PL231214B1 - Pochodne kolchicyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie - Google Patents
Pochodne kolchicyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanieInfo
- Publication number
- PL231214B1 PL231214B1 PL424866A PL42486618A PL231214B1 PL 231214 B1 PL231214 B1 PL 231214B1 PL 424866 A PL424866 A PL 424866A PL 42486618 A PL42486618 A PL 42486618A PL 231214 B1 PL231214 B1 PL 231214B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- demethoxy
- general formula
- deacetyl
- chloro
- iodo
- Prior art date
Links
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical class C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 title description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 39
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 31
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 25
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 22
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 14
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 claims description 13
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims description 13
- RGUKYNXWOWSRET-UHFFFAOYSA-N 4-pyrrolidin-1-ylpyridine Chemical compound C1CCCN1C1=CC=NC=C1 RGUKYNXWOWSRET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 12
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 claims description 12
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 11
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 201000002758 colorectal adenoma Diseases 0.000 claims description 7
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 7
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 5
- 201000002037 lung adenoma Diseases 0.000 claims description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 3
- 201000003163 breast adenoma Diseases 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000012011 nucleophilic catalyst Substances 0.000 claims description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 150000003511 tertiary amides Chemical class 0.000 claims description 3
- IIFFFBSAXDNJHX-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-n,n-bis(2-methylpropyl)propan-1-amine Chemical compound CC(C)CN(CC(C)C)CC(C)C IIFFFBSAXDNJHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 claims description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 claims description 2
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RKBCYCFRFCNLTO-UHFFFAOYSA-N triisopropylamine Chemical compound CC(C)N(C(C)C)C(C)C RKBCYCFRFCNLTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YFTHZRPMJXBUME-UHFFFAOYSA-N tripropylamine Chemical compound CCCN(CCC)CCC YFTHZRPMJXBUME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims 5
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 17
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 8
- SXQCTESRRZBPHJ-UHFFFAOYSA-M lissamine rhodamine Chemical compound [Na+].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O SXQCTESRRZBPHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 5
- JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N N-Chlorosuccinimide Substances ClN1C(=O)CCC1=O JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- ADIMAYPTOBDMTL-UHFFFAOYSA-N oxazepam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)C(O)N=C1C1=CC=CC=C1 ADIMAYPTOBDMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N Benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1 KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- WFKAJVHLWXSISD-UHFFFAOYSA-N isobutyramide Chemical compound CC(C)C(N)=O WFKAJVHLWXSISD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JJKWHOSQTYYFAE-UHFFFAOYSA-N 2-methoxyacetyl chloride Chemical compound COCC(Cl)=O JJKWHOSQTYYFAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 229940045695 antineooplastic colchicine derivative Drugs 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CC ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- TUMNHQRORINJKE-UHFFFAOYSA-N 1,1-diethylurea Chemical compound CCN(CC)C(N)=O TUMNHQRORINJKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 2
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 2
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- DNSISZSEWVHGLH-UHFFFAOYSA-N butanamide Chemical compound CCCC(N)=O DNSISZSEWVHGLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- TUTWLYPCGCUWQI-UHFFFAOYSA-N decanamide Chemical compound CCCCCCCCCC(N)=O TUTWLYPCGCUWQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IPIVAXLHTVNRBS-UHFFFAOYSA-N decanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCCC(Cl)=O IPIVAXLHTVNRBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- -1 hexafluorophosphate Chemical compound 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006217 methyl sulfide group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 description 2
- RZWZRACFZGVKFM-UHFFFAOYSA-N propanoyl chloride Chemical compound CCC(Cl)=O RZWZRACFZGVKFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTEZLAATISORQK-UHFFFAOYSA-N 2-methoxyacetamide Chemical compound COCC(N)=O MTEZLAATISORQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGMOBVGABMBZSB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropanoyl chloride Chemical compound CC(C)C(Cl)=O DGMOBVGABMBZSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDIIZULDSLKBKV-UHFFFAOYSA-N 4-chlorobutanoyl chloride Chemical compound ClCCCC(Cl)=O CDIIZULDSLKBKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000189665 Colchicum autumnale Species 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 240000008609 Gloriosa superba Species 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002927 anti-mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007809 chemical reaction catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000000850 deacetylating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000029115 microtubule polymerization Effects 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- OFCCYDUUBNUJIB-UHFFFAOYSA-N n,n-diethylcarbamoyl chloride Chemical compound CCN(CC)C(Cl)=O OFCCYDUUBNUJIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMEGANPVAXDBPL-INIZCTEOSA-N n-[(7s)-1,2,3-trimethoxy-10-methylsulfanyl-9-oxo-6,7-dihydro-5h-benzo[a]heptalen-7-yl]acetamide Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(SC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC CMEGANPVAXDBPL-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- ALELANHAGUYPLN-HNNXBMFYSA-N n-[(7s)-4-chloro-1,2,3,10-tetramethoxy-9-oxo-6,7-dihydro-5h-benzo[a]heptalen-7-yl]acetamide Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C(Cl)=C(OC)C(OC)=C1OC ALELANHAGUYPLN-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 230000027498 negative regulation of mitosis Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000007344 nucleophilic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229930001910 pseudoalkaloid Natural products 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- RMBAVIFYHOYIFM-UHFFFAOYSA-M sodium methanethiolate Chemical compound [Na+].[S-]C RMBAVIFYHOYIFM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000000935 solvent evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000020347 spindle assembly Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 231100000338 sulforhodamine B assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000003210 sulforhodamine B staining Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są potrójnie modyfikowane w pozycji C-4, C-7 i C-10 pochodne kolchicyny oraz sposób ich wytwarzania.
Chemiczna modyfikacja związków pochodzenia naturalnego, wykazujących aktywność biologiczną, jest obecnie jedną z najbardziej efektywnych metod poszukiwania nowych leków. Kolchicyna pseudoalkaloid izolowany głównie z Colchicum autumnale i Gloriosa superba jest dobrze znanym czynnikiem antymitotycznym oraz przeciwzapalnym. W testach in vivo wykazuje dobre właściwości cytostatyczne. Mechanizm działania cytostatycznego kolchicyny polega na wiązaniu się jej z tubuliną w kolchicynowym miejscu wiążącym tubuliny, czego skutkiem jest zablokowanie mitozy (podziału komórki). Powstawanie trwałego kompleksu kolchicyna - tubulina hamuje polimeryzację mikrotubul, co prowadzi do zablokowania tworzenia wrzeciona kariokinetycznego i zahamowania mitozy. Zastosowanie kliniczne kolchicyny w leczeniu nowotworów jest obecnie ograniczone ze względu na jej stosunkowo wysoką toksyczność i niską biodostępność.
W zgłoszeniu patentowym WO2011021397 ujawniono podwójnie modyfikowane pochodne kolchicyny podstawione atomami halogenu w pozycji C-4 oraz posiadające zmodyfikowaną grupę w pozycji C-7. Aktywność przeciwnowotworowa niektórych ujawnionych związków została sprawdzona wobec ludzkich nowotworowych linii komórkowych A549 (ludzki gruczolak płuc) oraz HT-29 (ludzki nowotwór jelita grubego). Związki modyfikowane w pozycji C-4 i C-7 ogólnie charakteryzowały się dobrą cytotoksycznością. W publikacji nie podano żadnych danych o działaniu badanych substancji na komórki zdrowe, zatem nie można określić współczynników selektywności badanych związków, które pozwalają przewidzieć czy dana substancja będzie w pierwszej kolejności działała na komórki nowotworowe czy na zdrowe komórki organizmu. Badania dotyczące pochodnych podstawionych atomem halogenu w pozycji C-4 prowadził również Yasobu i współpracownicy [Yasobu et al., ACS Medicinal Chemistry Letters, 2(5), 2011,348-352]. Z danych ujawnionych w publikacji wynika, że związki podstawione atomem halogenu w pozycji C-4 charakteryzowały się wyższą cytotoksycznością od niemodyfikowanej kolchicyny w stosunku do linii komórkowej A549 (ludzki gruczolak płuc) oraz porównywalną cytotoksycznością jak niemodyfikowana kolchicyna w stosunku do linii komórkowych HT-29 (ludzki nowotwór jelita grubego) oraz HCT116 (ludzki rak okrężnicy). Informacje zawarte w tej publikacji ograniczają się do testów in vitro w stosunku do komórek nowotworowych, zatem nieznane jest działanie tych związków na zdrowe komórki ludzkie, czyli nieznane są współczynniki selektywności tych związków.
W zgłoszeniu patentowym CA2808277, co prawda ujawniono m.in. podwójnie modyfikowane pochodne kolchicyny podstawione grupą metylosulfidową w pozycji C-10 oraz różnorodnymi podstawnikami w pozycji C-7, jednak nie ma tam żadnych doniesień (w przeciwieństwie do innych związków ujawnionych w tym zgłoszeniu) dotyczących badań cytotoksyczności dlatego typu pochodnych.
Kerekes i współpracownicy opisali badania nad pochodnymi kolchicyny modyfikowanymi w pozycji C-7 i C-10 [P. Kerekes et al. J Med Chem, 1985, 28, 1204-1208]. Badania cytotoksyczności otrzymanych związków prowadzono in vivo na myszach z mysią nowotworową linią komórkową P388 (mysia białaczka). Spośród czterech opisanych pochodnych z grupą amidową w pozycji C-7 oraz grupą metylosulfidową w pozycji C-10 dwie pochodne charakteryzowały się cytotoksycznością w stosunku do linii komórkowej P388 na poziomie niemodyfikowanej kolchicyny, a pozostałe dwie pochodne wykazywały gorszą cytotoksyczność od związku wyjściowego. Informacje zawarte w tej publikacji dotyczą wyłącznie badań in vivo wobec myszy z wszczepionymi mysimi komórkami nowotworowych. Organizm myszy istotnie różni się od organizmu człowieka, zatem nie można wyników uzyskanych dla komórek mysich bezpośrednio odnosić do komórek ludzkich, zatem nie można wnioskować o cytotoksyczności badanych pochodnych w stosunku do ludzkich nowotworowych linii komórkowych oraz zdrowych komórek organizmu.
Powszechnie wiadomo, że aktywność przeciwnowotworowa określonych farmakoforów jest specyficzna w stosunku do danej linii komórkowej. Dodatkowo żadna z otrzymanych do tej pory pochodnych kolchicyny nie znalazła zastosowania farmaceutycznego, a poszukiwania związku, który będzie charakteryzował się wysoką aktywnością przeciwnowotworową oraz dobrą selektywnością w stosunku do komórek nowotworowych wciąż trwają.
Celem wynalazku było wytworzenie nowych pochodnych kolchicyny modyfikowanych w pozycji C-4, C-7 i C-10 mogących znaleźć zastosowanie w terapii przeciwnowotworowej w szczególności wobec nowotworów podobnych do ludzkich nowotworowych linii komórkowych A549, MCF-7, LoVo, LoVo/DX.
PL231 214 Β1
Przedmiotem wynalazku są amidowe pochodne /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny o wzorze ogólnym 1
gdzie:
- X oznacza Cl, Br lub I;
- Y oznacza grupę alkilową prostą lub rozgałęzioną zawierającą od 1 do 4 atomów węgla;
- R oznacza:
• grupę alkilową prostą lub rozgałęzioną zawierającą od 1 do 10 atomów węgla, • grupę alkilową prostą zawierającą od 1 do 5 atomów węgla podstawioną w dowolnej pozycji łańcucha od 1 do 3 atomami halogenu, które mogą znajdować się zarówno przy tym samym jak i przy różnych atomach węgla, • grupę alkilową prostą zawierającą od 2 do 6 atomów węgla zawierającą w dowolnej pozycji łańcucha wiązania eterowe, • fenyl, • grupę aminową o wzorze ogólnym 2
r2 (2) gdzie podstawniki Ri, R2 są różne lub takie same i oznaczają atom wodoru lub grupę alkilową prostą zawierającą od 1 do 4 atomów węgla.
W drugim aspekcie przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nowych amidów N-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny o wzorze ogólnym 1, w którym X, R i Y mają wyżej podane znacznie w reakcji pomiędzy związkiem o wzorze ogólnym 3,
(3) w którym X i Y mają wyżej podane znacznie w reakcji z chlorkiem kwasowym o wzorze ogólnym 4,
O
w którym R ma wyżej podane znacznie w obecności zasady organicznej pełniącej rolę nukleofilowego katalizatora oraz aminy alifatycznej.
PL231 214 Β1
Reakcję prowadzi się w rozpuszczalniku apolarnym chloroalifatycznym, aromatycznym lub wtetrahydrofuranie, korzystnie w chloroformie, chlorku metylenu, toluenie, benzenie, tetrahydrofuranie. Korzystne jest prowadzenie reakcji w warunkach bezwodnych. Jako nukleofilowy katalizator reakcji stosuje się zasadę organiczną, korzystnie pirydynę, 4-pirolidynopiridynę (PPY), 4-dimetylaminopirydynę (DMAP), najkorzystniej 4-dimetylaminopirydynę (DMAP). Jako aminę alifatyczną stosuje się korzystnie tributyloaminę, tripropyloaminę, triizobutyloaminę, triizopropyloaminę, diizopropyloaminę, /V,/V-diizopropyloetyloaminę, trietyloaminę, najkorzystniej trietyloaminę. Aminy kompleksują powstający w wyniku rozpadu chlorku kwasowego produkt uboczny - chlorowodór. Wiązanie chlorowodoru przez aminę zapobiega zachodzeniu niepożądanych reakcji i zapobiega rozpadowi związku o wzorze 3. Do mieszaniny związku o wzorze 3 i aminy alifatycznej rozpuszczonych w rozpuszczalniku apolarnym dodaje się nukleofilowy katalizator, a następnie odpowiedni chlorek kwasowy o wzorze ogólnym 4. Reakcję prowadzi się w temperaturze nie wyższej niż 25°C, korzystnie stopień przereagowania kontroluje się za pomocą chromatografii TLC. Następnie odsącza się wytrącony osad chlorowodorku aminy alifatycznej. Jeżeli reakcja była prowadzona w innym rozpuszczalniku niż rozpuszczalnik chloroalifatyczny, rozpuszczalnik odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszcza w rozpuszczalniku chloroalifatycznym, korzystnie w chlorku metylenu lub chloroformie i ekstrahuje roztworem HCI(aq) (0,5 M), a następnie wodą. Jeżeli reakcja była prowadzona w rozpuszczalniku chloroalifatycznym pomija się etap odparowywania rozpuszczalnika i od razu przechodzi się do ekstrakcji. Następnie warstwę organiczną odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość oczyszcza się przy użyciu chromatografii kolumnowej, korzystnie przy użyciu chromatografu CombiFlash® stosując kolumnę wypełnioną S1O2 oraz mieszaninę rozpuszczalników organicznych, korzystnie heksan:octan etylu przy wzrastającym gradiencie stężeń octanu etylu od 0 do 100%.
W trzecim aspekcie przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nowych amidów /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny wzorze ogólnym 1, w którym X, R i Y mają wyżej podane znacznie w reakcji pomiędzy związkiem o wzorze ogólnym 3.
ogólnym 5,
O
gdzie R ma wyżej podane znaczenie w obecności czynnika sprzęgającego oraz zasady organicznej.
Czynnik sprzęgający jest aktywatorem grupy karboksylowej. W wyniku reakcji związku o wzorze ogólnym 5 z czynnikiem sprzęgającym wytworzony zostaje aktywny ester, który następnie reaguje z grupą aminową związku o wzorze ogólnym 3 prowadząc do wytworzenia związku o wzorze ogólnym 1.
Reakcję prowadzi się w rozpuszczalniku apolarnym chloroalifatycznym, aromatycznym lub w tetrahydrofuranie, korzystnie w chloroformie, chlorku metylenu, toluenie, benzenie, tetrahydrofuranie, najkorzystniej w chloroformie lub chlorku metylenu lub w rozpuszczalniku polarnym aprotycznym - prostym nitrylu, korzystnie acetonitrylu lub prostym trzeciorzędowym amidzie, korzystnie dimetyloformamidzie. Korzystne jest prowadzenie reakcji w warunkach bezwodnych. Jako czynnik sprzęgając stosuje się heksafluorofosforan 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylomocznika (HATU) (ang. 1-[Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxid hexafluorophosphate) lub Λ/,Λ/'-dicy
PL231 214 Β1 kloheksylokarbodiimid (DCC), przy czym w przypadku stosowania DCC korzystne jest stosowanie dodatkowo kwasu p-toluenosulfonowego lub /V-hydroksysukcynoimidu lub 3-hydroksy-4-keto-1,2,3-benzotriazyny lub /V-hydroksybenzotriazolu (HOBt).
Jako zasadę organiczną stosuje się pirydynę lub jej pochodne, korzystnie pirydynę, 4-pirolidynopiridynę (PPY), 4-dimetylaminopirydynę (DMAP), najkorzystniej 4-pirolidynopiridynę (PPY).
Związek pośredni o wzorze ogólnym 3 można otrzymać ze związku o wzorze ogólnym 6
w którym X i Y mają wyżej podane znaczenie, w wyniku jego deacetylacji pod wpływem roztworu kwasu nieorganicznego.
Reakcję deacetylacji związku o wzorze 6 prowadzi się w roztworze kwasu nieorganicznego korzystnie roztworze kwasu siarkowego (VI) o stężeniu 2 M - 5 M, kwasu solnego o stężeniu 2 M - 5 M, najkorzystniej kwasu solnego o stężeniu 2 M -3 M. Reakcję można prowadzić w temperaturze pokojowej lub w podwyższonej temperaturze <100°C. Z uwagi na skrócenie czasu reakcji korzystne jest prowadzenie jej w podwyższonej temperaturze 70-90°C. Stopień przereagowania substratu kontroluje się za pomocą chromatografii TLC.
Związek pośredni o wzorze ogólnym 6 można otrzymać w reakcji pomiędzy związkiem o wzorze ogólnym 7
(7) w reakcji z alkilotiolanem o wzorze ogólnym 8
NaSY (8) w którym Y ma wyżej podane znaczenie.
Reakcję prowadzi się w mieszaninie wody i alkoholu (1/1, v/v), korzystnie metanolu, etanolu.
Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej.
Związek pośredni o wzorze ogólnym 6 można również otrzymać w reakcji pomiędzy związkiem o wzorze ogólnym 9
PL231 214 Β1
(9) a:
- /V-chlorosukcynoimidem (NCS) w celu podstawienia atomu chloru, lub
- /V-bromosukcynoimidem (NBS) w celu podstawienia atomu bromu, lub
- /V-jodosukcynoimidem (NIS) w celu podstawienia atomu jodu.
Reakcję prowadzi się w rozpuszczalniku protycznym tj. prostym kwasie karboksylowym, korzystnie kwasie mrówkowym lub kwasie octowym lub w rozpuszczalniku polarnym aprotycznym tj. prostym nitrylu, korzystnie acetonitrylu. Rekcję można prowadzić zarówno w temperaturze pokojowej, jak i w podwyższonej temperaturze (< 100°C).
W czwartym aspekcie przedmiotem wynalazku jest zastosowanie pochodnych kolchicyny według wynalazku do wytwarzania środków stosowanych w terapii przeciwnowotworowej.
Badania przeprowadzone in vitro wobec ludzkich linii komórek nowotworowych potwierdziły działanie cytotoksyczne, przewyższające aktywność związku wyjściowego - kolchicyny. W badaniach wykorzystano następujące linie komórkowe:
- ludzki gruczolak płuc,
- ludzki gruczolak piersi,
- ludzki gruczolak jelita grubego wrażliwy na doksorubicynę,
- ludzki gruczolak jelita grubego oporny na doksorubicynę.
-A549
-MCF-7
-LoVo
- LoVo/DX
W badaniach wykorzystano również normalne mysie fibroblasty BALB/3T3, w celu określenia współczynnika selektywności badanych związków, który pozwala przewidzieć czy dana substancja będzie w pierwszej kolejności działała na komórki nowotworowe czy na zdrowe komórki organizmu.
W tabeli 1 podano dane dotyczące stosowanych w badaniach linii komórkowych.
Tabela 1
| Symbol linii komórkowej | Nazwa linii komórkowej | Źródło pochodzenia linii komórkowej |
| A549 | ludzki gruczolak płuc | ECACC 86012804 |
| MCF-7 | ludzki gruczolak piersi | ECACC 86012803 |
| LoVo | ludzki gruczolak jelita grubego wrażliwy na doksorubicynę | ATCC CCL-229 |
| LoVo/DX | ludzki gruczolak jelita grubego oporny na doksorubicynę | Prof. E. Borowski, Politechnika Gdańska |
| BALB/3T3 clone A31 | normalne mysie fibroblasty | ATCC CCL-163 |
W trakcie badań cytotoksyczności stosowano media hodowlane i odczynniki podane w tabeli 2.
PL 231 214 B1
T a b e l a 2
| Nazwa | Producent |
| Medium hodowlane dla linii A-549 | • OptiMEM+RPMI 1640 (1:1) (PChO, IITD PAN, Wrocław) 5% FBS HyClone (GE Healthcare, USA), • 2 mM L-Glutamina (Sigma Aldrich, Niemcy) • 0,1 mg/ml streptomycyna, 100 U/ml penicylina (odpowiednio: Sigma Aldrich, Niemcy i Polfa Tarchomin, Polska) |
| Medium hodowlane dla linii MCF-7 | • Eagle medium (PChO, IITD PAN, Wrocław) • 10% FBS (Sigma-Aldrich, Niemcy) • 2 mM L-Glutamina (Sigma-Aldrich, Niemcy) • 8 μg/mL insulina (Sigma-Aldrich, Niemcy) • 1% aminokwasy (Sigma-Aldrich, Niemcy) • 0,1 mg/ml streptomycyna, 100 U/ml penicylina (odpowiednio: Sigma Aldrich, Niemcy i Polfa Tarchomin, Polska) |
| Medium hodowlane dla linii LoVo | • OptiMEM+RPMI 1640 (1:1) (PChO, IITD) • 5% FBS HyClone (GE Healthcare, USA), • 2 mM L-Glutamina (Sigma Aldrich, Niemcy) • 1 mM pirogronian sodu (Sigma Aldrich, Niemcy) • 0,1 mg/ml streptomycyna, 100 U/ml penicylina (odpowiednio: Sigma Aldrich, Niemcy i Polfa Tarchomin, Polska) |
| Medium hodowlane dla linii LoVo/DX | Medium dla linii LoVo/DX jak dla LoVo oraz doksorubicyna (Accord Healthcare Ltd, UK) o stężeniu 10 μg/100 ml medium. |
| Medium hodowlane dla linii BALB/3T3 | • Dulbecco medium (Gibco, UK) • 10% FBS HyClone (GE Healthcare, USA) • 2 mM L-Glutamina (Sigma Aldrich, Niemcy) • 0,1 mg/ml streptomycyna, 100 U/ml penicylina (odpowiednio: Sigma Aldrich, Niemcy i Polfa Tarchomin, Polska) |
| Medium hodowlane do rozcieńczeń związków | • OptiMEM+RPMI 1640 (1:1) (PChO, IITD PAN, Wrocław) • 5% FBS HyClone (GE Healthcare, USA), • 2 mM L-Glutamina (Sigma Aldrich, Niemcy) • 0,1 mg/ml streptomycyna, 100 U/ml penicylina (odpowiednio: Sigma Aldrich, Niemcy i Polfa Tarchomin, Polska) |
| 10 mM TRIS | 1. Woda dejonizowana ogólnolaboratoryjna niejałowa 2. TRIZMA BASE (Sigma-Aldrich, Niemcy) |
| 1 % kwas octowy | 1. Woda dejonizowana ogólnolaboratoryjna niejałowa 2. Kwas octowy 80% CZDA (POCH SA, Gliwice) |
| 0,1% roztwór sulforodaminy B (SRB) | 1. Sulforhodamine B sodium salt (Sigma-Aldrich, Niemcy) 2. 2.1 % kwas octowy |
| 50% kwas trójchlorooctowy (TCA) | 1. Woda dejonizowana ogólnolaboratoryjna niejałowa 2. Kwas trichlorooctowy CZDA (POCH SA, Gliwice) |
| Cisplatyna | Koncentrat do sporządzania roztworu do infuzji; 1 mg/ml (10 mg/10 ml); 1 fiol. 10 ml (Teva Pharmaceuticals Sp. z o.o., Warszawa, Polska) |
| Doksorubicyna | Koncentrat do sporządzania roztworu do infuzji; 2 mg/ml; 1 fiol. 10 ml (Accord Healthcare Ltd, UK) |
Badania cytotoksyczności zostały przeprowadzone zgodnie z poniżej opisaną procedurą.
Roztwory wyjściowe (stock solutions) testowanych związków o stężeniu 10 mg/ml przygotowywano do każdego eksperymentu ex tempore, rozpuszczając 1 mg preparatu w 100 μΙ DMSO. Rozpuszczalnikiem dla dalszych rozcieńczeń było medium hodowlane. Związki przetestowano w przedziałach stężeń od 100 do 0,001 μg/ml.
PL 231 214 B1
Oznaczenie działania cytotoksycznego badanych związków oraz związków referencyjnych - powszechnie stosowanych chemioterapeutyków tj. doksorubicyny i cisplatyny wykonywano w 96-godzinnych hodowlach in vitro. Dla oznaczenia aktywności antyproliferacyjnej związków wobec wybranych linii komórkowych zastosowano test kolorymetryczny SRB wg P. Skehan et al., Journal ofthe National Cancer Institute, 1990, 82:1107-1112, mierzący zahamowanie proliferacji docelowych komórek na podstawie pomiaru ilości białka komórkowego. W każdym doświadczeniu próbki zawierające określone stężenia preparatu nanoszono na płytki 96-dołkowe w trzech powtórzeniach. Doświadczenia powtarzano minimum trzy razy.
a) Komórki (pochodzące z hodowli in vitro) nanoszono do dołków płytki w liczbie 1x104 w przypadku linii LoVo, LoVo/DX, MCF-7 oraz BALB/3T3 lub 0,5 x 104 dla linii A549 komórek w 100 pl medium hodowlanego danej linii komórkowej, a następnie inkubowano w 37°C, w wilgotnej atmosferze (60-90%) nasyconej 5% CO2.
b) po 24 godzinach do dołków dodawano rozcieńczenia badanych związków w badanych stężeniach w objętości 100pl medium hodowlanego do rozcieńczeń, a do dołków przeznaczonych na kontrolę wzrostu komórek nietraktowanych oraz dołków przeznaczonych na kontrolę medium bez komórek dodano 100 pl samego medium hodowlanego, stosowanego w przypadku związków do ich rozcieńczeń.
c) Płytki inkubowano przez kolejne 72 godziny w inkubatorze (37°C, w wilgotnej atmosferze (60-90%) nasyconej 5% CO2).
d) Po zakończeniu inkubacji komórek ze związkami wykonywano test SRB.
e) W każdym doświadczeniu próbki zawierające określone stężenia preparatu nanoszono w trzech powtórzeniach, po 4 stężenia dla danego związku. Kontrolę wzrostu komórek nietraktowanych prowadzono w 9 dołkach, a w kolejnych 3 dołkach stosowano tylko medium hodowlane bez komórek (kontrola tła). Doświadczenia powtarzano 3-5 razy.
Odczyt SRB:
Po upływie czasu inkubacji testu do każdego dołka dodano po 50 pl zimnego 50% kwasu trójchlorooctowego (TCA) i inkubowano przez 60 minut w temperaturze pokojowej, po czym płytki 4-krotnie przepłukano wodą, a następnie osuszono na ręcznikach papierowych. Następnie do każdego dołka dodano po 50 pl 0,1% roztworu sulforodaminy B (SRB) w 1% kwasie octowym w celu wybarwienia strąconego w dołku białka komórkowego. Po 30-minutowej inkubacji z SRB w temperaturze pokojowej płytki 4-krotnie płukano 1% kwasem octowym i ponownie osuszano na ręcznikach papierowych. W kolejnym etapie do każdego dołka dodano po 150 pl 10 mM buforu TRIS powodującego rozpuszczenie związanego z białkiem komórek barwnika. Gęstość optyczną poszczególnych próbek odczytywano przy długości fali 540 nm przy użyciu uniwersalnego czytnika płytkowego Synergy H4 firmy BioTek Instruments USA, Winooski VT, USA.
Na podstawie pomiaru absorbancji poszczególnych dołków wyliczano % zahamowania proliferacji dla każdego ze związków w danym stężeniu według wzoru:
% zahamowania proliferacji = X
- 100 gdzie,
Am - średnia wartość absorbancji medium kontrolnego
Ak - średnia wartość absorbancji kontroli komórek, tj. komórek nietraktowanych
At - średnia wartość absorbancji komórek potraktowanych badanymi związkami w danym stężeniu.
Przy obliczaniu średniej wartości absorbancji dla danego zestawu dołków, tzn. komórki nietraktowane, komórki traktowane danym związkiem o danym stężeniu, kontrola samego medium, odrzucano wartości odstające na podstawie współczynnika zmienności CV 10%. Z danych % zahamowania proliferacji wyznaczano parametr IC50 według metody opisanej w D. Nevozhay et al., Plos One 2014, 9:10. Następnie, z kolejnych 3-5 powtórzeń testu, wyliczano średnią wartość IC50 i odchylenie standardowe.
Dla wszystkich badanych pochodnych wyznaczono wskaźnik IC50, który oznacza stężenie związku potrzebne do zahamowania wzrostu komórek o 50%. Dla porównania analogiczne badania przeprowadzono z użyciem znanych środków cytotoksycznych a mianowicie cisplatyny i doksorubicyny. Wyniki badań aktywności cytotoksycznej przedstawione w formie stężenia wyrażonego w pM dla wybranych związków przedstawione są w tabeli 3. Wszystkie otrzymane pochodne wykazują bardzo wysoką aktywnością cytotoksyczną, wyższą lub porównywalną do powszechnie stosowanych leków przeciwnowotworowych tj. doksoru
PL231 214 Β1 bicyny i cisplatyny. Dodatkowo większość otrzymanych pochodnych charakteryzuje się korzystnymi współczynnikami selektywności (Sf). S/ > 1,0 wskazuje, że związek wykazuje wyższą skuteczność oddziaływania na komórki nowotworowe niż toksyczność w stosunku do komórek zdrowych.
Tabela 3
| Związek | A549 | MCF-7 | LoVo | LoVo/DX | BALB/3T3 | |||||
| IC50 [μΜ] | SI | IC50 [μΜ] | SI | IC50 [μΜ] | IC50 [μΜ] | SI | IC50 [μΜ] | SI | ||
| Kolchicyna | 0,125 | 1,1 | 0,054 | 2,6 | 0,108 | 1,3 | 1,69 | 0,1 | 15,7 | 0,139 |
| 12 | 0,013 | 1,0 | 0,013 | 0,9 | 0,008 | 1,6 | 0,068 | 0,2 | 8,9 | 0,013 |
| 13 | 0,029 | 2,7 | 0,018 | 4,3 | 0,010 | 8,0 | 0,166 | 0,5 | 17,0 | 0,079 |
| 14 | 0,011 | 1,3 | 0,012 | 1,2 | 0,007 | 2,0 | 0,036 | 0,4 | 4,8 | 0,014 |
| 15 | 0,010 | 1,1 | 0,011 | 1,0 | 0,007 | 1,5 | 0,087 | 0,1 | 12,1 | 0,011 |
| 16 | 0,010 | 2,0 | 0,011 | 1,8 | 0,007 | 2,9 | 0,076 | 0,3 | 10,8 | 0,020 |
| 17 | 0,833 | 0,4 | 0,846 | 0,4 | 0,568 | 0,5 | 3,866 | 0,1 | 6,8 | 0,305 |
| 18 | 0,081 | 1,3 | 0,095 | 1,1 | 0,065 | 1,7 | 0,794 | 0,1 | 12,3 | 0,107 |
| Doksorubicyna | 0,258 | 0,6 | 0,386 | 0,4 | 0,092 | 1,8 | 4,75 | <0,1 | 51,6 | 0,166 |
| Cisplatyna | 6,367 | 0,6 | 10,70 | 0,4 | 4,37 | 0,9 | 5,70 | 0,7 | 1,3 | 3,90 |
Wartość IC50 - stężenie związku, które odpowiada 50% hamowaniu wzrostu komórek nowotworowych ;
Indeks Rl (Resistance lndex): Rl = IC50 LoVo/DX / IC50 LoVo;
Indeks SI (Selectivity lndex) = IC50 dla normalnej linii komórkowej (BALB/3T3)/IC5o dla poszczególnych linii komórek nowotworowych.
Wynalazek ilustrują przykłady
Przykład 1
Otrzymywanie 4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny o wzorze 10
(10)
Metoda 1
Do roztworu 4-chlorokolchicyny (500 mg, 1,15 mmol) w mieszaninie metanol/woda (1/1, v/v, 5 ml) dodano metanotiolan sodu (roztwór wodny 21%, 0,77 ml, 2,30 mmol) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 72 h. Po tym czasie do mieszaniny reakcyjnej dodano wodę destylowaną (150 ml). Całość ekstrahowano czterokrotnie CH2CI2. Połączone warstwy organiczne wysuszono nad MgSCM, przesączono i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono przy użyciu chromatografu CombiFlash® stosując kolumnę wypełnioną S1O2 oraz mieszaninę octan etylu:metanol przy wzrastającym gradiencie stężeń metanolu od 0 do 50%. Otrzymano 4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicynę z wydajnością 73%.
Metoda 2
Do roztworu 10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny (500 mg, 1,20 mmol) w acetonitrylu dodano NCS (169 mg, 1,27 mmol) i mieszano w temperaturze pokojowej w atmosferze azotu przez 72 h. Po tym czasie do mieszaniny reakcyjnej dodano wodny nasycony roztwór Na2C>3 (100 ml). Całość ekstrahowano czterokrotnie CH2CI2. Połączone warstwy organiczne wysuszono nad MgSCM, przesączono i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono przy użyciu chromatografu CombiFlash® stosując kolumnę wypełnioną S1O2 oraz mieszaninę octan etylu:metanol przy wzrastającym gradiencie stężeń metanolu od 0 do 50%.
PL231 214 Β1
Otrzymano 4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicynę z wydajnością 70%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+ 450, [M+Na]+ 472, [2M+H]+ 889, [2M+Na]+ 921.
13C NMR (101 MHz, CDCIs) δ 182,4, 170,1, 159,1, 151,3, 150,2, 149,7, 146,6, 137,3, 134,81,
131,7, 129,9, 128,1, 126,4, 122,1,61,6, 61,5,61,1, 52,2, 34,5, 25,9, 22,8, 15,1.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,98 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,29-7,24 (m, 1H), 7,08 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,58 (dt, J = 13,1,6,7 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,61 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 3,24 (dd, J= 13,5, 4,8 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,27 (ddd, J= 18,0, 12,1,6,0 Hz, 1H), 2,20-2,09 (m, 1H), 2,00 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 1,92-1,80 (m, 1H).
Przykład 2
Otrzymywanie /V-deacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-mctylotiokolchicyny o wzorze 11
4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicynę (500 mg, 1,11 mmol) rozpuszczono w niewielkiej ilości metanolu (3 ml) i dodano 2 M roztwór kwasu solnego (5 ml), a następnie ogrzewano w temperaturze 90°C przez 96 h. Po tym czasie do mieszaniny reakcyjnej dodano wodny nasycony roztwór NaHCOs w celu zobojętnienia. Całość ekstrahowano czterokrotnie CH2CI2. Połączone warstwy organiczne wysuszono nad MgSCM, przesączono i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono przy użyciu chromatografu CombiFlash® stosując kolumnę wypełnioną S1O2 oraz mieszaninę heksan:octan etylu przy wzrastającym gradiencie stężeń octanu etylu od 50 do 100%.
Otrzymano /V-decacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicynę z wydajnością 58%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+ 408, [M+Na]+ 430, [2M+H]+ 815, [2M+Na]+837.
13C NMR (101 MHz, CDCIs) δ 182,4, 158,7, 153,1, 150,1, 149,2, 146,2, 137,0, 134,0, 132,6,
129.8, 129,2, 125,5, 121,8, 61,3, 61,1,53,5, 38,3, 26,5, 15,1.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,59 (s, 1H), 7,13 (dd, J = 10,1,4,8 Hz, 1H), 7,03 (dd, J= 10,2, 5,1 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 3,67-3,60 (m, 4H), 3,22-3,16 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,29 (ddd, J =
17.8, 12,0, 5,9 Hz, 1H), 2,22-2,12 (m, 1H), 1,69-1,51 (m, 1H).
Przykład 3
Otrzymywanie metoksyacetamidu-/V-deacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny o wzorze 12.
Do roztworu /V-deacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny (100 mg, 0,25 mmol) w tetrahydrofuranie (10 ml) w temperaturze pokojowej dodano trietyloaminę (1 ml) oraz DMAP (45 mg, 0,37 mmol) i mieszano przez 20 minut, a następnie dodano chlorek metoksyacetylu (67 μΙ, 0,75 mmol) i dalej mieszano w temperaturze pokojowej do czasu zakończenia reakcji, kontrolowanej za pomocą chromatografii TLC. Następnie odsączono wytrącony chlorowodorek trietyloaminy, przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu i ekstrahowano roztworem HCI(aq) (0,5 M), a następnie wodą. Warstwę organiczną odparowano do sucha pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono przy użyciu chromatografu CombiFlash® stosując kolumnę wypełnioną S1O2 oraz mieszaninę heksan:octan etylu przy wzrastającym gradiencie stężeń octanu etylu od 0 do 100%.
Otrzymano metoksyacetamid-/V-deacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny z wydajnością 79%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+ 480, [M+Na]+502, [2M+H]+ 959, [2M+Na]+ 981, [3M+Na]+ 1462.
PL231 214 Β1 13C NMR(101 MHz, CDCIs) δ 182,2, 169,2, 159,2, 150,1,149,7, 149,4, 146,6, 136,5, 134,5, 131,5,
129,9, 128,3, 125,8, 122,1,71,6, 61,5, 61,4, 61,1,59,1, 51,2, 34,9, 25,7, 15,1.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,25-7,21 (m, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,04 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,624,54 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 3,87 (q, J= 15,1 Hz, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,43 (s, 3H), 3,28 (dd, J = 6,4, 2,4 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,25-2,19 (m, 2H), 1,92-1,84 (m, 1H).
Przykład 4
Otrzymywanie (4-chloro)butanoamidu /V-deacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny o wzorze 13
Postępowano jak w przykładzie 3 przy czym zamiast chlorku metoksyacetylu do mieszaniny reakcyjnej dodano chlorek 4-chlorobutyrylu (84 μΙ, 0,75 mmol).
Otrzymano (4-chloro)butanoamid /V-deacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny z wydajnością 40%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+ 512, [M+Na]+534, [M+K]+550, [2M+H]+1025, [2M+Na]+1047, [2M+K]+1063.
13CNMR(101 MHz, CDCIs) δ 182,3, 171,7, 159,2, 151,1,150,2, 149,8, 146,7, 137,3, 134,8, 131,8,
129,9, 128,5, 126,4, 122,2, 61,7, 61,5, 61,1,51,8, 44,4, 35,0, 33,0, 28,1,26,0, 15,2.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,74 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,30-7,25 (m, 1H), 7,09 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,63 (dt, J = 11,8, 6,9 Hz, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,54 (dd, J =
9,8, 3,6 Hz, 2H), 3,24 (dd, J= 13,3, 4,6 Hz, 1H), 2,54-2,40 (m, 5H), 2,29-2,12 (m, 2H), 2,11-2,01 (m, 2H), 1,87 (ddd, J= 16,7, 9,0, 3,3 Hz, 1H).
Przykład 5
Otrzymywanie benzamidu /V-deacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny o wzorze 14
SCH3 (14)
Postępowano jak w przykładzie 3 przy czym zamiast chlorku metoksyacetylu do mieszaniny reakcyjnej dodano chlorek benzoilu (88 μΙ, 0,75 mmol).
Otrzymano benzamid /V-deacetylo-4-chloro-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny z wydajnością 78%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+512, [M+Na]+ 534, [2M+H]+ 1023, [2M+Na]+ 1045.
13C NMR (101 MHz, CDCIs) δ 182,2, 167,0, 159,2, 150,8, 150,2, 149,8, 146,7, 137,2, 134,7, 133,3, 131,8, 131,6, 130,1, 128,6, 128,4, 127,1, 126,2, 122,2, 61,8, 61,5, 61,1,52,4, 34,8, 26,0, 15,2.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,84-7,76 (m, 3H), 7,50 (s, 1H), 7,40-7,4 (m, 1H), 7,31-7,27 (m, 3H), 7,08 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,83 (dt, J = 11,9, 6,7 Hz, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,33-3,24 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,38-2,17 (m, 2H), 2,05 (ddd, J= 10,8, 9,5, 4,3 Hz, 1H).
Przykład 6
Otrzymywanie propanoamidu /V-deacetylo-4-bromo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny o wzorze 15
SCH.
(15)
PL231 214 Β1
Do roztworu /V-deacetylo-4-bromo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny (100 mg, 0,22 mmol) w tetrahydrofuranie (10 ml) w temperaturze pokojowej dodano trietyloaminę (1 ml) oraz DMAP (41 mg, 0,33 mmol) i mieszano przez 20 minut, a następnie dodano chlorek propionylu (58 μΙ, 66 mmol) i dalej mieszano w temperaturze pokojowej do czasu zakończenia reakcji, kontrolowanej za pomocą chromatografii TLC. Następnie odsączono wytrącony chlorowodorek trietyloaminy, przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu i ekstrahowano roztworem HCI(aq) (0,5 M), a następnie wodą. Warstwę organiczną odparowano do sucha pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono przy użyciu chromatografu CombiFlash® stosując kolumnę wypełnioną SiC>2 oraz mieszaninę heksan:octan etylu przy wzrastającym gradiencie stężeń octanu etylu od 0 do 100%.
Otrzymano propanoamid /V-deacetylo-4-bromo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny z wydajnością 87%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+ 508, [M+Na]+ 530, [2M+Na]+ 1037.
13C NMR (101 MHz, CDCIs) δ 182,3, 173,8, 159,1, 151,2, 151,1, 150,4, 146,6, 137,4, 133,5, 130,2, 128,3, 126,2, 113,5, 61,6, 61,5, 61,0, 51,8, 34,7, 29,2, 29,0, 15,1,9,6.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,58 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,26-7,22 (m, 1H), 7,09-7,04 (m, 1H), 4,64-4,52 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 3,27-3,22 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,34-2,20 (m, 4H), 1,89-1,77 (m, 1H), 1,10 (dd, J = 8,9, 6,3 Hz, 3H).
Przykład 7
Otrzymywanie 2-metylopropanoamidu /V-deacetylo-4-bromo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny o wzorze 16
Postępowano jak w przykładzie 6 przy czym zamiast chlorku propionylu do mieszaniny reakcyjnej dodano chlorek izobutyrylu (70 μΙ, 66 mmol).
Otrzymano 2-metylopropanoamid /V-deacetylo-4-bromo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny z wydajnością 64%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+ 522, [M+Na]+ 544, [2M+Na]+ 1065.
13CNMR(101 MHz, CDCIs) δ 182,3, 177,0, 159,1, 151,1,150,9, 150,5, 146,6, 137,3, 134,6, 133,5, 130,2, 128,4, 126,1, 113,5, 61,7, 61,5, 61,0, 51,4, 35,2, 34,9, 29,1, 19,5, 19,5, 15,2.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,41 (s, 1H), 7,26-7,21 (m, 2H), 7,06 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,644,54 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,24 (dd, J = 8,2, 3,2 Hz, 1H), 2,53 (dt, J = 13,8, 6,9 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,24 (dt, J = 7,4, 4,0 Hz, 2H), 1,87-1,76 (m, 1H), 1,16 (dd, J = 6,9, 1,1 Hz, 6H).
Przykład 8
Otrzymywanie dekanoamidu /V-deacetylo-4-jodo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny o wzorze 17
Do roztworu /V-deacetylo-4-jodo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny (100 mg, 0,20 mmol) w tetrahydrofuranie (10 ml) w temperaturze pokojowej dodano trietyloaminę (1 ml) oraz DMAP (37 mg, 30 mmol) i mieszano przez 20 minut, a następnie dodano chlorek dekanoilu (125 μΙ, 0,60 mmol) i dalej mieszano w temperaturze pokojowej do czasu zakończenia reakcji, kontrolowanej za pomocą chromatografii TLC. Na
PL231 214 Β1 stępnie odsączono wytrącony chlorowodorek trietyloaminy, przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszczono w chlorku metylenu i ekstrahowano roztworem HCI(aq) (0,5 M), a następnie wodą. Warstwę organiczną odparowano do sucha pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono przy użyciu chromatografu CombiFlash® stosując kolumnę wypełnioną S1O2 oraz mieszaninę heksan:octan etylu przy wzrastającym gradiencie stężeń octanu etylu od 0 do 100%.
Otrzymano dekanoamid /V-deacetylo-4-jodo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny z wydajnością 90%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+ 654, [2M+H]+ 1307.
13CNMR(101 MHz, CDCIs) δ 182,3, 173,2, 159,1, 153,4,151,4, 151,0, 145,6, 137,7, 136,8, 134,5, 129,7, 128,4, 126,1, 92,2, 61,6, 61,3, 60,7, 51,6, 36,3, 34,7, 34,5, 31,8, 29,3, 29,3, 29,3, 29,2, 25,5, 22,6, 15,1, 14,1.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,46 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,23 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 7,07 (d, J= 10,6 Hz, 1H), 4,58 (dt, J = 11,8, 6,9 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,16 (dd, J = 13,9, 5,0 Hz, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,39 (dd, J = 13,7, 6,3 Hz, 1H), 2,31-2,17 (m, 3H), 1,77 (td, J= 12,0, 5,4 Hz, 1H), 1,60 (dt, J= 15,3, 7,7 Hz, 2H), 1,32-1,20 (m, 12H), 0,86 (t, J = 6,9 Hz, 3H).
Przykład 9
Otrzymywanie 1,1-dietylomocznika /V-deacetylo-4-jodo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny o wzorze 18
Postępowano jak w przykładzie 8 przy czym zamiast chlorku dekanoilu do mieszaniny reakcyjnej dodano chlorek dietylokarbamoilowy (76 μΙ, 0,60 mmol).
Otrzymano 1,1-dietylomocznik /V-deacetylo-4-jodo-10-demetoksy-10-metylotiokolchicyny z wydajnością 45%.
ESI-MS (m/z): [M+H]+ 599, [M+Na]+ 621, [2M+H]+ 1197, [2M+Na]+ 1219.
13CNMR(101 MHz, CDCIs) δ 182,2, 158,8, 156,0, 153,2,152,1, 151,4, 145,5, 137,6, 137,0, 134,3,
129,9, 128,9, 125,9, 92,1,61,7, 61,3, 60,7, 52,9, 41,0, 35,2, 34,8, 15,1, 13,9.
1H NMR (403 MHz, CDCIs) δ 7,42 (s, 1H), 7,14 (dd, J = 8,9, 3,8 Hz, 1H), 6,98-6,94 (m, 1H), 5,845,78 (m, 1H), 4,48 (dt, J = 11,7, 6,7 Hz, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,24 (q, J = 7,1 Hz, 4H), 3,06 (dd, J= 13,8, 4,7 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,31 (dd, J= 13,6, 6,2 Hz, 1H), 2,22-2,11 (m, 1H), 1,76 (td, J= 12,0, 5,3 Hz, 1H), 1,07 (t, J = 7,1 Hz, 6H).
Claims (19)
- Zastrzeżenia patentowe1. Amidowe pochodne /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny o wzorze ogólnym 1Y (1)PL231 214 Β1 gdzie:- X oznacza Cl, Br lub I;- Y oznacza grupę alkilową prostą lub rozgałęzioną zawierającą od 1 do 4 atomów węgla;- R oznacza:• grupę alkilową prostą lub rozgałęzioną zawierającą od 1 do 10 atomów węgla, • grupę alkilową prostą zawierającą od 1 do 5 atomów węgla podstawioną w dowolnej pozycji łańcucha od 1 do 3 atomami halogenu, które mogą znajdować się zarówno przy tym samym jak i przy różnych atomach węgla, • grupę alkilową prostą zawierającą od 2 do 6 atomów węgla zawierającą w dowolnej pozycji łańcucha wiązania eterowe, • fenyl, • grupę aminową o wzorze ogólnym 2 R2 (2) gdzie podstawniki Ri, R2są różne lub takie same i oznaczają atom wodoru lub grupę alkilową prostą zawierającą od 1 do 4 atomów węgla.
- 2. Sposób otrzymywania amidów /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny o wzorze ogólnym 1, w którym X, R i Y mają znaczenie podane w zastrzeżeniu 1, znamienny tym, że polega na reakcji pomiędzy związkiem o wzorze ogólnym 3, ogólnym 4, w którym R ma wyżej podane znaczenie w obecności zasady organicznej pełniącej rolę nukleofilowego katalizatora oraz aminy alifatycznej.
- 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że reakcje prowadzi się w rozpuszczalniku apolarnym chloroalifatycznym, aromatycznym lub w tetrahydrofuranie.
- 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że reakcje prowadzi się w chloroformie, chlorku metylenu, toluenie, benzenie, tetrahydrofuranie.
- 5. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że korzystnie jako zasadę organiczną stosuje się pirydynę, 4-pirolidynopiridynę (PPY), 4-dimetylaminopirydynę (DMAP), najkorzystniej 4-dimetylaminopirydynę (DMAP).
- 6. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że korzystnie jako aminę alifatyczną stosuje się tributyloaminę, tripropyloaminę, triizobutyloaminę, triizopropyloaminę, diizopropyloaminę, /V,/V-diizopropyloetyloaminę, trietyloaminę, najkorzystniej trietyloaminę.PL231 214 Β1
- 7. Sposób otrzymywania amidów /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-1O-alkilotiokolchicyny o wzorze ogólnym 1, w którym X, R i Y mają znaczenie podane w zastrzeżeniu 1 znamienny tym, że polega na reakcji pomiędzy związkiem o wzorze ogólnym 3.w którym X i Y mają wyżej podane znaczenia a odpowiednim kwasem karboksylowym o wzorze ogólnym 5, (5) gdzie R ma wyżej podane znaczenie w obecności czynnika sprzęgającego oraz, zasady organicznej.
- 8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że reakcje prowadzi się w rozpuszczalniku apolarnym chloroalifatycznym, aromatycznym lub tetrahydrofuranie.
- 9. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że reakcje prowadzi się w chloroformie, chlorku metylenu, toluenie, benzenie lub tetrahydrofuranie.
- 10. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że reakcje prowadzi się w rozpuszczalniku polarnym aprotycznym - prostym nitrylu, korzystnie acetonitrylu lub prostym trzeciorzędowym amidzie, korzystnie dimetyloformamidzie.
- 11. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że jako czynnik sprzęgający stosuje się heksafluorofosforan 2-(7-aza-1 H-benzotriazol-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylomocznika lub Λ/,Λ/'-dicykloheksylokarbodiimid.
- 12. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że gdy jako czynnik sprzęgając stosuje się N,N'-dicykloheksylokarbodiimid to dodatkowo stosuje się kwas p-toluenosulfonowy lub /V-hydroksysukcynoimid lub 3-hydroksy-4-keto-1,2,3-benzotriazynę lub /V-hydroksybenzotriazol.
- 13. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że jako zasadę organiczną stosuje się pirydynę lub jej pochodne, korzystnie pirydynę, 4-pirolidynopiridynę (PPY), 4-dimetylaminopirydynę (DMAP), najkorzystniej 4-pirolidynopiridynę (PPY).
- 14. Zastosowanie amidowych pochodnych /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny o wzorze ogólnym 1 gdzie:- X oznacza Cl, Br lub I;PL231 214 Β1- Υ oznacza grupę alkilową prostą lub rozgałęzioną zawierającą od 1 do 4 atomów węgla;- R oznacza:• grupę alkilową prostą lub rozgałęzioną zawierającą od 1 do 10 atomów węgla, • grupę alkilową prostą zawierającą od 1 do 5 atomów węgla podstawioną w dowolnej pozycji łańcucha od 1 do 3 atomami halogenu, które mogą znajdować się zarówno przy tym samym jak i przy różnych atomach węgla, • grupę alkilową prostą zawierającą od 2 do 6 atomów węgla zawierającą w dowolnej pozycji łańcucha wiązania eterowe, • fenyl, • grupę aminową o wzorze ogólnym 2R2 (2) gdzie: podstawniki Ri, R2 są różne lub takie same i oznaczają atom wodoru lub grupę alkilową prostą zawierającą od 1 do 4 atomów węgla, do przygotowania preparatów leczniczych stosowanych w terapii przeciwnowotworowej.
- 15. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że amidowe pochodne /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny są użyte do sporządzania leków przydatnych w chemioterapii ludzkiego gruczolaka płuc.
- 16. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że amidowe pochodne /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny są użyte do sporządzania leków przydatnych w chemioterapii ludzkiego gruczolaka piersi.
- 17. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że amidowe pochodne /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny są użyte do sporządzania leków przydatnych w chemioterapii ludzkiego gruczolaka jelita grubego.
- 18. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że amidowe pochodne /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny są użyte do sporządzania leków przydatnych w chemioterapii ludzkiego gruczolaka jelita grubego wrażliwego na doksorubicynę.
- 19. Zastosowanie według zastrz. 14 znamienne tym, że amidowe pochodne /V-deacetylo-4-(bromo/chloro/jodo)-10-demetoksy-10-alkilotiokolchicyny są użyte do sporządzania leków przydatnych w chemioterapii ludzkiego gruczolaka jelita grubego opornego na doksorubicynę.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL424866A PL231214B1 (pl) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Pochodne kolchicyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL424866A PL231214B1 (pl) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Pochodne kolchicyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL424866A1 PL424866A1 (pl) | 2018-08-13 |
| PL231214B1 true PL231214B1 (pl) | 2019-02-28 |
Family
ID=63112927
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL424866A PL231214B1 (pl) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Pochodne kolchicyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL231214B1 (pl) |
-
2018
- 2018-03-13 PL PL424866A patent/PL231214B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL424866A1 (pl) | 2018-08-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6951767B2 (ja) | 抗癌薬として使用される複素環式化合物 | |
| CA2730314C (en) | Bicyclic compounds having antimitotic and/or antitumor activity and methods of use thereof | |
| Kim et al. | Synthesis and cytotoxicity of 1-substituted 2-methyl-1H-imidazo [4, 5-g] phthalazine-4, 9-dione derivatives | |
| Sidoryk et al. | The synthesis of indolo [2, 3-b] quinoline derivatives with a guanidine group: Highly selective cytotoxic agents | |
| AU2021217480B2 (en) | Compounds constituting C20-modified salinomycin derivatives, a method for obtaining the same, a composition containing the same, a use of said compounds and a method for obtaining an intermediate product | |
| SK15012000A3 (sk) | Ekteinascidínová zlúčenina, farmaceutický prostriedok, ktorý ju obsahuje, a jej použitie | |
| Li et al. | Synthesis and anti-tumor activity of nitrogen-containing derivatives of the natural product diphyllin | |
| CN112110977A (zh) | 一类雷公藤红素衍生物、其制备方法及用途 | |
| CN107266461A (zh) | 一种烷氧基二苯并吖庚因类化合物、其制备方法及医药用途 | |
| CA3029911C (en) | Antimetastatic 2h-selenopheno[3,2-h]chromenes, synthesis thereof, and methods of using same agents | |
| Qiao et al. | Method to build 2, 4-substituted selenazole from β-azido diselenide and carboxylic acid: A formal synthesis of selenazofurin | |
| JP2010516790A (ja) | 新規なビンブラスチン誘導体、その調製方法と用途、及び該誘導体を含む医薬組成物 | |
| PL231214B1 (pl) | Pochodne kolchicyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie | |
| EP3042913B1 (en) | Cyclic peptide compound, and preparation method, pharmaceutical composition and use thereof | |
| WO2013132262A1 (en) | Picropodophyllin derivatives | |
| CN112940050A (zh) | 二茂铁衍生物及其制备方法和用途 | |
| PL231213B1 (pl) | Pochodne kolchicyny, sposób ich wytwarzania i zastosowanie | |
| HUP0302905A2 (hu) | Triazolo-epotilon-analógok, eljárás az előállításukra és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények | |
| CN107253949B (zh) | 一类硫杂吴茱萸次碱化合物及其在抗肿瘤药物中的应用 | |
| Zhao et al. | Synthesis of dual target CPT-Ala-Nor conjugates and their biological activity evaluation | |
| PL225349B1 (pl) | Pochodne 2’,5’-dideoksy-5-fluorourydyny o działaniu cytotoksycznym, sposób ich wytwarzania i zastosowanie | |
| Anastassova et al. | SYNTHESIS OF NEW TRIAZOLE AND THIADIAZOLE DERIVATIVES OF THE N, N'-DISUBSTITUTED BENZIMIDAZOLE-2-THIONE AND EVALUATION OF THEIR ANTITUMOR POTENTIAL. | |
| DK161833B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af n-(vinblastinoyl-23)-derivater af aminosyrer eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf | |
| CN104610247B (zh) | 一种半合成紫杉烷衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN110724076B (zh) | 对芳基二甲酰胺类化合物、包含其的药物组合物、其制备方法及其用途 |