PL219884B1 - Method for obtaining a formulation of enzymes and a method for bioremediation of soil contaminated with diesel assisted by the preparation - Google Patents
Method for obtaining a formulation of enzymes and a method for bioremediation of soil contaminated with diesel assisted by the preparationInfo
- Publication number
- PL219884B1 PL219884B1 PL399980A PL39998012A PL219884B1 PL 219884 B1 PL219884 B1 PL 219884B1 PL 399980 A PL399980 A PL 399980A PL 39998012 A PL39998012 A PL 39998012A PL 219884 B1 PL219884 B1 PL 219884B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- bioremediation
- preparation
- inoculum
- enzymes
- days
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 28
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- 239000002689 soil Substances 0.000 title claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title 1
- RSJKGSCJYJTIGS-UHFFFAOYSA-N undecane Chemical compound CCCCCCCCCCC RSJKGSCJYJTIGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 11
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 8
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 7
- 239000002283 diesel fuel Substances 0.000 claims description 7
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 4
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 2
- 241000209149 Zea Species 0.000 claims 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 4
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 4
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 4
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 3
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 3
- 241001656677 Gordonia alkanivorans Species 0.000 description 3
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 3
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 3
- 241001673062 Achromobacter xylosoxidans Species 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000024675 Eruca sativa Species 0.000 description 2
- 235000014755 Eruca sativa Nutrition 0.000 description 2
- 241001337904 Gordonia <angiosperm> Species 0.000 description 2
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 241000590020 Achromobacter Species 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 241000293772 Cerrena Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 108090000417 Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 102000004020 Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 241000222385 Phanerochaete Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000222354 Trametes Species 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 231100000613 environmental toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- VUZPPFZMUPKLLV-UHFFFAOYSA-N methane;hydrate Chemical compound C.O VUZPPFZMUPKLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000001863 plant nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000004055 radioactive waste management Methods 0.000 description 1
- 238000005067 remediation Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazkuDescription of the invention
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu enzymów oraz sposób bioremediacji gleby zanieczyszczonej olejem napędowym wspomaganej tym preparatem.The subject of the invention is a method of obtaining an enzyme preparation and a method of bioremediation of soil contaminated with diesel oil aided with this preparation.
Z opisów zgłoszeń patentowych P-391955, P-396201, P-396515, P-396516 i P-396517 znane są sposoby otrzymywania nierozpuszczalnych lipaz Mucor circinelloides.From the patent applications P-391955, P-396201, P-396515, P-396516 and P-396517, methods for the preparation of insoluble Mucor circinelloides lipases are known.
Z opisu zgłoszenia patentowego P-395967 jest znane otrzymywanie nierozpuszczalnych enzymów Mucor circinelloides katalizujących hydrolizę chitozanu.It is known from the patent application P-395967 to obtain insoluble Mucor circinelloides enzymes that catalyze the hydrolysis of chitosan.
Znane są sposoby bioremediacji gleby zanieczyszczonej substancjami ropopochodnymi wykorzystujące potencjał metaboliczny mikroorganizmów, które przyswajając zanieczyszczenia jako źródło węgla powodują ich przekształcenie do prostszych związków - organicznych lub nieorganicznych, terminalnie do dwutlenku węgla i wody. W procesach tych zaangażowane są najczęściej bakterie z rodzaju Bacillus, Achromobacter, Acinetobacter, Flavobacterium, Nocardia, Gordonia, Micrococcus Pseudomonas, Corynebacterium.There are known methods of bioremediation of soil contaminated with petroleum substances using the metabolic potential of microorganisms which, by absorbing pollutants as a carbon source, transform them into simpler compounds - organic or inorganic, terminal to carbon dioxide and water. These processes most often involve bacteria of the genus Bacillus, Achromobacter, Acinetobacter, Flavobacterium, Nocardia, Gordonia, Micrococcus Pseudomonas, and Corynebacterium.
Sposoby te są opisane w czasopismach: Applied Microbiology and Biotechnology No 56, pp 650-663, 2001; Current Oppinon in Biotechnology No 12, pp 237-241, 2001; Environmental Pollution No 119, pp 23-31, 2002; Research In Microbiology No 154, pp 321-328, 2003; World Journal of Microbiology & Biotechnology No 21, pp 1409-1414, 2005; Word Journal of Microbiology & Biotechnology No 25, pp 65-70, 2009, Journal of Environmental Science Engineering No 52 (2), pp 113-116, 2010; Bioresource Technology No 101 (21), pp 8452-8456, 2010; Research Journal of Environmental Toxicology No 5 (1): 1-26, 2011 oraz w opisach patentowych PL nr 206566 i 206565.These methods are described in the journals: Applied Microbiology and Biotechnology No 56, pp 650-663, 2001; Current Oppinon in Biotechnology No 12, pp 237-241, 2001; Environmental Pollution No 119, pp 23-31, 2002; Research In Microbiology No 154, pp 321-328, 2003; World Journal of Microbiology & Biotechnology No 21, pp 1409-1414, 2005; Word Journal of Microbiology & Biotechnology No 25, pp 65-70, 2009, Journal of Environmental Science Engineering No 52 (2), pp 113-116, 2010; Bioresource Technology No. 101 (21), pp 8452-8456, 2010; Research Journal of Environmental Toxicology No 5 (1): 1-26, 2011 and in PL patents No. 206566 and 206565.
W procesach bioremediacji gleby zanieczyszczonej substancjami ropopochodnymi częstym problemem jest rozkład trudno degradowalnych związków stanowiących pozostałość mieszaniny zanieczyszczającej, czyli tak zwanych zanieczyszczeń resztkowych. Transformacji tych zanieczyszczeń w związki łatwiej przyswajalne sprzyjać może obecność wybranych enzymów z klasy oksydoreduktaz (oksygenazy, dehydrogenazy) i hydrolaz (lipazy, esterazy). Użyteczność enzymów z klasy oksydoreduktaz, otrzymanych z różnych gatunków grzybów tzw. „białej zgnilizny”, jak Phanerochaete, Trametes, Cerrena, w procesach bioremediacji środowisk zanieczyszczonych substancjami ropopochodnymi/ksenobiotykami opisano w czasopismach; International Biodeterioration & Biodegradation No 46, pp. 51-59, 2000; Applied Catalysis B: Environmental No 46, pp. 1-15, 2003; Enzyme & Microbial Technology No 35, pp. 339-354, 2004; Applied Catalysis A: General No 272, pp. 1-13, 2004; Soil Biology & Biochemistry No 36, pp. 1545-1551,2004; Enzyme & Microbial Technology No 38, pp. 291In the bioremediation processes of soil contaminated with petroleum substances, a frequent problem is the decomposition of difficult-to-degradable compounds that are the remainder of the contaminating mixture, i.e. the so-called residual pollutants. The transformation of these pollutants into more easily digestible compounds may be favored by the presence of selected enzymes from the class of oxidoreductases (oxygenases, dehydrogenases) and hydrolases (lipases, esterases). The usefulness of enzymes from the class of oxidoreductases obtained from various species of fungi, the so-called "White rot", such as Phanerochaete, Trametes, Cerrena, in the bioremediation processes of environments contaminated with petroleum substances / xenobiotics have been described in journals; International Biodeterioration & Biodegradation No 46, pp. 51-59,2000; Applied Catalysis B: Environmental No 46, pp. 1-15, 2003; Enzyme & Microbial Technology No 35, pp. 339-354, 2004; Applied Catalysis A: General No 272, pp. 1-13, 2004; Soil Biology & Biochemistry No 36, pp. 1545-1551,2004; Enzyme & Microbial Technology No 38, pp. 291
-316, 2006; Practice Periodical of Hazardous Tonic, and Radioactive Waste Management, No 10, pp. 73-85, 2006; Journal of Plant Nutrition and Soil Science No 10, pp. 333.353, 2010; Enzyme Research Vol. 2011, Pub 2011.-316, 2006; Practice Periodical of Hazardous Tonic, and Radioactive Waste Management, No 10, pp. 73-85, 2006; Journal of Plant Nutrition and Soil Science No 10, pp. 333,353, 2010; Enzyme Research Vol. 2011, Pub 2011.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się szczep pleśni Mucor circinelloides UD254 wyodrębniony z pancerzy krewetek, szczep bakterii Gordonia alkanivo-raus oznaczony symbolem S7 oraz szczep bakterii Achromobacter xylosoxidans oznaczony symbolem G21.The collection of the Institute of Technical Biochemistry of the Lodz University of Technology includes the Mucor circinelloides UD254 mold strain isolated from shrimp shells, the Gordonia alkanivo-raus bacterial strain marked with the S7 symbol and the Achromobacter xylosoxidans bacterial strain marked with the G21 symbol.
Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację gleby zanieczyszczonej olejem napędowym, w drodze hodowli szczepu pleśni Mucor circinelloides, polegający na uaktywnieniu szczepu na skosach agarowych zawierających agar i brzeczkę piwowarską o stężeniu 8° Be, hodowli na tym podłożu inokulum w temperaturze 30°C w czasie 72 godzin, zmyciu wyhodowanych zarodników wodnym roztworem niejonowego surfaktanta użytym w ilości 3-8% v/v, zaszczepieniu otrzymanym inokulum, użytym w ilości 3% v/v, ciekłego podłoża hodowlanego, wysterylizowanego w temperaturze 121°C w czasie 30 minut, zawierającego olej rzepakowy, namok kukurydziany, glukozę, składniki mineralne oraz wodę, o wyjściowym pH 4,9 i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wstrząsanej w temperaturze 28-31°C w czasie 72-75 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych na wstrząsarce o szybkości obrotowej 200-250 minut-1, a następnie odsączeniu otrzymanej biomasy, przemyciu jej wodą destylowaną, odwodnieniu acetonem, suszeniu i rozdrabnianiu, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się szczep pleśni Mucor circinelloides UD254, który uaktywnia się na skosach agarowych zawierających w procentach wagowych 0,3-0,5% undekanu, 3% agaru, reszta brzeczki piwowarskiej, zaś hodowlę produkcyjną wstrząsaną prowadzi się na podłożu zawierającym w procentach wagowych; 0,5-2,9% undekanu, 3-5% oleju rzepakowego, 3-5% namokuA method of obtaining the preparation of enzymes supporting the bioremediation of soil contaminated with diesel oil by culturing the Mucor circinelloides mold strain, which consists in activating the strain on agar slants containing agar and brewing wort with a concentration of 8 ° Be, culturing on this medium inoculum at 30 ° C during 72 hours, washing the cultured spores with an aqueous solution of non-ionic surfactant used in the amount of 3-8% v / v, inoculation with the obtained inoculum, used in the amount of 3% v / v, liquid culture medium, sterilized at 121 ° C for 30 minutes, containing oil rapeseed, corn steep, glucose, minerals and water, with an initial pH of 4.9 and the production of a shaken production culture at 28-31 ° C for 72-75 hours with a flask filling degree of 20% by volume on a shaker with a rotational speed of 200- 250 minutes -1 , and then filtering the biomass obtained, washing it with distilled water, dehydration with acetone, su according to the invention, it is characterized in that the mold strain Mucor circinelloides UD254 is used, which is activated on agar slants containing 0.3-0.5% by weight of undecane, 3% agar, the rest of the brewing wort, and the production culture agitated is carried out on a substrate containing in percent by weight; 0.5-2.9% undecane, 3-5% rapeseed oil, 3-5% soak
PL 219 884 B1 kukurydzianego, 0,5-1% glukozy, 0,2% KH2PO4, 0,05% KCl, 0,05% NaNO3 i wodę do 100%. Otrzymany preparat zawiera enzymy oksydoredukcyjne i hydrolazy.Corn, 0.5-1% glucose, 0.2% KH 2 PO 4 , 0.05% KCl, 0.05% NaNO 3 and water to 100%. The obtained preparation contains oxidoreductive enzymes and hydrolases.
Sposób bioremediacji gleby zanieczyszczonej olejem napędowym, polegający na przygotowaniu inokulum pojedynczego szczepu lub konsorcjum szczepów bakterii o zdolności degradacji węglowodorów, w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu płynnym zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu, fosforu oraz substancje wzrostowe, a następnie na wprowadzeniu namnożonego inokulum do oczyszczanej gleby i prowadzeniu hodowli w warunkach tlenowych, w temperaturze 25-30°C w czasie 20-35 dni przy wilgotności 25-40%, według wynalazku charakteryzuje się tym, że do oczyszczanego środowiska, w okresie między 5-10 dniem bioremediacji oraz ewentualnie w okresie między 15-20 dniem bioremediacji, wprowadza się dodatkowo zawieszony w sterylnej wodzie preparat enzymów Mucor circinelloides UD254 otrzymany wyżej opisanym sposobem, stosując 0,3-0,6 g preparatu na 1 kg substancji ropopochodnych zawartych w oczyszczanej glebie i po wprowadzeniu tego preparatu kontynuuje się proces bioremediacji.A method of bioremediation of soil contaminated with diesel fuel, consisting in the preparation of an inoculum of a single strain or a consortium of bacterial strains with the ability to degrade hydrocarbons, by shaking culture on a sterilized liquid medium containing an assimilable source of carbon, nitrogen, phosphorus and growth substances, and then introducing the multiplied inoculum into the cleaned soil and cultivation under aerobic conditions at 25-30 ° C for 20-35 days and 25-40% humidity, according to the invention, it is characterized by the fact that into the environment to be treated, in the period between 5-10 days of bioremediation and possibly in the period between the 15-20 day of bioremediation, the preparation of the Mucor circinelloides UD254 enzymes, obtained as described above, is additionally suspended in sterile water, using 0.3-0.6 g of the preparation per 1 kg of petroleum substances contained in the treated soil and continued after the introduction of this preparation the process of bioremediation is taking place.
Użycie w procesie bioremediacji kultur bakterii łącznie z preparatem enzymatycznym Mucor circinelloides UD254 umożliwia zwiększenie wydajności biodegradacji oraz skrócenie czasu remediacji o około 30-40% w porównaniu z wydajnością oraz czasem bioremediacji prowadzonej bez użycia preparatu enzymatycznego.The use of bacterial cultures in the bioremediation process together with the enzyme preparation Mucor circinelloides UD254 allows to increase the biodegradation efficiency and shorten the remediation time by about 30-40% compared to the efficiency and time of bioremediation carried out without the use of an enzyme preparation.
Przedmiot wynalazku ilustrują poniższe przykłady.The following examples illustrate the subject matter of the invention.
P r z y k ł a d I.P r z x l a d I.
W celu otrzymania preparatu enzymów szczep pleśni Mucor circinelloides UD254, wyizolowany z pancerzy krewetek, uaktywniono na skosach agarowych o składzie w procentach wagowych: 0,3% undekanu, 3% agaru, do 100% brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8° Be i hodowano na tym podłożu w temperaturze 30°C w czasie 72 godzin. Inokulum otrzymanym po zmyciu zarodników pleśni ze skosów 0,01% roztworem wodnym Tritonu X-100 szczepiono podłoże hodowlane wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 30 minut, zawierające w procentach wagowych: 0,5% undekanu, 2,5% oleju rzepakowego, 3% namoku kukurydzianego firmy Roquette, 0,5% glukozy, 0,2% KH2PO4, 0,05% KCl, 0,05% NaNO3 i wodę do 100%, o wyjściowym pH 4,9, stosując zawiesinę zarodników w ilości 3% v/v i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 72 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 200 min-1. Uzyskaną w wyniku hodowli biomasę, po odsączeniu na spieku krzemionkowym, przemyto wodą destylowaną 3 użytą w ilości 10 cm na 1 g grzybni, sączono na spieku krzemionkowym i 3-krotnie odwadniano ace3 tonem stosując 15 cm3 acetonu o temperaturze 4°C na 1 g odsączonej biomasy, suszono 18 godzin w temperaturze 20°C i rozdrobniono w młynie udarowym do wielkości ziaren około 5 ąm.To obtain the enzyme preparation, the mold strain Mucor circinelloides UD254, isolated from shrimp shells, was activated on agar slants with the composition in percent by weight: 0.3% undecane, 3% agar, to 100% brewing wort with a concentration of 8 ° Be and grown on this medium at 30 ° C for 72 hours. The inoculum obtained after washing the mold spores from the slants with a 0.01% aqueous solution of Triton X-100, was inoculated in the culture medium sterilized at 121 ° C for 30 minutes, containing by weight: 0.5% undecane, 2.5% rapeseed oil, 3% Roquette corn steep, 0.5% glucose, 0.2% KH 2 PO 4 , 0.05% KCl, 0.05% NaNO3 and water up to 100%, with a starting pH of 4.9, using a spore suspension in in the amount of 3% v / v, the shake culture was carried out at 28-31 ° C for 72 hours, with the flask filling degree of 20% by volume and the shaker rotation speed of 200 min -1 . The biomass obtained as a result of the cultivation, after filtering on a silica frit, was washed with distilled water 3, used in the amount of 10 cm per 1 g of mycelium, filtered on a silica frit and 3 times dehydrated with ace 3 tons using 15 cm 3 of acetone at a temperature of 4 ° C per 1 g of drained biomass, dried 18 hours at 20 ° C and ground in an impact mill to a grain size of about 5 µm.
Otrzymano 20 g preparatu enzymów z 1 litra podłoża, który wykazywał aktywność lakkazy Mnzależnej peroksydazy, lipazy i esterazy.20 g of an enzyme preparation was obtained from 1 liter of medium, which showed the activity of laccase Mn-dependent peroxidase, lipase and esterase.
Jednocześnie przygotowano inokulum konsorcjum szczepów Gordonia alkanivorans S7At the same time, an inoculum of the Gordonia alkanivorans S7 consortium was prepared
Achromobacter xylosoxidans G21 w drodze hodowli wstrząsanej na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu płynnym o składzie w częściach wagowych: 2 części glukozy, części ekstraktu drożdżowego, 1,5 części Na2HPO4, 2,5 części NH4CI, 100 części wody wodociągowej, o pH 6,5, w czasie 48 godzin. Próbę gruntu (0,5 kg) zanieczyszczonego olejem napędowym zawartym w ilości 5% v/v umieszczono w kuwetach o pojemności 0,7 l, po czym wprowadzono do nich otrzymane inokulum konsorcjum szczepów i prowadzono hodowlę na wstrząsarce mimośrodowej o szybkości obrotów 200 rpm i amplitudzie drgań 4,5 cm, w temperaturze 30°C. Po upływie 7 dni wprowadzano otrzymany preparat enzymatyczny w ilości 0,6 g na 1 kg związków ropopochodnych. Proces bioremediacji prowadzono przez 21 dni w temperaturze 25°C, codziennie mieszając zawartość kuwet i utrzymując wilgotność na poziomie ok. 30%.Achromobacter xylosoxidans G21 by shaking culture on a liquid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes with the composition in parts by weight: 2 parts glucose, parts yeast extract, 1.5 parts Na 2 HPO 4 , 2.5 parts NH 4 Cl, 100 parts of tap water, pH 6.5, for 48 hours. A soil sample (0.5 kg) contaminated with 5% v / v diesel oil was placed in 0.7 l cuvettes, then the obtained inoculum of the consortium of strains was introduced into them and the cultivation was carried out on an eccentric shaker with a rotation speed of 200 rpm and vibration amplitude 4.5 cm at 30 ° C. After 7 days, the obtained enzyme preparation was introduced in the amount of 0.6 g per 1 kg of petroleum compounds. The bioremediation process was carried out for 21 days at 25 ° C, stirring the contents of the cuvettes every day and keeping the humidity at the level of approx. 30%.
Po 21 dniach bioremediacji stwierdzono 60%-owy ubytek ogólnej puli węglowodorów tj. o 30% większy niż w przypadku bioremediacji prób gleby bez dodatku preparatu enzymatycznego.After 21 days of bioremediation, a 60% loss of the total hydrocarbon pool was found, i.e. 30% greater than in the case of bioremediation of soil samples without the addition of an enzyme preparation.
P r z y k ł a d IIP r z x l a d II
Szczep pleśni Mucor circinelloides UD254 wyizolowany z pancerzy krewetek uaktywniono na skosach agarowych o składzie w procentach wagowych: 0,5% undekanu, 3% agaru, do 100% brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8° Be i hodowano na tym podłożu w temperaturze 30°C w czasie 75 godzin. Inokulum otrzymanym po zmyciu zarodników pleśni ze skosów 0,01% roztworem wodnym Tritonu X-100 szczepiono podłoże hodowlane wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 30 minut,The Mucor circinelloides UD254 mold strain isolated from shrimp shells was activated on agar slants with the composition in percent by weight: 0.5% undecane, 3% agar, up to 100% brewing broth with a concentration of 8 ° Be and grown on this medium at 30 ° C at time of 75 hours. The inoculum obtained after washing the mold spores from the slants with a 0.01% aqueous solution of Triton X-100 was inoculated in the culture medium sterilized at 121 ° C for 30 minutes,
PL 219 884 B1 zawierające w procentach wagowych: 2% undekanu, 5% oleju rzepakowego, 5% namoku kukurydzianego firmy Roquette, 1% glukozy, 0,2% KH2PO4, 0,05% KCl, 0,05% NaNO3 i wodę do 100%, o wyjściowym pH 4,9, stosując zawiesinę zarodników w ilości 8% v/v i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 72 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 250 min-1. Uzyskaną w wyniku hodowli biomasę, po odsączeniu na 3 spieku krzemionkowym, przemyto wodą destylowaną użytą w ilości 10 cm3 na 1 g grzybni, sączono na 3 spieku krzemionkowym i 3-krotnie odwadniano acetonem stosując 15 cm3 acetonu o temperaturzePL 219 884 B1 containing in percentages by weight: 2% undecane, 5% rapeseed oil, 5% Roquette corn steep, 1% glucose, 0.2% KH2PO4, 0.05% KCl, 0.05% NaNO3 and water up to 100 %, with an initial pH of 4.9, using a spore suspension in the amount of 8% v / v, and a shaking culture was carried out at 28-31 ° C, for 72 hours, with a flask filling degree of 20% by volume and a shaker rotational speed of 250 min -1 . The biomass obtained as a result of the cultivation, after filtering on 3 silica frit, was washed with distilled water used in the amount of 10 cm 3 per 1 g of mycelium, filtered on 3 silica frit and 3 times dehydrated with acetone using 15 cm 3 of acetone at the temperature of
4°C na 1 g odsączonej biomasy, suszono 18 godzin w temperaturze 20°C, przemyto eterem naftowym 3 stosując 10 cm3 eteru o temperaturze 20°C na 1 g odwodnionej biomasy i rozdrobniono w młynie udarowym do wielkości ziaren 5 ąm.4 ° C per 1 g of drained biomass, dried 18 hours at 20 ° C, washed with petroleum ether 3 using 10 cm 3 of 20 ° C ether per 1 g of dehydrated biomass and ground in an impact mill to a grain size of 5 µm.
Otrzymano 25 g preparatu enzymów z 1 litra podłoża, który wykazywał aktywność lakkazy, Mn- zależnej peroksydazy, lipazy i esterazy.25 g of an enzyme preparation was obtained from 1 liter of medium, which showed the activity of laccase, Mn-dependent peroxidase, lipase and esterase.
Proces bioremediacji gruntu skażonego olejem napędowym prowadzono jak w przykładzie I stosując otrzymany preparat enzymatyczny w ilości 0,3 g na 1 kg związków ropopochodnych.The bioremediation process of soil contaminated with diesel oil was carried out as in Example 1, using the obtained enzyme preparation in the amount of 0.3 g per 1 kg of petroleum compounds.
Po 21 dniach bioremediacji stwierdzono 50%-owy ubytek ogólnej puli węglowodorów tj. o 20% większy niż w przypadku bioremediacji prób gleby bez dodatku preparatu enzymatycznego.After 21 days of bioremediation, a 50% loss of the total hydrocarbon pool was found, ie 20% greater than in the case of bioremediation of soil samples without the addition of an enzyme preparation.
P r z y k ł a d IIIP r x l a d III
Preparat enzymatyczny przygotowano postępując jak w przykładzie I. Przygotowano także inokulum szczepu bakterii Gordonia alkanivorans S7 w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym, w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, na podłożu płynnym o składzie w częściach wagowych: 2 części glukozy, 2 części ekstraktu drożdżowego, 1,5 części Na2HPO4, 2,5 części NH4CI, 100 części wody wodociągowej, o pH 6,5 w czasie 48 godzin. Próbę gruntu (0,5 kg) zanieczyszczonego substancjami ropopochodnymi w stężeniu 5 g/l, pochodzącą z terenów dołów urobkowych, zawierającą mikroflorę autochtoniczną umieszczono w kuwetach pojemności 0,7 l. Do prób wprowadzano otrzymane wcześniej inokulum bakterii prowadzono hodowlę na wstrząsarce mimośrodowej o szybkości obrotów 220 rpm i amplitudzie drgań 4,5 cm, w temperaturze 30°C. Po upływie 9 dni wprowadzano preparat enzymatyczny w ilości 0,6 g na 1 kg związków ropopochodnych. Następną dawkę preparatu wprowadzano do zanieczyszczonego środowiska w 15 dniu bioremediacji. Proces bioremediacji prowadzono 30 dni, w temperaturze 25°C, codziennie mieszając zawartość kuwet i utrzymując wilgotność na poziomie ok. 30%. Po 30 dniach bioremediacji stwierdzono 70% wydajność procesu, tj. o około 30% wyższą niż w przypadku bioremediacji prowadzonej przy użyciu szczepu Gordonia alkanivorans S7, bez dodatku preparatu enzymatycznego.The enzyme preparation was prepared as in Example I. An inoculum of the bacterium Gordonia alkanivorans S7 was also prepared by shaking in a sterilized culture at 121 ° C for 20 minutes on a liquid medium with the composition in parts by weight: 2 parts of glucose, 2 parts of extract yeast, 1.5 parts Na 2 HPO 4 , 2.5 parts NH 4 Cl, 100 parts tap water, pH 6.5 for 48 hours. A soil sample (0.5 kg) contaminated with petroleum substances at a concentration of 5 g / l, coming from the excavation pits, containing autochthonous microflora, was placed in 0.7 l cuvettes. speed of 220 rpm and vibration amplitude 4.5 cm, at a temperature of 30 ° C. After 9 days, the enzyme preparation was introduced in the amount of 0.6 g per 1 kg of petroleum compounds. The next dose of the preparation was introduced into the polluted environment on the 15th day of bioremediation. The bioremediation process was carried out for 30 days at the temperature of 25 ° C, daily mixing the contents of the cuvettes and maintaining the humidity at the level of approx. 30%. After 30 days of bioremediation, the efficiency of the process was 70%, i.e. about 30% higher than in the case of bioremediation carried out with the Gordonia alkanivorans S7 strain, without the addition of an enzyme preparation.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL399980A PL219884B1 (en) | 2012-07-16 | 2012-07-16 | Method for obtaining a formulation of enzymes and a method for bioremediation of soil contaminated with diesel assisted by the preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL399980A PL219884B1 (en) | 2012-07-16 | 2012-07-16 | Method for obtaining a formulation of enzymes and a method for bioremediation of soil contaminated with diesel assisted by the preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL399980A1 PL399980A1 (en) | 2014-01-20 |
| PL219884B1 true PL219884B1 (en) | 2015-07-31 |
Family
ID=49920818
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL399980A PL219884B1 (en) | 2012-07-16 | 2012-07-16 | Method for obtaining a formulation of enzymes and a method for bioremediation of soil contaminated with diesel assisted by the preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL219884B1 (en) |
-
2012
- 2012-07-16 PL PL399980A patent/PL219884B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL399980A1 (en) | 2014-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ertuğrul et al. | Isolation of lipase producing Bacillus sp. from olive mill wastewater and improving its enzyme activity | |
| Vega et al. | Dimethylphthalate hydrolysis by specific microbial esterase | |
| Mnif et al. | Improvement of methyl orange dye biotreatment by a novel isolated strain, Aeromonas veronii GRI, by SPB1 biosurfactant addition | |
| US20240343624A1 (en) | Microorganisms for treatment of hydrocarbons or oil | |
| Anidu et al. | Study on optimization, degreasing and destaining potentials of glycophospholipid biosurfactant produced by Bacillus anthracis S62A. | |
| Parwata et al. | Organic solvent-stable lipase from moderate halophilic bacteria Pseudomonas stutzeri isolated from the mud crater of Bleduk Kuwu, Central Java, Indonesia | |
| Al-Dossary et al. | Biodegradation of crude oil using Aspergillus species | |
| JPWO2020009097A1 (en) | Decontamination methods and materials used for environments contaminated by petroleum-related substances | |
| Suyanto et al. | Production and optimization of lipase by Aspergillus niger using coconut pulp waste in solid state fermentation | |
| Teh et al. | Enhanced degradation of pyrene and metabolite identification by Pleurotus eryngii F032 | |
| Mahmood et al. | Lipase production and optimization from bioremediation of disposed engine oil | |
| CN109455891A (en) | A kind of compound bio preparation for repairing for oily sludge | |
| Kumar et al. | Optimization of biosynthesis parameters, partial purification and characterization of extracellular lipase from soil derived Streptomyces sp. Loyola Lipase-1 | |
| Zubbair et al. | Biodegradation of malachite green by white-rot fungus, Pleurotus pulminarious | |
| TWI756538B (en) | oil-decomposing microorganisms | |
| Zhen et al. | Biodegradation of PAHs by Trametes hirsuta zlh237 and effect of bioaugmentation on PAHs-contaminated soil | |
| Rodrigues et al. | Lipase-producing fungi for potential wastewater treatment and bioenergy production | |
| JP7106370B2 (en) | oil-degrading microorganisms | |
| Maiyadi et al. | Studies on the bioremediation potential of bacteria isolated from Diesel-contaminated soils in Kano | |
| Ali et al. | Screening, isolation and optimization of an extracellular lipase producing Exiguobacterium sp. BBXS-7 segregated from waste cooking oil contaminated sites | |
| López et al. | Scaling-up the production of thermostable lipolytic enzymes from Thermus aquaticus YT1 | |
| Raheem et al. | Biodegradation of crude oil by nematode trapping fungi isolated from iraq | |
| WO2006067085A1 (en) | Method for decontaminating polluted soil | |
| Mahmood et al. | Bioremediation of disposed engine oil for Lipase production | |
| Patel et al. | Isolation and characterization of phenol degrading yeast |