PL218400B1 - Szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg in vitro do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1 - Google Patents

Szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg in vitro do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1

Info

Publication number
PL218400B1
PL218400B1 PL399447A PL39944712A PL218400B1 PL 218400 B1 PL218400 B1 PL 218400B1 PL 399447 A PL399447 A PL 399447A PL 39944712 A PL39944712 A PL 39944712A PL 218400 B1 PL218400 B1 PL 218400B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
vaccine
diabetes
cells
treatment
type
Prior art date
Application number
PL399447A
Other languages
English (en)
Other versions
PL399447A1 (pl
Inventor
Piotr Trzonkowski
Małgorzata Myśliwiec
Natalia Marek-Trzonkowska
Original Assignee
Gdański Univ Medyczny
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Gdański Univ Medyczny filed Critical Gdański Univ Medyczny
Priority to PL399447A priority Critical patent/PL218400B1/pl
Priority to PCT/PL2013/000072 priority patent/WO2013184011A1/en
Priority to SI201331762T priority patent/SI2859092T1/sl
Priority to ES13739523T priority patent/ES2807279T3/es
Priority to EP13739523.2A priority patent/EP2859092B1/en
Priority to HRP20201177TT priority patent/HRP20201177T1/hr
Priority to PT137395232T priority patent/PT2859092T/pt
Priority to PL13739523T priority patent/PL2859092T3/pl
Priority to LTEP13739523.2T priority patent/LT2859092T/lt
Priority to HUE13739523A priority patent/HUE057439T2/hu
Priority to DK13739523.2T priority patent/DK2859092T3/da
Priority to US14/405,906 priority patent/US20150165007A1/en
Publication of PL399447A1 publication Critical patent/PL399447A1/pl
Publication of PL218400B1 publication Critical patent/PL218400B1/pl
Priority to US15/852,227 priority patent/US11944672B2/en
Priority to US16/661,038 priority patent/US20200054724A1/en
Priority to CY20201101056T priority patent/CY1123467T1/el
Priority to US18/588,535 priority patent/US20240197848A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/26—Lymph; Lymph nodes; Thymus; Spleen; Splenocytes; Thymocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/20—Cellular immunotherapy characterised by the effect or the function of the cells
    • A61K40/22—Immunosuppressive or immunotolerising
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/416—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C12N5/0637—Immunosuppressive T lymphocytes, e.g. regulatory T cells or Treg
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis wynalazku
Dziedzina wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1 oraz sposób namnażania komórek Treg in vitro do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1.
Podstawy wynalazku
Cukrzyca typu 1 (DM1A) jest chorobą o podłożu genetycznym, niemniej jednak wszyscy badacze są zgodni, że bezpośrednie uszkodzenie komórek β trzustki jest wynikiem reakcji autoimmunologicznej. Przemawia za tym nie tylko obecność przeciwciał przeciw antygenom wyspowym, ale również gromadzenie się nacieków leukocytarnych w wyspach Langerhansa tzw. insulitis, czemu towarzyszy wzmożona apoptoza komórek β.
Limfocyty T regulatorowe (Treg) to szczególna populacja w układzie odpornościowym. Chociaż ich odsetek to mniej niż 1% limfocytów krwi obwodowej to regulują one odpowiedź odpornościową w ten sposób, że możliwa jest szybka eliminacja szkodliwych patogenów, natomiast chronione są nasze własne tkanki. Dzieje się tak dlatego, że limfocyty Treg nie hamują innych komórek układu odpornościowego, gdy atakowane są obce patogeny, natomiast wywierają silny efekt hamujący, gdy układ odpornościowy zaczyna niszczyć własne tkanki i narządy. Dlatego immunosupresyjne działanie limfocytów Treg określane jest czasami przez analogię jako „inteligentne sterydy”.
Zmniejszona ilość limfocytów Treg w organizmie jest wiązana z niepowodzeniem przeszczepów oraz zachorowaniami na choroby alergiczne i autoimmunologiczne. Jedna z chorób przebiegająca z deficytem limfocytów Treg, to cukrzyca typu 1, w której w wyniku autoimmunologicznego ataku zniszczeniu ulega trzustka pacjenta.
W międzynarodowej publikacji WO 2004/110373 ujawniono kompozycję w postaci szczepionki, która zawiera zmodyfikowane komponenty łańcucha B insuliny, do stosowania jako środki immunogenne do leczenia i zapobiegania cukrzycy typu 1.
Natomiast z publikacji WO 2012/001099 znana jest szczepionka zawierająca co najmniej jeden enterowirus wybrany z grupy obejmującej: wirus Coxsackie CAV4, CAV5, CAV6 i echovirus E18, lub jego część składową. W opisie tym stwierdzono, że wymienione enterowirusy związane są z cukrzycą typu 1, co otwiera nowe możliwości terapeutyczne i diagnostyczne.
Podobnie w opisie WO 2012/001100 przedstawiono szczepionkę, która zawiera m.in. wirus Coxsackie B CBV1 do zapobiegania lub leczenia cukrzycy typu 1. Jak się okazało wirus ten jest silnie związany z ryzykiem zachorowania na cukrzycę typu 1.
Z informacji zawartych w powyższych publikacjach znane są szczepionki przeznaczone do leczenia cukrzyca typu 1, jednak są one inne niż szczepionka, która jest przedmiotem niniejszego wynalazku.
Zwiększenie skuteczności, leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, wymaga poszukiwania bardziej efektywnych i skutecznych sposobów leczenia tej choroby. Współcześnie najbardziej obiecującą metodą leczenia cukrzycy, a także świeżo rozpoznanej cukrzycy jest terapia z użyciem przeciwciał anty-CD3.
Istota wynalazku
Nieoczekiwanie okazało się, że nowa szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1, skutecznie jej zapobiega. Podanie pacjentowi szczepionki według wynalazku powoduje, że najważniejszy marker funkcji trzustki tj. poziom c-peptydu jest wyższy. Ponadto zastosowany sorter, został zaprojektowany specjalnie do terapii komórkowych co zwiększa jego bezpieczeństwo.
Istotą wynalazku jest szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, która zawiera:
- limfocyty Treg CD3(+)CD4(+)CD25(high)CD127(-).
Ponadto przedmiotem wynalazku jest zastosowanie sortera komórek do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1, gdzie komórki są sortowane do limfocytów Treg przy użyciu algorytmu sortującego do następującego fenotypu:
- CD3(+)CD4(+)CD25(high)CD127(-)doublet(-)lineage(-)dead(-).
Przedmiotem wynalazku jest również sposób namnażania komórek Treg in vitro, do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1, gdzie:
- wyizolowane komórki Treg namnaża się w pożywce CellGro suplementowanej autologiczną inaktywowaną surowicą oraz interleukiną 2,
- do hodowli dodaje się sztuczne komórki prezentujące antygen w stosunku 1:1.
PL 218 400 B1
Sztuczne komórki prezentujące antygen to kulki magnetyczne opłaszczane przeciwciałami anty CD3 i antyCD28.
Opis rysunków:
Fig. 1 - przedstawia poziom komórek Treg CD3+CD4+CD25highCD127-FoxP3+ u dzieci z cukrzycą typu 1 poddanych terapii komórkami Treg (n=10) podczas czteromiesięcznej obserwacji. Wartość dla punktu „-10 dni oznacza dzień pobrania krwi w celu izolacji komórek Treg. Kolumny w kolorze szarym przedstawiają wyniki otrzymane dla dzieci, które nie otrzymały infuzji limfocytów Tregs (grupa kontrolna; n=10). Wartości przedstawiono jako medianę z min. i max. Wartości istotne statystycznie (p<0.05) oznaczono „*”.
Fig. 2 - przedstawia c-peptyd, dzienna dawka insuliny /kg m.c. (DDI/kg) oraz HbA1C w grupach badanych u dzieci z cukrzycą typu 1 poddanych terapii komórkami Treg (n=10) podczas czteromiesięcznej obserwacji. Wyniki dla pacjentów, którzy nie otrzymali preparatu komórek (grupa kontrolna; n=10) przedstawione są w postaci kolumn w kolorze szarym. Wartości przedstawiono jako medianę z min. i max. wartości istotne statystycznie (p <0.05) oznaczono „*.
Wynalazek ilustruje następujący przykład wykonania, nie stanowiący jego ograniczenia.
Przykład:
Od każdego pacjenta pobierano do 250 ml krwi obwodowej przy asyście anestezjologa. W przypadku dzieci o masie ciała poniżej 50 kg pobierana objętość krwi stanowiła 0.5% masy ciała (m.c). Dotyczy dzieci poniżej 18 roku życia.
Pobrana krew była przetwarzana w Regionalnej Stacji Krwiodawstwa i Krwiolecznictwa w Gdańsku do kożuszka leukocytarnego i osocza. Z otrzymanych kożuszków izolowano jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (ang. peripheral blood mononuclear cells; PBMC) poprzez wirowanie w gradiencie stężeń Ficoll/Uropolina. Limfocyty T CD4+ były następnie izolowane metodą immunomagnetyczną (czystość izolacji 96-99%) przy użyciu zestawu „CD4+ T enrichment kit” i znakowane przeciwciałami monoklonalnymi (ang. monoclonal antibodies; mAb): anty-CD3, anty-CD4, anty-CD8, antyCD19, anty-CD14, anty-CD16, anty-CD25 oraz anty-CD127 (5 ul mAb/10-6 komórek). Spośród wymienionych przeciwciał, przeciwciała rozpoznające antygeny: CD14, CD16, CD19 i CD8 były skoniugowane z tym samym barwnikiem. Celem takiego sposobu barwienia jest wykluczenie komórek pozytywnych dla wymienionych antygenów (odpowiednio: monocyty, komórki NK, limfocyty B i T cytotoksyczne) bez konieczności wprowadzania dodatkowych fluorochromów, co zmniejsza niepożądane zjawisko nakładania się widm fluorescencji. Następnie, komórki były sortowane do limfocytów Treg przy użyciu cytometru sortującego przy użyciu algorytmu sortującego do następującego fenotypu: CD3(+)CD4(+)CD25(high)CD127(-)doublet(-)lineage(-)dead(-).
Czystość wyizolowanych komórek Treg wynosiła ~100% [mediana(min-max): 98%(97-99)] W porównaniu z naszym wcześniejszym protokołem, ważną modyfikacją było zastosowanie sortera komórkowego Influx zaprojektowanego zgodnie z wymogami dobrej praktyki produkcyjnej (GMP). Sorter ten jest wyposażony w wymienną linię przepływu próbki, co eliminuje ryzyko kontaminacji próbek pomiędzy pacjentami. Zastosowano ponadto pożywkę CellGro spełniającą standardy GMP. Pożywka była suplementowana autologiczną inaktywowaną surowicą (10%) i interleukiną 2 (1000 U/ml). Do hodowli dodawano ponadto tzw. sztuczne komórki prezentujące antygen [kulki magnetyczne opłaszczone przeciwciałami anty-CD3 i anty-CD28 w stosunku 1:1. Komórki hodowano do momentu uzyskania ich odpowiedniej liczby lecz nie dłużej niż 2 tygodnie [mediana(min-max): 10 dni (7-12)].
Dzięki wyżej wymienionym zmianom udało się znacząco poprawić stabilność i jakość hodowanych komórek Treg w produkcie końcowym. Zastosowanie preparatu do terapii było uzależnione od następujących kryteriów: ekspresja czynnika FoxP3 powyżej 90% [mediana(min.-max)=93%(90-97)], pozytywny wynik testu hamowania produkcji IFNy oraz negatywne wyniki testów mikrobiologicznych - brak materiału genetycznego wirusów HBV, HCV i HIV oraz brak zanieczyszczeń bakteryjnych w nadsączach hodowlanych. Komórki przed infuzją była płukane PBS, oczyszczane z kulek magnetycznych i podawane w powolnym wlewie dożylnym w 250 ml 0.9% NaCl pod kontrolą anestezjologa w ciągu 1 h od uwolnienia produktu. Dawka lecznicza wynosiła 20 x 106/kg m.c. (n=6) lub 10x106/kg b.w. (n=4; w przypadkach, kiedy nie otrzymano wyższej liczby komórek po upływie 2 tyg. hodowli). Grupę kontrolną stanowili pacjenci, którzy spełniali wszystkie wymienione kryteria włączenia do badania z wyjątkiem odpowiedniego dostępu żylnego i nie otrzymali szczepionki Treg. Badanie nie było randomizowane, nie wprowadzono też próby ślepej, a dzieci z grupy kontrolnej nie zostały poddane żadnej medycznej interwencji związanej z prowadzonymi badaniami (pobranie krwi, symulowana transfuzja etc). Charakterystykę badanych grup przedstawiono w Tab. 1. Punktami końcowymi bada4
PL 218 400 B1 nia były: poziom C-peptydu na czczo, stężenie HbA1c, zapotrzebowanie na insulin ze szczególnym naciskiem na dzienną dawkę (DDI)=0.5 UI/kg m.c. jako przyjętą za wyznacznik remisji. Badanie prowadzono zgodnie z protokołem zaaprobowanym przez Niezależną Komisję Bioetyczną do Spraw Badań Naukowych przy Gdańskim Uniwersytecie Medycznym (NKEBN/8/2010). Od każdego z pacjentów i rodziców pobierano pisemną zgodę na przeprowadzenie wyżej opisanej procedury.
U żadnego z pacjentów nie zaobserwowano poważnych infekcji, epizodów ostrej hiper/hipoglikemii ani innych efektów niepożądanych szczepionki Tregs podczas całego badania. U jednego z pacjentów dzień infuzji komórek Treg był związany koincydencyjnie z wystąpieniem grypy, którą zdiagnozowano w dzień po podaniu komórek Treg.
Odnotowano znaczący wzrost odsetka limfocytów Treg we krwi obwodowej poczynając od dnia infuzji (Wilcoxon test, p=0.04) (Fig. 1).
Dwa tygodnie po infuzji komórek Treg u wszystkich pacjentów poddanych terapii zaobserwowano istotny spadek zapotrzebowania na egzogenną insulinę oraz obniżenie poziomu HbA1c (Fig. 2).
Pierwsze istotne różnice pomiędzy grupą badaną a pacjentami grupy kontrolnej zaobserwowano pół roku po zdiagnozowaniu cukrzycy (5-6 miesięcy po podaniu komórek Treg). Pacjenci poddani terapii byli w tym czasie wciąż w fazie remisji [DDI mediana (min - max)=0.24 UI/kg m.c. (0-0.55)]. W tym samym czasie remisja dobiegła końca w grupie kontrolnej [DDI mediana(min-max)=0.55 UI/kg m.c. (0.43-0.69)] (test U Mann'a-Whitney'a, p=0.03). Ponadto, dzieci poddane terapii limfocytami Treg miały istotnie wyższy poziom C-peptydu [mediana(min-max): 0.65 ng/ml (0.46-2.11) vs 0.40 ng/ml (0.15-0.54)] (U test U Mann'a-Whitney'a, p=0.04) (Rys. 3). Nie zaobserwowano różnic w skuteczności terapii u chorych, którzy otrzymali komórki Treg w dawce 20 x 106/kg m.c. oraz 10 x 106/kg m.c, dlatego wyniki dla grupy badanej przedstawiane są łącznie.
L i t e r a t u r a:
1. Marek N, Krzystyniak A, Ergenc I, Cochet O, Misawa R, Wang LJ, Gołąb K, Wang X, Kilimnik G, Hara M, Kizilel S, Trzonkowski P, Millis JM, Witkowski P. Coating humanpancreatic islets with CD4(+)CD25(high)CD127(-) regulatory T cells as a novel approach for the local immunoprotection. Ann Surg. 2011;254(3):512-8; discussion 518-9.
2. Marek N, Bieniaszewska M, Krzystyniak A, Juscinska J, Myśliwska J, Witkowski P, Hellmann A, Trzonkowski P. The time is crucial for exvivo expansion of T regulatory cellsfor therapy. Cell Transplant. 2011 (20):1747-1758;
3. Trzonkowski P. All roads lead to T regulatory cells. Transplantation. 2011;91(2):150-1.
4. Trzonkowski P, Bieniaszewska M, Juścińska J, Dobyszuk A, Krzystyniak A, Marek N, Myśliwska J, Hellmann A. First-in-man clinical results of the treatment of patients with graft versus host disease with human ex vivo expanded CD4+CD25+CD1 27- T regulatory cells. Clin Immunol. 2009;133(1):22-6.
5. Trzonkowski P, Szaryńska M, Myśliwska J, Myśliwski A. Ex vivo expansion of CD4(+)CD25(+) T regulatory cells for immunosuppressive therapy. Cytometry A. 2009;75(3):175-88.
6. Ryba M, Marek N, Hak Ł, Rybarczyk-Kapturska K, Myśliwiec M, Trzonkowski P, Myśliwska J. Anti-TNF rescue CD4+Foxp3+ regulatory T cells in patients with type 1 diabetes from effects mediated by TNF. Cytokine. 2011;55(3):353-61.
7. Trzonkowski P, Szmit E, Myśliwska J, Myśliwski A. CD4+CD25+ T regulatory cells inhibit cytotoxic activity of CTL and NK cells in humans-impact of immunosenescence.
Clin Immunol. 2006;119(3):307-16.
8. Trzonkowski P, Szmit E, Myśliwska J, Dobyszuk A, Myśliwski A. CD4+CD25+ T regulatory cells inhibit cytotoxic activity of T CD8+ and NK lymphocytes in the direct cell-tocell interaction. Clin Immunol. 2004;112(3):258-67.
9. Trzonkowski P, Zaucha JM, Myśliwska J, Balon J, Szmit E, Halaburda K, Bieniaszewska M, Mlotkowska M, Hellmann A, Myśliwski A. Differences in kinetics of donor lymphoid cells in response to G-CSF administration may affect the incidence and severity of acute GvHD in respective HLA-identical sibling recipients. Med Oncol. 2004;21(1):81-94.

Claims (4)

1. Szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, znamienna tym, że zawiera:
- limfocyty Treg CD3(+)CD4(+)CD25(high)CD127(-)
2. Zastosowanie sortera komórek do wytwarzania szczepionki określonej w zastrz. 1, znamienne tym, że komórki są sortowane do limfocytów Treg przy użyciu algorytmu sortującego do następującego fenotypu:
CD3(+)CD4(+)CD25(high)CD127(-)doublet(-)lineage(-)dead(-).
3. Sposób namnażania komórek Treg in vitro do wytwarzania szczepionki określonej w zastrzeżeniu nr 1, znamienny tym, że:
- wyizolowane komórki Treg namnaża się w pożywce CellGro suplementowanej autologiczną inaktywowaną surowicą oraz interleukiną 2,
- do hodowli dodaje się sztuczne komórki prezentujące antygen w stosunku 1:1.
4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że sztuczne komórki prezentujące antygen to kulki magnetyczne opłaszczane przeciwciałami anty CD3 i anty CD28.
PL399447A 2012-06-06 2012-06-06 Szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg in vitro do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1 PL218400B1 (pl)

Priority Applications (16)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL399447A PL218400B1 (pl) 2012-06-06 2012-06-06 Szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg in vitro do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1
PL13739523T PL2859092T3 (pl) 2012-06-06 2013-06-04 Szczepionka terapeutyczna do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1
DK13739523.2T DK2859092T3 (da) 2012-06-06 2013-06-04 Terapeutisk vaccine til behandling af diabetes type-1 hos børn, anvendelse af cellesorter og fremgangsmåde til at multiplicere treg-celler til fremstilling af terapeutisk vaccine til behandling af diabetes type-1
ES13739523T ES2807279T3 (es) 2012-06-06 2013-06-04 Vacuna terapéutica para el tratamiento de la diabetes de tipo 1 en niños, aplicación del separador celular y método de multiplicación de células Treg para producir vacuna terapéutica para el tratamiento de la diabetes de tipo 1
EP13739523.2A EP2859092B1 (en) 2012-06-06 2013-06-04 Therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 in children, application of the cell sorter and the method of multiplying treg cells to produce therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1
HRP20201177TT HRP20201177T1 (hr) 2012-06-06 2013-06-04 Terapijsko cjepivo za liječenje dijabetesa tipa 1 kod djece, primjena staničnog sortera i metoda umnožavanja treg stanica za proizvodnju terapijskog cjepiva za liječenje dijabetesa tipa 1
PT137395232T PT2859092T (pt) 2012-06-06 2013-06-04 ¿vacina terapêutica para tratamento de diabetes tipo 1 em crianças, aplicação do separador de células e método de multiplicação de células treg para produzir a vacina terapêutica para tratamento de diabetes tipo 1¿
PCT/PL2013/000072 WO2013184011A1 (en) 2012-06-06 2013-06-04 Therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 in children, application of the cell sorter and the method of multiplying treg cells to produce therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1
LTEP13739523.2T LT2859092T (lt) 2012-06-06 2013-06-04 Terapinė vakcina, skirta vaikų 1 tipo diabeto gydymui, ląstelių sorterio taikymas ir treg ląstelių dauginimo būdas, siekiant gaminti terapinę vakciną 1 tipo diabeto gydymui
HUE13739523A HUE057439T2 (hu) 2012-06-06 2013-06-04 Terápiás vakcina 1-es típusú cukorbetegség kezelésére gyermekekben, sejtválogató alkalmazása és eljárás TREG sejtek sokszorosítására 1-es típusú cukorbetegség kezelésére szolgáló terápiás vakcina elõállítására
SI201331762T SI2859092T1 (sl) 2012-06-06 2013-06-04 Terapevtsko cepivo za zdravljenje diabetesa tipa 1 pri otrocih, uporaba naprave za sortiranje celic in postopek multipliciranja TREG celic za pridobivanje terapevtskega cepiva za zdravljenje diabetesa tipa 1
US14/405,906 US20150165007A1 (en) 2012-06-06 2013-06-04 Therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 in children, application of the cell sorter and the method of multiplying treg cells to produce therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1
US15/852,227 US11944672B2 (en) 2012-06-06 2017-12-22 Therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 in children, application of the cell sorter and the method of multiplying Treg cells to produce therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1
US16/661,038 US20200054724A1 (en) 2012-06-06 2019-10-23 Therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 in children, application of the cell sorter and the method of multiplying treg cells to produce therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1
CY20201101056T CY1123467T1 (el) 2012-06-06 2020-07-29 Θεραπευτικο εμβολιο για τη θεραπεια του παιδικου διαβητη τυπου 1, εφαρμογη του κυτταροδιαχωριστη κυτταρομετριας ροης και της μεθοδου πολλαπλασιασμου των κυτταρων treg για την παραγωγη θεραπευτικου εμβολιου για τη θεραπεια του διαβητη τυπου 1
US18/588,535 US20240197848A1 (en) 2012-06-06 2024-02-27 Therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 in children, application of the cell sorter and the method of multiplying treg cells to produce therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL399447A PL218400B1 (pl) 2012-06-06 2012-06-06 Szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg in vitro do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL399447A1 PL399447A1 (pl) 2013-12-09
PL218400B1 true PL218400B1 (pl) 2014-11-28

Family

ID=48808489

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL399447A PL218400B1 (pl) 2012-06-06 2012-06-06 Szczepionka do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg in vitro do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1
PL13739523T PL2859092T3 (pl) 2012-06-06 2013-06-04 Szczepionka terapeutyczna do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL13739523T PL2859092T3 (pl) 2012-06-06 2013-06-04 Szczepionka terapeutyczna do leczenia cukrzycy typu 1 u dzieci, zastosowanie sortera komórek oraz sposób namnażania komórek Treg do wytwarzania szczepionki do leczenia cukrzycy typu 1

Country Status (12)

Country Link
US (4) US20150165007A1 (pl)
EP (1) EP2859092B1 (pl)
CY (1) CY1123467T1 (pl)
DK (1) DK2859092T3 (pl)
ES (1) ES2807279T3 (pl)
HR (1) HRP20201177T1 (pl)
HU (1) HUE057439T2 (pl)
LT (1) LT2859092T (pl)
PL (2) PL218400B1 (pl)
PT (1) PT2859092T (pl)
SI (1) SI2859092T1 (pl)
WO (1) WO2013184011A1 (pl)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017105265A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Gdański Uniwersytet Medyczny Method for ex vivo expansion of regulatory t cells

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170232084A1 (en) 2013-04-26 2017-08-17 Enzo Biochem Inc. Immune modulation for the treatment of age-related macular degeneration
BR112021021528A2 (pt) * 2019-04-30 2022-04-19 Univ California Expansão ex vivo livre de contas de células t reguladoras humanas
PL241050B1 (pl) * 2019-12-12 2022-07-25 Gdanski Univ Medyczny Zastosowanie limfocytów T regulatorowych jako leku w leczeniu stwardnienia rozsianego
EP3985105A1 (en) 2020-10-16 2022-04-20 Uniwersytet Gdanski Conditioned regulatory t cell population tregs with enhanced therapeutic potential, method for obtaining of conditioned tregs and the medical use of the tregs population
EP3985106A1 (en) 2020-10-16 2022-04-20 Uniwersytet Gdanski Conditioned regulatory t cell population with enhanced therapeutic potential, method for obtaining of regulatory t cell population and the medical use of regulatory t cell population
WO2025096685A1 (en) * 2023-10-30 2025-05-08 City Of Hope Methods of making and using regulatory t cells for treatment of autoimmune disorders and cancers
WO2025219454A1 (en) 2024-04-18 2025-10-23 Poltreg S.A. Preproinsulin tolerogenic fragments for treating and monitoring type 1 diabetes

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2527830A1 (en) 2003-06-02 2004-12-23 Mercia Pharma, Inc. Therapeutic vaccine compositions for the treatment of type 1 diabetes
JP2006280307A (ja) * 2005-04-01 2006-10-19 Kyoto Univ 制御性ｔ細胞の製造方法
EP2514315A3 (en) * 2005-08-24 2012-11-07 Yeda Research and Development Co. Ltd. Universal donor-derived tolerogenic cells for inducing non-syngeneic transplantation tolerance
WO2007117602A2 (en) * 2006-04-07 2007-10-18 Biogen Idec Ma Inc. Isolation and use of human regulatory t cells
WO2007127787A2 (en) * 2006-04-25 2007-11-08 Joslin Diabetes Center, Inc. Insulin autoantigen-specific regulatory cd4+ t cells
WO2010022341A1 (en) * 2008-08-21 2010-02-25 The United State Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods of enriching and using regulatory t cells
EP2402028A1 (en) 2010-07-01 2012-01-04 Sanofi Pasteur Enterovirus vaccines for preventing and treating type 1 diabetes (II)
EP2402029A1 (en) 2010-07-01 2012-01-04 Sanofi Pasteur Enterovirus vaccines for preventing or treating type 1 diabetes (III)
US9481866B2 (en) * 2011-12-16 2016-11-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods of producing T cell populations enriched for stable regulatory T-cells

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017105265A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Gdański Uniwersytet Medyczny Method for ex vivo expansion of regulatory t cells
US11072779B2 (en) 2015-12-17 2021-07-27 Gdanski Uniwersytet Medyczny Method for ex vivo expansion of regulatory T cells

Also Published As

Publication number Publication date
EP2859092A1 (en) 2015-04-15
US11944672B2 (en) 2024-04-02
US20180117134A1 (en) 2018-05-03
DK2859092T3 (da) 2020-07-27
US20240197848A1 (en) 2024-06-20
PL399447A1 (pl) 2013-12-09
US20200054724A1 (en) 2020-02-20
WO2013184011A1 (en) 2013-12-12
US20150165007A1 (en) 2015-06-18
SI2859092T1 (sl) 2021-02-26
PT2859092T (pt) 2020-07-23
EP2859092B1 (en) 2020-04-29
HRP20201177T1 (hr) 2021-02-19
HUE057439T2 (hu) 2022-05-28
ES2807279T3 (es) 2021-02-22
CY1123467T1 (el) 2022-03-24
LT2859092T (lt) 2020-09-25
PL2859092T3 (pl) 2020-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240197848A1 (en) Therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1 in children, application of the cell sorter and the method of multiplying treg cells to produce therapeutic vaccine for treatment of diabetes type 1
Wolf et al. Novel approaches to exploiting invariant NKT cells in cancer immunotherapy
CN108350428B (zh) 用于生产TCRγδ+T细胞的方法
KR100943087B1 (ko) 면역치료용 활성화 림프구 제조방법
US8679841B2 (en) Allogeneic cell compositions with cross-linked CD3/CD28
JP6422344B2 (ja) 同種抗原反応性の制御性ｔ細胞を増大させる方法
Horwitz et al. Therapeutic polyclonal human CD8+ CD25+ Fox3+ TNFR2+ PD-L1+ regulatory cells induced ex-vivo
JP2015513403A5 (pl)
CN118662615A (zh) 用于造血干细胞移植的组合物和方法
US20250222084A1 (en) Immune cell selection, expansion, and use
JP5840876B2 (ja) Ｎｋ細胞を増幅するための組成物及び方法
Bernaldo-de-Quirós et al. A novel GMP protocol to produce high-quality treg cells from the pediatric thymic tissue to be employed as cellular therapy
KR101900807B1 (ko) 헬퍼 t1 특성들 및 세포용해 특성들을 발현하는 세포들
Wang et al. Induction of immunotolerance via mPEG grafting to allogeneic leukocytes
Vasania et al. Molecular and cellular characterization of expanded and cryopreserved human limbal epithelial stem cells reveal unique immunological properties
AU2020266599B2 (en) Bead-free ex-vivo expansion of human regulatory T cells
Yang et al. Induction of tolerance and prolongation of islet allograft survival by syngeneic hematopoietic stem cell transplantation in mice
Huang et al. Efficacy of pretreatment of allografts with methoxypolyethylene glycol-succinimidyl-propionic acid ester in combination with an anti-OX40L monoclonal antibody in relieving graft-versus-host disease in mice
JP2003508047A (ja) 移植片−対−宿主疾患を抑制するサイトカイン、細胞およびマイトジェンの使用
Shao et al. Combination of monoclonal antibodies with DST inhibits accelerated rejection mediated by memory T cells to induce long-lived heart allograft acceptance in mice
JP2018138539A (ja) ＴＣＲａｂ陽性細胞およびＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させた細胞組成物
Wang et al. Prolongation of rat renal allograft survival by CD4+ CD25‑T cells induced by recipient dendritic cells transfected with IKK2dn
Pion A Novel GMP Protocol to Produce High-Quality Treg Cells From the Pediatric Thymic Tissue to Be Employed as Cellular Therapy
Gao Interaction of αβ-TCR+ CD3+ CD4-CD8-NK1. 1-T Cells with Antigen Presenting Cells in Immune Suppression
Berber et al. Haploidentical Transplantation Experience in Turgut Ozal Medical Center: Case Report and a Review of Literature