PL233899B1 - Nowe szczepy bakterii probiotycznych do zwalczania Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza u drobiu, kompozycje szczepów bakterii probiotycznych i ich zastosowania - Google Patents
Nowe szczepy bakterii probiotycznych do zwalczania Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza u drobiu, kompozycje szczepów bakterii probiotycznych i ich zastosowania Download PDFInfo
- Publication number
- PL233899B1 PL233899B1 PL416205A PL41620516A PL233899B1 PL 233899 B1 PL233899 B1 PL 233899B1 PL 416205 A PL416205 A PL 416205A PL 41620516 A PL41620516 A PL 41620516A PL 233899 B1 PL233899 B1 PL 233899B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- probiotic
- bacteria
- strains
- birds
- composition
- Prior art date
Links
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims description 92
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims description 92
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims description 82
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 60
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 title claims description 49
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 title claims description 39
- 244000144977 poultry Species 0.000 title claims description 27
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 62
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 36
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 23
- 241000192133 Weissella paramesenteroides Species 0.000 claims description 21
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 claims description 18
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 18
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 18
- 241000191998 Pediococcus acidilactici Species 0.000 claims description 17
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 11
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 5
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims description 5
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 4
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 4
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 23
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 20
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 19
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 18
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 11
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 10
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 9
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 7
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 4
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 4
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 3
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 description 3
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 3
- 241000272458 Numididae Species 0.000 description 3
- 241000271567 Struthioniformes Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 2
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 235000019728 animal nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 2
- 210000003323 beak Anatomy 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000005282 brightening Methods 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 2
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 2
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 2
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000589877 Campylobacter coli Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000605980 Faecalibacterium prausnitzii Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010017982 Gastrointestinal necrosis Diseases 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 241000186871 Lactobacillus murinus Species 0.000 description 1
- 241000186684 Lactobacillus pentosus Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000191996 Pediococcus pentosaceus Species 0.000 description 1
- 241000287530 Psittaciformes Species 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 description 1
- -1 acetaldehyde, organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 231100000249 enterotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002242 enterotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000688 enterotoxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 235000021474 generally recognized As safe (food) Nutrition 0.000 description 1
- 235000021472 generally recognized as safe Nutrition 0.000 description 1
- 235000021473 generally recognized as safe (food ingredients) Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- COCAUCFPFHUGAA-MGNBDDOMSA-N n-[3-[(1s,7s)-5-amino-4-thia-6-azabicyclo[5.1.0]oct-5-en-7-yl]-4-fluorophenyl]-5-chloropyridine-2-carboxamide Chemical compound C=1C=C(F)C([C@@]23N=C(SCC[C@@H]2C3)N)=CC=1NC(=O)C1=CC=C(Cl)C=N1 COCAUCFPFHUGAA-MGNBDDOMSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 1
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 229940108461 rennet Drugs 0.000 description 1
- 108010058314 rennet Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 244000005714 skin microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Fodder In General (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są nowe szczepy bakterii fermentacji mlekowej do ograniczania rozwoju chorobotwórczych szczepów bakterii Escherichia coli i Clostridium perfringens, występujących w organizmach ptaków hodowlanych, szczególnie kurcząt rzeźnych, indyków, kaczek, gęsi, perliczek, bażantów, strusiów i ptaków ozdobnych oraz w środowisku ich bytowania. Wynalazek obejmuje także probiotyk i kompozycje szczepów probiotycznych oraz ich zastosowania polegające na podawaniu ptakom opracowanych kompozycji bakterii probiotycznych w celu zabezpieczenia ich organizmu przed chorobotwórczymi bakteriami E. coli i C. perfringens oraz dezynfekcję powierzchni ich ciał, a także pomieszczeń hodowlanych środkami zawierającymi komórki i/lub metabolity drobnoustrojów nowych szczepów bakterii probiotyczych.
Pod pojęciem probiotyku rozumie się produkt zawierający aktywne formy bakterii probiotycznych, który wpływa korzystnie na zdrowie zwierząt. Pod terminem „korzystny wpływ” rozumie się ograniczenie biegunek i chorób przewodu pokarmowego wywołanych patogennymi mikroorganizmami z gatunków E. coli i C. perfringens, lepszą ogólną kondycję zwierząt i inne korzystne efekty spożywania probiotyku.
W ostatnich latach obserwuje się wyraźne zainteresowanie biologicznymi metodami zwiększania bezpieczeństwa żywności. Większość chorób bakteryjnych przenoszonych drogą pokarmową ma pochodzenie odzwierzęce. Jednymi z bardziej niebezpieczniejszych patogenów przenoszonych w ten sposób są enterotoksyczne bakterie Escherichia coli i Clostridium perfringens. Wymienione bakterie stanowią także bezpośrednie zagrożenie w hodowli zwierząt gospodarskich. Zagrożenie to jest szczególnie duże w fermach, w których skoncentrowany jest chów tysięcy zwierząt gospodarskich. Z tego powodu są poszukiwane nowe, skuteczne metody zwalczania patogennych bakterii zarówno na poziomie produkcji pierwotnej, jak i przetwórstwa produktów zwierzęcych.
Przez dziesiątki lat ochronę przed chorobotwórczymi bakteriami spełniały antybiotyki. Dodatkowo były one czynnikiem stymulującym wzrost zwierząt. Masowe stosownie antybiotyków spowodowało jednak pojawienie się antybiotykoopornych szczepów patogennych bakterii, co znacznie osłabiło antybiotykową ochronę zwierząt i ludzi. Doprowadziło to także do wydania zakazu stosowania antybiotyków w żywieniu zwierząt na terenie UE.
Alternatywą do stosowania antybiotyków paszowych stały się w ostatnich latach probiotyki. Pod tym pojęciem rozumie się produkty zawierające mikroorganizmy, które podane w odpowiedniej ilości, wywierają korzystny wpływ na dobrostan zwierząt, którym zostały podane. Pojęcie dobrostanu zwierząt obejmuje wiele zjawisk, jak brak zachorowań, szybszy wzrost zwierzęcia, lepsze wykorzystanie paszy i lepszą ogólną kondycję zwierząt.
W literaturze przedmiotu pojawiło się wiele rozwiązań oferujących preparaty probiotyczne zwierające mikroorganizmy antagonistyczne w stosunku do bakterii chorobotwórczych, w tym chorobotwórczych szczepów Escherichia coli i C. perfringens. Zdecydowana większość z tych preparatów ma w swoim składzie bakterie fermentacji mlekowej. Należy jednak mocno podkreślić, że nie wszystkie szczepy bakterii fermentacji mlekowej wykazują właściwości antagonistyczne w stosunku do bakterii chorobotwórczych. Cecha ma bowiem charakter szczepozależny. Oznacza to, że tylko nieliczne szczepy należące do danego gatunku wykazują takie właściwości. Aktywność antagonistyczną może być wykryta w wieloetapowej procedurze specjalistycznych badań skriningowych, a następnie musi być potwierdzona w testach żywieniowych na zwierzętach.
Bakterie fermentacji mlekowej występują naturalnie w przewodzie pokarmowym ludzi i zwierząt. Są one uważane za całkowicie bezpieczne i zaliczane do klasy GRAS (ang. generally recognized as safe). Spotkać je także można w paszach dla zwierząt, szczególnie w kiszonkach. Ponadto są one składnikami mikroflory skóry zwierząt oraz występują w środowisku hodowlanym.
Antagonistyczne działanie probiotycznych bakterii fermentacji mlekowej jest najczęściej następstwem konkurencji o substancje pokarmowe oraz hamowania wzrostu lub niszczenia komórek bakterii chorobotwórczych. Może być ono także rezultatem blokowania receptorów dla bakterii chorobotwórczych, a co za tym idzie ograniczania przez nie kolonizacji przewodu pokarmowego. Dodatkowo może być ono skutkiem aglomerowania komórek bakterii probiotycznych z komórkami bakterii patogennych i ich usuwania z przewodu pokarmowego wraz z kałem. Aktywność bakterii fermentacji mlekowej w stosunku do patogenów wynika z produkowania przez nie substancji hamujących lub zabijających bakterie chorobotwórcze, takich jak bakteriocyny, nadtlenek wodoru, aldehyd octowy, kwasy organiczne i inne metabolity. Aktywność antagonistyczną wykrywa się w testach laboratoryjnych, np. po
PL 233 899 B1 przez naniesienie punktowo bakterii potencjalnie probiotycznych na powierzchnię płytek z pożywką agarową pokrytą komórkami bakterii chorobotwórczych, pełniących rolę mikroorganizmu wskaźnikowego. Pojawienie się po inkubacji, stref przejaśnień wokół punktu naniesienia testowanych bakterii fermentacji mlekowej świadczy ich aktywności w stosunku do bakterii chorobotwórczych. Im większa jest średnica strefy przejaśnienia, tym silniejsza aktywność antybakteryjna badanego szczepu w stosunku do stosowanej wskaźnikowej bakterii chorobotwórczej.
W praktyce do zwalczania bakterii chorobotwórczych wykorzystywane są preparaty zawierające pojedyncze szczepy bakterii probiotycznych lub ich kompozycje. Stosowanie kompozycji wieloszczepowych lub wielogatunkowych wymaga jednak standaryzacji preparatów probiotycznych.
W ostatnich latach pojawiły się komercyjnie wytwarzane preparaty probiotyczne przeznaczone do ochrony drobiu przed szkodliwym działaniem E. coli i C. perfringens. W opisie patentowym CN102373172 do zwalczania chorobotwórczych szczepów bakterii E. coli u drobiu i świń użyto szczepu Enterococcus faecium CGMCC 5058. Mikroorganizm ten stosowano jako dodatek paszowy lub jako samodzielny produkt. Podanie probiotycznych bakterii powodowało ochronę przed patogenami i promocję wzrostu zwierząt. Inny szczep tego samego rodzaju, Enterococcus faecalis CCTCC M2014488, wykorzystywany do zwalczania patogennych bakterii Escherichia coli, Salmonella, Pasteurella multocida, Listeria monocytogenes i Staphylococcus aureus, opisano w CN104774782. Szczep ten wyizolowano z 20-tygodniowych kurcząt. Wykazano, że cechuje się on opornością na kwasy i sole żółciowe. Może być przy tym wykorzystany jako system ekspresyjny do produkcji heterologicznych białek.
W opisie RU2246537 do zwalczania patogennych bakterii E. coli, Enterobacteria, Staphylococcus, Citrobacter i Aeromonas zastosowano szczep bakterii Bacillus subtilis VKM B-2287. Szczep ten wyizolowano z gleby i wykorzystano do konstrukcji komercyjnego preparatu o nazwie „Subtilis +”. Preparat ten reguluje skład mikroflory jelitowej drobiu i ryb i może być stosowany zarówno w celach leczniczych, jak i w profilaktyce.
W znanym rozwiązaniu MX2014012098 do niszczenia chorobotwórczych bakterii E. coli i Clostridium perfringens u drobiu, przeżuwaczy, cieląt, świń, koni i ryb wykorzystano probiotyczne szczepy z rodzaju Bacillus, a mianowicie B. majovensis DSM 25839, B. amyloliquefaciens DSM 25840, DSM 27032 i B. subtilis DSM 25841, a także ich mutanty. Bakterie te wprowadzano do paszy lub premiksów i podawano zwierzętom.
Inny preparat o podobnym antagonistycznym działaniu wobec enteropatogennych i enterotoksygennych E. coli zawierający szczep Lactobacillus casei ATCC PTA-3945. opisano w CA2520178. Podano, że może być on stosowany w żywieniu kurcząt, indyków, bażantów, przepiórek i papug, a także dla ssaków i ryb.
W rozwiązaniu znanym z opisu MX2014005754 opisano z kolei preparat probiotyczny dla kurcząt, indyków i kur niosek, zawierający szczep Lactobacillus LA51. Preparat ten hamuje rozwój C. coli, Staphylococcus aureus, Campylobacter jejuni i Salmonella typhimurium o 30%. Podawanie go ptakom w ilości 103-1010 jtk/ptaka dziennie zwiększa przyrosty masy ciała.
Kompozycję szczepów Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium longum, Bacillus subtilis i B. licheniformis przedstawioną w opisie CN101368165 zastosowano natomiast do przyspiesze nia wzrostu, redukcji zawartości ołowiu w tuszach drobiowych i wołowych oraz polepszenia strawności pasz.
W opisie WO2015160960 (A1) przedstawiono następny probiotyk dla drobiu. Jako aktywnym składnikiem były endospory 17 szczepów Bacillus o numerach akcesyjnych z kolekcji NRRL. Probiotyk ten podawano łącznie z enzymami z klasy hydrolaz i z nośnikiem.
Inny probiotyk, znany z opisu CN103636923, zawierający Bacillus coagulans dodawano do paszy w ilości 0,15% w celu polepszenia efektów żywieniowych kur niosek. Biomasę komórkową będącą podstawą tego probiotyku pozyskiwano przez hodowlę w podłożu stałym, w skład którego wchodziły otręby ryżowe, mąka sojowa i ekstrakt słodowy.
Do polepszenia efektów żywieniowych zwierząt hodowlanych zaproponowano też kompozycję bakterii Lactobacillus murinus DPC6002, L. pentosus DPC6004, L. salivarius DPC6005 i Pediococcus pentosaceus DPC6006. Jak podaje US8603461 kompozycja ta wprowadzana do paszy i podawana zwierzętom w ilości 3 x 109 jtk/dobę ma działanie profilaktyczno-lecznicze.
Kolejny bioaktywny szczep Lactobacillus salivarius L2 (CCTCC M2014614) odkryty przez chińskich badaczy, został zastosowany do ochrony drobiu przed patogennym szczepem Escherichia coli (CN104789497). Ten probiotyczny szczep został wyizolowany z treści jelitowej zdrowej kury. Cecho
PL 233 899 B1 wał się on opornością na ekspozycję 3% soli żółciowych. W opisie KR20090057154 przedstawiono natomiast nowy szczep Lactobacillus salivarius CPM-7 (KACC 91332P), wyizolowany z kału kurcząt, wykazujący właściwości antagonistyczne w stosunku do Escherichia coli.
W rozwiązaniu ujawnionym w opisie CN104363769 (A) przeciwko biegunkom u drobiu, bydła, trzody i owiec zastosowano probiotyczny szczep Faecalibacterium prausnitzii.
Opisy bakterii probiotycznych działających antagonistycznie wobec bakterii Escherichia coli można znaleźć także w zgłoszeniach i patentach opublikowanych przez Urząd Patentowy RP. W opisie PL 209987 przedstawiono charakterystykę probiotycznego szczepu Lactobacillus casei ŁOCK 0915, zdeponowanego w Kolekcji Czystych Kultur Przemysłowych ŁOCK pod numerem ŁOCK 0915 oraz w Zakładzie Mikrobiologii Molekularnej Narodowego Instytutu Leków pod numerem depozytu 08/01/2012. Szczep ten wykazuje zdolność zwalczania patogennych E. coli, S. aureus, P. aeruginosa, E. faecalis, S. Enteritidis, S. Typhimurium, L. monocytogenes i C. jejuni. Z kolei w opisie PL 209986 (B1) scharakteryzowano inny szczep L. casei ŁOCK 0908, który wykazuje aktywność wobec E. coli i innych bakterii chorobotwórczych.
W opisie PL 207930 przedstawiono kompozycję szczepów bakterii probiotycznych z rodzaju Lactobacillus, Bifidobacterium i Enterococcus stosowanych w celu poprawy zdrowia psów i kotów, których jedną z podstawowych cech był antagonizm wobec patogennych bakterii E. coli.
Przykłady zwalczania chorobotwórczych E. coli i C. perfringens przez probiotyczne bakterie opisano także w literaturze naukowej.
Wśród bakterii patogennych największe zagrożenie dla drobiu i zdrowia ludzkiego stanowią Salmonella, Campylobacter jejuni i Clostridium perfringens (Humphrey i in. 2007, Van Immersed i in. 2004). Probiotyki mogą być używane do kontroli rozwoju w/w patogenów i tym samym do normalizacji składu mikroflory jelitowej. Wyniki wielu badań dowiodły, że probiotyczne szczepy Lactobacillus redukują liczbę chorobotwórczych bakterii, takich jak: Salmonella enteritidis, C. jejuni, Listeria monocytogenes, enteropatogenne E. coli, Yersinia enterocolitica i C. perfringens. W konsekwencji tego zmniejszają śmiertelność kilkudniowych brojlerów z powodu martwicy jelit (Schneitz i in. 2003). Ważnym czynnikiem wpływającym na skuteczność działania preparatów probiotycznych u drobiu jest sposób i czas ich podania. Wykazano, że probiotyki podawane za pośrednictwem paszy, w porównaniu do aplikowanych wraz wodą, działają lepiej i powodują większe przyrosty masy ciała (Timmerman i in. 2006).
W obszernej pracy Dahiya i in. (2006) omówiono współczesne strategie stosowane w kontroli enteritis wywołanych u brojlerów przez C. perfringens. Wśród zalecanych środków wymieniono probiotyki, prebiotyki, kwasy organiczne, enzymy, ekstrakty roślinne przeciwciała z jaj kurzych i bakteriofagi. Pod względem skuteczności działania na czoło wysuwają się probiotyczne bakterie z rodzaju Lactobacillus, Streptococcus, Enterococcus, Bacillus i drożdże z rodzaju Saccharomyces. Pozytywną rolę probiotyków w żywieniu brojlerów podkreślają też Huyghebaert i in. (2011). Najważniejsze aspekty stosowania probiotyków w przemyśle drobiarskim omówił Kabir (2009). Autor ten przedstawił szeroki przegląd literaturowy na temat probiotyków, kryteriów ich selekcji, mechanizmów działania i wykorzystania w żywieniu drobiu, a także omówił korzystny wpływ podawania probiotyków złożonych z bakterii fermentacji mlekowej na redukcję chorobotwórczych bakterii E. coli i C. perfringens .
W skład żadnego z opisanych w literaturze preparatów probiotycznych nie wchodzą jednak szczepy będące podstawą niniejszego zgłoszenia. Żaden z opisanych w literaturze probiotyków dla drobiu, nie wykazuje też takiej samej aktywności przeciwdrobnoustrojowej i właściwości fizykochemicznych jak opracowana przez nas kompozycja. W związku z tym żaden z dostępnych dotąd probiotyków nie działa w taki sam sposób.
Probiotyczne szczepy są pozyskane na drodze izolacji i wielokierunkowego skriningu w stosunku do wybranych gatunków/szczepów bakterii chorobotwórczych, w tym przypadku wobec chorobotwórczych szczepów Escherichia coli i Clostridium perfringens. Mimo oferty tego typu probiotyków na rynku ich skuteczność jest dyskusyjna. Przyczyną tego jest duża naturalna zmienność genetyczna bakterii chorobotwórczych i bakterii probiotycznych. Efekt antagonizmu między mikroorganizmami jest zależny od oporności bakterii patogennych na toksyczne dla niego metabolity wytwarzane przez bakterie probiotyczne. Wrażliwość ta jest zmienna. Ponadto po dłuższym stosowaniu probiotyków na danym terenie pojawiają się szczepy odporne na biobójcze czynniki wytwarzane przez dany probiotyk. Istnie tu pełna analogia do uodparniania się bakterii chorobotwórczych na antybiotyki. Występuje swego rodzaju wyścig biologiczny między patogenami a probiotykami. Oznacza to, że dla ochrony
PL 233 899 B1 zwierząt konieczne jest nieustanne poszukiwanie nowych szczepów bakterii probiotycznych wykazujących antagonistyczną aktywność wobec patogenów występujących aktualnie na danym terenie.
Dla pozyskania skutecznych szczepów bakterii probiotycznych konieczne jest prowadzenie skriningu bakterii probiotycznych wobec patogenów występujących w danym momencie na obszarze, na którym ma być przeprowadzana ochrona zwierząt przed tymi patogenami. Idąc za tym tokiem rozumowania przeprowadzono skrining bakterii fermentacji mlekowej wyizolowanych z ferm drobiu w kierunku ich zdolności do zwalczania chorobotwórczych szczepów bakterii Escherichia coli i Clostridium perfringens występujących na teranie Polski i nieoczekiwanie odkryto nowe szczepy bakterii fermentacji mlekowej zdolne do hamowania wzrostu i niszczenia tych patogenów.
Nowy szczep bakterii fermentacji mlekowej Enterococcus faecium eub1D o właściwościach probiotycznych według wynalazku, zdeponowany pod numerem PKM B/00094, charakteryzuje się sekwencją nukleotydową regionu DNA kodującego gen 16S rRNA wskazaną pod pozycją 1 wykazu sekwencji.
Nowy szczep bakterii fermentacji mlekowej Weissella paramesenteroides eub2D o właściwościach probiotycznych według wynalazku, zdeponowany pod numerem PKM B/00100, charakteryzuje się sekwencją nukleotydową regionu DNA kodującego gen 16S rRNA wskazaną pod pozycją 2 wykazu sekwencji nukleotydowych.
Nowy szczep bakterii fermentacji mlekowej Pediococcus acidilactici eub3D o właściwościach probiotycznych, zdeponowany pod numerem PKM B/00095, charakteryzuje się sekwencją nukleotydową regionu DNA kodującego gen 16S rRNA wskazaną pod pozycją 3 załączonego wykazu sekwencji.
Wymienione szczepy zostały zdeponowane w depozycie patentowym Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu.
Korzystnie izolacja bakterii polegała na pobraniu wymazów z dziobów kurcząt oraz próbek kału i ściółki, a następnie namnożeniu zawartych w nich bakterii w pożywce MRS, selektywnie wspomagającej wzrost bakterii fermentacji 30 mlekowej. Z otrzymanych hodowli izolowano następnie pojedyncze komórki, które dały początek kolekcji monokultur izolatów. Następnie przeprowadzono procedurę skriningową mającą na celu wyłonienie spośród pozyskanych izolatów tych, które wykazują zdolność niszczenia chorobotwórczych szczepów bakterii Escherichia coli i Clostridium perfringens.
Korzystnie szczepy chorobotwórczych E. coli i Clostridium perfringens wyizolowano z kału drobiu hodowanego na terenie Polski.
Procedura skriningu polegała na wysianiu chorobotwórczych szczepów bakterii E. coli i C. perfringens na odpowiednie dla nich pożywki umieszczone na płytkach Petriego, nałożeniu na nie komórek badanego izolatu bakteryjnego, wspólnej inkubacji a następnie pomiarze średnicy stref zahamowania wzrostu wokół punktu, na który nałożono komórki izolatu. Strefa przejaśnienia oznacza, że komórki badanego izolatu bakterii mlekowych wykazują działanie antagonistyczne wobec patogenu. Izolaty te traktowano jako bakterie potencjalnie probiotyczne, czyli takie, które mogą być zastosowane w ochronie zwierząt przed patogenami, wpływając korzystnie na dobrostan zwierząt. Kolejnym krokiem w badaniach była identyfikacja szczepów, które wykazały silne właściwości antagonistyczne wobec patogennych E. coli i C. perfringens. Korzystnie identyfikację przynależności gatunkowej izolatów oparto głównie na sekwencjonowaniu genu kodującego 16S rRNA izolatów.
Prebiotyk do zwalczania patogennych szczepów bakterii Escherichia coli u ptaków hodowlanych, zwłaszcza drobiu według wynalazku zawiera nowy szczep bakterii Weissella paramesenteroides eub2D. Jego postać aplikacyjna zawiera w jednym gramie co najmniej 106 jtk, korzystnie 109-1011 jtk.
Kompozycja probiotyczna do zwalczania patogennych szczepów bakterii Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza drobiu według wynalazku zawiera nowy szczep bakterii Enterococcus faeciumeub1D i/lub nowy szczep bakterii Weissella paramesenteroides eub2D i/lub nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici eub3D. Postać aplikacyjna kompozycji zawiera w jednym gramie co najmniej 106 jtk, korzystnie 109-1011 jtk.
Kompozycja probiotyczna do zwalczania patogennych szczepów bakterii Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza drobiu według wynalazku zawiera szczepy bakterii Weissella paramesenteroides eub2D i Enterococcus faecium eub1D i/lub Pediococcus acidilactici eub3D. Szczepy wchodzące w jej skład mogą być stosowne jako szczepy alternatywne, wymienialne w danej kompozycji w razie ataku wirusowego. Postać aplikacyjna kompozycji zawiera w jednym gramie co najmniej 106 jtk, korzystnie 109-1011 jtk.
Zastosowanie kompozycji probiotycznej według wynalazku polega na produkcji preparatu probiotycznego, zawierającego nowe szczepy Weissella paramesenteroides eub2D i/lub Enterococcus
PL 233 899 B1 faecium eubID i/lub Pediococcus acidilactici eub3D i podawaniu go ptakom w celu ograniczania rozwoju chorobotwórczych szczepów bakterii Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza drobiu. Kompozycja probiotyczna jest podawana ptakom doustnie lub doodbytniczo w ilości co najmniej 108-109 jtk/kg masy ciała zwierzęcia dziennie, korzystnie 108 jtk/kg masy ciała zwierzęcia dziennie. Korzystnie, kompozycja probiotyczna jest podawana ptakom doustnie razem z paszą i/lub z prefiksami i/lub z dodatkami paszowymi lub w formie specjalnych preparatów bakteryjnych.
Zastosowanie kompozycji do produkcji preparatu do dezynfekcji ciał ptaków i miejsca ich przebywania według wynalazku polega na dezynfekcji ciał ptaków i miejsca ich przebywania środkami zawierającymi w swoim składzie kompozycje i/lub ich metabolity. Metabolitami bakterii probiotycznych stosowanymi w celach dezynfekcji są bakteriocyny i/lub kwasy organiczne i/lub nadtlenek wodoru i/lub aldehyd octowy i/lub D-aminokwasy i/lub kwasy tłuszczowe i/lub cały płyn pohodowlany bakterii probiotycznych. Korzystnie, kompozycje i/lub metabolity są stosowane w formie zawiesiny komórkowej lub w formie utrwalonej.
Wśród korzystnych cech bakterii probiotycznych wymienia się:
a) oporność na niskie pH, gwarantująca przejście bakterii przez żołądek do dalszych odcinków przewodu pokarmowego,
b) oporność na sole żółciowe, gwarantująca przeżycie bakterii w obecności soków trzustkowych,
c) zdolność adhezji do ścian jelit, zwiększająca czas przebywania bakterii probiotycznych w przewodzie pokarmowych zwierząt.
Aby wykazać oporność na niskie pH zbadano ich przeżywalność w środowisku o pH 2,0. Wykazano, że 2 h inkubację w tych warunkach przeżyły szczepy Enterococcus faecium eub1D, Weissella paramesenteroides eub2D i Pediococcus acidilactici eub3D.
Następnie przeprowadzono test oporności na sole żółciowe, polegający na 4 h inkubacji pozyskanych szczepów w pożywce zawierającej 3% dodatek soli żółciowych. Korzystnie wykazano, że test ten pozytywnie przeszły szczepy Enterococcus faecium eub1D, Weissella paramesenteroides eub2D i Pediococcus acidilactici eub3D.
Zgodnie z wynalazkiem szczepy bakterii probiotycznych, wchodzące w skład kompozycji, mogą być namnażane w pożywkach ciekłych lub półstałych o składzie dostosowanym do wymogów pokarmowych kultur bakterii fermentacji mlekowej. Korzystnie w skład podłoża hodowlanego powinien wejść jeden z mono- lub disacharydów, organiczne źródło azotu zawierające aminokwasy i krótkie peptydy, witaminy i potrzebne sole mineralne. Przykładowo, odpowiednim podłożem do hodowli probiotycznych bakterii fermentacji mlekowej jest handlowa pożywka MRS (bulion DeMan-Rogosa-Sharpe), serwatka podpuszczkowa lub kwasowa, podłoże melasowe. W trakcie hodowli bakterii korzystne jest stabilizowanie pH pożywki do poziomu powyżej 5,0. Hodowlę bakterii wchodzących w skład kompozycji prowadzi się w warunkach beztlenowych lub względnie beztlenowych w temperaturze 30-37°C, korzystnie 35-37°C. Po zakończeniu hodowli korzystnie jest wydzielić komórki z ciekłego podłoża przez wirowanie lub mikrofiltrację i uzyskać w ten sposób koncentrat komórkowy, który następnie może być utrwalany przez zamrożenie lub wysuszenie. W przypadku hodowli bakterii w podłożu półstałym bakterie suszy się lub zamraża z całym podłożem.
Zgodnie z wynalazkiem, na podstawie wyników testów opracowano kompozycje probiotycznych szczepów bakterii fermentacji mlekowej, dobierając grupy drobnoustrojów pod kątem ich pochodzenia. Przykładowo, szczepy wyizolowane z odchodów kurcząt rzeźnych mogą stanowić środek do ochrony drobiu przed patogennymi szczepami E. coli i/lub C. perfringens. Korzystnie ochrona tych ptaków odnosi się szczególnie do patogennych szczepów E. coli i/lub C. perfringens występujących na terenie Polski.
Pozyskane szczepy bakterii probiotycznych mogą być wykorzystane jako samodzielne preparaty lub dodatki do pasz stosowanych w żywieniu kurcząt rzeźnych, indyków, bażantów, perliczek, strusi oraz innych ptaków hodowlanych, w tym ozdobnych, a także do dezynfekcji ich ciał i środowiska bytowania.
Przykłady zastosowania wynalazku
P r z y k ł a d 1. Izolacja i skrining na aktywność antagonistyczną
Z dziobów i skóry zdrowych kurcząt-brojlerów pobrano wymazy, natomiast ze ściółki próbki ich kału. Pobrany materiał zhomogenizowano, a następnie rozcieńczono metodą rozcieńczeń dziesiętnych i posiano na płytki Petriego, które zalano pożywką MRS-agar o składzie (g/l): agar 20,0 ekstrakt drożdżowy - 5,0, ekstrakt mięsny - 10,0, pepton K - 10,0, glukoza - 20,0 cytrynian amonu - 2,0, fosforan dwupotasowy - 2,0, octan sodu - 5,0, siarczan magnezu 0,1, siarczan manganu - 0,05. Płytki
PL 233 899 Β1 inkubowano w warunkach względnie beztlenowych w temperaturze 35-37°C przez co najmniej 48 godzin. Po inkubacji sterylną ezą pobrano pojedyncze kolonie i wprowadzono do ciekłej pożywki MRS umieszczonej w probówkach szczelnie zamykanych korkiem. Hodowle izolatów prowadzono w temperaturze 35-37°C przez 24h, a następnie wykonano z nich preparaty barwione metodą Grama. Monokultury oznaczono numerami pozwalającymi identyfikować je pod względem pochodzenia i zabezpieczano w ciekłym azocie. Utworzono w ten sposób bank izolatów bakterii fermentacji mlekowej naturalnie bytujących w przewodzie pokarmowym brojlerów.
Izolaty badano dalej w kierunku zdolności oddziaływania na patogenne szczepy bakterii E. coli i C. perfringens, które wyizolowano samodzielnie z ferm drobiu.
W testach stosowano pięć szczepów E. coli wyizolowanych z różnych regionów Polski. Na płytkach Petriego umieszczono podłoże - bulion wzbogacony z dodatkiem 2% glukozy i 1% agaru uprzednio zaszczepione chorobotwórczymi szczepami E. coli. Po jego zestaleniu wprowadzano na nie kolejno po 20pl zawiesiny badanych izolatów bakteryjnych. Aktywność każdego izolatu testowano wobec pięciu różnych szczepów E. coli.
Po 24 godzinach inkubacji w temperaturze 35-37°C dokonywano pomiaru średnicy stref przejaśnień wokół miejsc naniesienia zawiesiny izolatów. Na tej podstawie sporządzono ranking izolatów o antagonistycznej aktywności wobec testowanych szczepów. Aktywność w stosunku do wszystkim badanych szczepów Escherichia coli wykazał izolat Weissella paramesenteroides eub2D. Izolat ten wykorzystano do konstrukcji preparatu probiotycznego.
W analogiczny sposób wykonano test na antagonistyczną aktywność wyizolowanych szczepów wobec patogennych Clostridium perfringens. Do testu użyto siedmiu szczepów C. perfrinegns, pozyskanych z różnych regionów Polski. Każdy z izolatów bakterii fermentacji mlekowej testowano wobec wszystkich chorobotwórczych szczepów C. perfringens. Bakterie C. perfringens hodowano na płytkach Petriego w pożywce RCM-agar (Reinforced Clostridial Medium). W wyniku testu wykazano, że najsilniejszą aktywnością antagonistyczną w stosunku do wszystkich testowanych szczepów C. perfringens charakteryzowały się izolaty Enterococcus faecium eub1D, Weissella paramesenteroides eub2D i Pediococcus acidilactici eub3D.
Przykład 2. Identyfikacja izolatów
W wyniku hodowli wgłębnej izolatów wybranych w przykładzie 1, pozyskano biomasę komórkową, z której izolowano bakteryjne DNA. Następnie przeprowadzano sekwencjonowanie regionu DNA kodującego gen 16S rRNA. Otrzymaną sekwencję nukleotydową genu 16S rRNA porównano za pomocą programu BLASTN 2.2.27+ z sekwencjami dostępnymi w bazie National Center of Biotechnology Information (NCB1). Na podstawie analizy porównawczej sekwencji genów 16S rRNA izolatu określono przynależność gatunkową poszczególnych izolatów. Wyniki badań zamieszczono w tabeli 1
Tabela 1. Bakterie probiotyczne wykazujące aktywność przeciw 5 chorobotwórczym szczepom Escherichia coli i Clostridium perfringens
| Numer izolatu | Pochodzenie izolatu | Przynależność gatunkowa na podstawie sekwencjonowania 16S rRNA | Homologia do wzorca gatunku, % | Numer akcesyjny w depozycie Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu |
| eublD | kał | Enterococcus faecium | 99 | B/00094 |
| eub2D | kał | Weissella paramesenteroides | 99 | B/00100 |
| eub3D | kał | Pediococcus acidilactici | 98 | B/00095 |
Sekwencja 16S rDNA szczepu Enterococcus faecium eub1D wskazana pod pozycją 1 wykazu sekwencji
Sekwencja 16S rDNA szczepu Weissella paramesenteroides eub2D wskazana pod pozycją 2 wykazu sekwencji
Sekwencja 16S rDNA szczepu Pediococcus acidilactici eub3D wskazana pod pozycją 3 wykazu sekwencji
PL 233 899 Β1
Przykład 3. Hodowla bakterii
Izolaty bakterii mlekowych wymienione w przykładzie 2 hodowano w ciekłej pożywce o składzie (g/l): ekstrakt drożdżowy - 5,0, ekstrakt mięsny - 8,0, pepton K - 5,0, glukoza - 10,0, cytrynian amonu - 2,0, fosforan dwupotasowy - 2,0, octan sodu - 5,0, siarczan magnezu 0,1, siarczan manganu - 0,05. Hodowle prowadzono metodą okresową w bioreaktorze laboratoryjnym o poj. 30 L. Pożywkę sterylizowano metodą mikrofiltracji membranowej, a następnie zaszczepiano 2% v/v inoculum o stężeniu komórek ok. 109 jtk/ml. Hodowlę prowadzono w warunkach względnie beztlenowych w temperaturze 37°C, przy pH 6,0, z mieszaniem 100 obr/min. Po upływie 18 godzin hodowlę przerywano i oznaczano liczebność żywych komórek metodą klasycznych posiewów ilościowych. W opisanych warunkach uzyskiwano stężenie komórek powyżej 2 x 109 jtk/ml.
Przykład 4. Oporność na niskie pH 5
Hodowle szczepów otrzymane w przykładzie 3 odwirowywano, przemywano dwu-krotnie solą fizjologiczną, a następnie zawieszano w 0,01 M buforze fosforanowym o pH 2,0. Stężenie wyjściowe komórek w zawiesinie doprowadzano do poziomu ok. 107 jtk/ml. Tak przygotowaną zawiesinę inkubowano przez 2 godziny w temp. 37°C. Po inkubacji oznaczano liczebność żywych komórek w zawiesinie. Oznaczenia te wykonywano metodą posiewów ilościowych. Ustalono, że ekspozycję na niskie pH przeżywały wszystkie badane szczepy, na co wskazują wyniki badań zamieszczone w tabeli 2.
Tabela 2. Przeżywalność bakterii probiotycznych w środowisku o niskim pH
| Badany szczep | Początkowa liczebność komórek w zawiesinie jtk/ml | Końcowa liczebność komórek w zawiesinie jtk/ml |
| Enterococcus faecium eublD | l,32xl07 | 1,02x1ο5 |
| Weissella paramesenteroides eub2D | l,13xlO7 | 8,67xl04 |
| Pediococcus acidilactici eub3D | 1,08x107 | Ι,ΙΟχΙΟ5 |
Przykład 5. Odporność na sole żółciowe
Zawiesiny komórek bakteryjnych otrzymanych w przykładzie 3 umieszczano w podłożu zawierającym 3% soli żółci i inkubowano przez 4 godziny. Jako kryterium oceny wytrzymałości na działanie soli żółciowych przyjęto wyniki oznaczenia liczebności komórek po ekspozycji. Wyniki te przedstawiono w tabeli 3.
Tabela 3. Przeżywalność bakterii probiotycznych w obecności soli żółciowych
| Badany szczep | Początkowa liczebność komórek w zawiesinie jtk/ml | Końcowa liczebność komórek w zawiesinie jtk/ml |
| Enterococcus faecium eublD | 2,51xl07 | 1,99x107 |
| Weissella paramesenteroides cub2D | 3,71xl07 | 2,00xl07 |
| Pediococcus acidilactici eub3D | 2,52x107 | 1,05x106 |
Przykład 6. Probiotyk o aktywności przeciw E. coli oraz eksperymenty na zwierzętach potwierdzające jego działanie profilaktyczne
Szczep Weissella paramesenteroides eub2D wykazujący aktywność przeciw patogennym E. coli hodowano w bioreaktorze w pożywce MRS, pozbawionej ekstraktu mięsnego. Hodowle prowadzono przez 22 godziny. Następnie płyn pohodowlany odwirowano w wirówce przy 5000 g przez 5 min. Uzyskaną gęstwę komórkową wymieszano z 5% dodatkiem odtłuszczonego mleka w proszku i 8% dodatkiem trehalozy, a następnie wysuszono w suszami rozpyłowej. W suszu określono liczebność komórek metodą płytkową. Niewielką próbkę wytworzonego preparatu przeznaczono na testy mające potwierdzić jego aktywność antagonistyczną wobec patogennych E. coli. W tym celu susz bakteryjny wprowadzono do pożywki MRS na 20 godzin celem ożywienia zawartych w nim komórek,
PL 233 899 B1 a następnie zaszczepiono nim pożywkę MRS w kolbach o poj. 300 ml. Hodowle prowadzono przez 18 godzin w temp. 37°C. Uzyskaną kulturę wykorzystano do przeprowadzenia testu na aktywność antagonistyczną wobec E. coli, który przeprowadzono jedną ze znanych metod dyfuzyjnych. Testy dyfuzyjne potwierdziły zdolność badanego szczepu do antagonistycznego działania na patogenne E. coli.
Pozostały przygotowany preparat wymieszano z paszą w ilości 100 g/tonę. Paszą tą skarmiano 3 grupy kurcząt rzeźnych rasy Ross 500, każda po 80 ptaków. Doświadczenie prowadzono przez okres 42 dni. Dzienna dawka bakterii probiotycznych podana kurczętom wynosiła 109 jtk/kg paszy. Próbę kontrolną stanowiła grupa kurcząt, której podawano paszę bez dodatku probiotyków. Zwierzęta były hodowane w pomieszczeniach o niskich standardach higienicznych. Wykazano, że kurczęta należące do grupy skarmianej paszą z dodatkiem kompozycji probiotycznych nie miały biegunek, podczas gdy biegunki były obserwowane w grupie kontrolnej. Ponadto grupa kontrolna miała luźniejszy kał od grupy chronionej probiotykiem, a także obserwowano odparzenia łap u niektórych osobników .
Analogiczny test przeprowadzono z grupami indyków, strusi i gęsi, uzyskując podobne obserwacje, jak u kurcząt.
P r z y k ł a d 7. Kompozycje aktywne wobec Clostridium perfringens oraz eksperymenty na zwierzętach potwierdzające ich działanie profilaktyczne
Wykonano eksperymenty potwierdzające aktywność antybakteryjną kompozycji i ich działanie antagonistyczne wobec patogennych szczepów Clostridium perfringens. Eksperymenty zostały przeprowadzone w identyczny sposób jak w przykładzie 6. W badaniach stosowano następujące kompozycje probiotyków:
Kompozycja A: Enterococcus faecium eub1D + Weissella paramesenteroides eub2D (1:1) Kompozycja B: Weissella paramesenteroides eub2D + Pediococcus acidilactici eub3D (3:1) Kompozycja C: Enterococcus faecium eub1D + Weissella paramesenteroides eub2D + Pediococcus acidilactici eub3D (1:2:2)
Wyniki badań potwierdziły aktywność antagonistyczną kompozycji w stosunku do Clostridium perfringens, niezależnie od składu tych kompozycji, oraz ich aktywność ochronną w badanych grupach kurcząt.
Analogiczne eksperymenty przeprowadzono na grupach bażantów i perliczek hodowlanych, uzyskując potwierdzenie aktywności przeciwbakteryjnej kompozycji u tych grup ptaków.
P r z y k ł a d 8. Testy oceniające aktywność antagonistyczną i profilaktyczną kompozycji przeznaczonych do zwalczania patogennych E. coli i C. perfringens jednocześnie
Badania wykonano identycznie jak w przykładzie 6, stosując następujące kompozycje probiotyczne:
Kompozycja A: Enterococcus faecium eub1D + Weissella paramesenteroides 10 eub2D (1:2) Kompozycja B: Pediococcus acidilactici eub3D + Weissella paramesenteroides eub2D (1:5) Kompozycja C: Enterococcus faecium eub1D + Weissella paramesenteroides eub2D + Pediococcus acidilactici eub3D (1:5:2)
Wyniki badań potwierdziły aktywności antagonistyczną wszystkich kompozycji względem E. coli i C. perfringens oraz ich działanie ochronne w testach ze zwierzętami.
P r z y k ł a d 9. Dezynfekcja
Przeprowadzono hodowle bakterii probiotycznych Weissella paramesenteroides eub2D i Pediococcus acidilactici eub3D w oddzielnych bioreaktorach. Jako medium hodowlane stosowano pożywkę MRS zawierającą zwiększoną zawartość glukozy do 25 g/l. Hodowle prowadzono w warunkach beztlenowych w temperaturze 30°C przez 20 godzin. Po tym czasie płyn pohodowlany odwirowano w celu usunięcia komórek i zatężano metodą ultrafiltracji membranowej, a następnie przeniesiono go do zbiornika aplikatora aparatu do dezynfekcji i spryskano nim powierzchnie posadzki w kurniku. Preparat stosowano w ilości 20 ml/m2 i pozostawiano na dezynfekowanych powierzchniach przez 5 minut. Dla porównania część posadzki nie dezynfekowano. Następnie pobrano wymazy z powierzchni dezynfekowanych i kontrolnych i oznaczono na nich pozostałych liczbę żywych komórek Escherichia oraz Clostridium, postępując zgodnie z normą PN-EN 13697. Stwierdzono, że w stosunku do powierzchni niedezynfekowanej liczebności żywych komórek bakterii Escherichia zmniejszyła się o co najmniej 105, a Clostridium o ponad 106.
PL 233 899 B1
Literatura
Humphrey T., O’Brien S., Madsen M.: Campylobacters as zoonotic pathogens: a food production perspective. Int. J. Food Microbiol. 2007, 117, 237-257.
Van Immerseel F., De Buck J., Pasmans F., Huyghebaert G., Haesebrouck F., Ducatelle R.: Clostridium perfringens in poultry: an emerging threat for animal and public health. Avian Pathol. 2004, 33, 537-549.
Schneitz C.: Competitive exclusion in poultry - 30 years of research. Food Control. 2005, 16, 657-667. Timmerman H.M., Veldman A., van den Elsen E., Rombouts F.M., Beynen A.C.: Mortality and growth performance of broilers given drinking water supplemented with chicken-specific probiotics. Poultry Sci. 2006, 85, 1383-1388.
Dahiya JP, Wilkie DC, van Kessel AG, Drew MD.: Potential strategies for controlling necrotic enteritis in broiler chicken in post-antibiotic era. Animal Feed Sci. Technol. 129, 60-88, 2006.
Huyghebaert G., Ducatelle R., van Immerseel F.: An update on alternatives to antimicrobial growth promotors for broilers. The Veterinary J., 187, 182-188, 2011.
Kabir SML: The role of probiotics in the poultry industry. Int. J. Mol. Sci. 10, 3531-3546, 2009.
PL 233 899 Β1
Wykaz sekwencji nukleotydowych <110> Uniwersytet Przyrodniczy w Poznaniu
Przyrodniczy, Uniwersytet <120> Nowe szczepy bakterii probiotycznych do zwalczania Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza u drobiu, kompozycje szczepów bakterii probiotycznych i ich zastosowania.
<130> P.416205 <160> 3 <170> Patentln yersion 3.5 <210> 1 <211> 1414 <212> DNA <213> Enterococcus faecium <220>
<221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> n is a, c, g, or t
PL 233 899 Β1 <220>
<221> misc_feature <222> (37)..(37) <223> n is a, c, g, or t <220 <221> misc_feature <222> (42)..(42) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_fcaturc <222> (60)..(60) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (67)..(67) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (70)..(70) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (72)..(72) <223> n is a, c, g, or t
PL 233 899 Β1 <220>
<221 > misc_feature <222> (74)..(74) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_fcaturc <222> (77)..(77) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_fcaturc <222> (96)..(96) <223> n is a, c, g, or l <220>
<221> misc_feature <222> (100)..(100) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (114)..(114) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (122)..(122) <223> n is a, c, g, or t <220>
PL 233 899 Β1 <221> misc_feature <222> (124)..(124) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misę.fcaiurc <222> (134)..(134) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_fcaturc <222> (138)..(138) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (143)..(143) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (145)..(145) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (152)..(152) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature
PL 233 899 Β1 <222> (154)..(154) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (165)..(165) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (172)..(172) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (174)..(174) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (177)..(177) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_fcaturc <222> (184)..(184) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (191)..(191)
PL 233 899 Β1 <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> miscfeature <222> (196)..(196) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc feature <222> (201)..(201) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misC-fealure <222> (209)..(209) <223> n is a, c, g, or i <220>
<221> misc_fcaturc <222> (211)..(211) <223> n is a, c, g, or ( <220>
<221> misc_feature <222> (220)..(220) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc feature <222> (1287)..(1287) <223> n is a, c, g, or t
PL 233 899 Β1 <400> sekwencja 1 taggcggctg gctccaaagg ntacctcacc ganttcnggt gntacaaact ctcgtggtgn 60 gacgggnggn gngnacnagg gccgggaacg tattcnccgn ggcgtggtga tccncgatta 120 cnancgattc cggnttcntg gangngaatt gnancctgga atccnaactg ananaanctt 180 taanaaatta ncttancctc ncgacttcnc nactcgttgn acttcccatt ggagcacgtg 240 ggtagcccag gtcataaggg gatgatgatt tgacgtcatc cccaccttcc tccggttgtc 300 accggcagtc ttgctagagt gccaactgaa tgatggcaac taaaataagg gttgcgctcg 360 ttgcgggact taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg acaaccatgc accacctgtc 420 actttgcccc cgaaggggaa gctctatctc tagagtggtc aaaggatgtc aagacctggt 480 aaggttcttc gcgttgcttc gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt 540 caattccttt gagtttcaac cttgcggtcg tactccccca ggcggagtgc ttaatgcgtt 600 agctgcagca ctgaagggcg gaaaccctcc aacacttagc actcatcgtt tacggcgtgg 660 actaccaggg tatctaatcc tgtttgctcc ccacgctttc gagcctcagc gtcagttaca 720 gaccagagag ccgccttcgc cactggtgtt cctccatata tctacgcatt tcaccgctac 780 acatggaaat tccactctcc tcttctgcac tcaagtctcc cagtttccaa tgaccctccc 840 cggttgagcc gggggctttc acatcagact taagaaaccg cctgcgctcg ctttacgccc 900
PL 233 899 Β1 aataaatccg gacaacgctt gccacctacg tattaccgcg gctgctggca cgtagttagc 960 cgtggctttc tggttagata ccgtcaaggg atgaacagtt actctcatcc ttgttcttct 1020 ctaacaacag agttttacga tccgaaaacc ttcttcactc acgcggcgtt gctcggtcag 1080 actttcgtcc attgccgaag attccctact gctgcctccc gtaggagttt gggccgtgtc 1140 tcagtcccaa tgtggccgat caccctctca ggtcggctat gcatcgtggc cttggtgagc 1200 cgttacctca ccaactagct aatgcaccgc gggtccatcc atcagcgaca cccgaaagcg 1260 cctttcaaat caaaaccatg cggtttngat tgttatacgg tattagcacc tgtttccaag 1320 tgttatcccc ttctgatggg caggttaccc acgtgttact cacccgttcg ccactcctct 1380 ttttccggtg gagcaagctc cggtggaaaa agaa 1414 <210> 2 <211> 1438 <212> DNA <213> Wcissella paramcscnteroidcs <220>
<221> misc_feature <222> (50)..(50) <223> n is a, c, g, or t
PL 233 899 Β1 <400> sekwencja 2 tgcagtcgaa cgctttagtc tttaattgat ctgacgagct tgctctgatn tgattttatc 60 tgacaaagag tggcgaacgg gtgagtaaca cgtgggtaac ctacctctta gcaggggata 120 acatttggaa acaagtgcta ataccgtata ataccaacaa ccgcatggtt gttggttgaa 180 agatggttct gctatcacta agagatggac ccgcggtgca ttagctagtt ggtaaggtaa 240 cggcttacca aggcaatgat gcatagccga gttgagagac tgatcggcca caatgggact 300 gagacacggc ccatactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccaca atgggcgcaa 360 gcctgatgga gcaacgccgc gtgtgtgatg aagggtttcg gctcgtaaaa cactgttata 420 agagaagaac ggcactgaga gtaactgttc agtgtgtgac ggtatcttac cagaaaggaa 480 cggctaaata cgtgccagca gccgcggtaa tacgtatgtt ccaagcgtta tccggattta 540 ttgggcgtaa agcgagcgca gacggttatt taagtctgaa gtgaaagccc tcagctcaac 600 tgaggaatgg ctltggaaac tggatgactt gagtgcagla gaggaaagtg gaactccatg 660 tgtagcggtg aaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg gctttctgga 720 ctgtaactga cgttgaggct cgaaagtgtg ggtagcaaac aggattagat accctggtag 780 tecacaccgt aaacgatgag tgctagatgt tcgagggttt ccgcccttga gtgtcgcagc 840 taacgcatta agcactccgc ctggggagta cgaccgcaag gttgaaactc aaaggaattg 900
PL 233 899 Β1 acggggaccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt 960 accaggtctt gacatccctt gctaatccta gaaataggac gttcccttcg gggacaaggt 1020 gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 1080 cgagcgcaac ccttattatt agttgccagc attcagttgg gcactctagt gagactgccg 1140 gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccclta tgacctgggc 1200 tacacacgtg ctacaatggc atatacaacg agtcgccaac ccgcgagggl gcgctaatct 1260 cttaaagtat gtctcagttc ggattgtagg ctgcaactcg cctacatgaa gtcggaatcg 1320 ctagtaatcg cggatcagca cgccgcggtg aatacgttcc cgggtcttgt acacaccgcc 1380 cgtcacacca tgagagtttg taacacccaa agccggtggg gtaaccttgt aggagcca 1438 <210> 3 <211> 1446 <212> DNA <213> Pcdiococcus acidilactici <220>
<221> misc_feature <222> (212)..(212) <223> n is a, c, g, or t <220>
PL 233 899 Β1 <221> misc_feature <222> (1413)..(1413) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_feature <222> (1416)..(1416) <223> n is a, c, g, or t <220>
<221> misc_fcaturc <222> (1418)..(1418) <223> n is a, c, g, or t <400> sekwencja 3 tagacggcta gctcctaaag gttaccccac cggctttggg tgttacaaac tctcatggtg 60 tgacgggcgg Lgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg cggcatgctg atccgcgalt 120 actagcgatt ccgacttcgt gtaggcgagt tgcagcctac agtccgaact gagaatggtt 180 ttaagagatt agctaaacct cgcggtttcg cnactcgttg taccatccat tgtagcacgt 240 gtgtagccca ggtcataagg ggcatgatga tttgacgtcg tccccacctt cctccggttt 300 gtcaccggca gtctcactag agtgcccaac tgaatgctgg caactagtaa taagggttgc 360 gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca cgacacgagc tgacgacaac catgcaccac 420 ctgtcattct gtccccgaag ggaacgccta atctcttagg ttggcagaag atgtcaagac 480
PL 233 899 Β1 ctggtaaggt tcltcgcgta gcttcgaatt aaaccacatg ctccaccgct tgtgcgggcc 540 cccgtcaatt cttttgagtt tcaaccttgc ggtcgtactc ccccaggcgg attacttaat 600 gcgttagctg cagcactgaa gggcggaaac cctccaacac ttagtaatca tcgtttacgg 660 catggactac cagggtatct aatcctgttc gctacccatg ctttcgagcc tcagcgtcag 720 ttacagacca gacagccgcc ttcgccactg gtgttcttcc atatatctac gcatttcacc 780 gctacacatg gagttccact gtcctcttct gcactcaagt ctcccagttt ccaatgcact 840 tcttcggttg agccgaaggc tttcacatta gacttaaaag accgcctgcg ctcgctttac 900 gcccaataaa tccggataac gcttgccacc tacgtattac cgcggctgct ggcacgtagt 960 tagccgtggc tttctggtta aataccgtca ctgggtgaac agttactctc acccacgttc 1020 ttctttaaca acagagcttt acgagccgaa acccttcttc actcacgcgg cgttgctcca 1080 tcagacttgc gtccattgtg gaagattccc tactgctgcc tcccgtagga gtctgggccg 1140 tgtctcagtc ccaatgtggc cgattaccct ctcaggtcgg ctacgcatca tcgccttggt 1200 gagccgttac ctcaccaact agctaatgcg ccgcgggtcc atccagaagt gatagcagag 1260 ccatctttta aaagaaaacc aggcggtttt ctctgttata cggtattagc atctgtttcc 1320 aggtgttatc ccctgcttct gggcaggtta cccacgtgtt actcacccgt ccgccactca 1380 cttcgtgtla aaatctcatl cagtgcaagc acnlcntnat caaltaacgg aagttcgtcg 1440 actgca 1446
Claims (15)
- Zastrzeżenia patentowe1. Nowy szczep bakterii fermentacji mlekowej Enterococcus faecium eubID o właściwościach probiotycznych, zdeponowany pod numerem PKM B/00094, o sekwencji nukleotydowej regionu DNA kodującego gen 16S rRNA wskazanej pod pozycją 1 wykazu sekwencji.
- 2. Nowy szczep bakterii fermentacji mlekowej o właściwościach probiotycznych Weissella paramesenteroides eub2D, zdeponowany pod numerem PKM B/00100, o sekwencji nukleotydowej regionu DNA kodującego gen 16S rRNA wskazanej pod pozycją 2 wykazu sekwencji.
- 3. Nowy szczep bakterii fermentacji mlekowej o właściwościach probiotycznych Pediococcus acidilactici eub3D, zdeponowany pod numerem PKM B/00095, o sekwencji nukleotydowej regionu DNA kodującego gen 16S rRNA wskazanej pod pozycją 3 wykazu sekwencji.
- 4. Prebiotyk do zwalczania patogennych szczepów bakterii Escherichia coli u ptaków hodowlanych, zwłaszcza drobiu, znamienny tym, że w jego skład wchodzi nowy szczep bakterii Weissella paramesenteroides eub2D jak określono w zastrz. 2.
- 5. Prebiotyk według zastrz. 4, znamienny tym, że jego postać aplikacyjna zawiera w jednym gramie co najmniej 106 jtk, korzystnie 109-1011 jtk.
- 6. Kompozycja probiotyczna do zwalczania patogennych szczepów bakterii Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza drobiu, znamienna tym, że zawiera nowy szczep bakterii Enterococcus faecium eub1D jak określono w zastrz. 1 i/lub nowy szczep bakterii Weissella paramesenteroides eub2D jak określono w zastrz. 2 i/lub nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici eub3 D jak określono w zastrz. 3.
- 7. Kompozycja probiotyczna do zwalczania patogennych szczepów bakterii Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza drobiu, znamienna tym, że zawiera szczepy bakterii Weissella paramesenteroides eub2D jak określono w zastrz. 2 i Enterococcus faecium eub1D jak określono w zastrz. 1 i/lub Pediococcus acidilactici eub3D jak określono w zastrz. 3.
- 8. Kompozycja według zastrz. 7, znamienna tym, że szczepy wchodzące w jej skład mogą być stosowne jako szczepy alternatywne, wymienialne w danej kompozycji w razie ataku wirusowego.
- 9. Kompozycja według zastrz. 7 albo 8, znamienna tym, że jej postać aplikacyjna zawiera w jednym gramie co najmniej 106 jtk, korzystnie 109-1011 jtk.
- 10. Zastosowanie kompozycji jak określono w zastrz. 6 albo 7 albo 8 albo 9 do produkcji preparatu probiotycznego w celu ograniczania rozwoju chorobotwórczych szczepów bakterii Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza drobiu.
- 11. Zastosowanie według zastrz. 10, znamienne tym, że kompozycja probiotyczna według zastrz. 6 albo 7 albo 8 albo 9 jest podawana ptakom doustnie lub doodbytniczo w ilości co najmniej 108-109 jtk/kg masy ciała zwierzęcia dziennie, korzystnie 108 jtk/kg masy ciała zwierzęcia dziennie.
- 12. Zastosowanie według zastrz. 11, znamienne tym, że kompozycja probiotyczna według zastrz. 7 albo 8 albo 9 jest podawana ptakom doustnie razem z paszą i/lub z prefiksami i/lub z dodatkami paszowymi lub w formie specjalnych preparatów bakteryjnych.
- 13. Zastosowanie kompozycji jak określono w zastrz. 7 albo 8 albo 9 do produkcji preparatu do dezynfekcji ciał ptaków i miejsca ich przebywania, znamienne tym, że ciała ptaków i miejsca ich przebywania dezynfekuje się środkami zawierającymi w swoim składzie kompozycje według zastrz. 6 albo 7 albo 8 albo 9 i/lub ich metabolity.
- 14. Zastosowanie według zastrz. 13, znamienne tym, że metabolitami bakterii probiotycznych stosowanymi w celach dezynfekcji są bakteriocyny i/lub kwasy organiczne i/lub nadtlenek wodoru i/lub aldehyd octowy i/lub D-aminokwasy i/lub kwasy tłuszczowe i/lub cały płyn pohodowlany bakterii probiotycznych.
- 15. Zastosowanie według zastrz. 13, znamienne tym, że kompozycje i/lub metabolity są stosowane w formie zawiesiny komórkowej lub w formie utrwalonej.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL416205A PL233899B1 (pl) | 2016-02-19 | 2016-02-19 | Nowe szczepy bakterii probiotycznych do zwalczania Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza u drobiu, kompozycje szczepów bakterii probiotycznych i ich zastosowania |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL416205A PL233899B1 (pl) | 2016-02-19 | 2016-02-19 | Nowe szczepy bakterii probiotycznych do zwalczania Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza u drobiu, kompozycje szczepów bakterii probiotycznych i ich zastosowania |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL416205A1 PL416205A1 (pl) | 2017-08-28 |
| PL233899B1 true PL233899B1 (pl) | 2019-12-31 |
Family
ID=59684534
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL416205A PL233899B1 (pl) | 2016-02-19 | 2016-02-19 | Nowe szczepy bakterii probiotycznych do zwalczania Escherichia coli i Clostridium perfringens u ptaków hodowlanych, zwłaszcza u drobiu, kompozycje szczepów bakterii probiotycznych i ich zastosowania |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL233899B1 (pl) |
-
2016
- 2016-02-19 PL PL416205A patent/PL233899B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL416205A1 (pl) | 2017-08-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI574628B (zh) | 利用枯草芽孢桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株增進動物健康之方法 | |
| ES2695149T3 (es) | Cepas de Bacillus sensibles a antibióticos que tienen efecto antimicrobiano contra E. coli y Clostridium perfringens y que tienen alta capacidad de esporulación | |
| JP5103531B2 (ja) | 新規バクテリオファージおよびこれを含む抗菌組成物 | |
| JP2008543290A (ja) | プロバイオティック健康及び体調増進食品、餌及び／又は飲料水添加物並びにその使用 | |
| JPH09506625A (ja) | サルモネラの調節用の共生体 | |
| KR20130113037A (ko) | 신규 바실러스 서브틸리스 | |
| Faragi | Isolation and identification of Bacillus subtilus as) probiotic) from intestinal microflora of common carp Cyprinus carpio L.: Jamal KH Al-Faragi and Sundus AA Alsaphar | |
| Castañeda et al. | In ovo administration of Bacillus subtilis serotypes effect hatchability, 21-day performance, and intestinal microflora | |
| Rahimi et al. | Effect of direct-fed microbials on performance and Clostridium perfringens colonization of turkey poults | |
| CN1913787B (zh) | 在动物中促进生长的活体细菌的应用 | |
| JP5371169B2 (ja) | 薬剤耐性菌感染防除剤 | |
| KR20180131948A (ko) | 슈도모나스 익스트리모리엔탈리스 균주 kacc 81047bp 및 이를 포함하는 조성물 | |
| KR100557397B1 (ko) | 유해미생물 억제 활성을 가지는 신규 내산성 락토바실러스 루테리 Probio-054 및 이를 함유하는 생균활성제 | |
| Ragione et al. | Competitive exclusion. | |
| KR100513167B1 (ko) | 가금티푸스 유발 살모넬라 갈리나룸 및 유해 병원성 미생물 생육 억제능을 갖는 신규 내산성 엔테로코커스 훼칼리스 Probio-053 및 이를 함유한 생균활성제 | |
| KR20150024116A (ko) | 바실러스 속, 락토바실러스 속, 이스트 속 및 파지 혼합물을 유효성분으로 함유하는 축산용 프로바이오틱스 조성물 | |
| KR100523255B1 (ko) | 가금티푸스 유발 살모넬라 갈리나룸 및 유해 병원성 미생물 생육 억제능을 갖는 신규 내산성 엔테로코커스훼시움 Probio-048 및 이를 함유한 생균활성제 | |
| PL233898B1 (pl) | Nowe szczepy bakterii fermentacji mlekowej do zwalczania Escherichia coli i Clostridium perfringens u zwierząt, zwłaszcza u przeżuwaczy, ich kompozycje i zastosowania | |
| KR20090129019A (ko) | 박테리오신을 생산하는 유산균 및 이를 함유하는 육계용생균제 조성물 | |
| KR102037398B1 (ko) | 신규한 살모넬라균 특이 박테리오파지 sg102 및 이를 포함하는 항균 조성물 | |
| KR20140005573A (ko) | 식물성 생균을 함유하는 가금류용 사료 조성물 | |
| KR20250099550A (ko) | 항생제 내성 및 병원성 대장균에 대한 특이적인 사멸능을 갖는 신규한 박테리오파지 kfsec8 및 이를 포함하는 항균 조성물 | |
| Ivanov | Laboratory study to determine the effect of a probiotic mixture on chicken-broiler | |
| Duffy | Pathogen control in primary production: meat, dairy and eggs | |
| CZ36678U1 (cs) | Komplexní probiotický přípravek z anaerobů trávicího traktu pro drůbež |