PL217193B1 - Zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych - Google Patents
Zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowychInfo
- Publication number
- PL217193B1 PL217193B1 PL401911A PL40191112A PL217193B1 PL 217193 B1 PL217193 B1 PL 217193B1 PL 401911 A PL401911 A PL 401911A PL 40191112 A PL40191112 A PL 40191112A PL 217193 B1 PL217193 B1 PL 217193B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- preparation
- immunoregulatory
- mice
- test
- disorders
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 31
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 title claims description 24
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 claims description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 5
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 claims description 2
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 12
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 10
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 7
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 5
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 5
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 5
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 5
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 5
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 5
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 108010002212 colostrinine Proteins 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 238000012549 training Methods 0.000 description 4
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- 238000012347 Morris Water Maze Methods 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001186 vagus nerve Anatomy 0.000 description 3
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100258233 Caenorhabditis elegans sun-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000009118 appropriate response Effects 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000037411 cognitive enhancing Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000020243 first infant milk formula Nutrition 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 231100000245 skin permeability Toxicity 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000003144 traumatizing effect Effects 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000003936 working memory Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Description
Przedmiotem zgłoszenia patentowego jest zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych.
Procesy poznawcze są to procesy przetwarzania informacji, które zachodzą w układzie nerwowym i polegają na odbieraniu informacji z otoczenia, ich przechowywaniu i przekształcaniu. Funkcje poznawcze dzielą się na percepcję, uwagę, myślenie, pamięć, uczenie się oraz funkcje decyzyjne. Wszystkie funkcje poznawcze mają podłoże molekularne. Procesy molekularne na poziomie neurofizjologicznym wpływają na behawior. Oznacza to, że zmiany na poziomie molekularnym wpływają na przebieg procesu poznawczego co skutkuje odpowiednią reakcją na bodziec i może przejawiać się zmianą w zachowaniu.
Badania biologii komórkowej i immunologii udowodniły że układ nerwowy i odpornościowy są ściśle ze sobą powiązane. Interakcje zachodzą na wielu poziomach od poziomu anatomicznego po molekularny. Oba systemy mają zdolność „pamięci”, a ich komórki wiele wspólnych receptorów i substancji powierzchniowo czynnych. Również część przekaźników pierwszego i drugiego rzędu jest dla obu układów wspólna (red. Górska T., Mózg a zachowanie. PWN 2005 Warszawa).
Cytokiny mają zdolność penetracji bariery krew-mózg wpływając na procesy w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN). W układzie odpornościowym zasadniczymi producentami cytokin są aktywowane limfocyty T oraz makrofagi. IL-1a, IL-1 β, IL-6, TNFa są to głównie cytokiny włączone w procesy zwalczania procesów zapalnych, wywołujące bezpośredni efekt cytotoksyczny.
Jednym z głównych szlaków sygnałowych łączących układ nerwowy i immunologiczny jest dziesiąty nerw czaszkowy - nerw błędny. Uszkodzenie nerwu błędnego hamuje powstanie typowej mózgowej odpowiedzi na obwodowe wstrzykiwanie IL-1 bądź niewielkich dawek Iipopolisacharydu (LPS). W normalnych warunkach wstrzykiwanie LPS stanowi modelowy przykład reakcji OUN na zmianę aktywności układu odpornościowego (red. Górska T., Mózg a zachowanie. PWN 2005 Warszawa).
Astrocyty, duże komórki glejowe tworzą między innymi barierę krew - mózg, mają zdolność do syntezy czynników troficznych i cytokin. Wzrost stężenia cytokin w krwiobiegu powoduje, że astrocyty zaczynają wzmożoną produkcję IL-1, IL-6 TNFa. Jest to drugi sposób komunikacji układu immunologicznego z OUN. Cytokiny to podgrupa czynników wzrostowych, których funkcją jest przede wszystkim immunomodulacja (red. Górska T., Mózg a zachowanie. PWN 2005 Warszawa).
Podawanie domózgowe lub dordzeniowe czynników troficznych (neurotrofin) zapobiega wywoływanej eksperymentalnie degeneracji komórek nerwowych lub wspomaga procesy kompensacji biochemicznej i morfologicznej. Próby wszczepienia astrocytów pochodzących z obszarów przyrannych zwierzętom z zaburzeniami zachowania, wykazały poprawę wykonywania testów behawioralnych. Sugeruje to, że czynniki pochodzenia glejowego wytwarzane przez astrocyty, mogą w pewnych warunkach zapobiegać śmierci neuronów i wspomagać procesy kompensacji. Astrocyty reagują na różne bodźce traumatyzujące w sposób, który stwarza możliwość przywrócenia homeostazy w środowisku pozakomórkowym i dostarcza czynników troficznych komórkom nerwowym i glejowym (red. Górska T., Mózg a zachowanie. PWN 2005 Warszawa).
Osoby, którym podawano bardzo niskie dawki LPS, nie odczuły subiektywnie stanu chorobowego, obniżyły się wyniki ich testów pamięci deklaratywnej natomiast odnotowana została zwiększona wydajność pamięci roboczej (Cohen et al., 2003 Endotoxin-induced changes in human working and declarative memory associate with cleavage of plasma „readthrough” acetylcholinesterase. J Mol Neurosci 21:199-212).
Poczyniony w ostatnich latach znaczący postęp w wyjaśnieniu molekularnych podstaw procesów poznawczych, zwrócił uwagę badaczy na nową grupę substancji białkowych, charakteryzujących się właściwościami regulacyjnymi wobec komórek układu immunologicznego i centralnego systemu nerwowego. Wspomniana grupa substancji białkowych może mieć właściwości wspomagające procesy poznawcze, dzięki swoim właściwościom immunoregulatorowym. Peptydy o właściwościach immunoregulatorowych, mogą występować w stanie wolnym, skompleksowanym z innymi substancjami lub stanowić strukturalny element większych białek, z których wycinane są na drodze proteolizy.
W badaniu in vitro pełnego pierwszego mleka (siary) stwierdzono wywołanie wytwarzania cytokin przez ludzkie jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (Shing C.M., at all. Bovine colostrum modulates cytokine production in human peripheral blood mononuclear cells stimulated with Iipopolysaccharide and phytohemagglutinin. J. Interferon Cytokine Res.. 2008. Nov 17. [Epubahead of
PL 217 193 B1 print]). Wskazuje to na możliwość zastosowania preparatów zawierających składowe siary do kontrolowania procesu zapalnego.
Typowym przykładem białek immunoregulatorowych jest kompleks peptydów po raz pierwszy wyizolowany z siary owczej (Janusz M., Lisowski J., Franek F., 1974. Isolation and characterisation of a proline-rich polypeptide from ovine colostrum. FEBS Letters 49, 276-279). Kompleks ten, nazwany później kolostryniną (Colostrinin®), występuje w siarze w formie związanej z frakcją immunoglobulin lgG2, wskazując na jego immunoregulatorowe właściwości. Kolostryniną ma zdolność stymulowania odpowiedzi humoralnej i nasila przepuszczalność naczyń krwionośnych (Wieczorek Z., Zimecki M., Janusz M., Staroscik K., Lisowski J.: Prolinerich polipeptide from ovine colostrum: its effects on skin permeability and on the immune response. Immunology, 1997, 36, 875- 881). Zwiększa napływanie supresorowych limfocytów T i powoduje działanie immunosupresyjne (Zimecki M.: A proline-rich polypeptide from ovine colostrum: colostrinin with immunomodulatory activity. Adv. Exp. Med. Biol., 2008, 606, 241-250). Kolostrynina promuje dojrzewanie tymocytów i indukuje proliferację komórek w węzłach chłonnych (Staroscik K., Janusz M., Zimecki M., Wieczorek Z., Lisowski J.: Immunologically active nonapeptide fragment of a proline-rich polpeptide from ovine colostrum: amino acid sequence and immunoregulatory properties. Mol. Immunol., 1983, 20, 1277-1282). Indukuje wydzielanie cytokin, w tym interferonu (IFN), czynnika martwicy guza (TNF-α) oraz IL-6 i IL-10 (Zabłocka A., Janusz M., Rybka K., Wirkus-Romanowska I., Kupryszewski G., Lisowski J.: Cytokine-inducing activity of a proline-rich polipeptide complex (PRP) from ovine colostrum and its active nonapeptide fragment analogs. Eur. Cytokine Netw., 2001, 12, 462-467. Płusa T., Immunomodulacyjne białka zawarte w siarze Pol. Merk. Lek., 2009, XXVI, 153, 234).
Zarejestrowana w indeksie leków (N07X) cerebrolizyna jest mieszaniną peptydów uzyskiwaną z kolei z białek strukturalnych mózgu świni. Pobudza ona różnicowanie komórek, wspomaga czynność komórek nerwowych, działa ochronnie i pobudza procesy naprawcze. W badaniach na zwierzętach cerebrolizyna wpływa na plastyczność neuronów i synaps oraz ułatwia proces uczenia się.
(http://indeks.mp.pl/desc.php?id=1314).
Doświadczenia in vitro oraz ex vivo przeprowadzone w celu porównania immunoregulatorowej aktywności kompleksu białkowego będącego przedmiotem zgłoszenia patentowego P.396027, wykazały, że preparat immunoregulatorowy z żółtka jaja, wpływa na wydzielanie przez komórki interleukin IL-1 β oraz IL-6. Obie interleukiny należą do cytokin prozapalnych (tzw. typ Th1), odpowiedzialnych za aktywację odpowiedzi immunologicznej. Zdolność indukcji cytokin in vitro przez białka tego kompleksu przewyższa preparat referencyjny (kolostryninę). Stężenie indukowanych cytokin IL-1 β i IL-6 jest maksymalne już przy najniższej dawce preparatu.
Niespodziewanie okazało się, że preparat immunoregulatorowy pozyskany z żółtka jaja wykazuje działanie poprawiające funkcje poznawcze. Wynalazek ma charakter innowacyjny ze względu na brak opisanego w literaturze wpływu preparatu immunoregulatorowego z jaja na poprawę tych funkcji. Badania prowadzono w ramach projektu finansowanego przez Unię Europejską z Europejskiego Funduszu Rozwoju Regionalnego, Grant Nr POIG. 01.03.01-00-158/09.
Istotą wynalazku jest zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych, zwanego Yolkiną, a będącego przedmiotem zgłoszenia patentowego zarejestrowanego pod numerem P. 396027, jako surowca farmaceutycznego do wytwarzania leków stosowanych przy zaburzeniach degeneracyjnych centralnego układu nerwowego, zwłaszcza u osób z niezadowalającą odpowiedzią na konwencjonalną terapię. Dodatkowo, istotą jest zastosowanie tego preparatu jako suplementu diety lub jako składnik suplementu diety, wspomagającego i/lub poprawiającego funkcje poznawcze, stosowanego w profilaktyce zaburzeń tych funkcji o różnym podłożu i/lub wspomagająco w terapii tych zaburzeń.
Doświadczenia in vivo przeprowadzone z użyciem preparatu immunoregulatorowego oraz testu behawioralnego oceniającego funkcje poznawcze, m.in. zdolność uczenia się i pamięć, przyniosły rezultaty świadczące o istotnej poprawie w zakresie funkcjonowania poznawczego. Myszy otrzymujące preparat immunoregulatorowy statystycznie lepiej wypadły w teście behawioralnym w porównaniu do myszy otrzymujących placebo. Świadczy to o wpływie jaki wywarł preparat na poziomie molekularnym w mózgu myszy, co przełożyło się na poprawę procesów poznawczych, zwłaszcza uczenia się i pamięci.
Pozytywny wpływ preparatu immunoregulatorowego na funkcje poznawcze myszy przedstawiono w poniższych przykładach.
PL 217 193 B1
Opis grup biorących udział w eksperymencie: Do oceny wpływu preparatu użyto myszy B6C3-Tg (APPswe,PSEN1dE9)85Dbo/Mmjax NCAR). Myszy (samce) zakupiono od firmy The Jackson Laboratories (USA). Przeprowadzono dwa niezależne eksperymenty przy użyciu innych osobników, różniące się drogą podania preparatu równolegle z placebo oraz wiekiem zwierząt. Myszy biorące udział w obu eksperymentach niezależnie, podzielono na grupę badaną i kontrolną. Grupa badana otrzymywała preparat immunoregulatorowy. Grupa kontrolna otrzymywała placebo. Charakterystykę każdej z badanych grup przedstawiono w tabeli 1.
T a b e l a 1. Charakterystyka gryp w ramach przeprowadzonych eksperymentów
| Droga podania | Czas podawania preparatu/placebo | Średnia waga w zależności od wieku | Wiek myszy na początku podawania preparatu/placebo | Wiek badanych myszy | Liczebność grupy badanej | Liczebność grupy kontrolnej |
| Dootrzewnowa | 4 tyg. pon-pt. | 28 g-29 g | 8. mż | 9. mż. | n=9 | n=10 |
| Doustna | 24 tyg. pon-nd | 25 g-30 g | 4. mż. | 10. mż. | n=7 | n=10 |
Opis metody badawczej: Basen Wodny Morrisa jest testem behawioralnym oceniającym zdolność uczenia się i pamięci. Zwierzę umieszcza się w okrągłym basenie wodnym (0122 cm), z platformą, która znajduje się w stałym miejscu. Mysz, aby wydostać się z wody powinna odnaleźć ukrytą platformę. Na ścianach pomieszczenia widnieją charakterystyczne obiekty, (tzw. flagi), które umożliwiają orientację w przestrzeni. Eksperyment poprzedzony jest serią treningów (5 sesji). W czasie treningu tj. od 1-go do 5-go dnia mysz uczy się, gdzie umiejscowiono platformę, rozpoczynając każdą sesję z innej pozycji startowej (N,S,W,E) zgodnie z Tabelą 2. Pierwszego dnia treningu platformę umieszcza się nad powierzchnią wody. Od 2-go do 5-go dnia pod powierzchnią wody. W dniu szóstym sprawdza się w jakim stopniu mysz zapamiętała położenie platformy. Za pomocą kamery wideo rejestrowany jest czas pobytu myszy w czterech strefach labiryntu wodnego Morrisa (NE, NW, SE, SW) oraz w dniu testu (dzień 6.) w miejscu położenia platformy w czasie treningu. Schemat doświadczenia prezentuje tabela 2. Dane analizowano przy użyciu oprogramowania SMART ver. 2,5 (PanLab, Hiszpania). Parametrem mierzonym w teście jest odsetek czasu przebywania (PT%) oraz odsetek dystansu (D%) przebytego w rejonie usuniętej platformy. Wynik parametrów D% i PT% dotyczący strefy gdzie znajdowała się platforma świadczy o poszukiwaniu platformy przez mysz w odpowiednim miejscu. Labirynt wodny Morrisa pozwala na ocenę pracy hipokampu, czego obrazem jest zdolność zwierzęcia do orientacji w przestrzeni oraz umiejętność uczenia się i zapamiętywania.
T a b e l a 2. Schemat doświadczenia. (N-północ, W-zachód, E-wschód, S-południe, SW-południowy-zachód;
NW-północny-zachód, NE-północny-wschód, SE-południowy-wschód) (Bromley-Brits K. et al.: Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer's Disease Model Mice. J. Vis. Exp. (53), e2920, DOI : 10.3791/2920, 2011).
| Dzień 1 | Dzień 2 | Dzień 3 | Dzień 4 | Dzień 5 | Dzień 6 | ||
| Położenie platformy | Pozycja startowa | Położenie platformy SW. Pozycja startowa jak poniżej: | Brak platformy | ||||
| Sesja 1 | SW | S | W | N | N | E | N |
| Sesja 2 | NW | N | S | W | E | S | - |
| Sesja 3 | NE | S | N | E | W | W | - |
| Sesja 4 | CENTER | E | E | W | S | E | - |
| Sesja 5 | SE | W | S | S | N | N | - |
P r z y k ł a d 1. Myszom w trakcie ich ósmego miesiąca życia podawano drogą iniekcji dootrzewnowej preparat zachowując podział na grupę badaną i grupę kontrolną (Tabela 3 i 4). Grupie badanej podawano preparat immunoregulatorowy z żółtka jaja dootrzewnowo w dawce 100 pg/mysz (średnio 3,5 mg/kg) przez 5 tygodni od poniedziałku do piątku. Grupie kontrolnej podawano placebo
PL 217 193 B1 dootrzewnowo przez 5 tygodni od poniedziałku do piątku (tabela 3 i 4). W trakcie trwania dziewiątego miesiąca życia, myszy zbadano testem Basenu Wodnego Morrisa. Wyniki zaprezentowano na Wykresie 1.
T a b e l a 3. Schemat podawanych dawek drogą dootrzewnową. Czas podawania = 5 tyg. pon - pt.
| Grupa badana [n=9] | Grupa kontrolna [n=10] | |
| Dawka | 100 pg/mysz w 0,9% NaCI Objętość=100 pl | 0,9% NaCI Objętość=100 pl |
T a b e l a 4. Schemat podawania preparatu/placebo oraz badania testem Basenu Wodnego Morrisa. X- dni podawania preparatu, 1-6- dni testu Basenu Wodnego Morrisa.
| Tyg. | Wiek [mż] | Pon. | Wt. | Śr. | Czw. | Pt. | Sob. | Nd. |
| 1. | 8. | x | x | x | x | x | - | - |
| 2. | 8. | x | x | x | x | x | - | - |
| 3. | 8. | x | x | x | x | x | - | - |
| 4. | 8. | x | x | x | x | x | - | - |
| x | x | x | x | x | - | |||
| 5. | 9. | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | - |
Wykres 1. Porównanie parametrów D% (1) i PT% (2) myszy otrzymujących dootrzewnowe preparat lub placebo.
Analiza statystyczna wyników przy użyciu testu t- studenta pokazała, że zachodzą różnice na poziomie tendencji statystycznej pomiędzy grupą badaną i kontrolną. Myszy z grupy badanej uzyskały lepsze wyniki pod względem parametru D% i PD%. Wartość poziomu istotności statystycznej p dla parametru D% wynosiła 0,06. Wartość p dla parametru PT% wynosiła 0,07. Wartości p dla grup badanej i kontrolnej zbliżyły się do istotnie statystycznej różnicy (p<0,05). Wyniki badanych parametrów D% i PT% przedstawiono na powyższym wykresie.
PL 217 193 B1
P r z y k ł a d 2. Grupie badanej do czwartego miesiąca życia podawano 20 pg/mysz preparatu immunoregulatorowego do picia w wodnym 0,1% roztworze albuminy wołowej przez 24 tygodnie (średnio 0,7 mg/kg). Grupie kontrolnej od czwartego miesiąca życia podawano do picia 0,1% wodny roztwór albuminy wołowej (placebo) przez okres 24 tygodnie (tabela 5.). W trakcie trwania dziesiątego miesiąca życia myszy zbadano testem Basenu Wodnego Morrisa.
T a b e l a 5. Schemat podawanych dawek drogą doustną. Czas podawania = 24 tyg. pon - nd.
| Grupa badana [n=7] | Grupa kontrolna [n=10] | Wiek [mż] | |
| Dawka | 20 pg preparatu immunoregulatorowego w 0,1% wodnym roztworze albuminy wołowej | 0,1% wodny roztwór albuminy wołowej | 4.-10. |
| Badanie testem behawioralnym Basen Wodny Morrisa | 10. |
Opis procedury przygotowywania i doustnego podawania myszom preparatu immunoregulatorowego z żółtka jaja. Sporządzono 0,1% roztwór albuminy wołowej. Użyto wody pitnej (niemineralizowanej). W celu zabezpieczenie preparatu rozpuszczono go w 0,1% roztworze albuminy wołowej, tak aby uzyskać stężenie 0,5 pg/ml. Każda mysz otrzymywała objętość 4ml roztworu preparatu immunoregulatorowego na dobę w 0,1% roztworze albuminy wołowej. Każda mysz otrzymywała w ten sposób 20 pg preparatu immunoregulatorowego z żółtka jaja (średnio 0,7mg/kg). Tak przygotowany roztwór był podawany myszom w szklanych poidełkach. Gdy roztwór z szklanego poidełka został wypity, szklane poidełko było zastępowane standardowym poidełkiem z wodą. W dziesiątym miesiącu życia myszy poddano opisanemu wyżej testowi Basenu Wodnego Morrisa. Wyniki zaprezentowano na Wykresie 2.
Wykres 2. Porównanie parametrów D% (1) i PT% (2) myszy otrzymujących doustnie preparat lub placebo.
Analiza statystyczna przy użyciu testu t- studenta pokazała, że zachodzi istotna różnica pod względem parametru D% i PT% pomiędzy w grupą badaną i kontrolną. Wartość p dla parametru D% wynosi 0,014. Wartość p dla parametru PT% wynosi 0,013. Wyniki świadczą, że statystycznie istotnie lepsze rezultaty w teście Basenu Wodnego Morrisa osiągnęły myszy z grupy badanej w porównaniu z grupą kontrolną w badanych parametrach. Podsumowanie analizy statystycznej przykładu 1 i przykładu 2 zamieszczono w tabeli 6.
PL 217 193 B1
T a b e l a 6. Podsumowanie analizy statystycznej myszy otrzymując preparat/placebo za pomocą iniekcji dootrzewnowej oraz myszy otrzymując preparat/placebo w wodzie do picia, SD - odchylenie standardowe
| Droga podania preparatu | Parametr | Średnia grupy badanej | SD | Średnia grupy kontrolnej | SD | Wartość p |
| Dootrzewnowa | D% | 43,64 | 14,22 | 32,07 | 9,44 | 0,06 |
| PT% | 43,48 | 13,99 | 32,78 | 9,00 | 0,07 | |
| Doustna | D% | 60,08 | 13,40 | 45,46 | 8,39 | 0,014 |
| PT% | 59,57 | 12,45 | 44,77 | 9,21 | 0,013 |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (2)
1. Zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych, zwanego Yolkiną, a będącego przedmiotem zgłoszenia patentowego zarejestrowanego pod numerem P.396027, jako surowca farmaceutycznego do wytwarzania leków stosowanych przy zaburzeniach degeneracyjnych centralnego układu nerwowego, zwłaszcza u osób z niezadowalającą odpowiedzią na konwencjonalną terapię.
2. Zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych, zwanego Yolkiną, a będącego przedmiotem zgłoszenia patentowego zarejestrowanego pod numerem P.396027, jako suplementu diety lub jako składnika suplementu diety, wspomagającego i/lub poprawiającego funkcje poznawcze, stosowanego w profilaktyce zaburzeń tych funkcji o różnym podłożu i/lub wspomagająco w terapii tych zaburzeń.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL401911A PL217193B1 (pl) | 2012-12-05 | 2012-12-05 | Zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL401911A PL217193B1 (pl) | 2012-12-05 | 2012-12-05 | Zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL401911A1 PL401911A1 (pl) | 2013-08-19 |
| PL217193B1 true PL217193B1 (pl) | 2014-06-30 |
Family
ID=48951787
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL401911A PL217193B1 (pl) | 2012-12-05 | 2012-12-05 | Zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL217193B1 (pl) |
-
2012
- 2012-12-05 PL PL401911A patent/PL217193B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL401911A1 (pl) | 2013-08-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Siteneski et al. | Central irisin administration affords antidepressant-like effect and modulates neuroplasticity-related genes in the hippocampus and prefrontal cortex of mice | |
| ES2938546T3 (es) | Método de tratamiento de la esclerosis lateral amiotrófica con pridopidina | |
| Tan et al. | Low-frequency (1Hz) repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) reverses Aβ1–42-mediated memory deficits in rats | |
| Riikonen | Treatment of autistic spectrum disorder with insulin-like growth factors | |
| ES2738658T3 (es) | Composición farmacéutica para inhibir la respuesta inmunitaria a través de la inducción de la diferenciación en células T reguladoras y la promoción de la proliferación de células T reguladoras | |
| JP2011513493A (ja) | 血液脳関門透過性の調節方法 | |
| WO2009005771A1 (en) | A drug demonstrating anxiolytic effect based on hydrogenated pyrido (4, 3-b) indoles, its pharmacological compound and application method | |
| CA2784132C (en) | Composition for improving brain function and method for improving brain function | |
| Nowak et al. | Mechanisms contributing to antidepressant zinc actions | |
| CN107320674A (zh) | 一种中药组合物及其应用 | |
| Dubynin et al. | Delayed effect of exorphins on learning of albino rat pups | |
| KR101682637B1 (ko) | 청피경옥고를 유효성분으로 포함하는 신경세포보호 및 기억력개선효과를 갖는 약학 조성물 및 청피경옥고를 함유하는 기능성식품 | |
| PL217193B1 (pl) | Zastosowanie preparatu o właściwościach immunoregulatorowych | |
| US20230241061A1 (en) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of fgfr3-related cognitive deficit | |
| ES2848828T3 (es) | Extracto de Withania para el tratamiento de enfermedades relacionadas con amiloides | |
| Kim et al. | Neuron-Microglia Interaction is Involved in Anti-inflammatory Response by Vagus Nerve Stimulation in the Prefrontal Cortex of Rats Injected with Polyinosinic: Polycytidylic Acid | |
| JP2011136932A (ja) | 脳機能改善用組成物および脳機能を改善する方法 | |
| US20050226845A1 (en) | Method of treatment using interferon-tau | |
| JP5634062B2 (ja) | 脳機能改善用組成物および脳機能を改善する方法 | |
| Daubry et al. | Alcohol and caffeine Co-administration increased acetylcholinesterase activity and inflammatory cytokines in sleep-deprived rats: implications for cognitive decline and depressive-like manifestations | |
| ES2995933T3 (en) | Proline-rich polypeptide complex for use in treatment of bdnf-dependent disorders | |
| KR101929682B1 (ko) | 올러유러핀을 포함하는 외상 후 스트레스 장애의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| US20140342991A1 (en) | Composition for improving brain function and method for improving brain function | |
| JP2007534746A (ja) | 化学療法誘発性ニューロパシーの治療または予防のためのｉｌ−６ | |
| WO2012035871A1 (ja) | 脳機能改善用組成物および脳機能を改善する方法 |