PL221807B1 - Nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego, sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego, i zastosowanie nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego do wytwarzania leku immunosupresyjnego zwłaszcza zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów - Google Patents
Nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego, sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego, i zastosowanie nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego do wytwarzania leku immunosupresyjnego zwłaszcza zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepówInfo
- Publication number
- PL221807B1 PL221807B1 PL402374A PL40237413A PL221807B1 PL 221807 B1 PL221807 B1 PL 221807B1 PL 402374 A PL402374 A PL 402374A PL 40237413 A PL40237413 A PL 40237413A PL 221807 B1 PL221807 B1 PL 221807B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- mycophenoyl
- amide derivatives
- nmr
- mhz
- mycophenolic acid
- Prior art date
Links
- -1 amide derivatives of mycophenolic acid Chemical class 0.000 title claims abstract description 42
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 3
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 title 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 210
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 claims description 64
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 58
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 claims description 57
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 37
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 36
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 17
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonylcarbamate Chemical compound CCOC(=O)NC(=O)OCC PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide monohydrate Substances [Li+].O.[OH-] GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 229940040692 lithium hydroxide monohydrate Drugs 0.000 claims description 14
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 2
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 abstract description 6
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 abstract 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 abstract 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 112
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 108
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 62
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 54
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 32
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 29
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 29
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 28
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 28
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 25
- OMFRMAHOUUJSGP-IRHGGOMRSA-N bifenthrin Chemical compound C1=CC=C(C=2C=CC=CC=2)C(C)=C1COC(=O)[C@@H]1[C@H](\C=C(/Cl)C(F)(F)F)C1(C)C OMFRMAHOUUJSGP-IRHGGOMRSA-N 0.000 description 25
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 22
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 16
- OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-2h-pyridin-1-amine Chemical compound CN(C)N1CC=CC=C1 OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 13
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 13
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N acetone d6 Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C(=O)C([2H])([2H])[2H] CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 10
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 10
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- WWOOEYCTHQFRGE-UHFFFAOYSA-N mycophenolic acid amide Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(N)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 WWOOEYCTHQFRGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 9
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 8
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 7
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 7
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- KQSSATDQUYCRGS-UHFFFAOYSA-N methyl glycinate Chemical compound COC(=O)CN KQSSATDQUYCRGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 238000000551 statistical hypothesis test Methods 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 3
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical group OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000013043 cell viability test Methods 0.000 description 2
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- TVHCXXXXQNWQLP-DMTCNVIQSA-N methyl (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O TVHCXXXXQNWQLP-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 2
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- HPLNTJVXWMJLNJ-YWEYNIOJSA-N (z)-2-cyano-3-(3-hydroxyphenyl)prop-2-enoic acid Chemical compound OC(=O)C(\C#N)=C/C1=CC=CC(O)=C1 HPLNTJVXWMJLNJ-YWEYNIOJSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008541 D-alanines Chemical class 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical class OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 229930182819 D-leucine Natural products 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N D-valine Chemical compound CC(C)[C@@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182831 D-valine Natural products 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001431 Hyperuricemia Diseases 0.000 description 1
- GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N IMP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- ZDLDXNCMJBOYJV-YFKPBYRVSA-N L-arginine, methyl ester Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ZDLDXNCMJBOYJV-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 150000008539 L-glutamic acids Chemical class 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- RTGDFNSFWBGLEC-UHFFFAOYSA-N Mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1CC=C(C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- IYUKFAFDFHZKPI-AENDTGMFSA-N [(2r)-1-methoxy-1-oxopropan-2-yl]azanium;chloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](C)N IYUKFAFDFHZKPI-AENDTGMFSA-N 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940030999 antipsoriatics Drugs 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940107810 cellcept Drugs 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 150000002332 glycine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 235000013902 inosinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- DWKPPFQULDPWHX-VKHMYHEASA-N l-alanyl ester Chemical compound COC(=O)[C@H](C)N DWKPPFQULDPWHX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- CEMZBWPSKYISTN-RXMQYKEDSA-N methyl (2r)-2-amino-3-methylbutanoate Chemical compound COC(=O)[C@H](N)C(C)C CEMZBWPSKYISTN-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- VSDUZFOSJDMAFZ-SECBINFHSA-N methyl (2r)-2-amino-3-phenylpropanoate Chemical compound COC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 VSDUZFOSJDMAFZ-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- DWKPPFQULDPWHX-GSVOUGTGSA-N methyl (2r)-2-aminopropanoate Chemical compound COC(=O)[C@@H](C)N DWKPPFQULDPWHX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- CEMZBWPSKYISTN-YFKPBYRVSA-N methyl (2s)-2-amino-3-methylbutanoate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)C(C)C CEMZBWPSKYISTN-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SWVMLNPDTIFDDY-FVGYRXGTSA-N methyl (2s)-2-amino-3-phenylpropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SWVMLNPDTIFDDY-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 1
- IYUKFAFDFHZKPI-DFWYDOINSA-N methyl (2s)-2-aminopropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@H](C)N IYUKFAFDFHZKPI-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- QVDXUKJJGUSGLS-LURJTMIESA-N methyl L-leucinate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CC(C)C QVDXUKJJGUSGLS-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- VSDUZFOSJDMAFZ-VIFPVBQESA-N methyl L-phenylalaninate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 VSDUZFOSJDMAFZ-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 1
- 229940083410 myfortic Drugs 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000747 viability assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Przedmiotem wynalazku są nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H, albo CH3, albo CH2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3 albo H. Przedmiotem wynalazku są również sposoby otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2. Wynalazek obejmuje również zastosowanie nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo CH2Ph, albo CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2 albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3 albo H do wytwarzania leku immunosupresyjnego, zwłaszcza leku zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego, sposób ich otrzymywania oraz ich zastosowanie do wytwarzania leku o działaniu immunosupresyjnym, zwłaszcza mającego zastosowanie w transplantologii przy zmniejszaniu ryzyka odrzucenia przeszczepów.
Kwas mykofenolowy (MPA) o wzorze 1 stanowiący produkt wyjściowy do otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, jest związkiem naturalnym o działaniu immunosupresyjnym, przeciwdrobnoustrojowym i przeciwnowotworowym oraz mającym zastosowanie jako lek przeciw łuszczycy i hiperurykemii.
Znane jest zastosowanie MPA w transplantologii jako leku zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów narządów.
Pomimo postępów w leczeniu immunosupresyjnym wciąż nie udało się wyeliminować ryzyka odrzucenia przeszczepu. Po przeszczepie, białka pochodzące od narządu dawcy są rozpoznawane jako obce, co wywołuje silną reakcję immunologiczną biorcy, a w konsekwencji niszczenie organu. Stosowane w transplantologii leki immunosupresyjne powodują efekty uboczne - obniżają aktywność układu odpornościowego, co wiąże się z podwyższonym ryzykiem infekcji i nowotworzenia. Z tego względu poszukuje się nowych analogów MPA i jego pochodnych, które w większym stopniu zmniejszyłyby ryzyko odrzutów, przy stosowaniu mniejszej dawki i ograniczeniu toksyczności leku.
Do tej pory zsyntezowano wiele analogów MPA, które zawierają cykliczne ugrupowania takie jak: monocykliczne fenole, niefenolowe analogi oraz monocykliczne aminy.
Znane są amidowe pochodne kwasu mykofenolowego z przyłączonymi poprzez grupę karboksylową resztami cukrowymi i aminokwasami takimi jak glicyna i racemiczna alanina. Pochodne cukrowe stanowią teki przeciwnowotworowe i przeciw łuszczycy.
Nie są znane zastosowania pochodnej glicynowej i racemicznej pochodnej alaninowej jako leki w transplantologii.
Znane amidowe pochodne MPA otrzymuje się w reakcji z udziałem mikroorganizmów. Pocho dne te - W-mykofenoiloglicynę, jak i W-mykofenoiloalaninę uzyskuje się jako metabolity przemiany kwasu mykofenolowego przez mikroorganizmy Mucor rammamianus lub też w reakcji chemicznej kwasu mykofenolowego z estrami odpowiednich aminokwasów w obecności W,W'-dicykloheksylokarbodiimidu, a następnie alkalicznej hydrolizy otrzymanych estrów.
Znane są również inne pochodne kwasu mykofenolowego takie jak ester morfolinowy kwasu mykofenolowego - mykofenolan mofetylu (MMF, CellCept®, Roche AG) znany jako środek zmniejszający ryzyko odrzucenia przeszczepów narządów, takich jak: nerki, wątroba i serce.
Inną znaną postacią MPA jest sól sodowa kwasu mykofenolowego (MPS, Myfortic®, Novartis Farma AG).
Inną znaną modyfikacją MPA jest kwas (S)-a-metylomykofenolowy, który ma silniejsze działanie immunosupresyjne niż MPA.
Wynalazek dotyczy nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H, albo CH3, albo CH2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a oznacza CH3 albo H.
Wynalazkiem jest również sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo Ch2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2^NH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3, który charakteryzuje się według wynalazku tym, że sporządza się mieszaninę reakcyjną zawierającą od 29% do 36% masowych kwasu mykofenolowego, oraz od 29% do 36% masowych estru aminokwasu takiego jak glicyna albo alanina, albo fenyloalanina, albo walina, albo leucyna, albo kwas glutaminowy, w postaci chlorowodorku rozpuszczonego w bezwodnym W,W-dimetyloformamidzie, oraz od 14% do 21% masowych 4-W,W-dimetyloaminopirydyny, rozpuszczonej w bezwodnym W,W-dimetyloformamidzie. Mieszaninę reakcyjną chłodzi się do temperatury od 0 do 10°C, a następnie do mieszaniny reakcyjnej wprowadza się od 24% do 31% masowych odczynnika kondensującego w postaci chlorowodorku 1-etylo(3-dimetyloaminopropylo)karbodiimidu i utrzymując temperaturę reakcji w zakresie od 0°C do 10°C, korzystnie 0°C, miesza się korzystnie przez okres od 1 do 2 godzin, po czym kontynuuje się reakcję sukcesywnie zwiększając temperaturę do 18 do 26°C przez okres od 24 do 48 godzin. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się wodę i octan etylu w takiej ilości, aby utworzyć dwie klarowne fazy, a następnie rozdziela się fazy i przemywa się korzystnie 10% roztworem wodorowęglanu sodu i wodą,
PL 221 807 B1 po czym oddzieloną warstwę organiczną korzystnie osusza się bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje się do uzyskania czystego produktu.
Wynalazkiem jest również sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo CH2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza H który charakteryzuje się tym, że rozpuszcza się w metanolu od 64% do 77% masowych amidowej pochodnej kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo Ch2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3, a następnie dodaje się od 23% do 36% masowych monohydratu wodorotlenku litu rozcieńczonego w wodzie. Uzyskaną mieszaninę reakcyjną miesza się w temperaturze pokojowej przez okres od 12 do 48 godzin, korzystnie 24 godzin, a następnie tą mieszaninę reakcyjną zakwasza się kwasem solnym i dodaje octanu etylu w takiej ilości aby utworzyć dwie klarowne fazy. Następnie rozdziela się fazy od siebie, po czym warstwę organiczną korzystnie osusza się bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje się do uzyskania czystego produktu.
Wynalazkiem jest również zastosowanie nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo CH2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3 albo H do wytwarzania leku immunosupresyjnego, zwłaszcza leku zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów.
Nowe amidowe pochodne według wynalazku stanowią prostą modyfikację struktury cząsteczki kwasu mykofenolowego i wykazują podwyższoną aktywność, przy jednocześnie niższej toksyczności, w porównaniu z kwasem mykofenolowym.
Nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego stanowią związki wykazujące immunosupresyjną aktywność wobec komórek układu odpornościowego, dzięki czemu mogą być zastosowane w transplantologii do wytwarzania leku immunosupresyjnego zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów.
Dzięki zachowaniu konfiguracji chiralnego atomu węgla reszty aminokwasowej, a także ze względu na wielkość i polarność podstawników nowe amidowe pochodne charakteryzują się silnymi właściwościami immunosupresyjnymi. Amidowe pochodne dzięki obecności na końcu łańcucha bocznego polarnej grupy funkcyjnej, mogą oddziaływać z Ser 276 dehydrogenazy monofosforanu inozyny, hamując proliferację komórek.
Zastosowanie 1-etylo(3-dimetytoaminopropylo)karbodiimidu (EDCI) jako odczynnika kondensującego w reakcji kwasu mykofenolowego z estrami aminokwasów pozwala na otrzymanie z dobrą wydajnością czystych pochodnych.
Korzyścią sposobu według wynalazku jest brak konieczności oczyszczania chromatograficznego otrzymanych nowych pochodnych kwasu mykofenolowego, co umożliwia zwiększanie wydajności reakcji.
Pełen dowód struktury nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego został opisany w przykładach otrzymywania nowych amidowych pochodnych o ogólnym wzorze 2, sposób ich otrzymywania oraz ich właściwości biologiczne ilustrują podane niżej przykłady.
Sposób według wynalazku przedstawiono na fig. 1, na której oznaczono jako 1 kwas mykofenolowy MPA, jako 2 estry metylowe chlorowodorków aminokwasów, jako 3 nowe amidowe pochodne o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3 albo CH2Ph albo CH(CH3)2 albo CH2CH(CH3)2 albo CH2CH2COOCH3 albo CH(OH)CH3, albo (CH2UNH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3, jako 4 nowe amidowe pochodne o ogólnym wzorze 2 gdzie R oznacza H albo CH3 albo CH2Ph albo CH(CH3)2 albo CH2CH(CH3)2 albo CH2CH2COOH albo CH(OH)CH3 albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza H. W sposobie według wynalazku związki oznaczone jako 2 przekształca się za pomocą odczynnika kondensującego 1-etylo(3-dimetyloaminopropylo)karbodiimidu oznaczonego jako EDCI w amidowe pochodne kwasu mykofenolowego oznaczone na fig. 1 jako związki 3. Związki 3, według sposobu według wynalazku hydrolizuje się za pomocą rozcieńczonego roztworu LiOH do innych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego oznaczonych na fig. 1 jako związki 4. W reakcji tej odtwarzana jest wolna grupa karboksylowa w części aminokwasowej.
W tabeli 1 przedstawiono wydajności reakcji otrzymywania nowych amidowych pochodnych, opisanych w przykładach wykonania jako związki 3 i 4, w zależności od użytego związku 2. W tabelach od 2 do 6 przedstawiono wyniki badań aktywności biologicznej in vitro nowych amidowych pochodnych.
Strukturę chemiczną nowych amidowych pochodnych potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS
PL 221 807 B1 (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Uzyskane na widmie NMR sygnały odpowiadają atomowi wodoru i węgla występującym w badanych cząsteczkach pod względem sposobu połączenia oraz ilości atomów danego rodzaju, w MS potwierdzono masę cząsteczkową jonu macierzystego, skręcalność optyczna pozwoliła scharakteryzować substancje chiralne.
Przedstawione wyniki dowodzą, że sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego według wynalazku prowadzi do uzyskania żądanych produktów o ogólnym wzorze 2.
P r z y k ł a d 1
Otrzymywanie amidowej pochodnej kwasu mykofenolowego - estru metylowego W-mykofenoilo-D-alaniny 3, a następnie W-mykofenoilo-D-alaniny 4
0,04 g (0,125 mmola) kwasu mykofenolowego (MPA) 1, 0,178 mmola chlorowodorku estru metylowego D-alaniny 2, i 0,022 g (0,178 mmola) 4-W,W-dimetytoaminopirydyny (DMAP) rozpuszczono w 1,5 ml bezwodnego W,W-dimetyloformamidu (DMF). Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,033 g (0,170 mmola) 1-etylo(3-dimetyloaminopropylo)karbodiimidu (EDCI). Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 15 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDITOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®, model: APII-6W-10). Dane estru metylowego pochodnej D-alaniny 3 przedstawiono poniżej:
| 1H NMR | (CDCla, 500 MHz) δ ppm: 1,34 (d, 3H, J=7,3 Hz); 1,81 (s, 3H); 2,15 (s, 3H); 2,31 (s, 4H); 3,39 (d, 2H, J=7,3 Hz); 3,74 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 4,55-4,58 (m, 1H); 5,20 (s, 2H); 5,26 (t, 1H, J=6,8 Hz); 6,02 (s, 1H); 7,67 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCla, 500 MHz) δ ppm: 173,85; 173,15; 172,39; 163,90; 153,84; 144,26; 134.65; 123,10; 122,33; 116,98; 106,60; 70,27; 61,24; 52,68; 48,10; 35,27; 35,22; 22,83; 18,70; 16,39; 11,79 |
| MS (DHB) | m/z 406,2 (M+) C21H2yOyN=405,4 |
| temp. top. | 135-137°C |
| skręcalność [afc25 | -4° (c=1, CHCla) |
| TLC | Rf=0,56 (CH2Cl2 : MeOH; 20 : 1 v/v) |
gdzie:
DHB oznacza kwas 2,5-dihydroksybenzoesowy - standardowa matryca w spekrometrii masowej; TLC oznacza technika chromatografii cienkowarstwowej.
Następnie 0,1 mmola otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-D-alaniny 3 rozpuszczono w 1 ml metanolu, a następnie dodano 0,3 mmola monohydratu wodorotlenku litu w 1 ml wody, po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4 W-mykofenoilo-D-alaninę. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APH-6W-10). Dane W-mykofenoilo-D-alaniny 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 1,31 (d, 3H, J=7,3 Hz): 1,61 (s, 3H); 2,05-2,07 (m, 3H); 2,26-2,32 (m, 2H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,795 (s, 3H); 4,38-4,41 (m, 1H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,32 (s, 2H); 7,28 (d, 1H, J=6,8 Hz). |
| 13C NMR | (aceton-d6, DMSO, 500 MHz) δ ppm: 174,13; 172,84; 164,21; 153,86; 145,61; 135,02; 127,62; 127,58; 123,43; 117,52; 106,83; 70,48; 61,30; 48,25; 35,87; 35,14; 23,10; 17,89; 16,32, 11,51 |
| MS (DHB) | m/z 392 (M+) C20H25O7N=391,4 |
| temp. top. | 113-116°C |
| skręcalność [a]D25 | 2° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,73 (CH2Cl2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 2
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-L-alaniny 3, a następnie W-mykofenoilo-L-alaniny 4 0,16 g (0,5 mmola) MPA 1, 0,712 mmola chlorowodorku estru metylowego L-alaniny 2 i 0,088 g (0,712 mmola) DMAP rozpuszczono w 6,0 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,132 g (0,680 mmola) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 15 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane chemiczne estru metylowego W-mykofenoilo-L-alaniny 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCla, 500 MHz) δ ppm: 1,34 (d, 3H, J=7,3 Hz); 1,81 (s. 3H); 2,15 (s, 3H); 2,32 (s, 4H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,74 (s, 3H); 3,77 (s, 3H); 4,55-4,58 (m, 1H); 5,205 (s, 2H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 6,02 (s, 1H); 7,675 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCls, 200 MHz) δ ppm: 173,58; 172,88; 172,05; 163,66; 153,62; 143,99; 134,40; 122,86; 122,08; 116,71; 106,36; 70,01; 60,98; 52,40; 47,85; 35,40; 35,40; 22,59; 18,48; 16,15; 11,54. |
| MS (DHB) | m/z 406,3 (M+) C21H27O7N=405,4 |
| temp. top. | 138-142°C |
| skręcalność [afc25 | +4° (c=1, CHCls) |
| TLC | Rf=0,58 (CH2Cl2 : MeOH; 20 : 1 v/v) |
Następnie 0,4 mmola otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-L-alaniny 3 rozpuszczono w 4 ml metanolu, a następnie dodano 1,2 mmola monohydratu LiOH w 4 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie (chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v). Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4, W-mykofenoilo-L-alaninę. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej potwierdzono
13 metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APH-6W-10). Dane chemiczne otrzymanego W-mykofenoilo-L-alaniny 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 1,31 (d, 3H, J=7,3 Hz); 1,81 (s, 3H); 1,97 (s, 1H); 2,05-2,07 (m, 3H); 2,26-2,31 (m, 2H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,795 (s, 3H); 4,38-4,41 (m, 1H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,315 (s, 2H);7,27 (d, 1H, J=6,8 Hz). |
| 13C NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 173,62; 172,24; 163,69; 153,34; 145,35; 134,61; 122,91; 122,02; 117,06; 106,58; 69,91; 60,74; 47,78; 35,34; 34,54; 22,56; 17,23; 15,65; 10,80 |
| MS (DHB) | m/z 391,9 (M+) C20H25O7N=391,4 |
| temp. top. | 114-117°C |
| skręcalność [a]D25 | -2° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,74 (CH2CI2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 3
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoiloglicyny 3, a następnie W-mykofenoiloglicyny 4 0,20 g (0,62 mmola) MPA 1, 0,890 mmola chlorowodorku estru metylowego glicyny 2 i 0,110 g (0,890 mmola) DMAP rozpuszczono w 8,0 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,165 g (0,850 mmola) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 10 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane chemiczne otrzymanego estru metylowego W-mykofenoiloglicyny 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR (CDCI3) | (CDCls, 500 MHz) δ ppm: 1,82 (s, 3H); 2,15 (s, 3H); 2,34 (s, 4H); 3,40 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,75 (s, 3H); 3,77 (s, 3H); 3,98 (d, 2H, J=5,4 Hz); 5,205 (s, 2H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,98 (s, 1H); 7,68 (s, 1H). |
| '3C NMR (CDCla) | (CDCls, 200 MHz) δ ppm: 173,26; 173,26; 170,94; 164,14; 154,09; 144,52; 134,87; 123,55; 122,57; 117,24; 106,87; 70,51; 61,48; 52,78; 41,61; 35,53; 35,28; 23,09; 16,58; 12,02. |
| MS (DHB) | m/z 392,1 (M+) C20H25O7N=391,4 |
| temp. top. | 130-133°C |
| skręcalność [a]D25 | - |
| TLC | Rf=0,6 (CH2C)2 : MeOH; 10 : 1 v/v) |
Następnie 0,5 mmola otrzymanego estru metylowego W-mykofenoiloglicyny 3 rozpuszczono w 5 ml metanolu, a następnie dodano 1,5 mmola monohydratu wodorotlenku litu w 5 ml wody, po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu, otrzymywano czystą W-mykofenoiloglicynę 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 4 1 potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane W-mykofenoilo-glicyny 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (CDCh, 500 MHz) δ ppm: 1,83 (s. 3H); 2,15 (s, 1H); 2,28-2,34 (m, 3H); 3,31 (s, 3H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz): 3,795 (s, 3H); 5,25 (s, 2H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz). |
| 13C NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 172,58; 172,20; 170,81; 163,67; 153,40; 145,37; 134,62; 122,98; 122,11; 117,05; 106,64; 69,88; 60,74; 40,66; 35,40; 34,60; 22,57; 15,62; 10,80 |
| MS (DHB) | m/z 378,1 (M+) C19H23OyN=377,4 |
| temp. top. | 114-118°C |
| skręcalność [afc25 | - |
| TLC | Rf=0,67 (CH2Cl2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 4
Otrzymywanie diestru metylowego kwasu W-mykofenoilo-L-glutaminowego 3 a następnie kwasu W-mykofenoilo-L-glutaminowego 4
0,40 g (1,25 mmola) MPA 1, 1,78 mmola chlorowodorku diestru metylowego kwasu L-glutaminowego 2 i 0,22 g (1,78 mmola) DMAP rozpuszczono w 20 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,330 g (1,70 mmola) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godziny. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 10 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane diestru metylowego kwasu W-mykofenoilo-L-glutaminowego 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCh, 500 MHz) δ ppm: 1,80 (s, 3H); 1,9-1,97 (m, 2H); 2,14 (s, 3H); 2,27-2,35 (m, 4H); 2,36-2,42 (m, 2H); 3,38-3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,66 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 4,6-4,61 (m, 1H); 5,19 (s, 3H); 5,24-5,26 (t, 1H, J=6,3 Hz); 6,27 (d, 1H, J=7,3 Hz). |
| 13C NMR | (CDCI3, 500 MHz) δ ppm: 173,54; 173,14; 173,02; 172,61; 163,88; 153,83; 144,30; 134,55; 123,16; 122,28; 116,99; 106,61; 70,28; 61,24; 52,77; 52,10; 51,74; 35,23; 35,13; 30,20; 27,55; 22,82; 16,37; 11,80. |
| MS (DHB) | m/z 478,1 (M+) C24Hg1O9N=477,5 |
| temp. top. | 76-79°C |
| skręcalność [a]D25 | + 12° (c=1, CHClg) |
| TLC | Rf=0,72 (CH2Cl2 : MeOH; 10 : 1 v/v) |
Następnie 1,0 mmol otrzymanego diestru metylowego pochodnej kwasu L-glutaminowego 3 rozpuszczono w 10 ml metanolu, a następnie dodano 6,0 mmoli monohydratu wodorotlenku litu w 10 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej potwierdzono metodą pro1 tonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane kwasu W-mykofenoilo-L-glutaminowego 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 1,82 (s, 3H); 1,89-1,95 (m, 2H); 1,97 (s. 1H); 2,06 (s, 1H); 2,17 (s, 3H); 2,19-2,46 (m, 6H, nałożenie dwóch multipletów); 3,40 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3.79 (s, 3H); 4,47-4,52 (m, 1H); 5,27-5,30 (t, 1H, J=6,3 Hz); 5,30 (s, 3H); 7,34 (d, 1H, J=7,3 Hz). |
| 13C NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 173,420; 172,70; 172,61; 172,22; 163,66; 153,40; 145,36; 134,60; 122,91; 122,07; 117,06; 106,64; 69,89; 60,76; 51,54; 51,45; 35,35; 34,63; 27,17; 22,56; 15,68; 10,82. |
| MS (DHB) | m/z 450,1 (M+) C22H27OgN=449,4 |
| temp. top. | 109-113°C |
| skręcalność [afc25 | -4° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,68 (CH2Cl2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 5
Otrzymywanie diestru metylowego kwasu N-mykofenoilo-D-glutaminowego 3 a następnie kwasu W-mykofenoilo-D-glutaminowego 4
5,00 g (15,62 mmola) MPA 1, 22,25 mmola chlorowodorku diestru metylowego kwasu L-glutaminowego 2 i 2,75 g (22,25 mmola) DMAP rozpuszczono w 200 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 4,12 g (21,25 mmola) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 h. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 10 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane diestru metylowego kwasu W-mykofenoilo-D-glutaminowego 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCI3, 500 MHz) δ ppm: 1,81 (s, 3H); 1,9-1,98 (m, 2H); 2,15 (s, 3H); 2,27-2,35 (m, 4H); 2,36-2,42 (m, 2H); 3,38-3,395 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,67 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 4,6-4,60 (m, 1H); 5,20 (s, 3H); 5,25-5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 6,27 (d, 1H, J=7,8 Hz). |
| 13C NMR | (CDCI3, 500 MHz) δ ppm: 173,51; 173,13; 172,80; 172,63; 163,89; 153,85; 144,28; 134,59; 123,13; 122,29; 116,97; 106,62; 70,27; 61,24; 52,74; 52,07; 51,72; 35,23; 35,17; 30,21; 27,60; 22,83; 16,39; 11,79. |
| MS (DHB) | m/z 477,9 (M+) C24Hg1O9N=477,5 |
| temp. top. | 75-78 °C |
| skręcalność [a]D25 | -12° (c=1, CHClg) |
| TLC | Rf=0,70 (CH2Cl2 : MeOH; 10 : 1 v/v) |
Następnie 10 mmoli mmola otrzymanego diestru metylowego pochodnej kwasu D-glutaminowego 3 rozpuszczono w 120 ml metanolu, a następnie dodano 60 mmoli monohydratu wodorotlenku litu w 120 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie (chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v). Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 1 potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane kwasu
W-mykofenoilo-D-glutaminowego 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 1,82 (s, 3H); 1,89-1,95 (m, 2H); 1,97 (s, 1H); 2,06 (s, 1H); 2,17 (s, 3H); 2,19-2,40 (m, 6H, nałożenie dwóch multipletów); 3,40 (d, 2H, 7=6,8 Hz); 3,79 (s, 3H); 4,47-4,52 (m, 1H); 5,27-5,30 (t, 1H, J=6,3 Hz); 5,30 (s, 3H); 7,34 (d, 1H, J=7,3 Hz). |
| 13C NMR | (aceton d6 + DMSO, 200 MHz) δ ppm: 174,50; 173,76; 173,69; 173,38; 164,72; 154,41; 146,19; 135,55; 123,95; 123,05; 118,06; 70,98; 61,83; 52,57; 52,48; 36,37; 35,68; 28,15; 23,61;20,99; 16,82; 11,98. |
| MS (DHB) | m/z 450,1 (M+) C22H2?OgN=449,4 |
| temp. top. | 107-111°C |
| skręcalność [a]D25 | +4° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,66 (CH2CI2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 6
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-L-treoniny 3, a następnie W-mykofenoilo-L-treoniny 4
0,24 g (0,750 mmola) MPA 1, 1,07 mmola estru metylowego L-treoniny i 0,132 g (1,07 mmola) DMAP rozpuszczono w 10 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,198 g (1,02 mmola) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol : kwas octowy 15 : 1 : 0,1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 po1 13 twierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane estru metylowego W-mykofenoilo-L-treoniny 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCI3, 500 MHz) δ ppm: 1,34 (d, 3H, J=7,3 Hz); 1,81 (s, 3H); 2,15 (s, 3H); 2,32 (s, 4H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,74 (s, 3H); 3,77 (s, 3H); 4,55-4,58 (m, 1H); 5,205 (s, 3H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 6,02 (s, 1H); 7,68 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCI3, 200 MHz) δ ppm: 173,28; 172,86; 171,50; 163,58; 153,61; 144,08; 134,36; 122,95; 122,15; 116,70; 106,42; 69,98; 68,02; 61,02; 57,06; 52,50; 34,96; 34,96; 22,66; 19,86; 16,22; 11,53. |
| MS (DHB) | m/z 436,3 (M+) C22H2gOaN=435,5 |
| temp. top. | 131-134°C |
| skręcalność [a]D25 | +2° (c=1, CHCI3) |
| TLC | Rf=0,55 (CH2CĘ : MeOH : CH3COOH; 15 : 1 : 0,1 v/v) |
Następnie 0,5 mmola otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-L-treoniny 3 rozpuszczono w 5 ml metanolu, a następnie dodano 1,5 mmola monohydratu wodorotlenku litu w 5 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 4 potwierdzono metodą
13 protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane W-mykofenoilo-L-treoniny 4 przedstawiono poniżej:
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 1,13 (d, 3H, J=7,3 Hz); 1,84 (s, 3H); 2,05-2,07 (m, 3H); 2,17 (s, 3H); 2,29-2,45 (m, 2H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,80 (s, 3H); 4,30-4,42 (m, 1H); 4,45 (d, 1H, J=0,44 Hz); 5,29 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,32 (s, 2H); 7,27 (d, 1H, rozmyty sygnał). |
| 13C NMR | (aceton-d6, 500 MHz) δ ppm: 172,57; 172,24; 171,69; 163,70; 153,34; 145,34; 134,67; 122,87; 122,04; 117,05; 106,58; 69,91; 67,23; 60,76; 57,37; 35,46; 34,61; 22,57; 19,81; 15,68; 10,81 |
| MS (CCA) | m/z 422,1 (M+) C21H27OsN=421,4 |
| temp. top. | 117-121°C |
| skręcalność [afc25 | +4° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,49 (CH2CI2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
gdzie:
CCA oznacza kwas a-cyjano-3-hydroksycynamonowy - standardowa matryca w spektrometrii mas. P r z y k ł a d 7
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-L-waliny 3, a następnie W-mykofenoilo-L-waliny 4 0,32 g (1,00 mmol) MPA 1, 1,424 mmola chlorowodorku estru metylowego L-waliny 2 i 0,176 g (1,424 mmola) DMAP rozpuszczono w 15 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,264 g (1,36 mmola) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 20 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane estru metylowego W-mykofenoilo-L-waliny 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCla, 500 MHz) δ ppm: 0,86 (dd, 6H, J=6,8 Hz); 1,82 (s, 3H); 2,08-2,12 (m, 1H); 2,15 (s, 3H); 2,30-2,36 (m, 4H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,72 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 4,53-4,56 (m, 1H); 5,20 (s, 3H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,95 (d, 1H, J=8,8 Hz); 7,67 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCla, 200 MHz) δ ppm: 172,88; 172,59; 172,46; 163,68; 153,63; 144,00; 134,42; 122,77; 122,06; 116,70; 106,36; 70,00; 60,97; 56,83; 52,07; 35,06; 35,06; 31,27; 22,59; 18,84; 17,75; 16,14; 11,53 |
| MS (DHB) | m/z 434,3 (M+) C23H31O7N=433,5 |
| temp. top. | 135-138°C |
| skręcalność [afc25 | + 10° (c=1, CHCls) |
| TLC | Rf=0,87 (CH2Cl2 : MeOH; 10 : 1 v/v) |
Następnie 0,6 mmola otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-L-waliny 3 rozpuszczono w 6 ml metanolu, a następnie dodano 1,8 mmola monohydratu wodorotlenku litu w 6 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie (chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v). Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 4 potwierdzono
13 metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane przedstawiono W-mykofenoilo-L-waliny 4 poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton, 500 MHz) δ ppm: 0,91 (dd, 6H, J=6,8 Hz); 1,81 (s, 3H); 2,15-2,30 (m, 1H); 2,15 (s, 3H); 2,32-2,38 (m, 4H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,76 (s, 3H); 4,52-4,54 (m, 1H); 5,20 (s, 3H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 6,23 (d, 1H, J=8,8 Hz); 7,27 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCla, 500 MHz) δ ppm: 175,51; 173,68; 173,22; 163,90; 153,86; 144,35; 134,47; 123,32; 122,29; 117,00; 106,62; 70,32; 61,25; 57,28; 35,29; 35,00; 31,15; 22,86; 19,17; 17,88; 16,33; 11,79 |
| MS (DHB) | m/z 420,1 (M+) C22H29OyN=419,5 |
| temp. top. | 130-133°C |
| skręcalność [afc25 | +2° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,78 (CH2CI2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 8
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-D-waliny 3, a następnie W-mykofenoilo-D-waliny 4
0,28 g (0,875 mmola) MPA 1, 1,246 mmola chlorowodorku estru metylowego D-waliny 2 i 0,154 g (1,246 mmola) DMAP rozpuszczono w 12 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,231 g (1,19 mmola) EDCl. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 20 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego 1H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APH-6W-10). Dane estru metylowego W-mykofenoilo-D-waliny 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCl2, 500 MHz) δ ppm: 0,86 (dd, 6H, J=6,8 Hz); 1,81 (s, 3H); 2,07-2,11 (m, 1H); 2,14 (s, 3H); 2,30-2,35 (m, 4H); 3,38 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,71 (s, 3H); 3,755 (s, 3H); 4,52-4,56 (m, 1H); 5,19 (s, 3H); 5,26 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,98 (d, 1H, J=8,7 Hz); 7,665 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCl2, 200 MHz) δ ppm: 172,86; 172,58; 172,45; 163,62; 153,55; 143,97; 134,39; 122,71; 122,00; 116,69; 106,30; 70,00; 60,95; 56,77; 52,06; 35,06; 34,99; 31,23; 22,54; 18,82; 17,71; 16,11; 11,52 |
| MS (DHB) | m/z 434,1 (M+) C2aH31OyN=433,5 |
| temp. top. | 136-139°C |
| skręcalność [a]D25 | -10° (c=1, CHCla) |
| TLC | Rf=0,86 (CH2Cl2 : MeOH; 10 : 1 v/v) |
Następnie 0,7 mmola otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-D-waliny 3 rozpuszczono w 7 ml metanolu, a następnie dodano 2,1 mmola monohydratu wodorotlenku litu w 7 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 4 potwierdzono metodą
13 protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDt-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model; APII-6W-10). Dane W-mykofenoilo-D-waliny 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton, 500 MHz) δ ppm: 0,91 (dd, 6H, J=6,8 Hz); 1,81 (s, 3H); 2,15-2,30 (m, 1H); 2,15 (s, 3H); 2,32-2,38 (m, 4H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,76 (s, 3H); 4,52-4,54 (m, 1H); 5,20 (s, 3H); 5,27 (t, 1H, J=6,8 Hz); 6,23 (d, 1H, J=8,8 Hz); 7,27 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCl2, 500 MHz) δ ppm: 177,04; 172,60; 172,22; 163,71; 153,34; 145,34; 134,67; 122,78; 122,03; 117,06; 106,62; 69,92; 60,74; 57,02; 35,46; 34,53; 30,71; 22,56; 18,83; 17,49; 15,70; 10,81 |
| MS (DHB) | m/z 420,3 (M+) C22H2gO7N=419,5 |
| temp. top. | 131-135°C |
| skręcalność [a]D25 | -2° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,76 (CH2Cl2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 9
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-L-leucyny 3, a następnie W-mykofenoilo-L-leucyny 4
4,00 g (12,50 mmola) MPA 1, 17,80 mmola chlorowodorku estru metylowego L-leucyny 2 i 2,20 g (18,80 mmola) DMAP rozpuszczono w 150 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 3,30 g (17,00 mmoli) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 20 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 potwierdzo1 13 no metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane estru metylowego W-mykofenoilo-L-leucyny 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCls, 500 MHz) δ ppm: 0,90 (dd, 6H, J=4,4 Hz); 1,44-1,48 (m, 2H); 1,56-1,62 (m, 1H), 1,80 (s, 3H); 2,14 (s, 3H); 2,31 (s, 3H); 3.38 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,71 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 4,59-4,63 (m, 1H); 5,19 (s, 3H); 5,25 (t, 1H, J=6,8 Hz);5,89 (d, 1H, J=9,3 Hz); 7,67 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCl3, 500 MHz) δ ppm: 173,89; 173,14; 172,66; 163,90; 153,85; 144,26; 134,74; 123,02; 122,30; 116,98; 106,61; 70,27; 61,25; 52,49; 50,74; 41,94; 35,28; 35,19; 25,07; 23,00; 22,84; 222,17; 16.37; 11,80. |
| MS (DHB) | m/z 448 (M+) C24H33O7N=447,5 |
| temp. top. | 101-104°C |
| skręcalność [a]D25 | +2° (c=1, CHCI3) |
| TLC | Rf=0,68 (CH2Cl2 : MeOH; 20 : 1 v/v) |
Następnie 7 mmoli otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-L-leucyny 3 rozpuszczono w 70 ml metanolu, a następnie dodano 21 mmoli monohydratu wodorotlenku litu w 70 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 4 potwierdzono metodą
13 protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane W-mykofenoilo-L-leucyny 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton, 500 MHz) δ ppm: 0,91 (dd, 6H, J=6,8 Hz); 1,56-1,62 (m, 1H); 1,7-1,74 (m, 2H); 1,82 (s, 3H); 2,17 (s, 3H); 2,28-2,33 (m, 4H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,79 (s. 3H); 4,46-4,51 (m, 1H); 5,26-5,30 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,31 (s, 2H); 7,23 (d, 1H, J=6,8 Hz). |
| 13C NMR | (aceton, 200 MHz) δ ppm: 174,29; 172,99; 172,84; 164,40; 154,04; 145,95; 135,36; 123,51; 122,70; 117,74; 107,26; 70,63; 61,46; 51,05; 41,64; 36,13; 35,36; 25,53; 23,36; 23,26; 21,91; 16,38; 11,55 |
| MS (DHB) | m/z 434,3 (M+) C23H31OyN=433,5 |
| temp. top. | 97-99°C |
| skręcalność [a]D25 | 8° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,68 (CH2CI2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 10
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-D-leucyny 3, a następnie W-mykofenoilo-D-leucyny 4
0,40 g (1,25 mmola) MPA 1, 1,78 mmola chlorowodorku estru metylowego D-leucyny 2 i 0,20 g (1,88 mmola) DMAP rozpuszczono w 15 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,33 g (1,70 mmoli) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 20 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 potwierdzono
13 metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APH-6W-10). Dane estru metylowego W-mykofenoilo-D-leucyny 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCl?, 500 MHz) δ ppm: 0,90 (dd, 6H, J=4,4 Hz); 1,44-1,50 (m, 2H); 1,56-1,63 (m, 1H), 1,80 (s, 3H); 2,14 (s, 3H); 2,31 (s, 3H); 3,38 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,71 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 4,59-4,63 (m, 1H); 5,19 (s, 3H); 5,25 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,89 (d, 1H, J=9,3 Hz); 7,67 (s, słaby sygnał, 1H). |
| 13C NMR | (CDCl2, 500 MHz) δ ppm: 173,90; 173,14; 172,64; 163,90; 153,85; 144,26; 134,75; 123,02; 122,30; 116,98; 106,61; 70,27; 61,25; 52,49; 50,74; 41,94; 35,28; 35,20; 25,08; 23,00; 22,84; 22,17; 16,37; 11,80. |
| MS (DHB) | m/z 448 (M+) C24H33OyN=447,5 |
| temp. top. | 100-104°C |
| skręcalność [a]D25 | -2° (c=1, CHCh) |
| TLC | Rf=0,69 (CH2Cl2 : MeOH; 20 : 1 v/v) |
Następnie 1 mmol otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-D-leucyny 3 rozpuszczono w 10 ml metanolu, a następnie dodano 3 mmole monohydratu wodorotlenku litu w 10 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 4 potwierdzono
13 metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane W-mykofenoilo-D-leucyny 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (aceton, 500 MHz) δ ppm: 0,91 (dd, 6H, J=6,8 Hz); 1,56-1,62 (m, 1H); 1,7-1,74 (m, 2H); 1,82 (s, 3H); 2,17(s, 3H);2,28-2,33(m, 4H); 3,39 (d, 2H, J=6,8 Hz); 3,79 (s, 3H); 4,40-4,51 (m, 1H); 5,26-5,30 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,31 (s, 2H); 7,24 (d, 1H, J=6,8 Hz). |
| 13C NMR | (aceton + CDCh, 200 MHz) δ ppm: 174,17; 173.00; 172,90; 164,24; 153,90; 145,65; 135,14; 123,36; 122,54; 117,55; 107,07; 70,50; 61,33; 50,89; 41,49; 35,99; 35,24; 25,37; 23,29; 32,12:21,85; 16,32; 11,51 |
| MS (DHB) | m/z 434,3 (M+) C23H31O7N=433,5 |
| temp. top. | 97-100°C |
| skręcalność [a]D25 | -8° (c=1, aceton) |
| TLC | Rf=0,70 (CH2CI2: MeOH: CH3COOH; 10:1:0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 11
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-L-argininy 3, a następnie N-mykofenolilo-L-argininy 4
0,40 g (1,25 mmola) MPA 1, 1,78 mmola W-chronionego estru metylowego L-argininy 2 i 0,20 g (1,88 mmola) DMAP rozpuszczono w 15 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,33 g (1,70 mmoli) EDCl. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 20 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 potwierdzono
13 metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane estru metylowego W-mykofenoilo-L-argininy 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCI3, 500 MHz) δ ppm: 1,56-1,61 (m, 2H); 1,82 (s, 3H); 1,82-1,9 (m, 2H); 2,14 (s, 3H); 2,28-2,34 (m, 2H); 2,33-2,41 (m, 4H); 3,38 (d, 2H, J=7,3 Hz); 3,76 (s, 3H); 3,77 (s, 3H); 4,60-4,61 (m, 1H); 5,20 (s, 2H); 5,25 (t, 1H, J=6,8 Hz); 6,38 (d, 1H, J=6,8 Hz); 7,67 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCI3, 500 MHz) δ ppm: 173,19; 172,83; 163,86; 159,54; 153,75; 144,46; 134,14; 123,32; 122,10; 117,12; 106,56; 70,37; 61,25; 60,65; 53,06; 40,48; 35,18; 35,01; 24,57; 22,85; 21,57; 16,43; 14,43; 11,77 |
| MS (DHB) | m/z 491,1 (M+) C24H34O7N4=490,6 |
| temp. top. | 101-104°C |
| skręcalność [a]D25 | -20° (c=2, CHCI3) |
| TLC | Rf=0,45 (CH2Ch:MeOH:CH3COOH; 15:1:0,1 v/v) |
Następnie 1 mmol otrzymanego estru metylowego N-mykofenoilo-L-argininy 3 rozpuszczono w 10 ml metanolu, a następnie dodano 3 mmole monohydratu wodorotlenku litu w 10 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 4 potwierdzono metodą
13 protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane W-mykofenoilo-L-argininy 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (CD3OD, 500 MHz) δ ppm: 1,59-1,7 (m, 2H); 1,82 (s, 3H); 1,84-1,92 (m, 2H); 2,15 (s, 3H): 2,28-2,36 (m, 4H); 3,22-2,25 (m, 2H); 3,38 (d, 2H, J=7,3 Hz); 3,76 (s, 3H); 4,35 (m, 1H); 5,25 (s, 2H); 5,26 (t, 1H, J=6,8 Hz). |
| 13C NMR | (CD3OD, 500 MHz) δ ppm: 175,88; 174,93; 174,55; 164,86; 160,99; 154,71; 146,63; 135,15; 124,48; 123,65; 117,88; 107,69; 70,85; 66,91; 61,56; 53,22; 41,72; 36,54; 35,59; 23,62; 23,62; 16,27; 11,7721, |
| MS (DHB) | m/z 477,2 (M+) C23H32O7N4=476,5 |
| temp. top. | 97-102°C |
| skręcalność [a]D25 | +2°(c=1, MeOH) |
| TLC | Rf=0,55 (CH2Cl2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 12
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-L-fenyloalaniny 3, a następnie W-mykofenoiloL-fenyloalaniny 4
4,00 g (12,50 mmola) MPA 1, 17,80 mmola chlorowodorku estru metylowego L-fenyloalaniny 2 i 2,20 g (18,80 mmola) DMAP rozpuszczono w 150 ml bezwodnego DMF. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 3,30 g (17,00 mmoli) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 20 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 1 potwierdzono metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), 13C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCla, 500 MHz) δ ppm: 1,79 (s, 3H); 2,13 (s, 3H); 2,28 (s, 4H); 2,98-3,07 (m, 2H); 3,37 (d, 2H, J=7,3 Hz); 3,69 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 4,82-4,86 (m, 1H); 5,14 (s, 2H); 5,24 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,94 (d, 1H, J=7,3 Hz); 7,04-7,23 (m, 5H, aromat); 7,67 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCla, 500 MHz) δ ppm: 173,14; 172,40; 172,30; 163,88, 153,83; 144,29; 136,11; 134,60; 129,43; 128,77; 127,33; 123,07; 122,27; 116,97; 106,61; 70,26; 61,24; 53,23; 52,52; 38,16; 35,23; 35,11; 22,83; 16,37; 11,80 |
| MS (DHB) | m/z 482,2 (M+) C27H31O7N=481,5 |
| temp. top. | 87-91°C |
| skręcalność [a]D25 | +20° (c=2, CHCh) |
| TLC | Rf=0,82 (CH2Cl2 : MeOH; 20 : 1 v/v) |
Następnie 8 mmoli otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-L-fenyloalaniny 3 rozpuszczono w 80 ml metanolu, a następnie dodano 24 mmole monohydratu wodorotlenku litu w 80 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol: kwas octowy; 10 : 1 : 0,1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej potwierdzono metodą
13 protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APH-6W-10). Dane W-mykofenoilo-L-fenyloalaniny 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (CD3OD, 500 MHz) δ ppm: 1,77 (s, 3H); 2,11 (s, 3H); 2,15-2,27 (dt, 4H); 2,78-3,09 (dq, 2H); 3,35 (d, 2H, J=7,3 Hz); 3,74 (s, 3H); 4,57-4,6 (m, 1H); 5,12 (s, 2H); 5,22 (t, 1H, J=6,8 Hz); 7,15-7,26 (m, 5H, aromat). |
| 13C NMR | (CD3OD, 500 MHz) δ ppm: 174,32; 173,45; 172,61; 163,64, 153,50; 145,45; 137,30; 133,95; 129,07; 128,21; 126,57; 123,23; 122,44; 116,64; 106,51; 69,57; 60,38; 53,78; 37,43; 35,32; 34,30; 22,42; 15,03; 10,21 |
| MS (DHB) | m/z 468,3 (M+) C26H2?OyN=467,5 |
| temp. top. | 61-65°C |
| skręcalność [a]D25 | +2° (c=1, MeOH) |
| TLC | Rf=0,70 (CH2C)2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
P r z y k ł a d 13
Otrzymywanie estru metylowego W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny 3, a następnie N-mykofenoilo-D-fenyloalaniny 4
0,40 g (1,25 mmola) MPA 1, 1,78 mmola chlorowodorku estru metylowego D-fenyloalaniny 2 i 0,20 g (1,88 mmola) DMAP rozpuszczono w 15 ml bezwodnego DMP. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 0,33 g (1,70 mmoli) EDCI. Całość mieszano przez 2 godziny w 0°C, a później w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Postęp reakcji kontrolowano za pomocą techniki TLC (chlorek metylenu : metanol 20 : 1 v/v). Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej 3 potwierdzono
13 metodą protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane estru metylowego W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny 3 przedstawiono poniżej.
| 1H NMR | (CDCla, 500 MHz) δ ppm: 1,79 (s, 3H); 2,13 (s, 3H); 2,28 (s, 4H); 2,98-3,07 (m, 2H); 3,37 (d, 2H, J=7,3 Hz); 3,69 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 4,82-4,86 (m, 1H); 5,14 (s, 2H); 5,24 (t, 1H, J=6,8 Hz); 5,94 (d, 1H, J=7,3 Hz); 7,04-7,28 (m, 5H, aromat); 7,67 (s, 1H). |
| 13C NMR | (CDCl3, 500 MHz) δ ppm: 173,14; 172.38; 172,29; 163,88; 153,83; 144,30; 136,12; 134,60; 129,43; 128,77; 127,32; 123,07; 122,27; 116,97; 106,61; 70,25; 61,24; 53,24; 52,52; 38,16; 35,23; 35,10; 22,83; 16,37; 11,79 |
| MS (DHB) | m/z 482,1 (M+) C2yH31OyN=481,5 |
| temp. top. | 87-91 °C |
| skręcalność [a]D25 | -20° (c=2, CHCI3) |
| TLC | Rf=0,80 (CH2CĘ : MeOH; 20 : 1 v/v) |
Następnie 1 mmol otrzymanego estru metylowego W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny 3 rozpuszczono w 10 ml metanolu, a następnie dodano 3 mmole monohydratu wodorotlenku litu w 10 ml wody po czym całość mieszano w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC w układzie chlorek metylenu : metanol : kwas octowy; 10 : 1 : 1 v/v. Następnie mieszaninę reakcyjną zakwaszono 2N HCI i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu warstwy organicznej bezwodnym siarczanem magnezu rozpuszczalnik oddestylowano pod zmniejszonym ciśnieniem za pomocą wyparki rotacyjnej. Do oleistej pozostałości dodawano eteru w celu uzyskania kryształów. Po odsączeniu otrzymywano czysty produkt 4. Strukturę chemiczną otrzymanej pochodnej potwierdzono metodą
13 protonowego magnetycznego rezonansu jądrowego H NMR (500 MHz), C NMR (500 MHz), spektrometrią mas MS (BIFLEX III Bruker MALDI-TOF), a także poprzez oznaczenia skręcalności optycznej za pomocą polarymetru (Autopol®II, model: APII-6W-10). Dane W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny 4 przedstawiono poniżej.
PL 221 807 B1
| 1H NMR | (CD3OD, 500 MHz) δ ppm: 1,77 (s, 3H); 2,12 (s. 3H); 2,16-2,27 (dt, 4H); 2,78-3,09 (dq, 2H); 3,36 (d, 2H, J=7,3 Hz); 3,75 (s, 3H); 4,57-4,6 (m, 1H); 5,13 (s, 2H); 5,22 (t, 1H, J=6,8 Hz); 7,15-7,26 (m, 5H, aromat). |
| 13C NMR | (CD3OD, 500 MHz) δ ppm: 174,32; 173,47; 172,62; 163,64, 153,50; 145,44; 137,31; 133,95; 129,07; 128,21; 126,56; 123,23; 122,45; 116,64; 106,51; 69,57; 60,38; 53,79; 37,43; 35,32; 34,30:22,42; 15,02; 10,20 |
| MS (DHB) | m/z 468,2 (M+) C26H2gOyN=467,5 |
| temp. top. | 63-67°C |
| skręcalność [a]D25 | -2° (c=1, MeOH) |
| TLC | Rf=0,69 (CH2Cl2 : MeOH : CH3COOH; 10 : 1 : 0,1 v/v) |
T a b e l a 1
Wydajności amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, opisanych w przykładach od 1 do 13 jako związki 3 i 4
| estry metylowe chlorowodorków aminokwasów 2 | R | Wydajność otrzymywania amidowych pochodnych 3 (%) | Wydajność otrzymywania amidowych pochodnych 4 (%) |
| ester metylowy D-alaniny, | CH3 | 77 | 62 |
| ester metylowy L-alaniny | CH3 | 75 | 60 |
| ester metylowy glicyny | H | 86 | 68 |
| diester metylowy kwasu L-glutaminowego | CH2CH2COOH(R') | 68 | 70 |
| diester metylowy kwasu -D-glutaminowego | CH2CH2COOH(R') | 63 | 65 |
| ester metylowy-L-treoniny | CH(OH)CH3 | 50 | 45 |
| ester metylowy-L-waliny | CH(CH3)2 | 54 | 64 |
| ester metylowy-D-waliny | CH(CH3)2 | 55 | 62 |
| ester metylowy-L-leucyny | CH2CH(CHs)2 | 71 | 69 |
| ester metylowy-D-leucyny | CH2CH(CHs)2 | 81 | 68 |
| ester metylowy-L-argininy | (CH2)3NH(C=NH)NH2 | 58 | 49 |
| ester metylowy-L-fenyloalaniny | CH2Ph | 64 | 59 |
| ester metylowy-D-fenyloalaniny | CH2Ph | 69 | 57 |
P r z y k ł a d 14
Badanie właściwości immunosupresyjnych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego wyniki badań in vitro
W celu oceny aktywności biologicznej nowych pochodnych otrzymanych w przykładzie 1-13 wykonano dwa rodzaje testów: testy żywotności MTT oraz testy hamowania proliferacji ze znakowaną trytem tymidyną.
Testy żywotności służą ocenie toksyczności związków. W testach tych w yznaczono IC50 (50% inhibitory concentration) służący ocenie potencjalnej dawki, jaką można byłoby zastosować, jeśli związek zostałby użyty w celach terapeutycznych. Im wyższa wartość IC50, tym wyższe stężenia danej substancji, jakie można byłoby stosować w leczeniu. Jeśli wartość IC50 dla pochodnej jest wyższa od IC50 MPA, to oznacza, że związek taki będzie lepiej tolerowany w organizmie. Testy zahamowania proliferacji służą ocenie skuteczności działania substancji jako leku immunosupresyjnego. Im niższa wartość EC50 (50% effect concentration), tym niższe stężenia danej substancji, jakie można byłoby stosować w leczeniu. Jeśli wartość EC50 dla pochodnej jest niższa od EC50 MPA, to oznacza, że związek taki ma silniejsze działanie w porównaniu do MPA. Analizę statystyczną uzyskanych danych przeprowadzono w programach Sigma Plot oraz Statistica 10.0.
PL 221 807 B1
A) Testy żywotności komórek dla amidowych pochodnych 3 otrzymanych w przykładach wykonania
W testach żywotności porównywano 50% przeżycie komórek w obecności badanych amidowych pochodnych 3 (IC50) do stężenia IC50 dla MPA. Badanie przeprowadzono wobec modelowej linii ludzkich limfocytów - linii komórkowej JURKAT. Spośród otrzymanych pochodnych estrowych opisanych w przykładach takich jak ester metylowy W-mykofenoilo-D-alaniny, ester metylowy W-mykofenoilo-L-alaniny, ester metylowy W-mykofenoiloglicyny, diester metylowy kwasu W-mykofenoilo-L-glutaminowego, diester metylowy kwasu W-mykofenoilo-D-glutaminowego, ester metylowy W-mykofenoilo-L-treoniny, ester metylowy W-mykofenoilo-L-waliny, ester metylowy W-mykofenoilo-D-waliny, ester metylowy W-mykofenoilo-L-leucyny, ester metylowy W-mykofenoilo-D-leucyny, ester metylowy W-mykofenoilo-L-argininy, ester metylowy W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny, dwie z nich: ester metylowy W-mykofenoilo-D-alaniny i ester metylowy W-mykofenoiloglicyny wykazały trend w kierunku wyższych wartości IC50 w porównaniu do IC50 MPA w testach z linią komórkową JURKAT (Tabela 2). Pozostałe wymienione amidowe pochodne wykazały niższą wartość IC50 aniżeli MPA, czyli byłyby tolerowane w mniejszej dawce. Rezultaty tej serii pomiarów zestawiono w tabeli 2, gdzie p oznacza istotność statystyczną. Testy istotności statystycznej mają za zadanie wykrycie istnienia istotnej różnicy lub jej braku między wartościami parametrów (wartości stężeń) badanego związku a związkiem wyjściowym (MPA). Związki w których p<0,05 są istotne statystycznie. Wartość F oznacza test Fishera, który określa siłę testu. Test żywotności przeprowadzany był w temperaturze pokojowej przy długości fali λ = 570 nm.
T a b e l a 2
Żywotność (IC50 [pM]) dla nowych amidowych pochodnych 3.
| Nowa amidowa pochodna 3 | JURKATT | p** | p** |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-alaniny | 65,701 ± 0,011* | 0,07 | 103,6 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-alaniny | 23,465 ± 0,0059 | 0,05 | 194,5 |
| ester metylowy W-mykofenoiloglicyny | 65,28 ± NAN* | 0,07 | 109,3 |
| diester metylowy kwasu W-mykofenoilo-L-glutaminowego | 20,33 ± 0,0142 | 0,06 | 124,6 |
| diester metylowy kwasu W-mykofenoilo-D-glutaminowego | 25,99 ± 0,0036 | <0,05 | 476,3 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-treoniny | 54,26 ± 0,0115 | 0,11 | 42,7 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-waliny | 2,31 ± 0,0005 | <0,05 | 1243,4 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-waliny | 27,03 ± 0,018 | <0,05 | 309,6 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-leucyny | 6,5 ± 0,0009 | <0,05 | 329,4 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-leucyny | 19,26 ± 0,006 | <0,05 | 365,2 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-argininy | 21,83 ± 0,003 | <0,05 | 118282,8 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-fenyloalaniny | 23,92 ± 0,0096 | <0,05 | 250,8 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny | 6,45 ± 0,0037 | <0,05 | 3175,3 |
| MPA | 28,21 ± 0,02536 | - | - |
gdzie:
* oznacza IC50 związków wyższe od IC50 MPA, związki potencjalnie lepiej tolerowane w organizmie od MPA, ** p oznacza istotność statystyczna,
F oznacza test Fishera,
NAN oznacza wielkość niezamienną.
B) Testy żywotności komórek dla amidowych pochodnych 4 otrzymanych w przykładach wykonania
Spośród nowych amidowych pochodnych 4, cztery z nich: kwas W-mykofenoilo-L-glutaminowy, W-mykofenoilo-D-walina, W-mykofenoilo-D-leucyna, W-mykofenoilo-L-fenyloalanina charakteryzowały się istotnie statystycznie wyższą wartości IC50 w porównaniu do IC50 MPA w testach z linią komórkową JURKAT.
PL 221 807 B1
Przykłady żywotności dla nowych pochodnych 4, otrzymanych w przykładach wykonania podaje tabela 3, gdzie p oznacza istotność statystyczną. Testy istotności statystycznej mają za zadanie wykrycie istnienia istotnej różnicy lub jej braku między wartościami parametrów (wartości stężeń) bad anego związku a związkiem wyjściowym (MPA). Związki w których p<0,05 są istotne statystycznie. Wartość F oznacza test Fishera, który określa siłę testu. Test żywotności przeprowadzany był w temp. pok. przy długości 570 nm.
T a b e l a 3
| Żywotność (IC50 [pM | ) dla nowych pochodnych 4. | ||
| Nowa amidowa pochodna 4 | JURKATT | p** | p** |
| W-mykofenoilo-D-alanina | 9,73 ± NAN | 0,11 | 38,43 |
| W-mykofenoilo-L-alanina | 1,85 ± NAN | <0,05 | 408,15 |
| W-mykofenoiloglicyna | 5,03 ± NAN | <0,05 | 202,62 |
| kwas W-mykofenoilo-L-glutaminowy | 32,56 ± 0,0194* | 0,05 | 173,48 |
| kwas W-mykofenoilo-D-glutaminowy | 21,18 ± NAN | <0,05 | 336,61 |
| W-mykofenoilo-L-treonina | 1,85 ± NAN | <0,05 | 9403,63 |
| W-mykofenoilo-L-walina | 0,19 ± NAN | <0,05 | 431,28 |
| W-mykofenoilo-D-walina | 38 ± 0,0406* | <0,05 | 529,83 |
| W-mykofenoilo-L-leucyna | 8,78 ± 0,016 | 0,14 | 25,53 |
| W-mykofenoilo-D-leucyna | 41,8 ± 0,0146* | <0,05 | 2010,23 |
| W-mykofenoilo-L-arginina | 26,11 ± 0,014 | <0,05 | 576,87 |
| W-mykofenoilo-L-fenyloalanina | 32,31 ± 0,025* | <0,05 | 7743,89 |
| W-mykofenoilo-D-fenyloalanina | 18,26 ± 0,056 | <0,05 | 223,56 |
| MPA | 28,21 ± 0,02536 | - | - |
gdzie:
*oznacza IC50 związków wyższe od IC50 MPA, związki potencjalnie lepiej tolerowane w organizmie od MPA **p oznacza istotność statystyczną,
F oznacza test Fishera,
NAN oznacza wielkość niezamienną.
C) Analiza testu hamowania proliferacji (EC50) dla nowych amidowych pochodnych 3
W testach hamowania proliferacji porównywano dawki badanych pochodnych amidowych MPA 3 wywołujące 50% zahamowanie proliferacji komórek (EC50) do dawki IC50 dla MPA. (Tabela 4) Badanie przeprowadzono wobec linii komórkowej JURKAT, modelowej linii ludzkich limfocytów. Pięć badanych pochodnych ester metylowy W-mykofenoilo-L-alaniny, ester metylowy W-mykofenoilo-L-leucyny, ester metylowy W-mykofenoilo-D-leucyny, ester metylowy W-mykofenoilo-L-fenyloalaniny i ester metylowy W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny charakteryzowało się istotnie statystycznie niższą wartością EC50 w porównaniu do EC50 MPA w testach z linią komórkową JURKAT. Wynik ten oznacza, że wyżej wymienione amidowe pochodne są substancjami o potencjalnie silniejszym działaniu aniżeli MPA i można by je stosować w mniejszych dawkach.
Przykłady hamowania proliferacji linii komórkowej Jurkat podaje tabela 4, gdzie p oznacza istotność statystyczną. Testy istotności statystycznej mają za zadanie wykrycie istnienia istotnej różnicy lub jej braku między wartościami parametrów (wartości stężeń) badanego związku a związkiem wyjściowym (MPA). Związki w których p<0,05 są istotne statystycznie. Wartość F oznacza test Fishera, który określa siłę testu. Test hamowania proliferacji przeprowadzany był w temperaturze pokojowej dla promieniowania β.
PL 221 807 B1
T a b e l a 4
Test hamowania proliferacji (IC50 [pM]), tryt) dla nowych pochodnych 3
| Nowa amidowa pochodna 3 | JURKATT | P** | p** |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-alaniny | 30,134 ± 0,011 | <0,05 | 285,4 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-alaniny | 5,681 ± 0,0017* | <0,05 | 29331,4 |
| ester metylowy W-mykofenoiloglicyny | 24,58 ± 0,0028 | <0,05 | 351,2 |
| diester metylowy kwasu W-mykofenoilo-L-glutaminowego | 26,2 ± 0,0174 | <0,05 | 738,4 |
| diester metylowy kwasu W-mykofenoilo-D-glutaminowego | 24,73 ± 0,0272 | <0,05 | 1594,7 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-treoniny | 26,67 ± 0,0283 | <0,05 | 7816,2 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-waliny | 15,25 ± 0,0032 | <0,05 | 6091,4 |
| ester metylowy W-mykofenoito-D-waliny | 36,04 ± 0,0236 | 0,06 | 141,2 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-leucyny | 6,27 ± 0,0031* | <0,05 | 204,1 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-leucyny | 8,29 ± 0,0036* | <0,05 | 37153,3 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-argininy | 55,28 ± 0,1086 | <0,05 | 553,8 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-fenyloalaniny | 6,66 ± 0,0014* | <0,05 | 5723,4 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny | 7,9 ± 0,0304* | <0,05 | 65934,9 |
| MPA | 9,45 ± 0,0789 | - | - |
gdzie:
* oznacza EC50 związków niższe od EC50 MPA, związki potencjalnie silniejsze od MPA, **p oznacza istotność statystyczną,
F oznacza test Fishera.
D) Analiza testu hamowania proliferacji (EC50) dla nowych amidowych pochodnych 4
W testach hamowania proliferacji porównywano także dawki amidowych pochodnych MPA 4 wywołujące 50% zahamowanie proliferacji komórek (EC50) do dawki IC50 dla MPA. Badanie przeprowadzono wobec linii komórkowej JURKAT, modelowej linii ludzkich limfocytów. Pięć badanych pochodnych z wolną grupą karboksylową, W-mykofenoilo-D-alanina, W-mykofenoiloglicyna, kwas W-mykofenoilo-D-glutaminowy, W-mykofenoilo-L-leucyna, W-mykofenoilo-L-arginina charakteryzowało się istotnie statystycznie niższą wartością EC50 w porównaniu do EC50 MPA w testach z linią komórkową JURKAT. Wynik ten oznacza potencjalnie większą aktywność.
Wyniki pomiarów hamowania proliferacji linii komórkowej Jurkat przez amidowe pochodne MPA 4 przedstawia tabela 5, gdzie p oznacza istotność statystyczną. Testy istotności statystycznej mają za zadanie wykrycie istnienia istotnej różnicy lub jej braku między wartościami parametrów (wartości stężeń) badanego związku a związkiem wyjściowym (MPA). Związki w których p<0,05 są istotne st atystycznie. Wartość F oznacza test Fishera, który określa siłę testu. Test hamowania proliferacji przeprowadzany był w temperaturze pokojowej dla promieniowania β.
T a b e l a 5
Test hamowania proliferacji (EC50 [pM], tryt) dla nowych amidowych pochodnych 4
| Nowe amidowe pochodne 4 | JURKATT | P** | p** |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| W-mykofenoilo-D-alanina | 7,9 ± 0,0023* | <0,05 | 2216,5 |
| W-mykofenoilo-L-alanina | 13,3 ± 0,0028 | <0,05 | 1250,6 |
| W-mykofenoiloglicyna | 1,25 ± 0,008* | <0,05 | 1719,1 |
| kwas W-mykofenoilo-L-glutaminowy | 19,85 ± 0,0027 | <0,05 | 1235,0 |
| kwas W-mykofenoilo-D-glutaminowy | 0,45 ± 7,3*10'5* | <0,05 | 7978,3 |
PL 221 807 B1 cd. tabeli 5
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| W-mykofenoilo-L-treonina | 13,3 ± 0,0028 | <0,05 | 104605,1 |
| W-mykofenoilo-L-walina | 21,51 ± 0,0015 | <0,05 | 8855,7 |
| W-mykofenoilo-D-walina | 19,12 ± 0,0016 | <0,05 | 179860,9 |
| W-mykofenoilo-L-leucyna | 6,01 ± 0,0016* | <0,05 | 11663,8 |
| W-mykofenoilo-D-leucyna | 16,17 ± 0,0050 | <0,05 | 2770,6 |
| W-mykofenoilo-L-arginina | 8,4 ± 0,014* | <0,05 | 4638,47 |
| W-mykofenoilo-L-fenyloalanina | 19,49 ± 0,025 | <0,05 | 659,89 |
| W-mykofenoilo-D-fenyloalanina | 21,20 ± 0,056 | <0,05 | 157,54 |
| MPA | 9,45 ± 0,0789 | - | - |
gdzie:
* oznacza EC50 związków niższe od EC50 MPA, związki potencjalnie silniejsze od MPA, **p oznacza istotność statystyczną,
F oznacza test Fishera.
E) Ocena współczynnika selektywności (SI)
W celu określenia zależności pomiędzy IC50 oraz EC50 amidowych pochodnych o ogólnym wzorze 2 policzono współczynnik selektywności, co przedstawiono w tabeli 6. Im wartość SI jest większa tym mniejsza jest toksyczność związku w porównaniu z zastosowaną dawką leku.
gdzie:
IC50 oznacza 50% inhibitory concentration otrzymane w teście MTT [liM]
EC50 oznacza 50% effective concentration otrzymane w teście antyproliferacyjnym [lM]
T a b e l a 6
Współczynniki selektywności SI nowych pochodnych 3 i 4.
| Amidowa pochodna o ogólnym wzorze 2 | JURKAT |
| SI | |
| 1 | 2 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-alaniny | 2,2 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-alaniny | 4,1 |
| ester metylowy W-mykofenoiloglicyny | 2,7 |
| diester metylowy kwasu W-mykofenoilo-L-glutaminowego | 0,8 |
| diester metylowy kwasu W-mykofenoilo-D-glutaminowego | 1,05 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-treoniny | 2,03 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-waliny | 0,2 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-waliny | 0,75 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-leucyny | 1,04 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-leucyny | 2,3 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-argininy | 0,4 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-L-fenyloalaniny | 3,6 |
| ester metylowy W-mykofenoilo-D-fenyloalaniny | 0,8 |
PL 221 807 B1 cd. tabeli 6
| 1 | 2 |
| W-mykofenoilo-D-alanina | 1,2 |
| W-mykofenoilo-L-alanina | 0,1 |
| W-mykofenoiloglicyna | 4,02 |
| kwas W-mykofenoilo-L-glutaminowy | 1,6 |
| kwas W-mykofenoilo-D-glutaminowy | 47,07 |
| W-mykofenoilo-L-treonina | 0,1 |
| W-mykofenoilo-L-walina | 0,001 |
| W-mykofenoilo-D-walina | 1,99 |
| W-mykofenoilo-L-leucyna | 1,5 |
| W-mykofenoilo-D-leucyna | 2,6 |
| W-mykofenoilo-L-arginina | 3,1 |
| W-mykofenoilo-L-fenyloalanina | 1,7 |
| W-mykofenoilo-D-fenyloalanina | 0,9 |
| MPA | 2,99 |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (4)
1. Nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H, albo CH3, albo CH2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a oznacza CH3 albo H.
2. Sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo Ch2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3, który charakteryzuje się według wynalazku tym, że sporządza się mieszaninę reakcyjną zawierającą od 29% do 36% masowych kwasu myk ofenolowego, oraz od 29% do 36% masowych estru aminokwasu takiego jak glicyna albo alanina, albo fenyloalanina, albo walina, albo leucyna, albo kwas glutaminowy, w postaci chlorowodorku rozpuszczonego w bezwodnym W,W-dimetyloformamidzie, oraz od 14% do 21% masowych 4-W,W-dimetyloaminopirydyny, rozpuszczonej w bezwodnym W,W-dimetyloformamidzie, przy czym mieszaninę reakcyjną chłodzi się do temperatury od 0 do 10°C, a następnie do mieszaniny reakcyjnej wprowadza się od 24% do 31% masowych odczynnika kondensującego w postaci chlorowodorku 1 -etylo(3-dimetyloaminopropylo)karbodiimidu i utrzymując temperaturę reakcji w zakresie od 0°C do 10°C, korzystnie 0°C, miesza się korzystnie przez okres od 1 do 2 godzin, po czym kontynuuje się reakcję sukcesywnie zwiększając temperaturę do 18 do 26°C przez okres od 24 do 48 godzin. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się wodę i octan etylu w takiej ilości, aby utworzyć dwie klarowne fazy, a następnie rozdziela się fazy i przemywa się korzystnie 10% roztworem wodorowęglanu sodu i wodą, po czym oddzieloną warstwę organiczną korzystnie osusza się bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje się do uzyskania czystego produktu.
3. Sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo CH2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza H, znamienny tym, że rozpuszcza się w metanolu od 64% do 77% masowych amidowej pochodnej kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo Ch2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3, a następnie dodaje się od 23% do 36% masowych monohydratu wodorotlenku litu rozcieńczonego w wodzie, po czym uzyskaną mieszaninę reakcyjną miesza się w temperaturze pokojowej przez okres od 12 do 48 godzin, korzystnie 24 godzin, a następnie tą mieszaninę reakcyjną zakwasza się kwasem solnym i dod aje octanu etylu w takiej ilości aby utworzyć dwie klarowne fazy, a następnie rozdziela się fazy od
PL 221 807 B1 siebie, po czym warstwę organiczną korzystnie osusza się bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje się do uzyskania czystego produktu.
4. Zastosowanie nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego o ogólnym wzorze 2, gdzie R oznacza H albo CH3, albo CH2Ph, albo CH(CH3)2, albo CH2CH(CH3)2, albo CH2CH2COOH, albo CH(OH)CH3, albo (CH2)3NH(C=NH)NH2, a R' oznacza CH3 albo H do wytwarzania leku immunosupresyjnego, zwłaszcza leku zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL402374A PL221807B1 (pl) | 2013-01-07 | 2013-01-07 | Nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego, sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego, i zastosowanie nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego do wytwarzania leku immunosupresyjnego zwłaszcza zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL402374A PL221807B1 (pl) | 2013-01-07 | 2013-01-07 | Nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego, sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego, i zastosowanie nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego do wytwarzania leku immunosupresyjnego zwłaszcza zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL402374A1 PL402374A1 (pl) | 2014-07-21 |
| PL221807B1 true PL221807B1 (pl) | 2016-05-31 |
Family
ID=51179247
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL402374A PL221807B1 (pl) | 2013-01-07 | 2013-01-07 | Nowe amidowe pochodne kwasu mykofenolowego, sposób otrzymywania amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego, i zastosowanie nowych amidowych pochodnych kwasu mykofenolowego do wytwarzania leku immunosupresyjnego zwłaszcza zmniejszającego ryzyko odrzucenia przeszczepów |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL221807B1 (pl) |
-
2013
- 2013-01-07 PL PL402374A patent/PL221807B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL402374A1 (pl) | 2014-07-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6552197B2 (en) | Condensed-hexacyclic compounds and a process therefor | |
| KR20150003875A (ko) | 바독솔론 메틸의 2,2-다이플루오로프로피온아미드 유도체, 그의 다형태 및 사용 방법 | |
| EP2958883B1 (en) | Cyclohexenone compositions and process for making thereof | |
| WO1999051586A1 (en) | Reagent for singlet oxygen determination | |
| Bucciarelli et al. | Regioselectivity of ring-opening reactions of optically active N-acetyl-2-methoxycarbonylaziridine | |
| Angelici et al. | Synthesis of imidazolidin-2-one-4-carboxylate and of (tetrahydro) pyrimidin-2-one-5-carboxylate via an efficient modification of the Hofmann rearrangement | |
| Yang et al. | Neihumicin, a new cytotoxic antibiotic from Micromonospora neihuensis II. Structural determination and total synthesis | |
| EP3157906B1 (en) | Iminosydnone derivatives for conjugation and release of compounds of interest | |
| DK150490B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af 2-aminooctahydro-oxazolo-(3,2-a)pyrrolo(2,1-c)pyrazinderivater | |
| IL128186A (en) | Intermediates for the preparation of 2 - imidazoline - 5 lobes | |
| US6372936B1 (en) | Optical resolution of aminoisobobutyric acid | |
| KR20090102784A (ko) | 3,4-디아미노피리딘 유도체 | |
| EP2855422B1 (en) | Synthesis of diamido gellants by using dane salts of amino acids | |
| JP7842890B2 (ja) | ４－［５－［ビス（２－クロロエチル）アミノ］－１－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－イル］酪酸アルキルエステル及びホルミル化誘導体の調製方法 | |
| AU2016233227B2 (en) | Amino acid acylation reagents and methods of using the same | |
| Yoshida et al. | Synthesis of cross-linkable 2, 5-diketopiperazine derivatives | |
| EP4692084A1 (en) | Novel derivatives of n-substituted nortropinone, their production and their use | |
| EP3956332B1 (en) | Diasteroselective process for the preparation of thiol- or disulfide-containing maytansinoid esters and intermediates thereof | |
| Masuoka et al. | Diheteropeptin, a Novel Substance with TGF-β-like Activity, Produced by a Fungus, Diheterospora chlamydosporia II. Physico-chemical Properties and Structure Elucidation | |
| Pan et al. | Diastereospecific synthesis of trans-2, 3-diaryl-1-aminocyclopropanecarboxylic acids | |
| AU2024331870A1 (en) | Macrocyclic compound and use thereof | |
| CA3207957A1 (en) | Benzazepine compounds, preparation method therefor and pharmaceutical use thereof | |
| JP2020180052A (ja) | 新規フルオロジニトロフェニル化合物及びその用途 | |
| JPS63239283A (ja) | イミダゾ−ル誘導体、製造方法およびそれらを含む製薬組成物 | |
| HUP0201635A2 (en) | Method for preparing substituted [1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-4-ones |