PL220926B1 - Pochodne tiofenu, molekularnie wdrukowany polimer zawierający spolimeryzowaną pochodną tiofenu i zastosowanie tego polimeru do selektywnego oznaczania i kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu (ATP) - Google Patents

Pochodne tiofenu, molekularnie wdrukowany polimer zawierający spolimeryzowaną pochodną tiofenu i zastosowanie tego polimeru do selektywnego oznaczania i kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu (ATP)

Info

Publication number
PL220926B1
PL220926B1 PL398275A PL39827512A PL220926B1 PL 220926 B1 PL220926 B1 PL 220926B1 PL 398275 A PL398275 A PL 398275A PL 39827512 A PL39827512 A PL 39827512A PL 220926 B1 PL220926 B1 PL 220926B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
atp
layer
mip
polymer
triphosphate
Prior art date
Application number
PL398275A
Other languages
English (en)
Other versions
PL398275A1 (pl
Inventor
Tan-Phat Huynh
Agnieszka Pietrzyk-Le
Krzysztof Noworyta
K.C. Chandra Bikram
Janusz Sobczak
Francis Dôçösouza
WŁODZIMIERZ KUTNER
Original Assignee
Inst Chemii Fizycznej Polskiej Akademii Nauk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inst Chemii Fizycznej Polskiej Akademii Nauk filed Critical Inst Chemii Fizycznej Polskiej Akademii Nauk
Priority to PL398275A priority Critical patent/PL220926B1/pl
Priority to GB201302943A priority patent/GB2503064B/en
Publication of PL398275A1 publication Critical patent/PL398275A1/pl
Publication of PL220926B1 publication Critical patent/PL220926B1/pl

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08GMACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G61/00Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/12Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/122Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides
    • C08G61/123Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds
    • C08G61/126Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds with a five-membered ring containing one sulfur atom in the ring
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/06Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D333/14Radicals substituted by singly bound hetero atoms other than halogen
    • C07D333/16Radicals substituted by singly bound hetero atoms other than halogen by oxygen atoms
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28Electrolytic cell components
    • G01N27/30Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/327Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
    • G01N27/3275Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28Electrolytic cell components
    • G01N27/30Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/333Ion-selective electrodes or membranes
    • G01N27/3335Ion-selective electrodes or membranes the membrane containing at least one organic component
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08GMACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/30Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain
    • C08G2261/32Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating heteroaromatic structural elements in the main chain
    • C08G2261/322Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating heteroaromatic structural elements in the main chain non-condensed
    • C08G2261/3223Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating heteroaromatic structural elements in the main chain non-condensed containing one or more sulfur atoms as the only heteroatom, e.g. thiophene
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08GMACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/30Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain
    • C08G2261/33Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating non-aromatic structural elements in the main chain
    • C08G2261/332Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating non-aromatic structural elements in the main chain containing only carbon atoms
    • C08G2261/3326Monomer units or repeat units incorporating structural elements in the main chain incorporating non-aromatic structural elements in the main chain containing only carbon atoms alkane-based
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08GMACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G2261/00Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G2261/90Applications
    • C08G2261/94Applications in sensors, e.g. biosensors

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są (a) nowe pochodne tiofenu, molekularnie wdrukowany polimer zawierający spolimeryzowaną pochodną tiofenu, zastosowanie tego polimeru jako elementu rozpoznającego chemicznego czujnika do selektywnego oznaczania adenozyno-5'-trifosforanu (ATP), oraz (d) zastosowanie tego polimeru jako materiału do kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu (ATP).
Adenozyno-5'-trifosforan (ATP) (oznaczany dalej 1, patrz fig. 8) niezależnie odkryły dwa laboratoria [1, 2], ATP uznano jako główny czynnik przenoszący energię w żywych komórkach [3]. Jest on uważany za jednostkę monetarną przetwarzania energii w żywych organizmach. Energia uwalniana w trakcie hydrolizy wysokoenergetycznych wiązań grup fosforanowych umożliwia realizację szeregu czynności biologicznych, takich jak skurcz mięśni, pobudzenie nerwu czy aktywny transport, jak również syntezę szeregu różnych substancji, w tym białek i kwasów nukleinowych [4]. W organizmach żywych ATP nie może być magazynowany, ponieważ ulega szybkiemu rozkładowi. Aby zaspokajać bieżące potrzeby energetyczne komórki, musi więc być na bieżąco wytwarzany. Dlatego wykrywanie obecności ATP w układzie biologicznym jest pośrednim testem sprawdzającym czy układ ten jest żywy czy też nie. Stężenie ATP w cytoplazmie żywych komórek jest stosunkowo niskie; wynosi ono ~1,0 μΜ [5]. Dlatego wykrywanie ATP na tym poziomie stężeń jest istotne z punktu widzenia badań układów biologicznych. Korzystnie z punktu widzenia selektywności oznaczeń ATP, jego stężenie w komórce jest tysiąckrotnie wyższe niż stężenie adenozyno-5'-difosforanu (ADP), produktu enzymatycznej defosforylacji ATP [6].
W strukturze cząsteczki ATP występują trzy główne części składowe, tj. adenina, rybofuranoza i trifosforan. Te trzy fragmenty łącznie dysponują 15 miejscami wiążącymi [7]. W przyrodzie, w rozpoznawaniu ATP uczestniczą wszystkie te miejsca niekowalencyjnie wiążąc aminokwasy, takie jak Glu156, His155, Phe28, Val35, Thr61, Tbr60, Lys59, His215, Ser55, Ser158, Gln161, Leu 157, Arg152 receptora purynergicznego. Tak liczne oddziaływania prowadzą do specyficznego w tych warunkach rozpoznawania ATP.
Do rozpoznawania i oznaczania ATP w układach syntetycznych opracowano i wykonano szereg różnych czujników. Początkowo stosowane były w tym celu czujniki biochemiczne (biosensory). W jednym z nich wykorzystano zdolność ATP do przeciwdziałania utleniania glukozy katalizowanego glukooksydazą [8]. Jednakże osiągnięty za pomocą chronoamperometrii 10-liM próg wykrywalności (ang. limit of detection, LOD) tego biosensora był zbyt wysoki, aby umożliwić oznaczanie ATP w układach biologicznych. Chociaż wartość LOD innego biosensora, w którym do przetwarzania sygnału detekcji wykorzystano chemiluminescencję produktu reakcji trifosforanu ATP z luminolem był, korzystnie, znacznie niższy (10 nM ATP), to oznaczanie to wymagało zastosowania zbyt wielu różnych drogich odczynników chemicznych [9]. Ostatnio do budowy biosensorów do oznaczania ATP wykorzystano aptamery, tj. wybrane in vitro oligonukleotydy funkcyjne [10,11]. Ze swej natury aptamery cechują się wysoką selektywnością i powinowactwem pod wieloma względami swoimi zaletami przewyższając naturalne receptory rozpoznawania ATP. Jednakże główną wadą biosensorów do oznaczania ATP jest niska trwałość i odtwarzalność oznaczeń, co je dyskwalifikuje w zastosowaniu do rutynowych oznaczeń. Dlatego podjęto szereg prób wytwarzania syntetycznych receptorów ATP zmierzających do budowy czujników chemicznych (chemosensorów).
W ostatnich latach wzrasta zastosowanie molekularnie wdrukowywanych polimerów (ang. molecularly imprinted polymers, MIPs) do biomimetycznego rozpoznawania w celu selektywnego oznaczania [12-19].
Tak więc pożądane byłoby opracowanie czujnika o podwyższonej selektywności względem ATP poprzez zastosowanie specjalnie opracowanego do ich oznaczania elementu rozpoznającego.
Dlatego też celem obecnego wynalazku jest opracowanie i wykonanie substancji chemicznej, która po spolimeryzowaniu mogłaby być wykorzystana do budowy chemicznego czujnika do oznaczania ATP. Kolejnym celem obecnego wynalazku jest opracowanie i wykonanie substancji chemicznej, która mogłaby służyć do wytwarzania materiałów do kontrolowanego uwalniania ATP.
W niniejszym zgłoszeniu, do budowy chemosensora do oznaczania ATP zastosowano cztery różne elektroaktywne pochodne tiofenu jako trzy monomery funkcyjne i jeden monomer sieciujący. Do monomerów funkcyjnych należą uracylofenylo-4-[bis(2,2'-bitienylo)metan] (oznaczany dalej 2, patrz fig. 8), kwas (3-tiofeno-3-yl)borowy (oznaczany dalej 3, patrz fig. 8) i 1-metyloamido-4-[bis(2,2'-bitienylo]metan] (oznaczany dalej 4, patrz fig. 8), a rolę monomeru sieciującego spełnia 3,3'-bis[2,2'-bisPL 220 926 B1
-(2,2'-bitiofeno-5-yl)]tianaften (oznaczany dalej 5). Zastosowane monomery funkcyjne umożliwiają przygotowanie kompleksu w roztworze, w którym ATP jest związany jedenastopunktowo. To znaczy, jego jedenaście miejsc wiążących jest zaangażowanych w tworzenie tego kompleksu. Przygotowanie roztworu do polimeryzacji elektrochemicznej wymagało z jednej strony rozpuszczenia wszystkich jego pięciu składników o różnej polarności w jednym roztworze, a z drugiej zapewnienia warunków elektropolimeryzacji takich, aby wytwarzane w jej trakcie kationorodniki tiofenu nie ulegały zbyt szybkiemu zanikowi. W tym celu opracowano procedurę przygotowania tego roztworu. Zastosowano w niej trzy różne rozpuszczalniki organiczne i wodę. Zsyntetyzowane w niniejszej pracy warstwy polimerów z lukami molekularnymi wdrukowanymi za pomocą cząsteczek ATP są oznaczone jako MIP-ATP. Tworzenie kompleksu do polimeryzacji było modelowane za pomocą obliczeń kwantowochemicznych. Następnie przeprowadzono elektropolimeryzację potencjodynamiczną, aby osadzić warstwy MIP wypełnione cząsteczkami ATP na powierzchniach dwóch różnych przetworników sygnału rozpoznawania molekularnego na analityczny sygnał elektryczny. Po wyekstrahowaniu szablonu ATP z tych warstw otrzymano elementy rozpoznające tych chemoczujników. Jako techniki przetwarzania sygnału wybrano mikrograwimetrię piezoelektryczną (ang. piezoelectric microgravimetry, PM) i impedimetrię pojemnościową (ang. capacitive impedimetry, Cl). Jako sygnał detekcji ATP w roztworze badanym, związany z wypełnianiem i opróżnianiem luk molekularnych polimeru przez cząsteczki oznaczanego ATP, w tej pierwszej służyła zmiana częstotliwości rezonansowej proporcjonalna do zmian masy polimeru a w drugiej - zmiana elektrycznej pojemności warstwy MIP-ATP.
Przedmiotem wynalazku jest związek chemiczny o wzorze strukturalnym (1).
gdzie lub
Wynalazek obejmuje także molekularnie wdrukowany polimer zawierający ten spolimeryzowany związek chemiczny.
PL 220 926 B1
Wynalazek dotyczy także zastosowania tego molekularnie wdrukowanego polimeru jako elementu rozpoznającego czujnika chemicznego do selektywnego oznaczania adenozyno 5'-trifosforanu oraz jego zastosowania jako materiału do kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu.
Wynalazek jest bliżej przedstawiony poniżej w korzystnych przykładach wykonania, z odniesieniem do załączonych rysunków.
Fig. 1 Krzywe potencjodynamiczne dla 0,1 mM 1, 0,1 mM 2, 0,1 mM 3, 0,3 mM 4 i 0,5 mM 5 w 0,1 M (TBA)CIO4, w roztworze o stosunku objętościowym wody do acetonitrylu do toluenu do propanolu jak 1,5 : 6 : 1 : 1,5, zarejestrowane za pomocą platynowej elektrody dyskowej o średnicy 1 mm dla (1) pierwszego, (2) drugiego i (3) trzeciego cyklu zmian potencjału w zakresie potencjałów od 0,50 do 1,25 V vs Ag/AgCI. Szybkość zmian potencjału wynosiła 50 mV/s.
Fig. 2 Krzywe potencjałowej zależności (a) prądu jak również zmian (b) częstotliwości rezonansowej i (c) rezystancji dynamicznej równocześnie zarejestrowane w trakcie osadzania warstwy MIP-ATP za pomocą elektropolimeryzacji potencjodynamicznej na elektrodzie złotej rezonatora kwarcowo-krystaIicznego o podstawowej częstotliwości rezonansowej 10 MHz. Skład roztworu był taki sam jak roztworu podanego w opisie do fig. 1.
Fig. 3 Widma odbiciowo-absorpcyjnej spektroskopii w podczerwieni (IRRAS) dla osadzonej na pozłacanym szkiełku mikroskopowym warstwy (1) ATP, (2) polimeru niewdrukowanego (NIP), jak również MIP-ATP (3) przed i (4) po ekstrakcji ATP za pomocą 0,1 M HCI przez 5 godz. w temperaturze 60°C.
Fig. 4 Wysokiej rozdzielczości widma rentgenowskiej spektroskopii fotoelektronów (XPS) w zakresie energii wiązania elektronu P 2p dla warstwy MIP-ATP (a) przed i (b) po ekstrakcji ATP za pomocą 0,1 M HCI przez 5 godz. w temperaturze 60°C. Dla porównania, za pomocą krzywej przerywanej na panelu (a) pokazano widmo XPS dla warstwy NIP.
Fig. 5. Woltamperogramy różniczkowej woltamperometrii pulsowej dla 0,1 M K4Fe(CN)6 w 0,1 M KNO3, zarejestrowane za pomocą platynowej elektrody dyskowej o średnicy 1 mm pokrytej warstwą MIP-ATP (1) przed i (2) po ekstrakcji szablonu ATP za pomocą 0,1 M HCI przez 5 godz. w temperaturze 50°C. Warstwę MIP-ATP osadzono w warunkach potencjodynamicznych w trakcie trzech cykli zmian potencjału w zakresie potencjałów od 0,50 do 1,25 V vs Ag/AgCl, przy szybkości zmian potencjału 50 mV/s.
Fig. 6 Zmiana pojemności w czasie dla różnych stężeń ATP w 0,1 M KF (pH = 8,3). Zmiana ta była mierzona w warunkach analizy wstrzykowo-przepływowej (FIA) przy potencjale 0,50 V vs Ag/AgCI i częstotliwości 20 Hz dla warstwy MIP-ATP z wyekstrahowanym szablonem ATP pokrywającej platynową elektrodę dyskową o średnicy 1 mm. 0,1 M KF pompowany z szybkością 20 ąL/min służył jako roztwór nośny. Wstawka przedstawia krzywą kalibracyjną oznaczania ATP.
Fig. 7. Zmiana częstotliwości rezonansowej w czasie dla różnych stężeń ATP (pH = 7,8). Zmiana ta była mierzona w warunkach analizy wstrzykowo-przepływowej (FIA), dla warstwy MIP-ATP, z wyekstrahowanym szablonem ATP, pokrywającej elektrodę złotą naparowaną na rezonator kwarcowy o podstawowej częstotliwości rezonansowej 10 MHz. Woda pompowana z szybkością 20 ąL/min służyła jako ciecz nośna. Wstawka przedstawia krzywą kalibracyjną oznaczania ATP.
Fig. 8 Schemat „jedenastopunktowego rozpoznawania 1. (a) Proponowany wzór strukturalny kompleksu 1 z monomerami funkcyjnymi 2, 3 i 4 oraz (b) struktura tego kompleksu zoptymalizowana za pomocą DFT w przybliżeniu B3LYPy6-31g(d).
Bibliografia
[1] C.H. Fiske, Y. Subbarow, Science, 70 (1929) 381.
[2] K. Lohmann, Naturwissenschaften, 17 (1929) 624.
[3] F. Lipmann, Adv. Enzymol., 1 (1941) 99.
[4] K. Maruyama, J. Hist. Biol., 24 (1991) 145.
[5] M.W. Gorman, E.O. Feigl, C.W. Buffington, Clin. Chem., 53 (2007) 318.
[6] D.G. Nicholls, SJ. Ferguson, Bioenergetics 3, Academic Press, San Diego, USA, 2002.
[7] A.-M. Brandt, W. Raksajit, P. Mulo, A. Incharoensakdi, T.A. Salminen, P. Maenpaa, Arch.
Microbiol., 191 (2009) 561.
[8] D. Compagnone, G.G. Guilbault, Anal. Chim. Acta, 340 (1997) 109.
[9] T. Fujiwara, K. Kurahashi, T. Kumamaru, Anal. Chim. Acta, 349 (1997) 159.
[10] Y. Du, B. Li, H. Wei, Y Wang, E. Wang, Anal. Chem., 80 (2008) 5110.
[11] X. Zuo, 5. Song, J. Zhang, D. Pan, L. Wang, C. Fan, J. Am. Chem. Soc., 129 (2007) 1042.
[12] K. Haupt, K. Mosbach, Chem. Rev., 100 (2000) 2495.
PL 220 926 B1
[13] B. Sellergren, TrAC-Trends Anal. Chem., 16 (1997) 310.
[14] C. Malitesta, E. Mazzotta, R.A. Pieca, A. Poma, I. Chianella, S.A. Piletsky, Anal. Bioanal. Chem., 402 (2012) 1827.
[15] S. Suriyanarayanan, P. J. Cywinski, A. J. Moro, G .J. Mohr, W. Kutner, Top. Curr. Chem., 325 (2012) 165.
[16] A. Pietrzyk-Le, C.K.C. Bikram, F. D'Souza, W. Kutner, in: H.-J. Schneider (Ed.), Supramolecular Chemistry for 21st Century Technology, Taylor & Francis/CRC Press, London, UK, 2012, pp. 105-128.
[17] P.S. Sharma, F. D'Souza, W. Kutner, in: D.P. Nikolelis (Ed.), Portable chemical sensors: weapons against bioterrorism, NATO science for peace and security series A: chemistry and biology, Springer, Dordrecht, Netherland, 2012, pp. 63-94.
[18] P.S. Sharma, F. D'Souza, W. Kutner, TrAC-Trends Anal. Chem., 34 (2012) 59.
[19] P.S. Sharma, A. Pietrzyk-Le, F. D'Souza, W. Kutner, Anal. Bioanal. Chem., 402 (2012)
3177.
[20] A. Pietrzyk, W. Kutner, R. Chitta, M.E. Zandler, F. D'Souza, F. Sannicolo, P.R. Mussini, Anal. Chem., 81 (2009) 10061.
[21] F. Sannicolo, S. Rizzo, T. Benincori, W. Kutner, K. Noworyta, J.W. Sobczak, V. Bonometti, L. Falciola, P.R. Mussini, M. Pierini, Electrochim. Acta, 55 (2010) 8352.
[22] T.-P. Huynh, Chandra Bikram K. C, W. Lisowski, F. D'Souza, W. Kutner,
Bioelectrochemistry, 93 (2013) 37.
[23] MJ. Frisch, Gaussian, Inc., Wallingford CT, et al., 2009.
[24] A. Kochman, A. Krupka, J. Grissbach, W. Kutner, B. Gniewinska, L. Nafalski, Electroanalysis, 18 (2006) 2168.
[25] B. Soucaze-Guillous, W. Kutner, Electroanalysis 9(1997) 32.
[26] R. Marczak, V.T. Hoang, K. Noworyta, M.E. Zandler, W. Kutner, F. D'Souza, J. Mater. Chem., 12 (2002) 2123.
[27] R. Cini, G. Giorgi, F. Lasch i, M. Sabat, A. Sabatini, A. Vacca, J. Chem. Soc. Dalton Trans. (1989) 575.
[28] H. Takeuchi, H. Murata, I. Harada, J. Am. Chem. Soc., 110 (1988) 392.
[29] A. Jaramillo, L.D. Spurlock, V. Young, A. Brajter-Toth, Analyst, 124 (1999) 1215.
[30] J.-L. Gong, F.-C. Gong, G.-M. Zeng, G.-L. Shen, R.-Q. Yu, Talanta, 61 (2003) 447.
[31] D.A. Buttry, M.D. Ward, Chem. Rev., 92 (1992) 1355.
Korzystne przykłady wykonania wynalazku
Przykład 1
Otrzymywanie monomerów funkcyjnych
Monomer funkcyjny 3 (fig. 8) i sieciujący 5 przygotowano według wcześniej opracowanych procedur [20, 21], a procedury syntezy monomerów funkcyjnych 2 (fig. 8) i 4 (fig. 8) opracowano w ramach niniejszych badań w sposób następujący.
1-Metyloamido-4-[bis(2,2'-bitienylo)metan] 4. [Bis(2,2'-bitienylo)-(4-carboksyfenylo)metan [22] (500 mg, 1,10 mmol) mieszano przez ~15 min pod azotem w 100-ml kolbie okrągłodennej zawierającej 25 ml toluenu, po czym dodano SOCI2 (1,85 ml, 25 mmol) i pirydynę (2,02 ml, 25 mmol). Otrzymany roztwór ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 3 godz. Następnie odparowano z niego rozpuszczalniki otrzymując zieloną pochodną acylochlorkową. Na tym etapie dodano toluen (25 ml) i otrzymany roztwór mieszano przez 15 min pod azotem. Następnie dodano metyloaminę (0,05 ml, 1,10 mmol) i pirydynę (6,52 ml, 80,625 mmol) a otrzymany roztwór mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Po odparowaniu rozpuszczalników pozostał zielony osad. Osad ten oczyszczono za pomocą chromatografii cieczowej na kolumnie wypełnionej silikażelem stosując jako eluent roztwór chlorofor1 mowo-metanolowy stosunku objętościowym 95:05. Wydajność: 180 mg (35%). 1H NMR (CHCI3-d):
δ (w ppm) 8,10 (d, 2H, fenyl H), 7,45 (d, 2H, fenyl H), 7,20 (dd, 2H, bitiofen H), 7,10 (dd, 2H, bitiofen H), 7,00 (m, 4H, bitiofen H), 6,75 (dd, 2H, bitiofen, H) 5,82 (s, 1H, -CH-), 2,18 (s, 1H, metyl H).
UracyIofenylo-4-[bis(2,2'-bitienylo)metan] 2. Przez 100-ml kolbę kulistą zawierającą 1-metyloamido-4-[bis(2,2'-bitienylo)metan (400 mg, 0,813 mmol), 5-jodouracyl (150 mg, 0,633 mmol), bezwodny K2CO3 (750 mg, 5,42 mmol) tetrakis(trifenylofosfino)pallad(0) (105 mg, 0,09 mmol) przepuszczono azot przez 15 min. Następnie dodano toluen (15 ml) i tetrahydrofuran (15 ml), po czym roztwór ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 16 godz. w temperaturze 90°C. Potem roztwór ochłodzono w tem6
PL 220 926 B1 peraturze pokojowej i odfiltrowano. Po odparowaniu z filtratu rozpuszczalników pozostał jasny żółtoczerwony osad. Oczyszczono go za pomocą chromatografii cieczowej na kolumnie silikażelowej stosując jako eluent roztwór chloroformowo-metanolowy o stosunku objętościowym_90:10. Jasnoczer1 wona (trzecia) frakcja na kolumnie zawierała pożądany produkt. Wydajność: 180 mg (55%). 1H NMR (CHCIs-d): δ (w ppm) 8,01 (s, 1H, uracyl -CH-), 7,20-7,14 (m, 4H, fenyl H), 7,08 (dd, 2H, bitiofen H), 7,02-6,92 (m, 4H, bitiofen H), 6,84 (d, 2H, bitiofen H), 6,74 (dd, 2H, bitiofen H), 5,68 (s, 1H, -CH-).
Przykład 2
Przygotowanie warstw polimerów wdrukowanych molekularnie za pomocą ATP
Warstwy MIP-ATP przygotowano za pomocą polimeryzacji elektrochemicznej w warunkach potencjodynamicznych w zakresie potencjałów od 0,50 do 1,25 V vs Ag/AgCI przy szybkości zmian potencjału 50 mV/s. Wzrost warstwy MIP-ATP, zarówno na platynowej elektrodzie dyskowej jak i na elektrodzie złotej rezonatora kwarcowo-krystalicznego (ang. quartz crystal resonator, QCR), Au-QCR, o podstawowej częstotliwości rezonansowej 10 MHz, kontrolowano za pomocą liczby cykli zmian potencjału. Po zakończeniu elektropolimeryzacji, warstwy MIP-ATP obficie przemyto acetonitrylem, aby usunąć z nich nadmiar roztworu elektrolitu podstawowego. Następnie z warstw wyekstrahowano szablon ATP za pomocą 0,1 M HCI w ciągu 5 godz. w temperaturze 60°C. Do ekstrakcji zastosowano roztwór o tej właśnie kwasowości z uwagi na szybki rozkład grupy trifosforanowej ATP w roztworach o wyższej kwasowości.
Warstwy kontrolnego polimeru niewdrukowanego (ang. non-imprinted polymer, NIP) osadzono z roztworu do elektropolimeryzacji nie zawierającego szablonu ATP stosując taką samą procedurę jak procedura stosowana do osadzania warstw MIP-ATP.
Obliczenia i pomiary
Strukturę kompleksu ATP z monomerami funkcyjnymi 2, 3, i 4 zoptymalizowano (fig. 8) a wartości funkcji termodynamicznych jego tworzenia obliczono za pomocą teorii funkcjonału gęstości (ang. density functional theory, DFT) w przybliżeniu B3LYP/6-31g(d) za pomocą oprogramowania Gaussian 2009 [23].
Pozbawione ATP warstwy MIP-ATP pokrywające Au-QCRs zbadano za pomocą PM w warunkach analizy wstrzykowo-przepływowej (ang. flow-injection analysis, FIA). Wodę zastosowaną jako ciecz nośną pompowano z szybkością 20 μΐ/min przez oprawkę do QCR model EQCM 5610 wyprodukowaną przez Instytut Chemii Fizycznej PAN (Warszawa) [24] za pomocą pompy strzykawkowej model NE-500 firmy New Era Pump Systems (Farmingdale NY, USA). Do zastrzykiwania próbek roztworów badanych stosowano sześciopozycyjny obrotowy zawór dozujący model 7725 i firmy Rheodyne (Cotati CA, USA). Objętość każdej próbki wynosiła 200 μΗ Zastrzykiwane substancje rozpuszczono w roztworze o takim samym składzie jak ciecz nośna, tj. w wodzie w badaniach PM i w 0,1 M KF w badaniach Cl.
Warunki FIA oznaczania ATP w badaniach Cl były takie same jak w badaniach PM tylko oprawkę przepływową do OCR zastąpiono w nich przepływowym naczynkiem elektrochemicznym o dużej objętości i cienkowarstwowym przepływie radialnym z zamocowaną platynową elektrodą dyskową o średnicy 1 mm w izolatorze z PTFE [25]. Zastosowany stały potencjał i częstotliwość prądu zmiennego utrzymywano, odpowiednio, przy 0,50 V vs Ag/AgCI i 20 Hz. Przy tej wartości potencjału na elektrodzie nie przebiegał żaden proces faradajowski.
Osadzanie warstw MIP-ATP na różnych elektrodach badanych
Zgodnie z zoptymalizowaną strukturą kompleksu ATP z monomerami funkcyjnymi (fig. 8b), przygotowano roztwór do polimeryzacji o stosunku wagowym składników 1 : 2 : 3 : 4 : 5 jak 1:1:1: 3 : 5. Zastosowano, korzystnie, wysoki nadmiar monomeru sieciującego 5, aby luki molekularne trwale unieruchomić w sieci polimeru. ATP jest rozpuszczalny a wytworzone roztwory są trwałe, jeżeli do rozpuszczania stosowany jest roztwór wodny o kwasowości w zakresie 7,7 < pH < 8,3. Dlatego do rozpuszczania zastosowano roztwór trzech rozpuszczalników organicznych i wody, w którym objętościowe stężenie wody wynosiło 15%. Obecność 10% toluenu w tym roztworze zapewniła całkowite rozpuszczenie 4. Jednakże toluen nie rozpuszcza się w wodzie. Dlatego propanol o stężeniu 15% umożliwił przygotowanie roztworu homogenicznego. W końcu do roztworu tego dodano duży nadmiar acetonitrylu, który wraz z elektrolitem podstawowym, 0,1 M (TBA)CIO4, był niezbędny do przeprowadzenia elektropolimeryzacji. Końcowy skład roztworu był określony stosunkiem objętościowym wody do acetonitrylu do toluenu do propanolu jak 1,5 : 6 : 1 : 1,5. W zależności od rodzaju przeprowadzonych następnie badań, warstwę MIP-ATP osadzono na dysku platynowym, na Au-QCR, lub na szkiełku mikroskopowym z naparowaną warstwą złota.
PL 220 926 B1
Osadzanie warstwy MIP-ATP na platynowej elektrodzie dyskowej
W celu osadzenia warstwy MIP-ATP na platynowej elektrodzie dyskowej o średnicy 1 mm zastosowano elektropolimeryzację potencjodynamiczną za pomocą trzech cykli zmian potencjału w zakresie od 0,50 do 1,25 V vs Ag/AgCI przy szybkości polaryzacji 50 mV/s (fig. 1). Pomimo obecności wody, inhibitora elektropolimeryzacji, na krzywej zależności prądu od potencjału przy potencjale 0,95 V vs Ag/AgCI pojawił się skumulowany pik anodowy elektropolimeryzacji monomerów funkcyjnych i monomeru sieciującego - pochodnych tiofenu - a na elektrodzie osadziła się dobrze przylegająca do jej powierzchni ciemnobrązowa warstwa MIP-ATP. Jednakże prąd tego piku w kolejnych cyklach był coraz niższy. Ten spadek prądu był najprawdopodobniej związany z zaporowym działaniem warstwy MIP-ATP blokującej przeniesienie ładunku niezbędne do elektropolimeryzacji.
Elektroutlenianie ATP zbadano również w przypadku roztworu nie zawierającego tiofenu. Jak można było oczekiwać na podstawie naszych wcześniejszych badań [26], woltamperometryczny pik anodowy utleniania fragmentu adeninowego ATP występował przy potencjale ~1,0 V. Jednakże nie było go już po jednym cyklu zmian potencjału, ponieważ produkt utleniania ATP najprawdopodobniej adsorbował się na powierzchni elektrody. Adsorpcja ta uniemożliwiała dalsze elektroutlenianie ATP w zakresie potencjałów od 0,50 do 1,25 V. Z uwagi na tę adsorpcję i oporność elektryczną warstwy MIP-ATP, fragment adeninowy ATP nie ulegał elektroutlenianiu w kolejnych cyklach elektropolimeryzacji.
Osadzanie warstwy MIP-ATP na elektrodzie złotej rezonatora kwarcowego (Au-QCR)
Aby osadzić warstwę MIP-ATP na Au-QCR w celu przeprowadzenia pomiarów PM (fig. 2) zastosowano taką samą procedurę jak procedura, opisana powyżej, zastosowana do osadzania takiej warstwy na platynowej elektrodzie dyskowej. W tym elektroosadzaniu (fig. 2a), prąd anodowy wyższy niż analogiczny prąd anodowy osadzania warstwy na elektrodzie platynowej wynikał ze znacznie większej powierzchni elektrody złotej (o średnicy 5 mm). Osadzanie warstwy MIP-ATP na Au-QCR skutkowało spadkiem częstotliwości rezonansowej wskazując na wzrost masy Au-QCR (fig. 2b). Ten spadek częstotliwości był mniejszy w każdym kolejnym cyklu zmian potencjału, zgodnie z coraz mniejszym prądem anodowym rejestrowanym w każdym z tych kolejnych cykli. Co więcej, równocześnie mierzona oporność dynamiczna wzrastała (fig. 2c) wskazując, że wiskoelastyczność warstwy MIP-ATP rosła ze wzrostem jej grubości.
Osadzanie warstwy MIP-ATP na szkiełku mikroskopowym z naparowaną warstwą złota
W celu scharakteryzowania warstwy MIP-ATP za pomocą odbiciowo-absorpcyjnej spektroskopii w podczerwieni (ang. infra-red reflection-absorption spectroscopy, IRRAS), rentgenowskiej spektroskopii fotoelektronowej (ang. X-ray photoelectron spectroscopy, XPS) i spektroskopowej elipsometrii, zarówno warstwę NIP jak i MIP-ATP osadzono na elektrodach złotych naparowanych na szkiełka mikroskopowe stosując taką samą procedurę jak procedura opisana powyżej. Dla porównania, na takiej elektrodzie złotej osadzono również warstwę ATP za pomocą odparowania z kropli 0,1 M roztworu ATP.
Efektywność wdrukowania i ekstrakcji ATP z warstw MIP-ATP
Po elektropolimeryzacji, z warstwy MIP-ATP wyekstrahowano szablon ATP. Postęp ekstrakcji monitorowano za pomocą IRRAS, XPS i różniczkowej woltamperometrii pulsowej (ang. differential pulse voltammetry, DPV).
Za pomocą pomiarów IRRAS zarejestrowano widma dla czterech próbek, w tym dla warstwy ATP (krzywa 1 na fig. 3), NIP (krzywa 2 na fig. 3) oraz MIP-ATP przed (krzywa 3 na fig. 3) i po (krzywa 4 na fig. 3) ekstrakcji szablonu ATP. W widmie dla warstwy MIP-ATP przed ekstrakcją można wyróżnić piki odpowiadające drganiom wiązań w szablonie ATP pomimo znacznego nakładania się tych pików na piki odpowiadające drganiom wiązań polimeru. Są to piki o liczbie falowej 1102 i 875 cm-1 odpowiadające drganiom rozciągającym wiązań ugrupowania, odpowiednio, PO2 i POP w skompleksowanym ATP [27, 28]. Piki te były znacznie niższe po ekstrakcji szablonu ATP. Powyższe zmiany w widmie znacznie uwydatniły się po normalizacji wysokości pików względem wysokiego piku o liczbie falowej 800 cm-1 odpowiadającemu drganiom wiązań w cząsteczce politiofenu.
Usuwanie szablonu ATP z warstwy MIP-ATP potwierdzono za pomocą badań XPS w zakresie energii wiązania elektronów atomu fosforu. W widmie XPS dla warstwy przed ekstrakcją występowały dwa piki o energii wiązania 134 i 134,9 eV (fig. 4a) odpowiadające elektronom, odpowiednio, 2p3/2 i 2p1/2 atomu fosforu [29]. Potwierdzają one obecność ATP w warstwie MIP-ATP, jako że w badanym układzie tylko ATP zawiera fosfor. Pików fosforu nie było natomiast w widmie po ekstrakcji ATP (fig. 4b), co potwierdza całkowite usunięcie ATP z tej warstwy.
O usunięciu szablonu ATP z warstwy MIP-ATP świadczyły ponadto wyniki badań DPV (fig. 5). W badaniach tych zastosowano Fe jako próbnik redoks. Okupujące luki molekularne polimeru
PL 220 926 B1 cząsteczki szablonu utrudniają dyfuzję próbnika do powierzchni elektrody [30]. Dlatego pik elektroutleniania Fe (C N) był stłumiony (krzywa 1 na fig. 5). Jednakże po ekstrakcji ATP pik ten był znacznie wyższy (krzywa 2 na fig. 5), ponieważ opróżnienie wdrukowanych luk molekularnych umożliwiło swobodną dyfuzję próbnika do powierzchni elektrody.
Wyznaczona za pomocą spektroskopowej elipsometrii grubość warstwy MIP-ATP, osadzonej za pomocą elektropolimeryzacji potencjodynamicznej w trakcie trzech cykli zmian potencjału, wynosiła ~100 nm.
Oznaczanie ATP w warunkach analizy wstrzykowo-przepływowej. (FIA)
ATP oznaczano w warunkach FIA stosując warstwę MIP-ATP z wyekstrahowanym szablonem ATP i dwa różne sposoby ilościowego przetwarzania sygnału rozpoznawania ATP na sygnał analityczny, tj. Cl i PM.
Przykład 3
Oznaczanie ATP w warunkach FIA za pomocą chemoczujnika Cl z warstwą rozpoznającą MIP-ATP
W celu oznaczania ATP za pomocą czujnika chemicznego z przetwarzaniem sygnału za pomocą Cl, platynową elektrodę dyskową o średnicy 1 mm pokryto warstwą MIP-ATP o grubości ~100 nm i wyekstrahowano z niej szablon ATP. Do oznaczeń ATP służył pomiar pojemności elektrycznej warstwy podwójnej C. Pojemność tę wyznaczano ze zmierzonej wielkości składowej urojonej impedancji, Z, przy stałej częstotliwości prądu zmiennego, ω, i potencjale przyłożonym do elektrody, według równania (1).
Z” = — ćt)C
Zgodnie z oczekiwaniem, po zastrzyknięciu każdej kolejnej próbki roztworu ATP pojemność początkowo rosła w miarę jak ATP wnikał do warstwy MIP-ATP. Następnie pojemność ta malała powracając do swojej pierwotnej wartości w miarę wymywania ATP z warstwy przez nadmiar roztworu nośnego - elektrolitu podstawowego (0,1 M KF) (fig. 6). Zachowanie to wskazuje na pełną odwracalność wiązania ATP w warstwie. Za zmierzone zmiany pojemności najprawdopodobniej odpowiedzialne były zmiany pojemności części sztywnej elektrycznej warstwy podwójnej z uwagi na znikomy wkład pojemności jej części rozmytej do całkowitej pojemności warstwy przy tak wysokim stężeniu elektrolitu podstawowego o nieadsorbujących się specyficznie jonach 0,1 M KF. Dlatego część sztywną warstwy przybliżono za pomocą modelu Helmholtza. W modelu tym pojemność warstwy jest wprost proporcjonalna do jej przenikalności elektrycznej. Przenikalność ta rośnie ze wzrostem obsadzenia luk molekularnych warstwy MIP-ATP przez analit ATP.
Wysokość piku zmian pojemności był proporcjonalny do stężenia ATP w roztworze badanym. Liniowy zakres stężeniowy rozciągał się przynajmniej od 10 do 100 μΜ (wstawka na fig. 6) spełniając następujące równanie regresji liniowej: C = 0,44 + 0,04 CATP. W równaniu tym CATP oznacza stężenie
ATP w roztworze badanym. Przy stosunku sygnału do szumu, S/N = 3, wartość LOD i czułość tego
-2 -1 chemoczujnika wynosiła, odpowiednio, 0,5 μM ATP i 0,04 nF cm- μM' ze współczynnikiem korelacji 0,99. Niniejsze parametry analityczne przemawiają za tym, że wytworzony czujnik chemiczny nadaje się do oznaczania ATP w układach biologicznych. Korzystnie dla tych oznaczeń ATP, analityczny sygnał Cl był o wiele bardziej stabilny niż sygnał PM w oznaczeniach opisanych poniżej.
Przykład 4
Oznaczanie ATP w warunkach FIA za pomocą chemoczujnika PM z warstwą rozpoznającą MIP-ATP
Do oznaczania ATP w warunkach FIA za pomocą chemosensora PM zastosowano przetwornik Au-QCR pokryty warstwą MIP-ATP o grubości ~100 nm, z wyekstrahowanym szablonem ATP. Przetwornik ten zamontowano w oprawce przepływowej EQCM 5610. Dla dostatecznie sztywnych warstw osadzonych na rezonatorze, jego zmiana częstotliwości rezonansowej, Δ/, jest przeciwna zmianom masy, Δη, zgodnie z zależnością Sauerbry'a, równanie (2) [31].
W równaniu tym f0 to podstawowa częstotliwość rezonansowa Au-QCR (wynosząca 10 MHz dla zastosowanych w niniejszych badaniach rezonatorów), A to akustycznie czynna powierzchnia 2
Au-QCR (wynosząca 0,1963 cm dla rezonatorów stosowanych w niniejszych badaniach), μ to moduł
PL 220 926 B1
-2 -1 ścinający monokryształu kwarcu o cięciu AT (μ = 2,947x10 g s- cm-) a pq to gęstość kwarcu (pq = 2.648 g cm-3). Dla tak cienkich warstw MIP-ATP jakie stosowano w niniejszych badaniach, zmiany ich właściwości wiskoelastycznych można zaniedbać [20].
Po każdym kolejnym zastrzyku roztworu ATP, częstotliwość rezonansowa początkowo malała (fig. 7). Za ten spadek częstotliwości odpowiedzialny był wzrost masy warstwy związany z wnikaniem do niej ATP. Nadmiar przepływającej cieczy nośnej (wody) wypłukiwał następnie ATP z warstwy obniżając jej masę. Przez to częstotliwość rosła aż osiągała wartość częstotliwości tła potwierdzając odwracalne wiązanie ATP w warstwie, wykazane powyżej w pomiarach Cl.
Wysokość piku zmian częstotliwości była przeciwna do stężenia ATP w roztworze badanym przynajmniej w zakresie od 10 do 100 μΜ spełniając następujące równanie regresji liniowej: Δ/ = -3,17-0,32
CATP. Dla S/N=3, wartość LOD tak wytworzonego czujnika chemicznego z warstwą rozpoznającą
MIP-ATP i z przetwarzaniem sygnału za pomocą PM wynosiła 0,1 μΜ przy czułości 0,6 Hz μΜ- ze współczynnikiem korelacji 0,99. Wartość LOD dla chemoczujnika FIA-PM jest więc, korzystnie, o rząd wielkości niższa niż dla chemoczujnika FIA-CI opisanego powyżej. Jednakże pomiary PM są eksperymentalnie bardziej wymagające.
Przykład 5
Kontrolowane uwalnianie ATP
Figury 6 i 7 jednocześnie ilustrują kontrolowane uwalnianie ATP. Po zatężeniu ATP w polimerze, jest on w sposób kontrolowany uwalniany. Dlatego na obu wykresach (fig. 6 i 7) nie występują stopnie (stopnie z dobrze wykształconym plateau występowałyby, gdyby ATP był wiązany w sposób nieodwracalny) po zastrzyknięciu kolejnej porcji roztworu ATP a piki (minima lub maksima), tj. wzrost sygnału wskazujący na zatężanie ATP w polimerze po dokonaniu zastrzyku, po czym spadek tego sygnału pod wpływem nadmiaru roztworu nośnego. Nadmiar tego roztworu wypłukuje ATP z polimeru.
Wnioski
Modelowanie molekularne okazało się sprawnym narzędziem do optymalizowania struktury i badania trwałości kompleksu ATP z zastosowanymi trzema różnymi monomerami funkcyjnymi, którymi były pochodne bis(2,2'-bitienyIo)metanu, przed pomiarami laboratoryjnymi. Zsyntetyzowanie dwóch nowych pochodnych obdarzonych różnymi podstawnikami wiążącymi otworzyło nowe możliwości molekularnego wdrukowania ATP. Rozwiązanie problemu rozpuszczenia w jednym roztworze składników o bardzo różnej polarności i ich elektropolimeryzacja w obecności niewielkiej ilości wody zaowocowały opracowaniem nowej procedury przygotowania warstw MIP wdrukowanych za pomocą szablonu rozpuszczalnego w wodzie, takiego jak ATP.
Elektropolimeryzja potencjodynamiczna w zakresie dodatnich potencjałów znakomicie nadaje się do wdrukowania ATP w polimer zbudowany z pochodnych tiofenu z uwagi na (i) krótki czas przygotowania warstwy M1P wynoszący zaledwie kilka minut potrzebnych do osadzenia warstwy za pomocą zaledwie trzech cykli zmian potencjału, (ii) dobre przywieranie warstwy MIP do podłoża o dostatecznej szorstkości, (iii) łatwa kontrola grubości warstwy za pomocą liczby cykli potencjałowych i (iv) łatwa kontrola porowatości warstwy za pomocą wyboru odpowiednich składników roztworu do elektropolimeryzacji. Analityczne sygnały detekcji rejestrowane w postaci pików a nie stopni wskazują, że wiązanie cząsteczek ATP we wdrukowanych lukach molekularnych MIP-ATP jest w pełni odwracalne. Zachowanie to jest korzystne do wytwarzania czujników chemicznych wielokrotnego użycia do oznaczania ATP. Najniższa wartość LOD dla warstwy MIP-ATP o grubości ~100 nm wynosiła 0,1 μΜ ATP. Osiągnięto ją za pomocą czujnika FIA-PM. Ten czujnik jest preferowany do oznaczania ATP w układach biologicznych, ponieważ przy jego zastosowaniu woda jest stosowana jako ciecz nośna. Wykrywalność chemosensora FIA-CI wynosząca 0,5 pM ATP jest, niekorzystnie, niższa niż wykrywalność chemosensora FIA-PM. Jest ona jednakże wciąż wystarczająco wysoka do oznaczania ATP w układach biologicznych. Możliwe jest także kontrolowane uwalnianie ATP, na przykład sposobami opisanymi w przykładach 3 i 4 opisanych powyżej.

Claims (4)

1. Związek chemiczny o wzorze strukturalnym (wzór 1), gdzie
2. Molekularnie wdrukowany polimer zawierający spolimeryzowany związek chemiczny określony zastrz. 1.
3. Zastosowanie molekularnie wdrukowanego polimeru określonego zastrz. 2 jako elementu rozpoznającego czujnika chemicznego do selektywnego oznaczania adenozyno-5'-trifosforanu.
4. Zastosowanie molekularnie wdrukowanego polimeru określonego zastrz. 2 jako mate riału do kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu.
PL398275A 2012-02-29 2012-02-29 Pochodne tiofenu, molekularnie wdrukowany polimer zawierający spolimeryzowaną pochodną tiofenu i zastosowanie tego polimeru do selektywnego oznaczania i kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu (ATP) PL220926B1 (pl)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL398275A PL220926B1 (pl) 2012-02-29 2012-02-29 Pochodne tiofenu, molekularnie wdrukowany polimer zawierający spolimeryzowaną pochodną tiofenu i zastosowanie tego polimeru do selektywnego oznaczania i kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu (ATP)
GB201302943A GB2503064B (en) 2012-02-29 2013-02-20 Thiophene derivatives, molecularly imprinted polymers formed therefrom and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL398275A PL220926B1 (pl) 2012-02-29 2012-02-29 Pochodne tiofenu, molekularnie wdrukowany polimer zawierający spolimeryzowaną pochodną tiofenu i zastosowanie tego polimeru do selektywnego oznaczania i kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu (ATP)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL398275A1 PL398275A1 (pl) 2013-09-02
PL220926B1 true PL220926B1 (pl) 2016-01-29

Family

ID=48048656

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL398275A PL220926B1 (pl) 2012-02-29 2012-02-29 Pochodne tiofenu, molekularnie wdrukowany polimer zawierający spolimeryzowaną pochodną tiofenu i zastosowanie tego polimeru do selektywnego oznaczania i kontrolowanego uwalniania adenozyno-5'-trifosforanu (ATP)

Country Status (2)

Country Link
GB (1) GB2503064B (pl)
PL (1) PL220926B1 (pl)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL422854A1 (pl) * 2017-09-15 2019-03-25 Instytut Chemii Fizycznej Polskiej Akademii Nauk Polimer wydrukowany molekularnie za pomocą p-synefryny i selektywny chemoczujnik do elektrochemicznego oznaczania p-synefryny z warstwą polimeru wydrukowanego molekularnie jako jednostką rozpoznającą

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL223094B1 (pl) * 2013-06-03 2016-10-31 Inst Chemii Fizycznej Polskiej Akademii Nauk Nowa pochodna bis(2,2'-bitienylo)metanu i sposób jej wytwarzania, warstwa molekularnie wdrukowanego polimeru, sposób jej wytwarzania i jej zastosowanie do selektywnego wykrywania i oznaczania związków nitroaromatycznych

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5007905B2 (ja) * 2007-08-29 2012-08-22 公立大学法人大阪府立大学 分子鋳型を有するポリマーを備えたセンサー

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL422854A1 (pl) * 2017-09-15 2019-03-25 Instytut Chemii Fizycznej Polskiej Akademii Nauk Polimer wydrukowany molekularnie za pomocą p-synefryny i selektywny chemoczujnik do elektrochemicznego oznaczania p-synefryny z warstwą polimeru wydrukowanego molekularnie jako jednostką rozpoznającą

Also Published As

Publication number Publication date
PL398275A1 (pl) 2013-09-02
GB2503064B (en) 2020-01-01
GB201302943D0 (en) 2013-04-03
GB2503064A8 (en) 2014-02-05
GB2503064A (en) 2013-12-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yan et al. Two-dimensional porphyrin-based covalent organic framework: A novel platform for sensitive epidermal growth factor receptor and living cancer cell detection
Yang et al. Electrochemical biosensor based on three-dimensional reduced graphene oxide and polyaniline nanocomposite for selective detection of mercury ions
Huynh et al. Cytosine derivatized bis (2, 2′-bithienyl) methane molecularly imprinted polymer for selective recognition of 6-thioguanine, an antitumor drug
Mintz Hemed et al. On-demand, reversible, ultrasensitive polymer membrane based on molecular imprinting polymer
Aghaei et al. A novel capacitive biosensor for cholesterol assay that uses an electropolymerized molecularly imprinted polymer
Silva et al. An ultrasensitive human cardiac troponin T graphene screen-printed electrode based on electropolymerized-molecularly imprinted conducting polymer
Pietrzyk et al. Melamine acoustic chemosensor based on molecularly imprinted polymer film
Zhong et al. Pyrrole–phenylboronic acid: A novel monomer for dopamine recognition and detection based on imprinted electrochemical sensor
Huynh et al. Molecularly imprinted polymer for recognition of 5-fluorouracil by RNA-type nucleobase pairing
Pietrzyk et al. Molecularly imprinted polymer (MIP) based piezoelectric microgravimetry chemosensor for selective determination of adenine
Dabrowski et al. Early diagnosis of fungal infections using piezomicrogravimetric and electric chemosensors based on polymers molecularly imprinted with D-arabitol
Mohanan et al. Selective electrochemical detection of dopamine based on molecularly imprinted poly (5-amino 8-hydroxy quinoline) immobilized reduced graphene oxide
Wang et al. A highly sensitive molecularly-imprinted electrochemical sensor based on a conducting PEDOT/SA hydrogel for the detection of cortisol with exceptional antifouling properties
Huynh et al. Electrochemically synthesized molecularly imprinted polymer of thiophene derivatives for flow-injection analysis determination of adenosine-5′-triphosphate (ATP)
Maouche et al. A surface acoustic wave sensor functionalized with a polypyrrole molecularly imprinted polymer for selective dopamine detection
Gliga et al. Electrochemical platform for the detection of adenosine using a sandwich-structured molecularly imprinted polymer-based sensor
Putra et al. Selective non-enzymatic uric acid sensing in the presence of dopamine: electropolymerized poly-pyrrole modified with a reduced graphene oxide/PEDOT: PSS composite
Wang et al. Graphene nanostructures with plasma polymerized allylamine biosensor for selective detection of mercury ions
Prasad et al. Development of molecularly imprinted polymer nanoarrays of N-acryloyl-2-mercaptobenzamide on a silver electrode for ultratrace sensing of uracil and 5-fluorouracil
Regasa et al. Novel multifunctional molecular recognition elements based on molecularly imprinted poly (aniline-co-itaconic acid) composite thin film for melamine electrochemical detection
Luhar et al. An impedometric sensor based on boronic acid@ plastic chip electrode for sensitive detection of prostate cancer biomarker spermine
Aytaç et al. A novel polypyrrole–phenylboronic acid based electrochemical saccharide sensor
Li et al. A sensitive non-enzyme sensing platform for glucose based on boronic acid–diol binding
Wikeley et al. Pyrene-appended boronic acids on graphene foam electrodes provide quantum capacitance-based molecular sensors for lactate
Ćwik et al. Electrochemical studies of self-assembled monolayers composed of various phenylboronic acid derivatives