PL230996B1 - Nowa pochodna lupeolu - Google Patents
Nowa pochodna lupeoluInfo
- Publication number
- PL230996B1 PL230996B1 PL418917A PL41891716A PL230996B1 PL 230996 B1 PL230996 B1 PL 230996B1 PL 418917 A PL418917 A PL 418917A PL 41891716 A PL41891716 A PL 41891716A PL 230996 B1 PL230996 B1 PL 230996B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- lupeol
- derivative
- new
- formula
- skin
- Prior art date
Links
- 150000002656 lupeols Chemical class 0.000 title claims abstract description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 5
- TWBYWOBDOCUKOW-UHFFFAOYSA-N isonicotinic acid Natural products OC(=O)C1=CC=NC=C1 TWBYWOBDOCUKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- -1 4-picolinic acid ester Chemical class 0.000 claims description 4
- MQYXUWHLBZFQQO-QGTGJCAVSA-N lupeol Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C MQYXUWHLBZFQQO-QGTGJCAVSA-N 0.000 abstract description 35
- PKGKOZOYXQMJNG-UHFFFAOYSA-N lupeol Natural products CC(=C)C1CC2C(C)(CCC3C4(C)CCC5C(C)(C)C(O)CCC5(C)C4CCC23C)C1 PKGKOZOYXQMJNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 34
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 abstract description 6
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 abstract 2
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 abstract 2
- ATBIAJXSKNPHEI-UHFFFAOYSA-N pyridine-3-carbonyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CN=C1 ATBIAJXSKNPHEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 10
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 9
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 9
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 9
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 8
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- TWBYWOBDOCUKOW-UHFFFAOYSA-M isonicotinate Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=NC=C1 TWBYWOBDOCUKOW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 5
- 235000009109 Betula pendula Nutrition 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 4
- RVQZKNOMKUSGCI-UHFFFAOYSA-N pyridine-4-carbonyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=NC=C1 RVQZKNOMKUSGCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000219430 Betula pendula Species 0.000 description 3
- 235000002992 Betula pubescens Nutrition 0.000 description 3
- 241001520764 Betula pubescens Species 0.000 description 3
- 231100000948 EpiDerm Skin Irritation Test Toxicity 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 3
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 2
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 231100000058 in vitro skin irritation / corrosion testing Toxicity 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AKGNIBXGIPMDLE-UHFFFAOYSA-N pyridine-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=NC=C1.OC(=O)C1=CC=NC=C1 AKGNIBXGIPMDLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 2
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-AAKVHIHISA-N 2,3-bis[[(z)-12-hydroxyoctadec-9-enoyl]oxy]propyl (z)-12-hydroxyoctadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCC(O)C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(O)CCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-AAKVHIHISA-N 0.000 description 1
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009113 Betula papyrifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000010928 Betula populifolia Nutrition 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 231100000124 OECD 439 In Vitro Skin Irritation Toxicity 0.000 description 1
- JYDNKGUBLIKNAM-UHFFFAOYSA-N Oxyallobutulin Natural products C1CC(=O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(CO)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C JYDNKGUBLIKNAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 206010042496 Sunburn Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- FVWJYYTZTCVBKE-ROUWMTJPSA-N betulin Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(CO)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C FVWJYYTZTCVBKE-ROUWMTJPSA-N 0.000 description 1
- MVIRREHRVZLANQ-UHFFFAOYSA-N betulin Natural products CC(=O)OC1CCC2(C)C(CCC3(C)C2CC=C4C5C(CCC5(CO)CCC34C)C(=C)C)C1(C)C MVIRREHRVZLANQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- UPZNFEYZMRXDPD-UHFFFAOYSA-N pyridine-4-carboxylic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)C1=CC=NC=C1 UPZNFEYZMRXDPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 231100000428 reversible damage to the skin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest nowa, pochodna lupeolu, o nazwie chemicznej ester kwasu 3-pikolinowego i 20(29)-lupen-3ß-olu, o wzorze 1, będąca estrem pozyskanym w wyniku modyfikacji struktury naturalnego lupeolu o wzorze 2, chlorkiem kwasu 3-pikolinowego o wzorze 3 lub kwasem 3-pikolinowym o wzorze 4.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest nowa, nie opisana dotychczas w literaturze pochodna lupeolu, o nazwie chemicznej ester kwasu 4-pikolinowego i 20(29)-lupen-33-olu, o wzorze 1, będąca estrem pozyskanym w wyniku modyfikacji struktury naturalnego lupeolu (alkoholu triretpenowego 20(29)-lupen-33-olu) występującego w korze brzozy, w tym zwłaszcza brzozy brodawkowatej (Betula pendula Ehrh), brzozy omszonej (Betula pubescens Ehrh.) i brzozy białej (Betula Pendula Roth), chlorkiem kwasu 4-pikolinowego (chlorkiem kwasu izonikotynowego) lub kwasem 4-pikolinowym (kwasem izonikotynowym).
Będąca przedmiotem wynalazku nowa pochodna lupeolu (ester kwasu 4-pikolinowego i 20(29)-lupen-33-olu), o wzorze sumarycznym C36H53NO2, ma postać ciała stałego (biały proszek), jest bardzo słabo rozpuszczalna w wodzie, dobrze rozpuszcza się w alkoholu metylowym i etylowym oraz rozpuszczalnikach organicznych, jak chloroform, chlorek metylenu, aceton, octan etylu, tetrahydrofuran. Jej temperatura topnienia mieści się w przedziale 257-259°C.
Nowy pochodna lupeolu wykazuje działanie proliferacyjne w stosunku do komórek skóry ludzkiej, nie wykazując przy tym działania toksycznego ani drażniącego. Ponadto, działa antyoksydacyjnie, dzięki czemu może wchodzić w skład preparatów pielęgnacyjnych i leczniczych przeznaczonych do skóry uszkodzonej lub wymagającej szybkiej regeneracji.
Wiadomo, że ekstrakt z kory brzozy jest od lat stosowany jako środek leczący choroby skóry, np. wysypki, infekcje, stany zapalne. Obecnie w lecznictwie stosowany jest surowiec pozyskiwany z dwóch gatunków: brzozy brodawkowatej Betula pendula Ehrh. i brzozy omszonej Betula pubescens Ehrh. [B. Bednarczycz-Cwynar, L. Zaprutko, Polish J. Cosmetol, 2003, 4, 218; K.H.C. Ba§er, B. Demirci, Arkivoc, 2007, VII, 335; A. Ożarowski, W. Jaroniewski, Rośliny lecznicze i ich praktyczne zastosowanie, IWZZ, Warszawa, 1987].
Kora brzozy charakteryzuje się szczególnie wysoką zawartością triterpenów, głównie betuliny i lupeolu. Zawartość ich w suchym ekstrakcie z kory brzozy sięga 80% [A. Z. Abyshev, E. M. Agaev, A. B. Guseinov, Pharm. Chem. J., 2007, 41(8) 22].
Triterpeny wchodzące w skład ekstraktu brzozowego wykazują działanie przeciwzapalne, antyoksydacyjne i regenerujące, a także przeciwdrobnoustrojowe i przeciwnowotworowe.
W zgłoszeniu patentowym US2006/216249 „Use of a cosmetic of pharmaceutical composition, comprising a lupeol-rich extract as an active ingredient for stimulating the synthesis of heat shock proteins, oraz jego analogach WO2005/9331 i EP1648482, opisane są badania, które potwierdzają skuteczność lupeolu w stymulacji komórek skóry do tworzenia białek strukturalnych (kolagenu i elastyny).
Stanowiący przedmiot wynalazku ester lupeolu i kwasu izonikotynowego (izonikotynian lupeolu) to nowy związek nieopisany dotąd w literaturze. Jak dotąd brak także w literaturze opisu otrzymania nowej pochodnej lupeolu przedstawionej we wzorze 1, będącej przedmiotem wynalazku.
Nowa pochodna lupeolu charakteryzuje się wykazaną badaniami, aktywnością biologiczną. Posiada zdolność do proliferacji (regeneracji) komórek naskórka oraz działanie antyoksydacyjne wyższe od lupeolu, co zostało potwierdzone przedstawionymi niżej wynikami badań porównawczych obejmujących ocenę dermatologiczną (test EpiDerm™ SIT) oraz określenie zdolności do redukcji wolnych rodników (aktywności antyoksydacyjnej).
Wiadomo, że podrażnienie kontaktowe skóry, w następstwie działania czynnika chemicznego, jest jej odwracalnym uszkodzeniem i pojawia się krótko po wystąpieniu narażenia. W podrażnieniu kontaktowym występuje charakterystyczna, odwracalna reakcja zapalna.
W celu oceny porównawczej potencjału drażniącego lupeolu i jego nowej pochodnej, będącej przedmiotem wynalazku, zastosowano metodę - EpiDerm™ SIT (EPI-200) zgodnie z wytycznymi Organizacji Współpracy Gospodarczej i Rozwoju (OECD 439) [OECD Guideline For The Testing Of Chemicals. Test No. 439: In Vitro Skin Irritation: Reconstructed Human Epidermis Test Method. 2013].
Zastosowana metoda jest metodą in vitro, bazująca na modelu rekonstruowanego ludzkiego naskórka (RhE), którego budowa pozwala na odtworzenie biochemicznych i fizjologicznych właściwości zewnętrznych warstw skóry człowieka, tj. naskórka. Zastosowano w badaniach model naskórka EpiDerm dostarczony przez amerykańską firmę MatTek. Naskórek hodowany był na matrycy kolagenowej.
Badanie polegało na nałożeniu roztworu badanego związku na powierzchnię modelu naskórka. Roztwory lupeolu i jego nowej pochodnej zostały sporządzone w bazie olejowej Crodamol GTCC (firmy Croda, W. Brytania), a stężenie każdego z nich wynosiło 0,5% (m/m). Całą procedurę pomiaru potencjalnego potencjału drażniącego wykonano zgodnie z SOP (ang. Standard Operation Protocol)
PL 230 996 B1
ECVAM [In vitro Skin Irritation Test:Human Skin Model, EpiDerm-200, Version: 7.0, 30.10.2007]. Po 42 godzinach inkubacji oceniona została żywotność komórek za pomocą testu kolorymetrycznego MTT. Równocześnie z badanymi związkami (lupeolem i jego nową pochodną), badano również próbę pozytywną - PC (roztwór 5% dodecylosiarczanu sodu (SDS) w bazie olejowej Crodamol GTCC) oraz próbę negatywną - NC, którą stanowiła czysta baza olejowa Crodamol GTCC.
Przeprowadzone testy na potencjał drażniący wykazały, że nowa pochodna lupeolu, będąca przedmiotem wynalazku, podobnie jak lupeol, nie powoduje powstawania odczynu zapalnego komórek naskórka. Co więcej, nowa pochodna lupeolu wykazywała zdolność do indukcji proliferacji komórek na poziomie 134,1%, czego nie można było wcześniej przewidzieć. Natomiast w przypadku czystego lupeolu wartość ta wynosiła 89,2% .
Wyniki oceny potencjału drażniącego metodą Epiderm dla lupeolu, nowej pochodnej lupeolu (izonikotynianu lupeolu), próby negatywnej (NC) i próby pozytywnej (PC) przedstawiono w tabeli 1.
T a b e l a 1
| Nazwa | Żywotność komórek [%] |
| Lupeol | 89,2% ± 6,0 |
| Nowa pochodna lupeolu | 134,1% ± 10,2 |
| NC | 100,0% ± 10,2 |
| PC | 28,1 ± 0,0 |
Uzyskane wyniki badań wskazują jednoznacznie na to, że nowa pochodna lupeolu wykazuje bezpośrednie działanie stymulujące podziały komórek skóry, a przy tym ma ponad 50% wyższą aktywność niż związek wyjściowy, tj. lupeol. Dzięki tym właściwościom nowa pochodna lupeolu nadaje się do zastosowania w preparatach wspomagających gojenie ran, a także wspomagających regenerację skóry.
Właściwości antyoksydacyjne lupeolu i jego nowej pochodnej badano metodą chemiczną redukcji rodnika 1,1-difenylo-2-pikrylohydrazylu (DPPH). Efektywność działania antyutleniającego w tej metodzie, wyrażana jest zdolnością do dezaktywacji rodnika DPPH. Metoda ta pozwala na określenie całkowitej aktywności antyoksydacyjnej związku, wyrażonej jako procent inhibicji.
Przeprowadzone badania wykazały, że nowa pochodna lupeolu będąca przedmiotem wynalazku, wykazuje 27,7% aktywność w procesie neutralizacji rodnika DPPH, podczas gdy lupeol jedynie 1,4%. Wyniki badań całkowitej aktywności antyoksydacyjnej obu związków przedstawiono w tabeli 2.
T a b e l a 2
| Nazwa | Inhibicja procesu utleniania [%] |
| Lupeol | 1,40 ± 0,08 |
| Nowa pochodna lupeolu | 27,66 ± 0,12 |
Sposób otrzymywania nowej pochodnej lupeolu (estru kwasu 4-pikolinowego i 20(29)-lupen-33-olu) o wzorze 1, polega na tym, że lupeol (alkohol triperpenowy 20(29)-lupen-3p-ol) o wzorze 2 estryfikuje się chlorkiem kwasu 4-pikolinowego (chlorkiem kwasu izonikotynowego) o wzorze 3. Alternatywnie, estryfikację prowadzi się kwasem 4-pikolinowym (kwasem izonikotynowym) o wzorze 4. Proces estryfikacji prowadzi się w rozpuszczalniku organicznym w obecności katalizatora i regulatorów pH.
Szczegółowy przebieg procesu wytwarzania nowej pochodnej lupeolu ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d 1 g (2,3 mmola) lupeolu rozpuszczono w 16 ml DCM (chlorku metylenu). Następnie do roztworu dodano 1,0 g (9,2 mmola) chlorku kwasu izonikotynowego i 7,5 ml pirydyny, uzyskując pH 10,5. Następnie dodano 0,58 g (2,3 mmola) DMAP (4-dimetyloaminopirydyny) jako katalizatora. Mieszaninę reakcyjną mieszano, utrzymując temperaturę w przedziale 0-5°C, kontrolując postęp reakcji metodą TLC (chromatografii cienkowarstwowej). Po stwierdzeniu że stopnień przereagowania lupeolu osiągnął założoną wartość, np. 60%, mieszaninę reakcyjną wylano na 200 g pokruszonego lodu i dodano 100 ml 30% (m/v) kwasu solnego, uzyskując pH mieszaniny 6,5. Następnie dodano 15 ml CH2CI2 (chlorku metylenu) i ekstrahowano produkt do fazy organicznej. Po oddzieleniu fazy organicznej od fazy wodnej, fazę organiczną odwodniono nad bezwodnym siarczanem magnezu, po czym fazę organiczną zagęsz4
PL 230 996 B1 czono na wyparce próżniowej. Otrzymany produkt w formie sypkiej rozpuszczono w chloroformie i krystalizowano. Tak otrzymaną nową pochodną lupeolu w formie krystalicznej suszono w temperaturze pokojowej przez 8 godzin.
Wykonane analizy pozwalają na jednoznaczne potwierdzenie, że w wyniku estryfikacji lupeolu otrzymano nową jego pochodną - ester kwasu 4-pikolinowego i 20(29)-lupen-33-olu (izonikotynian lupeolu). Związek scharakteryzowano wykonując spektroskopię UV-Vis, magnetyczny rezonans jądrowy (NMR), analizę chromatograficzną ze spektroskopią mas (HPLC-MS), analizę elementarną (CHN), chromatografię cienkowarstwową (TLC), pomiar jego temperatury topnienia.
Wyniki analiz potwierdzające strukturę otrzymanego związku są następujące.
Spektroskopia UV-Vis
Maksimum absorbancji : Xmax = 209,8 nm
Widmo UV-Vis przedstawiono na załączonym rysunku na fig. 1
NMR (magnetyczny rezonans jądrowy) 1H NMR (CDCIa δ) [ppm]: 9.00 (d, 2H, H-36,38), 8.37 (d, 2H, H-35,37), 4.81 (m, 1H, H-6), 4.57 (m, 2H, H-5), 2.37 (3td, 1H, H-2), 1.93 (m, 2H, H-3), 1.78 (s, 3H, H-23), 1.65 (m, 6H, H-27,28) 1.50 (d, 1H, H-9), 1.46 (d, 1H, H-11), 1.40 (m, 4H, H-10,14), 1.32 (m, 4H, H-8,13), 1.16 (m, 4H, H-16,18), 1.04 (s, 3H, H-24), 1.00 (s, 3H, H-26), 0.91 (t, 8H, H-22,30,31) 0.86 (d, 1H, H-21) 0.76 (m, 4H, H-19,20) 0.63 (m, 1H, H-17).
Widmo wodorowe NMR przedstawiono na załączonym rysunku na fig. 2 13C NMR (CDCI3 δ) [ppm]: 161.83(C-32), 150.90(C-25), 144.85(C-36), 143.59(C-38), 126.02 (C-35), 109.35(C-30), 85.07(C-37), 78.93(C-6), 55.31(C-21) 50.36(C-31), 48.24(C-4), 47.95(C-5), 42.96(C-1), 42.81(0-7), 40.81(C-12), 39.95(C-15), 38.83(C-17), 38.68(C-11), 38.21 (C-34), 37.98(C-9), 37.08(C-2), 35.51(C-3), 34.11 (C-20), 29.80(C-19), 28.18(C-10), 27.98(C-13), 27.41 (C-14), 25.03(C-8), 20.96(C-16), 19.28(C-18), 18.15(0-7), 17.97(C-28), 16.15(C-22), 15.96(C-26), 15.38(C-23),14.50(C-24).
Widmo węglowe NMR przedstawiono na załączonym rysunku na fig. 3
Analiza HPLC - MS (analiza chromatograficzna ze spektroskopią mas)
MS (m/z, %): 425.5 (25.7), 424.4 (26.9), 423.3 (100), 410.3 (23.9), 409.4 (51.2), 407.2 (25.2), 311.3 (14.8).
Czystość związku określono metodą HPLC na 96,1%.
Chromatogram HPLC przedstawiono na załączonym rysunku na fig. 4, chromatogram MS przedstawiono na fig. 5, a masy i intensywność jonów fragmentacyjnych na fig. 6.
Analiza elementarna (CHN)
CHN: Wartości teoretyczne: C=81,30%; H=10,04%; N=2,63% (m/m)
Wartości eksperymentalne: C=80,74 +/- 0,03%; H=10,12 +/- 0,01%; N=2,70 +/- 0,02% (m/m).
Chromatografia cienkowarstwowa (TLC)
TLC: Rf = 0,81 (układ eluentów chloroform : octan etylu - 9:1 v/v).
Temperatura topnienia (wyznaczona w aparacie Stuart SMP 10)
Tt = 257-259°C.
Wzór sumaryczny: C36H53NO2
Masa molowa: 531.81 g/mol.
P r z y k ł a d 2 g (2,3 mmola) lupeolu rozpuszczono w 16 ml DCM (chlorku metylenu). Następnie do roztworu dodano 1,0 g (9,2 mmola) kwasu izonikotynowego i 7,5 ml pirydyny, uzyskując pH 10,0. Następnie dodano 0,71 g (5,8 mmola) DMAP (4-dimetyloaminopirydyny) jako katalizatora. Następnie mieszaninę reakcyjną ogrzewano pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 50°C, przez 4 godziny, kontrolując postęp reakcji metodą TLC (chromatografii cienkowarstwowej). Po stwierdzeniu że stopień przereagowania lupeolu osiągnął założoną wartość, np. 60%, dodano 100 ml 30% (m/v) kwasu solnego, uzyskując pH=6,5. Następnie dodano się 15 ml CH2CI2 (chlorku metylenu), w celu całkowitego rozpuszczenia produktu w fazie organicznej. Po oddzieleniu fazy organicznej od fazy wodnej, fazę organiczną odwodniono nad bezwodnym siarczanem magnezu, po czym fazę organiczną zagęszczono na wyparce próżniowej. Otrzymany produkt w formie sypkiej rozpuszczono w chloroformie i krystalizowano. Tak otrzymaną nową pochodną lupeolu w formie krystalicznej suszono w temperaturze pokojowej przez 8 godzin.
P r z y k ł a d 3 g (2,3 mmola) lupeolu rozprowadzono w 5,5 ml THF (tetrahydrofuranu). Dodano 1 ml NMM (N-metylomorfoliny) uzyskując wartość pH 10. Następnie dodano 1,1 g (9,2 mola) kwasu izonikotynoPL 230 996 B1 wego oraz 0,54 g (2,3 mmola) DCC (N,N-dicykloheksylokarbodiimidu) jako katalizatora. Mieszaninę reakcyjną ogrzewano pod chłodnicą zwrotną, mieszając, w temperaturze 50°C. Po uzyskaniu założonego stopnia przereagowania, np. 60%, który kontrolowano metodą TLC, z mieszaniny reakcyjnej wytrącił się kremowy osad, który przesączono na lejku ze spiekiem, a następnie przemyto 45 ml wody destylowanej. Otrzymany związek w formie proszku suszono w temperaturze pokojowej przez 6 godzin.
Wyniki analiz produktów z przykładów 2 i 3, potwierdzające strukturę otrzymanego związku były, w granicach błędu pomiarowego, takie jak w przykładzie 1.
Przedstawione wyniki analiz dla izonikotynianu lupeolu otrzymanego różnymi metodami nie odbiegają od siebie i opisują ta samą strukturę. Wybór metody syntezy nie wpływa na jakość otrzymanego estru. Otrzymany związek, będący przedmiotem wynalazku, jest półsyntetyczną pochodną lupeolu naturalnego metabolitu roślinnego.
Modyfikacja struktury lupeolu pozwoliła na otrzymanie cząsteczki wykazującej efektywniejsze działanie antyoksydacyjne i proliferacyjne w porównaniu z wyjściowym surowcem. Jak jednoznacznie wskazują wyniki testów in vitro, otrzymana nowa pochodna lupeolu będąca estrem kwasu izonikotynowego i lupeolu (izonikotynian lupeolu) charakteryzuje się aktywnością antyoksydacyjną oraz zdolnością do inicjacji procesów odbudowy komórek skóry (właściwości proliferacyjne), co czyni ją pożądanym składnikiem aktywnym preparatów dermatologicznych i kosmetycznych. Jest substancją o bardzo dobrych właściwościach dermatologicznych, nie wykazującą działania toksycznego i potencjału drażniącego w stosunku do komórek skóry. W zależności od użytego stężenia może ona znaleźć zastosowanie jako składnik biologicznie czynny w preparatach pielęgnacyjnych lub leczniczych.
Preparaty zawierające nową pochodną lupeolu, stanowiącą przedmiot wynalazku, mogą być stosowane do regeneracji skóry uszkodzonej (związek ten indukuje proces namnażania keratynocytów intensywniej niż lupeol, przez co znacznie mocniej od lupeolu wspomaga proces odbudowy naskórka) oraz skóry podrażnionej przykładowo przy łagodzeniu skutków nadmiernej eksploatacji skóry narażonej na promienie ultrafioletowe czy oparzeń słonecznych.
Claims (1)
- Zastrzeżenie patentowe1. Nowa pochodna lupeolu o nazwie chemicznej ester kwasu 4-pikolinowego i 20(29)-lupen-33olu i wzorze 1 przedstawionym na rysunku.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL418917A PL230996B1 (pl) | 2016-09-29 | 2016-09-29 | Nowa pochodna lupeolu |
| PCT/PL2017/000070 WO2018063010A1 (en) | 2016-09-29 | 2017-07-12 | Novel lupeol derivative and the method of obtaining the novel lupeol derivative |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL418917A PL230996B1 (pl) | 2016-09-29 | 2016-09-29 | Nowa pochodna lupeolu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL418917A1 PL418917A1 (pl) | 2018-04-09 |
| PL230996B1 true PL230996B1 (pl) | 2019-01-31 |
Family
ID=61809871
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL418917A PL230996B1 (pl) | 2016-09-29 | 2016-09-29 | Nowa pochodna lupeolu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL230996B1 (pl) |
-
2016
- 2016-09-29 PL PL418917A patent/PL230996B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL418917A1 (pl) | 2018-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wolfram et al. | Homopiperazine-rhodamine B adducts of triterpenoic acids are strong mitocans | |
| Fernández-Herrera et al. | Probing the selective antitumor activity of 22-oxo-26-selenocyanocholestane derivatives | |
| CN102574890B (zh) | 某些化学个体、组合物及方法 | |
| DE69715010T2 (de) | Ausgewählte k-252a derivate | |
| Michalak et al. | Antioxidant activity of novel diosgenin derivatives: Synthesis, biological evaluation, and in silico ADME prediction | |
| Kahnt et al. | Platanic acid-derived methyl 20-amino-30-norlupan-28-oates are potent cytotoxic agents acting by apoptosis | |
| Petrenko et al. | MSBA-S–A pentacyclic sulfamate as a new option for radiotherapy of human breast cancer cells | |
| Mashrai et al. | Green synthesis and biological evaluation of steroidal 2H-pyrans as anticancer and antioxidant agents | |
| CN111072682A (zh) | 白屈菜碱呋咱类一氧化氮供体衍生物及其制备方法和用途 | |
| Khusnutdinova et al. | The synthesis and selective cytotoxicity of new Mannich bases, derivatives of 19-and 28-alkynyltriterpenoids | |
| CN102675405A (zh) | 熊果酸哌嗪酰胺类化合物及其制备方法和用途 | |
| CN110981881A (zh) | 白屈菜碱一氧化氮供体衍生物及其制备方法和用途 | |
| PL230996B1 (pl) | Nowa pochodna lupeolu | |
| Li et al. | Synthesis and Anti‐tumor Evaluation of Novel C‐37 Modified Derivatives of Gambogic Acid | |
| CN110981882B (zh) | 一类白屈菜碱一氧化氮供体衍生物及其制备方法和用途 | |
| Ledeti et al. | Study on obtaining 3-oxolup-20 (29)-en-28-oic acid (betulonic acid) from (3β)-lup-20 (29)-en-3, 28-diol (betulin) | |
| RU2686459C1 (ru) | Таксановое соединение, а также способ его получения и его применение | |
| Bednarczyk-Cwynar et al. | Hybrids of oleanolic acid with norbornene-2, 3-dicarboximide-N-carboxylic acids as potential anticancer agents | |
| Khanam et al. | Synthesis, growth, spectral, thermal and crystallographic studies of 5α, 6α-epoxycholestane single crystals | |
| RU2686675C1 (ru) | Таксановые соединения, а также способ их получения и их применения | |
| Stulov et al. | Synthesis of 21-nitrogen substituted pregna-5, 17 (20)-dienes from pregnenolone | |
| PL230998B1 (pl) | Sposób wytwarzania nowej pochodnej lupeolu | |
| Wolfram et al. | β-11-Keto-boswellic acid derived amides: synthesis and cytotoxicity | |
| RU2798105C1 (ru) | 7-триазолил-замещенные гидроксиспиростаны, обладающие цитотоксической активностью в отношении опухолевых клеток человека | |
| Serbian et al. | Interconversion of hederagenin and gypsogenin and accessing 4-epi-hedragonic acid |