a b l i c a 9: żel 1 mM
Związek B 32,94 mg
HEC 2 g
Glicerol 5 g
Metyloparaben 180 mg
Propyloparaben 20 mg
Kwas mlekowy 50 mg
Wodorotlenek sodu (tyle ile potrzeba) do pH 4,5
Woda (tyle ile potrzeba) do 100 g
T a b l i c a 10: żel 10 mM
Związek B 329,40 mg
HEC 2 g
Glicerol 5 g
Metyloparaben 180 mg
Propyloparaben 20 mg
Kwas mlekowy 50 mg
Wodorotlenek sodu (tyle ile potrzeba) do pH 4,5
Woda (tyle ile potrzeba) do 100 g
PL 215 128 B1

Claims (23)

1. Zastosowanie związku wybranego z 4-[[4-amino-5-bromo-6-(4-cyjano-2,6-dimetylofenylooksy)-2-pirymidynylo]amino]benzonitrylu i 4-[[4-[(2,4,6-trimetyIofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitrylu, ich N-tlenku, farmaceutycznie dopuszczalnej soli addycyjnej lub czwartorzędowej aminy do wytwarzania leku przydatnego do zapobiegania przenoszeniu lub infekcji HIV, w którym przenoszenie lub infekcja zachodzi poprzez stosunek seksualny lub pokrewny kontakt intymny pomiędzy partnerami, przy czym związek jest podawany na miejsce, w którym zachodzi stosunek seksualny lub pokrewny kontakt intymny pomiędzy partnerami.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym związek jest wybrany z 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitrylu i 4-[[4-amino-5-bromo-6-(4-cyjano-2,6-dimetylofenylooksy)-2-pirymidynylo]amino]benzonitrylu.
3. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym związek stanowi 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitryl, jego N-tlenek, jego farmaceutycznie dopuszczalną sól addycyjną lub czwartorzędową aminę.
4. Zastosowanie według zastrz. 3, w którym związek stanowi 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitryl.
5. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-4, w którym przenoszenie lub infekcja zachodzi poprzez pochwę.
6. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-5, w którym lek jest w postaci do podawania miejscowego.
7. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-6, w którym lek jest środkiem bioadhezyjnym przylegającym do miejsca podania.
8. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-7, w którym lek występuje w postaci żelu, galaretki, kremu, pasty, emulsji, dyspersji, maści, filmu, gąbki, pianki, aerozolu, proszku, pierścienia pochwowego, kapturka naszyjkowego, implantu, opatrunku, czopka, globulki dopochwowej, tabletki lub płynu do płukania ust.
9. Zastosowanie według zastrz. 8, w którym lek występuje w postaci pierścienia pochwowego.
10. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-7, w którym lek występuje w postaci systemu dostarczania leku o natychmiastowym uwalnianiu.
11. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-7, w którym lek występuje w postaci systemu dostarczania leku o przedłużonym uwalnianiu.
12. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-8, w którym lek jest w formie żelu, zawierającego w ilości skutecznej przeciwdrobnoustrojowo związek jak przedstawiono w zastrz. 1-4, związek żelotwórczy, bufor, farmaceutycznie dopuszczalny rozcieńczalnik, ewentualnie środek zwilżający i ewentualnie środek konserwujący.
13. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-8, w którym lek zawiera 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitryl, hydroksyetylocelulozę, glicerol, metyloparaben, propyloparaben, kwas mlekowy, wodorotlenek sodu i wodę.
14. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-13, w którym lek zawiera jeden lub więcej dodatkowych związków antyretrowirusowych.
15. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-14, w którym lek zawiera jeden lub więcej składników wybranych spośród takich jak przeciwciało, detergent lub surfaktant, powłokę na patogen, powłokę na miejsce przeniesienia, peptyd o działaniu antybiotykowym lub środek regulujący pH.
16. Zastosowanie według któregokolwiek z zastrz. 1-15, w którym lek zawiera związek plemnikobójczy.
17. Zastosowanie związku według któregokolwiek z zastrz. 1-4 do wytwarzania leku przydatnego do zapobiegania przenoszeniu Haemophilus ducreyi.
18. Zastosowanie związku według któregokolwiek z zastrz. 1-4 do wytwarzania leku przydatnego w leczeniu choroby wywołanej przez Haemophilus ducreyi.
19. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i jako substancję czynną w ilości skutecznej przeciwdrobnoustrojowo związek jak przedstawiono w którymkolwiek z zastrz. 1-4, przy czym kompozycja farmaceutyczna występuje w postaci pierścienia pochwowego lub kapturka naszyjkowego.
20. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 19, znamienna tym, że kompozycja farmaceutyczna występuje w postaci pierścienia pochwowego.
PL 215 128 B1
21. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i jako substancję czynną w ilości skutecznej przeciwdrobnoustrojowo związek jak przedstawiono w którymkolwiek z zastrz. 1-4, przy czym kompozycja farmaceutyczna występuje w postaci żelu w skutecznej ilości zawiera przeciwdrobnoustrojowo działający związek jak przedstawiono w zastrz. 1-4, związek żelotwórczy, bufor utrzymujący pH poniżej 5, farmaceutycznie dopuszczalny rozcieńczalnik, ewentualnie środek zwilżający i ewentualnie środek konserwujący.
22. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 21, znamienna tym, że bufor utrzymuje pH w zakresie od 3,2 do 4,5.
23. Kompozycja farmaceutyczna według któregokolwiek z zastrz. 19-22, znamienna tym, że zawiera 4-[[4-[(2,4,6-trimetylofenylo)amino]-2-pirymidynylo]amino]benzonitryl.
PL373840A 2002-05-13 2003-05-13 Zastosowanie pochodnej pirymidynowej do zapobiegania przenoszeniu lub infekcji wirusa HIV i kompozycja farmaceutyczna PL215128B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP02076897 2002-05-13

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL373840A1 PL373840A1 (pl) 2005-09-19
PL215128B1 true PL215128B1 (pl) 2013-10-31

Family

ID=29414777

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL373840A PL215128B1 (pl) 2002-05-13 2003-05-13 Zastosowanie pochodnej pirymidynowej do zapobiegania przenoszeniu lub infekcji wirusa HIV i kompozycja farmaceutyczna

Country Status (26)

Country Link
US (4) US7935710B2 (pl)
EP (1) EP1505980B1 (pl)
JP (2) JP4530848B2 (pl)
KR (1) KR101095358B1 (pl)
CN (2) CN1668305B (pl)
AP (1) AP2024A (pl)
AR (1) AR039540A1 (pl)
AT (1) ATE376420T1 (pl)
AU (1) AU2003240844B2 (pl)
BR (2) BR122014006936B8 (pl)
CA (1) CA2486078C (pl)
CY (1) CY1110249T1 (pl)
DE (1) DE60317060T2 (pl)
DK (1) DK1505980T3 (pl)
EA (1) EA011298B1 (pl)
ES (1) ES2294291T3 (pl)
HR (1) HRP20041177B1 (pl)
IL (1) IL165174A (pl)
MX (1) MXPA04011392A (pl)
NO (2) NO331030B1 (pl)
NZ (1) NZ536976A (pl)
PL (1) PL215128B1 (pl)
PT (1) PT1505980E (pl)
SI (1) SI1505980T1 (pl)
WO (1) WO2003094920A1 (pl)
ZA (1) ZA200409984B (pl)

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA03010810A (es) 2001-05-29 2004-03-22 Schering Ag Pirimidinas inhibidoras de cdk, su obtencion y su uso como medicamentos.
TWI329105B (en) 2002-02-01 2010-08-21 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
AR039540A1 (es) * 2002-05-13 2005-02-23 Tibotec Pharm Ltd Compuestos microbicidas con contenido de pirimidina o triazina
DK1534286T3 (da) 2002-07-29 2010-04-26 Rigel Pharmaceuticals Inc Fremgangsmåder til behandling eller forebyggelse af autoimmune sygdomme med 2,4-pyrimidindiamin-forbindelser
JP5602333B2 (ja) 2003-02-07 2014-10-08 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ Ｈｉｖ感染の予防のためのピリミジン誘導体
CL2004000303A1 (es) * 2003-02-20 2005-04-08 Tibotec Pharm Ltd Compuestos derivados de pirimidinas y triazinas; proceso de preparacion; composicion farmaceutica; y su uso para inhibir la replicacion del vih.
BRPI0413018B8 (pt) 2003-07-30 2021-05-25 Rigel Pharmaceuticals Inc composto, e, uso de um composto
ITMI20031640A1 (it) * 2003-08-08 2005-02-09 Mipharm S P A Base per gel bioadesivi.
UA93354C2 (ru) * 2004-07-09 2011-02-10 Гилиад Сайенсиз, Инк. Местный противовирусный препарат
WO2006068770A1 (en) 2004-11-24 2006-06-29 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Spiro-2, 4-pyrimidinediamine compounds and their uses
JP4801096B2 (ja) 2005-01-19 2011-10-26 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ２，４−ピリミジンジアミン化合物のプロドラッグおよびそれらの使用
RU2398768C2 (ru) * 2005-02-18 2010-09-10 Тиботек Фармасьютикалз Лтд. Ингибирующие вич производные 2-(4-цианофениламино)-пиримидин-оксида
EP1911454B1 (en) * 2005-04-27 2012-01-11 Shenzhen Phlora Biotechnology Limited A composition and method of regulating and maintaining the vaginal bacterial flora and the normal acidity in the vagina
US7491732B2 (en) 2005-06-08 2009-02-17 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the JAK pathway
US20070203161A1 (en) 2006-02-24 2007-08-30 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the jak pathway
CN101245051B (zh) * 2005-12-22 2011-04-20 中国科学院上海药物研究所 2，4-二取代氨基-6-取代-[1，3，5]三嗪类化合物、其制备方法、药物组合物及用途
US8962643B2 (en) 2006-02-24 2015-02-24 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of the JAK pathway
US20070293525A1 (en) 2006-06-15 2007-12-20 Djung Jane F 2-anilino-4-aminoalkyleneaminopyrimidines
MX2008016004A (es) 2006-06-15 2009-01-16 Boehringer Ingelheim Int 2-anilino-4-(heterociclo)amino-pirimidinas en calidad de inhibidores de la proteina quinasa c-alfa.
GEP20156282B (en) 2006-12-08 2015-05-11 Irm Llc Compounds and compositions as protein kinase inhibitors
JP5415957B2 (ja) * 2006-12-13 2014-02-12 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤としての２−（ピペリジン−４−イル）−４−フェノキシ−又はフェニルアミノ−ピリミジン誘導体
US8318736B2 (en) * 2006-12-29 2012-11-27 Janssen R&D Ireland HIV inhibiting 5,6-substituted pyrimidines
WO2008080964A1 (en) * 2006-12-29 2008-07-10 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hiv inhibiting 6-substituted pyrimidines
US7989465B2 (en) 2007-10-19 2011-08-02 Avila Therapeutics, Inc. 4,6-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
CN101902911B (zh) 2007-10-19 2015-12-16 阿维拉制药公司 杂芳基化合物和其用途
WO2009143389A1 (en) 2008-05-21 2009-11-26 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Phosphorous derivatives as kinase inhibitors
US9273077B2 (en) 2008-05-21 2016-03-01 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Phosphorus derivatives as kinase inhibitors
PL2576541T3 (pl) 2010-06-04 2016-10-31 Pochodne aminopirymidyny jako modulatory lrrk2
US8580294B2 (en) 2010-10-19 2013-11-12 International Partnership For Microbicides Platinum-catalyzed intravaginal rings
HUE046617T2 (hu) 2010-11-10 2020-03-30 Genentech Inc Pirazol-aminopirimidin-származékok mint LRRK2 modulátorok
US20130039959A1 (en) * 2011-04-19 2013-02-14 Brian Vincent Sokol Method of inhibiting hiv and barrier-forming composition therefor
US10426761B2 (en) 2011-04-19 2019-10-01 Arms Pharmaceutical, Llc Method for treatment of disease caused or aggravated by microorganisms or relieving symptoms thereof
US8535646B2 (en) 2011-04-19 2013-09-17 ARMS Pharmaceutical LLC Method of inhibiting harmful microorganisms and barrier-forming composition therefor
JP5999177B2 (ja) 2011-05-04 2016-09-28 アリアド・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ発動性がんの細胞増殖阻害用化合物
GB201119358D0 (en) 2011-11-10 2011-12-21 Lewi Paulus J Disubstituted triazine dimers for treatment and/or prevention of infectious diseases
GB201204756D0 (en) 2012-03-19 2012-05-02 Lewi Paulus J Triazines with suitable spacers for treatment and/or prevention of HIV infections
JP6469567B2 (ja) 2012-05-05 2019-02-13 アリアド・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ発動性がんの細胞増殖阻害用化合物
CN102675212B (zh) * 2012-05-09 2014-11-05 昆明理工大学 N-取代苯基-2-((1h-苯并咪唑-2-基)巯基)乙酰胺类衍生物及其用途
HK1209742A1 (en) 2012-11-20 2016-04-08 沃泰克斯药物股份有限公司 Compounds useful as inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase
US9611283B1 (en) 2013-04-10 2017-04-04 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Methods for inhibiting cell proliferation in ALK-driven cancers
US10137031B2 (en) 2013-11-14 2018-11-27 International Partnership For Microbicides, Inc. Combination therapy intravaginal rings
JP6466107B2 (ja) * 2014-09-04 2019-02-06 東ソー・ファインケム株式会社 ４−フェニルチオ−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン誘導体及びその製造方法
CN105085410B (zh) * 2015-08-21 2017-10-10 武汉工程大学 一种二芳基嘧啶类hiv‑1抑制剂及其制备方法
EP3370701A1 (en) 2015-11-06 2018-09-12 INEB-Instituto Nacional De Engenharia Biomédica A composition for use in a method for prevention or treatment of human immunodeficiency virus infections
CN106478521A (zh) * 2016-10-11 2017-03-08 武汉工程大学 一种二芳基嘧啶类hiv‑1逆转录酶抑制剂及其制备方法
CN106866628A (zh) * 2017-02-27 2017-06-20 武汉工程大学 一种芳基杂芳基嘧啶类hiv‑1逆转录酶抑制剂及其制备方法
AU2018254577B2 (en) 2017-04-21 2024-06-13 Epizyme, Inc. Combination therapies with EHMT2 inhibitors
CN109053613A (zh) * 2018-07-04 2018-12-21 复旦大学 含有联苯结构的二芳基三嗪类化合物及其制备方法和用途
US12532886B2 (en) 2018-12-04 2026-01-27 Virox Technologies Inc. Method of killing microbes using C3-C5 n-alkyl-gamma-butyrolactams and antimicrobial compositions containing same
US12052990B2 (en) 2018-12-04 2024-08-06 Virox Technologies Inc. C3-C5 n-alkyl-gamma-butyrolactam containing antimicrobial compositions and methods of using same
US12053540B2 (en) 2018-12-04 2024-08-06 Virox Technologies Inc. Antimicrobial compositions containing solvents including a C3-C5 N-alkyl-gamma-butyrolactam
EP3890486A4 (en) 2018-12-04 2022-08-03 Virox Technologies Inc. ANTIMICROBIAL COMPOSITIONS CONTAINING C3-C5 N-ALKYL-GAMMA-BUTYROLACTAM AND THEIR USES
US20220033851A1 (en) * 2020-08-03 2022-02-03 Roger B. Swartz mRNA, episomal and genomic integrated lentiviral and gammaretroviral vector expression of dimeric immunoglobulin A and polymeric immunoglobulin A to Enable Mucosal and Hematological Based Immunity/Protection via Gene Therapy for Allergens, viruses, HIV, bacteria, pneumonia, infections, pathology associated proteins, systemic pathologies, cancer, toxins and unnatural viruses. CAR engineered and non-CAR engineered immune cell expression of dimeric immunoglobulin A and polymeric immunoglobulin A.
EP4380613A1 (en) 2021-08-03 2024-06-12 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Hiv-1 vaccination and samt-247 microbicide to prevent hiv-1 infection
WO2023220645A1 (en) 2022-05-10 2023-11-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Vaccine for human t-lymphotropic virus-1

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4983393A (en) * 1987-07-21 1991-01-08 Maximed Corporation Intra-vaginal device and method for sustained drug release
CH679152A5 (pl) * 1988-01-20 1991-12-31 Univ Minnesota
GB8815265D0 (en) * 1988-06-27 1988-08-03 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
JPH075465B2 (ja) * 1990-03-29 1995-01-25 三菱化学株式会社 抗ウイルス剤
JP3094036B2 (ja) 1990-07-19 2000-10-03 ザ ウエルカム ファウンデーション リミテッド 酵素不活性化剤
GB9214720D0 (en) 1992-07-10 1992-08-19 Wellcome Found Enzyme inhibitors
EP0706514B1 (en) 1993-08-24 1998-11-18 Medivir Ab Compounds and methods for inhibition of hiv and related viruses
US6165493A (en) 1997-10-22 2000-12-26 New York Blood Center, Inc. "Methods and compositions for decreasing the frequency of HIV, herpesvirus and sexually transmitted bacterial infections"
EP0945447A1 (en) * 1998-03-27 1999-09-29 Janssen Pharmaceutica N.V. Trisubstituted 1,3,5-triazine derivatives for treatment of HIV infections
EE04850B1 (et) * 1998-03-27 2007-06-15 Janssen Pharmaceutica N.V. Pürimidiini derivaatide kasutamine ravimi valmistamiseks, mis on ette nähtud HIV nakkuse raviks, ühend, seda sisaldav farmatseutiline kompositsioon, meetod ühendi ja kompositsiooni valmistamiseks ning kombineeritud preparaat kasutamiseks HIV nakku
IL143024A0 (en) 1998-11-10 2002-04-21 Janssen Pharmaceutica Nv 2,4-disubstituted triazine derivatives
AU762523C (en) * 1998-11-10 2004-02-12 Janssen Pharmaceutica N.V. HIV replication inhibiting pyrimidines
US6159491A (en) * 1999-02-12 2000-12-12 Biovector Technologies, Inc. Prolonged release bioadhesive vaginal gel dosage form
PL351710A1 (en) * 1999-05-14 2003-06-02 Univ California Anti−inflammatory therapy for inflammatory mediated infection
ATE316781T1 (de) * 1999-09-24 2006-02-15 Janssen Pharmaceutica Nv Antivirale feste dispersionen
DE19945982A1 (de) * 1999-09-24 2001-03-29 Knoll Ag Geschwindigkeitsbestimmte Partikel
JP2003532403A (ja) 2000-05-05 2003-11-05 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー センチネルウイルスｉｉ
US7276510B2 (en) * 2000-05-08 2007-10-02 Janssen Pharmaceutica, Inc. HIV replication inhibitors
ES2559273T3 (es) 2000-05-08 2016-02-11 Janssen Pharmaceutica Nv Profármacos de pirimidinas que inhiben la replicación del VIH
US6596729B2 (en) 2000-07-20 2003-07-22 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic-2-pyridone compounds useful as HIV reverse transcriptase inhibitors
IL157348A0 (en) * 2001-03-02 2004-02-19 Smithkline Beecham Corp Benzophenones as inhibitors of reverse transcriptase
JP4959907B2 (ja) 2001-03-27 2012-06-27 ワーナー チルコット（アイルランド）リミティド 抗菌剤投与のための膣内用ドラッグデリバリーデバイス
JO3429B1 (ar) 2001-08-13 2019-10-20 Janssen Pharmaceutica Nv مشتقات برميدينات مثبطة فيروس الايدز
TW200306192A (en) 2002-01-18 2003-11-16 Bristol Myers Squibb Co Tricyclic 2-pyrimidone compounds useful as HIV reverse transcriptase inhibitors
AR039540A1 (es) * 2002-05-13 2005-02-23 Tibotec Pharm Ltd Compuestos microbicidas con contenido de pirimidina o triazina

Also Published As

Publication number Publication date
CY1110249T1 (el) 2015-01-14
BR122014006936B1 (pt) 2020-11-24
WO2003094920A1 (en) 2003-11-20
IL165174A (en) 2011-01-31
PL373840A1 (pl) 2005-09-19
BRPI0310021B8 (pt) 2021-05-25
JP2005526846A (ja) 2005-09-08
HRP20041177B1 (hr) 2013-03-31
NO334067B1 (no) 2013-12-02
NO20045267L (no) 2005-02-14
US20200345733A1 (en) 2020-11-05
US20170100399A1 (en) 2017-04-13
HK1173141A1 (zh) 2013-05-10
DE60317060T2 (de) 2008-07-24
AU2003240844A1 (en) 2003-11-11
AU2003240844B2 (en) 2008-09-11
SI1505980T1 (sl) 2008-02-29
US7935710B2 (en) 2011-05-03
AP2004003182A0 (en) 2004-12-31
DE60317060D1 (de) 2007-12-06
JP5256244B2 (ja) 2013-08-07
EP1505980A1 (en) 2005-02-16
NO331030B1 (no) 2011-09-19
CN1668305A (zh) 2005-09-14
ZA200409984B (en) 2006-07-26
ES2294291T3 (es) 2008-04-01
IL165174A0 (en) 2005-12-18
US20110165093A1 (en) 2011-07-07
ATE376420T1 (de) 2007-11-15
EA200401494A1 (ru) 2005-06-30
JP2010189435A (ja) 2010-09-02
BR0310021A (pt) 2005-02-15
JP4530848B2 (ja) 2010-08-25
DK1505980T3 (da) 2008-02-11
CN1668305B (zh) 2013-06-12
KR101095358B1 (ko) 2011-12-16
PT1505980E (pt) 2008-01-17
MXPA04011392A (es) 2005-02-17
EA011298B1 (ru) 2009-02-27
US20060166943A1 (en) 2006-07-27
NZ536976A (en) 2007-08-31
CA2486078A1 (en) 2003-11-20
NO20110298L (no) 2005-02-14
BR122014006936B8 (pt) 2021-05-25
HRP20041177A2 (hr) 2006-04-30
AR039540A1 (es) 2005-02-23
AP2024A (en) 2009-08-11
KR20050010798A (ko) 2005-01-28
BRPI0310021B1 (pt) 2018-03-13
EP1505980B1 (en) 2007-10-24
CN102558070A (zh) 2012-07-11
CA2486078C (en) 2011-08-23
CN102558070B (zh) 2016-01-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL215128B1 (pl) Zastosowanie pochodnej pirymidynowej do zapobiegania przenoszeniu lub infekcji wirusa HIV i kompozycja farmaceutyczna
US11992472B2 (en) Compositions and methods for enhancing the efficacy of contraceptive microbicides
CN1642540B (zh) 作为局部杀微生物药和避孕药的苏拉明及其衍生物
HK1173141B (en) Microbicidal pyrimidine or triazine for preventing sexual hiv transmission
EA041271B1 (ru) Противозачаточная микробицидная композиция и способ предупреждения заболеваний, передающихся половым путем