PL234591B1 - Sposób izolowania śluzu ślimaka, kompozycja i zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus - Google Patents
Sposób izolowania śluzu ślimaka, kompozycja i zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus Download PDFInfo
- Publication number
- PL234591B1 PL234591B1 PL413883A PL41388315A PL234591B1 PL 234591 B1 PL234591 B1 PL 234591B1 PL 413883 A PL413883 A PL 413883A PL 41388315 A PL41388315 A PL 41388315A PL 234591 B1 PL234591 B1 PL 234591B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- mucus
- snail
- snails
- rufus
- mass
- Prior art date
Links
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 title claims abstract description 56
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 title claims abstract description 37
- 241000237521 Arion rufus Species 0.000 title claims abstract description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 21
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 6
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 4
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000865 liniment Substances 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 9
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N Heroin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)OC(C)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4OC(C)=O GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N 0.000 description 12
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 9
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 9
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 Polyoxyethylene Polymers 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 2
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 2
- 241000237526 Arionidae Species 0.000 description 1
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000237367 Helix aspersa Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 description 1
- 241000543567 Rapana venosa Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000002828 disc diffusion antibiotic sensitivity testing Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000000087 hemolymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 230000003843 mucus production Effects 0.000 description 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002420 orchard Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest sposób izolacji śluzu ślimaka Arion rufus, kompozycja a także zastosowanie śluzu do wytwarzania preparatów o właściwościach bakteriostatycznych i bakteriobójczych. Preparaty mogą być stosowane na skórę, jak i błony śluzowe zewnętrznie i wewnętrznie. Opisana metoda wykorzystuje powszechnie dostępny gatunek ślimaka, jest nieszkodliwa dla zwierząt, a dzięki zastosowaniu roztworów wodnych nie powoduje powstawania odpadów.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób izolacji śluzu, kompozycja zawierająca ten śluz, a także jego zastosowanie do wytwarzania preparatów o właściwościach przeciwbakteryjnych. Preparaty mogą być stosowane na skórę, jak i błony śluzowe, zewnętrznie i wewnętrznie.
Znane jest z opisu zgłoszenia patentowego nr BG 20100110665 wykorzystanie właściwości przeciwbakteryjnych śluzu i hemolimfy ślimaków muszlowych, Helix aspersa i Rapana venosa. Są to jednak gatunki niewystępujące naturalnie w Polsce, co więcej ich hodowla wymaga sztucznych i często kosztownych warunków, przez co wykorzystanie ich do pozyskiwania związków o aktywności biologicznej jest znacząco ograniczone.
Nieoczekiwanie okazało się, że śluz ślimaków bezmuszlowych Arion rufus wykazuje bakteriostatyczne działanie w stosunku do bakterii chorobotwórczych dla człowieka, wywołujących stan zapalny przewodu pokarmowego, który w pewnych przypadkach rozwijać się może do uogólnienia procesu chorobowego z zajęciem narządów wewnętrznych i posocznicą.
Z opisów zgłoszeń patentowych WO2007124625 i US2010048457, znana jest metoda izolowania z ciała ślimaków konkretnych cząsteczek (glikoproteiny i polisacharydy), która polega na homogenizacji całych ślimaków, a następnie ekstrakcji tych cząsteczek etanolem. Jednak wytrząsanie w etanolu może powodować degradację białek ze śluzu, jest szkodliwe dla ślimaków, trudne w utylizacji i szkodliwe dla środowiska.
Celem wynalazku było opracowanie metody izolowania samego śluzu, pozwalającej na ponownie wykorzystanie ślimaków do otrzymywania śluzu, przy udziale roztworu izoosmotycznego względem ślimaków, nieszkodliwego dla białek, środowiska i łatwego w utylizacji.
Ślimak z gatunku Arion rufus należy do rodziny ślinikowatych (Arionidae), ich ciało jest wydłużone, w kolorach brunatno-brązowych, z ciemniejszą stopą i czułkami. Ich polska nazwa to ślinik wielki (ang. red slug). Na terenie Polski występują licznie, nie są gatunkiem chronionym i są uważane za szkodniki. Jest to gatunek żyjący w pobliżu siedzib ludzkich, takich jak ogrody, sady, a także parki. Jest to gatunek żywiący się niemal każdym rodzajem i częścią roślin ogrodowych, zarówno uprawnych jak i ozdobnych, głównie ich częściami przyziemnymi. Z tego powodu jest on uważany za szkodnika.
Istota sposobu według wynalazku polega na tym, że żywe ślimaki Arion rufus wytrząsa się w fizjologicznym roztworze NaCI w sposób umożliwiający omycie ślimaka ze śluzu, przy jednoczesnym przeżyciu osobników. Wytrząsanie prowadzi się do momentu stwierdzenia zmian charakteru roztworu, który jest możliwie jednolicie galaretowaty. Stosunek wagowo-objętościowy masy ślimaków do ilości roztworu NaCI powinien być tak dobrany, aby zachować stabilizację białek w śluzie. Kolejno, po odłowieniu zwierząt, roztwór odwirowuje się, a uzyskany supernatant poddaje się dializie w celu usunięcia soli i liofilizacji w celu usunięcia rozpuszczalnika.
Korzystnie jest, gdy stosunek wagowo-objętościowy masy ślimaków do ilości roztworu NaCI wynosi od 1:5 do 1:15.
Istotą wynalazku jest również kompozycja, która zawiera śluz izolowany według sposobu będącego przedmiotem wynalazku oraz ewentualnie nośniki i/lub środki pomocnicze i/lub rozcieńczalniki.
Korzystnie jest gdy kompozycja stanowi formę maści, kremów, żeli, past, roztworów, mazideł, zawiesin i emulsji. Korzystne jest szczególnie nadanie postaci żelu, który dzięki hydrofilowemu charakterowi odpowiada właściwościom śluzu.
Istotą jest także zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus do wytwarzania wyrobu medycznego, niebędącego lekiem, który zapobiega występowaniu, hamuje wzrost lub zwalcza bakterie, korzystnie z rodzaju Escherichia i/lub Salmonella.
Istotą wynalazku jest również medyczne zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus do wytwarzania leków do leczenia zakażeń bakteryjnych, o etiologii zwłaszcza Escherichia i/lub Salmonella, korzystnie E. coli i S. typhimurium.
Preparaty zawierające śluz ślimaka mogą być zastosowane na skórę i błony śluzowe zewnętrznie i wewnętrznie.
Testy na ludzkich fibroblastach potwierdziły brak toksyczności śluzu ślimaka tego gatunku.
Duża dostępność w warunkach naturalnych na terenie kraju oraz łatwość hodowli tego gatunku ślimaka, jest atutem przedstawionego wynalazku. Opracowana metoda izolacji śluzu jest nieinwazyjna, nieszkodliwa dla ślimaków. Metoda izolacji jest także mniej szkodliwa dla białek zawartych w ślu
PL 234 591 B1 zie, dzięki rezygnacji z wykorzystania etanolu, jak w innych znanych metodach. Dodatkowo, ponieważ wszystkie stosowane w procesie pozyskiwania śluzu roztwory są roztworami wodnymi, nie dochodzi do produkcji szkodliwych odpadów.
Poniżej podano przykłady możliwych kompozycji poprzez składy wybranych preparatów.
| Skład preparatu 1 Śluz Metyloceluloza 4000 cp Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 95,8 części masowych |
| Skład preparatu 2 Śluz Metyloceluloza 1500 cp Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 95,8 części masowych |
| Skład preparatu 3 Śluz Metyloceluloza 4000 cp Glicerol Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 5,0 części masowych 90,8 części masowych |
| Skład preparatu 4 Śluz Metyloceluloza 4000 cp Glikol propylenowy-1,2 Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 10,0 części masowych 85,8 części masowych |
| Skład preparatu 5 Śluz Metyloceluloza 4000 cp Glikol polioksyetylenowy 200 Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 15,0 części masowych 80,8 części masowych |
| Skład preparatu 6 Śluz Metyloceluloza 4000 cp Glicerol Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 15,0 części masowych 80,8 części masowych |
| Skład preparatu 7 Śluz Metyloceluloza 1500 cp Glikol polioksyetylenowy 200 Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 5,0 części masowych 95,8 części masowych |
| Skład preparatu 8 Śluz Metyloceluloza 1500 cp Glikol propylenowy-1,2 Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 5,0 części masowych 90,8 części masowych |
| Skład preparatu 9 Śluz Metyloceluloza 1500 cp Glicerol Woda oczyszczona | 0,2 części masowych 4,0 części masowych 5,0 części masowych 90,8 części masowych |
PL 234 591 B1
Izolacja śluzu ślimaka Arion rufus
P r z y k ł a d 1
Ślimaki gatunku Arion rufus pozyskiwane są z odłowu w środowisku naturalnym, np. przydomowych ogrodów. Jest to gatunek o nocnym trybie życia i zbiory odbywają się nocą. Ślimaki przetrzymywane są w glinianych naczyniach, z dostępem tlenu, światła słonecznego i słodkiej wody oraz pożywienia w postaci roślin ogrodowych.
Śluz pozyskiwany jest przez w następujący sposób: ślimaki w ilości 6 osobników dorosłych na jedno powtórzenie (ok. 40 g) umieszcza się w szklanym naczyniu, następnie uzupełnia się je buforowanym 0,9% roztworem NaCI o temperaturze pokojowej, w stosunku 1:9 wagowo-objętościowym. Tak przygotowane ślimaki ostrożne wytrząsa się na wytrząsarce laboratoryjnej rotacyjnej, firmy Elpan - water bath shaker type 357. Ślimaki nie ulegają uszkodzeniu, a śluz osmotycznie odpływa z ich ciała. Wytrząsanie prowadzi się przez 20 minut przy 150 obr./min., otrzymując w miarę jednolity, galaretowaty roztwór, natomiast stan ślimaków wskazuje na ich pełne omycie. Następnie zwierzęta odławia się.
Pozyskaną mieszaninę poddaje się wirowaniu na urządzeniu firmy Sigma przez 15 minut przy 15 000 rpm w celu usunięcia zanieczyszczeń.
Po tym etapie przeprowadza się proces dializy w 10°C (12 wymian wody, co ok. 3 h z przerwą nocną), mający na celu usunięcie soli z preparatu w zlewkach, a po jego zakończeniu całość liofilizuje się aż do momentu całkowitego usunięcia wody.
P r z y k ł a d 2
Postępuje się jak w przykładzie 1, z tym, że wstrząsanie ślimaków w roztworze NaCI, prowadzi się przez 30 minut przy 120 obr./min., oraz w stosunku wagowo-objętościowym ślimaków do NaCI 1:15.
Dalej postępuje się jak w przykładzie 1.
P r z y k ł a d 3
Postępuje się jak w przykładzie 1, z tym, że wstrząsanie ślimaków w roztworze NaCI, prowadzi się przez 10 minut pr zy 180 obr./min., oraz w stosunku wagowo-objętościowym ślimaków do NaCl 1:5. Dalej postępuje się jak w przykładzie 1.
Z kolei osad po wirowaniu, z obu powt órzeń, badany był pod kątem mikrobiologicznym. Wyniki wymazów pobranych z ciał ślimaków przed izolacją śluzu potwierdzają znikomą obecność żywych bakterii w śluzie badanych ślimaków oraz dużą liczbę bakterii w osadzie uzyskanym po wirowaniu na etapie izolacji śluzu. Jest to zgodne z założeniem, że wirowanie jest etapem mającym za zadanie usunięcie ewentualnych zanieczyszczeń oraz bakterii. Ponadto należy dodać, że ślimaki, jak wspomniano wyżej, żyją w środowisku skażonym działalnością ludzką oraz zwierząt domowych, co mogłoby powodować nagromadzenie się mikroorganizmów chorobotwórczych w naskórnym śluzie ślimaków. Taka sytuacja nie ma jednak miejsca, co widać po wynikach wymazów załączonych w tabeli 1. Na podstawie wymazów podjęto decyzję o sprawdzeniu właściwości przeciwbakteryjnych w stosunku do wybranych mikroorganizmów chorobotwórczych. Wybrane do badan ia mikroorganizmy są powszechnie występującymi w środowisku i wywołującymi infekcje mikroorganizmami. Skupiono się na 4 szczepach, które są najpowszechniejsze i jak np. w przypadku S. aureus w wielu przypadkach odporne na działanie aktualnie dostępnych antybiotyków. W tym celu wykonano m.in. test na przeżywalność na płytce 96-dołkowej.
PL 234 591 Β1
Tabela 1
| typ posiewu | badany gatunek ślimaka | wynik |
| różnicowy bezpośredni | ciało ślimaka-^4non rufus (Przykład 1) | jałowy |
| ciało ślimaka-złrżon rufus (Przykład 2) | Escherichia coli - nielicznie | |
| Enterococcus spp, - pojedynczo | ||
| Serratia marcescens - nielicznie | ||
| osad po wirowaniu - Arion rufus | Enterococcus spp. - bardzo licznie | |
| Serratia marcescens - bardzo licznie | ||
| posiew po namnożeniu | ciało ślimaka-./non rufus (Przykład 1) | tj. wyżej |
| ciało ślimaka-^4rion rufus (Przykład 2) | ||
| osad po wirowaniu - Arion rufus | ||
| badanie mikologicznc | ciało ślimaka-/rion rufus (Przykład 1) | brak wzrostu grzybów drożdżopodobnych i pleśniowych |
| ciało ślimaka-Zrzon rufus (Przykład 2) | ||
| osad po wirowaniu - Arion rufus |
Badanie właściwości przeciwbakteryjnych śluzu ślimaka Arion rufus.
Badania potwierdzające właściwości bakteriostatyczne śluzu ślimaka A. rufus wykonano metodą krążkowo-dyfuzyjną. Rozpuszczono liofilizowany śluz w wodzie uzyskując stężenie 2 mg śluzu/ml roztworu. Przygotowano płytki do hodowli mikrobiologicznej z podłożem Mueller Hinton II Agar. Firmy GRASO® BIOTECH. Na płytki wysiano zawiesinę bakterii o zmętnieniu 0,5 wg skali McFarlanda. Bakteriostatyczność śluzów badano na 4 szczepach bakteryjnych wzorcowych, tj.:
- Salmonella typhimurium ATCC 1402
- Escherichia coli ATCC 25922
- Staphylococcus aureus MSSA ATCC 29213
- Salmonella enteritidis ATCC 13076
Na płytki z podłożem agarowym i wysianymi bakteriami nakładano sterylne krążki o średnicy 6 mm. Na każdy krążek nałożono po 5 μΙ lub 10 μΙ odpowiedniego stężenia badanego śluzu. Płytki umieszczono w cieplarce o temperaturze 37°C i pozostawiono w tych warunkach na 22 h. Po tym czasie płytki wyjęto z cieplarki i poddano wizualnej ocenie występujące strefy zahamowania wzrostu.
Badanie przeciwbakteryjnych właściwości śluzu ślimaka Arion rufus z jednoczesnym określeniem MIC.
Przygotowano jałową płytkę 96-dołkową. Do każdego dołka zaaplikowano 200 μΙ pożywki BHI Bulion firmy GRASO® BIOTECH. Do każdego dołka dodano po 2 μΙ płynnej hodowli bakteryjnej o zmętnieniu 1 w skali McFarlanda. Do tak uzyskanej zawiesiny dodano po 20 μΙ odpowiednio rozcieńczonych wodnych roztworów śluzu ślimaka A. rufus tak, by końcowe stężenia w dołkach wynosiły odpowiednio:
- 2 mg liofilizowanego śluzu/ml
- 1 mg/ml
- 0,5 mg/ml
- 0,25 mg/ml
- 0,125 mg/ml
- 0,0625 mg/ml
PL 234 591 Β1
Każde stężenie badane było w trzech powtórzeniach. Wykonano także, również w trzech powtórzeniach, kontrolę, którą stanowiła pożywka z dodatkiem zawiesiny bakteryjnej o zmętnieniu 1 w skali McFarlanda.
Po aplikacji wszystkich roztworów i płynów na płytkę, zamknięto ją szczelnie parafilmem w celu ochrony przed parowaniem i wstawiono do cieplarki o temperaturze 37°C i pozostawiono w niej na 20 h. Po tym czasie płytki wyjęto i zmierzono stopień zmętnienia w poszczególnych dołkach, korzystając z czytnika płytek.
Wyniki przedstawiono na wykresie 1.
Przeżywalność % - śluz A. rufus \ kontrola «2 mg/ml = 1 mg/ml »0,5 mg/ml ?.. 0.25 mg/ml »0,125 mg/ml »0,0625 mg/ml
160,00
E.ccli S. aureus S. typhimurium S. enteritidis badany mikroorganizm
Wykres 1. Wynik testu płytkowego śluzu A. rufus.
W przypadku śluzu ślimaków Arion rufus, pozyskany śluz wpływa na przeżywalność, hamując przyrost bakterii Escherichia coli oraz Salmonella typhimurium. W przypadku E. coli oraz S. typhimurium 230 stężenie śluzu w próbie wynoszące 2 mg/ml hamuje przyrost tych bakterii o odpowiednio 28 i 12%. Śluz ślimaków Arion rufus jest najbardziej skuteczny w walce z E. coli, działając w sposób hamujący ich przyrost, w każdym z badanych stężeń.
Claims (6)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób izolacji śluzu ślimaka, znamienny tym, że żywe ślimaki Arion rufus wytrząsa się w fizjologicznym roztworze NaCI w sposób umożliwiający omycie ślimaka ze śluzu, przy jednoczesnym przeżyciu osobników i pozwalający na wizualną ocenę zmian charakteru roztworu, przy czym stosunek wagowo-objętościowy masy ślimaków do ilości roztworu NaCI powinien być tak dobrany aby zachować stabilizację białek w śluzie, następnie, po odłowieniu zwierząt, roztwór odwirowuje się, a uzyskany supernatant poddaje się dializie w celu usunięcia soli i liofilizacji w celu usunięcia rozpuszczalnika.
- 2. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że stosunek wagowo-objętościowy masy ślimaków do ilości roztworu NaCI wynosi od 1:5 do 1:15.
- 3. Kompozycja, znamienna tym, że zawiera śluz izolowany według sposobu opisanego w zastrz. 1 i 2 oraz ewentualnie nośniki i/lub środki pomocnicze i/lub rozcieńczalniki.
- 4. Kompozycja, według zastrz. 3, znamienna tym, że jest w postaci maści, kremów, żeli, past, roztworów, mazideł, zawiesin i emulsji.
- 5. Zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus do wytwarzania wyrobu medycznego, zapobiegającego występowaniu, hamującego wzrost lub zwalczającego bakterie, zwłaszcza z rodzaju Escherichia i/lub Salmonella.
- 6. Zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus do wytwarzania leków do leczenia infekcji bakteryjnych, o etiologii zwłaszcza Escherichia i/lub Salmonella, zwłaszcza E. coli i S. typhimurium.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL413883A PL234591B1 (pl) | 2015-09-09 | 2015-09-09 | Sposób izolowania śluzu ślimaka, kompozycja i zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL413883A PL234591B1 (pl) | 2015-09-09 | 2015-09-09 | Sposób izolowania śluzu ślimaka, kompozycja i zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL413883A1 PL413883A1 (pl) | 2017-03-13 |
| PL234591B1 true PL234591B1 (pl) | 2020-03-31 |
Family
ID=58231143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL413883A PL234591B1 (pl) | 2015-09-09 | 2015-09-09 | Sposób izolowania śluzu ślimaka, kompozycja i zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL234591B1 (pl) |
-
2015
- 2015-09-09 PL PL413883A patent/PL234591B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL413883A1 (pl) | 2017-03-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kandhasamy et al. | Evaluation of in vitro antibacterial property of seaweeds of southeast coast of India | |
| Ramalivhana et al. | Antibacterial activity of honey and medicinal plant extracts against Gram negative microorganisms | |
| CN102524240B (zh) | 一种高效环保的遗体防腐剂及其应用 | |
| Manoharan et al. | Antibacterial and photocatalytic activities of 5-nitroindole capped bimetal nanoparticles against multidrug resistant bacteria | |
| Boyko et al. | Changes in the viability of the eggs of Ascaris suum under the influence of flavourings and source materials approved for use in and on foods | |
| Kamboh | Effect of pomegranate peel extract on some biochemical and histopathological parameters in experimental induced mice with Staphylococcus aureus | |
| Tajbakhsh et al. | Antibacterial effect of the brown alga Cystoseira trinodis | |
| Tutar et al. | Investigation of antibacterial properties of mucus and coelomic fluid obtained from Eisenia fetida | |
| Tajbakhsh et al. | In vitro study of antibacterial activity of the alga Sargassum oligocystum from the Persian Gulf | |
| Alli et al. | In-vitro assessments of the effects of garlic (Allium sativum) extract on clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus | |
| PL234592B1 (pl) | Sposób izolowania śluzu ślimaka, kompozycja i zastosowanie śluzu ślimaka Limax maximus | |
| PL234591B1 (pl) | Sposób izolowania śluzu ślimaka, kompozycja i zastosowanie śluzu ślimaka Arion rufus | |
| Pandurangan et al. | Evaluation of antimicrobial and anthelmentic activity of leaves of Chromolaena odorata | |
| Sheh-Hong et al. | Assessment of anticandidal activity and cytotoxicity of root extract from Curculigo latifolia on pathogenic | |
| Mokhlesi et al. | Antibacterial, antifungal and cytotoxic activities of Bohadschia marmorata a sea cucumber from North coastal of Persian | |
| Bulugahapitiya et al. | Cytotoxicity and antimicrobial activity of Dialium ovoideum thwaites, an endemic plant in Sri Lanka | |
| Aksu et al. | Disinfection of eggshells contaminated with Salmonella enteritidis | |
| Muazzam et al. | Anti-MRSA activity of ethyl acetate crude extract from endophytic fungus Ceratobasidium ramicola IBRLCM127 isolated from rhizome of Curcuma mangga Valeton & Zijp | |
| CN109400691B (zh) | 一种用于防治小瓜虫的抗菌肽 | |
| do Nascimento et al. | Antimicrobial activity of the fixed oil extracted from Ficus gomelleira (Moraceae) seeds on Escherichia coli and Staphylococcus aureus | |
| Sorokova et al. | Pathohistological changes in the intestine, lungs and liver of sheep with spontaneous strongyloidiasis | |
| AlSalih Al-Bakri et al. | Improvement of the Ethanol activity by using leaves extract of Artemisia herb alba against Pseudomonas aeuroginosa | |
| Jafarzadeh et al. | Investigating the inhibitory effect of poulk extract (Stachys schtschegleevii) on biofilm forming Streptococcus in vitro. | |
| Singh et al. | In vitro evaluation of antifungal activity of aqueous extract of lemon grass (Cymbopogon citrates) against pathogenic fungi Saprolegnia parasitica isolated from endangered cold water fish Tor putitora | |
| Bamane et al. | Assessing the Antimicrobial Potential of Sea Cucumber Holothuria leucospilota from the Ratnagiri Coast |