PL218878B1 - Sposób wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych - Google Patents
Sposób wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowychInfo
- Publication number
- PL218878B1 PL218878B1 PL397433A PL39743311A PL218878B1 PL 218878 B1 PL218878 B1 PL 218878B1 PL 397433 A PL397433 A PL 397433A PL 39743311 A PL39743311 A PL 39743311A PL 218878 B1 PL218878 B1 PL 218878B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- orf
- protein
- pigeons
- truncated form
- vector
- Prior art date
Links
- 241000272205 Columba livia Species 0.000 title claims description 19
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title claims description 9
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 title claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 7
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 title description 2
- 241000745220 Pigeon circovirus Species 0.000 claims description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 34
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 30
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 claims description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 16
- 241000211815 Livia Species 0.000 claims description 13
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 11
- 241001533384 Circovirus Species 0.000 claims description 10
- 101150061009 C1 gene Proteins 0.000 claims description 9
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 claims description 9
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 9
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 claims description 9
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 8
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 6
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 claims description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 6
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 6
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 5
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims description 4
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 3
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 claims description 3
- 101710132631 Protein C1 Proteins 0.000 claims description 3
- 108091036333 Rapid DNA Proteins 0.000 claims description 3
- 101710203837 Replication-associated protein Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 241000345397 Columbid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 claims description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 6
- 101150040063 orf gene Proteins 0.000 description 5
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710189078 Helicase Proteins 0.000 description 2
- 101710118046 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 235000009434 Actinidia chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000298697 Actinidia deliciosa Species 0.000 description 1
- 235000009436 Actinidia deliciosa Nutrition 0.000 description 1
- 241001533399 Circoviridae Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych (Columbia livia) przeciwko cirkowirusowej chorobie wywoływanej przez cirkowirus gołębi pn. PiCV ang. Pigeon Circo Virus).
Czynnikiem etiologicznym cirkowirusowej choroby gołębi jest cirkowirus gołębi pn. PiCV (ang. Pigeon Circo Virus), mały pozbawiony otoczki zarazek o średnicy 14 - 20 nm o genomie wielkości ok. 2kb o jednoniciowym (ss) DNA (Todd D. 2000; Todd D. et alt. 2006). Należący do rodziny Circoviridae rodzaju Circovirus (Marlier D., Vindevogel H; 2006).
Cirkowirusowa choroba gołębi występuje u osobników młodych najczęściej w wieku od 6 tygodnia życia do 1 roku życia gołębi (Soike D. 1997). Objawy kliniczne są zróżnicowane a u gołębi obserwuje się brak apetytu, spadek masy ciała, wodnistą biegunkę, zapalenie dróg oddechowych, słabe wyniki lotowe u gołębi pocztowych. Wirus wykazuje predylekcję do narządów limfatycznych uszkadzając torby Fabrycjusza doprowadza do upośledzenia funkcje układu immunologicznego a w konsekwencji immunosupresji, i zachorowaniami gołębi na schorzenia bakteryjne, grzybicze oraz wirusowe (Todd D. 2000). Cirkowiroza jest określana jako zespół nabytego braku odporności gołębi (Szeleszczuk P., Dolka B. 2009).
Ostatnie doniesienia naukowe opisują nową wieloczynnikową jednostkę chorobową jako chorobę młodych gołębi (YPDS ang. Young pigeon disease syndrome); w której cirkowirus gołębi (PiCV) odgrywa ważną rolę w indukowaniu immunosupresji u zakażonych gołębi (Duchatel J.P., Szeleszczuk 2011).
Ze względu na trudności w namnażaniu zarazka w hodowlach komórkowych nie udało się dotychczas uzyskać konwencjonalnej szczepionki, która mogłaby być użyta do zapobiegania chorobie (Schmidt V., et alt 2008). Z powyższych względów twórcy podjęli próbę otrzymania szczepionki technologią rekombinacji DNA.
Znany jest z opisu publikacji (Daum I. et alt 2009) klonowanie i ekspresja białka kapsydu wirusa odpowiedniego do wykrywania testem ELISA przeciwciał u gołębi zakażonych cirkowirusem (PiCV).
Twórcy wynalazku od chorych gołębi domowych z Polski wykazujących objawy choroby cirkowirusowej pobrali próbki krwi, kału, śluzu oraz śledziony a następnie wyizolowali z nich szczep wirusa PiCV, z którego następnie wyodrębnili DNA wirusowe.
Ponadto twórcy zsekwencjonowali genom szczepu pochodzącego z Polski i wykazali silną homologie na poziomie nukleotydowym z innymi dostępnymi sekwencjami szczepów PiCV.
Sposób według wynalazku charakteryzuje się tym, że otrzymanie szczepionki obejmuje pobranie materiału biologicznego z narządów zakażonych gołębi domowych (Columbia livia), następnie izolację materiału genetycznego do izolacji całkowitego DNA wirusowego, następnie powielanie genu strukturalnego białka kapsydu (ORF C1) wirusa PiCV o wielkości 822 (lub jego skróconej formy np. 722 b) następnie subklonowanie białka ORF C1 lub jego skróconej formy genu ORF C1 do wektora pGEM -3Zf lub innych systemów ekspresyjnych i określenie sekwencji nukleotydów i aminokwasów białka lub skróconej formy genu ORF C1, wklonowanie skróconej formy genu ORF C1 do genomu wektora pQE-31 lub wektora pET -32a (lub innych systemów ekspresyjnych) i uzyskanie ekspresji rekombinowanego białka strukturalnego ORF C1 uzyskanego antygenu rekombinowanego białka ORF C1.
Wynalazek dotyczy szczepionki zawierającej pełny antygen białka cirkowirusa PiCV ORF C1 lub jego skróconą formę indukującą odpowiedź immunologiczną u gołębi przeciwko cirkowirusowej chorobie gołębi wywoływanej przez PiCV indukującego immunosupresję u zakażonych gołębi domowych.
Zakresem wynalazku objęte jest również wykorzystanie antygenu białka ORF C1 lub jego skróconej formy do celów diagnostycznych zakażenia gołębi cirkowirusem (PiCV) lub oceny właściwości immunogennych szczepionek przeznaczonych do immunoprofilaktyki cirkowirusowej choroby gołębi lub różnicowania gołębi szczepionych od zakażonych naturalnie.
Zakresem wynalazku objęty jest sposób, który obejmuje izolację i namnażanie DNA wirusowego i jego oczyszczanie.
Wynalazek również dotyczy przeciwciała mono lub poliklonalnego wytworzonego przy pomocy białka ORF C1 lub jego skróconej formy.
PL 218 878 B1
Wynalazek również dotyczy fragmentu kwasu nukleinowego obejmującego sekwencję genomu białka ORF1 C1 cirkowirusa PiCV przedstawioną jako sekwencja 1 (zostanie uzupełniona).
Wynalazek dotyczy fragmentu kwasu nukleinowego, który wykazuje co najmniej 70% zgodności z sekwencją według wynalazku.
Wynalazek również dotyczy fragmentu kwasu nukleinowego obejmującego sekwencję genomu białka ORF1 C1 cirkowirusa PiCV, który jest zdolny do specyficznej hybrydyzacji z fragmentem kwasu nukleinowego według wynalazku, korzystnie hybrydyzacji w ostrych warunkach.
Wynalazek dotyczy fragmentu kwasu nukleinowego obejmującego całą lub część sekwencji według wynalazku kodującego epitop zdolny do indukowania odpowiedzi immunologicznej przeciwko cirkowirusowej chorobie gołębi (PiCV). Korzystnie epitop obejmuje 13-25 aminokwasów.
Polipeptyd kodowany przez fragment kwasu nukleinowego według wynalazku również wchodzi w zakres wynalazku. Sekwencje genu strukturalnego białka kapsydu (ORF C1) wirusa PiCV i jej fragmenty można korzystnie zastosować do ekspresji polipeptydów in vitro i in vivo przy użyciu odpowiednich wektorów.
Korzystnie wektor ekspresyjny wdraża polipeptyd w E. coli, komórkach owadzich lub eukariotycznych.
W zakres wynalazku wchodzi również polipeptyd wytworzony przez wektor ekspresyjny według wynalazku.
Polipeptyd można wytworzyć in vitro przez ekspresję a następnie oczyścić konwencjonalnymi technikami. Szczepionka obejmuje w ten sposób otrzymany polipeptyd lub jego fragment z dopuszczonymi do stosowania w lecznictwie weterynaryjnym nośnikami lub rozcieńczalnikami oraz adiuwantami i substancjami wzmagającymi odpowiedź immunologiczną.
W korzystnym sposobie antygen, epitop lub polipeptyd wykrywa w próbce przeciwciała, które są specyficzne dla PiCV. W innym korzystnym sposobie stosuje się metodę Western Blott, immunofluorescencji, ELISA lub rodzaj immunochromatografii.
Antygeny i przeciwciała według wynalazku można zastosować w dowolnej znanej technice diagnostyki laboratoryjnej.
Techniki diagnostyczne, które można korzystnie zastosować: technikę Western Biot, immunofluorescencji, ELISA i immunochromatografię.
Korzystnie, gdy izolacji materiału genetycznego dokonuje się na drodze izolacji całkowitego DNA wirusowego metoda tiocjanian guanidyny-fenol-chloroform-alkohol izoamylowy i precypitacji etanolem lub innym dowolnym zestawem do ekstrakcji DNA wirusowego.
Korzystnie, gdy powielanie genu strukturalnego białka kapsydu (ORF C1) wirusa PiCV o wielkości 822 b (1166-1987) lub jego skróconej formy (1166-1870) dokonuje się przy zastosowaniu metody enzymatycznej amplifikacji, przy czym do amplifikacji materiału genetycznego w łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) stosuje się startery reakcji obejmujące pełny odcinek genu ORF C1 o wielkości ok. 822 (lub jego skróconej formy), zawierające sekwencję startową i kodon stop oraz jeśli trzeba sekwencję niezbędną do oczyszczania eksprymowanego białka.
Korzystnie, gdy rekombinowane białko ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skrócona forma, będące produktem ekspresji, poddaje się badaniu na obecność cząstek pseudowirusowych - VLP (virus-like particles).
Korzystnie, gdy ocenia się aktywność antygenową białka ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skrócona forma w technice Western Blot, immunofluorescencji, ELISA i immunochromatografii.
Korzystnie, gdy ocenia się ilość białka ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skrócona forma w technice ELISA, Western Blot, immunofluorescencji i immunochromatografii.
Korzystnie, gdy ocenia się tożsamość białka ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skrócona forma w technice ELISA, Western Blot, immunofluorescencji i immunochromatografii.
Korzystnie, gdy wklonowania genu ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconej formy dokonuje się za pośrednictwem wektora będącego składnikiem systemu pQE-31 (Qiagen) lub do wektora pET -32a (Novagen) lub do innego wektora.
Korzystnie, gdy pierwszy etap obejmuje klonowanie do wektora pGEM -3Zf (Promega) lub do innego wektora.
Korzystnie, gdy drugi etap obejmuje subklonowanie z wektora pGEM -3Zf do wektora pQE-31 (Qiagen) lub do wektora pET -32a (Novagen) lub do innego wektora.
Korzystnie, gdy powielanie genu strukturalnego białka kapsydu (ORF C1) wirusa PiCV o wielkości 822 b lub jego skróconej formy dokonuje się przy zastosowaniu metody enzymatycznej
PL 218 878 B1 amplifikacji, przy czym do amplifikacji materiału genetycznego w łańcuchowej reakcji polimerazy stosuje się startery reakcji obejmujące pełny odcinek genu ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconej formy.
Fw: AAAGGATCCTTACTTCCGCCTACGTCGCAAGGAC
Rw: AAAAAGCTTTTCAGAATCCACAGCTGAGTCTGGG, zawierające sekwencję miejsca dla enzymów restrykcyjnych i sekwencję niezbędną do oczyszczania eksprymowanego białka.
P r z y k ł a d l
Od chorych gołębi domowych (Columbia livia), z Polski wykazujących objawy choroby cirkowirusowej z narządów pobrano próbki śledziony, krwi, kału i śluzu, z których izolowano materiał genetyczny wirusa PiCV metodą tiocjanian guanidyny-fenolchloroform-alkohol izoamylowy i precypitacji etanolem (wg Chomczyńskiego i Sacchi) [Chomczyński 1978] i/lub stosując zestaw do szybkiej izolacji DNA np. firmy A&A Biotechnology (mini kit).
Do otrzymania amplikonu użyto Starterów oligonukleotydowych Fw: AAAGGATCCTTACTTCCGCCTACGTCGCAAGGAC Rw: AAAAAGCTTTTCAGAATCCACAGCTGAGTCTGGG
Do otrzymania skróconego genomu ORF C1 wirusa PiCV powielano metodą PCR - łańcuchowej reakcji polimerazy wykorzystując do tego celu Starterów oligonukleotydowych podobnych do starterów opisanych w artykule I.Daum 2009. Avian Patology 38, 135-141 zmienione zostały sekwencje dla enzymów restrykcyjnych oraz oraz przesunięto część sekwencji.
Skrócony gen ORF C1 wklonowano wg procedury producenta do wektora typu pGEM -3Zf (Promega), który jest przeznaczony do klonowania produktów przeznaczonych do późniejszego sekwencjonowania.
W następnym etapie skrócony gen ORF C1 wirusa PiCV subklonowano do wektora pQE-31 (Qiagen) lub do wektora pET -32a (Novagen) lub do innego wektora i wprowadzono do genomu E. Coli w celu ekspresji białka.
P r z y k ł a d II
Od chorych gołębi domowych (Columbia livia), z Polski wykazujących objawy choroby cirkowirusowej z narządów pobrano próbki, śledziony, kiwi, kału i śluzu, z których izolowano materiał genetyczny wirusa PiCV metodą tiocjanian guanidyny-fenolchloroform-alkohol izoamylowy i precypitacji etanolem (wg Chomczyńskiego i Sacchi) [Chomczynski 1978] i/lub stosując zestaw do szybkiej izolacji DNA np. firmy A&A Biotechnology (mini kit).
Do otrzymania amplikonu użyto Starterów oligonukleotydowych Fw: AAAGGATCCTTACTTCCGCCTACGTCGCAAGGAC Rw: AAAAAGCTTTTCAGAATCCACAGCTGAGTCTGGG
Do otrzymania skróconego genomu ORF C1 wirusa PiCV powielano metodą PCR - łańcuchowej reakcji polimerazy wykorzystując do tego celu Starterów oligonukleotydowych podobnych do starterów opisanych w artykule I.Daum 2009. Avian Patology 38, 135-141 zmienione zostały sekwencje dla enzymów restrykcyjnych oraz przesunięto część sekwencji.
Skrócony gen ORF C1 wklonowano wg procedury producenta do wektora typu pGEM -3Zf (Promega), który jest przeznaczony do klonowania produktów przeznaczonych do późniejszego sekwencjonowania.
W następnym etapie skrócony gen ORF C1 wirusa PiCV subklonowano do wektora pQE-31 (Qiagen) lub do wektora pET -32a (Novagen) lub do innego wektora i wprowadzono do genomu E. Coli w celu ekspresji białka.
Polipeptyd wytworzony in vitro przez ekspresję w E. coli oczyszczono konwencjonalnymi technikami.
P r z y k ł a d III
Według przykładu II sporządzono szczepionkę rekombinowaną przy użyciu technologii DNA immunologiczny produkt leczniczy weterynaryjny dla gołębi domowych (Columbia livia) zawierającą polipeptyd lub jego fragment białko ORF C1 z dopuszczonymi do stosowania w lecznictwie weterynaryjnym nośnikami lub rozcieńczalnikami oraz adiuwantami i substancjami wzmagającymi odpowiedź immunologiczną.
P r z y k ł a d IV
Szczepionkę rekombinowaną sporządzoną przy użyciu technologii DNA zawierającą polipeptyd lub jego fragment białko ORF C1 według przykładu III podano dwukrotnie w odstępie 21 dni w iniekcji
PL 218 878 B1 podskórnej młodym gołębiom domowym w wieku 3 tygodni i uzyskano wzrost miana przeciwciał, które mierzono techniką ELISA.
P r z k ł a d V
Szczepionkę rekombinowaną sporządzoną przy użyciu technologii DNA zawierającą polipeptyd lub jego fragment białko ORF C1 według przykładu III podano dwukrotnie w odstępie 21 dni w iniekcji podskórnej młodym gołębiom domowym w wieku 3 tygodni i uzyskano wzrost miana przeciwciał, które mierzono techniką ELISA.
P r z y k ł a d VI
Szczepionkę rekombinowaną sporządzoną przy użyciu technologii DNA zawierającą polipeptyd lub jego fragment białko ORF C1 według przykładu III podano w iniekcji podskórnej gołębiom domowym dorosłym i uzyskano wzrost miana przeciwciał, które mierzono techniką ELISA.
P r z y k ł a d VII
Szczepionkę rekombinowaną sporządzoną przy użyciu technologii DNA zawierającą polipeptyd lub jego fragment białko ORF C1 oraz antygen wybrany z grupy złożonej z Salmonella spp, Mycoplasma spp., Paramyksowirus ptasi - 1 (PMV -1), Herpeswirus gołębi -1 (PiHV) lub ich kombinacje podano w odstępie w iniekcji podskórnej młodym oraz dorosłym gołębiom domowym i uzyskano wzrost miana przeciwciał, które mierzono techniką ELISA.
PUBLIKACJE
Daum I., et alt. Cloning and expression of a truncated pigeon circovirus capsid protein suitable for antibody detection in infected pigeons. Avian Pathol. 2009, 38, 135-141.
Duchatel J. P. et alt. New data on the transmission of pigeon circovirus. Vet. Rec. 2005, 157, 413-415.
Duchatel J. P. et alt. Observations on detection, excretion and transmission of pigeon circovirus in adult, young and embryonic pigeons. Avian Pathol. 2006, 35, 30-34).
Duchatel J.P., L'infection du pigeon par le circovirus Ann. Med. Vet. 153, 211, 2009
Duchatel, J.P., Szeleszczuk P. Young pigeon disease syndrome. Med.Wet.67,291,2011
Duchatel, J.P., et alt. Pigeon circovirus: Baculovirus expression of the capsid protein gene, specific antibody and viral load measured by RT polymerase chain reaction. website: www.isrvma.org
Marlier D, Vindevogel H; Viral infection of pigeons Vet,J. 172,40,2006
Schmidt, V. et alt., Experimental infection of domestic pigeons with pigeon circovirus. Av,.Diseases 52, 380, 2008.
Soike D.; Circovirus infection bei Tauben. Tierarztl. Prax. 25, 52-54, 1997
Szeleszczuk P., Dolka B., Cirkowiroza czyli AIDS gołębi czy można się uchronić przed zagrożeniem VI Sympozjum naukowe, Aktualne problemy w hodowli gołębi pocztowych. Sosnowiec 2009.
Todd D.; Circoviruses; lmmunosuppressive threats to avian species: A review. Avian Pathol. 2000, 29, 373-394.
Todd D. et alt. Sequence comparision of pigeon circoviruses . Res in Vet. Sci, 84,311, 2008,
Wieliczko A.i wsp.; Zakażenia cirkowirusowe gołębi. Medycyna Wet. 61, 94-97. 2005
Woods L., i wsp. Circovirus-like infection in a pigeon. J. Vet. Diagn. Invest. 1993, 5, 609-612.
Woods L. i wsp., A retrospective study of circovirus; infection in pigeons; nine cases (19861993). J. Vet. Diagn. lnvest. 1994, 6, 156-164.
Claims (14)
1. Sposób wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych (Columbia livia) przeciwko cirkowirusowej chorobie wywoływanej przez cirkowirus gołębi pn. PiCV ang. Pigeon Circo Virus, znamienny tym, że obejmuje pobieranie materiału od zakażonych gołębi domowych (Columbia livia) narządów i izolację materiału genetycznego na drodze izolacji całkowitego DNA wirusowego, powielanie genu strukturalnego białka kapsydu (ORF C1) wirusa PiCV o wielkości 822 (lub jego skróconej formy), klonowanie białka ORF C1 lub jego skróconej formy genu ORF C1 do wektora pGEM -3Zf i określenie sekwencji nukleotydów i aminokwasów skróconej formy genu ORF C1, wklonowanie skróconej formy genu ORF C1 do genomu wektora pQE-31, wektora pET - 32a lub innych systemów ekspresyjnych i uzyskanie ekspresji rekombinowanego białka strukturalnego ORF C1 i uzyskanego antygenu rekombinowanego białka ORF C1.
PL 218 878 B1
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się szczep wyizolowany od gołębi domowych (Columbia livia) z objawami cirkowirusowej choroby wywoływanej przez cirkowirus gołębi pn. PiCV (ang. Pigeon Circo Virus).
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że izolacji materiału genetycznego dokonuje się na drodze izolacji całkowitego DNA metodą tiocjanian guanidyny-fenol-chloroform-alkohol izoamylowy i precypitacji etanolem lub stosując zestaw do szybkiej izolacji DNA.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że powielanie genu strukturalnego białka kapsydu (ORF C1) wirusa PiCV o wielkości 822 (lub jego skróconej formy) dokonuje się przy zastosowaniu metody enzymatycznej amplifikacji, przy czym do amplifikacji materiału genetycznego w łańcuchowej reakcji polimerazy stosuje się startery reakcji obejmujące pełny odcinek genu ORF C1 o wielkości ok. 822 b, zawierające sekwencję 1166-1987 lub jego skróconej formy zawierające sekwencję 1166-1870 (GeneBank associacion numer AF 252610).
6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się rekombinowane białko ORF C1 PiCV lub jego skróconą formę będące produktem ekspresji do hodowli E.coli lub innych systemów ekspresyjnych np. bakulowirusy, drożdże itd.
7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się pierwszy etap obejmujący klonowanie do wektora pGEM -3Zf (Promega) lub innego wektora niezbędnego do potwierdzenia sekwencji.
8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się drugi etap obejmujący subklonowanie z wektora pGEM -3Zf do wektora pQE-31 (Qiagen) lub do wektora pET -32a (Novagen) lub do innego wektora, który pozwoli na ekspresję sklonowanego białka w E. coli lub innych istniejących systemach ekspresyjnych, np.: bakulowirusy, drożdże itd.
9. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się białko ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconą formę i może być użyte w technice ELISA, Western Blot, immunofluorescencji, i immunochromatografii.
10. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że białko ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconą formę stosuje się do wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych (Columbia livia) przeciwko cirkowirusowej chorobie wywoływanej przez cirkowirus gołębi pn. PiCV (ang. Pigeon Circo Virus).
11. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że białko ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconą formę stosuje się do szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA wytwarzania immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych (Columbia livia) przeciwko cirkowirusowej chorobie wywoływanej przez cirkowirus gołębi pn. PiCV (ang. Pigeon Circo Virus) zawiera dopuszczone do stosowania w lecznictwie weterynaryjnym nośniki lub rozcieńczalniki oraz adiuwanty i substancje wzmagające odpowiedź immunologiczną.
12. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że białko ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconą formę stosuje się do wytwarzania immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych (Columbia livia) zawierającego dodatkowo antygeny wybrane z grupy złożonej z Salmonella spp, Mycoplasma spp., Paramyksowirus ptasi - 1 (PMV -1), Herpeswirus gołębi -1 (PiHV) lub ich kombinacje.
13. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że białko ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconą formę stosuje się do wytwarzania immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych (Columbia livia) do stosowania u gołębi młodych w wieku od 14-42 dni życia, w szczególności 14-35 dni, ściślej 14-28 dni, a korzystniej 14-21 dni życia.
14. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że białko ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconą formę stosuje się do wytwarzania immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych (Columbia livia) do stosowania u gołębi dorosłych na 1-35 dni przed przypuszczalnym łączeniem gołębi w pary, w szczególności 1-28 dni, ściślej 7-21 dni, a korzystniej 14-21 dni przed tą datą.
15. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że szczepionka zawiera białko ORF C1 o wielkości ok. 822 lub jego skróconą formę stosuje się określone ilościowo metodą ELISA, od około 0,01 μg do 50 μg, w szczególności od około 0,1 μg do około 30 μg na dawkę, a korzystnie od około 0,3 μg do około 15 μg na dawkę.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL397433A PL218878B1 (pl) | 2011-12-15 | 2011-12-15 | Sposób wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL397433A PL218878B1 (pl) | 2011-12-15 | 2011-12-15 | Sposób wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL397433A1 PL397433A1 (pl) | 2013-06-24 |
| PL218878B1 true PL218878B1 (pl) | 2015-02-27 |
Family
ID=48671832
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL397433A PL218878B1 (pl) | 2011-12-15 | 2011-12-15 | Sposób wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL218878B1 (pl) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106191079A (zh) * | 2015-09-24 | 2016-12-07 | 内蒙古金凯默生物科技有限公司 | 一种重组鸽圆环病毒Cap蛋白的杆状病毒系统表达及该蛋白的应用 |
-
2011
- 2011-12-15 PL PL397433A patent/PL218878B1/pl unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106191079A (zh) * | 2015-09-24 | 2016-12-07 | 内蒙古金凯默生物科技有限公司 | 一种重组鸽圆环病毒Cap蛋白的杆状病毒系统表达及该蛋白的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL397433A1 (pl) | 2013-06-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2129390B1 (en) | Turkey herpesvirus vectored recombinant containing avian influenza genes | |
| CN109762792B (zh) | 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合毒株及其应用 | |
| CN111019910B (zh) | F基因型腮腺炎病毒减毒株及构建方法和应用 | |
| CN111560354A (zh) | 重组新型冠状病毒及其制备方法和应用 | |
| EP2560985B1 (en) | Nucleic acid sequences of a fish virus and the use thereof | |
| CN113293145B (zh) | 一种麻疹病毒活载体新冠疫苗 | |
| CN113293148B (zh) | 一种h基因替换的嵌合麻疹减毒株的构建 | |
| WO2022188783A1 (zh) | 一种f基因替换的嵌合麻疹减毒株的构建 | |
| CN105816871A (zh) | 一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用 | |
| CN107164409A (zh) | 犬瘟热病毒敏感细胞系slam‑mdck及其构建方法和应用 | |
| CN112940084A (zh) | 一种血清4型禽腺病毒亚单位疫苗及其应用 | |
| JP7213507B2 (ja) | 組換え豚パルボウイルス抗原タンパク質及びその用途 | |
| PL218878B1 (pl) | Sposób wytwarzania szczepionki rekombinowanej przy użyciu technologii DNA immunologicznego produktu leczniczego weterynaryjnego dla gołębi domowych | |
| Mansoor et al. | Molecular characterization of fowl adenovirus serotype 4 (FAV-4) isolate associated with fowl hydropericardium-hepatitis syndrome in Pakistan | |
| Yang et al. | Biological and molecular characterization of feline caliciviruses isolated from cats in South Korea | |
| CN109943576A (zh) | 一种嵌合犬瘟热病毒主要免疫基因的重组狂犬病病毒及其应用 | |
| CN101092631B (zh) | 一种修饰的猪圆环病毒2型orf2基因及应用 | |
| CN101215575A (zh) | 兔病毒性出血症病毒衣壳蛋白基因重组腺病毒及疫苗 | |
| KR102365039B1 (ko) | 부유세포 배양에 적응된 A/ASIA/Sea-97 유전형 구제역 바이러스 백신주 및 이의 제조방법 | |
| CN111676244B (zh) | 以麻疹病毒为载体的麻疹、风疹联合疫苗 | |
| KR20150044954A (ko) | 변형된 인간 로타바이러스 및 이의 용도 | |
| CN111004783A (zh) | 一种表达猪圆环病毒2型cap蛋白的重组羊口疮病毒，其制备方法及应用 | |
| CN120796206B (zh) | 一种同时表达不同g型vp7的重组猪轮状病毒及其构建方法和应用 | |
| CN115992099B (zh) | 一株猪细小病毒及其应用 | |
| US20250197454A1 (en) | Virus-like particle containing capsid proteins connected by linker |